人工多能性幹細胞（ｉＰＳ細胞）の産生に関連した方法および組成物を開示する。例えば、人工多能性幹細胞は、ヒトＣＤ３４^＋血液始原細胞などのＣＤ３４^＋造血細胞またはＴ細胞から作製することができる。様々なｉＰＳ細胞系も提供する。特定の実施形態では、本発明は、Ｔ細胞受容体の遺伝子再構成を含むゲノムを有する新規な人工多能性幹細胞を提供する。本方法では、Ｔ細胞の臨床的に入手しやすい供給源、例えば、３ｍｌの全血サンプルからｉＰＳ細胞を産生させることができ、造血細胞の動員が必要ない。

【特許請求の範囲】
【請求項１】
Ｔ細胞またはＣＤ３４^＋造血始原細胞から人工多能性幹細胞を作製する方法であって、
（ａ）Ｔ細胞またはＣＤ３４^＋造血始原細胞を含む細胞集団を入手する工程であって、前記ＣＤ３４^＋造血始原細胞が、被験体に由来し、前記被験体の細胞が、外的に加えられる顆粒球コロニー刺激因子（Ｇ−ＣＳＦ）で動員されていない、工程と、
（ｂ）前記細胞集団の前記Ｔ細胞またはＣＤ３４^＋造血始原細胞からｉＰＳ細胞を産生させて、ｉＰＳ細胞集団を提供する工程と、を含む、方法。
【請求項２】
前記細胞集団の供給源が、血液サンプル、血液成分、骨髄、リンパ節、胎児肝臓、または臍帯である、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
前記細胞集団の供給源が、約１〜約５ｍｌの血液サンプルである、請求項２に記載の方法。
【請求項４】
前記細胞集団の供給源が、約３ｍｌの血液サンプルである、請求項３に記載の方法。
【請求項５】
Ｔ細胞を含む前記細胞集団の供給源が被験体であり、前記被験体の細胞が、外的に加えられるＧ−ＣＳＦで動員されていない、請求項１に記載の方法。
【請求項６】
前記細胞集団が凍結保存されている、請求項１に記載の方法。
【請求項７】
Ｔ細胞を含む前記細胞集団を、前記Ｔ細胞を活性化させる条件下でｉｎ ｖｉｔｒｏまたｉｎ ｖｉｖｏで調製する、請求項１に記載の方法。
【請求項８】
Ｔ細胞を含む細胞集団を、抗ＣＤ３抗体の存在下で培養する、請求項７に記載の方法。
【請求項９】
Ｔ細胞またはＣＤ３４^＋造血始原細胞を含む前記細胞集団を１つ以上のサイトカインと共にｉｎ ｖｉｔｒｏで培養して、その中で前記Ｔ細胞またはＣＤ３４^＋造血始原細胞の細胞集団を増大させる、請求項１に記載の方法。
【請求項１０】
前記細胞集団がＴ細胞を含み、前記１つ以上のサイトカインがＩＬ−２を含む、請求項９に記載の方法。
【請求項１１】
前記細胞集団がＣＤ３４^＋造血始原細胞を含み、前記１つ以上のサイトカインが、ＳＣＦ、Ｆｌｔ３Ｌ、またはＩＬ−３の少なくとも１つを含む、請求項９に記載の方法。
【請求項１２】
前記Ｔ細胞がヒトＴ細胞である、請求項１に記載の方法。
【請求項１３】
前記ＣＤ３４^＋造血始原細胞が、ヒトＣＤ３４^＋造血始原細胞である、請求項１に記載の方法。
【請求項１４】
前記Ｔ細胞が、ＣＤ４^＋Ｔ細胞またはＣＤ８^＋Ｔ細胞である、請求項１に記載の方法。
【請求項１５】
前記Ｔ細胞が、Ｔヘルパー１（ＴＨ１）細胞、Ｔヘルパー２（ＴＨ２）細胞、ＴＨ１７細胞、細胞傷害性Ｔ細胞、調節性Ｔ細胞、ナチュラルキラーＴ細胞、ナイーブＴ細胞、記憶Ｔ細胞、またはγδＴ細胞である、請求項１に記載の方法。
【請求項１６】
前記細胞集団が、約９０％〜約９９％のＴ細胞を含む、請求項１に記載の方法。
【請求項１７】
前記細胞集団が、約９７％〜約９９％のＴ細胞を含む、請求項１に記載の方法。
【請求項１８】
前記細胞集団が、少なくとも１×１０^３のＴ細胞を含む、請求項１に記載の方法。
【請求項１９】
前記細胞集団が、少なくとも５×１０^３のＴ細胞を含む、請求項１に記載の方法。
【請求項２０】
前記細胞集団が、約１×１０^６〜約２×１０^６のＴ細胞を含む、請求項１に記載の方法。
【請求項２１】
前記集団の前記Ｔ細胞またはＣＤ３４^＋造血始原細胞からｉＰＳ細胞を産生させる工程が、１つ以上のリプログラミング因子を前記Ｔ細胞またはＣＤ３４^＋造血始原細胞に導入する工程を含む、請求項１に記載の方法。
【請求項２２】
前記リプログラミング因子が、Ｓｏｘファミリータンパク質およびＯｃｔファミリータンパク質を含むリプログラミングタンパク質である、請求項２１に記載の方法。
【請求項２３】
１つ以上の前記リプログラミングタンパク質が、タンパク質形質導入ドメインに作用的に連結されている、請求項２２に記載の方法。
【請求項２４】
前記リプログラミング因子が、１つ以上の発現カセットによってコードされ、Ｓｏｘファミリータンパク質およびＯｃｔファミリータンパク質を含む、請求項２１に記載の方法。
【請求項２５】
前記１つ以上の発現カセットが、少なくとも１つのポリシストロニック転写単位を含む、請求項２４に記載の方法。
【請求項２６】
前記ポリシストロニック転写単位が、少なくとも２つのリプログラミング遺伝子を含む、請求項２５に記載の方法。
【請求項２７】
前記ポリシストロニック転写単位が、Ｓｏｘ遺伝子およびＯｃｔ遺伝子を含む、請求項２６に記載の方法。
【請求項２８】
前記ポリシストロニック転写単位が、ｃＭｙｃ遺伝子およびＫｌｆ４遺伝子を含む、請求項２６に記載の方法。
【請求項２９】
前記ポリシストロニック転写単位が、Ｎａｎｏｇ遺伝子およびＬｉｎ２８遺伝子を含む、請求項２６に記載の方法。
【請求項３０】
前記ポリシストロニック転写単位が、リプログラミング遺伝子マーカーおよび選択またはスクリーニングマーカーを含む、請求項２５に記載の方法。
【請求項３１】
前記ポリシストロニック転写単位が、内部リボソーム侵入部位（ＩＲＥＳ）、または少なくとも１つのプロテアーゼ切断部位および／またはポリシストロニック転写のための自己切断ペプチドをコードする配列を含む、請求項２５に記載の方法。
【請求項３２】
前記１つ以上の発現カセットが、ウイルスベクター、エピソームベクター、またはトランスポゾンからなる群から選択されるリプログラミングベクターに含められている、請求項２４に記載の方法。
【請求項３３】
前記リプログラミングベクターが、レトロウイルスベクターである、請求項３２に記載の方法。
【請求項３４】
前記Ｓｏｘファミリータンパク質がＳｏｘ２である、請求項２２または２４のいずれかに記載の方法。
【請求項３５】
前記Ｏｃｔファミリータンパク質がＯｃｔ４である、請求項２２または２４のいずれかに記載の方法。
【請求項３６】
前記リプログラミングタンパク質が、Ｎａｎｏｇ、Ｌｉｎ２８、ｃ−Ｍｙｃ、Ｋｌｆ４、またはＥｓｒｒｂをさらに含む、請求項２２または２４のいずれかに記載の方法。
【請求項３７】
前記リプログラミングタンパク質が、Ｎａｎｏｇをさらに含む、請求項３６に記載の方法。
【請求項３８】
前記リプログラミングタンパク質が、Ｋｌｆ４およびｃ−Ｍｙｃをさらに含む、請求項３６に記載の方法。
【請求項３９】
前記集団の前記Ｔ細胞またはＣＤ３４^＋造血始原細胞からｉＰＳ細胞を産生させる工程が、胚性幹細胞の１つ以上の特性について前記ｉＰＳ細胞を選択する工程をさらに含む、請求項１に記載の方法。
【請求項４０】
前記特性が、接着性、未分化形態、胚性幹細胞特異的マーカー、または多能性である、請求項３９に記載の方法。
【請求項４１】
前記特性が接着性である、請求項４０に記載の方法。
【請求項４２】
前記特性が未分化形態である、請求項４０に記載の方法。
【請求項４３】
前記方法が、前記ｉＰＳ細胞を分化細胞に分化させる工程を含む、請求項１に記載の方法。
【請求項４４】
前記分化細胞が、心筋細胞、造血細胞、ニューロン、線維芽細胞、または表皮細胞を含む、請求項４３に記載の方法。
【請求項４５】
前記ｉＰＳ細胞集団が、組み込まれた外来性ウイルス要素を本質的に含まない、請求項１に記載の方法。
【請求項４６】
請求項１〜４５のいずれか１項に記載の方法に従って産生させた人工多能性幹細胞。
【請求項４７】
胚性幹細胞と比較して、不完全なセットのＴ細胞受容体遺伝子のＶ、Ｄ、およびＪセグメントを含むゲノムを含む人工多能性幹細胞。
【請求項４８】
前記人工多能性幹細胞がヒト細胞である、請求項４７に記載の人工多能性幹細胞。
【請求項４９】
前記人工多能性幹細胞が、組み込まれた外来性ウイルス要素を含まない、または組み込まれた外来性ウイルス要素を本質的に含まない、請求項４７に記載の人工多能性幹細胞。

【図８】

【図９】

【図１１Ａ】

【図１１Ｂ】

【図１１Ｃ】

【図１】

【図２−１】

【図２−２】

【図２−３】

【図３−１】

【図３−２】

【図４−１】

【図４−２】

【図４−３】

【図４−４】

【図５】

【図６−１】

【図６−２】

【図７】

【図１０】

【公表番号】特表２０１２−５２８５９９（Ｐ２０１２−５２８５９９Ａ）
【公表日】平成２４年１１月１５日（２０１２．１１．１５）
【国際特許分類】
【出願番号】特願２０１２−５１４１６９（Ｐ２０１２−５１４１６９）
【出願日】平成２２年６月４日（２０１０．６．４）
【国際出願番号】ＰＣＴ／ＵＳ２０１０／０３７３７６
【国際公開番号】ＷＯ２０１０／１４１８０１
【国際公開日】平成２２年１２月９日（２０１０．１２．９）
【出願人】（５１０００３８３０）セルラー　ダイナミクス　インターナショナル，　インコーポレイテッド (11)
【Ｆターム（参考）】