乳房炎検出方法、及びこの乳房炎検出方法に用いる測定用器具
【課題】乳汁中の溶存酸素濃度に影響を受けない乳房炎検出方法、及びこの乳房炎検出方法に用いる測定用器具を提供することで乳房炎発症の予防を目的とする。
【解決手段】本発明の乳房炎検出方法は、乳汁に所定の量の過酸化水素を供給し、乳汁の過酸化水素消去能を電気化学的方法によって検出する乳房炎検出方法であって、過酸化水素分解酵素活性に応じて一定時間に減少する過酸化水素濃度を測定することを特徴とする。
【解決手段】本発明の乳房炎検出方法は、乳汁に所定の量の過酸化水素を供給し、乳汁の過酸化水素消去能を電気化学的方法によって検出する乳房炎検出方法であって、過酸化水素分解酵素活性に応じて一定時間に減少する過酸化水素濃度を測定することを特徴とする。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、例えば牛の乳汁における過酸化水素の分解反応による乳房炎検出方法、及びこの乳房炎検出方法に用いる測定用器具に関する。
【背景技術】
【０００２】
乳房炎防除のため、乳房内への細菌感染を早期に発見し、治療するなどの早期対策が求められている。
従来の乳房炎検出法としてのＣＭＴ変法（ＰＬテスター法）は、酪農家が簡便に検査できるが、乳房炎発症後でないと検知できない方法である。また、ＣＬ法（化学発光法）は、乳房炎発症前の感染を捉えられるが、酪農家が簡便に検査できる方法ではない。
乳房炎に感染すると、活性酸素の一種である過酸化水素（Ｈ２Ｏ２）の分解酵素であるグルタチオンペルオキシダーゼやカタラーゼの量が増加する。
本発明者らは、酪農家が現場において、乳汁中の過酸化水素分解酵素の活性を測定することで、乳房炎感染を簡易に判定する方法を既に提案している。
この方法は、サイクリックボルタンメトリー法を代表例とし、乳汁の過酸化水素消去能を、過酸化水素分解により発生する酸素濃度から検出するものであり、日々の搾乳作業の中で、搾乳インラインから乳汁サンプルを採取し、短時間で自動的に測定、診断することにより、通常の乳房炎検出に加え、感染初期の乳房炎および外見上異常の認められない潜在性乳房炎を検出することができる。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００３】
【特許文献１】特開２００９−２４４０４１号公報
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００４】
しかし、乳汁の過酸化水素消去能を、過酸化水素分解により発生する酸素濃度から検出する方法では、乳汁中の溶存酸素濃度に影響を受ける場合があることが分かってきた。
また、サイクリックボルタンメトリー法を用いる場合には、炭素電極と銀塩化銀電極を用いるが、銀塩化銀電極は、ガラス製であるため破損しやすく、また、測定後に食塩水に浸漬して保管する必要があるため、酪農家にとっては扱いにくいという問題を有している。
【０００５】
そこで本発明は、乳汁中の溶存酸素濃度に影響を受けない乳房炎検出方法、及びこの乳房炎検出方法に用いる測定用器具を提供することで乳房炎発症の予防を目的とする。
【課題を解決するための手段】
【０００６】
請求項１記載の本発明の乳房炎検出方法は、乳汁に所定の量の過酸化水素を供給し、前記乳汁の過酸化水素消去能を電気化学的方法によって検出する乳房炎検出方法であって、過酸化水素分解酵素活性に応じて一定時間に減少する過酸化水素濃度を測定することを特徴とする。
請求項２記載の本発明は、請求項１に記載の乳房炎検出方法において、前記電気化学的方法が、クロノアンペロメトリー法であることを特徴とする。
請求項３記載の本発明は、請求項１又は請求項２に記載の乳房炎検出方法において、前記乳汁に前記過酸化水素を供給する前の前記過酸化水素濃度を測定する第１の測定ステップと、前記第１の測定ステップの後に前記乳汁に前記過酸化水素を供給して混合する供給ステップと、前記供給ステップの所定時間経過後に前記過酸化水素濃度を測定する第２の測定ステップと、を有し、前記第１の測定ステップで測定した前記過酸化水素濃度から前記第２の測定ステップで測定した前記過酸化水素濃度を減じて前記過酸化水素消去能を算出することを特徴とする。
請求項４記載の本発明は、請求項１から請求項３のいずれかに記載の乳房炎検出方法において、体細胞数をあらかじめ測定し、前記体細胞数が所定値以下の場合に、前記過酸化水素消去能を検出することを特徴とする。
請求項５記載の本発明の乳房炎検出方法に用いる測定用器具は、請求項１から請求項４のいずれかに記載の乳房炎検出方法に用いる測定用器具であって、前記乳汁に供給する前の前記過酸化水素を収容する第１の空間と、前記過酸化水素を供給する前の前記乳汁を収容する第２の空間と、前記第１の空間と前記第２の空間とを連通させる連通手段と、前記第１の空間内の前記過酸化水素濃度を測定するとともに、前記連通手段で連通させた後の前記第１の空間内又は前記第２の空間内の前記過酸化水素濃度を測定する測定手段と、を備えたことを特徴とする。
請求項６記載の本発明は、請求項５に記載の乳房炎検出方法に用いる測定用器具において、複数の前記第１の空間と、複数の前記第１の空間にそれぞれ対応する複数の前記第２の空間とを備え、前記測定手段では、それぞれの前記第１の空間内の前記過酸化水素濃度を同時に個別に測定するとともに、前記連通手段で連通させた後のそれぞれの前記第１の空間内又はそれぞれの前記第２の空間内の前記過酸化水素濃度を同時に個別に測定することを特徴とする。
【発明の効果】
【０００７】
本発明によれば、過酸化水素が分解されて減少する過酸化水素の濃度自体を測定することで、乳汁中に溶存する酸素量の影響を受けることなく、乳汁の過酸化水素消去能を正確に検出することができる。
【図面の簡単な説明】
【０００８】
【図１】クロノアンペロメトリー測定（以下ＣＡ測定）による時間経過にともなう電流特性を示す図
【図２】過酸化水素濃度とＣＡ測定による電流値との関係を示す特性図
【図３】カタラーゼ混合量とＣＡ測定による電流値の関係を示す特性図
【図４】乳汁中の活性酸素消去能と体細胞数の測定結果を示す図
【図５】本発明の実施例による乳房炎検出方法を機能実現手段で示すブロック図
【図６】同測定用器具の構成と使用方法を示す図
【図７】図６（ｅ）の状態を模式的に示した構成図
【図８】同測定用器具を用いた測定フロー図
【図９】乳房炎感染の簡易判定方法を示す図
【発明を実施するための形態】
【０００９】
本発明の第１の実施の形態による乳房炎検出方法は、過酸化水素分解酵素活性に応じて一定時間に減少する過酸化水素濃度を測定するものである。本実施の形態によれば、過酸化水素が分解されて減少する過酸化水素の濃度自体を測定することで、過酸化水素の分解により発生する酸素濃度を測定する場合のように、乳汁中に溶存する酸素量の影響を受けることなく、乳汁の過酸化水素消去能を正確に検出することができる。
本発明の第２の実施の形態は、第１の実施の形態による乳房炎検出方法において、電気化学的方法が、クロノアンペロメトリー法であるものである。本実施の形態によれば、過酸化水素の分解により減少する過酸化水素濃度を電流値として検出するため、データ処理を容易に行うことができ、また、サイクリックボルタンメトリー法と比較すると、カタラーゼとグルタチオンペルオキシダーゼとの双方の酵素活性を測定でき、また、電極の取り扱いが容易となる。
本発明の第３の実施の形態は、第１又は第２の実施の形態による乳房炎検出方法において、乳汁に過酸化水素を供給する前の過酸化水素濃度を測定する第１の測定ステップと、第１の測定ステップの後に乳汁に過酸化水素を供給して混合する供給ステップと、供給ステップの所定時間経過後に過酸化水素濃度を測定する第２の測定ステップとを有し、第１の測定ステップで測定した過酸化水素濃度から第２の測定ステップで測定した過酸化水素濃度を減じて過酸化水素消去能を算出するものである。本実施の形態によれば、毎回の測定時に電極などの測定器による誤差を補正できるため、測定器によるばらつきの影響を受けることなく、より正確な検出を行うことができる。
本発明の第４の実施の形態は、第１から第３の実施の形態による乳房炎検出方法において、体細胞数をあらかじめ測定し、体細胞数が所定値以下の場合に、過酸化水素消去能を検出するものである。本実施の形態によれば、既に乳房炎が発生している検査対象をあらかじめ除外することで、乳房炎の早期発見が行いやすくなる。
本発明の第５の実施の形態による乳房炎検出方法に用いる測定用器具は、第１から第４の実施の形態による乳房炎検出方法に用いる測定用器具であって、乳汁に供給する前の過酸化水素を収容する第１の空間と、過酸化水素を供給する前の乳汁を収容する第２の空間と、第１の空間と第２の空間とを連通させる連通手段と、第１の空間内の過酸化水素濃度を測定するとともに、連通手段で連通させた後の第１の空間内又は第２の空間内の過酸化水素濃度を測定する測定手段とを備えたものである。本実施の形態によれば、乳汁及び過酸化水素の定量分注を容易に行え、また、第１の測定ステップでの過酸化水素濃度の測定と、第２の測定ステップでの過酸化水素濃度の測定を迅速に行うことができる。
本発明の第６の実施の形態は、第５の実施の形態による乳房炎検出方法に用いる測定用器具において、複数の第１の空間と、複数の第１の空間にそれぞれ対応する複数の第２の空間とを備え、測定手段では、それぞれの第１の空間内の過酸化水素濃度を同時に個別に測定するとともに、連通手段で連通させた後のそれぞれの第１の空間内又はそれぞれの第２の空間内の過酸化水素濃度を同時に個別に測定するものである。本実施の形態によれば、例えば検査対象が牛の場合には、４つの乳房を同時に個別に測定することができ、いずれかの乳房が感染している場合であっても、確実に乳房炎を検出することができるため、乳房炎の早期発見が行いやすくなる。
【実施例】
【００１０】
以下本発明の一実施例による乳房炎検出方法について説明する。
乳房炎原因菌（以下、細菌）に感染すると、白血球が活性酸素を放出して殺菌するが、同時に自身を傷めないよう活性酸素分解酵素が増加する。
本実施例による乳房炎検出方法は、活性酸素の一種である過酸化水素を乳汁に定量添加し、過酸化水素分解酵素の活性に応じて一定時間に減少する過酸化水素濃度を活性酸素消去能として電気化学センサで測定することで、乳房炎発症前の細菌感染を検出する方法である。
【００１１】
図１は、クロノアンペロメトリー測定（以下ＣＡ測定）による時間経過にともなう電流特性を示す図である。図１では、横軸に測定開始からの時間を、縦軸にはＣＡ測定による電流値（μＡ）を示している。
作用極、対極ともに白金電極を用い、電位を０．７Ｖとし、４サンプル（ＣＨ１、ＣＨ２、ＣＨ３、ＣＨ４）について測定を行った。測定温度は２８〜３０℃とした。
図１に示すように、４つのサンプルはいずれも同じ特性を示し、測定開始後６０秒までは電流値が大きく変動するが、その後は一定値に収束し、１２０秒経過後の変化量は少ない。２７０秒ではほぼ一定値に収束しており、その後の変化量は極めて少ないことから、以降の測定には、２７０秒経過後の電流値を用いた。
【００１２】
図２は、過酸化水素濃度とＣＡ測定による電流値との関係を示す特性図である。図２では、横軸に添加した過酸化水素の濃度を、縦軸には２７０秒後電流値（μＡ）を示している。
電位を０．７Ｖとし、２７０秒後の電流値を測定した。測定には、過酸化水素を混合した生理食塩水を供し、測定温度は２８〜３０℃とした。
図２に示すように、過酸化水素濃度とＣＡ測定における２７０秒後電流値は正の比例関係にあることがわかる。
【００１３】
図３は、カタラーゼ混合量とＣＡ測定による電流値の関係を示す特性図である。図３では、横軸に０．１％カタラーゼ混合量（μｌ）を、縦軸には２７０秒後電流値（μＡ）を示している。ここで、縦軸の２７０秒後電流値（μＡ）は過酸化水素濃度を表している。
分解酵素であるカタラーゼ（以下ＣＡT）試薬と生理食塩水を混合した後、過酸化水素を添加し測定した。生理食塩水は１２ｍｌ、過酸化水素は２ｍｌ、１００ｍＭ（ｍｍｏｌ／ｌ）、測定温度は２８〜３０℃とした。
図３に示すように、過酸化水素分解酵素であるカタラーゼの混合量と２７０秒後電流値は負の比例関係にあった。従って、過酸化水素分解酵素の活性に応じて一定時間に減少する過酸化水素濃度、即ち過酸化水素消去能は、ＣＡ測定による電流値で推定できることが分かる。
【００１４】
図４は、乳汁中の活性酸素消去能と体細胞数の測定結果を示す図である。図４では、横軸に体細胞数（万個／ｍｌ）を、縦軸には活性酸素消去能（μＡ）を示している。ここで、縦軸では数値が大きい場合には活性酸素消去能が高く、数値が小さい場合には活性酸素消去能が低いことを表している。
乳汁中の活性酸素消去能と体細胞数（ＳＣＣ）や細菌数等の関係を調査するため、過酸化水素と乳汁（細胞膜を破壊し反応速度を上げるため界面活性剤を添加）を混合してＣＡ測定を行った。乳汁は１２ｍｌ、過酸化水素は２ｍｌ、１００ｍＭ、測定温度は２８〜３０℃とし、併せて乳汁中の体細胞数と細菌数を測定した。なお、活性酸素消去能は、測定器差補正と温度補正を行っている。測定器差補正については後述する。
図４に示すように、体細胞数が高くなると乳汁中の活性酸素消去能が高くなることが分かる。また、体細胞数が低くても消去能が高い場合があり、この場合は、細菌に感染し、殺菌のために活性酸素が放出されたことにより、消去能が高くなったと推察される。
従って、図４において、領域Ａは乳房炎に感染し、自然免疫では防御できず体細胞（白血球）が増加した群であり、領域Ｂは乳房炎に感染し、自然免疫により活性酸素を放出して殺菌している群であると推察される。
【００１５】
次に、本実施例による乳房炎検出方法に用いる測定用器具について説明する。
図５は本実施例による乳房炎検出方法を機能実現手段で示すブロック図、図６は同測定用器具の構成と使用方法を示す図、図７は、図６（ｅ）の状態を模式的に示した構成図、図８は同測定用器具を用いた測定フロー図である。
【００１６】
図５に示すように、本実施例による乳房炎検出方法は、測定用器具１０と、測定用コントローラ２０とを用いて行う。
測定用器具１０は、乳汁に供給する前の過酸化水素を収容する第１の空間（過酸化水素容器）１１と、過酸化水素を供給する前の乳汁を収容する第２の空間（乳汁容器）１２と、過酸化水素容器１１と乳汁容器１２とを連通させる連通手段（押棒）１３と、過酸化水素容器１１内又は乳汁容器１２内の過酸化水素濃度を測定する測定手段であるセンサプレート１４と測定ユニット１４’、乳汁容器１２内に乳汁を定量する乳汁定量手段１５とを備えている。
ここで、過酸化水素容器１１は、独立した複数の空間を備え、また乳汁容器１２も、複数の過酸化水素容器１１にそれぞれ対応する複数の乳汁容器１２を備えていることが好ましい。
また、センサプレート１４は、温度センサ１４ａとＣＡ測定用電極１４ｂを備えている。ＣＡ測定用電極１４ｂは、作用極と対極ともに白金電極を用いることが好ましい。ただし、白金電極以外に、イリジウムや、イリジウムとジルコニウムを含有する電極、又はカーボンを電極とするものであってもよい。
【００１７】
測定用コントローラ２０は、センサプレート１４と測定ユニット１４’で測定するデータを読み取るデータ取込手段２１と、センサプレート１４と測定ユニット１４’での測定開始からの時間を計測する計時手段２２と、データ取込手段２１で取り込んだデータを基に活性酸素消去能を演算する演算手段２３と、この演算手段２３での演算結果によって細菌感染を判定する判定手段２４と、この判定手段２４での判定に用いる閾値を記憶する閾値記憶手段２５と、判定結果を出力する出力手段２６と、データ取込手段２１で取り込んだデータ及び判定手段２４での判定結果を記憶するデータ記憶手段２７とを備えている。
【００１８】
次に、図６及び図７を用いて、同測定用器具の構成と使用方法を説明する。
図６（ａ）は、搬送具内空間に、４つの乳汁容器１２と１つの捨て乳容器１２’を備えていることを示している。４つの乳汁容器１２には、乳汁定量手段１５によって、乳牛１頭の４分房の乳汁がそれぞれ定量収容されている。
図６（ｂ）は、図６（ａ）の状態において、それぞれの乳汁容器１２内に、あらかじめ過酸化水素を定量分注している過酸化水素容器１１を投入した状態を示している。
【００１９】
図６（ｃ）は、図６（ｂ）の状態にある搬送具とともに、センサプレート１４と、測定ユニット１４’とを示している。センサプレート１４には、温度センサ１４ａとＣＡ測定用電極１４ｂを備えている。また、測定ユニット１４’には、温度センサ用コンタクトピン１４’ａとＣＡ測定用コンタクトピン１４’ｂが設けられている。
それぞれの乳汁容器１２内に、過酸化水素容器１１を浮かべた状態で、センサプレート１４を乳汁容器１２にかぶせ、乳汁容器１２を、センサプレート１４が当接するように測定ユニット１４’に設置する。後述するように、乳汁容器１２底面に押棒１３が設けられているために、センサプレート１４を乳汁容器１２にかぶせた段階で過酸化水素容器１１内には、温度センサ１４ａ及びＣＡ測定用電極１４ｂが位置する。
【００２０】
図６（ｄ）は、測定ユニット１４’に乳汁容器１２を設置した状態を示している。
図６（ｄ）に示すように、乳汁容器１２底面には、押棒１３が設けられている。
図６（ｅ）は、図６（ｄ）の状態にある乳汁容器１２に、保温カバー１６をかぶせた状態を示している。
【００２１】
図７（ａ）は、図６（ｅ）の状態を、模式的に示した構成図である。
また、図７（ｂ）は、図７（ａ）の状態から、押棒１３を押し下げて過酸化水素容器１１の底面を割り、過酸化水素容器１１内の過酸化水素と乳汁容器１２内の乳汁を混合する状態を、模式的に示した構成図である。
【００２２】
次に図８を用いて同測定用器具を用いた測定フローについて説明する。
まず、乳汁を乳汁容器１２に採取する（ステップ１）。ステップ１における乳汁は、乳牛１頭の４分房の乳汁を混合することなく採取する。ステップ２では、ステップ１で採取した４分房の乳汁の内、余計な乳汁が測定用器具を斜めに傾けることで乳汁容器１２の外側にある捨て乳容器１２’に排出され、各乳汁容器１２内の乳汁は一定量にされる。
そして、所定濃度の過酸化水素を過酸化水素容器１１に定量分注する（ステップ３）。
ステップ３において所定濃度の過酸化水素が定量分注された過酸化水素容器１１は、所定位置に設置される（ステップ４）。図６に示す実施例では、過酸化水素容器１１を乳汁容器１２内に浮かべる。
そして、センサプレート１４を過酸化水素容器１１を浮かべた乳汁容器１２の開口に設置し、センサプレート１４を設置した乳汁容器１２を測定ユニット１４’に設置する（ステップ５）。
【００２３】
ステップ５が終了した後に、ＣＡ測定による電流値の測定を開始する（ステップ６）。
ステップ６における測定開始からの経過時間を計時手段２２にて計時し、ステップ７において、あらかじめ設定した時間（２７０秒）が経過した場合には、設定時間経過時点での過酸化水素容器１１内の過酸化水素濃度を測定する（ステップ８）。すなわち、ステップ８（第１の測定ステップ）では、乳汁に過酸化水素を供給する前の過酸化水素濃度をセンサプレート１４と測定ユニット１４’で測定し、測定したデータをデータ取込手段２１で取り込む。センサプレート１４と測定ユニット１４’では、それぞれの過酸化水素容器１１内の過酸化水素濃度を同時に個別に測定する。
ステップ８（第１の測定ステップ）における測定終了後に、押棒１３を操作することで、過酸化水素容器１１を破損し、過酸化水素容器１１内の過酸化水素と乳汁容器１２内の乳汁とを混合する（ステップ９）。
【００２４】
ステップ９における押棒１３の操作、すなわち過酸化水素容器１１内の過酸化水素と乳汁容器１２内の乳汁との混合からの経過時間を計時手段２２にて計時し、ステップ１０において、あらかじめ設定した時間（２７０秒）が経過した場合には、設定時間経過時点での過酸化水素濃度を測定する（ステップ１１）。すなわち、ステップ１１では、過酸化水素を供給した乳汁の過酸化水素濃度をセンサプレート１４と測定ユニット１４’で測定し、測定したデータをデータ取込手段２１で取り込む。センサプレート１４と測定ユニット１４’では、押棒１３で連通させた後のそれぞれの過酸化水素容器１１内又はそれぞれの乳汁容器１２内の過酸化水素濃度を同時に個別に測定する。
ステップ１２では、活性酸素消去能を演算手段２３において演算する。活性酸素消去能の演算は、ステップ８（第１の測定ステップ）で測定した過酸化水素濃度からステップ１１（第２の測定ステップ）で測定した過酸化水素濃度を減じて算出する。演算手段２３での活性酸素消去能の演算は、それぞれの乳汁容器１２別に行う。なお、この演算において、温度センサ１４ａで検出した温度を基に補正を行う。
ここで、演算手段２３での活性酸素消去能の演算を、それぞれの乳汁容器１２別に行うことで、検査対象が牛の場合には、４つの乳房を同時に個別に測定することができ、いずれかの乳房が感染している場合であっても、確実に乳房炎を検出することができるため、乳房炎の早期発見が行いやすくなる。
【００２５】
ステップ１２で演算した結果に基づき、閾値記憶手段２５にあらかじめ記憶している閾値と比較し感染判定を行う（ステップ１３）。
ステップ１３での判定結果は出力される（ステップ１４）。また、ステップ８において測定された過酸化水素濃度、ステップ１１において測定された過酸化水素濃度、及びステップ１３における判定結果はデータ記憶手段２７に記憶される。
【００２６】
図９は、乳房炎感染の簡易判定方法を示す図である。
図４で示した測定結果から、体細胞数が高くなると乳汁中の活性酸素消去能が高くなること、及び体細胞数が低くても活性酸素消去能が高い場合があることが分かった。
この結果から、図９に示すように、体細胞数が所定値以上の場合には、乳房炎であり、体細胞数が所定値以下の場合で活性酸素消去能が所定値より高い場合に初期段階の乳房炎原因菌感染と判断できる。
従って、体細胞数をあらかじめ測定し、体細胞数が所定値以下の場合に、過酸化水素消去能を検出することが好ましい。
このように、体細胞数が所定値以下の検体に限ることで、乳房炎発症の検査負担を減らし、予防検査を確実に行うことができる。
【００２７】
以上のように本発明によれば、乳汁に所定の量の過酸化水素を供給し、乳汁の過酸化水素消去能を電気化学的方法によって検出する乳房炎検出方法において、ＣＡ測定により、過酸化水素分解酵素活性に応じて一定時間に減少する過酸化水素濃度を測定することで、乳汁中の溶存酸素濃度の影響を排除し、かつ過酸化水素分解酵素であるカタラーゼとグルタチオンペルオキシダーゼ両方の消去能が測定できる。
また、本発明では、最初に、既知濃度の過酸化水素をＣＡ測定により行った後、続いて、過酸化水素と乳汁とを混合してＣＡ測定を行うため、測定器差の補正が測定毎に行える。
【産業上の利用可能性】
【００２８】
本発明は、牛や山羊、その他動物の乳房炎検出方法に適用できる。
【符号の説明】
【００２９】
１０ 測定用器具
１１ 第１の空間（過酸化水素容器）
１２ 第２の空間（乳汁容器）
１３ 連通手段（押棒）
１４ 測定手段（センサプレート）
１４’ 測定手段（測定ユニット）
２０ 測定用コントローラ
２１ データ取込手段
【技術分野】
【０００１】
本発明は、例えば牛の乳汁における過酸化水素の分解反応による乳房炎検出方法、及びこの乳房炎検出方法に用いる測定用器具に関する。
【背景技術】
【０００２】
乳房炎防除のため、乳房内への細菌感染を早期に発見し、治療するなどの早期対策が求められている。
従来の乳房炎検出法としてのＣＭＴ変法（ＰＬテスター法）は、酪農家が簡便に検査できるが、乳房炎発症後でないと検知できない方法である。また、ＣＬ法（化学発光法）は、乳房炎発症前の感染を捉えられるが、酪農家が簡便に検査できる方法ではない。
乳房炎に感染すると、活性酸素の一種である過酸化水素（Ｈ２Ｏ２）の分解酵素であるグルタチオンペルオキシダーゼやカタラーゼの量が増加する。
本発明者らは、酪農家が現場において、乳汁中の過酸化水素分解酵素の活性を測定することで、乳房炎感染を簡易に判定する方法を既に提案している。
この方法は、サイクリックボルタンメトリー法を代表例とし、乳汁の過酸化水素消去能を、過酸化水素分解により発生する酸素濃度から検出するものであり、日々の搾乳作業の中で、搾乳インラインから乳汁サンプルを採取し、短時間で自動的に測定、診断することにより、通常の乳房炎検出に加え、感染初期の乳房炎および外見上異常の認められない潜在性乳房炎を検出することができる。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００３】
【特許文献１】特開２００９−２４４０４１号公報
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００４】
しかし、乳汁の過酸化水素消去能を、過酸化水素分解により発生する酸素濃度から検出する方法では、乳汁中の溶存酸素濃度に影響を受ける場合があることが分かってきた。
また、サイクリックボルタンメトリー法を用いる場合には、炭素電極と銀塩化銀電極を用いるが、銀塩化銀電極は、ガラス製であるため破損しやすく、また、測定後に食塩水に浸漬して保管する必要があるため、酪農家にとっては扱いにくいという問題を有している。
【０００５】
そこで本発明は、乳汁中の溶存酸素濃度に影響を受けない乳房炎検出方法、及びこの乳房炎検出方法に用いる測定用器具を提供することで乳房炎発症の予防を目的とする。
【課題を解決するための手段】
【０００６】
請求項１記載の本発明の乳房炎検出方法は、乳汁に所定の量の過酸化水素を供給し、前記乳汁の過酸化水素消去能を電気化学的方法によって検出する乳房炎検出方法であって、過酸化水素分解酵素活性に応じて一定時間に減少する過酸化水素濃度を測定することを特徴とする。
請求項２記載の本発明は、請求項１に記載の乳房炎検出方法において、前記電気化学的方法が、クロノアンペロメトリー法であることを特徴とする。
請求項３記載の本発明は、請求項１又は請求項２に記載の乳房炎検出方法において、前記乳汁に前記過酸化水素を供給する前の前記過酸化水素濃度を測定する第１の測定ステップと、前記第１の測定ステップの後に前記乳汁に前記過酸化水素を供給して混合する供給ステップと、前記供給ステップの所定時間経過後に前記過酸化水素濃度を測定する第２の測定ステップと、を有し、前記第１の測定ステップで測定した前記過酸化水素濃度から前記第２の測定ステップで測定した前記過酸化水素濃度を減じて前記過酸化水素消去能を算出することを特徴とする。
請求項４記載の本発明は、請求項１から請求項３のいずれかに記載の乳房炎検出方法において、体細胞数をあらかじめ測定し、前記体細胞数が所定値以下の場合に、前記過酸化水素消去能を検出することを特徴とする。
請求項５記載の本発明の乳房炎検出方法に用いる測定用器具は、請求項１から請求項４のいずれかに記載の乳房炎検出方法に用いる測定用器具であって、前記乳汁に供給する前の前記過酸化水素を収容する第１の空間と、前記過酸化水素を供給する前の前記乳汁を収容する第２の空間と、前記第１の空間と前記第２の空間とを連通させる連通手段と、前記第１の空間内の前記過酸化水素濃度を測定するとともに、前記連通手段で連通させた後の前記第１の空間内又は前記第２の空間内の前記過酸化水素濃度を測定する測定手段と、を備えたことを特徴とする。
請求項６記載の本発明は、請求項５に記載の乳房炎検出方法に用いる測定用器具において、複数の前記第１の空間と、複数の前記第１の空間にそれぞれ対応する複数の前記第２の空間とを備え、前記測定手段では、それぞれの前記第１の空間内の前記過酸化水素濃度を同時に個別に測定するとともに、前記連通手段で連通させた後のそれぞれの前記第１の空間内又はそれぞれの前記第２の空間内の前記過酸化水素濃度を同時に個別に測定することを特徴とする。
【発明の効果】
【０００７】
本発明によれば、過酸化水素が分解されて減少する過酸化水素の濃度自体を測定することで、乳汁中に溶存する酸素量の影響を受けることなく、乳汁の過酸化水素消去能を正確に検出することができる。
【図面の簡単な説明】
【０００８】
【図１】クロノアンペロメトリー測定（以下ＣＡ測定）による時間経過にともなう電流特性を示す図
【図２】過酸化水素濃度とＣＡ測定による電流値との関係を示す特性図
【図３】カタラーゼ混合量とＣＡ測定による電流値の関係を示す特性図
【図４】乳汁中の活性酸素消去能と体細胞数の測定結果を示す図
【図５】本発明の実施例による乳房炎検出方法を機能実現手段で示すブロック図
【図６】同測定用器具の構成と使用方法を示す図
【図７】図６（ｅ）の状態を模式的に示した構成図
【図８】同測定用器具を用いた測定フロー図
【図９】乳房炎感染の簡易判定方法を示す図
【発明を実施するための形態】
【０００９】
本発明の第１の実施の形態による乳房炎検出方法は、過酸化水素分解酵素活性に応じて一定時間に減少する過酸化水素濃度を測定するものである。本実施の形態によれば、過酸化水素が分解されて減少する過酸化水素の濃度自体を測定することで、過酸化水素の分解により発生する酸素濃度を測定する場合のように、乳汁中に溶存する酸素量の影響を受けることなく、乳汁の過酸化水素消去能を正確に検出することができる。
本発明の第２の実施の形態は、第１の実施の形態による乳房炎検出方法において、電気化学的方法が、クロノアンペロメトリー法であるものである。本実施の形態によれば、過酸化水素の分解により減少する過酸化水素濃度を電流値として検出するため、データ処理を容易に行うことができ、また、サイクリックボルタンメトリー法と比較すると、カタラーゼとグルタチオンペルオキシダーゼとの双方の酵素活性を測定でき、また、電極の取り扱いが容易となる。
本発明の第３の実施の形態は、第１又は第２の実施の形態による乳房炎検出方法において、乳汁に過酸化水素を供給する前の過酸化水素濃度を測定する第１の測定ステップと、第１の測定ステップの後に乳汁に過酸化水素を供給して混合する供給ステップと、供給ステップの所定時間経過後に過酸化水素濃度を測定する第２の測定ステップとを有し、第１の測定ステップで測定した過酸化水素濃度から第２の測定ステップで測定した過酸化水素濃度を減じて過酸化水素消去能を算出するものである。本実施の形態によれば、毎回の測定時に電極などの測定器による誤差を補正できるため、測定器によるばらつきの影響を受けることなく、より正確な検出を行うことができる。
本発明の第４の実施の形態は、第１から第３の実施の形態による乳房炎検出方法において、体細胞数をあらかじめ測定し、体細胞数が所定値以下の場合に、過酸化水素消去能を検出するものである。本実施の形態によれば、既に乳房炎が発生している検査対象をあらかじめ除外することで、乳房炎の早期発見が行いやすくなる。
本発明の第５の実施の形態による乳房炎検出方法に用いる測定用器具は、第１から第４の実施の形態による乳房炎検出方法に用いる測定用器具であって、乳汁に供給する前の過酸化水素を収容する第１の空間と、過酸化水素を供給する前の乳汁を収容する第２の空間と、第１の空間と第２の空間とを連通させる連通手段と、第１の空間内の過酸化水素濃度を測定するとともに、連通手段で連通させた後の第１の空間内又は第２の空間内の過酸化水素濃度を測定する測定手段とを備えたものである。本実施の形態によれば、乳汁及び過酸化水素の定量分注を容易に行え、また、第１の測定ステップでの過酸化水素濃度の測定と、第２の測定ステップでの過酸化水素濃度の測定を迅速に行うことができる。
本発明の第６の実施の形態は、第５の実施の形態による乳房炎検出方法に用いる測定用器具において、複数の第１の空間と、複数の第１の空間にそれぞれ対応する複数の第２の空間とを備え、測定手段では、それぞれの第１の空間内の過酸化水素濃度を同時に個別に測定するとともに、連通手段で連通させた後のそれぞれの第１の空間内又はそれぞれの第２の空間内の過酸化水素濃度を同時に個別に測定するものである。本実施の形態によれば、例えば検査対象が牛の場合には、４つの乳房を同時に個別に測定することができ、いずれかの乳房が感染している場合であっても、確実に乳房炎を検出することができるため、乳房炎の早期発見が行いやすくなる。
【実施例】
【００１０】
以下本発明の一実施例による乳房炎検出方法について説明する。
乳房炎原因菌（以下、細菌）に感染すると、白血球が活性酸素を放出して殺菌するが、同時に自身を傷めないよう活性酸素分解酵素が増加する。
本実施例による乳房炎検出方法は、活性酸素の一種である過酸化水素を乳汁に定量添加し、過酸化水素分解酵素の活性に応じて一定時間に減少する過酸化水素濃度を活性酸素消去能として電気化学センサで測定することで、乳房炎発症前の細菌感染を検出する方法である。
【００１１】
図１は、クロノアンペロメトリー測定（以下ＣＡ測定）による時間経過にともなう電流特性を示す図である。図１では、横軸に測定開始からの時間を、縦軸にはＣＡ測定による電流値（μＡ）を示している。
作用極、対極ともに白金電極を用い、電位を０．７Ｖとし、４サンプル（ＣＨ１、ＣＨ２、ＣＨ３、ＣＨ４）について測定を行った。測定温度は２８〜３０℃とした。
図１に示すように、４つのサンプルはいずれも同じ特性を示し、測定開始後６０秒までは電流値が大きく変動するが、その後は一定値に収束し、１２０秒経過後の変化量は少ない。２７０秒ではほぼ一定値に収束しており、その後の変化量は極めて少ないことから、以降の測定には、２７０秒経過後の電流値を用いた。
【００１２】
図２は、過酸化水素濃度とＣＡ測定による電流値との関係を示す特性図である。図２では、横軸に添加した過酸化水素の濃度を、縦軸には２７０秒後電流値（μＡ）を示している。
電位を０．７Ｖとし、２７０秒後の電流値を測定した。測定には、過酸化水素を混合した生理食塩水を供し、測定温度は２８〜３０℃とした。
図２に示すように、過酸化水素濃度とＣＡ測定における２７０秒後電流値は正の比例関係にあることがわかる。
【００１３】
図３は、カタラーゼ混合量とＣＡ測定による電流値の関係を示す特性図である。図３では、横軸に０．１％カタラーゼ混合量（μｌ）を、縦軸には２７０秒後電流値（μＡ）を示している。ここで、縦軸の２７０秒後電流値（μＡ）は過酸化水素濃度を表している。
分解酵素であるカタラーゼ（以下ＣＡT）試薬と生理食塩水を混合した後、過酸化水素を添加し測定した。生理食塩水は１２ｍｌ、過酸化水素は２ｍｌ、１００ｍＭ（ｍｍｏｌ／ｌ）、測定温度は２８〜３０℃とした。
図３に示すように、過酸化水素分解酵素であるカタラーゼの混合量と２７０秒後電流値は負の比例関係にあった。従って、過酸化水素分解酵素の活性に応じて一定時間に減少する過酸化水素濃度、即ち過酸化水素消去能は、ＣＡ測定による電流値で推定できることが分かる。
【００１４】
図４は、乳汁中の活性酸素消去能と体細胞数の測定結果を示す図である。図４では、横軸に体細胞数（万個／ｍｌ）を、縦軸には活性酸素消去能（μＡ）を示している。ここで、縦軸では数値が大きい場合には活性酸素消去能が高く、数値が小さい場合には活性酸素消去能が低いことを表している。
乳汁中の活性酸素消去能と体細胞数（ＳＣＣ）や細菌数等の関係を調査するため、過酸化水素と乳汁（細胞膜を破壊し反応速度を上げるため界面活性剤を添加）を混合してＣＡ測定を行った。乳汁は１２ｍｌ、過酸化水素は２ｍｌ、１００ｍＭ、測定温度は２８〜３０℃とし、併せて乳汁中の体細胞数と細菌数を測定した。なお、活性酸素消去能は、測定器差補正と温度補正を行っている。測定器差補正については後述する。
図４に示すように、体細胞数が高くなると乳汁中の活性酸素消去能が高くなることが分かる。また、体細胞数が低くても消去能が高い場合があり、この場合は、細菌に感染し、殺菌のために活性酸素が放出されたことにより、消去能が高くなったと推察される。
従って、図４において、領域Ａは乳房炎に感染し、自然免疫では防御できず体細胞（白血球）が増加した群であり、領域Ｂは乳房炎に感染し、自然免疫により活性酸素を放出して殺菌している群であると推察される。
【００１５】
次に、本実施例による乳房炎検出方法に用いる測定用器具について説明する。
図５は本実施例による乳房炎検出方法を機能実現手段で示すブロック図、図６は同測定用器具の構成と使用方法を示す図、図７は、図６（ｅ）の状態を模式的に示した構成図、図８は同測定用器具を用いた測定フロー図である。
【００１６】
図５に示すように、本実施例による乳房炎検出方法は、測定用器具１０と、測定用コントローラ２０とを用いて行う。
測定用器具１０は、乳汁に供給する前の過酸化水素を収容する第１の空間（過酸化水素容器）１１と、過酸化水素を供給する前の乳汁を収容する第２の空間（乳汁容器）１２と、過酸化水素容器１１と乳汁容器１２とを連通させる連通手段（押棒）１３と、過酸化水素容器１１内又は乳汁容器１２内の過酸化水素濃度を測定する測定手段であるセンサプレート１４と測定ユニット１４’、乳汁容器１２内に乳汁を定量する乳汁定量手段１５とを備えている。
ここで、過酸化水素容器１１は、独立した複数の空間を備え、また乳汁容器１２も、複数の過酸化水素容器１１にそれぞれ対応する複数の乳汁容器１２を備えていることが好ましい。
また、センサプレート１４は、温度センサ１４ａとＣＡ測定用電極１４ｂを備えている。ＣＡ測定用電極１４ｂは、作用極と対極ともに白金電極を用いることが好ましい。ただし、白金電極以外に、イリジウムや、イリジウムとジルコニウムを含有する電極、又はカーボンを電極とするものであってもよい。
【００１７】
測定用コントローラ２０は、センサプレート１４と測定ユニット１４’で測定するデータを読み取るデータ取込手段２１と、センサプレート１４と測定ユニット１４’での測定開始からの時間を計測する計時手段２２と、データ取込手段２１で取り込んだデータを基に活性酸素消去能を演算する演算手段２３と、この演算手段２３での演算結果によって細菌感染を判定する判定手段２４と、この判定手段２４での判定に用いる閾値を記憶する閾値記憶手段２５と、判定結果を出力する出力手段２６と、データ取込手段２１で取り込んだデータ及び判定手段２４での判定結果を記憶するデータ記憶手段２７とを備えている。
【００１８】
次に、図６及び図７を用いて、同測定用器具の構成と使用方法を説明する。
図６（ａ）は、搬送具内空間に、４つの乳汁容器１２と１つの捨て乳容器１２’を備えていることを示している。４つの乳汁容器１２には、乳汁定量手段１５によって、乳牛１頭の４分房の乳汁がそれぞれ定量収容されている。
図６（ｂ）は、図６（ａ）の状態において、それぞれの乳汁容器１２内に、あらかじめ過酸化水素を定量分注している過酸化水素容器１１を投入した状態を示している。
【００１９】
図６（ｃ）は、図６（ｂ）の状態にある搬送具とともに、センサプレート１４と、測定ユニット１４’とを示している。センサプレート１４には、温度センサ１４ａとＣＡ測定用電極１４ｂを備えている。また、測定ユニット１４’には、温度センサ用コンタクトピン１４’ａとＣＡ測定用コンタクトピン１４’ｂが設けられている。
それぞれの乳汁容器１２内に、過酸化水素容器１１を浮かべた状態で、センサプレート１４を乳汁容器１２にかぶせ、乳汁容器１２を、センサプレート１４が当接するように測定ユニット１４’に設置する。後述するように、乳汁容器１２底面に押棒１３が設けられているために、センサプレート１４を乳汁容器１２にかぶせた段階で過酸化水素容器１１内には、温度センサ１４ａ及びＣＡ測定用電極１４ｂが位置する。
【００２０】
図６（ｄ）は、測定ユニット１４’に乳汁容器１２を設置した状態を示している。
図６（ｄ）に示すように、乳汁容器１２底面には、押棒１３が設けられている。
図６（ｅ）は、図６（ｄ）の状態にある乳汁容器１２に、保温カバー１６をかぶせた状態を示している。
【００２１】
図７（ａ）は、図６（ｅ）の状態を、模式的に示した構成図である。
また、図７（ｂ）は、図７（ａ）の状態から、押棒１３を押し下げて過酸化水素容器１１の底面を割り、過酸化水素容器１１内の過酸化水素と乳汁容器１２内の乳汁を混合する状態を、模式的に示した構成図である。
【００２２】
次に図８を用いて同測定用器具を用いた測定フローについて説明する。
まず、乳汁を乳汁容器１２に採取する（ステップ１）。ステップ１における乳汁は、乳牛１頭の４分房の乳汁を混合することなく採取する。ステップ２では、ステップ１で採取した４分房の乳汁の内、余計な乳汁が測定用器具を斜めに傾けることで乳汁容器１２の外側にある捨て乳容器１２’に排出され、各乳汁容器１２内の乳汁は一定量にされる。
そして、所定濃度の過酸化水素を過酸化水素容器１１に定量分注する（ステップ３）。
ステップ３において所定濃度の過酸化水素が定量分注された過酸化水素容器１１は、所定位置に設置される（ステップ４）。図６に示す実施例では、過酸化水素容器１１を乳汁容器１２内に浮かべる。
そして、センサプレート１４を過酸化水素容器１１を浮かべた乳汁容器１２の開口に設置し、センサプレート１４を設置した乳汁容器１２を測定ユニット１４’に設置する（ステップ５）。
【００２３】
ステップ５が終了した後に、ＣＡ測定による電流値の測定を開始する（ステップ６）。
ステップ６における測定開始からの経過時間を計時手段２２にて計時し、ステップ７において、あらかじめ設定した時間（２７０秒）が経過した場合には、設定時間経過時点での過酸化水素容器１１内の過酸化水素濃度を測定する（ステップ８）。すなわち、ステップ８（第１の測定ステップ）では、乳汁に過酸化水素を供給する前の過酸化水素濃度をセンサプレート１４と測定ユニット１４’で測定し、測定したデータをデータ取込手段２１で取り込む。センサプレート１４と測定ユニット１４’では、それぞれの過酸化水素容器１１内の過酸化水素濃度を同時に個別に測定する。
ステップ８（第１の測定ステップ）における測定終了後に、押棒１３を操作することで、過酸化水素容器１１を破損し、過酸化水素容器１１内の過酸化水素と乳汁容器１２内の乳汁とを混合する（ステップ９）。
【００２４】
ステップ９における押棒１３の操作、すなわち過酸化水素容器１１内の過酸化水素と乳汁容器１２内の乳汁との混合からの経過時間を計時手段２２にて計時し、ステップ１０において、あらかじめ設定した時間（２７０秒）が経過した場合には、設定時間経過時点での過酸化水素濃度を測定する（ステップ１１）。すなわち、ステップ１１では、過酸化水素を供給した乳汁の過酸化水素濃度をセンサプレート１４と測定ユニット１４’で測定し、測定したデータをデータ取込手段２１で取り込む。センサプレート１４と測定ユニット１４’では、押棒１３で連通させた後のそれぞれの過酸化水素容器１１内又はそれぞれの乳汁容器１２内の過酸化水素濃度を同時に個別に測定する。
ステップ１２では、活性酸素消去能を演算手段２３において演算する。活性酸素消去能の演算は、ステップ８（第１の測定ステップ）で測定した過酸化水素濃度からステップ１１（第２の測定ステップ）で測定した過酸化水素濃度を減じて算出する。演算手段２３での活性酸素消去能の演算は、それぞれの乳汁容器１２別に行う。なお、この演算において、温度センサ１４ａで検出した温度を基に補正を行う。
ここで、演算手段２３での活性酸素消去能の演算を、それぞれの乳汁容器１２別に行うことで、検査対象が牛の場合には、４つの乳房を同時に個別に測定することができ、いずれかの乳房が感染している場合であっても、確実に乳房炎を検出することができるため、乳房炎の早期発見が行いやすくなる。
【００２５】
ステップ１２で演算した結果に基づき、閾値記憶手段２５にあらかじめ記憶している閾値と比較し感染判定を行う（ステップ１３）。
ステップ１３での判定結果は出力される（ステップ１４）。また、ステップ８において測定された過酸化水素濃度、ステップ１１において測定された過酸化水素濃度、及びステップ１３における判定結果はデータ記憶手段２７に記憶される。
【００２６】
図９は、乳房炎感染の簡易判定方法を示す図である。
図４で示した測定結果から、体細胞数が高くなると乳汁中の活性酸素消去能が高くなること、及び体細胞数が低くても活性酸素消去能が高い場合があることが分かった。
この結果から、図９に示すように、体細胞数が所定値以上の場合には、乳房炎であり、体細胞数が所定値以下の場合で活性酸素消去能が所定値より高い場合に初期段階の乳房炎原因菌感染と判断できる。
従って、体細胞数をあらかじめ測定し、体細胞数が所定値以下の場合に、過酸化水素消去能を検出することが好ましい。
このように、体細胞数が所定値以下の検体に限ることで、乳房炎発症の検査負担を減らし、予防検査を確実に行うことができる。
【００２７】
以上のように本発明によれば、乳汁に所定の量の過酸化水素を供給し、乳汁の過酸化水素消去能を電気化学的方法によって検出する乳房炎検出方法において、ＣＡ測定により、過酸化水素分解酵素活性に応じて一定時間に減少する過酸化水素濃度を測定することで、乳汁中の溶存酸素濃度の影響を排除し、かつ過酸化水素分解酵素であるカタラーゼとグルタチオンペルオキシダーゼ両方の消去能が測定できる。
また、本発明では、最初に、既知濃度の過酸化水素をＣＡ測定により行った後、続いて、過酸化水素と乳汁とを混合してＣＡ測定を行うため、測定器差の補正が測定毎に行える。
【産業上の利用可能性】
【００２８】
本発明は、牛や山羊、その他動物の乳房炎検出方法に適用できる。
【符号の説明】
【００２９】
１０ 測定用器具
１１ 第１の空間（過酸化水素容器）
１２ 第２の空間（乳汁容器）
１３ 連通手段（押棒）
１４ 測定手段（センサプレート）
１４’ 測定手段（測定ユニット）
２０ 測定用コントローラ
２１ データ取込手段
【特許請求の範囲】
【請求項１】
乳汁に所定の量の過酸化水素を供給し、前記乳汁の過酸化水素消去能を電気化学的方法によって検出する乳房炎検出方法であって、過酸化水素分解酵素活性に応じて一定時間に減少する過酸化水素濃度を測定することを特徴とする乳房炎検出方法。
【請求項２】
前記電気化学的方法が、クロノアンペロメトリー法であることを特徴とする請求項１に記載の乳房炎検出方法。
【請求項３】
前記乳汁に前記過酸化水素を供給する前の前記過酸化水素濃度を測定する第１の測定ステップと、
前記第１の測定ステップの後に前記乳汁に前記過酸化水素を供給して混合する供給ステップと、
前記供給ステップの所定時間経過後に前記過酸化水素濃度を測定する第２の測定ステップと、を有し、
前記第１の測定ステップで測定した前記過酸化水素濃度から前記第２の測定ステップで測定した前記過酸化水素濃度を減じて前記過酸化水素消去能を算出することを特徴とする請求項１又は請求項２に記載の乳房炎検出方法。
【請求項４】
体細胞数をあらかじめ測定し、前記体細胞数が所定値以下の場合に、前記過酸化水素消去能を検出することを特徴とする請求項１から請求項３のいずれかに記載の乳房炎検出方法。
【請求項５】
請求項1から請求項４のいずれかに記載の乳房炎検出方法に用いる測定用器具であって、
前記乳汁に供給する前の前記過酸化水素を収容する第１の空間と、
前記過酸化水素を供給する前の前記乳汁を収容する第２の空間と、
前記第１の空間と前記第２の空間とを連通させる連通手段と、
前記第１の空間内の前記過酸化水素濃度を測定するとともに、前記連通手段で連通させた後の前記第１の空間内又は前記第２の空間内の前記過酸化水素濃度を測定する測定手段と、
を備えたことを特徴とする乳房炎検出方法に用いる測定用器具。
【請求項６】
複数の前記第１の空間と、複数の前記第１の空間にそれぞれ対応する複数の前記第２の空間とを備え、
前記測定手段では、それぞれの前記第１の空間内の前記過酸化水素濃度を同時に個別に測定するとともに、前記連通手段で連通させた後のそれぞれの前記第１の空間内又はそれぞれの前記第２の空間内の前記過酸化水素濃度を同時に個別に測定することを特徴とする請求項５に記載の乳房炎検出方法に用いる測定用器具。
【請求項１】
乳汁に所定の量の過酸化水素を供給し、前記乳汁の過酸化水素消去能を電気化学的方法によって検出する乳房炎検出方法であって、過酸化水素分解酵素活性に応じて一定時間に減少する過酸化水素濃度を測定することを特徴とする乳房炎検出方法。
【請求項２】
前記電気化学的方法が、クロノアンペロメトリー法であることを特徴とする請求項１に記載の乳房炎検出方法。
【請求項３】
前記乳汁に前記過酸化水素を供給する前の前記過酸化水素濃度を測定する第１の測定ステップと、
前記第１の測定ステップの後に前記乳汁に前記過酸化水素を供給して混合する供給ステップと、
前記供給ステップの所定時間経過後に前記過酸化水素濃度を測定する第２の測定ステップと、を有し、
前記第１の測定ステップで測定した前記過酸化水素濃度から前記第２の測定ステップで測定した前記過酸化水素濃度を減じて前記過酸化水素消去能を算出することを特徴とする請求項１又は請求項２に記載の乳房炎検出方法。
【請求項４】
体細胞数をあらかじめ測定し、前記体細胞数が所定値以下の場合に、前記過酸化水素消去能を検出することを特徴とする請求項１から請求項３のいずれかに記載の乳房炎検出方法。
【請求項５】
請求項1から請求項４のいずれかに記載の乳房炎検出方法に用いる測定用器具であって、
前記乳汁に供給する前の前記過酸化水素を収容する第１の空間と、
前記過酸化水素を供給する前の前記乳汁を収容する第２の空間と、
前記第１の空間と前記第２の空間とを連通させる連通手段と、
前記第１の空間内の前記過酸化水素濃度を測定するとともに、前記連通手段で連通させた後の前記第１の空間内又は前記第２の空間内の前記過酸化水素濃度を測定する測定手段と、
を備えたことを特徴とする乳房炎検出方法に用いる測定用器具。
【請求項６】
複数の前記第１の空間と、複数の前記第１の空間にそれぞれ対応する複数の前記第２の空間とを備え、
前記測定手段では、それぞれの前記第１の空間内の前記過酸化水素濃度を同時に個別に測定するとともに、前記連通手段で連通させた後のそれぞれの前記第１の空間内又はそれぞれの前記第２の空間内の前記過酸化水素濃度を同時に個別に測定することを特徴とする請求項５に記載の乳房炎検出方法に用いる測定用器具。
【図１】
【図２】
【図３】
【図４】
【図５】
【図６】
【図７】
【図８】
【図９】
【図２】
【図３】
【図４】
【図５】
【図６】
【図７】
【図８】
【図９】
【公開番号】特開２０１２−２０８００６（Ｐ２０１２−２０８００６Ａ）
【公開日】平成２４年１０月２５日（２０１２．１０．２５）
【国際特許分類】
【出願番号】特願２０１１−７３７０４（Ｐ２０１１−７３７０４）
【出願日】平成２３年３月２９日（２０１１．３．２９）
【出願人】（５０１２０３３４４）独立行政法人農業・食品産業技術総合研究機構 (827)
【出願人】（５１１０８０６９４）日美商事株式会社 (3)
【公開日】平成２４年１０月２５日（２０１２．１０．２５）
【国際特許分類】
【出願日】平成２３年３月２９日（２０１１．３．２９）
【出願人】（５０１２０３３４４）独立行政法人農業・食品産業技術総合研究機構 (827)
【出願人】（５１１０８０６９４）日美商事株式会社 (3)
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