【課題】新規のサテライト人工染色体を提供する。
【解決手段】選択可能マーカーを含む１つまたは複数のＤＮＡフラグメントを細胞に導入する段階と、前記１つまたは複数のＤＮＡフラグメントをゲノムＤＮＡに取込んだ細胞が産生されるような選択条件下で細胞を増殖させる段階と、サテライト人工染色体を含む細胞を選択する段階とを含んで成る、ここでサテライト人工染色体は真正染色質よりも異質染色質を多く含むものである、人工染色体の製造方法、このような方法によって得られるサテライト人工染色体、並びにサテライト人工染色体を含むトランスジェニック非ヒト動物または植物。

【特許請求の範囲】
【請求項１】
植物細胞の染色体の挟動原体異質染色質に選択可能マーカーをコードするＤＮＡが導入されるよう、選択可能マーカーを含む１つまたは複数のＤＮＡフラグメントを植物細胞に導入する段階と、
前記１つまたは複数のＤＮＡフラグメントをゲノムＤＮＡに取込んだ細胞が産生されるような選択条件下で前記植物細胞を増殖させる段階と、
サテライト人工染色体またはソーセージ型染色体を含む細胞を選択する条件下で細胞を増殖させる段階と
を含んで成る、ここでサテライト人工染色体は真正染色質よりも異質染色質を多く含むものであり、
ここでサテライト人工染色体は真正染色質よりも異質染色質を多く含むものであり、
ソーセージ染色体は（ｉ）増幅された異質染色質部分および（ｉｉ）真正染色質部分を含むものである、植物人工染色体または植物ソーセージ型染色体の製造方法。
【請求項２】
選択された細胞が、ソーセージ染色体を含有している、請求項１記載の方法。
【請求項３】
選択された細胞が、サテライト人工染色体を含有する、請求項１記載の方法。
【請求項４】
更に、遺伝子産物をコードするＤＮＡを導入する段階を含んでおり、この遺伝子産物をコードするＤＮＡは選択可能マーカーを含むフラグメントに存在するかまたは第二のＤＮＡフラグメントに存在し、得られるサテライト人工染色体またはソーセージ染色体が遺伝子産物をコードする異種ＤＮＡを含むことを特徴とする請求項１に記載の方法。
【請求項５】
該細胞がサテライト人工染色体を含有し、
該サテライト人工染色体がメガ染色体であり、
ここでメガ染色体は、２個の反転メガレプリコンを有するアンプリコンを含む、５０Ｍｂ〜４００Ｍｂを含有するサテライト人工染色体であり、
メガレプリコンが反復異質染色質ＤＮＡ単位を含むものであり、
該方法が、末端切断されたメガ染色体を含む細胞が産生される条件に細胞を置く段階を更に含むことを特徴とする請求項１から４のいずれか一項に記載の方法。
【請求項６】
前記条件が、Ｘ線照射と、染色体内部の塩基対合を不安定化する物質の存在下の増殖とから選択されることを特徴とする請求項５に記載の方法。
【請求項７】
前記物質がブロモデオキシウリジンであることを特徴とする請求項６に記載の方法。
【請求項８】
更に、１５〜６０Ｍｂからなるサテライト人工染色体を含んでいる細胞を選択する段階を含むことを特徴とする請求項１から７のいずれか一項に記載の方法。
【請求項９】
細胞からサテライト人工染色体を単離する段階を更に含むことを特徴とする請求項１から８のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１０】
単離が、
中期染色体を単離し、
内因性染色体からサテライト人工染色体を識別し、
内因性染色体からサテライト人工染色体を分離することによって行われることを特徴とする請求項９に記載の方法。
【請求項１１】
ＤＮＡ配列特異的染料で染色体を染色することによってサテライト人工染色体を内因性染色体から識別し、フローセルソーターによって分離することを特徴とする請求項１０に記載の方法。
【請求項１２】
植物細胞が、植物プロトプラストである、請求項１から１１のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１３】
請求項１から１２のいずれか一項に記載の方法によって製造されるサテライト人工染色体。
【請求項１４】
実質的に純粋であり、真正染色質よりも異質染色質を多く含む、単離された植物サテライト人工染色体。
【請求項１５】
５０〜４５０Ｍｂからなるメガ染色体であることを特徴とする請求項１４に記載のサテライト人工染色体。
【請求項１６】
選択可能マーカーを含む１つまたは複数のＤＮＡフラグメントを植物細胞に導入する段階と、
前記１つまたは複数のＤＮＡフラグメントをそのゲノムＤＮＡに取込んだ細胞が産生されるような選択条件下で細胞を増殖させる段階と、
増殖した細胞から新規な動原体を含む二動原体型染色体を有する細胞を選択する段階と、
サテライト人工染色体またはソーセージ染色体が産生される条件下で細胞を増殖させる段階と
を含んで成り、ここで
サテライト人工染色体が真正染色質よりも異質染色質を多く含み；および
ソーセージ染色体が（ｉ）増幅された異質染色質部分および（ｉｉ）真正染色質部分を含むものである、
植物人工染色体または植物ソーセージ型染色体の製造方法。
【請求項１７】
サテライト人工染色体またはソーセージ型染色体を含有する細胞、ここで該サテライト人工染色体は請求項１から１２のいずれか一項に記載の方法で調製されたものであり、
ソーセージ型染色体は請求項１から１２のいずれか一項に記載の方法で調製されたものである。
【請求項１８】
植物プロトプラスト細胞である、請求項１７記載の細胞。
【請求項１９】
請求項１７または１８記載の植物細胞を、トランスジェニック植物が産生される条件下で培養する段階を含む、トランスジェニック植物の産生方法。
【請求項２０】
サテライト人工染色体を植物細胞に導入する段階と、該植物細胞をトランスジェニック植物が産生される条件下で培養する段階を含むことを特徴とするトランスジェニック植物の産生方法。
【請求項２１】
サテライト人工染色体が細胞融合およびミクロセル（微小核体）融合からなる群から選択される方法により得られたものである、請求項２０記載の方法。
【請求項２２】
植物細胞がタバコ、イネ、トウモロコシ、ライ麦、小麦、大豆、Brassica napus、綿、レタス、ジャガイモ、トマトまたはシロイヌナズナの細胞であることを特徴とする請求項１９から２１いずれか一項に記載の方法。
【請求項２３】
ＤＮＡフラグメントを植物細胞に導入する段階、ここでＤＮＡフラグメントは植物細胞内の狭動原体領域内へ組み込まれる、
前記植物細胞を増殖させる段階と、
得られた植物細胞から、増幅された領域を染色体内に含む細胞を選択する段階
を含む、増幅された核酸を含む植物染色体の製造方法。
【請求項２４】
前記ＤＮＡフラグメントが、狭動原体領域を標的とする標的化ヌクレオチド配列を含有する、請求項１または２３記載の方法。
【請求項２５】
前記標的化配列がｒＤＮＡを含有する、請求項２４記載の方法。
【請求項２６】
前記増幅された領域を含む染色体が、ソーセージ染色体である、請求項２３から２５いずれか一項に記載の方法。
【請求項２７】
植物細胞がタバコ、イネ、トウモロコシ、ライ麦、小麦、大豆、Brassica napus、綿、レタス、ジャガイモ、トマトまたはシロイヌナズナの細胞であることを特徴とする、請求項２３から２６いずれか一項に記載の方法。
【請求項２８】
増幅された核酸領域が増幅された内因性染色体核酸を含む、請求項２３から２７いずれか一項に記載の方法。
【請求項２９】
前記導入されたＤＮＡフラグメントが１つまたは複数の遺伝子をコードする、請求項１または２３記載の方法。
【請求項３０】
前記導入されたＤＮＡフラグメントが植物へ病気に対する耐性を付与する産物をコードするものである、請求項２９記載の方法。

【図１】

【図２】

【図３】

【図４】

【図５】

【公開番号】特開２００９−２５４３７９（Ｐ２００９−２５４３７９Ａ）
【公開日】平成２１年１１月５日（２００９．１１．５）
【国際特許分類】
【出願番号】特願２００９−１７５２８１（Ｐ２００９−１７５２８１）
【出願日】平成２１年７月２８日（２００９．７．２８）
【分割の表示】特願２００８−２６６０８（Ｐ２００８−２６６０８）の分割
【原出願日】平成９年４月１０日（１９９７．４．１０）
【出願人】（５９１１７３４８６）ザ・バイオロジカル・リサーチ・センター・オブ・ザ・ハンガリアン・アカデミー・オブ・サイエンシズ (3)
【氏名又は名称原語表記】ＴＨＥ　ＢＩＯＬＯＧＩＣＡＬ　ＲＥＳＥＡＲＣＨ　ＣＥＮＴＥＲ　ＯＦ　ＴＨＥ　ＨＵＮＧＡＲＩＡＮ　ＡＣＡＤＥＭＹ　ＯＦ　ＳＣＩＥＮＣＥＳ
【出願人】（３９７００９９３４）グラクソ　グループ　リミテッド (832)
【氏名又は名称原語表記】ＧＬＡＸＯ　ＧＲＯＵＰ　ＬＩＭＩＴＥＤ
【住所又は居所原語表記】Ｇｌａｘｏ　Ｗｅｌｌｃｏｍｅ　Ｈｏｕｓｅ，Ｂｅｒｋｅｌｅｙ　Ａｖｅｎｕｅ　Ｇｒｅｅｎｆｏｒｄ，Ｍｉｄｄｌｅｓｅｘ　ＵＢ６　０ＮＮ，Ｇｒｅａｔ　Ｂｒｉｔａｉｎ
【Ｆターム（参考）】