優れた安全性プロファイルを有する血漿陽イオンを含む診断用組成物
本発明は、優れた心臓安全性プロファイルを示す新規な診断用Ｘ線組成物に関する。かかる組成物は、薬学的に許容されるキャリア中に非イオン性ヨウ素化二量体を含んでいる。さらに詳しくは、本発明は、次式の化合物Ｉ、薬学的に許容されるキャリア、並びに上記キャリア中に溶解されて４０〜５０ｍＭのナトリウムイオン濃度及び０．１〜０．７ｍＭのカルシウムイオン濃度を与えるナトリウム化合物及びカルシウム化合物を含んでいる。本発明はまた、かかる診断用組成物を用いるイメージング方法にも関する。
【化１】
【化１】
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、優れた心臓安全性プロファイルを示す新規な診断用Ｘ線組成物に関する。かかる組成物は、薬学的に許容されるキャリア中に非イオン性ヨウ素化二量体を含んでいる。本発明はまた、かかる診断用組成物を用いるイメージング方法にも関する。
【背景技術】
【０００２】
すべての診断イメージングは、身体内部の異なる構造から異なる信号レベルを得ることに基づいている。したがって、例えばＸ線イメージングにおいて所定の身体構造が画像中で見えるためには、その構造によるＸ線減衰度が周囲の組織のＸ線減衰度と違っていなければならない。身体構造とその周囲との間における信号の差はしばしばコントラストと呼ばれ、診断イメージングでのコントラストを高めるための手段に多大の努力が捧げられてきた。これは、身体構造とその周囲との間のコントラストが大きいほど画像の品質が高くなり、診断を行う医師にとってのそれの価値が高くなるからである。その上、コントラストが大きいほど、イメージング操作で可視化できる身体構造は小さくなる。即ち、コントラストの向上は空間解像度の向上をもたらすことができる。画像の診断品質はイメージング操作における固有ノイズレベルに大きく依存し、したがってコントラストレベルとノイズレベルとの比は診断画像に関する有効診断品質因子となることがわかる。かかる診断品質因子の向上を達成することはずっと以前から重要な目標であって、今なお変わっていない。
【０００３】
Ｘ線のような技術では、診断品質因子を向上させるための１つのアプローチは、コントラスト媒体として処方されたコントラスト増強物質をイメージングすべき身体領域中に導入することであった。即ち、Ｘ線の場合、造影剤の初期の例は、それが分布した身体領域のＸ線減衰度を高める不溶性の無機バリウム塩であった。最近の５０年間、Ｘ線造影剤の分野では可溶性のヨウ素含有化合物が支配的であった。ヨウ素化造影剤を含む商業的に入手可能なコントラスト媒体（ＣＭ）は、通常、（例えばＧａｓｔｒｏｇｒａｆｅｎ（商標）の商品名で市販されている）ジアトリゾエートのようなイオン性単量体、（例えばＨｅｘａｂｒｉｘ（商標）の商品名で市販されている）イオキサグレートのようなイオン性二量体、（例えばＯｍｎｉｐａｑｕｅ（商標）の商品名で市販されている）イオヘキソールや（例えばＩｓｏｖｕｅ（商標）の商品名で市販されている）イオパミドールや（例えばＩｏｍｅｒｏｎ（商標）の商品名で市販されている）イオメプロールのような非イオン性単量体、及び（例えばＶｉｓｉｐａｑｕｅ（商標）の商品名で市販されている）非イオン性二量体イオジキサノールに分類される。ヨウ素化Ｘ線コントラスト媒体の臨床安全性は、最近の数十年間にわたり、新しい薬剤の開発を通じて（即ち、イオン性単量体（Ｉｓｏｐａｑｕｅ（商標））から非イオン性単量体（例えば、Ｏｍｎｉｐａｑｕｅ（商標））及び非イオン性二量体（例えば、Ｖｉｓｉｐａｑｕｅ（商標））へと）絶えず改良されてきた。しかし、現在市場にある高度に精製されたＸ線コントラスト媒体でも、低度の望ましくない副作用（例えば、造影剤誘発腎症（ＣＩＮ）、有害な心臓事象及び遅延副作用（ＤＡＲ））を示す。その結果、特にこれらの副作用が起こるリスクの高い患者に関係する診断検査について、新規で一層安全なＸ線コントラスト媒体に対する臨床的ニーズが存在している。
【０００４】
コントラスト媒体の有用性は、主としてその毒性、その診断効果、コントラスト媒体を投与された被験者が受けることがある副作用、並びに製造、貯蔵及び投与の容易性によって支配される。コントラスト媒体の毒性及び有害な生物学的効果は、配合媒体（即ち、診断用組成物）の成分（例えば、溶媒又はキャリア）並びに造影剤自体及びその成分（例えば、イオン性造影剤用のイオン）によって生み出され、またその代謝産物によって生み出される。
【０００５】
冠動脈造影処置の回数は、経皮経管腔冠動脈形成術、ステント移植、及び治療薬の冠動脈内投与をはじめとする冠動脈介入能力の拡大に伴って増加し続けている。年間７千万を超える回数の処置が世界中で実施されており、その大部分が冠動脈に関係している。ヨウ素化放射線コントラスト媒体によって引き起こされるいくつかの副作用は稀であるが、ハイリスク患者及び経皮冠動脈介入では起こることがある。
【０００６】
冠動脈造影では、放射線写真の減衰度を最大にし、それによって診断イメージングを最適化するため、冠動脈中の血液をボーラス量のヨウ素化放射線コントラスト媒体によって理想的には完全に置換すべきである。コントラスト媒体が血液を置換した場合、コントラスト媒体は冠動脈血管に化学毒性効果及び浸透圧効果を引き起こすと共に、電解質濃度、粘度及び酸素張力の変化を引き起こす。これらの変化は収縮力及び心臓リズムに影響を及ぼし、心室細動（ＶＦ）を引き起こすことがある。冠動脈中へのコントラスト媒体の選択的注入は、局所電気生理学的効果及び血行力学的効果を誘起する。重篤な心室性不整脈並びに心臓抑制が、コントラスト媒体に関係し得る冠動脈造影の公知合併症である。
【０００７】
国際公開第９１／１３６３６号及び同第９０／１１０９４号（いずれもＮｙｃｏｍｅｄ ＡＳ、現在はＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ ＡＳ）は、Ｘ線コントラスト媒体及び様々な塩を含むその製剤に関する。また、塩（主としてＮａＣｌ）の含有を伴うＸ線造影剤の製剤の利点に関する多数の研究が文献中に存在している。研究は、ラット（Ｊｙｎｇｅ ｅｔ ａｌ．，Ｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｉｖｅ Ｒａｄｉｏｌｏｇｙ １９９３，２８，２０−２５）及びウサギ（Ｂａａｔｈ ｅｔ ａｌ，Ｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｉｖｅ Ｒａｄｉｏｌｏｇｙ １９９３，２８，２２３−２２７）からの単離心臓に関して実施され、またイヌ（Ｐｅｄｅｒｓｅｎ ｅｔ ａｌ．，Ａｃａｄ．Ｒａｄｉｏｌ．１９９４，１，１３６−１４４）及びブタにおいて実施されている。特に重要なのはＣｈａｉ ｅｔ ａｌ．（Ａｃａｄ．Ｒａｄｉｏｌ．２００４，１１，５８３−５９３）による研究であって、そこには１９ｍＭのＮａＣｌ及び０．３ｍＭのＣａＣｌ2を含むイオジキサノールの製剤が単独のイオジキサノールより低い頻度の心室細動を示すことが証明されている。
【０００８】
Ｊａｃｏｂｓｅｎ ｅｔ ａｌ．（Ｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｉｖｅ Ｒａｄｉｏｌｏｇｙ １９９３；２８，９１７−９２４）は、イヌにおけるコントラスト媒体の急速な反復注入が心筋変力作用（ｉｎｏｔｒｏｐｙ）及び単相性活動電位に対する追加の効果を生じるのに対し、リンガー液はいかなる効果も生じないことを示している。これは、冠動脈樹全体を満たすために反復注入が稀ではない臨床現場での血管造影が心臓パラメーターの変化を誘発して合併症を引き起こし得る機序を理解するために研究された。
【０００９】
現在市販されているイオジキサノール製剤（３２０ｍｇＩ／ｍｌ）は、１９ｍＭのナトリウムイオン及び０．３ｍＭのカルシウムイオンを含んでいる（Ｖｉｓｉｐａｑｕｅ（商標））。この製剤は、主としてブタ心臓モデルでのインビボ研究によるばかりでなく、単離された動物心臓に関する研究によっても、塩を添加しないイオジキサノールに比べて優れた心臓安全性プロファイルを示すことが実験的に証明された。同様な研究において、イオヘキサノールも添加塩（主としてＮａＣｌ）と共に製剤化された場合に心臓耐性の増大を示すことが証明された。
【００１０】
ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ ＡＳの国際公開第２００９／００８７３４号は、新規な部類の化合物及びＸ線造影剤としてのそれの使用を開示している。かかる化合物は、２つの連結されたヨウ素化フェニル基を含む二量体である。２つのヨウ素化フェニル基を連結するブリッジは、１〜６の−ＯＨ基又はＯＣＨ3基で任意に置換された直鎖Ｃ3〜Ｃ8アルキレン鎖である。この出願の一般式（Ｉ）では一連の化合物がカバーされ、多数の特定化合物が示唆されている。
【００１１】
国際公開第２００９／００８７３４号の式（Ｉ）の範囲内に含まれる、１つの特定二量体Ｘ線造影剤である化合物Ｉは、好ましい性質を有することが出願人によって見出されている。
【００１２】
【化１】
【先行技術文献】
【特許文献】
【００１３】
国際公開第２００９／００８７３４号パンフレット
【発明の概要】
【００１４】
今回、出願人は、意外にも、上述のものと同様なインビボ研究において証明される通り、Ｖｉｓｉｐａｑｕｅ（商標）に比べて優れた心臓安全性プロファイルを示す新規な診断用Ｘ線組成物を同定した。
【００１５】
かくして第１の態様では、本発明は、
次式の化合物Ｉと、
【００１６】
【化２】
薬学的に許容されるキャリアと、
上記キャリア中に溶解されて４０〜５０ｍＭのナトリウムイオン濃度及び０．１〜０．７ｍＭのカルシウムイオン濃度を与えるナトリウム化合物及びカルシウム化合物と
を含む診断用組成物を提供する。
【００１７】
化合物Ｉの生理化学的性質は下記のように見出される。生体分布情報及び急性毒性情報に加えて、使用した方法に関する追加の情報は実施例１に示される。
【００１８】
タンパク質結合：平衡透析法を用いて、ヒト血清アルブミン（ＨＳＡ）に対する化合物Ｉの結合を測定した。ヒト血清アルブミンに対する化合物Ｉの結合は非常に低い（３．１±１．３％）と測定され、該物質と内因性タンパク質との相互作用は無視できることが確認された。
【００１９】
分配係数：オクタノールと水との間における分配によって化合物Ｉの親水性を測定したところ、化合物Ｉは非常に親水性が高くて、−４．２８のｌｏｇＰを有することが示された。
【００２０】
粘度：化合物Ｉの粘度を３種の濃度について２０℃及び３７℃で測定した。結果を図４に示す。３２０ｍｇＩ／ｍｌ及び２０℃での粘度は約２４ｍＰａｓである。
【００２１】
重量オスモル濃度：化合物Ｉの重量オスモル濃度を４種の濃度（２０４、２５４、３１０及び３２４ｍｇＩ／ｍｌ）で測定した。３２０ｍｇＩ／ｍｌでの化合物Ｉの重量オスモル濃度は１３６ｍＯｓｍ／ｋｇである。
【図面の簡単な説明】
【００２２】
【図１】図１は、［123Ｉ］標識化合物Ｉの投与から４８時間後における雄及び雌Ｗｉｓｔａｒラットでの放射能分布の比較を示している。
【図２】図２は、マンニトール、マンニトール＋添加ナトリウム及びカルシウム、イオジキサノール＋マンニトール、Ｖｉｓｉｐａｑｕｅ（商標）並びにリンガー液の注入によって引き起こされた心室細動の頻度を示している。データはＣｈａｉ ｅｔ ａｌ．から取得した。
【図３】図３は、様々な濃度の塩化カルシウムを含む化合物Ｉの組成物の注入によって引き起こされた心室細動の頻度を、Ｖｉｓｉｐａｑｕｅの注入と比較して示している。注入容量は６２．５秒間にわたって２５ｍｌであり、溶液はＬＡＤに選択的に注入した。
【図４】図４は、濃度に対してプロットした２０℃及び３７℃での化合物Ｉの粘度を示している。
【図５】図５は、正常ブタのＬＡＤへの注入開始から４５〜７０秒後のＬＶＳＰに対する化合物Ｉ（Ｃａ添加及び無添加）並びにＶｉｓｉｐａｑｕｅの効果を、リンガー乳酸塩（ＬＲ）の注入に対して正規化して示している。
【図６】図６は、正常ブタのＬＡＤへの４０ｍｌ（５ｍｌ／秒）のリンガー乳酸塩、化合物Ｉ、Ｖｉｓｉｐａｑｕｅ又はイオパミドールの注入後における、心臓血管パラメーターに対する効果を示している。
【発明を実施するための形態】
【００２３】
Ｖｉｓｉｐａｑｕｅ（商標）に比べて優れた心臓安全性プロファイルを示す新規な診断用Ｘ線組成物が同定された。化合物自体（即ち、コントラストを与える化合物）の安全性に加えて、診断用組成物の追加成分が決定的に重要である。
【００２４】
Ｃｈａｉ ｅｔ ａｌ．による研究では、１９ｍＭのＮａＣｌ及び０．３ｍＭのＣａＣｌ2を含むイオジキサノールの製剤が単独のイオジキサノールより低い頻度の心室細動（ＶＦ）を示すことが証明されている。この研究は、ブタにおいて、予め閉塞させた左冠動脈（ＬＣＡ）に媒体を直接注入することで実施された。Ｖｉｓｉｐａｑｕｅ（商標）を注入しても心室細動の発生は認められなかった。化合物Ｉの安全性試験及びそのための製剤の同定の一部として、化合物Ｉの製剤を試験し、Ｖｉｓｉｐａｑｕｅ（商標）と比較した。以前に発表した研究（上記）では、２０ｍｌのイオジキサノールの冠動脈内注入を４０秒の注入時間にわたって実施してもＶＦの発生例はなかったので、注入容量を６２．５秒間にわたって２５ｍｌに増加させることで比較目的のためにＶＦ発生例を増加させるた。加えて、モデルの感度をさらに高めるため、試験溶液及び参照溶液を左前下行冠動脈（ＬＡＤ）に選択的に注入した。このような高い容量では、Ｖｉｓｉｐａｑｕｅでも顕著な頻度（１００％）の心室細動を示した（図３）。これらの実験は実施例２に略述されている。
【００２５】
意外にも、新規なＸ線造影剤である化合物Ｉは、４０〜５０ｍＭという多量のＮａＣｌ及び０．１〜０．７ｍＭのＣａＣｌ2と共に診断用組成物として製剤化した場合、心室細動の発生を示さなかった（詳細については図３及び表３を参照されたい）。
【００２６】
２つの異なる研究からの結果を比較した場合、Ｖｉｓｉｐａｑｕｅでは心室細動の頻度が０％から１００％に増加した。しかし、高い用量においても、二量体Ｘ線造影剤である化合物Ｉは心室細動を示さなかった。主たる相違点は、本研究では化合物Ｉが４５ｍＭのＮａＣｌと共に製剤化されたことであり、これはＶｉｓｉｐａｑｕｅの場合（１９ｍＭ）より実質的に高い。０．１〜０．７ｍＭのカルシウムイオン濃度に関しては、心室細動（ＶＦ）の点で顕著な効果は見られなかったが、存在するカルシウムが少ない場合、収縮期動脈血圧（ＳＡＰ）及び左心室収縮期血圧（ＬＶＰ）の顕著な低下が見られた（表２）。これらのデータが示す通り、心室細動の頻度を左右する主因子は塩化ナトリウムの濃度である一方、カルシウムは収縮期動脈血圧及び左心室収縮期血圧（ＬＶＳＰ）に対して顕著な効果を及ぼす。実際、正常ブタにおける研究では、４５ｍＭのＮａＣｌを含むがＣａＣｌ2を添加しない化合物Ｉの組成物のＬＡＤ注入は注入から４５〜７０秒後にＬＶＳＰの低下（リンガー乳酸塩に対して正規化して平均−５．７ｍｍＨｇ）を生じたが、４５ｍＭのＮａＣｌ及び０．５ｍＭのＣａＣｌ2を含む化合物Ｉの組成物の注入はＶｉｓｉｐａｑｕｅと同様にしてＬＶＳＰを維持した（リンガー乳酸塩に対して正規化してそれぞれ−０．３及び＋０．１ｍｍＨｇ）（実施例２ｂ）。加えて、同じ速度及び容量でのイオパミドールの注入は、あらゆる場合において（３頭のブタにおける全部で９回の注入時において）、注入の開始から約２７〜５０秒後にＶＦを誘発した（これはＬＶＳＰの分析を制限した）。これらの結果はさらに、化合物Ｉの組成物中における０．５ｍＭのＣａＣｌ2の存在が有益であり、Ｖｉｓｉｐａｑｕｅと同様にしてＬＶＳＰに対する負の効果を制限することを示している。さらに、化合物Ｉの診断用組成物及びＶｉｓｉｐａｑｕｅ中に存在する添加電解質は、添加電解質を含まないイオパミドールに比べてＶＦを誘発する傾向を低下させることができる。試験した電解質の量及び比は、実施例２ｂの表４に示されている。
【００２７】
一層急速な注入（５ｍｌ／秒で４０ｍｌ）の研究では、４５ｍＭのＮａＣｌ及び０．５ｍＭのＣａＣｌ2を含む組成物中の化合物Ｉを正常ブタのＬＡＤに選択的に注入した場合、左心室収縮期血圧はリンガー乳酸塩及びＶｉｓｉｐａｑｕｅの投与後に観測される値と同様に維持された。それとは対照的に、添加電解質を含まないイオパミドールの注入はＬＶＳＰの有意な低下を誘発した（実施例２ｃ）。さらに、イオパミドールはｄＰ／ｄｔの実質的な増加（６９％）を誘発したのに対し、化合物Ｉはこの点に関してはリンガー乳酸塩及びＶｉｓｉｐａｑｕｅと同様であった（３０％以下の控えめな増加）。試験した化合物Ｉの製剤及びＶｉｓｉｐａｑｕｅ中におけるナトリウム（Ｎａ）及びカルシウム（Ｃａ）電解質の存在及び比（これらはリンガー乳酸塩及び間質液のＮａ／Ｃａバランス組成に一層近い）は、添加電解質を含まないイオパミドールの注入後の状態に比べて優れた心臓機能の維持に寄与すると考えられる。電解質の量及び比は、実施例２ｂの表５に示されている。
【００２８】
本発明のさらに別の実施形態では、本発明の組成物は、４２〜４７ｍＭのナトリウムイオン濃度、さらに好ましくは４４〜４６ｍＭのナトリウムイオン濃度、最も好ましくは４５ｍＭのナトリウムイオン濃度を与えるナトリウム化合物を含んでいる。
【００２９】
本発明のさらに別の実施形態では、本発明の組成物は、０．３〜０．６ｍＭのカルシウムイオン濃度、さらに好ましくは０．４〜０．５ｍＭのカルシウムイオン濃度、最も好ましくは０．５ｍＭのカルシウムイオン濃度を与えるカルシウム化合物を含んでいる。
【００３０】
この態様では、ナトリウムイオン濃度とカルシウムイオン濃度との比は５７〜５００（例えば、６３〜１１７）、さらに好ましくは７０〜１５６、さらに好ましくは８５〜１１５、最も好ましくは８８〜９５とすべきである。
【００３１】
第２の態様では、本発明は、
次式の化合物Ｉ、
【００３２】
【化３】
薬学的に許容されるキャリア、並びに
上記キャリア中に溶解されたナトリウム化合物及びカルシウム化合物であって、ナトリウムイオン濃度とカルシウムイオン濃度との比が４０〜４５、好ましくは４３であるナトリウム化合物及びカルシウム化合物
を含む診断用組成物を提供する。これは、リンガー乳酸塩組成物の電解質濃度を反映するものである。
【００３３】
本組成物のナトリウム化合物及びカルシウム化合物は、塩の形態で供給すればよい。即ち、これらの塩は生理学的に認容される対イオン、例えば塩化物イオン、硫酸イオン、リン酸イオン及び炭酸水素イオンからなる群から選択される対イオンを含んでいる。好ましくは、ナトリウム化合物は塩化ナトリウムであり、カルシウム化合物は塩化カルシウムである。
【００３４】
薬学的に許容されるキャリアは水溶液であり、好ましくは純水である。
【００３５】
ナトリウムは、内向きのＮａ+の流れに依存する心筋の脱分極のために不可欠である。化合物Ｉに４０〜５０ｍＭのナトリウムイオン（好ましくは４５ｍＭのＮａＣｌ）を添加することは、それをイオジキサノール＋１９ｍＭ Ｎａ+／Ｌよりも正常Ｎａ+間質濃度に近づけると考えられる。それにより、化合物Ｉは一層生理的であり、速いナトリウムチャンネルの活動電位を一層良好に維持することができ、かくしてナトリウムの量が過少又はゼロであることで引き起こされる「遅応答性」活動電位を阻止することができる。
【００３６】
以前の研究では、少量（１０〜３０ｍｍｏｌ／Ｌ）のナトリウムを非イオン性コントラスト媒体に添加すると、これらのコントラスト媒体に由来する心室細動（ＶＦ）のリスクを減少させ得ることが示された。しかし、研究はまた、収縮期動脈血圧／左心室収縮期血圧（ＳＡＰ／ＬＶＰ）の低下によって表されるように、コントラスト媒体に対する多量のナトリウムの添加は負の心筋変力作用を増大させ得ることも示されている。正常な細胞外及び細胞内ナトリウム−カルシウム（Ｎａ−Ｃａ）関係を維持するためには、非イオン性コントラスト媒体に対するカルシウムの添加が負の心筋変力作用を低減させる。しかし、重要な問題点は、負の心筋変力作用を防止するためにどれだけの量のカルシウムを添加すべきかである。Ｖｉｓｉｐａｑｕｅ製剤においてイオジキサノール（３２０ｍｇＩ／ｍＬ）に１９ｍＭのＮａＣｌ及び０．３ｍＭのＣａＣｌ2を添加することは、冠動脈造影に際してＶＦや負の心筋変力作用の増大のような生理学的障害を最小限に抑えるために最適であると考えられた。
【００３７】
我々の研究では、４５ｍＭのＮａＣｌを含む化合物Ｉに対してＣａＣｌ2がもたらす利益が確認された（表３）。０．１ｍＭ ＣａＣｌ2を含む製剤（Ｆ１）は、それぞれ０．３ｍＭ ＣａＣｌ2（Ｆ３）又は０．７ｍＭ ＣａＣｌ2（Ｆ５）を含む製剤より顕著に低いＳＡＰ及びＬＶＰを誘発した。０．３ｍＭ ＣａＣｌ2を含む化合物Ｉの製剤は、０．３ｍＭ ＣａＣｌ2を含む製剤より低いＳＡＰを引き起こした。コントラスト媒体へのカルシウムイオンの添加は、ナトリウムの添加によって引き起こされる負の心筋変力作用を阻止し得るということになる。
【００３８】
しかし、ナトリウムイオンとカルシウムイオンとの間には決定的に重要なバランスが存在している。非イオン性コントラスト媒体に適正な濃度のナトリウム及びカルシウムを添加すれば、ＶＦのリスクが減少すると共に、収縮力に対する悪影響が低減する。過大な量のナトリウムを添加すると、心筋の収縮力が減少する。後者の効果は、Ｃａイオンの添加によって阻止される。４５ｍＭのＮａＣｌ及び０．７ｍＭのＣａＣｌ2を含む化合物Ｉの製剤（Ｆ７）は、ＶＦを引き起こさないと共にＦ１及びＦ３製剤より良好な心筋変力作用を維持したので、最良の製剤であると思われる。しかし、化合物ＩのＦ５製剤の血行力学的効果はＶｉｓｉｐａｑｕｅのものに等しいので、Ｆ３とＦ５との間のカルシウム濃度が好ましい。かくして、特に好ましい実施形態では、本発明の組成物は４５ｍＭのＮａＣｌ及び０．５ｍＭのＣａＣｌ2を含んでいる。
【００３９】
このような化合物Ｉの組成物の静脈内及び動脈内安全性が、別の研究において証明された。この研究では、４５ｍＭ ＮａＣｌ及び０．５ｍＭ ＣａＣｌ2を含む組成物中の化合物Ｉの心臓血管効果が、急性ブタモデルを用いて３種の用量レベルについてインビボで評価された。要約すれば、組成物を静脈内及び動脈内経路で投与した場合、心筋性能に対する総合的な変化は存在しなかった。この研究は実施例３に一層詳しく記載されている。
【００４０】
一般に、ヨウ素化コントラスト媒体は、敏感な患者においては、暴露から１時間乃至数日後に遅延型過敏反応を引き起こすことがある。これらの反応は主として、斑状疹、斑丘疹及びじんま疹様発疹のような重篤でない皮膚発疹である。発疹のようなコントラスト媒体で誘発される遅延型副作用（ＤＡＲ）は、コントラスト媒体を再認識すると増殖し、次いで皮膚における炎症反応を手配するコントラスト媒体反応性Ｔ細胞によって引き起こされると思われる。出願人は、化合物Ｉのようなコントラスト媒体が血管内投与後の患者において遅延型皮膚反応を引き起こす相対頻度を予測するように設計されたインビトロＴ細胞増殖モデルを評価した。既知の遅延型皮膚反応率を有する２種のコントラスト媒体（イオジキサノール及びイオヘキソール）並びに新規なコントラスト媒体（化合物Ｉ）を、世界人口のＨＬＡ−ＤＲ頻度を表す１００名のドナーからのＣＤ２５+−欠損末梢血液単核細胞中でのインビトロＴ細胞増殖についてスクリーニングした（２及び５ｍｇＩ／ｍＬ）。公表されているプロトコル及び刺激指数値（陽性応答≧１．９）に従って陽性のＴ細胞応答を評価した。最初の１０のドナー試料試験コントラスト媒体（５ｍｇＩ／ｍＬ）と共にインキュベートして細胞生存度を測定することで、インビトロ毒性を試験した。結果は、すべての主たるＨＬＡ−ＤＲアロタイプが世界人口と同等な頻度で表されていた。試験したコントラスト媒体はいずれも、細胞生存度に対して有意な効果を及ぼさないように思われた。化合物Ｉは、両方の濃度において、イオジキサノール及びイオヘキソールより少ない陽性のＴ細胞増殖ドナー試料を示した。イオジキサノール及びイオヘキソールに関しては、大抵のドナーにおけるＴ細胞増殖応答は７日目及び８日目に起こった。統計的有意性は、８日目の化合物Ｉに対する増殖応答の低下について認められた。結論として、このモデルはコントラスト媒体がインビトロＴ細胞活性化を引き起こす相対頻度を確認することに成功した。結果は、２種の市販コントラスト媒体に関して報告された遅延型皮膚反応の頻度と相関しており、化合物Ｉに関する低い頻度を確認した。
【００４１】
したがって、かかる結果は、インビトロＴ細胞増殖を刺激する化合物Ｉの能力がイオジキサノール及びイオヘキソールに比べて最も低いことを示している。ＤＡＲが二量体コントラスト媒体と高い頻度で関連すると仮定すれば、イオジキサノールと密接に関係する非イオン性二量体がインビトロＴ細胞増殖をイオジキサノールと同程度まで刺激せず、実際には単量体のイオヘキソールと同程度にしか刺激しないという我々の所見は、大いに興味深いことである。現在、Ｔ細胞増殖がＤＡＲの基礎をなすことが知られているので、我々のデータは、二量体構造自体が本質的に高い頻度のＴ細胞増殖を引き起こすわけではないことを示唆している。化合物Ｉとイオジキサノールとの間における基本的な構造の差は、イオジキサノールにおける２つのアセチル基が化合物Ｉでは２つのホルミル基で置換されていることである。このような変更は分子のリンカー構造、コンフォメーション及び物理化学的挙動に影響を及ぼし、そして意外にもインビトロＴ細胞増殖を刺激する化合物Ｉの能力はイオジキサノール及びイオヘキソールよりも低い。したがって、本発明の第１の態様に係る診断用組成物は、Ｏｍｎｉｐａｑｕｅ（商標）（イオヘキソール）及びＶｉｓｉｐａｑｕｅ（商標）（イオジキサノール）のような市販のコントラスト媒体より遅延型過敏反応を引き起こすことが少ないと期待される。
【００４２】
化合物Ｉは、国際公開第２００９／００８７３４号に略述されているようにして製造できる。一般手順は国際公開第２００９／００８７３４号の１６〜２０頁に略述されており、詳細な製造方法はその実施例１に示されている。国際公開第２００９／００８７３４号の開示内容は、製造方法の記載を含め、援用によって本明細書の内容の一部をなす。
【００４３】
化合物Ｉは、キラル炭素原子のため、いくつかの異性体形態で存在し得る。加えて、かかる化合物は、大きなヨウ素原子の近接によって引き起こされるホルミル官能基中のＮ−ＣＯ結合の制限された回転のためにエキソ／エンド異性を示す。両方の鏡像異性的に純粋な生成物並びに光学異性体の混合物が含まれる。
【００４４】
本発明の診断用組成物は、すぐに使用できる濃度を有する。一般に、すぐに使用できる形態の組成物は１００ｍｇＩ／ｍｌ以上、好ましくは１５０ｍｇＩ／ｍｌ以上のヨウ素濃度を有し、３００ｍｇＩ／ｍｌ以上（例えば、３２０ｍｇＩ／ｍｌ）の濃度が好ましい。診断用組成物は、好ましくはさらに薬学的に許容されるキャリア又は賦形剤を含んでいる。その例は、エチレンジアミン四酢酸（ＥＤＴＡ）及びトリス（ヒドロキシメチル）アミノメタン（ＴＲＩＳ）である。
【００４５】
本発明の診断用組成物は、好ましくはＸ線診断又はＸ線イメージングにおいてＸ線コントラスト媒体として使用するためのものである。本組成物はボーラス注射として又は輸液によって投与できる。さらに、本組成物は血管内、静脈内又は動脈内投与によって投与できる。別法として、本組成物は経口投与することもできる。
【００４６】
第３の態様では、本発明は、Ｘ線診断で使用するための診断用組成物であって、薬学的に許容されるキャリア、並びに上記キャリア中に溶解されて４０〜５０ｍＭのナトリウムイオン濃度及び０．１〜０．７ｍＭのカルシウムイオン濃度を与えるナトリウム化合物及びカルシウム化合物を含む診断用組成物を製造するための、次式の化合物Ｉの使用を提供する。
【００４７】
【化４】
さらに別の態様では、本発明は、本発明の診断用組成物をヒト又は動物の身体に投与する段階、診断装置で身体を検査する段階、及び検査からのデータをコンパイルする段階を含む診断方法を提供する。本診断方法では、身体に診断用組成物を予め投与することもできる。
【００４８】
さらに別の態様では、本発明は、インビボイメージング検出方法であって、
ｉ）本発明の診断用組成物の検出可能な量を投与する段階、
ｉｉ）投与された組成物を分布させる段階、
ｉｉｉ）分布した組成物の化合物Ｉによって放出される信号を検出する段階、及び
ｉv）前記信号の位置及び／又は量を表す画像を生成する段階
を含むインビボイメージング検出方法を提供する。
【００４９】
イメージング方法はＸ線イメージング方法であり、この態様の好ましい実施形態では、検出方法は冠動脈造影法であり、さらに好ましくは、診断用組成物はボーラス注射として冠動脈に投与される。
【００５０】
さらに別の態様では、本発明は、Ｘ線イメージング又は診断（例えば、冠動脈造影）で使用するための本発明の組成物を提供する。
【実施例】
【００５１】
実施例１．化合物Ｉに関する生理化学的性質、急性毒性及び生体分布データ
タンパク質結合
平衡透析法を用いて、ヒト血清アルブミン（ＨＳＡ）に対する化合物Ｉの結合を測定した。化合物Ｉの原液（リン酸緩衝食塩水（ＰＢＳ）中５．０ｍｇ／ｍｌ）を１：９の比のクエン酸塩：ヒト血漿と混合した。Ｄｉａｃｈｅｍ Ｄｉａｎｏｒｍ Ｄｉａｌｙｓｅｒにおいて、Ｄｉａｃｈｅｍ １０．１７ ＭＷカットオフ１００００膜を用いてリン酸緩衝食塩水に対する平衡化を２５時間実施した。ＩＣＰ−ＡＥＳ測定器を用いて溶液の分析を行った。加えて、平衡が達成されたことを保証するため、スパイクされたＰＢＳ溶液をクエン酸塩添加ヒト血漿溶液に対して平衡化した。ヒト血清アルブミンに対する化合物Ｉの結合は非常に低い（３．１±１．３％）と測定され、該物質と内因性タンパク質との相互作用は無視できることが確認された。参考として、ＨＳＡに対するイオジキサノールの結合は０．４±０．９％と測定された。
【００５２】
分配係数
化合物Ｉの親水性の尺度として、オクタノールと水との間の分配係数を測定した。試験物質（０．３ｍｇ／ｍｌ）を含む水（５ｍｌ）を１５ｍｌのｎ−オクタノールと共に、平衡が得られるまで振盪した。水性相を遠心分離によって分離し、２４４ｎｍでのＵＶ検出及び０．３ｍｌ／分の流量を用いたＨＰＬＣ（Ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ Ｃ１８カラム、１００×２．１ｍｍを備えたＨＰ１１００）によって分析した。水中８％アセトニトリル（ｖ／ｖ）のイソクラティックＨＰＬＣ条件を使用した。オクタノール相（１２．５ｍｌ）を平衡が得られるまで水（０．７３ｍｌ）で抽出し、遠心分離によって相を分離した。上記に詳述した条件を用いたＨＰＬＣによって水性相を分析した。分配係数実験に先立ち、オクタノール及び水の両方をそれぞれ水及びオクチルで予め飽和させた。オクタノールと水との間における分配によって化合物Ｉの親水性を測定したところ、化合物Ｉは非常に親水性が高くて、−４．２８のｌｏｇＰを有することが示された。比較として、イオジキサノールの対応するｌｏｇＰは−４．０２と測定された。報告されている文献値は−４．０５８である。イオジキサノールに比べて上昇した化合物Ｉの親水性は、そのＨＰＬＣ挙動によって確認される。
【００５３】
粘度
化合物Ｉの粘度を、２種の温度（２０℃及び３７℃）並びに３種の濃度（２４６、２９５及び３１３ｍｇＩ／ｍｌ）で測定した。試験溶液は、ＮａＣｌによる重量オスモル濃度の調整によって等張とし、オートクレーブ処理によって滅菌した。密度メーターＤＭＡ５８（Ａｎｔｏｎ Ｐａａｒ社）を用いて溶液の密度を測定した。落下時間を動的粘度の尺度として用いる較正Ｕ管技法を使用した。化合物Ｉの粘度を３種の濃度について２０℃及び３７℃で測定した。結果を図４に示す。Ｖｉｓｉｐａｑｕｅと比較したところ、３２０ｍｇＩ／ｍｌ及び２０℃での粘度は同様であって、約２４ｍＰａｓである。
【００５４】
重量オスモル濃度
化合物Ｉの重量オスモル濃度を４種の濃度（２０４、２５４、３１０及び３２４ｍｇＩ／ｍｌ）で測定した。Ｖａｐｒｏ Ｉｎｃ．からのＶａｐｒｏ ５５２０蒸気圧浸透圧計を使用した。化合物Ｉの重量オスモル濃度は、濃度に対し、直線に近い関係を示している。３２０ｍｇＩ／ｍｌでの化合物Ｉの重量オスモル濃度はイオジキサノールの重量オスモル濃度より低い（３２０ｍｇＩ／ｍｌで１３６ｍＯｓｍ／ｋｇ対２１０ｍＯｓｍ／ｋｇ）。
【００５５】
急性毒性
体重２００±２０ｇの若い成体雄Ｓｃａ：ＳＤラット（Ｓｃａｎｂｕｒ社、スウェーデン）に、化合物Ｉ（３４０ｍｇＩ／ｍＬ、２８６ｍｏｓｍｏｌ／ｋｇ）、イオジキサノール（３２１ｍｇＩ／ｍＬ、２８４ｍｏｓｍｏｌ／ｋｇ）、浸透圧調節用マンニトール（２８３ｍｏｓｍｏｌ／ｋｇ）又は食塩水（２９０ｍｏｓｍｏｌ／ｋｇ）を１．２ｍｌ／分の速度で静脈内注射し、各々を２回分の用量として４時間間隔で投与した。中間屠殺動物（処置後２日目）に関しては、化合物Ｉ及びイオジキサノールはそれぞれ２３．７、２９．７及び３８．０ｍｌ／ｋｇ並びに２５、３１．３及び４０ｍｌ／ｋｇの総投与容量に相当する８、１０及び１２．８ｇＩ／ｋｇで投与したのに対し、マンニトール及び食塩水についての投与容量は４０ｍｌ／ｋｇであった。７日目の最終屠殺動物に関しては、４つの投与群、即ち化合物Ｉ及びイオジキサノール（１２．８ｇＩ／ｋｇ）並びに食塩水及びマンニトール（４０ｍＬ／ｋｇ）が存在していた。いずれの場合にも、各群は８頭の動物を含んでいた。
【００５６】
研究中に以下の評価を行った。即ち、０、２及び７日目には臨床徴候及び体重を検査し、血液学及び臨床化学検査のために血液を採取し、２又は７日目には過剰の静脈内チオペンタール注射によって屠殺した動物からの組織の肉眼観察、臓器重量測定及び組織形態学的検査を行った。投与日を０日目として定義した。臨床生化学パラメーター（Ｎａ、Ｋ、Ｃｌ、ＰＯ4、Ｃａ、ＡＳＴ、ＡＬＴ、ＡＬＰ、コレステロール、クレアチニン、ＣＫ、ＧＧＴ、ＴＧ（トリグリセリド）、総ビリルビン、総タンパク質、尿素、アルブミン、ＬＤＨ及びＧＬＤＨ）はＢｅｃｋｍａｎ Ｓｙｎｃｈｒｏｎ ＣＸ５上において３７℃で測定した。血液学パラメーター（ＷＢＣ、分別ＷＢＣ、ＲＢＣ、ＷＢＣ／ＲＢＣ比、Ｈｇｂ、ＰＬＴ、ＨＣＴ、ＭＣＨ、ＭＣＨＣ、ＭＣＶ、ＭＰＶ及びＲＤＷ）は、Ａｂｂｏｔｔ Ｃｅｌｌ−Ｄｙｎ ３５００ ＣＳ自動血液学分析装置を用いて分析した。食塩水対照並びに１２．８ｇＩ／ｋｇ化合物Ｉ及びイオジキサノール群からの腎臓を１０％中性緩衝ホルマリン中に浸漬固定し、パラフィンろう中に包埋し、５μｍの公称厚さで切片化し、ヘマトキシリン及びエオシンで染色し、光学顕微鏡で検査した。
【００５７】
２日間及び７日間のイオジキサノール群及び化合物Ｉ群と比較するために２日間及び７日間の食塩水群を使用しながら、パラメトリックワンウェイＡＮＯＶＡ、次いでＤｕｎｎｅｔｔの事後検定によってデータを分析した。統計的分析は、−１日目（基線）、２日目及び７日目に適用した。
【００５８】
生体分布
各時点（２分、２０分、１時間、２時間、４時間、２４時間、４８時間）について、各性別の動物３頭をイソフルランで麻酔した。各試験動物は約２０秒以内に２回の注射を受けた。最初の注射は約３２０ｍｇＩ／ｍｌの化合物Ｉ（非放射性）であり、特定の尾静脈（左又は右）を通して約１．６ｇＩ／ｋｇの総化学用量を与えるように投与した。その後できるだけ早く（約２０秒以内に）、放射性［123Ｉ］化合物Ｉ試験品（約１〜約８ＭＢｑ、３５０μｇ以下）を静脈内ボーラスとして反対側の尾静脈に注射した。このアプローチでは、化合物Ｉの総化学用量を顕著に変化させることなく、投与する放射能の量を解剖時点（試験日１、２及び３）に従って調整することができる。次いで、動物を尿及び糞便回収用の代謝ケージ内に配置し、標識化合物Ｉの注射後の適当な時点まで維持した。この時点で、動物をイソフルランで再び麻酔し、頸部脱臼によって屠殺した。選択された器官及び組織（血液、腎臓、膀胱及び尿、肺、肝臓、胃、小腸及び大腸、心臓、睾丸、卵巣、子宮並びに糞便）を取り出すと共に、尾を注射部位として分析した。次いで、選択された器官、組織及び排泄物中の放射能の量を、自動双晶型γ線カウンター及び分析システムを用いて測定した。
【００５９】
急性毒性の結果：
食塩水又はマンニトールで処置されたラットでは有害な臨床徴候は見られなかったのに対し、化合物Ｉ及びイオジキサノールで処置されたラットでは、軽度乃至中度の抑うつ状態、非協調運動及び虚弱／無気力、並びに四肢の浮腫及び紅斑が見られた。これらの効果は最初の投与から１０〜２０分後に始まり、２〜３時間続いたが、明確な用量−応答関係はなかった。血液学及び臨床化学データの解析は、いずれの群においても毒物学的に有意な悪影響は存在しないことを示した。
【００６０】
腎臓では、主たる処置関連所見は近位細管の細胞質空胞化であり、糸球体では、タンパク質様物質を含むボーマン腔の拡張であった。２日目では、空胞化の程度は化合物Ｉに比べてイオジキサノール投与群で高かった。７日目までには、いずれの群においても空胞化の程度は２日目に比べてやや低くなり、ポーマン腔の拡張及びタンパク質様物質の存在についても同様であった。
【００６１】
【表１】
生体分布の結果：
静脈内投与後、［123Ｉ］標識化合物Ｉは急速に排出され、注射後２時間では注射用量（ｉｄ）の＞８０％が膀胱及び尿中に存在していた。血液中のレベルは、注射後２分での２１％ｉｄから注射後２時間での０．６％ｉｄに減少した。糞便経路を通じて少ないが実質的な量の排出が存在しており、これは注射後４８時間では雄の動物（糞便中８．２％ｉｄ）に比べて雌の動物（糞便中１４．３％ｉｄ）で僅かに高いと思われた。ただし、この差は統計的に有意でなかった。標識化合物Ｉの注射から４８時間後には、２％ｉｄ未満が体内に保持されていた。約０．５％が腎臓に保持され、０．１％が肝臓に保持され、１％未満が残りの胴体に保持されていた（図１）が、これらのすべてが２４時間時点からさらに減少していた。これは、初期の急速排出段階後、体内に保持された化合物Ｉが継続的にゆっくりと排出されることを反映しているようである。生殖器官における放射能の保持は存在しなかった。全体として、標識化合物Ｉの生体分布プロファイルは他の二量体ヨウ素化造影剤と同様であった。
【００６２】
実施例２：比較研究
２ａ）ブタＬＡＤ閉塞モデルにおけるＶｉｓｉｐａｑｕｅ（商標）及び化合物Ｉの診断用組成物の心臓毒性の比較
１９ｍＭのＮａＣｌ及び０．３ｍＭのＣａＣｌ2を含むイオジキサノールの製剤が単独のイオジキサノールより低い頻度の心室細動を示すことを証明したＣｈａｉ ｅｔ ａｌ．（Ａｃａｄ．Ｒａｄｉｏｌ．２００４，１１，５８３−５９３）による研究を参照されたい。この研究は、ブタにおいて、予め閉塞させた左冠動脈（ＬＣＡ）に媒体を直接注入することで実施された。１９ｍＭのＮａＣｌ及び０．３ｍＭのＣａＣｌ2を含むイオジキサノールの製剤が単独のイオジキサノールより低い頻度の心室細動を示すことは、図２から明らかである（Ｐ＜０．０１）。この場合、Ｖｉｓｉｐａｑｕｅ（商標）の注入後に心室細動の発生は認められなかった。これらの実験で投与された用量は、２．０ｍｌ／分の注入速度で２０ｍｌであった。
【００６３】
Ｃｈａｉ ｅｔ ａｌ．による研究では、（Ｖｉｓｉｐａｑｕｅとして製剤化された）２０ｍｌのイオジキサノールの冠動脈内注入を４０秒の注入時間にわたって実施してもＶＦの発生例はなかったので、我々は、注入容量を６２．５秒間にわたって２５ｍｌに増加させることで比較目的のためにＶＦ発生例を増加させる研究を実施した。加えて、モデルの感度をさらに高めるため、試験溶液及び参照溶液を左前下行冠動脈（ＬＡＤ）に選択的に注入した。試験溶液の物理的及び化学的性質を表２に示し、結果を図３に示す。
【００６４】
【表２】
このような高い注入容量では、Ｖｉｓｉｐａｑｕｅでも顕著な頻度（１００％）の心室細動を示した（図３）。
【００６５】
しかし、意外にも、新規なＸ線造影剤である化合物Ｉは、４５ｍＭのＮａＣｌ及び０．１〜０．７ｍＭのＣａＣｌ2と共に製剤化した場合、心室細動の発生を示さなかった（詳細については図３及び表３を参照されたい）。
【００６６】
２つの異なる研究からの結果を比較した場合、Ｖｉｓｉｐａｑｕｅ（商標）では、０％から１００％への心室細動の頻度の増加が認められる。しかし、高い用量でも、診断用組成物中における二量体Ｘ線造影剤の化合物Ｉは心室細動を示さない。主たる相違点は、化合物ＩがＶｉｓｉｐａｑｕｅの場合（１９ｍＭ）より顕著に高い４５ｍＭのＮａＣｌと共に製剤化されたことである。０．１〜０．７ｍＭのカルシウムイオン濃度ではＶＦに対する顕著な効果は見られなかったものの、カルシウムの存在量が少ない場合にはＳＡＰ及びＬＶＰの顕著な低下があった（表３）。
【００６７】
【表３】
これらのデータが示す通り、心室細動の頻度を左右する主因子は塩化ナトリウムの濃度である一方、カルシウムは収縮期動脈血圧及び左心室収縮期血圧に対して顕著な効果を及ぼす。
【００６８】
２ｂ：ＣａＣｌ2添加及び無添加の組成物中における化合物ＩとＶｉｓｉｐａｑｕｅ及びイオパミドールとの比較
パルーン閉塞を施さない正常ブタのＬＡＤへの選択的投与後において、ＣａＣｌ2添加及び無添加の化合物Ｉの組成物の血行力学的効果をＶｉｓｉｐａｑｕｅ及びイオパミドールと比較した。各コントラスト媒体の効果は、容量及び電解質「比」対照として作用するリンガー乳酸塩溶液の等価注入で見られた効果に対して正規化した。この研究では全部で１２頭のブタが使用され、各ブタには単一のＣＭが１０ｍｌ（４ｍｌ／秒）、２０ｍｌ（１ｍｌ／秒）及び２５ｍｌ（０．４ｍｌ／秒）の容量で３回注入された（各ブタにおいて全部で９回のＣＭ注入）。各ＣＭの前又は後にはリンガー乳酸塩の対照注入が行われ、各注入（容量）の順序は各ブタにおいてランダム化された。表４は、使用したナトリウム及びカルシウム電解質の量及び比を示している。
【００６９】
【表４】
２５ｍｌの注入容量では、添加ＣａＣｌ2を含まない組成物中の化合物Ｉは注入から４５〜７０秒後にＬＶＳＰの低下（リンガー乳酸塩に対して正規化して平均−５．７ｍｍＨｇ）を生じたのに対し、添加ＣａＣｌ2を含む組成物中の化合物Ｉ及びＶｉｓｉｐａｑｕｅはほとんど又は全く効果を及ぼさなかった（リンガー乳酸塩に対して正規化してそれぞれ−０．３及び＋０．１ｍｍＨｇ）（図５）。添加ＣａＣｌ2を含まない化合物Ｉの組成物に関して認めるられたＬＶＳＰの低下は、添加ＣａＣｌ2を含むものに対して有意差があったが、後者はＶｉｓｉｐａｑｕｅに対して有意差がなかった。加えて、イオパミドール注入に対しての対応する応答は分析できなかった。これは、各々の場合において、２５ｍｌ注入の開始から約２７〜５０秒後にＶＦが認められたからである。これらの結果は、化合物Ｉの組成物中における０．５ｍＭのＣａＣｌ2の存在が有益であり、Ｖｉｓｉｐａｑｕｅと同様にしてＬＶＳＰに対する負の効果を制限することを示している。加えて、化合物Ｉの診断用組成物及びＶｉｓｉｐａｑｕｅ中に存在する添加電解質は、添加電解質を含まないイオパミドールに比べてＶＦを誘発する傾向を低下させることができる。
【００７０】
２ｃ：急速注入速度を用いた正常ブタにおける化合物Ｉの組成物とＶｉｓｉｐａｑｕｅ、イオパミドール及びリンガー乳酸塩との比較
さらに別の研究では、急速注入速度（５ｍｌ／秒）を用いて正常ブタのＬＡＤに選択的に投与した後において、４５ｍＭのＮａＣｌ及び０．５ｍＭのＣａＣｌ2を含む組成物中の化合物Ｉの血行力学的効果をＶｉｓｉｐａｑｕｅ及びイオパミドールと比較した。リンガー乳酸塩もまた、容量及び電解質「比」対照として試験した。全部で３頭のブタを試験し、各ＣＭをランダムな順序で各ブタに２回投与した。使用した注入速度は５ｍｌ／秒であり、総注入容量は４０ｍｌであった。表５は、試験したナトリウム及びカルシウム電解質の量及び比を示している。
【００７１】
【表５】
化合物Ｉ及びＶｉｓｉｐａｑｕｅの注入は、リンガー乳酸塩の投与とは有意に異なる基線からのＬＶＳＰ又はｄＰ／ｄｔの変化を誘発しなかったのに対し、イオパミドールはＬＶＳＰ値の有意な低下及びｄＰ／ｄｔ値の有意な増加を誘発した（図６）。イオパミドールの投与後、ＬＶＳＰは９％±６だけ低下し、ｄＰ／ｄｔは６９％±１６だけ増加した。これは、ＬＶＳＰの僅かな増加（約５％）及びｄＰ／ｄｔの控えめな増加（約３０％以下）を生じたリンガー乳酸塩、化合物Ｉ及びＶｉｓｉｐａｑｕｅの注入と対照的であった。これらの結果は、正常ブタのＬＡＤに急速注入した場合、４５ｍＭのＮａＣｌ及び０．５ｍＭのＣａＣｌ2を含む組成物中の化合物ＩがＶｉｓｉｐａｑｕｅ又は生理的リンガー液と同じく血行力学的パラメーターに対して最小の効果しか及ぼさないことを示している。試験した化合物Ｉの製剤及びＶｉｓｉｐａｑｕｅ中に、リンガー乳酸塩及び間質液のバランス組成に一層類似した電解質が存在することは、添加電解質を含まないイオパミドールの注入後の状態に比べて優れた心臓機能の維持に寄与すると考えられる。
【００７２】
実施例３：化合物Ｉの診断用組成物の静脈内及び動脈内安全性
化合物Ｉの組成物の静脈内（ｉ．ｖ．）及び動脈内（ｉ．ａ．）安全性が、別の研究（参考文献Ｂ１４５０９５）において証明された。この研究では、４５ｍＭのＮａＣｌ及び０．５ｍＭのＣａＣｌ2を含む組成物中の化合物Ｉの心臓血管効果が、急性ブタモデルを用いて３種の容量レベルについてインビボで評価された。
【００７３】
方法：３頭ずつの動物群に対し、３種の用量レベルの１つ（２ｍｌ／ｋｇの標準容量の１倍、２倍又は３倍）で組成物を動脈内又は静脈内に投与した。各動物はまた、容量対照として同容量のリンガー乳酸塩溶液の投与を受けた。ＣＶ効果として、心拍数（ＨＲ）、脈拍酸素測定値、心電図（ＥＣＧ）、大動脈血圧（収縮期、拡張期及び平均）並びに左心室最終拡張期血圧（ＬＶＥＤＰ）を評価した。一回拍出量、駆出率及び心臓収縮性を評価するための超音波／エコー心臓検査も行った。
【００７４】
結果：予備データ要約の評価は、ブタ心臓において、ＨＲ、脈拍酸素測定値及びＥＣＧに対する化合物Ｉの重要な用量又は経路関連効果が存在しないことを示唆している。脈拍酸素測定値の分析は、投与期間全体を通じて酸素飽和度が約９８％に保たれたことを示した。ＨＲも正常範囲内に保たれた。化合物Ｉに関連する調律障害は存在しなかった。即ち、化合物Ｉの動脈内又は静脈内投与にかかわらず、ＱＴ間隔は正常範囲内にあった。同様に、用量範囲全体にわたり、大動脈血圧（収縮期、拡張期及び平均）に対する化合物Ｉの効果はほとんど又は全く認められなかった。化合物Ｉが静脈内又は動脈内経路のいずれで投与されたにせよ、大動脈血圧の変化は同様であると思われた。化合物Ｉの用量の増加に伴ってＬＶＥＤＰの僅かな増加が存在したが、その効果は化合物Ｉが静脈内又は動脈内経路のいずれで投与されても同様であった。加えて、ＬＶＥＤＰの増加の大きさは、増加した容量のリンガー乳酸塩を投与した後に見られるものと同様であった。エコー心臓検査による一回拍出量、駆出率及び心臓収縮性の分析は最終拡張期容量（ＥＤＶ）の僅かな変化のみを示し、いずれの効果も容量に関連するものであり、化合物Ｉの投与に特有のものではないことが確認された。
【００７５】
したがって、化合物Ｉを静脈内又は動脈内経路で投与した場合、心筋性能の総合的変化は存在しなかった。ＣＶ機能パラメーターの小さな変化は投与した容量によるものであり、試験品の化合物Ｉによるものではなかった。その理由は、リンガー乳酸塩溶液の注入後に同様な効果が見られたことにある。２ｍｌ／ｋｇの標準投与容量の３倍までの化合物Ｉの静脈内又は動脈内投与後、すべての心筋パラメーターは正常範囲内にあった。
【技術分野】
【０００１】
本発明は、優れた心臓安全性プロファイルを示す新規な診断用Ｘ線組成物に関する。かかる組成物は、薬学的に許容されるキャリア中に非イオン性ヨウ素化二量体を含んでいる。本発明はまた、かかる診断用組成物を用いるイメージング方法にも関する。
【背景技術】
【０００２】
すべての診断イメージングは、身体内部の異なる構造から異なる信号レベルを得ることに基づいている。したがって、例えばＸ線イメージングにおいて所定の身体構造が画像中で見えるためには、その構造によるＸ線減衰度が周囲の組織のＸ線減衰度と違っていなければならない。身体構造とその周囲との間における信号の差はしばしばコントラストと呼ばれ、診断イメージングでのコントラストを高めるための手段に多大の努力が捧げられてきた。これは、身体構造とその周囲との間のコントラストが大きいほど画像の品質が高くなり、診断を行う医師にとってのそれの価値が高くなるからである。その上、コントラストが大きいほど、イメージング操作で可視化できる身体構造は小さくなる。即ち、コントラストの向上は空間解像度の向上をもたらすことができる。画像の診断品質はイメージング操作における固有ノイズレベルに大きく依存し、したがってコントラストレベルとノイズレベルとの比は診断画像に関する有効診断品質因子となることがわかる。かかる診断品質因子の向上を達成することはずっと以前から重要な目標であって、今なお変わっていない。
【０００３】
Ｘ線のような技術では、診断品質因子を向上させるための１つのアプローチは、コントラスト媒体として処方されたコントラスト増強物質をイメージングすべき身体領域中に導入することであった。即ち、Ｘ線の場合、造影剤の初期の例は、それが分布した身体領域のＸ線減衰度を高める不溶性の無機バリウム塩であった。最近の５０年間、Ｘ線造影剤の分野では可溶性のヨウ素含有化合物が支配的であった。ヨウ素化造影剤を含む商業的に入手可能なコントラスト媒体（ＣＭ）は、通常、（例えばＧａｓｔｒｏｇｒａｆｅｎ（商標）の商品名で市販されている）ジアトリゾエートのようなイオン性単量体、（例えばＨｅｘａｂｒｉｘ（商標）の商品名で市販されている）イオキサグレートのようなイオン性二量体、（例えばＯｍｎｉｐａｑｕｅ（商標）の商品名で市販されている）イオヘキソールや（例えばＩｓｏｖｕｅ（商標）の商品名で市販されている）イオパミドールや（例えばＩｏｍｅｒｏｎ（商標）の商品名で市販されている）イオメプロールのような非イオン性単量体、及び（例えばＶｉｓｉｐａｑｕｅ（商標）の商品名で市販されている）非イオン性二量体イオジキサノールに分類される。ヨウ素化Ｘ線コントラスト媒体の臨床安全性は、最近の数十年間にわたり、新しい薬剤の開発を通じて（即ち、イオン性単量体（Ｉｓｏｐａｑｕｅ（商標））から非イオン性単量体（例えば、Ｏｍｎｉｐａｑｕｅ（商標））及び非イオン性二量体（例えば、Ｖｉｓｉｐａｑｕｅ（商標））へと）絶えず改良されてきた。しかし、現在市場にある高度に精製されたＸ線コントラスト媒体でも、低度の望ましくない副作用（例えば、造影剤誘発腎症（ＣＩＮ）、有害な心臓事象及び遅延副作用（ＤＡＲ））を示す。その結果、特にこれらの副作用が起こるリスクの高い患者に関係する診断検査について、新規で一層安全なＸ線コントラスト媒体に対する臨床的ニーズが存在している。
【０００４】
コントラスト媒体の有用性は、主としてその毒性、その診断効果、コントラスト媒体を投与された被験者が受けることがある副作用、並びに製造、貯蔵及び投与の容易性によって支配される。コントラスト媒体の毒性及び有害な生物学的効果は、配合媒体（即ち、診断用組成物）の成分（例えば、溶媒又はキャリア）並びに造影剤自体及びその成分（例えば、イオン性造影剤用のイオン）によって生み出され、またその代謝産物によって生み出される。
【０００５】
冠動脈造影処置の回数は、経皮経管腔冠動脈形成術、ステント移植、及び治療薬の冠動脈内投与をはじめとする冠動脈介入能力の拡大に伴って増加し続けている。年間７千万を超える回数の処置が世界中で実施されており、その大部分が冠動脈に関係している。ヨウ素化放射線コントラスト媒体によって引き起こされるいくつかの副作用は稀であるが、ハイリスク患者及び経皮冠動脈介入では起こることがある。
【０００６】
冠動脈造影では、放射線写真の減衰度を最大にし、それによって診断イメージングを最適化するため、冠動脈中の血液をボーラス量のヨウ素化放射線コントラスト媒体によって理想的には完全に置換すべきである。コントラスト媒体が血液を置換した場合、コントラスト媒体は冠動脈血管に化学毒性効果及び浸透圧効果を引き起こすと共に、電解質濃度、粘度及び酸素張力の変化を引き起こす。これらの変化は収縮力及び心臓リズムに影響を及ぼし、心室細動（ＶＦ）を引き起こすことがある。冠動脈中へのコントラスト媒体の選択的注入は、局所電気生理学的効果及び血行力学的効果を誘起する。重篤な心室性不整脈並びに心臓抑制が、コントラスト媒体に関係し得る冠動脈造影の公知合併症である。
【０００７】
国際公開第９１／１３６３６号及び同第９０／１１０９４号（いずれもＮｙｃｏｍｅｄ ＡＳ、現在はＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ ＡＳ）は、Ｘ線コントラスト媒体及び様々な塩を含むその製剤に関する。また、塩（主としてＮａＣｌ）の含有を伴うＸ線造影剤の製剤の利点に関する多数の研究が文献中に存在している。研究は、ラット（Ｊｙｎｇｅ ｅｔ ａｌ．，Ｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｉｖｅ Ｒａｄｉｏｌｏｇｙ １９９３，２８，２０−２５）及びウサギ（Ｂａａｔｈ ｅｔ ａｌ，Ｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｉｖｅ Ｒａｄｉｏｌｏｇｙ １９９３，２８，２２３−２２７）からの単離心臓に関して実施され、またイヌ（Ｐｅｄｅｒｓｅｎ ｅｔ ａｌ．，Ａｃａｄ．Ｒａｄｉｏｌ．１９９４，１，１３６−１４４）及びブタにおいて実施されている。特に重要なのはＣｈａｉ ｅｔ ａｌ．（Ａｃａｄ．Ｒａｄｉｏｌ．２００４，１１，５８３−５９３）による研究であって、そこには１９ｍＭのＮａＣｌ及び０．３ｍＭのＣａＣｌ2を含むイオジキサノールの製剤が単独のイオジキサノールより低い頻度の心室細動を示すことが証明されている。
【０００８】
Ｊａｃｏｂｓｅｎ ｅｔ ａｌ．（Ｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｉｖｅ Ｒａｄｉｏｌｏｇｙ １９９３；２８，９１７−９２４）は、イヌにおけるコントラスト媒体の急速な反復注入が心筋変力作用（ｉｎｏｔｒｏｐｙ）及び単相性活動電位に対する追加の効果を生じるのに対し、リンガー液はいかなる効果も生じないことを示している。これは、冠動脈樹全体を満たすために反復注入が稀ではない臨床現場での血管造影が心臓パラメーターの変化を誘発して合併症を引き起こし得る機序を理解するために研究された。
【０００９】
現在市販されているイオジキサノール製剤（３２０ｍｇＩ／ｍｌ）は、１９ｍＭのナトリウムイオン及び０．３ｍＭのカルシウムイオンを含んでいる（Ｖｉｓｉｐａｑｕｅ（商標））。この製剤は、主としてブタ心臓モデルでのインビボ研究によるばかりでなく、単離された動物心臓に関する研究によっても、塩を添加しないイオジキサノールに比べて優れた心臓安全性プロファイルを示すことが実験的に証明された。同様な研究において、イオヘキサノールも添加塩（主としてＮａＣｌ）と共に製剤化された場合に心臓耐性の増大を示すことが証明された。
【００１０】
ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ ＡＳの国際公開第２００９／００８７３４号は、新規な部類の化合物及びＸ線造影剤としてのそれの使用を開示している。かかる化合物は、２つの連結されたヨウ素化フェニル基を含む二量体である。２つのヨウ素化フェニル基を連結するブリッジは、１〜６の−ＯＨ基又はＯＣＨ3基で任意に置換された直鎖Ｃ3〜Ｃ8アルキレン鎖である。この出願の一般式（Ｉ）では一連の化合物がカバーされ、多数の特定化合物が示唆されている。
【００１１】
国際公開第２００９／００８７３４号の式（Ｉ）の範囲内に含まれる、１つの特定二量体Ｘ線造影剤である化合物Ｉは、好ましい性質を有することが出願人によって見出されている。
【００１２】
【化１】
【先行技術文献】
【特許文献】
【００１３】
国際公開第２００９／００８７３４号パンフレット
【発明の概要】
【００１４】
今回、出願人は、意外にも、上述のものと同様なインビボ研究において証明される通り、Ｖｉｓｉｐａｑｕｅ（商標）に比べて優れた心臓安全性プロファイルを示す新規な診断用Ｘ線組成物を同定した。
【００１５】
かくして第１の態様では、本発明は、
次式の化合物Ｉと、
【００１６】
【化２】
薬学的に許容されるキャリアと、
上記キャリア中に溶解されて４０〜５０ｍＭのナトリウムイオン濃度及び０．１〜０．７ｍＭのカルシウムイオン濃度を与えるナトリウム化合物及びカルシウム化合物と
を含む診断用組成物を提供する。
【００１７】
化合物Ｉの生理化学的性質は下記のように見出される。生体分布情報及び急性毒性情報に加えて、使用した方法に関する追加の情報は実施例１に示される。
【００１８】
タンパク質結合：平衡透析法を用いて、ヒト血清アルブミン（ＨＳＡ）に対する化合物Ｉの結合を測定した。ヒト血清アルブミンに対する化合物Ｉの結合は非常に低い（３．１±１．３％）と測定され、該物質と内因性タンパク質との相互作用は無視できることが確認された。
【００１９】
分配係数：オクタノールと水との間における分配によって化合物Ｉの親水性を測定したところ、化合物Ｉは非常に親水性が高くて、−４．２８のｌｏｇＰを有することが示された。
【００２０】
粘度：化合物Ｉの粘度を３種の濃度について２０℃及び３７℃で測定した。結果を図４に示す。３２０ｍｇＩ／ｍｌ及び２０℃での粘度は約２４ｍＰａｓである。
【００２１】
重量オスモル濃度：化合物Ｉの重量オスモル濃度を４種の濃度（２０４、２５４、３１０及び３２４ｍｇＩ／ｍｌ）で測定した。３２０ｍｇＩ／ｍｌでの化合物Ｉの重量オスモル濃度は１３６ｍＯｓｍ／ｋｇである。
【図面の簡単な説明】
【００２２】
【図１】図１は、［123Ｉ］標識化合物Ｉの投与から４８時間後における雄及び雌Ｗｉｓｔａｒラットでの放射能分布の比較を示している。
【図２】図２は、マンニトール、マンニトール＋添加ナトリウム及びカルシウム、イオジキサノール＋マンニトール、Ｖｉｓｉｐａｑｕｅ（商標）並びにリンガー液の注入によって引き起こされた心室細動の頻度を示している。データはＣｈａｉ ｅｔ ａｌ．から取得した。
【図３】図３は、様々な濃度の塩化カルシウムを含む化合物Ｉの組成物の注入によって引き起こされた心室細動の頻度を、Ｖｉｓｉｐａｑｕｅの注入と比較して示している。注入容量は６２．５秒間にわたって２５ｍｌであり、溶液はＬＡＤに選択的に注入した。
【図４】図４は、濃度に対してプロットした２０℃及び３７℃での化合物Ｉの粘度を示している。
【図５】図５は、正常ブタのＬＡＤへの注入開始から４５〜７０秒後のＬＶＳＰに対する化合物Ｉ（Ｃａ添加及び無添加）並びにＶｉｓｉｐａｑｕｅの効果を、リンガー乳酸塩（ＬＲ）の注入に対して正規化して示している。
【図６】図６は、正常ブタのＬＡＤへの４０ｍｌ（５ｍｌ／秒）のリンガー乳酸塩、化合物Ｉ、Ｖｉｓｉｐａｑｕｅ又はイオパミドールの注入後における、心臓血管パラメーターに対する効果を示している。
【発明を実施するための形態】
【００２３】
Ｖｉｓｉｐａｑｕｅ（商標）に比べて優れた心臓安全性プロファイルを示す新規な診断用Ｘ線組成物が同定された。化合物自体（即ち、コントラストを与える化合物）の安全性に加えて、診断用組成物の追加成分が決定的に重要である。
【００２４】
Ｃｈａｉ ｅｔ ａｌ．による研究では、１９ｍＭのＮａＣｌ及び０．３ｍＭのＣａＣｌ2を含むイオジキサノールの製剤が単独のイオジキサノールより低い頻度の心室細動（ＶＦ）を示すことが証明されている。この研究は、ブタにおいて、予め閉塞させた左冠動脈（ＬＣＡ）に媒体を直接注入することで実施された。Ｖｉｓｉｐａｑｕｅ（商標）を注入しても心室細動の発生は認められなかった。化合物Ｉの安全性試験及びそのための製剤の同定の一部として、化合物Ｉの製剤を試験し、Ｖｉｓｉｐａｑｕｅ（商標）と比較した。以前に発表した研究（上記）では、２０ｍｌのイオジキサノールの冠動脈内注入を４０秒の注入時間にわたって実施してもＶＦの発生例はなかったので、注入容量を６２．５秒間にわたって２５ｍｌに増加させることで比較目的のためにＶＦ発生例を増加させるた。加えて、モデルの感度をさらに高めるため、試験溶液及び参照溶液を左前下行冠動脈（ＬＡＤ）に選択的に注入した。このような高い容量では、Ｖｉｓｉｐａｑｕｅでも顕著な頻度（１００％）の心室細動を示した（図３）。これらの実験は実施例２に略述されている。
【００２５】
意外にも、新規なＸ線造影剤である化合物Ｉは、４０〜５０ｍＭという多量のＮａＣｌ及び０．１〜０．７ｍＭのＣａＣｌ2と共に診断用組成物として製剤化した場合、心室細動の発生を示さなかった（詳細については図３及び表３を参照されたい）。
【００２６】
２つの異なる研究からの結果を比較した場合、Ｖｉｓｉｐａｑｕｅでは心室細動の頻度が０％から１００％に増加した。しかし、高い用量においても、二量体Ｘ線造影剤である化合物Ｉは心室細動を示さなかった。主たる相違点は、本研究では化合物Ｉが４５ｍＭのＮａＣｌと共に製剤化されたことであり、これはＶｉｓｉｐａｑｕｅの場合（１９ｍＭ）より実質的に高い。０．１〜０．７ｍＭのカルシウムイオン濃度に関しては、心室細動（ＶＦ）の点で顕著な効果は見られなかったが、存在するカルシウムが少ない場合、収縮期動脈血圧（ＳＡＰ）及び左心室収縮期血圧（ＬＶＰ）の顕著な低下が見られた（表２）。これらのデータが示す通り、心室細動の頻度を左右する主因子は塩化ナトリウムの濃度である一方、カルシウムは収縮期動脈血圧及び左心室収縮期血圧（ＬＶＳＰ）に対して顕著な効果を及ぼす。実際、正常ブタにおける研究では、４５ｍＭのＮａＣｌを含むがＣａＣｌ2を添加しない化合物Ｉの組成物のＬＡＤ注入は注入から４５〜７０秒後にＬＶＳＰの低下（リンガー乳酸塩に対して正規化して平均−５．７ｍｍＨｇ）を生じたが、４５ｍＭのＮａＣｌ及び０．５ｍＭのＣａＣｌ2を含む化合物Ｉの組成物の注入はＶｉｓｉｐａｑｕｅと同様にしてＬＶＳＰを維持した（リンガー乳酸塩に対して正規化してそれぞれ−０．３及び＋０．１ｍｍＨｇ）（実施例２ｂ）。加えて、同じ速度及び容量でのイオパミドールの注入は、あらゆる場合において（３頭のブタにおける全部で９回の注入時において）、注入の開始から約２７〜５０秒後にＶＦを誘発した（これはＬＶＳＰの分析を制限した）。これらの結果はさらに、化合物Ｉの組成物中における０．５ｍＭのＣａＣｌ2の存在が有益であり、Ｖｉｓｉｐａｑｕｅと同様にしてＬＶＳＰに対する負の効果を制限することを示している。さらに、化合物Ｉの診断用組成物及びＶｉｓｉｐａｑｕｅ中に存在する添加電解質は、添加電解質を含まないイオパミドールに比べてＶＦを誘発する傾向を低下させることができる。試験した電解質の量及び比は、実施例２ｂの表４に示されている。
【００２７】
一層急速な注入（５ｍｌ／秒で４０ｍｌ）の研究では、４５ｍＭのＮａＣｌ及び０．５ｍＭのＣａＣｌ2を含む組成物中の化合物Ｉを正常ブタのＬＡＤに選択的に注入した場合、左心室収縮期血圧はリンガー乳酸塩及びＶｉｓｉｐａｑｕｅの投与後に観測される値と同様に維持された。それとは対照的に、添加電解質を含まないイオパミドールの注入はＬＶＳＰの有意な低下を誘発した（実施例２ｃ）。さらに、イオパミドールはｄＰ／ｄｔの実質的な増加（６９％）を誘発したのに対し、化合物Ｉはこの点に関してはリンガー乳酸塩及びＶｉｓｉｐａｑｕｅと同様であった（３０％以下の控えめな増加）。試験した化合物Ｉの製剤及びＶｉｓｉｐａｑｕｅ中におけるナトリウム（Ｎａ）及びカルシウム（Ｃａ）電解質の存在及び比（これらはリンガー乳酸塩及び間質液のＮａ／Ｃａバランス組成に一層近い）は、添加電解質を含まないイオパミドールの注入後の状態に比べて優れた心臓機能の維持に寄与すると考えられる。電解質の量及び比は、実施例２ｂの表５に示されている。
【００２８】
本発明のさらに別の実施形態では、本発明の組成物は、４２〜４７ｍＭのナトリウムイオン濃度、さらに好ましくは４４〜４６ｍＭのナトリウムイオン濃度、最も好ましくは４５ｍＭのナトリウムイオン濃度を与えるナトリウム化合物を含んでいる。
【００２９】
本発明のさらに別の実施形態では、本発明の組成物は、０．３〜０．６ｍＭのカルシウムイオン濃度、さらに好ましくは０．４〜０．５ｍＭのカルシウムイオン濃度、最も好ましくは０．５ｍＭのカルシウムイオン濃度を与えるカルシウム化合物を含んでいる。
【００３０】
この態様では、ナトリウムイオン濃度とカルシウムイオン濃度との比は５７〜５００（例えば、６３〜１１７）、さらに好ましくは７０〜１５６、さらに好ましくは８５〜１１５、最も好ましくは８８〜９５とすべきである。
【００３１】
第２の態様では、本発明は、
次式の化合物Ｉ、
【００３２】
【化３】
薬学的に許容されるキャリア、並びに
上記キャリア中に溶解されたナトリウム化合物及びカルシウム化合物であって、ナトリウムイオン濃度とカルシウムイオン濃度との比が４０〜４５、好ましくは４３であるナトリウム化合物及びカルシウム化合物
を含む診断用組成物を提供する。これは、リンガー乳酸塩組成物の電解質濃度を反映するものである。
【００３３】
本組成物のナトリウム化合物及びカルシウム化合物は、塩の形態で供給すればよい。即ち、これらの塩は生理学的に認容される対イオン、例えば塩化物イオン、硫酸イオン、リン酸イオン及び炭酸水素イオンからなる群から選択される対イオンを含んでいる。好ましくは、ナトリウム化合物は塩化ナトリウムであり、カルシウム化合物は塩化カルシウムである。
【００３４】
薬学的に許容されるキャリアは水溶液であり、好ましくは純水である。
【００３５】
ナトリウムは、内向きのＮａ+の流れに依存する心筋の脱分極のために不可欠である。化合物Ｉに４０〜５０ｍＭのナトリウムイオン（好ましくは４５ｍＭのＮａＣｌ）を添加することは、それをイオジキサノール＋１９ｍＭ Ｎａ+／Ｌよりも正常Ｎａ+間質濃度に近づけると考えられる。それにより、化合物Ｉは一層生理的であり、速いナトリウムチャンネルの活動電位を一層良好に維持することができ、かくしてナトリウムの量が過少又はゼロであることで引き起こされる「遅応答性」活動電位を阻止することができる。
【００３６】
以前の研究では、少量（１０〜３０ｍｍｏｌ／Ｌ）のナトリウムを非イオン性コントラスト媒体に添加すると、これらのコントラスト媒体に由来する心室細動（ＶＦ）のリスクを減少させ得ることが示された。しかし、研究はまた、収縮期動脈血圧／左心室収縮期血圧（ＳＡＰ／ＬＶＰ）の低下によって表されるように、コントラスト媒体に対する多量のナトリウムの添加は負の心筋変力作用を増大させ得ることも示されている。正常な細胞外及び細胞内ナトリウム−カルシウム（Ｎａ−Ｃａ）関係を維持するためには、非イオン性コントラスト媒体に対するカルシウムの添加が負の心筋変力作用を低減させる。しかし、重要な問題点は、負の心筋変力作用を防止するためにどれだけの量のカルシウムを添加すべきかである。Ｖｉｓｉｐａｑｕｅ製剤においてイオジキサノール（３２０ｍｇＩ／ｍＬ）に１９ｍＭのＮａＣｌ及び０．３ｍＭのＣａＣｌ2を添加することは、冠動脈造影に際してＶＦや負の心筋変力作用の増大のような生理学的障害を最小限に抑えるために最適であると考えられた。
【００３７】
我々の研究では、４５ｍＭのＮａＣｌを含む化合物Ｉに対してＣａＣｌ2がもたらす利益が確認された（表３）。０．１ｍＭ ＣａＣｌ2を含む製剤（Ｆ１）は、それぞれ０．３ｍＭ ＣａＣｌ2（Ｆ３）又は０．７ｍＭ ＣａＣｌ2（Ｆ５）を含む製剤より顕著に低いＳＡＰ及びＬＶＰを誘発した。０．３ｍＭ ＣａＣｌ2を含む化合物Ｉの製剤は、０．３ｍＭ ＣａＣｌ2を含む製剤より低いＳＡＰを引き起こした。コントラスト媒体へのカルシウムイオンの添加は、ナトリウムの添加によって引き起こされる負の心筋変力作用を阻止し得るということになる。
【００３８】
しかし、ナトリウムイオンとカルシウムイオンとの間には決定的に重要なバランスが存在している。非イオン性コントラスト媒体に適正な濃度のナトリウム及びカルシウムを添加すれば、ＶＦのリスクが減少すると共に、収縮力に対する悪影響が低減する。過大な量のナトリウムを添加すると、心筋の収縮力が減少する。後者の効果は、Ｃａイオンの添加によって阻止される。４５ｍＭのＮａＣｌ及び０．７ｍＭのＣａＣｌ2を含む化合物Ｉの製剤（Ｆ７）は、ＶＦを引き起こさないと共にＦ１及びＦ３製剤より良好な心筋変力作用を維持したので、最良の製剤であると思われる。しかし、化合物ＩのＦ５製剤の血行力学的効果はＶｉｓｉｐａｑｕｅのものに等しいので、Ｆ３とＦ５との間のカルシウム濃度が好ましい。かくして、特に好ましい実施形態では、本発明の組成物は４５ｍＭのＮａＣｌ及び０．５ｍＭのＣａＣｌ2を含んでいる。
【００３９】
このような化合物Ｉの組成物の静脈内及び動脈内安全性が、別の研究において証明された。この研究では、４５ｍＭ ＮａＣｌ及び０．５ｍＭ ＣａＣｌ2を含む組成物中の化合物Ｉの心臓血管効果が、急性ブタモデルを用いて３種の用量レベルについてインビボで評価された。要約すれば、組成物を静脈内及び動脈内経路で投与した場合、心筋性能に対する総合的な変化は存在しなかった。この研究は実施例３に一層詳しく記載されている。
【００４０】
一般に、ヨウ素化コントラスト媒体は、敏感な患者においては、暴露から１時間乃至数日後に遅延型過敏反応を引き起こすことがある。これらの反応は主として、斑状疹、斑丘疹及びじんま疹様発疹のような重篤でない皮膚発疹である。発疹のようなコントラスト媒体で誘発される遅延型副作用（ＤＡＲ）は、コントラスト媒体を再認識すると増殖し、次いで皮膚における炎症反応を手配するコントラスト媒体反応性Ｔ細胞によって引き起こされると思われる。出願人は、化合物Ｉのようなコントラスト媒体が血管内投与後の患者において遅延型皮膚反応を引き起こす相対頻度を予測するように設計されたインビトロＴ細胞増殖モデルを評価した。既知の遅延型皮膚反応率を有する２種のコントラスト媒体（イオジキサノール及びイオヘキソール）並びに新規なコントラスト媒体（化合物Ｉ）を、世界人口のＨＬＡ−ＤＲ頻度を表す１００名のドナーからのＣＤ２５+−欠損末梢血液単核細胞中でのインビトロＴ細胞増殖についてスクリーニングした（２及び５ｍｇＩ／ｍＬ）。公表されているプロトコル及び刺激指数値（陽性応答≧１．９）に従って陽性のＴ細胞応答を評価した。最初の１０のドナー試料試験コントラスト媒体（５ｍｇＩ／ｍＬ）と共にインキュベートして細胞生存度を測定することで、インビトロ毒性を試験した。結果は、すべての主たるＨＬＡ−ＤＲアロタイプが世界人口と同等な頻度で表されていた。試験したコントラスト媒体はいずれも、細胞生存度に対して有意な効果を及ぼさないように思われた。化合物Ｉは、両方の濃度において、イオジキサノール及びイオヘキソールより少ない陽性のＴ細胞増殖ドナー試料を示した。イオジキサノール及びイオヘキソールに関しては、大抵のドナーにおけるＴ細胞増殖応答は７日目及び８日目に起こった。統計的有意性は、８日目の化合物Ｉに対する増殖応答の低下について認められた。結論として、このモデルはコントラスト媒体がインビトロＴ細胞活性化を引き起こす相対頻度を確認することに成功した。結果は、２種の市販コントラスト媒体に関して報告された遅延型皮膚反応の頻度と相関しており、化合物Ｉに関する低い頻度を確認した。
【００４１】
したがって、かかる結果は、インビトロＴ細胞増殖を刺激する化合物Ｉの能力がイオジキサノール及びイオヘキソールに比べて最も低いことを示している。ＤＡＲが二量体コントラスト媒体と高い頻度で関連すると仮定すれば、イオジキサノールと密接に関係する非イオン性二量体がインビトロＴ細胞増殖をイオジキサノールと同程度まで刺激せず、実際には単量体のイオヘキソールと同程度にしか刺激しないという我々の所見は、大いに興味深いことである。現在、Ｔ細胞増殖がＤＡＲの基礎をなすことが知られているので、我々のデータは、二量体構造自体が本質的に高い頻度のＴ細胞増殖を引き起こすわけではないことを示唆している。化合物Ｉとイオジキサノールとの間における基本的な構造の差は、イオジキサノールにおける２つのアセチル基が化合物Ｉでは２つのホルミル基で置換されていることである。このような変更は分子のリンカー構造、コンフォメーション及び物理化学的挙動に影響を及ぼし、そして意外にもインビトロＴ細胞増殖を刺激する化合物Ｉの能力はイオジキサノール及びイオヘキソールよりも低い。したがって、本発明の第１の態様に係る診断用組成物は、Ｏｍｎｉｐａｑｕｅ（商標）（イオヘキソール）及びＶｉｓｉｐａｑｕｅ（商標）（イオジキサノール）のような市販のコントラスト媒体より遅延型過敏反応を引き起こすことが少ないと期待される。
【００４２】
化合物Ｉは、国際公開第２００９／００８７３４号に略述されているようにして製造できる。一般手順は国際公開第２００９／００８７３４号の１６〜２０頁に略述されており、詳細な製造方法はその実施例１に示されている。国際公開第２００９／００８７３４号の開示内容は、製造方法の記載を含め、援用によって本明細書の内容の一部をなす。
【００４３】
化合物Ｉは、キラル炭素原子のため、いくつかの異性体形態で存在し得る。加えて、かかる化合物は、大きなヨウ素原子の近接によって引き起こされるホルミル官能基中のＮ−ＣＯ結合の制限された回転のためにエキソ／エンド異性を示す。両方の鏡像異性的に純粋な生成物並びに光学異性体の混合物が含まれる。
【００４４】
本発明の診断用組成物は、すぐに使用できる濃度を有する。一般に、すぐに使用できる形態の組成物は１００ｍｇＩ／ｍｌ以上、好ましくは１５０ｍｇＩ／ｍｌ以上のヨウ素濃度を有し、３００ｍｇＩ／ｍｌ以上（例えば、３２０ｍｇＩ／ｍｌ）の濃度が好ましい。診断用組成物は、好ましくはさらに薬学的に許容されるキャリア又は賦形剤を含んでいる。その例は、エチレンジアミン四酢酸（ＥＤＴＡ）及びトリス（ヒドロキシメチル）アミノメタン（ＴＲＩＳ）である。
【００４５】
本発明の診断用組成物は、好ましくはＸ線診断又はＸ線イメージングにおいてＸ線コントラスト媒体として使用するためのものである。本組成物はボーラス注射として又は輸液によって投与できる。さらに、本組成物は血管内、静脈内又は動脈内投与によって投与できる。別法として、本組成物は経口投与することもできる。
【００４６】
第３の態様では、本発明は、Ｘ線診断で使用するための診断用組成物であって、薬学的に許容されるキャリア、並びに上記キャリア中に溶解されて４０〜５０ｍＭのナトリウムイオン濃度及び０．１〜０．７ｍＭのカルシウムイオン濃度を与えるナトリウム化合物及びカルシウム化合物を含む診断用組成物を製造するための、次式の化合物Ｉの使用を提供する。
【００４７】
【化４】
さらに別の態様では、本発明は、本発明の診断用組成物をヒト又は動物の身体に投与する段階、診断装置で身体を検査する段階、及び検査からのデータをコンパイルする段階を含む診断方法を提供する。本診断方法では、身体に診断用組成物を予め投与することもできる。
【００４８】
さらに別の態様では、本発明は、インビボイメージング検出方法であって、
ｉ）本発明の診断用組成物の検出可能な量を投与する段階、
ｉｉ）投与された組成物を分布させる段階、
ｉｉｉ）分布した組成物の化合物Ｉによって放出される信号を検出する段階、及び
ｉv）前記信号の位置及び／又は量を表す画像を生成する段階
を含むインビボイメージング検出方法を提供する。
【００４９】
イメージング方法はＸ線イメージング方法であり、この態様の好ましい実施形態では、検出方法は冠動脈造影法であり、さらに好ましくは、診断用組成物はボーラス注射として冠動脈に投与される。
【００５０】
さらに別の態様では、本発明は、Ｘ線イメージング又は診断（例えば、冠動脈造影）で使用するための本発明の組成物を提供する。
【実施例】
【００５１】
実施例１．化合物Ｉに関する生理化学的性質、急性毒性及び生体分布データ
タンパク質結合
平衡透析法を用いて、ヒト血清アルブミン（ＨＳＡ）に対する化合物Ｉの結合を測定した。化合物Ｉの原液（リン酸緩衝食塩水（ＰＢＳ）中５．０ｍｇ／ｍｌ）を１：９の比のクエン酸塩：ヒト血漿と混合した。Ｄｉａｃｈｅｍ Ｄｉａｎｏｒｍ Ｄｉａｌｙｓｅｒにおいて、Ｄｉａｃｈｅｍ １０．１７ ＭＷカットオフ１００００膜を用いてリン酸緩衝食塩水に対する平衡化を２５時間実施した。ＩＣＰ−ＡＥＳ測定器を用いて溶液の分析を行った。加えて、平衡が達成されたことを保証するため、スパイクされたＰＢＳ溶液をクエン酸塩添加ヒト血漿溶液に対して平衡化した。ヒト血清アルブミンに対する化合物Ｉの結合は非常に低い（３．１±１．３％）と測定され、該物質と内因性タンパク質との相互作用は無視できることが確認された。参考として、ＨＳＡに対するイオジキサノールの結合は０．４±０．９％と測定された。
【００５２】
分配係数
化合物Ｉの親水性の尺度として、オクタノールと水との間の分配係数を測定した。試験物質（０．３ｍｇ／ｍｌ）を含む水（５ｍｌ）を１５ｍｌのｎ−オクタノールと共に、平衡が得られるまで振盪した。水性相を遠心分離によって分離し、２４４ｎｍでのＵＶ検出及び０．３ｍｌ／分の流量を用いたＨＰＬＣ（Ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ Ｃ１８カラム、１００×２．１ｍｍを備えたＨＰ１１００）によって分析した。水中８％アセトニトリル（ｖ／ｖ）のイソクラティックＨＰＬＣ条件を使用した。オクタノール相（１２．５ｍｌ）を平衡が得られるまで水（０．７３ｍｌ）で抽出し、遠心分離によって相を分離した。上記に詳述した条件を用いたＨＰＬＣによって水性相を分析した。分配係数実験に先立ち、オクタノール及び水の両方をそれぞれ水及びオクチルで予め飽和させた。オクタノールと水との間における分配によって化合物Ｉの親水性を測定したところ、化合物Ｉは非常に親水性が高くて、−４．２８のｌｏｇＰを有することが示された。比較として、イオジキサノールの対応するｌｏｇＰは−４．０２と測定された。報告されている文献値は−４．０５８である。イオジキサノールに比べて上昇した化合物Ｉの親水性は、そのＨＰＬＣ挙動によって確認される。
【００５３】
粘度
化合物Ｉの粘度を、２種の温度（２０℃及び３７℃）並びに３種の濃度（２４６、２９５及び３１３ｍｇＩ／ｍｌ）で測定した。試験溶液は、ＮａＣｌによる重量オスモル濃度の調整によって等張とし、オートクレーブ処理によって滅菌した。密度メーターＤＭＡ５８（Ａｎｔｏｎ Ｐａａｒ社）を用いて溶液の密度を測定した。落下時間を動的粘度の尺度として用いる較正Ｕ管技法を使用した。化合物Ｉの粘度を３種の濃度について２０℃及び３７℃で測定した。結果を図４に示す。Ｖｉｓｉｐａｑｕｅと比較したところ、３２０ｍｇＩ／ｍｌ及び２０℃での粘度は同様であって、約２４ｍＰａｓである。
【００５４】
重量オスモル濃度
化合物Ｉの重量オスモル濃度を４種の濃度（２０４、２５４、３１０及び３２４ｍｇＩ／ｍｌ）で測定した。Ｖａｐｒｏ Ｉｎｃ．からのＶａｐｒｏ ５５２０蒸気圧浸透圧計を使用した。化合物Ｉの重量オスモル濃度は、濃度に対し、直線に近い関係を示している。３２０ｍｇＩ／ｍｌでの化合物Ｉの重量オスモル濃度はイオジキサノールの重量オスモル濃度より低い（３２０ｍｇＩ／ｍｌで１３６ｍＯｓｍ／ｋｇ対２１０ｍＯｓｍ／ｋｇ）。
【００５５】
急性毒性
体重２００±２０ｇの若い成体雄Ｓｃａ：ＳＤラット（Ｓｃａｎｂｕｒ社、スウェーデン）に、化合物Ｉ（３４０ｍｇＩ／ｍＬ、２８６ｍｏｓｍｏｌ／ｋｇ）、イオジキサノール（３２１ｍｇＩ／ｍＬ、２８４ｍｏｓｍｏｌ／ｋｇ）、浸透圧調節用マンニトール（２８３ｍｏｓｍｏｌ／ｋｇ）又は食塩水（２９０ｍｏｓｍｏｌ／ｋｇ）を１．２ｍｌ／分の速度で静脈内注射し、各々を２回分の用量として４時間間隔で投与した。中間屠殺動物（処置後２日目）に関しては、化合物Ｉ及びイオジキサノールはそれぞれ２３．７、２９．７及び３８．０ｍｌ／ｋｇ並びに２５、３１．３及び４０ｍｌ／ｋｇの総投与容量に相当する８、１０及び１２．８ｇＩ／ｋｇで投与したのに対し、マンニトール及び食塩水についての投与容量は４０ｍｌ／ｋｇであった。７日目の最終屠殺動物に関しては、４つの投与群、即ち化合物Ｉ及びイオジキサノール（１２．８ｇＩ／ｋｇ）並びに食塩水及びマンニトール（４０ｍＬ／ｋｇ）が存在していた。いずれの場合にも、各群は８頭の動物を含んでいた。
【００５６】
研究中に以下の評価を行った。即ち、０、２及び７日目には臨床徴候及び体重を検査し、血液学及び臨床化学検査のために血液を採取し、２又は７日目には過剰の静脈内チオペンタール注射によって屠殺した動物からの組織の肉眼観察、臓器重量測定及び組織形態学的検査を行った。投与日を０日目として定義した。臨床生化学パラメーター（Ｎａ、Ｋ、Ｃｌ、ＰＯ4、Ｃａ、ＡＳＴ、ＡＬＴ、ＡＬＰ、コレステロール、クレアチニン、ＣＫ、ＧＧＴ、ＴＧ（トリグリセリド）、総ビリルビン、総タンパク質、尿素、アルブミン、ＬＤＨ及びＧＬＤＨ）はＢｅｃｋｍａｎ Ｓｙｎｃｈｒｏｎ ＣＸ５上において３７℃で測定した。血液学パラメーター（ＷＢＣ、分別ＷＢＣ、ＲＢＣ、ＷＢＣ／ＲＢＣ比、Ｈｇｂ、ＰＬＴ、ＨＣＴ、ＭＣＨ、ＭＣＨＣ、ＭＣＶ、ＭＰＶ及びＲＤＷ）は、Ａｂｂｏｔｔ Ｃｅｌｌ−Ｄｙｎ ３５００ ＣＳ自動血液学分析装置を用いて分析した。食塩水対照並びに１２．８ｇＩ／ｋｇ化合物Ｉ及びイオジキサノール群からの腎臓を１０％中性緩衝ホルマリン中に浸漬固定し、パラフィンろう中に包埋し、５μｍの公称厚さで切片化し、ヘマトキシリン及びエオシンで染色し、光学顕微鏡で検査した。
【００５７】
２日間及び７日間のイオジキサノール群及び化合物Ｉ群と比較するために２日間及び７日間の食塩水群を使用しながら、パラメトリックワンウェイＡＮＯＶＡ、次いでＤｕｎｎｅｔｔの事後検定によってデータを分析した。統計的分析は、−１日目（基線）、２日目及び７日目に適用した。
【００５８】
生体分布
各時点（２分、２０分、１時間、２時間、４時間、２４時間、４８時間）について、各性別の動物３頭をイソフルランで麻酔した。各試験動物は約２０秒以内に２回の注射を受けた。最初の注射は約３２０ｍｇＩ／ｍｌの化合物Ｉ（非放射性）であり、特定の尾静脈（左又は右）を通して約１．６ｇＩ／ｋｇの総化学用量を与えるように投与した。その後できるだけ早く（約２０秒以内に）、放射性［123Ｉ］化合物Ｉ試験品（約１〜約８ＭＢｑ、３５０μｇ以下）を静脈内ボーラスとして反対側の尾静脈に注射した。このアプローチでは、化合物Ｉの総化学用量を顕著に変化させることなく、投与する放射能の量を解剖時点（試験日１、２及び３）に従って調整することができる。次いで、動物を尿及び糞便回収用の代謝ケージ内に配置し、標識化合物Ｉの注射後の適当な時点まで維持した。この時点で、動物をイソフルランで再び麻酔し、頸部脱臼によって屠殺した。選択された器官及び組織（血液、腎臓、膀胱及び尿、肺、肝臓、胃、小腸及び大腸、心臓、睾丸、卵巣、子宮並びに糞便）を取り出すと共に、尾を注射部位として分析した。次いで、選択された器官、組織及び排泄物中の放射能の量を、自動双晶型γ線カウンター及び分析システムを用いて測定した。
【００５９】
急性毒性の結果：
食塩水又はマンニトールで処置されたラットでは有害な臨床徴候は見られなかったのに対し、化合物Ｉ及びイオジキサノールで処置されたラットでは、軽度乃至中度の抑うつ状態、非協調運動及び虚弱／無気力、並びに四肢の浮腫及び紅斑が見られた。これらの効果は最初の投与から１０〜２０分後に始まり、２〜３時間続いたが、明確な用量−応答関係はなかった。血液学及び臨床化学データの解析は、いずれの群においても毒物学的に有意な悪影響は存在しないことを示した。
【００６０】
腎臓では、主たる処置関連所見は近位細管の細胞質空胞化であり、糸球体では、タンパク質様物質を含むボーマン腔の拡張であった。２日目では、空胞化の程度は化合物Ｉに比べてイオジキサノール投与群で高かった。７日目までには、いずれの群においても空胞化の程度は２日目に比べてやや低くなり、ポーマン腔の拡張及びタンパク質様物質の存在についても同様であった。
【００６１】
【表１】
生体分布の結果：
静脈内投与後、［123Ｉ］標識化合物Ｉは急速に排出され、注射後２時間では注射用量（ｉｄ）の＞８０％が膀胱及び尿中に存在していた。血液中のレベルは、注射後２分での２１％ｉｄから注射後２時間での０．６％ｉｄに減少した。糞便経路を通じて少ないが実質的な量の排出が存在しており、これは注射後４８時間では雄の動物（糞便中８．２％ｉｄ）に比べて雌の動物（糞便中１４．３％ｉｄ）で僅かに高いと思われた。ただし、この差は統計的に有意でなかった。標識化合物Ｉの注射から４８時間後には、２％ｉｄ未満が体内に保持されていた。約０．５％が腎臓に保持され、０．１％が肝臓に保持され、１％未満が残りの胴体に保持されていた（図１）が、これらのすべてが２４時間時点からさらに減少していた。これは、初期の急速排出段階後、体内に保持された化合物Ｉが継続的にゆっくりと排出されることを反映しているようである。生殖器官における放射能の保持は存在しなかった。全体として、標識化合物Ｉの生体分布プロファイルは他の二量体ヨウ素化造影剤と同様であった。
【００６２】
実施例２：比較研究
２ａ）ブタＬＡＤ閉塞モデルにおけるＶｉｓｉｐａｑｕｅ（商標）及び化合物Ｉの診断用組成物の心臓毒性の比較
１９ｍＭのＮａＣｌ及び０．３ｍＭのＣａＣｌ2を含むイオジキサノールの製剤が単独のイオジキサノールより低い頻度の心室細動を示すことを証明したＣｈａｉ ｅｔ ａｌ．（Ａｃａｄ．Ｒａｄｉｏｌ．２００４，１１，５８３−５９３）による研究を参照されたい。この研究は、ブタにおいて、予め閉塞させた左冠動脈（ＬＣＡ）に媒体を直接注入することで実施された。１９ｍＭのＮａＣｌ及び０．３ｍＭのＣａＣｌ2を含むイオジキサノールの製剤が単独のイオジキサノールより低い頻度の心室細動を示すことは、図２から明らかである（Ｐ＜０．０１）。この場合、Ｖｉｓｉｐａｑｕｅ（商標）の注入後に心室細動の発生は認められなかった。これらの実験で投与された用量は、２．０ｍｌ／分の注入速度で２０ｍｌであった。
【００６３】
Ｃｈａｉ ｅｔ ａｌ．による研究では、（Ｖｉｓｉｐａｑｕｅとして製剤化された）２０ｍｌのイオジキサノールの冠動脈内注入を４０秒の注入時間にわたって実施してもＶＦの発生例はなかったので、我々は、注入容量を６２．５秒間にわたって２５ｍｌに増加させることで比較目的のためにＶＦ発生例を増加させる研究を実施した。加えて、モデルの感度をさらに高めるため、試験溶液及び参照溶液を左前下行冠動脈（ＬＡＤ）に選択的に注入した。試験溶液の物理的及び化学的性質を表２に示し、結果を図３に示す。
【００６４】
【表２】
このような高い注入容量では、Ｖｉｓｉｐａｑｕｅでも顕著な頻度（１００％）の心室細動を示した（図３）。
【００６５】
しかし、意外にも、新規なＸ線造影剤である化合物Ｉは、４５ｍＭのＮａＣｌ及び０．１〜０．７ｍＭのＣａＣｌ2と共に製剤化した場合、心室細動の発生を示さなかった（詳細については図３及び表３を参照されたい）。
【００６６】
２つの異なる研究からの結果を比較した場合、Ｖｉｓｉｐａｑｕｅ（商標）では、０％から１００％への心室細動の頻度の増加が認められる。しかし、高い用量でも、診断用組成物中における二量体Ｘ線造影剤の化合物Ｉは心室細動を示さない。主たる相違点は、化合物ＩがＶｉｓｉｐａｑｕｅの場合（１９ｍＭ）より顕著に高い４５ｍＭのＮａＣｌと共に製剤化されたことである。０．１〜０．７ｍＭのカルシウムイオン濃度ではＶＦに対する顕著な効果は見られなかったものの、カルシウムの存在量が少ない場合にはＳＡＰ及びＬＶＰの顕著な低下があった（表３）。
【００６７】
【表３】
これらのデータが示す通り、心室細動の頻度を左右する主因子は塩化ナトリウムの濃度である一方、カルシウムは収縮期動脈血圧及び左心室収縮期血圧に対して顕著な効果を及ぼす。
【００６８】
２ｂ：ＣａＣｌ2添加及び無添加の組成物中における化合物ＩとＶｉｓｉｐａｑｕｅ及びイオパミドールとの比較
パルーン閉塞を施さない正常ブタのＬＡＤへの選択的投与後において、ＣａＣｌ2添加及び無添加の化合物Ｉの組成物の血行力学的効果をＶｉｓｉｐａｑｕｅ及びイオパミドールと比較した。各コントラスト媒体の効果は、容量及び電解質「比」対照として作用するリンガー乳酸塩溶液の等価注入で見られた効果に対して正規化した。この研究では全部で１２頭のブタが使用され、各ブタには単一のＣＭが１０ｍｌ（４ｍｌ／秒）、２０ｍｌ（１ｍｌ／秒）及び２５ｍｌ（０．４ｍｌ／秒）の容量で３回注入された（各ブタにおいて全部で９回のＣＭ注入）。各ＣＭの前又は後にはリンガー乳酸塩の対照注入が行われ、各注入（容量）の順序は各ブタにおいてランダム化された。表４は、使用したナトリウム及びカルシウム電解質の量及び比を示している。
【００６９】
【表４】
２５ｍｌの注入容量では、添加ＣａＣｌ2を含まない組成物中の化合物Ｉは注入から４５〜７０秒後にＬＶＳＰの低下（リンガー乳酸塩に対して正規化して平均−５．７ｍｍＨｇ）を生じたのに対し、添加ＣａＣｌ2を含む組成物中の化合物Ｉ及びＶｉｓｉｐａｑｕｅはほとんど又は全く効果を及ぼさなかった（リンガー乳酸塩に対して正規化してそれぞれ−０．３及び＋０．１ｍｍＨｇ）（図５）。添加ＣａＣｌ2を含まない化合物Ｉの組成物に関して認めるられたＬＶＳＰの低下は、添加ＣａＣｌ2を含むものに対して有意差があったが、後者はＶｉｓｉｐａｑｕｅに対して有意差がなかった。加えて、イオパミドール注入に対しての対応する応答は分析できなかった。これは、各々の場合において、２５ｍｌ注入の開始から約２７〜５０秒後にＶＦが認められたからである。これらの結果は、化合物Ｉの組成物中における０．５ｍＭのＣａＣｌ2の存在が有益であり、Ｖｉｓｉｐａｑｕｅと同様にしてＬＶＳＰに対する負の効果を制限することを示している。加えて、化合物Ｉの診断用組成物及びＶｉｓｉｐａｑｕｅ中に存在する添加電解質は、添加電解質を含まないイオパミドールに比べてＶＦを誘発する傾向を低下させることができる。
【００７０】
２ｃ：急速注入速度を用いた正常ブタにおける化合物Ｉの組成物とＶｉｓｉｐａｑｕｅ、イオパミドール及びリンガー乳酸塩との比較
さらに別の研究では、急速注入速度（５ｍｌ／秒）を用いて正常ブタのＬＡＤに選択的に投与した後において、４５ｍＭのＮａＣｌ及び０．５ｍＭのＣａＣｌ2を含む組成物中の化合物Ｉの血行力学的効果をＶｉｓｉｐａｑｕｅ及びイオパミドールと比較した。リンガー乳酸塩もまた、容量及び電解質「比」対照として試験した。全部で３頭のブタを試験し、各ＣＭをランダムな順序で各ブタに２回投与した。使用した注入速度は５ｍｌ／秒であり、総注入容量は４０ｍｌであった。表５は、試験したナトリウム及びカルシウム電解質の量及び比を示している。
【００７１】
【表５】
化合物Ｉ及びＶｉｓｉｐａｑｕｅの注入は、リンガー乳酸塩の投与とは有意に異なる基線からのＬＶＳＰ又はｄＰ／ｄｔの変化を誘発しなかったのに対し、イオパミドールはＬＶＳＰ値の有意な低下及びｄＰ／ｄｔ値の有意な増加を誘発した（図６）。イオパミドールの投与後、ＬＶＳＰは９％±６だけ低下し、ｄＰ／ｄｔは６９％±１６だけ増加した。これは、ＬＶＳＰの僅かな増加（約５％）及びｄＰ／ｄｔの控えめな増加（約３０％以下）を生じたリンガー乳酸塩、化合物Ｉ及びＶｉｓｉｐａｑｕｅの注入と対照的であった。これらの結果は、正常ブタのＬＡＤに急速注入した場合、４５ｍＭのＮａＣｌ及び０．５ｍＭのＣａＣｌ2を含む組成物中の化合物ＩがＶｉｓｉｐａｑｕｅ又は生理的リンガー液と同じく血行力学的パラメーターに対して最小の効果しか及ぼさないことを示している。試験した化合物Ｉの製剤及びＶｉｓｉｐａｑｕｅ中に、リンガー乳酸塩及び間質液のバランス組成に一層類似した電解質が存在することは、添加電解質を含まないイオパミドールの注入後の状態に比べて優れた心臓機能の維持に寄与すると考えられる。
【００７２】
実施例３：化合物Ｉの診断用組成物の静脈内及び動脈内安全性
化合物Ｉの組成物の静脈内（ｉ．ｖ．）及び動脈内（ｉ．ａ．）安全性が、別の研究（参考文献Ｂ１４５０９５）において証明された。この研究では、４５ｍＭのＮａＣｌ及び０．５ｍＭのＣａＣｌ2を含む組成物中の化合物Ｉの心臓血管効果が、急性ブタモデルを用いて３種の容量レベルについてインビボで評価された。
【００７３】
方法：３頭ずつの動物群に対し、３種の用量レベルの１つ（２ｍｌ／ｋｇの標準容量の１倍、２倍又は３倍）で組成物を動脈内又は静脈内に投与した。各動物はまた、容量対照として同容量のリンガー乳酸塩溶液の投与を受けた。ＣＶ効果として、心拍数（ＨＲ）、脈拍酸素測定値、心電図（ＥＣＧ）、大動脈血圧（収縮期、拡張期及び平均）並びに左心室最終拡張期血圧（ＬＶＥＤＰ）を評価した。一回拍出量、駆出率及び心臓収縮性を評価するための超音波／エコー心臓検査も行った。
【００７４】
結果：予備データ要約の評価は、ブタ心臓において、ＨＲ、脈拍酸素測定値及びＥＣＧに対する化合物Ｉの重要な用量又は経路関連効果が存在しないことを示唆している。脈拍酸素測定値の分析は、投与期間全体を通じて酸素飽和度が約９８％に保たれたことを示した。ＨＲも正常範囲内に保たれた。化合物Ｉに関連する調律障害は存在しなかった。即ち、化合物Ｉの動脈内又は静脈内投与にかかわらず、ＱＴ間隔は正常範囲内にあった。同様に、用量範囲全体にわたり、大動脈血圧（収縮期、拡張期及び平均）に対する化合物Ｉの効果はほとんど又は全く認められなかった。化合物Ｉが静脈内又は動脈内経路のいずれで投与されたにせよ、大動脈血圧の変化は同様であると思われた。化合物Ｉの用量の増加に伴ってＬＶＥＤＰの僅かな増加が存在したが、その効果は化合物Ｉが静脈内又は動脈内経路のいずれで投与されても同様であった。加えて、ＬＶＥＤＰの増加の大きさは、増加した容量のリンガー乳酸塩を投与した後に見られるものと同様であった。エコー心臓検査による一回拍出量、駆出率及び心臓収縮性の分析は最終拡張期容量（ＥＤＶ）の僅かな変化のみを示し、いずれの効果も容量に関連するものであり、化合物Ｉの投与に特有のものではないことが確認された。
【００７５】
したがって、化合物Ｉを静脈内又は動脈内経路で投与した場合、心筋性能の総合的変化は存在しなかった。ＣＶ機能パラメーターの小さな変化は投与した容量によるものであり、試験品の化合物Ｉによるものではなかった。その理由は、リンガー乳酸塩溶液の注入後に同様な効果が見られたことにある。２ｍｌ／ｋｇの標準投与容量の３倍までの化合物Ｉの静脈内又は動脈内投与後、すべての心筋パラメーターは正常範囲内にあった。
【特許請求の範囲】
【請求項１】
次式の化合物Ｉと、
【化１】
薬学的に許容されるキャリアと、
上記キャリア中に溶解されて４０〜５０ｍＭのナトリウムイオン濃度及び０．１〜０．７ｍＭのカルシウムイオン濃度を与えるナトリウム化合物及びカルシウム化合物と
を含む診断用組成物。
【請求項２】
４２〜４７ｍＭのナトリウムイオン濃度を与えるナトリウム化合物を含む、請求項１記載の診断用組成物。
【請求項３】
４４〜４６ｍＭのナトリウムイオン濃度を与えるナトリウム化合物を含む、請求項１記載の診断用組成物。
【請求項４】
４５ｍＭのナトリウムイオン濃度を与えるナトリウム化合物を含む、請求項１記載の診断用組成物。
【請求項５】
０．３〜０．６ｍＭのカルシウムイオン濃度を与えるカルシウム化合物を含む、請求項１乃至請求項４のいずれかに記載の診断用組成物。
【請求項６】
０．４〜０．５ｍＭのカルシウム濃度を与えるカルシウム化合物を含む、請求項１乃至請求項４のいずれかに記載の診断用組成物。
【請求項７】
０．５ｍＭのカルシウム濃度を与えるカルシウム化合物を含む、請求項１乃至請求項４のいずれかに記載の診断用組成物。
【請求項８】
ナトリウムイオン濃度とカルシウムイオン濃度との比が６３〜１１７である、請求項１記載の診断用組成物。
【請求項９】
次式の化合物Ｉと、
【化２】
薬学的に許容されるキャリアと、
上記キャリア中に溶解されたナトリウム化合物及びカルシウム化合物であって、ナトリウムイオン濃度とカルシウムイオン濃度との比が４０〜４５であるナトリウム化合物及びカルシウム化合物と
を含む診断用組成物。
【請求項１０】
ナトリウム化合物及びカルシウム化合物が、塩化物イオン、硫酸イオン、リン酸イオン及び炭酸水素イオンからなる群から選択される対イオンを含む塩である、請求項１乃至請求項９のいずれかに記載の診断用組成物。
【請求項１１】
ナトリウム化合物が塩化ナトリウムであり、カルシウム化合物が塩化カルシウムである、請求項１０記載の診断用組成物。
【請求項１２】
さらにＥＤＴＡ及び／又はＴＲＩＳを含む、請求項１乃至請求項１１のいずれかに記載の診断用組成物。
【請求項１３】
請求項１乃至請求項１２のいずれかに記載の診断用組成物をヒト又は動物の身体に投与する段階、診断装置で身体を検査する段階、及び検査からのデータをコンパイルする段階を含む診断方法。
【請求項１４】
インビボイメージング検出方法であって、
ｉ）請求項１乃至請求項１２のいずれかに記載の診断用組成物の検出可能な量を投与する段階、
ｉｉ）投与された組成物を分布させる段階、
ｉｉｉ）分布した組成物の化合物Ｉによって放出される信号を検出する段階、及び
ｉv）前記信号の位置及び／又は量を表す画像を生成する段階
を含むインビボイメージング検出方法。
【請求項１５】
当該方法が冠動脈造影法である、請求項１４記載の方法。
【請求項１６】
Ｘ線診断又はＸ線イメージングにおいてＸ線コントラスト媒体として使用するための、請求項１乃至請求項１２のいずれかに記載の診断用組成物。
【請求項１】
次式の化合物Ｉと、
【化１】
薬学的に許容されるキャリアと、
上記キャリア中に溶解されて４０〜５０ｍＭのナトリウムイオン濃度及び０．１〜０．７ｍＭのカルシウムイオン濃度を与えるナトリウム化合物及びカルシウム化合物と
を含む診断用組成物。
【請求項２】
４２〜４７ｍＭのナトリウムイオン濃度を与えるナトリウム化合物を含む、請求項１記載の診断用組成物。
【請求項３】
４４〜４６ｍＭのナトリウムイオン濃度を与えるナトリウム化合物を含む、請求項１記載の診断用組成物。
【請求項４】
４５ｍＭのナトリウムイオン濃度を与えるナトリウム化合物を含む、請求項１記載の診断用組成物。
【請求項５】
０．３〜０．６ｍＭのカルシウムイオン濃度を与えるカルシウム化合物を含む、請求項１乃至請求項４のいずれかに記載の診断用組成物。
【請求項６】
０．４〜０．５ｍＭのカルシウム濃度を与えるカルシウム化合物を含む、請求項１乃至請求項４のいずれかに記載の診断用組成物。
【請求項７】
０．５ｍＭのカルシウム濃度を与えるカルシウム化合物を含む、請求項１乃至請求項４のいずれかに記載の診断用組成物。
【請求項８】
ナトリウムイオン濃度とカルシウムイオン濃度との比が６３〜１１７である、請求項１記載の診断用組成物。
【請求項９】
次式の化合物Ｉと、
【化２】
薬学的に許容されるキャリアと、
上記キャリア中に溶解されたナトリウム化合物及びカルシウム化合物であって、ナトリウムイオン濃度とカルシウムイオン濃度との比が４０〜４５であるナトリウム化合物及びカルシウム化合物と
を含む診断用組成物。
【請求項１０】
ナトリウム化合物及びカルシウム化合物が、塩化物イオン、硫酸イオン、リン酸イオン及び炭酸水素イオンからなる群から選択される対イオンを含む塩である、請求項１乃至請求項９のいずれかに記載の診断用組成物。
【請求項１１】
ナトリウム化合物が塩化ナトリウムであり、カルシウム化合物が塩化カルシウムである、請求項１０記載の診断用組成物。
【請求項１２】
さらにＥＤＴＡ及び／又はＴＲＩＳを含む、請求項１乃至請求項１１のいずれかに記載の診断用組成物。
【請求項１３】
請求項１乃至請求項１２のいずれかに記載の診断用組成物をヒト又は動物の身体に投与する段階、診断装置で身体を検査する段階、及び検査からのデータをコンパイルする段階を含む診断方法。
【請求項１４】
インビボイメージング検出方法であって、
ｉ）請求項１乃至請求項１２のいずれかに記載の診断用組成物の検出可能な量を投与する段階、
ｉｉ）投与された組成物を分布させる段階、
ｉｉｉ）分布した組成物の化合物Ｉによって放出される信号を検出する段階、及び
ｉv）前記信号の位置及び／又は量を表す画像を生成する段階
を含むインビボイメージング検出方法。
【請求項１５】
当該方法が冠動脈造影法である、請求項１４記載の方法。
【請求項１６】
Ｘ線診断又はＸ線イメージングにおいてＸ線コントラスト媒体として使用するための、請求項１乃至請求項１２のいずれかに記載の診断用組成物。
【図１】
【図２】
【図３】
【図４】
【図５】
【図６】
【図２】
【図３】
【図４】
【図５】
【図６】
【公表番号】特表２０１３−５０９３７８（Ｐ２０１３−５０９３７８Ａ）
【公表日】平成２５年３月１４日（２０１３．３．１４）
【国際特許分類】
【出願番号】特願２０１２−５３５８２７（Ｐ２０１２−５３５８２７）
【出願日】平成２２年１０月２８日（２０１０．１０．２８）
【国際出願番号】ＰＣＴ／ＥＰ２０１０／０６６３５１
【国際公開番号】ＷＯ２０１１／０５１３８７
【国際公開日】平成２３年５月５日（２０１１．５．５）
【出願人】（３９６０１９３８７）ジーイー・ヘルスケア・アクスイェ・セルスカプ (82)
【Ｆターム（参考）】
【公表日】平成２５年３月１４日（２０１３．３．１４）
【国際特許分類】
【出願日】平成２２年１０月２８日（２０１０．１０．２８）
【国際出願番号】ＰＣＴ／ＥＰ２０１０／０６６３５１
【国際公開番号】ＷＯ２０１１／０５１３８７
【国際公開日】平成２３年５月５日（２０１１．５．５）
【出願人】（３９６０１９３８７）ジーイー・ヘルスケア・アクスイェ・セルスカプ (82)
【Ｆターム（参考）】
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