免疫応答調節組成物及び該組成物を有効成分とする食品
【課題】食物アレルギー等の各種免疫疾患の治療・予防に有用な免疫応答調節組成物や免疫応答調節用食品を提供すること。
【解決手段】卵白オボムコイド等の免疫調節機能を有するタンパク質、免疫調節機能を有するその分解物及び免疫調節機能を有するそれらの化学修飾体からなる群から選ばれる少なくとも１種の物質と、Ｔｈ１タイプサイトカイン（ＩＬ−１２やＩＦＮ−γ等）及びＴｈ２タイプサイトカイン（ＩＬ−６やＩＬ−１０等）を誘導し、かつ、前記化学物質と協働して免疫調節機能を向上させることができるラクトバチルス属、ビフィドバクテリウム属、エンテロコッカス属に属する微生物群より選ばれる乳酸菌とを含有する免疫応答調節組成物や、該免疫応答調節組成物を有効成分とする食品を調製する。
【解決手段】卵白オボムコイド等の免疫調節機能を有するタンパク質、免疫調節機能を有するその分解物及び免疫調節機能を有するそれらの化学修飾体からなる群から選ばれる少なくとも１種の物質と、Ｔｈ１タイプサイトカイン（ＩＬ−１２やＩＦＮ−γ等）及びＴｈ２タイプサイトカイン（ＩＬ−６やＩＬ−１０等）を誘導し、かつ、前記化学物質と協働して免疫調節機能を向上させることができるラクトバチルス属、ビフィドバクテリウム属、エンテロコッカス属に属する微生物群より選ばれる乳酸菌とを含有する免疫応答調節組成物や、該免疫応答調節組成物を有効成分とする食品を調製する。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、免疫応答調節組成物及び該免疫応答調節組成物を有効成分として含有する食品に関し、詳しくは卵白オボムコイド等の免疫調節機能を有するタンパク質と、Ｔｈ１タイプサイトカイン及び／又はＴｈ２タイプサイトカインを誘導することができる免疫調節機能を有する乳酸菌との組み合わせによる非特異的な免疫応答調節機能の相互効果を利用した免疫応答調節組成物、並びに該免疫応答調節組成物を有効成分として含有する食品等に関する。
【背景技術】
【０００２】
生体の免疫反応において、種々の免疫担当細胞から産生されるサイトカインは免疫応答の方向性を制御している。この免疫応答制御において中心的な役割を担っているのが、ヘルパーＴ細胞（Ｔｈ）であり、産生するサイトカインのパターンによって、Ｔｈ１とＴｈ２のサブセットに分類されている。Ｔｈ１タイプ細胞は、主にインターロイキン２（ＩＬ−２）、インターロイキン１２（ＩＬ−１２）、インターフェロンγ（ＩＦＮ−γ）、腫瘍壊死因子（ＴＮＦ−α）等を産生し、マクロファージやナチュラルキラー細胞を活性化することで、主にウイルス、バクテリア等に対する感染防御などの細胞性免疫に関与することが知られている。他方、Ｔｈ２タイプ細胞は、主にインターロイキン４（ＩＬ−４）、インターロイキン５（ＩＬ−５）、インターロイキン６（ＩＬ−６）、インターロイキン１０（ＩＬ−１０）、インターロイキン１３（ＩＬ−１３）等を産生し、寄生虫に対する感染防御やＢ細胞からのＩｇＥ等の抗体産生などの体液性免疫に関与することが知られている。特に、Ｔｈ２細胞はアレルギー反応に関与するＩｇＥ抗体の産生を誘導するサイトカインを産生し、またアレルギーではＴｈ１とＴｈ２のバランスが崩れ、Ｔｈ２優位の状態にあるとされている。
【０００３】
Ｔｈ１タイプのサイトカインであるＩＬ−１２はＴｈ２細胞の分化を抑え、またＩＦＮ−γはＴｈ２細胞の活性化を抑制することによりアレルギー反応を抑制する。Ｔｈ１タイプの免疫応答は、その異常亢進に起因して、細胞性免疫反応を誘導、活性化し、慢性関節リウマチ、Ｉ型糖尿病、橋本甲状腺炎、重症筋無力症、多発性硬化症等の臓器特異的自己免疫疾患の誘発、増悪に深く関与している。また、臓器移植に伴う拒絶反応は、やはりＴｈ１タイプの細胞性免疫反応が深く関わっている。これらの自己免疫疾患や移植後の拒絶反応を予防又は治療するためにはＴｈ１タイプの免疫応答を制御することが重要であると考えられている。他方、Ｔｈ２タイプのサイトカインであるＩＬ−４はＢ細胞に対してＩｇＥ抗体の産生を誘導するとともに、肥満細胞の活性化及び増殖を誘導する作用を有している。このように、Ｔｈ２タイプの免疫応答は、その異常亢進に起因して、即時型アレルギー反応、遅延型アレルギー反応などアレルギー性炎症反応を誘導・活性化し、蕁麻疹、食物アレルギー、アナフィラキシーショック、好酸球増加症候群、喘息、アレルギー性鼻炎、アレルギー性結膜炎、アトピー性皮膚炎等種々のアレルギー性疾患の誘発、増悪に深く関与している。また、全身性エリテマトーデス等の抗体産生或いは液性免疫が異常に亢進した病態にある全身性自己免疫疾患もやはりＴｈ２タイプの免疫応答の異常亢進が深く関わっている。これらのアレルギー性疾患を予防又は治療するためにはＴｈ２タイプの免疫応答を制御することが重要であると考えられている。
【０００４】
ところで、乳酸菌の中には免疫系のバランスを調節し抗アレルギー作用を有するものがあることが知られている。例えば、乳酸菌の免疫調節機能に関して、乳製品製造に適した乳酸菌である、ラクトバチルス属菌中ラクトバチルス アシドフィルスＴＭＣ０３５６菌株（ＦＥＲＭ Ｐ−１９２３２）の生菌、死菌又は菌体処理物の何れかを有効成分とする、腸内生残性に優れ、腸管上皮に炎症反応を起こすことなく、マクロファージ細胞から炎症性及び抗炎症性サイトカインをバランスよく誘導し、生体でのＩｇＥ抗体産生を抑制する抗アレルギー作用を有する免疫機能調節剤が知られている（例えば、特許文献１参照）。
【０００５】
一方、卵白タンパク質には他のタンパク質に対する抗体応答抑制作用があり、中でもオボムコイドは食物アレルゲンの他にもダニ等の抗原に対する抗体応答抑制作用を有することが、本発明者らによって明らかにされている（例えば、特許文献２参照）。また、本発明者らは、乳酸菌及びオボムコイドの相互効果に関して検討し、インビボでの結果は用いた乳酸菌及びオボムコイドの相互効果が認められなかったことを報告している（例えば、非特許文献１参照）。
【０００６】
その他、 その表面にサイトカイン誘導物質（リステリア溶血素、サルモネラの鞭毛タンパク質フラジェリン）を融合タンパク質（シグナル配列とサイトカイン誘導物質遺伝子と膜アンカー配列とを順次結合したＤＮＡの発現産物）として発現させたラクトバチルス・カゼイ等の乳酸菌の菌体を経口用サイトカイン誘導剤として用い、生体にＩＦＮ−γ、ＩＬ−８等のサイトカインの産生を促進することができ、感染症、自己免疫疾患、炎症、腫瘍などの各種疾患の治療に有用な経口用サイトカイン誘導剤が提案されている（例えば、特許文献３参照）。
【０００７】
【特許文献１】特開２００４−２７７３８１号公報
【特許文献２】特開２００３−２６１４５２号公報
【特許文献３】特開２００３−６３９９１号公報
【非特許文献１】日本農芸化学会 大会講演要旨集 （2005）,p280,30E149α
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００８】
幼小児で多く発症する食物アレルギーにおけるアレルゲン除去や対症療法は、幼小児の発育、成長に支障をきたすばかりでなく、精神的な苦痛及び経済的負担を伴う。また、幼小児の成長に伴って食物アレルギーがダニアレルギーや喘息等のアレルギー性疾患の引き金になるとも言われており、アレルギーになりにくい体質への改善が望まれている。本発明の課題は、食物アレルギー等の各種免疫疾患の治療・予防に有用な免疫応答調節組成物や、該免疫応答調節組成物を食品に添加した免疫応答調節用の食品を提供することにある。
【課題を解決するための手段】
【０００９】
本発明者らは、前述のように、乳酸菌及びオボムコイドの相互効果に関して検討し、インビボにおける乳酸菌及びオボムコイドの相互効果が認められなかったことを報告しているが、乳酸菌及びオボムコイドの相互効果に関して、さらに乳酸菌の種類や、オボムコイドの分解物及び修飾物などの組み合わせの検討を進めるために、先ずラクトバチルス菌、ビフィドバクテリウム菌、エンテロコッカス菌に関してサイトカイン産生また抗体産生を評価し、抗アレルギー作用を有する菌株をいくつか見い出した。これら抗アレルギー作用を有する乳酸菌と、オボムコイド等の免疫調節機能を有するタンパク質との組み合わせにより、相乗的な免疫調節機能を有する免疫応答調節組成物が得られるとの知見を得た。本発明はかかる知見に依拠するものである。
【００１０】
すなわち本発明は、（１）免疫調節機能を有する、タンパク質、その分解物及びそれらの化学修飾体からなる群から選ばれる少なくとも１種の物質と、Ｔｈ１タイプサイトカイン及び／又はＴｈ２タイプサイトカインを誘導し、かつ、前記化学物質と協働して免疫調節機能を向上させることができる乳酸菌とを含有する免疫応答調節組成物や、（２）免疫調節機能を有するタンパク質が、卵白オボムコイドであることを特徴とする上記（１）記載の免疫応答調節組成物や、（３）乳酸菌が、Ｔｈ１タイプサイトカインであるＩＬ−１２及びＩＦＮ−γ、並びにＴｈ２タイプサイトカインであるＩＬ−１０を誘導する乳酸菌であることを特徴とする免疫応答調節組成物に関する。
【００１１】
また本発明は、（４）Ｔｈ１タイプサイトカインであるＩＬ−１２及びＩＦＮ−γ、並びにＴｈ２タイプサイトカインであるＩＬ−１０を誘導する乳酸菌が、Lactobacillus salivarius ssp. Salicinius(ＪＣＭ１０４２)、Enterococcus faecium（ＦＥＲＭ Ｐ−２０６３７）又はEnterococcus faecium(ＪＣＭ５８０４Ｔ)であることを特徴とする上記（３）記載の免疫応答調節組成物や、（５）上記（１）〜（４）のいずれか記載の免疫応答調節組成物を有効成分として含有する食品や、（６）Lactobacillus salivarius ssp. Salicinius(ＪＣＭ１０４２)、Enterococcus faecium（ＦＥＲＭ Ｐ−２０６３７）又はEnterococcus faecium(ＪＣＭ５８０４Ｔ) を含有する免疫応答調節剤や、（７）Lactobacillus salivarius ssp. Salicinius(ＪＣＭ１０４２)、Enterococcus faecium（ＦＥＲＭ Ｐ−２０６３７）又はEnterococcus faecium(ＪＣＭ５８０４Ｔ) を添加した食品に関する。
【発明の効果】
【００１２】
本発明によると、Ｔｈ１タイプサイトカイン及び／又はＴｈ２タイプサイトカインを誘導することができる免疫調節機能を有する乳酸菌を含有する免疫応答調節剤や、該免疫応答調節剤を有効成分とする非特異的な免疫応答調節機能を有する食品を得ることができる。また、卵白オボムコイド等の免疫調節機能を有するタンパク質と、Ｔｈ１タイプサイトカイン及び／又はＴｈ２タイプサイトカインを誘導することができる免疫調節機能を有する乳酸菌との組み合わせにより、非特異的な免疫応答調節機能を有する免疫応答調節組成物や、該免疫応答調節組成物を有効成分として含有する非特異的な免疫応答調節機能を有する食品を得ることができる。
【発明を実施するための最良の形態】
【００１３】
本発明の免疫応答調節組成物としては、免疫調節機能を有するタンパク質、免疫調節機能を有するその分解物、及び免疫調節機能を有するそれらの化学修飾体からなる群から選ばれる少なくとも１種の物質（以下、これらを総称して「免疫調節機能を有する本件タンパク質等」ということがある）と、Ｔｈ１タイプサイトカイン及び／又はＴｈ２タイプサイトカインを誘導し、かつ、前記化学物質と協働して免疫調節機能を向上させることができる乳酸菌とを含有するものであれば特に制限されず、上記「免疫応答調節組成物」には、免疫応答抑制組成物、免疫応答賦活組成物等が含まれ、また「免疫調節機能」には、免疫応答抑制機能、免疫応答賦活機能等が含まれる。
【００１４】
上記免疫調節機能を有するタンパク質としては、免疫応答抑制機能、免疫応答賦活機能等を有するタンパク質であれば特に制限されないが、免疫応答抑制機能を有するタンパク質としては、卵類、牛乳類、肉類、魚類、甲殻類及び軟体動物類、穀類、豆類及びナッツ類、果実類、野菜類、ビール酵母若しくはゼラチンなどアレルギーを引き起こす食品に含まれるアレルゲン、特に乳アレルゲンの主要成分としてのαｓ１カゼインや、β−ラクトグロブリンや、卵白アレルゲン成分としてはオボアルブミンとオボムコイドや、小麦アレルゲンの主要成分としてグリアジンや、そばの主要タンパク質である分子量２４ｋＤａと７６ｋＤａのタンパク質や、落花生の主要タンパク質であるＡｒａ ｈ１、中でも卵白オボムコイドを好適に例示することができる。また、免疫応答賦活機能等を有するタンパク質としては、ラクトフェリン、インターフェロン誘導シグナル伝達活性を有するタンパク質（特開２００４−１７３６７９）、膜局在型プロテインチロシンキナーゼ（特開平１０−３１３８６８）、ホエーのプロテアーゼ処理物等を挙げることができる。
【００１５】
上記免疫調節機能を有するその分解物としては、トリプシン、Ｖ８プロテアーゼ等プロテアーゼによる分解物を例示することができ、また免疫調節機能を有するそれらの化学修飾体としては、グルコシル化及びリン酸化などの酵素による修飾物、アセチル化、エステル化、アミド化などの化学修飾物、加熱、酸化、酸加水分解、アルカリ処理、脱糖などの処理物を挙げることができる。
【００１６】
上記Ｔｈ１タイプサイトカイン及び／又はＴｈ２タイプサイトカインを誘導しうる乳酸菌としては、生菌や死菌（断片も含む）の状態で、Ｔｈ１タイプサイトカイン及びＴｈ２タイプサイトカインを誘導しうる乳酸菌や、Ｔｈ１タイプサイトカインを誘導しうる乳酸菌が好ましく、Ｔｈ１タイプサイトカイン及びＴｈ２タイプサイトカインを誘導しうる乳酸菌がより好ましい。ここで、Ｔｈ１タイプサイトカインとしては、ＩＬ−２、ＩＬ−１２、ＩＦＮ−γ、ＴＮＦ−α等を挙げることができるが、中でも、ＩＬ−１２やＩＦＮ−γを好適に例示することができ、またＴｈ２タイプサイトカインとしては、ＩＬ−４、ＩＬ−５、ＩＬ−６、ＩＬ−１０、ＩＬ−１３等を挙げることができるが、中でも、ＩＬ−６やＩＬ−１０を好適に例示することができる。例えば、Ｔｈ１タイプサイトカイン及び／又はＴｈ２タイプサイトカインを誘導しうる乳酸菌の選択基準としては、マクロファージ系細胞株Ｊ７７４．１細胞を用いた評価において、ＬＰＳ １μｇ／ｍｌでの刺激による場合と同等のＩＬ−１２ｐ４０あるいはＩＬ−６産生量を示す乳酸菌を選択するのが好ましい。また、マウス脾臓細胞を用いた評価において、５００ｐｇ／ｍｌ以上好ましくは２０００ｐｇ／ｍｌ以上のＩＬ−１２ｐ７０産生量、あるいは１０ｎｇ／ｍｌ以上好ましくは３０ｎｇ／ｍｌ以上のＩＦＮ−γ産生量を示す乳酸菌を選択するのが好ましい。このような免疫調節機能を有する乳酸菌は、ラクトバチラス属、ビフィドバクテリウム属、エンテロコッカス属、ラクトコッカス属、ストレプトコッカス属、などの乳酸菌群からも選ぶことができ、特に好適に、Lactobacillus salivarius ssp. Salicinius(ＪＣＭ１０４２)、Enterococcus faecium（ＦＥＲＭ Ｐ−２０６３７）又はEnterococcus faecium(ＪＣＭ５８０４Ｔ)を具体的に例示することができる。
【００１７】
また、前記免疫調節機能を有する本件タンパク質等と協働して免疫調節機能を向上させることができる乳酸菌は、例えば、供試乳酸菌と、オボムコイド等の免疫調節機能を有する本件タンパク質等とをマウスに連続的に経口投与し、アレルゲン等の抗原で免疫した後、血清中の抗原特異的ＩｇＥ抗体、ＩｇＧ抗体、ＩｇＧ１抗体及びＩｇＧ２ａ抗体をＥＬＩＳＡにより測定し、これら抗体の内１以上の抗体産生を、供試乳酸菌単独及び本件タンパク質等単独の場合よりも有意に抑制する乳酸菌を選択することにより得ることができる。
【００１８】
本発明の免疫応答調節組成物は、そのまま用いて免疫応答抑制剤や免疫応答賦活剤等の免疫応答調節剤として、あるいは食品に添加して免疫応答抑制用や免疫応答賦活剤用の免疫応答調節用食品として、主に経口摂取される。免疫応答調節剤としての摂取形態、例えば粉末、顆粒、錠剤、カプセル剤、シロップ剤、懸濁液等の剤型は特に制限されず、また、摂取量等も年齢や症状、疾患の程度により適宜決定することができる。さらに、免疫応答抑制組成物は食経験がある食品素材を利用することから、免疫応答抑制組成物中に含まれる食物アレルゲンに対するアレルギーを有する人を除いて、生体に悪影響を与えないという利点を有する。この場合の投与量については、基本的にはアレルゲンタンパク質に対する免疫応答を抑制することができる量であればよく、例えば、１日あたり、５〜５００ｍｇ／ｋｇ体重の投与が適当である。また、経口投与する場合、薬学的に許容される通常の担体、結合剤、安定化剤、賦形剤、希釈剤、ｐＨ緩衝剤、崩壊剤、可溶化剤、溶解補助剤、等張剤などの各種調剤用配合成分を添加することができる。
【００１９】
上記のように、本発明の免疫応答調節組成物、好ましくは本発明の免疫応答抑制組成物は、食品に配合しても使用されるが、かかる本発明の免疫応答調節組成物を有効成分として含有する食品としては、例えば、上記免疫応答抑制剤を添加した食品を例示することができ、ここで、食品としてはヨーグルト、ドリンクヨーグルト、ジュース、牛乳、豆乳、酒類、コーヒー、紅茶、煎茶、ウーロン茶、スポーツ飲料等の各種飲料や、プリン、クッキー、パン、ケーキ、ゼリー、煎餅などの焼き菓子、羊羹などの和菓子、冷菓、チューインガム等のパン・菓子類や、うどん、そば等の麺類や、かまぼこ、ハム、魚肉ソーセージ等の魚肉練り製品や、みそ、しょう油、ドレッシング、マヨネーズ、甘味料等の調味類や、チーズ、バター等の乳製品や、豆腐、こんにゃく、その他佃煮、餃子、コロッケ、サラダ等の各種総菜などを挙げることができる。食品中の免疫応答抑制組成物の含量については、上記と同様に、例えばアレルゲンタンパク質に対する免疫応答を抑制することができる量であればよい。
【００２０】
次に本発明は、Lactobacillus salivarius ssp. Salicinius(ＪＣＭ１０４２)、Enterococcus faecium（ＦＥＲＭ Ｐ−２０６３７）又はEnterococcus faecium(ＪＣＭ５８０４Ｔ) を含有する免疫応答調節剤や、Lactobacillus salivarius ssp. Salicinius(ＪＣＭ１０４２)、Enterococcus faecium（ＦＥＲＭ Ｐ−２０６３７）又はEnterococcus faecium(ＪＣＭ５８０４Ｔ) を添加した食品にも関し、これらの内、Lactobacillus salivarius ssp. Salicinius(ＪＣＭ１０４２)及びEnterococcus faecium(ＪＣＭ５８０４Ｔ)は独立行政法人理化学研究所バイオリソースセンター（ＪＣＭ）から入手することができる。また、Enterococcus faecium（ＦＥＲＭ Ｐ−２０６３７）は、平成１７年（西暦２００５年）８月２４日（受領日）付で独立行政法人産業技術総合研究所 特許生物寄託センター（〒３０５−５４６６ 日本国茨城県つくば市東１丁目１番地１ 中央第６）に受託されている。
【００２１】
以下、実施例により本発明をより具体的に説明するが、本発明の技術的範囲はこれらの例示に限定されるものではない。
【実施例１】
【００２２】
［Ｊ７７４．１細胞を用いた評価］
（１）乳酸菌の培養
ラクトバチルス属（Lactobacillus）乳酸菌であるL.gasseri１９菌株（Ｌ１〜Ｌ１９）、L.acidophilus１５株（Ｌ２０〜Ｌ３４）、L.johnsonii５菌株（Ｌ３５〜Ｌ３９）、L.salivarius ssp. Salicinius１０菌株（Ｌ４０〜Ｌ４９）、L.reuteri１菌株（Ｌ５０）、L.casei ssp. alactosus１菌株（Ｌ５１）、L. rhamnosus１菌株（Ｌ５２）、L.amylovorus４菌株（Ｌ５３〜Ｌ５６）、L. crispatus２菌株（Ｌ５７〜Ｌ５８）の計５８菌株（Ｌ１〜Ｌ５８）を供試した。これらの乳酸菌は、ＡＰＴ−ｂｒｏｔｈ培地（Difco Laboratories）で３７℃・４０時間培養を行った。
【００２３】
（２）Ｊ７７４．１細胞の培養
マウスのmonocyte-macrophage cell line Ｊ７７４．１はＡＴＣＣより購入した。ＦＣＳを１０％加えたＲＰＭＩ１６４０培地（Sigma）を用い、３７℃・５％ＣＯ２条件下でＪ７７４．１細胞の培養を行った。細胞の継代は３日おきに、また、培地交換は継代して４８時間後に行った。
【００２４】
（３）サイトカインの測定
Ｊ７７４．１細胞を５×１０5個／ｍｌに調製し、４８ウェル培養プレートに０．５ｍｌ／ウェルずつ播種した。１時間プレインキュベートした後、乳酸菌（湿重量１、１０ｍｇ／ｍｌ）を５０μｌ／ウェル添加した。乳酸菌は生理食塩水で調製し、死菌は１００℃・５０分加熱したものを用いた。２４時間培養後、上清を回収した。そして、サイトカインＩＬ−１２ｐ４０及びＩＬ−６の測定は、Ｍｏｕｓｅ ＢＤ Ｏｐｔ ＥＩＡ ＥＬＩＳＡ ｓｅｔ（BD Pharmingen）を用いて行った。
【００２５】
（４）結果
各乳酸菌によるＩＬ−１２ｐ４０の産生量を図１（生菌）及び図３（死菌）に、ＩＬ−６の産生量を図２（生菌）及び図４（死菌）に示す。生菌では、ＩＬ−１２ｐ４０誘導能の高い菌が６菌株、ＩＬ−６誘導能の高い菌が１３菌株認められた。一方、死菌では、ＩＬ−１２ｐ４０誘導能の高い菌が３菌株、ＩＬ−６誘導能の高い菌が２１菌株認められた。
【００２６】
（５）考察
Ｊ７７４．１細胞においてサイトカイン産生に影響を与え、ＩＬ−１２ｐ４０又はＩＬ−６を誘導している菌株は、生体におけるサイトカイン産生に対しても影響を与える可能性が高いと考えられる。そこで、ＩＬ−１２ｐ４０及びＩＬ−６誘導能の高い菌、ＩＬ−１２ｐ４０又はＩＬ−６誘導能のどちらかが高い菌など特徴的なサイトカイン誘導能を示した乳酸菌、また菌種を考慮して選択した乳酸菌の８菌株（Ｌ２、Ｌ１６、Ｌ３２、Ｌ３４、Ｌ３９、Ｌ４１、Ｌ５２、Ｌ５６）に関して、マウス脾臓細胞を用いた評価を行うこととした。なお、Ｌ２はL. gasseri（ＪＣＭ１０１７）、Ｌ１６はL. gasseriの一菌株、Ｌ３２はL. acidophilusの一菌株、Ｌ３４はL. acidophilusの一菌株、Ｌ３９はL. johnsoniiの一菌株、Ｌ４１はL. salivarius ssp. salicinius（ＪＣＭ１０４２）、Ｌ５２はL. rhamnosus（ＪＣＭ１１３６Ｔ）、Ｌ５６はL. amylovorusの一菌株を示す。
【実施例２】
【００２７】
［マウス脾臓細胞を用いた評価］
（１）乳酸菌の培養
Ｊ７７４．１細胞を用いた評価で選択した乳酸菌８菌株（Ｌ２、Ｌ１６、Ｌ３２、Ｌ３４、Ｌ３９、Ｌ４１、Ｌ５２、Ｌ５６）について、評価を行った。これらの乳酸菌は、ＡＰＴ−ｂｒｏｔｈ培地（Difco Laboratories）で３７℃・１８時間培養を行った。
【００２８】
（２）脾臓細胞の調製
マウスから採取した脾臓をセルストレイナー（Falcon2350）で濾過した後、ＲＰＭＩ１６４０培地（Sigma）１０ｍｌで懸濁し、遠心した（１９０×ｇ・１０分）。沈殿した細胞に溶血バッファー（０．１５Ｍ ＮＨ４Ｃｌ、１０ｍＭ ＫＨＣＯ３、０．１ｍＭ Ｎａ２ＥＤＴＡ：ｐＨ７．２）を２ｍｌ添加し、５分静置した。ＲＰＭＩ培地を１０ｍｌ添加し、２回洗浄を行った後、ＦＣＳを１０％加えたＲＰＭＩ培地を用いて６×１０6個／ｍｌに調製した。
【００２９】
（３）サイトカインの測定
脾臓細胞を４８ウェル培養プレートに０．５ｍｌ／ウェルずつ播種した。１時間プレインキュベートした後、乳酸菌（湿重量５、５０、５００μｇ／ｍｌ）を５０μｌ／ウェル添加した。乳酸菌は生理食塩水で調製し、死菌は１００℃・５０分加熱したものを用いた。２４時間及び７２時間培養後、上清を回収した。そして、サイトカインＩＬ−１２ｐ７０、ＩＦＮ−γ及びＩＬ−１０の測定は、Ｍｏｕｓｅ ＢＤ Ｏｐｔ ＥＩＡ ＥＬＩＳＡ ｓｅｔ（BD Pharmingen）を用いて行った。
【００３０】
（４）結果
各乳酸菌によるＩＬ−１２ｐ７０の産生量を図５、ＩＦＮ−γの産生量を図６、ＩＬ−１０の産生量を図７に示す。Ｌ１６及びＬ４１は、生菌、死菌ともに、ＩＬ−１２ｐ７０、ＩＦＮ−γ及びＩＬ−１０を強く誘導し、Ｔｈ１タイプサイトカイン誘導能が高いことが示唆された。また、他の菌株では、Ｌ３４は生菌でＩＦＮ−γを、Ｌ５２は生菌及び死菌でＩＬ−１２ｐ７０を強く誘導していた。
【００３１】
（５）考察
マウス脾臓細胞においてＴｈ１タイプサイトカイン産生に影響を与え、ＩＬ−１２ｐ７０及びＩＦＮ−γを誘導している菌株は、生体においてもＴｈ１タイプサイトカインを誘導する可能性が高いと考えられる。そこで、生菌、死菌ともにＴｈ１タイプサイトカイン誘導能が高かったＬ４１に関して、マウスへの投与試験を行うこととした。
【実施例３】
【００３２】
［マウスへの投与試験による評価］
（１）乳酸菌の培養
脾臓細胞を用いた評価でＴｈ１タイプサイトカイン誘導能の高かった乳酸菌Ｌ４１について、評価を行った。Ｌ４１は、ＡＰＴ−ｂｒｏｔｈ培地（Difco Laboratories）で３７℃・１８時間培養を行った。
【００３３】
（２）マウスへの投与及び免疫
投与試験は、１試験区あたりマウス１０匹を用いた。経口投与は生理食塩水又は乳酸菌（湿重量１０ｍｇ／ｍｌ）を１匹あたり２００μｌずつ７日連続で行った。乳酸菌は生理食塩水で調製し、死菌は１００℃・５０分加熱したものを用いた。また、免疫は１週目及び３週目に、生理食塩水で１ｍｇ／ｍｌに調製したオボアルブミン（ＯＶＡ）とＡｌｕｍ（４０〜５０ｍｇ／ｍｌ 水酸化アルミニウムゲル）を等量混合した溶液を１匹あたり１００μｌ腹腔内に注射した。
【００３４】
（３）抗体の測定
４週目に採血を行い、血清中のＯＶＡ特異的ＩｇＥ抗体、ＩｇＧ抗体、ＩｇＧ１抗体及びＩｇＧ２ａ抗体をＥＬＩＳＡにより測定した。
【００３５】
（４）結果
ＯＶＡ特異的ＩｇＥ抗体量を図８、ＩｇＧ抗体量、ＩｇＧ１抗体量及びＩｇＧ２ａ抗体量を図９に示す。Ｌ４１の生菌及び死菌は、ＯＶＡ特異的ＩｇＥ抗体量を有意に抑制していた（＜０．０５）。一方、ＯＶＡ特異的ＩｇＧ抗体の産生に対する影響はなかったが、ＩｇＧ１抗体の産生を抑制、ＩｇＧ２ａ抗体の産生を誘導する傾向が認められた。
【００３６】
（５）考察
マウスへの投与試験では、Ｌ４１は、ＩｇＥ抗体の産生を抑制したが、ＩｇＧ抗体など他の抗体の産生は抑制しなかった。また、Ｌ４１は、ＩｇＧ１抗体の産生を抑制し、ＩｇＧ２ａ抗体の産生を誘導する傾向が認められたことから、ＩｇＧ１抗体及びＩｇＧ２ａ抗体産生に関与するＴｈ２タイプサイトカイン（ＩＬ−４）が抑制され、Ｔｈ１タイプサイトカイン（ＩＦＮ-γ）が誘導されていると考えられた。したがって、Ｌ４１は、他の抗体反応に大きな影響を与えることなくＩｇＥ抗体が関与するアレルギー作用を抑制し、またＴｈ１細胞の分化を誘導して免疫バランスを調節する可能性があると考えられた。
【実施例４】
【００３７】
［マウス脾臓細胞を用いた評価］
（１）乳酸菌の培養
ビフィドバクテリウム属（Bifidobacterium）乳酸菌であるB.bifidum３菌株（Ｂ１〜Ｂ３）、B.breve３菌株（Ｂ４〜Ｂ６）、B. adolescentis４菌株（Ｂ７〜Ｂ１０）、B.thermophilum２菌株（Ｂ１１〜Ｂ１２）、B.infantis２菌株（Ｂ１３〜Ｂ１４）、B.longum４菌株（Ｂ１５〜Ｂ１８）、B.pseudocatenulatum１菌株（Ｂ１９）、B.pseudolongum２菌株（Ｂ２０〜Ｂ２１）、B.suis１菌株（Ｂ２２）、B.catenulatum１菌株（Ｂ２３）、B.angulatum１菌株（Ｂ２４）、B.gallicum１菌株（Ｂ２５）の計２５菌株（Ｂ１〜Ｂ２５）を供試した。これらの乳酸菌は、ＭＲＳ−ｂｒｏｔｈ培地（Difco Laboratories）で３５℃・４０時間培養を行った。
【００３８】
（２）脾臓細胞の調製
マウスから採取した脾臓をセルストレイナー（Falcon2350）で濾過した後、ＲＰＭＩ１６４０培地（Sigma）１０ｍｌで懸濁し、遠心した（１９０×ｇ・１０分）。沈殿した細胞に溶血バッファー（０．１５Ｍ ＮＨ４Ｃｌ、１０ｍＭ ＫＨＣＯ３、０．１ｍＭ Ｎａ２ＥＤＴＡ：ｐＨ７．２）を２ｍｌ添加し、５分静置した。ＲＰＭＩ培地を１０ｍｌ添加し、２回洗浄を行った後、ＦＣＳを１０％加えたＲＰＭＩ培地を用いて６×１０6個／ｍｌに調製した。
【００３９】
（３）サイトカインの測定
脾臓細胞を４８ウェル培養プレートに０．５ｍｌ／ウェルずつ播種した。１時間プレインキュベートした後、乳酸菌（湿重量５、５０、５００μｇ／ｍｌ）を５０μｌ／ウェル添加した。乳酸菌は生理食塩水で調製し、死菌は１００℃・５０分加熱したものを用いた。２４時間及び７２時間培養後、上清を回収した。そして、サイトカインＩＬ−１２ｐ７０、ＩＦＮ-γ及びＩＬ−１０の測定は、Ｍｏｕｓｅ ＢＤ Ｏｐｔ ＥＩＡ ＥＬＩＳＡ ｓｅｔ（BD Pharmingen）を用いて行った。
【００４０】
（４）結果
各乳酸菌によるＩＬ−１２ｐ７０の産生量を図１０、ＩＦＮ-γの産生量を図１１、ＩＬ−１０の産生量を図１２に示す。Ｂ１６の生菌はＩＦＮ-γを、死菌はＩＬ−１２ｐ７０を強く誘導していた。また、Ｂ２０の死菌はＩＬ−１２ｐ７０を、Ｂ２２の生菌はＩＦＮ-γ及びＩＬ−１０を、Ｂ２４の生菌はＩＦＮ-γを誘導していた。なお、Ｂ１６はB.longumの一菌株、Ｂ２０はB. pseudolongumの一菌株、Ｂ２２はB. suisの一菌株、Ｂ２４はB. angulatum（ＪＣＭ７０９６Ｔ）を示す。
【００４１】
（５）考察
マウス脾臓細胞においてＴｈ１タイプサイトカイン産生に影響を与え、ＩＬ−１２ｐ７０及びＩＦＮ−γを誘導している菌株は、生体においてもＴｈ１タイプサイトカインを誘導する可能性が高いと考えられる。したがって、Ｂ１６の生菌及び死菌、Ｂ２０の死菌などは、Ｔｈ１細胞の分化を誘導して免疫バランスを調節する可能性があると考えられた。
【実施例５】
【００４２】
［マウス脾臓細胞を用いた評価］
（１）乳酸菌の培養
エンテロコッカス属（Enterococcus）乳酸菌であるE.faecalis８菌株（Ｅ１〜Ｅ５及びＥ１３〜Ｅ１５）、E.faecium８菌株（Ｅ６〜Ｅ１２及びＥ１６）の計１６菌株を供試した。これらの乳酸菌は、ＳＣＤ−ｂｒｏｔｈ培地（Difco Laboratories）で３５℃・１８時間培養を行った。
【００４３】
（２）脾臓細胞の調製
マウスから採取した脾臓をセルストレイナー（Falcon2350）で濾過した後、ＲＰＭＩ１６４０培地（Sigma）１０ｍｌで懸濁し、遠心した（１９０×ｇ・１０分）。沈殿した細胞に溶血バッファー（０．１５Ｍ ＮＨ４Ｃｌ、１０ｍＭ ＫＨＣＯ３、０．１ｍＭ Ｎａ２ＥＤＴＡ：ｐＨ７．２）を２ｍｌ添加し、５分静置した。ＲＰＭＩ培地を１０ｍｌ添加し、２回洗浄を行った後、ＦＣＳを１０％加えたＲＰＭＩ培地を用いて６×１０6個／ｍｌに調製した。
【００４４】
（３）サイトカインの測定
脾臓細胞を４８ウェル培養プレートに０．５ｍｌ／ウェルずつ播種した。１時間プレインキュベートした後、乳酸菌（湿重量５、５０、５００μｇ／ｍｌ）を５０μｌ／ウェル添加した。乳酸菌は生理食塩水で調製し、１００℃・５０分加熱したものを用いた。２４時間及び７２時間培養後、上清を回収した。そして、サイトカインＩＬ−１２ｐ７０、ＩＦＮ-γ及びＩＬ−１０の測定は、Ｍｏｕｓｅ ＢＤ Ｏｐｔ ＥＩＡ ＥＬＩＳＡ ｓｅｔ（BD Pharmingen）を用いて行った。
【００４５】
（４）結果
各乳酸菌によるＩＬ−１２ｐ７０の産生量を図１３、ＩＦＮ-γの産生量を図１４、ＩＬ−１０の産生量を図１５に示す。Ｅ１２は、ＩＬ−１２ｐ７０、ＩＦＮ-γ及びＩＬ−１０を強く誘導し、Ｔｈ１タイプサイトカイン誘導能が高いことが示唆された。また、Ｅ１０はＩＬ−１２ｐ７０、ＩＦＮ-γを、Ｅ１４及びＥ１６はＩＦＮ−γを誘導していた。なお、Ｅ１０はE. faeciumの一菌株、Ｅ１２はE. faecium（ＦＥＲＭ Ｐ−２０６３７）、Ｅ１４はE. faecalis（ＪＣＭ５８０３Ｔ）、Ｅ１６はE. faecium（ＪＣＭ５８０４Ｔ）を示す。
【００４６】
（５）考察
マウス脾臓細胞においてＴｈ１タイプサイトカイン産生に影響を与え、ＩＬ−１２ｐ７０及びＩＦＮ−γを誘導している菌株は、生体においてもＴｈ１タイプサイトカインを誘導する可能性が高いと考えられる。そこで、Ｔｈ１タイプサイトカイン誘導能が高かったＥ１２及びＥ１６に関して、マウスへの投与試験を行うこととした。
【実施例６】
【００４７】
［マウスへの投与試験による評価］
（１）乳酸菌の培養
脾臓細胞を用いた評価でＴｈ１タイプサイトカイン誘導能の高かった乳酸菌Ｅ１２及びＥ１６について、評価を行った。ＳＣＤ−ｂｒｏｔｈ培地（Difco Laboratories）で３５℃・１８時間培養を行った。
【００４８】
（２）マウスへの投与及び免疫
投与試験は、１試験区あたりマウス１０匹を用いた。経口投与は生理食塩水又は乳酸菌（湿重量１０ｍｇ／ｍｌ）を１匹あたり２００μｌずつ７日連続で行った。乳酸菌は生理食塩水で調製し、１００℃・５０分加熱したものを用いた。また、免疫は１週目及び３週目に、生理食塩水で１ｍｇ／ｍｌに調製した ＯＶＡとＡｌｕｍ（４０〜５０ｍｇ／ｍｌ 水酸化アルミニウムゲル）を等量混合した溶液を１匹あたり１００μｌ腹腔内に注射
した。
【００４９】
（３）抗体の測定
４週目に採血を行い、血清中のＯＶＡ特異的ＩｇＥ抗体、ＩｇＧ抗体をＥＬＩＳＡにより測定した。
【００５０】
（４）結果
ＯＶＡ特異的ＩｇＥ抗体量を図１６、ＩｇＧ抗体量を図１７に示す。Ｅ１２及びＥ１６は、ＯＶＡ特異的ＩｇＥ抗体量を有意に抑制していた（＜０．０５）。一方、ＯＶＡ特異的ＩｇＧ抗体の産生に対する影響はなかった。したがって、Ｅ１２及びＥ１６は、他の抗体反応に大きな影響を与えることなくＩｇＥ抗体が関与するアレルギー作用を抑制する可能性があると考えられた。
【００５１】
（５）考察
マウスへの投与試験では、Ｅ１２及びＥ１６は、ＩｇＥ抗体の産生を抑制したが、ＩｇＧ抗体など他の抗体の産生は抑制しなかった。したがって、Ｅ１２及びＥ１６は、他の抗体反応に大きな影響を与えることなくＩｇＥ抗体が関与するアレルギー作用を抑制する可能性があると考えられた。
【実施例７】
【００５２】
［マウスへの投与試験による評価］
Ｅ１２（Enterococcus faecium（ＦＥＲＭ Ｐ−２０６３７））は、ＳＣＤ−ｂｒｏｔｈ培地（Difco Laboratories）で３５℃・１８時間培養を行った。
【００５３】
（２）卵白の調製
鶏卵の卵白を凍結乾燥した。
【００５４】
（３）β−ラクトグロブリン（以下β−ＬＧ）の調製
新鮮な牛乳よりAschaffenburgとDrewryの方法に従い、粗β−ＬＧ画分を得た。この粗画分をさらにＤＥＡＥ ６５０Ｓ（ＴＯＳＯＨ）を用いたイオン交換クロマトグラフィーにより精製した。移動相には５０ｍＭイミダゾール−塩酸緩衝液（ｐＨ６．４）を用い、ＮａＣｌの０から０．５Ｍのリニアグラジェントによりβ−ＬＧを分画し、透析による脱塩後、凍結乾燥を行った。
【００５５】
（４）マウスへの投与及び免疫
投与試験は、１試験区あたりマウス８匹を用いた。経口投与は、下記４試験区（表１）で実施した。
乳酸菌及び卵白は７日間連続で投与した。卵白及び乳酸菌は生理食塩水で調製し、乳酸菌は調製後１００℃・５０分加熱したものを用いた。また、免疫は投与開始から１週目及び３週目に、１匹あたりβ−ＬＧ５０μｇを 水酸化アルミニウムゲル（４０〜５０ｍｇ／ｍｌ）とともに腹腔内に注射した。
【００５６】
【表１】
【００５７】
（５）抗体の測定
４週目に採血を行い、血清中のβ−ＬＧ特異的ＩｇＥ抗体量をＥＬＩＳＡにより測定した。
【００５８】
（６）結果
各投与区のβ−ＬＧ特異的ＩｇＥ抗体量を図１８に示す。ＴＥＳＴ１を対照としたｔ検定により、ＴＥＳＴ２の乾燥卵白のみ、あるいはＴＥＳＴ３のＥ１２のみの投与ではβ−ＬＧ特異的ＩｇＥ抗体産生の低下は認められなかった。しかし、単独では効果の認められなかった乾燥卵白とＥ１２を組み合わせたＴＥＳＴ４では有意にβ−ＬＧ特異的ＩｇＥ抗体の産生の低下が認められた（Ｐ≦０．０５％）。
【００５９】
（７）考察
卵白成分のオボムコイドが乳、ダニ、花粉などに対する過剰な免疫を抑制する作用を有することを本発明者らにより明らかにしているが、今回の試験では、通常の食品である卵白を投与した場合、あるいは卵白に免疫調節機能を有する乳酸菌を加えた場合の免疫応答に対する影響を検討した。その結果、卵白の投与は、乳の主要アレルゲンであるβ−ＬＧに対する特異的ＩｇＥ抗体の産生を抑制する傾向にあるものの有意ではなかった。また、実施例６ではＥ１２の１０ｍｇ／ｍｌ投与によりＯＶＡに対する特異的ＩｇＥ抗体抑制作用を示したが、実施例７では、ＯＶＡと同じ濃度のβ−ＬＧに対し、特異的ＩｇＥ抗体の産生を抑制する傾向にあるものの有意ではなかった。しかし、有意な抑制効果を示さない乾燥卵白とＥ１２を組み合わせることにより相乗的な免疫調節機能を示し、β−ＬＧ特異的ＩｇＥ抗体の産生を抑制すること（ＴＥＳＴ４）が明らかとなった。このことから、免疫調製剤は、単一性分を利用するよりも、複数の有効成分の組み合わせにより、より効果的な商品設計が可能になると考えられた。さらに、乳酸菌の製造コストが最終製品のコストアップにつながるが、乳酸菌を他の食品成分と組み合わせることにより相乗的な効果が得られることが明らかとなり、免疫調製剤のコストダウンにも貢献できるものと考えられた。
【実施例８】
【００６０】
［オボムコイド及び乳酸菌の組み合わせによるマウスの免疫応答に対する効果］
（１）乳酸菌の培養
Ｅ１２（Enterococcus faecium（ＦＥＲＭ Ｐ−２０６３７））は、ＳＣＤ−ｂｒｏｔｈ培地（Difco Laboratories）で３５℃・１８時間培養を行った。
【００６１】
（２）ニワトリオボムコイド（以下「ＯＭ」という）の調製
新鮮卵白よりアセトン沈殿法（Lineweaver & Murry）により粗ＯＭを調製した。さらに０．１Ｍ酢酸緩衝液に対し透析後、８，０００ｒｐｍ×２０分遠心し、上精を回収した。さらに、ＴＳＫ ｇｅｌ ＤＥＡＥ ６５０Ｓ（ＴＯＳＯＨ）を用いたイオン交換クロマトグラフィーにより精製した。移動相には５０ｍＭイミダゾール−塩酸緩衝液（ｐＨ６．４）を用い、ＮａＣｌの０から０．３ＭのリニアグラジェントによりＯＭを分画し、透析による脱塩後、凍結乾燥を行った。
【００６２】
（３）マウスへの投与及び免疫
投与試験は、１試験区あたりマウス８匹を用いた。経口投与は、下記４試験区（表２）で実施した。
乳酸菌及びＯＭは７日間連続で投与した。ＯＭ及び乳酸菌は生理食塩水で調製し、乳酸菌は調製後１００℃・５０分加熱したものを用いた。また、免疫は投与開始から１週目及び３週目に、１匹あたりβ−ＬＧ５０μｇを水酸化アルミニウムゲル（４０〜５０ｍｇ／ｍｌ）とともに腹腔内に注射した。
【００６３】
【表２】
【００６４】
（４）抗体の測定
４週目に採血を行い、血清中の総ＩｇＥ抗体量をＥＬＩＳＡにより測定した。
【００６５】
（５）結果
各投与区の総ＩｇＥ抗体量を図１９に示す。ＴＥＳＴ１を対照としたｔ検定により、ＴＥＳＴ２のＯＭのみ、あるいはＴＥＳＴ３のＥ１２のみの投与では総ＩｇＥ抗体量の低下は認められなかった。しかし、単独では効果の認められなかったＯＭとＥ１２を組み合わせたＴＥＳＴ４では有意に総ＩｇＥ抗体量の低下が認められた（Ｐ≦０．０５％）。
【００６６】
（６）考察
単独で免疫抑制効果を示さない少量のＥ１２と、卵白アレルゲンのＯＭと組み合わせることにより、免疫抑制効果を示すことが明らかとなった。これらの結果は実施例７と同様の傾向を示し、実施例７でβ−ＬＧ特異的ＩｇＥ抗体を抑制していた卵の成分は主にＯＭと考えられ、ＯＭとＥ１２を組み合わせることにより、効果的な免疫調節機能を発現できるものと考えられた。
【図面の簡単な説明】
【００６７】
【図１】Ｊ７７４．１細胞を用いたラクトバチルス属乳酸菌（生菌）によるＩＬ−１２ｐ４０の産生量についての評価結果を示す図である。
【図２】Ｊ７７４．１細胞を用いたラクトバチルス属乳酸菌（生菌）によるＩＬ−６の産生量についての評価結果を示す図である。
【図３】Ｊ７７４．１細胞を用いたラクトバチルス属乳酸菌（死菌）によるＩＬ−１２ｐ４０の産生量についての評価結果を示す図である。
【図４】Ｊ７７４．１細胞を用いたラクトバチルス属乳酸菌（死菌）によるＩＬ−６の産生量を示す図である。
【図５】マウス脾臓細胞を用いたラクトバチルス属乳酸菌によるＩＬ−１２ｐ７０の産生量を示す図である。
【図６】本発明のマウス脾臓細胞を用いたラクトバチルス属乳酸菌によるＩＦＮ−γの産生量についての評価結果を示す図である。
【図７】本発明のマウス脾臓細胞を用いたラクトバチルス属乳酸菌によるＩＬ−１０の産生量についての評価結果を示す図である。
【図８】本発明のラクトバチルス属乳酸菌のマウス投与試験に関する血清中ＯＶＡ特異的ＩｇＥ抗体量についての結果を示す図である。
【図９】本発明のラクトバチルス属乳酸菌のマウス投与試験に関する血清中ＩｇＧ抗体量、ＩｇＧ１抗体量及びＩｇＧ２ａ抗体量についての結果を示す図である。
【図１０】本発明のマウス脾臓細胞を用いたビフィドバクテリウム属乳酸菌によるＩＬ−１２ｐ７０の産生量についての評価結果を示す図である。
【図１１】本発明のマウス脾臓細胞を用いたビフィドバクテリウム属乳酸菌によるＩＦＮ−γの産生量についての評価結果を示す図である。
【図１２】本発明のマウス脾臓細胞を用いたビフィドバクテリウム属乳酸菌によるＩＬ−１０の産生量についての評価結果を示す図である。
【図１３】本発明のマウス脾臓細胞を用いたエンテロコッカス属乳酸菌によるＩＬ−１２ｐ７０の産生量についての評価結果を示す図である。
【図１４】本発明のマウス脾臓細胞を用いたエンテロコッカス属乳酸菌によるＩＦＮ−γの産生量についての評価結果を示す図である。
【図１５】本発明のマウス脾臓細胞を用いたエンテロコッカス属乳酸菌によるＩＬ−１０の産生量についての評価結果を示す図である。
【図１６】本発明のエンテロコッカス属乳酸菌のマウス投与試験に関する血清中ＯＶＡ特異的ＩｇＥ抗体量についての結果を示す図である。
【図１７】本発明のエンテロコッカス属乳酸菌のマウス投与試験に関する血清中ＩｇＧ抗体量についての結果を示す図である。
【図１８】本発明のβ−ＬＧ特異的ＩｇＥ抗体産生に及ぼす卵白あるいは乳酸菌投与の影響を示す図である。
【図１９】本発明の総ＩｇＥ抗体産生に及ぼすＯＭあるいは乳酸菌投与の影響を示す図である。
【技術分野】
【０００１】
本発明は、免疫応答調節組成物及び該免疫応答調節組成物を有効成分として含有する食品に関し、詳しくは卵白オボムコイド等の免疫調節機能を有するタンパク質と、Ｔｈ１タイプサイトカイン及び／又はＴｈ２タイプサイトカインを誘導することができる免疫調節機能を有する乳酸菌との組み合わせによる非特異的な免疫応答調節機能の相互効果を利用した免疫応答調節組成物、並びに該免疫応答調節組成物を有効成分として含有する食品等に関する。
【背景技術】
【０００２】
生体の免疫反応において、種々の免疫担当細胞から産生されるサイトカインは免疫応答の方向性を制御している。この免疫応答制御において中心的な役割を担っているのが、ヘルパーＴ細胞（Ｔｈ）であり、産生するサイトカインのパターンによって、Ｔｈ１とＴｈ２のサブセットに分類されている。Ｔｈ１タイプ細胞は、主にインターロイキン２（ＩＬ−２）、インターロイキン１２（ＩＬ−１２）、インターフェロンγ（ＩＦＮ−γ）、腫瘍壊死因子（ＴＮＦ−α）等を産生し、マクロファージやナチュラルキラー細胞を活性化することで、主にウイルス、バクテリア等に対する感染防御などの細胞性免疫に関与することが知られている。他方、Ｔｈ２タイプ細胞は、主にインターロイキン４（ＩＬ−４）、インターロイキン５（ＩＬ−５）、インターロイキン６（ＩＬ−６）、インターロイキン１０（ＩＬ−１０）、インターロイキン１３（ＩＬ−１３）等を産生し、寄生虫に対する感染防御やＢ細胞からのＩｇＥ等の抗体産生などの体液性免疫に関与することが知られている。特に、Ｔｈ２細胞はアレルギー反応に関与するＩｇＥ抗体の産生を誘導するサイトカインを産生し、またアレルギーではＴｈ１とＴｈ２のバランスが崩れ、Ｔｈ２優位の状態にあるとされている。
【０００３】
Ｔｈ１タイプのサイトカインであるＩＬ−１２はＴｈ２細胞の分化を抑え、またＩＦＮ−γはＴｈ２細胞の活性化を抑制することによりアレルギー反応を抑制する。Ｔｈ１タイプの免疫応答は、その異常亢進に起因して、細胞性免疫反応を誘導、活性化し、慢性関節リウマチ、Ｉ型糖尿病、橋本甲状腺炎、重症筋無力症、多発性硬化症等の臓器特異的自己免疫疾患の誘発、増悪に深く関与している。また、臓器移植に伴う拒絶反応は、やはりＴｈ１タイプの細胞性免疫反応が深く関わっている。これらの自己免疫疾患や移植後の拒絶反応を予防又は治療するためにはＴｈ１タイプの免疫応答を制御することが重要であると考えられている。他方、Ｔｈ２タイプのサイトカインであるＩＬ−４はＢ細胞に対してＩｇＥ抗体の産生を誘導するとともに、肥満細胞の活性化及び増殖を誘導する作用を有している。このように、Ｔｈ２タイプの免疫応答は、その異常亢進に起因して、即時型アレルギー反応、遅延型アレルギー反応などアレルギー性炎症反応を誘導・活性化し、蕁麻疹、食物アレルギー、アナフィラキシーショック、好酸球増加症候群、喘息、アレルギー性鼻炎、アレルギー性結膜炎、アトピー性皮膚炎等種々のアレルギー性疾患の誘発、増悪に深く関与している。また、全身性エリテマトーデス等の抗体産生或いは液性免疫が異常に亢進した病態にある全身性自己免疫疾患もやはりＴｈ２タイプの免疫応答の異常亢進が深く関わっている。これらのアレルギー性疾患を予防又は治療するためにはＴｈ２タイプの免疫応答を制御することが重要であると考えられている。
【０００４】
ところで、乳酸菌の中には免疫系のバランスを調節し抗アレルギー作用を有するものがあることが知られている。例えば、乳酸菌の免疫調節機能に関して、乳製品製造に適した乳酸菌である、ラクトバチルス属菌中ラクトバチルス アシドフィルスＴＭＣ０３５６菌株（ＦＥＲＭ Ｐ−１９２３２）の生菌、死菌又は菌体処理物の何れかを有効成分とする、腸内生残性に優れ、腸管上皮に炎症反応を起こすことなく、マクロファージ細胞から炎症性及び抗炎症性サイトカインをバランスよく誘導し、生体でのＩｇＥ抗体産生を抑制する抗アレルギー作用を有する免疫機能調節剤が知られている（例えば、特許文献１参照）。
【０００５】
一方、卵白タンパク質には他のタンパク質に対する抗体応答抑制作用があり、中でもオボムコイドは食物アレルゲンの他にもダニ等の抗原に対する抗体応答抑制作用を有することが、本発明者らによって明らかにされている（例えば、特許文献２参照）。また、本発明者らは、乳酸菌及びオボムコイドの相互効果に関して検討し、インビボでの結果は用いた乳酸菌及びオボムコイドの相互効果が認められなかったことを報告している（例えば、非特許文献１参照）。
【０００６】
その他、 その表面にサイトカイン誘導物質（リステリア溶血素、サルモネラの鞭毛タンパク質フラジェリン）を融合タンパク質（シグナル配列とサイトカイン誘導物質遺伝子と膜アンカー配列とを順次結合したＤＮＡの発現産物）として発現させたラクトバチルス・カゼイ等の乳酸菌の菌体を経口用サイトカイン誘導剤として用い、生体にＩＦＮ−γ、ＩＬ−８等のサイトカインの産生を促進することができ、感染症、自己免疫疾患、炎症、腫瘍などの各種疾患の治療に有用な経口用サイトカイン誘導剤が提案されている（例えば、特許文献３参照）。
【０００７】
【特許文献１】特開２００４−２７７３８１号公報
【特許文献２】特開２００３−２６１４５２号公報
【特許文献３】特開２００３−６３９９１号公報
【非特許文献１】日本農芸化学会 大会講演要旨集 （2005）,p280,30E149α
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００８】
幼小児で多く発症する食物アレルギーにおけるアレルゲン除去や対症療法は、幼小児の発育、成長に支障をきたすばかりでなく、精神的な苦痛及び経済的負担を伴う。また、幼小児の成長に伴って食物アレルギーがダニアレルギーや喘息等のアレルギー性疾患の引き金になるとも言われており、アレルギーになりにくい体質への改善が望まれている。本発明の課題は、食物アレルギー等の各種免疫疾患の治療・予防に有用な免疫応答調節組成物や、該免疫応答調節組成物を食品に添加した免疫応答調節用の食品を提供することにある。
【課題を解決するための手段】
【０００９】
本発明者らは、前述のように、乳酸菌及びオボムコイドの相互効果に関して検討し、インビボにおける乳酸菌及びオボムコイドの相互効果が認められなかったことを報告しているが、乳酸菌及びオボムコイドの相互効果に関して、さらに乳酸菌の種類や、オボムコイドの分解物及び修飾物などの組み合わせの検討を進めるために、先ずラクトバチルス菌、ビフィドバクテリウム菌、エンテロコッカス菌に関してサイトカイン産生また抗体産生を評価し、抗アレルギー作用を有する菌株をいくつか見い出した。これら抗アレルギー作用を有する乳酸菌と、オボムコイド等の免疫調節機能を有するタンパク質との組み合わせにより、相乗的な免疫調節機能を有する免疫応答調節組成物が得られるとの知見を得た。本発明はかかる知見に依拠するものである。
【００１０】
すなわち本発明は、（１）免疫調節機能を有する、タンパク質、その分解物及びそれらの化学修飾体からなる群から選ばれる少なくとも１種の物質と、Ｔｈ１タイプサイトカイン及び／又はＴｈ２タイプサイトカインを誘導し、かつ、前記化学物質と協働して免疫調節機能を向上させることができる乳酸菌とを含有する免疫応答調節組成物や、（２）免疫調節機能を有するタンパク質が、卵白オボムコイドであることを特徴とする上記（１）記載の免疫応答調節組成物や、（３）乳酸菌が、Ｔｈ１タイプサイトカインであるＩＬ−１２及びＩＦＮ−γ、並びにＴｈ２タイプサイトカインであるＩＬ−１０を誘導する乳酸菌であることを特徴とする免疫応答調節組成物に関する。
【００１１】
また本発明は、（４）Ｔｈ１タイプサイトカインであるＩＬ−１２及びＩＦＮ−γ、並びにＴｈ２タイプサイトカインであるＩＬ−１０を誘導する乳酸菌が、Lactobacillus salivarius ssp. Salicinius(ＪＣＭ１０４２)、Enterococcus faecium（ＦＥＲＭ Ｐ−２０６３７）又はEnterococcus faecium(ＪＣＭ５８０４Ｔ)であることを特徴とする上記（３）記載の免疫応答調節組成物や、（５）上記（１）〜（４）のいずれか記載の免疫応答調節組成物を有効成分として含有する食品や、（６）Lactobacillus salivarius ssp. Salicinius(ＪＣＭ１０４２)、Enterococcus faecium（ＦＥＲＭ Ｐ−２０６３７）又はEnterococcus faecium(ＪＣＭ５８０４Ｔ) を含有する免疫応答調節剤や、（７）Lactobacillus salivarius ssp. Salicinius(ＪＣＭ１０４２)、Enterococcus faecium（ＦＥＲＭ Ｐ−２０６３７）又はEnterococcus faecium(ＪＣＭ５８０４Ｔ) を添加した食品に関する。
【発明の効果】
【００１２】
本発明によると、Ｔｈ１タイプサイトカイン及び／又はＴｈ２タイプサイトカインを誘導することができる免疫調節機能を有する乳酸菌を含有する免疫応答調節剤や、該免疫応答調節剤を有効成分とする非特異的な免疫応答調節機能を有する食品を得ることができる。また、卵白オボムコイド等の免疫調節機能を有するタンパク質と、Ｔｈ１タイプサイトカイン及び／又はＴｈ２タイプサイトカインを誘導することができる免疫調節機能を有する乳酸菌との組み合わせにより、非特異的な免疫応答調節機能を有する免疫応答調節組成物や、該免疫応答調節組成物を有効成分として含有する非特異的な免疫応答調節機能を有する食品を得ることができる。
【発明を実施するための最良の形態】
【００１３】
本発明の免疫応答調節組成物としては、免疫調節機能を有するタンパク質、免疫調節機能を有するその分解物、及び免疫調節機能を有するそれらの化学修飾体からなる群から選ばれる少なくとも１種の物質（以下、これらを総称して「免疫調節機能を有する本件タンパク質等」ということがある）と、Ｔｈ１タイプサイトカイン及び／又はＴｈ２タイプサイトカインを誘導し、かつ、前記化学物質と協働して免疫調節機能を向上させることができる乳酸菌とを含有するものであれば特に制限されず、上記「免疫応答調節組成物」には、免疫応答抑制組成物、免疫応答賦活組成物等が含まれ、また「免疫調節機能」には、免疫応答抑制機能、免疫応答賦活機能等が含まれる。
【００１４】
上記免疫調節機能を有するタンパク質としては、免疫応答抑制機能、免疫応答賦活機能等を有するタンパク質であれば特に制限されないが、免疫応答抑制機能を有するタンパク質としては、卵類、牛乳類、肉類、魚類、甲殻類及び軟体動物類、穀類、豆類及びナッツ類、果実類、野菜類、ビール酵母若しくはゼラチンなどアレルギーを引き起こす食品に含まれるアレルゲン、特に乳アレルゲンの主要成分としてのαｓ１カゼインや、β−ラクトグロブリンや、卵白アレルゲン成分としてはオボアルブミンとオボムコイドや、小麦アレルゲンの主要成分としてグリアジンや、そばの主要タンパク質である分子量２４ｋＤａと７６ｋＤａのタンパク質や、落花生の主要タンパク質であるＡｒａ ｈ１、中でも卵白オボムコイドを好適に例示することができる。また、免疫応答賦活機能等を有するタンパク質としては、ラクトフェリン、インターフェロン誘導シグナル伝達活性を有するタンパク質（特開２００４−１７３６７９）、膜局在型プロテインチロシンキナーゼ（特開平１０−３１３８６８）、ホエーのプロテアーゼ処理物等を挙げることができる。
【００１５】
上記免疫調節機能を有するその分解物としては、トリプシン、Ｖ８プロテアーゼ等プロテアーゼによる分解物を例示することができ、また免疫調節機能を有するそれらの化学修飾体としては、グルコシル化及びリン酸化などの酵素による修飾物、アセチル化、エステル化、アミド化などの化学修飾物、加熱、酸化、酸加水分解、アルカリ処理、脱糖などの処理物を挙げることができる。
【００１６】
上記Ｔｈ１タイプサイトカイン及び／又はＴｈ２タイプサイトカインを誘導しうる乳酸菌としては、生菌や死菌（断片も含む）の状態で、Ｔｈ１タイプサイトカイン及びＴｈ２タイプサイトカインを誘導しうる乳酸菌や、Ｔｈ１タイプサイトカインを誘導しうる乳酸菌が好ましく、Ｔｈ１タイプサイトカイン及びＴｈ２タイプサイトカインを誘導しうる乳酸菌がより好ましい。ここで、Ｔｈ１タイプサイトカインとしては、ＩＬ−２、ＩＬ−１２、ＩＦＮ−γ、ＴＮＦ−α等を挙げることができるが、中でも、ＩＬ−１２やＩＦＮ−γを好適に例示することができ、またＴｈ２タイプサイトカインとしては、ＩＬ−４、ＩＬ−５、ＩＬ−６、ＩＬ−１０、ＩＬ−１３等を挙げることができるが、中でも、ＩＬ−６やＩＬ−１０を好適に例示することができる。例えば、Ｔｈ１タイプサイトカイン及び／又はＴｈ２タイプサイトカインを誘導しうる乳酸菌の選択基準としては、マクロファージ系細胞株Ｊ７７４．１細胞を用いた評価において、ＬＰＳ １μｇ／ｍｌでの刺激による場合と同等のＩＬ−１２ｐ４０あるいはＩＬ−６産生量を示す乳酸菌を選択するのが好ましい。また、マウス脾臓細胞を用いた評価において、５００ｐｇ／ｍｌ以上好ましくは２０００ｐｇ／ｍｌ以上のＩＬ−１２ｐ７０産生量、あるいは１０ｎｇ／ｍｌ以上好ましくは３０ｎｇ／ｍｌ以上のＩＦＮ−γ産生量を示す乳酸菌を選択するのが好ましい。このような免疫調節機能を有する乳酸菌は、ラクトバチラス属、ビフィドバクテリウム属、エンテロコッカス属、ラクトコッカス属、ストレプトコッカス属、などの乳酸菌群からも選ぶことができ、特に好適に、Lactobacillus salivarius ssp. Salicinius(ＪＣＭ１０４２)、Enterococcus faecium（ＦＥＲＭ Ｐ−２０６３７）又はEnterococcus faecium(ＪＣＭ５８０４Ｔ)を具体的に例示することができる。
【００１７】
また、前記免疫調節機能を有する本件タンパク質等と協働して免疫調節機能を向上させることができる乳酸菌は、例えば、供試乳酸菌と、オボムコイド等の免疫調節機能を有する本件タンパク質等とをマウスに連続的に経口投与し、アレルゲン等の抗原で免疫した後、血清中の抗原特異的ＩｇＥ抗体、ＩｇＧ抗体、ＩｇＧ１抗体及びＩｇＧ２ａ抗体をＥＬＩＳＡにより測定し、これら抗体の内１以上の抗体産生を、供試乳酸菌単独及び本件タンパク質等単独の場合よりも有意に抑制する乳酸菌を選択することにより得ることができる。
【００１８】
本発明の免疫応答調節組成物は、そのまま用いて免疫応答抑制剤や免疫応答賦活剤等の免疫応答調節剤として、あるいは食品に添加して免疫応答抑制用や免疫応答賦活剤用の免疫応答調節用食品として、主に経口摂取される。免疫応答調節剤としての摂取形態、例えば粉末、顆粒、錠剤、カプセル剤、シロップ剤、懸濁液等の剤型は特に制限されず、また、摂取量等も年齢や症状、疾患の程度により適宜決定することができる。さらに、免疫応答抑制組成物は食経験がある食品素材を利用することから、免疫応答抑制組成物中に含まれる食物アレルゲンに対するアレルギーを有する人を除いて、生体に悪影響を与えないという利点を有する。この場合の投与量については、基本的にはアレルゲンタンパク質に対する免疫応答を抑制することができる量であればよく、例えば、１日あたり、５〜５００ｍｇ／ｋｇ体重の投与が適当である。また、経口投与する場合、薬学的に許容される通常の担体、結合剤、安定化剤、賦形剤、希釈剤、ｐＨ緩衝剤、崩壊剤、可溶化剤、溶解補助剤、等張剤などの各種調剤用配合成分を添加することができる。
【００１９】
上記のように、本発明の免疫応答調節組成物、好ましくは本発明の免疫応答抑制組成物は、食品に配合しても使用されるが、かかる本発明の免疫応答調節組成物を有効成分として含有する食品としては、例えば、上記免疫応答抑制剤を添加した食品を例示することができ、ここで、食品としてはヨーグルト、ドリンクヨーグルト、ジュース、牛乳、豆乳、酒類、コーヒー、紅茶、煎茶、ウーロン茶、スポーツ飲料等の各種飲料や、プリン、クッキー、パン、ケーキ、ゼリー、煎餅などの焼き菓子、羊羹などの和菓子、冷菓、チューインガム等のパン・菓子類や、うどん、そば等の麺類や、かまぼこ、ハム、魚肉ソーセージ等の魚肉練り製品や、みそ、しょう油、ドレッシング、マヨネーズ、甘味料等の調味類や、チーズ、バター等の乳製品や、豆腐、こんにゃく、その他佃煮、餃子、コロッケ、サラダ等の各種総菜などを挙げることができる。食品中の免疫応答抑制組成物の含量については、上記と同様に、例えばアレルゲンタンパク質に対する免疫応答を抑制することができる量であればよい。
【００２０】
次に本発明は、Lactobacillus salivarius ssp. Salicinius(ＪＣＭ１０４２)、Enterococcus faecium（ＦＥＲＭ Ｐ−２０６３７）又はEnterococcus faecium(ＪＣＭ５８０４Ｔ) を含有する免疫応答調節剤や、Lactobacillus salivarius ssp. Salicinius(ＪＣＭ１０４２)、Enterococcus faecium（ＦＥＲＭ Ｐ−２０６３７）又はEnterococcus faecium(ＪＣＭ５８０４Ｔ) を添加した食品にも関し、これらの内、Lactobacillus salivarius ssp. Salicinius(ＪＣＭ１０４２)及びEnterococcus faecium(ＪＣＭ５８０４Ｔ)は独立行政法人理化学研究所バイオリソースセンター（ＪＣＭ）から入手することができる。また、Enterococcus faecium（ＦＥＲＭ Ｐ−２０６３７）は、平成１７年（西暦２００５年）８月２４日（受領日）付で独立行政法人産業技術総合研究所 特許生物寄託センター（〒３０５−５４６６ 日本国茨城県つくば市東１丁目１番地１ 中央第６）に受託されている。
【００２１】
以下、実施例により本発明をより具体的に説明するが、本発明の技術的範囲はこれらの例示に限定されるものではない。
【実施例１】
【００２２】
［Ｊ７７４．１細胞を用いた評価］
（１）乳酸菌の培養
ラクトバチルス属（Lactobacillus）乳酸菌であるL.gasseri１９菌株（Ｌ１〜Ｌ１９）、L.acidophilus１５株（Ｌ２０〜Ｌ３４）、L.johnsonii５菌株（Ｌ３５〜Ｌ３９）、L.salivarius ssp. Salicinius１０菌株（Ｌ４０〜Ｌ４９）、L.reuteri１菌株（Ｌ５０）、L.casei ssp. alactosus１菌株（Ｌ５１）、L. rhamnosus１菌株（Ｌ５２）、L.amylovorus４菌株（Ｌ５３〜Ｌ５６）、L. crispatus２菌株（Ｌ５７〜Ｌ５８）の計５８菌株（Ｌ１〜Ｌ５８）を供試した。これらの乳酸菌は、ＡＰＴ−ｂｒｏｔｈ培地（Difco Laboratories）で３７℃・４０時間培養を行った。
【００２３】
（２）Ｊ７７４．１細胞の培養
マウスのmonocyte-macrophage cell line Ｊ７７４．１はＡＴＣＣより購入した。ＦＣＳを１０％加えたＲＰＭＩ１６４０培地（Sigma）を用い、３７℃・５％ＣＯ２条件下でＪ７７４．１細胞の培養を行った。細胞の継代は３日おきに、また、培地交換は継代して４８時間後に行った。
【００２４】
（３）サイトカインの測定
Ｊ７７４．１細胞を５×１０5個／ｍｌに調製し、４８ウェル培養プレートに０．５ｍｌ／ウェルずつ播種した。１時間プレインキュベートした後、乳酸菌（湿重量１、１０ｍｇ／ｍｌ）を５０μｌ／ウェル添加した。乳酸菌は生理食塩水で調製し、死菌は１００℃・５０分加熱したものを用いた。２４時間培養後、上清を回収した。そして、サイトカインＩＬ−１２ｐ４０及びＩＬ−６の測定は、Ｍｏｕｓｅ ＢＤ Ｏｐｔ ＥＩＡ ＥＬＩＳＡ ｓｅｔ（BD Pharmingen）を用いて行った。
【００２５】
（４）結果
各乳酸菌によるＩＬ−１２ｐ４０の産生量を図１（生菌）及び図３（死菌）に、ＩＬ−６の産生量を図２（生菌）及び図４（死菌）に示す。生菌では、ＩＬ−１２ｐ４０誘導能の高い菌が６菌株、ＩＬ−６誘導能の高い菌が１３菌株認められた。一方、死菌では、ＩＬ−１２ｐ４０誘導能の高い菌が３菌株、ＩＬ−６誘導能の高い菌が２１菌株認められた。
【００２６】
（５）考察
Ｊ７７４．１細胞においてサイトカイン産生に影響を与え、ＩＬ−１２ｐ４０又はＩＬ−６を誘導している菌株は、生体におけるサイトカイン産生に対しても影響を与える可能性が高いと考えられる。そこで、ＩＬ−１２ｐ４０及びＩＬ−６誘導能の高い菌、ＩＬ−１２ｐ４０又はＩＬ−６誘導能のどちらかが高い菌など特徴的なサイトカイン誘導能を示した乳酸菌、また菌種を考慮して選択した乳酸菌の８菌株（Ｌ２、Ｌ１６、Ｌ３２、Ｌ３４、Ｌ３９、Ｌ４１、Ｌ５２、Ｌ５６）に関して、マウス脾臓細胞を用いた評価を行うこととした。なお、Ｌ２はL. gasseri（ＪＣＭ１０１７）、Ｌ１６はL. gasseriの一菌株、Ｌ３２はL. acidophilusの一菌株、Ｌ３４はL. acidophilusの一菌株、Ｌ３９はL. johnsoniiの一菌株、Ｌ４１はL. salivarius ssp. salicinius（ＪＣＭ１０４２）、Ｌ５２はL. rhamnosus（ＪＣＭ１１３６Ｔ）、Ｌ５６はL. amylovorusの一菌株を示す。
【実施例２】
【００２７】
［マウス脾臓細胞を用いた評価］
（１）乳酸菌の培養
Ｊ７７４．１細胞を用いた評価で選択した乳酸菌８菌株（Ｌ２、Ｌ１６、Ｌ３２、Ｌ３４、Ｌ３９、Ｌ４１、Ｌ５２、Ｌ５６）について、評価を行った。これらの乳酸菌は、ＡＰＴ−ｂｒｏｔｈ培地（Difco Laboratories）で３７℃・１８時間培養を行った。
【００２８】
（２）脾臓細胞の調製
マウスから採取した脾臓をセルストレイナー（Falcon2350）で濾過した後、ＲＰＭＩ１６４０培地（Sigma）１０ｍｌで懸濁し、遠心した（１９０×ｇ・１０分）。沈殿した細胞に溶血バッファー（０．１５Ｍ ＮＨ４Ｃｌ、１０ｍＭ ＫＨＣＯ３、０．１ｍＭ Ｎａ２ＥＤＴＡ：ｐＨ７．２）を２ｍｌ添加し、５分静置した。ＲＰＭＩ培地を１０ｍｌ添加し、２回洗浄を行った後、ＦＣＳを１０％加えたＲＰＭＩ培地を用いて６×１０6個／ｍｌに調製した。
【００２９】
（３）サイトカインの測定
脾臓細胞を４８ウェル培養プレートに０．５ｍｌ／ウェルずつ播種した。１時間プレインキュベートした後、乳酸菌（湿重量５、５０、５００μｇ／ｍｌ）を５０μｌ／ウェル添加した。乳酸菌は生理食塩水で調製し、死菌は１００℃・５０分加熱したものを用いた。２４時間及び７２時間培養後、上清を回収した。そして、サイトカインＩＬ−１２ｐ７０、ＩＦＮ−γ及びＩＬ−１０の測定は、Ｍｏｕｓｅ ＢＤ Ｏｐｔ ＥＩＡ ＥＬＩＳＡ ｓｅｔ（BD Pharmingen）を用いて行った。
【００３０】
（４）結果
各乳酸菌によるＩＬ−１２ｐ７０の産生量を図５、ＩＦＮ−γの産生量を図６、ＩＬ−１０の産生量を図７に示す。Ｌ１６及びＬ４１は、生菌、死菌ともに、ＩＬ−１２ｐ７０、ＩＦＮ−γ及びＩＬ−１０を強く誘導し、Ｔｈ１タイプサイトカイン誘導能が高いことが示唆された。また、他の菌株では、Ｌ３４は生菌でＩＦＮ−γを、Ｌ５２は生菌及び死菌でＩＬ−１２ｐ７０を強く誘導していた。
【００３１】
（５）考察
マウス脾臓細胞においてＴｈ１タイプサイトカイン産生に影響を与え、ＩＬ−１２ｐ７０及びＩＦＮ−γを誘導している菌株は、生体においてもＴｈ１タイプサイトカインを誘導する可能性が高いと考えられる。そこで、生菌、死菌ともにＴｈ１タイプサイトカイン誘導能が高かったＬ４１に関して、マウスへの投与試験を行うこととした。
【実施例３】
【００３２】
［マウスへの投与試験による評価］
（１）乳酸菌の培養
脾臓細胞を用いた評価でＴｈ１タイプサイトカイン誘導能の高かった乳酸菌Ｌ４１について、評価を行った。Ｌ４１は、ＡＰＴ−ｂｒｏｔｈ培地（Difco Laboratories）で３７℃・１８時間培養を行った。
【００３３】
（２）マウスへの投与及び免疫
投与試験は、１試験区あたりマウス１０匹を用いた。経口投与は生理食塩水又は乳酸菌（湿重量１０ｍｇ／ｍｌ）を１匹あたり２００μｌずつ７日連続で行った。乳酸菌は生理食塩水で調製し、死菌は１００℃・５０分加熱したものを用いた。また、免疫は１週目及び３週目に、生理食塩水で１ｍｇ／ｍｌに調製したオボアルブミン（ＯＶＡ）とＡｌｕｍ（４０〜５０ｍｇ／ｍｌ 水酸化アルミニウムゲル）を等量混合した溶液を１匹あたり１００μｌ腹腔内に注射した。
【００３４】
（３）抗体の測定
４週目に採血を行い、血清中のＯＶＡ特異的ＩｇＥ抗体、ＩｇＧ抗体、ＩｇＧ１抗体及びＩｇＧ２ａ抗体をＥＬＩＳＡにより測定した。
【００３５】
（４）結果
ＯＶＡ特異的ＩｇＥ抗体量を図８、ＩｇＧ抗体量、ＩｇＧ１抗体量及びＩｇＧ２ａ抗体量を図９に示す。Ｌ４１の生菌及び死菌は、ＯＶＡ特異的ＩｇＥ抗体量を有意に抑制していた（＜０．０５）。一方、ＯＶＡ特異的ＩｇＧ抗体の産生に対する影響はなかったが、ＩｇＧ１抗体の産生を抑制、ＩｇＧ２ａ抗体の産生を誘導する傾向が認められた。
【００３６】
（５）考察
マウスへの投与試験では、Ｌ４１は、ＩｇＥ抗体の産生を抑制したが、ＩｇＧ抗体など他の抗体の産生は抑制しなかった。また、Ｌ４１は、ＩｇＧ１抗体の産生を抑制し、ＩｇＧ２ａ抗体の産生を誘導する傾向が認められたことから、ＩｇＧ１抗体及びＩｇＧ２ａ抗体産生に関与するＴｈ２タイプサイトカイン（ＩＬ−４）が抑制され、Ｔｈ１タイプサイトカイン（ＩＦＮ-γ）が誘導されていると考えられた。したがって、Ｌ４１は、他の抗体反応に大きな影響を与えることなくＩｇＥ抗体が関与するアレルギー作用を抑制し、またＴｈ１細胞の分化を誘導して免疫バランスを調節する可能性があると考えられた。
【実施例４】
【００３７】
［マウス脾臓細胞を用いた評価］
（１）乳酸菌の培養
ビフィドバクテリウム属（Bifidobacterium）乳酸菌であるB.bifidum３菌株（Ｂ１〜Ｂ３）、B.breve３菌株（Ｂ４〜Ｂ６）、B. adolescentis４菌株（Ｂ７〜Ｂ１０）、B.thermophilum２菌株（Ｂ１１〜Ｂ１２）、B.infantis２菌株（Ｂ１３〜Ｂ１４）、B.longum４菌株（Ｂ１５〜Ｂ１８）、B.pseudocatenulatum１菌株（Ｂ１９）、B.pseudolongum２菌株（Ｂ２０〜Ｂ２１）、B.suis１菌株（Ｂ２２）、B.catenulatum１菌株（Ｂ２３）、B.angulatum１菌株（Ｂ２４）、B.gallicum１菌株（Ｂ２５）の計２５菌株（Ｂ１〜Ｂ２５）を供試した。これらの乳酸菌は、ＭＲＳ−ｂｒｏｔｈ培地（Difco Laboratories）で３５℃・４０時間培養を行った。
【００３８】
（２）脾臓細胞の調製
マウスから採取した脾臓をセルストレイナー（Falcon2350）で濾過した後、ＲＰＭＩ１６４０培地（Sigma）１０ｍｌで懸濁し、遠心した（１９０×ｇ・１０分）。沈殿した細胞に溶血バッファー（０．１５Ｍ ＮＨ４Ｃｌ、１０ｍＭ ＫＨＣＯ３、０．１ｍＭ Ｎａ２ＥＤＴＡ：ｐＨ７．２）を２ｍｌ添加し、５分静置した。ＲＰＭＩ培地を１０ｍｌ添加し、２回洗浄を行った後、ＦＣＳを１０％加えたＲＰＭＩ培地を用いて６×１０6個／ｍｌに調製した。
【００３９】
（３）サイトカインの測定
脾臓細胞を４８ウェル培養プレートに０．５ｍｌ／ウェルずつ播種した。１時間プレインキュベートした後、乳酸菌（湿重量５、５０、５００μｇ／ｍｌ）を５０μｌ／ウェル添加した。乳酸菌は生理食塩水で調製し、死菌は１００℃・５０分加熱したものを用いた。２４時間及び７２時間培養後、上清を回収した。そして、サイトカインＩＬ−１２ｐ７０、ＩＦＮ-γ及びＩＬ−１０の測定は、Ｍｏｕｓｅ ＢＤ Ｏｐｔ ＥＩＡ ＥＬＩＳＡ ｓｅｔ（BD Pharmingen）を用いて行った。
【００４０】
（４）結果
各乳酸菌によるＩＬ−１２ｐ７０の産生量を図１０、ＩＦＮ-γの産生量を図１１、ＩＬ−１０の産生量を図１２に示す。Ｂ１６の生菌はＩＦＮ-γを、死菌はＩＬ−１２ｐ７０を強く誘導していた。また、Ｂ２０の死菌はＩＬ−１２ｐ７０を、Ｂ２２の生菌はＩＦＮ-γ及びＩＬ−１０を、Ｂ２４の生菌はＩＦＮ-γを誘導していた。なお、Ｂ１６はB.longumの一菌株、Ｂ２０はB. pseudolongumの一菌株、Ｂ２２はB. suisの一菌株、Ｂ２４はB. angulatum（ＪＣＭ７０９６Ｔ）を示す。
【００４１】
（５）考察
マウス脾臓細胞においてＴｈ１タイプサイトカイン産生に影響を与え、ＩＬ−１２ｐ７０及びＩＦＮ−γを誘導している菌株は、生体においてもＴｈ１タイプサイトカインを誘導する可能性が高いと考えられる。したがって、Ｂ１６の生菌及び死菌、Ｂ２０の死菌などは、Ｔｈ１細胞の分化を誘導して免疫バランスを調節する可能性があると考えられた。
【実施例５】
【００４２】
［マウス脾臓細胞を用いた評価］
（１）乳酸菌の培養
エンテロコッカス属（Enterococcus）乳酸菌であるE.faecalis８菌株（Ｅ１〜Ｅ５及びＥ１３〜Ｅ１５）、E.faecium８菌株（Ｅ６〜Ｅ１２及びＥ１６）の計１６菌株を供試した。これらの乳酸菌は、ＳＣＤ−ｂｒｏｔｈ培地（Difco Laboratories）で３５℃・１８時間培養を行った。
【００４３】
（２）脾臓細胞の調製
マウスから採取した脾臓をセルストレイナー（Falcon2350）で濾過した後、ＲＰＭＩ１６４０培地（Sigma）１０ｍｌで懸濁し、遠心した（１９０×ｇ・１０分）。沈殿した細胞に溶血バッファー（０．１５Ｍ ＮＨ４Ｃｌ、１０ｍＭ ＫＨＣＯ３、０．１ｍＭ Ｎａ２ＥＤＴＡ：ｐＨ７．２）を２ｍｌ添加し、５分静置した。ＲＰＭＩ培地を１０ｍｌ添加し、２回洗浄を行った後、ＦＣＳを１０％加えたＲＰＭＩ培地を用いて６×１０6個／ｍｌに調製した。
【００４４】
（３）サイトカインの測定
脾臓細胞を４８ウェル培養プレートに０．５ｍｌ／ウェルずつ播種した。１時間プレインキュベートした後、乳酸菌（湿重量５、５０、５００μｇ／ｍｌ）を５０μｌ／ウェル添加した。乳酸菌は生理食塩水で調製し、１００℃・５０分加熱したものを用いた。２４時間及び７２時間培養後、上清を回収した。そして、サイトカインＩＬ−１２ｐ７０、ＩＦＮ-γ及びＩＬ−１０の測定は、Ｍｏｕｓｅ ＢＤ Ｏｐｔ ＥＩＡ ＥＬＩＳＡ ｓｅｔ（BD Pharmingen）を用いて行った。
【００４５】
（４）結果
各乳酸菌によるＩＬ−１２ｐ７０の産生量を図１３、ＩＦＮ-γの産生量を図１４、ＩＬ−１０の産生量を図１５に示す。Ｅ１２は、ＩＬ−１２ｐ７０、ＩＦＮ-γ及びＩＬ−１０を強く誘導し、Ｔｈ１タイプサイトカイン誘導能が高いことが示唆された。また、Ｅ１０はＩＬ−１２ｐ７０、ＩＦＮ-γを、Ｅ１４及びＥ１６はＩＦＮ−γを誘導していた。なお、Ｅ１０はE. faeciumの一菌株、Ｅ１２はE. faecium（ＦＥＲＭ Ｐ−２０６３７）、Ｅ１４はE. faecalis（ＪＣＭ５８０３Ｔ）、Ｅ１６はE. faecium（ＪＣＭ５８０４Ｔ）を示す。
【００４６】
（５）考察
マウス脾臓細胞においてＴｈ１タイプサイトカイン産生に影響を与え、ＩＬ−１２ｐ７０及びＩＦＮ−γを誘導している菌株は、生体においてもＴｈ１タイプサイトカインを誘導する可能性が高いと考えられる。そこで、Ｔｈ１タイプサイトカイン誘導能が高かったＥ１２及びＥ１６に関して、マウスへの投与試験を行うこととした。
【実施例６】
【００４７】
［マウスへの投与試験による評価］
（１）乳酸菌の培養
脾臓細胞を用いた評価でＴｈ１タイプサイトカイン誘導能の高かった乳酸菌Ｅ１２及びＥ１６について、評価を行った。ＳＣＤ−ｂｒｏｔｈ培地（Difco Laboratories）で３５℃・１８時間培養を行った。
【００４８】
（２）マウスへの投与及び免疫
投与試験は、１試験区あたりマウス１０匹を用いた。経口投与は生理食塩水又は乳酸菌（湿重量１０ｍｇ／ｍｌ）を１匹あたり２００μｌずつ７日連続で行った。乳酸菌は生理食塩水で調製し、１００℃・５０分加熱したものを用いた。また、免疫は１週目及び３週目に、生理食塩水で１ｍｇ／ｍｌに調製した ＯＶＡとＡｌｕｍ（４０〜５０ｍｇ／ｍｌ 水酸化アルミニウムゲル）を等量混合した溶液を１匹あたり１００μｌ腹腔内に注射
した。
【００４９】
（３）抗体の測定
４週目に採血を行い、血清中のＯＶＡ特異的ＩｇＥ抗体、ＩｇＧ抗体をＥＬＩＳＡにより測定した。
【００５０】
（４）結果
ＯＶＡ特異的ＩｇＥ抗体量を図１６、ＩｇＧ抗体量を図１７に示す。Ｅ１２及びＥ１６は、ＯＶＡ特異的ＩｇＥ抗体量を有意に抑制していた（＜０．０５）。一方、ＯＶＡ特異的ＩｇＧ抗体の産生に対する影響はなかった。したがって、Ｅ１２及びＥ１６は、他の抗体反応に大きな影響を与えることなくＩｇＥ抗体が関与するアレルギー作用を抑制する可能性があると考えられた。
【００５１】
（５）考察
マウスへの投与試験では、Ｅ１２及びＥ１６は、ＩｇＥ抗体の産生を抑制したが、ＩｇＧ抗体など他の抗体の産生は抑制しなかった。したがって、Ｅ１２及びＥ１６は、他の抗体反応に大きな影響を与えることなくＩｇＥ抗体が関与するアレルギー作用を抑制する可能性があると考えられた。
【実施例７】
【００５２】
［マウスへの投与試験による評価］
Ｅ１２（Enterococcus faecium（ＦＥＲＭ Ｐ−２０６３７））は、ＳＣＤ−ｂｒｏｔｈ培地（Difco Laboratories）で３５℃・１８時間培養を行った。
【００５３】
（２）卵白の調製
鶏卵の卵白を凍結乾燥した。
【００５４】
（３）β−ラクトグロブリン（以下β−ＬＧ）の調製
新鮮な牛乳よりAschaffenburgとDrewryの方法に従い、粗β−ＬＧ画分を得た。この粗画分をさらにＤＥＡＥ ６５０Ｓ（ＴＯＳＯＨ）を用いたイオン交換クロマトグラフィーにより精製した。移動相には５０ｍＭイミダゾール−塩酸緩衝液（ｐＨ６．４）を用い、ＮａＣｌの０から０．５Ｍのリニアグラジェントによりβ−ＬＧを分画し、透析による脱塩後、凍結乾燥を行った。
【００５５】
（４）マウスへの投与及び免疫
投与試験は、１試験区あたりマウス８匹を用いた。経口投与は、下記４試験区（表１）で実施した。
乳酸菌及び卵白は７日間連続で投与した。卵白及び乳酸菌は生理食塩水で調製し、乳酸菌は調製後１００℃・５０分加熱したものを用いた。また、免疫は投与開始から１週目及び３週目に、１匹あたりβ−ＬＧ５０μｇを 水酸化アルミニウムゲル（４０〜５０ｍｇ／ｍｌ）とともに腹腔内に注射した。
【００５６】
【表１】
【００５７】
（５）抗体の測定
４週目に採血を行い、血清中のβ−ＬＧ特異的ＩｇＥ抗体量をＥＬＩＳＡにより測定した。
【００５８】
（６）結果
各投与区のβ−ＬＧ特異的ＩｇＥ抗体量を図１８に示す。ＴＥＳＴ１を対照としたｔ検定により、ＴＥＳＴ２の乾燥卵白のみ、あるいはＴＥＳＴ３のＥ１２のみの投与ではβ−ＬＧ特異的ＩｇＥ抗体産生の低下は認められなかった。しかし、単独では効果の認められなかった乾燥卵白とＥ１２を組み合わせたＴＥＳＴ４では有意にβ−ＬＧ特異的ＩｇＥ抗体の産生の低下が認められた（Ｐ≦０．０５％）。
【００５９】
（７）考察
卵白成分のオボムコイドが乳、ダニ、花粉などに対する過剰な免疫を抑制する作用を有することを本発明者らにより明らかにしているが、今回の試験では、通常の食品である卵白を投与した場合、あるいは卵白に免疫調節機能を有する乳酸菌を加えた場合の免疫応答に対する影響を検討した。その結果、卵白の投与は、乳の主要アレルゲンであるβ−ＬＧに対する特異的ＩｇＥ抗体の産生を抑制する傾向にあるものの有意ではなかった。また、実施例６ではＥ１２の１０ｍｇ／ｍｌ投与によりＯＶＡに対する特異的ＩｇＥ抗体抑制作用を示したが、実施例７では、ＯＶＡと同じ濃度のβ−ＬＧに対し、特異的ＩｇＥ抗体の産生を抑制する傾向にあるものの有意ではなかった。しかし、有意な抑制効果を示さない乾燥卵白とＥ１２を組み合わせることにより相乗的な免疫調節機能を示し、β−ＬＧ特異的ＩｇＥ抗体の産生を抑制すること（ＴＥＳＴ４）が明らかとなった。このことから、免疫調製剤は、単一性分を利用するよりも、複数の有効成分の組み合わせにより、より効果的な商品設計が可能になると考えられた。さらに、乳酸菌の製造コストが最終製品のコストアップにつながるが、乳酸菌を他の食品成分と組み合わせることにより相乗的な効果が得られることが明らかとなり、免疫調製剤のコストダウンにも貢献できるものと考えられた。
【実施例８】
【００６０】
［オボムコイド及び乳酸菌の組み合わせによるマウスの免疫応答に対する効果］
（１）乳酸菌の培養
Ｅ１２（Enterococcus faecium（ＦＥＲＭ Ｐ−２０６３７））は、ＳＣＤ−ｂｒｏｔｈ培地（Difco Laboratories）で３５℃・１８時間培養を行った。
【００６１】
（２）ニワトリオボムコイド（以下「ＯＭ」という）の調製
新鮮卵白よりアセトン沈殿法（Lineweaver & Murry）により粗ＯＭを調製した。さらに０．１Ｍ酢酸緩衝液に対し透析後、８，０００ｒｐｍ×２０分遠心し、上精を回収した。さらに、ＴＳＫ ｇｅｌ ＤＥＡＥ ６５０Ｓ（ＴＯＳＯＨ）を用いたイオン交換クロマトグラフィーにより精製した。移動相には５０ｍＭイミダゾール−塩酸緩衝液（ｐＨ６．４）を用い、ＮａＣｌの０から０．３ＭのリニアグラジェントによりＯＭを分画し、透析による脱塩後、凍結乾燥を行った。
【００６２】
（３）マウスへの投与及び免疫
投与試験は、１試験区あたりマウス８匹を用いた。経口投与は、下記４試験区（表２）で実施した。
乳酸菌及びＯＭは７日間連続で投与した。ＯＭ及び乳酸菌は生理食塩水で調製し、乳酸菌は調製後１００℃・５０分加熱したものを用いた。また、免疫は投与開始から１週目及び３週目に、１匹あたりβ−ＬＧ５０μｇを水酸化アルミニウムゲル（４０〜５０ｍｇ／ｍｌ）とともに腹腔内に注射した。
【００６３】
【表２】
【００６４】
（４）抗体の測定
４週目に採血を行い、血清中の総ＩｇＥ抗体量をＥＬＩＳＡにより測定した。
【００６５】
（５）結果
各投与区の総ＩｇＥ抗体量を図１９に示す。ＴＥＳＴ１を対照としたｔ検定により、ＴＥＳＴ２のＯＭのみ、あるいはＴＥＳＴ３のＥ１２のみの投与では総ＩｇＥ抗体量の低下は認められなかった。しかし、単独では効果の認められなかったＯＭとＥ１２を組み合わせたＴＥＳＴ４では有意に総ＩｇＥ抗体量の低下が認められた（Ｐ≦０．０５％）。
【００６６】
（６）考察
単独で免疫抑制効果を示さない少量のＥ１２と、卵白アレルゲンのＯＭと組み合わせることにより、免疫抑制効果を示すことが明らかとなった。これらの結果は実施例７と同様の傾向を示し、実施例７でβ−ＬＧ特異的ＩｇＥ抗体を抑制していた卵の成分は主にＯＭと考えられ、ＯＭとＥ１２を組み合わせることにより、効果的な免疫調節機能を発現できるものと考えられた。
【図面の簡単な説明】
【００６７】
【図１】Ｊ７７４．１細胞を用いたラクトバチルス属乳酸菌（生菌）によるＩＬ−１２ｐ４０の産生量についての評価結果を示す図である。
【図２】Ｊ７７４．１細胞を用いたラクトバチルス属乳酸菌（生菌）によるＩＬ−６の産生量についての評価結果を示す図である。
【図３】Ｊ７７４．１細胞を用いたラクトバチルス属乳酸菌（死菌）によるＩＬ−１２ｐ４０の産生量についての評価結果を示す図である。
【図４】Ｊ７７４．１細胞を用いたラクトバチルス属乳酸菌（死菌）によるＩＬ−６の産生量を示す図である。
【図５】マウス脾臓細胞を用いたラクトバチルス属乳酸菌によるＩＬ−１２ｐ７０の産生量を示す図である。
【図６】本発明のマウス脾臓細胞を用いたラクトバチルス属乳酸菌によるＩＦＮ−γの産生量についての評価結果を示す図である。
【図７】本発明のマウス脾臓細胞を用いたラクトバチルス属乳酸菌によるＩＬ−１０の産生量についての評価結果を示す図である。
【図８】本発明のラクトバチルス属乳酸菌のマウス投与試験に関する血清中ＯＶＡ特異的ＩｇＥ抗体量についての結果を示す図である。
【図９】本発明のラクトバチルス属乳酸菌のマウス投与試験に関する血清中ＩｇＧ抗体量、ＩｇＧ１抗体量及びＩｇＧ２ａ抗体量についての結果を示す図である。
【図１０】本発明のマウス脾臓細胞を用いたビフィドバクテリウム属乳酸菌によるＩＬ−１２ｐ７０の産生量についての評価結果を示す図である。
【図１１】本発明のマウス脾臓細胞を用いたビフィドバクテリウム属乳酸菌によるＩＦＮ−γの産生量についての評価結果を示す図である。
【図１２】本発明のマウス脾臓細胞を用いたビフィドバクテリウム属乳酸菌によるＩＬ−１０の産生量についての評価結果を示す図である。
【図１３】本発明のマウス脾臓細胞を用いたエンテロコッカス属乳酸菌によるＩＬ−１２ｐ７０の産生量についての評価結果を示す図である。
【図１４】本発明のマウス脾臓細胞を用いたエンテロコッカス属乳酸菌によるＩＦＮ−γの産生量についての評価結果を示す図である。
【図１５】本発明のマウス脾臓細胞を用いたエンテロコッカス属乳酸菌によるＩＬ−１０の産生量についての評価結果を示す図である。
【図１６】本発明のエンテロコッカス属乳酸菌のマウス投与試験に関する血清中ＯＶＡ特異的ＩｇＥ抗体量についての結果を示す図である。
【図１７】本発明のエンテロコッカス属乳酸菌のマウス投与試験に関する血清中ＩｇＧ抗体量についての結果を示す図である。
【図１８】本発明のβ−ＬＧ特異的ＩｇＥ抗体産生に及ぼす卵白あるいは乳酸菌投与の影響を示す図である。
【図１９】本発明の総ＩｇＥ抗体産生に及ぼすＯＭあるいは乳酸菌投与の影響を示す図である。
【特許請求の範囲】
【請求項１】
免疫調節機能を有する、タンパク質、その分解物及びそれらの化学修飾体からなる群から選ばれる少なくとも１種の物質と、Ｔｈ１タイプサイトカイン及び／又はＴｈ２タイプサイトカインを誘導し、かつ、前記化学物質と協働して免疫調節機能を向上させることができる乳酸菌とを含有する免疫応答調節組成物。
【請求項２】
免疫調節機能を有するタンパク質が、卵白オボムコイドであることを特徴とする請求項１記載の免疫応答調節組成物。
【請求項３】
乳酸菌が、Ｔｈ１タイプサイトカインであるＩＬ−１２及びＩＦＮ−γ、並びにＴｈ２タイプサイトカインであるＩＬ−１０を誘導する乳酸菌であることを特徴とする免疫応答調節組成物。
【請求項４】
Ｔｈ１タイプサイトカインであるＩＬ−１２及びＩＦＮ−γ、並びにＴｈ２タイプサイトカインであるＩＬ−１０を誘導する乳酸菌が、Lactobacillus salivarius ssp. Salicinius(ＪＣＭ１０４２)、Enterococcus faecium（ＦＥＲＭ Ｐ−２０６３７）又はEnterococcus faecium(ＪＣＭ５８０４Ｔ)であることを特徴とする請求項３記載の免疫応答調節組成物。
【請求項５】
請求項１〜４のいずれか記載の免疫応答調節組成物を有効成分として含有する食品。
【請求項６】
Lactobacillus salivarius ssp. Salicinius(ＪＣＭ１０４２)、Enterococcus faecium（ＦＥＲＭ Ｐ−２０６３７）又はEnterococcus faecium(ＪＣＭ５８０４Ｔ) を含有する免疫応答調節剤。
【請求項７】
Lactobacillus salivarius ssp. Salicinius(ＪＣＭ１０４２)、Enterococcus faecium（ＦＥＲＭ Ｐ−２０６３７）又はEnterococcus faecium(ＪＣＭ５８０４Ｔ) を添加した食品。
【請求項１】
免疫調節機能を有する、タンパク質、その分解物及びそれらの化学修飾体からなる群から選ばれる少なくとも１種の物質と、Ｔｈ１タイプサイトカイン及び／又はＴｈ２タイプサイトカインを誘導し、かつ、前記化学物質と協働して免疫調節機能を向上させることができる乳酸菌とを含有する免疫応答調節組成物。
【請求項２】
免疫調節機能を有するタンパク質が、卵白オボムコイドであることを特徴とする請求項１記載の免疫応答調節組成物。
【請求項３】
乳酸菌が、Ｔｈ１タイプサイトカインであるＩＬ−１２及びＩＦＮ−γ、並びにＴｈ２タイプサイトカインであるＩＬ−１０を誘導する乳酸菌であることを特徴とする免疫応答調節組成物。
【請求項４】
Ｔｈ１タイプサイトカインであるＩＬ−１２及びＩＦＮ−γ、並びにＴｈ２タイプサイトカインであるＩＬ−１０を誘導する乳酸菌が、Lactobacillus salivarius ssp. Salicinius(ＪＣＭ１０４２)、Enterococcus faecium（ＦＥＲＭ Ｐ−２０６３７）又はEnterococcus faecium(ＪＣＭ５８０４Ｔ)であることを特徴とする請求項３記載の免疫応答調節組成物。
【請求項５】
請求項１〜４のいずれか記載の免疫応答調節組成物を有効成分として含有する食品。
【請求項６】
Lactobacillus salivarius ssp. Salicinius(ＪＣＭ１０４２)、Enterococcus faecium（ＦＥＲＭ Ｐ−２０６３７）又はEnterococcus faecium(ＪＣＭ５８０４Ｔ) を含有する免疫応答調節剤。
【請求項７】
Lactobacillus salivarius ssp. Salicinius(ＪＣＭ１０４２)、Enterococcus faecium（ＦＥＲＭ Ｐ−２０６３７）又はEnterococcus faecium(ＪＣＭ５８０４Ｔ) を添加した食品。
【図１】
【図２】
【図３】
【図４】
【図５】
【図６】
【図７】
【図８】
【図９】
【図１０】
【図１１】
【図１２】
【図１３】
【図１４】
【図１５】
【図１６】
【図１７】
【図１８】
【図１９】
【図２】
【図３】
【図４】
【図５】
【図６】
【図７】
【図８】
【図９】
【図１０】
【図１１】
【図１２】
【図１３】
【図１４】
【図１５】
【図１６】
【図１７】
【図１８】
【図１９】
【公開番号】特開２００７−８４５３３（Ｐ２００７−８４５３３Ａ）
【公開日】平成１９年４月５日（２００７．４．５）
【国際特許分類】
【出願番号】特願２００６−２２７５６４（Ｐ２００６−２２７５６４）
【出願日】平成１８年８月２４日（２００６．８．２４）
【新規性喪失の例外の表示】特許法第３０条第１項適用申請有り ２００５年３月５日 社団法人日本農芸化学会発行の「日本農芸化学会 ２００５年度（平成１７年度）大会講演要旨集」に発表
【出願人】（０００１１３０６７）プリマハム株式会社 (72)
【出願人】（５０１２０３３４４）独立行政法人農業・食品産業技術総合研究機構 (827)
【Ｆターム（参考）】
【公開日】平成１９年４月５日（２００７．４．５）
【国際特許分類】
【出願日】平成１８年８月２４日（２００６．８．２４）
【新規性喪失の例外の表示】特許法第３０条第１項適用申請有り ２００５年３月５日 社団法人日本農芸化学会発行の「日本農芸化学会 ２００５年度（平成１７年度）大会講演要旨集」に発表
【出願人】（０００１１３０６７）プリマハム株式会社 (72)
【出願人】（５０１２０３３４４）独立行政法人農業・食品産業技術総合研究機構 (827)
【Ｆターム（参考）】
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