変異受容体、及び核内受容体依存性の誘導性遺伝子の発現系におけるその使用
【課題】新規な置換変異体レセプター及び核内受容体ベースの誘導可能な遺伝子発現システム、並びにそれを用いた遺伝子治療、タンパク質及び抗体の大規模な産生、細胞ベースの高いスループットの解析、機能ゲノミクス及びトランスジェニック生物の形質の調節への用途に関する。
【解決手段】グループＨ核内受容体リガンド結合ドメインにおけるリガンド結合に関与し、リガンド感受性及びグループＨ核内受容体の誘導の程度に影響を及ぼすアミノ酸残基に置換変異を導入し、変異型グループＨ核内受容体を構築し、並びにこれらの核内受容体の置換変異体を遺伝子発現の調節に用いること。
【解決手段】グループＨ核内受容体リガンド結合ドメインにおけるリガンド結合に関与し、リガンド感受性及びグループＨ核内受容体の誘導の程度に影響を及ぼすアミノ酸残基に置換変異を導入し、変異型グループＨ核内受容体を構築し、並びにこれらの核内受容体の置換変異体を遺伝子発現の調節に用いること。
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【特許請求の範囲】
【請求項１】
（ａ）下記を含む第１のポリペプチドをコードするポリヌクレオチドを含む、宿主細胞にて発現可能な第１の組換え遺伝子発現カセットと、
（ｉ）発現が調節される遺伝子と関係する応答エレメントを認識するＤＮＡ結合ドメイン、及び
（ｉｉ）第１の核受容体リガンド結合ドメイン、
（ｂ）下記を含む第２のポリペプチドをコードするポリヌクレオチドを含む、宿主細胞にて発現可能な第２の組換え遺伝子発現カセットと、を含む組換え遺伝子発現調節系であって、
（ｉ）トランス活性化ドメイン、及び
（ｉｉ）第２の核受容体リガンド結合ドメイン、
前記第１の核受容体リガンド結合ドメイン又は前記第２の核受容体リガンド結合ドメインのうちの１つが、下記のうちの少なくとも１つのアミノ酸残基置換変異を含む点を除き、配列番号１アミノ酸配列と同一である組換え遺伝子発現調節系；Ｆ４８Ｙ、Ｆ４８Ｗ、Ｆ４８Ｌ、Ｆ４８Ｎ、Ｆ４８Ｒ、Ｆ４８Ｋ、Ｉ５１Ｍ、Ｉ５１Ｎ、Ｉ５１Ｌ、Ｔ５２Ｍ、Ｔ５２Ｅ、Ｔ５２Ｐ、Ｔ５２Ｒ、Ｔ５２Ｗ、Ｔ５２Ｇ、Ｔ５２Ｑ、Ｍ９２Ｌ、Ｍ９２Ｅ、Ｒ９５Ｈ、Ｒ９５Ｍ、Ｒ９５Ｗ、Ｖ９６Ｌ、Ｖ９６Ｗ、Ｖ９６Ｓ、Ｖ９６Ｅ、Ｆ１０９Ｗ、Ｆ１０９Ｐ、Ｆ１０９Ｌ、Ｆ１０９Ｍ、Ｆ１０９Ｎ、Ａ１１０Ｅ、Ａ１１０Ｎ、Ａ１１０Ｗ、Ｙ１２０Ｗ、Ｙ１２０Ｍ、Ｍ１２５Ｐ、Ｍ１２５Ｒ、Ｍ１２５Ｅ、Ｍ１２５Ｌ、Ｍ１２５Ｃ、Ｍ１２５Ｗ、Ｍ１２５Ｇ、Ｍ１２５Ｉ、Ｍ１２５Ｎ、Ｍ１２５Ｓ、Ｍ１２５Ｖ、Ｍ２１９Ｋ、Ｍ２１９Ｗ、Ｍ２１９Ｙ、Ｍ２１９Ａ、Ｌ２２３Ｋ、Ｌ２２３Ｒ、Ｌ２２３Ｙ、Ｌ２３４Ｍ、Ｌ２３４Ｉ、Ｌ２３４Ｒ、Ｌ２３４Ｗ、Ｗ２３８Ｐ、Ｗ２３８Ｅ、Ｗ２３８Ｙ、Ｗ２３８Ｍ、Ｗ２３８Ｌ、Ｎ１１９Ｆ／Ｖ９６Ｔ、Ｔ５２Ｖ／Ａ１１０Ｐ、Ｖ１０７Ｉ／Ｙ１２７Ｅ／Ｔ５２Ｖ、又は、Ｖ１０７Ｉ／Ｙ１２７Ｅ／Ａ１１０Ｐ。
【請求項２】
前記ＤＮＡ結合ドメインが、エクジソン受容体ＤＮＡ結合ドメイン、ＧＡＬ４ ＤＮＡ結合ドメイン、又はＬｅｘＡ ＤＮＡ結合ドメインである請求項１に記載の組換え遺伝子発現調節系。
【請求項３】
前記トランス活性化ドメインが、エクジソン受容体トランス活性化ドメイン、ＶＰ１６トランス活性化ドメイン、Ｂ４２酸性活性剤トランス活性化ドメイン、又はｐ６５トランス活性化ドメインである請求項１又は２に記載の組換え遺伝子発現調節系。
【請求項４】
前記ＤＮＡ結合ドメインがＧＡＬ４ ＤＮＡ結合ドメインである請求項３に記載の組換え遺伝子発現調節系。
【請求項５】
前記トランス活性化ドメインがＶＰ１６トランス活性化ドメインである請求項４に記載の組換え遺伝子発現調節系。
【請求項６】
請求項１から５のいずれか１項に記載の組換え遺伝子発現調節系を含むベクター。
【請求項７】
請求項１から５のいずれか１項に記載の組換え遺伝子発現調節系を含む宿主細胞。
【請求項８】
請求項６に記載のベクターを含む宿主細胞。
【請求項９】
アミノ酸残基置換変異を含む点を除き、配列番号１のアミノ酸配列と同一である核受容体リガンド結合ドメインが、脊椎動物レチノイドＸ受容体リガンド結合ドメイン、無脊椎動物レチノイドＸ受容体リガンド結合ドメイン、ｕｌｔｒａｓｐｉｒａｃｌｅタンパク質リガンド結合ドメイン、又は、第１のポリペプチド断片及び第２のポリペプチド断片を含むキメラリガンド結合ドメインであり、
前記第１のポリペプチド断片が、前記第２のポリペプチド断片と異なり、前記第１のポリペプチド断片及び前記第２のポリペプチド断片の各々が、脊椎動物レチノイドＸ受容体リガンド結合ドメイン、無脊椎動物レチノイドＸ受容体リガンド結合ドメイン、及びｕｌｔｒａｓｐｉｒａｃｌｅタンパク質リガンド結合ドメインから独立に選択される、請求項１から５のいずれか１項に記載の組換え遺伝子発現調節系。
【請求項１０】
ＤＮＡ結合ドメイン及び核受容体リガンド結合ドメインを含むポリペプチドをコードする単離されたポリヌクレオチドを含む組換え遺伝子発現カセットであって、
前記核受容体リガンド結合ドメインが、下記のうちの少なくとも１つのアミノ酸残基置換変異を含む点を除き、配列番号１アミノ酸配列と同一である組換え遺伝子発現カセット；Ｆ４８Ｙ、Ｆ４８Ｗ、Ｆ４８Ｌ、Ｆ４８Ｎ、Ｆ４８Ｒ、Ｆ４８Ｋ、Ｉ５１Ｍ、Ｉ５１Ｎ、Ｉ５１Ｌ、Ｔ５２Ｍ、Ｔ５２Ｅ、Ｔ５２Ｐ、Ｔ５２Ｒ、Ｔ５２Ｗ、Ｔ５２Ｇ、Ｔ５２Ｑ、Ｍ９２Ｌ、Ｍ９２Ｅ、Ｒ９５Ｈ、Ｒ９５Ｍ、Ｒ９５Ｗ、Ｖ９６Ｌ、Ｖ９６Ｗ、Ｖ９６Ｓ、Ｖ９６Ｅ、Ｆ１０９Ｗ、Ｆ１０９Ｐ、Ｆ１０９Ｌ、Ｆ１０９Ｍ、Ｆ１０９Ｎ、Ａ１１０Ｅ、Ａ１１０Ｎ、Ａ１１０Ｗ、Ｙ１２０Ｗ、Ｙ１２０Ｍ、Ｍ１２５Ｐ、Ｍ１２５Ｒ、Ｍ１２５Ｅ、Ｍ１２５Ｌ、Ｍ１２５Ｃ、Ｍ１２５Ｗ、Ｍ１２５Ｇ、Ｍ１２５Ｉ、Ｍ１２５Ｎ、Ｍ１２５Ｓ、Ｍ１２５Ｖ、Ｍ２１９Ｋ、Ｍ２１９Ｗ、Ｍ２１９Ｙ、Ｍ２１９Ａ、Ｌ２２３Ｋ、Ｌ２２３Ｒ、Ｌ２２３Ｙ、Ｌ２３４Ｍ、Ｌ２３４Ｉ、Ｌ２３４Ｒ、Ｌ２３４Ｗ、Ｗ２３８Ｐ、Ｗ２３８Ｅ、Ｗ２３８Ｙ、Ｗ２３８Ｍ、Ｗ２３８Ｌ、Ｎ１１９Ｆ／Ｖ９６Ｔ、Ｔ５２Ｖ／Ａ１１０Ｐ、Ｖ１０７Ｉ／Ｙ１２７Ｅ／Ｔ５２Ｖ、又は、Ｖ１０７Ｉ／Ｙ１２７Ｅ／Ａ１１０Ｐ。
【請求項１１】
前記少なくとも１つのアミノ酸残基置換変異がＶ１０７Ｉ／Ｙ１２７Ｅ／Ａ１１０Ｐである請求項１０に記載の組換え遺伝子発現カセット。
【請求項１２】
前記少なくとも１つのアミノ酸残基置換変異がＶ１０７Ｉ／Ｙ１２７Ｅ／Ｔ５２Ｖである請求項１０に記載の組換え遺伝子発現カセット。
【請求項１３】
請求項１０から１２のいずれか１項に記載の組換え遺伝子発現カセットを含むベクター。
【請求項１４】
請求項１０から１２のいずれか１項に記載の組換え遺伝子発現カセットを含む宿主細胞。
【請求項１５】
請求項１３に記載のベクターを含む宿主細胞。
【請求項１６】
請求項１０から１２のいずれか１項に記載の組換え遺伝子発現カセットを含む組換え遺伝子発現調節系。
【請求項１】
（ａ）下記を含む第１のポリペプチドをコードするポリヌクレオチドを含む、宿主細胞にて発現可能な第１の組換え遺伝子発現カセットと、
（ｉ）発現が調節される遺伝子と関係する応答エレメントを認識するＤＮＡ結合ドメイン、及び
（ｉｉ）第１の核受容体リガンド結合ドメイン、
（ｂ）下記を含む第２のポリペプチドをコードするポリヌクレオチドを含む、宿主細胞にて発現可能な第２の組換え遺伝子発現カセットと、を含む組換え遺伝子発現調節系であって、
（ｉ）トランス活性化ドメイン、及び
（ｉｉ）第２の核受容体リガンド結合ドメイン、
前記第１の核受容体リガンド結合ドメイン又は前記第２の核受容体リガンド結合ドメインのうちの１つが、下記のうちの少なくとも１つのアミノ酸残基置換変異を含む点を除き、配列番号１アミノ酸配列と同一である組換え遺伝子発現調節系；Ｆ４８Ｙ、Ｆ４８Ｗ、Ｆ４８Ｌ、Ｆ４８Ｎ、Ｆ４８Ｒ、Ｆ４８Ｋ、Ｉ５１Ｍ、Ｉ５１Ｎ、Ｉ５１Ｌ、Ｔ５２Ｍ、Ｔ５２Ｅ、Ｔ５２Ｐ、Ｔ５２Ｒ、Ｔ５２Ｗ、Ｔ５２Ｇ、Ｔ５２Ｑ、Ｍ９２Ｌ、Ｍ９２Ｅ、Ｒ９５Ｈ、Ｒ９５Ｍ、Ｒ９５Ｗ、Ｖ９６Ｌ、Ｖ９６Ｗ、Ｖ９６Ｓ、Ｖ９６Ｅ、Ｆ１０９Ｗ、Ｆ１０９Ｐ、Ｆ１０９Ｌ、Ｆ１０９Ｍ、Ｆ１０９Ｎ、Ａ１１０Ｅ、Ａ１１０Ｎ、Ａ１１０Ｗ、Ｙ１２０Ｗ、Ｙ１２０Ｍ、Ｍ１２５Ｐ、Ｍ１２５Ｒ、Ｍ１２５Ｅ、Ｍ１２５Ｌ、Ｍ１２５Ｃ、Ｍ１２５Ｗ、Ｍ１２５Ｇ、Ｍ１２５Ｉ、Ｍ１２５Ｎ、Ｍ１２５Ｓ、Ｍ１２５Ｖ、Ｍ２１９Ｋ、Ｍ２１９Ｗ、Ｍ２１９Ｙ、Ｍ２１９Ａ、Ｌ２２３Ｋ、Ｌ２２３Ｒ、Ｌ２２３Ｙ、Ｌ２３４Ｍ、Ｌ２３４Ｉ、Ｌ２３４Ｒ、Ｌ２３４Ｗ、Ｗ２３８Ｐ、Ｗ２３８Ｅ、Ｗ２３８Ｙ、Ｗ２３８Ｍ、Ｗ２３８Ｌ、Ｎ１１９Ｆ／Ｖ９６Ｔ、Ｔ５２Ｖ／Ａ１１０Ｐ、Ｖ１０７Ｉ／Ｙ１２７Ｅ／Ｔ５２Ｖ、又は、Ｖ１０７Ｉ／Ｙ１２７Ｅ／Ａ１１０Ｐ。
【請求項２】
前記ＤＮＡ結合ドメインが、エクジソン受容体ＤＮＡ結合ドメイン、ＧＡＬ４ ＤＮＡ結合ドメイン、又はＬｅｘＡ ＤＮＡ結合ドメインである請求項１に記載の組換え遺伝子発現調節系。
【請求項３】
前記トランス活性化ドメインが、エクジソン受容体トランス活性化ドメイン、ＶＰ１６トランス活性化ドメイン、Ｂ４２酸性活性剤トランス活性化ドメイン、又はｐ６５トランス活性化ドメインである請求項１又は２に記載の組換え遺伝子発現調節系。
【請求項４】
前記ＤＮＡ結合ドメインがＧＡＬ４ ＤＮＡ結合ドメインである請求項３に記載の組換え遺伝子発現調節系。
【請求項５】
前記トランス活性化ドメインがＶＰ１６トランス活性化ドメインである請求項４に記載の組換え遺伝子発現調節系。
【請求項６】
請求項１から５のいずれか１項に記載の組換え遺伝子発現調節系を含むベクター。
【請求項７】
請求項１から５のいずれか１項に記載の組換え遺伝子発現調節系を含む宿主細胞。
【請求項８】
請求項６に記載のベクターを含む宿主細胞。
【請求項９】
アミノ酸残基置換変異を含む点を除き、配列番号１のアミノ酸配列と同一である核受容体リガンド結合ドメインが、脊椎動物レチノイドＸ受容体リガンド結合ドメイン、無脊椎動物レチノイドＸ受容体リガンド結合ドメイン、ｕｌｔｒａｓｐｉｒａｃｌｅタンパク質リガンド結合ドメイン、又は、第１のポリペプチド断片及び第２のポリペプチド断片を含むキメラリガンド結合ドメインであり、
前記第１のポリペプチド断片が、前記第２のポリペプチド断片と異なり、前記第１のポリペプチド断片及び前記第２のポリペプチド断片の各々が、脊椎動物レチノイドＸ受容体リガンド結合ドメイン、無脊椎動物レチノイドＸ受容体リガンド結合ドメイン、及びｕｌｔｒａｓｐｉｒａｃｌｅタンパク質リガンド結合ドメインから独立に選択される、請求項１から５のいずれか１項に記載の組換え遺伝子発現調節系。
【請求項１０】
ＤＮＡ結合ドメイン及び核受容体リガンド結合ドメインを含むポリペプチドをコードする単離されたポリヌクレオチドを含む組換え遺伝子発現カセットであって、
前記核受容体リガンド結合ドメインが、下記のうちの少なくとも１つのアミノ酸残基置換変異を含む点を除き、配列番号１アミノ酸配列と同一である組換え遺伝子発現カセット；Ｆ４８Ｙ、Ｆ４８Ｗ、Ｆ４８Ｌ、Ｆ４８Ｎ、Ｆ４８Ｒ、Ｆ４８Ｋ、Ｉ５１Ｍ、Ｉ５１Ｎ、Ｉ５１Ｌ、Ｔ５２Ｍ、Ｔ５２Ｅ、Ｔ５２Ｐ、Ｔ５２Ｒ、Ｔ５２Ｗ、Ｔ５２Ｇ、Ｔ５２Ｑ、Ｍ９２Ｌ、Ｍ９２Ｅ、Ｒ９５Ｈ、Ｒ９５Ｍ、Ｒ９５Ｗ、Ｖ９６Ｌ、Ｖ９６Ｗ、Ｖ９６Ｓ、Ｖ９６Ｅ、Ｆ１０９Ｗ、Ｆ１０９Ｐ、Ｆ１０９Ｌ、Ｆ１０９Ｍ、Ｆ１０９Ｎ、Ａ１１０Ｅ、Ａ１１０Ｎ、Ａ１１０Ｗ、Ｙ１２０Ｗ、Ｙ１２０Ｍ、Ｍ１２５Ｐ、Ｍ１２５Ｒ、Ｍ１２５Ｅ、Ｍ１２５Ｌ、Ｍ１２５Ｃ、Ｍ１２５Ｗ、Ｍ１２５Ｇ、Ｍ１２５Ｉ、Ｍ１２５Ｎ、Ｍ１２５Ｓ、Ｍ１２５Ｖ、Ｍ２１９Ｋ、Ｍ２１９Ｗ、Ｍ２１９Ｙ、Ｍ２１９Ａ、Ｌ２２３Ｋ、Ｌ２２３Ｒ、Ｌ２２３Ｙ、Ｌ２３４Ｍ、Ｌ２３４Ｉ、Ｌ２３４Ｒ、Ｌ２３４Ｗ、Ｗ２３８Ｐ、Ｗ２３８Ｅ、Ｗ２３８Ｙ、Ｗ２３８Ｍ、Ｗ２３８Ｌ、Ｎ１１９Ｆ／Ｖ９６Ｔ、Ｔ５２Ｖ／Ａ１１０Ｐ、Ｖ１０７Ｉ／Ｙ１２７Ｅ／Ｔ５２Ｖ、又は、Ｖ１０７Ｉ／Ｙ１２７Ｅ／Ａ１１０Ｐ。
【請求項１１】
前記少なくとも１つのアミノ酸残基置換変異がＶ１０７Ｉ／Ｙ１２７Ｅ／Ａ１１０Ｐである請求項１０に記載の組換え遺伝子発現カセット。
【請求項１２】
前記少なくとも１つのアミノ酸残基置換変異がＶ１０７Ｉ／Ｙ１２７Ｅ／Ｔ５２Ｖである請求項１０に記載の組換え遺伝子発現カセット。
【請求項１３】
請求項１０から１２のいずれか１項に記載の組換え遺伝子発現カセットを含むベクター。
【請求項１４】
請求項１０から１２のいずれか１項に記載の組換え遺伝子発現カセットを含む宿主細胞。
【請求項１５】
請求項１３に記載のベクターを含む宿主細胞。
【請求項１６】
請求項１０から１２のいずれか１項に記載の組換え遺伝子発現カセットを含む組換え遺伝子発現調節系。
【公開番号】特開２０１２−４５００９（Ｐ２０１２−４５００９Ａ）
【公開日】平成２４年３月８日（２０１２．３．８）
【国際特許分類】
【出願番号】特願２０１１−２７００６０（Ｐ２０１１−２７００６０）
【出願日】平成２３年１２月９日（２０１１．１２．９）
【分割の表示】特願２００７−５１１０６９（Ｐ２００７−５１１０６９）の分割
【原出願日】平成１７年５月２日（２００５．５．２）
【出願人】（５０６３８７００７）イントレクソン コーポレイション (7)
【Ｆターム（参考）】
【公開日】平成２４年３月８日（２０１２．３．８）
【国際特許分類】
【出願日】平成２３年１２月９日（２０１１．１２．９）
【分割の表示】特願２００７−５１１０６９（Ｐ２００７−５１１０６９）の分割
【原出願日】平成１７年５月２日（２００５．５．２）
【出願人】（５０６３８７００７）イントレクソン コーポレイション (7)
【Ｆターム（参考）】
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