多層の組織培養容器
【課題】本発明は細胞を培養するための容器を開示する。
【解決手段】容器は、基部を含み且つ基部の境界を少なくとも部分的になす上方に延びた壁を備える底部と、基部を含み且つ基部の境界を少なくとも部分的になす下方に延びた壁を備える頂部と、開口を画成する管状首部と、一以上の棚部とを含み、各棚部が基部と、基部の境界を少なくとも部分的になす上方に延びた壁とを備える。第１の棚部の上方に延びる壁が頂部の下方に延びる壁に隣接し、第１の棚部が底部と頂部の間に位置される。各棚部の基部がこれに形成された少なくとも一つの穴を有する。底部、頂部および一以上の棚部が、集合して、細胞を培養するための囲まれた容積を画成する。管状首部が容器から延び、囲まれた容積が、管状首部の開口によってアクセス可能である。有利には、この容器は、効率を高め且つ細胞培養のコストを減じる方法で、大量の細胞培養を提供する。
【解決手段】容器は、基部を含み且つ基部の境界を少なくとも部分的になす上方に延びた壁を備える底部と、基部を含み且つ基部の境界を少なくとも部分的になす下方に延びた壁を備える頂部と、開口を画成する管状首部と、一以上の棚部とを含み、各棚部が基部と、基部の境界を少なくとも部分的になす上方に延びた壁とを備える。第１の棚部の上方に延びる壁が頂部の下方に延びる壁に隣接し、第１の棚部が底部と頂部の間に位置される。各棚部の基部がこれに形成された少なくとも一つの穴を有する。底部、頂部および一以上の棚部が、集合して、細胞を培養するための囲まれた容積を画成する。管状首部が容器から延び、囲まれた容積が、管状首部の開口によってアクセス可能である。有利には、この容器は、効率を高め且つ細胞培養のコストを減じる方法で、大量の細胞培養を提供する。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は実験用容器に関する。より詳細には、本発明は多層の組織培養容器に関する。
【背景技術】
【０００２】
真核細胞等の細胞（セル）は、基礎研究および高スループットスクリーニングを含む様々な目的のために培養される。しかしながら、滅菌状態の下で細胞を培養することは面倒だし費用もかかる。よって、細胞を培養するためのより効率的で費用効果の高い実験用容器の要請がある。
【発明の概要】
【０００３】
本発明は、細胞を培養するための容器を開示する。容器は、基部を含む底部であって、底部の基部の境界を少なくとも部分的になす上方に延びた壁を備える底部と、基部を含む頂部であって、頂部の基部の境界を少なくとも部分的になす下方に延びた壁を備える頂部と、開口を画成する管状首部と、一以上の棚部とを含み、各棚部が基部と、棚部の基部の境界を少なくとも部分的になす上方に延びた壁とを備える。第１の棚部の上方に延びる壁が、頂部の下方に延びる壁に隣接し、第１の棚部が底部と頂部の間に位置される。各棚部の基部が、これに形成された少なくとも一つの穴を有する。底部、頂部および一以上の棚部が、集合して、細胞を培養するための囲まれた容積を画成する。管状首部が容器から延び、囲まれた容積が、管状首部の開口によってアクセス可能である。有利には、この容器は、効率を高め且つ細胞培養のコストを減じる方法で、大量の細胞培養を提供する。
【０００４】
本発明の容器は、培養容器の底面積（フットプリント；footprint）の表面積当たりの全培養面積を増加する。容器は、培養容器の底面積の表面積当たりの細胞の回収率（percent recovery）をも増加する。よって、容器は、効率的な大量細胞培養のための手段を提供する。このような容器は、手動および／または自動の方法で用いられる。例示的な実施形態は、限定されないが、標準的なBD Falcon T-175フラスコの総底面積を維持する容器を含み、よって、The Automation PartnershipのSelecT（商標）およびCompacT（商標）自動化細胞培養システム等の、自動化細胞培養システムと両立可能である。容器は、しかしながら、BD Falcon T-175フラスコ等の標準的フラスコの高さに比較して、拡大または縮小されることができる。特に、容器内における棚部の積み重なった配置は、細胞を培養するための表面積が拡大されるように高さが変更されることを可能にする。
【０００５】
加えて、容器の設計は、媒体を満たし除去するのに必要な操作の数を最小にし、これにより、細胞を培養する効率を上げ、各移動による容器の汚染の機会を減少する。好ましくは、容器は、容器の後壁にピペットがアクセスするのに十分大きい開口を含み、これにより、良好な細胞培養技術のための良好な実験室活動を促進する。例示的な実施形態は、限定されないが、１０ｍＬピペットさらには５０ｍＬピペットが後壁にアクセスするのに十分大きい開口を持った容器を含む。
【０００６】
また、容器の設計は、容器内の壁およびコーナーに沿って「引っ掛かった（hung up）」媒体さらには細胞の量を減少し、媒体および細胞の効率的な除去を可能にする。また、容器の設計は、液体（例えば媒体、燐酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ）、トリプシン）を効率的に異なる細胞層に分配し、これにより、必要とされる液体の量を減少させ、液体のさらなる分配を促進し、シーディング（seeding）中の細胞のさらなる分配を促進する。これは、より一貫した栄養素の分配、栄養素消費速度、細胞成長速度、および細胞採取時の解離速度を提供し、これにより、より一定の細胞成長および／または分化、さらには全細胞のより健康的な個体群を促進する。また、このような容器は、細胞成長と細胞の解離それぞれに必要な媒体および解離剤（例えばトリプシン）の量に関して、多大なコスト抑制をもたらす。要するに、本発明の容器は、細胞を培養することに関する労働と出費の量を減少させる。
【０００７】
本発明のこれらおよび他の特徴は、以下の詳細な説明と添付図面の検討を通じて、さらに良好に理解されるであろう。
【図面の簡単な説明】
【０００８】
【図１】本発明に従って形成された容器の斜視図である。
【図２】図１の２−２線に沿った断面図である。
【図３】容器の平面図である。
【図４】図３の４−４線に沿った断面図である。
【図５】容器の側面図である。
【図６】本発明で使用可能な底部の斜視図である。
【図７】図６の７−７線に沿った断面図である。
【図８】本発明で使用可能な頂部の斜視図である。
【図９】図８の９−９線に沿った断面図である。
【図１０】図８の１０−１０線に沿った断面図である。
【図１１】本発明で使用可能な棚部の斜視図である。
【図１２】図１１の１２−１２線に沿った断面図である。
【図１３】本発明に従って形成された容器の斜視図である。
【図１４】図１３の１４−１４線に沿った断面図である。
【図１５】本発明で使用可能な棚部の斜視図である。
【図１６】本発明に従って形成された容器中での細胞媒体の平衡を示す概略図である。
【図１７】本発明に従って形成された容器中でのピペットアクセスを示す概略図である。
【図１８】本発明に従って形成された容器中での、細胞媒体の層状配置を示す概略図である。
【図１９】本発明で使用可能な棚部の平面図である。
【図２０】図１９の２０−２０線に沿った断面図である。
【図２１】図２０の区分２１の拡大図である。
【図２２】図２０の区分２２の拡大図である。
【図２３】異なる格納壁形状を示す図である。
【図２４】異なる格納壁形状を示す図である。
【図２５】本発明で使用可能なキャップを示す図である。
【図２６】本発明で使用可能なキャップを示す図である。
【図２７】本発明で使用可能なキャップを示す図である。
【発明を実施するための形態】
【０００９】
図を参照すると、細胞培養のための容器１０が描かれている。当業者によって理解されるように、容器１０は種々の細胞培養で利用されることができる。容器１０は概して、底部１２、頂部１４、管状首部１６、および一以上の棚部２０を含む。管状首部１６は、これに画成された開口１８を有する。一以上の棚部２０は、底部１２と頂部１４の間に配置される。底部１２、頂部１４および棚部２０は、集合して、細胞を培養するための囲まれた容積２２を画成する。管状首部１６は容器１０から延び、囲まれた容積２２は、管状首部１６の開口１８によってアクセス可能である。
【００１０】
底部１２は、概ね盆（トレイ）形状とされ、基部２４を有する。基部２４から上方に壁２６が延びる。壁２６は少なくとも部分的に基部２４の境界をなす。好ましくは、壁２６は周縁で完全に基部２４の境界をなす。
【００１１】
容器の望まれる全体サイズに依存して、一以上の棚部２０が利用されることができる。棚部２０の量が多いと、容器１０の細胞培養容量が増加する。ガス流と分配における制限のため、過剰なサイズは望まれない。二つまたは四つの棚部２０を利用する実施形態が考えられる。しかしながら、他の数量が利用されることもできる。それぞれの棚部２０は、概ね盆形状とされ、基部２８を有し、基部２８から上方に延びる壁３０を有し、壁３０は少なくとも部分的に基部２８の境界をなす。好ましくは、それぞれの棚部２０に対し、壁３０は周縁で完全に基部２８の境界をなす。加えて、少なくとも一つの穴３２が、それぞれの棚部２０の基部２８を通じて形成される。好ましくは、それぞれの棚部２０は少なくとも二つの穴３２、ガス伝達穴３２ａと流れ穴３２ｂを含む。以下でさらに論じられるように、ガス流穴３２ａは、ガス流が容器１０全体に行き渡れるように、棚部２０を通したガス伝達を可能とする。流れ穴３２ｂは、底部１２および棚部２０によって画成されるような容器１０の種々の支持層の間に細胞媒体（セルメディア；cell media）を分配するよう、容器１０内に配置された細胞媒体を平衡させるために設けられる。それぞれの棚部２０のために二つ穴の構成を利用することが好ましいけれども、ガス伝達と平衡の両方の機能を実行することができる単一の穴３２が、それぞれの棚部２０に設けられてもよい。さらに、ガス伝達と平衡の一方または両方の機能のため、二つより多い穴３２が利用されてもよい。それぞれの棚部２０のガス伝達穴３２ａと流れ穴３２ｂは離間されるのが好ましい。
【００１２】
頂部１４は、概して逆さ盆形状を有し、基部３４と壁３６を有し、壁３６は、基部３４から下方に延び、少なくとも部分的に基部３４の境界をなす。好ましくは、管状首部１６が頂部１４に一体に形成され、頂部１４から延びる。代替的に、頂部１４に開口が形成され、管状首部１６が別部品として形成され、溶着や接着等の任意の既知の技術を使って頂部１４に固定されてもよい。頂部１４から、管状首部１６が取り付けられた一以上の棚部２０内に延びる開口を形成することもさらに可能である。管状首部１６の開口１８は、楕円形（円形を含む）または半円形であってもよく、管状首部１６の長さに沿って一定のあるいは可変の形状に形成されることができる（例えば、管状首部１６の長さに沿って、開口１８の一部が楕円形であり、一部が半円形である）。
【００１３】
底部１２、頂部１４および一以上の棚部２０は、集合して容器１０を形成するよう、積み重ねられた方法で配置される。好ましくは、構成部品は、対象の細胞と両立可能な（compatible）熱可塑性材料から形成される。ポリスチレンが利用されてもよい。当業者に認識されるように、他の材料が利用されてもよい。構成部品は、透明に形成されたり、薄く色付けされたり（例えば青く）、あるいは着色されたり（例えば琥珀色に）することができる。加えて、底部１２、頂部１４および棚部２０の種々の部分は、ある特定条件を高めるよう、変形され、あるいは処理されることができる。例えば、一以上の生物学的薬品が、底部１２、頂部１４および／または棚部２０の一以上の部分に適用されることができる。一以上の生物学的薬品は、限定しないが、細胞外基質（extracellular matrix）、またはその成分、例えばラミニン（laminin）、フィブロネクチン、コラーゲン、およびこれらの任意の組み合わせを含む。加えて、あるいは代替的に、合成剤が適用されてもよい。表面は、例えば組織培養処理またはプラズマ重合法により、予め処理されることもできる。当業者に認識されるように、これらの種々の処理または変更は、種々の組み合わせで使用され、意図される目的に応じて利用される。
【００１４】
底部１２、頂部１４および棚部２０は、容器１０を形成すべく隣接される。特に、頂部１４の壁３６は、頂部１４に隣接して位置された棚部２０の壁３０に隣接される。全ての棚部２０は、底部１２と頂部１４の間に位置される。隣接する複数の棚部２０は、積み重ねられた方法で配置され、積み重ねられた下段の棚部２０の壁３０は、積み重ねられて隣接する上段の棚部２０に隣接する。底部１２は、底部１２に隣接する棚部２０に隣接され、当該棚部２０は、複数の棚部２０が用いられている場合、積み重ねられた最下段の棚部２０でなければならない。底部１２の壁２６は、隣接する棚部２０に隣接される。これらの境界における液密シールを提供するため、溶着（例えば超音波溶接による）、接着、および／または機械的接続（例えば噛み合う舌片および溝）等のあらゆる公知の技術が、任意の組み合わせで利用されることができる。ガスケット等のシール部材が、頂部１４と隣接する棚部２０との間などの、隣接部品の間に介設されることができる。ガスケット材料は、ガス透過性だが液体不透過性であるように選択されることができる。加えて、一以上の排気口３７が、底部１２、頂部１４および／または一以上の棚部２０に形成されてもよい。ガス透過性／液体不透過性の膜（メンブレン）が、一以上の排気口３７を横切って延びるよう設けられてもよい。
【００１５】
底部１２、頂部１４および棚部２０は、細胞培養のための異なる表面積を提供するよう、様々な形状を持ったサイズとされることができる。したがって、容器１０は、例えば図示されたフラスコ形状のような、異なったサイズおよび異なった形状で形成されることができる。代わりに、容器１０は、長方形状を有してもよく、あるいは他の多角形またはその他の形状で形成されることができる。好ましくは、容器１０は、棚部２０が縦に整列される直立位置に容器１０を支持するよう形成された第１の端部３８を含む。これは、平衡を達成すべく細胞媒体を充填するのに好ましい状態である。より好ましくは、第１の端部３８は、容器１０の、管状首部１６の開口１８から反対側の位置に配置される。第１の端部３８は、平坦面、または集合して着座面を画成する多点（a locus of points）であってもよい。
【００１６】
底部１２、頂部１４および棚部２０は容器１０を形成する。底部１２、頂部１４および棚部２０の壁２６、３６、３０はそれぞれ、また底部１２および頂部１４の基部２４、３４はそれぞれ、容器１０の外表面の部分を画成する。
【００１７】
平衡を達成するため、流れ穴３２ｂが第１の端部３８に近接して位置されるのが好ましい。この方法において、図１６に示されるように、細胞媒体Ｃが容器１０内に配置され、容器１０が第１の端部３８の上に静止するという状態で、細胞媒体Ｃは流れ穴３２ｂを通過し、底部１２、棚部２０および頂部１４の間において平衡状態で分割された容積（Ｖ１、Ｖ２、Ｖ３・・・）を達成する。平衡状態から、容器１０は、図１８に示されるように、底部１２の上に水平に静止するよう置かれる。細胞媒体Ｃの分割された量は、結局、底部１２または棚部２０によって画成される支持下層（supporting underlayer）に広がって分配させられる。
【００１８】
好ましくは、細胞媒体Ｃは、底部１２、棚部２０および頂部１４間の等しい容積の中に平衡化させられる。底部１２、頂部１４および棚部２０それぞれの基部２４、３４、２８の間の間隔ｚのような、等しい間隔が、特に容器１０の第１の端部３８に隣接した位置で、各層の間に等しい量を捕獲させる。
【００１９】
図１３−１４に示されるように、頂部１４の基部３４は概ね全体が平坦に形成される。良好なピペットアクセスを可能とすべく、図１４に示されるように、頂部１４の基部３４は、隣接する棚部２０の基部２８から離間された部分を有し、当該部分は、棚部２０の基部２８間に見られる間隔ｚ、または底部１２の基部２４と隣接する棚部２０の基部２８との間に見られる間隔ｚよりも大きく離間されている。図１７に示されるように、この増加された間隔（間隔ｑ）は、容器１０の全長を通じ第１の端部３８に接触するピペットアクセスを向上する。こうして、ピペットアクセスを利用し、容器１０を第１の端部３８の上に静止させて、ポストセル培養（post cell culturing）、細胞媒体および細胞の効率的回収が行われる。頂部１４の基部３４と隣接棚部２０の基部２８との間隔を増すことは、しかしながら、頂部１４と隣接棚部２０との間に、棚部２０同士の間に捕獲される量および底部１２と隣接棚部２０との間に捕獲される量と比べて、より多い量が捕獲されることに帰結する。
【００２０】
好ましくは、頂部１４の基部３４には、第１、第２および第３の部分４２、４４、４６がそれぞれ形成される。これらは、第１の端部３８の付近において、頂部１４の基部３４と隣接棚部２０の基部２８との間に捕獲される量を減少する。特に、図１８を参照して、第１の部分４２は隣接棚部２０の基部２８から距離ｘだけ離れて位置され、第２の部分４４は隣接棚部２０の基部２８から距離ｙだけ離れて位置され、距離ｘは距離ｙより大きい。第２の部分４４は、第１の端部３８に隣接した容積を部分的に取り囲むよう、第１の端部３８から延びる。好ましくは、距離ｙは、各隣接棚部２０間および底部１２と隣接棚部２０との間に設定された間隔ｚに等しい。第２の部分４４が、第１の端部３８から延びる所定長さＬを有し、所定長さＬが、目標平衡量を受け入れるのに必要な長さ以上であるのがさらに好ましい。この方法において、図１６に示されるように、細胞媒体Ｃが平衡化された状態で、第２の部分４４が細胞媒体Ｃの高さと同一にまたはそれを越えて延びる（容積Ｖ１、Ｖ２、Ｖ３・・・が平衡化されるように）。平衡状態において、細胞媒体Ｃの高さが第３の部分４６の下にあるのが好ましい。第２の部分４４の上にあり、第３の部分４６に接する細胞媒体Ｃの高さは、平衡化から生じた不均等な量に帰結する。第１、第２および第３の部分４２、４４、４６の配置により、第１の端部３８への良好なピペットアクセスがもたらされる。これは、第１の部分４２に隣接したより高い領域を通過するピペットによる、第１の端部３８付近の第２の部分４４に隣接した容積へのアクセスを含む。この配置は、種々の層間で平衡化されるべき等しい容積をも可能にする。第１および第２の部分４２、４４は、それぞれ平坦に形成され、平行に配置されることができるが、他の形状（例えば円弧状）も可能である。
【００２１】
基部３４の第３の部分４６は、第１および第２の部分４２、４４の間に延びてこれらを接続する。好ましくは第３の部分４６は平坦に形成されるが、円弧状などの他の形状に形成されてもよい。有利には、第３の部分４６は、印刷またはバーコード等の他の指標の付加に適した表面を画成する。第２の部分４４によって画成された平面に対し、第３の部分４６は、約１０〜９０°の範囲の角度、より好ましくは約１０〜３０°の範囲の角度、より好ましくは約２０°の角度で、配置される。第２の部分４４に対し傾斜して配置された第３の部分４６は、第１の端部３８の上に容器１０が静止している状態で、細胞媒体Ｃを第１の端部３８に向けるテーパ面を提供する。９０°の角度αが可能であるけれども、角度αは、いかなる細胞媒体または細胞も第１および第３の部分４２、４６の交差部に捕獲されることを避けるよう、９０°より小さいのが好ましい。
【００２２】
第２の部分４４の使用により、図１に示されるように、凹部４８が容器１０に画成される。頂部１４の壁３６は部分的に凹部４８との境界をなす。凹部４８は、壁３６の露出部分において、ユーザーがこれに把持アクセスすることができるハンドル機能を提供する。
【００２３】
図２に示されるように、ガス伝達穴３２ａは、囲まれた容積２２の中にガス流路４０を画成するよう、直線状であるのが好ましい。好ましくは、ガス流路４０は、管状首部１６に画成された開口１８の付近に延びる。ガス流路４０は、棚部２０を通じて延びることにより、ガス流が、囲まれた容積２２の様々な部分に到達するのを許容する。
【００２４】
上述されたように、また図１８に示されるように、細胞培養使用状態において、容器１０は底部１２の上に静止するよう配置される。この位置で、細胞媒体Ｃは、その液体特性のため、対応する底部１２または棚部２０の基部２４、２８の面に広がって配置される。底部１２に関し、壁２６は、細胞媒体Ｃを基部２４の上に維持する流体格納（fluid containment）を提供する。棚部２０に関して、細胞媒体Ｃがいずれかの穴３２（３２ａ、３２ｂ）を通って通過するのを避ける格納を提供するため、格納壁５０が、それぞれの穴３２の端縁部に沿って配置され、堤防として機能する。好ましくは、棚部２０の壁３０の高さは、格納壁５０の高さよりも大きい。この方法において、棚部２０間の細胞媒体Ｃの各層の上にオープンスペースが維持されることができる。
【００２５】
同一容器１０内で同一量が各層に受け入れられるのが好ましいけれども、底部１２と棚部２０は、細胞媒体Ｃの異なる量を処理するよう構成されてもよい。底部１２の基部２４および壁２６は、底部１２上に細胞媒体Ｃを受け入れるための容積を画成する。各棚部２０の基部２８、壁３０および格納壁５０は、それらの上に細胞媒体Ｃを受け入れるための容積を画成する。底部１２と棚部２０は、４〜５０ミリリットルの範囲で細胞媒体Ｃの量をそれぞれ受け入れるよう構成されることができる。底部１２が、それに形成された穴３２を有しないので、底部１２の表面積は、各棚部２０の表面積より大きい。こうして、底部１２上の細胞媒体Ｃ層の高さは、棚部２０上の細胞媒体Ｃ層の高さより僅かに小さい高さを有する。間隔ｚは、細胞媒体Ｃの層上に十分なヘッドスペースを確保し、適切にガス分配できるよう、各層の細胞媒体Ｃの容量を考慮して設定される。
【００２６】
格納壁５０によって対応する穴３２に吸い入れられる（wicked）細胞媒体Ｃに関する関心が存在する。図１１、１５、１９に示されるように、格納壁５０は、円弧状の長手軸に沿って曲げられるのが好ましい。曲げられた形状は、毛細管引力に逆らって作用し、格納壁５０に無吸引効果（anti-wicking effect）を提供する。
穴３２（３２ａ、３２ｂ）が円弧状に形成され、その端縁部に沿って格納壁５０が配置されることができる。加えて、図１１、１５、１９に示されるように、穴３２は種々の形状を有することができる。特に、３２ａのガス伝達穴は、棚部２０の側端縁部５２の一部に沿って延びるよう形成され（図１１、１５）、または棚部２０の側端縁部５２の全長に沿って延びるよう形成され（図１９）ることができる。
【００２７】
格納壁５０には、他の無吸引特徴が与えられることができる。例えば、各棚部２０の基部２８に対して傾斜して配置されること（図２１）；円弧状の断面が与えられること（図２３）；および／または対応する穴３２から離れる方向に向く非平滑表面５３を含むこと、である。図２０〜２４に示されるように、非平滑表面５３は、種々の表面中断部または突起部を含むことができる。例えば出っ張り、小窪み、粗くされた領域、条痕等である。無吸引特徴は、毛細管引力を妨げることを意図される。
加えて、あるいは代わりに、格納壁５０は、細胞媒体Ｃをはじくための疎水性部分を有するよう作製または準備されてもよい。例えば、格納壁５０が終端する自由端縁５４は、疎水性であるように準備されてもよい。格納壁５０の他の部分が同様に扱われてもよい。この効果をさらに高めるため、棚部２０の基部２８の部分は、棚部２０の基部２８上における細胞媒体Ｃの保持を高めるため、親水性に形成されてもよい。これらの種々の無吸引特徴は様々な組み合わせで用いられることができる。
【００２８】
容器１０は、追加の特徴または変更が与えられることができる。例えば、図２、２５を参照して、管状首部１６は、容器１０に対して異なった角度の向きで設けられることができる。図２に示されるように、管状首部１６は、最上段の棚部２０の基部２８によって画成される平面に対して角度βで配置される長手軸に沿って延びる。
角度βは約０°〜９０°の範囲内にあってもよい。０°において、管状首部１６は、図２に示されるように、頂部１４の側面から突出する。９０°において、管状首部１６は、図２５に示されるように、鉛直の向きを有し、頂部１４の基部３４から突出する。この配置により、ガス流路４０を通り、底部１２の基部２４付近に位置される容積に至るピペットアクセスが、細胞媒体または細胞の除去のために提供される。
角度βは代替的に鋭角であってもよい。
【００２９】
容器１０は、他の容器に積み重ねることができるよう形成されるのが好ましい。このような積み重ねを達成するため、頂部１４が、底部１２によって画成される着座面に平行な上部着座面を画成するのが好ましい。この方法において、二以上の容器１０が積み重ねられ、上部に積み重ねられた容器の底部１２は、下部に積み重ねられた容器１０の頂部１４によって支持される。安定性を高めるため、ビード５６が、底部１２の外面に画成されてもよい。これに対応して、頂部１４の壁３６は、基部３４から僅かに突出するよう形成されてもよい。壁３６は、ビード５６を入れ子状に受け入れ、積み重ねられた状態において横の安定性を与える。留意すべきは、頂部１４の壁３６が、特に基部３４から突出することにより、上部に積み重ねられた容器１０の重量を主に支持するよう構成されることである。こうして、凹部４８の存在による不安定性の問題は回避される。
【００３０】
棚部２０の基部２８は好ましくは平坦に形成される。代わりに、基部２８は、表面積を増すため、波状、起伏状または他の形状で形成されることができる。いかなる形状でも、棚部２０によって支持される細胞媒体Ｃの層が、底部１２上に静止する容器１０と平行に配置されるのが好ましい。底部１２の基部２４は、同様に、増大された表面積を有するよう形成された、波状、起伏状または他の形状であるよう形成されることができる。いかなる形状でも、底部１２によって支持される細胞媒体Ｃの層が、細胞媒体Ｃの他の層と平行であるのが好ましい。
【００３１】
アッセンブリとしての容器１０は、開口１８をシールするような、管状首部１６に取り付けられるように形成された対応するキャップ５８を設けられることができる。摩擦嵌合、締まり嵌め、ねじ取り付けまたはバヨネット（差し込み）取り付けなどの、取り付けを可能とするあらゆる公知の構成が、利用可能である。キャップ５８は、排気の無いよう固体で形成されることができる。代わりに、キャップ５８は、ガス透過／液体不透過膜６１を含む一以上の排気口６０が設けられてもよい。さらに、キャップ５８は、取り囲まれた容積２２と外部固定物との間の選択的な無菌接続を可能とする一以上の調節弁６２を含むことができる。さらに、キャップ５８は、一以上の供給管Ｔ（例えばガス供給管）との直接的且つ連続的な連通を可能にする一以上の管継手６４を含むことができる。
【００３２】
使用において、容器１０が第１の端部３８の上に置かれ、十分な量の細胞媒体Ｃが、開口１８を介して囲まれた容積２２に導入され、底部１２および各棚部２０に対し目標容量を与える。ピペットが細胞媒体Ｃを導入するために用いられ、ピペットは開口１８を通じて、頂部１４と隣接棚部２０の間の囲まれた容積２２に挿入される。導入された細胞媒体Ｃは、第１の端部３８に隣接した容積に集まり、流れ穴３２ｂの間で平衡化し、底部１２と各棚部２０に対応した、細胞媒体Ｃの分割された量を提供する。平衡化されると、容器１０は底部１２上に静止するよう調整され、細胞媒体Ｃは、底部１２と各棚部２０に広がって分散される。キャップ５８が、開口１８をシールするために管状首部１６に取り付けられてもよい。その後、容器１０はインキュベーター（培養器）に置かれることができる。運搬のため、容器１０が縦に保持され、細胞媒体Ｃが、第１の端部３８に隣接した囲まれた容積２２内に蓄積されるのが好ましい。培養の間、複数の容器１０が積み重ねられてもよい。
【００３３】
交換や細胞採取の目的で細胞媒体Ｃを抽出するため、容器１０は第１の端部３８の上に置かれる。ピペットまたは他の抽出器具が、第１の端部３８に隣接した位置から細胞媒体Ｃを抽出するために導入される。これは完全な除去を可能にする。ピペットは、頂部１４と隣接棚部２０の間の囲まれた容積２２に導入され、第１の端部３８に隣接した容積に、抽出のためアクセスする。細胞媒体Ｃは、負圧下で、流れ穴３２ｂを通じ、頂部１４に隣接した容積へと、そこからの抽出のため吸引される。代わりに、細胞媒体Ｃは開口１８を通じて注入されることができる。トリプシンまたは他の解離剤が、採取のため細胞を解放させるのに利用されることができる。
【符号の説明】
【００３４】
１０ 容器
１２ 底部
１４ 頂部
１６ 管状首部
１８ 開口
２０ 棚部
２２ 囲まれた容積
２４ 基部
２６ 壁
２８ 基部
３０ 壁
３２ 穴
３４ 基部
３６ 壁
【技術分野】
【０００１】
本発明は実験用容器に関する。より詳細には、本発明は多層の組織培養容器に関する。
【背景技術】
【０００２】
真核細胞等の細胞（セル）は、基礎研究および高スループットスクリーニングを含む様々な目的のために培養される。しかしながら、滅菌状態の下で細胞を培養することは面倒だし費用もかかる。よって、細胞を培養するためのより効率的で費用効果の高い実験用容器の要請がある。
【発明の概要】
【０００３】
本発明は、細胞を培養するための容器を開示する。容器は、基部を含む底部であって、底部の基部の境界を少なくとも部分的になす上方に延びた壁を備える底部と、基部を含む頂部であって、頂部の基部の境界を少なくとも部分的になす下方に延びた壁を備える頂部と、開口を画成する管状首部と、一以上の棚部とを含み、各棚部が基部と、棚部の基部の境界を少なくとも部分的になす上方に延びた壁とを備える。第１の棚部の上方に延びる壁が、頂部の下方に延びる壁に隣接し、第１の棚部が底部と頂部の間に位置される。各棚部の基部が、これに形成された少なくとも一つの穴を有する。底部、頂部および一以上の棚部が、集合して、細胞を培養するための囲まれた容積を画成する。管状首部が容器から延び、囲まれた容積が、管状首部の開口によってアクセス可能である。有利には、この容器は、効率を高め且つ細胞培養のコストを減じる方法で、大量の細胞培養を提供する。
【０００４】
本発明の容器は、培養容器の底面積（フットプリント；footprint）の表面積当たりの全培養面積を増加する。容器は、培養容器の底面積の表面積当たりの細胞の回収率（percent recovery）をも増加する。よって、容器は、効率的な大量細胞培養のための手段を提供する。このような容器は、手動および／または自動の方法で用いられる。例示的な実施形態は、限定されないが、標準的なBD Falcon T-175フラスコの総底面積を維持する容器を含み、よって、The Automation PartnershipのSelecT（商標）およびCompacT（商標）自動化細胞培養システム等の、自動化細胞培養システムと両立可能である。容器は、しかしながら、BD Falcon T-175フラスコ等の標準的フラスコの高さに比較して、拡大または縮小されることができる。特に、容器内における棚部の積み重なった配置は、細胞を培養するための表面積が拡大されるように高さが変更されることを可能にする。
【０００５】
加えて、容器の設計は、媒体を満たし除去するのに必要な操作の数を最小にし、これにより、細胞を培養する効率を上げ、各移動による容器の汚染の機会を減少する。好ましくは、容器は、容器の後壁にピペットがアクセスするのに十分大きい開口を含み、これにより、良好な細胞培養技術のための良好な実験室活動を促進する。例示的な実施形態は、限定されないが、１０ｍＬピペットさらには５０ｍＬピペットが後壁にアクセスするのに十分大きい開口を持った容器を含む。
【０００６】
また、容器の設計は、容器内の壁およびコーナーに沿って「引っ掛かった（hung up）」媒体さらには細胞の量を減少し、媒体および細胞の効率的な除去を可能にする。また、容器の設計は、液体（例えば媒体、燐酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ）、トリプシン）を効率的に異なる細胞層に分配し、これにより、必要とされる液体の量を減少させ、液体のさらなる分配を促進し、シーディング（seeding）中の細胞のさらなる分配を促進する。これは、より一貫した栄養素の分配、栄養素消費速度、細胞成長速度、および細胞採取時の解離速度を提供し、これにより、より一定の細胞成長および／または分化、さらには全細胞のより健康的な個体群を促進する。また、このような容器は、細胞成長と細胞の解離それぞれに必要な媒体および解離剤（例えばトリプシン）の量に関して、多大なコスト抑制をもたらす。要するに、本発明の容器は、細胞を培養することに関する労働と出費の量を減少させる。
【０００７】
本発明のこれらおよび他の特徴は、以下の詳細な説明と添付図面の検討を通じて、さらに良好に理解されるであろう。
【図面の簡単な説明】
【０００８】
【図１】本発明に従って形成された容器の斜視図である。
【図２】図１の２−２線に沿った断面図である。
【図３】容器の平面図である。
【図４】図３の４−４線に沿った断面図である。
【図５】容器の側面図である。
【図６】本発明で使用可能な底部の斜視図である。
【図７】図６の７−７線に沿った断面図である。
【図８】本発明で使用可能な頂部の斜視図である。
【図９】図８の９−９線に沿った断面図である。
【図１０】図８の１０−１０線に沿った断面図である。
【図１１】本発明で使用可能な棚部の斜視図である。
【図１２】図１１の１２−１２線に沿った断面図である。
【図１３】本発明に従って形成された容器の斜視図である。
【図１４】図１３の１４−１４線に沿った断面図である。
【図１５】本発明で使用可能な棚部の斜視図である。
【図１６】本発明に従って形成された容器中での細胞媒体の平衡を示す概略図である。
【図１７】本発明に従って形成された容器中でのピペットアクセスを示す概略図である。
【図１８】本発明に従って形成された容器中での、細胞媒体の層状配置を示す概略図である。
【図１９】本発明で使用可能な棚部の平面図である。
【図２０】図１９の２０−２０線に沿った断面図である。
【図２１】図２０の区分２１の拡大図である。
【図２２】図２０の区分２２の拡大図である。
【図２３】異なる格納壁形状を示す図である。
【図２４】異なる格納壁形状を示す図である。
【図２５】本発明で使用可能なキャップを示す図である。
【図２６】本発明で使用可能なキャップを示す図である。
【図２７】本発明で使用可能なキャップを示す図である。
【発明を実施するための形態】
【０００９】
図を参照すると、細胞培養のための容器１０が描かれている。当業者によって理解されるように、容器１０は種々の細胞培養で利用されることができる。容器１０は概して、底部１２、頂部１４、管状首部１６、および一以上の棚部２０を含む。管状首部１６は、これに画成された開口１８を有する。一以上の棚部２０は、底部１２と頂部１４の間に配置される。底部１２、頂部１４および棚部２０は、集合して、細胞を培養するための囲まれた容積２２を画成する。管状首部１６は容器１０から延び、囲まれた容積２２は、管状首部１６の開口１８によってアクセス可能である。
【００１０】
底部１２は、概ね盆（トレイ）形状とされ、基部２４を有する。基部２４から上方に壁２６が延びる。壁２６は少なくとも部分的に基部２４の境界をなす。好ましくは、壁２６は周縁で完全に基部２４の境界をなす。
【００１１】
容器の望まれる全体サイズに依存して、一以上の棚部２０が利用されることができる。棚部２０の量が多いと、容器１０の細胞培養容量が増加する。ガス流と分配における制限のため、過剰なサイズは望まれない。二つまたは四つの棚部２０を利用する実施形態が考えられる。しかしながら、他の数量が利用されることもできる。それぞれの棚部２０は、概ね盆形状とされ、基部２８を有し、基部２８から上方に延びる壁３０を有し、壁３０は少なくとも部分的に基部２８の境界をなす。好ましくは、それぞれの棚部２０に対し、壁３０は周縁で完全に基部２８の境界をなす。加えて、少なくとも一つの穴３２が、それぞれの棚部２０の基部２８を通じて形成される。好ましくは、それぞれの棚部２０は少なくとも二つの穴３２、ガス伝達穴３２ａと流れ穴３２ｂを含む。以下でさらに論じられるように、ガス流穴３２ａは、ガス流が容器１０全体に行き渡れるように、棚部２０を通したガス伝達を可能とする。流れ穴３２ｂは、底部１２および棚部２０によって画成されるような容器１０の種々の支持層の間に細胞媒体（セルメディア；cell media）を分配するよう、容器１０内に配置された細胞媒体を平衡させるために設けられる。それぞれの棚部２０のために二つ穴の構成を利用することが好ましいけれども、ガス伝達と平衡の両方の機能を実行することができる単一の穴３２が、それぞれの棚部２０に設けられてもよい。さらに、ガス伝達と平衡の一方または両方の機能のため、二つより多い穴３２が利用されてもよい。それぞれの棚部２０のガス伝達穴３２ａと流れ穴３２ｂは離間されるのが好ましい。
【００１２】
頂部１４は、概して逆さ盆形状を有し、基部３４と壁３６を有し、壁３６は、基部３４から下方に延び、少なくとも部分的に基部３４の境界をなす。好ましくは、管状首部１６が頂部１４に一体に形成され、頂部１４から延びる。代替的に、頂部１４に開口が形成され、管状首部１６が別部品として形成され、溶着や接着等の任意の既知の技術を使って頂部１４に固定されてもよい。頂部１４から、管状首部１６が取り付けられた一以上の棚部２０内に延びる開口を形成することもさらに可能である。管状首部１６の開口１８は、楕円形（円形を含む）または半円形であってもよく、管状首部１６の長さに沿って一定のあるいは可変の形状に形成されることができる（例えば、管状首部１６の長さに沿って、開口１８の一部が楕円形であり、一部が半円形である）。
【００１３】
底部１２、頂部１４および一以上の棚部２０は、集合して容器１０を形成するよう、積み重ねられた方法で配置される。好ましくは、構成部品は、対象の細胞と両立可能な（compatible）熱可塑性材料から形成される。ポリスチレンが利用されてもよい。当業者に認識されるように、他の材料が利用されてもよい。構成部品は、透明に形成されたり、薄く色付けされたり（例えば青く）、あるいは着色されたり（例えば琥珀色に）することができる。加えて、底部１２、頂部１４および棚部２０の種々の部分は、ある特定条件を高めるよう、変形され、あるいは処理されることができる。例えば、一以上の生物学的薬品が、底部１２、頂部１４および／または棚部２０の一以上の部分に適用されることができる。一以上の生物学的薬品は、限定しないが、細胞外基質（extracellular matrix）、またはその成分、例えばラミニン（laminin）、フィブロネクチン、コラーゲン、およびこれらの任意の組み合わせを含む。加えて、あるいは代替的に、合成剤が適用されてもよい。表面は、例えば組織培養処理またはプラズマ重合法により、予め処理されることもできる。当業者に認識されるように、これらの種々の処理または変更は、種々の組み合わせで使用され、意図される目的に応じて利用される。
【００１４】
底部１２、頂部１４および棚部２０は、容器１０を形成すべく隣接される。特に、頂部１４の壁３６は、頂部１４に隣接して位置された棚部２０の壁３０に隣接される。全ての棚部２０は、底部１２と頂部１４の間に位置される。隣接する複数の棚部２０は、積み重ねられた方法で配置され、積み重ねられた下段の棚部２０の壁３０は、積み重ねられて隣接する上段の棚部２０に隣接する。底部１２は、底部１２に隣接する棚部２０に隣接され、当該棚部２０は、複数の棚部２０が用いられている場合、積み重ねられた最下段の棚部２０でなければならない。底部１２の壁２６は、隣接する棚部２０に隣接される。これらの境界における液密シールを提供するため、溶着（例えば超音波溶接による）、接着、および／または機械的接続（例えば噛み合う舌片および溝）等のあらゆる公知の技術が、任意の組み合わせで利用されることができる。ガスケット等のシール部材が、頂部１４と隣接する棚部２０との間などの、隣接部品の間に介設されることができる。ガスケット材料は、ガス透過性だが液体不透過性であるように選択されることができる。加えて、一以上の排気口３７が、底部１２、頂部１４および／または一以上の棚部２０に形成されてもよい。ガス透過性／液体不透過性の膜（メンブレン）が、一以上の排気口３７を横切って延びるよう設けられてもよい。
【００１５】
底部１２、頂部１４および棚部２０は、細胞培養のための異なる表面積を提供するよう、様々な形状を持ったサイズとされることができる。したがって、容器１０は、例えば図示されたフラスコ形状のような、異なったサイズおよび異なった形状で形成されることができる。代わりに、容器１０は、長方形状を有してもよく、あるいは他の多角形またはその他の形状で形成されることができる。好ましくは、容器１０は、棚部２０が縦に整列される直立位置に容器１０を支持するよう形成された第１の端部３８を含む。これは、平衡を達成すべく細胞媒体を充填するのに好ましい状態である。より好ましくは、第１の端部３８は、容器１０の、管状首部１６の開口１８から反対側の位置に配置される。第１の端部３８は、平坦面、または集合して着座面を画成する多点（a locus of points）であってもよい。
【００１６】
底部１２、頂部１４および棚部２０は容器１０を形成する。底部１２、頂部１４および棚部２０の壁２６、３６、３０はそれぞれ、また底部１２および頂部１４の基部２４、３４はそれぞれ、容器１０の外表面の部分を画成する。
【００１７】
平衡を達成するため、流れ穴３２ｂが第１の端部３８に近接して位置されるのが好ましい。この方法において、図１６に示されるように、細胞媒体Ｃが容器１０内に配置され、容器１０が第１の端部３８の上に静止するという状態で、細胞媒体Ｃは流れ穴３２ｂを通過し、底部１２、棚部２０および頂部１４の間において平衡状態で分割された容積（Ｖ１、Ｖ２、Ｖ３・・・）を達成する。平衡状態から、容器１０は、図１８に示されるように、底部１２の上に水平に静止するよう置かれる。細胞媒体Ｃの分割された量は、結局、底部１２または棚部２０によって画成される支持下層（supporting underlayer）に広がって分配させられる。
【００１８】
好ましくは、細胞媒体Ｃは、底部１２、棚部２０および頂部１４間の等しい容積の中に平衡化させられる。底部１２、頂部１４および棚部２０それぞれの基部２４、３４、２８の間の間隔ｚのような、等しい間隔が、特に容器１０の第１の端部３８に隣接した位置で、各層の間に等しい量を捕獲させる。
【００１９】
図１３−１４に示されるように、頂部１４の基部３４は概ね全体が平坦に形成される。良好なピペットアクセスを可能とすべく、図１４に示されるように、頂部１４の基部３４は、隣接する棚部２０の基部２８から離間された部分を有し、当該部分は、棚部２０の基部２８間に見られる間隔ｚ、または底部１２の基部２４と隣接する棚部２０の基部２８との間に見られる間隔ｚよりも大きく離間されている。図１７に示されるように、この増加された間隔（間隔ｑ）は、容器１０の全長を通じ第１の端部３８に接触するピペットアクセスを向上する。こうして、ピペットアクセスを利用し、容器１０を第１の端部３８の上に静止させて、ポストセル培養（post cell culturing）、細胞媒体および細胞の効率的回収が行われる。頂部１４の基部３４と隣接棚部２０の基部２８との間隔を増すことは、しかしながら、頂部１４と隣接棚部２０との間に、棚部２０同士の間に捕獲される量および底部１２と隣接棚部２０との間に捕獲される量と比べて、より多い量が捕獲されることに帰結する。
【００２０】
好ましくは、頂部１４の基部３４には、第１、第２および第３の部分４２、４４、４６がそれぞれ形成される。これらは、第１の端部３８の付近において、頂部１４の基部３４と隣接棚部２０の基部２８との間に捕獲される量を減少する。特に、図１８を参照して、第１の部分４２は隣接棚部２０の基部２８から距離ｘだけ離れて位置され、第２の部分４４は隣接棚部２０の基部２８から距離ｙだけ離れて位置され、距離ｘは距離ｙより大きい。第２の部分４４は、第１の端部３８に隣接した容積を部分的に取り囲むよう、第１の端部３８から延びる。好ましくは、距離ｙは、各隣接棚部２０間および底部１２と隣接棚部２０との間に設定された間隔ｚに等しい。第２の部分４４が、第１の端部３８から延びる所定長さＬを有し、所定長さＬが、目標平衡量を受け入れるのに必要な長さ以上であるのがさらに好ましい。この方法において、図１６に示されるように、細胞媒体Ｃが平衡化された状態で、第２の部分４４が細胞媒体Ｃの高さと同一にまたはそれを越えて延びる（容積Ｖ１、Ｖ２、Ｖ３・・・が平衡化されるように）。平衡状態において、細胞媒体Ｃの高さが第３の部分４６の下にあるのが好ましい。第２の部分４４の上にあり、第３の部分４６に接する細胞媒体Ｃの高さは、平衡化から生じた不均等な量に帰結する。第１、第２および第３の部分４２、４４、４６の配置により、第１の端部３８への良好なピペットアクセスがもたらされる。これは、第１の部分４２に隣接したより高い領域を通過するピペットによる、第１の端部３８付近の第２の部分４４に隣接した容積へのアクセスを含む。この配置は、種々の層間で平衡化されるべき等しい容積をも可能にする。第１および第２の部分４２、４４は、それぞれ平坦に形成され、平行に配置されることができるが、他の形状（例えば円弧状）も可能である。
【００２１】
基部３４の第３の部分４６は、第１および第２の部分４２、４４の間に延びてこれらを接続する。好ましくは第３の部分４６は平坦に形成されるが、円弧状などの他の形状に形成されてもよい。有利には、第３の部分４６は、印刷またはバーコード等の他の指標の付加に適した表面を画成する。第２の部分４４によって画成された平面に対し、第３の部分４６は、約１０〜９０°の範囲の角度、より好ましくは約１０〜３０°の範囲の角度、より好ましくは約２０°の角度で、配置される。第２の部分４４に対し傾斜して配置された第３の部分４６は、第１の端部３８の上に容器１０が静止している状態で、細胞媒体Ｃを第１の端部３８に向けるテーパ面を提供する。９０°の角度αが可能であるけれども、角度αは、いかなる細胞媒体または細胞も第１および第３の部分４２、４６の交差部に捕獲されることを避けるよう、９０°より小さいのが好ましい。
【００２２】
第２の部分４４の使用により、図１に示されるように、凹部４８が容器１０に画成される。頂部１４の壁３６は部分的に凹部４８との境界をなす。凹部４８は、壁３６の露出部分において、ユーザーがこれに把持アクセスすることができるハンドル機能を提供する。
【００２３】
図２に示されるように、ガス伝達穴３２ａは、囲まれた容積２２の中にガス流路４０を画成するよう、直線状であるのが好ましい。好ましくは、ガス流路４０は、管状首部１６に画成された開口１８の付近に延びる。ガス流路４０は、棚部２０を通じて延びることにより、ガス流が、囲まれた容積２２の様々な部分に到達するのを許容する。
【００２４】
上述されたように、また図１８に示されるように、細胞培養使用状態において、容器１０は底部１２の上に静止するよう配置される。この位置で、細胞媒体Ｃは、その液体特性のため、対応する底部１２または棚部２０の基部２４、２８の面に広がって配置される。底部１２に関し、壁２６は、細胞媒体Ｃを基部２４の上に維持する流体格納（fluid containment）を提供する。棚部２０に関して、細胞媒体Ｃがいずれかの穴３２（３２ａ、３２ｂ）を通って通過するのを避ける格納を提供するため、格納壁５０が、それぞれの穴３２の端縁部に沿って配置され、堤防として機能する。好ましくは、棚部２０の壁３０の高さは、格納壁５０の高さよりも大きい。この方法において、棚部２０間の細胞媒体Ｃの各層の上にオープンスペースが維持されることができる。
【００２５】
同一容器１０内で同一量が各層に受け入れられるのが好ましいけれども、底部１２と棚部２０は、細胞媒体Ｃの異なる量を処理するよう構成されてもよい。底部１２の基部２４および壁２６は、底部１２上に細胞媒体Ｃを受け入れるための容積を画成する。各棚部２０の基部２８、壁３０および格納壁５０は、それらの上に細胞媒体Ｃを受け入れるための容積を画成する。底部１２と棚部２０は、４〜５０ミリリットルの範囲で細胞媒体Ｃの量をそれぞれ受け入れるよう構成されることができる。底部１２が、それに形成された穴３２を有しないので、底部１２の表面積は、各棚部２０の表面積より大きい。こうして、底部１２上の細胞媒体Ｃ層の高さは、棚部２０上の細胞媒体Ｃ層の高さより僅かに小さい高さを有する。間隔ｚは、細胞媒体Ｃの層上に十分なヘッドスペースを確保し、適切にガス分配できるよう、各層の細胞媒体Ｃの容量を考慮して設定される。
【００２６】
格納壁５０によって対応する穴３２に吸い入れられる（wicked）細胞媒体Ｃに関する関心が存在する。図１１、１５、１９に示されるように、格納壁５０は、円弧状の長手軸に沿って曲げられるのが好ましい。曲げられた形状は、毛細管引力に逆らって作用し、格納壁５０に無吸引効果（anti-wicking effect）を提供する。
穴３２（３２ａ、３２ｂ）が円弧状に形成され、その端縁部に沿って格納壁５０が配置されることができる。加えて、図１１、１５、１９に示されるように、穴３２は種々の形状を有することができる。特に、３２ａのガス伝達穴は、棚部２０の側端縁部５２の一部に沿って延びるよう形成され（図１１、１５）、または棚部２０の側端縁部５２の全長に沿って延びるよう形成され（図１９）ることができる。
【００２７】
格納壁５０には、他の無吸引特徴が与えられることができる。例えば、各棚部２０の基部２８に対して傾斜して配置されること（図２１）；円弧状の断面が与えられること（図２３）；および／または対応する穴３２から離れる方向に向く非平滑表面５３を含むこと、である。図２０〜２４に示されるように、非平滑表面５３は、種々の表面中断部または突起部を含むことができる。例えば出っ張り、小窪み、粗くされた領域、条痕等である。無吸引特徴は、毛細管引力を妨げることを意図される。
加えて、あるいは代わりに、格納壁５０は、細胞媒体Ｃをはじくための疎水性部分を有するよう作製または準備されてもよい。例えば、格納壁５０が終端する自由端縁５４は、疎水性であるように準備されてもよい。格納壁５０の他の部分が同様に扱われてもよい。この効果をさらに高めるため、棚部２０の基部２８の部分は、棚部２０の基部２８上における細胞媒体Ｃの保持を高めるため、親水性に形成されてもよい。これらの種々の無吸引特徴は様々な組み合わせで用いられることができる。
【００２８】
容器１０は、追加の特徴または変更が与えられることができる。例えば、図２、２５を参照して、管状首部１６は、容器１０に対して異なった角度の向きで設けられることができる。図２に示されるように、管状首部１６は、最上段の棚部２０の基部２８によって画成される平面に対して角度βで配置される長手軸に沿って延びる。
角度βは約０°〜９０°の範囲内にあってもよい。０°において、管状首部１６は、図２に示されるように、頂部１４の側面から突出する。９０°において、管状首部１６は、図２５に示されるように、鉛直の向きを有し、頂部１４の基部３４から突出する。この配置により、ガス流路４０を通り、底部１２の基部２４付近に位置される容積に至るピペットアクセスが、細胞媒体または細胞の除去のために提供される。
角度βは代替的に鋭角であってもよい。
【００２９】
容器１０は、他の容器に積み重ねることができるよう形成されるのが好ましい。このような積み重ねを達成するため、頂部１４が、底部１２によって画成される着座面に平行な上部着座面を画成するのが好ましい。この方法において、二以上の容器１０が積み重ねられ、上部に積み重ねられた容器の底部１２は、下部に積み重ねられた容器１０の頂部１４によって支持される。安定性を高めるため、ビード５６が、底部１２の外面に画成されてもよい。これに対応して、頂部１４の壁３６は、基部３４から僅かに突出するよう形成されてもよい。壁３６は、ビード５６を入れ子状に受け入れ、積み重ねられた状態において横の安定性を与える。留意すべきは、頂部１４の壁３６が、特に基部３４から突出することにより、上部に積み重ねられた容器１０の重量を主に支持するよう構成されることである。こうして、凹部４８の存在による不安定性の問題は回避される。
【００３０】
棚部２０の基部２８は好ましくは平坦に形成される。代わりに、基部２８は、表面積を増すため、波状、起伏状または他の形状で形成されることができる。いかなる形状でも、棚部２０によって支持される細胞媒体Ｃの層が、底部１２上に静止する容器１０と平行に配置されるのが好ましい。底部１２の基部２４は、同様に、増大された表面積を有するよう形成された、波状、起伏状または他の形状であるよう形成されることができる。いかなる形状でも、底部１２によって支持される細胞媒体Ｃの層が、細胞媒体Ｃの他の層と平行であるのが好ましい。
【００３１】
アッセンブリとしての容器１０は、開口１８をシールするような、管状首部１６に取り付けられるように形成された対応するキャップ５８を設けられることができる。摩擦嵌合、締まり嵌め、ねじ取り付けまたはバヨネット（差し込み）取り付けなどの、取り付けを可能とするあらゆる公知の構成が、利用可能である。キャップ５８は、排気の無いよう固体で形成されることができる。代わりに、キャップ５８は、ガス透過／液体不透過膜６１を含む一以上の排気口６０が設けられてもよい。さらに、キャップ５８は、取り囲まれた容積２２と外部固定物との間の選択的な無菌接続を可能とする一以上の調節弁６２を含むことができる。さらに、キャップ５８は、一以上の供給管Ｔ（例えばガス供給管）との直接的且つ連続的な連通を可能にする一以上の管継手６４を含むことができる。
【００３２】
使用において、容器１０が第１の端部３８の上に置かれ、十分な量の細胞媒体Ｃが、開口１８を介して囲まれた容積２２に導入され、底部１２および各棚部２０に対し目標容量を与える。ピペットが細胞媒体Ｃを導入するために用いられ、ピペットは開口１８を通じて、頂部１４と隣接棚部２０の間の囲まれた容積２２に挿入される。導入された細胞媒体Ｃは、第１の端部３８に隣接した容積に集まり、流れ穴３２ｂの間で平衡化し、底部１２と各棚部２０に対応した、細胞媒体Ｃの分割された量を提供する。平衡化されると、容器１０は底部１２上に静止するよう調整され、細胞媒体Ｃは、底部１２と各棚部２０に広がって分散される。キャップ５８が、開口１８をシールするために管状首部１６に取り付けられてもよい。その後、容器１０はインキュベーター（培養器）に置かれることができる。運搬のため、容器１０が縦に保持され、細胞媒体Ｃが、第１の端部３８に隣接した囲まれた容積２２内に蓄積されるのが好ましい。培養の間、複数の容器１０が積み重ねられてもよい。
【００３３】
交換や細胞採取の目的で細胞媒体Ｃを抽出するため、容器１０は第１の端部３８の上に置かれる。ピペットまたは他の抽出器具が、第１の端部３８に隣接した位置から細胞媒体Ｃを抽出するために導入される。これは完全な除去を可能にする。ピペットは、頂部１４と隣接棚部２０の間の囲まれた容積２２に導入され、第１の端部３８に隣接した容積に、抽出のためアクセスする。細胞媒体Ｃは、負圧下で、流れ穴３２ｂを通じ、頂部１４に隣接した容積へと、そこからの抽出のため吸引される。代わりに、細胞媒体Ｃは開口１８を通じて注入されることができる。トリプシンまたは他の解離剤が、採取のため細胞を解放させるのに利用されることができる。
【符号の説明】
【００３４】
１０ 容器
１２ 底部
１４ 頂部
１６ 管状首部
１８ 開口
２０ 棚部
２２ 囲まれた容積
２４ 基部
２６ 壁
２８ 基部
３０ 壁
３２ 穴
３４ 基部
３６ 壁
【特許請求の範囲】
【請求項１】
細胞を培養するための容器であって、
基部を含む底部であって、前記底部の前記基部の境界を少なくとも部分的になす上方に延びた壁を備える底部と、
基部を含む頂部であって、前記頂部の前記基部の境界を少なくとも部分的になす下方に延びた壁を備える頂部と、
開口を画成する管状首部と、
一以上の棚部であって、各棚部が基部と、前記棚部の前記基部の境界を少なくとも部分的になす上方に延びた壁とを備える一以上の棚部と、
を備え、
前記一以上の棚部のうちの第１の棚部の前記上方に延びる壁が、前記頂部の前記下方に延びる壁に隣接し、
前記第１の棚部が前記底部と前記頂部の間に位置され、
前記各棚部の前記基部が少なくとも一つの穴を有し、
前記底部、前記頂部および前記一以上の棚部が、集合して、細胞を培養するための囲まれた容積を画成し、前記管状首部が前記容器から延び、前記囲まれた容積が、前記管状首部の前記開口によってアクセス可能である容器。
【請求項２】
前記少なくとも一つの棚部が第２の棚部を含み、前記第２の棚部が前記底部と前記第１の棚部の間に位置され、前記底部の壁が前記第２の棚部に隣接する、請求項１に記載の容器。
【請求項３】
前記容器が、第１の端部と、第１の容積と、第２の容積とを有し、前記第１の容積が、前記頂部と前記第１の棚部の間に画成され、前記第１の端部から所定長さ延び、前記第２の容積が、前記底部と前記第２の棚部の間に画成され、前記第１の端部から所定長さ延び、前記第１および第２の容積が実質的に等しい、請求項２に記載の容器。
【請求項４】
前記開口が、前記容器の前記第１の端部付近の前記第１の容積へのピペットアクセスを可能とするよう、整列されている、請求項３に記載の容器。
【請求項５】
前記各棚部に流れ穴が形成され、前記第１の容積が前記第１の棚部の前記流れ穴に連通され、前記第２の容積が前記第２の棚部の前記流れ穴に連通されている、請求項３に記載の容器。
【請求項６】
前記頂部の前記基部が、前記第１の棚部の前記基部から第１の距離だけ離れた第１の部分を有し、前記頂部の前記基部が、前記第１の棚部の前記基部から第２の距離だけ離れた第２の部分を有し、前記第１の距離が前記第２の距離より大きい、請求項３に記載の容器。
【請求項７】
前記開口が、前記容器の前記第１の端部付近の前記第１の容積へのピペットアクセスを可能とするよう、整列されている、請求項６に記載の容器。
【請求項８】
前記第２の部分が、前記容器の前記第１の端部から所定長さ延びる、請求項６に記載の容器。
【請求項９】
前記頂部の前記基部が第３の部分を含み、前記第３の部分が、前記頂部の前記基部の前記第１および第２の部分の間に延び、且つこれらを接続する、請求項６に記載の容器。
【請求項１０】
前記頂部の前記基部の前記第１および第２の部分が略平行に配置されている、請求項９に記載の容器。
【請求項１１】
前記第３の部分が、ほぼ平坦であり、前記基部の前記第２の部分によって画成される平面に対し角度を付けて配置され、前記角度が約１０〜９０°の範囲内にある、請求項１０に記載の容器。
【請求項１２】
前記角度が約１０〜３０°の範囲内にある、請求項１１に記載の容器。
【請求項１３】
前記角度が約２０°である、請求項１１に記載の容器。
【請求項１４】
前記管状首部が前記頂部から延びる、請求項６に記載の容器。
【請求項１５】
前記頂部が少なくとも一つの排気口をさらに含む、請求項１に記載の容器。
【請求項１６】
ガス透過性膜が前記排気口を横切って延びる、請求項１５に記載の容器。
【請求項１７】
前記管状首部の前記開口が、前記管状首部の長さに沿った少なくとも一部において、楕円形または半円形である、請求項１に記載の容器。
【請求項１８】
前記管状首部が長手軸に沿って延び、前記長手軸が、前記第１の棚部の前記基部によって画成される平面に対し角度を付けて配置され、前記角度が約０〜９０°の範囲内にある、請求項１に記載の容器。
【請求項１９】
前記角度が約０°である、請求項１８に記載の容器。
【請求項２０】
前記角度が約９０°である、請求項１８に記載の容器。
【請求項２１】
前記角度が鋭角である、請求項１８に記載の容器。
【請求項２２】
ガス伝達穴が前記各棚部に形成され、前記複数の棚部の前記ガス伝達穴が、直線状とされてガス流路を画成する、請求項１に記載の容器。
【請求項２３】
前記ガス流路が、前記管状首部に画成された前記開口の付近へと延びる、請求項２２に記載の容器。
【請求項２４】
流れ穴が前記各棚部に形成され、前記各棚部の前記流れ穴が、前記各棚部の前記ガス伝達穴から離間されている、請求項２２に記載の容器。
【請求項２５】
前記各棚部が、前記基部から上方に延びる格納壁を含み、前記格納壁が少なくとも一つの穴に沿って画成される、請求項１に記載の容器。
【請求項２６】
前記格納壁が、円弧状の長手軸に沿って曲げられる、請求項２５に記載の容器。
【請求項２７】
前記格納壁が、前記各棚部の前記基部に対し傾斜して配置される、請求項２５に記載の容器。
【請求項２８】
前記格納壁が円弧状の断面を有する、請求項２５に記載の容器。
【請求項２９】
前記格納壁が、前記各穴から離れる方向に向く非平滑表面を含む、請求項２５に記載の容器。
【請求項３０】
前記格納壁が自由端縁で終端し、前記格納壁が少なくとも前記自由端縁に沿って疎水性である、請求項２５に記載の容器。
【請求項３１】
前記各棚部の前記基部が、前記格納壁から離間された親水性部分を有する、請求項３０に記載の容器。
【請求項３２】
請求項１に従って形成された容器と、
前記管状首部に取り付けられるよう形成されたキャップと、
を備えるアセンブリ。
【請求項３３】
前記キャップに排気口が設けられる、請求項３２に記載のアセンブリ。
【請求項３４】
前記キャップに排気口が設けられない、請求項３２に記載のアセンブリ。
【請求項３５】
前記キャップが、前記囲まれた容積への選択的なアクセスを可能にするための弁を含む、請求項３２に記載のアセンブリ。
【請求項３６】
前記キャップが、一以上の管に接続するための手段を含む、請求項３２に記載のアセンブリ。
【請求項１】
細胞を培養するための容器であって、
基部を含む底部であって、前記底部の前記基部の境界を少なくとも部分的になす上方に延びた壁を備える底部と、
基部を含む頂部であって、前記頂部の前記基部の境界を少なくとも部分的になす下方に延びた壁を備える頂部と、
開口を画成する管状首部と、
一以上の棚部であって、各棚部が基部と、前記棚部の前記基部の境界を少なくとも部分的になす上方に延びた壁とを備える一以上の棚部と、
を備え、
前記一以上の棚部のうちの第１の棚部の前記上方に延びる壁が、前記頂部の前記下方に延びる壁に隣接し、
前記第１の棚部が前記底部と前記頂部の間に位置され、
前記各棚部の前記基部が少なくとも一つの穴を有し、
前記底部、前記頂部および前記一以上の棚部が、集合して、細胞を培養するための囲まれた容積を画成し、前記管状首部が前記容器から延び、前記囲まれた容積が、前記管状首部の前記開口によってアクセス可能である容器。
【請求項２】
前記少なくとも一つの棚部が第２の棚部を含み、前記第２の棚部が前記底部と前記第１の棚部の間に位置され、前記底部の壁が前記第２の棚部に隣接する、請求項１に記載の容器。
【請求項３】
前記容器が、第１の端部と、第１の容積と、第２の容積とを有し、前記第１の容積が、前記頂部と前記第１の棚部の間に画成され、前記第１の端部から所定長さ延び、前記第２の容積が、前記底部と前記第２の棚部の間に画成され、前記第１の端部から所定長さ延び、前記第１および第２の容積が実質的に等しい、請求項２に記載の容器。
【請求項４】
前記開口が、前記容器の前記第１の端部付近の前記第１の容積へのピペットアクセスを可能とするよう、整列されている、請求項３に記載の容器。
【請求項５】
前記各棚部に流れ穴が形成され、前記第１の容積が前記第１の棚部の前記流れ穴に連通され、前記第２の容積が前記第２の棚部の前記流れ穴に連通されている、請求項３に記載の容器。
【請求項６】
前記頂部の前記基部が、前記第１の棚部の前記基部から第１の距離だけ離れた第１の部分を有し、前記頂部の前記基部が、前記第１の棚部の前記基部から第２の距離だけ離れた第２の部分を有し、前記第１の距離が前記第２の距離より大きい、請求項３に記載の容器。
【請求項７】
前記開口が、前記容器の前記第１の端部付近の前記第１の容積へのピペットアクセスを可能とするよう、整列されている、請求項６に記載の容器。
【請求項８】
前記第２の部分が、前記容器の前記第１の端部から所定長さ延びる、請求項６に記載の容器。
【請求項９】
前記頂部の前記基部が第３の部分を含み、前記第３の部分が、前記頂部の前記基部の前記第１および第２の部分の間に延び、且つこれらを接続する、請求項６に記載の容器。
【請求項１０】
前記頂部の前記基部の前記第１および第２の部分が略平行に配置されている、請求項９に記載の容器。
【請求項１１】
前記第３の部分が、ほぼ平坦であり、前記基部の前記第２の部分によって画成される平面に対し角度を付けて配置され、前記角度が約１０〜９０°の範囲内にある、請求項１０に記載の容器。
【請求項１２】
前記角度が約１０〜３０°の範囲内にある、請求項１１に記載の容器。
【請求項１３】
前記角度が約２０°である、請求項１１に記載の容器。
【請求項１４】
前記管状首部が前記頂部から延びる、請求項６に記載の容器。
【請求項１５】
前記頂部が少なくとも一つの排気口をさらに含む、請求項１に記載の容器。
【請求項１６】
ガス透過性膜が前記排気口を横切って延びる、請求項１５に記載の容器。
【請求項１７】
前記管状首部の前記開口が、前記管状首部の長さに沿った少なくとも一部において、楕円形または半円形である、請求項１に記載の容器。
【請求項１８】
前記管状首部が長手軸に沿って延び、前記長手軸が、前記第１の棚部の前記基部によって画成される平面に対し角度を付けて配置され、前記角度が約０〜９０°の範囲内にある、請求項１に記載の容器。
【請求項１９】
前記角度が約０°である、請求項１８に記載の容器。
【請求項２０】
前記角度が約９０°である、請求項１８に記載の容器。
【請求項２１】
前記角度が鋭角である、請求項１８に記載の容器。
【請求項２２】
ガス伝達穴が前記各棚部に形成され、前記複数の棚部の前記ガス伝達穴が、直線状とされてガス流路を画成する、請求項１に記載の容器。
【請求項２３】
前記ガス流路が、前記管状首部に画成された前記開口の付近へと延びる、請求項２２に記載の容器。
【請求項２４】
流れ穴が前記各棚部に形成され、前記各棚部の前記流れ穴が、前記各棚部の前記ガス伝達穴から離間されている、請求項２２に記載の容器。
【請求項２５】
前記各棚部が、前記基部から上方に延びる格納壁を含み、前記格納壁が少なくとも一つの穴に沿って画成される、請求項１に記載の容器。
【請求項２６】
前記格納壁が、円弧状の長手軸に沿って曲げられる、請求項２５に記載の容器。
【請求項２７】
前記格納壁が、前記各棚部の前記基部に対し傾斜して配置される、請求項２５に記載の容器。
【請求項２８】
前記格納壁が円弧状の断面を有する、請求項２５に記載の容器。
【請求項２９】
前記格納壁が、前記各穴から離れる方向に向く非平滑表面を含む、請求項２５に記載の容器。
【請求項３０】
前記格納壁が自由端縁で終端し、前記格納壁が少なくとも前記自由端縁に沿って疎水性である、請求項２５に記載の容器。
【請求項３１】
前記各棚部の前記基部が、前記格納壁から離間された親水性部分を有する、請求項３０に記載の容器。
【請求項３２】
請求項１に従って形成された容器と、
前記管状首部に取り付けられるよう形成されたキャップと、
を備えるアセンブリ。
【請求項３３】
前記キャップに排気口が設けられる、請求項３２に記載のアセンブリ。
【請求項３４】
前記キャップに排気口が設けられない、請求項３２に記載のアセンブリ。
【請求項３５】
前記キャップが、前記囲まれた容積への選択的なアクセスを可能にするための弁を含む、請求項３２に記載のアセンブリ。
【請求項３６】
前記キャップが、一以上の管に接続するための手段を含む、請求項３２に記載のアセンブリ。
【図１】
【図２】
【図３】
【図４】
【図５】
【図６】
【図７】
【図８】
【図９】
【図１０】
【図１１】
【図１２】
【図１３】
【図１４】
【図１５】
【図１７】
【図１９】
【図２０】
【図２１】
【図２２】
【図２３】
【図２４】
【図２５】
【図２６】
【図２７】
【図１６】
【図１８】
【図２】
【図３】
【図４】
【図５】
【図６】
【図７】
【図８】
【図９】
【図１０】
【図１１】
【図１２】
【図１３】
【図１４】
【図１５】
【図１７】
【図１９】
【図２０】
【図２１】
【図２２】
【図２３】
【図２４】
【図２５】
【図２６】
【図２７】
【図１６】
【図１８】
【公開番号】特開２０１１−２４５７７（Ｐ２０１１−２４５７７Ａ）
【公開日】平成２３年２月１０日（２０１１．２．１０）
【国際特許分類】
【外国語出願】
【出願番号】特願２０１０−１６４８７５（Ｐ２０１０−１６４８７５）
【出願日】平成２２年７月２２日（２０１０．７．２２）
【出願人】（５９５１１７０９１）ベクトン・ディキンソン・アンド・カンパニー (539)
【氏名又は名称原語表記】ＢＥＣＴＯＮ， ＤＩＣＫＩＮＳＯＮ ＡＮＤ ＣＯＭＰＡＮＹ
【住所又は居所原語表記】１ ＢＥＣＴＯＮ ＤＲＩＶＥ， ＦＲＡＮＫＬＩＮ ＬＡＫＥＳ， ＮＥＷ ＪＥＲＳＥＹ ０７４１７−１８８０， ＵＮＩＴＥＤ ＳＴＡＴＥＳ ＯＦ ＡＭＥＲＩＣＡ
【Ｆターム（参考）】
【公開日】平成２３年２月１０日（２０１１．２．１０）
【国際特許分類】
【出願番号】特願２０１０−１６４８７５（Ｐ２０１０−１６４８７５）
【出願日】平成２２年７月２２日（２０１０．７．２２）
【出願人】（５９５１１７０９１）ベクトン・ディキンソン・アンド・カンパニー (539)
【氏名又は名称原語表記】ＢＥＣＴＯＮ， ＤＩＣＫＩＮＳＯＮ ＡＮＤ ＣＯＭＰＡＮＹ
【住所又は居所原語表記】１ ＢＥＣＴＯＮ ＤＲＩＶＥ， ＦＲＡＮＫＬＩＮ ＬＡＫＥＳ， ＮＥＷ ＪＥＲＳＥＹ ０７４１７−１８８０， ＵＮＩＴＥＤ ＳＴＡＴＥＳ ＯＦ ＡＭＥＲＩＣＡ
【Ｆターム（参考）】
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