抗イデオタイプ抗体である抗ＣＡ−１２５及びアルミニウム誘導体を含有する医薬組成物
本発明は、モノクローナル抗体と、アジュバントとしてアルミニウム誘導体とを有するワクチンとしての非経口投与用医薬組成物に関する。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、非経口で適用するワクチンとして使用される医薬組成物の分野に関する。
【背景技術】
【０００２】
知られているように、予防又は治療ワクチンの免疫原性を増幅させるため、アルミニウム化合物などのアジュバントの使用は、非経口適用のための溶液又は懸濁液としての医薬投与形態の調製に一般的に考慮されている（非特許文献１）。これらの処方の標的は、最大且つ長時間の免疫効果を誘導するものである。
【０００３】
しかしながら、現在、登録され市販されているワクチンには、制限された量のアルミニウムアジュバントが使用されており、事実、欧州薬局方において、１．２５ｍｇ／投与と規定されている。
【０００４】
また、非特許文献２は、生物学的製品の推奨される個々の１回分の処方におけるアルミニウム量について、下記の通り（１）〜（３）を超えてはならないと規定している。
【０００５】
（１）アッセイによって同定される場合、０．８５ミリグラム
（２）添加したアルミニウム化合物の量に基づいて計算により同定される場合、１．１４ミリグラム
（３）使用したアルミニウムの量が安全且つ意図した効果を生じさせるのに必要であることを示すデータを条件として、アッセイにより同定される場合、１．２５ミリグラム
【０００６】
アルミニウムアジュバントの表面上に吸着された抗体の免疫原性は、吸着の程度に依存するようであるが（非特許文献３）、安全性プロフィールを保持しつつ最大限の免疫反応を達成するのに用いるべき最良の比率は明らかではない。例えば、世界保健機関（ＷＨＯ）は、破傷風及びジフテリアトキソイドに関して、８０％を超えるトキソイドのレベルにおけるアルミニウムアジュバント上への吸着を推奨している（非特許文献４及び５）。一方、８０％を超える水酸化アルミニウムへの破傷風成分の吸着が健常成人において免疫反応を向上させないというデータが示されている（非特許文献６）。
【０００７】
他の技術的問題は、かなり変化するワクチンの安定性である。これは、高温における保存に対する耐性によりランク付け可能であって、ジフテリア及び破傷風トキソイド並びにＢ型肝炎ワクチンは、最も高い熱安定性を示し、凍結乾燥したはしか、黄熱病及びＢＣＧワクチンは、中程度の位置を占め、経口用のポリオワクチンは、最も脆弱である（非特許文献７）。はしか、黄熱病及び結核に対する再構築されたワクチンは、不安定なワクチンである；これらは、再構築後にできるだけ早期に使用する必要があり、且つ免疫性付与の間、氷浴中で保持する必要がある。一価のワクチン又は組み合わせたワクチンの成分としての破傷風及びジフテリア（例えば、アルミニウム塩上に吸着されたもの）が３５〜３７℃で数週間安定であるが、周囲温度への曝露により、ワクチンのいくらかは分解する（非特許文献７の４８頁）。従って、これらの「安定な」型のワクチンに関し、低温条件での保存が規定されている（非特許文献８）。
【０００８】
複合蛋白質の活性本体の性質のため、これらの薬物製品は、一定の冷却連鎖（ｃｏｏｌｉｎｇ ｃｈａｉｎ）を必要とする、冷条件（２〜８℃）での保存が必要である。これにより、流通費が高くなり、全体的な安全性を危険にさらし、より重要な可能性のあることとして抗癌ワクチンなどのより有益性の高い薬物の全世界的な使用が制限される。従って、周囲温度及びこれよりも高い温度（２５〜３７℃）であっても薬物の一定の品質を確保するワクチン処方の開発は、全体的な安全性及びこれらの薬物の有効性を向上させる。このことは、患者に非常に有益であるばかりでなく、これらの貴重な薬物の全体的な取扱をも促進する。
【０００９】
他方、ヒトの癌の処置における免疫治療の重要性、特に、癌に対する治療ワクチンとしての抗イデオタイプモノクローナル抗体を使用することは、公知である。
【００１０】
斯かるワクチンは、宿主において、癌に対する体液性（ｈｕｍｏｕｒ）及び細胞作用を刺激する免疫系を活性化する。
【００１１】
斯かる種類の処方の開発及び定義は、ＡＣＡ１２５／ＭＥＮ２２３４（特許文献１に述べられているもの）に関して特に重要であり、これは、卵巣癌に対する治療ワクチンとして使用される意図のある非常に有望な抗イデオタイプモノクローナル抗体である。ＭＥＮ２２３４に対して、下記のＣＡインデックス名が指定されている：ｉｍｍｕｎｏｇｌｏｂｕｌｉｎ Ｇｌ， ａｎｔｉ−（ｍｏｕｓｅ ＯＣ １２５） （ｍｏｕｓｅ ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ ＡＣＡ−１２５ ｃｌｏｎｅ ３Ｄ５ ｇ−ｃｈａｉｎ）， ｄｉｓｕｌｆｉｄｅ ｗｉｔｈ ｍｏｕｓｅ ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ ＡＣＡ−１２５ ｃｌｏｎｅ ３Ｄ５ ｋ−ｃｈａｉｎ， ｄｉｍｅｒ。対応するＣＡＳ登録番号は、７９２９２１−１０−９である。提案されたＩＮＮは、Ａｂａｇｏｖｏｍａｂである。
【００１２】
ＭＥＮ２２３４は、マウスモノクローナル抗体ＯＣ１２５に対して生成されたマウスのモノクローナル抗体であって、癌関連抗原（ＴＡＡ）であるＣＡ１２５を認識する。ＭＥＮ２２３４は、ＣＡ１２５のＴＡＡの三次元構造に効率的に類似しており、宿主において、ＣＡ１２５抗原を発現するガン細胞を標的とする抗−抗イデオタイプ抗体（Ａｂ３）の産生を誘導する。また、ＭＥＮ２２３４は、宿主において、特にＣＡ１２５の腫瘍細胞に対する細胞免疫反応を引き起こし得る。
【００１３】
進行性の卵巣癌の患者の約８０％で、ＣＡ１２５の発現が上昇している。卵巣癌においてＣＡ１２５が過剰発現しているが、ヒトの臓器自体は、これらのガン細胞に対する効果的な免疫反応を開始し得ない。ＭＥＮ２２３４を含有する治療ワクチンによる処置は、拡散した卵巣癌細胞を攻撃し破壊する宿主の免疫系を復活させ得るべきである。
【００１４】
特許文献１は抗イデオタイプモノクローナル抗体である抗ＣＡ１２５について述べているが、病態の処置に適した特別な医薬処方については、述べていない。
【００１５】
非特許文献９では、抗体であるＡＣＡ−１２５について特徴付けをおこなっているが、処方は開発されていない。
【００１６】
非特許文献１０では、ＡＣＡ１２５を用いたワクチン接種を行っている；処方におけるアルミニウム濃度については、開示されておらず、先行技術に基づけば、当業者は、アジュバントとして比較的低濃度のアルミニウム（個々の一回分の投与当たり１．２５ｍｇ未満）を容易に想到し得る。
【００１７】
非特許文献１１では、卵巣癌に対するワクチンとして免疫原性を向上するようにＡＣＡ１２５ｈＦｃ（ＡＣＡ１２５のキメラ体）の持続的で内在的な放出を行うための送達システムについて述べているが、生物学的なカプセル化技術（ｂｉｏｅｎｃａｐｓｕｌａｔｉｏｎ ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ）に基づいたｉｎ ｖｉｔｒｏでの持続性薬剤を生じる。
【００１８】
さらなる文献は、ＭＥＮ２２３４を含む卵巣癌ワクチンに関する前臨床及び臨床試験の結果についてまとめているが、処方又は使用されるアジュバントの濃度に関する具体的なデータには言及していない（例えば、アルミニウム化合物が引用されていない）：非特許文献１２〜１５。
【特許文献１】欧州特許第７００３０５号明細書
【非特許文献１】Ｆｉｅｊｋａら著、Ｒｏｃｚ Ｐａｎｓｔｗ Ｚａｋｌ Ｈｉｇ、１９９３年、ｐ．７３−８０
【非特許文献２】２１ ＣＦＲ ６１０．１５、米国食品医薬品局
【非特許文献３】Ｃａｐｅｌｌｅら著、Ｖａｃｃｉｎｅ、２００５年、ｐ．１６８６−１６９４
【非特許文献４】Ｇｕｐｔａら著、Ｖａｃｃｉｎｅ、１９９５年、ｐ．１２６３−１２７６
【非特許文献５】ＷＨＯ Ｔｅｃｈｎｉｃａｌ Ｒｅｐｏｒｔ Ｓｅｒｉｅｓ Ｎｏ．５９５、１９９６年、ｐ．６
【非特許文献６】Ｐａｏｌｅｔｔｉら著、Ｉｎｆｅｃｔ．Ｉｍｍｕｎ．、２００１年、ｐ．６６９６−６７０１
【非特許文献７】Ｇａｌａｚｋａら著、Ｔｈｅｒｍｏｓｔａｂｉｌｉｔｙ ｏｆ ｖａｃｃｉｎｅｓ、Ｗｏｒｌｄ Ｈｅａｌｔｈ Ｏｒｇａｎｉｓａｔｉｏｎ、１９９８年
【非特許文献８】Ｒｏｔｅ Ｌｉｓｔｅ、Ｅｄｉｔｉｏｎ Ｃａｎｔｏｒ Ｖｅｒｌａｇ、２００５年
【非特許文献９】Ｈｙｂｒｉｄｏｍａ、１９９５年、１４巻、２号、ｐ．１６４−１７４
【非特許文献１０】Ｃｌｉｎｉｃａｌ Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓｅａｒｃｈ、２００４年、１０巻、ｐ．１５８０−１５８７
【非特許文献１１】Ｈｙｂｒｉｄｏｍａ、２００５年、ｐ．１３３−１４０
【非特許文献１２】Ｃｌｉｎｉｃａｌ Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓｅａｒｃｈ、２００４年、ｐ．１５８０−１５８７
【非特許文献１３】Ｃｌｉｎｉｃａｌ Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓｅａｒｃｈ、２００３年、ｐ．３２３４−３２４０
【非特許文献１４】Ｃｌｉｎｉｃａｌ Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓｅａｒｃｈ、２００１年、ｐ．１１５４−１１６２
【非特許文献１５】Ｃｌｉｎｉｃａｌ Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓｅａｒｃｈ、２００１年、ｐ．１１１２−１１１５
【非特許文献１６】Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ、１９８６年９月、８３巻、１７号、ｐ．６２３３−６２３７
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【００１９】
モノクローナル抗体を含有するワクチンの免疫原性を最大化するアルミニウム化合物の最も適当な量は、未だ技術的論点である。
【００２０】
モノクローナル抗体を含有するこの種のワクチンに関する未解決の技術的問題は、周囲温度における低い安定性である。
【課題を解決するための手段】
【００２１】
本発明は、水酸化アルミニウム（アルム（ａｌｕｍ））又はリン酸アルミニウムから選択されたアルミニウム化合物上に吸着され、水性緩衝系中で懸濁された、抗イデオタイプであるＭＥＮ２２３４を含有する非経口適用（好ましくは、皮下又は筋肉内）のための医薬処方を請求する。
【００２２】
高い濃度のアルミニウム化合物をアジュバントとして使用することは、下記の予期せぬ臨床的及び医薬的な利点を有するワクチンを提供する：
【００２３】
Ｉ．体液性及び細胞性反応の両方に関して非常に特異的な免疫原性の確保
ＩＩ．免疫反応の長時間の誘導及び持続の保証
ＩＩＩ．安全な薬物投与の保証
ＩＶ．最終的な薬品に関する製造及び放出手法の単純化
Ｖ．製造工程における一貫性の上昇
ＶＩ．関連する温度範囲における薬品安定性の向上
【発明を実施するための最良の形態】
【００２４】
本発明による医薬組成物は、０．１ｍｇ／ｍＬ〜４ｍｇ／ｍＬの量で抗イデオタイプ抗体であるＭＥＮ２２３４を含有しており、好ましくは、０．２ｍｇ／ｍＬ〜２．５ｍｇ／ｍＬであり、より好ましくは、約２ｍｇ／ｍＬの濃度（１．９〜２．１ｍｇ／ｍＬ）である。抗体ＭＥＮ２２３４は、アルミニウム化合物上に吸着され（好ましくは、約３．５ｍｇ／ｍＬのアルミニウムの濃度）、緩衝性で且つ等張性の生理食塩水に懸濁される。本発明の組成物は、アルミニウム化合物上に吸着された抗体及び緩衝液の塩に加えて、その他のいかなる材料も必要なく、安定化剤、抗酸化剤、その他のアジュバントなどのその他の薬剤の使用に由来する可能性のあるさらなる安全性の懸念がない非常に簡単な解決法をもたらす。
【００２５】
好適な緩衝液は、リン酸又はクエン酸塩から得たものである。
【００２６】
最終的な組成物は、好ましくは皮下又は筋肉内注射を介して非経口的に投与されるべき製品を、好ましくは１ｍＬ含有する。
【００２７】
本発明の主要な特徴のひとつは、吸着剤上へのほぼ完全なＭＥＮ２２３４の吸着を保証するのに、リン酸アルミニウム及び水酸化アルミニウムから選択された、比較的高い濃度のアルミニウム化合物を必要とすることである（表１参照）。
【００２８】
組成物における好適なアルミニウムＡｌ＋＋＋の濃度は、２．４〜５．２ｍｇ／ｍＬであり、最も好ましくは、約３．５ｍｇ／ｍＬ（３．１〜３．８ｍｇ／ｍＬの範囲）であって、これらは、水酸化アルミニウムの含量で、０．７〜１．５％ｗ／ｗの範囲、好ましくは約１％ｗ／ｗ（０．９〜１．１％）に対応する。
【００２９】
【表１】
【００３０】
１％の水酸化アルミニウムの含量は、１ｍＬ当たり約３．５ｍｇのアルミニウムＡｌ＋＋＋に対応し、登録され且つ市販されるワクチンに現在使用され、且つ当局に一般的に推奨されている含量よりも高いものである。
【００３１】
本発明の処方は、本技術分野公知の標準法に従って調製してもよい。使用し得る一般的方法は、以下の通りである。最終製品の製造は、抗体溶液及びアジュバント（アルミニウム化合物のゲル）を所定の条件下で攪拌することにより、行われる。薬物製品は、欧州薬局方のモノグラフ”Ｐａｒｅｎｔｅｒａｌ ｐｒｅｐａｒａｔｉｏｎ”に従った滅菌性の要件を満たす必要がある。従って、製造工程は、規定要件に従って、無菌条件下で厳密に行われる。使用する全ての材料は、滅菌グレードであるか、製造中、溶液の形態で０．２２μｍのフィルターを介して濾過される。
【００３２】
本発明による処方は、下記の一貫した利点のグループを示す。
【００３３】
Ｉ．体液性及び細胞性反応に関する非常に高い特異的免疫原性の保証
月を通じた本発明の組成物の処理（４週間のｓ．ｃ．投与）がアルミニウム化合物の濃度に依存した量で特異的な体液性反応（ＭＥＮ２２３４に対する特別の抗体）を誘導し得ることを示す。事実、１％の水酸化アルミニウムを有する処方（例１）で惹起された体液性反応の程度が、０．３６％の水酸化アルミニウム（欧州薬局方及び米国食品医薬品局のガイドラインで示されている上限に対応）を含有する懸濁液又はＭＥＮ２２３４を有する緩衝生理食塩水の溶液で惹起されるものよりも有意に優れていることを示した。
【００３４】
【表２】
【００３５】
また、特定の細胞性免疫反応の構築に必要な炎症性細胞及び抗原提示細胞の動員を測定するため、注射部位において組織的評価を行った。また、このパラメータに関し、１％の水酸化アルミニウムを有する処方（例１）に対する反応は、より低いＡｌ（ＯＨ）３含量（０．３６％）の懸濁液又はＡｌ（ＯＨ）３を有さないＭＥＮ２２３４溶液で達成されたものよりも非常に優れていた。
【００３６】
【表３】
【００３７】
ＩＩ．免疫反応の長時間の誘導及び保持の保証
ウサギにおいて、例１の組成物を用いた免疫接種（４週間の注射）の後、免疫反応が、長時間に亘り持続し、且つ数週間経過した後であっても、血漿中に特定の抗体が検出可能であることを示した。他方、より低い含量のＡｌ（ＯＨ）３（０．３６％）のＭＥＮ２２３４懸濁液又はアジュバントを有さない溶液としてのＭＥＮ２２３４を用いて免疫接種を行った場合、短期間だけ抗体の存在が検出可能であった。
【００３８】
ＩＩＩ．安全な薬物投与の保証
２ｍｇ／ｍＬの投与量のｓ．ｃ．注射として、２６週間まで、本発明のＭＥＮ２２３４の懸濁物をウサギに投与した。投与スキームは、一ヶ月目は、毎週、残りの期間は、２週間に一度の割合であった。局所性耐性及び全身性の安全性を評価した。１５の処理の後であっても、体重、臨床的兆候、食餌消費、血液、臨床化学、全ての臓器の組織病理の点で、有毒作用は記録されなかった。注射部位においてのみ、薬物の薬理作用の結果としての炎症性及び免疫反応が観察された。
【００３９】
また、フリーのマウス抗体の量を低減し得る本発明により、吸収が低下し、且つ全身循環のピークが低下し、従って、アナフィラキシー反応のリスクが低減される。
【００４０】
ＩＶ．最終薬物製品に関する製造及び放出手法の単純化
約１％の水酸化アルミニウムは、ＭＥＮ２２３４の完全な結合を保証する（１％未満の非吸着抗体）。このことは、非常に強固な吸着性をもたらし、また、破傷風やジフテリアなどのワクチンを含有する多くのアルミニウムに通常必要なｉｎ ｖｉｖｏでの放出試験（実験動物での免疫反応）の必要がない製造方法をもたらす。完全な吸着により、宿主の免疫反応に対して最適な抗体（Ａｂ２）の提示を保証する。
【００４１】
両物質の理想に近い化学量論的分布がリン酸緩衝溶液で達成されたことが、ＭＥＮ２２３４−水酸化アルミニウム吸着機構の詳細な検討により明らかになった。このことは、上記した通り、本発明の自己集合した特性のため、簡単で強固な製造方法を保証する。１５秒の標準的な混合の後に既に、抗体は、水酸化アルミニウム上に完全に吸着される（表４）。
【００４２】
【表４】
【００４３】
表１から分かるように、０．７５％未満のアジュバントの濃度では、完全な吸着は達成されなかった；１％よりも高い濃度（例えば、２％）では、追加の向上性を示さなかった。
【００４４】
推奨されているよりも高い濃度の吸着性のアルミニウム化合物上へのＭＥＮ２２３４の非常に速く完全な吸着により、薬物としての組成物の製造をかなり単純化し得る。数秒の間に、モノクローナル抗体とアジュバントとを単に混合することにより、最終処方が得られる。この混合ステップは、医薬工場における無菌工程のための標準的な装置を用いて通常通りに実行され得る。述べた系の自己集合する特徴は、吸着されたモノクローナル抗体又は一般的なワクチンとともに本発明の処方の製造及び安定化に完全に新たな展望へと導く。また、数秒の間のアルミニウムアジュバント上へのＭＥＮ２２３４の完全な吸着により、患者の最終的な適用場所、例えば病院において、ｓ．ｃ．又はｉ．ｍ．注射の直前に必要量の薬物及びアルミニウムアジュバントを混合するだけで、最終懸濁液の調製が可能となる。
【００４５】
従って、本発明の特別な態様は、活性本体であるワクチン（抗体ＭＥＮ２２３４）及びアジュバント（アルミニウム化合物、好ましくは水酸化アルミニウム）を別々に保持し、且つ患者への注射の直前に混合され得る準備の整った形態で提供されるものである。この混合ステップの好適な時間は、患者に投与する前１０秒〜１０分であるべきである。
【００４６】
特定の形態に関して、組成物は、抗体とアジュバント溶液とが別々に提供されるべきであるが、バイアル、アンプル、前もって充填されたシリンジ又は混合及び／若しくは再構築のための適当な２つのチャンバーシステムなどの医薬の標準的な容器に充填されてもよい。モノクローナル抗体は、最終的に緩衝溶液の形態で使用されてもよく、また、例えば粉末の形態で使用されてもよい。個体の形態の薬物を使用する可能性により、モノクローナル抗体又はワクチン（凍結乾燥品、噴霧乾燥品など）の安定性の向上を意図した全ての技術を適用可能である。このことは、一般的な吸着されたワクチンの全てについて、特に、ＭＥＮ２２３４などのモノクローナル抗体を含有するものについての取扱性の有意な進展及び安定性の向上を示す。輸送及び保存中の永続的な冷却連鎖などの吸着されたワクチンの主要な欠点は、回避され、薬物の保管寿命は、増加可能である。
【００４７】
言及したように、モノクローナル抗体を含有する医薬組成物のｉｎ ｖｉｖｏにおける免疫活性は、様々な様式における使用される吸着剤上への抗体の吸着の程度に依存する（非特許文献３）。従って、薬物放出の前の動物における「ｉｎ ｖｉｖｏ」での（吸着された）ワクチンの生物学的免疫活性を同定することが本技術分野の現状である。アルミニウムアジュバント上へのＭＥＮ２２３４の再現可能な吸着は、放出手法を有意に単純化する。吸着性の信頼性のため、放出試験は、組成物の有効性を同定するためのｉｎ ｖｉｔｒｏでの試験にのみ依拠することができる。動物における「ｉｎ ｖｉｖｏ」での生物活性を同定する通常の手法は、本発明の組成物に関し、不必要である。
【００４８】
Ｖ．薬品製造における一貫的な向上性
例えば推奨されている高い濃度の水酸化アルミニウムを使用したＭＥＮ２２３４の吸着の再現性により、薬物製造における一貫性が有意に向上する。表５に示したように、水酸化アルミニウムの濃度が組成物において０．７〜２％ｗ／ｖの範囲の場合、ＭＥＮ２２３４の吸着は、製造した全てのバッチに関して完全（１％未満のフリーの抗体）である。
【００４９】
【表５】
【００５０】
完全で再現性のある吸着性により、抗体凝集物の形成などのさらに懸念される加工中の問題が回避される。溶液中の抗体は、凝集物を形成する可能性がある。溶液中での抗体の凝集は、例えば攪拌など液相中での過度なせん断力により、誘導され得る。これらの凝集物は、再溶解可能ではなく、ワクチンの生物活性が有意に低下する。しかしながら、完全で急速な吸着工程のため、このような減少は、本発明の組成物の目的の全体で回避され得る。
【００５１】
ＶＩ．関連する温度範囲における薬品の安定性の向上
驚くべきことに、例１の組成物は、緩衝化されたＭＥＮ２２３４溶液と比較して、はるかに安定である（２５℃及び３７℃においても）。この単純で有効な手段（水酸化アルミニウム濃度の増加は、推奨される投与量の２又は３倍までである）は、ほぼ完全な結合を保証し、また、安定性も保証する。表６において、溶液中で、且つ例１に従って処方されたＭＥＮ２２３４についての関連する安定性データを示す。
【００５２】
【表６】
【００５３】
従って、本発明は、ヒトに投与した後、関連する体温（３６〜３７℃）における必要とされる抗体の安定性及び活性を保証する。
【００５４】
本発明の非限定的な例は、下記の通りである。
【００５５】
例１：注射用懸濁液
材料 ｍｇ／ｍＬ
ＭＥＮ２２３４ ２．００
Ａｌ（ＯＨ）３＊ １０．００
ＫＣｌ ０．２０
ＫＨ２ＰＯ４ ０．２０
ＮａＣｌ ８．００
Ｎａ２ＨＰＯ４×７Ｈ２Ｏ ２．１６
注射用水 全１．００ｍＬ
＊吸着用の、水和した水酸化アルミニウムの製造に使用した。
【００５６】
上述の通り、ＭＥＮ２２３４を、関連する塩で緩衝化した溶液中で、水酸化アルミニウムの懸濁液と簡単に攪拌するという標準的な方法に従って組成物を調製した。
【００５７】
例２：注射用懸濁液
材料 ｍｇ／ｍＬ
ＭＥＮ２２３４ ２．００
Ａｌ（ＯＨ）３＊ ７．５０
ＫＣｌ ０．２０
ＫＨ２ＰＯ４ ０．２０
ＮａＣｌ ８．００
Ｎａ２ＨＰＯ４×７Ｈ２Ｏ ２．１６
注射用水 全１．００ｍＬ
＊吸着用の、水和した水酸化アルミニウムの製造に使用した。例１と同様に調製した。
【００５８】
例３：注射用懸濁液
材料 ｍｇ／ｍＬ
ＭＥＮ２２３４ ２．００
ＡｌＰＯ４ １０．００
ＫＨ２ＰＯ４ ０．２０
ＮａＣｌ ９．００
Ｎａ２ＨＰＯ４×７Ｈ２Ｏ １．２０
注射用水 全１．００ｍＬ
例１と同様に調製した。
【００５９】
例４：ＭＥＮ２２３４（ａｂａｇｏｖｏｍａｂ）のアミノ酸配列の同定
配列番号１
重鎖配列
ＱＶＱＸＱＱＳＧＡＥ ＸＡＲＰＧＡＳＶＫＸ ＳＣＫＡＳＧＹＴＦＴ ＮＹＷＭＱＷＶＫＱＲ ＰＧＱＧＸＤＷＸＧＡ ＸＹＰＧＤＧＮＴＲＹ ６０
ＴＱＫＦＫＧＫＡＴＸ ＴＡＤＫＳＳＳＴＡＹ ＭＱＸＳＳＸＡＳＥＤ ＳＡＶＹＹＣＡＲＧＥ ＧＮＹＡＷＦＡＹＷＧ ＱＧＴＸＶＴＶＳＡＡ １２０
ＫＴＴＰＰＳＶＹＰＸ ＡＰＧＳＡＡＱＴＮＳ ＭＶＴＸＧＣＸＶＫＧ ＹＦＰＥＰＶＴＶＴＷ ＮＳＧＳＸＳＳＧＶＨ ＴＦＰＡＶＸＱＳＤＸ １８０
ＹＴＸＳＳＳＶＴＶＰ ＳＳＴＷＰＳＥＴＶＴ ＣＮＶＡＨＰＡＳＳＴ ＫＶＤＫＫＸＶＰＲＤ ＣＧＣＫＰＣＸＣＴＶ ＰＥＶＳＳＶＦＸＦＰ ２４０
ＰＫＰＫＤＶＸＴＸＴ ＸＴＰＫＶＴＣＶＶＶ ＤＸＳＫＤＤＰＥＶＱ ＦＳＷＦＶＤＤＶＥＶ ＨＴＡＱＴＱＰＲＥＥ ＱＦＮＳＴＦＲＳＶＳ ３００
ＥＸＰＸＭＨＱＤＷＸ ＮＧＫＥＦＫＣＲＶＮ ＳＡＡＦＰＡＰＸＥＫ ＴＸＳＫＴＫＧＲＰＫ ＡＰＱＶＹＴＸＰＰＰ ＫＥＱＭＡＫＤＫＶＳ ３６０
ＸＴＣＭＸＴＤＦＦＰ ＥＤＸＴＶＥＷＱＷＮ ＧＱＰＡＥＮＹＫＮＴ ＱＰＸＭＤＴＤＧＳＹ ＦＶＹＳＫＸＮＶＱＫ ＳＮＷＥＡＧＮＴＦＴ ４２０
ＣＳＶＸＨＥＧＸＨＮ ＨＨＴＥＫＳＸＳＨＳ ＰＧＫ
【００６０】
配列番号２
軽鎖配列
ＤＩＱＭＴＱＳＰＡＳ ＬＳＡＳＶＧＥＴＶＴ ＸＴＣＲＡＳＥＮＸＹ ＳＹＸＡＷＨＱＱＫＱ ＧＫＳＰＱＸＸＶＹＮ ＡＫＴＸＡＧＧＶＳＳ ６０
ＲＦＳＧＳＧＳＧＴＨ ＦＳＸＫＸＫＳＸＱＰ ＥＤＦＧＸＹＹＣＱＨ ＨＹＧＸＦＰＴＦＧＧ ＧＴＫＸＥＸＫＲＡＤ ＡＡＰＴＶＳＸＦＰＰ １２０
ＳＳＥＱＸＴＳＧＧＡ ＳＶＶＣＦＸＮＮＦＹ ＰＫＤＸＮＶＫＷＫＸ ＤＧＳＥＲＱＮＧＶＸ ＮＳＷＴＤＱＤＳＫＤ ＳＴＹＳＭＳＳＴＸＴ １８０
ＸＴＫＤＥＹＥＲＨＮ ＳＹＴＣＥＡＴＨＫＴ ＳＴＳＰＸＶＫＳＦＮ ＲＮＥＣ
【００６１】
ａｂａｇｏｖｏｍａｂにおけるアミノ酸配列の同定の第一部は、エドマン分解法に従った自動の配列技術を用いて、ａｂａｇｏｖｏｍａｂが配列メンブレンに共有結合された蛋白シークエンサー中で行った（軽鎖の最初の１５個のアミノ酸）。
【００６２】
自動化されたエドマンシークエンシングは、重鎖の配列データの生成をすることができず、このことは、重鎖のＮ末端基がピログルタミン酸に改変されていることを示唆するものであるので、さらなる配列解析のため、質量分光分析を利用して、公知のＬＣ／ＭＳ／ＭＳ配列解析技術を使用した（非特許文献１６）。
【００６３】
簡潔にいえば、ＬＣ／ＭＳ／ＭＳ分析の前に異なる蛋白分解酵素を用いて異なる抗体サンプルを断片化し、複数の一連の重なり合う配列フラグメントを得た。これらのフラグメントの重なりあうスキームを見出すことにより、抗体の軽鎖の全配列（軽鎖及び重鎖の完全なアミノ酸配列は、配列番号１及び２に示す通りである。）を同定することが可能となった。
【００６４】
実験結果の信頼性に関する最終チェックのように、ここに報告した配列は、蛋白質分析に関して最適化された非冗長な蛋白質データベース（ｎｏｎ ｒｅｄｕｎｄａｎｔ ｐｒｏｔｅｉｎ ｄａｔａｂａｓｅ）に対してＢＬＡＳＴソフトウェアパッケージを用いた配列類似分析によっても検証された（ＭＳＤＢ、Ｅｕｒｏｐｅａｎ Ｂｉｏｉｎｆｏｒｍａｔｉｃｓ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅのｆｔｐサイトから２００７年３月にダウンロードしたもの）。
【００６５】
質量分光分析において、イソロイシン及びロイシンを区別することは不可能であるので、図１では、この区別できない状態を「Ｘ」で示す。
【技術分野】
【０００１】
本発明は、非経口で適用するワクチンとして使用される医薬組成物の分野に関する。
【背景技術】
【０００２】
知られているように、予防又は治療ワクチンの免疫原性を増幅させるため、アルミニウム化合物などのアジュバントの使用は、非経口適用のための溶液又は懸濁液としての医薬投与形態の調製に一般的に考慮されている（非特許文献１）。これらの処方の標的は、最大且つ長時間の免疫効果を誘導するものである。
【０００３】
しかしながら、現在、登録され市販されているワクチンには、制限された量のアルミニウムアジュバントが使用されており、事実、欧州薬局方において、１．２５ｍｇ／投与と規定されている。
【０００４】
また、非特許文献２は、生物学的製品の推奨される個々の１回分の処方におけるアルミニウム量について、下記の通り（１）〜（３）を超えてはならないと規定している。
【０００５】
（１）アッセイによって同定される場合、０．８５ミリグラム
（２）添加したアルミニウム化合物の量に基づいて計算により同定される場合、１．１４ミリグラム
（３）使用したアルミニウムの量が安全且つ意図した効果を生じさせるのに必要であることを示すデータを条件として、アッセイにより同定される場合、１．２５ミリグラム
【０００６】
アルミニウムアジュバントの表面上に吸着された抗体の免疫原性は、吸着の程度に依存するようであるが（非特許文献３）、安全性プロフィールを保持しつつ最大限の免疫反応を達成するのに用いるべき最良の比率は明らかではない。例えば、世界保健機関（ＷＨＯ）は、破傷風及びジフテリアトキソイドに関して、８０％を超えるトキソイドのレベルにおけるアルミニウムアジュバント上への吸着を推奨している（非特許文献４及び５）。一方、８０％を超える水酸化アルミニウムへの破傷風成分の吸着が健常成人において免疫反応を向上させないというデータが示されている（非特許文献６）。
【０００７】
他の技術的問題は、かなり変化するワクチンの安定性である。これは、高温における保存に対する耐性によりランク付け可能であって、ジフテリア及び破傷風トキソイド並びにＢ型肝炎ワクチンは、最も高い熱安定性を示し、凍結乾燥したはしか、黄熱病及びＢＣＧワクチンは、中程度の位置を占め、経口用のポリオワクチンは、最も脆弱である（非特許文献７）。はしか、黄熱病及び結核に対する再構築されたワクチンは、不安定なワクチンである；これらは、再構築後にできるだけ早期に使用する必要があり、且つ免疫性付与の間、氷浴中で保持する必要がある。一価のワクチン又は組み合わせたワクチンの成分としての破傷風及びジフテリア（例えば、アルミニウム塩上に吸着されたもの）が３５〜３７℃で数週間安定であるが、周囲温度への曝露により、ワクチンのいくらかは分解する（非特許文献７の４８頁）。従って、これらの「安定な」型のワクチンに関し、低温条件での保存が規定されている（非特許文献８）。
【０００８】
複合蛋白質の活性本体の性質のため、これらの薬物製品は、一定の冷却連鎖（ｃｏｏｌｉｎｇ ｃｈａｉｎ）を必要とする、冷条件（２〜８℃）での保存が必要である。これにより、流通費が高くなり、全体的な安全性を危険にさらし、より重要な可能性のあることとして抗癌ワクチンなどのより有益性の高い薬物の全世界的な使用が制限される。従って、周囲温度及びこれよりも高い温度（２５〜３７℃）であっても薬物の一定の品質を確保するワクチン処方の開発は、全体的な安全性及びこれらの薬物の有効性を向上させる。このことは、患者に非常に有益であるばかりでなく、これらの貴重な薬物の全体的な取扱をも促進する。
【０００９】
他方、ヒトの癌の処置における免疫治療の重要性、特に、癌に対する治療ワクチンとしての抗イデオタイプモノクローナル抗体を使用することは、公知である。
【００１０】
斯かるワクチンは、宿主において、癌に対する体液性（ｈｕｍｏｕｒ）及び細胞作用を刺激する免疫系を活性化する。
【００１１】
斯かる種類の処方の開発及び定義は、ＡＣＡ１２５／ＭＥＮ２２３４（特許文献１に述べられているもの）に関して特に重要であり、これは、卵巣癌に対する治療ワクチンとして使用される意図のある非常に有望な抗イデオタイプモノクローナル抗体である。ＭＥＮ２２３４に対して、下記のＣＡインデックス名が指定されている：ｉｍｍｕｎｏｇｌｏｂｕｌｉｎ Ｇｌ， ａｎｔｉ−（ｍｏｕｓｅ ＯＣ １２５） （ｍｏｕｓｅ ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ ＡＣＡ−１２５ ｃｌｏｎｅ ３Ｄ５ ｇ−ｃｈａｉｎ）， ｄｉｓｕｌｆｉｄｅ ｗｉｔｈ ｍｏｕｓｅ ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ ＡＣＡ−１２５ ｃｌｏｎｅ ３Ｄ５ ｋ−ｃｈａｉｎ， ｄｉｍｅｒ。対応するＣＡＳ登録番号は、７９２９２１−１０−９である。提案されたＩＮＮは、Ａｂａｇｏｖｏｍａｂである。
【００１２】
ＭＥＮ２２３４は、マウスモノクローナル抗体ＯＣ１２５に対して生成されたマウスのモノクローナル抗体であって、癌関連抗原（ＴＡＡ）であるＣＡ１２５を認識する。ＭＥＮ２２３４は、ＣＡ１２５のＴＡＡの三次元構造に効率的に類似しており、宿主において、ＣＡ１２５抗原を発現するガン細胞を標的とする抗−抗イデオタイプ抗体（Ａｂ３）の産生を誘導する。また、ＭＥＮ２２３４は、宿主において、特にＣＡ１２５の腫瘍細胞に対する細胞免疫反応を引き起こし得る。
【００１３】
進行性の卵巣癌の患者の約８０％で、ＣＡ１２５の発現が上昇している。卵巣癌においてＣＡ１２５が過剰発現しているが、ヒトの臓器自体は、これらのガン細胞に対する効果的な免疫反応を開始し得ない。ＭＥＮ２２３４を含有する治療ワクチンによる処置は、拡散した卵巣癌細胞を攻撃し破壊する宿主の免疫系を復活させ得るべきである。
【００１４】
特許文献１は抗イデオタイプモノクローナル抗体である抗ＣＡ１２５について述べているが、病態の処置に適した特別な医薬処方については、述べていない。
【００１５】
非特許文献９では、抗体であるＡＣＡ−１２５について特徴付けをおこなっているが、処方は開発されていない。
【００１６】
非特許文献１０では、ＡＣＡ１２５を用いたワクチン接種を行っている；処方におけるアルミニウム濃度については、開示されておらず、先行技術に基づけば、当業者は、アジュバントとして比較的低濃度のアルミニウム（個々の一回分の投与当たり１．２５ｍｇ未満）を容易に想到し得る。
【００１７】
非特許文献１１では、卵巣癌に対するワクチンとして免疫原性を向上するようにＡＣＡ１２５ｈＦｃ（ＡＣＡ１２５のキメラ体）の持続的で内在的な放出を行うための送達システムについて述べているが、生物学的なカプセル化技術（ｂｉｏｅｎｃａｐｓｕｌａｔｉｏｎ ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ）に基づいたｉｎ ｖｉｔｒｏでの持続性薬剤を生じる。
【００１８】
さらなる文献は、ＭＥＮ２２３４を含む卵巣癌ワクチンに関する前臨床及び臨床試験の結果についてまとめているが、処方又は使用されるアジュバントの濃度に関する具体的なデータには言及していない（例えば、アルミニウム化合物が引用されていない）：非特許文献１２〜１５。
【特許文献１】欧州特許第７００３０５号明細書
【非特許文献１】Ｆｉｅｊｋａら著、Ｒｏｃｚ Ｐａｎｓｔｗ Ｚａｋｌ Ｈｉｇ、１９９３年、ｐ．７３−８０
【非特許文献２】２１ ＣＦＲ ６１０．１５、米国食品医薬品局
【非特許文献３】Ｃａｐｅｌｌｅら著、Ｖａｃｃｉｎｅ、２００５年、ｐ．１６８６−１６９４
【非特許文献４】Ｇｕｐｔａら著、Ｖａｃｃｉｎｅ、１９９５年、ｐ．１２６３−１２７６
【非特許文献５】ＷＨＯ Ｔｅｃｈｎｉｃａｌ Ｒｅｐｏｒｔ Ｓｅｒｉｅｓ Ｎｏ．５９５、１９９６年、ｐ．６
【非特許文献６】Ｐａｏｌｅｔｔｉら著、Ｉｎｆｅｃｔ．Ｉｍｍｕｎ．、２００１年、ｐ．６６９６−６７０１
【非特許文献７】Ｇａｌａｚｋａら著、Ｔｈｅｒｍｏｓｔａｂｉｌｉｔｙ ｏｆ ｖａｃｃｉｎｅｓ、Ｗｏｒｌｄ Ｈｅａｌｔｈ Ｏｒｇａｎｉｓａｔｉｏｎ、１９９８年
【非特許文献８】Ｒｏｔｅ Ｌｉｓｔｅ、Ｅｄｉｔｉｏｎ Ｃａｎｔｏｒ Ｖｅｒｌａｇ、２００５年
【非特許文献９】Ｈｙｂｒｉｄｏｍａ、１９９５年、１４巻、２号、ｐ．１６４−１７４
【非特許文献１０】Ｃｌｉｎｉｃａｌ Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓｅａｒｃｈ、２００４年、１０巻、ｐ．１５８０−１５８７
【非特許文献１１】Ｈｙｂｒｉｄｏｍａ、２００５年、ｐ．１３３−１４０
【非特許文献１２】Ｃｌｉｎｉｃａｌ Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓｅａｒｃｈ、２００４年、ｐ．１５８０−１５８７
【非特許文献１３】Ｃｌｉｎｉｃａｌ Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓｅａｒｃｈ、２００３年、ｐ．３２３４−３２４０
【非特許文献１４】Ｃｌｉｎｉｃａｌ Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓｅａｒｃｈ、２００１年、ｐ．１１５４−１１６２
【非特許文献１５】Ｃｌｉｎｉｃａｌ Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓｅａｒｃｈ、２００１年、ｐ．１１１２−１１１５
【非特許文献１６】Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ、１９８６年９月、８３巻、１７号、ｐ．６２３３−６２３７
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【００１９】
モノクローナル抗体を含有するワクチンの免疫原性を最大化するアルミニウム化合物の最も適当な量は、未だ技術的論点である。
【００２０】
モノクローナル抗体を含有するこの種のワクチンに関する未解決の技術的問題は、周囲温度における低い安定性である。
【課題を解決するための手段】
【００２１】
本発明は、水酸化アルミニウム（アルム（ａｌｕｍ））又はリン酸アルミニウムから選択されたアルミニウム化合物上に吸着され、水性緩衝系中で懸濁された、抗イデオタイプであるＭＥＮ２２３４を含有する非経口適用（好ましくは、皮下又は筋肉内）のための医薬処方を請求する。
【００２２】
高い濃度のアルミニウム化合物をアジュバントとして使用することは、下記の予期せぬ臨床的及び医薬的な利点を有するワクチンを提供する：
【００２３】
Ｉ．体液性及び細胞性反応の両方に関して非常に特異的な免疫原性の確保
ＩＩ．免疫反応の長時間の誘導及び持続の保証
ＩＩＩ．安全な薬物投与の保証
ＩＶ．最終的な薬品に関する製造及び放出手法の単純化
Ｖ．製造工程における一貫性の上昇
ＶＩ．関連する温度範囲における薬品安定性の向上
【発明を実施するための最良の形態】
【００２４】
本発明による医薬組成物は、０．１ｍｇ／ｍＬ〜４ｍｇ／ｍＬの量で抗イデオタイプ抗体であるＭＥＮ２２３４を含有しており、好ましくは、０．２ｍｇ／ｍＬ〜２．５ｍｇ／ｍＬであり、より好ましくは、約２ｍｇ／ｍＬの濃度（１．９〜２．１ｍｇ／ｍＬ）である。抗体ＭＥＮ２２３４は、アルミニウム化合物上に吸着され（好ましくは、約３．５ｍｇ／ｍＬのアルミニウムの濃度）、緩衝性で且つ等張性の生理食塩水に懸濁される。本発明の組成物は、アルミニウム化合物上に吸着された抗体及び緩衝液の塩に加えて、その他のいかなる材料も必要なく、安定化剤、抗酸化剤、その他のアジュバントなどのその他の薬剤の使用に由来する可能性のあるさらなる安全性の懸念がない非常に簡単な解決法をもたらす。
【００２５】
好適な緩衝液は、リン酸又はクエン酸塩から得たものである。
【００２６】
最終的な組成物は、好ましくは皮下又は筋肉内注射を介して非経口的に投与されるべき製品を、好ましくは１ｍＬ含有する。
【００２７】
本発明の主要な特徴のひとつは、吸着剤上へのほぼ完全なＭＥＮ２２３４の吸着を保証するのに、リン酸アルミニウム及び水酸化アルミニウムから選択された、比較的高い濃度のアルミニウム化合物を必要とすることである（表１参照）。
【００２８】
組成物における好適なアルミニウムＡｌ＋＋＋の濃度は、２．４〜５．２ｍｇ／ｍＬであり、最も好ましくは、約３．５ｍｇ／ｍＬ（３．１〜３．８ｍｇ／ｍＬの範囲）であって、これらは、水酸化アルミニウムの含量で、０．７〜１．５％ｗ／ｗの範囲、好ましくは約１％ｗ／ｗ（０．９〜１．１％）に対応する。
【００２９】
【表１】
【００３０】
１％の水酸化アルミニウムの含量は、１ｍＬ当たり約３．５ｍｇのアルミニウムＡｌ＋＋＋に対応し、登録され且つ市販されるワクチンに現在使用され、且つ当局に一般的に推奨されている含量よりも高いものである。
【００３１】
本発明の処方は、本技術分野公知の標準法に従って調製してもよい。使用し得る一般的方法は、以下の通りである。最終製品の製造は、抗体溶液及びアジュバント（アルミニウム化合物のゲル）を所定の条件下で攪拌することにより、行われる。薬物製品は、欧州薬局方のモノグラフ”Ｐａｒｅｎｔｅｒａｌ ｐｒｅｐａｒａｔｉｏｎ”に従った滅菌性の要件を満たす必要がある。従って、製造工程は、規定要件に従って、無菌条件下で厳密に行われる。使用する全ての材料は、滅菌グレードであるか、製造中、溶液の形態で０．２２μｍのフィルターを介して濾過される。
【００３２】
本発明による処方は、下記の一貫した利点のグループを示す。
【００３３】
Ｉ．体液性及び細胞性反応に関する非常に高い特異的免疫原性の保証
月を通じた本発明の組成物の処理（４週間のｓ．ｃ．投与）がアルミニウム化合物の濃度に依存した量で特異的な体液性反応（ＭＥＮ２２３４に対する特別の抗体）を誘導し得ることを示す。事実、１％の水酸化アルミニウムを有する処方（例１）で惹起された体液性反応の程度が、０．３６％の水酸化アルミニウム（欧州薬局方及び米国食品医薬品局のガイドラインで示されている上限に対応）を含有する懸濁液又はＭＥＮ２２３４を有する緩衝生理食塩水の溶液で惹起されるものよりも有意に優れていることを示した。
【００３４】
【表２】
【００３５】
また、特定の細胞性免疫反応の構築に必要な炎症性細胞及び抗原提示細胞の動員を測定するため、注射部位において組織的評価を行った。また、このパラメータに関し、１％の水酸化アルミニウムを有する処方（例１）に対する反応は、より低いＡｌ（ＯＨ）３含量（０．３６％）の懸濁液又はＡｌ（ＯＨ）３を有さないＭＥＮ２２３４溶液で達成されたものよりも非常に優れていた。
【００３６】
【表３】
【００３７】
ＩＩ．免疫反応の長時間の誘導及び保持の保証
ウサギにおいて、例１の組成物を用いた免疫接種（４週間の注射）の後、免疫反応が、長時間に亘り持続し、且つ数週間経過した後であっても、血漿中に特定の抗体が検出可能であることを示した。他方、より低い含量のＡｌ（ＯＨ）３（０．３６％）のＭＥＮ２２３４懸濁液又はアジュバントを有さない溶液としてのＭＥＮ２２３４を用いて免疫接種を行った場合、短期間だけ抗体の存在が検出可能であった。
【００３８】
ＩＩＩ．安全な薬物投与の保証
２ｍｇ／ｍＬの投与量のｓ．ｃ．注射として、２６週間まで、本発明のＭＥＮ２２３４の懸濁物をウサギに投与した。投与スキームは、一ヶ月目は、毎週、残りの期間は、２週間に一度の割合であった。局所性耐性及び全身性の安全性を評価した。１５の処理の後であっても、体重、臨床的兆候、食餌消費、血液、臨床化学、全ての臓器の組織病理の点で、有毒作用は記録されなかった。注射部位においてのみ、薬物の薬理作用の結果としての炎症性及び免疫反応が観察された。
【００３９】
また、フリーのマウス抗体の量を低減し得る本発明により、吸収が低下し、且つ全身循環のピークが低下し、従って、アナフィラキシー反応のリスクが低減される。
【００４０】
ＩＶ．最終薬物製品に関する製造及び放出手法の単純化
約１％の水酸化アルミニウムは、ＭＥＮ２２３４の完全な結合を保証する（１％未満の非吸着抗体）。このことは、非常に強固な吸着性をもたらし、また、破傷風やジフテリアなどのワクチンを含有する多くのアルミニウムに通常必要なｉｎ ｖｉｖｏでの放出試験（実験動物での免疫反応）の必要がない製造方法をもたらす。完全な吸着により、宿主の免疫反応に対して最適な抗体（Ａｂ２）の提示を保証する。
【００４１】
両物質の理想に近い化学量論的分布がリン酸緩衝溶液で達成されたことが、ＭＥＮ２２３４−水酸化アルミニウム吸着機構の詳細な検討により明らかになった。このことは、上記した通り、本発明の自己集合した特性のため、簡単で強固な製造方法を保証する。１５秒の標準的な混合の後に既に、抗体は、水酸化アルミニウム上に完全に吸着される（表４）。
【００４２】
【表４】
【００４３】
表１から分かるように、０．７５％未満のアジュバントの濃度では、完全な吸着は達成されなかった；１％よりも高い濃度（例えば、２％）では、追加の向上性を示さなかった。
【００４４】
推奨されているよりも高い濃度の吸着性のアルミニウム化合物上へのＭＥＮ２２３４の非常に速く完全な吸着により、薬物としての組成物の製造をかなり単純化し得る。数秒の間に、モノクローナル抗体とアジュバントとを単に混合することにより、最終処方が得られる。この混合ステップは、医薬工場における無菌工程のための標準的な装置を用いて通常通りに実行され得る。述べた系の自己集合する特徴は、吸着されたモノクローナル抗体又は一般的なワクチンとともに本発明の処方の製造及び安定化に完全に新たな展望へと導く。また、数秒の間のアルミニウムアジュバント上へのＭＥＮ２２３４の完全な吸着により、患者の最終的な適用場所、例えば病院において、ｓ．ｃ．又はｉ．ｍ．注射の直前に必要量の薬物及びアルミニウムアジュバントを混合するだけで、最終懸濁液の調製が可能となる。
【００４５】
従って、本発明の特別な態様は、活性本体であるワクチン（抗体ＭＥＮ２２３４）及びアジュバント（アルミニウム化合物、好ましくは水酸化アルミニウム）を別々に保持し、且つ患者への注射の直前に混合され得る準備の整った形態で提供されるものである。この混合ステップの好適な時間は、患者に投与する前１０秒〜１０分であるべきである。
【００４６】
特定の形態に関して、組成物は、抗体とアジュバント溶液とが別々に提供されるべきであるが、バイアル、アンプル、前もって充填されたシリンジ又は混合及び／若しくは再構築のための適当な２つのチャンバーシステムなどの医薬の標準的な容器に充填されてもよい。モノクローナル抗体は、最終的に緩衝溶液の形態で使用されてもよく、また、例えば粉末の形態で使用されてもよい。個体の形態の薬物を使用する可能性により、モノクローナル抗体又はワクチン（凍結乾燥品、噴霧乾燥品など）の安定性の向上を意図した全ての技術を適用可能である。このことは、一般的な吸着されたワクチンの全てについて、特に、ＭＥＮ２２３４などのモノクローナル抗体を含有するものについての取扱性の有意な進展及び安定性の向上を示す。輸送及び保存中の永続的な冷却連鎖などの吸着されたワクチンの主要な欠点は、回避され、薬物の保管寿命は、増加可能である。
【００４７】
言及したように、モノクローナル抗体を含有する医薬組成物のｉｎ ｖｉｖｏにおける免疫活性は、様々な様式における使用される吸着剤上への抗体の吸着の程度に依存する（非特許文献３）。従って、薬物放出の前の動物における「ｉｎ ｖｉｖｏ」での（吸着された）ワクチンの生物学的免疫活性を同定することが本技術分野の現状である。アルミニウムアジュバント上へのＭＥＮ２２３４の再現可能な吸着は、放出手法を有意に単純化する。吸着性の信頼性のため、放出試験は、組成物の有効性を同定するためのｉｎ ｖｉｔｒｏでの試験にのみ依拠することができる。動物における「ｉｎ ｖｉｖｏ」での生物活性を同定する通常の手法は、本発明の組成物に関し、不必要である。
【００４８】
Ｖ．薬品製造における一貫的な向上性
例えば推奨されている高い濃度の水酸化アルミニウムを使用したＭＥＮ２２３４の吸着の再現性により、薬物製造における一貫性が有意に向上する。表５に示したように、水酸化アルミニウムの濃度が組成物において０．７〜２％ｗ／ｖの範囲の場合、ＭＥＮ２２３４の吸着は、製造した全てのバッチに関して完全（１％未満のフリーの抗体）である。
【００４９】
【表５】
【００５０】
完全で再現性のある吸着性により、抗体凝集物の形成などのさらに懸念される加工中の問題が回避される。溶液中の抗体は、凝集物を形成する可能性がある。溶液中での抗体の凝集は、例えば攪拌など液相中での過度なせん断力により、誘導され得る。これらの凝集物は、再溶解可能ではなく、ワクチンの生物活性が有意に低下する。しかしながら、完全で急速な吸着工程のため、このような減少は、本発明の組成物の目的の全体で回避され得る。
【００５１】
ＶＩ．関連する温度範囲における薬品の安定性の向上
驚くべきことに、例１の組成物は、緩衝化されたＭＥＮ２２３４溶液と比較して、はるかに安定である（２５℃及び３７℃においても）。この単純で有効な手段（水酸化アルミニウム濃度の増加は、推奨される投与量の２又は３倍までである）は、ほぼ完全な結合を保証し、また、安定性も保証する。表６において、溶液中で、且つ例１に従って処方されたＭＥＮ２２３４についての関連する安定性データを示す。
【００５２】
【表６】
【００５３】
従って、本発明は、ヒトに投与した後、関連する体温（３６〜３７℃）における必要とされる抗体の安定性及び活性を保証する。
【００５４】
本発明の非限定的な例は、下記の通りである。
【００５５】
例１：注射用懸濁液
材料 ｍｇ／ｍＬ
ＭＥＮ２２３４ ２．００
Ａｌ（ＯＨ）３＊ １０．００
ＫＣｌ ０．２０
ＫＨ２ＰＯ４ ０．２０
ＮａＣｌ ８．００
Ｎａ２ＨＰＯ４×７Ｈ２Ｏ ２．１６
注射用水 全１．００ｍＬ
＊吸着用の、水和した水酸化アルミニウムの製造に使用した。
【００５６】
上述の通り、ＭＥＮ２２３４を、関連する塩で緩衝化した溶液中で、水酸化アルミニウムの懸濁液と簡単に攪拌するという標準的な方法に従って組成物を調製した。
【００５７】
例２：注射用懸濁液
材料 ｍｇ／ｍＬ
ＭＥＮ２２３４ ２．００
Ａｌ（ＯＨ）３＊ ７．５０
ＫＣｌ ０．２０
ＫＨ２ＰＯ４ ０．２０
ＮａＣｌ ８．００
Ｎａ２ＨＰＯ４×７Ｈ２Ｏ ２．１６
注射用水 全１．００ｍＬ
＊吸着用の、水和した水酸化アルミニウムの製造に使用した。例１と同様に調製した。
【００５８】
例３：注射用懸濁液
材料 ｍｇ／ｍＬ
ＭＥＮ２２３４ ２．００
ＡｌＰＯ４ １０．００
ＫＨ２ＰＯ４ ０．２０
ＮａＣｌ ９．００
Ｎａ２ＨＰＯ４×７Ｈ２Ｏ １．２０
注射用水 全１．００ｍＬ
例１と同様に調製した。
【００５９】
例４：ＭＥＮ２２３４（ａｂａｇｏｖｏｍａｂ）のアミノ酸配列の同定
配列番号１
重鎖配列
ＱＶＱＸＱＱＳＧＡＥ ＸＡＲＰＧＡＳＶＫＸ ＳＣＫＡＳＧＹＴＦＴ ＮＹＷＭＱＷＶＫＱＲ ＰＧＱＧＸＤＷＸＧＡ ＸＹＰＧＤＧＮＴＲＹ ６０
ＴＱＫＦＫＧＫＡＴＸ ＴＡＤＫＳＳＳＴＡＹ ＭＱＸＳＳＸＡＳＥＤ ＳＡＶＹＹＣＡＲＧＥ ＧＮＹＡＷＦＡＹＷＧ ＱＧＴＸＶＴＶＳＡＡ １２０
ＫＴＴＰＰＳＶＹＰＸ ＡＰＧＳＡＡＱＴＮＳ ＭＶＴＸＧＣＸＶＫＧ ＹＦＰＥＰＶＴＶＴＷ ＮＳＧＳＸＳＳＧＶＨ ＴＦＰＡＶＸＱＳＤＸ １８０
ＹＴＸＳＳＳＶＴＶＰ ＳＳＴＷＰＳＥＴＶＴ ＣＮＶＡＨＰＡＳＳＴ ＫＶＤＫＫＸＶＰＲＤ ＣＧＣＫＰＣＸＣＴＶ ＰＥＶＳＳＶＦＸＦＰ ２４０
ＰＫＰＫＤＶＸＴＸＴ ＸＴＰＫＶＴＣＶＶＶ ＤＸＳＫＤＤＰＥＶＱ ＦＳＷＦＶＤＤＶＥＶ ＨＴＡＱＴＱＰＲＥＥ ＱＦＮＳＴＦＲＳＶＳ ３００
ＥＸＰＸＭＨＱＤＷＸ ＮＧＫＥＦＫＣＲＶＮ ＳＡＡＦＰＡＰＸＥＫ ＴＸＳＫＴＫＧＲＰＫ ＡＰＱＶＹＴＸＰＰＰ ＫＥＱＭＡＫＤＫＶＳ ３６０
ＸＴＣＭＸＴＤＦＦＰ ＥＤＸＴＶＥＷＱＷＮ ＧＱＰＡＥＮＹＫＮＴ ＱＰＸＭＤＴＤＧＳＹ ＦＶＹＳＫＸＮＶＱＫ ＳＮＷＥＡＧＮＴＦＴ ４２０
ＣＳＶＸＨＥＧＸＨＮ ＨＨＴＥＫＳＸＳＨＳ ＰＧＫ
【００６０】
配列番号２
軽鎖配列
ＤＩＱＭＴＱＳＰＡＳ ＬＳＡＳＶＧＥＴＶＴ ＸＴＣＲＡＳＥＮＸＹ ＳＹＸＡＷＨＱＱＫＱ ＧＫＳＰＱＸＸＶＹＮ ＡＫＴＸＡＧＧＶＳＳ ６０
ＲＦＳＧＳＧＳＧＴＨ ＦＳＸＫＸＫＳＸＱＰ ＥＤＦＧＸＹＹＣＱＨ ＨＹＧＸＦＰＴＦＧＧ ＧＴＫＸＥＸＫＲＡＤ ＡＡＰＴＶＳＸＦＰＰ １２０
ＳＳＥＱＸＴＳＧＧＡ ＳＶＶＣＦＸＮＮＦＹ ＰＫＤＸＮＶＫＷＫＸ ＤＧＳＥＲＱＮＧＶＸ ＮＳＷＴＤＱＤＳＫＤ ＳＴＹＳＭＳＳＴＸＴ １８０
ＸＴＫＤＥＹＥＲＨＮ ＳＹＴＣＥＡＴＨＫＴ ＳＴＳＰＸＶＫＳＦＮ ＲＮＥＣ
【００６１】
ａｂａｇｏｖｏｍａｂにおけるアミノ酸配列の同定の第一部は、エドマン分解法に従った自動の配列技術を用いて、ａｂａｇｏｖｏｍａｂが配列メンブレンに共有結合された蛋白シークエンサー中で行った（軽鎖の最初の１５個のアミノ酸）。
【００６２】
自動化されたエドマンシークエンシングは、重鎖の配列データの生成をすることができず、このことは、重鎖のＮ末端基がピログルタミン酸に改変されていることを示唆するものであるので、さらなる配列解析のため、質量分光分析を利用して、公知のＬＣ／ＭＳ／ＭＳ配列解析技術を使用した（非特許文献１６）。
【００６３】
簡潔にいえば、ＬＣ／ＭＳ／ＭＳ分析の前に異なる蛋白分解酵素を用いて異なる抗体サンプルを断片化し、複数の一連の重なり合う配列フラグメントを得た。これらのフラグメントの重なりあうスキームを見出すことにより、抗体の軽鎖の全配列（軽鎖及び重鎖の完全なアミノ酸配列は、配列番号１及び２に示す通りである。）を同定することが可能となった。
【００６４】
実験結果の信頼性に関する最終チェックのように、ここに報告した配列は、蛋白質分析に関して最適化された非冗長な蛋白質データベース（ｎｏｎ ｒｅｄｕｎｄａｎｔ ｐｒｏｔｅｉｎ ｄａｔａｂａｓｅ）に対してＢＬＡＳＴソフトウェアパッケージを用いた配列類似分析によっても検証された（ＭＳＤＢ、Ｅｕｒｏｐｅａｎ Ｂｉｏｉｎｆｏｒｍａｔｉｃｓ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅのｆｔｐサイトから２００７年３月にダウンロードしたもの）。
【００６５】
質量分光分析において、イソロイシン及びロイシンを区別することは不可能であるので、図１では、この区別できない状態を「Ｘ」で示す。
【特許請求の範囲】
【請求項１】
ワクチンとしての非経口投与用の医薬組成物であって、
モノクローナル抗体及び、アジュバントとして２．４〜５．２ｍｇ／ｍＬのイオン濃度のアルミニウム誘導体を有し、
前記モノクローナル抗体は、配列番号１及び２からなる、抗イデオタイプモノクローナル抗体の抗ＣＡ１２５であるＭＥＮ２２３４であることを特徴とする医薬組成物。
【請求項２】
前記アルミニウム誘導体は、３．１〜３．８ｍｇ／ｍＬのアルミニウムイオン濃度であることを特徴とする請求項１に記載の医薬組成物。
【請求項３】
前記のアルミニウム化合物は、水酸化アルミニウム及びリン酸アルミニウムから選択されることを特徴とする請求項１又は２に記載の医薬組成物。
【請求項４】
前記のアルミニウム化合物は、水酸化アルミニウムであることを特徴とする請求項３に記載の医薬組成物。
【請求項５】
前記ＭＥＮ２２３４は、０．１〜４ｍｇ／ｍＬの含量で存在することを特徴とする請求項１乃至４のいずれか一項に記載の医薬組成物。
【請求項６】
前記ＭＥＮ２２３４は、０．２〜２．５ｍｇ／ｍＬの含量で存在することを特徴とする請求項５に記載の医薬組成物。
【請求項７】
前記ＭＥＮ２２３４は、１．９〜２．１ｍｇ／ｍＬの含量で存在することを特徴とする請求項６に記載の医薬組成物。
【請求項８】
前記ＭＥＮ２２３４は、前記のアルミニウム化合物上に吸着され、緩衝化された等張性の生理食塩水溶液中に懸濁されていることを特徴とする請求項１乃至７のいずれか一項に記載の医薬組成物。
【請求項９】
非経口投与に適する、液体懸濁液の形態であることを特徴とする請求項１乃至８のいずれか一項に記載の医薬組成物。
【請求項１０】
皮下又は筋肉内投与に適することを特徴とする請求項９に記載の医薬組成物。
【請求項１１】
前記ＭＥＮ２２３４及び前記のアルミニウム化合物の懸濁液は、別々に保存され、患者に投与される直前に混合されるべく準備が整っていることを特徴とする請求項１乃至１０のいずれか一項に記載の医薬組成物。
【請求項１２】
前記ＭＥＮ２２３４及び前記のアルミニウム化合物の混合は、患者への投与前１０秒〜１０分の間に実行されることを特徴とする請求項１１に記載の組成物の調製方法。
【請求項１３】
請求項１２に記載の方法で得たことを特徴とする医薬組成物。
【請求項１４】
ａ）２．００ｍｇ／ｍＬのＭＥＮ２２３４、 １０．００ｍｇ／ｍＬのＡｌ（ＯＨ）３、０．２０ｍｇ／ｍＬのＫＣｌ、 ０．２０ｍｇ／ｍＬのＫＨ２ＰＯ４、８．００ｍｇ／ｍＬのＮａＣｌ、 ２．１６ｍｇ／ｍＬのＮａ２ＨＰＯ４・７Ｈ２Ｏ、及び注射用水で全量１．００ｍＬとしたもの；
ｂ）２．００ｍｇ／ｍＬのＭＥＮ２２３４、７．５０ｍｇ／ｍＬのＡｌ（ＯＨ）３、０．２０ｍｇ／ｍＬのＫＣｌ、０．２０ｍｇ／ｍＬのＫＨ２ＰＯ４、８．００ｍｇ／ｍＬのＮａＣｌ、２．１６ｍｇ／ｍＬのＮａ２ＨＰＯ４・７Ｈ２Ｏ、及び注射用水で全量１．００ｍＬとしたもの；
ｃ）２．００ｍｇ／ｍＬのＭＥＮ２２３４、１０．００ｍｇ／ｍＬのＡｌＰＯ４、０．２０ｍｇ／ｍＬのＫＨ２ＰＯ４、９．００ｍｇ／ｍＬのＮａＣｌ、１．２０ｍｇ／ｍＬのＮａ２ＨＰＯ４・７Ｈ２Ｏ、及び注射用水で全量１．００ｍＬとしたもの；
から選択されることを特徴とする請求項１乃至１０のいずれか一項に記載の医薬組成物。
【請求項１５】
腫瘍を処置又は予防するための抗腫瘍ワクチンとして使用されることを特徴とする請求項１乃至１４のいずれか一項に記載の医薬組成物。
【請求項１６】
卵巣腫瘍を処置するための抗腫瘍ワクチンとしての請求項１５に記載の医薬組成物。
【請求項１７】
請求項１に記載の医薬組成物の調製のための水酸化アルミニウム及びリン酸アルミニウムから選択されるアルミニウム化合物の使用であって、
前記アルミニウム化合物の濃度は、２．４〜５．２ｍｇ／ｍＬの範囲のアルミニウムイオンであることを特徴とする使用。
【請求項１】
ワクチンとしての非経口投与用の医薬組成物であって、
モノクローナル抗体及び、アジュバントとして２．４〜５．２ｍｇ／ｍＬのイオン濃度のアルミニウム誘導体を有し、
前記モノクローナル抗体は、配列番号１及び２からなる、抗イデオタイプモノクローナル抗体の抗ＣＡ１２５であるＭＥＮ２２３４であることを特徴とする医薬組成物。
【請求項２】
前記アルミニウム誘導体は、３．１〜３．８ｍｇ／ｍＬのアルミニウムイオン濃度であることを特徴とする請求項１に記載の医薬組成物。
【請求項３】
前記のアルミニウム化合物は、水酸化アルミニウム及びリン酸アルミニウムから選択されることを特徴とする請求項１又は２に記載の医薬組成物。
【請求項４】
前記のアルミニウム化合物は、水酸化アルミニウムであることを特徴とする請求項３に記載の医薬組成物。
【請求項５】
前記ＭＥＮ２２３４は、０．１〜４ｍｇ／ｍＬの含量で存在することを特徴とする請求項１乃至４のいずれか一項に記載の医薬組成物。
【請求項６】
前記ＭＥＮ２２３４は、０．２〜２．５ｍｇ／ｍＬの含量で存在することを特徴とする請求項５に記載の医薬組成物。
【請求項７】
前記ＭＥＮ２２３４は、１．９〜２．１ｍｇ／ｍＬの含量で存在することを特徴とする請求項６に記載の医薬組成物。
【請求項８】
前記ＭＥＮ２２３４は、前記のアルミニウム化合物上に吸着され、緩衝化された等張性の生理食塩水溶液中に懸濁されていることを特徴とする請求項１乃至７のいずれか一項に記載の医薬組成物。
【請求項９】
非経口投与に適する、液体懸濁液の形態であることを特徴とする請求項１乃至８のいずれか一項に記載の医薬組成物。
【請求項１０】
皮下又は筋肉内投与に適することを特徴とする請求項９に記載の医薬組成物。
【請求項１１】
前記ＭＥＮ２２３４及び前記のアルミニウム化合物の懸濁液は、別々に保存され、患者に投与される直前に混合されるべく準備が整っていることを特徴とする請求項１乃至１０のいずれか一項に記載の医薬組成物。
【請求項１２】
前記ＭＥＮ２２３４及び前記のアルミニウム化合物の混合は、患者への投与前１０秒〜１０分の間に実行されることを特徴とする請求項１１に記載の組成物の調製方法。
【請求項１３】
請求項１２に記載の方法で得たことを特徴とする医薬組成物。
【請求項１４】
ａ）２．００ｍｇ／ｍＬのＭＥＮ２２３４、 １０．００ｍｇ／ｍＬのＡｌ（ＯＨ）３、０．２０ｍｇ／ｍＬのＫＣｌ、 ０．２０ｍｇ／ｍＬのＫＨ２ＰＯ４、８．００ｍｇ／ｍＬのＮａＣｌ、 ２．１６ｍｇ／ｍＬのＮａ２ＨＰＯ４・７Ｈ２Ｏ、及び注射用水で全量１．００ｍＬとしたもの；
ｂ）２．００ｍｇ／ｍＬのＭＥＮ２２３４、７．５０ｍｇ／ｍＬのＡｌ（ＯＨ）３、０．２０ｍｇ／ｍＬのＫＣｌ、０．２０ｍｇ／ｍＬのＫＨ２ＰＯ４、８．００ｍｇ／ｍＬのＮａＣｌ、２．１６ｍｇ／ｍＬのＮａ２ＨＰＯ４・７Ｈ２Ｏ、及び注射用水で全量１．００ｍＬとしたもの；
ｃ）２．００ｍｇ／ｍＬのＭＥＮ２２３４、１０．００ｍｇ／ｍＬのＡｌＰＯ４、０．２０ｍｇ／ｍＬのＫＨ２ＰＯ４、９．００ｍｇ／ｍＬのＮａＣｌ、１．２０ｍｇ／ｍＬのＮａ２ＨＰＯ４・７Ｈ２Ｏ、及び注射用水で全量１．００ｍＬとしたもの；
から選択されることを特徴とする請求項１乃至１０のいずれか一項に記載の医薬組成物。
【請求項１５】
腫瘍を処置又は予防するための抗腫瘍ワクチンとして使用されることを特徴とする請求項１乃至１４のいずれか一項に記載の医薬組成物。
【請求項１６】
卵巣腫瘍を処置するための抗腫瘍ワクチンとしての請求項１５に記載の医薬組成物。
【請求項１７】
請求項１に記載の医薬組成物の調製のための水酸化アルミニウム及びリン酸アルミニウムから選択されるアルミニウム化合物の使用であって、
前記アルミニウム化合物の濃度は、２．４〜５．２ｍｇ／ｍＬの範囲のアルミニウムイオンであることを特徴とする使用。
【公表番号】特表２００９−５４１４４８（Ｐ２００９−５４１４４８Ａ）
【公表日】平成２１年１１月２６日（２００９．１１．２６）
【国際特許分類】
【出願番号】特願２００９−５１７２０２（Ｐ２００９−５１７２０２）
【出願日】平成１９年６月２８日（２００７．６．２８）
【国際出願番号】ＰＣＴ／ＥＰ２００７／０５６４６５
【国際公開番号】ＷＯ２００８／０００７８９
【国際公開日】平成２０年１月３日（２００８．１．３）
【出願人】（５０００４７２２８）メナリニ インターナショナル オペレーションズ ルクセンブルグ ソシエテ アノニマ (6)
【Ｆターム（参考）】
【公表日】平成２１年１１月２６日（２００９．１１．２６）
【国際特許分類】
【出願日】平成１９年６月２８日（２００７．６．２８）
【国際出願番号】ＰＣＴ／ＥＰ２００７／０５６４６５
【国際公開番号】ＷＯ２００８／０００７８９
【国際公開日】平成２０年１月３日（２００８．１．３）
【出願人】（５０００４７２２８）メナリニ インターナショナル オペレーションズ ルクセンブルグ ソシエテ アノニマ (6)
【Ｆターム（参考）】
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