抽だい耐性判定方法
【課題】ポット栽培法より省スペース化を達成することができ、且つより短い試験期間で抽だい耐性の判定が可能である抽だい耐性判定方法を提供する。
【解決手段】表面殺菌したホウレンソウ種子１０をバーミキュライトを敷き詰めたバーミキュライト培地２０に播種し（播種工程）、このホウレンソウ種子１０を人工気象機内で２５℃および８ｈ日長にて同調的に発芽させる（発芽工程）。２日後、発芽した胚軸を１／２ＭＳ寒天培地４０に移植して１週間育成し（第１移植工程）、育成した胚軸４４を子葉４２から約１ｃｍ近傍の長さで切断し、子葉４２のついた胚軸４４を直接１／２ＭＳ寒天培地４０に移植する（第２移植工程）。第２移植工程で移植した子葉４２のついた胚軸４４を人工気象機内で２５℃および８ｈ日長にて２週間育成させる（育成工程）。育成工程により育成したホウレンソウの内、第１葉節８２以上が伸長しているものを抽だいと判定する（判定工程）。
【解決手段】表面殺菌したホウレンソウ種子１０をバーミキュライトを敷き詰めたバーミキュライト培地２０に播種し（播種工程）、このホウレンソウ種子１０を人工気象機内で２５℃および８ｈ日長にて同調的に発芽させる（発芽工程）。２日後、発芽した胚軸を１／２ＭＳ寒天培地４０に移植して１週間育成し（第１移植工程）、育成した胚軸４４を子葉４２から約１ｃｍ近傍の長さで切断し、子葉４２のついた胚軸４４を直接１／２ＭＳ寒天培地４０に移植する（第２移植工程）。第２移植工程で移植した子葉４２のついた胚軸４４を人工気象機内で２５℃および８ｈ日長にて２週間育成させる（育成工程）。育成工程により育成したホウレンソウの内、第１葉節８２以上が伸長しているものを抽だいと判定する（判定工程）。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、所定の葉菜類、特にホウレンソウの抽だい耐性を判定する抽だい耐性判定方法に関する。
【背景技術】
【０００２】
ホウレンソウは、夏等のように明期が暗期より長い長日条件で生育させると、花を咲かせるために茎が著しく伸びる抽だいが促進される。抽だいしたホウレンソウは食用とする器官である葉等の栄養が少なくなり、繊維質になると言われている。このため、抽だいしたホウレンソウは商品価値が著しく減ずることになる。従って、抽だいしにくい品種の作出は、品種改良において従来から重要な項目の一つとされてきた（非特許文献１参照）。
【０００３】
抽だいしにくいホウレンソウの品種の作出を行うためには、抽だいが起きるかどうか、抽だいする程度等のいわゆる抽だいの特性を示す抽だい耐性の判定法が重要である。この抽だい耐性の判定法として、どのように栽培するのかという点に着目した畑栽培法とポット栽培法とがある。
【０００４】
畑栽培法とは、ホウレンソウを畑で栽培し、その抽だい耐性を判定する判定法である。自然環境で栽培するため、抽だい耐性の判定法として最も確実性が高い。一方、広い敷地が必要であり、育成可能株数は約５０株／ｍ２程度であるという問題があった。自然環境で栽培するということは、１年に１回しか試験を行うことができないという欠点を有することでもあった。
【０００５】
上述した畑栽培法の問題を解決する判定法として、ポット栽培法がある。ポット栽培法とは、ホウレンソウを直径約４ｃｍ程度の多穴ポットを利用して栽培し、その抽だい耐性を判定する判定法である。ポット栽培法は人工気象室を利用するため畑栽培法と比較して広い敷地は不要であり、育成可能株数は約５００株／ｍ２程度である。加えて、人工気象室で栽培するため１年中試験を行うことが可能であり、播種から約６０日程度の試験期間で抽だい耐性の判定が可能である。
【０００６】
【非特許文献１】“たより１８号”、東北農業研究センターたより、［online］、独立行政法人農業・食品産業技術総合研究機構、［平成２０年６月１２日検索］、インターネット、<URL: http://tohoku.naro.affrc.go.jp/periodical/tayori/18/no18_01.html>
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００７】
上述したように、ポット栽培法で利用する人工気象室のスペースは畑栽培法が必要とする広い敷地よりは少ない。しかし、人工気象室は一般に大型施設であり、育成可能株数は約５００株／ｍ２程度であったため、より省スペース化が要求されているという問題があった。ポット栽培法では畑栽培法より短い試験期間で抽だい耐性の判定が可能であるが、それでも播種から約６０日程度の試験期間を要していたため、より短い試験期間が要求されているという問題があった。
【０００８】
そこで、本発明の目的は、上記問題を解決するためになされたものであり、ポット栽培法より省スペース化を達成することができ、且つより短い試験期間で抽だい耐性の判定が可能である抽だい耐性判定方法を提供することにある。
【課題を解決するための手段】
【０００９】
この発明の抽だい耐性判定方法は、所定の葉菜類の抽だい耐性を判定する抽だい耐性判定方法であって、殺菌した所定の葉菜類の種子をバーミキュライト培地に播種する播種工程と、前記播種工程で播種した所定の葉菜類の種子を人工気象機内で発芽させる発芽工程と、前記発芽工程により発芽した胚軸を寒天培地に移植する第１移植工程と、前記第１移植工程で移植した胚軸を子葉から所定の長さで切断し、子葉のついた胚軸を寒天培地に移植する第２移植工程と、前記第２移植工程で移植した子葉のついた胚軸を人工気象機内で育成させる育成工程と、前記育成工程により育成した所定の葉菜類の内、所定の葉節以上が伸長しているものを抽だいと判定する判定工程とを備えたことを特徴とする。
【００１０】
ここで、この発明の抽だい耐性判定方法において、前記バーミキュライト培地及び寒天培地は各々所定の容積以下の小型容器内に設けることができる。
【００１１】
ここで、この発明の抽だい耐性判定方法において、前記人工気象機は所定の容積以下の小型人工気象機とすることができる。
【００１２】
ここで、この発明の抽だい耐性判定方法において、前記寒天培地は無機塩類の濃度を１／２とすることができる。
【００１３】
ここで、この発明の抽だい耐性判定方法において、前記所定の長さは１ｃｍ近傍とすることができる。
【００１４】
ここで、この発明の抽だい耐性判定方法において、前記所定の葉節は第１葉節とすることができる。
【００１５】
ここで、この発明の抽だい耐性判定方法において、前記所定の葉菜類はホウレンソウとすることができる。
【発明の効果】
【００１６】
本発明の抽だい耐性判定方法では、表面殺菌したホウレンソウ種子をバーミキュライトを敷き詰めたバーミキュライト培地に播種する（播種工程）。バーミキュライト培地は、例えば３００ｍＬ容（所定の容積）以下の例えばカルチャーボトル（小型容器）内に設けることが好適である。次に、播種工程で播種したホウレンソウ種子を人工気象機（不図示）内で発芽させる（発芽工程）。具体的には、ホウレンソウ種子が播種されたカルチャーボトルを人工気象機内に置き、好適には２５℃および８ｈ日長にて同調的に発芽させる。本発明の抽だい耐性判定方法（播種工程および発芽工程）によれば、例えば６０粒のホウレンソウ種子を１５粒ずつ４本のカルチャーボトルに入れるため、極めて省スペース化を達成することができるという効果がある。このため、使用する人工気象機は小型人工気象機でよい。上述の発芽工程は好適には２日間であり、その後、発芽した胚軸を１／２ＭＳ寒天培地（別の４本のカルチャーボトル）に移植して好適には１週間育成する（第１移植工程）。次に、第１移植工程で移植し１週間育成した後の胚軸を子葉から所定の長さで切断し、子葉のついた胚軸を直接寒天培地に移植する（第２移植工程）。胚軸は子葉から約１ｃｍ近傍（所定の長さ）で切断する。その後、子葉のついた胚軸を直接１／２ＭＳ寒天培地に移植する。１／２ＭＳ寒天培地は、例えば１００ｍＬ容（所定の容積）以下の例えばコニカルビーカー（小型容器）内に設けることが好適であり、１／２ＭＳ寒天培地はコニカルビーカー内に約２０ｍＬ入っている。次に、第２移植工程で移植した子葉のついた胚軸を上記発芽工程で用いた人工気象機内で育成させる（育成工程）。具体的には、子葉のついた胚軸を移植した１／２ＭＳ寒天培地の入ったコニカルビーカーを人工気象機内に置き、好適には２５℃および８ｈ日長にて２週間育成する。本発明の抽だい耐性判定方法（第２移植工程および育成工程）によれば、例えば胚軸を５個ずつ１２本のコニカルビーカーに入れるため、極めて省スペース化を達成することができるという効果がある。このため、使用する人工気象機は小型人工気象機でよい。以上のように、本発明の抽だい耐性判定方法（播種工程から育成工程）では大幅な省スペース化が可能となり、約２０００株／ｍ２となった。播種から２０日程度で育成が終了し、抽だいの判定が可能となった。本発明の抽だい耐性判定方法におけるバーミキュライト培地での２日間の発芽工程と１／２ＭＳ寒天培地での１週間の第１移植工程との併用により、雑菌汚染を極めて有効に軽減することができるため、ホウレンソウの効率的な発芽および育成を行うことができるという効果がある。育成工程により育成したホウレンソウの内、所定の葉節以上が伸長しているものを抽だいと判定する（判定工程）。所定の葉節としては第１葉節を用い、育成工程により育成したホウレンソウの内、第１葉節以上が伸長しているものを抽だいと判定する。
【００１７】
上記１０種類の品種のホウレンソウ種子について本発明の抽だい耐性判定方法を適用して抽だい率を算出した結果、当該１０種類の品種の既知の抽だい耐性と一致したため、本発明の抽だい耐性判定方法により抽だい耐性を判定できることが検定された。
【００１８】
本発明の抽だい耐性判定方法によれば、大幅な省スペース化が可能となり、約２０００株／ｍ２となる。この結果、約５００株／ｍ２のポット栽培法の４倍というより大幅な省スペース化を達成することができるという効果がある。さらに、播種から２０日程度で育成が終了し、抽だい耐性の判定が可能となった。この結果、約６０日の試験期間を要するポット栽培法より約１／３の短い試験期間で抽だい耐性の判定が可能となるという効果がある。１年中試験を行うことが可能である上、試験に使用する人工気象機は小型の装置ですむため、単位時間当たりの消費電力も小さくなり低コスト化を図ることもできるという効果がある。この結果、ポット栽培法より省スペース化を達成することができ、且つより短い試験期間で抽だい耐性の判定が可能である抽だい耐性判定方法を提供することができるという効果がある。
【発明を実施するための最良の形態】
【００１９】
以下、本発明の実施例について図面を参照して詳細に説明する。
【実施例１】
【００２０】
本発明の抽だい耐性判定方法を説明するために、以下では所定の葉菜類としてホウレンソウを採り上げるが、所定の葉菜類はホウレンソウに限定されるものではなく、例えばサニーレタス、チンゲンサイ、サラダ菜等であってもよい。
【００２１】
１．種子殺菌
図１（Ａ）ないし（Ｄ）は、本発明の抽だい耐性判定方法を適用するホウレンソウ種子の殺菌方法の概要を示す。種子殺菌に用いられる薬剤は、従来用いられているエタノール、次亜塩素酸ナトリウム水溶液等を用いればよい。市販の種々の濃度の薬剤は、有効（実効）塩素濃度によって適宜調節する。まず、図１（Ａ）に示されるように、ホウレンソウ種子１０を不織布で作成した袋１１に詰める。ホウレンソウ種子１０は市販されているものでよく、果皮を除いた種子等である必要はない。袋１１内には同じ品種のホウレンソウ種子１０が約６０粒入っている。約６０粒というのは便宜上の数字であって、６０粒に限定されるものではない。後述するように、本発明の抽だい耐性判定方法の妥当性を示すため、１０種類の品種のホウレンソウ種子（各約６０粒）について本発明の抽だい耐性判定方法が適用される。
【００２２】
次に、図１（Ｂ）に示されるように、ホウレンソウ種子１０が入った袋１１を８０％エタノール１２が入ったビーカー１３等内に数秒間浸して表面殺菌する。ビーカー１３等内に浸す時間は数秒間から３０秒間であってもよい。続いて、図１（Ｃ）に示されるように、Tween20またはTween20相当品のポリオキシエチレンソルビタンモノラウレートを３滴滴下した実効塩素濃度０．５％の次亜塩素酸ナトリウム水溶液１４が入ったビーカー１５等内に約４０分間浸して表面殺菌する。ビーカー１５等内に浸す時間は４０分間から４時間であってもよい。最後に、図１（Ｄ）に示されるように、表面殺菌したホウレンソウ種子１０を袋１１ごと滅菌済みの蒸留水（滅菌水）１６でよくすすいで洗浄する。
【００２３】
２．播種および発芽
図２（Ａ）、（Ｂ）は、各々表面殺菌したホウレンソウ種子１０を播種した状態を示す斜視図および平面図である。図２（Ａ）に示されるように、表面殺菌したホウレンソウ種子１０をバーミキュライトを敷き詰めたバーミキュライト培地２０に播種する（播種工程）。バーミキュライト培地２０は、例えば３００ｍＬ容（所定の容積）程度のカルチャーボトル２２ａ（小型容器）内に設けることが好適である。カルチャーボトル２２ａの容積は３００ｍＬ容に限定されるものではなく、３００ｍＬ容以下であってもよい。小型容器としてはカルチャーボトル２２ａに限定されるものではなく、上から光をあてやすく、ガラスのように割れるおそれがなく、適切な培地面積を有するものであれば、他の容器であってもよい。３００ｍＬ容カルチャーボトル２２ａに入れられるホウレンソウ種子１０の数は約１５粒程度が好適である。ホウレンソウ種子１０をカルチャーボトル２２ａに多く入れすぎると、発芽後に植物同士がぶつかることになるためである。従って、６０粒のホウレンソウ種子１０をすべて播種するためには４本のカルチャーボトル２２ａを用いる。図２（Ｂ）は、図２（Ａ）に示される雑菌の侵入を防ぐ密閉キャップ２３を外して上から撮影した写真を示す。
【００２４】
次に、播種工程で播種したホウレンソウ種子１０を人工気象機（不図示）内で発芽させる（発芽工程）。具体的には、ホウレンソウ種子１０が播種されたカルチャーボトル２２ａを人工気象機内に置き、ホウレンソウの生育適温である１５℃から２５℃の範囲（好適には実験で良い結果を得られた２５℃）で、植物を育てる通常の８ｈ日長から１６ｈ日長の範囲（好適には実験で良い結果を得られた８ｈ日長）にて同調的に発芽させる。ここで、８ｈ日長等は人工気象機における日の長さが１日あたり８時間ということであり、同調的にとはバラツキなくという程度の意味である。今回使用した人工気象機は株式会社日本医化器械製作所製の人工気象機LPH-200-RDSMPであり、外寸は横７００ｍｍ、奥行７５０ｍｍ、高さ１７５０ｍｍであり、内寸は横４８０mm、奥行４５０ｍｍ、高さ９５０ｍｍである（所定の容積）。一般に、人工気象機のサイズは様々であり、館内設置のもの、屋外設置の巨大温室まで色々ある。本発明の抽だい耐性判定方法（播種工程および発芽工程）では、カルチャーボトル２２ａを４本のみ用いるため極めて省スペース化を達成することができる。このため、使用する人工気象機は上記の所定の容積で示されるように小型人工気象機でよい。上述の発芽工程は好適には２日間であり、その後、発芽した胚軸を１／２ＭＳ寒天培地に移植して好適には１週間育成する（第１移植工程）。図３（Ａ）、（Ｂ）は、各々第１移植工程で移植し１週間育成した後の発芽した状態を示す斜視図および平面図である。図３（Ａ）、（Ｂ）で図２（Ａ）、（Ｂ）と同じ符号を付した箇所は同じ要素を示すため、説明は省略する。図３（Ａ）、（Ｂ）で、符号４０は上述した第１移植工程における１／２ＭＳ寒天培地であり、２２ｂはこの１／２ＭＳ寒天培地４０が設けられたカルチャーボトルであってカルチャーボトル２２ａと同様のものである。図３（Ａ）、（Ｂ）に示されるように、ホウレンソウ種子１０が発芽して胚軸および子葉が観察される。
【００２５】
３．移植および育成
第１移植工程により１／２ＭＳ寒天培地４０に移植し約１週間育成した後に、第１移植工程で移植した胚軸４４を子葉４２から所定の長さで切断し、子葉４２のついた胚軸４４を直接寒天培地に移植する（第２移植工程）。図４（Ａ）、（Ｂ）は、第２移植工程の概要を示す。図４（Ａ）、（Ｂ）において、符号４４は上述した発芽工程で発芽した胚軸、４２は子葉（一部）、４０は上述した第２移植工程における１／２ＭＳ寒天培地である。図４（Ａ）に示されるように、胚軸４４を子葉４２から約１ｃｍ近傍（所定の長さ）で切断する。その後、図４（Ｂ）に示されるように、子葉４２のついた胚軸４４を直接１／２ＭＳ（Murashige & Skoog）寒天培地４０に移植する。１／２ＭＳ寒天培地４０は無機塩類の濃度だけを１／２にしているが、ＭＳ寒天培地であってもよい。
【００２６】
図５（Ａ）、（Ｂ）は上述した子葉４２のついた胚軸４４を移植した状態を示す斜視図である。図５（Ａ）、（Ｂ）で図４（Ａ）、（Ｂ）と同じ符号を付した箇所は同じ要素を示すため、説明は省略する。図５（Ａ）、（Ｂ）に示されるように、１／２ＭＳ寒天培地４０は、例えば１００ｍＬ容（所定の容積）程度のコニカルビーカー５０（小型容器）内に設けることが好適である。コニカルビーカー５０の容積は１００ｍＬ容に限定されるものではなく、１００ｍＬ容以下であってもよい。１／２ＭＳ寒天培地４０はコニカルビーカー５０内に約２０ｍＬ入っている。図５（Ａ）では雑菌汚染を防ぐために、コニカルビーカー５０の上をアルミホイル５２で覆っている。図５（Ｂ）は観察しやすくするために、コニカルビーカー５０からアルミホイル５２を取り去った状態を示す。上述した４本のカルチャーボトル２２ｂから胚軸を５個ずつ１２本のコニカルビーカー５０に入れる。
【００２７】
次に、第２移植工程で移植した子葉４２のついた胚軸４４を上記発芽工程で用いた人工気象機内で育成させる（育成工程）。具体的には、子葉４２のついた胚軸４４を移植した１／２ＭＳ寒天培地４０の入ったコニカルビーカー５０を人工気象機内に置き、ホウレンソウの生育適温である１５℃から２５℃の範囲（好適には実験で良い結果を得られた２５℃）で、植物を育てる通常の８ｈ日長から１６ｈ日長の範囲（好適には実験で良い結果を得られた８ｈ日長）にて２週間育成する。育成期間は１週間から３週間の範囲であればよく、好適には実験で良い結果が得られた２週間である。本発明の抽だい耐性判定方法（移植工程および育成工程）では、コニカルビーカー５０を１２本のみ用いるため極めて省スペース化を達成することができる。このため、使用する人工気象機は上記の所定の容積で示されるように小型人工気象機でよい。以上のように、本発明の抽だい耐性判定方法（播種工程から育成工程）では大幅な省スペース化が可能となり、約２０００株／ｍ２となった。播種から２０日程度で育成が終了し、以下で述べる抽だいの判定が可能となった。
【００２８】
図６は抽だいを判定可能な程度に育成された状態のホウレンソウを示す。図６で図５（Ａ）、（Ｂ）と同じ符号を付した箇所は同じ要素を示すため、説明は省略する。図６に示されるように、バーミキュライト培地２０で発芽させた後、１／２ＭＳ寒天培地４０で２週間育成した状態のホウレンソウは、効率的に発芽および育成が行われている。図７は参考のためバーミキュライト培地２０での発芽工程を行わず、従来のように寒天培地４０で発芽させた状態のホウレンソウを示す。図７で図６と同じ符号を付した箇所は同じ要素を示すため、説明は省略する。図７に示されるように、寒天培地４０で発芽させた場合、雑菌汚染が起こりやすくなるため、効率的な発芽および育成を行うことが難しい。以上のように、本発明の抽だい耐性判定方法におけるバーミキュライト培地２０での２日間の発芽工程と１／２ＭＳ寒天培地４０での１週間の第１移植工程との併用により、雑菌汚染を極めて有効に軽減することができるため、ホウレンソウの効率的な発芽および育成を行うことができる。
【００２９】
４．判定
育成工程により育成したホウレンソウの内、所定の葉節以上が伸長しているものを抽だいと判定する（判定工程）。図８は、育成工程で抽だいと判定されたホウレンソウを示す。図８に示されるように、胚軸４４の上に子葉４２が対生で向かい合ってつき、その上に子葉節８０から第１葉８１が伸び、その後は互生で子葉節８０の上の第１葉節８２から第２葉８３が伸び、第１葉節８２の上には第２葉節８４が観察される。所定の葉節としては第１葉節８２を用い、育成工程により育成したホウレンソウの内、第１葉節８２以上が伸長しているものを抽だいと判定する。
【００３０】
図９は、判定工程で判定された抽だい株と非抽だい株とを例示する。図９で図８と同じ符号を付した箇所は同じ要素を示すため、説明は省略する。図９に示されるように、株９０および９１は第１葉節８２以上が伸長しているため、抽だい株と判定される。一方、図９に示される株９２ないし９５は、いずれも子葉節８０までは伸長しているが第１葉節８２以上が伸長していないため、非抽だい株と判定される。
【００３１】
図１０は、本発明の抽だい耐性判定方法の妥当性を示すため、抽だい率が既知の１０種類の品種のホウレンソウ種子について、各々本発明の抽だい耐性判定方法を適用して抽だい率を算出した結果を示すグラフである。ここで抽だい率は、例えば１００個のホウレンソウの粒の内、６０個が発芽、育成して抽だい株となった場合、抽だい率６０％とする。図１０で、縦軸は抽だい率（％）であり、横軸は抽だい率が既知の１０種類のホウレンソウ種子の品種および抽だい耐性（弱、中、強）を並べて示す。図１０に示されるように、品種まほろばの抽だい率は１００％、品種日本ホウレンソウの抽だい率は約９０％、品種ディンプルの抽だい率は約８５％、品種ミストラルの抽だい率は約７０％、品種ソロモンの抽だい率は約７０％、品種リードの抽だい率は約５０％、品種晩抽パルクの抽だい率は約３５％、品種アクティブの抽だい率は約２０％、品種サンライトの抽だい率は約５％、品種アクティオンの抽だい率は約５％であった。既知の事実として、品種まほろば、品種日本ホウレンソウおよび品種ディンプルは抽だい耐性が弱とされており、品種ミストラル、品種ソロモンおよび品種リードの抽だい耐性は中とされており、品種晩抽パルク、品種アクティブ、品種サンライトおよび品種アクティオンの抽だい耐性は強とされている。図１０に示されるように、本発明の抽だい耐性判定方法を適用して抽だい率を算出した結果、品種まほろば、品種日本ホウレンソウおよび品種ディンプルは抽だい率が８０％以上となったため、抽だい耐性は弱と考えられる。品種ミストラル、品種ソロモンおよび品種リードは抽だい率が５０％から７０％となったため、抽だい耐性は中と考えられる。品種晩抽パルク、品種アクティブ、品種サンライトおよび品種アクティオンは抽だい率が４０％以下となったため、抽だい耐性は強と考えられる。従って、上記１０種類の品種のホウレンソウ種子について本発明の抽だい耐性判定方法を適用して抽だい率を算出した結果、当該１０種類の品種の既知の抽だい耐性と一致したため、本発明の抽だい耐性判定方法により抽だい耐性を判定できることが検定された。上記１０種類以外のホウレンソウの品種についても、本発明の抽だい耐性判定方法により抽だい耐性を判定できるものと考えられる。
【００３２】
以上より、本発明の実施例１によれば、表面殺菌したホウレンソウ種子１０をバーミキュライトを敷き詰めたバーミキュライト培地２０に播種する（播種工程）。バーミキュライト培地２０は、例えば３００ｍＬ容以下のカルチャーボトル２２ａ内に設けることが好適である。次に、播種工程で播種したホウレンソウ種子１０を人工気象機内で発芽させる（発芽工程）。具体的には、ホウレンソウ種子１０が播種されたカルチャーボトル２２ａを人工気象機内に置き、好適には実験で良い結果を得られた２５℃および８ｈ日長にて同調的に発芽させる。本発明の抽だい耐性判定方法（播種工程および発芽工程）では、カルチャーボトル２２を４本のみ用いるため極めて省スペース化を達成することができる。このため、使用する人工気象機は上記の所定の容積で示されるように小型人工気象機でよい。上述の発芽工程は好適には２日間であり、その後、発芽した胚軸を１／２ＭＳ寒天培地（別のカルチャーボトル２２ｂ）に移植し好適には１週間育成する（第１移植工程）。次に、第１移植工程で移植し１週間育成した後の胚軸４４を子葉４２から約１ｃｍ近傍の長さで切断し、子葉のついた胚軸を直接寒天培地に移植する（第２移植工程）。その後、子葉４２のついた胚軸４４を直接１／２ＭＳ寒天培地４０に移植する。１／２ＭＳ寒天培地４０は、例えば１００ｍＬ容以下のコニカルビーカー５０内に設けることが好適であり、１／２ＭＳ寒天培地４０はコニカルビーカー５０内に約２０ｍＬ入っている。次に、移植工程で移植した子葉４２のついた胚軸４４を上記発芽工程で用いた人工気象機内で育成させる（育成工程）。具体的には、子葉４２のついた胚軸４４を移植した１／２ＭＳ寒天培地４０の入ったコニカルビーカー５０を人工気象機内に置き、好適には実験で良い結果を得られた２５℃および８ｈ日長にて２週間育成する。育成期間は１週間から３週間の範囲であればよく、好適には実験で良い結果が得られた２週間である。本発明の抽だい耐性判定方法（第２移植工程および育成工程）では、コニカルビーカー５０を１２本のみ用いるため極めて省スペース化を達成することができる。このため、使用する人工気象機は上記の所定の容積で示されるように小型人工気象機でよい。以上のように、本発明の抽だい耐性判定方法（播種工程から育成工程）では大幅な省スペース化が可能となり、約２０００株／ｍ２となった。播種から２０日程度で育成が終了し、抽だいの判定が可能となった。本発明の抽だい耐性判定方法におけるバーミキュライト培地２０での２日間の発芽工程と１／２ＭＳ寒天培地４０での１週間の第１移植工程との併用により、雑菌汚染を極めて有効に軽減することができるため、ホウレンソウの効率的な発芽および育成を行うことができる。育成工程により育成したホウレンソウの内、所定の葉節以上が伸長しているものを抽だいと判定する（判定工程）。所定の葉節としては第１葉節８２を用い、育成工程により育成したホウレンソウの内、第１葉節８２以上が伸長しているものを抽だいと判定する。
【００３３】
上記１０種類の品種のホウレンソウ種子について本発明の抽だい耐性判定方法を適用して抽だい率を算出した結果、当該１０種類の品種の既知の抽だい耐性と一致したため、本発明の抽だい耐性判定方法により抽だい耐性を判定できることが検定された。上記１０種類以外のホウレンソウの品種についても、本発明の抽だい耐性判定方法により抽だい耐性を判定できるものと考えられる。
【００３４】
以上より、本発明の抽だい耐性判定方法では大幅な省スペース化が可能となり、約２０００株／ｍ２となった。この結果、約５００株／ｍ２のポット栽培法の４倍というより大幅な省スペース化を達成することができた。さらに、播種から２０日程度で育成が終了し、抽だい耐性の判定が可能となった。この結果、約６０日の試験期間を要するポット栽培法より約１／３の短い試験期間で抽だい耐性の判定が可能となった。１年中試験を行うことが可能である上、試験に使用する人工気象機は小型の装置ですむため、単位時間当たりの消費電力も小さくなり低コスト化を図ることもできる。以上により、ポット栽培法より省スペース化を達成することができ、且つより短い試験期間で抽だい耐性の判定が可能である抽だい耐性判定方法を提供することができる。
【産業上の利用可能性】
【００３５】
本発明の活用例として、種々の葉菜類、例えばホウレンソウ、サニーレタス、チンゲンサイ、サラダ菜等に適用することができる。
【図面の簡単な説明】
【００３６】
【図１】本発明の抽だい耐性判定方法を適用するホウレンソウ種子の殺菌方法の概要を示す図である。
【図２】表面殺菌したホウレンソウ種子１０を播種した状態を示す斜視図および平面図である。
【図３】第１移植工程で移植し１週間育成した後の発芽した状態を示す斜視図および平面図である。
【図４】第２移植工程の概要を示す図である。
【図５】子葉４２のついた胚軸４４を移植した状態を示す斜視図である。
【図６】抽だいを判定可能な程度に育成された状態のホウレンソウを示す図である。
【図７】参考のためバーミキュライト培地２０での発芽工程を行わず、従来のように寒天培地４０で発芽させた状態のホウレンソウを示す図である。
【図８】育成工程で抽だいと判定されたホウレンソウを示す図である。
【図９】判定工程で判定された抽だい株と非抽だい株とを例示する図である。
【図１０】本発明の抽だい耐性判定方法の妥当性を示すため、抽だい率が既知の１０種類の品種のホウレンソウ種子について本発明の抽だい耐性判定方法を適用して抽だい率を算出した結果を示すグラフである。
【符号の説明】
【００３７】
１０ ホウレンソウ種子、 １１ 袋、 １２ エタノール、 １３、１５ ビーカー等、 １４ 次亜塩素酸ナトリウム水溶液、 １６ 滅菌水、 ２０ バーミキュライト培地、 ２２ａ、２２ｂ カルチャーボトル、 ２３ 密閉キャップ、 ４０ １／２ＭＳ寒天培地、 ４２ 子葉、 ４４ 胚軸、 ５０ コニカルビーカー、 ８０ 子葉節、 ８１ 第１葉、 ８２ 第１葉節、 ８３ 第２葉、 ８４ 第２葉節、 ９０、９１ 抽だい株、 ９２、９３、９４、９５ 非抽だい株。
【技術分野】
【０００１】
本発明は、所定の葉菜類、特にホウレンソウの抽だい耐性を判定する抽だい耐性判定方法に関する。
【背景技術】
【０００２】
ホウレンソウは、夏等のように明期が暗期より長い長日条件で生育させると、花を咲かせるために茎が著しく伸びる抽だいが促進される。抽だいしたホウレンソウは食用とする器官である葉等の栄養が少なくなり、繊維質になると言われている。このため、抽だいしたホウレンソウは商品価値が著しく減ずることになる。従って、抽だいしにくい品種の作出は、品種改良において従来から重要な項目の一つとされてきた（非特許文献１参照）。
【０００３】
抽だいしにくいホウレンソウの品種の作出を行うためには、抽だいが起きるかどうか、抽だいする程度等のいわゆる抽だいの特性を示す抽だい耐性の判定法が重要である。この抽だい耐性の判定法として、どのように栽培するのかという点に着目した畑栽培法とポット栽培法とがある。
【０００４】
畑栽培法とは、ホウレンソウを畑で栽培し、その抽だい耐性を判定する判定法である。自然環境で栽培するため、抽だい耐性の判定法として最も確実性が高い。一方、広い敷地が必要であり、育成可能株数は約５０株／ｍ２程度であるという問題があった。自然環境で栽培するということは、１年に１回しか試験を行うことができないという欠点を有することでもあった。
【０００５】
上述した畑栽培法の問題を解決する判定法として、ポット栽培法がある。ポット栽培法とは、ホウレンソウを直径約４ｃｍ程度の多穴ポットを利用して栽培し、その抽だい耐性を判定する判定法である。ポット栽培法は人工気象室を利用するため畑栽培法と比較して広い敷地は不要であり、育成可能株数は約５００株／ｍ２程度である。加えて、人工気象室で栽培するため１年中試験を行うことが可能であり、播種から約６０日程度の試験期間で抽だい耐性の判定が可能である。
【０００６】
【非特許文献１】“たより１８号”、東北農業研究センターたより、［online］、独立行政法人農業・食品産業技術総合研究機構、［平成２０年６月１２日検索］、インターネット、<URL: http://tohoku.naro.affrc.go.jp/periodical/tayori/18/no18_01.html>
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００７】
上述したように、ポット栽培法で利用する人工気象室のスペースは畑栽培法が必要とする広い敷地よりは少ない。しかし、人工気象室は一般に大型施設であり、育成可能株数は約５００株／ｍ２程度であったため、より省スペース化が要求されているという問題があった。ポット栽培法では畑栽培法より短い試験期間で抽だい耐性の判定が可能であるが、それでも播種から約６０日程度の試験期間を要していたため、より短い試験期間が要求されているという問題があった。
【０００８】
そこで、本発明の目的は、上記問題を解決するためになされたものであり、ポット栽培法より省スペース化を達成することができ、且つより短い試験期間で抽だい耐性の判定が可能である抽だい耐性判定方法を提供することにある。
【課題を解決するための手段】
【０００９】
この発明の抽だい耐性判定方法は、所定の葉菜類の抽だい耐性を判定する抽だい耐性判定方法であって、殺菌した所定の葉菜類の種子をバーミキュライト培地に播種する播種工程と、前記播種工程で播種した所定の葉菜類の種子を人工気象機内で発芽させる発芽工程と、前記発芽工程により発芽した胚軸を寒天培地に移植する第１移植工程と、前記第１移植工程で移植した胚軸を子葉から所定の長さで切断し、子葉のついた胚軸を寒天培地に移植する第２移植工程と、前記第２移植工程で移植した子葉のついた胚軸を人工気象機内で育成させる育成工程と、前記育成工程により育成した所定の葉菜類の内、所定の葉節以上が伸長しているものを抽だいと判定する判定工程とを備えたことを特徴とする。
【００１０】
ここで、この発明の抽だい耐性判定方法において、前記バーミキュライト培地及び寒天培地は各々所定の容積以下の小型容器内に設けることができる。
【００１１】
ここで、この発明の抽だい耐性判定方法において、前記人工気象機は所定の容積以下の小型人工気象機とすることができる。
【００１２】
ここで、この発明の抽だい耐性判定方法において、前記寒天培地は無機塩類の濃度を１／２とすることができる。
【００１３】
ここで、この発明の抽だい耐性判定方法において、前記所定の長さは１ｃｍ近傍とすることができる。
【００１４】
ここで、この発明の抽だい耐性判定方法において、前記所定の葉節は第１葉節とすることができる。
【００１５】
ここで、この発明の抽だい耐性判定方法において、前記所定の葉菜類はホウレンソウとすることができる。
【発明の効果】
【００１６】
本発明の抽だい耐性判定方法では、表面殺菌したホウレンソウ種子をバーミキュライトを敷き詰めたバーミキュライト培地に播種する（播種工程）。バーミキュライト培地は、例えば３００ｍＬ容（所定の容積）以下の例えばカルチャーボトル（小型容器）内に設けることが好適である。次に、播種工程で播種したホウレンソウ種子を人工気象機（不図示）内で発芽させる（発芽工程）。具体的には、ホウレンソウ種子が播種されたカルチャーボトルを人工気象機内に置き、好適には２５℃および８ｈ日長にて同調的に発芽させる。本発明の抽だい耐性判定方法（播種工程および発芽工程）によれば、例えば６０粒のホウレンソウ種子を１５粒ずつ４本のカルチャーボトルに入れるため、極めて省スペース化を達成することができるという効果がある。このため、使用する人工気象機は小型人工気象機でよい。上述の発芽工程は好適には２日間であり、その後、発芽した胚軸を１／２ＭＳ寒天培地（別の４本のカルチャーボトル）に移植して好適には１週間育成する（第１移植工程）。次に、第１移植工程で移植し１週間育成した後の胚軸を子葉から所定の長さで切断し、子葉のついた胚軸を直接寒天培地に移植する（第２移植工程）。胚軸は子葉から約１ｃｍ近傍（所定の長さ）で切断する。その後、子葉のついた胚軸を直接１／２ＭＳ寒天培地に移植する。１／２ＭＳ寒天培地は、例えば１００ｍＬ容（所定の容積）以下の例えばコニカルビーカー（小型容器）内に設けることが好適であり、１／２ＭＳ寒天培地はコニカルビーカー内に約２０ｍＬ入っている。次に、第２移植工程で移植した子葉のついた胚軸を上記発芽工程で用いた人工気象機内で育成させる（育成工程）。具体的には、子葉のついた胚軸を移植した１／２ＭＳ寒天培地の入ったコニカルビーカーを人工気象機内に置き、好適には２５℃および８ｈ日長にて２週間育成する。本発明の抽だい耐性判定方法（第２移植工程および育成工程）によれば、例えば胚軸を５個ずつ１２本のコニカルビーカーに入れるため、極めて省スペース化を達成することができるという効果がある。このため、使用する人工気象機は小型人工気象機でよい。以上のように、本発明の抽だい耐性判定方法（播種工程から育成工程）では大幅な省スペース化が可能となり、約２０００株／ｍ２となった。播種から２０日程度で育成が終了し、抽だいの判定が可能となった。本発明の抽だい耐性判定方法におけるバーミキュライト培地での２日間の発芽工程と１／２ＭＳ寒天培地での１週間の第１移植工程との併用により、雑菌汚染を極めて有効に軽減することができるため、ホウレンソウの効率的な発芽および育成を行うことができるという効果がある。育成工程により育成したホウレンソウの内、所定の葉節以上が伸長しているものを抽だいと判定する（判定工程）。所定の葉節としては第１葉節を用い、育成工程により育成したホウレンソウの内、第１葉節以上が伸長しているものを抽だいと判定する。
【００１７】
上記１０種類の品種のホウレンソウ種子について本発明の抽だい耐性判定方法を適用して抽だい率を算出した結果、当該１０種類の品種の既知の抽だい耐性と一致したため、本発明の抽だい耐性判定方法により抽だい耐性を判定できることが検定された。
【００１８】
本発明の抽だい耐性判定方法によれば、大幅な省スペース化が可能となり、約２０００株／ｍ２となる。この結果、約５００株／ｍ２のポット栽培法の４倍というより大幅な省スペース化を達成することができるという効果がある。さらに、播種から２０日程度で育成が終了し、抽だい耐性の判定が可能となった。この結果、約６０日の試験期間を要するポット栽培法より約１／３の短い試験期間で抽だい耐性の判定が可能となるという効果がある。１年中試験を行うことが可能である上、試験に使用する人工気象機は小型の装置ですむため、単位時間当たりの消費電力も小さくなり低コスト化を図ることもできるという効果がある。この結果、ポット栽培法より省スペース化を達成することができ、且つより短い試験期間で抽だい耐性の判定が可能である抽だい耐性判定方法を提供することができるという効果がある。
【発明を実施するための最良の形態】
【００１９】
以下、本発明の実施例について図面を参照して詳細に説明する。
【実施例１】
【００２０】
本発明の抽だい耐性判定方法を説明するために、以下では所定の葉菜類としてホウレンソウを採り上げるが、所定の葉菜類はホウレンソウに限定されるものではなく、例えばサニーレタス、チンゲンサイ、サラダ菜等であってもよい。
【００２１】
１．種子殺菌
図１（Ａ）ないし（Ｄ）は、本発明の抽だい耐性判定方法を適用するホウレンソウ種子の殺菌方法の概要を示す。種子殺菌に用いられる薬剤は、従来用いられているエタノール、次亜塩素酸ナトリウム水溶液等を用いればよい。市販の種々の濃度の薬剤は、有効（実効）塩素濃度によって適宜調節する。まず、図１（Ａ）に示されるように、ホウレンソウ種子１０を不織布で作成した袋１１に詰める。ホウレンソウ種子１０は市販されているものでよく、果皮を除いた種子等である必要はない。袋１１内には同じ品種のホウレンソウ種子１０が約６０粒入っている。約６０粒というのは便宜上の数字であって、６０粒に限定されるものではない。後述するように、本発明の抽だい耐性判定方法の妥当性を示すため、１０種類の品種のホウレンソウ種子（各約６０粒）について本発明の抽だい耐性判定方法が適用される。
【００２２】
次に、図１（Ｂ）に示されるように、ホウレンソウ種子１０が入った袋１１を８０％エタノール１２が入ったビーカー１３等内に数秒間浸して表面殺菌する。ビーカー１３等内に浸す時間は数秒間から３０秒間であってもよい。続いて、図１（Ｃ）に示されるように、Tween20またはTween20相当品のポリオキシエチレンソルビタンモノラウレートを３滴滴下した実効塩素濃度０．５％の次亜塩素酸ナトリウム水溶液１４が入ったビーカー１５等内に約４０分間浸して表面殺菌する。ビーカー１５等内に浸す時間は４０分間から４時間であってもよい。最後に、図１（Ｄ）に示されるように、表面殺菌したホウレンソウ種子１０を袋１１ごと滅菌済みの蒸留水（滅菌水）１６でよくすすいで洗浄する。
【００２３】
２．播種および発芽
図２（Ａ）、（Ｂ）は、各々表面殺菌したホウレンソウ種子１０を播種した状態を示す斜視図および平面図である。図２（Ａ）に示されるように、表面殺菌したホウレンソウ種子１０をバーミキュライトを敷き詰めたバーミキュライト培地２０に播種する（播種工程）。バーミキュライト培地２０は、例えば３００ｍＬ容（所定の容積）程度のカルチャーボトル２２ａ（小型容器）内に設けることが好適である。カルチャーボトル２２ａの容積は３００ｍＬ容に限定されるものではなく、３００ｍＬ容以下であってもよい。小型容器としてはカルチャーボトル２２ａに限定されるものではなく、上から光をあてやすく、ガラスのように割れるおそれがなく、適切な培地面積を有するものであれば、他の容器であってもよい。３００ｍＬ容カルチャーボトル２２ａに入れられるホウレンソウ種子１０の数は約１５粒程度が好適である。ホウレンソウ種子１０をカルチャーボトル２２ａに多く入れすぎると、発芽後に植物同士がぶつかることになるためである。従って、６０粒のホウレンソウ種子１０をすべて播種するためには４本のカルチャーボトル２２ａを用いる。図２（Ｂ）は、図２（Ａ）に示される雑菌の侵入を防ぐ密閉キャップ２３を外して上から撮影した写真を示す。
【００２４】
次に、播種工程で播種したホウレンソウ種子１０を人工気象機（不図示）内で発芽させる（発芽工程）。具体的には、ホウレンソウ種子１０が播種されたカルチャーボトル２２ａを人工気象機内に置き、ホウレンソウの生育適温である１５℃から２５℃の範囲（好適には実験で良い結果を得られた２５℃）で、植物を育てる通常の８ｈ日長から１６ｈ日長の範囲（好適には実験で良い結果を得られた８ｈ日長）にて同調的に発芽させる。ここで、８ｈ日長等は人工気象機における日の長さが１日あたり８時間ということであり、同調的にとはバラツキなくという程度の意味である。今回使用した人工気象機は株式会社日本医化器械製作所製の人工気象機LPH-200-RDSMPであり、外寸は横７００ｍｍ、奥行７５０ｍｍ、高さ１７５０ｍｍであり、内寸は横４８０mm、奥行４５０ｍｍ、高さ９５０ｍｍである（所定の容積）。一般に、人工気象機のサイズは様々であり、館内設置のもの、屋外設置の巨大温室まで色々ある。本発明の抽だい耐性判定方法（播種工程および発芽工程）では、カルチャーボトル２２ａを４本のみ用いるため極めて省スペース化を達成することができる。このため、使用する人工気象機は上記の所定の容積で示されるように小型人工気象機でよい。上述の発芽工程は好適には２日間であり、その後、発芽した胚軸を１／２ＭＳ寒天培地に移植して好適には１週間育成する（第１移植工程）。図３（Ａ）、（Ｂ）は、各々第１移植工程で移植し１週間育成した後の発芽した状態を示す斜視図および平面図である。図３（Ａ）、（Ｂ）で図２（Ａ）、（Ｂ）と同じ符号を付した箇所は同じ要素を示すため、説明は省略する。図３（Ａ）、（Ｂ）で、符号４０は上述した第１移植工程における１／２ＭＳ寒天培地であり、２２ｂはこの１／２ＭＳ寒天培地４０が設けられたカルチャーボトルであってカルチャーボトル２２ａと同様のものである。図３（Ａ）、（Ｂ）に示されるように、ホウレンソウ種子１０が発芽して胚軸および子葉が観察される。
【００２５】
３．移植および育成
第１移植工程により１／２ＭＳ寒天培地４０に移植し約１週間育成した後に、第１移植工程で移植した胚軸４４を子葉４２から所定の長さで切断し、子葉４２のついた胚軸４４を直接寒天培地に移植する（第２移植工程）。図４（Ａ）、（Ｂ）は、第２移植工程の概要を示す。図４（Ａ）、（Ｂ）において、符号４４は上述した発芽工程で発芽した胚軸、４２は子葉（一部）、４０は上述した第２移植工程における１／２ＭＳ寒天培地である。図４（Ａ）に示されるように、胚軸４４を子葉４２から約１ｃｍ近傍（所定の長さ）で切断する。その後、図４（Ｂ）に示されるように、子葉４２のついた胚軸４４を直接１／２ＭＳ（Murashige & Skoog）寒天培地４０に移植する。１／２ＭＳ寒天培地４０は無機塩類の濃度だけを１／２にしているが、ＭＳ寒天培地であってもよい。
【００２６】
図５（Ａ）、（Ｂ）は上述した子葉４２のついた胚軸４４を移植した状態を示す斜視図である。図５（Ａ）、（Ｂ）で図４（Ａ）、（Ｂ）と同じ符号を付した箇所は同じ要素を示すため、説明は省略する。図５（Ａ）、（Ｂ）に示されるように、１／２ＭＳ寒天培地４０は、例えば１００ｍＬ容（所定の容積）程度のコニカルビーカー５０（小型容器）内に設けることが好適である。コニカルビーカー５０の容積は１００ｍＬ容に限定されるものではなく、１００ｍＬ容以下であってもよい。１／２ＭＳ寒天培地４０はコニカルビーカー５０内に約２０ｍＬ入っている。図５（Ａ）では雑菌汚染を防ぐために、コニカルビーカー５０の上をアルミホイル５２で覆っている。図５（Ｂ）は観察しやすくするために、コニカルビーカー５０からアルミホイル５２を取り去った状態を示す。上述した４本のカルチャーボトル２２ｂから胚軸を５個ずつ１２本のコニカルビーカー５０に入れる。
【００２７】
次に、第２移植工程で移植した子葉４２のついた胚軸４４を上記発芽工程で用いた人工気象機内で育成させる（育成工程）。具体的には、子葉４２のついた胚軸４４を移植した１／２ＭＳ寒天培地４０の入ったコニカルビーカー５０を人工気象機内に置き、ホウレンソウの生育適温である１５℃から２５℃の範囲（好適には実験で良い結果を得られた２５℃）で、植物を育てる通常の８ｈ日長から１６ｈ日長の範囲（好適には実験で良い結果を得られた８ｈ日長）にて２週間育成する。育成期間は１週間から３週間の範囲であればよく、好適には実験で良い結果が得られた２週間である。本発明の抽だい耐性判定方法（移植工程および育成工程）では、コニカルビーカー５０を１２本のみ用いるため極めて省スペース化を達成することができる。このため、使用する人工気象機は上記の所定の容積で示されるように小型人工気象機でよい。以上のように、本発明の抽だい耐性判定方法（播種工程から育成工程）では大幅な省スペース化が可能となり、約２０００株／ｍ２となった。播種から２０日程度で育成が終了し、以下で述べる抽だいの判定が可能となった。
【００２８】
図６は抽だいを判定可能な程度に育成された状態のホウレンソウを示す。図６で図５（Ａ）、（Ｂ）と同じ符号を付した箇所は同じ要素を示すため、説明は省略する。図６に示されるように、バーミキュライト培地２０で発芽させた後、１／２ＭＳ寒天培地４０で２週間育成した状態のホウレンソウは、効率的に発芽および育成が行われている。図７は参考のためバーミキュライト培地２０での発芽工程を行わず、従来のように寒天培地４０で発芽させた状態のホウレンソウを示す。図７で図６と同じ符号を付した箇所は同じ要素を示すため、説明は省略する。図７に示されるように、寒天培地４０で発芽させた場合、雑菌汚染が起こりやすくなるため、効率的な発芽および育成を行うことが難しい。以上のように、本発明の抽だい耐性判定方法におけるバーミキュライト培地２０での２日間の発芽工程と１／２ＭＳ寒天培地４０での１週間の第１移植工程との併用により、雑菌汚染を極めて有効に軽減することができるため、ホウレンソウの効率的な発芽および育成を行うことができる。
【００２９】
４．判定
育成工程により育成したホウレンソウの内、所定の葉節以上が伸長しているものを抽だいと判定する（判定工程）。図８は、育成工程で抽だいと判定されたホウレンソウを示す。図８に示されるように、胚軸４４の上に子葉４２が対生で向かい合ってつき、その上に子葉節８０から第１葉８１が伸び、その後は互生で子葉節８０の上の第１葉節８２から第２葉８３が伸び、第１葉節８２の上には第２葉節８４が観察される。所定の葉節としては第１葉節８２を用い、育成工程により育成したホウレンソウの内、第１葉節８２以上が伸長しているものを抽だいと判定する。
【００３０】
図９は、判定工程で判定された抽だい株と非抽だい株とを例示する。図９で図８と同じ符号を付した箇所は同じ要素を示すため、説明は省略する。図９に示されるように、株９０および９１は第１葉節８２以上が伸長しているため、抽だい株と判定される。一方、図９に示される株９２ないし９５は、いずれも子葉節８０までは伸長しているが第１葉節８２以上が伸長していないため、非抽だい株と判定される。
【００３１】
図１０は、本発明の抽だい耐性判定方法の妥当性を示すため、抽だい率が既知の１０種類の品種のホウレンソウ種子について、各々本発明の抽だい耐性判定方法を適用して抽だい率を算出した結果を示すグラフである。ここで抽だい率は、例えば１００個のホウレンソウの粒の内、６０個が発芽、育成して抽だい株となった場合、抽だい率６０％とする。図１０で、縦軸は抽だい率（％）であり、横軸は抽だい率が既知の１０種類のホウレンソウ種子の品種および抽だい耐性（弱、中、強）を並べて示す。図１０に示されるように、品種まほろばの抽だい率は１００％、品種日本ホウレンソウの抽だい率は約９０％、品種ディンプルの抽だい率は約８５％、品種ミストラルの抽だい率は約７０％、品種ソロモンの抽だい率は約７０％、品種リードの抽だい率は約５０％、品種晩抽パルクの抽だい率は約３５％、品種アクティブの抽だい率は約２０％、品種サンライトの抽だい率は約５％、品種アクティオンの抽だい率は約５％であった。既知の事実として、品種まほろば、品種日本ホウレンソウおよび品種ディンプルは抽だい耐性が弱とされており、品種ミストラル、品種ソロモンおよび品種リードの抽だい耐性は中とされており、品種晩抽パルク、品種アクティブ、品種サンライトおよび品種アクティオンの抽だい耐性は強とされている。図１０に示されるように、本発明の抽だい耐性判定方法を適用して抽だい率を算出した結果、品種まほろば、品種日本ホウレンソウおよび品種ディンプルは抽だい率が８０％以上となったため、抽だい耐性は弱と考えられる。品種ミストラル、品種ソロモンおよび品種リードは抽だい率が５０％から７０％となったため、抽だい耐性は中と考えられる。品種晩抽パルク、品種アクティブ、品種サンライトおよび品種アクティオンは抽だい率が４０％以下となったため、抽だい耐性は強と考えられる。従って、上記１０種類の品種のホウレンソウ種子について本発明の抽だい耐性判定方法を適用して抽だい率を算出した結果、当該１０種類の品種の既知の抽だい耐性と一致したため、本発明の抽だい耐性判定方法により抽だい耐性を判定できることが検定された。上記１０種類以外のホウレンソウの品種についても、本発明の抽だい耐性判定方法により抽だい耐性を判定できるものと考えられる。
【００３２】
以上より、本発明の実施例１によれば、表面殺菌したホウレンソウ種子１０をバーミキュライトを敷き詰めたバーミキュライト培地２０に播種する（播種工程）。バーミキュライト培地２０は、例えば３００ｍＬ容以下のカルチャーボトル２２ａ内に設けることが好適である。次に、播種工程で播種したホウレンソウ種子１０を人工気象機内で発芽させる（発芽工程）。具体的には、ホウレンソウ種子１０が播種されたカルチャーボトル２２ａを人工気象機内に置き、好適には実験で良い結果を得られた２５℃および８ｈ日長にて同調的に発芽させる。本発明の抽だい耐性判定方法（播種工程および発芽工程）では、カルチャーボトル２２を４本のみ用いるため極めて省スペース化を達成することができる。このため、使用する人工気象機は上記の所定の容積で示されるように小型人工気象機でよい。上述の発芽工程は好適には２日間であり、その後、発芽した胚軸を１／２ＭＳ寒天培地（別のカルチャーボトル２２ｂ）に移植し好適には１週間育成する（第１移植工程）。次に、第１移植工程で移植し１週間育成した後の胚軸４４を子葉４２から約１ｃｍ近傍の長さで切断し、子葉のついた胚軸を直接寒天培地に移植する（第２移植工程）。その後、子葉４２のついた胚軸４４を直接１／２ＭＳ寒天培地４０に移植する。１／２ＭＳ寒天培地４０は、例えば１００ｍＬ容以下のコニカルビーカー５０内に設けることが好適であり、１／２ＭＳ寒天培地４０はコニカルビーカー５０内に約２０ｍＬ入っている。次に、移植工程で移植した子葉４２のついた胚軸４４を上記発芽工程で用いた人工気象機内で育成させる（育成工程）。具体的には、子葉４２のついた胚軸４４を移植した１／２ＭＳ寒天培地４０の入ったコニカルビーカー５０を人工気象機内に置き、好適には実験で良い結果を得られた２５℃および８ｈ日長にて２週間育成する。育成期間は１週間から３週間の範囲であればよく、好適には実験で良い結果が得られた２週間である。本発明の抽だい耐性判定方法（第２移植工程および育成工程）では、コニカルビーカー５０を１２本のみ用いるため極めて省スペース化を達成することができる。このため、使用する人工気象機は上記の所定の容積で示されるように小型人工気象機でよい。以上のように、本発明の抽だい耐性判定方法（播種工程から育成工程）では大幅な省スペース化が可能となり、約２０００株／ｍ２となった。播種から２０日程度で育成が終了し、抽だいの判定が可能となった。本発明の抽だい耐性判定方法におけるバーミキュライト培地２０での２日間の発芽工程と１／２ＭＳ寒天培地４０での１週間の第１移植工程との併用により、雑菌汚染を極めて有効に軽減することができるため、ホウレンソウの効率的な発芽および育成を行うことができる。育成工程により育成したホウレンソウの内、所定の葉節以上が伸長しているものを抽だいと判定する（判定工程）。所定の葉節としては第１葉節８２を用い、育成工程により育成したホウレンソウの内、第１葉節８２以上が伸長しているものを抽だいと判定する。
【００３３】
上記１０種類の品種のホウレンソウ種子について本発明の抽だい耐性判定方法を適用して抽だい率を算出した結果、当該１０種類の品種の既知の抽だい耐性と一致したため、本発明の抽だい耐性判定方法により抽だい耐性を判定できることが検定された。上記１０種類以外のホウレンソウの品種についても、本発明の抽だい耐性判定方法により抽だい耐性を判定できるものと考えられる。
【００３４】
以上より、本発明の抽だい耐性判定方法では大幅な省スペース化が可能となり、約２０００株／ｍ２となった。この結果、約５００株／ｍ２のポット栽培法の４倍というより大幅な省スペース化を達成することができた。さらに、播種から２０日程度で育成が終了し、抽だい耐性の判定が可能となった。この結果、約６０日の試験期間を要するポット栽培法より約１／３の短い試験期間で抽だい耐性の判定が可能となった。１年中試験を行うことが可能である上、試験に使用する人工気象機は小型の装置ですむため、単位時間当たりの消費電力も小さくなり低コスト化を図ることもできる。以上により、ポット栽培法より省スペース化を達成することができ、且つより短い試験期間で抽だい耐性の判定が可能である抽だい耐性判定方法を提供することができる。
【産業上の利用可能性】
【００３５】
本発明の活用例として、種々の葉菜類、例えばホウレンソウ、サニーレタス、チンゲンサイ、サラダ菜等に適用することができる。
【図面の簡単な説明】
【００３６】
【図１】本発明の抽だい耐性判定方法を適用するホウレンソウ種子の殺菌方法の概要を示す図である。
【図２】表面殺菌したホウレンソウ種子１０を播種した状態を示す斜視図および平面図である。
【図３】第１移植工程で移植し１週間育成した後の発芽した状態を示す斜視図および平面図である。
【図４】第２移植工程の概要を示す図である。
【図５】子葉４２のついた胚軸４４を移植した状態を示す斜視図である。
【図６】抽だいを判定可能な程度に育成された状態のホウレンソウを示す図である。
【図７】参考のためバーミキュライト培地２０での発芽工程を行わず、従来のように寒天培地４０で発芽させた状態のホウレンソウを示す図である。
【図８】育成工程で抽だいと判定されたホウレンソウを示す図である。
【図９】判定工程で判定された抽だい株と非抽だい株とを例示する図である。
【図１０】本発明の抽だい耐性判定方法の妥当性を示すため、抽だい率が既知の１０種類の品種のホウレンソウ種子について本発明の抽だい耐性判定方法を適用して抽だい率を算出した結果を示すグラフである。
【符号の説明】
【００３７】
１０ ホウレンソウ種子、 １１ 袋、 １２ エタノール、 １３、１５ ビーカー等、 １４ 次亜塩素酸ナトリウム水溶液、 １６ 滅菌水、 ２０ バーミキュライト培地、 ２２ａ、２２ｂ カルチャーボトル、 ２３ 密閉キャップ、 ４０ １／２ＭＳ寒天培地、 ４２ 子葉、 ４４ 胚軸、 ５０ コニカルビーカー、 ８０ 子葉節、 ８１ 第１葉、 ８２ 第１葉節、 ８３ 第２葉、 ８４ 第２葉節、 ９０、９１ 抽だい株、 ９２、９３、９４、９５ 非抽だい株。
【特許請求の範囲】
【請求項１】
所定の葉菜類の抽だい耐性を判定する抽だい耐性判定方法であって、
殺菌した所定の葉菜類の種子をバーミキュライト培地に播種する播種工程と、
前記播種工程で播種した所定の葉菜類の種子を人工気象機内で発芽させる発芽工程と、
前記発芽工程により発芽した胚軸を寒天培地に移植する第１移植工程と、
前記第１移植工程で移植した胚軸を子葉から所定の長さで切断し、子葉のついた胚軸を別の寒天培地に移植する第２移植工程と、
前記第２移植工程で移植した子葉のついた胚軸を人工気象機内で育成させる育成工程と、
前記育成工程により育成した所定の葉菜類の内、所定の葉節以上が伸長しているものを抽だいと判定する判定工程とを備えたことを特徴とする抽だい耐性判定方法。
【請求項２】
請求項１記載の抽だい耐性判定方法において、前記バーミキュライト培地及び寒天培地は各々所定の容積以下の小型容器内に設けられたことを特徴とする抽だい耐性判定方法。
【請求項３】
請求項１又は２記載の抽だい耐性判定方法において、前記人工気象機は所定の容積以下の小型人工気象機であることを特徴とする抽だい耐性判定方法。
【請求項４】
請求項１乃至３のいずれかに記載の抽だい耐性判定方法において、前記寒天培地は無機塩類の濃度を１／２としたことを特徴とする抽だい耐性判定方法。
【請求項５】
請求項１乃至４のいずれかに記載の抽だい耐性判定方法において、前記所定の長さは１ｃｍ近傍であることを特徴とする抽だい耐性判定方法。
【請求項６】
請求項１乃至５のいずれかに記載の抽だい耐性判定方法において、前記所定の葉節は第１葉節であることを特徴とする抽だい耐性判定方法。
【請求項７】
請求項１乃至６のいずれかに記載の抽だい耐性判定方法において、前記所定の葉菜類はホウレンソウであることを特徴とする抽だい耐性判定方法。
【請求項１】
所定の葉菜類の抽だい耐性を判定する抽だい耐性判定方法であって、
殺菌した所定の葉菜類の種子をバーミキュライト培地に播種する播種工程と、
前記播種工程で播種した所定の葉菜類の種子を人工気象機内で発芽させる発芽工程と、
前記発芽工程により発芽した胚軸を寒天培地に移植する第１移植工程と、
前記第１移植工程で移植した胚軸を子葉から所定の長さで切断し、子葉のついた胚軸を別の寒天培地に移植する第２移植工程と、
前記第２移植工程で移植した子葉のついた胚軸を人工気象機内で育成させる育成工程と、
前記育成工程により育成した所定の葉菜類の内、所定の葉節以上が伸長しているものを抽だいと判定する判定工程とを備えたことを特徴とする抽だい耐性判定方法。
【請求項２】
請求項１記載の抽だい耐性判定方法において、前記バーミキュライト培地及び寒天培地は各々所定の容積以下の小型容器内に設けられたことを特徴とする抽だい耐性判定方法。
【請求項３】
請求項１又は２記載の抽だい耐性判定方法において、前記人工気象機は所定の容積以下の小型人工気象機であることを特徴とする抽だい耐性判定方法。
【請求項４】
請求項１乃至３のいずれかに記載の抽だい耐性判定方法において、前記寒天培地は無機塩類の濃度を１／２としたことを特徴とする抽だい耐性判定方法。
【請求項５】
請求項１乃至４のいずれかに記載の抽だい耐性判定方法において、前記所定の長さは１ｃｍ近傍であることを特徴とする抽だい耐性判定方法。
【請求項６】
請求項１乃至５のいずれかに記載の抽だい耐性判定方法において、前記所定の葉節は第１葉節であることを特徴とする抽だい耐性判定方法。
【請求項７】
請求項１乃至６のいずれかに記載の抽だい耐性判定方法において、前記所定の葉菜類はホウレンソウであることを特徴とする抽だい耐性判定方法。
【図１】
【図４】
【図１０】
【図２】
【図３】
【図５】
【図６】
【図７】
【図８】
【図９】
【図４】
【図１０】
【図２】
【図３】
【図５】
【図６】
【図７】
【図８】
【図９】
【公開番号】特開２０１０−１７１４９（Ｐ２０１０−１７１４９Ａ）
【公開日】平成２２年１月２８日（２０１０．１．２８）
【国際特許分類】
【出願番号】特願２００８−１８１７７３（Ｐ２００８−１８１７７３）
【出願日】平成２０年７月１１日（２００８．７．１１）
【国等の委託研究の成果に係る記載事項】（出願人による申告）平成１９年度、文部科学省、「実用化のための可能性試験（ＦＳ）」（野菜の安定供給を目指した抗抽だい剤の実証試験）委託研究、産業技術力強化法第１９条の適用を受ける特許出願
【出願人】（５０４２２９２８４）国立大学法人弘前大学 (162)
【Ｆターム（参考）】
【公開日】平成２２年１月２８日（２０１０．１．２８）
【国際特許分類】
【出願日】平成２０年７月１１日（２００８．７．１１）
【国等の委託研究の成果に係る記載事項】（出願人による申告）平成１９年度、文部科学省、「実用化のための可能性試験（ＦＳ）」（野菜の安定供給を目指した抗抽だい剤の実証試験）委託研究、産業技術力強化法第１９条の適用を受ける特許出願
【出願人】（５０４２２９２８４）国立大学法人弘前大学 (162)
【Ｆターム（参考）】
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