新規な診断マーカーであるＣＴ−プロＡＤＭによる診断および危険性の層化
本発明は、疾患の診断および／または疾患の危険性を層化するための新規な診断マーカーＣＴ−プロＡＤＭ（プレプロＡＤＭ、配列番号１のＣ末端フラグメント）に関する。疾患、特に、心血管疾患、心機能不全、ならびに肺および気道の感染および／もしくは炎症を、診断ならびに／またはその危険性を層化するための方法がまた、開示される。上記方法において、上記ＣＴ−プロＡＤＭ（配列番号１）マーカー、またはその部分ペプチドもしくはフラグメント、またはマーカー組み合わせ（パネル、クラスター）に含まれる上記マーカーは、試験されるべき患者において測定される。本発明はさらに、診断装置および上記方法を実施するためのキットに関する。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
（説明）
本発明は、疾患の診断および／または危険性の層化のための、新規な診断マーカーであるＣＴ−プロＡＤＭ（プレプロＡＤＭ、配列番号１のＣ末端フラグメント）に関する。疾患、特に、心血管疾患、心機能不全、ならびに肺および気道の感染および／もしくは炎症の診断および／または危険性の層化のための方法もまた、開示される。上記方法において、上記ＣＴ−プロＡＤＭ（配列番号１）マーカー、またはその部分ペプチドもしくはフラグメント、あるいはマーカー組み合わせ（パネル、クラスター）に含まれる上記マーカーは、試験されるべき患者において測定される。本発明はさらに、診断装置、ならびに上記方法を行うためのキットに関する。
【背景技術】
【０００２】
先行技術は、診断において、特に、敗血症を診断する目的で（特許文献１）、プロアドレノメデュリン（プロＡＤＭ）およびアドレノメデュリンをどのように測定するかを記載する（特許文献２，非特許文献１；非特許文献２；Ｋｏｂａｙａｓｈｉ Ｋ，Ｋｉｔａｍｕｒａ Ｋ，Ｅｔｏｈ Ｔ，Ｎａｇａｔｏｍｏ Ｙ，Ｔａｋｅｎａｇａ Ｍ，Ｉｓｈｉｋａｗａ Ｔら，Ｉｎｃｒｅａｓｅｄ ｐｌａｓｍａ ａｄｒｅｎｏｍｅｄｕｌｌｉｎ ｌｅｖｅｌｓ ｉｎ ｃｈｒｏｎｉｃ ｃｏｎｇｅｓｔｉｖｅ ｈｅａｒｔ ｆａｉｌｕｒｅ．Ａｍ Ｈｅａｒｔ Ｊ １９９６；１３１：９９４−８；Ｋｏｂａｙａｓｈｉ Ｋ，Ｋｉｔａｍｕｒａ Ｋ，Ｈｉｒａｙａｍａ Ｎ，Ｄａｔｅ Ｈ，Ｋａｓｈｉｗａｇｉ Ｔ，Ｉｋｕｓｈｉｍａ Ｉら，Ｉｎｃｒｅａｓｅｄ ｐｌａｓｍａ ａｄｒｅｎｏｍｅｄｕｌｌｉｎ ｉｎ ａｃｕｔｅ ｍｙｏｃａｒｄｉａｌ ｉｎｆａｒｃｔｉｏｎ．Ａｍ Ｈｅａｒｔ Ｊ １９９６；１３１：６７６−８０）。診断のための（プレ）プロアドレノメデュリンのＮ末端フラグメントはまた、特許文献２に記載されている（例えば、ＰＡＭＰ（Ｈａｓｈｉｄａ Ｓ，Ｋｉｔａｍｕｒａ Ｋ，Ｎａｇａｔｏｍｏ Ｙ，Ｓｈｉｂａｔａ Ｙ，Ｉｍａｍｕｒａ Ｔ，Ｙａｍａｄａ Ｋら，Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ ｏｆ ａｎ ｕｌｔｒａ ｓｅｎｓｉｔｉｖｅ ｅｎｚｙｍｅ ｉｍｍｕｎｏａｓｓａｙ ｆｏｒ ｈｕｍａｎ ｐｒｏ−ａｄｒｅｎｏｍｅｄｕｌｌｉｎ Ｎ−ｔｅｒｍｉｎａｌ ２０ ｐｅｐｔｉｄｅ ａｎｄ ｄｉｒｅｃｔ ｍｅａｓｕｒｅｍｅｎｔ ｏｆ ｔｗｏ ｍｏｌｅｃｕｌａｒ ｆｏｒｍｓ ｏｆ ＰＡＭＰ ｉｎ ｐｌａｓｍａ ｆｒｏｍ ｈｅａｌｔｈｙ ｓｕｂｊｅｃｔｓ ａｎｄ ｐａｔｉｅｎｔｓ ｗｉｔｈ ｃａｒｄｉｏｖａｓｃｕｌａｒ ｄｉｓｅａｓｅ． Ｃｌｉｎ Ｂｉｏｃｈｅｍ ２００４；３７：１４−２１））。
【０００３】
さらに、上記プロ−アドレノメデュリンのさらなるフラグメント、すなわち、いわゆる中間領域のプロ−アドレノメデュリン（ＭＲプロＡＤＭ）は、診断目的で、ＥＰ１４８８２０９Ｂ１に開示される（Ｓｔｒｕｃｋ Ｊ，Ｔａｏ Ｃ，Ｍｏｒｇｅｎｔｈａｌｅｒ ＮＧ，Ｂｅｒｇｍａｎｎ Ａ．Ｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎ ｏｆ ａｎ Ａｄｒｅｎｏｍｅｄｕｌｌｉｎ ｐｒｅｃｕｒｓｏｒ ｆｒａｇｍｅｎｔ ｉｎ ｐｌａｓｍａ ｏｆ ｓｅｐｓｉｓ ｐａｔｉｅｎｔｓ．Ｐｅｐｔｉｄｅｓ ２００４；２５：１３６９−７２；Ｍｏｒｇｅｎｔｈａｌｅｒ ＮＧ，Ｓｔｒｕｃｋ Ｊ，Ａｌｏｎｓｏ Ｃ，Ｂｅｒｇｍａｎｎ Ａ．Ｍｅａｓｕｒｅｍｅｎｔ ｏｆ ｍｉｄ−ｒｅｇｉｏｎａｌ ｐｒｏ−ａｄｒｅｎｏｍｅｄｕｌｌｉｎ ｉｎ ｐｌａｓｍａ ｗｉｔｈ ａｎ ｉｍｍｕｎｏｌｕｍｉｎｏｍｅｔｒｉｃ ａｓｓａｙ．Ｃｌｉｎ Ｃｈｅｍ ２００５；５１：１８２３−９；Ｃｈｒｉｓｔ−Ｃｒａｉｎ Ｍ，Ｍｏｒｇｅｎｔｈａｌｅｒ ＮＧ，Ｓｔｏｌｚ Ｄ，Ｍｕｌｌｅｒ Ｃ，Ｂｉｎｇｉｓｓｅｒ Ｒ，Ｈａｒｂａｒｔｈ Ｓら，Ｐｒｏ−ａｄｒｅｎｏｍｅｄｕｌｌｉｎ ｔｏ ｐｒｅｄｉｃｔ ｓｅｖｅｒｉｔｙ ａｎｄ ｏｕｔｃｏｍｅ ｉｎ ｃｏｍｍｕｎｉｔｙ−ａｃｑｕｉｒｅｄ ｐｎｅｕｍｏｎｉａ ［ＩＳＲＣＴＮ０４１７６３９７］．Ｃｒｉｔ Ｃａｒｅ ２００６；１０：Ｒ９６；Ｃｈｒｉｓｔ−Ｃｒａｉｎ Ｍ，Ｍｏｒｇｅｎｔｈａｌｅｒ ＮＧ，Ｓｔｒｕｃｋ Ｊ，Ｈａｒｂａｒｔｈ Ｓ，Ｂｅｒｇｍａｎｎ Ａ，Ｍｕｌｌｅｒ Ｂ．Ｍｉｄ−ｒｅｇｉｏｎａｌ ｐｒｏ−ａｄｒｅｎｏｍｅｄｕｌｌｉｎ ａｓ ａ ｐｒｏｇｎｏｓｔｉｃ ｍａｒｋｅｒ ｉｎ ｓｅｐｓｉｓ：ａｎ ｏｂｓｅｒｖａｔｉｏｎａｌ ｓｔｕｄｙ．Ｃｒｉｔ Ｃａｒｅ ２００５；９：Ｒ８１６−２４）。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００４】
【特許文献１】欧州特許第ｌ１２１６００号明細書
【特許文献２】欧州特許第０６２２４５８号明細書
【非特許文献】
【０００５】
【非特許文献１】Ｌｅｗｉｓ ＬＫ，Ｓｍｉｔｈ ＭＷ，Ｙａｎｄｌｅ ＴＧ，Ｒｉｃｈａｒｄｓ ＡＭ，Ｎｉｃｈｏｌｌｓ ＭＧ． Ａｄｒｅｎｏｍｅｄｕｌｌｉｎ（１−５２） ｍｅａｓｕｒｅｄ ｉｎ ｈｕｍａｎ ｐｌａｓｍａ ｂｙ ｒａｄｉｏｉｍｍｕｎｏａｓｓａｙ：ｐｌａｓｍａ ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ，ａｄｓｏｒｐｔｉｏｎ，ａｎｄ ｓｔｏｒａｇｅ．Ｃｌｉｎ Ｃｈｅｍ １９９８；４４：５７１−７
【非特許文献２】Ｕｅｄａ Ｓ，Ｎｉｓｈｉｏ Ｋ，Ｍｉｎａｍｉｎｏ Ｎ，Ｋｕｂｏ Ａ，Ａｋａｉ Ｙ，Ｋａｎｇａｗａ Ｋら，Ｉｎｃｒｅａｓｅｄ ｐｌａｓｍａ ｌｅｖｅｌｓ ｏｆ ａｄｒｅｎｏｍｅｄｕｌｌｉｎ ｉｎ ｐａｔｉｅｎｔｓ ｗｉｔｈ ｓｙｓｔｅｍｉｃ ｉｎｆｌａｍｍａｔｏｒｙ ｒｅｓｐｏｎｓｅ ｓｙｎｄｒｏｍｅ．Ａｍ Ｊ Ｒｅｓｐｉｒ Ｃｒｉｔ Ｃａｒｅ Ｍｅｄ １９９９；１６０：１３２−６
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００６】
しかし、信頼性の高い診断を提供し、または疾患、特に、心血管疾患、心機能不全、肺および気道の感染および／もしくは炎症について、特に、さらなる臨床的決定に関して、そして特に、特に、心血管疾患、心機能不全、肺および気道の感染および／もしくは炎症を伴う疾患の重篤度に関して、（危険性の）層化を行う必要性が非常にある。
【課題を解決するための手段】
【０００７】
新規のマーカーを提供することは、本発明の１つの課題である。本発明のさらなる課題は、疾患、特に、心血管疾患、心機能不全、ならびに肺および気道の感染および／もしくは炎症の診断および／または危険性を層化するための改善された方法を提供することからなる。
【０００８】
他方で、上記課題は、診断マーカーであるＣＴ−プロＡＤＭ（プロアドレノメデュリン，配列番号１のＣ末端フラグメント）、またはその部分ペプチドもしくはフラグメントを提供することによって、他方で、疾患のインビトロ診断および／または危険性の層化のための方法によって解決される。上記方法において、上記ＣＴ−プロＡＤＭ（配列番号１）マーカー、またはその部分ペプチドもしくはフラグメント、あるいはマーカー組み合わせ（パネル、クラスター）中に含まれる上記マーカーは、試験されるべき患者において測定される（本発明に従う以下の方法）。
【図面の簡単な説明】
【０００９】
【図１】図１である。
【図２】図２である。
【図３】図３である。
【発明を実施するための形態】
【００１０】
用語「危険性の層化」とは、本発明によれば、最も有利な疾患経過をもたらすという目的とともに、疾患のより集中した診断および（追跡（Ｆｏｌｇｅ−））治療／処置の目的のために、よりひどい予後を有する罹患した患者を見いだすことからなる。
【００１１】
従って、特に有利には、信頼性の高い診断および／または危険性の層化は、本発明に従う方法によって行われ得る。本発明に従う方法は、より迅速な診断をもたらす臨床的決定を行うことを可能にする。このような臨床的決定はまた、疾患の処置または治療のための薬物を使用することによるさらなる処置を含む。
【００１２】
従って、本発明はまた、患者の危険性の層化のための、特に、臨床的決定に関して、好ましくは、集中医療もしくは救急救命医療における患者の層化のための、時間が重要な場合には、患者の入院のための方法に関する。
【００１３】
本発明に従う方法のさらなる好ましい実施形態において、上記診断および／または危険性の層化が、予後のために、鑑別診断的初期診断および検出のために、重篤度の評価のために、ならびに治療に伴う疾患経過の評価のために行われる。
【００１４】
本発明に従う方法のさらなる実施形態において、体液もしくは身体組織、好ましくは、血液、あるいは全血、血清もしくは入手可能な血漿は、試験されるべき患者から採取され、そして診断は、インビトロ／エキソビボ（すなわち、ヒトもしくは動物の身体の外）で行われる。マーカーであるＣＴ−プロＡＤＭ（配列番号１）、またはその部分ペプチドもしくはフラグメントの測定、ならびに少なくとも１種の患者サンプル中のその存在量に起因して、診断または危険性の層化が行われ得る。
【００１５】
本発明の範囲内で、「疾患」は、ヒトおよび動物、特に、哺乳動物の病気として理解されるべきである。このような疾患、特に、ヒトの疾患の説明は、Ｐｓｃｈｙｒｅｍｂｅｌ，Ｄｅ Ｇｒｕｙｔｅｒ，Ｂｅｒｌｉｎ ２００４において見いだされ得る。
【００１６】
しかし、特に有利には、心血管疾患、心機能不全、肺および気道の感染および／もしくは炎症は、本発明の範囲内で診断および／または層化され得る。
【００１７】
用語「心血管疾患」とは、本発明によれば、心臓および血液循環、特に、高血圧症、冠動脈性心疾患、特に、急性冠症候群、（急性）心筋梗塞、狭心症のような適応症のすべての疾患を含む。
【００１８】
用語「急性冠症候群」とは、すぐに生命を脅かす冠動脈性心疾患の種々の相を含む。特に、このことは、救急救命医療、すなわち、急性心筋梗塞および／もしくは狭心症、ならびに突然心臓死に関する。ＷＨＯ基準（ＷＨＯ（１９７９）：Ｎｏｍｅｎｃｌａｔｕｒｅ ａｎｄ ｃｒｉｔｅｒｉａ ｆｏｒ ｄｉａｇｎｏｓｉｓ ｏｆ ｉｓｃｈｅｍｉｃ ｈｅａｒｔ ｄｉｓｅａｓｅ．Ｒｅｐｏｒｔ ｏｆ ｔｈｅ Ｊｏｉｎｔ Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ Ｓｏｃｉｅｔｙ ａｎｄ Ｆｅｄｅｒａｔｉｏｎ ｏｆ Ｃａｒｄｉｏｌｏｇｙ／Ｗｏｒｌｄ Ｈｅａｌｔｈ Ｏｒｇａｎｉｚａｔｉｏｎ ｔａｓｋ ｆｏｒｃｅ ｏｎ ｓｔａｎｄａｒｄｉｚａｔｉｏｎ ｏｆ ｃｌｉｎｉｃａｌ ｎｏｍｅｎｃｌａｔｕｒｅ，Ｃｉｒｃｕｌａｔｉｏｎ ５９（３）：６０７−６０９）に従って、ＳＴ部分の上昇および／または心筋酵素の増加と関連して、２０分間より長く持続する急性胸痛事象として定義される上記急性心筋梗塞に加えて、用語、不安定狭心症（ＡＰ）が作られ、本発明によれば、「急性冠症候群」の下で読み取られ得る（Ｈａｍｍ ＣＷ： Ｇｕｉｄｅｌｉｎｅｓ：Ａｃｕｔｅ Ｃｏｒｏｎａｒｙ Ｓｙｎｄｒｏｍｅ（ＡＣＳ）−Ｐａｒｔ １：ＡＣＳ ｗｉｔｈｏｕｔ ａ ｐｅｒｓｉｓｔｉｎｇ ｅｌｅｖａｔｉｏｎ ｏｆ ｔｈｅ ＳＴ ｓｅｇｍｅｎｔ．Ｚ Ｋａｒｄｉｏｌ（２００４）９３：７２−９０）。
【００１９】
本発明の範囲内で、「心機能不全」は、心臓が急性的もしくは慢性的に、組織に十分な血液を供給する、結果として、酸素を供給して安静時および負荷時に組織代謝を保証することができないこととして理解される。臨床的に、心機能不全は、代表的な症状（呼吸困難、疲労、流動性保持（Ｆｌｕｅｓｓｉｇｋｅｉｔｓｒｅｔｅｎｔｉｏｎ））が存在する場合に存在し、その原因は、収縮機能不全もしくは拡張機能不全の意味内で、心機能不全に基づく。慢性心機能不全はまた、本発明によって包含される（Ｃａｒｄｉｏｌｏｇｙ ｃｏｍｐａｃｔ， ｐｕｂｌｉｓｈｅｄ ｂｙ Ｃｈｒｉｓｔｉａｎ Ｍｅｗｉｓ， Ｒｅｉｍｅｒ Ｒｉｅｓｓｅｎ ａｎｄ Ｉｏａｋｉｍ Ｓｐｙｒｉｄｏｐｏｕｌｏｓ，２ｎｄ ｕｎｃｈａｎｇｅｄ ｅｄｉｔｉｏｎ，Ｔｈｉｅｍｅ ２００６）。心機能不全は、以下によって引き起こされ得る：弁膜性心臓欠陥（Ｈｅｒｚｋｌａｐｐｅｎｆｅｈｌｅｒ）（例えば、リウマチ熱の長期の結果として）、心筋炎（心筋の炎症）、心不整脈、高血圧症（高血圧）を除く心臓発作および／または冠状血管の動脈硬化症（石灰化）（冠動脈性心疾患）。本発明は、（欝血性）心機能不全を伴う高血圧性心疾患、（欝血性）心機能不全を伴う高血圧性心腎疾患、原発性右心不全、二次的右心不全、苦痛を伴わない左心不全（ＮＹＨＡ［Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ Ｈｅａｒｔ Ａｓｓｏｃｉａｔｉｏｎ］ステージＩ）、増大したストレス下で苦痛を伴う左心不全（ＮＹＨＡ ステージＩＩ）、軽いストレス下で苦痛を伴う左心不全（ＮＹＨＡ ステージＩＩＩ）、安静時に苦痛を伴う左心不全（ＮＹＨＡ ステージＩＶ）および心原性ショックをさらに含む。
【００２０】
本発明の文脈内において、用語「肺および気道の感染」とは、特に、細菌、ウイルス、真菌もしくは寄生生物によって引き起こされるそのような感染、例えば、深部気道感染（ＬＲＴＩ：下気道感染）、気管支炎、肺炎、サルコイドーシス、気管支拡張症、非心原性肺浮腫（ｎｏｎ−ｃａｒｄｉａｃ ｐｕｌｍｏｎａｒｙ ｅｄｅｍａ）のような適応症を意味する。さらに、本発明に従って好ましいのは、深部気道感染（ＬＲＴＩ：下気道感染）、気管支炎、腐敗性気管支炎、肺炎である。特に好ましいのは、肺炎、特に市中肺炎（ＣＡＰ：市中感染（ｃｏｍｍｕｎｉｔｙ−ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ）肺炎）、深部気道感染（ＬＲＴＩ：下気道感染）である。
【００２１】
本発明の範囲内において、肺炎は、肺組織の急性もしくは慢性の炎症であると理解される。上記感染は、細菌、ウイルスもしくは真菌によって引き起こされ、希な場合には、毒性物質を吸入することによって毒性的に、または免疫学的にも引き起こされる。臨床医に関しては、肺炎は、胸郭ｘ線で見える少なくとも１つの浸潤物と組み合わせて、種々の症状（熱もしくは低体温症、振戦、咳、胸膜性胸郭痛（ｐｌｅｕｒｉｔｉｃ ｔｈｏｒａｘ ｐａｉｎ）、増大した喀痰生成、増大した呼吸速度、聴打診音減弱、気管支性呼吸、高頻度のラ音、胸膜摩擦音）の状態を構成する（Ｈａｒｒｉｓｏｎ’ｓ Ｉｎｔｅｒｎａｌ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ， ｐｕｂｌｉｓｈｅｄ ｂｙ Ｍａｎｆｒｅｄ Ｄｉｅｔｅｌ， Ｎｏｒｂｅｒｔ Ｓｕｔｔｏｒｐ ａｎｄ Ｍａｒｔｉｎ Ｚｅｉｔｚ， ＡＢＷ Ｗｉｓｓｅｎｓｃｈａｆｔｓｖｅｒｌａｇ ［ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ ｈｏｕｓｅ］ ２００５）。
【００２２】
本発明の範囲内において、用語「肺および気道の感染性疾患」または「肺および気道の炎症性疾患」とは、間質性肺疾患および肺線維症、慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）、特に、ＣＯＰＤ感染悪化、気管支喘息、特に、気管支喘息を伴う感染悪化、気管支癌腫のような適応症を意味する。
【００２３】
本発明によれば、ＣＯＰＤは、ストレス下での咳、増大した喀痰および呼吸困難によって特徴づけられる慢性疾患の群をいう。第１のおよび主要な、慢性閉塞性気管支炎および肺気腫が、言及されなければならない。両方の臨床的像は、呼気の妨害によって特に特徴づけられる。さらに、ＣＯＰＤの主要な症状は、口語的に、「喫煙者の咳（Ｒａｕｃｈｅｒｈｕｓｔｅｎ）」といわれる。本発明は特に、急性悪化の場合に有利である。
【００２４】
本発明の範囲内において、「ＣＴ−プロＡＤＭ」とは、以下のアミノ酸配列（配列番号１：ＳＬＰＥＡＧＰＧＲＴＬＶＳＳＫＰＱＡＨＧＡＰＡＰＰＳＧＳＡＰＨＦＬ）を有する３３アミノ酸からなる遊離のヒトタンパク質もしくはポリペプチド、またはプレプロアドレノメデュリンの、配列番号２のアミノ酸配列１５３〜１８５（１５３位はＳｅｒを表し、１８５位はＬｅｕを表す）を有するフラグメント（図１）（Ｋｉｔａｍｕｒａ Ｋ，Ｓａｋａｔａ Ｊ，Ｋａｎｇａｗａ Ｋ，Ｋｏｊｉｍａ Ｍ，Ｍａｔｓｕｏ Ｈ，Ｅｔｏ Ｔ．Ｃｌｏｎｉｎｇ ａｎｄ ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎ ｏｆ ｃＤＮＡ ｅｎｃｏｄｉｎｇ ａ ｐｒｅｃｕｒｓｏｒ ｆｏｒ ｈｕｍａｎ ａｄｒｅｎｏｍｅｄｕｌｌｉｎ Ｂｉｏｃｈｅｍ Ｂｉｏｐｈｙｓ Ｒｅｓ Ｃｏｍｍｕｎ １９９３；１９４：７２０−７２５）、またはその部分ペプチドおよび／もしくはフラグメントとして理解されるべきである。このようなフラグメントは、例えば、配列番号１のアミノ酸配列１〜１５および／またはプレプロアドレノメデュリン（図１）の１５３〜１６７もしくは配列番号１の１９〜３３および／またはプレプロアドレノメデュリン（図１）の１７１〜１８５（実施例を参照のこと）であり得る。その血管収縮効果に起因して、ＣＴ−プロＡＤＭはまた、アドレノメデュリンといわれる（Ｇｕｍｕｓｅｌ Ｂ，Ｃｈａｎｇ ＪＫ，Ｈｙｍａｎ Ａ，Ｌｉｐｐｔｏｎ Ｈ．Ａｄｒｅｎｏｔｅｎｓｉｎ：ａｎ ＡＤＭ ｇｅｎｅ ｐｒｏｄｕｃｔ ｗｉｔｈ ｔｈｅ ｏｐｐｏｓｉｔｅ ｅｆｆｅｃｔｓ ｏｆ ＡＤＭ．Ｌｉｆｅ Ｓｃｉ １９９５；５７：ＰＬ８７−９０）。
【００２５】
本発明に従う「ＣＴ−プロＡＤＭ」とはまた、改変（例えば、グリコシル化、脂質化もしくは誘導体化）を特徴とし得る。
【００２６】
さらなる実施形態において、上記「ＣＴ−プロＡＤＭ」（配列番号１）はまた、さらなるマーカーとともに測定され得、「上記マーカーであるＣＴ−プロＡＤＭ」は、マーカー組み合わせ（パネル、クラスター）、すなわち、好ましくは、疾患を既に示すこのようなマーカー組み合わせに含まれる。しかし、好ましいのは、順番に本発明の範囲内において好まれる、相乗効果をもたらし得る適応症／疾患を示すそのようなマーカーである。
【００２７】
従って、本発明は、本発明に従う方法のこのような実施形態（測定は、炎症マーカー、心血管マーカー、神経ホルモンマーカー、または虚血マーカーの群からの少なくとも１つのさらなるマーカーによってさらに選択される選択され、試験されるべき患者において行われる）に関する。
【００２８】
本発明によれば、上記炎症マーカーは、Ｃ反応性タンパク質（ＣＲＰ）、サイトカイン（例えば、ＴＮＦ−α）、インターロイキン（例えば、ＩＬ−６）、プロカルシトニン（１〜１１６、３〜１１６）および接着分子（例えば、ＶＣＡＭもしくはＩＣＡＭ）の群からの少なくとも１つのマーカーから選択され得、ならびに上記心血管マーカーは、クレアチンキナーゼ、ミエロペルオキシダーゼ、コペプチン、ミオグロビン、ナトリウム利尿性タンパク質、特に、ＡＮＰ（もしくはＡＮＦ）、プロＡＮＰ、ＮＴ−プロＡＮＰ、ＢＮＰ、プロＢＮＰ、ＮＴ−プロＢＮＰ、または各場合には、これらの部分配列、心筋トロポニン、ＣＲＰの群からの少なくとも１つのマーカーから選択され得る。さらに、これはまた、循環を調節する（プロ）ホルモン、特に、例えば、プロ−ガストリン放出ペプチド（プロＧＲＰ）、プロ−エンドセリン（プロＥｎｄ）、プロ−レプチン、プロ−ニューロペプチド−Ｙ、プロ−ソマトスタチン、プロ−ニューロペプチド−ＹＹ、プロ−オピオメラノコルチン、コペプチン、もしくは各場合には、これらの部分配列を含む。上記虚血マーカーは、トロポニンＩおよびＴ、ＣＫ−ＭＢの群からの少なくとも１つのマーカーから選択され得る。さらに、上記神経ホルモンマーカーは、少なくとも、ナトリウム利尿性タンパク質、特に、ＡＮＰ（もしくはＡＮＦ）、プロＡＮＰ、ＮＴ−プロＡＮＰ、ＢＮＰ、プロＢＮＰ、ＮＴ−プロＢＮＰ、または各場合には、これらの部分配列であり得る。特に好ましいのは、ＣＴ−プロＡＤＭと、プロホルモン（特に、プロＢＮＰ、ＮＴ−プロＢＮＰ）とのマーカー組み合わせである。
【００２９】
本発明のさらなる実施形態において、本発明に従う方法は、上記マーカーの並行したもしくは同時の測定を使用して（例えば、９６以上の穴を有するマルチタイタープレート）行われ得、上記測定は、少なくとも１つの患者サンプルによって行われる。
【００３０】
本発明に従う方法およびその測定はまた、自動分析デバイス、特に、Ｋｒｙｐｔｏｒ（ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｋｒｙｐｔｏｒ．ｎｅｔ）によって行われ得る。
【００３１】
さらなる実施形態において、本発明に従う方法およびその測定は、迅速な試験（例えば、ラテラルフロー試験（ｌａｔｅｒａｌ−ｆｌｏｗ Ｔｅｓｔ））によって行われ、個々のもしくはマルチパラメーター測定を介してである。
【００３２】
本発明はさらに、疾患、特に、心血管疾患、心機能不全、肺および気道の感染および／もしくは炎症のインビトロ診断および／または危険性の層化のための、ＣＴ−プロＡＤＭ（配列番号１）、またはその部分ペプチドもしくはフラグメントの使用に関する。
【００３３】
さらなる実施形態において、本発明は、心臓診断における、ＣＴ−プロＡＤＭ（配列番号１）、またはその部分ペプチドもしくはフラグメントの使用に関する。
【００３４】
本発明はさらに、疾患、特に、心血管疾患、心機能不全、肺および気道の感染および／もしくは炎症のインビトロ診断および／または危険性の層化のため、ならびに特に上記の実施形態を考慮する際の、ＣＴ−プロＡＤＭ（配列番号１）、またはその部分ペプチドもしくはフラグメント、またはマーカー組み合わせ（パネル、クラスター）に含まれるものの使用に関する。上記マーカー組み合わせは、おそらくさらなる適切なマーカーを含み得る。
【００３５】
さらなる課題は、本発明に従う方法を実施するための、適切な診断デバイスの提供、またはこのようなデバイスの使用である。
【００３６】
本発明の範囲内において、このような診断デバイスは、特に、アレイもしくはアッセイ（例えば、イムノアッセイ、ＥＬＩＳＡなど）、最も広義において、本発明に従う方法を行うためのデバイスであると理解される。
【００３７】
本発明はさらに、疾患、特に、心血管疾患、心機能不全、肺および気道の感染および／もしくは炎症をインビトロで診断および／または危険性を層化するためのキット、またはこのようなキットの使用に関する。上記方法において、上記ＣＴ−プロＡＤＭ（配列番号１）マーカー、またはその部分ペプチドもしくはフラグメント、またはマーカー組み合わせ（パネル，クラスター）に含まれる上記マーカーは、試験されるべき患者において、特に、上記の実施形態を考慮して測定される。このような検出試薬としては、例えば、抗体などが挙げられる。
【００３８】
従って、本発明はさらに、ＣＴ−プロＡＤＭの検出のための抗体、特にモノクローナル抗体（これは、ＣＴ−プロＡＤＭを個々に、好ましくは、結合部位である配列番号１の１〜１５もしくは１９〜３３において結合するか、または各場合において、互いに独立して、上記ＣＴ−プロＡＤＭを両方の結合部位において結合する）に関する。
【００３９】
以下の実施例および図面の目的は、本発明を詳細に説明することであるが、本発明を上記実施例および図面に限定することはない。
【実施例】
【００４０】
イムノアッセイ
ペプチド合成
プレプロＡＤＭの公知のアミノ酸配列から、２つの領域を選択した（１５３〜１６７位、１７１〜１８５位）。上記領域（各々、Ｎ末端システイン残部が追加される）を、化学的に合成し、精製し、質量分析および逆相ＨＰＬＣによって品質について検査し、そして可溶性ペプチドとして、標準的方法に基づいてアリコートに分けて凍結乾燥した（Ｆｉｒｍａ ＪＰＴ，Ｂｅｒｌｉｎ，Ｇｅｒｍａｎｙ）。上記ペプチドのアミノ酸配列は、以下のように称される：
ＰＳＫ１６ ＣＳＬＰＥＡＧＰＧＲＴＬＶＳＳＫ １５３〜１６７位
ＰＨＬ１６ ＣＨＧＡＰＡＰＰＳＧＳＡＰＨＦＬ １７１〜１８５位
さらに、プレプロＡＤＭの領域１５３〜１８５位を網羅するペプチドを合成した。（ＰＳＬ３３ ＳＬＰＥＡＧＰＧＲＴＬＶＳＳＫＰＱＡＨＧＡＰＡＰＰＳＧＳＡＰＨＦＬ）。
【００４１】
結合体化および免疫
ＭＢＳ（ｍ−マレイミドベンゾイル−Ｎ−ヒドロキシスクシンイミドエステル）によって、上記ペプチドＰＳＫ１６およびＰＨＬ１６を、キャリアタンパク質であるＫＬＨ（キーホールリンペットヘモシアニン）に結合体化した（作業説明書「ＮＨＳ ｅｓｔｅｒｓ−ｍａｌｅｉｍｉｄｅ ｃｒｏｓｓ−ｌｉｎｋｅｒｓ」 ＰＩＥＲＣＥ Ｃｏｍｐａｎｙ，Ｒｏｃｋｆｏｒｄ，ＩＬ，ＵＳＡを参照のこと）。これら結合体を使用して、以下の手順に基づいて、ヒツジを免疫した：各ヒツジに、最初に、１００μｇの結合体（上記結合体のペプチド部分に対する重量測定値）および後に、５０μｇの結合体を４週間毎に（上記結合体のペプチド部分に対する重量測定値）を与えた。免疫を開始してから４ヶ月後から開始して、７００ｍｌの血液を、４週間毎に各ヒツジから採取し、抗血清を、遠心分離を介して得た。結合体化、免疫および抗血清の抽出を、Ｆｉｒｍａ ＭｉｃｒｏＰｈａｒｍ，Ｃａｒｍａｒｔｈｅｎｓｈｉｒｅ，ＵＫによって行った。
【００４２】
抗体の精製
１工程プロセスにおいて、上記ペプチド特異的抗体を、上記免疫後４週間から開始して抽出した抗血清から調製した。
【００４３】
この目的のために、上記ペプチドＰＳＫ１６およびＰＨＬ１６を、最初に、ＳｕｌｆｏＬｉｎｋゲル（作業説明書「ＳｕｌｆｏＬｉｎｋ Ｋｉｔ」 ＰＩＥＲＣＥ Ｃｏｍｐａｎｙ，Ｒｏｃｋｆｏｒｄ，ＩＬ，ＵＳＡを参照のこと）に連結した。上記プロセスにおいて、５ｍｌのゲルあたり５ｍｇのペプチドを、連結のために供した。
【００４４】
上記ペプチドに対するヒツジ抗血清からの、ペプチド特異的抗体のアフィニティー精製を、以下のとおりに行った：
最初に、上記ペプチドカラムを、１０ｍｌの溶出緩衝液（５０ｍＭ クエン酸，ｐＨ２．２）および結合緩衝液（１００ｍＭ リン酸ナトリウム，０．１％ Ｔｗｅｅｎ，ｐＨ６．８）で交互に３回洗浄した。１００ｍｌの上記抗血清を、０．２μｍを通して濾過し、既存のカラム材料で処理した。この目的のために、上記ゲルを、１０ｍｌ 結合緩衝液でカラムから定量的に洗い流した。回転を介して、室温で一晩インキュベーションを行った。その沈着物を、空のカラム（ＮＡＰ ２５，Ｐｈａｒｍａｃｉａ，空にした）に定量的に移した。上記サイクルを廃棄した。その後、２５０ｍｌの結合緩衝液で洗浄を行って、上記タンパク質を取り出した（上記洗浄溶出液のタンパク質含有量は、Ａ２８０ｎｍで＜０．０２）。溶出緩衝液を、上記洗浄したカラムに配置し、１ｍｌの画分を各々回収した。各画分のタンパク質含有量を、ＢＣＡ法によって測定した（作業説明書ＰＩＥＲＣＥ Ｃｏｍｐａｎｙ，Ｒｏｃｋｆｏｒｄ，ＩＬ，ＵＳＡを参照のこと）。タンパク質濃度＞０．８ｍｇ／ｍｌを有する画分をプールした。ＢＣＡ法によって上記プールのタンパク質を測定した後に、抗ＰＳＫ１６抗体については３４ｍｇおよび抗ＰＨＬ１６抗体については４８ｍｇの収量が得られた。
【００４５】
標識
ＮＡＰ−５ゲル濾過カラム（Ｐｈａｒｍａｃｉａ）の上に、５００μｌの精製抗ＰＳＫ１６抗体（上記を参照のこと）を、作業説明書に従って、１ｍｌ １００ｍＭのリン酸カリウム緩衝液（ｐｈ８．０）中で緩衝液交換した。上記抗体溶液のタンパク質濃度を、１００ｍＭのリン酸カリウム緩衝液（ｐＨ８．０）で１．５ｍｇ／ｍｌになるまで調節した。
【００４６】
上記抗体を、以下のとおり、化学発光での標識のためにさらに処理した：６７μｌの上記抗体溶液を、１０μｌのＭＡ７０ アクリジニウムＮＨＳエステル（１ｍｇ／ｍｌ，Ｆｉｒｍａ ＨＯＥＣＨＳＴ Ｂｅｈｒｉｎｇ）で処理し、１５分間室温でインキュベートした。次いで、４２３μｌの１Ｍ グリシンを添加し、さらに１０分間インキュベートした。次いで、上記標識沈着物を、上記作業説明書に基づいて、１ｍｌの溶出液Ａ（５０ｍＭ リン酸カリウム、１００ｍＭ 塩化ナトリウム，ｐＨ７．４）中、ＮＡＰ−５ゲル濾過カラム（Ｐｈａｒｍａｃｉａ）を介して緩衝液交換した。そしてこのことにあたって、低分子成分を除いた。抗体に連結されていない標識の最終的な残りを分離するために、ゲル濾過ＨＰＬＣを行った（カラム：Ｗａｔｅｒｓ Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｐａｋ ＳＷ３００）。上記アッセイを適用し、溶出液Ａを用いて流速１ｍｌ／分でクロマトグラフィーにかけた。流速光度計で、波長２８０ｎｍおよび３６８ｎｍを測定した。上記抗体の標識程度の尺度としての３６８ｎｍ／２８０ｎｍの吸光度比は、ピーク時に０．１０＋／−０．０１に達した。抗体を含むモノマー画分（保持時間８〜１０分間）を集め、３ｍｌの、１００ｍＭ リン酸ナトリウム、１５０ｍＭ 塩化ナトリウム、５％ ウシ血清アルブミン、０．１％ アジ化ナトリウム（Ｎａｔｒｉｕｍ Ａｚｉｄ），ｐＨ７．４中に回収した。
【００４７】
カップリング
少量の照射した５ｍｌのポリスチレンチューブ（Ｆｉｒｍａ Ｇｒｅｉｎｅｒ）を、精製抗ＰＨＬ１６抗体で、以下のようにコーティングした：上記抗体を、６．６μｇ／ｍｌの濃度になるように、５０ｍｌのＴｒｉｓ、１００ｍｌの塩化ナトリウム，ｐＨ７．８中に希釈した。３００μｌのこの溶液を、各々の小さなチューブにピペットで移した。上記の小さなチューブを、２２℃で２０時間にわたってインキュベートした。上記溶液を吸引によって抜き取った。次いで、各々の小さなチューブに、４．２ｍｌの１０ｍＭ リン酸ナトリウム、２％ Ｋａｒｉｏｎ ＦＰ、０．３％ ウシ血清アルブミン，ｐＨ６．５を充填した。２０時間後に、上記溶液を吸引によって抜き取った。最後に、上記小さなチューブを、真空乾燥器中で乾燥させた。
【００４８】
イムノアッセイの実施および分析
ペプチドＰＳＬ３３（これは、正常ウマ血清（Ｆｉｒｍａ ＳＩＧＭＡ）に連続希釈した）は、標準物質として供した。最初のペプチド重量に従う濃度を、このようにして製造した標準に割り当てた。
【００４９】
サンドイッチイムノアッセイを、以下のように調製した：５０μｌ標準またはアッセイ、ならびに２００μｌのアッセイ緩衝液（１００ｍＭ リン酸ナトリウム、１５０ｍＭ 塩化ナトリウム、５％ ウシ血清アルブミン、０．１％ 非特異的ヒツジＩｇＧ、０．１％ 酸性ナトリウム，ｐｈ７．４）（ＭＡ７０標識抗体の１００万ＲＬＵ（相対発光単位）を含む）を、上記小さな試験管（各々抗体でコーティングした）にピペットで移した。上記チューブを、振盪によって、２２℃で２時間にわたってインキュベートした。次いで、各々の小さなチューブを、１ｍｌの洗浄溶液（０．１％ Ｔｗｅｅｎ ２０）で４回洗浄し、静かに液を流し、そして上記小さなチューブに結合した化学発光を、ルミノメーター（Ｆｉｒｍａ ＢＥＲＴＨＯＬＤ，ＬＢ９５２Ｔ；基本試薬（Ｂａｓｉｓｒｅａｇｅｎｚ） ＢＲＡＨＭＳ ＡＧ）で測定した。ソフトウェアＭｕｌｔｉＣａｌｃ（Ｓｐｌｉｎｅ Ｆｉｔ）を使用することによって、上記アッセイのＣＴ−プロＡＤＭ濃度を、標準曲線において読み取った。
【００５０】
上記アッセイで測定され得る分析物は、Ｃ末端プロアドレノメデュリン（ＣＴ−プロＡＤＭ）といわれる。
【００５１】
臨床値
正常範囲
ＣＴ−プロＡＤＭ濃度を、健常なコントロールのアッセイ（ｎ＝２００）において測定した。そのメジアンは、７７．６ｐｍｏｌ／Ｌであり、最小測定値は、４６．６ｐｍｏｌ／Ｌであり、最大測定値は、１３６．２ｐｍｏｌ／Ｌであり、それぞれ、９５％パーセンタイルは、それぞれ、５８．６ｐｍｏｌ／Ｌまたは１１３．８ｐｍｏｌ／Ｌであった。
【００５２】
心機能不全／重篤度
ＣＴ−プロＡＤＭ濃度を、慢性もしくは急性の代償不全性心機能不全を有する患者において測定した。ＣＴ−プロＡＤＭ濃度を、心機能不全の重篤度と関連づけた：４つのＮＹＨＡ重篤度分類Ｉ〜ＩＶについてのＣＴ−プロＡＤＭ濃度の平均値は、以下の通りであった：８５ｐｍｏｌ／Ｌ、１０７ｐｍｏｌ／Ｌ、１４０．４ｐｍｏｌ／Ｌ、または２４２．７ｐｍｏｌ／Ｌ（図２を参照のこと）。
【００５３】
慢性心機能不全／診断
慢性心機能不全に罹患している３１６名の患者および２００名の健常コントロールの集団のＣＴ−プロＡＤＭ値を、測地した。受信者−操作者−特性分析（Ｒｅｃｅｉｖｅｒ−Ｏｐｅｒａｔｏｒ−Ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｓｔｉｃｓ Ａｎａｌｙｓｅ）は、０．７９のＡＵＣを示した。１２２ｐｍｏｌ／Ｌのカットオフ値で、３９．７％の感度と、９８％の特異性を得た。１１３ｐｍｏｌ／Ｌのカットオフ値で、４６．３％の感度と、９５％の特異性とを得た。
【００５４】
慢性心機能不全／予後
慢性心機能不全に罹患している３１６名の患者の集団のＣＴ−プロＡＤＭ値を測定した。上記患者を、平均３６０日間の期間にわたってモニターした。４２名の患者は、この期間の間に死亡した；２７４名は、生存していた。死亡率を予測するための最良のカットオフ値（感度および特異性の最大の積として定義される）を、受信者−操作者−特性分析によって測定した：１１９．７ｐｍｏｌ／Ｌ。このカットオフ値において、予後の感度は、７３．２％であり、特異性は、６２．２％であった。１１９．７ｐｇ／ｍｌのカットオフ値における死亡の尤度比は、１．９であった。
【００５５】
【表１】
急性心機能不全／診断
急性呼吸困難に罹患している１２５名の患者の集団のＣＴ−プロＡＤＭ値を測定した。上記１２５名の患者のうちの６９名は、心機能不全を有した。心機能不全の鑑別診断についての受信者−操作者−特性分析は、０．７５のＡＵＣを示した。４１０ｐｍｏｌ／Ｌのカットオフ値において、１２．４％の感度と、９８％の特異性とが得られた。３１５ｐｍｏｌ／Ｌのカットオフ値において、１８．３％の感度と、９５％の特異性とを得た。
【００５６】
急性心機能不全／予後
急性代償不全性心機能不全に罹患している６９名の患者の集団のＣＴ−プロＡＤＭ値を測定した。上記患者を、３６０日間の期間にわたってモニターした。この期間の間に、２１名の患者が死亡し；４８名が生存していた。死亡率を予測するための最良のカットオフ値（感度と特異性の最大の積として定義される）を、受信者−操作者−特性分析によって測定した：１９２ｐｍｏｌ／Ｌ。このカットオフ値において、上記予後の感度は、６６．６％であり、特異性は、７５％であった。１９２ｐｍｏｌ／Ｌのカットオフ値における死亡率の尤度比は、２．５であった。
【００５７】
【表２】
心筋梗塞／予後
サンプルを、心臓発作が起こった３日後に急性心臓発作に苦しんでいる２８７名の患者から採取し、ＣＴ−プロＡＤＭを測定した。上記患者を、３６０日間の期間にわたってモニターした。この期間の間に、２２０名の患者が、有害な事象を経験せず、６７名が死亡するか、または心機能不全に起因して再入院した。死亡率または心機能不全に起因する再入院を予想するための最良のカットオフ値（感度と特異性の最大の積として定義される）を、受信者−操作者−特性分析によって測定した：１６１．９ｐｍｏｌ／Ｌ。このカットオフ値において、上記予後の感度は、６７．２％であり、特異性は、７９．１％であった。１６１．９ｐｍｏｌ／Ｌのカットオフ値における有害事象の尤度比は、３．２であった。
【００５８】
【表３】
肺炎／重篤度および予後
サンプルを、市中肺炎を有する１４２名の患者から、彼らが病院に入ったときに採取し、ＣＴ−プロＡＤＭを測定した。上記患者を、７０日間の期間にわたってモニターした。この期間の間に、１０名の患者が死亡した。ＣＴ−プロＡＤＭ濃度は、ＰＳＩ（肺炎重篤度指数（Ｐｎｅｕｍｏｎｉａ Ｓｅｖｅｒｉｔｙ Ｉｎｄｅｘ））（疾患の重篤度についてのスコア）とともに上昇し（図３）、健常コントロール（７７ｐｍｏｌ／Ｌ）と比較して、平均１３５ｐｍｏｌ／Ｌ、と上昇した。死亡率の予測（Ｐｒｏｇｎｏｓｅ ｄｅｒ Ｍｏｒｔａｌｉｔａｅｔ）について、受信者−操作者−特性分析によって、０．８９のＡＵＣを得た。死亡率を予測するための最良のカットオフ値（感度と重篤度との最大の積として定義される）を、受信者−操作者−特性分析によって測定した：１９４．５ｐｍｏｌ／Ｌ。このカットオフ値において、上記予後の感度は、１００％であり、特異性は、８１．２％であった。１９４．５ｐｍｏｌ／Ｌのカットオフ値における死亡率の尤度率は、５．５であった。
【００５９】
【表４】
悪化したＣＯＰＤ
慢性閉塞性肺疾患に罹患し、同時に下気道の感染を同時に罹患している５３名の患者のＣＴ−プロＡＤＭを測定した。これら患者のＣＴ−プロＡＤＭ濃度は、健常コントロール（７７ｐｍｏｌ／Ｌ）と比較して、平均１０６ｐｍｏｌ／Ｌと、上昇したが、肺炎に罹患している患者のものより低かった（１３５ｐｍｏｌ／Ｌを超えるのを参照のこと）。
【技術分野】
【０００１】
（説明）
本発明は、疾患の診断および／または危険性の層化のための、新規な診断マーカーであるＣＴ−プロＡＤＭ（プレプロＡＤＭ、配列番号１のＣ末端フラグメント）に関する。疾患、特に、心血管疾患、心機能不全、ならびに肺および気道の感染および／もしくは炎症の診断および／または危険性の層化のための方法もまた、開示される。上記方法において、上記ＣＴ−プロＡＤＭ（配列番号１）マーカー、またはその部分ペプチドもしくはフラグメント、あるいはマーカー組み合わせ（パネル、クラスター）に含まれる上記マーカーは、試験されるべき患者において測定される。本発明はさらに、診断装置、ならびに上記方法を行うためのキットに関する。
【背景技術】
【０００２】
先行技術は、診断において、特に、敗血症を診断する目的で（特許文献１）、プロアドレノメデュリン（プロＡＤＭ）およびアドレノメデュリンをどのように測定するかを記載する（特許文献２，非特許文献１；非特許文献２；Ｋｏｂａｙａｓｈｉ Ｋ，Ｋｉｔａｍｕｒａ Ｋ，Ｅｔｏｈ Ｔ，Ｎａｇａｔｏｍｏ Ｙ，Ｔａｋｅｎａｇａ Ｍ，Ｉｓｈｉｋａｗａ Ｔら，Ｉｎｃｒｅａｓｅｄ ｐｌａｓｍａ ａｄｒｅｎｏｍｅｄｕｌｌｉｎ ｌｅｖｅｌｓ ｉｎ ｃｈｒｏｎｉｃ ｃｏｎｇｅｓｔｉｖｅ ｈｅａｒｔ ｆａｉｌｕｒｅ．Ａｍ Ｈｅａｒｔ Ｊ １９９６；１３１：９９４−８；Ｋｏｂａｙａｓｈｉ Ｋ，Ｋｉｔａｍｕｒａ Ｋ，Ｈｉｒａｙａｍａ Ｎ，Ｄａｔｅ Ｈ，Ｋａｓｈｉｗａｇｉ Ｔ，Ｉｋｕｓｈｉｍａ Ｉら，Ｉｎｃｒｅａｓｅｄ ｐｌａｓｍａ ａｄｒｅｎｏｍｅｄｕｌｌｉｎ ｉｎ ａｃｕｔｅ ｍｙｏｃａｒｄｉａｌ ｉｎｆａｒｃｔｉｏｎ．Ａｍ Ｈｅａｒｔ Ｊ １９９６；１３１：６７６−８０）。診断のための（プレ）プロアドレノメデュリンのＮ末端フラグメントはまた、特許文献２に記載されている（例えば、ＰＡＭＰ（Ｈａｓｈｉｄａ Ｓ，Ｋｉｔａｍｕｒａ Ｋ，Ｎａｇａｔｏｍｏ Ｙ，Ｓｈｉｂａｔａ Ｙ，Ｉｍａｍｕｒａ Ｔ，Ｙａｍａｄａ Ｋら，Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ ｏｆ ａｎ ｕｌｔｒａ ｓｅｎｓｉｔｉｖｅ ｅｎｚｙｍｅ ｉｍｍｕｎｏａｓｓａｙ ｆｏｒ ｈｕｍａｎ ｐｒｏ−ａｄｒｅｎｏｍｅｄｕｌｌｉｎ Ｎ−ｔｅｒｍｉｎａｌ ２０ ｐｅｐｔｉｄｅ ａｎｄ ｄｉｒｅｃｔ ｍｅａｓｕｒｅｍｅｎｔ ｏｆ ｔｗｏ ｍｏｌｅｃｕｌａｒ ｆｏｒｍｓ ｏｆ ＰＡＭＰ ｉｎ ｐｌａｓｍａ ｆｒｏｍ ｈｅａｌｔｈｙ ｓｕｂｊｅｃｔｓ ａｎｄ ｐａｔｉｅｎｔｓ ｗｉｔｈ ｃａｒｄｉｏｖａｓｃｕｌａｒ ｄｉｓｅａｓｅ． Ｃｌｉｎ Ｂｉｏｃｈｅｍ ２００４；３７：１４−２１））。
【０００３】
さらに、上記プロ−アドレノメデュリンのさらなるフラグメント、すなわち、いわゆる中間領域のプロ−アドレノメデュリン（ＭＲプロＡＤＭ）は、診断目的で、ＥＰ１４８８２０９Ｂ１に開示される（Ｓｔｒｕｃｋ Ｊ，Ｔａｏ Ｃ，Ｍｏｒｇｅｎｔｈａｌｅｒ ＮＧ，Ｂｅｒｇｍａｎｎ Ａ．Ｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎ ｏｆ ａｎ Ａｄｒｅｎｏｍｅｄｕｌｌｉｎ ｐｒｅｃｕｒｓｏｒ ｆｒａｇｍｅｎｔ ｉｎ ｐｌａｓｍａ ｏｆ ｓｅｐｓｉｓ ｐａｔｉｅｎｔｓ．Ｐｅｐｔｉｄｅｓ ２００４；２５：１３６９−７２；Ｍｏｒｇｅｎｔｈａｌｅｒ ＮＧ，Ｓｔｒｕｃｋ Ｊ，Ａｌｏｎｓｏ Ｃ，Ｂｅｒｇｍａｎｎ Ａ．Ｍｅａｓｕｒｅｍｅｎｔ ｏｆ ｍｉｄ−ｒｅｇｉｏｎａｌ ｐｒｏ−ａｄｒｅｎｏｍｅｄｕｌｌｉｎ ｉｎ ｐｌａｓｍａ ｗｉｔｈ ａｎ ｉｍｍｕｎｏｌｕｍｉｎｏｍｅｔｒｉｃ ａｓｓａｙ．Ｃｌｉｎ Ｃｈｅｍ ２００５；５１：１８２３−９；Ｃｈｒｉｓｔ−Ｃｒａｉｎ Ｍ，Ｍｏｒｇｅｎｔｈａｌｅｒ ＮＧ，Ｓｔｏｌｚ Ｄ，Ｍｕｌｌｅｒ Ｃ，Ｂｉｎｇｉｓｓｅｒ Ｒ，Ｈａｒｂａｒｔｈ Ｓら，Ｐｒｏ−ａｄｒｅｎｏｍｅｄｕｌｌｉｎ ｔｏ ｐｒｅｄｉｃｔ ｓｅｖｅｒｉｔｙ ａｎｄ ｏｕｔｃｏｍｅ ｉｎ ｃｏｍｍｕｎｉｔｙ−ａｃｑｕｉｒｅｄ ｐｎｅｕｍｏｎｉａ ［ＩＳＲＣＴＮ０４１７６３９７］．Ｃｒｉｔ Ｃａｒｅ ２００６；１０：Ｒ９６；Ｃｈｒｉｓｔ−Ｃｒａｉｎ Ｍ，Ｍｏｒｇｅｎｔｈａｌｅｒ ＮＧ，Ｓｔｒｕｃｋ Ｊ，Ｈａｒｂａｒｔｈ Ｓ，Ｂｅｒｇｍａｎｎ Ａ，Ｍｕｌｌｅｒ Ｂ．Ｍｉｄ−ｒｅｇｉｏｎａｌ ｐｒｏ−ａｄｒｅｎｏｍｅｄｕｌｌｉｎ ａｓ ａ ｐｒｏｇｎｏｓｔｉｃ ｍａｒｋｅｒ ｉｎ ｓｅｐｓｉｓ：ａｎ ｏｂｓｅｒｖａｔｉｏｎａｌ ｓｔｕｄｙ．Ｃｒｉｔ Ｃａｒｅ ２００５；９：Ｒ８１６−２４）。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００４】
【特許文献１】欧州特許第ｌ１２１６００号明細書
【特許文献２】欧州特許第０６２２４５８号明細書
【非特許文献】
【０００５】
【非特許文献１】Ｌｅｗｉｓ ＬＫ，Ｓｍｉｔｈ ＭＷ，Ｙａｎｄｌｅ ＴＧ，Ｒｉｃｈａｒｄｓ ＡＭ，Ｎｉｃｈｏｌｌｓ ＭＧ． Ａｄｒｅｎｏｍｅｄｕｌｌｉｎ（１−５２） ｍｅａｓｕｒｅｄ ｉｎ ｈｕｍａｎ ｐｌａｓｍａ ｂｙ ｒａｄｉｏｉｍｍｕｎｏａｓｓａｙ：ｐｌａｓｍａ ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ，ａｄｓｏｒｐｔｉｏｎ，ａｎｄ ｓｔｏｒａｇｅ．Ｃｌｉｎ Ｃｈｅｍ １９９８；４４：５７１−７
【非特許文献２】Ｕｅｄａ Ｓ，Ｎｉｓｈｉｏ Ｋ，Ｍｉｎａｍｉｎｏ Ｎ，Ｋｕｂｏ Ａ，Ａｋａｉ Ｙ，Ｋａｎｇａｗａ Ｋら，Ｉｎｃｒｅａｓｅｄ ｐｌａｓｍａ ｌｅｖｅｌｓ ｏｆ ａｄｒｅｎｏｍｅｄｕｌｌｉｎ ｉｎ ｐａｔｉｅｎｔｓ ｗｉｔｈ ｓｙｓｔｅｍｉｃ ｉｎｆｌａｍｍａｔｏｒｙ ｒｅｓｐｏｎｓｅ ｓｙｎｄｒｏｍｅ．Ａｍ Ｊ Ｒｅｓｐｉｒ Ｃｒｉｔ Ｃａｒｅ Ｍｅｄ １９９９；１６０：１３２−６
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００６】
しかし、信頼性の高い診断を提供し、または疾患、特に、心血管疾患、心機能不全、肺および気道の感染および／もしくは炎症について、特に、さらなる臨床的決定に関して、そして特に、特に、心血管疾患、心機能不全、肺および気道の感染および／もしくは炎症を伴う疾患の重篤度に関して、（危険性の）層化を行う必要性が非常にある。
【課題を解決するための手段】
【０００７】
新規のマーカーを提供することは、本発明の１つの課題である。本発明のさらなる課題は、疾患、特に、心血管疾患、心機能不全、ならびに肺および気道の感染および／もしくは炎症の診断および／または危険性を層化するための改善された方法を提供することからなる。
【０００８】
他方で、上記課題は、診断マーカーであるＣＴ−プロＡＤＭ（プロアドレノメデュリン，配列番号１のＣ末端フラグメント）、またはその部分ペプチドもしくはフラグメントを提供することによって、他方で、疾患のインビトロ診断および／または危険性の層化のための方法によって解決される。上記方法において、上記ＣＴ−プロＡＤＭ（配列番号１）マーカー、またはその部分ペプチドもしくはフラグメント、あるいはマーカー組み合わせ（パネル、クラスター）中に含まれる上記マーカーは、試験されるべき患者において測定される（本発明に従う以下の方法）。
【図面の簡単な説明】
【０００９】
【図１】図１である。
【図２】図２である。
【図３】図３である。
【発明を実施するための形態】
【００１０】
用語「危険性の層化」とは、本発明によれば、最も有利な疾患経過をもたらすという目的とともに、疾患のより集中した診断および（追跡（Ｆｏｌｇｅ−））治療／処置の目的のために、よりひどい予後を有する罹患した患者を見いだすことからなる。
【００１１】
従って、特に有利には、信頼性の高い診断および／または危険性の層化は、本発明に従う方法によって行われ得る。本発明に従う方法は、より迅速な診断をもたらす臨床的決定を行うことを可能にする。このような臨床的決定はまた、疾患の処置または治療のための薬物を使用することによるさらなる処置を含む。
【００１２】
従って、本発明はまた、患者の危険性の層化のための、特に、臨床的決定に関して、好ましくは、集中医療もしくは救急救命医療における患者の層化のための、時間が重要な場合には、患者の入院のための方法に関する。
【００１３】
本発明に従う方法のさらなる好ましい実施形態において、上記診断および／または危険性の層化が、予後のために、鑑別診断的初期診断および検出のために、重篤度の評価のために、ならびに治療に伴う疾患経過の評価のために行われる。
【００１４】
本発明に従う方法のさらなる実施形態において、体液もしくは身体組織、好ましくは、血液、あるいは全血、血清もしくは入手可能な血漿は、試験されるべき患者から採取され、そして診断は、インビトロ／エキソビボ（すなわち、ヒトもしくは動物の身体の外）で行われる。マーカーであるＣＴ−プロＡＤＭ（配列番号１）、またはその部分ペプチドもしくはフラグメントの測定、ならびに少なくとも１種の患者サンプル中のその存在量に起因して、診断または危険性の層化が行われ得る。
【００１５】
本発明の範囲内で、「疾患」は、ヒトおよび動物、特に、哺乳動物の病気として理解されるべきである。このような疾患、特に、ヒトの疾患の説明は、Ｐｓｃｈｙｒｅｍｂｅｌ，Ｄｅ Ｇｒｕｙｔｅｒ，Ｂｅｒｌｉｎ ２００４において見いだされ得る。
【００１６】
しかし、特に有利には、心血管疾患、心機能不全、肺および気道の感染および／もしくは炎症は、本発明の範囲内で診断および／または層化され得る。
【００１７】
用語「心血管疾患」とは、本発明によれば、心臓および血液循環、特に、高血圧症、冠動脈性心疾患、特に、急性冠症候群、（急性）心筋梗塞、狭心症のような適応症のすべての疾患を含む。
【００１８】
用語「急性冠症候群」とは、すぐに生命を脅かす冠動脈性心疾患の種々の相を含む。特に、このことは、救急救命医療、すなわち、急性心筋梗塞および／もしくは狭心症、ならびに突然心臓死に関する。ＷＨＯ基準（ＷＨＯ（１９７９）：Ｎｏｍｅｎｃｌａｔｕｒｅ ａｎｄ ｃｒｉｔｅｒｉａ ｆｏｒ ｄｉａｇｎｏｓｉｓ ｏｆ ｉｓｃｈｅｍｉｃ ｈｅａｒｔ ｄｉｓｅａｓｅ．Ｒｅｐｏｒｔ ｏｆ ｔｈｅ Ｊｏｉｎｔ Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ Ｓｏｃｉｅｔｙ ａｎｄ Ｆｅｄｅｒａｔｉｏｎ ｏｆ Ｃａｒｄｉｏｌｏｇｙ／Ｗｏｒｌｄ Ｈｅａｌｔｈ Ｏｒｇａｎｉｚａｔｉｏｎ ｔａｓｋ ｆｏｒｃｅ ｏｎ ｓｔａｎｄａｒｄｉｚａｔｉｏｎ ｏｆ ｃｌｉｎｉｃａｌ ｎｏｍｅｎｃｌａｔｕｒｅ，Ｃｉｒｃｕｌａｔｉｏｎ ５９（３）：６０７−６０９）に従って、ＳＴ部分の上昇および／または心筋酵素の増加と関連して、２０分間より長く持続する急性胸痛事象として定義される上記急性心筋梗塞に加えて、用語、不安定狭心症（ＡＰ）が作られ、本発明によれば、「急性冠症候群」の下で読み取られ得る（Ｈａｍｍ ＣＷ： Ｇｕｉｄｅｌｉｎｅｓ：Ａｃｕｔｅ Ｃｏｒｏｎａｒｙ Ｓｙｎｄｒｏｍｅ（ＡＣＳ）−Ｐａｒｔ １：ＡＣＳ ｗｉｔｈｏｕｔ ａ ｐｅｒｓｉｓｔｉｎｇ ｅｌｅｖａｔｉｏｎ ｏｆ ｔｈｅ ＳＴ ｓｅｇｍｅｎｔ．Ｚ Ｋａｒｄｉｏｌ（２００４）９３：７２−９０）。
【００１９】
本発明の範囲内で、「心機能不全」は、心臓が急性的もしくは慢性的に、組織に十分な血液を供給する、結果として、酸素を供給して安静時および負荷時に組織代謝を保証することができないこととして理解される。臨床的に、心機能不全は、代表的な症状（呼吸困難、疲労、流動性保持（Ｆｌｕｅｓｓｉｇｋｅｉｔｓｒｅｔｅｎｔｉｏｎ））が存在する場合に存在し、その原因は、収縮機能不全もしくは拡張機能不全の意味内で、心機能不全に基づく。慢性心機能不全はまた、本発明によって包含される（Ｃａｒｄｉｏｌｏｇｙ ｃｏｍｐａｃｔ， ｐｕｂｌｉｓｈｅｄ ｂｙ Ｃｈｒｉｓｔｉａｎ Ｍｅｗｉｓ， Ｒｅｉｍｅｒ Ｒｉｅｓｓｅｎ ａｎｄ Ｉｏａｋｉｍ Ｓｐｙｒｉｄｏｐｏｕｌｏｓ，２ｎｄ ｕｎｃｈａｎｇｅｄ ｅｄｉｔｉｏｎ，Ｔｈｉｅｍｅ ２００６）。心機能不全は、以下によって引き起こされ得る：弁膜性心臓欠陥（Ｈｅｒｚｋｌａｐｐｅｎｆｅｈｌｅｒ）（例えば、リウマチ熱の長期の結果として）、心筋炎（心筋の炎症）、心不整脈、高血圧症（高血圧）を除く心臓発作および／または冠状血管の動脈硬化症（石灰化）（冠動脈性心疾患）。本発明は、（欝血性）心機能不全を伴う高血圧性心疾患、（欝血性）心機能不全を伴う高血圧性心腎疾患、原発性右心不全、二次的右心不全、苦痛を伴わない左心不全（ＮＹＨＡ［Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ Ｈｅａｒｔ Ａｓｓｏｃｉａｔｉｏｎ］ステージＩ）、増大したストレス下で苦痛を伴う左心不全（ＮＹＨＡ ステージＩＩ）、軽いストレス下で苦痛を伴う左心不全（ＮＹＨＡ ステージＩＩＩ）、安静時に苦痛を伴う左心不全（ＮＹＨＡ ステージＩＶ）および心原性ショックをさらに含む。
【００２０】
本発明の文脈内において、用語「肺および気道の感染」とは、特に、細菌、ウイルス、真菌もしくは寄生生物によって引き起こされるそのような感染、例えば、深部気道感染（ＬＲＴＩ：下気道感染）、気管支炎、肺炎、サルコイドーシス、気管支拡張症、非心原性肺浮腫（ｎｏｎ−ｃａｒｄｉａｃ ｐｕｌｍｏｎａｒｙ ｅｄｅｍａ）のような適応症を意味する。さらに、本発明に従って好ましいのは、深部気道感染（ＬＲＴＩ：下気道感染）、気管支炎、腐敗性気管支炎、肺炎である。特に好ましいのは、肺炎、特に市中肺炎（ＣＡＰ：市中感染（ｃｏｍｍｕｎｉｔｙ−ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ）肺炎）、深部気道感染（ＬＲＴＩ：下気道感染）である。
【００２１】
本発明の範囲内において、肺炎は、肺組織の急性もしくは慢性の炎症であると理解される。上記感染は、細菌、ウイルスもしくは真菌によって引き起こされ、希な場合には、毒性物質を吸入することによって毒性的に、または免疫学的にも引き起こされる。臨床医に関しては、肺炎は、胸郭ｘ線で見える少なくとも１つの浸潤物と組み合わせて、種々の症状（熱もしくは低体温症、振戦、咳、胸膜性胸郭痛（ｐｌｅｕｒｉｔｉｃ ｔｈｏｒａｘ ｐａｉｎ）、増大した喀痰生成、増大した呼吸速度、聴打診音減弱、気管支性呼吸、高頻度のラ音、胸膜摩擦音）の状態を構成する（Ｈａｒｒｉｓｏｎ’ｓ Ｉｎｔｅｒｎａｌ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ， ｐｕｂｌｉｓｈｅｄ ｂｙ Ｍａｎｆｒｅｄ Ｄｉｅｔｅｌ， Ｎｏｒｂｅｒｔ Ｓｕｔｔｏｒｐ ａｎｄ Ｍａｒｔｉｎ Ｚｅｉｔｚ， ＡＢＷ Ｗｉｓｓｅｎｓｃｈａｆｔｓｖｅｒｌａｇ ［ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ ｈｏｕｓｅ］ ２００５）。
【００２２】
本発明の範囲内において、用語「肺および気道の感染性疾患」または「肺および気道の炎症性疾患」とは、間質性肺疾患および肺線維症、慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）、特に、ＣＯＰＤ感染悪化、気管支喘息、特に、気管支喘息を伴う感染悪化、気管支癌腫のような適応症を意味する。
【００２３】
本発明によれば、ＣＯＰＤは、ストレス下での咳、増大した喀痰および呼吸困難によって特徴づけられる慢性疾患の群をいう。第１のおよび主要な、慢性閉塞性気管支炎および肺気腫が、言及されなければならない。両方の臨床的像は、呼気の妨害によって特に特徴づけられる。さらに、ＣＯＰＤの主要な症状は、口語的に、「喫煙者の咳（Ｒａｕｃｈｅｒｈｕｓｔｅｎ）」といわれる。本発明は特に、急性悪化の場合に有利である。
【００２４】
本発明の範囲内において、「ＣＴ−プロＡＤＭ」とは、以下のアミノ酸配列（配列番号１：ＳＬＰＥＡＧＰＧＲＴＬＶＳＳＫＰＱＡＨＧＡＰＡＰＰＳＧＳＡＰＨＦＬ）を有する３３アミノ酸からなる遊離のヒトタンパク質もしくはポリペプチド、またはプレプロアドレノメデュリンの、配列番号２のアミノ酸配列１５３〜１８５（１５３位はＳｅｒを表し、１８５位はＬｅｕを表す）を有するフラグメント（図１）（Ｋｉｔａｍｕｒａ Ｋ，Ｓａｋａｔａ Ｊ，Ｋａｎｇａｗａ Ｋ，Ｋｏｊｉｍａ Ｍ，Ｍａｔｓｕｏ Ｈ，Ｅｔｏ Ｔ．Ｃｌｏｎｉｎｇ ａｎｄ ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎ ｏｆ ｃＤＮＡ ｅｎｃｏｄｉｎｇ ａ ｐｒｅｃｕｒｓｏｒ ｆｏｒ ｈｕｍａｎ ａｄｒｅｎｏｍｅｄｕｌｌｉｎ Ｂｉｏｃｈｅｍ Ｂｉｏｐｈｙｓ Ｒｅｓ Ｃｏｍｍｕｎ １９９３；１９４：７２０−７２５）、またはその部分ペプチドおよび／もしくはフラグメントとして理解されるべきである。このようなフラグメントは、例えば、配列番号１のアミノ酸配列１〜１５および／またはプレプロアドレノメデュリン（図１）の１５３〜１６７もしくは配列番号１の１９〜３３および／またはプレプロアドレノメデュリン（図１）の１７１〜１８５（実施例を参照のこと）であり得る。その血管収縮効果に起因して、ＣＴ−プロＡＤＭはまた、アドレノメデュリンといわれる（Ｇｕｍｕｓｅｌ Ｂ，Ｃｈａｎｇ ＪＫ，Ｈｙｍａｎ Ａ，Ｌｉｐｐｔｏｎ Ｈ．Ａｄｒｅｎｏｔｅｎｓｉｎ：ａｎ ＡＤＭ ｇｅｎｅ ｐｒｏｄｕｃｔ ｗｉｔｈ ｔｈｅ ｏｐｐｏｓｉｔｅ ｅｆｆｅｃｔｓ ｏｆ ＡＤＭ．Ｌｉｆｅ Ｓｃｉ １９９５；５７：ＰＬ８７−９０）。
【００２５】
本発明に従う「ＣＴ−プロＡＤＭ」とはまた、改変（例えば、グリコシル化、脂質化もしくは誘導体化）を特徴とし得る。
【００２６】
さらなる実施形態において、上記「ＣＴ−プロＡＤＭ」（配列番号１）はまた、さらなるマーカーとともに測定され得、「上記マーカーであるＣＴ−プロＡＤＭ」は、マーカー組み合わせ（パネル、クラスター）、すなわち、好ましくは、疾患を既に示すこのようなマーカー組み合わせに含まれる。しかし、好ましいのは、順番に本発明の範囲内において好まれる、相乗効果をもたらし得る適応症／疾患を示すそのようなマーカーである。
【００２７】
従って、本発明は、本発明に従う方法のこのような実施形態（測定は、炎症マーカー、心血管マーカー、神経ホルモンマーカー、または虚血マーカーの群からの少なくとも１つのさらなるマーカーによってさらに選択される選択され、試験されるべき患者において行われる）に関する。
【００２８】
本発明によれば、上記炎症マーカーは、Ｃ反応性タンパク質（ＣＲＰ）、サイトカイン（例えば、ＴＮＦ−α）、インターロイキン（例えば、ＩＬ−６）、プロカルシトニン（１〜１１６、３〜１１６）および接着分子（例えば、ＶＣＡＭもしくはＩＣＡＭ）の群からの少なくとも１つのマーカーから選択され得、ならびに上記心血管マーカーは、クレアチンキナーゼ、ミエロペルオキシダーゼ、コペプチン、ミオグロビン、ナトリウム利尿性タンパク質、特に、ＡＮＰ（もしくはＡＮＦ）、プロＡＮＰ、ＮＴ−プロＡＮＰ、ＢＮＰ、プロＢＮＰ、ＮＴ−プロＢＮＰ、または各場合には、これらの部分配列、心筋トロポニン、ＣＲＰの群からの少なくとも１つのマーカーから選択され得る。さらに、これはまた、循環を調節する（プロ）ホルモン、特に、例えば、プロ−ガストリン放出ペプチド（プロＧＲＰ）、プロ−エンドセリン（プロＥｎｄ）、プロ−レプチン、プロ−ニューロペプチド−Ｙ、プロ−ソマトスタチン、プロ−ニューロペプチド−ＹＹ、プロ−オピオメラノコルチン、コペプチン、もしくは各場合には、これらの部分配列を含む。上記虚血マーカーは、トロポニンＩおよびＴ、ＣＫ−ＭＢの群からの少なくとも１つのマーカーから選択され得る。さらに、上記神経ホルモンマーカーは、少なくとも、ナトリウム利尿性タンパク質、特に、ＡＮＰ（もしくはＡＮＦ）、プロＡＮＰ、ＮＴ−プロＡＮＰ、ＢＮＰ、プロＢＮＰ、ＮＴ−プロＢＮＰ、または各場合には、これらの部分配列であり得る。特に好ましいのは、ＣＴ−プロＡＤＭと、プロホルモン（特に、プロＢＮＰ、ＮＴ−プロＢＮＰ）とのマーカー組み合わせである。
【００２９】
本発明のさらなる実施形態において、本発明に従う方法は、上記マーカーの並行したもしくは同時の測定を使用して（例えば、９６以上の穴を有するマルチタイタープレート）行われ得、上記測定は、少なくとも１つの患者サンプルによって行われる。
【００３０】
本発明に従う方法およびその測定はまた、自動分析デバイス、特に、Ｋｒｙｐｔｏｒ（ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｋｒｙｐｔｏｒ．ｎｅｔ）によって行われ得る。
【００３１】
さらなる実施形態において、本発明に従う方法およびその測定は、迅速な試験（例えば、ラテラルフロー試験（ｌａｔｅｒａｌ−ｆｌｏｗ Ｔｅｓｔ））によって行われ、個々のもしくはマルチパラメーター測定を介してである。
【００３２】
本発明はさらに、疾患、特に、心血管疾患、心機能不全、肺および気道の感染および／もしくは炎症のインビトロ診断および／または危険性の層化のための、ＣＴ−プロＡＤＭ（配列番号１）、またはその部分ペプチドもしくはフラグメントの使用に関する。
【００３３】
さらなる実施形態において、本発明は、心臓診断における、ＣＴ−プロＡＤＭ（配列番号１）、またはその部分ペプチドもしくはフラグメントの使用に関する。
【００３４】
本発明はさらに、疾患、特に、心血管疾患、心機能不全、肺および気道の感染および／もしくは炎症のインビトロ診断および／または危険性の層化のため、ならびに特に上記の実施形態を考慮する際の、ＣＴ−プロＡＤＭ（配列番号１）、またはその部分ペプチドもしくはフラグメント、またはマーカー組み合わせ（パネル、クラスター）に含まれるものの使用に関する。上記マーカー組み合わせは、おそらくさらなる適切なマーカーを含み得る。
【００３５】
さらなる課題は、本発明に従う方法を実施するための、適切な診断デバイスの提供、またはこのようなデバイスの使用である。
【００３６】
本発明の範囲内において、このような診断デバイスは、特に、アレイもしくはアッセイ（例えば、イムノアッセイ、ＥＬＩＳＡなど）、最も広義において、本発明に従う方法を行うためのデバイスであると理解される。
【００３７】
本発明はさらに、疾患、特に、心血管疾患、心機能不全、肺および気道の感染および／もしくは炎症をインビトロで診断および／または危険性を層化するためのキット、またはこのようなキットの使用に関する。上記方法において、上記ＣＴ−プロＡＤＭ（配列番号１）マーカー、またはその部分ペプチドもしくはフラグメント、またはマーカー組み合わせ（パネル，クラスター）に含まれる上記マーカーは、試験されるべき患者において、特に、上記の実施形態を考慮して測定される。このような検出試薬としては、例えば、抗体などが挙げられる。
【００３８】
従って、本発明はさらに、ＣＴ−プロＡＤＭの検出のための抗体、特にモノクローナル抗体（これは、ＣＴ−プロＡＤＭを個々に、好ましくは、結合部位である配列番号１の１〜１５もしくは１９〜３３において結合するか、または各場合において、互いに独立して、上記ＣＴ−プロＡＤＭを両方の結合部位において結合する）に関する。
【００３９】
以下の実施例および図面の目的は、本発明を詳細に説明することであるが、本発明を上記実施例および図面に限定することはない。
【実施例】
【００４０】
イムノアッセイ
ペプチド合成
プレプロＡＤＭの公知のアミノ酸配列から、２つの領域を選択した（１５３〜１６７位、１７１〜１８５位）。上記領域（各々、Ｎ末端システイン残部が追加される）を、化学的に合成し、精製し、質量分析および逆相ＨＰＬＣによって品質について検査し、そして可溶性ペプチドとして、標準的方法に基づいてアリコートに分けて凍結乾燥した（Ｆｉｒｍａ ＪＰＴ，Ｂｅｒｌｉｎ，Ｇｅｒｍａｎｙ）。上記ペプチドのアミノ酸配列は、以下のように称される：
ＰＳＫ１６ ＣＳＬＰＥＡＧＰＧＲＴＬＶＳＳＫ １５３〜１６７位
ＰＨＬ１６ ＣＨＧＡＰＡＰＰＳＧＳＡＰＨＦＬ １７１〜１８５位
さらに、プレプロＡＤＭの領域１５３〜１８５位を網羅するペプチドを合成した。（ＰＳＬ３３ ＳＬＰＥＡＧＰＧＲＴＬＶＳＳＫＰＱＡＨＧＡＰＡＰＰＳＧＳＡＰＨＦＬ）。
【００４１】
結合体化および免疫
ＭＢＳ（ｍ−マレイミドベンゾイル−Ｎ−ヒドロキシスクシンイミドエステル）によって、上記ペプチドＰＳＫ１６およびＰＨＬ１６を、キャリアタンパク質であるＫＬＨ（キーホールリンペットヘモシアニン）に結合体化した（作業説明書「ＮＨＳ ｅｓｔｅｒｓ−ｍａｌｅｉｍｉｄｅ ｃｒｏｓｓ−ｌｉｎｋｅｒｓ」 ＰＩＥＲＣＥ Ｃｏｍｐａｎｙ，Ｒｏｃｋｆｏｒｄ，ＩＬ，ＵＳＡを参照のこと）。これら結合体を使用して、以下の手順に基づいて、ヒツジを免疫した：各ヒツジに、最初に、１００μｇの結合体（上記結合体のペプチド部分に対する重量測定値）および後に、５０μｇの結合体を４週間毎に（上記結合体のペプチド部分に対する重量測定値）を与えた。免疫を開始してから４ヶ月後から開始して、７００ｍｌの血液を、４週間毎に各ヒツジから採取し、抗血清を、遠心分離を介して得た。結合体化、免疫および抗血清の抽出を、Ｆｉｒｍａ ＭｉｃｒｏＰｈａｒｍ，Ｃａｒｍａｒｔｈｅｎｓｈｉｒｅ，ＵＫによって行った。
【００４２】
抗体の精製
１工程プロセスにおいて、上記ペプチド特異的抗体を、上記免疫後４週間から開始して抽出した抗血清から調製した。
【００４３】
この目的のために、上記ペプチドＰＳＫ１６およびＰＨＬ１６を、最初に、ＳｕｌｆｏＬｉｎｋゲル（作業説明書「ＳｕｌｆｏＬｉｎｋ Ｋｉｔ」 ＰＩＥＲＣＥ Ｃｏｍｐａｎｙ，Ｒｏｃｋｆｏｒｄ，ＩＬ，ＵＳＡを参照のこと）に連結した。上記プロセスにおいて、５ｍｌのゲルあたり５ｍｇのペプチドを、連結のために供した。
【００４４】
上記ペプチドに対するヒツジ抗血清からの、ペプチド特異的抗体のアフィニティー精製を、以下のとおりに行った：
最初に、上記ペプチドカラムを、１０ｍｌの溶出緩衝液（５０ｍＭ クエン酸，ｐＨ２．２）および結合緩衝液（１００ｍＭ リン酸ナトリウム，０．１％ Ｔｗｅｅｎ，ｐＨ６．８）で交互に３回洗浄した。１００ｍｌの上記抗血清を、０．２μｍを通して濾過し、既存のカラム材料で処理した。この目的のために、上記ゲルを、１０ｍｌ 結合緩衝液でカラムから定量的に洗い流した。回転を介して、室温で一晩インキュベーションを行った。その沈着物を、空のカラム（ＮＡＰ ２５，Ｐｈａｒｍａｃｉａ，空にした）に定量的に移した。上記サイクルを廃棄した。その後、２５０ｍｌの結合緩衝液で洗浄を行って、上記タンパク質を取り出した（上記洗浄溶出液のタンパク質含有量は、Ａ２８０ｎｍで＜０．０２）。溶出緩衝液を、上記洗浄したカラムに配置し、１ｍｌの画分を各々回収した。各画分のタンパク質含有量を、ＢＣＡ法によって測定した（作業説明書ＰＩＥＲＣＥ Ｃｏｍｐａｎｙ，Ｒｏｃｋｆｏｒｄ，ＩＬ，ＵＳＡを参照のこと）。タンパク質濃度＞０．８ｍｇ／ｍｌを有する画分をプールした。ＢＣＡ法によって上記プールのタンパク質を測定した後に、抗ＰＳＫ１６抗体については３４ｍｇおよび抗ＰＨＬ１６抗体については４８ｍｇの収量が得られた。
【００４５】
標識
ＮＡＰ−５ゲル濾過カラム（Ｐｈａｒｍａｃｉａ）の上に、５００μｌの精製抗ＰＳＫ１６抗体（上記を参照のこと）を、作業説明書に従って、１ｍｌ １００ｍＭのリン酸カリウム緩衝液（ｐｈ８．０）中で緩衝液交換した。上記抗体溶液のタンパク質濃度を、１００ｍＭのリン酸カリウム緩衝液（ｐＨ８．０）で１．５ｍｇ／ｍｌになるまで調節した。
【００４６】
上記抗体を、以下のとおり、化学発光での標識のためにさらに処理した：６７μｌの上記抗体溶液を、１０μｌのＭＡ７０ アクリジニウムＮＨＳエステル（１ｍｇ／ｍｌ，Ｆｉｒｍａ ＨＯＥＣＨＳＴ Ｂｅｈｒｉｎｇ）で処理し、１５分間室温でインキュベートした。次いで、４２３μｌの１Ｍ グリシンを添加し、さらに１０分間インキュベートした。次いで、上記標識沈着物を、上記作業説明書に基づいて、１ｍｌの溶出液Ａ（５０ｍＭ リン酸カリウム、１００ｍＭ 塩化ナトリウム，ｐＨ７．４）中、ＮＡＰ−５ゲル濾過カラム（Ｐｈａｒｍａｃｉａ）を介して緩衝液交換した。そしてこのことにあたって、低分子成分を除いた。抗体に連結されていない標識の最終的な残りを分離するために、ゲル濾過ＨＰＬＣを行った（カラム：Ｗａｔｅｒｓ Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｐａｋ ＳＷ３００）。上記アッセイを適用し、溶出液Ａを用いて流速１ｍｌ／分でクロマトグラフィーにかけた。流速光度計で、波長２８０ｎｍおよび３６８ｎｍを測定した。上記抗体の標識程度の尺度としての３６８ｎｍ／２８０ｎｍの吸光度比は、ピーク時に０．１０＋／−０．０１に達した。抗体を含むモノマー画分（保持時間８〜１０分間）を集め、３ｍｌの、１００ｍＭ リン酸ナトリウム、１５０ｍＭ 塩化ナトリウム、５％ ウシ血清アルブミン、０．１％ アジ化ナトリウム（Ｎａｔｒｉｕｍ Ａｚｉｄ），ｐＨ７．４中に回収した。
【００４７】
カップリング
少量の照射した５ｍｌのポリスチレンチューブ（Ｆｉｒｍａ Ｇｒｅｉｎｅｒ）を、精製抗ＰＨＬ１６抗体で、以下のようにコーティングした：上記抗体を、６．６μｇ／ｍｌの濃度になるように、５０ｍｌのＴｒｉｓ、１００ｍｌの塩化ナトリウム，ｐＨ７．８中に希釈した。３００μｌのこの溶液を、各々の小さなチューブにピペットで移した。上記の小さなチューブを、２２℃で２０時間にわたってインキュベートした。上記溶液を吸引によって抜き取った。次いで、各々の小さなチューブに、４．２ｍｌの１０ｍＭ リン酸ナトリウム、２％ Ｋａｒｉｏｎ ＦＰ、０．３％ ウシ血清アルブミン，ｐＨ６．５を充填した。２０時間後に、上記溶液を吸引によって抜き取った。最後に、上記小さなチューブを、真空乾燥器中で乾燥させた。
【００４８】
イムノアッセイの実施および分析
ペプチドＰＳＬ３３（これは、正常ウマ血清（Ｆｉｒｍａ ＳＩＧＭＡ）に連続希釈した）は、標準物質として供した。最初のペプチド重量に従う濃度を、このようにして製造した標準に割り当てた。
【００４９】
サンドイッチイムノアッセイを、以下のように調製した：５０μｌ標準またはアッセイ、ならびに２００μｌのアッセイ緩衝液（１００ｍＭ リン酸ナトリウム、１５０ｍＭ 塩化ナトリウム、５％ ウシ血清アルブミン、０．１％ 非特異的ヒツジＩｇＧ、０．１％ 酸性ナトリウム，ｐｈ７．４）（ＭＡ７０標識抗体の１００万ＲＬＵ（相対発光単位）を含む）を、上記小さな試験管（各々抗体でコーティングした）にピペットで移した。上記チューブを、振盪によって、２２℃で２時間にわたってインキュベートした。次いで、各々の小さなチューブを、１ｍｌの洗浄溶液（０．１％ Ｔｗｅｅｎ ２０）で４回洗浄し、静かに液を流し、そして上記小さなチューブに結合した化学発光を、ルミノメーター（Ｆｉｒｍａ ＢＥＲＴＨＯＬＤ，ＬＢ９５２Ｔ；基本試薬（Ｂａｓｉｓｒｅａｇｅｎｚ） ＢＲＡＨＭＳ ＡＧ）で測定した。ソフトウェアＭｕｌｔｉＣａｌｃ（Ｓｐｌｉｎｅ Ｆｉｔ）を使用することによって、上記アッセイのＣＴ−プロＡＤＭ濃度を、標準曲線において読み取った。
【００５０】
上記アッセイで測定され得る分析物は、Ｃ末端プロアドレノメデュリン（ＣＴ−プロＡＤＭ）といわれる。
【００５１】
臨床値
正常範囲
ＣＴ−プロＡＤＭ濃度を、健常なコントロールのアッセイ（ｎ＝２００）において測定した。そのメジアンは、７７．６ｐｍｏｌ／Ｌであり、最小測定値は、４６．６ｐｍｏｌ／Ｌであり、最大測定値は、１３６．２ｐｍｏｌ／Ｌであり、それぞれ、９５％パーセンタイルは、それぞれ、５８．６ｐｍｏｌ／Ｌまたは１１３．８ｐｍｏｌ／Ｌであった。
【００５２】
心機能不全／重篤度
ＣＴ−プロＡＤＭ濃度を、慢性もしくは急性の代償不全性心機能不全を有する患者において測定した。ＣＴ−プロＡＤＭ濃度を、心機能不全の重篤度と関連づけた：４つのＮＹＨＡ重篤度分類Ｉ〜ＩＶについてのＣＴ−プロＡＤＭ濃度の平均値は、以下の通りであった：８５ｐｍｏｌ／Ｌ、１０７ｐｍｏｌ／Ｌ、１４０．４ｐｍｏｌ／Ｌ、または２４２．７ｐｍｏｌ／Ｌ（図２を参照のこと）。
【００５３】
慢性心機能不全／診断
慢性心機能不全に罹患している３１６名の患者および２００名の健常コントロールの集団のＣＴ−プロＡＤＭ値を、測地した。受信者−操作者−特性分析（Ｒｅｃｅｉｖｅｒ−Ｏｐｅｒａｔｏｒ−Ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｓｔｉｃｓ Ａｎａｌｙｓｅ）は、０．７９のＡＵＣを示した。１２２ｐｍｏｌ／Ｌのカットオフ値で、３９．７％の感度と、９８％の特異性を得た。１１３ｐｍｏｌ／Ｌのカットオフ値で、４６．３％の感度と、９５％の特異性とを得た。
【００５４】
慢性心機能不全／予後
慢性心機能不全に罹患している３１６名の患者の集団のＣＴ−プロＡＤＭ値を測定した。上記患者を、平均３６０日間の期間にわたってモニターした。４２名の患者は、この期間の間に死亡した；２７４名は、生存していた。死亡率を予測するための最良のカットオフ値（感度および特異性の最大の積として定義される）を、受信者−操作者−特性分析によって測定した：１１９．７ｐｍｏｌ／Ｌ。このカットオフ値において、予後の感度は、７３．２％であり、特異性は、６２．２％であった。１１９．７ｐｇ／ｍｌのカットオフ値における死亡の尤度比は、１．９であった。
【００５５】
【表１】
急性心機能不全／診断
急性呼吸困難に罹患している１２５名の患者の集団のＣＴ−プロＡＤＭ値を測定した。上記１２５名の患者のうちの６９名は、心機能不全を有した。心機能不全の鑑別診断についての受信者−操作者−特性分析は、０．７５のＡＵＣを示した。４１０ｐｍｏｌ／Ｌのカットオフ値において、１２．４％の感度と、９８％の特異性とが得られた。３１５ｐｍｏｌ／Ｌのカットオフ値において、１８．３％の感度と、９５％の特異性とを得た。
【００５６】
急性心機能不全／予後
急性代償不全性心機能不全に罹患している６９名の患者の集団のＣＴ−プロＡＤＭ値を測定した。上記患者を、３６０日間の期間にわたってモニターした。この期間の間に、２１名の患者が死亡し；４８名が生存していた。死亡率を予測するための最良のカットオフ値（感度と特異性の最大の積として定義される）を、受信者−操作者−特性分析によって測定した：１９２ｐｍｏｌ／Ｌ。このカットオフ値において、上記予後の感度は、６６．６％であり、特異性は、７５％であった。１９２ｐｍｏｌ／Ｌのカットオフ値における死亡率の尤度比は、２．５であった。
【００５７】
【表２】
心筋梗塞／予後
サンプルを、心臓発作が起こった３日後に急性心臓発作に苦しんでいる２８７名の患者から採取し、ＣＴ−プロＡＤＭを測定した。上記患者を、３６０日間の期間にわたってモニターした。この期間の間に、２２０名の患者が、有害な事象を経験せず、６７名が死亡するか、または心機能不全に起因して再入院した。死亡率または心機能不全に起因する再入院を予想するための最良のカットオフ値（感度と特異性の最大の積として定義される）を、受信者−操作者−特性分析によって測定した：１６１．９ｐｍｏｌ／Ｌ。このカットオフ値において、上記予後の感度は、６７．２％であり、特異性は、７９．１％であった。１６１．９ｐｍｏｌ／Ｌのカットオフ値における有害事象の尤度比は、３．２であった。
【００５８】
【表３】
肺炎／重篤度および予後
サンプルを、市中肺炎を有する１４２名の患者から、彼らが病院に入ったときに採取し、ＣＴ−プロＡＤＭを測定した。上記患者を、７０日間の期間にわたってモニターした。この期間の間に、１０名の患者が死亡した。ＣＴ−プロＡＤＭ濃度は、ＰＳＩ（肺炎重篤度指数（Ｐｎｅｕｍｏｎｉａ Ｓｅｖｅｒｉｔｙ Ｉｎｄｅｘ））（疾患の重篤度についてのスコア）とともに上昇し（図３）、健常コントロール（７７ｐｍｏｌ／Ｌ）と比較して、平均１３５ｐｍｏｌ／Ｌ、と上昇した。死亡率の予測（Ｐｒｏｇｎｏｓｅ ｄｅｒ Ｍｏｒｔａｌｉｔａｅｔ）について、受信者−操作者−特性分析によって、０．８９のＡＵＣを得た。死亡率を予測するための最良のカットオフ値（感度と重篤度との最大の積として定義される）を、受信者−操作者−特性分析によって測定した：１９４．５ｐｍｏｌ／Ｌ。このカットオフ値において、上記予後の感度は、１００％であり、特異性は、８１．２％であった。１９４．５ｐｍｏｌ／Ｌのカットオフ値における死亡率の尤度率は、５．５であった。
【００５９】
【表４】
悪化したＣＯＰＤ
慢性閉塞性肺疾患に罹患し、同時に下気道の感染を同時に罹患している５３名の患者のＣＴ−プロＡＤＭを測定した。これら患者のＣＴ−プロＡＤＭ濃度は、健常コントロール（７７ｐｍｏｌ／Ｌ）と比較して、平均１０６ｐｍｏｌ／Ｌと、上昇したが、肺炎に罹患している患者のものより低かった（１３５ｐｍｏｌ／Ｌを超えるのを参照のこと）。
【特許請求の範囲】
【請求項１】
ＣＴ−プロＡＤＭ（配列番号１）、またはその部分ペプチドもしくはフラグメントからなる診断マーカー。
【請求項２】
疾患を診断および／または該疾患の危険性を層化するための方法であって、該方法は、ＣＴ−プロＡＤＭ（配列番号１）、またはその部分ペプチドもしくはフラグメントが、試験されるべき患者において測定されることで特徴づけられる、方法。
【請求項３】
前記方法は、インビトロ診断であることで特徴づけられる、請求項２に記載の方法。
【請求項４】
疾患、特に、心血管疾患、心機能不全、肺および気道の感染および／もしくは炎症の前記診断もしくは該疾患の危険性の層化は、インビトロで測定されることで特徴づけられる、請求項２または３に記載の方法。
【請求項５】
前記心疾患は、高血圧症、冠動脈性心疾患、特に、急性冠症候群、（急性）心筋梗塞、狭心症を含むことで特徴づけられる、請求項２〜４のいずれか１項に記載の方法。
【請求項６】
前記心機能不全は、慢性心機能不全、（欝血性）心機能不全を伴う高血圧性心疾患、（欝血性）心機能不全を伴う高血圧性心腎疾患、原発性右心不全、二次的右心不全、苦痛を伴わない左心不全（ＮＹＨＡ［Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ Ｈｅａｒｔ Ａｓｓｏｃｉａｔｉｏｎ］ステージＩ）、増大したストレス下で苦痛を伴う左心不全（ＮＹＨＡ ステージＩＩ）、軽いストレス下で苦痛を伴う左心不全（ＮＹＨＡ ステージＩＩＩ）、安静時に苦痛を伴う左心不全（ＮＹＨＡ ステージＩＶ）、心原性ショック、心筋炎、心不整脈および／または高血圧症を含むことで特徴づけられる、請求項２〜５のいずれか１項に記載の方法。
【請求項７】
前記肺および気道の感染および／もしくは炎症は、
ａ）細菌、ウイルス、真菌もしくは寄生生物によって引き起こされる感染、深部気道感染（ＬＲＴＩ：下気道感染）、気管支炎、肺炎、サルコイドーシス、気管支拡張症、非心原性肺浮腫ならびに／または
ｂ）間質性肺疾患および肺線維症、慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）、特に、ＣＯＰＤ感染悪化、気管支喘息、特に、気管支喘息による感染悪化、気管支癌腫、
を含むことで特徴づけられる、請求項２〜６のいずれか１項に記載の方法。
【請求項８】
炎症マーカー、心血管マーカー、神経ホルモンマーカー、虚血マーカーから選択されるさらに少なくとも１種のさらなるマーカーは、試験されるべき患者において測定されることで特徴づけられる、請求項２〜７のいずれか１項に記載の方法。
【請求項９】
前記炎症マーカーは、Ｃ反応性タンパク質（ＣＲＰ）、ＴＮＦ−αのようなサイトカイン、ＩＬ−６のようなインターロイキン、プロカルシトニン（１〜１１６、３〜１１６）およびＶＣＡＭもしくはＩＣＡＭのような接着分子の群からの少なくとも１種のマーカーから選択されることで特徴づけられる、請求項２〜８のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１０】
前記心血管マーカーは、クレアチンキナーゼ、キナーゼ、ミエロペルオキシダーゼ、コペプチン、ミオグロビン、ナトリウム利尿性タンパク質、特に、ＡＮＰ（もしくはＡＮＦ）、プロＡＮＰ、ＮＴ−プロＡＮＰ、ＢＮＰ、プロＢＮＰ、ＮＴ−プロＢＮＰ、または各場合において、それらの部分配列、心筋トロポニン、ＣＲＰ、ならびにプロ−ガストリン放出ペプチド（プロＧＲＰ）、プロ−エンドセリン−１、プロ−レプチン、プロ−ニューロペプチド−Ｙ、プロ−ソマトスタチン、プロ−ニューロペプチド−ＹＹ、プロ−オピオメラノコルチンのような循環を制御する（プロ）ホルモン、または各場合において、それらの部分配列の群からの少なくとも１種のマーカーから選択されることで特徴づけられる、請求項２〜９のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１１】
前記虚血マーカーは、トロポニンＩおよびトロポニンＴ、ＣＢ−ＭＢの群からの少なくとも１種のマーカーから選択されることで特徴づけられる、請求項２〜１０のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１２】
前記神経ホルモンマーカーは、少なくともナトリウム利尿性タンパク質、特に、ＡＮＰ（もしくは、ＡＮＦ）、プロＡＮＰ、ＮＴ−プロＡＮＰ、ＢＮＰ、プロＢＮＰ、ＮＴ−プロＢＮＰ、または各場合においてこれらの部分配列であることで特徴づけられる、請求項２〜１１のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１３】
前記マーカーの並行した測定または同時の決定が行われることで特徴づけられる、請求項２〜１２のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１４】
前記測定は、少なくとも１つの患者サンプルによって行われることで特徴づけられる、請求項２〜１３のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１５】
前記測定は、自動分析デバイス、特にＫｒｙｐｔｏｒによって行われることで特徴づけられる、請求項２〜１４のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１６】
前記測定は、迅速な試験によって、特に個々のパラメーターもしくは複数のパラメーターの測定を介して行われることで特徴づけられる、請求項２〜１５のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１７】
患者の層化のための診断は、特に、患者の層化に関して、臨床的決定のために、特に、疾患の処置もしくは治療のための医薬を使用することによるさらなる処置、特に、集中医療もしくは救急救命医療において、および患者の入院のために行われることで特徴づけられる、請求項２〜１６のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１８】
前記診断および／もしくは危険性の層化は、予後のため、鑑別診断的な早期診断および検出のため、重篤度の評価のため、ならびに該治療に付随する疾患、特に、心血管疾患、心機能不全、肺および気道の感染および／もしくは炎症の経過を評価するために行われることで特徴づけられる、請求項２〜１７のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１９】
疾患、特に、心血管疾患、心機能不全、肺および気道の感染および／もしくは炎症のインビトロ診断および／または危険性の層化のための、ＣＴ−プロＡＤＭ（配列番号１）、またはその部分ペプチドもしくはフラグメントの使用。
【請求項２０】
心臓の診断における、ＣＴ−プロＡＤＭ（配列番号１）、またはその部分ペプチドもしくはフラグメントの使用。
【請求項２１】
疾患、特に、心血管疾患、心機能不全、肺および気道の感染および／もしくは炎症のインビトロ診断および／または危険性の層化のためのマーカー組み合わせに含まれる、ＣＴ−プロＡＤＭ（配列番号１）、またはその部分ペプチドもしくはフラグメントの使用であって、該マーカー組み合わせは、請求項８〜１２のいずれか１項に記載のさらなるマーカーを含むか、または必要であれば、さらなる適切なマーカーを含む、使用。
【請求項２２】
請求項２〜１８のいずれか１項に記載の方法を行うための診断デバイス。
【請求項２３】
疾患、特に、心血管疾患、心機能不全、肺および気道の感染および／もしくは炎症のインビトロ診断および／または危険性の層化のためのキットであって、該キットは、マーカーＣＴ−プロＡＤＭ（配列番号１）、またはその部分ペプチドもしくはフラグメントを測定するための検出試薬を含むか、またはマーカー組み合わせに含まれ、そしてデバイスを含み、該マーカー組み合わせは、請求項８〜１２のいずれか１項に記載されるさらなるマーカーを含む、キット。
【請求項２４】
ＣＴ−プロＡＤＭ（配列番号１）の検出のための抗体。
【請求項１】
ＣＴ−プロＡＤＭ（配列番号１）、またはその部分ペプチドもしくはフラグメントからなる診断マーカー。
【請求項２】
疾患を診断および／または該疾患の危険性を層化するための方法であって、該方法は、ＣＴ−プロＡＤＭ（配列番号１）、またはその部分ペプチドもしくはフラグメントが、試験されるべき患者において測定されることで特徴づけられる、方法。
【請求項３】
前記方法は、インビトロ診断であることで特徴づけられる、請求項２に記載の方法。
【請求項４】
疾患、特に、心血管疾患、心機能不全、肺および気道の感染および／もしくは炎症の前記診断もしくは該疾患の危険性の層化は、インビトロで測定されることで特徴づけられる、請求項２または３に記載の方法。
【請求項５】
前記心疾患は、高血圧症、冠動脈性心疾患、特に、急性冠症候群、（急性）心筋梗塞、狭心症を含むことで特徴づけられる、請求項２〜４のいずれか１項に記載の方法。
【請求項６】
前記心機能不全は、慢性心機能不全、（欝血性）心機能不全を伴う高血圧性心疾患、（欝血性）心機能不全を伴う高血圧性心腎疾患、原発性右心不全、二次的右心不全、苦痛を伴わない左心不全（ＮＹＨＡ［Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ Ｈｅａｒｔ Ａｓｓｏｃｉａｔｉｏｎ］ステージＩ）、増大したストレス下で苦痛を伴う左心不全（ＮＹＨＡ ステージＩＩ）、軽いストレス下で苦痛を伴う左心不全（ＮＹＨＡ ステージＩＩＩ）、安静時に苦痛を伴う左心不全（ＮＹＨＡ ステージＩＶ）、心原性ショック、心筋炎、心不整脈および／または高血圧症を含むことで特徴づけられる、請求項２〜５のいずれか１項に記載の方法。
【請求項７】
前記肺および気道の感染および／もしくは炎症は、
ａ）細菌、ウイルス、真菌もしくは寄生生物によって引き起こされる感染、深部気道感染（ＬＲＴＩ：下気道感染）、気管支炎、肺炎、サルコイドーシス、気管支拡張症、非心原性肺浮腫ならびに／または
ｂ）間質性肺疾患および肺線維症、慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）、特に、ＣＯＰＤ感染悪化、気管支喘息、特に、気管支喘息による感染悪化、気管支癌腫、
を含むことで特徴づけられる、請求項２〜６のいずれか１項に記載の方法。
【請求項８】
炎症マーカー、心血管マーカー、神経ホルモンマーカー、虚血マーカーから選択されるさらに少なくとも１種のさらなるマーカーは、試験されるべき患者において測定されることで特徴づけられる、請求項２〜７のいずれか１項に記載の方法。
【請求項９】
前記炎症マーカーは、Ｃ反応性タンパク質（ＣＲＰ）、ＴＮＦ−αのようなサイトカイン、ＩＬ−６のようなインターロイキン、プロカルシトニン（１〜１１６、３〜１１６）およびＶＣＡＭもしくはＩＣＡＭのような接着分子の群からの少なくとも１種のマーカーから選択されることで特徴づけられる、請求項２〜８のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１０】
前記心血管マーカーは、クレアチンキナーゼ、キナーゼ、ミエロペルオキシダーゼ、コペプチン、ミオグロビン、ナトリウム利尿性タンパク質、特に、ＡＮＰ（もしくはＡＮＦ）、プロＡＮＰ、ＮＴ−プロＡＮＰ、ＢＮＰ、プロＢＮＰ、ＮＴ−プロＢＮＰ、または各場合において、それらの部分配列、心筋トロポニン、ＣＲＰ、ならびにプロ−ガストリン放出ペプチド（プロＧＲＰ）、プロ−エンドセリン−１、プロ−レプチン、プロ−ニューロペプチド−Ｙ、プロ−ソマトスタチン、プロ−ニューロペプチド−ＹＹ、プロ−オピオメラノコルチンのような循環を制御する（プロ）ホルモン、または各場合において、それらの部分配列の群からの少なくとも１種のマーカーから選択されることで特徴づけられる、請求項２〜９のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１１】
前記虚血マーカーは、トロポニンＩおよびトロポニンＴ、ＣＢ−ＭＢの群からの少なくとも１種のマーカーから選択されることで特徴づけられる、請求項２〜１０のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１２】
前記神経ホルモンマーカーは、少なくともナトリウム利尿性タンパク質、特に、ＡＮＰ（もしくは、ＡＮＦ）、プロＡＮＰ、ＮＴ−プロＡＮＰ、ＢＮＰ、プロＢＮＰ、ＮＴ−プロＢＮＰ、または各場合においてこれらの部分配列であることで特徴づけられる、請求項２〜１１のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１３】
前記マーカーの並行した測定または同時の決定が行われることで特徴づけられる、請求項２〜１２のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１４】
前記測定は、少なくとも１つの患者サンプルによって行われることで特徴づけられる、請求項２〜１３のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１５】
前記測定は、自動分析デバイス、特にＫｒｙｐｔｏｒによって行われることで特徴づけられる、請求項２〜１４のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１６】
前記測定は、迅速な試験によって、特に個々のパラメーターもしくは複数のパラメーターの測定を介して行われることで特徴づけられる、請求項２〜１５のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１７】
患者の層化のための診断は、特に、患者の層化に関して、臨床的決定のために、特に、疾患の処置もしくは治療のための医薬を使用することによるさらなる処置、特に、集中医療もしくは救急救命医療において、および患者の入院のために行われることで特徴づけられる、請求項２〜１６のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１８】
前記診断および／もしくは危険性の層化は、予後のため、鑑別診断的な早期診断および検出のため、重篤度の評価のため、ならびに該治療に付随する疾患、特に、心血管疾患、心機能不全、肺および気道の感染および／もしくは炎症の経過を評価するために行われることで特徴づけられる、請求項２〜１７のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１９】
疾患、特に、心血管疾患、心機能不全、肺および気道の感染および／もしくは炎症のインビトロ診断および／または危険性の層化のための、ＣＴ−プロＡＤＭ（配列番号１）、またはその部分ペプチドもしくはフラグメントの使用。
【請求項２０】
心臓の診断における、ＣＴ−プロＡＤＭ（配列番号１）、またはその部分ペプチドもしくはフラグメントの使用。
【請求項２１】
疾患、特に、心血管疾患、心機能不全、肺および気道の感染および／もしくは炎症のインビトロ診断および／または危険性の層化のためのマーカー組み合わせに含まれる、ＣＴ−プロＡＤＭ（配列番号１）、またはその部分ペプチドもしくはフラグメントの使用であって、該マーカー組み合わせは、請求項８〜１２のいずれか１項に記載のさらなるマーカーを含むか、または必要であれば、さらなる適切なマーカーを含む、使用。
【請求項２２】
請求項２〜１８のいずれか１項に記載の方法を行うための診断デバイス。
【請求項２３】
疾患、特に、心血管疾患、心機能不全、肺および気道の感染および／もしくは炎症のインビトロ診断および／または危険性の層化のためのキットであって、該キットは、マーカーＣＴ−プロＡＤＭ（配列番号１）、またはその部分ペプチドもしくはフラグメントを測定するための検出試薬を含むか、またはマーカー組み合わせに含まれ、そしてデバイスを含み、該マーカー組み合わせは、請求項８〜１２のいずれか１項に記載されるさらなるマーカーを含む、キット。
【請求項２４】
ＣＴ−プロＡＤＭ（配列番号１）の検出のための抗体。
【図２】
【図３】
【図１】
【図３】
【図１】
【公表番号】特表２０１０−５１３８７９（Ｐ２０１０−５１３８７９Ａ）
【公表日】平成２２年４月３０日（２０１０．４．３０）
【国際特許分類】
【出願番号】特願２００９−５４１７６０（Ｐ２００９−５４１７６０）
【出願日】平成１９年１２月２０日（２００７．１２．２０）
【国際出願番号】ＰＣＴ／ＤＥ２００７／００２３００
【国際公開番号】ＷＯ２００８／０７４３１５
【国際公開日】平成２０年６月２６日（２００８．６．２６）
【出願人】（５０９０９１３３２）ブラームズ アクチェンゲゼルシャフト (12)
【Ｆターム（参考）】
【公表日】平成２２年４月３０日（２０１０．４．３０）
【国際特許分類】
【出願日】平成１９年１２月２０日（２００７．１２．２０）
【国際出願番号】ＰＣＴ／ＤＥ２００７／００２３００
【国際公開番号】ＷＯ２００８／０７４３１５
【国際公開日】平成２０年６月２６日（２００８．６．２６）
【出願人】（５０９０９１３３２）ブラームズ アクチェンゲゼルシャフト (12)
【Ｆターム（参考）】
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