方法、組成物、及びその使用
本発明は、（ａ）試験しようとする化合物を準備する工程；（ｂ）モノアミン再取り込み輸送体のコカイン結合部位に結合する化合物の能力を試験する工程；及び（ｃ）モノアミン再取り込み輸送体を介してモノアミン神経伝達物質の内側又は外側への輸送を調節する化合物の能力を試験する工程を含む、中枢神経系におけるモノアミン神経伝達の機能不全に関連する疾患又は状態を治療するための候補化合物を同定するための方法であって、試験化合物が、モノアミン再取り込み輸送体のコカイン結合部位に結合し、且つ、その活性を調節することが可能である場合に、モノアミン神経伝達の機能不全と関連する疾患又は状態を治療するための候補化合物として同定される、方法に関する。本発明は、本発明の方法を使用して同定した化合物並びにその使用、組成物、及び医薬にも関する。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、中枢神経系（ＣＮＳ）におけるモノアミン伝達の作用のメカニズム、特に、モノアミン神経伝達の機能不全に関する疾患又は状態を治療するための候補化合物を同定するための方法に関する。
【背景技術】
【０００２】
コカインは、コカシュラブ（ｃｏｃａ ｓｈｕｒｕｂ）（ｅｒｙｔｈｒｏｘｙｌｏｎ ｃｏｃａ）の葉から抽出される強力な精神刺激乱用薬物である。コカインは、経口、吸入、及び焙りを含む様々な手段によって乱用され得る。そして、その乱用は、世界中の多数の先進国及び発展途上国において大きな問題となっている。Ｗｈｉｔｅ Ｈｏｕｓｅ Ｏｆｆｉｃｅ ｏｆ Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｄｒｕｇ Ｃｏｎｔｒｏｌ Ｐｏｌｉｃｙが１９８８から１９９５年の間にアメリカ人は当該精神刺激薬の違法な購入に約３８０億ドルを費やしていると推定しており、その社会的な課題は非常に大きい。この数字は、法的処置、入院、社会的支援、リハビリテーション、及び経済的生産力の低下を含む、コカイン乱用の間接的なコストを考慮に入れておらず、また、コカインの違法な供給及び使用に関連する犯罪活動の社会への危害も考慮に入れていない。
【先行技術文献】
【非特許文献】
【０００３】
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【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００４】
コカインの精神刺激効果は、モノアミン神経伝達物質であるドーパミンの脳内における作用を増大するという機能に由来するものであると解されており、脳の辺縁域におけるその作用は、ヒトにおいて活性化、陶酔、強化、及び報酬特性に関与すると解されている（Ｄｉ Ｃｈｉａｒａ ｅｔ ａｌ．１９９３）。本発明の完成する以前には、コカインは、ドーパミン作動性ニューロンのドーパミン再取り込み輸送体（ＤＡＴ）部位を競争的に阻害し、それによってシナプス間隙の外への及びシナプス前ドーパミン作動性神経末端に戻るドーパミンの輸送を受動的に妨げることによって、中枢神経系のドーパミンの作用を増大するという仮説があった。神経モノアミン再取り込み輸送体（元来は、Ｕｐｔａｋｅ １を称されていた）に対するコカインの作用の態様は、Ｉｖｅｒｓｅｎ（１９３７）によって最初に開示された。しかしながら、この提唱されたメカニズムは、他のドーパミン再取り込み阻害剤、例えば、ブプロピオン及びシブトラミン（その薬理学的に活性な代謝物）が、多くの場合にコカインよりもドーパミン再取り込み阻害剤として強力であるが、ヒトにおいて同様の精神刺激陶酔作用を有しないことを説明するものではない（Ｇｒｉｆｆｉｔｈ ｅｔ ａｌ, １９８３; Ｍｉｌｌｅｒ ＆ Ｇｒｉｆｆｉｔｈ, １９８３; Ｓｃｈｕｈ ｅｔ ａｌ, ２０００）。重要なことに、コカイン依存症及び脱離症状は、その様な薬剤を使用することによっては、成功裡に治療されていない（Ｇｏｒｅｌｉｃｋ ｅｔ ａｌ, ２００４; Ｓｏｆｕｏｇｌｕ ＆ Ｋｏｓｔｅｎ, ２００５）。
【０００５】
ドーパミンの細胞外放出のための生理学的メカニズムは、ドーパミン作動性神経伝達の調節におけるＤＡＴの役割とともに、図１に図示している。ドーパミン作動性のニューロン発火の速度の増大が、ドーパミン含有神経末端からシナプス間隙へのドーパミン作動性の細胞外放出を誘導する。この化学伝達物質は、次いで、そのシグナルを受容（シナプス後）ニューロンにその受容体を介して伝達する。ドーパミン作動性のシグナル伝達を停止するための主要な生理学的メカニズムは、ナトリウム／塩素イオンチャンネルＤＡＴを介した再取り込みの活性化プロセスによる、シナプス間隙からの神経伝達物質の除去である（図２）。図３に示すように、競争的な再取り込み阻害剤、例えば、シブトラミン（その活性代謝物による）及びブプロピオンは、当該プロセスを阻害し、段階的で穏やかな持続するドーパミン濃度の増大をシナプス間隙において生じさせ、それによって、ドーパミン作動性神経伝達を段階的且つ穏やかに増進させる。競争的な再取り込み阻害剤はドーパミン作動性神経伝達に対して直接的な作用を有しておらず、ドーパミンの細胞外放出の作用を促進及び持続するにすぎない。
【０００６】
対照的に、図４で示すように、コカイン及び薬理学的に関連する化合物、例えば、コカイン様精神刺激及び陶酔作用をヒトにおいて引き起こすメチルフェニデート（Ｒｕｓｈ＆Ｂａｋｅｒ，２００１）は、ＤＡＴの別の部位、すなわち「コカイン結合部位」で作用し（Ｅｄｖａｒｄｓｅｎ＆ Ｄａｈｌ，１９９４）、ドーパミン作動性神経伝達を促進する。コカインは当該部位に結合することが長い間知られていたが、単に、これらの輸送体を介するシナプスからのドーパミンのクリアランスを受動的に阻害する競争的ＤＡＴ阻害剤（参考例としては、シブトラミンの代謝物及びブプロピオン）として作用していると広く解されていた。
【０００７】
競争的ＤＡＴ基質放出剤、例えば、ｄ−アンフェタミン、メタンフェタミン、メチルアンフェタミン、メチレンジオキシアンフェタミン（ＭＤＡ）、及びメチレンジオキシメタンフェタミン（ＭＤＭＡ）は全て、中枢神経系におけるドーパミン作動性神経伝達物質の強力な刺激因子である（表１）。これらの分子は、サイズ及び三次元構造においてドーパミンと類似している。図５に示すように、これらの放出剤は、ドーパミン含有末端に当該放出剤を送り込むＤＡＴ複合体の競争的な基質である。シナプス前末端の内部に入ると、それらは、「放出可能な」（新規に合成された）小胞貯蔵プールからドーパミンを移動させ、神経伝達物質をシナプス間隙に移動させることによって強制的に放出させる。前記放出剤はＤＡＴ複合体の基質であるため、それらは、シナプス前神経末端への輸送についてドーパミンと競争することによって、シナプス間隙からのドーパミンのクリアランスも遅延させる。競争的ＤＡＴ基質放出剤は、神経末端の内部から薬理学的作用を生じ、加えて、ドーパミン作動性神経伝達に対するそれらの作用はニューロン発火から独立したものである。
【０００８】
これらの各種のＤＡＴリガンドの薬理学的特性の類似点及び主要な相違点のまとめを表２に示す。
【０００９】
このような背景において、本発明者は驚くべきことに、コカインが、従来の競争的ドーパミン再取り込み阻害剤ではなく、むしろＤＡＴ複合体における「コカイン結合部位」における逆アゴニストとして作用することを発見した。ドーパミンをドーパミン作動性神経末端から送り出すようにドーパミンの輸送体を逆行させる、この更により強力で動的な薬理学的メカニズムによって、コカイン及び関連する薬剤が重大な精神刺激剤の乱用傾向を生じさせる理由が説明される。
【００１０】
用語「逆アゴニスト」は、Ｐｏｌｃ ｅｔ ａｌ（１９８２）において新しい種類のベンゾジアゼピンリガンド、例えば、ＦＧ−７１４２の作用を説明するために初めて使用された。ベンゾジアゼピンアゴニストは、γ−アミノ酪酸（ＧＡＢＡ）Ａタイプ塩素イオンチャンネル受容体上の調節部位に結合し、神経細胞へのＣｌ−イオン流動を増大させることが知られており、この作用によって抗痙攣剤及び抗不安剤であることが知られている。それらの作用は、アンタゴニスト、例えば、それ自体ではＣｌ−イオン流動に対して作用を有さず、そのため薬理学的には「サイレント」であると説明されるＲｏ １５−１７８８によって阻害されうる。一方で、ＦＧ−７１４２などのリガンドの作用は、ベンゾジアゼピンアゴニストの作用に逆行するものであることが観察された。かくして、それらは、ニューロンへのＣｌ−イオン流動を低減し、抗痙攣剤であり、且つ、深刻に不安を惹起するものであった。それらの作用は、ベンゾジアゼピンアゴニストの逆の作用であったため、それらは必然的に「逆アゴニスト」と称された。現在では、Ｇタンパク質共役型受容体を含む多数の他の受容体系について逆アゴニストが知られている。しかしながら、本発明は、輸送体の「逆アゴニスト」を初めて開示するものである。本願では、前記輸送体は、脳のドーパミン含有ニューロンに存在し、ドーパミン作動性神経伝達の調節において重要な役割を担うナトリウム／塩素イオンＤＡＴである。
【００１１】
本明細書に提示する証拠は、ＤＡＴ上の「コカイン結合部位」が当該輸送体上のアロステリックな調節部位であり、そして、コカイン及び関連の化合物が、神経末端からシナプス間隙へのドーパミン分子の輸送を生じさせる逆アゴニストとして作用することを示す。この動的なメカニズムによって、コカインは、脳においてドーパミン作動性神経伝達を顕著に増大する。コカイン及び関連の化合物の当該作用はドーパミン作動性神経末端の外側で作用し、完全なドーパミン作動性神経発火に依存する。
【００１２】
このことは、コカイン及び関連する「コカイン結合部位」リガンドの作用の薬理学的メカニズムの驚くべき特徴であり、コカインが、ドーパミン再取り込み輸送体（ＤＡＴ）において逆アゴニストとして作用することによって、その神経刺激作用及び陶酔作用を生じさせることを示す。
【００１３】
大半の研究はＤＡＴに対するコカインの作用に集中しているが、膜貫通輸送体のモノアミンファミリーは、セロトニン（ＳＥＲＴ）及びノルエピネフリン（ＮＥＴ）輸送体も含む（Ａｍａｒａ ａｎｄ Ａｒｒｉｚａ，１９９３）。これら３つの分子は全て、高いアミノ酸相同性を共有するＮａ＋／Ｃｌ−依存性モノアミン再取り込み部位である（Ｂｌａｋｅｌｙ ｅｔ ａｌ, １９９１; Ｇｉｒｏｓ ｅｔ ａｌ, １９９１, １９９２; Ｐａｃｈｏｌｃｚｙｋ ｅｔ ａｌ, １９９１; Ｒａｍａｍｏｏｒｔｈｙ ｅｔ ａｌ, １９９３）。コカインは、ＤＡＴ、ＮＥＴ、及びＳＥＲＴと高い親和性で結合し得る（Ｈｙｔｔｅｌ, １９８２; Ｒｉｃｈｅｌｓｏｎ ＆ Ｐｆｅｎｎｉｎｇ, １９８４;表３参照のこと）。
【００１４】
本発明及びその完成に使用した実験方法は、他のコカイン結合部位リガンド、すなわち、逆アゴニスト、部分的逆アゴニスト、アゴニスト、部分アゴニスト、及びアンタゴニストのコカイン過量摂取、コカイン渇望、コカイン中毒、並びにコカイン乱用からの離脱により生じる身体的及び精神的な症状の治療のための新規薬剤としてのスクリーニング及び薬理学的な特性決定のための方法として応用される（図７）。さらに、本発明は、新規のコカイン結合部位リガンド、すなわち、逆アゴニスト、部分逆アゴニスト、アゴニスト、部分アゴニスト、及びアンタゴニストの精神刺激剤の乱用に関連する臨床疾患、並びに脳におけるドーパミン作動性の作用の欠陥又は過剰による精神及び神経の疾患及び状態の治療のための薬剤としての開発につながる治療的応用も可能である（図７）。
【００１５】
本発明は、アンフェタミン、メタンフェタミン、ＭＤＡ、及びＭＤＭＡ、並びにそれらの異性体及び同族体を含むが、それらに限らない他の精神刺激剤の中毒によって生じる過剰摂取、渇望、中毒、及び離脱症状の治療のための新規薬剤の発見及び開発にも応用可能である。本発明の更なる利点は、脳におけるドーパミン作動性神経伝達を、双方向、すなわち上方及び下方の双方に、薬理学的に操作するが、依然としてドーパミン作動性ニューロン発火の生理学的な速度を保持するための方法を提供することである。この手法は、ドーパミン作動性神経伝達の不足又は過剰のいずれかに由来する精神及び神経の疾患を治療するための新規薬剤の開発に応用可能である。ドーパミン作動性神経伝達における不足に由来する状態の例は、注意欠陥過活動性障害（ＡＤＨＤ）及び関連する認知、衝動性、注意、及び攻撃性に関連するＣＮＳ疾患、ナルコレプシー、及びパーキンソン病を含むが、それらに限らない。ドーパミン作動性神経伝達の過剰に由来する状態の例は、統合失調症、統合失調感情障害、及び関連の精神病を含むが、それらに限らない。
【課題を解決するための手段】
【００１６】
したがって、本発明の第一の態様は、
ａ）試験しようとする化合物を準備する工程；
ｂ）モノアミン再取り込み輸送体のコカイン結合部位に結合する化合物の能力を試験する工程；及び
ｃ）モノアミン再取り込み輸送体を介してモノアミン神経伝達物質の内側又は外側への輸送を調節する化合物の能力を試験する工程
を含む、中枢神経系におけるモノアミン神経伝達の機能不全に関連する疾患又は状態を治療するための候補化合物を同定するための方法であって、
前記化合物がモノアミン再取り込み輸送体のコカイン結合部位に結合し、且つ、その活性を調節することが可能である場合に、モノアミン神経伝達の機能不全に関連する疾患又は状態を治療するための候補化合物として同定される、方法を提供する。
【００１７】
かくして、本発明の第一の態様の方法の工程（ｃ）は、特にモノアミン神経伝達物質の内側又は外側への輸送を試験することによって、モノアミン再取り込み輸送体の活性を試験する工程を含む。
【００１８】
１つの実施態様では、工程（ｃ）は、モノアミン再取り込み輸送体のコカイン結合部位の活性を調節する化合物の能力を試験する工程を含む。かくして、工程（ｃ）は、モノアミン再取り込み輸送体に対するコカインの作用を調節する化合物の能力を試験する工程を含んでよい。
【００１９】
したがって、本発明は、ＤＡＴ複合体のコカイン結合部位の逆アゴニスト、部分的逆アゴニスト、アンタゴニスト、部的アゴニスト、及び完全なアゴニストである新規薬剤の同定及び薬理学的な分類のためのスクリーニング戦略を提供する（図６、表４及び５）。
【００２０】
表２に詳細に開示しているように、ＤＡＴ複合体のコカイン結合部位のリガンドは、競争的ＤＡＴ再取り込み阻害剤及び競争的DAT基質放出剤の双方とは区別される特有の薬理学的特性を有する。コカインがＤＡＴ複合体の逆アゴニストであるという予測し得なかった発見に鑑みると、そのナトリウム／塩素依存輸送体に対する動的作用の結果として、化合物が、逆アゴニスト（ＤＡＴ輸送体の方向を逆転する）からサイレントアンタゴニスト（ＤＡＴ輸送体の作用に対して薬理学的作用を有しない）、完全なアゴニスト（シナプス間隙からのドーパミンのクリアランスの速度を顕著に増大する）まで広範な薬理学的作用を示し得ることは明らかである。しかしながら、本発明で示すように、コカイン結合部位における薬剤の作用は、ドーパミン作動性ニューロンのニューロン発火の生理学的な速度に依存するものである。したがって、従来の機能スクリーニング技術、例えば、［３Ｈ］ドーパミンのシナプトソームへの取り込みの阻害は、これらの動的特性を有する分子の検出及び薬理学的な特性決定に利用し得ない。なぜならば、シナプトソーム及び細胞株調製物において、ＤＡＴ複合体に対するコカイン結合部位リガンドの動的特性に必須である、完全な神経構造及び生理学的なドーパミン作動性神経発火が存在しないからである。後述の実施例において説明するように、意識があるか又は麻酔したラットにおける大脳内マイクロダイアリシス並びにボルタンメトリー及び電気刺激ニューロン高速サイクリックボルタンメトリーｉｎ ｖｉｖｏ技術が、コカイン結合部位がＤＡＴ複合体のアロステリックな調節サブユニットであり、コカインが当該部位に結合すると、逆アゴニストとして作用してドーパミン輸送の正常な方向を逆転させるという予期しなかった発見を導いた。当該相互作用の動的性質及びその完全なドーパミン作動性ニューロン発火への依存性のために、その様な実験技術が、全てのコカイン結合部位リガンドの発見及び薬理学的特性決定を実施するには必要である。図６は、従来のスクリーニングアッセイ、例えば、放射リガンド受容体結合が、現在、ＤＡＴ複合体を安定に発現する組織及び細胞株におけるコカイン結合部位異のリガンドの親和性を規定するためにどのように利用されているかを示す。しかしながら、その様な技術は、問題の化合物、例えば、逆アゴニスト、部分的逆アゴニスト、アンタゴニスト、部分的アゴニスト、又はアゴニストの機能を規定することはない。表４及び５に説明しているように、この目的は、上述のｉｎ ｖｉｖｏ技術を利用することによって達成することが可能であり、新規なコカイン結合部位リガンドの薬理学的特性を規定する関連の結果がそこで規定される。
【００２１】
好ましくは、本発明は、前記モノアミン再取り込み輸送体が、ドーパミン、ノルアドレナリン、及び／又はセロトニン（５−ＨＴ）の再取り込み輸送体からなる群から選択される、方法を提供する。
【００２２】
かくして、１つの実施態様では、モノアミン再取り込み輸送体はドーパミン再取り込み輸送体である。
【００２３】
例えば、本発明は、前記疾患又は状態が、中枢神経系におけるドーパミン神経伝達の欠陥に関連し、特に前記疾患又は状態が、パーキンソン病、ナルコレプシー、注意欠陥過活動性障害（ＡＨＤＨ）、境界性人格障害、間欠性爆発性障害、反社会的人格障害、薬物乱用、窃盗癖、及び放火狂を含むか又はそれらからなる群から選択される、方法を提供してよい。
【００２４】
代替的には、前記疾患又は状態は、中枢神経系におけるドーパミン神経伝達の過剰と関連してよく、例えば、統合失調症、統合失調感情障害、統合失調症様障害、薬物乱用誘導精神病性障害、妄想性障害、鬱病、及び共有精神病性障害を含むか又はからなる群から選択される疾患又は状態である。
【００２５】
更なる実施態様では、モノアミン再取り込み輸送体は、ノルアドレナリン再取り込み輸送体である。
【００２６】
例えば、本発明は、前記疾患又は状態が中枢神経系におけるノルアドレナリン神経伝達の欠陥に関連し、例えば、疾患又は状態が衝動性、注意、及び攻撃性の疾患、例えば、注意欠陥過活動性障害（ＡＤＨＤ）、境界性人格障害、間欠性爆発性障害、反社会的人格障害、薬物乱用、窃盗癖、放火狂、及び鬱病を含むか又はそれらからなる群から選択される、方法を提供してよい。
【００２７】
代替的には、前記疾患又は状態は、中枢神経系におけるノルアドレナリン神経伝達の過剰に関連してよく、例えば、疾患又は状態が、パニック発作、心的外傷後ストレス障害、不安神経症、恐怖症、強迫性障害を含むか又はそれらからなる群から選択されてよい。
【００２８】
さらなる実施態様では、モノアミン再取り込み輸送体が、セロトニン再取り込み輸送体である。
【００２９】
例えば、本発明は、前記疾患又は状態が、中枢神経系におけるセロトニン神経伝達の欠陥に関連し、例えば、衝動性、注意、及び／又は攻撃性の疾患、例えば、境界性人格障害、間欠性爆発性障害、反社会的人格障害、薬物乱用、窃盗癖、放火狂、摂食障害（過食症、多食症、拒食症）、不安神経症、恐怖症、強迫性障害、及び鬱病を含むか又はそれらからなる群から選択される、方法を提供してよい。
【００３０】
代替的には、本発明は、前記疾患又は状態が、中枢神経系におけるセロトニン神経伝達の過剰に関連し、例えば偏頭痛である、方法を提供する。
【００３１】
本発明の好ましい実施態様では、工程（ｂ）は、適当な放射性リガンド、例えば、［３Ｈ］ＷＩＮ３５，４２８（例えば、Ａｌｏｙｏ ｅｔ ａｌ，１９９５；Ｃｈｅｎ ｅｔ ａｌ，１９９６；Ｋａｔｚ ｅｔ ａｌ，２０００）を使用するｉｎ ｖｉｔｒｏ受容体結合によって実施され、及び工程（ｃ）は組織切片、細胞、又はシナプトソームを使用するｉｎ ｖｉｔｒｏ神経伝達物質の放出又は再取り込み（例えば、ｄｅ Ｌａｎｇｅｎ ＆ Ｍｕｌｄｅｒ, １９８０; Ｐｒｉｓｔｕｐａ ｅｔ ａｌ, １９９４; Ｐｉｆｌ ｅｔ ａｌ, １９９５; Ｈｅａｌ ｅｔ ａｌ, １９９６; Ｓｅｒｓｈｅｎ ｅｔ ａｌ, １９９６; Ｒｏｗｌｅｙ ｅｔ ａｌ, ２０００）、ｉｎ ｖｉｔｒｏ電気生理学（例えば、Ｊｏｎｅｓ ｅｔ ａｌ, １９９６; Ｃｒａｇｇ ｅｔ ａｌ, ２０００）、ｉｎ ｖｉｖｏマイクロダイアリシス（例えば、Ｒｏｗｌｅｙ ｅｔ ａｌ, ２０００）、ｉｎ ｖｉｖｏボルタンメトリー（例えば、Ｗｕ ｅｔ ａｌ, ２００１）、ｉｎ ｖｉｔｒｏバイオセンサー又はｉｎ ｖｉｖｏ移植バイオセンサー（例えば、Ｃｒｅｓｐｉ ｅｔ ａｌ １９９０; Ａｌｌｅｎ １９９７）によって実施されてよい。
【００３２】
本発明の方法の工程（ｃ）は、モノアミン再取り込み輸送体の活性を受動的及び／又は積極的に調節する化合物の能力を試験する工程を含んでよいと当業者に解されるであろう。
【００３３】
１つの実施態様では、本発明は、モノアミン再取り込み輸送体（及び／又はそのコカイン結合部位）の活性を受動的に調節する化合物の能力を試験する工程を含む、方法を提供する。
【００３４】
例えば、工程（ｃ）は、モノアミン再取り込み輸送体（及び／又はそのコカイン結合部位）のアンタゴニストとして作用する化合物の能力を試験する工程を含んでよい。
【００３５】
更なる実施態様では、本発明は、工程（ｃ）がモノアミン再取り込み輸送体（及び／又はそのコカイン結合部位）を積極的に調節する化合物の能力を試験する工程を含む、方法を提供する。
【００３６】
例えば、工程（ｃ）は、モノアミン再取り込み輸送体の逆アゴニスト（完全又は部分的のいずれか）として作用する化合物の能力を試験する工程を含んでよい。モノアミン再取り込み輸送体阻害剤のコカイン結合部位において、その様な逆アゴニストは以下：
（ｉ）前記化合物はモノアミンの神経細胞発火依存性の放出を誘導及び／又は増大し得る；
（ｉｉ）前記化合物は前記モノアミンの再取り込み速度に対する作用を有しない
という特性によって特徴付けられてよい。
【００３７】
細胞発火依存性のモノアミンの放出は、モノアミン流出のｉｎ ｖｉｖｏマイクロダイアリシス測定によって測定されてよい。例えば、細胞発火は、テトロドトキシン又はＥＧＴＡを用いたマイクロダイアリシスプローブのかん流によって阻害されてよい。
【００３８】
モノアミンの再取り込み速度は、シナプトソームへの標識モノアミン輸送の測定によって測定されてよい。
【００３９】
代替的に又は加えて、工程（ｃ）は、モノアミン再取り込み輸送体のアゴニスト（完全又は部分的のいずれか）として作用する化合物の能力を試験する工程を含んでよい。
【００４０】
代替的に又は加えて、工程（ｃ）は、モノアミン再取り込み輸送体（及び／又はそのコカイン結合部位）のアゴニスト又は逆アゴニストの作用をアンタゴナイズする化合物の能力を試験する工程を含んでよい。
【００４１】
工程（ｃ）はｉｎ ｖｉｔｒｏ及び／又はｉｎ ｖｉｖｏのモノアミン再取り込み輸送体の活性を調節する化合物の能力を試験する工程を含むか又は当該工程からなってよいと、当業者に解されるであろう。
【００４２】
好ましい実施態様では、工程（ｃ）は、モノアミン再取り込み輸送体のコカイン結合部位において作用する化合物の能力を試験する工程を含むか又は当該工程からなる。例えば、工程（ｃ）は、ドーパミン再取り込み輸送体のコカイン結合部位においてアゴニスト（完全又は部分的）として作用する化合物の能力を試験する工程を含むか又は当該工程からなってよい。
【００４３】
ドーパミンの神経外濃度に対する薬剤の作用（当該神経伝達物質のシナプス濃度に対するそれらの作用の代わり）が、例えば、灌流による前処置した脳切片からの［３Ｈ］ドーパミンのｉｎ ｖｉｔｒｏ放出、高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）及び電気化学的な検出手段と組み合わせた脳内マイクロダイアリシスによる自由行動ラットの脳における神経外ドーパミン濃度の測定、又はｉｎ ｖｉｖｏ脳内高速サイクリックボルタンメトリーを含む各種のｉｎ ｖｉｔｒｏ及びｉｎ ｖｉｖｏ技術を使用して評価されてよい。当該技術の組み合わせによって得られたデータによって、コカイン及び関連の化合物が、競争的ＤＡＴ再取り込み阻害剤（参考例としては、シブトラミン（その活性代謝物を介して）及びブプロピオン）又は競争的基質放出剤（参考例としては、アンフェタミン及びメタンフェタミン）のいずれかとして作用せず、むしろ、それらは、ＤＡＴ複合体のアロステリックな調節部位において逆アゴニスト作用に相当する特有の薬理学的作用態様を有し、前記部位がコカイン結合部位である。かくして、まとめると、高濃度においてコカインは［３Ｈ］ドーパミンを前処理した脳切片から放出させ、且つ、ｉｎ ｖｉｖｏで脳内マイクロダイアリシスによって測定されるように、コカインは開始してから非常に急速且つ比較的短い期間で細胞外ドーパミン濃度を非常に大きな増大を引き起こすため、コカインは競争的ＤＡＴ再取り込み阻害剤とは異なる。双方の種類の化合物が、脳内マイクロダイアリシス実験によって示されるように、神経外ドーパミン濃度における非常に大きな増大を引き起こしたが、コカインの作用はドーパミン作動性ニューロン発火に依存し、競争的な基質放出剤のものはそれに依存しないため、コカインは競争的基質放出剤とは薬理学的に異なる。そして、ｉｎ ｖｉｖｏボルタンメトリー実験は、コカインが電気刺激によって引き起こされるドーパミン放出速度並びに放出される神経伝達物質の最大量を増大させるが、当該薬剤はシナプス間隙からのドーパミンクリアランスの速度を遅延させないことを示す。本願の独創的な工程は、コカイン結合部位は単にコカインが結合してドーパミンの取り込みを受動的に阻害するＤＡＴ複合体の位置ではなく、むしろ当該部位はドーパミン作動性ニューロンの内又は外へのドーパミン輸送の速度及び方向を調節するアロステリックな調節部位であるという当該２つの観察結果から推定される。さらに、本明細書では、コカインがＤＡＴのコカイン結合部位において逆アゴニストとして作用し、発火によって引き起こされるドーパミン流出を促進することを示す。コカイン結合部位への結合によって、コカインが再取り込み阻害剤として作用するのであれば、当該神経伝達物質のクリアランス速度を遅延させるであろうが、データはそうではないことを示している。
【００４４】
典型的には、工程（ｃ）は、
（Ａ）灌流による、モノアミン再取り込み輸送体部位を含有する組織切片、細胞（又はその細胞亜分画）からの自発的なモノアミンの放出のｉｎ ｖｉｔｒｏにおける測定（例えば、ｄｅ Ｌａｎｇｅｎ ＆ Ｍｕｌｄｅｒ, １９８０; Ｐｒｉｓｔｕｐａ ｅｔ ａｌ, １９９４; Ｐｉｆｌ ｅｔ ａｌ, １９９５; Ｈｅａｌ ｅｔ ａｌ, １９９６）；
（Ｂ）灌流による、モノアミン再取り込み輸送体部位を含有する組織切片、細胞（又は細胞亜画分）からのモノアミン再取り込みのｉｎ ｖｉｔｒｏにおける測定（例えば、ｄｅ Ｌａｎｇｅｎ ＆ Ｍｕｌｄｅｒ, １９８０; Ｐｒｉｓｔｕｐａ ｅｔ ａｌ, １９９４; Ｐｉｆｌ ｅｔ ａｌ, １９９５; Ｈｅａｌ ｅｔ ａｌ, １９９６）；
（Ｃ）灌流による、モノアミン再取り込み輸送体部位を含有する組織切片、細胞（又は細胞亜画分）の電気誘発放出のｉｎ ｖｉｔｒｏにおける測定；
（Ｄ）電気生理学的技術による、モノアミン再取り込み輸送体部位を含有する組織切片、細胞（又は細胞亜画分）からの自発的及び／又は電気誘発モノアミン流出のｉｎ ｖｉｔｒｏにおける測定（例えば、Ｊｏｎｅｓ ｅｔ ａｌ, １９９６; Ｃｒａｇｇ ｅｔ ａｌ, ２０００）；
（Ｅ）１つ又は複数のバイオセンサーを使用する、自発的及び／又は電気誘発モノアミン誘発のｉｎ ｖｉｔｒｏ及び／又はｉｎ ｖｉｖｏの測定（Ｃｒｅｓｐｉ ｅｔ ａｌ １９９０; Ａｌｌｅｎ １９９７）；
（Ｆ）動物におけるマイクロダイアリシスによる、細胞発火依存的及び細胞発火非依存的なモノアミン流出のｉｎ ｖｉｖｏ測定（Ｒｏｗｌｅｙ ｅｔ ａｌ, ２０００）；
（Ｇ）ボルタンメトリー技術による、動物における自発的及び／又は電気誘発モノアミン流出のｉｎ ｖｉｖｏにおける測定（Ｗｕ ｅｔ ａｌ，２００１）
を含むが、それらに限らない技術の一つ又は複数を使用して、モノアミン再取り込み輸送体の活性を調節する化合物の能力を試験する工程を含む。
【００４５】
好ましい実施態様では、（Ａ）、（Ｂ）、及び（Ｃ）は、標識モノアミンの放出のｉｎ ｖｉｔｒｏにおける測定を含む。
【００４６】
さらに好ましい実施態様では、（Ｅ）のバイオセンサーが、例えば、酵素、抗体、及び／又は神経伝達物質受容体によって被覆される。
【００４７】
本発明の方法は、以下：
Ａのみ、Ｂのみ、Ｃのみ、Ｄのみ、Ｅのみ、Ｆのみ、Ｇのみ、Ａ+Ｂ、Ａ+Ｃ、Ａ+Ｄ、Ａ+Ｂ+Ｃ、Ａ+Ｂ+Ｃ+Ｄ、Ａ+Ｂ+Ｄ、Ｂ+Ｃ、Ｂ+Ｄ、Ｃ+Ｂ、Ｃ+Ｄ、Ａ+Ｃ+Ｅ (ｉｎ ｖｉｔｒｏ)、Ａ+Ｃ+Ｅ (ｉｎ ｖｉｖｏ)、Ａ+Ｃ+Ｆ、Ａ+Ｃ+Ｇ、Ａ+Ｂ+Ｃ+Ｅ (ｉｎ ｖｉｔｒｏ)、Ａ+Ｂ+Ｃ+Ｅ (ｉｎ ｖｉｖｏ)、Ａ+Ｂ+Ｃ+Ｆ、Ａ+Ｂ+Ｃ+Ｇ、Ａ+Ｄ+Ｅ (ｉｎ ｖｉｔｒｏ)、Ａ+Ｄ+Ｅ (ｉｎ ｖｉｖｏ)、Ａ+Ｄ+Ｆ、Ａ+Ｄ+Ｇ、Ａ+Ｂ+Ｄ+Ｅ (ｉｎ ｖｉｔｒｏ)、Ａ+Ｂ+Ｄ+Ｅ (ｉｎ ｖｉｖｏ)、Ａ+Ｂ+Ｄ+Ｆ、Ａ+Ｂ+Ｄ+Ｇ
の技術手段／組み合わせの一つ又は複数を含んでよいと、当業者に解されるであろう。
【００４８】
更に、モノアミン再取り込み輸送体部位を含有する任意の組織、細胞、又は細胞亜画分が、本発明の方法において使用され得ると解されるであろう。例えば、モノアミン再取り込み輸送体部位を含有する細胞は、脳切片（例えば、大脳基底核領域）などの組織切片に存在するか又は由来するものであってよい。
【００４９】
好ましくは、本発明は、前記組織切片が脳、例えば、脳のドーパミン作動性領域に由来する、方法を提供する。
【００５０】
モノアミン再取り込み輸送体部位を含有する細胞は、培養物中で維持されてもよい。かくして、前記細胞は、初代細胞又はモノアミン再取り込み輸送体を発現するように遺伝子操作した不死化細胞（すなわち、細胞株）からなる群から選択されてよい。細胞を遺伝子操作する適切な方法は、Ｓａｍｂｒｏｏｋ ＆ Ｒｕｓｓｅｌｌ，２００１，Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ，Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｐｒｅｓｓに開示されている。
【００５１】
１つの実施態様では、モノアミン再取り込み輸送体部位を含有する細胞は血液細胞である。
【００５２】
代替的には、モノアミン再取り込み輸送体部位を含有する細胞は、腎臓血管に存在するか又は由来するものである。
【００５３】
代替的には、モノアミン放出又は取り込みが、シナプトソームなどの細胞亜分画において測定されてよい。
【００５４】
モノアミン再取り込み輸送体部位を含有する細胞は、任意の適切な供給源、例えば、ヒト又は非ヒト（例えば、マウス又はラットなどのげっ歯類）に由来するものであってよい。
【００５５】
モノアミン再取り込み輸送体の機能のｉｎ ｖｉｖｏにおける評価を含む本発明の方法では、その様な測定は、好ましくは、脳において実施される。例えば、ｉｎ ｖｉｖｏにおける測定が、モノアミン再取り込み輸送体を含有する細胞が豊富な脳の領域において実施される。典型的には、モノアミン再取り込み輸送体の機能は、脳のドーパミン作動領域（例えば、大脳基底核）においてｉｎ ｖｉｖｏで測定される。
【００５６】
好ましくは、ｉｎ ｖｉｖｏ測定は、ヒト又は非ヒトの種（例えば、マウス又はラットなどのげっ歯類）において実施されてよい。
【００５７】
モノアミンの放出及び再取り込みを検出するための適切な技術は当該技術分野において既知である。好ましくは、放射リガンド計数、オートラジオグラフィー、ＨＰＬＣ（たとえば、蛍光検出、電気検出、質量分析検出を組み合わせる）、免疫アッセイ、蛍光検出、電気検出、質量分析検出、及び酵素アッセイが、本発明の方法において使用されてよいであろう。
【００５８】
１つの実施態様では、本発明の工程（ｃ）は、モノアミン再取り込み輸送体の活性を調節する異なる用量の試験化合物の能力を試験する工程を含む。例えば、灌流による組織からのモノアミンの放出のｉｎ ｖｉｔｒｏにおける測定は、高用量の試験化合物（例えば、１０−５Ｍ）及び低用量の試験化合物（例えば、１０−７Ｍ）を使用して実施してよい。
【００５９】
本発明の方法が、悪性又は望ましくない特性、例えば、毒性及び／又は乱用の可能性について試験化合物をカウンタースクリーニングする工程を更に含むことが好ましい。
【００６０】
有利には、本発明の方法が、中枢神経系におけるモノアミン神経伝達の機能不全に関連する疾患又は状態を治療するための候補化合物として同定された化合物を医薬組成物に製剤化する工程（ｄ）を更に含む。
【００６１】
更なる態様では、本発明は、本発明の方法に係る方法によって同定された化合物を提供する。
【００６２】
例えば、前記化合物は、モノアミン再取り込み輸送体のコカイン結合部位の完全又は部分的逆アゴニストであってよい。代替的には、前記化合物は、モノアミン再取り込み輸送体のコカイン結合部位の完全又は部分的アゴニストであってよい。さらなる実施態様では、前記化合物は、モノアミン再取り込み輸送体のコカイン結合部位の逆アゴニストとして作用するリガンド（例えば、コカイン）のアンタゴニストである。
【００６３】
更なる実施態様では、本発明は、本発明に係る化合物及び製薬学的に許容される担体又は賦形剤を含む医薬組成物を提供する。
【００６４】
本発明の化合物、医薬、及び医薬組成物は、注射可能な持続放出薬剤送達系を使用して送達されてよい。これらは、注射の頻度を低減するために特に設計されている。その様な系の例は、注射されると持続的な期間に亘ってゆっくりとｒｈＧＨを放出する、生分解性マイクロスフェアにヒト成長ホルモン（ｒｈＧＨ）をカプセル化したＮｕｔｒｏｐｉｎ Ｄｅｐｏｔである。
【００６５】
本発明の化合物、医薬、及び医薬組成物の送達の代替的な方法は、熱感受性のＲｅＧｅｌ注射システムである。体温未満では、ＲｅＧｅｌは注射液体であるが、体温において既知の安全な生分解性ポリマーにゆっくりと侵食及び溶解されるゲルリザーバーを形成する。有効成分は、バイオポリマーの溶解に応じて経時的に送達される。
【００６６】
好ましくは、本発明の医薬及び／又は医薬組成物は、有効成分の一日の用量若しくは単位、一日の用量以下、又はその適当な一部を含有する単位用量である。
【００６７】
本発明の化合物、医薬、及び医薬組成物は、通常、製薬学的に許容される剤形において、任意に非毒性有機又は無機酸又は塩基の付加塩の形態である有効成分を含む医薬組成物の形態において、経口又は任意の非経口経路によって投与されるであろう。治療しようとする疾患及び患者並びに投与経路に依存して、前記組成物は各種の用量で投与されてよい。
【００６８】
ヒトの治療において、本発明の化合物、医薬、及び医薬組成物は単独で投与されてよいが、意図する投与経路及び標準の製薬学的な慣例の点から選択される適切な製薬学的に許容される賦形剤、希釈剤、又は担体との混合物において一般的には投与される。
【００６９】
例えば、本発明の化合物、医薬、及び医薬組成物は、即時放出、遅延放出、又は制御放出用途のために、香味剤又は着色剤を含有してよい錠剤、カプセル剤、胚珠剤、エリクシル剤、液剤、又は懸濁剤の形態で、経口、経頬、又は舌下に投与されてよい。本発明の化合物、医薬、及び医薬組成物は、海綿体内注射により投与されてもよい。
【００７０】
その様な錠剤は、ミクロクリスタリンセルロース、ラクトース、クエン酸ナトリウム、炭酸カルシウム、リン酸二塩基カルシウム、及びグリシンなどの賦形剤、デンプン（好ましくは、コーン、ポテト、又はタピオカデンプン）、ナトリウムデンプングリコレート、クロスカルメロースデンプン、及びある複合シリケートなどの崩壊剤、ポリビニルピロリドン、ヒドロキシプロピルメチルセルロース（ＨＰＭＣ）、ヒドロキシプロピルセルロース（ＨＰＣ）、スクロース、ゼラチン、及びアカシアなどの造粒バインダーを含有してよい。加えて、ステアリン酸マグネシウム、ステアリン酸、ベヘン酸グリセリル、及びタルクなどの潤滑剤が含まれてよい。
【００７１】
類似のタイプの固体組成物が、ゼラチンカプセルにおいてフィラーとして使用されてよい。この点において好ましい賦形剤はラクトース、デンプン、セルロース、乳糖、又は高分子ポリエチレングリコールを含む。水性懸濁剤及び／又はエリクシル剤としては、本発明の化合物は、各種の甘味剤若しくは香味剤、着色剤若しくは染料、乳化及び／若しくは懸濁剤、並びに希釈剤、例えば、水、エタノール、プロピレングリコール、及びグリセリン、並びにそれらの組み合わせと組み合わせてよい。
【００７２】
本発明の化合物、医薬、及び医薬組成物は、非経口、例えば、静脈内、動脈内、腹腔内、鞘内、気管内、心室内、胸骨内、頭蓋内、筋肉内、又は皮下に投与してもよく、又はそれらは点滴技術によって投与されてよい。最良には、それらは、他の物質、例えば、血液と等張の溶液を作製するのに十分な塩又はグルコースを含有してよい、滅菌水溶液の形態で使用される。前記水溶液は、必要であれば、適切に緩衝化（好ましくは３から９のｐＨ）されるべきである。滅菌条件下における適切な非経口製剤の調製は、当業者によく知られた標準的な製剤技術によって容易に達成される。
【００７３】
非経口投与に適切な医薬及び医薬組成物は、抗酸化剤、緩衝剤、静菌剤、及び溶液を意図する受容者の血液と等張にする溶質を含んでよい水性及び非水性滅菌注射溶液、並びに懸濁剤及び増粘剤を含む。前記医薬及び組成物は、単位用量又は複数用量の容器、例えば、密封アンプル及びバイアルにおいて提供されてよく、使用の直前に滅菌液体担体、例えば、注射のための水の添加のみを必要とする凍結乾燥条件下で保存されてよい。即時の注射のための溶液及び懸濁剤が、既に開示されているような滅菌粉末、顆粒、及び錠剤から調製されてよい。
【００７４】
ヒト患者に対する経口及び非経口投与のために、本発明の化合物、医薬、及び医薬組成物の一日の用量レベルが、一回又は複数に分割した用量で投与されてよい。
【００７５】
かくして、例えば、本発明の化合物の錠剤又はカプセル剤が、適当に、一回に又は二回以上の投与で十分な有効成分を含有してよい。とにかく、医療従事者は、任意の個々の患者に最も適切である実際の用量を決定し、それは、特定の患者の年齢、体重、及び応答に応じて変化するであろう。上述の用量は、平均的な場合の例示である。もちろん、より高用量又は低用量の範囲が有用である個々の事例が存在してよく、その様な場合も本発明の範囲内である。
【００７６】
本発明の化合物、医薬、及び医薬組成物は、鼻内又は吸入によって投与されてもよく、及び適切な推進剤、例えば、ジクロロジフルオロメタン、トリクロロフルオロメタン、ジクロロテトラフルオロエタン、ヒドロフルオロアルカン、例えば、１，１，１，２−テトラフルオロエタン（ＨＦＡ １３４Ａ３）、又は１，１，１，２，３，３，３−ヘプタフルオロプロパン（ＨＦＡ ２２７ＥＡ３）、二酸化炭素、又は他の適切なガスを使用して加圧容器、ポンプ、スプレー、又はネブライザーからの乾燥粉末吸入剤又はエアロゾルスプレーによる提供の形態で簡便に送達されてよい。高圧エアロゾルの場合には、用量単位が、一定量を送達するバルブを提供することによって決定されてよい。高圧容器、ポンプ、スプレー、又はネブライザーは、例えば、溶媒としてエタノールの混合物及び推進剤を使用し、潤滑剤、例えば三オレイン酸ソルビタンを更に含有してよい、有効成分の溶液又は懸濁剤を含有してよい。吸入器において使用するためのカプセル又はカートリッジ（例えば、ゼラチン製）が、本発明の薬剤及び適切な粉末基剤、例えば、ラクトース又はデンプンの粉末混合物を含有するように製剤化されてよい。
【００７７】
エアロゾル又は乾燥粉末製剤は、好ましくは、各一定用量又は「一息」が患者に送達するための本発明の化合物を含有するように好適に調整されてよい。エアロゾルを用いた一日全体の用量は患者ごとに変化し、単回用量又はより一般的には分割用量を一日に投与してよい。
【００７８】
代替的には、本発明の化合物、医薬、及び医薬組成物は、坐剤若しくはペッサリーの形態において投与されてよく、又はそれらは、ローション剤、液剤、クリーム剤、軟膏剤、又は散布剤の形態で局所的に適用されてよい。本発明の化合物、医薬、及び医薬組成物は、例えば皮膚パッチの使用によって、経皮投与されてもよい。
【００７９】
皮膚への局所投与のために、本発明の化合物、医薬、及び医薬組成物は、例えば、以下：天然油、流動ワセリン、白色ワセリン、プロピレングリコール、ポリオキシエチレン、ポリオキシプロピレン剤、乳化ワックス、及び水の１つ又は複数との混合物に懸濁又は溶解された有効成分を含有する適切な軟膏剤として製剤化されてよい。代替的には、それらは、例えば以下：天然油、モノステアリン酸ソルビタン、ポリエチレングリコール、液体パラフィン、ポリソルベート６０、セチルエステルワックス、セテアリールアルコール、２−オクチルドデカノール、ベンジルアルコール、及び水の１つ又は複数の混合物に懸濁又は溶解した、適切なローション又はクリームとして製剤化されてよい。
【００８０】
口内における局所投与のために適切な製剤は、香味基剤、多くの場合にはスクロース及びアカシア又はトラガカントに有効成分を含むロゼンジ剤；ゼラチン及びグリセリン又はスクロース及びアカシアなどの不活性基剤に有効成分を含むトローチ剤；並びに適切な液体担体に有効成分を含むマウスウォッシュ剤を含む。
【００８１】
一般的には、ヒトにおいて、本発明の化合物、医薬、及び医薬組成物並びに本発明の薬剤の経口又は非経口投与は、好ましい経路であり、最も簡便なものである。
【００８２】
獣医学的な用途のために、本発明の化合物、医薬、及び医薬組成物が、通常の獣医学的な慣例に従って、適切な許容される製剤として投与され、獣医は特定の動物に最も適当な投与計画及び投与経路を決定するであろう。
【００８３】
好都合には、前記製剤は医薬製剤である。
【００８４】
有利には、前記製剤は獣医用製剤である。
【００８５】
本発明は、医薬において使用するための本発明で開示するような化合物を更に提供する。かくして、本発明は、中枢神経系におけるモノアミン神経伝達の機能不全に関連する疾患又は状態を治療するための医薬の製造における、本発明に係る化合物の使用を提供する。
【００８６】
例えば、前記疾患又は状態は、ドーパミン、ノルアドレナリン、及び／又はセロトニン（５−ＨＴ）の再取り込み輸送体の機能不全と関連してよい。
【００８７】
かくして、１つの実施態様では、モノアミン再取り込み輸送体はドーパミン再取り込み輸送体である。
【００８８】
例えば、本発明は、前記疾患又は状態が中枢神経系におけるドーパミン神経伝達の不足と関連する、治療方法を提供してよく、特に前記疾患又は状態は、パーキンソン病、ナルコレプシー、注意欠陥過活動性障害（ＡＤＨＤ）、境界性人格障害、間欠性爆発性障害、反社会的性格障害、薬物乱用、窃盗癖、及び放火狂を含むか又はそれらからなる群から選択される。
【００８９】
代替的には、前記疾患又は状態は、中枢神経系におけるドーパミン神経伝達の過剰と関連してよく、例えば、統合失調症、統合失調感情障害、統合失調症様障害、薬物乱用誘導精神病、妄想性障害、躁病、及び共有精神病性障害を含むかそれらからなる群から選択される疾患又は状態であってよい。
【００９０】
更なる実施態様では、前記モノアミン再取り込み輸送体はノルアドレナリン再取り込み輸送体である。
【００９１】
例えば、本発明は、前記疾患又は状態が中枢神経系におけるノルアドレナリン神経伝達の不足と関連し、例えば、衝動性、注意、及び攻撃性の疾患、例えば、注意欠陥過活動性疾患（ＡＤＨＤ）、境界性人格障害、間欠性爆発性障害、反社会的性格障害、薬物乱用、窃盗癖、放火狂、及び鬱病を含むか又はそれらからなる群から選択される疾患又は状態である、方法を提供する。
【００９２】
代替的には、前記疾患又は状態は、中枢神経系におけるノルアドレナリン神経伝達
の過剰に関連してよく、例えば、パニック発作、心的外傷後ストレス障害、不安、恐怖症、及び強迫性障害を含むが、それらに限らない群から選択される疾患又は状態であってよい。
【００９３】
更なる実施態様では、前記モノアミン再取り込み輸送体は、セロトニン再取り込み輸送体である。
【００９４】
例えば、本発明は、前記疾患又は状態が、中枢神経系におけるセロトニン神経伝達の不足に関連してよく、例えば、衝動性、注意、及び／又は攻撃性の疾患、例えば、境界性人格障害、間欠性爆発性障害、反社会性性格障害、薬物乱用、窃盗癖、放火狂、摂食障害（過食症、多食症、拒食症）、不安神経症、恐怖症、強迫性障害、及び鬱病を含むか又はそれらからなる群から選択される疾患又は条件であってよい。
【００９５】
代替的には、本発明は、前記疾患又状態が、中枢神経系におけるセロトニン神経伝達の過剰と関連する疾患又は状態であってよく、例えば、偏頭痛である。
【００９６】
本明細書における過去に公開された文献の記載又は議論は、必ずしも、当該文献が従来技術の一部であるか又は一般的な技術常識であると認めるものと捉えられるべきではない。
【００９７】
本発明のある態様を具体化する、好ましい非限定的な実施例を、表及び図の参照と共に以下に記載する。
【図面の簡単な説明】
【００９８】
【図１】表１は、ラット線条体切片からの［３Ｈ］ドーパミン放出に対する、各種のＤＡＴリガンドの効果を示す。
【図２】表２は、各種のタイプのＤＡＴリガンドの分類を示す。
【図３】表３は、放射標識したドーパミン、ノルアドレナリン、及び５−ＨＴの再取り込み阻害剤としてのコカインの相対的な効力の比較を示す。
【図４】表４は、脳内ミクロダイアリシス又はボルタンメトリー機能スクリーニングを使用した、各種のＤＡＴコカイン結合部位リガンドの特性決定を示す。
【図５】表５は、電気刺激した、ｉｎ ｖｉｖｏ高速サイクリックボルタンメトリースクリーニングにおける、各種のＤＡＴコカイン結合部位リガンドの特定決定を示す。
【図６】図１は、ドーパミン作動性神経伝達の生理プロセスを示す。ドーパミン作動性ニューロンの軸索に沿って進む活動電位（神経インパルス）は、前記ニューロンを脱分極して、エキソサイトーシスと称されるプロセスによる、その貯蔵小胞からシナプス間隙へのドーパミンの量子的放出を生じさせる。化学メッセンジャーであるドーパミンは、ドーパミンがシナプス後受容体を活性化することによって、そのシグナルを伝達する、受容者のニューロンまでシナプス間隙において拡散する。ドーパミンシグナル伝達は、主に、シナプス前ドーパミン作動性神経末端のドーパミン再取り込み輸送体（ＤＡＴ）部位を介するイオン勾配駆動型能動輸送によって、シナプス間隙から当該神経伝達物質を除去することによって停止する。
【図７】図２は、ドーパミン再取り込み輸送体（ＤＡＴ）複合体の作用を示す。ドーパミンは、イオン勾配関連能動輸送体であるＤＡＴによってシナプス前末端に戻される。該再取り込み輸送体は、ドーパミン、２ナトリウムイオン、及び１塩素イオンに結合し、それらをシナプス前末端に移動させる。イオン勾配の力による該システムは、ナトリウム／カリウムＡＴＰａｓｅ及び修飾塩素イオンチャンネル、例えば、ＧＡＢＡＡ受容体によって維持される。
【図８】図３は、競争的ドーパミン再取り込み阻害剤の薬理学的メカニズムを示す。競争的ドーパミン再取り込み阻害剤、例えば、シブトラミン又はブプロピオンは、ドーパミン再取り込み輸送体に競争的に結合し、それによってＤＡＴによるシナプス間隙のドーパミンのクリアランスを妨げる。この受動的な効果は、シナプス間隙におけるドーパミンの濃度における漸増的且つ穏やかな増大を引き起こす。当該図面に示すように、競争的ドーパミン再取り込み阻害剤は、神経末端の外側からのドーパミン神経伝達を強化し、それらの作用は神経発火の速度に依存する。再取り込み阻害剤は、直接的な薬理学的作用を有しない。それらは、生理的に放出されたドーパミンの効果を強化及び持続させるにすぎない。
【図９】図４は、コカインの薬理学的メカニズムを示す。ドーパミンを介する神経末端へのドーパミンの輸送を競争的に阻害する従来の再取り込み阻害剤、例えば、シブトラミン及びブプロピオンとは異なり、コカインは、ＤＡＴ複合体のアロステリック部位に結合する（コカイン結合部位）。逆アゴニストとしてコカインは、神経末端にドーパミンを輸送するメカニズムからドーパミンを能動的に外側に輸送するメカニズムへと、輸送体の機能を逆転させる。これによって、シナプスのドーパミン濃度における急速且つ非常に大きな増大、それによるドーパミン作動性神経伝達が生じる。このメカニズムによって、コカインの大きな精神刺激プロフィールが説明される。当該図面に示すように、コカインは、神経末端の外側にあるＤＡＴの部位に結合することによってドーパミン作動性神経伝達を強化し、その作用は神経発火に依存する。
【図１０】図５は、競争的DAT基質放出剤の薬理学的メカニズムを示す。競争的DAT基質放出剤、例えば、ｄ−アンフェタミン及びメタンフェタミンは、内在性モノアミン伝達物質であるドーパミンを摸倣する低分子である。それらは、ＤＡＴ複合体を介してシナプス前神経末端へと能動的に輸送される。一度神経に入ると、それらは、その貯蔵部位のドーパミンと置き換わり、「逆輸送」又は「レトロ輸送」と称させるプロセスによってドーパミンを強制的にシナプス間隙へと放出させる。ドーパミン放出剤は、ドーパミン作動性神経末端への輸送に関してモノアミンと競争することによって、シナプス間隙からのモノアミンのクリアランスを遅延させる。当該図面に示すように、競争的DAT基質放出剤は、神経末端内部からドーパミン作動性神経伝達を強化し、それらの作用は神経発火からは独立したものである。
【図１１】図６は、ＤＡＴのコカイン結合部位における各種のアゴニスト及び逆アゴニスト特性を有する薬剤を検出するためのスクリーニング方法を示す。
【図１２】図７は、各種のコカイン結合部位リガンドについての広範な作用、乱用の可能性、及び臨床応用を示す。
【図１３】図８は、自由移動ラットの側坐核における細胞外ドーパミン濃度に対するシブトラミン及びｄ−アンフェタミンの効果を示す。各データポイントは、平均±Ｓ．Ｅ．Ｍ．（ｎ＝８〜１１）を表わし、シブトラミン、ｄ−アンフェタミン、又は生理食塩水投与は縦の矢印によって示す。*Ｐ＜0.05；**Ｐ＜0.01；***Ｐ＜0.001は、多重比較のためのｐｏｓｔ ｈｏｃ ｔ−ｔｅｓｔを用いたＡＮＣＯＶＡによって、生理食塩水処理群から優位に異なる。Ｒｏｗｌｅｙ ｅｔ ａｌ（２０００）からデータを参照した。
【図１４】図９は、生理食塩水、ｄ−アンフェタミン、及びコカインによって誘導される内側前頭前皮質における細胞外ドーパミンレベルの時間経過、すなわち、生理食塩水、ｄ−アンフェタミン（女性１．２５ｍｇ／ｋｇ；男性１．５６ｍｇ／ｋｇ）、及びコカイン（２０ｍｇ／ｋｇ）によって誘導される内側前頭前皮質における細胞外ドーパミンの時間経過を示す。サンプルは２０分の間隔に亘って回収した。データは、ベースラインの値の割合（±ＳＥＭ）として表わしている。Ｍａｉｓｏｎｎｅｕｖｅ ｅｔ ａｌ（１９９０）から得たデータを示す。
【図１５】図１０は、ｄ−アンフェタミン及びコカインによって引き起こされた側坐核における細胞外ドーパミンの増大に対するテトロドトキシンの異なる効果を示す。プローブの透析に使用するリンガー溶液は、第一の矢印によって示す点でテトロドトキシン（１×１０−６Ｍ：ｎ＝４）を含有するものに変えた。全ての動物は、第二の矢印で示した点でｄ−アンフェタミン（０．５ｍｇ／ｋｇ ｓ．ｃ．）又はコカイン（１５ｍｇ／ｋｇ ｉ．ｐ．）の注射を受けた（標準的なリンガー溶液を使用して試験した動物に関してｎ＝７）。結果は、リンガー溶液に切り替える前（黒四角）又はｄ−アンフェタミン若しくはコカインの注射の前（白丸）に回収した３つのサンプルにおいて測定した処理前の値の平均として表わしている。透析物におけるドーパミンの基礎レベルは（プローブによる回収の修正をしていない）、０．０６２±０．０１４ｐｍｏｌ／２０μｌであった。データは、Ｗｅｓｔｅｒｉｎｋ ｅｔ ａｌ（１９８７）から得られる。
【図１６】図１１は、側坐核における細胞外ドーパミンの電気的に誘導されたレベルに対するＲＴＩ−７６の効果を示す。異なる各種の動物において記録した２つのセットの誘導されたシグナルを示す。第一のセットのトレースは、ＲＴＩ−７６の脳質内注射の１日後に観察されるドーパミンシグナルにおける変化を記載する（１００ｎｍｏｌ；黒丸）。第二のセット（ＣＯＮ；白丸）は未処理のマウスにおいて記録した。比較のために、時間及び濃度スケール及びデータの提示は、当該図面及び図１２で同一である。データはＷｕ ｅｔ ａｌ（２００１）から得られる。
【図１７】図１２は、側坐核における細胞外ドーパミンの電気的に誘導されたレベルに対するＲＴＩ−７６の効果を示す。異なる各種の動物において記録した２つのセットの誘導されたシグナルを示す。第一のセットのトレースは、ＲＴＩ−７６の脳質内注射の１日後に観察されるドーパミンシグナルにおける変化を記載する（１００ｎｍｏｌ；黒丸）。第二のセット（ＣＯＮ；白丸）は未処理のマウスにおいて記録した。比較のために、時間及び濃度スケール及びデータの提示は、当該図面及び図１２で同一である。データはＷｕ ｅｔ ａｌ（２００１）から得られる。
【実施例】
【００９９】
ｉｎ ｖｉｔｒｏにおけるラット線条体切片からの［３Ｈ］ドーパミン放出に対する各種のＤＡＴリガンドの効果の灌流による測定
使用した方法は、Ｈｅａｌ ｅｔ ａｌ（１９９２）によって詳細に開示されたものである。簡潔には、成体のオスのＣＤラット（１８０〜３００ｇ）を屠殺して、線条体を迅速に除去して、Ｍｃｌｌｗａｉｎ組織チョッパーを使用して９０°で二方向において組織を切断することによって調製した。前記切片は、次いで、０．１３ｍＭパーギリン及び６０ｎＭ［３Ｈ］ドーパミン（４５Ｃｉ／ｍｍｏｌ）を含有するｐＨ７．４の２ｍｌのＫｒｅｂｓ−Ｈｅｎｓｅｌｅｉｔ緩衝液（１８８ｍＭ ＮａＣｌ、２５ｍＭ ＮａＨＣＯ３、１１ｍＭ Ｄ−グルコース、４．７ｍＭ ＫＣｌ、１．２ｍＭ ＭｇＳＯ４、１．２ｍＭ ＫＨ２ＰＯ４、１．３ｍＭ ＣあＣｌ２、９５％Ｏ２−５％ＣＯ２を含むガス）中で３７℃において２０分間に亘ってインキュベートした。５ｍｇの切片の一定分量を灌流装置の各チャンバーに移し、３７℃に事前に加温したＫｒｅｂｓ−Ｈｅｎｓｅｌｅｉｔ緩衝液で灌流した。流速は１ｍｌ／分であり、最初の３０分間の灌流を実施して切片から神経外［３Ｈ］ドーパミンを除去した後に、２分の間隔で画分を回収した。［３Ｈ］ドーパミンの流出は８分間に亘って回収し（画分１から４）、試験化合物の溶液（１０−７〜１０−５Ｍ）又はＫｒｅｂｓ−Ｈｅｎｓｅｌｅｉｔ緩衝液単独の前の［３Ｈ］ドーパミン流出のベースラインレベルを規定した。最終的には、全ての切片を更に１０分間に亘って灌流した。前記画分及び切片の放射活性は、液体シンチレーションカウンターによって測定した。５〜１３画分に存在する［３Ｈ］ドーパミンの蓄積した放出量を、切片に最初に存在した放射活性全体の一部として計算した。
【０１００】
Ｈｅａｌ ｅｔ ａｌ（１９８２及び１９９６）によって開示された実験によって評価された試験化合物は、シブトラミン、その活性代謝物、すなわち、ＢＴＳ ５４ ３５４（Ｎ−｛１−［１−（４−クロロフェニル）シクロブチル］−３−メチルブチル｝−Ｎ−メチルアミン）及びＢＴＳ ５４ ５０５（１−［１−（４−クロロフェニル）シクロブチル］−３−メチルブチルアミン）、ブプロピオン、コカイン ＤＬ−トレオ−メチルフェニデート、ｄ−アンフェタミン、並びにメタンフェタミンを含んでいた。
【０１０１】
自由移動ラットの側坐核における神経外ドーパミン濃度に対する各種のＤＡＴリガンドの効果の脳内ミクロダイアリシスによる測定
ミクロダイアリシス実験は、Ｒｏｗｌｅｙ ｅｔ ａｌ（２０００）によって詳細に説明されているように実施した。簡潔には、オスのＳｐｒａｇｕｅ−Ｄａｗｌｅｙラット（２５０〜３５０ｇの体重）をＯ２／Ｎ２Ｏ混合物中のイソフルレンで麻酔をかけた（１Ｌ／分）。２ｍｍ Ｈｏｓｐａｌ ｍｅｍｂｒａｎｅ ｔｉｐを備えた同心ミクロダイアリシスプローブ（３００μＭ外形）を側坐核に定位移植し（座標：Ａ：＋２．２ｍｍ；Ｌ：ブレグマに対して−１．５ｍｍ；Ｐａｘｉｎｏｓ ａｎｄ Ｗａｔｓｏｎ，１９８６の定位図による頭蓋骨表面に対して−８．０ｍｍ）、ステンレス鋼のネジ及び歯科用セメントを使用して頭蓋骨を固定した。手術後に、ラットは液体スイベル及び釣り合わせたアームを介して結合したミクロダイアリシスプローブと共に個々に飼育し、動物の自由な運動を確実にした。前記プローブは、１．２μｌ／分の流速で人工的なＣＳＦ（１５０ｍＭ Ｎａ＋、３．０ｍＭ Ｋ＋、０．８ｍＭ Ｍｇ２＋、１．４ｍＭ Ｃａ２＋、１．０ Ｐ２＋、１５５ｍＭＣｌ−）を用いて連続的に灌流した。実験の間には、サンプルを２０分の間隔で０．１Ｍ過塩素酸に回収し、次いでドーパミン濃度を電気化学的検出と組み合わせた高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）によって測定するまで、４℃で保存した。
【０１０２】
４×２０分の基礎サンプルの回収後、腹腔内注射によって薬剤を投与し、２０分の透析サンプルを４時間に亘って回収した。調べた薬剤は、シブトラミン塩酸一水和物（２．０又は６．０ｍｇ／ｋｇ ｉｐ）及びｄ−アンフェタミンスルフェート（０．５又は１．５ｍｇ／ｋｇ ｉｐ）を含んでいた。
【０１０３】
本願に含まれる他の透析データは、Ｍａｉｓｏｎｎｅｕｖｅ ｅｔ ａｌ（１９９０）によって開示されており、コカイン塩酸（２０ｍｇ／ｋｇ ｉｐ）に対して、ｄ−アンフェタミンスルフェート（女性１．２５ｍｇ／ｋｇ及び男性１．５６ｍｇ／ｋｇ）の腹腔内注射の、抱水クローラル又はペントバルビタールで麻酔したＬｏｎｇ−Ｅｖａｎｓラットの内側前頭前皮質におけるドーパミンの神経外濃度に対する効果を比較している。また、Ｗｅｓｔｅｒｉｎｋ ｅｔ ａｌ（１９８７）によって開示されているように、コカイン及びｄ−アンフェタミンによって誘導された側坐核におけるドーパミン濃度の増大に対する、ニューロン発火を妨げるナトリウムチャンネル阻害剤であるテトロドトキシンの効果を比較した。
【０１０４】
ｉｎ ｖｉｖｏにおけるラット側坐核におけるドーパミンの電気的に誘導されたエキソサイトーシスに対するコカインの効果の高速サイクリックボルタンメトリーによる測定
これらの実験はＷｕ ｅｔ ａｌ（２００１）の文献に詳細に開示されている。簡潔には、成体のオスＳｐｒａｕｇｕｅ−Ｄａｗｌｅｙラット（２５０−４５０ｇの体重）をウレタンの注射（１．５ｇ／ｋ ｉｐ）によって麻酔した。定位操作において、２つの作用電極を移植した（１つは新線条体の中心領域に移植し、他方は側坐核の中心領域に移植した）。刺激微小電極は同側前脳束に移植した。ドーパミン作動性ニューロンの位置は、６０Ｈｚ、２秒、３００μＡの刺激の間に強力なシグナルが尾状核被殻及び側坐核の双方において記録されるまで刺激電極を下げることによって決定した。参考電極を表層皮質の対側に移植した。セットアップを最適にした後に、電極の位置を記録期間の全体に亘って変化しなかった。刺激電極は、１．０ｍｍ隔てられた０．２ｍｍチップを備えたねじれた双極電極であった。前記電極は、これらのチップ以外に全長に亘って覆われていた。電気刺激はコンピューターによって生じ、ボルタンメトリー測定と同調させた。一定電流、二相方形波パルスを提供した（３００〜４００μＡ及び各相２ｍ秒）。刺激を与える期間は、２秒であり、１０及び６０Ｈｚの周波数を無作為に適用した。ニューロン外ドーパミンはシリンダー炭素繊維微小電極を使用して定量した（曝露した先端：半径＝２．５μｍ、長さ＝５０−１００μｍ）。電気化学はコンピューターで制御し、２つの作用電極のために定電位電解装置を使用した。三角波（−４００から１０００ｍＶ；３００ｖ／秒スキャン速度）を１００ｍ秒ごとに適用した。スキャンの間のバイアス電位は−４００ｍＶであった。全ての電位は、銀／塩化銀電極について言及される。ドーパミンのニューロン外濃度は、連続的なボルタングラムにおけるドーパミンについてのピーク酸化ポテンシャル（典型的には５００〜７００ｍV）における電流から得られ、ｉｎ ｖｉｖｏ実験の後の各作用電極のｉｎ ｖｉｔｒｏ補正に基づいて濃度に変換した。バックグラウンドを差し引いたサイクリックボルタングラムが、ベースラインの記録の間に回収したボルタングラムから刺激の間に回収したボルタングラムを差し引くことによって得た。ポテンシオスタットのアナログ出力をデジタル化して、コンピューターに保存した。
【０１０５】
ボルタンメトリーのサイクリックスキャンは、コカイン注射（４０ｍｇ／ｋｇ ｉｐ）の２０分後及びＲＴＩ−７６（３β−（ｐ−クロロフェニル）トロパン−２β−
カルボン酸ｐ−イソチオシアナトフェニルメチルエステル塩酸；１０μｌ、１００ｎｍｏｌ）の脳室内注射の１又は２日後に実施した。
【０１０６】
結果
灌流によるｉｎ ｖｉｔｒｏにおけるラット線条体切片からの［３Ｈ］ドーパミン放出に対する各種のＤＡＴリガンドの効果
灌流したラット線条体切片からの［３Ｈ］ドーパミン放出に対する各種のＤＡＴリガンドの効果を表４に記載している。競争的ＤＡＴ再取り込み阻害剤であるシブトラミン、その２種の代謝物（ＢＴＳ ５４ ３５４及びＢＴＳ ５４ ５０５）、及びブプロピオンでは、低濃度（１０−７Ｍ）又は高濃度（１０−５Ｍ）のいずれにおいても線条体切片から［３Ｈ］ドーパミンが放出しなかった。対照的に、競争的DAT基質放出剤、すなわち、ｄ−アンフェタミン及びメタンフェタミンは、線状体切片から［３Ｈ］ドーパミンを用量依存的に放出させ、この効果は低濃度及び高濃度の双方において統計的に有意であった。コカイン及びメタンフェニデートのプロフィールは、低濃度（１０−７Ｍ）における線条体切片からの［３Ｈ］ドーパミン流出の刺激を有しないＤＡＴリガンドの他のタイプとは異なるものであったが、高濃度（１０−５Ｍ）では統計的に有意に増大する。
【０１０７】
脳室内ミクロダイアリシスによって測定したラット脳におけるニューロン外ドーパミン濃度に対するシブトラミン、ｄ−アンフェタミン、及びコカインの効果の比較
図８Ａに示すように、ラットに競争的ＤＡＴ阻害剤であるシブトラミンの注射を与えた際には、自由移動ラットの側坐核のドーパミンのニューロン外濃度における遅く漸増的な上昇が生じた。低濃度の当該薬剤では（２．０ｍｇ／ｋｇ ｉｐ）、前記増大は統計的優位性には達しなかった。しかしながら、より高用量では（６．０ｍｇ／ｋｇ ｉｐ）、２３１±８７％という最大の増大が６０分において認められた（Ｐ＜０．００１）。側坐核におけるニューロン外ドーパミンに対する、これらの効果は、薬理学的に同等な量の競争的DAT基質放出剤であるｄ−アンフェタミン（０．５及び１．５ｍｇ／ｋｇ ｉｐ）で認められたものとは非常に異なるものであった。かくして、図８Ｂで示すように、側坐核におけるニューロン外ドーパミン濃度に対するｄ−アンフェタミンの効果は、開始からより速く、４０分に当該薬剤の双方の用量で最大に達した。さらに、０．５ｍｇ／ｋｇの用量で２４２±８９％及び１．５ｍｇ／ｋｇの用量で６０３±３１９％というピーク増加は、早い時点、すなわち、０から４０分及び４０から８０分（Ｐ＜０．０５）においてシブトラミンを用いて観察されたものよりも有意に大きいものであった。図８Ａおよび８Ｂに示す、これらの結果は、競争的ＤＡＴ阻害剤と競争的DAT基質放出剤との間に存在するニューロンドーパミンに対する作用の力の間の差異を明確に示す（Ｒｏｗｌｅｙ ｅｔ ａｌ，２０００）。
【０１０８】
図９に示すデータは、Ｍａｉｓｓｏｎｅｕｖｅ ｅｔ ａｌ（１９９０）によって公開された試験から把握されるように、効果の開始の早さ及び規模の観点からは、競争的DAT基質放出剤、ｄ−アンフェタミン、及びＤＡＴコカイン結合部位リガンドであるコカインの作用の間には差異が比較的小さい。しかしながら、ミクロダイアリシス技術も使用して、Ｗｅｓｔｅｒｉｎｋ ｅｔ ａｌ（１９８７）は、ニューロン外ドーパミン濃度に対するｄ−アンフェタミンなどの競争的DAT基質放出剤の効果が、それらがニューロン発火を停止させるナトリウムチャンネルブロッカーであるテトロドトキシンを透析において含めることによって変化を受けないため、ドーパミン作動性のニューロン発火に依存しないことを示した（図１０Ａ）。対照的に、シナプスドーパミン濃度に対するコカインの強化効果は、透析においてテトロドトキシンを含めることによって妨げられ、その薬理は完全なドーパミン作動性ニューロン発火に完全に依存することを示した（Ｗｅｓｔｅｒｉｎｋ ｅｔ ａｌ，１９８７；図１０Ｂ）。
【０１０９】
高速サイクリックボルタンメトリーによって測定したラット側坐核におけるニューロン外ドーパミン濃度に対するコカイン及びＲＴＩ−７６の効果の比較
ＲＴＩ−７６は、非競争的ＤＡＴ阻害剤であり、図１１に明確に示すように、ラットに投与される際に（１００ｎｍｏｌ ｉｃｖ）、当該化合物は頻度依存的な様式で側坐核におけるドーパミンの細胞外濃度を増大する。その作用メカニズムとしての再取り込み阻害と一致して、ＤＡＴによるドーパミンクリアランス（ピーク後のボルタングラムの勾配によって示される）は明確に遅らされる（Ｗｕ ｅｔ ａｌ，２００１）。
【０１１０】
対照的に、図１２に示すように、側坐核におけるニューロン外ドーパミン濃度に対するコカインの作用は、全ての刺激の度に認められる神経伝達物質のピーク濃度における大きな増大を伴い、非常に異なる；しかしながら、シナプス間隙からのクリアランスの速度、すなわち、ピーク後のボルタングラムの勾配は、対象のものと一般的には平行になっており、コカインが発火依存的な放出を介してシナプスのドーパミン濃度を増大していることを示した。これらのデータは、シナプスからのドーパミンのクリアランスを遅延させる再取り込み阻害剤としてコカインが作用していないことも示す（Ｗｕ ｅｔ ａｌ，２００１）。
【０１１１】
考察
これらのデータを概観すると、コカイン及び他のＤＡＴコカイン結合部位リガンド、例えば、メチルフェニデートの脳内のドーパミン作動性の作用に対する薬理学的作用は、他の薬理学的種類のＤＡＴリガンド、すなわち、競争的ＤＡＴ再取り込み阻害剤、例えば、シブトラミンの代謝物及びブプロピオン、並びに競争的DAT基質放出剤、例えば、ｄ−アンフェタミン、ＭＤＡ、及びＭＤＭＡのものとは異なることが明らかである。かくして、コカイン結合部位逆アゴニストであるコカイン及びメチルフェニデートは、高濃度において前処理したラット線条体切片からの［３Ｈ］ドーパミンの流出を増大するというｉｎ ｖｉｔｒｏにおけるそれらの機能によって競争的ＤＡＴ再取り込み阻害剤から区別されてよい。神経構造を維持しているため、切片を使用した。ある生理学的なニューロン発火は組織調製物内で生じており、ＤＡＴに対するこれらのコカイン結合部位リガンドの発火依存的な効果を生じさせ得るようである。ニューロン外ドーパミン濃度におけるコカインに誘導される増大についての完全なドーパミン作動性ニューロン発火に対する依存は、Ｗｅｓｔｅｒｉｎｋ ｅｔ ａｌ（１９８７；図１０Ｂ）のｉｎ ｖｉｖｏミクロダイアリシス実験によって示されている。同様に、コカイン及びメチルフェニデートは、競争的DAT基質放出剤、例えば、ｄ−アンフェタミン及びメタンフェタミンは前処理したラット線条体切片からの［３Ｈ］ドーパミンの顕著な放出をｉｎ ｖｉｔｒｏで生じさせ、この効果は非常に低い薬剤濃度で現れるため、これらとは区別されてもよい。この観察結果は、ニューロン発火からは独立した放出薬剤のドーパミン放出メカニズムと一致している。この仮説は、透析プローブを介したナトリウムチャンネルブロッカーであるテトロドトキシンの点滴によるドーパミン作動性ニューロン発火の阻害が、これらの放出剤によるシナプスのドーパミン濃度の向上を妨げないことを示す、脳内ミクロダイアリシス実験によってｉｎ ｖｉｖｏで確認されている（Ｗｅｓｔｅｒｉｎｋ ｅｔ ａｌ，１９８７；図１０Ａ）。
【０１１２】
まとめると、これらのｉｎ ｖｉｔｒｏ及びｉｎ ｖｉｖｏの観察結果は、コカイン及びメチルフェニデートが、他のＤＡＴリガンドとは明らかに異なる薬理学的メカニズムを有することを示す。しかしながら、ｖｉｚ Ｗｅｓｔｅｒｉｎｋ ｅｔ ａｌ（１９８７）、Ｍａｉｓｓｏｎｅｕｖｅ ｅｔ ａｌ（１９９０）、Ｈｅａｌ ｅｔ ａｌ（１９８２、１９９６）、又はＲｏｗｌｅｙ ｅｔ ａｌ（２０００）といったこれらの文献の著者の誰もが、コカイン及び関連の化合物がＤＡＴ複合体の逆アゴニストであることを推測しておらず、単に、再取り込み阻害剤又は作用の不特定のメカニズムを有する放出剤のいずれかとして作用することを推定するのみである。
【０１１３】
Ｗｕら（２００１）によるｉｎ ｖｉｖｏにおけるサイクリックボルタンメトリーによる発見の幾つかは本願のサポートに含めるが、前述したように、これらの著者は、コカインを、シブトラミンの代謝産物及びブプロピオンに例示される従来の競争的ＤＡＴ再取り込み阻害剤としてのみ作用するものとして結論付けている。報告では、Ｗｕ ｅｔ ａｌ（２００１）は、コカインはシナプス間隙からのドーパミンのクリアランスに何の作用も有していないことを示した。［Ｅｘ：「当該現象の一つの興味深い結果は、主にドーパミンの再取り込みのＶｍａｘを反映することが過去に示されている（式３参照）（Ｗｉｇｈｔａｍａｎ ｅｔ ａｌ、１９８８）、電気刺激により誘導されるＤＡの細胞外クリアランスの速度が、コカインによって顕著には影響を受けなかったことである。事実、細胞外ＤＡのクリアランスを説明する誘導された反応の一部は、高濃度（＞１μＭ）における薬剤反応前の応答と本質的に平行するものであった」Ｗｕ ｅｔ ａｌ，２００１、６３４０頁、右欄、第三段落、４から６行目及び６３４１ページ、左欄、第一段落、１から４行目］。これらの著者は、他の独特な発見も示した：第一に、シナプスのドーパミン濃度に対するコカインの増強作用がＤＡＴ部位の数と逆に相関した。［Ｅｘ：「その関係は、図８に最も良好に示されており、阻害剤に誘導された細胞外ＤＡレベルにおける増大、及びドーパミン放出のための速度定数である［ＤＡ］ｐ、及びＤＡ再取り込み部位の数に比例するＶｍａｘの間に逆の相関を示す」Ｗｕ ｅｔ ａｌ，２００１、６３４５頁、左欄、第二段落、４から８行目］、第二に、ドーパミン放出に対するコカインの作用とドーパミン再取り込み輸送体部位の阻害を介するその競争的阻害作用との間の不明な相関関係が存在した。［Ｅｘ：「放出に対する薬剤の直接的な作用は動力学的分析によっては示されないため、ＤＡ放出と再取り込み阻害剤との間の観察された相関関係は驚くべきことである（図５）」Ｗｕ ｅｔ ａｌ，２００１、６３４５頁、左欄、第三段落、１から３行目］。それらは矛盾する観察結果であり、Ｗｕ ｅｔ ａｌはコカインが競争的ドーパミン再取り込み輸送体阻害剤であるという前提のために矛盾をとくことができなかった。本願において為された発明は、ＤＡＴのコカイン結合部位は、ドーパミン輸送の速度及び方向の双方を調節する複合体の調節的なアロステリックサブユニットであることを推定したことである。また、ＤＡＴによるドーパミン輸送の正常な方向はシナプス前末端への方向であり、コカインがドーパミン輸送の方向を逆転させる、すなわち内側ではなく神経末端の外側に輸送させる部位において逆アゴニストとして作用することを推定した。したがって、コカインは、完全なニューロン発火、より大きな数のＤＡＴ部位、より大きなコカインのドーパミンの細胞外放出増大効果に依存するメカニズムによって、ＤＡＴ複合体によるドーパミン輸送の方向を逆転させる。コカインは競争的ドーパミン再取り込み阻害剤としてよりもドーパミン放出を増大する逆アゴニストとして作用するため、シナプス間隙からのドーパミンのクリアランスに対する作用は有しない。後のより高いレベルの細胞外ドーパミン放出に関連する高い発火速度では、ＤＡＴ部位におけるコカインの逆アゴニスト作用によるシナプス間隙への輸送に利用されるシナプス前末端内の放出可能なシナプス前プールに貯蔵された神経伝達物質の量は、顕著に低減するであろう。かくして、低い発火速度においてドーパミンの細胞が放出が比較的小さい際は、それが、コカインの逆アゴニスト作用による顕著に増大されるが、より高い発火速度では、エキソサイトーシスに対するシナプスのドーパミン濃度に対するコカインの寄与がより小さい；これは、図１２におけるＷｕ ｅｔ ａｌ（２００１）のデータに正確に示されている。
【０１１４】
まとめると、広範な出典から取り出したこれらの実験結果は、コカイン及び関連のコカイン結合部位リガンドについて、予期されていなかった新規なメカニズムの発見を導いた。本発明及びその発見において使用した実験方法は、ＤＡＴ複合体のコカイン結合部位に結合する他のリガンドのスクリーニング及び薬理学的特性について応用する。そして、本発明は、精神刺激剤乱用と関連する臨床的状態、並びに脳内のドーパミン作動性の作用の不足又は過剰による精神及び神経疾患の治療のための薬剤の発見又は開発のため治療的な応用がされる。
【技術分野】
【０００１】
本発明は、中枢神経系（ＣＮＳ）におけるモノアミン伝達の作用のメカニズム、特に、モノアミン神経伝達の機能不全に関する疾患又は状態を治療するための候補化合物を同定するための方法に関する。
【背景技術】
【０００２】
コカインは、コカシュラブ（ｃｏｃａ ｓｈｕｒｕｂ）（ｅｒｙｔｈｒｏｘｙｌｏｎ ｃｏｃａ）の葉から抽出される強力な精神刺激乱用薬物である。コカインは、経口、吸入、及び焙りを含む様々な手段によって乱用され得る。そして、その乱用は、世界中の多数の先進国及び発展途上国において大きな問題となっている。Ｗｈｉｔｅ Ｈｏｕｓｅ Ｏｆｆｉｃｅ ｏｆ Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｄｒｕｇ Ｃｏｎｔｒｏｌ Ｐｏｌｉｃｙが１９８８から１９９５年の間にアメリカ人は当該精神刺激薬の違法な購入に約３８０億ドルを費やしていると推定しており、その社会的な課題は非常に大きい。この数字は、法的処置、入院、社会的支援、リハビリテーション、及び経済的生産力の低下を含む、コカイン乱用の間接的なコストを考慮に入れておらず、また、コカインの違法な供給及び使用に関連する犯罪活動の社会への危害も考慮に入れていない。
【先行技術文献】
【非特許文献】
【０００３】
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【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００４】
コカインの精神刺激効果は、モノアミン神経伝達物質であるドーパミンの脳内における作用を増大するという機能に由来するものであると解されており、脳の辺縁域におけるその作用は、ヒトにおいて活性化、陶酔、強化、及び報酬特性に関与すると解されている（Ｄｉ Ｃｈｉａｒａ ｅｔ ａｌ．１９９３）。本発明の完成する以前には、コカインは、ドーパミン作動性ニューロンのドーパミン再取り込み輸送体（ＤＡＴ）部位を競争的に阻害し、それによってシナプス間隙の外への及びシナプス前ドーパミン作動性神経末端に戻るドーパミンの輸送を受動的に妨げることによって、中枢神経系のドーパミンの作用を増大するという仮説があった。神経モノアミン再取り込み輸送体（元来は、Ｕｐｔａｋｅ １を称されていた）に対するコカインの作用の態様は、Ｉｖｅｒｓｅｎ（１９３７）によって最初に開示された。しかしながら、この提唱されたメカニズムは、他のドーパミン再取り込み阻害剤、例えば、ブプロピオン及びシブトラミン（その薬理学的に活性な代謝物）が、多くの場合にコカインよりもドーパミン再取り込み阻害剤として強力であるが、ヒトにおいて同様の精神刺激陶酔作用を有しないことを説明するものではない（Ｇｒｉｆｆｉｔｈ ｅｔ ａｌ, １９８３; Ｍｉｌｌｅｒ ＆ Ｇｒｉｆｆｉｔｈ, １９８３; Ｓｃｈｕｈ ｅｔ ａｌ, ２０００）。重要なことに、コカイン依存症及び脱離症状は、その様な薬剤を使用することによっては、成功裡に治療されていない（Ｇｏｒｅｌｉｃｋ ｅｔ ａｌ, ２００４; Ｓｏｆｕｏｇｌｕ ＆ Ｋｏｓｔｅｎ, ２００５）。
【０００５】
ドーパミンの細胞外放出のための生理学的メカニズムは、ドーパミン作動性神経伝達の調節におけるＤＡＴの役割とともに、図１に図示している。ドーパミン作動性のニューロン発火の速度の増大が、ドーパミン含有神経末端からシナプス間隙へのドーパミン作動性の細胞外放出を誘導する。この化学伝達物質は、次いで、そのシグナルを受容（シナプス後）ニューロンにその受容体を介して伝達する。ドーパミン作動性のシグナル伝達を停止するための主要な生理学的メカニズムは、ナトリウム／塩素イオンチャンネルＤＡＴを介した再取り込みの活性化プロセスによる、シナプス間隙からの神経伝達物質の除去である（図２）。図３に示すように、競争的な再取り込み阻害剤、例えば、シブトラミン（その活性代謝物による）及びブプロピオンは、当該プロセスを阻害し、段階的で穏やかな持続するドーパミン濃度の増大をシナプス間隙において生じさせ、それによって、ドーパミン作動性神経伝達を段階的且つ穏やかに増進させる。競争的な再取り込み阻害剤はドーパミン作動性神経伝達に対して直接的な作用を有しておらず、ドーパミンの細胞外放出の作用を促進及び持続するにすぎない。
【０００６】
対照的に、図４で示すように、コカイン及び薬理学的に関連する化合物、例えば、コカイン様精神刺激及び陶酔作用をヒトにおいて引き起こすメチルフェニデート（Ｒｕｓｈ＆Ｂａｋｅｒ，２００１）は、ＤＡＴの別の部位、すなわち「コカイン結合部位」で作用し（Ｅｄｖａｒｄｓｅｎ＆ Ｄａｈｌ，１９９４）、ドーパミン作動性神経伝達を促進する。コカインは当該部位に結合することが長い間知られていたが、単に、これらの輸送体を介するシナプスからのドーパミンのクリアランスを受動的に阻害する競争的ＤＡＴ阻害剤（参考例としては、シブトラミンの代謝物及びブプロピオン）として作用していると広く解されていた。
【０００７】
競争的ＤＡＴ基質放出剤、例えば、ｄ−アンフェタミン、メタンフェタミン、メチルアンフェタミン、メチレンジオキシアンフェタミン（ＭＤＡ）、及びメチレンジオキシメタンフェタミン（ＭＤＭＡ）は全て、中枢神経系におけるドーパミン作動性神経伝達物質の強力な刺激因子である（表１）。これらの分子は、サイズ及び三次元構造においてドーパミンと類似している。図５に示すように、これらの放出剤は、ドーパミン含有末端に当該放出剤を送り込むＤＡＴ複合体の競争的な基質である。シナプス前末端の内部に入ると、それらは、「放出可能な」（新規に合成された）小胞貯蔵プールからドーパミンを移動させ、神経伝達物質をシナプス間隙に移動させることによって強制的に放出させる。前記放出剤はＤＡＴ複合体の基質であるため、それらは、シナプス前神経末端への輸送についてドーパミンと競争することによって、シナプス間隙からのドーパミンのクリアランスも遅延させる。競争的ＤＡＴ基質放出剤は、神経末端の内部から薬理学的作用を生じ、加えて、ドーパミン作動性神経伝達に対するそれらの作用はニューロン発火から独立したものである。
【０００８】
これらの各種のＤＡＴリガンドの薬理学的特性の類似点及び主要な相違点のまとめを表２に示す。
【０００９】
このような背景において、本発明者は驚くべきことに、コカインが、従来の競争的ドーパミン再取り込み阻害剤ではなく、むしろＤＡＴ複合体における「コカイン結合部位」における逆アゴニストとして作用することを発見した。ドーパミンをドーパミン作動性神経末端から送り出すようにドーパミンの輸送体を逆行させる、この更により強力で動的な薬理学的メカニズムによって、コカイン及び関連する薬剤が重大な精神刺激剤の乱用傾向を生じさせる理由が説明される。
【００１０】
用語「逆アゴニスト」は、Ｐｏｌｃ ｅｔ ａｌ（１９８２）において新しい種類のベンゾジアゼピンリガンド、例えば、ＦＧ−７１４２の作用を説明するために初めて使用された。ベンゾジアゼピンアゴニストは、γ−アミノ酪酸（ＧＡＢＡ）Ａタイプ塩素イオンチャンネル受容体上の調節部位に結合し、神経細胞へのＣｌ−イオン流動を増大させることが知られており、この作用によって抗痙攣剤及び抗不安剤であることが知られている。それらの作用は、アンタゴニスト、例えば、それ自体ではＣｌ−イオン流動に対して作用を有さず、そのため薬理学的には「サイレント」であると説明されるＲｏ １５−１７８８によって阻害されうる。一方で、ＦＧ−７１４２などのリガンドの作用は、ベンゾジアゼピンアゴニストの作用に逆行するものであることが観察された。かくして、それらは、ニューロンへのＣｌ−イオン流動を低減し、抗痙攣剤であり、且つ、深刻に不安を惹起するものであった。それらの作用は、ベンゾジアゼピンアゴニストの逆の作用であったため、それらは必然的に「逆アゴニスト」と称された。現在では、Ｇタンパク質共役型受容体を含む多数の他の受容体系について逆アゴニストが知られている。しかしながら、本発明は、輸送体の「逆アゴニスト」を初めて開示するものである。本願では、前記輸送体は、脳のドーパミン含有ニューロンに存在し、ドーパミン作動性神経伝達の調節において重要な役割を担うナトリウム／塩素イオンＤＡＴである。
【００１１】
本明細書に提示する証拠は、ＤＡＴ上の「コカイン結合部位」が当該輸送体上のアロステリックな調節部位であり、そして、コカイン及び関連の化合物が、神経末端からシナプス間隙へのドーパミン分子の輸送を生じさせる逆アゴニストとして作用することを示す。この動的なメカニズムによって、コカインは、脳においてドーパミン作動性神経伝達を顕著に増大する。コカイン及び関連の化合物の当該作用はドーパミン作動性神経末端の外側で作用し、完全なドーパミン作動性神経発火に依存する。
【００１２】
このことは、コカイン及び関連する「コカイン結合部位」リガンドの作用の薬理学的メカニズムの驚くべき特徴であり、コカインが、ドーパミン再取り込み輸送体（ＤＡＴ）において逆アゴニストとして作用することによって、その神経刺激作用及び陶酔作用を生じさせることを示す。
【００１３】
大半の研究はＤＡＴに対するコカインの作用に集中しているが、膜貫通輸送体のモノアミンファミリーは、セロトニン（ＳＥＲＴ）及びノルエピネフリン（ＮＥＴ）輸送体も含む（Ａｍａｒａ ａｎｄ Ａｒｒｉｚａ，１９９３）。これら３つの分子は全て、高いアミノ酸相同性を共有するＮａ＋／Ｃｌ−依存性モノアミン再取り込み部位である（Ｂｌａｋｅｌｙ ｅｔ ａｌ, １９９１; Ｇｉｒｏｓ ｅｔ ａｌ, １９９１, １９９２; Ｐａｃｈｏｌｃｚｙｋ ｅｔ ａｌ, １９９１; Ｒａｍａｍｏｏｒｔｈｙ ｅｔ ａｌ, １９９３）。コカインは、ＤＡＴ、ＮＥＴ、及びＳＥＲＴと高い親和性で結合し得る（Ｈｙｔｔｅｌ, １９８２; Ｒｉｃｈｅｌｓｏｎ ＆ Ｐｆｅｎｎｉｎｇ, １９８４;表３参照のこと）。
【００１４】
本発明及びその完成に使用した実験方法は、他のコカイン結合部位リガンド、すなわち、逆アゴニスト、部分的逆アゴニスト、アゴニスト、部分アゴニスト、及びアンタゴニストのコカイン過量摂取、コカイン渇望、コカイン中毒、並びにコカイン乱用からの離脱により生じる身体的及び精神的な症状の治療のための新規薬剤としてのスクリーニング及び薬理学的な特性決定のための方法として応用される（図７）。さらに、本発明は、新規のコカイン結合部位リガンド、すなわち、逆アゴニスト、部分逆アゴニスト、アゴニスト、部分アゴニスト、及びアンタゴニストの精神刺激剤の乱用に関連する臨床疾患、並びに脳におけるドーパミン作動性の作用の欠陥又は過剰による精神及び神経の疾患及び状態の治療のための薬剤としての開発につながる治療的応用も可能である（図７）。
【００１５】
本発明は、アンフェタミン、メタンフェタミン、ＭＤＡ、及びＭＤＭＡ、並びにそれらの異性体及び同族体を含むが、それらに限らない他の精神刺激剤の中毒によって生じる過剰摂取、渇望、中毒、及び離脱症状の治療のための新規薬剤の発見及び開発にも応用可能である。本発明の更なる利点は、脳におけるドーパミン作動性神経伝達を、双方向、すなわち上方及び下方の双方に、薬理学的に操作するが、依然としてドーパミン作動性ニューロン発火の生理学的な速度を保持するための方法を提供することである。この手法は、ドーパミン作動性神経伝達の不足又は過剰のいずれかに由来する精神及び神経の疾患を治療するための新規薬剤の開発に応用可能である。ドーパミン作動性神経伝達における不足に由来する状態の例は、注意欠陥過活動性障害（ＡＤＨＤ）及び関連する認知、衝動性、注意、及び攻撃性に関連するＣＮＳ疾患、ナルコレプシー、及びパーキンソン病を含むが、それらに限らない。ドーパミン作動性神経伝達の過剰に由来する状態の例は、統合失調症、統合失調感情障害、及び関連の精神病を含むが、それらに限らない。
【課題を解決するための手段】
【００１６】
したがって、本発明の第一の態様は、
ａ）試験しようとする化合物を準備する工程；
ｂ）モノアミン再取り込み輸送体のコカイン結合部位に結合する化合物の能力を試験する工程；及び
ｃ）モノアミン再取り込み輸送体を介してモノアミン神経伝達物質の内側又は外側への輸送を調節する化合物の能力を試験する工程
を含む、中枢神経系におけるモノアミン神経伝達の機能不全に関連する疾患又は状態を治療するための候補化合物を同定するための方法であって、
前記化合物がモノアミン再取り込み輸送体のコカイン結合部位に結合し、且つ、その活性を調節することが可能である場合に、モノアミン神経伝達の機能不全に関連する疾患又は状態を治療するための候補化合物として同定される、方法を提供する。
【００１７】
かくして、本発明の第一の態様の方法の工程（ｃ）は、特にモノアミン神経伝達物質の内側又は外側への輸送を試験することによって、モノアミン再取り込み輸送体の活性を試験する工程を含む。
【００１８】
１つの実施態様では、工程（ｃ）は、モノアミン再取り込み輸送体のコカイン結合部位の活性を調節する化合物の能力を試験する工程を含む。かくして、工程（ｃ）は、モノアミン再取り込み輸送体に対するコカインの作用を調節する化合物の能力を試験する工程を含んでよい。
【００１９】
したがって、本発明は、ＤＡＴ複合体のコカイン結合部位の逆アゴニスト、部分的逆アゴニスト、アンタゴニスト、部的アゴニスト、及び完全なアゴニストである新規薬剤の同定及び薬理学的な分類のためのスクリーニング戦略を提供する（図６、表４及び５）。
【００２０】
表２に詳細に開示しているように、ＤＡＴ複合体のコカイン結合部位のリガンドは、競争的ＤＡＴ再取り込み阻害剤及び競争的DAT基質放出剤の双方とは区別される特有の薬理学的特性を有する。コカインがＤＡＴ複合体の逆アゴニストであるという予測し得なかった発見に鑑みると、そのナトリウム／塩素依存輸送体に対する動的作用の結果として、化合物が、逆アゴニスト（ＤＡＴ輸送体の方向を逆転する）からサイレントアンタゴニスト（ＤＡＴ輸送体の作用に対して薬理学的作用を有しない）、完全なアゴニスト（シナプス間隙からのドーパミンのクリアランスの速度を顕著に増大する）まで広範な薬理学的作用を示し得ることは明らかである。しかしながら、本発明で示すように、コカイン結合部位における薬剤の作用は、ドーパミン作動性ニューロンのニューロン発火の生理学的な速度に依存するものである。したがって、従来の機能スクリーニング技術、例えば、［３Ｈ］ドーパミンのシナプトソームへの取り込みの阻害は、これらの動的特性を有する分子の検出及び薬理学的な特性決定に利用し得ない。なぜならば、シナプトソーム及び細胞株調製物において、ＤＡＴ複合体に対するコカイン結合部位リガンドの動的特性に必須である、完全な神経構造及び生理学的なドーパミン作動性神経発火が存在しないからである。後述の実施例において説明するように、意識があるか又は麻酔したラットにおける大脳内マイクロダイアリシス並びにボルタンメトリー及び電気刺激ニューロン高速サイクリックボルタンメトリーｉｎ ｖｉｖｏ技術が、コカイン結合部位がＤＡＴ複合体のアロステリックな調節サブユニットであり、コカインが当該部位に結合すると、逆アゴニストとして作用してドーパミン輸送の正常な方向を逆転させるという予期しなかった発見を導いた。当該相互作用の動的性質及びその完全なドーパミン作動性ニューロン発火への依存性のために、その様な実験技術が、全てのコカイン結合部位リガンドの発見及び薬理学的特性決定を実施するには必要である。図６は、従来のスクリーニングアッセイ、例えば、放射リガンド受容体結合が、現在、ＤＡＴ複合体を安定に発現する組織及び細胞株におけるコカイン結合部位異のリガンドの親和性を規定するためにどのように利用されているかを示す。しかしながら、その様な技術は、問題の化合物、例えば、逆アゴニスト、部分的逆アゴニスト、アンタゴニスト、部分的アゴニスト、又はアゴニストの機能を規定することはない。表４及び５に説明しているように、この目的は、上述のｉｎ ｖｉｖｏ技術を利用することによって達成することが可能であり、新規なコカイン結合部位リガンドの薬理学的特性を規定する関連の結果がそこで規定される。
【００２１】
好ましくは、本発明は、前記モノアミン再取り込み輸送体が、ドーパミン、ノルアドレナリン、及び／又はセロトニン（５−ＨＴ）の再取り込み輸送体からなる群から選択される、方法を提供する。
【００２２】
かくして、１つの実施態様では、モノアミン再取り込み輸送体はドーパミン再取り込み輸送体である。
【００２３】
例えば、本発明は、前記疾患又は状態が、中枢神経系におけるドーパミン神経伝達の欠陥に関連し、特に前記疾患又は状態が、パーキンソン病、ナルコレプシー、注意欠陥過活動性障害（ＡＨＤＨ）、境界性人格障害、間欠性爆発性障害、反社会的人格障害、薬物乱用、窃盗癖、及び放火狂を含むか又はそれらからなる群から選択される、方法を提供してよい。
【００２４】
代替的には、前記疾患又は状態は、中枢神経系におけるドーパミン神経伝達の過剰と関連してよく、例えば、統合失調症、統合失調感情障害、統合失調症様障害、薬物乱用誘導精神病性障害、妄想性障害、鬱病、及び共有精神病性障害を含むか又はからなる群から選択される疾患又は状態である。
【００２５】
更なる実施態様では、モノアミン再取り込み輸送体は、ノルアドレナリン再取り込み輸送体である。
【００２６】
例えば、本発明は、前記疾患又は状態が中枢神経系におけるノルアドレナリン神経伝達の欠陥に関連し、例えば、疾患又は状態が衝動性、注意、及び攻撃性の疾患、例えば、注意欠陥過活動性障害（ＡＤＨＤ）、境界性人格障害、間欠性爆発性障害、反社会的人格障害、薬物乱用、窃盗癖、放火狂、及び鬱病を含むか又はそれらからなる群から選択される、方法を提供してよい。
【００２７】
代替的には、前記疾患又は状態は、中枢神経系におけるノルアドレナリン神経伝達の過剰に関連してよく、例えば、疾患又は状態が、パニック発作、心的外傷後ストレス障害、不安神経症、恐怖症、強迫性障害を含むか又はそれらからなる群から選択されてよい。
【００２８】
さらなる実施態様では、モノアミン再取り込み輸送体が、セロトニン再取り込み輸送体である。
【００２９】
例えば、本発明は、前記疾患又は状態が、中枢神経系におけるセロトニン神経伝達の欠陥に関連し、例えば、衝動性、注意、及び／又は攻撃性の疾患、例えば、境界性人格障害、間欠性爆発性障害、反社会的人格障害、薬物乱用、窃盗癖、放火狂、摂食障害（過食症、多食症、拒食症）、不安神経症、恐怖症、強迫性障害、及び鬱病を含むか又はそれらからなる群から選択される、方法を提供してよい。
【００３０】
代替的には、本発明は、前記疾患又は状態が、中枢神経系におけるセロトニン神経伝達の過剰に関連し、例えば偏頭痛である、方法を提供する。
【００３１】
本発明の好ましい実施態様では、工程（ｂ）は、適当な放射性リガンド、例えば、［３Ｈ］ＷＩＮ３５，４２８（例えば、Ａｌｏｙｏ ｅｔ ａｌ，１９９５；Ｃｈｅｎ ｅｔ ａｌ，１９９６；Ｋａｔｚ ｅｔ ａｌ，２０００）を使用するｉｎ ｖｉｔｒｏ受容体結合によって実施され、及び工程（ｃ）は組織切片、細胞、又はシナプトソームを使用するｉｎ ｖｉｔｒｏ神経伝達物質の放出又は再取り込み（例えば、ｄｅ Ｌａｎｇｅｎ ＆ Ｍｕｌｄｅｒ, １９８０; Ｐｒｉｓｔｕｐａ ｅｔ ａｌ, １９９４; Ｐｉｆｌ ｅｔ ａｌ, １９９５; Ｈｅａｌ ｅｔ ａｌ, １９９６; Ｓｅｒｓｈｅｎ ｅｔ ａｌ, １９９６; Ｒｏｗｌｅｙ ｅｔ ａｌ, ２０００）、ｉｎ ｖｉｔｒｏ電気生理学（例えば、Ｊｏｎｅｓ ｅｔ ａｌ, １９９６; Ｃｒａｇｇ ｅｔ ａｌ, ２０００）、ｉｎ ｖｉｖｏマイクロダイアリシス（例えば、Ｒｏｗｌｅｙ ｅｔ ａｌ, ２０００）、ｉｎ ｖｉｖｏボルタンメトリー（例えば、Ｗｕ ｅｔ ａｌ, ２００１）、ｉｎ ｖｉｔｒｏバイオセンサー又はｉｎ ｖｉｖｏ移植バイオセンサー（例えば、Ｃｒｅｓｐｉ ｅｔ ａｌ １９９０; Ａｌｌｅｎ １９９７）によって実施されてよい。
【００３２】
本発明の方法の工程（ｃ）は、モノアミン再取り込み輸送体の活性を受動的及び／又は積極的に調節する化合物の能力を試験する工程を含んでよいと当業者に解されるであろう。
【００３３】
１つの実施態様では、本発明は、モノアミン再取り込み輸送体（及び／又はそのコカイン結合部位）の活性を受動的に調節する化合物の能力を試験する工程を含む、方法を提供する。
【００３４】
例えば、工程（ｃ）は、モノアミン再取り込み輸送体（及び／又はそのコカイン結合部位）のアンタゴニストとして作用する化合物の能力を試験する工程を含んでよい。
【００３５】
更なる実施態様では、本発明は、工程（ｃ）がモノアミン再取り込み輸送体（及び／又はそのコカイン結合部位）を積極的に調節する化合物の能力を試験する工程を含む、方法を提供する。
【００３６】
例えば、工程（ｃ）は、モノアミン再取り込み輸送体の逆アゴニスト（完全又は部分的のいずれか）として作用する化合物の能力を試験する工程を含んでよい。モノアミン再取り込み輸送体阻害剤のコカイン結合部位において、その様な逆アゴニストは以下：
（ｉ）前記化合物はモノアミンの神経細胞発火依存性の放出を誘導及び／又は増大し得る；
（ｉｉ）前記化合物は前記モノアミンの再取り込み速度に対する作用を有しない
という特性によって特徴付けられてよい。
【００３７】
細胞発火依存性のモノアミンの放出は、モノアミン流出のｉｎ ｖｉｖｏマイクロダイアリシス測定によって測定されてよい。例えば、細胞発火は、テトロドトキシン又はＥＧＴＡを用いたマイクロダイアリシスプローブのかん流によって阻害されてよい。
【００３８】
モノアミンの再取り込み速度は、シナプトソームへの標識モノアミン輸送の測定によって測定されてよい。
【００３９】
代替的に又は加えて、工程（ｃ）は、モノアミン再取り込み輸送体のアゴニスト（完全又は部分的のいずれか）として作用する化合物の能力を試験する工程を含んでよい。
【００４０】
代替的に又は加えて、工程（ｃ）は、モノアミン再取り込み輸送体（及び／又はそのコカイン結合部位）のアゴニスト又は逆アゴニストの作用をアンタゴナイズする化合物の能力を試験する工程を含んでよい。
【００４１】
工程（ｃ）はｉｎ ｖｉｔｒｏ及び／又はｉｎ ｖｉｖｏのモノアミン再取り込み輸送体の活性を調節する化合物の能力を試験する工程を含むか又は当該工程からなってよいと、当業者に解されるであろう。
【００４２】
好ましい実施態様では、工程（ｃ）は、モノアミン再取り込み輸送体のコカイン結合部位において作用する化合物の能力を試験する工程を含むか又は当該工程からなる。例えば、工程（ｃ）は、ドーパミン再取り込み輸送体のコカイン結合部位においてアゴニスト（完全又は部分的）として作用する化合物の能力を試験する工程を含むか又は当該工程からなってよい。
【００４３】
ドーパミンの神経外濃度に対する薬剤の作用（当該神経伝達物質のシナプス濃度に対するそれらの作用の代わり）が、例えば、灌流による前処置した脳切片からの［３Ｈ］ドーパミンのｉｎ ｖｉｔｒｏ放出、高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）及び電気化学的な検出手段と組み合わせた脳内マイクロダイアリシスによる自由行動ラットの脳における神経外ドーパミン濃度の測定、又はｉｎ ｖｉｖｏ脳内高速サイクリックボルタンメトリーを含む各種のｉｎ ｖｉｔｒｏ及びｉｎ ｖｉｖｏ技術を使用して評価されてよい。当該技術の組み合わせによって得られたデータによって、コカイン及び関連の化合物が、競争的ＤＡＴ再取り込み阻害剤（参考例としては、シブトラミン（その活性代謝物を介して）及びブプロピオン）又は競争的基質放出剤（参考例としては、アンフェタミン及びメタンフェタミン）のいずれかとして作用せず、むしろ、それらは、ＤＡＴ複合体のアロステリックな調節部位において逆アゴニスト作用に相当する特有の薬理学的作用態様を有し、前記部位がコカイン結合部位である。かくして、まとめると、高濃度においてコカインは［３Ｈ］ドーパミンを前処理した脳切片から放出させ、且つ、ｉｎ ｖｉｖｏで脳内マイクロダイアリシスによって測定されるように、コカインは開始してから非常に急速且つ比較的短い期間で細胞外ドーパミン濃度を非常に大きな増大を引き起こすため、コカインは競争的ＤＡＴ再取り込み阻害剤とは異なる。双方の種類の化合物が、脳内マイクロダイアリシス実験によって示されるように、神経外ドーパミン濃度における非常に大きな増大を引き起こしたが、コカインの作用はドーパミン作動性ニューロン発火に依存し、競争的な基質放出剤のものはそれに依存しないため、コカインは競争的基質放出剤とは薬理学的に異なる。そして、ｉｎ ｖｉｖｏボルタンメトリー実験は、コカインが電気刺激によって引き起こされるドーパミン放出速度並びに放出される神経伝達物質の最大量を増大させるが、当該薬剤はシナプス間隙からのドーパミンクリアランスの速度を遅延させないことを示す。本願の独創的な工程は、コカイン結合部位は単にコカインが結合してドーパミンの取り込みを受動的に阻害するＤＡＴ複合体の位置ではなく、むしろ当該部位はドーパミン作動性ニューロンの内又は外へのドーパミン輸送の速度及び方向を調節するアロステリックな調節部位であるという当該２つの観察結果から推定される。さらに、本明細書では、コカインがＤＡＴのコカイン結合部位において逆アゴニストとして作用し、発火によって引き起こされるドーパミン流出を促進することを示す。コカイン結合部位への結合によって、コカインが再取り込み阻害剤として作用するのであれば、当該神経伝達物質のクリアランス速度を遅延させるであろうが、データはそうではないことを示している。
【００４４】
典型的には、工程（ｃ）は、
（Ａ）灌流による、モノアミン再取り込み輸送体部位を含有する組織切片、細胞（又はその細胞亜分画）からの自発的なモノアミンの放出のｉｎ ｖｉｔｒｏにおける測定（例えば、ｄｅ Ｌａｎｇｅｎ ＆ Ｍｕｌｄｅｒ, １９８０; Ｐｒｉｓｔｕｐａ ｅｔ ａｌ, １９９４; Ｐｉｆｌ ｅｔ ａｌ, １９９５; Ｈｅａｌ ｅｔ ａｌ, １９９６）；
（Ｂ）灌流による、モノアミン再取り込み輸送体部位を含有する組織切片、細胞（又は細胞亜画分）からのモノアミン再取り込みのｉｎ ｖｉｔｒｏにおける測定（例えば、ｄｅ Ｌａｎｇｅｎ ＆ Ｍｕｌｄｅｒ, １９８０; Ｐｒｉｓｔｕｐａ ｅｔ ａｌ, １９９４; Ｐｉｆｌ ｅｔ ａｌ, １９９５; Ｈｅａｌ ｅｔ ａｌ, １９９６）；
（Ｃ）灌流による、モノアミン再取り込み輸送体部位を含有する組織切片、細胞（又は細胞亜画分）の電気誘発放出のｉｎ ｖｉｔｒｏにおける測定；
（Ｄ）電気生理学的技術による、モノアミン再取り込み輸送体部位を含有する組織切片、細胞（又は細胞亜画分）からの自発的及び／又は電気誘発モノアミン流出のｉｎ ｖｉｔｒｏにおける測定（例えば、Ｊｏｎｅｓ ｅｔ ａｌ, １９９６; Ｃｒａｇｇ ｅｔ ａｌ, ２０００）；
（Ｅ）１つ又は複数のバイオセンサーを使用する、自発的及び／又は電気誘発モノアミン誘発のｉｎ ｖｉｔｒｏ及び／又はｉｎ ｖｉｖｏの測定（Ｃｒｅｓｐｉ ｅｔ ａｌ １９９０; Ａｌｌｅｎ １９９７）；
（Ｆ）動物におけるマイクロダイアリシスによる、細胞発火依存的及び細胞発火非依存的なモノアミン流出のｉｎ ｖｉｖｏ測定（Ｒｏｗｌｅｙ ｅｔ ａｌ, ２０００）；
（Ｇ）ボルタンメトリー技術による、動物における自発的及び／又は電気誘発モノアミン流出のｉｎ ｖｉｖｏにおける測定（Ｗｕ ｅｔ ａｌ，２００１）
を含むが、それらに限らない技術の一つ又は複数を使用して、モノアミン再取り込み輸送体の活性を調節する化合物の能力を試験する工程を含む。
【００４５】
好ましい実施態様では、（Ａ）、（Ｂ）、及び（Ｃ）は、標識モノアミンの放出のｉｎ ｖｉｔｒｏにおける測定を含む。
【００４６】
さらに好ましい実施態様では、（Ｅ）のバイオセンサーが、例えば、酵素、抗体、及び／又は神経伝達物質受容体によって被覆される。
【００４７】
本発明の方法は、以下：
Ａのみ、Ｂのみ、Ｃのみ、Ｄのみ、Ｅのみ、Ｆのみ、Ｇのみ、Ａ+Ｂ、Ａ+Ｃ、Ａ+Ｄ、Ａ+Ｂ+Ｃ、Ａ+Ｂ+Ｃ+Ｄ、Ａ+Ｂ+Ｄ、Ｂ+Ｃ、Ｂ+Ｄ、Ｃ+Ｂ、Ｃ+Ｄ、Ａ+Ｃ+Ｅ (ｉｎ ｖｉｔｒｏ)、Ａ+Ｃ+Ｅ (ｉｎ ｖｉｖｏ)、Ａ+Ｃ+Ｆ、Ａ+Ｃ+Ｇ、Ａ+Ｂ+Ｃ+Ｅ (ｉｎ ｖｉｔｒｏ)、Ａ+Ｂ+Ｃ+Ｅ (ｉｎ ｖｉｖｏ)、Ａ+Ｂ+Ｃ+Ｆ、Ａ+Ｂ+Ｃ+Ｇ、Ａ+Ｄ+Ｅ (ｉｎ ｖｉｔｒｏ)、Ａ+Ｄ+Ｅ (ｉｎ ｖｉｖｏ)、Ａ+Ｄ+Ｆ、Ａ+Ｄ+Ｇ、Ａ+Ｂ+Ｄ+Ｅ (ｉｎ ｖｉｔｒｏ)、Ａ+Ｂ+Ｄ+Ｅ (ｉｎ ｖｉｖｏ)、Ａ+Ｂ+Ｄ+Ｆ、Ａ+Ｂ+Ｄ+Ｇ
の技術手段／組み合わせの一つ又は複数を含んでよいと、当業者に解されるであろう。
【００４８】
更に、モノアミン再取り込み輸送体部位を含有する任意の組織、細胞、又は細胞亜画分が、本発明の方法において使用され得ると解されるであろう。例えば、モノアミン再取り込み輸送体部位を含有する細胞は、脳切片（例えば、大脳基底核領域）などの組織切片に存在するか又は由来するものであってよい。
【００４９】
好ましくは、本発明は、前記組織切片が脳、例えば、脳のドーパミン作動性領域に由来する、方法を提供する。
【００５０】
モノアミン再取り込み輸送体部位を含有する細胞は、培養物中で維持されてもよい。かくして、前記細胞は、初代細胞又はモノアミン再取り込み輸送体を発現するように遺伝子操作した不死化細胞（すなわち、細胞株）からなる群から選択されてよい。細胞を遺伝子操作する適切な方法は、Ｓａｍｂｒｏｏｋ ＆ Ｒｕｓｓｅｌｌ，２００１，Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ，Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｐｒｅｓｓに開示されている。
【００５１】
１つの実施態様では、モノアミン再取り込み輸送体部位を含有する細胞は血液細胞である。
【００５２】
代替的には、モノアミン再取り込み輸送体部位を含有する細胞は、腎臓血管に存在するか又は由来するものである。
【００５３】
代替的には、モノアミン放出又は取り込みが、シナプトソームなどの細胞亜分画において測定されてよい。
【００５４】
モノアミン再取り込み輸送体部位を含有する細胞は、任意の適切な供給源、例えば、ヒト又は非ヒト（例えば、マウス又はラットなどのげっ歯類）に由来するものであってよい。
【００５５】
モノアミン再取り込み輸送体の機能のｉｎ ｖｉｖｏにおける評価を含む本発明の方法では、その様な測定は、好ましくは、脳において実施される。例えば、ｉｎ ｖｉｖｏにおける測定が、モノアミン再取り込み輸送体を含有する細胞が豊富な脳の領域において実施される。典型的には、モノアミン再取り込み輸送体の機能は、脳のドーパミン作動領域（例えば、大脳基底核）においてｉｎ ｖｉｖｏで測定される。
【００５６】
好ましくは、ｉｎ ｖｉｖｏ測定は、ヒト又は非ヒトの種（例えば、マウス又はラットなどのげっ歯類）において実施されてよい。
【００５７】
モノアミンの放出及び再取り込みを検出するための適切な技術は当該技術分野において既知である。好ましくは、放射リガンド計数、オートラジオグラフィー、ＨＰＬＣ（たとえば、蛍光検出、電気検出、質量分析検出を組み合わせる）、免疫アッセイ、蛍光検出、電気検出、質量分析検出、及び酵素アッセイが、本発明の方法において使用されてよいであろう。
【００５８】
１つの実施態様では、本発明の工程（ｃ）は、モノアミン再取り込み輸送体の活性を調節する異なる用量の試験化合物の能力を試験する工程を含む。例えば、灌流による組織からのモノアミンの放出のｉｎ ｖｉｔｒｏにおける測定は、高用量の試験化合物（例えば、１０−５Ｍ）及び低用量の試験化合物（例えば、１０−７Ｍ）を使用して実施してよい。
【００５９】
本発明の方法が、悪性又は望ましくない特性、例えば、毒性及び／又は乱用の可能性について試験化合物をカウンタースクリーニングする工程を更に含むことが好ましい。
【００６０】
有利には、本発明の方法が、中枢神経系におけるモノアミン神経伝達の機能不全に関連する疾患又は状態を治療するための候補化合物として同定された化合物を医薬組成物に製剤化する工程（ｄ）を更に含む。
【００６１】
更なる態様では、本発明は、本発明の方法に係る方法によって同定された化合物を提供する。
【００６２】
例えば、前記化合物は、モノアミン再取り込み輸送体のコカイン結合部位の完全又は部分的逆アゴニストであってよい。代替的には、前記化合物は、モノアミン再取り込み輸送体のコカイン結合部位の完全又は部分的アゴニストであってよい。さらなる実施態様では、前記化合物は、モノアミン再取り込み輸送体のコカイン結合部位の逆アゴニストとして作用するリガンド（例えば、コカイン）のアンタゴニストである。
【００６３】
更なる実施態様では、本発明は、本発明に係る化合物及び製薬学的に許容される担体又は賦形剤を含む医薬組成物を提供する。
【００６４】
本発明の化合物、医薬、及び医薬組成物は、注射可能な持続放出薬剤送達系を使用して送達されてよい。これらは、注射の頻度を低減するために特に設計されている。その様な系の例は、注射されると持続的な期間に亘ってゆっくりとｒｈＧＨを放出する、生分解性マイクロスフェアにヒト成長ホルモン（ｒｈＧＨ）をカプセル化したＮｕｔｒｏｐｉｎ Ｄｅｐｏｔである。
【００６５】
本発明の化合物、医薬、及び医薬組成物の送達の代替的な方法は、熱感受性のＲｅＧｅｌ注射システムである。体温未満では、ＲｅＧｅｌは注射液体であるが、体温において既知の安全な生分解性ポリマーにゆっくりと侵食及び溶解されるゲルリザーバーを形成する。有効成分は、バイオポリマーの溶解に応じて経時的に送達される。
【００６６】
好ましくは、本発明の医薬及び／又は医薬組成物は、有効成分の一日の用量若しくは単位、一日の用量以下、又はその適当な一部を含有する単位用量である。
【００６７】
本発明の化合物、医薬、及び医薬組成物は、通常、製薬学的に許容される剤形において、任意に非毒性有機又は無機酸又は塩基の付加塩の形態である有効成分を含む医薬組成物の形態において、経口又は任意の非経口経路によって投与されるであろう。治療しようとする疾患及び患者並びに投与経路に依存して、前記組成物は各種の用量で投与されてよい。
【００６８】
ヒトの治療において、本発明の化合物、医薬、及び医薬組成物は単独で投与されてよいが、意図する投与経路及び標準の製薬学的な慣例の点から選択される適切な製薬学的に許容される賦形剤、希釈剤、又は担体との混合物において一般的には投与される。
【００６９】
例えば、本発明の化合物、医薬、及び医薬組成物は、即時放出、遅延放出、又は制御放出用途のために、香味剤又は着色剤を含有してよい錠剤、カプセル剤、胚珠剤、エリクシル剤、液剤、又は懸濁剤の形態で、経口、経頬、又は舌下に投与されてよい。本発明の化合物、医薬、及び医薬組成物は、海綿体内注射により投与されてもよい。
【００７０】
その様な錠剤は、ミクロクリスタリンセルロース、ラクトース、クエン酸ナトリウム、炭酸カルシウム、リン酸二塩基カルシウム、及びグリシンなどの賦形剤、デンプン（好ましくは、コーン、ポテト、又はタピオカデンプン）、ナトリウムデンプングリコレート、クロスカルメロースデンプン、及びある複合シリケートなどの崩壊剤、ポリビニルピロリドン、ヒドロキシプロピルメチルセルロース（ＨＰＭＣ）、ヒドロキシプロピルセルロース（ＨＰＣ）、スクロース、ゼラチン、及びアカシアなどの造粒バインダーを含有してよい。加えて、ステアリン酸マグネシウム、ステアリン酸、ベヘン酸グリセリル、及びタルクなどの潤滑剤が含まれてよい。
【００７１】
類似のタイプの固体組成物が、ゼラチンカプセルにおいてフィラーとして使用されてよい。この点において好ましい賦形剤はラクトース、デンプン、セルロース、乳糖、又は高分子ポリエチレングリコールを含む。水性懸濁剤及び／又はエリクシル剤としては、本発明の化合物は、各種の甘味剤若しくは香味剤、着色剤若しくは染料、乳化及び／若しくは懸濁剤、並びに希釈剤、例えば、水、エタノール、プロピレングリコール、及びグリセリン、並びにそれらの組み合わせと組み合わせてよい。
【００７２】
本発明の化合物、医薬、及び医薬組成物は、非経口、例えば、静脈内、動脈内、腹腔内、鞘内、気管内、心室内、胸骨内、頭蓋内、筋肉内、又は皮下に投与してもよく、又はそれらは点滴技術によって投与されてよい。最良には、それらは、他の物質、例えば、血液と等張の溶液を作製するのに十分な塩又はグルコースを含有してよい、滅菌水溶液の形態で使用される。前記水溶液は、必要であれば、適切に緩衝化（好ましくは３から９のｐＨ）されるべきである。滅菌条件下における適切な非経口製剤の調製は、当業者によく知られた標準的な製剤技術によって容易に達成される。
【００７３】
非経口投与に適切な医薬及び医薬組成物は、抗酸化剤、緩衝剤、静菌剤、及び溶液を意図する受容者の血液と等張にする溶質を含んでよい水性及び非水性滅菌注射溶液、並びに懸濁剤及び増粘剤を含む。前記医薬及び組成物は、単位用量又は複数用量の容器、例えば、密封アンプル及びバイアルにおいて提供されてよく、使用の直前に滅菌液体担体、例えば、注射のための水の添加のみを必要とする凍結乾燥条件下で保存されてよい。即時の注射のための溶液及び懸濁剤が、既に開示されているような滅菌粉末、顆粒、及び錠剤から調製されてよい。
【００７４】
ヒト患者に対する経口及び非経口投与のために、本発明の化合物、医薬、及び医薬組成物の一日の用量レベルが、一回又は複数に分割した用量で投与されてよい。
【００７５】
かくして、例えば、本発明の化合物の錠剤又はカプセル剤が、適当に、一回に又は二回以上の投与で十分な有効成分を含有してよい。とにかく、医療従事者は、任意の個々の患者に最も適切である実際の用量を決定し、それは、特定の患者の年齢、体重、及び応答に応じて変化するであろう。上述の用量は、平均的な場合の例示である。もちろん、より高用量又は低用量の範囲が有用である個々の事例が存在してよく、その様な場合も本発明の範囲内である。
【００７６】
本発明の化合物、医薬、及び医薬組成物は、鼻内又は吸入によって投与されてもよく、及び適切な推進剤、例えば、ジクロロジフルオロメタン、トリクロロフルオロメタン、ジクロロテトラフルオロエタン、ヒドロフルオロアルカン、例えば、１，１，１，２−テトラフルオロエタン（ＨＦＡ １３４Ａ３）、又は１，１，１，２，３，３，３−ヘプタフルオロプロパン（ＨＦＡ ２２７ＥＡ３）、二酸化炭素、又は他の適切なガスを使用して加圧容器、ポンプ、スプレー、又はネブライザーからの乾燥粉末吸入剤又はエアロゾルスプレーによる提供の形態で簡便に送達されてよい。高圧エアロゾルの場合には、用量単位が、一定量を送達するバルブを提供することによって決定されてよい。高圧容器、ポンプ、スプレー、又はネブライザーは、例えば、溶媒としてエタノールの混合物及び推進剤を使用し、潤滑剤、例えば三オレイン酸ソルビタンを更に含有してよい、有効成分の溶液又は懸濁剤を含有してよい。吸入器において使用するためのカプセル又はカートリッジ（例えば、ゼラチン製）が、本発明の薬剤及び適切な粉末基剤、例えば、ラクトース又はデンプンの粉末混合物を含有するように製剤化されてよい。
【００７７】
エアロゾル又は乾燥粉末製剤は、好ましくは、各一定用量又は「一息」が患者に送達するための本発明の化合物を含有するように好適に調整されてよい。エアロゾルを用いた一日全体の用量は患者ごとに変化し、単回用量又はより一般的には分割用量を一日に投与してよい。
【００７８】
代替的には、本発明の化合物、医薬、及び医薬組成物は、坐剤若しくはペッサリーの形態において投与されてよく、又はそれらは、ローション剤、液剤、クリーム剤、軟膏剤、又は散布剤の形態で局所的に適用されてよい。本発明の化合物、医薬、及び医薬組成物は、例えば皮膚パッチの使用によって、経皮投与されてもよい。
【００７９】
皮膚への局所投与のために、本発明の化合物、医薬、及び医薬組成物は、例えば、以下：天然油、流動ワセリン、白色ワセリン、プロピレングリコール、ポリオキシエチレン、ポリオキシプロピレン剤、乳化ワックス、及び水の１つ又は複数との混合物に懸濁又は溶解された有効成分を含有する適切な軟膏剤として製剤化されてよい。代替的には、それらは、例えば以下：天然油、モノステアリン酸ソルビタン、ポリエチレングリコール、液体パラフィン、ポリソルベート６０、セチルエステルワックス、セテアリールアルコール、２−オクチルドデカノール、ベンジルアルコール、及び水の１つ又は複数の混合物に懸濁又は溶解した、適切なローション又はクリームとして製剤化されてよい。
【００８０】
口内における局所投与のために適切な製剤は、香味基剤、多くの場合にはスクロース及びアカシア又はトラガカントに有効成分を含むロゼンジ剤；ゼラチン及びグリセリン又はスクロース及びアカシアなどの不活性基剤に有効成分を含むトローチ剤；並びに適切な液体担体に有効成分を含むマウスウォッシュ剤を含む。
【００８１】
一般的には、ヒトにおいて、本発明の化合物、医薬、及び医薬組成物並びに本発明の薬剤の経口又は非経口投与は、好ましい経路であり、最も簡便なものである。
【００８２】
獣医学的な用途のために、本発明の化合物、医薬、及び医薬組成物が、通常の獣医学的な慣例に従って、適切な許容される製剤として投与され、獣医は特定の動物に最も適当な投与計画及び投与経路を決定するであろう。
【００８３】
好都合には、前記製剤は医薬製剤である。
【００８４】
有利には、前記製剤は獣医用製剤である。
【００８５】
本発明は、医薬において使用するための本発明で開示するような化合物を更に提供する。かくして、本発明は、中枢神経系におけるモノアミン神経伝達の機能不全に関連する疾患又は状態を治療するための医薬の製造における、本発明に係る化合物の使用を提供する。
【００８６】
例えば、前記疾患又は状態は、ドーパミン、ノルアドレナリン、及び／又はセロトニン（５−ＨＴ）の再取り込み輸送体の機能不全と関連してよい。
【００８７】
かくして、１つの実施態様では、モノアミン再取り込み輸送体はドーパミン再取り込み輸送体である。
【００８８】
例えば、本発明は、前記疾患又は状態が中枢神経系におけるドーパミン神経伝達の不足と関連する、治療方法を提供してよく、特に前記疾患又は状態は、パーキンソン病、ナルコレプシー、注意欠陥過活動性障害（ＡＤＨＤ）、境界性人格障害、間欠性爆発性障害、反社会的性格障害、薬物乱用、窃盗癖、及び放火狂を含むか又はそれらからなる群から選択される。
【００８９】
代替的には、前記疾患又は状態は、中枢神経系におけるドーパミン神経伝達の過剰と関連してよく、例えば、統合失調症、統合失調感情障害、統合失調症様障害、薬物乱用誘導精神病、妄想性障害、躁病、及び共有精神病性障害を含むかそれらからなる群から選択される疾患又は状態であってよい。
【００９０】
更なる実施態様では、前記モノアミン再取り込み輸送体はノルアドレナリン再取り込み輸送体である。
【００９１】
例えば、本発明は、前記疾患又は状態が中枢神経系におけるノルアドレナリン神経伝達の不足と関連し、例えば、衝動性、注意、及び攻撃性の疾患、例えば、注意欠陥過活動性疾患（ＡＤＨＤ）、境界性人格障害、間欠性爆発性障害、反社会的性格障害、薬物乱用、窃盗癖、放火狂、及び鬱病を含むか又はそれらからなる群から選択される疾患又は状態である、方法を提供する。
【００９２】
代替的には、前記疾患又は状態は、中枢神経系におけるノルアドレナリン神経伝達
の過剰に関連してよく、例えば、パニック発作、心的外傷後ストレス障害、不安、恐怖症、及び強迫性障害を含むが、それらに限らない群から選択される疾患又は状態であってよい。
【００９３】
更なる実施態様では、前記モノアミン再取り込み輸送体は、セロトニン再取り込み輸送体である。
【００９４】
例えば、本発明は、前記疾患又は状態が、中枢神経系におけるセロトニン神経伝達の不足に関連してよく、例えば、衝動性、注意、及び／又は攻撃性の疾患、例えば、境界性人格障害、間欠性爆発性障害、反社会性性格障害、薬物乱用、窃盗癖、放火狂、摂食障害（過食症、多食症、拒食症）、不安神経症、恐怖症、強迫性障害、及び鬱病を含むか又はそれらからなる群から選択される疾患又は条件であってよい。
【００９５】
代替的には、本発明は、前記疾患又状態が、中枢神経系におけるセロトニン神経伝達の過剰と関連する疾患又は状態であってよく、例えば、偏頭痛である。
【００９６】
本明細書における過去に公開された文献の記載又は議論は、必ずしも、当該文献が従来技術の一部であるか又は一般的な技術常識であると認めるものと捉えられるべきではない。
【００９７】
本発明のある態様を具体化する、好ましい非限定的な実施例を、表及び図の参照と共に以下に記載する。
【図面の簡単な説明】
【００９８】
【図１】表１は、ラット線条体切片からの［３Ｈ］ドーパミン放出に対する、各種のＤＡＴリガンドの効果を示す。
【図２】表２は、各種のタイプのＤＡＴリガンドの分類を示す。
【図３】表３は、放射標識したドーパミン、ノルアドレナリン、及び５−ＨＴの再取り込み阻害剤としてのコカインの相対的な効力の比較を示す。
【図４】表４は、脳内ミクロダイアリシス又はボルタンメトリー機能スクリーニングを使用した、各種のＤＡＴコカイン結合部位リガンドの特性決定を示す。
【図５】表５は、電気刺激した、ｉｎ ｖｉｖｏ高速サイクリックボルタンメトリースクリーニングにおける、各種のＤＡＴコカイン結合部位リガンドの特定決定を示す。
【図６】図１は、ドーパミン作動性神経伝達の生理プロセスを示す。ドーパミン作動性ニューロンの軸索に沿って進む活動電位（神経インパルス）は、前記ニューロンを脱分極して、エキソサイトーシスと称されるプロセスによる、その貯蔵小胞からシナプス間隙へのドーパミンの量子的放出を生じさせる。化学メッセンジャーであるドーパミンは、ドーパミンがシナプス後受容体を活性化することによって、そのシグナルを伝達する、受容者のニューロンまでシナプス間隙において拡散する。ドーパミンシグナル伝達は、主に、シナプス前ドーパミン作動性神経末端のドーパミン再取り込み輸送体（ＤＡＴ）部位を介するイオン勾配駆動型能動輸送によって、シナプス間隙から当該神経伝達物質を除去することによって停止する。
【図７】図２は、ドーパミン再取り込み輸送体（ＤＡＴ）複合体の作用を示す。ドーパミンは、イオン勾配関連能動輸送体であるＤＡＴによってシナプス前末端に戻される。該再取り込み輸送体は、ドーパミン、２ナトリウムイオン、及び１塩素イオンに結合し、それらをシナプス前末端に移動させる。イオン勾配の力による該システムは、ナトリウム／カリウムＡＴＰａｓｅ及び修飾塩素イオンチャンネル、例えば、ＧＡＢＡＡ受容体によって維持される。
【図８】図３は、競争的ドーパミン再取り込み阻害剤の薬理学的メカニズムを示す。競争的ドーパミン再取り込み阻害剤、例えば、シブトラミン又はブプロピオンは、ドーパミン再取り込み輸送体に競争的に結合し、それによってＤＡＴによるシナプス間隙のドーパミンのクリアランスを妨げる。この受動的な効果は、シナプス間隙におけるドーパミンの濃度における漸増的且つ穏やかな増大を引き起こす。当該図面に示すように、競争的ドーパミン再取り込み阻害剤は、神経末端の外側からのドーパミン神経伝達を強化し、それらの作用は神経発火の速度に依存する。再取り込み阻害剤は、直接的な薬理学的作用を有しない。それらは、生理的に放出されたドーパミンの効果を強化及び持続させるにすぎない。
【図９】図４は、コカインの薬理学的メカニズムを示す。ドーパミンを介する神経末端へのドーパミンの輸送を競争的に阻害する従来の再取り込み阻害剤、例えば、シブトラミン及びブプロピオンとは異なり、コカインは、ＤＡＴ複合体のアロステリック部位に結合する（コカイン結合部位）。逆アゴニストとしてコカインは、神経末端にドーパミンを輸送するメカニズムからドーパミンを能動的に外側に輸送するメカニズムへと、輸送体の機能を逆転させる。これによって、シナプスのドーパミン濃度における急速且つ非常に大きな増大、それによるドーパミン作動性神経伝達が生じる。このメカニズムによって、コカインの大きな精神刺激プロフィールが説明される。当該図面に示すように、コカインは、神経末端の外側にあるＤＡＴの部位に結合することによってドーパミン作動性神経伝達を強化し、その作用は神経発火に依存する。
【図１０】図５は、競争的DAT基質放出剤の薬理学的メカニズムを示す。競争的DAT基質放出剤、例えば、ｄ−アンフェタミン及びメタンフェタミンは、内在性モノアミン伝達物質であるドーパミンを摸倣する低分子である。それらは、ＤＡＴ複合体を介してシナプス前神経末端へと能動的に輸送される。一度神経に入ると、それらは、その貯蔵部位のドーパミンと置き換わり、「逆輸送」又は「レトロ輸送」と称させるプロセスによってドーパミンを強制的にシナプス間隙へと放出させる。ドーパミン放出剤は、ドーパミン作動性神経末端への輸送に関してモノアミンと競争することによって、シナプス間隙からのモノアミンのクリアランスを遅延させる。当該図面に示すように、競争的DAT基質放出剤は、神経末端内部からドーパミン作動性神経伝達を強化し、それらの作用は神経発火からは独立したものである。
【図１１】図６は、ＤＡＴのコカイン結合部位における各種のアゴニスト及び逆アゴニスト特性を有する薬剤を検出するためのスクリーニング方法を示す。
【図１２】図７は、各種のコカイン結合部位リガンドについての広範な作用、乱用の可能性、及び臨床応用を示す。
【図１３】図８は、自由移動ラットの側坐核における細胞外ドーパミン濃度に対するシブトラミン及びｄ−アンフェタミンの効果を示す。各データポイントは、平均±Ｓ．Ｅ．Ｍ．（ｎ＝８〜１１）を表わし、シブトラミン、ｄ−アンフェタミン、又は生理食塩水投与は縦の矢印によって示す。*Ｐ＜0.05；**Ｐ＜0.01；***Ｐ＜0.001は、多重比較のためのｐｏｓｔ ｈｏｃ ｔ−ｔｅｓｔを用いたＡＮＣＯＶＡによって、生理食塩水処理群から優位に異なる。Ｒｏｗｌｅｙ ｅｔ ａｌ（２０００）からデータを参照した。
【図１４】図９は、生理食塩水、ｄ−アンフェタミン、及びコカインによって誘導される内側前頭前皮質における細胞外ドーパミンレベルの時間経過、すなわち、生理食塩水、ｄ−アンフェタミン（女性１．２５ｍｇ／ｋｇ；男性１．５６ｍｇ／ｋｇ）、及びコカイン（２０ｍｇ／ｋｇ）によって誘導される内側前頭前皮質における細胞外ドーパミンの時間経過を示す。サンプルは２０分の間隔に亘って回収した。データは、ベースラインの値の割合（±ＳＥＭ）として表わしている。Ｍａｉｓｏｎｎｅｕｖｅ ｅｔ ａｌ（１９９０）から得たデータを示す。
【図１５】図１０は、ｄ−アンフェタミン及びコカインによって引き起こされた側坐核における細胞外ドーパミンの増大に対するテトロドトキシンの異なる効果を示す。プローブの透析に使用するリンガー溶液は、第一の矢印によって示す点でテトロドトキシン（１×１０−６Ｍ：ｎ＝４）を含有するものに変えた。全ての動物は、第二の矢印で示した点でｄ−アンフェタミン（０．５ｍｇ／ｋｇ ｓ．ｃ．）又はコカイン（１５ｍｇ／ｋｇ ｉ．ｐ．）の注射を受けた（標準的なリンガー溶液を使用して試験した動物に関してｎ＝７）。結果は、リンガー溶液に切り替える前（黒四角）又はｄ−アンフェタミン若しくはコカインの注射の前（白丸）に回収した３つのサンプルにおいて測定した処理前の値の平均として表わしている。透析物におけるドーパミンの基礎レベルは（プローブによる回収の修正をしていない）、０．０６２±０．０１４ｐｍｏｌ／２０μｌであった。データは、Ｗｅｓｔｅｒｉｎｋ ｅｔ ａｌ（１９８７）から得られる。
【図１６】図１１は、側坐核における細胞外ドーパミンの電気的に誘導されたレベルに対するＲＴＩ−７６の効果を示す。異なる各種の動物において記録した２つのセットの誘導されたシグナルを示す。第一のセットのトレースは、ＲＴＩ−７６の脳質内注射の１日後に観察されるドーパミンシグナルにおける変化を記載する（１００ｎｍｏｌ；黒丸）。第二のセット（ＣＯＮ；白丸）は未処理のマウスにおいて記録した。比較のために、時間及び濃度スケール及びデータの提示は、当該図面及び図１２で同一である。データはＷｕ ｅｔ ａｌ（２００１）から得られる。
【図１７】図１２は、側坐核における細胞外ドーパミンの電気的に誘導されたレベルに対するＲＴＩ−７６の効果を示す。異なる各種の動物において記録した２つのセットの誘導されたシグナルを示す。第一のセットのトレースは、ＲＴＩ−７６の脳質内注射の１日後に観察されるドーパミンシグナルにおける変化を記載する（１００ｎｍｏｌ；黒丸）。第二のセット（ＣＯＮ；白丸）は未処理のマウスにおいて記録した。比較のために、時間及び濃度スケール及びデータの提示は、当該図面及び図１２で同一である。データはＷｕ ｅｔ ａｌ（２００１）から得られる。
【実施例】
【００９９】
ｉｎ ｖｉｔｒｏにおけるラット線条体切片からの［３Ｈ］ドーパミン放出に対する各種のＤＡＴリガンドの効果の灌流による測定
使用した方法は、Ｈｅａｌ ｅｔ ａｌ（１９９２）によって詳細に開示されたものである。簡潔には、成体のオスのＣＤラット（１８０〜３００ｇ）を屠殺して、線条体を迅速に除去して、Ｍｃｌｌｗａｉｎ組織チョッパーを使用して９０°で二方向において組織を切断することによって調製した。前記切片は、次いで、０．１３ｍＭパーギリン及び６０ｎＭ［３Ｈ］ドーパミン（４５Ｃｉ／ｍｍｏｌ）を含有するｐＨ７．４の２ｍｌのＫｒｅｂｓ−Ｈｅｎｓｅｌｅｉｔ緩衝液（１８８ｍＭ ＮａＣｌ、２５ｍＭ ＮａＨＣＯ３、１１ｍＭ Ｄ−グルコース、４．７ｍＭ ＫＣｌ、１．２ｍＭ ＭｇＳＯ４、１．２ｍＭ ＫＨ２ＰＯ４、１．３ｍＭ ＣあＣｌ２、９５％Ｏ２−５％ＣＯ２を含むガス）中で３７℃において２０分間に亘ってインキュベートした。５ｍｇの切片の一定分量を灌流装置の各チャンバーに移し、３７℃に事前に加温したＫｒｅｂｓ−Ｈｅｎｓｅｌｅｉｔ緩衝液で灌流した。流速は１ｍｌ／分であり、最初の３０分間の灌流を実施して切片から神経外［３Ｈ］ドーパミンを除去した後に、２分の間隔で画分を回収した。［３Ｈ］ドーパミンの流出は８分間に亘って回収し（画分１から４）、試験化合物の溶液（１０−７〜１０−５Ｍ）又はＫｒｅｂｓ−Ｈｅｎｓｅｌｅｉｔ緩衝液単独の前の［３Ｈ］ドーパミン流出のベースラインレベルを規定した。最終的には、全ての切片を更に１０分間に亘って灌流した。前記画分及び切片の放射活性は、液体シンチレーションカウンターによって測定した。５〜１３画分に存在する［３Ｈ］ドーパミンの蓄積した放出量を、切片に最初に存在した放射活性全体の一部として計算した。
【０１００】
Ｈｅａｌ ｅｔ ａｌ（１９８２及び１９９６）によって開示された実験によって評価された試験化合物は、シブトラミン、その活性代謝物、すなわち、ＢＴＳ ５４ ３５４（Ｎ−｛１−［１−（４−クロロフェニル）シクロブチル］−３−メチルブチル｝−Ｎ−メチルアミン）及びＢＴＳ ５４ ５０５（１−［１−（４−クロロフェニル）シクロブチル］−３−メチルブチルアミン）、ブプロピオン、コカイン ＤＬ−トレオ−メチルフェニデート、ｄ−アンフェタミン、並びにメタンフェタミンを含んでいた。
【０１０１】
自由移動ラットの側坐核における神経外ドーパミン濃度に対する各種のＤＡＴリガンドの効果の脳内ミクロダイアリシスによる測定
ミクロダイアリシス実験は、Ｒｏｗｌｅｙ ｅｔ ａｌ（２０００）によって詳細に説明されているように実施した。簡潔には、オスのＳｐｒａｇｕｅ−Ｄａｗｌｅｙラット（２５０〜３５０ｇの体重）をＯ２／Ｎ２Ｏ混合物中のイソフルレンで麻酔をかけた（１Ｌ／分）。２ｍｍ Ｈｏｓｐａｌ ｍｅｍｂｒａｎｅ ｔｉｐを備えた同心ミクロダイアリシスプローブ（３００μＭ外形）を側坐核に定位移植し（座標：Ａ：＋２．２ｍｍ；Ｌ：ブレグマに対して−１．５ｍｍ；Ｐａｘｉｎｏｓ ａｎｄ Ｗａｔｓｏｎ，１９８６の定位図による頭蓋骨表面に対して−８．０ｍｍ）、ステンレス鋼のネジ及び歯科用セメントを使用して頭蓋骨を固定した。手術後に、ラットは液体スイベル及び釣り合わせたアームを介して結合したミクロダイアリシスプローブと共に個々に飼育し、動物の自由な運動を確実にした。前記プローブは、１．２μｌ／分の流速で人工的なＣＳＦ（１５０ｍＭ Ｎａ＋、３．０ｍＭ Ｋ＋、０．８ｍＭ Ｍｇ２＋、１．４ｍＭ Ｃａ２＋、１．０ Ｐ２＋、１５５ｍＭＣｌ−）を用いて連続的に灌流した。実験の間には、サンプルを２０分の間隔で０．１Ｍ過塩素酸に回収し、次いでドーパミン濃度を電気化学的検出と組み合わせた高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）によって測定するまで、４℃で保存した。
【０１０２】
４×２０分の基礎サンプルの回収後、腹腔内注射によって薬剤を投与し、２０分の透析サンプルを４時間に亘って回収した。調べた薬剤は、シブトラミン塩酸一水和物（２．０又は６．０ｍｇ／ｋｇ ｉｐ）及びｄ−アンフェタミンスルフェート（０．５又は１．５ｍｇ／ｋｇ ｉｐ）を含んでいた。
【０１０３】
本願に含まれる他の透析データは、Ｍａｉｓｏｎｎｅｕｖｅ ｅｔ ａｌ（１９９０）によって開示されており、コカイン塩酸（２０ｍｇ／ｋｇ ｉｐ）に対して、ｄ−アンフェタミンスルフェート（女性１．２５ｍｇ／ｋｇ及び男性１．５６ｍｇ／ｋｇ）の腹腔内注射の、抱水クローラル又はペントバルビタールで麻酔したＬｏｎｇ−Ｅｖａｎｓラットの内側前頭前皮質におけるドーパミンの神経外濃度に対する効果を比較している。また、Ｗｅｓｔｅｒｉｎｋ ｅｔ ａｌ（１９８７）によって開示されているように、コカイン及びｄ−アンフェタミンによって誘導された側坐核におけるドーパミン濃度の増大に対する、ニューロン発火を妨げるナトリウムチャンネル阻害剤であるテトロドトキシンの効果を比較した。
【０１０４】
ｉｎ ｖｉｖｏにおけるラット側坐核におけるドーパミンの電気的に誘導されたエキソサイトーシスに対するコカインの効果の高速サイクリックボルタンメトリーによる測定
これらの実験はＷｕ ｅｔ ａｌ（２００１）の文献に詳細に開示されている。簡潔には、成体のオスＳｐｒａｕｇｕｅ−Ｄａｗｌｅｙラット（２５０−４５０ｇの体重）をウレタンの注射（１．５ｇ／ｋ ｉｐ）によって麻酔した。定位操作において、２つの作用電極を移植した（１つは新線条体の中心領域に移植し、他方は側坐核の中心領域に移植した）。刺激微小電極は同側前脳束に移植した。ドーパミン作動性ニューロンの位置は、６０Ｈｚ、２秒、３００μＡの刺激の間に強力なシグナルが尾状核被殻及び側坐核の双方において記録されるまで刺激電極を下げることによって決定した。参考電極を表層皮質の対側に移植した。セットアップを最適にした後に、電極の位置を記録期間の全体に亘って変化しなかった。刺激電極は、１．０ｍｍ隔てられた０．２ｍｍチップを備えたねじれた双極電極であった。前記電極は、これらのチップ以外に全長に亘って覆われていた。電気刺激はコンピューターによって生じ、ボルタンメトリー測定と同調させた。一定電流、二相方形波パルスを提供した（３００〜４００μＡ及び各相２ｍ秒）。刺激を与える期間は、２秒であり、１０及び６０Ｈｚの周波数を無作為に適用した。ニューロン外ドーパミンはシリンダー炭素繊維微小電極を使用して定量した（曝露した先端：半径＝２．５μｍ、長さ＝５０−１００μｍ）。電気化学はコンピューターで制御し、２つの作用電極のために定電位電解装置を使用した。三角波（−４００から１０００ｍＶ；３００ｖ／秒スキャン速度）を１００ｍ秒ごとに適用した。スキャンの間のバイアス電位は−４００ｍＶであった。全ての電位は、銀／塩化銀電極について言及される。ドーパミンのニューロン外濃度は、連続的なボルタングラムにおけるドーパミンについてのピーク酸化ポテンシャル（典型的には５００〜７００ｍV）における電流から得られ、ｉｎ ｖｉｖｏ実験の後の各作用電極のｉｎ ｖｉｔｒｏ補正に基づいて濃度に変換した。バックグラウンドを差し引いたサイクリックボルタングラムが、ベースラインの記録の間に回収したボルタングラムから刺激の間に回収したボルタングラムを差し引くことによって得た。ポテンシオスタットのアナログ出力をデジタル化して、コンピューターに保存した。
【０１０５】
ボルタンメトリーのサイクリックスキャンは、コカイン注射（４０ｍｇ／ｋｇ ｉｐ）の２０分後及びＲＴＩ−７６（３β−（ｐ−クロロフェニル）トロパン−２β−
カルボン酸ｐ−イソチオシアナトフェニルメチルエステル塩酸；１０μｌ、１００ｎｍｏｌ）の脳室内注射の１又は２日後に実施した。
【０１０６】
結果
灌流によるｉｎ ｖｉｔｒｏにおけるラット線条体切片からの［３Ｈ］ドーパミン放出に対する各種のＤＡＴリガンドの効果
灌流したラット線条体切片からの［３Ｈ］ドーパミン放出に対する各種のＤＡＴリガンドの効果を表４に記載している。競争的ＤＡＴ再取り込み阻害剤であるシブトラミン、その２種の代謝物（ＢＴＳ ５４ ３５４及びＢＴＳ ５４ ５０５）、及びブプロピオンでは、低濃度（１０−７Ｍ）又は高濃度（１０−５Ｍ）のいずれにおいても線条体切片から［３Ｈ］ドーパミンが放出しなかった。対照的に、競争的DAT基質放出剤、すなわち、ｄ−アンフェタミン及びメタンフェタミンは、線状体切片から［３Ｈ］ドーパミンを用量依存的に放出させ、この効果は低濃度及び高濃度の双方において統計的に有意であった。コカイン及びメタンフェニデートのプロフィールは、低濃度（１０−７Ｍ）における線条体切片からの［３Ｈ］ドーパミン流出の刺激を有しないＤＡＴリガンドの他のタイプとは異なるものであったが、高濃度（１０−５Ｍ）では統計的に有意に増大する。
【０１０７】
脳室内ミクロダイアリシスによって測定したラット脳におけるニューロン外ドーパミン濃度に対するシブトラミン、ｄ−アンフェタミン、及びコカインの効果の比較
図８Ａに示すように、ラットに競争的ＤＡＴ阻害剤であるシブトラミンの注射を与えた際には、自由移動ラットの側坐核のドーパミンのニューロン外濃度における遅く漸増的な上昇が生じた。低濃度の当該薬剤では（２．０ｍｇ／ｋｇ ｉｐ）、前記増大は統計的優位性には達しなかった。しかしながら、より高用量では（６．０ｍｇ／ｋｇ ｉｐ）、２３１±８７％という最大の増大が６０分において認められた（Ｐ＜０．００１）。側坐核におけるニューロン外ドーパミンに対する、これらの効果は、薬理学的に同等な量の競争的DAT基質放出剤であるｄ−アンフェタミン（０．５及び１．５ｍｇ／ｋｇ ｉｐ）で認められたものとは非常に異なるものであった。かくして、図８Ｂで示すように、側坐核におけるニューロン外ドーパミン濃度に対するｄ−アンフェタミンの効果は、開始からより速く、４０分に当該薬剤の双方の用量で最大に達した。さらに、０．５ｍｇ／ｋｇの用量で２４２±８９％及び１．５ｍｇ／ｋｇの用量で６０３±３１９％というピーク増加は、早い時点、すなわち、０から４０分及び４０から８０分（Ｐ＜０．０５）においてシブトラミンを用いて観察されたものよりも有意に大きいものであった。図８Ａおよび８Ｂに示す、これらの結果は、競争的ＤＡＴ阻害剤と競争的DAT基質放出剤との間に存在するニューロンドーパミンに対する作用の力の間の差異を明確に示す（Ｒｏｗｌｅｙ ｅｔ ａｌ，２０００）。
【０１０８】
図９に示すデータは、Ｍａｉｓｓｏｎｅｕｖｅ ｅｔ ａｌ（１９９０）によって公開された試験から把握されるように、効果の開始の早さ及び規模の観点からは、競争的DAT基質放出剤、ｄ−アンフェタミン、及びＤＡＴコカイン結合部位リガンドであるコカインの作用の間には差異が比較的小さい。しかしながら、ミクロダイアリシス技術も使用して、Ｗｅｓｔｅｒｉｎｋ ｅｔ ａｌ（１９８７）は、ニューロン外ドーパミン濃度に対するｄ−アンフェタミンなどの競争的DAT基質放出剤の効果が、それらがニューロン発火を停止させるナトリウムチャンネルブロッカーであるテトロドトキシンを透析において含めることによって変化を受けないため、ドーパミン作動性のニューロン発火に依存しないことを示した（図１０Ａ）。対照的に、シナプスドーパミン濃度に対するコカインの強化効果は、透析においてテトロドトキシンを含めることによって妨げられ、その薬理は完全なドーパミン作動性ニューロン発火に完全に依存することを示した（Ｗｅｓｔｅｒｉｎｋ ｅｔ ａｌ，１９８７；図１０Ｂ）。
【０１０９】
高速サイクリックボルタンメトリーによって測定したラット側坐核におけるニューロン外ドーパミン濃度に対するコカイン及びＲＴＩ−７６の効果の比較
ＲＴＩ−７６は、非競争的ＤＡＴ阻害剤であり、図１１に明確に示すように、ラットに投与される際に（１００ｎｍｏｌ ｉｃｖ）、当該化合物は頻度依存的な様式で側坐核におけるドーパミンの細胞外濃度を増大する。その作用メカニズムとしての再取り込み阻害と一致して、ＤＡＴによるドーパミンクリアランス（ピーク後のボルタングラムの勾配によって示される）は明確に遅らされる（Ｗｕ ｅｔ ａｌ，２００１）。
【０１１０】
対照的に、図１２に示すように、側坐核におけるニューロン外ドーパミン濃度に対するコカインの作用は、全ての刺激の度に認められる神経伝達物質のピーク濃度における大きな増大を伴い、非常に異なる；しかしながら、シナプス間隙からのクリアランスの速度、すなわち、ピーク後のボルタングラムの勾配は、対象のものと一般的には平行になっており、コカインが発火依存的な放出を介してシナプスのドーパミン濃度を増大していることを示した。これらのデータは、シナプスからのドーパミンのクリアランスを遅延させる再取り込み阻害剤としてコカインが作用していないことも示す（Ｗｕ ｅｔ ａｌ，２００１）。
【０１１１】
考察
これらのデータを概観すると、コカイン及び他のＤＡＴコカイン結合部位リガンド、例えば、メチルフェニデートの脳内のドーパミン作動性の作用に対する薬理学的作用は、他の薬理学的種類のＤＡＴリガンド、すなわち、競争的ＤＡＴ再取り込み阻害剤、例えば、シブトラミンの代謝物及びブプロピオン、並びに競争的DAT基質放出剤、例えば、ｄ−アンフェタミン、ＭＤＡ、及びＭＤＭＡのものとは異なることが明らかである。かくして、コカイン結合部位逆アゴニストであるコカイン及びメチルフェニデートは、高濃度において前処理したラット線条体切片からの［３Ｈ］ドーパミンの流出を増大するというｉｎ ｖｉｔｒｏにおけるそれらの機能によって競争的ＤＡＴ再取り込み阻害剤から区別されてよい。神経構造を維持しているため、切片を使用した。ある生理学的なニューロン発火は組織調製物内で生じており、ＤＡＴに対するこれらのコカイン結合部位リガンドの発火依存的な効果を生じさせ得るようである。ニューロン外ドーパミン濃度におけるコカインに誘導される増大についての完全なドーパミン作動性ニューロン発火に対する依存は、Ｗｅｓｔｅｒｉｎｋ ｅｔ ａｌ（１９８７；図１０Ｂ）のｉｎ ｖｉｖｏミクロダイアリシス実験によって示されている。同様に、コカイン及びメチルフェニデートは、競争的DAT基質放出剤、例えば、ｄ−アンフェタミン及びメタンフェタミンは前処理したラット線条体切片からの［３Ｈ］ドーパミンの顕著な放出をｉｎ ｖｉｔｒｏで生じさせ、この効果は非常に低い薬剤濃度で現れるため、これらとは区別されてもよい。この観察結果は、ニューロン発火からは独立した放出薬剤のドーパミン放出メカニズムと一致している。この仮説は、透析プローブを介したナトリウムチャンネルブロッカーであるテトロドトキシンの点滴によるドーパミン作動性ニューロン発火の阻害が、これらの放出剤によるシナプスのドーパミン濃度の向上を妨げないことを示す、脳内ミクロダイアリシス実験によってｉｎ ｖｉｖｏで確認されている（Ｗｅｓｔｅｒｉｎｋ ｅｔ ａｌ，１９８７；図１０Ａ）。
【０１１２】
まとめると、これらのｉｎ ｖｉｔｒｏ及びｉｎ ｖｉｖｏの観察結果は、コカイン及びメチルフェニデートが、他のＤＡＴリガンドとは明らかに異なる薬理学的メカニズムを有することを示す。しかしながら、ｖｉｚ Ｗｅｓｔｅｒｉｎｋ ｅｔ ａｌ（１９８７）、Ｍａｉｓｓｏｎｅｕｖｅ ｅｔ ａｌ（１９９０）、Ｈｅａｌ ｅｔ ａｌ（１９８２、１９９６）、又はＲｏｗｌｅｙ ｅｔ ａｌ（２０００）といったこれらの文献の著者の誰もが、コカイン及び関連の化合物がＤＡＴ複合体の逆アゴニストであることを推測しておらず、単に、再取り込み阻害剤又は作用の不特定のメカニズムを有する放出剤のいずれかとして作用することを推定するのみである。
【０１１３】
Ｗｕら（２００１）によるｉｎ ｖｉｖｏにおけるサイクリックボルタンメトリーによる発見の幾つかは本願のサポートに含めるが、前述したように、これらの著者は、コカインを、シブトラミンの代謝産物及びブプロピオンに例示される従来の競争的ＤＡＴ再取り込み阻害剤としてのみ作用するものとして結論付けている。報告では、Ｗｕ ｅｔ ａｌ（２００１）は、コカインはシナプス間隙からのドーパミンのクリアランスに何の作用も有していないことを示した。［Ｅｘ：「当該現象の一つの興味深い結果は、主にドーパミンの再取り込みのＶｍａｘを反映することが過去に示されている（式３参照）（Ｗｉｇｈｔａｍａｎ ｅｔ ａｌ、１９８８）、電気刺激により誘導されるＤＡの細胞外クリアランスの速度が、コカインによって顕著には影響を受けなかったことである。事実、細胞外ＤＡのクリアランスを説明する誘導された反応の一部は、高濃度（＞１μＭ）における薬剤反応前の応答と本質的に平行するものであった」Ｗｕ ｅｔ ａｌ，２００１、６３４０頁、右欄、第三段落、４から６行目及び６３４１ページ、左欄、第一段落、１から４行目］。これらの著者は、他の独特な発見も示した：第一に、シナプスのドーパミン濃度に対するコカインの増強作用がＤＡＴ部位の数と逆に相関した。［Ｅｘ：「その関係は、図８に最も良好に示されており、阻害剤に誘導された細胞外ＤＡレベルにおける増大、及びドーパミン放出のための速度定数である［ＤＡ］ｐ、及びＤＡ再取り込み部位の数に比例するＶｍａｘの間に逆の相関を示す」Ｗｕ ｅｔ ａｌ，２００１、６３４５頁、左欄、第二段落、４から８行目］、第二に、ドーパミン放出に対するコカインの作用とドーパミン再取り込み輸送体部位の阻害を介するその競争的阻害作用との間の不明な相関関係が存在した。［Ｅｘ：「放出に対する薬剤の直接的な作用は動力学的分析によっては示されないため、ＤＡ放出と再取り込み阻害剤との間の観察された相関関係は驚くべきことである（図５）」Ｗｕ ｅｔ ａｌ，２００１、６３４５頁、左欄、第三段落、１から３行目］。それらは矛盾する観察結果であり、Ｗｕ ｅｔ ａｌはコカインが競争的ドーパミン再取り込み輸送体阻害剤であるという前提のために矛盾をとくことができなかった。本願において為された発明は、ＤＡＴのコカイン結合部位は、ドーパミン輸送の速度及び方向の双方を調節する複合体の調節的なアロステリックサブユニットであることを推定したことである。また、ＤＡＴによるドーパミン輸送の正常な方向はシナプス前末端への方向であり、コカインがドーパミン輸送の方向を逆転させる、すなわち内側ではなく神経末端の外側に輸送させる部位において逆アゴニストとして作用することを推定した。したがって、コカインは、完全なニューロン発火、より大きな数のＤＡＴ部位、より大きなコカインのドーパミンの細胞外放出増大効果に依存するメカニズムによって、ＤＡＴ複合体によるドーパミン輸送の方向を逆転させる。コカインは競争的ドーパミン再取り込み阻害剤としてよりもドーパミン放出を増大する逆アゴニストとして作用するため、シナプス間隙からのドーパミンのクリアランスに対する作用は有しない。後のより高いレベルの細胞外ドーパミン放出に関連する高い発火速度では、ＤＡＴ部位におけるコカインの逆アゴニスト作用によるシナプス間隙への輸送に利用されるシナプス前末端内の放出可能なシナプス前プールに貯蔵された神経伝達物質の量は、顕著に低減するであろう。かくして、低い発火速度においてドーパミンの細胞が放出が比較的小さい際は、それが、コカインの逆アゴニスト作用による顕著に増大されるが、より高い発火速度では、エキソサイトーシスに対するシナプスのドーパミン濃度に対するコカインの寄与がより小さい；これは、図１２におけるＷｕ ｅｔ ａｌ（２００１）のデータに正確に示されている。
【０１１４】
まとめると、広範な出典から取り出したこれらの実験結果は、コカイン及び関連のコカイン結合部位リガンドについて、予期されていなかった新規なメカニズムの発見を導いた。本発明及びその発見において使用した実験方法は、ＤＡＴ複合体のコカイン結合部位に結合する他のリガンドのスクリーニング及び薬理学的特性について応用する。そして、本発明は、精神刺激剤乱用と関連する臨床的状態、並びに脳内のドーパミン作動性の作用の不足又は過剰による精神及び神経疾患の治療のための薬剤の発見又は開発のため治療的な応用がされる。
【特許請求の範囲】
【請求項１】
（ａ）試験しようとする化合物を準備する工程；
（ｂ）モノアミン再取り込み輸送体のコカイン結合部位に結合する前記化合物の能力を試験する工程；及び
（ｃ）前記モノアミン再取り込み輸送体を介してモノアミン神経伝達物質の内側又は外側への輸送を調節する前記化合物の能力を試験する工程
を含む、中枢神経系におけるモノアミン神経伝達の機能不全と関連する疾患又は状態を治療するための候補化合物を同定するための方法であって、
試験化合物がモノアミン再取り込み輸送体のコカイン結合部位に結合し、且つ、その活性を調節し得た場合に、前記試験化合物がモノアミン神経伝達の機能不全と関連する疾患又は状態を治療するための候補化合物として同定される、方法。
【請求項２】
工程（ｃ）が、モノアミン再取り込み輸送体のコカイン結合部位の活性を調節する化合物の能力を試験する工程を含む、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
前記モノアミンが、ドーパミン、ノルアドレナリン、及びセロトニン（５−ＨＴ）からなる群から選択される、請求項１又は２に記載の方法。
【請求項４】
前記モノアミンがドーパミンである、請求項３に記載の方法。
【請求項５】
前記疾患又は状態が、中枢神経系におけるドーパミン神経伝達の不足と関連する、請求項４に記載の方法。
【請求項６】
前記疾患又は状態が、パーキンソン病、ナルコレプシー、注意欠陥過活動性障害（ＡＤＨＤ）、境界性人格障害、間欠性爆発性障害、反社会的人格障害、薬物乱用、窃盗癖、及び放火狂を含むか又はそれらからなる群から選択される、請求項５に記載の方法。
【請求項７】
前記疾患又は状態が、中枢神経系におけるドーパミン神経伝達の過剰と関連する、請求項４に記載の方法。
【請求項８】
前記疾患又は状態が、統合失調症、統合失調性感情障害、統合失調症様障害、薬物乱用誘発性精神病性障害、妄想性障害、躁病、及び共有精神病性障害からなる群から選択される、請求項７に記載の方法。
【請求項９】
前記モノアミンがノルアドレナリンである、請求項３に記載の方法。
【請求項１０】
前記疾患又は状態が、中枢神経系におけるノルアドレナリン神経伝達の不足と関連する、請求項９に記載の方法。
【請求項１１】
前記疾患又は状態が、衝動性、注意、及び攻撃性の疾患、例えば、注意欠陥過活動性障害（ＡＤＨＤ）、境界性人格障害、間欠性爆発性障害、反社会的人格障害、薬物乱用、窃盗癖、放火狂、及び鬱病を含む群から選択される、請求項１０に記載の方法。
【請求項１２】
前記疾患又は状態が、中枢神経系におけるノルアドレナリン神経伝達の過剰と関連する、請求項９に記載の方法。
【請求項１３】
前記疾患又は状態が、パニック発作、心的外傷後ストレス障害、不安神経症、恐怖症、及び強迫性障害を含む群から選択される、請求項１２に記載の方法。
【請求項１４】
前記モノアミンがセロトニン（５−ＨＴ）である、請求項３に記載の方法。
【請求項１５】
前記疾患又は状態が、中枢神経系におけるセロトニン神経伝達の不足と関連する、請求項１４に記載の方法。
【請求項１６】
前記疾患又は状態が、衝動性、注意、及び／又は攻撃性の疾患、例えば、境界性人格障害、間欠性爆発性障害、反社会的人格障害、薬物乱用、窃盗癖、放火狂、摂食障害（過食症、多食症、拒食症）、不安神経症、恐怖症、強迫性障害、及び鬱病を含む群から選択される、請求項１５に記載の方法。
【請求項１７】
前記疾患又は状態が中枢神経系におけるセロトニン神経伝達の過剰と関連する、請求項１４に記載の方法。
【請求項１８】
前記疾患又は状態が偏頭痛である、請求項１７に記載の方法。
【請求項１９】
工程（ｂ）及び／又は（ｃ）が、ｉｎ ｖｉｔｒｏ受容体結合、ｉｎ ｖｉｔｒｏ神経伝達物質放出及び／又は再取り込み（例えば、脳切片又はシナプトソームを使用する）、ｉｎ ｖｉｔｒｏ電気生理学、ｉｎ ｖｉｔｒｏ又はｉｎ ｖｉｖｏバイオセンサー、ｉｎ ｖｉｖｏミクロダイアリシス、或いはｉｎ ｖｉｖｏボルタンメトリーからなる群から選択される方法によって実施される、請求項１から１８のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２０】
工程（ｃ）が、モノアミン再取り込み輸送体の活性を受動的に調節する化合物の能力を試験する工程を含む、請求項１から１９のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２１】
工程（ｃ）が、モノアミン再取り込み輸送体の活性を能動的に調節する化合物の能力を試験する工程を含む、請求項１から２０のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２２】
工程（ｃ）が、モノアミン再取り込み輸送体のアンタゴニストとして作用する化合物の能力を試験する工程を含む、請求項１から２１のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２３】
工程（ｃ）が、モノアミン再取り込み輸送体の逆アゴニストとして作用する化合物の能力を試験する工程を含む、請求項１から２２のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２４】
工程（ｃ）が、モノアミン再取り込み輸送体の完全な逆アゴニストとして作用する化合物の能力を試験する工程を含む、請求項２３に記載の方法。
【請求項２５】
工程（ｃ）が、モノアミン再取り込み輸送体の部分的逆アゴニストとして作用する化合物の能力を試験する工程を含む、請求項２３に記載の方法。
【請求項２６】
工程（ｃ）が、モノアミン再取り込み輸送体のアゴニストとして作用する化合物の能力を試験する工程を含む、請求項１から２５のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２７】
工程（ｃ）が、モノアミン再取り込み輸送体の完全なアゴニストとして作用する化合物の能力を試験する工程を含む、請求項２６に記載の方法。
【請求項２８】
工程（ｃ）が、モノアミン再取り込み輸送体の部分的アゴニストとして作用する化合物の能力を試験する工程を含む、請求項２６に記載の方法。
【請求項２９】
工程（ｃ）が、モノアミン再取り込み輸送体のアゴニスト又は逆アゴニストの効果をアンタゴナイズする化合物の能力を試験する工程を含む、請求項１から２８のいずれか一項に記載の方法。
【請求項３０】
工程（ｃ）が、ｉｎ ｖｉｔｒｏにおけるモノアミン再取り込み輸送体の活性を調節する化合物の能力を試験する工程を含むか又は当該工程からなる、請求項１から２９のいずれか一項に記載の方法。
【請求項３１】
工程（ｃ）が、ｉｎ ｖｉｖｏにおけるモノアミン再取り込み輸送体の活性を調節する化合物の能力を試験する工程を含むか又は当該工程からなる、請求項１から３０のいずれか一項に記載の方法。
【請求項３２】
工程（ｃ）が、モノアミン再取り込み輸送体のコカイン結合部位において作用する化合物の能力を試験する工程を含むか又は当該工程からなる、請求項２０から３１のいずれか一項に記載の方法。
【請求項３３】
工程（ｃ）が、ドーパミン再取り込み輸送体のコカイン結合部位において逆アゴニスト（完全又は部分）、アゴニスト（完全又は部分）、又はアンタゴニストとして作用する化合物の能力を試験する工程を含むか又は当該工程からなる、請求項３２に記載の方法。
【請求項３４】
工程（ｃ）が、
（Ａ）灌流によってモノアミン再取り込み輸送体部位を含む組織切片又は細胞（又はそれらの細胞亜分画）からの自発的なモノアミン放出のｉｎ ｖｉｔｒｏ測定；
（Ｂ）灌流によるモノアミン再取り込み輸送体部位を含む組織切片又は細胞（又はそれらの細胞亜分画）からのモノアミン再取り込みのｉｎ ｖｉｔｒｏ測定；
（Ｃ）灌流によるモノアミン再取り込み輸送体部位を含む組織切片又は細胞（又はそれらの細胞亜分画）からの電気的に誘発されたモノアミン放出のｉｎ ｖｉｔｒｏ測定；
（Ｄ）電気生理学的技術による、モノアミン再取り込み輸送体部位を含む組織切片又は細胞（又はそれらの細胞亜分画）からの自発的及び／又は電気的に誘発されたモノアミン流出のｉｎ ｖｉｔｒｏ測定；
（Ｅ）１つ又は複数のバイオセンサーを使用する、自発的及び／又は電気的に誘発したモノアミン流出のｉｎ ｖｉｔｒｏ及び／又はｉｎ ｖｉｖｏ測定；
（Ｆ）動物におけるマイクロダイアリシスによる細胞発火依存性及び細胞発火非依存性モノアミン流出のｉｎ ｖｉｖｏ測定；
（Ｇ）ボルタンメトリー技術による、動物における自発的及び／又は電気的に誘発されたモノアミン流出のｉｎ ｖｉｖｏ測定
の技術の一つ又は複数を使用して、モノアミン再取り込み輸送体の活性を調節する化合物の能力を試験する工程を含む、請求項１から３３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項３５】
（Ａ）、（Ｂ）、及び（Ｃ）が、標識したモノアミンの放出又は再取り込みのｉｎ ｖｉｔｒｏ測定を含む、請求項３４に記載の方法。
【請求項３６】
（Ｅ）のバイオセンサーが酵素、抗体、及び／又は神経伝達物質受容体で被覆されている、請求項３４に記載の方法。
【請求項３７】
工程（ｃ）が、以下：
Ａのみ、Ｂのみ、Ｃのみ、Ｄのみ、Ｅのみ、Ｆのみ、Ｇのみ、Ａ+Ｂ、Ａ+Ｃ、Ａ+Ｄ、Ａ+Ｂ+Ｃ、Ａ+Ｂ+Ｃ+Ｄ、Ａ+Ｂ+Ｄ、Ｂ+Ｃ、Ｂ+Ｄ、Ｃ+Ｂ、Ｃ+Ｄ、Ａ+Ｃ+Ｅ (ｉｎ ｖｉｔｒｏ)、Ａ+Ｃ+Ｅ (ｉｎ ｖｉｖｏ)、Ａ+Ｃ+Ｆ、Ａ+Ｃ+Ｇ、Ａ+Ｂ+Ｃ+Ｅ (ｉｎ ｖｉｔｒｏ)、Ａ+Ｂ+Ｃ+Ｅ (ｉｎ ｖｉｖｏ)、Ａ+Ｂ+Ｃ+Ｆ、Ａ+Ｂ+Ｃ+Ｇ、Ａ+Ｄ+Ｅ (ｉｎ ｖｉｔｒｏ)、Ａ+Ｄ+Ｅ (ｉｎ ｖｉｖｏ)、Ａ+Ｄ+Ｆ、Ａ+Ｄ+Ｇ、Ａ+Ｂ+Ｄ+Ｅ (ｉｎ ｖｉｔｒｏ)、Ａ+Ｂ+Ｄ+Ｅ (ｉｎ ｖｉｖｏ)、Ａ+Ｂ+Ｄ+Ｆ、Ａ+Ｂ+Ｄ+Ｇ
の技術手段／組み合わせの一つ又は複数を含む、請求項３４から３６のいずれか一項に記載の方法。
【請求項３８】
モノアミン再取り込み輸送体部位を含む細胞が、組織切片に存在するか又は由来する、請求項３４から３７のいずれか一項に記載の方法。
【請求項３９】
前記組織切片が、脳、例えば、脳のドーパミン作動性領域に由来する、請求項３８に記載の方法。
【請求項４０】
モノアミン再取り込み輸送体部位を含む細胞が、培養物中に維持されている、請求項３４から３９のいずれか一項に記載の方法
【請求項４１】
前記細胞が、初代細胞及び不死化細胞（すなわち、細胞株）からなる群から選択される、請求項３４から４０のいずれか一項に記載の方法。
【請求項４２】
前記細胞がモノアミン再取り込み輸送体を発現するように遺伝子操作されている、請求項３４から４１のいずれか一項に記載の方法。
【請求項４３】
モノアミン再取り込み輸送体部位を含む細胞が血液細胞である、請求項３４から４２のいずれか一項に記載の方法。
【請求項４４】
モノアミン再取り込み輸送体部位を含む細胞が腎血管に存在するか又は由来する、請求項３４から４２のいずれか一項に記載の方法。
【請求項４５】
モノアミン放出又は再取り込みがシナプトソームにおいて測定される、請求項３４から４０のいずれか一項に記載の方法。
【請求項４６】
モノアミン再取り込み輸送体部位を含む細胞がヒトに由来する、請求項３４から４５のいずれか一項に記載の方法。
【請求項４７】
モノアミン再取り込み輸送体部位を含む細胞が、非ヒトの種、例えば、マウス又はラットなどのげっ歯類に由来する、請求項３４から４５のいずれか一項に記載の方法。
【請求項４８】
前記ｉｎ ｖｉｖｏ測定が脳において実施される、請求項３４から３７のいずれか一項に記載の方法。
【請求項４９】
前記ｉｎ ｖｉｖｏ測定が、モノアミン再取り込み輸送体を含む細胞が豊富な脳の領域において実施される、請求項４８に記載の方法。
【請求項５０】
前記ｉｎ ｖｉｖｏ測定が、脳のドーパミン作動性領域、例えば、基底核において実施される、請求項４９に記載の方法。
【請求項５１】
前記ｉｎ ｖｉｖｏ測定が、ヒト又は非ヒトの種、例えば、マウス又はラットなどのげっ歯類において実施される、請求項４８から５０のいずれか一項に記載の方法。
【請求項５２】
工程（ｃ）が、モノアミン再取り込み輸送体の活性を調節する異なる用量の試験化合物の能力を試験する工程を含む、請求項１から５１のいずれか一項に記載の方法。
【請求項５３】
灌流による組織からのモノアミンの放出のｉｎ ｖｉｔｒｏ測定が、高用量の試験化合物（例えば、１×１０−５Ｍ）及び低用量の試験化合物（例えば、１×１０−７Ｍ）を使用して実施される、請求項３４から４７のいずれか一項に記載の方法。
【請求項５４】
悪性又は望ましくない特性について試験化合物をカウンタースクリーニングする工程を更に含む、請求項１から５３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項５５】
中枢神経系におけるモノアミン神経伝達の機能不全と関連する疾患又は状態を治療するための候補化合物として同定された化合物を医薬組成物に製剤化する工程（ｄ）を更に含む、請求項１から５４のいずれか一項に記載の方法。
【請求項５６】
請求項１から５５のいずれか一項に記載の方法によって同定される化合物。
【請求項５７】
モノアミン再取り込み輸送体のコカイン結合部位の完全又は部分的逆アゴニストである、請求項５６に記載の化合物。
【請求項５８】
モノアミン再取り込み輸送体のコカイン結合部位の完全又は部分的なアゴニストである、請求項５６に記載の化合物。
【請求項５９】
モノアミン再取り込み輸送体のコカイン結合部位のアゴニスト又は逆アゴニストとして作用するリガンドのアンタゴニストである、請求項５６に記載の化合物。
【請求項６０】
コカイン結合部位の逆アゴニストとして作用するリガンドが、コカイン又は関連の化合物（例えば、メチルフェニデート）である、請求項５９に記載の化合物。
【請求項６１】
請求項５６から６０のいずれか一項に記載の化合物及び製薬学的に許容される担体又は賦形剤を含む、医薬組成物。
【請求項６２】
医薬において使用するための、請求項５６から６０のいずれか一項に記載の化合物。
【請求項６３】
中枢神経系におけるモノアミン神経伝達の機能不全と関連する疾患又は状態を治療するための医薬の製造における、請求項５６から６０のいずれか一項に記載の化合物の使用。
【請求項６４】
前記モノアミンがドーパミン、ノルアドレナリン、及びセロトニンからなる群から選択される、請求項６３に記載の使用。
【請求項６５】
前記モノアミンがドーパミンである、請求項６４に記載の使用。
【請求項６６】
前記疾患又は状態が、中枢神経系におけるドーパミン神経伝達の不足と関連する、請求項６５に記載の使用。
【請求項６７】
前記疾患又は状態が、パーキンソン病、ナルコレプシー、注意欠陥過活動性障害（ＡＤＨＤ）、境界性人格障害、間欠性爆発性障害、反社会的人格障害、薬物乱用、窃盗癖、及び放火狂を含む群から選択される、請求項６６に記載の使用。
【請求項６８】
前記疾患又は状態が、中枢神経系におけるドーパミン神経伝達の過剰と関連する、請求項６５に記載の使用。
【請求項６９】
前記疾患又は状態が、統合失調症、統合失調性感情障害、統合失調症様障害、薬物乱用誘発性精神病性障害、妄想性障害、躁病、及び共有精神病性障害を含む群から選択される、請求項６４に記載の使用。
【請求項７０】
前記モノアミンがノルアドレナリンである、請求項６４に記載の使用。
【請求項７１】
前記疾患又は状態が、中枢神経系においてノルアドレナリン神経伝達の不足と関連する、請求項７０に記載の使用。
【請求項７２】
前記疾患又は状態が、衝動性、注意、及び攻撃性の疾患、例えば、注意欠陥過活動性障害（ＡＤＨＤ）、境界性人格障害、間欠性爆発性障害、反社会的人格障害、薬物乱用、窃盗癖、放火狂、及び鬱病を含む群から選択される、請求項７１に記載の使用。
【請求項７３】
前記疾患又は状態が、中枢神経系のノルアドレナリン神経伝達の過剰と関連する、請求項７０に記載の使用。
【請求項７４】
前記疾患又は状態が、パニック発作、心的外傷後ストレス障害、不安神経症、恐怖症、強迫性障害を含む群から選択される、請求項７３に記載の使用。
【請求項７５】
前記モノアミンがセロトニン（５−ＨＴ）である、請求項６４に記載の使用。
【請求項７６】
前記疾患又は状態が、中枢神経系におけるセロトニン神経伝達の不足と関連する、請求項７５に記載の使用。
【請求項７７】
前記疾患又は状態が、衝動性、注意、及び／又は攻撃性の疾患、例えば、境界性人格障害、間欠性爆発性障害、反社会的人格障害、薬物乱用、窃盗癖、放火狂、摂食障害（過食症、多食症、拒食症）、不安神経症、恐怖症、強迫性障害、及び鬱病を含む群から選択される、請求項７６に記載の使用。
【請求項７８】
前記疾患又は状態が、中枢神経系におけるセロトニン神経伝達の過剰と関連する、請求項７５に記載の使用。
【請求項７９】
前記疾患又は状態が偏頭痛である、請求項７８に記載の使用。
【請求項８０】
明細書及び実施例に実質的に記載されている方法又は使用。
【請求項８１】
明細書及び実施例に実質的に記載されている化合物又は医薬組成物。
【請求項１】
（ａ）試験しようとする化合物を準備する工程；
（ｂ）モノアミン再取り込み輸送体のコカイン結合部位に結合する前記化合物の能力を試験する工程；及び
（ｃ）前記モノアミン再取り込み輸送体を介してモノアミン神経伝達物質の内側又は外側への輸送を調節する前記化合物の能力を試験する工程
を含む、中枢神経系におけるモノアミン神経伝達の機能不全と関連する疾患又は状態を治療するための候補化合物を同定するための方法であって、
試験化合物がモノアミン再取り込み輸送体のコカイン結合部位に結合し、且つ、その活性を調節し得た場合に、前記試験化合物がモノアミン神経伝達の機能不全と関連する疾患又は状態を治療するための候補化合物として同定される、方法。
【請求項２】
工程（ｃ）が、モノアミン再取り込み輸送体のコカイン結合部位の活性を調節する化合物の能力を試験する工程を含む、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
前記モノアミンが、ドーパミン、ノルアドレナリン、及びセロトニン（５−ＨＴ）からなる群から選択される、請求項１又は２に記載の方法。
【請求項４】
前記モノアミンがドーパミンである、請求項３に記載の方法。
【請求項５】
前記疾患又は状態が、中枢神経系におけるドーパミン神経伝達の不足と関連する、請求項４に記載の方法。
【請求項６】
前記疾患又は状態が、パーキンソン病、ナルコレプシー、注意欠陥過活動性障害（ＡＤＨＤ）、境界性人格障害、間欠性爆発性障害、反社会的人格障害、薬物乱用、窃盗癖、及び放火狂を含むか又はそれらからなる群から選択される、請求項５に記載の方法。
【請求項７】
前記疾患又は状態が、中枢神経系におけるドーパミン神経伝達の過剰と関連する、請求項４に記載の方法。
【請求項８】
前記疾患又は状態が、統合失調症、統合失調性感情障害、統合失調症様障害、薬物乱用誘発性精神病性障害、妄想性障害、躁病、及び共有精神病性障害からなる群から選択される、請求項７に記載の方法。
【請求項９】
前記モノアミンがノルアドレナリンである、請求項３に記載の方法。
【請求項１０】
前記疾患又は状態が、中枢神経系におけるノルアドレナリン神経伝達の不足と関連する、請求項９に記載の方法。
【請求項１１】
前記疾患又は状態が、衝動性、注意、及び攻撃性の疾患、例えば、注意欠陥過活動性障害（ＡＤＨＤ）、境界性人格障害、間欠性爆発性障害、反社会的人格障害、薬物乱用、窃盗癖、放火狂、及び鬱病を含む群から選択される、請求項１０に記載の方法。
【請求項１２】
前記疾患又は状態が、中枢神経系におけるノルアドレナリン神経伝達の過剰と関連する、請求項９に記載の方法。
【請求項１３】
前記疾患又は状態が、パニック発作、心的外傷後ストレス障害、不安神経症、恐怖症、及び強迫性障害を含む群から選択される、請求項１２に記載の方法。
【請求項１４】
前記モノアミンがセロトニン（５−ＨＴ）である、請求項３に記載の方法。
【請求項１５】
前記疾患又は状態が、中枢神経系におけるセロトニン神経伝達の不足と関連する、請求項１４に記載の方法。
【請求項１６】
前記疾患又は状態が、衝動性、注意、及び／又は攻撃性の疾患、例えば、境界性人格障害、間欠性爆発性障害、反社会的人格障害、薬物乱用、窃盗癖、放火狂、摂食障害（過食症、多食症、拒食症）、不安神経症、恐怖症、強迫性障害、及び鬱病を含む群から選択される、請求項１５に記載の方法。
【請求項１７】
前記疾患又は状態が中枢神経系におけるセロトニン神経伝達の過剰と関連する、請求項１４に記載の方法。
【請求項１８】
前記疾患又は状態が偏頭痛である、請求項１７に記載の方法。
【請求項１９】
工程（ｂ）及び／又は（ｃ）が、ｉｎ ｖｉｔｒｏ受容体結合、ｉｎ ｖｉｔｒｏ神経伝達物質放出及び／又は再取り込み（例えば、脳切片又はシナプトソームを使用する）、ｉｎ ｖｉｔｒｏ電気生理学、ｉｎ ｖｉｔｒｏ又はｉｎ ｖｉｖｏバイオセンサー、ｉｎ ｖｉｖｏミクロダイアリシス、或いはｉｎ ｖｉｖｏボルタンメトリーからなる群から選択される方法によって実施される、請求項１から１８のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２０】
工程（ｃ）が、モノアミン再取り込み輸送体の活性を受動的に調節する化合物の能力を試験する工程を含む、請求項１から１９のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２１】
工程（ｃ）が、モノアミン再取り込み輸送体の活性を能動的に調節する化合物の能力を試験する工程を含む、請求項１から２０のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２２】
工程（ｃ）が、モノアミン再取り込み輸送体のアンタゴニストとして作用する化合物の能力を試験する工程を含む、請求項１から２１のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２３】
工程（ｃ）が、モノアミン再取り込み輸送体の逆アゴニストとして作用する化合物の能力を試験する工程を含む、請求項１から２２のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２４】
工程（ｃ）が、モノアミン再取り込み輸送体の完全な逆アゴニストとして作用する化合物の能力を試験する工程を含む、請求項２３に記載の方法。
【請求項２５】
工程（ｃ）が、モノアミン再取り込み輸送体の部分的逆アゴニストとして作用する化合物の能力を試験する工程を含む、請求項２３に記載の方法。
【請求項２６】
工程（ｃ）が、モノアミン再取り込み輸送体のアゴニストとして作用する化合物の能力を試験する工程を含む、請求項１から２５のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２７】
工程（ｃ）が、モノアミン再取り込み輸送体の完全なアゴニストとして作用する化合物の能力を試験する工程を含む、請求項２６に記載の方法。
【請求項２８】
工程（ｃ）が、モノアミン再取り込み輸送体の部分的アゴニストとして作用する化合物の能力を試験する工程を含む、請求項２６に記載の方法。
【請求項２９】
工程（ｃ）が、モノアミン再取り込み輸送体のアゴニスト又は逆アゴニストの効果をアンタゴナイズする化合物の能力を試験する工程を含む、請求項１から２８のいずれか一項に記載の方法。
【請求項３０】
工程（ｃ）が、ｉｎ ｖｉｔｒｏにおけるモノアミン再取り込み輸送体の活性を調節する化合物の能力を試験する工程を含むか又は当該工程からなる、請求項１から２９のいずれか一項に記載の方法。
【請求項３１】
工程（ｃ）が、ｉｎ ｖｉｖｏにおけるモノアミン再取り込み輸送体の活性を調節する化合物の能力を試験する工程を含むか又は当該工程からなる、請求項１から３０のいずれか一項に記載の方法。
【請求項３２】
工程（ｃ）が、モノアミン再取り込み輸送体のコカイン結合部位において作用する化合物の能力を試験する工程を含むか又は当該工程からなる、請求項２０から３１のいずれか一項に記載の方法。
【請求項３３】
工程（ｃ）が、ドーパミン再取り込み輸送体のコカイン結合部位において逆アゴニスト（完全又は部分）、アゴニスト（完全又は部分）、又はアンタゴニストとして作用する化合物の能力を試験する工程を含むか又は当該工程からなる、請求項３２に記載の方法。
【請求項３４】
工程（ｃ）が、
（Ａ）灌流によってモノアミン再取り込み輸送体部位を含む組織切片又は細胞（又はそれらの細胞亜分画）からの自発的なモノアミン放出のｉｎ ｖｉｔｒｏ測定；
（Ｂ）灌流によるモノアミン再取り込み輸送体部位を含む組織切片又は細胞（又はそれらの細胞亜分画）からのモノアミン再取り込みのｉｎ ｖｉｔｒｏ測定；
（Ｃ）灌流によるモノアミン再取り込み輸送体部位を含む組織切片又は細胞（又はそれらの細胞亜分画）からの電気的に誘発されたモノアミン放出のｉｎ ｖｉｔｒｏ測定；
（Ｄ）電気生理学的技術による、モノアミン再取り込み輸送体部位を含む組織切片又は細胞（又はそれらの細胞亜分画）からの自発的及び／又は電気的に誘発されたモノアミン流出のｉｎ ｖｉｔｒｏ測定；
（Ｅ）１つ又は複数のバイオセンサーを使用する、自発的及び／又は電気的に誘発したモノアミン流出のｉｎ ｖｉｔｒｏ及び／又はｉｎ ｖｉｖｏ測定；
（Ｆ）動物におけるマイクロダイアリシスによる細胞発火依存性及び細胞発火非依存性モノアミン流出のｉｎ ｖｉｖｏ測定；
（Ｇ）ボルタンメトリー技術による、動物における自発的及び／又は電気的に誘発されたモノアミン流出のｉｎ ｖｉｖｏ測定
の技術の一つ又は複数を使用して、モノアミン再取り込み輸送体の活性を調節する化合物の能力を試験する工程を含む、請求項１から３３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項３５】
（Ａ）、（Ｂ）、及び（Ｃ）が、標識したモノアミンの放出又は再取り込みのｉｎ ｖｉｔｒｏ測定を含む、請求項３４に記載の方法。
【請求項３６】
（Ｅ）のバイオセンサーが酵素、抗体、及び／又は神経伝達物質受容体で被覆されている、請求項３４に記載の方法。
【請求項３７】
工程（ｃ）が、以下：
Ａのみ、Ｂのみ、Ｃのみ、Ｄのみ、Ｅのみ、Ｆのみ、Ｇのみ、Ａ+Ｂ、Ａ+Ｃ、Ａ+Ｄ、Ａ+Ｂ+Ｃ、Ａ+Ｂ+Ｃ+Ｄ、Ａ+Ｂ+Ｄ、Ｂ+Ｃ、Ｂ+Ｄ、Ｃ+Ｂ、Ｃ+Ｄ、Ａ+Ｃ+Ｅ (ｉｎ ｖｉｔｒｏ)、Ａ+Ｃ+Ｅ (ｉｎ ｖｉｖｏ)、Ａ+Ｃ+Ｆ、Ａ+Ｃ+Ｇ、Ａ+Ｂ+Ｃ+Ｅ (ｉｎ ｖｉｔｒｏ)、Ａ+Ｂ+Ｃ+Ｅ (ｉｎ ｖｉｖｏ)、Ａ+Ｂ+Ｃ+Ｆ、Ａ+Ｂ+Ｃ+Ｇ、Ａ+Ｄ+Ｅ (ｉｎ ｖｉｔｒｏ)、Ａ+Ｄ+Ｅ (ｉｎ ｖｉｖｏ)、Ａ+Ｄ+Ｆ、Ａ+Ｄ+Ｇ、Ａ+Ｂ+Ｄ+Ｅ (ｉｎ ｖｉｔｒｏ)、Ａ+Ｂ+Ｄ+Ｅ (ｉｎ ｖｉｖｏ)、Ａ+Ｂ+Ｄ+Ｆ、Ａ+Ｂ+Ｄ+Ｇ
の技術手段／組み合わせの一つ又は複数を含む、請求項３４から３６のいずれか一項に記載の方法。
【請求項３８】
モノアミン再取り込み輸送体部位を含む細胞が、組織切片に存在するか又は由来する、請求項３４から３７のいずれか一項に記載の方法。
【請求項３９】
前記組織切片が、脳、例えば、脳のドーパミン作動性領域に由来する、請求項３８に記載の方法。
【請求項４０】
モノアミン再取り込み輸送体部位を含む細胞が、培養物中に維持されている、請求項３４から３９のいずれか一項に記載の方法
【請求項４１】
前記細胞が、初代細胞及び不死化細胞（すなわち、細胞株）からなる群から選択される、請求項３４から４０のいずれか一項に記載の方法。
【請求項４２】
前記細胞がモノアミン再取り込み輸送体を発現するように遺伝子操作されている、請求項３４から４１のいずれか一項に記載の方法。
【請求項４３】
モノアミン再取り込み輸送体部位を含む細胞が血液細胞である、請求項３４から４２のいずれか一項に記載の方法。
【請求項４４】
モノアミン再取り込み輸送体部位を含む細胞が腎血管に存在するか又は由来する、請求項３４から４２のいずれか一項に記載の方法。
【請求項４５】
モノアミン放出又は再取り込みがシナプトソームにおいて測定される、請求項３４から４０のいずれか一項に記載の方法。
【請求項４６】
モノアミン再取り込み輸送体部位を含む細胞がヒトに由来する、請求項３４から４５のいずれか一項に記載の方法。
【請求項４７】
モノアミン再取り込み輸送体部位を含む細胞が、非ヒトの種、例えば、マウス又はラットなどのげっ歯類に由来する、請求項３４から４５のいずれか一項に記載の方法。
【請求項４８】
前記ｉｎ ｖｉｖｏ測定が脳において実施される、請求項３４から３７のいずれか一項に記載の方法。
【請求項４９】
前記ｉｎ ｖｉｖｏ測定が、モノアミン再取り込み輸送体を含む細胞が豊富な脳の領域において実施される、請求項４８に記載の方法。
【請求項５０】
前記ｉｎ ｖｉｖｏ測定が、脳のドーパミン作動性領域、例えば、基底核において実施される、請求項４９に記載の方法。
【請求項５１】
前記ｉｎ ｖｉｖｏ測定が、ヒト又は非ヒトの種、例えば、マウス又はラットなどのげっ歯類において実施される、請求項４８から５０のいずれか一項に記載の方法。
【請求項５２】
工程（ｃ）が、モノアミン再取り込み輸送体の活性を調節する異なる用量の試験化合物の能力を試験する工程を含む、請求項１から５１のいずれか一項に記載の方法。
【請求項５３】
灌流による組織からのモノアミンの放出のｉｎ ｖｉｔｒｏ測定が、高用量の試験化合物（例えば、１×１０−５Ｍ）及び低用量の試験化合物（例えば、１×１０−７Ｍ）を使用して実施される、請求項３４から４７のいずれか一項に記載の方法。
【請求項５４】
悪性又は望ましくない特性について試験化合物をカウンタースクリーニングする工程を更に含む、請求項１から５３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項５５】
中枢神経系におけるモノアミン神経伝達の機能不全と関連する疾患又は状態を治療するための候補化合物として同定された化合物を医薬組成物に製剤化する工程（ｄ）を更に含む、請求項１から５４のいずれか一項に記載の方法。
【請求項５６】
請求項１から５５のいずれか一項に記載の方法によって同定される化合物。
【請求項５７】
モノアミン再取り込み輸送体のコカイン結合部位の完全又は部分的逆アゴニストである、請求項５６に記載の化合物。
【請求項５８】
モノアミン再取り込み輸送体のコカイン結合部位の完全又は部分的なアゴニストである、請求項５６に記載の化合物。
【請求項５９】
モノアミン再取り込み輸送体のコカイン結合部位のアゴニスト又は逆アゴニストとして作用するリガンドのアンタゴニストである、請求項５６に記載の化合物。
【請求項６０】
コカイン結合部位の逆アゴニストとして作用するリガンドが、コカイン又は関連の化合物（例えば、メチルフェニデート）である、請求項５９に記載の化合物。
【請求項６１】
請求項５６から６０のいずれか一項に記載の化合物及び製薬学的に許容される担体又は賦形剤を含む、医薬組成物。
【請求項６２】
医薬において使用するための、請求項５６から６０のいずれか一項に記載の化合物。
【請求項６３】
中枢神経系におけるモノアミン神経伝達の機能不全と関連する疾患又は状態を治療するための医薬の製造における、請求項５６から６０のいずれか一項に記載の化合物の使用。
【請求項６４】
前記モノアミンがドーパミン、ノルアドレナリン、及びセロトニンからなる群から選択される、請求項６３に記載の使用。
【請求項６５】
前記モノアミンがドーパミンである、請求項６４に記載の使用。
【請求項６６】
前記疾患又は状態が、中枢神経系におけるドーパミン神経伝達の不足と関連する、請求項６５に記載の使用。
【請求項６７】
前記疾患又は状態が、パーキンソン病、ナルコレプシー、注意欠陥過活動性障害（ＡＤＨＤ）、境界性人格障害、間欠性爆発性障害、反社会的人格障害、薬物乱用、窃盗癖、及び放火狂を含む群から選択される、請求項６６に記載の使用。
【請求項６８】
前記疾患又は状態が、中枢神経系におけるドーパミン神経伝達の過剰と関連する、請求項６５に記載の使用。
【請求項６９】
前記疾患又は状態が、統合失調症、統合失調性感情障害、統合失調症様障害、薬物乱用誘発性精神病性障害、妄想性障害、躁病、及び共有精神病性障害を含む群から選択される、請求項６４に記載の使用。
【請求項７０】
前記モノアミンがノルアドレナリンである、請求項６４に記載の使用。
【請求項７１】
前記疾患又は状態が、中枢神経系においてノルアドレナリン神経伝達の不足と関連する、請求項７０に記載の使用。
【請求項７２】
前記疾患又は状態が、衝動性、注意、及び攻撃性の疾患、例えば、注意欠陥過活動性障害（ＡＤＨＤ）、境界性人格障害、間欠性爆発性障害、反社会的人格障害、薬物乱用、窃盗癖、放火狂、及び鬱病を含む群から選択される、請求項７１に記載の使用。
【請求項７３】
前記疾患又は状態が、中枢神経系のノルアドレナリン神経伝達の過剰と関連する、請求項７０に記載の使用。
【請求項７４】
前記疾患又は状態が、パニック発作、心的外傷後ストレス障害、不安神経症、恐怖症、強迫性障害を含む群から選択される、請求項７３に記載の使用。
【請求項７５】
前記モノアミンがセロトニン（５−ＨＴ）である、請求項６４に記載の使用。
【請求項７６】
前記疾患又は状態が、中枢神経系におけるセロトニン神経伝達の不足と関連する、請求項７５に記載の使用。
【請求項７７】
前記疾患又は状態が、衝動性、注意、及び／又は攻撃性の疾患、例えば、境界性人格障害、間欠性爆発性障害、反社会的人格障害、薬物乱用、窃盗癖、放火狂、摂食障害（過食症、多食症、拒食症）、不安神経症、恐怖症、強迫性障害、及び鬱病を含む群から選択される、請求項７６に記載の使用。
【請求項７８】
前記疾患又は状態が、中枢神経系におけるセロトニン神経伝達の過剰と関連する、請求項７５に記載の使用。
【請求項７９】
前記疾患又は状態が偏頭痛である、請求項７８に記載の使用。
【請求項８０】
明細書及び実施例に実質的に記載されている方法又は使用。
【請求項８１】
明細書及び実施例に実質的に記載されている化合物又は医薬組成物。
【図１】
【図２】
【図３】
【図４】
【図５】
【図６】
【図７】
【図８】
【図９】
【図１０】
【図１１】
【図１２】
【図１３】
【図１４】
【図１５】
【図１６】
【図１７】
【図２】
【図３】
【図４】
【図５】
【図６】
【図７】
【図８】
【図９】
【図１０】
【図１１】
【図１２】
【図１３】
【図１４】
【図１５】
【図１６】
【図１７】
【公表番号】特表２０１０−５２２７３６（Ｐ２０１０−５２２７３６Ａ）
【公表日】平成２２年７月８日（２０１０．７．８）
【国際特許分類】
【出願番号】特願２０１０−５００３６１（Ｐ２０１０−５００３６１）
【出願日】平成２０年３月２８日（２００８．３．２８）
【国際出願番号】ＰＣＴ／ＧＢ２００８／００１１２６
【国際公開番号】ＷＯ２００８／１１９９７８
【国際公開日】平成２０年１０月９日（２００８．１０．９）
【出願人】（５０９２６８４７３）レナスキー・コンサルタンシー・リミテッド (1)
【Ｆターム（参考）】
【公表日】平成２２年７月８日（２０１０．７．８）
【国際特許分類】
【出願日】平成２０年３月２８日（２００８．３．２８）
【国際出願番号】ＰＣＴ／ＧＢ２００８／００１１２６
【国際公開番号】ＷＯ２００８／１１９９７８
【国際公開日】平成２０年１０月９日（２００８．１０．９）
【出願人】（５０９２６８４７３）レナスキー・コンサルタンシー・リミテッド (1)
【Ｆターム（参考）】
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