活性酸素量測定による感染判定方法，ストレス判定方法および抗酸化能判定方法
【課題】病原体の感染の有無を手軽にかつ汎用的に判定可能な活性酸素量測定による感染判定方法を提供する。
【解決手段】唾液中の白血球が細菌，ウイルス等の病原体を貪食する際に発生する活性酸素量を測定し、測定された活性酸素量に基づいて病原体の感染の有無を判定する。活性酸素量を測定する方法としては、白血球が病原体を貪食する際に発生するフォトンを測定する化学発光法や，活性酸素種センサを用いて活性酸素量を直接測定する方法等がある。これにより、風邪やインフルエンザ等の感染症にかかり始めていないかを簡単に判定できる。
【解決手段】唾液中の白血球が細菌，ウイルス等の病原体を貪食する際に発生する活性酸素量を測定し、測定された活性酸素量に基づいて病原体の感染の有無を判定する。活性酸素量を測定する方法としては、白血球が病原体を貪食する際に発生するフォトンを測定する化学発光法や，活性酸素種センサを用いて活性酸素量を直接測定する方法等がある。これにより、風邪やインフルエンザ等の感染症にかかり始めていないかを簡単に判定できる。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は活性酸素量測定による感染判定方法，ストレス判定方法および抗酸化能判定方法に関し、特に唾液中に含まれる白血球が病原体等を貪食する際に発生する活性酸素量を測定することによる感染判定方法，ストレス判定方法および抗酸化能判定方法に関する。
【背景技術】
【０００２】
従来の風邪，インフルエンザ等の感染症の感染判定方法としては、鼻咽腔の擦過標本や分泌液を用い公知の免疫蛍光抗体法や公知の酵素抗体法により、病原菌やインフルエンザウイルス抗原を証明する方法が一般的であった（例えば、非特許文献１参照）。
【０００３】
ところで、唾液中には、好中球，好酸球，マクロファージ等の白血球が含まれている。これらの白血球は、健康時の唾液中にはほとんど存在しないが、口腔内が細菌やウイルス等の病原体の侵入を受け始めると、それを食い止めようとして貪食殺菌能力のある白血球（貪食白血球＝好中球，好酸球，マクロファージ等）が唾液中に集まってくることが知られている。中でも、好中球は病原体侵入後の機動性が高く、しかも圧倒的な数によって細菌，ウイルス等の病原体の侵入を食い止めようとして働く。貪食白血球は、貪食時に主に活性酸素によって病原体を殺し、活性酸素放出時にその量に比例して極微量の光（フォトン）を発生する。化学発光法は、この光（フォトン）を検出して増幅・定量する方法であり、病原体侵入に連動して集まる貪食白血球を、病原体侵入開始から感染症発現までの広範囲に渡って高感度で検出可能である（例えば、特許文献１参照）。また、活性酸素量は、活性酸素種センサを用いて直接測定することもできる（例えば、特許文献２参照）。
【０００４】
また、従来のストレス判定方法は、多数の質問が並べられた問診表に逐一回答して総合的にストレスがあるかないかを判定する精神科的な診断方法が一般的であった。これに対して、科学的なストレス判定方法の一例として、唾液中に含まれるストレスマーカーの量を測定する方法が知られている。例えば、ストレスマーカーとして信頼性の高い分泌型ＩｇＡ抗体とコルチゾール（cortisol）を測定対象物質に選び、高い選択性を持つ抗原抗体反応を微小な反応場で迅速化し、さらに電気泳動による高性能分離を組み合わせた分析法が提案されている（例えば、非特許文献２参照）。
【０００５】
ところで、ストレス時にも、唾液中に貪食白血球が集まり、生体の過剰防衛反応として口腔内粘膜などを攻撃して粘膜等の荒れ（口内炎等）を招くおそれがあることが知られている。
【０００６】
さらに、従来の抗酸化能判定方法の一例としては、リノール酸（linoleic acid）の自動酸化モデル系による方法が知られている。この方法は、リノール酸の酸化を抗酸化物質が抑制するか否かをα−トコフェロール（tocopherol）などの既知の抗酸化剤を対照として評価する方法である（例えば、非特許文献３参照）。
【特許文献１】特開２００４−２５１８７０号公報
【特許文献２】特開２００５−１０６４９０号公報
【非特許文献１】「インフルエンザＱ＆Ａ」、[online]、国立感染症研究所感染症情報センター、［平成１８年６月２２日検索］、インターネット＜http://idsc.nih.go.jp/disease/influenza/fluQA/QAdoc01.html#q02＞
【非特許文献２】「唾液でストレスを手軽に測るラボチップの開発に成功」[online]、独立行政法人産業技術総合研究所、［平成１８年６月２２日検索］、インターネット＜http://www.aist.go.jp/aist_j/press_release/pr2005/pr20051102/pr20051102.html＞
【非特許文献３】「食品の機能を評価する」、[online]、財団法人日本食品分析センター、［平成１８年６月２２日検索］、インターネット＜http://www.jfrl.or.jp/other/jfrlnews/news_no22.pdf＞
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００７】
従来の風邪，インフルエンザ等の感染症の感染判定方法は、鼻咽腔の擦過標本や分泌液を用い、公知の免疫蛍光抗体法や公知の酵素抗体法により、病原菌やインフルエンザウイルス抗原等の病原体を証明する方法であったので、判定できる感染症の範囲が限定されており、汎用的に使用できるものではないという問題点があった。
【０００８】
また、従来のストレス判定方法は、唾液中に含まれるストレスマーカーの量を測定するものであるが、唾液には非常に数多くの生体物質が含まれており、またストレス関連物質は微量であり濃度はたいへん低いので、大型の分析機器を駆使しても判定が容易でないという問題点があった。
【０００９】
さらに、従来の抗酸化能判定方法としては、リノール酸の酸化を抗酸化物質が抑制するか否かをα−トコフェロールなどの既知の抗酸化剤を対照として評価する方法であったが、生体において実際に抗酸化能が発揮されるかどうかを評価することができないという問題点があった。
【００１０】
本発明の目的は、唾液中に含まれる貪食白血球が細菌やウイルス等の病原体を貪食する際に発生する活性酸素量を測定することにより、生体への病原体の感染の有無を手軽にかつ汎用的に判定可能な活性酸素量測定による感染判定方法を提供することにある。
【００１１】
また、本発明の他の目的は、ストレスによって唾液中に集まってくる貪食白血球が食細胞刺激剤を貪食する際に発生する活性酸素量を測定することにより、生体の過剰防御作用を発現させるストレスを判定可能な活性酸素量測定によるストレス判定方法を提供することにある。
【００１２】
さらに、本発明の別の目的は、抗酸化物質がある場合とない場合とで唾液中に含まれる貪食白血球が食細胞刺激剤を貪食する際に発生する活性酸素量を測定して比較することにより、抗酸化物質の抗酸化能の有無を判定する活性酸素量測定による抗酸化能判定方法を提供することにある。
【課題を解決するための手段及び発明の効果】
【００１３】
請求項１記載の活性酸素量測定による感染判定方法は、唾液中の白血球が病原体を貪食する際に発生する活性酸素量を測定する工程と、測定された活性酸素量に基づいて病原体の感染の有無を判定する工程と、を含むことを特徴とする。請求項１記載の活性酸素量測定による感染判定方法によれば、唾液（うがいのすすぎ水等）に含まれる貪食白血球が細菌，ウイルス等の病原体を貪食する際に発生する活性酸素量を測定することにより、風邪やインフルエンザ等の感染症にかかり始めていないかどうかを簡単に判定できるようになる。この判定方法ならば、採血の必要も無いため、誰でも手軽に感染の有無を判定することができ、自覚症状を自ら訴えにくい子供などの健康管理に大いに役立てられると期待される。
【００１４】
請求項２記載の活性酸素量測定によるストレス判定方法は、少なくとも唾液と食細胞刺激剤とを混合する工程と、混合物中の白血球が前記食細胞刺激剤を貪食する際に発生する活性酸素量を測定する工程と、測定された活性酸素量に基づいてストレスの有無を判定する工程と、を含むことを特徴とする。請求項２記載の活性酸素量測定によるストレス判定方法によれば、仕事，運動などの肉体的ストレスや面接，試験などの精神的ストレスがかかる事柄の前後で測定し、これらを比較した結果、活性酸素量に大きな違いがあったとすると、肉体的ストレスや精神的ストレスによって口腔内白血球の貪食作用により活性酸素が生成されるので、うがいをしてそのすすぎ水（唾液）から活性酸素量を測定することにより、ストレスの有無を判定することができる。
【００１５】
請求項３記載の活性酸素量測定による抗酸化能判定方法は、少なくとも唾液および食細胞刺激剤を混合して第１混合物を作成する工程と、前記第１混合物中の白血球が前記食細胞刺激剤を貪食する際に発生する活性酸素量を測定して第１の活性酸素量を得る工程と、少なくとも唾液，食細胞刺激剤および抗酸化物質を混合して第２混合物を作成する工程と、前記第２混合物中の白血球が前記食細胞刺激剤を貪食する際に発生する活性酸素量を測定して第２の活性酸素量を得る工程と、前記第１の活性酸素量と前記第２の活性酸素量とを比較して前記抗酸化物質の抗酸化能の有無を判定する工程と、を含むことを特徴とする。請求項３記載の活性酸素量測定による抗酸化能判定方法によれば、抗酸化物質には活性酸素を除去する働きがある。抗酸化物質を多く含んだ「抗酸化食品」を摂る前後でうがいをしてそのすすぎ水（唾液）から活性酸素量を測定することにより、活性酸素量が小さいものは抗酸化物資によって体内の活性酸素が効果的に除去され、そうでないものは抗酸化物質の効果があまり現れなかったと、その抗酸化能を生体を使って確かめることができる。
【発明を実施するための最良の形態】
【００１６】
以下、本発明の実施の形態について図面を参照しながら説明する。
【実施例１】
【００１７】
図１および図２は、本発明の実施例１に係る活性酸素量測定による感染判定方法に用いられる微弱発光測定装置Ｄの正面図および背面図である。この微弱発光測定装置Ｄは、化学発光法に基づいてフォトンをカウントして活性酸素量を測定するものであり、すでに公知のものである（例えば、http://www.tokken.jp/tetralight.html参照）。このため、詳細な説明は省くが、微弱発光測定装置Ｄは、図１に示すように、略直方体の筐体１の表面に、電源スイッチ１１と、スタートボタン１２と、スライド扉１３とが配設されている。また、図２に示すように、筐体１の背面には、商用電源（ＡＣ１００Ｖ）のコードを接続する電源コネクタ１４と、商用電源（ＡＣ１００Ｖ）のヒューズホルダ１５と、ＲＳ−２３２Ｃ等の通信コネクタ１６とが配設されている。
【００１８】
図３は、微弱発光測定装置Ｄの透過側面図である。筐体１内には、ステッピングモータ等の正逆回転可能なモータ２１と、唾液，食細胞刺激剤および／または増光剤を入れた試料セル２５を保持しつつ正逆回転により攪拌する回転ステージ２２と、唾液中の貪食白血球が病原体を貪食する際に発生するフォトンを検出する光電子増倍管４０等が配設されている。
【００１９】
回転ステージ２２は、図４に示すように、円盤状に形成され、試料セル２５を上方から押し込んで密着固定する４つの配置孔２２ａ〜２２ｄが等間隔に穿設されている。回転ステージ２２の回転軸内には試料セル２５中の唾液等を温めるヒータ２０が収納されている。ヒータ２０は、温度検出センサ（図示せず）を備え、制御コンピュータ１０（図５参照）により恒温（３７±０．１℃）に制御される。図４で見て配置孔２２ａの位置に回転移動した試料セル２５の底面が光電子増倍管４０の真上になるように配置する。モータ２１の出力軸にプーリを固定し、プーリと回転ステージ２２の下端外周面との間にベルト（図示せず）を掛け渡す。回転ステージ２２の外周面には、４つの位置検出用突片２３ａ〜２３ｄが等間隔に取り付けられている。位置検出用突片２３ａ，２３ｄは長片であり、位置検出用突片２３ｂ，２３ｃは短片となっている。一方、筐体１には、図４で見て、４５度，１３５度，２７０度，および３１５度の各位置に、位置検出用突片２３ａ〜２３ｄを検出する光センサ２４ａ〜２４ｄが配置されている。光センサ２４ａ，２４ｂは透過型光センサであり、光センサ２４ｃ，２４ｄは反射型光センサである。このような位置検出用突片２３ａ〜２３ｄおよび光センサ２４ａ〜２４ｄにより、回転ステージ２２に配置された試料セル２５を位置決めし、また正逆回転して攪拌する（詳細は後述）。
【００２０】
図５に示すように、微弱発光測定装置Ｄは、制御コンピュータ１０と、試料セル２５の温度を例えば３７±０．１°Ｃに加熱保温するヒータ２０と、モータ２１，回転ステージ２２を含む攪拌回路３０と、試料セル２５内の唾液に含まれる好中球，好酸球，マクロファージ等の貪食白血球が病原体を貪食する際に発生するフォトンを検出する光電子増倍管４０と、光電子増倍管４０により検出されたフォトンの数をカウントするフォトンカウント回路５０とを含んで構成されている。
【００２１】
制御コンピュータ１０は、図示しないＣＰＵ（Central Processing Unit），ＲＯＭ（Read Only Memory），ＲＡＭ（Random Access Memory）等により構成されており、フォトンカウント回路５０によりカウントされたフォトン数（極微光量）をパーソナルコンピュータ（以下、パソコンと略記する）１００に出力する。
【００２２】
次に、本実施例１に係る活性酸素量測定による感染判定方法の手順を、図６に示すフローチャートを参照して微弱発光測定装置Ｄの動作とともに説明する。
【００２３】
まず、準備として、微弱発光測定装置Ｄの通信コネクタ１６とパソコン１００の背面にあるシリアルポート（図示せず）とをＲＳ−２３２Ｃリバースケーブル等の通信ケーブルで接続するとともに、電源コネクタ１４に商用電源（ＡＣ１００Ｖ）の電源コードを差し込む。次に、電源スイッチ１１を操作することにより、微弱発光測定装置Ｄに電源を投入する。電源スイッチ１１に内蔵されている電源ランプの点灯を確認した上で、微弱発光測定装置Ｄが安定するまで約３０分程度待つ。次に、パソコン１００の電源を入れる。デスクトップにある微弱発光測定装置Ｄのアイコンをクリックして、専用アプリケーションプログラムを立ち上げる。この専用アプリケーションプログラムは、パソコン１００と微弱発光測定装置Ｄとの通信を可能にする。
【００２４】
微弱発光測定装置Ｄの安定化後、試料セル２５を用意し、判定対象のうがいのすすぎ水（唾液）を入れる（図６のＡ１）。
【００２５】
次に、必要に応じて、試料セル２５に食細胞刺激剤および／または増光剤を加えて十分に混ぜ合わせる（図６のＡ２）。食細胞刺激剤としては、ザイモザン（Zymosan）を使用することができるが、この他にＣｏｎＡ（Concanavalin A），ＰＨＡ（Phytohemagglutinin），ＰＷＭ（Pokeweed Mitogen）等を使用することもできる。また、増光剤としては、一般的にルミノール（luminol）を使用することができるが、この他にルシゲニン（Lucigenin），ウミホタル・ルシフェリン誘導体（Cypridina Luciferin Analogue）等を使用することもできる。
【００２６】
続いて、試料セル２５を微弱発光測定装置Ｄにセットする（Ａ３）。詳しくは、微弱発光測定装置Ｄのスライド扉１３を取手１３ａを持って左方にスライドさせると、回転ステージ２２の一部が外部に露呈するので、露呈した配置孔（図４で見て配置孔２２ｃの位置にある配置孔）に試料セル２５を所定深さまで押し込んでセットした後、スライド扉１３を取手１３ａを持って右方にスライドさせることにより閉じる。スライド扉１３の開閉はマイクロスイッチ（図示せず）が検出する。このマイクロスイッチの検出により、制御コンピュータ１０は、微弱発光測定装置Ｄが動作可能状態になったと判断する。なお、回転ステージ２２に４つの配置孔２２ａ〜２２ｄが設けられているので、同時に４つまでの試料セル２５の測定が可能である。
【００２７】
次に、スタートボタン１２を押下して、微弱発光測定装置Ｄにセットされた試料セル２５の測定を開始する（図６のＡ４）。詳しくは、回転ステージ２２の配置孔２２ｃにセットした状態では、試料セル２５が光電子増倍管４０に対応した位置にないので、制御コンピュータ１０は、モータ２１を駆動して回転ステージ２２を時計回りに１８０度回転して、光電子増倍管４０に対応した位置（図４で見て配置孔２２ａの位置）に移動させる。この移動は、光センサ２４ａ，２４ｂ，２４ｄの出力に基づいて制御される。すなわち、配置孔２２ｃにセットされた試料セル２５の配置孔２２ａの位置への移動は、位置検出用突片２３ｂの光センサ２４ｄによる検出、かつ位置検出用突片２４ｄの光センサ２４ｂによる検出によって判定される。なお、位置検出用突片２３ｃは短片なので、透過型の光センサ２４ａによっては検出されない。
【００２８】
次に、制御コンピュータ１０は、回転ステージ２２を反時計回りおよび時計回りに４５度ずつ回転させることを約５秒間繰り返すことにより、試料セル２５の内容物を攪拌する（図６のＡ５）。この攪拌は、光センサ２４ｃ，２４ｄの出力に基づいて制御される。詳しくは、位置検出用突片２３ｂの光センサ２４ｄ，２４ｃでの検出によって判定される。
【００２９】
続いて、制御コンピュータ１０は、光電子増倍管４０に対応した位置（図４で見て配置孔２２ａの位置）にある試料セル２５の内容物に含まれる貪食白血球が細菌，ウイルス等の病原体を貪食する際に発生するフォトンをカウントする（図６のＡ６）。詳しくは、制御コンピュータ１０は、ヒータ２０への通電により試料セル２５を恒温（３７±０．１℃）に維持し約２０分間放置して病原体および貪食白血球をインキュベートしながら、試料セル２５内から化学発光されるフォトンを光電子増倍管４０で検出し、フォトンカウント回路５０によりカウントする。
【００３０】
そして、制御コンピュータ１０は、１分間毎のカウント値（単位はＣＰＭ）に基づく微弱発光量をパソコン１００に出力する（図６のＡ７）。
【００３１】
パソコン１００は、微弱発光測定装置Ｄから受信した微弱発光量をディスプレイに表示させる。例えば、測定中の微弱発光量の測定結果は、グラフとデータとで同時に表示される。グラフ表示では測定回数に応じた微弱発光量の経時的変化をグラフで、データ表示では測定結果の微弱発光量を数値で、それぞれ表示する。単位はいずれもＲＬＵ（Relative Light Unit ；相対発光量）である。そして、パソコン１００は、微弱発光測定装置Ｄからの微弱発光量と予め測定された病原体の感染が疑われる活性酸素量に対応する微弱発光量とを比較し、微弱発光測定装置Ｄからの微弱発光量が予め測定された病原体の感染が疑われる活性酸素量に対応する微弱発光量の閾値を越えている場合には、病原体の感染が疑われる旨のメッセージをディスプレイに表示する（図６のＡ８）。
【００３２】
微弱発光測定装置Ｄにセットされた各試料セル２５に対してステップＡ５〜Ａ８が繰り返され、全ての試料セル２５に対する測定が終了したならば、パソコン１００のディスプレイの「終了」のボタンをクリックして、専用アプリケーションプログラムを終了してから、電源ボタン１１を押圧操作することにより微弱発光測定装置Ｄの電源を切ることができる。
【００３３】
実施例１によれば、唾液を採取し、唾液中の白血球が唾液中の病原体を貪食する際に発生する活性酸素量を化学発光法により測定して活性酸素量を得、測定された活性酸素量を予め測定されている基準活性酸素量と比較することにより、病原体の感染の有無を判定することができる。具体的には、うがいのすすぎ水に含まれる貪食白血球が細菌，ウイルス等の病原体を貪食する際に発生する活性酸素量を測定することにより、風邪やインフルエンザ等の感染症にかかり始めていないかを簡単に判定できるようになる。なお、本実施例１では、風邪やインフルエンザ等の感染症の感染判定を例示したが、予め測定された病原体の感染が疑われる活性酸素量に対応する微弱発光量の閾値を病原体に応じて変更することにより、本発明は他の多くの病原体の感染判定に汎用的に適用することができる。例えば、口内炎や歯周病等の感染判定にも用いることができる。
【実施例２】
【００３４】
図７は、本発明の実施例２に係る活性酸素量測定によるストレス判定方法の手順を示すフローチャートである。本実施例２に係る活性酸素量測定によるストレス判定方法では、まず、唾液，食細胞刺激剤および増光剤を混合して混合物を作成し（Ｂ１）、次に混合物中の白血球が食細胞刺激剤を貪食する際に発生する活性酸素量を化学発光法により測定して活性酸素量を得（Ｂ２）、測定された活性酸素量を予め測定されている基準活性酸素量と比較してストレスの有無を判定する（Ｂ３）。
【００３５】
なお、本実施例２に係る活性酸素量測定によるストレス判定方法でも、実施例１に係る活性酸素量測定による感染判定方法と同様の微弱発光測定装置Ｄおよびパソコン１００を用いて測定が行われるが、それらについてはすでに説明したので詳しい説明を割愛する。
【００３６】
このように構成された実施例２に係る活性酸素量測定によるストレス判定方法では、測定された活性酸素量を予め測定されている基準活性酸素量と比較してストレスの有無を判定するようにしたが、仕事，運動などの肉体的ストレスや面接，試験などの精神的ストレスがかかる事柄の前後で測定をするようにしてもよい。これらを比較した結果、活性酸素量に大きな違いがあったとすると、仕事，運動などの肉体的ストレスや面接，試験などの精神的ストレスによって唾液中に多量の白血球が集まり、口腔内粘膜等を攻撃する。白血球は、口腔内粘膜等を攻撃する際には活性化される。このような白血球が唾液と混合されると、体内で活性酸素が生成される。肉体的ストレスや精神的ストレスがかかる事柄の前後で測定し、これらを比較した結果、活性酸素量に大きな違いがあったとすると、肉体的ストレスだけではなく精神的ストレスによっても口腔内白血球の貪食作用により活性酸素が生成されるので、うがいをしてそのすすぎ水（唾液）から活性酸素量を測定することにより、ストレスの有無を判定することができる。
【実施例３】
【００３７】
図８は、本発明の実施例３に係る活性酸素量測定による抗酸化能判定方法の手順を示すフローチャートである。本実施例３に係る活性酸素量測定による抗酸化能判定方法では、まず、唾液，食細胞刺激剤および増光剤を混合して第１混合物を作成し（Ｃ１）、第１混合物中の白血球が食細胞刺激剤を貪食する際に発生する活性酸素量を化学発光法により測定して第１の活性酸素量を得る（Ｃ２）。次に、唾液，抗酸化物質，食細胞刺激剤および増光剤を混合して第２混合物を作成し（Ｃ３）、第２混合物中の白血球が食細胞刺激剤を貪食する際に発生する活性酸素量を化学発光法により測定して第２の活性酸素量を得る（Ｃ４）。最後に、第１の活性酸素量と第２の活性酸素量とを比較して抗酸化物質の抗酸化能の有無を判定する（Ｃ５）。
【００３８】
なお、本実施例３に係る活性酸素量測定による抗酸化能判定方法でも、実施例１に係る活性酸素量測定による感染判定方法と同様の微弱発光測定装置Ｄおよびパソコン１００を用いて測定が行われるが、それらについてはすでに説明したので詳しい説明を割愛する。
【００３９】
このように構成された実施例３に係る活性酸素量測定による抗酸化能判定方法では、抗酸化物質には活性酸素を除去する働きがあるが、抗酸化物質を多く含んだ「抗酸化食品」を摂る前後でうがいをしてそのすすぎ水から活性酸素量を測定することにより、活性酸素量が小さいものは抗酸化物質によって体内の活性酸素が効果的に除去され、そうでないものは抗酸化物質の効果があまり現れなかったと、その抗酸化能を確かめることができる。
【００４０】
図９は、唾液内好中球について、微弱発光量（活性酸素量）と時間との関係をプロットしたグラフである。このグラフからも分かるようには、抗酸化物質としてビタミンＣを加えた３例と、抗酸化物質としてビタミンＣを加えなかった１例とでは、明らかに有意な違いが見られる。すなわち、唾液を提供した被検者に対するビタミンＣの抗酸化能が明らかに判定できたものである。
【００４１】
ところで、上記各実施例では、化学発光法に基づいて活性酸素量を測定するようにしたが、活性酸素種センサを使用して活性酸素量を直接測定するようにしてもよい。
【００４２】
また、微弱発光測定装置Ｄの電源として商用電源（ＡＣ１００Ｖ）を使用する場合を説明したが、野外等で病原体の感染の有無を判定する必要がある場合等を考慮して、電源を持ち運びに便利な電池式（バッテリ式）にしてもよい。
【００４３】
以上、本発明の各実施例を説明したが、これらはあくまでも例示にすぎず、本発明はこれらに限定されるものではなく、特許請求の範囲の趣旨を逸脱しない限りにおいて、当業者の知識に基づく種々の変更が可能である。
【図面の簡単な説明】
【００４４】
【図１】本発明の実施例１に係る活性酸素量測定による感染判定方法が適用される微弱発光測定装置の正面図。
【図２】微弱発光測定装置の背面図。
【図３】微弱発光測定装置の側断面図。
【図４】微弱発光測定装置における回転ステージの平面図。
【図５】微弱発光測定装置の回路構成図。
【図６】本実施例１に係る活性酸素量測定による感染判定方法の手順を示すフローチャート。
【図７】本発明の実施例２に係る活性酸素量測定によるストレス判定方法の手順を示すフローチャート。
【図８】本発明の実施例３に係る活性酸素量測定による抗酸化能判定方法の手順を示すフローチャート。
【図９】実施例３に係る活性酸素量測定による抗酸化能判定方法により測定された光量を示すグラフ。
【符号の説明】
【００４５】
１ 筐体
１０ 制御コンピュータ
１１ 電源スイッチ
１２ スタートスイッチ
１３ スライド扉
１４ 電源コネクタ
１５ ヒューズホルダ
１６ 通信コネクタ
２０ ヒータ
２１ モータ
２２ 回転ステージ
２２ａ〜２２ｄ 配置孔
２３ａ〜２３ｄ 位置検出用突片
２４ａ〜２４ｄ 位置検出用センサ
２５ 試料セル
Ａ１〜Ａ８ ステップ（活性酸素量測定による感染判定方法）
Ｂ１〜Ｂ３ ステップ（活性酸素量測定によるストレス判定方法）
Ｃ１〜Ｃ５ ステップ（活性酸素量測定による抗酸化能判定方法）
Ｄ 微弱発光測定装置
【技術分野】
【０００１】
本発明は活性酸素量測定による感染判定方法，ストレス判定方法および抗酸化能判定方法に関し、特に唾液中に含まれる白血球が病原体等を貪食する際に発生する活性酸素量を測定することによる感染判定方法，ストレス判定方法および抗酸化能判定方法に関する。
【背景技術】
【０００２】
従来の風邪，インフルエンザ等の感染症の感染判定方法としては、鼻咽腔の擦過標本や分泌液を用い公知の免疫蛍光抗体法や公知の酵素抗体法により、病原菌やインフルエンザウイルス抗原を証明する方法が一般的であった（例えば、非特許文献１参照）。
【０００３】
ところで、唾液中には、好中球，好酸球，マクロファージ等の白血球が含まれている。これらの白血球は、健康時の唾液中にはほとんど存在しないが、口腔内が細菌やウイルス等の病原体の侵入を受け始めると、それを食い止めようとして貪食殺菌能力のある白血球（貪食白血球＝好中球，好酸球，マクロファージ等）が唾液中に集まってくることが知られている。中でも、好中球は病原体侵入後の機動性が高く、しかも圧倒的な数によって細菌，ウイルス等の病原体の侵入を食い止めようとして働く。貪食白血球は、貪食時に主に活性酸素によって病原体を殺し、活性酸素放出時にその量に比例して極微量の光（フォトン）を発生する。化学発光法は、この光（フォトン）を検出して増幅・定量する方法であり、病原体侵入に連動して集まる貪食白血球を、病原体侵入開始から感染症発現までの広範囲に渡って高感度で検出可能である（例えば、特許文献１参照）。また、活性酸素量は、活性酸素種センサを用いて直接測定することもできる（例えば、特許文献２参照）。
【０００４】
また、従来のストレス判定方法は、多数の質問が並べられた問診表に逐一回答して総合的にストレスがあるかないかを判定する精神科的な診断方法が一般的であった。これに対して、科学的なストレス判定方法の一例として、唾液中に含まれるストレスマーカーの量を測定する方法が知られている。例えば、ストレスマーカーとして信頼性の高い分泌型ＩｇＡ抗体とコルチゾール（cortisol）を測定対象物質に選び、高い選択性を持つ抗原抗体反応を微小な反応場で迅速化し、さらに電気泳動による高性能分離を組み合わせた分析法が提案されている（例えば、非特許文献２参照）。
【０００５】
ところで、ストレス時にも、唾液中に貪食白血球が集まり、生体の過剰防衛反応として口腔内粘膜などを攻撃して粘膜等の荒れ（口内炎等）を招くおそれがあることが知られている。
【０００６】
さらに、従来の抗酸化能判定方法の一例としては、リノール酸（linoleic acid）の自動酸化モデル系による方法が知られている。この方法は、リノール酸の酸化を抗酸化物質が抑制するか否かをα−トコフェロール（tocopherol）などの既知の抗酸化剤を対照として評価する方法である（例えば、非特許文献３参照）。
【特許文献１】特開２００４−２５１８７０号公報
【特許文献２】特開２００５−１０６４９０号公報
【非特許文献１】「インフルエンザＱ＆Ａ」、[online]、国立感染症研究所感染症情報センター、［平成１８年６月２２日検索］、インターネット＜http://idsc.nih.go.jp/disease/influenza/fluQA/QAdoc01.html#q02＞
【非特許文献２】「唾液でストレスを手軽に測るラボチップの開発に成功」[online]、独立行政法人産業技術総合研究所、［平成１８年６月２２日検索］、インターネット＜http://www.aist.go.jp/aist_j/press_release/pr2005/pr20051102/pr20051102.html＞
【非特許文献３】「食品の機能を評価する」、[online]、財団法人日本食品分析センター、［平成１８年６月２２日検索］、インターネット＜http://www.jfrl.or.jp/other/jfrlnews/news_no22.pdf＞
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００７】
従来の風邪，インフルエンザ等の感染症の感染判定方法は、鼻咽腔の擦過標本や分泌液を用い、公知の免疫蛍光抗体法や公知の酵素抗体法により、病原菌やインフルエンザウイルス抗原等の病原体を証明する方法であったので、判定できる感染症の範囲が限定されており、汎用的に使用できるものではないという問題点があった。
【０００８】
また、従来のストレス判定方法は、唾液中に含まれるストレスマーカーの量を測定するものであるが、唾液には非常に数多くの生体物質が含まれており、またストレス関連物質は微量であり濃度はたいへん低いので、大型の分析機器を駆使しても判定が容易でないという問題点があった。
【０００９】
さらに、従来の抗酸化能判定方法としては、リノール酸の酸化を抗酸化物質が抑制するか否かをα−トコフェロールなどの既知の抗酸化剤を対照として評価する方法であったが、生体において実際に抗酸化能が発揮されるかどうかを評価することができないという問題点があった。
【００１０】
本発明の目的は、唾液中に含まれる貪食白血球が細菌やウイルス等の病原体を貪食する際に発生する活性酸素量を測定することにより、生体への病原体の感染の有無を手軽にかつ汎用的に判定可能な活性酸素量測定による感染判定方法を提供することにある。
【００１１】
また、本発明の他の目的は、ストレスによって唾液中に集まってくる貪食白血球が食細胞刺激剤を貪食する際に発生する活性酸素量を測定することにより、生体の過剰防御作用を発現させるストレスを判定可能な活性酸素量測定によるストレス判定方法を提供することにある。
【００１２】
さらに、本発明の別の目的は、抗酸化物質がある場合とない場合とで唾液中に含まれる貪食白血球が食細胞刺激剤を貪食する際に発生する活性酸素量を測定して比較することにより、抗酸化物質の抗酸化能の有無を判定する活性酸素量測定による抗酸化能判定方法を提供することにある。
【課題を解決するための手段及び発明の効果】
【００１３】
請求項１記載の活性酸素量測定による感染判定方法は、唾液中の白血球が病原体を貪食する際に発生する活性酸素量を測定する工程と、測定された活性酸素量に基づいて病原体の感染の有無を判定する工程と、を含むことを特徴とする。請求項１記載の活性酸素量測定による感染判定方法によれば、唾液（うがいのすすぎ水等）に含まれる貪食白血球が細菌，ウイルス等の病原体を貪食する際に発生する活性酸素量を測定することにより、風邪やインフルエンザ等の感染症にかかり始めていないかどうかを簡単に判定できるようになる。この判定方法ならば、採血の必要も無いため、誰でも手軽に感染の有無を判定することができ、自覚症状を自ら訴えにくい子供などの健康管理に大いに役立てられると期待される。
【００１４】
請求項２記載の活性酸素量測定によるストレス判定方法は、少なくとも唾液と食細胞刺激剤とを混合する工程と、混合物中の白血球が前記食細胞刺激剤を貪食する際に発生する活性酸素量を測定する工程と、測定された活性酸素量に基づいてストレスの有無を判定する工程と、を含むことを特徴とする。請求項２記載の活性酸素量測定によるストレス判定方法によれば、仕事，運動などの肉体的ストレスや面接，試験などの精神的ストレスがかかる事柄の前後で測定し、これらを比較した結果、活性酸素量に大きな違いがあったとすると、肉体的ストレスや精神的ストレスによって口腔内白血球の貪食作用により活性酸素が生成されるので、うがいをしてそのすすぎ水（唾液）から活性酸素量を測定することにより、ストレスの有無を判定することができる。
【００１５】
請求項３記載の活性酸素量測定による抗酸化能判定方法は、少なくとも唾液および食細胞刺激剤を混合して第１混合物を作成する工程と、前記第１混合物中の白血球が前記食細胞刺激剤を貪食する際に発生する活性酸素量を測定して第１の活性酸素量を得る工程と、少なくとも唾液，食細胞刺激剤および抗酸化物質を混合して第２混合物を作成する工程と、前記第２混合物中の白血球が前記食細胞刺激剤を貪食する際に発生する活性酸素量を測定して第２の活性酸素量を得る工程と、前記第１の活性酸素量と前記第２の活性酸素量とを比較して前記抗酸化物質の抗酸化能の有無を判定する工程と、を含むことを特徴とする。請求項３記載の活性酸素量測定による抗酸化能判定方法によれば、抗酸化物質には活性酸素を除去する働きがある。抗酸化物質を多く含んだ「抗酸化食品」を摂る前後でうがいをしてそのすすぎ水（唾液）から活性酸素量を測定することにより、活性酸素量が小さいものは抗酸化物資によって体内の活性酸素が効果的に除去され、そうでないものは抗酸化物質の効果があまり現れなかったと、その抗酸化能を生体を使って確かめることができる。
【発明を実施するための最良の形態】
【００１６】
以下、本発明の実施の形態について図面を参照しながら説明する。
【実施例１】
【００１７】
図１および図２は、本発明の実施例１に係る活性酸素量測定による感染判定方法に用いられる微弱発光測定装置Ｄの正面図および背面図である。この微弱発光測定装置Ｄは、化学発光法に基づいてフォトンをカウントして活性酸素量を測定するものであり、すでに公知のものである（例えば、http://www.tokken.jp/tetralight.html参照）。このため、詳細な説明は省くが、微弱発光測定装置Ｄは、図１に示すように、略直方体の筐体１の表面に、電源スイッチ１１と、スタートボタン１２と、スライド扉１３とが配設されている。また、図２に示すように、筐体１の背面には、商用電源（ＡＣ１００Ｖ）のコードを接続する電源コネクタ１４と、商用電源（ＡＣ１００Ｖ）のヒューズホルダ１５と、ＲＳ−２３２Ｃ等の通信コネクタ１６とが配設されている。
【００１８】
図３は、微弱発光測定装置Ｄの透過側面図である。筐体１内には、ステッピングモータ等の正逆回転可能なモータ２１と、唾液，食細胞刺激剤および／または増光剤を入れた試料セル２５を保持しつつ正逆回転により攪拌する回転ステージ２２と、唾液中の貪食白血球が病原体を貪食する際に発生するフォトンを検出する光電子増倍管４０等が配設されている。
【００１９】
回転ステージ２２は、図４に示すように、円盤状に形成され、試料セル２５を上方から押し込んで密着固定する４つの配置孔２２ａ〜２２ｄが等間隔に穿設されている。回転ステージ２２の回転軸内には試料セル２５中の唾液等を温めるヒータ２０が収納されている。ヒータ２０は、温度検出センサ（図示せず）を備え、制御コンピュータ１０（図５参照）により恒温（３７±０．１℃）に制御される。図４で見て配置孔２２ａの位置に回転移動した試料セル２５の底面が光電子増倍管４０の真上になるように配置する。モータ２１の出力軸にプーリを固定し、プーリと回転ステージ２２の下端外周面との間にベルト（図示せず）を掛け渡す。回転ステージ２２の外周面には、４つの位置検出用突片２３ａ〜２３ｄが等間隔に取り付けられている。位置検出用突片２３ａ，２３ｄは長片であり、位置検出用突片２３ｂ，２３ｃは短片となっている。一方、筐体１には、図４で見て、４５度，１３５度，２７０度，および３１５度の各位置に、位置検出用突片２３ａ〜２３ｄを検出する光センサ２４ａ〜２４ｄが配置されている。光センサ２４ａ，２４ｂは透過型光センサであり、光センサ２４ｃ，２４ｄは反射型光センサである。このような位置検出用突片２３ａ〜２３ｄおよび光センサ２４ａ〜２４ｄにより、回転ステージ２２に配置された試料セル２５を位置決めし、また正逆回転して攪拌する（詳細は後述）。
【００２０】
図５に示すように、微弱発光測定装置Ｄは、制御コンピュータ１０と、試料セル２５の温度を例えば３７±０．１°Ｃに加熱保温するヒータ２０と、モータ２１，回転ステージ２２を含む攪拌回路３０と、試料セル２５内の唾液に含まれる好中球，好酸球，マクロファージ等の貪食白血球が病原体を貪食する際に発生するフォトンを検出する光電子増倍管４０と、光電子増倍管４０により検出されたフォトンの数をカウントするフォトンカウント回路５０とを含んで構成されている。
【００２１】
制御コンピュータ１０は、図示しないＣＰＵ（Central Processing Unit），ＲＯＭ（Read Only Memory），ＲＡＭ（Random Access Memory）等により構成されており、フォトンカウント回路５０によりカウントされたフォトン数（極微光量）をパーソナルコンピュータ（以下、パソコンと略記する）１００に出力する。
【００２２】
次に、本実施例１に係る活性酸素量測定による感染判定方法の手順を、図６に示すフローチャートを参照して微弱発光測定装置Ｄの動作とともに説明する。
【００２３】
まず、準備として、微弱発光測定装置Ｄの通信コネクタ１６とパソコン１００の背面にあるシリアルポート（図示せず）とをＲＳ−２３２Ｃリバースケーブル等の通信ケーブルで接続するとともに、電源コネクタ１４に商用電源（ＡＣ１００Ｖ）の電源コードを差し込む。次に、電源スイッチ１１を操作することにより、微弱発光測定装置Ｄに電源を投入する。電源スイッチ１１に内蔵されている電源ランプの点灯を確認した上で、微弱発光測定装置Ｄが安定するまで約３０分程度待つ。次に、パソコン１００の電源を入れる。デスクトップにある微弱発光測定装置Ｄのアイコンをクリックして、専用アプリケーションプログラムを立ち上げる。この専用アプリケーションプログラムは、パソコン１００と微弱発光測定装置Ｄとの通信を可能にする。
【００２４】
微弱発光測定装置Ｄの安定化後、試料セル２５を用意し、判定対象のうがいのすすぎ水（唾液）を入れる（図６のＡ１）。
【００２５】
次に、必要に応じて、試料セル２５に食細胞刺激剤および／または増光剤を加えて十分に混ぜ合わせる（図６のＡ２）。食細胞刺激剤としては、ザイモザン（Zymosan）を使用することができるが、この他にＣｏｎＡ（Concanavalin A），ＰＨＡ（Phytohemagglutinin），ＰＷＭ（Pokeweed Mitogen）等を使用することもできる。また、増光剤としては、一般的にルミノール（luminol）を使用することができるが、この他にルシゲニン（Lucigenin），ウミホタル・ルシフェリン誘導体（Cypridina Luciferin Analogue）等を使用することもできる。
【００２６】
続いて、試料セル２５を微弱発光測定装置Ｄにセットする（Ａ３）。詳しくは、微弱発光測定装置Ｄのスライド扉１３を取手１３ａを持って左方にスライドさせると、回転ステージ２２の一部が外部に露呈するので、露呈した配置孔（図４で見て配置孔２２ｃの位置にある配置孔）に試料セル２５を所定深さまで押し込んでセットした後、スライド扉１３を取手１３ａを持って右方にスライドさせることにより閉じる。スライド扉１３の開閉はマイクロスイッチ（図示せず）が検出する。このマイクロスイッチの検出により、制御コンピュータ１０は、微弱発光測定装置Ｄが動作可能状態になったと判断する。なお、回転ステージ２２に４つの配置孔２２ａ〜２２ｄが設けられているので、同時に４つまでの試料セル２５の測定が可能である。
【００２７】
次に、スタートボタン１２を押下して、微弱発光測定装置Ｄにセットされた試料セル２５の測定を開始する（図６のＡ４）。詳しくは、回転ステージ２２の配置孔２２ｃにセットした状態では、試料セル２５が光電子増倍管４０に対応した位置にないので、制御コンピュータ１０は、モータ２１を駆動して回転ステージ２２を時計回りに１８０度回転して、光電子増倍管４０に対応した位置（図４で見て配置孔２２ａの位置）に移動させる。この移動は、光センサ２４ａ，２４ｂ，２４ｄの出力に基づいて制御される。すなわち、配置孔２２ｃにセットされた試料セル２５の配置孔２２ａの位置への移動は、位置検出用突片２３ｂの光センサ２４ｄによる検出、かつ位置検出用突片２４ｄの光センサ２４ｂによる検出によって判定される。なお、位置検出用突片２３ｃは短片なので、透過型の光センサ２４ａによっては検出されない。
【００２８】
次に、制御コンピュータ１０は、回転ステージ２２を反時計回りおよび時計回りに４５度ずつ回転させることを約５秒間繰り返すことにより、試料セル２５の内容物を攪拌する（図６のＡ５）。この攪拌は、光センサ２４ｃ，２４ｄの出力に基づいて制御される。詳しくは、位置検出用突片２３ｂの光センサ２４ｄ，２４ｃでの検出によって判定される。
【００２９】
続いて、制御コンピュータ１０は、光電子増倍管４０に対応した位置（図４で見て配置孔２２ａの位置）にある試料セル２５の内容物に含まれる貪食白血球が細菌，ウイルス等の病原体を貪食する際に発生するフォトンをカウントする（図６のＡ６）。詳しくは、制御コンピュータ１０は、ヒータ２０への通電により試料セル２５を恒温（３７±０．１℃）に維持し約２０分間放置して病原体および貪食白血球をインキュベートしながら、試料セル２５内から化学発光されるフォトンを光電子増倍管４０で検出し、フォトンカウント回路５０によりカウントする。
【００３０】
そして、制御コンピュータ１０は、１分間毎のカウント値（単位はＣＰＭ）に基づく微弱発光量をパソコン１００に出力する（図６のＡ７）。
【００３１】
パソコン１００は、微弱発光測定装置Ｄから受信した微弱発光量をディスプレイに表示させる。例えば、測定中の微弱発光量の測定結果は、グラフとデータとで同時に表示される。グラフ表示では測定回数に応じた微弱発光量の経時的変化をグラフで、データ表示では測定結果の微弱発光量を数値で、それぞれ表示する。単位はいずれもＲＬＵ（Relative Light Unit ；相対発光量）である。そして、パソコン１００は、微弱発光測定装置Ｄからの微弱発光量と予め測定された病原体の感染が疑われる活性酸素量に対応する微弱発光量とを比較し、微弱発光測定装置Ｄからの微弱発光量が予め測定された病原体の感染が疑われる活性酸素量に対応する微弱発光量の閾値を越えている場合には、病原体の感染が疑われる旨のメッセージをディスプレイに表示する（図６のＡ８）。
【００３２】
微弱発光測定装置Ｄにセットされた各試料セル２５に対してステップＡ５〜Ａ８が繰り返され、全ての試料セル２５に対する測定が終了したならば、パソコン１００のディスプレイの「終了」のボタンをクリックして、専用アプリケーションプログラムを終了してから、電源ボタン１１を押圧操作することにより微弱発光測定装置Ｄの電源を切ることができる。
【００３３】
実施例１によれば、唾液を採取し、唾液中の白血球が唾液中の病原体を貪食する際に発生する活性酸素量を化学発光法により測定して活性酸素量を得、測定された活性酸素量を予め測定されている基準活性酸素量と比較することにより、病原体の感染の有無を判定することができる。具体的には、うがいのすすぎ水に含まれる貪食白血球が細菌，ウイルス等の病原体を貪食する際に発生する活性酸素量を測定することにより、風邪やインフルエンザ等の感染症にかかり始めていないかを簡単に判定できるようになる。なお、本実施例１では、風邪やインフルエンザ等の感染症の感染判定を例示したが、予め測定された病原体の感染が疑われる活性酸素量に対応する微弱発光量の閾値を病原体に応じて変更することにより、本発明は他の多くの病原体の感染判定に汎用的に適用することができる。例えば、口内炎や歯周病等の感染判定にも用いることができる。
【実施例２】
【００３４】
図７は、本発明の実施例２に係る活性酸素量測定によるストレス判定方法の手順を示すフローチャートである。本実施例２に係る活性酸素量測定によるストレス判定方法では、まず、唾液，食細胞刺激剤および増光剤を混合して混合物を作成し（Ｂ１）、次に混合物中の白血球が食細胞刺激剤を貪食する際に発生する活性酸素量を化学発光法により測定して活性酸素量を得（Ｂ２）、測定された活性酸素量を予め測定されている基準活性酸素量と比較してストレスの有無を判定する（Ｂ３）。
【００３５】
なお、本実施例２に係る活性酸素量測定によるストレス判定方法でも、実施例１に係る活性酸素量測定による感染判定方法と同様の微弱発光測定装置Ｄおよびパソコン１００を用いて測定が行われるが、それらについてはすでに説明したので詳しい説明を割愛する。
【００３６】
このように構成された実施例２に係る活性酸素量測定によるストレス判定方法では、測定された活性酸素量を予め測定されている基準活性酸素量と比較してストレスの有無を判定するようにしたが、仕事，運動などの肉体的ストレスや面接，試験などの精神的ストレスがかかる事柄の前後で測定をするようにしてもよい。これらを比較した結果、活性酸素量に大きな違いがあったとすると、仕事，運動などの肉体的ストレスや面接，試験などの精神的ストレスによって唾液中に多量の白血球が集まり、口腔内粘膜等を攻撃する。白血球は、口腔内粘膜等を攻撃する際には活性化される。このような白血球が唾液と混合されると、体内で活性酸素が生成される。肉体的ストレスや精神的ストレスがかかる事柄の前後で測定し、これらを比較した結果、活性酸素量に大きな違いがあったとすると、肉体的ストレスだけではなく精神的ストレスによっても口腔内白血球の貪食作用により活性酸素が生成されるので、うがいをしてそのすすぎ水（唾液）から活性酸素量を測定することにより、ストレスの有無を判定することができる。
【実施例３】
【００３７】
図８は、本発明の実施例３に係る活性酸素量測定による抗酸化能判定方法の手順を示すフローチャートである。本実施例３に係る活性酸素量測定による抗酸化能判定方法では、まず、唾液，食細胞刺激剤および増光剤を混合して第１混合物を作成し（Ｃ１）、第１混合物中の白血球が食細胞刺激剤を貪食する際に発生する活性酸素量を化学発光法により測定して第１の活性酸素量を得る（Ｃ２）。次に、唾液，抗酸化物質，食細胞刺激剤および増光剤を混合して第２混合物を作成し（Ｃ３）、第２混合物中の白血球が食細胞刺激剤を貪食する際に発生する活性酸素量を化学発光法により測定して第２の活性酸素量を得る（Ｃ４）。最後に、第１の活性酸素量と第２の活性酸素量とを比較して抗酸化物質の抗酸化能の有無を判定する（Ｃ５）。
【００３８】
なお、本実施例３に係る活性酸素量測定による抗酸化能判定方法でも、実施例１に係る活性酸素量測定による感染判定方法と同様の微弱発光測定装置Ｄおよびパソコン１００を用いて測定が行われるが、それらについてはすでに説明したので詳しい説明を割愛する。
【００３９】
このように構成された実施例３に係る活性酸素量測定による抗酸化能判定方法では、抗酸化物質には活性酸素を除去する働きがあるが、抗酸化物質を多く含んだ「抗酸化食品」を摂る前後でうがいをしてそのすすぎ水から活性酸素量を測定することにより、活性酸素量が小さいものは抗酸化物質によって体内の活性酸素が効果的に除去され、そうでないものは抗酸化物質の効果があまり現れなかったと、その抗酸化能を確かめることができる。
【００４０】
図９は、唾液内好中球について、微弱発光量（活性酸素量）と時間との関係をプロットしたグラフである。このグラフからも分かるようには、抗酸化物質としてビタミンＣを加えた３例と、抗酸化物質としてビタミンＣを加えなかった１例とでは、明らかに有意な違いが見られる。すなわち、唾液を提供した被検者に対するビタミンＣの抗酸化能が明らかに判定できたものである。
【００４１】
ところで、上記各実施例では、化学発光法に基づいて活性酸素量を測定するようにしたが、活性酸素種センサを使用して活性酸素量を直接測定するようにしてもよい。
【００４２】
また、微弱発光測定装置Ｄの電源として商用電源（ＡＣ１００Ｖ）を使用する場合を説明したが、野外等で病原体の感染の有無を判定する必要がある場合等を考慮して、電源を持ち運びに便利な電池式（バッテリ式）にしてもよい。
【００４３】
以上、本発明の各実施例を説明したが、これらはあくまでも例示にすぎず、本発明はこれらに限定されるものではなく、特許請求の範囲の趣旨を逸脱しない限りにおいて、当業者の知識に基づく種々の変更が可能である。
【図面の簡単な説明】
【００４４】
【図１】本発明の実施例１に係る活性酸素量測定による感染判定方法が適用される微弱発光測定装置の正面図。
【図２】微弱発光測定装置の背面図。
【図３】微弱発光測定装置の側断面図。
【図４】微弱発光測定装置における回転ステージの平面図。
【図５】微弱発光測定装置の回路構成図。
【図６】本実施例１に係る活性酸素量測定による感染判定方法の手順を示すフローチャート。
【図７】本発明の実施例２に係る活性酸素量測定によるストレス判定方法の手順を示すフローチャート。
【図８】本発明の実施例３に係る活性酸素量測定による抗酸化能判定方法の手順を示すフローチャート。
【図９】実施例３に係る活性酸素量測定による抗酸化能判定方法により測定された光量を示すグラフ。
【符号の説明】
【００４５】
１ 筐体
１０ 制御コンピュータ
１１ 電源スイッチ
１２ スタートスイッチ
１３ スライド扉
１４ 電源コネクタ
１５ ヒューズホルダ
１６ 通信コネクタ
２０ ヒータ
２１ モータ
２２ 回転ステージ
２２ａ〜２２ｄ 配置孔
２３ａ〜２３ｄ 位置検出用突片
２４ａ〜２４ｄ 位置検出用センサ
２５ 試料セル
Ａ１〜Ａ８ ステップ（活性酸素量測定による感染判定方法）
Ｂ１〜Ｂ３ ステップ（活性酸素量測定によるストレス判定方法）
Ｃ１〜Ｃ５ ステップ（活性酸素量測定による抗酸化能判定方法）
Ｄ 微弱発光測定装置
【特許請求の範囲】
【請求項１】
唾液中の白血球が病原体を貪食する際に発生する活性酸素量を測定する工程と、
測定された活性酸素量に基づいて病原体の感染の有無を判定する工程と、
を含むことを特徴とする活性酸素量測定による感染判定方法。
【請求項２】
少なくとも唾液と食細胞刺激剤とを混合する工程と、
混合物中の白血球が前記食細胞刺激剤を貪食する際に発生する活性酸素量を測定する工程と、
測定された活性酸素量に基づいてストレスの有無を判定する工程と、
を含むことを特徴とする活性酸素量測定によるストレス判定方法。
【請求項３】
少なくとも唾液および食細胞刺激剤を混合して第１混合物を作成する工程と、
前記第１混合物中の白血球が前記食細胞刺激剤を貪食する際に発生する活性酸素量を測定して第１の活性酸素量を得る工程と、
少なくとも唾液，食細胞刺激剤および抗酸化物質を混合して第２混合物を作成する工程と、
前記第２混合物中の白血球が前記食細胞刺激剤を貪食する際に発生する活性酸素量を測定して第２の活性酸素量を得る工程と、
前記第１の活性酸素量と前記第２の活性酸素量とを比較して前記抗酸化物質の抗酸化能の有無を判定する工程と、
を含むことを特徴とする活性酸素量測定による抗酸化能判定方法。
【請求項１】
唾液中の白血球が病原体を貪食する際に発生する活性酸素量を測定する工程と、
測定された活性酸素量に基づいて病原体の感染の有無を判定する工程と、
を含むことを特徴とする活性酸素量測定による感染判定方法。
【請求項２】
少なくとも唾液と食細胞刺激剤とを混合する工程と、
混合物中の白血球が前記食細胞刺激剤を貪食する際に発生する活性酸素量を測定する工程と、
測定された活性酸素量に基づいてストレスの有無を判定する工程と、
を含むことを特徴とする活性酸素量測定によるストレス判定方法。
【請求項３】
少なくとも唾液および食細胞刺激剤を混合して第１混合物を作成する工程と、
前記第１混合物中の白血球が前記食細胞刺激剤を貪食する際に発生する活性酸素量を測定して第１の活性酸素量を得る工程と、
少なくとも唾液，食細胞刺激剤および抗酸化物質を混合して第２混合物を作成する工程と、
前記第２混合物中の白血球が前記食細胞刺激剤を貪食する際に発生する活性酸素量を測定して第２の活性酸素量を得る工程と、
前記第１の活性酸素量と前記第２の活性酸素量とを比較して前記抗酸化物質の抗酸化能の有無を判定する工程と、
を含むことを特徴とする活性酸素量測定による抗酸化能判定方法。
【図１】
【図２】
【図３】
【図４】
【図５】
【図６】
【図７】
【図８】
【図９】
【図２】
【図３】
【図４】
【図５】
【図６】
【図７】
【図８】
【図９】
【公開番号】特開２００８−８８６３（Ｐ２００８−８８６３Ａ）
【公開日】平成２０年１月１７日（２００８．１．１７）
【国際特許分類】
【出願番号】特願２００６−１８２２０４（Ｐ２００６−１８２２０４）
【出願日】平成１８年６月３０日（２００６．６．３０）
【出願人】（５９８１０４２３０）有限会社トッケン (4)
【Ｆターム（参考）】
【公開日】平成２０年１月１７日（２００８．１．１７）
【国際特許分類】
【出願日】平成１８年６月３０日（２００６．６．３０）
【出願人】（５９８１０４２３０）有限会社トッケン (4)
【Ｆターム（参考）】
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