液体試験ストリップ及び方法
【課題】液体試験ストリップ及びこれを使用する検出方法を提供する。
【解決手段】本液体試験ストリップはチャネルを上面に有する基板を備える。該チャネルは順次つながった第１領域、第２領域、及び第３領域を有する。第１抗体は該第１領域に入れられ、糖類とペルオキシダーゼは該第１領域又は該第２領域に入れられている。同じ抗原の第１抗体とは異なるエピトープを認識するための第２抗体は該第２領域に固定されている。光学基質と糖類オキシダーゼからなる基質試薬とは該第３領域に入れられている。
【解決手段】本液体試験ストリップはチャネルを上面に有する基板を備える。該チャネルは順次つながった第１領域、第２領域、及び第３領域を有する。第１抗体は該第１領域に入れられ、糖類とペルオキシダーゼは該第１領域又は該第２領域に入れられている。同じ抗原の第１抗体とは異なるエピトープを認識するための第２抗体は該第２領域に固定されている。光学基質と糖類オキシダーゼからなる基質試薬とは該第３領域に入れられている。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は液体試験ストリップ、特に、生体液の定量分析のための液体試験ストリップに関する。
【背景技術】
【０００２】
従来の定量分析検査は、生体分子を特異的に認識しこれと結合する免疫分子が有する特有の能力を利用する。例えば、従来の酵素免疫吸着法（ＥＬＩＳＡ）は、通常９６ウェルプレートで行われ、検体（例えば、抗原）の濃度を、該検体と対応する免疫分子と酵素と対応する試薬との間の反応に由来する検出された信号の強度により決定することを特徴とする。しかし、ユーザは通常、分析の段階毎に退屈な洗浄ステップを実行して非結合分子と非特異結合分子を洗い去り、分析の失敗または偽陽性結果の発生を防ぐ必要がある。
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００３】
技術の進歩とともに、今日、免疫分析検査は、マイクロ体液チャネルを有し分析の反応段階後毎に必要であった複雑で繰り返される洗浄作業を簡略化するか又は省略さえする液体試験ストリップを用いて実行される。しかし、このような液体試験ストリップは、反応に必要な試薬又は基質を液体試験ストリップに手動で加える必要があり、ユーザにとって不便である。従来のストリップに必要な試薬又は基質は長期保存時、室温で、又は光で劣化し易く、分析エラーを生じさせる。従って、このような試薬は特定の条件、例えば冷却又は遮光状態で保存される必要がある。その結果、従来の液体試験ストリップは使用及び保存になお不便である。
【０００４】
また、従来のチャネル又はマイクロ体液チャネルを有する液体試験ストリップは他の問題を有している。チャネル又はマイクロ体液チャネルは非吸収性材料で通常作られ、分析対象の体液サンプルはタンパク質又は炭水化物から主に成りその粘度は通常高いので、体液サンプルの一部は該チャネルの表面に付着し易く、反応をしない。このようなシナリオは、起こった場合、分析対象の体液サンプルを不利益にも無駄にするだけでなく、定量分析の精度に悪影響を及ぼす。
【０００５】
また、従来の液体試験ストリップはマイクロ体液チャネルにより体液サンプルの流れを可能にすることで、該チャネルの構造が及ぼす毛管力により体液サンプルが反応領域に送達されうる。体液サンプルを送達する別の手法は、体液サンプルが該チャネルに導入された時、該チャネルを通って反応領域へ推進されるように、例えば加圧手段による駆動力を適用することを含む。しかし、上記手法のどちらも、体液サンプルがチャネルに導入された後、気泡を発生させ易い。これらの気泡は、大きくても小さくても、該チャネルを塞ぎ、分析結果が不正確になる。
【課題を解決するための手段】
【０００６】
上記の欠点を直すために、本発明は体液サンプルの定量分析のための液体試験ストリップを開示する。本液体試験ストリップは１つ以上のチャネルを上面に有する基板を備える。該チャネルは体液サンプルを受け取るための第１領域と、第２領域と、第３領域とを有する。これらの３つの領域は連続して配置されている。また、該チャネルは第１抗体と糖類と第２抗体と光学基質と基質試薬とを含む。第１抗体は該体液サンプル中の検体を認識するために該第１領域に入れられている。糖類とペルオキシダーゼは該第１領域又は該第２領域に入れられてよい。第２抗体は第１抗体と同じ検体を認識するために該第２領域内に固定されている。該第１抗体と該第２抗体とは該検体の異なるエピトープを認識するよう構成されている。光学基質と糖類オキシダーゼからなる基質試薬とは該第３領域に入れられている。該体液サンプルを該チャネルに導入すると直ちに、該第１抗体、該糖類、及び該ペルオキシダーゼは該体液サンプルと一緒に流れる。該ペルオキシダーゼの一部、該第１抗体、及び該検体は一緒に該第２抗体と結合して該第２領域内に保持される。結合していないペルオキシダーゼは該体液サンプルと一緒に該第３領域へ流れ、該糖類は該糖類オキシダーゼにより酸化され過酸化水素（Ｈ2Ｏ2）を生成する。次に該光学基質と該過酸化水素は該第３領域において該ペルオキシダーゼの触媒作用により光学信号を生成する。
【０００７】
従って、本発明の主な目的は、複雑なステップがなく反応に必要な試薬と物質を主に含む液体試験ストリップを提供することである。
【０００８】
本発明の別の目的は、含まれている反応に必要な試薬と物質は乾燥しているので、使用まで比較的長期間保存でき、試薬の劣化による分析エラーを防ぐ液体試験ストリップを提供することである。
【０００９】
本発明は定量分析方法も開示する。この方法は次のステップを含む。（１）検体を含む体液サンプルを準備するステップ、（２）連続して配置された、該サンプルを受け取るための第１領域と、該サンプルを送達するための第２領域と、該サンプルが反応をする第３領域とを有する１つ以上のチャネルを有する基板を準備するステップと、ここで、該基板は、該体液サンプル中の該検体を認識するために該第１領域に入れられた第１抗体と、該第１領域又は該第２領域に入れられた糖類及びペルオキシダーゼと、該体液サンプル中の該検体を認識するために該第２領域内に固定された第２抗体と、該第３領域に入れられた光学基質及び基質試薬とを更に備え、該第１抗体と該第２抗体とは該体液サンプル中の同じ検体の異なるエピトープを認識するよう構成され、該基質試薬は糖類オキシダーゼからなり、（３）該体液サンプルを該チャネルの該第１領域に導入して、該第１抗体、該糖類、及び該ペルオキシダーゼが該体液サンプルと一緒に流れるのを可能にするステップ、（４）該検体を該第１抗体、該第２抗体、及び該ペルオキシダーゼの一部に結合させ該第２領域内に保持されるようにし、該糖類、結合していない第１抗体、及び結合していないペルオキシダーゼは、該体液サンプルと一緒に該第３領域へ流れ、該糖類が該糖類オキシダーゼにより酸化され過酸化水素（Ｈ2Ｏ2）を生成し、次に該光学基質が該第３領域に到達した該ペルオキシダーゼの触媒作用により該過酸化水素と反応して光学信号を生成するようにさせるステップ、及び（５）該生成された光学信号を検出するステップ。
【００１０】
従って、本発明の別の目的は、反応に必要な試薬と物質を主に含む液体試験ストリップを使用するので複雑な作業ステップがなく反応信号を直接検出することで分析結果が得られる定量分析方法を提供することである。
【００１１】
本発明の別の目的は、含まれている反応に必要な試薬と物質は乾燥しているので、使用まで比較的長期間保存でき、試薬の劣化による分析エラーを防ぐ液体試験ストリップを使用する定量分析方法を提供することである。
本発明とその好適な使用態様、他の目的、及び利点とは、添付の図面と実施形態の下記の詳細な説明を参照することで最も良く理解されるであろう。
【図面の簡単な説明】
【００１２】
【図１Ａ】本発明の第１実施形態に係る液体試験ストリップの斜視図である。
【図１Ｂ】図１Ａの液体試験ストリップのチャネル内の反応物質の配置を示す概略図である。
【図１Ｃ】図１Ａの液体試験ストリップのチャネル内の反応物質の配置の変化を示す概略図である。
【図１Ｄ】図１Ａの液体試験ストリップのチャネル内の反応物質の配置の変化を示す概略図である。
【図１Ｅ】図１Ａの液体試験ストリップのチャネル内の反応物質の配置の変化を示す概略図である。
【図１Ｆ】図１Ａの液体試験ストリップのチャネル内の反応物質の別の配置の変化を示す概略図である。
【図１Ｇ】図１Ａの液体試験ストリップのチャネル内の反応物質の別の配置の変化を示す概略図である。
【図１Ｈ】図１Ａの液体試験ストリップのチャネル内の反応物質の別の配置の変化を示す概略図である。
【図１Ｉ】図１Ａの液体試験ストリップの斜視断面図である。
【図２】本発明の第２実施形態に係る検出方法のフローチャートである。
【発明を実施するための形態】
【００１３】
本発明は液体試験ストリップとこれを使用する検出方法を提案するが、生物学的検定の物理的及び化学的原理は当業者に既知であり、本明細書で詳細に説明する必要はない。一方、下記の説明で参照する添付の図面は例示のために提供され、一定の倍率／縮尺で描かれる必要はない。
【００１４】
本発明の第１実施形態に係る液体試験ストリップの斜視図である図１Ａを参照されたい。液体試験ストリップ１は、チャネル１１が上面に設けられた基板１０を備える。チャネル１１は第１領域１１１、第２領域１１２、及び第３領域１１３を有する。これら３つの領域は連続して配置されている。第１領域１１１は体液サンプルを導入するための領域である。
【００１５】
図１Ｂは液体試験ストリップ１のチャネル１１内の反応物質の配置を示す概略図である。第１領域１１１は第１抗体１１１１、糖類１１１２、及びペルオキシダーゼ１１１３が入れられている。第２領域１１２は中に第２抗体１１２１が固定されている。第１抗体１１１１と第２抗体１１２１とは体液サンプル中の同一の検体１１０１の異なるエピトープを認識するよう構成されている。従って、第１抗体１１１１と第２抗体１１２１が同じ抗原を求めて互いに競合して抗原の認識を妨げない限り、第１抗体１１１１と第２抗体１１２１の両方が単クローン抗体（ｍＡｂｓ）か多クローン抗体（ｐＡｂｓ）のいずれかであってよい。また、第１抗体１１１１と第２抗体１１２１は全抗体、抗原結合断片（Ｆａｂ断片）、又は単鎖可変断片（ｓｃＦｖ）の形態であってもよい。光学基質１１３１と糖類オキシダーゼ１１３３からなる基質試薬１１３２とが第３領域１１３に入れられている。ペルオキシダーゼ１１１３はＨＲＰ（セイヨウワサビペルオキシダーゼ）、ＡＰ（アスコルビン酸ペルオキシダーゼ）、又は水素ペルオキシダーゼであってよい。光学基質１１３１は好ましくは５‐アミノ‐２，３‐ジヒドロ‐１，４‐フタラジンジオンであり、糖類１１１２は好ましくはグルコースであり、糖類オキシダーゼ１１３３はグルコースオキシダーゼである。
【００１６】
図１Ｃ〜図１Ｅを参照されたい。これらは液体試験ストリップ１のチャネル１１内の反応物質の異なる反応段階における配置を示す概略図である。図１Ｃでは、検体１１０１を含む体液サンプルがチャネル１１内に導入された後、第１抗体１１１１が検体１１０１を認識し結合する。第１抗体１１１１、糖類１１１２、及びペルオキシダーゼ１１１３は第１領域１１１内に固定されていないので、第１抗体１１１１と、第１抗体１１１１と結合した検体１１０１と、ペルオキシダーゼ１１１３と、糖類１１１２とが体液サンプルと一緒に第２領域１１２に向って流れる。
【００１７】
図１Ｄを参照すると、体液サンプルが第２領域１１２に到達した後、第２抗体１１２１は検体１１０１と結合する。従って、第１抗体１１１１と検体１１０１と第２抗体１１２１とからなる結合複合体が形成される。第２抗体１１２１は第２領域１１２内に固定されている。従って、検体１１０１と結合した第１抗体１１１１と、第２抗体１１２１と結合した検体１１０１と、第１抗体１１１１と共役するペルオキシダーゼ１１１３とが第２領域１１２内に保持される。しかし、体液サンプルと一緒に第２領域１１２に流れた糖類１１１２は体液サンプルと一緒に流れ続け、結合していない第１抗体１１１１及びこれと共役するペルオキシダーゼ１１１３も一緒に第３領域１１３に向って流れる。
【００１８】
図１Ｅを参照すると、糖類１１１２と、結合していない第１抗体１１１１及びこれと共役するペルオキシダーゼ１１１３とは第３領域１１３へ流れる。次に、糖類１１１２は第３領域１１３に固定された糖類オキシダーゼ１１３３と反応して、過酸化水素（Ｈ2Ｏ2）を生成する。得られた過酸化水素と光学基質１１３１とは第３領域１１３に到達したペルオキシダーゼ１１１３の触媒作用により光学信号を生成する。その結果、生成された光学信号の強度を検出することで、反応に関与した酵素の濃度を決定する。言い換えると、生成された光学信号の強度を検出することで、第３領域１１３に到達し該反応に関与したペルオキシダーゼ１１１３の量を決定できる。また、製造時、一定量のペルオキシダーゼ１１１３を液体試験ストリップ１に入れるので、簡単な引き算（第２領域１１２に保持されたペルオキシダーゼ１１１３の量＝ペルオキシダーゼ１１１３の全量−第３領域１１３へ流れるペルオキシダーゼ１１１３の量）により第２領域１１２に保持されたペルオキシダーゼ１１１３の量を決定することは容易である。最後に、第２領域１１２に保持されたペルオキシダーゼ１１１３の量を使うことで、体液サンプル中の検体１１０１の濃度を計算することが可能であり、これにより定量分析を完了する。
【００１９】
反応の前に、図１Ｂに示すように、第１抗体１１１１とペルオキシダーゼ１１１３とが直接互いに共役しているのが好ましい。或いは、第１抗体１１１１はビオチンと共役し、ペルオキシダーゼ１１１３はアビジンと共役できる。ビオチンとアビジンは反応時、強力に結合してＡＢ複合体を形成し、第１抗体１１１１が第２領域１１２に保持されている時、第１抗体１１１１はペルオキシダーゼ１１１３の一部を一緒に第２領域１１２に留まるよう引き寄せる。該アビジンはアビジン、ストレプトアビジン、又はニュートラアビジンであってよい。
【００２０】
次に、反応前の液体試験ストリップ１のチャネル１１内の反応物質の他の態様の配置を示す概略図である図１Ｆ〜図１Ｈを参照されたい。本発明の着想によれば、液体試験ストリップ１において、糖類１１１２とペルオキシダーゼ１１１３の両方を第１領域１１１に配置する代わりに、糖類１１１２とペルオキシダーゼ１１１３の両方を図１Ｆに示すように第２領域１１２に配置してもよい。
【００２１】
図１Ｆにおいて、第１抗体１１１１とペルオキシダーゼ１１１３が第１領域１１１に入れられている。糖類１１１２は第２領域１１２に入れられている。この態様では、第１抗体１１１１とペルオキシダーゼ１１１３は上述のように直接互いに共役するか、又はそれぞれビオチンとアビジンと結合してＡＢ複合体を形成することが出来る。他の反応物質、例えば第２抗体１１２１、光学基質１１３１、基質試薬１１３２、及び糖類オキシダーゼ１１３３の配置は図１Ｂに示したのと同様である。このような構成により、体液サンプルが第２領域１１２を通って流れた後、糖類１１１２も第３領域１１３に運ばれ該反応が可能になる。反応の異なる段階における反応物質の配置は図１Ｃ〜図１Ｅに示したのと同様であり、繰り返しの説明を省略する。
【００２２】
反応物質の別の態様の配置を図１Ｇに示す。第１抗体１１１１は第１領域１１１に入れられ、ペルオキシダーゼ１１１３と糖類１１１２は両方第２領域１１２に入れられている。反応物質の更に別の態様の配置を図１Ｈに示す。第１抗体１１１１と糖類１１１２は第１領域１１１に入れられ、ペルオキシダーゼ１１１３は第２領域１１２に入れられている。上記両態様の他の反応物質の配置は、図１Ｂに示したのと同様であり、反応の異なる段階における反応物質の配置は図１Ｃ〜図１Ｅに示したのと同様であり、繰り返しの説明を省略する。
【００２３】
図１Ｉを参照すると、図１ＡのＡ−Ａ線に沿った液体試験ストリップ１の断面図が示されている。図１Ｉによれば、繊維層１１１０が第１領域１１１の底部に設けられており、第１抗体（図１Ｂの符号１１１１）は繊維層１１１０に入れられ、体液サンプルが第１領域１１１内に導入された後、第１抗体（図１Ｂの符号１１１１）は体液サンプルにより第２領域１１２へ運ばれる。第２ニトロセルロース層１１２０と第３ニトロセルロース層１１３０がそれぞれ第２領域１１２の底部と第３領域１１３の底部に設けられている。第２抗体（図１Ｂの符号１１２１）は第２ニトロセルロース層１１２０に固定され、基質試薬１１３２は第３ニトロセルロース層１１３０に固定されている。
【００２４】
第２ニトロセルロース層１１２０と第３ニトロセルロース層１１３０は、それぞれ第２領域１１２の底部と第３領域１１３の底部に設けられた積層ニトロセルロース膜であってもよい。
【００２５】
第２領域１１２の底部と第３領域１１３の底部にニトロセルロース層を配置する別の好適な手法では、第２領域１１２の底部と第３領域１１３の底部の両方にニトロセルロース溶液を注ぎ、乾燥（空気乾燥又は凍結乾燥）処理を実行する。従って、このような処理により形成された第２ニトロセルロース層１１２０と第３ニトロセルロース層１１３０の両方が空洞マトリックス構造を有する。本発明に係る注ぎ込み処理で作られたニトロセルロース層を有するチャネル１１は、従来のマイクロ体液チャネルと異なる。また、毛管力を低減するために、第２領域１１２と第３領域１１３は各々０．３ｍｍ以上の幅を持つのが好ましい。基板１０は生体適合材料でできているのが好ましい。注ぎ込み処理の結果を最適化するために、チャネル１１は３μｍ〜５０μｍの範囲の表面粗さ（Ｒａ）を有するのが好ましい。ニトロセルロース層１１２０はニトロセルロース層１１３０と同じ平均厚みを有するのが好ましい。また、チャネル１１は、底部に形成され余分な体液サンプルを収容するための空洞マトリックス構造を有するニトロセルロース層を有する第４領域（不図示）を更に備えてもよい。
【００２６】
ニトロセルロース溶液を調製するために、ニトロセルロース粉末がエステル及びケトンを含む溶剤と混合される。ニトロセルロース粉末とエステル及びケトンを含む溶剤との体積比は好ましくは１：９である。また、ニトロセルロース層１１２０が上記のような注ぎ込み処理で形成される場合、第２抗体１１２１を含む反応溶液をニトロセルロース層１１２０に注入し次に乾燥処理することで、第２抗体１１２１はニトロセルロース層１１２０の空洞マトリックス構造内に装入される。従って、第２抗体１１２１は第２ニトロセルロース層１１２０内に粉末の形態で残される。
【００２７】
ニトロセルロース層を乾燥させて第２抗体１１２１が形成される上記手法のほかに、別の手法では、先ず第２抗体１１２１を含む溶液をニトロセルロース溶液と混合し、この混合液を第２領域１１２の底部に注ぎ、次に乾燥処理を行う。従って、第２ニトロセルロース層１１２０は第２領域１１２の底部に形成され、第２抗体１１２１は空洞マトリックス構造内に残され、乾燥されて粉末の形態になる。
【００２８】
第２ニトロセルロース層１１２０に第２抗体１１２１を供給するのと同様の手法を、第３ニトロセルロース層１１３０に基質試薬１１３２を供給するために実行してもよい。第３ニトロセルロース層１１３０を予成形しこれに基質試薬１１３２を加えるか、又は基質試薬１１３２をニトロセルロース溶液と混合しこの混合液を第３領域１１３の底部に注ぐことが出来、これにより第３ニトロセルロース層１１３０と基質試薬１１３２が形成される。同様の詳細な説明は省略する。
【００２９】
上記の第１実施形態のほかに、更に本発明は体液サンプルの検出方法を第２実施形態として提供する。第２実施形態における液体試験ストリップは第１実施形態の液体試験ストリップとほぼ同じであり、同様の詳細な説明は省略する。液体試験ストリップの構成要素を示す全ての符号は図１Ｂ〜図１Ｈに示されている。
【００３０】
図２は本発明の第２実施形態に係る検出方法のフローチャートである。本発明の検出方法の各ステップを下記に説明する。
ステップ２１：検体１１０１を含む体液サンプルを準備する（図１Ｂに示すように）。
ステップ２２：連続して配置された第１領域１１１、第２領域１１２、及び第３領域１１３を有する１つ以上のチャネル１１を有する基板１０を準備する。第１領域１１１は体液サンプルを導入するための領域であり、第１抗体１１１１を有する。第２領域１１２は中に第２抗体１１２１が固定されている。第１抗体１１１１と第２抗体１１２１とは体液サンプル中の検体１１０１の異なるエピトープを認識するよう構成されている。従って、第１抗体１１１１と第２抗体１１２１が同じ抗原を求めて互いに競合して抗原の認識を妨げない限り、第１抗体１１１１と第２抗体１１２１の両方が単クローン抗体（ｍＡｂｓ）か多クローン抗体（ｐＡｂｓ）のいずれかであってよい。光学基質１１３１と糖類オキシダーゼ１１３３からなる基質試薬１１３２とが第３領域１１３に入れられている。ペルオキシダーゼ１１１３はＨＲＰ（セイヨウワサビペルオキシダーゼ）、ＡＰ（アスコルビン酸ペルオキシダーゼ）、又は水素ペルオキシダーゼであってよい。光学基質１１３１は好ましくは５‐アミノ‐２，３‐ジヒドロ‐１，４‐フタラジンジオンであり、糖類１１１２は好ましくはグルコースであり、糖類オキシダーゼ１１３３はグルコースオキシダーゼである。また、糖類１１１２とペルオキシダーゼ１１１３は、第１実施形態で説明したのと同様にチャネル１１に亘って配置される（図１Ｂ、図１Ｆ、図１Ｇ、及び図１Ｈを参照）。
【００３１】
ステップ２３：チャネル１１の第１領域１１１に体液サンプルを導入する。この体液サンプルはチャネル１１に沿って第１領域１１１、第２領域１１２、及び第３領域１１３を連続して通って流れ、チャネル１１内の第１抗体１１１１、糖類１１１２、及びペルオキシダーゼ１１１３を運んで一緒に流れる。
【００３２】
ステップ２４：体液サンプル導入後、検体１１０１は体液サンプルと一緒に第２領域１１２へ流れる。第２抗体１１２１は検体１１０１と結合して、第１抗体１１１１と検体１１０１と第２抗体１１２１とからなる結合複合体が形成される。第２抗体１１２１は第２領域１１２内に固定されている。従って、検体１１０１と結合した第１抗体１１１１と、第２抗体１１２１と結合した検体１１０１と、第１抗体１１１１と共役するペルオキシダーゼ１１１３とが第２領域１１２内に保持される。しかし、体液サンプルは、糖類１１１２と、結合していない第１抗体１１１１と、結合していないペルオキシダーゼ１１１３とを第３領域１１３へ連続して運ぶ。第３領域１１３では、糖類１１１２が糖類オキシダーゼ１１３３の触媒作用により過酸化水素を生成する。光学基質１１３１は第３領域１１３に到達したペルオキシダーゼ１１１３の触媒作用により該過酸化水素と反応して光学信号を生成する。
【００３３】
ステップ２５：ステップ２４で生成された光学信号を検出する。生成された光学信号の強度を検出することで、反応に関与した酵素の濃度を決定する。言い換えると、生成された光学信号の強度を検出することで、第３領域１１３に到達し反応に関与したペルオキシダーゼ１１１３の量を決定できる。また、製造時、一定量のペルオキシダーゼ１１１３を液体試験ストリップ１に入れるので、簡単な引き算（第２領域１１２に保持されたペルオキシダーゼ１１１３の量＝ペルオキシダーゼ１１１３の全量−第３領域１１３へ流れるペルオキシダーゼ１１１３の量）により第２領域１１２に保持されたペルオキシダーゼ１１１３の量を決定することは容易である。最後に、第２領域１１２に保持されたペルオキシダーゼ１１１３の量を使うことで、体液サンプル中の検体１１０１の濃度を計算することが可能であり、これにより定量分析を完了する。
【００３４】
本発明の検出方法によれば、第１抗体１１１１、第２抗体１１２１、及びペルオキシダーゼ１１１３の好ましい構成と、第１抗体１１１１、第２抗体１１２１、及びペルオキシダーゼ１１１３の好ましい種類と、チャネル１１の各領域の好ましい構造と、ニトロセルロース層の形態及び製造方法と、ニトロセルロース溶液の組成及び好適な比率と、反応物質の組成と製造方法とは第１実施形態で説明したのと同様であり、それらの詳細な説明を省略する。
【００３５】
本発明を好適な実施形態を参照しながら説明した。これらの実施形態は本発明の範囲を限定する意図ではないことは理解されるであろう。また、当業者は本明細書に開示した内容を容易に理解し実施できるはずであり、本発明の着想から逸脱していない全ての等価な変更と変形は、添付の請求項に含まれるはずである。
【符号の説明】
【００３６】
１ 液体試験ストリップ
１０ 基板
１１ チャネル
１１１ 第１領域
１１２ 第２領域
１１３ 第３領域
１１０１ 検体
１１１１ 第１抗体
１１１２ 糖類
１１１３ ペルオキシダーゼ
１１２１ 第２抗体
１１３１ 光学基質
１１３２ 基質試薬
１１３３ 糖類オキシダーゼ
【技術分野】
【０００１】
本発明は液体試験ストリップ、特に、生体液の定量分析のための液体試験ストリップに関する。
【背景技術】
【０００２】
従来の定量分析検査は、生体分子を特異的に認識しこれと結合する免疫分子が有する特有の能力を利用する。例えば、従来の酵素免疫吸着法（ＥＬＩＳＡ）は、通常９６ウェルプレートで行われ、検体（例えば、抗原）の濃度を、該検体と対応する免疫分子と酵素と対応する試薬との間の反応に由来する検出された信号の強度により決定することを特徴とする。しかし、ユーザは通常、分析の段階毎に退屈な洗浄ステップを実行して非結合分子と非特異結合分子を洗い去り、分析の失敗または偽陽性結果の発生を防ぐ必要がある。
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００３】
技術の進歩とともに、今日、免疫分析検査は、マイクロ体液チャネルを有し分析の反応段階後毎に必要であった複雑で繰り返される洗浄作業を簡略化するか又は省略さえする液体試験ストリップを用いて実行される。しかし、このような液体試験ストリップは、反応に必要な試薬又は基質を液体試験ストリップに手動で加える必要があり、ユーザにとって不便である。従来のストリップに必要な試薬又は基質は長期保存時、室温で、又は光で劣化し易く、分析エラーを生じさせる。従って、このような試薬は特定の条件、例えば冷却又は遮光状態で保存される必要がある。その結果、従来の液体試験ストリップは使用及び保存になお不便である。
【０００４】
また、従来のチャネル又はマイクロ体液チャネルを有する液体試験ストリップは他の問題を有している。チャネル又はマイクロ体液チャネルは非吸収性材料で通常作られ、分析対象の体液サンプルはタンパク質又は炭水化物から主に成りその粘度は通常高いので、体液サンプルの一部は該チャネルの表面に付着し易く、反応をしない。このようなシナリオは、起こった場合、分析対象の体液サンプルを不利益にも無駄にするだけでなく、定量分析の精度に悪影響を及ぼす。
【０００５】
また、従来の液体試験ストリップはマイクロ体液チャネルにより体液サンプルの流れを可能にすることで、該チャネルの構造が及ぼす毛管力により体液サンプルが反応領域に送達されうる。体液サンプルを送達する別の手法は、体液サンプルが該チャネルに導入された時、該チャネルを通って反応領域へ推進されるように、例えば加圧手段による駆動力を適用することを含む。しかし、上記手法のどちらも、体液サンプルがチャネルに導入された後、気泡を発生させ易い。これらの気泡は、大きくても小さくても、該チャネルを塞ぎ、分析結果が不正確になる。
【課題を解決するための手段】
【０００６】
上記の欠点を直すために、本発明は体液サンプルの定量分析のための液体試験ストリップを開示する。本液体試験ストリップは１つ以上のチャネルを上面に有する基板を備える。該チャネルは体液サンプルを受け取るための第１領域と、第２領域と、第３領域とを有する。これらの３つの領域は連続して配置されている。また、該チャネルは第１抗体と糖類と第２抗体と光学基質と基質試薬とを含む。第１抗体は該体液サンプル中の検体を認識するために該第１領域に入れられている。糖類とペルオキシダーゼは該第１領域又は該第２領域に入れられてよい。第２抗体は第１抗体と同じ検体を認識するために該第２領域内に固定されている。該第１抗体と該第２抗体とは該検体の異なるエピトープを認識するよう構成されている。光学基質と糖類オキシダーゼからなる基質試薬とは該第３領域に入れられている。該体液サンプルを該チャネルに導入すると直ちに、該第１抗体、該糖類、及び該ペルオキシダーゼは該体液サンプルと一緒に流れる。該ペルオキシダーゼの一部、該第１抗体、及び該検体は一緒に該第２抗体と結合して該第２領域内に保持される。結合していないペルオキシダーゼは該体液サンプルと一緒に該第３領域へ流れ、該糖類は該糖類オキシダーゼにより酸化され過酸化水素（Ｈ2Ｏ2）を生成する。次に該光学基質と該過酸化水素は該第３領域において該ペルオキシダーゼの触媒作用により光学信号を生成する。
【０００７】
従って、本発明の主な目的は、複雑なステップがなく反応に必要な試薬と物質を主に含む液体試験ストリップを提供することである。
【０００８】
本発明の別の目的は、含まれている反応に必要な試薬と物質は乾燥しているので、使用まで比較的長期間保存でき、試薬の劣化による分析エラーを防ぐ液体試験ストリップを提供することである。
【０００９】
本発明は定量分析方法も開示する。この方法は次のステップを含む。（１）検体を含む体液サンプルを準備するステップ、（２）連続して配置された、該サンプルを受け取るための第１領域と、該サンプルを送達するための第２領域と、該サンプルが反応をする第３領域とを有する１つ以上のチャネルを有する基板を準備するステップと、ここで、該基板は、該体液サンプル中の該検体を認識するために該第１領域に入れられた第１抗体と、該第１領域又は該第２領域に入れられた糖類及びペルオキシダーゼと、該体液サンプル中の該検体を認識するために該第２領域内に固定された第２抗体と、該第３領域に入れられた光学基質及び基質試薬とを更に備え、該第１抗体と該第２抗体とは該体液サンプル中の同じ検体の異なるエピトープを認識するよう構成され、該基質試薬は糖類オキシダーゼからなり、（３）該体液サンプルを該チャネルの該第１領域に導入して、該第１抗体、該糖類、及び該ペルオキシダーゼが該体液サンプルと一緒に流れるのを可能にするステップ、（４）該検体を該第１抗体、該第２抗体、及び該ペルオキシダーゼの一部に結合させ該第２領域内に保持されるようにし、該糖類、結合していない第１抗体、及び結合していないペルオキシダーゼは、該体液サンプルと一緒に該第３領域へ流れ、該糖類が該糖類オキシダーゼにより酸化され過酸化水素（Ｈ2Ｏ2）を生成し、次に該光学基質が該第３領域に到達した該ペルオキシダーゼの触媒作用により該過酸化水素と反応して光学信号を生成するようにさせるステップ、及び（５）該生成された光学信号を検出するステップ。
【００１０】
従って、本発明の別の目的は、反応に必要な試薬と物質を主に含む液体試験ストリップを使用するので複雑な作業ステップがなく反応信号を直接検出することで分析結果が得られる定量分析方法を提供することである。
【００１１】
本発明の別の目的は、含まれている反応に必要な試薬と物質は乾燥しているので、使用まで比較的長期間保存でき、試薬の劣化による分析エラーを防ぐ液体試験ストリップを使用する定量分析方法を提供することである。
本発明とその好適な使用態様、他の目的、及び利点とは、添付の図面と実施形態の下記の詳細な説明を参照することで最も良く理解されるであろう。
【図面の簡単な説明】
【００１２】
【図１Ａ】本発明の第１実施形態に係る液体試験ストリップの斜視図である。
【図１Ｂ】図１Ａの液体試験ストリップのチャネル内の反応物質の配置を示す概略図である。
【図１Ｃ】図１Ａの液体試験ストリップのチャネル内の反応物質の配置の変化を示す概略図である。
【図１Ｄ】図１Ａの液体試験ストリップのチャネル内の反応物質の配置の変化を示す概略図である。
【図１Ｅ】図１Ａの液体試験ストリップのチャネル内の反応物質の配置の変化を示す概略図である。
【図１Ｆ】図１Ａの液体試験ストリップのチャネル内の反応物質の別の配置の変化を示す概略図である。
【図１Ｇ】図１Ａの液体試験ストリップのチャネル内の反応物質の別の配置の変化を示す概略図である。
【図１Ｈ】図１Ａの液体試験ストリップのチャネル内の反応物質の別の配置の変化を示す概略図である。
【図１Ｉ】図１Ａの液体試験ストリップの斜視断面図である。
【図２】本発明の第２実施形態に係る検出方法のフローチャートである。
【発明を実施するための形態】
【００１３】
本発明は液体試験ストリップとこれを使用する検出方法を提案するが、生物学的検定の物理的及び化学的原理は当業者に既知であり、本明細書で詳細に説明する必要はない。一方、下記の説明で参照する添付の図面は例示のために提供され、一定の倍率／縮尺で描かれる必要はない。
【００１４】
本発明の第１実施形態に係る液体試験ストリップの斜視図である図１Ａを参照されたい。液体試験ストリップ１は、チャネル１１が上面に設けられた基板１０を備える。チャネル１１は第１領域１１１、第２領域１１２、及び第３領域１１３を有する。これら３つの領域は連続して配置されている。第１領域１１１は体液サンプルを導入するための領域である。
【００１５】
図１Ｂは液体試験ストリップ１のチャネル１１内の反応物質の配置を示す概略図である。第１領域１１１は第１抗体１１１１、糖類１１１２、及びペルオキシダーゼ１１１３が入れられている。第２領域１１２は中に第２抗体１１２１が固定されている。第１抗体１１１１と第２抗体１１２１とは体液サンプル中の同一の検体１１０１の異なるエピトープを認識するよう構成されている。従って、第１抗体１１１１と第２抗体１１２１が同じ抗原を求めて互いに競合して抗原の認識を妨げない限り、第１抗体１１１１と第２抗体１１２１の両方が単クローン抗体（ｍＡｂｓ）か多クローン抗体（ｐＡｂｓ）のいずれかであってよい。また、第１抗体１１１１と第２抗体１１２１は全抗体、抗原結合断片（Ｆａｂ断片）、又は単鎖可変断片（ｓｃＦｖ）の形態であってもよい。光学基質１１３１と糖類オキシダーゼ１１３３からなる基質試薬１１３２とが第３領域１１３に入れられている。ペルオキシダーゼ１１１３はＨＲＰ（セイヨウワサビペルオキシダーゼ）、ＡＰ（アスコルビン酸ペルオキシダーゼ）、又は水素ペルオキシダーゼであってよい。光学基質１１３１は好ましくは５‐アミノ‐２，３‐ジヒドロ‐１，４‐フタラジンジオンであり、糖類１１１２は好ましくはグルコースであり、糖類オキシダーゼ１１３３はグルコースオキシダーゼである。
【００１６】
図１Ｃ〜図１Ｅを参照されたい。これらは液体試験ストリップ１のチャネル１１内の反応物質の異なる反応段階における配置を示す概略図である。図１Ｃでは、検体１１０１を含む体液サンプルがチャネル１１内に導入された後、第１抗体１１１１が検体１１０１を認識し結合する。第１抗体１１１１、糖類１１１２、及びペルオキシダーゼ１１１３は第１領域１１１内に固定されていないので、第１抗体１１１１と、第１抗体１１１１と結合した検体１１０１と、ペルオキシダーゼ１１１３と、糖類１１１２とが体液サンプルと一緒に第２領域１１２に向って流れる。
【００１７】
図１Ｄを参照すると、体液サンプルが第２領域１１２に到達した後、第２抗体１１２１は検体１１０１と結合する。従って、第１抗体１１１１と検体１１０１と第２抗体１１２１とからなる結合複合体が形成される。第２抗体１１２１は第２領域１１２内に固定されている。従って、検体１１０１と結合した第１抗体１１１１と、第２抗体１１２１と結合した検体１１０１と、第１抗体１１１１と共役するペルオキシダーゼ１１１３とが第２領域１１２内に保持される。しかし、体液サンプルと一緒に第２領域１１２に流れた糖類１１１２は体液サンプルと一緒に流れ続け、結合していない第１抗体１１１１及びこれと共役するペルオキシダーゼ１１１３も一緒に第３領域１１３に向って流れる。
【００１８】
図１Ｅを参照すると、糖類１１１２と、結合していない第１抗体１１１１及びこれと共役するペルオキシダーゼ１１１３とは第３領域１１３へ流れる。次に、糖類１１１２は第３領域１１３に固定された糖類オキシダーゼ１１３３と反応して、過酸化水素（Ｈ2Ｏ2）を生成する。得られた過酸化水素と光学基質１１３１とは第３領域１１３に到達したペルオキシダーゼ１１１３の触媒作用により光学信号を生成する。その結果、生成された光学信号の強度を検出することで、反応に関与した酵素の濃度を決定する。言い換えると、生成された光学信号の強度を検出することで、第３領域１１３に到達し該反応に関与したペルオキシダーゼ１１１３の量を決定できる。また、製造時、一定量のペルオキシダーゼ１１１３を液体試験ストリップ１に入れるので、簡単な引き算（第２領域１１２に保持されたペルオキシダーゼ１１１３の量＝ペルオキシダーゼ１１１３の全量−第３領域１１３へ流れるペルオキシダーゼ１１１３の量）により第２領域１１２に保持されたペルオキシダーゼ１１１３の量を決定することは容易である。最後に、第２領域１１２に保持されたペルオキシダーゼ１１１３の量を使うことで、体液サンプル中の検体１１０１の濃度を計算することが可能であり、これにより定量分析を完了する。
【００１９】
反応の前に、図１Ｂに示すように、第１抗体１１１１とペルオキシダーゼ１１１３とが直接互いに共役しているのが好ましい。或いは、第１抗体１１１１はビオチンと共役し、ペルオキシダーゼ１１１３はアビジンと共役できる。ビオチンとアビジンは反応時、強力に結合してＡＢ複合体を形成し、第１抗体１１１１が第２領域１１２に保持されている時、第１抗体１１１１はペルオキシダーゼ１１１３の一部を一緒に第２領域１１２に留まるよう引き寄せる。該アビジンはアビジン、ストレプトアビジン、又はニュートラアビジンであってよい。
【００２０】
次に、反応前の液体試験ストリップ１のチャネル１１内の反応物質の他の態様の配置を示す概略図である図１Ｆ〜図１Ｈを参照されたい。本発明の着想によれば、液体試験ストリップ１において、糖類１１１２とペルオキシダーゼ１１１３の両方を第１領域１１１に配置する代わりに、糖類１１１２とペルオキシダーゼ１１１３の両方を図１Ｆに示すように第２領域１１２に配置してもよい。
【００２１】
図１Ｆにおいて、第１抗体１１１１とペルオキシダーゼ１１１３が第１領域１１１に入れられている。糖類１１１２は第２領域１１２に入れられている。この態様では、第１抗体１１１１とペルオキシダーゼ１１１３は上述のように直接互いに共役するか、又はそれぞれビオチンとアビジンと結合してＡＢ複合体を形成することが出来る。他の反応物質、例えば第２抗体１１２１、光学基質１１３１、基質試薬１１３２、及び糖類オキシダーゼ１１３３の配置は図１Ｂに示したのと同様である。このような構成により、体液サンプルが第２領域１１２を通って流れた後、糖類１１１２も第３領域１１３に運ばれ該反応が可能になる。反応の異なる段階における反応物質の配置は図１Ｃ〜図１Ｅに示したのと同様であり、繰り返しの説明を省略する。
【００２２】
反応物質の別の態様の配置を図１Ｇに示す。第１抗体１１１１は第１領域１１１に入れられ、ペルオキシダーゼ１１１３と糖類１１１２は両方第２領域１１２に入れられている。反応物質の更に別の態様の配置を図１Ｈに示す。第１抗体１１１１と糖類１１１２は第１領域１１１に入れられ、ペルオキシダーゼ１１１３は第２領域１１２に入れられている。上記両態様の他の反応物質の配置は、図１Ｂに示したのと同様であり、反応の異なる段階における反応物質の配置は図１Ｃ〜図１Ｅに示したのと同様であり、繰り返しの説明を省略する。
【００２３】
図１Ｉを参照すると、図１ＡのＡ−Ａ線に沿った液体試験ストリップ１の断面図が示されている。図１Ｉによれば、繊維層１１１０が第１領域１１１の底部に設けられており、第１抗体（図１Ｂの符号１１１１）は繊維層１１１０に入れられ、体液サンプルが第１領域１１１内に導入された後、第１抗体（図１Ｂの符号１１１１）は体液サンプルにより第２領域１１２へ運ばれる。第２ニトロセルロース層１１２０と第３ニトロセルロース層１１３０がそれぞれ第２領域１１２の底部と第３領域１１３の底部に設けられている。第２抗体（図１Ｂの符号１１２１）は第２ニトロセルロース層１１２０に固定され、基質試薬１１３２は第３ニトロセルロース層１１３０に固定されている。
【００２４】
第２ニトロセルロース層１１２０と第３ニトロセルロース層１１３０は、それぞれ第２領域１１２の底部と第３領域１１３の底部に設けられた積層ニトロセルロース膜であってもよい。
【００２５】
第２領域１１２の底部と第３領域１１３の底部にニトロセルロース層を配置する別の好適な手法では、第２領域１１２の底部と第３領域１１３の底部の両方にニトロセルロース溶液を注ぎ、乾燥（空気乾燥又は凍結乾燥）処理を実行する。従って、このような処理により形成された第２ニトロセルロース層１１２０と第３ニトロセルロース層１１３０の両方が空洞マトリックス構造を有する。本発明に係る注ぎ込み処理で作られたニトロセルロース層を有するチャネル１１は、従来のマイクロ体液チャネルと異なる。また、毛管力を低減するために、第２領域１１２と第３領域１１３は各々０．３ｍｍ以上の幅を持つのが好ましい。基板１０は生体適合材料でできているのが好ましい。注ぎ込み処理の結果を最適化するために、チャネル１１は３μｍ〜５０μｍの範囲の表面粗さ（Ｒａ）を有するのが好ましい。ニトロセルロース層１１２０はニトロセルロース層１１３０と同じ平均厚みを有するのが好ましい。また、チャネル１１は、底部に形成され余分な体液サンプルを収容するための空洞マトリックス構造を有するニトロセルロース層を有する第４領域（不図示）を更に備えてもよい。
【００２６】
ニトロセルロース溶液を調製するために、ニトロセルロース粉末がエステル及びケトンを含む溶剤と混合される。ニトロセルロース粉末とエステル及びケトンを含む溶剤との体積比は好ましくは１：９である。また、ニトロセルロース層１１２０が上記のような注ぎ込み処理で形成される場合、第２抗体１１２１を含む反応溶液をニトロセルロース層１１２０に注入し次に乾燥処理することで、第２抗体１１２１はニトロセルロース層１１２０の空洞マトリックス構造内に装入される。従って、第２抗体１１２１は第２ニトロセルロース層１１２０内に粉末の形態で残される。
【００２７】
ニトロセルロース層を乾燥させて第２抗体１１２１が形成される上記手法のほかに、別の手法では、先ず第２抗体１１２１を含む溶液をニトロセルロース溶液と混合し、この混合液を第２領域１１２の底部に注ぎ、次に乾燥処理を行う。従って、第２ニトロセルロース層１１２０は第２領域１１２の底部に形成され、第２抗体１１２１は空洞マトリックス構造内に残され、乾燥されて粉末の形態になる。
【００２８】
第２ニトロセルロース層１１２０に第２抗体１１２１を供給するのと同様の手法を、第３ニトロセルロース層１１３０に基質試薬１１３２を供給するために実行してもよい。第３ニトロセルロース層１１３０を予成形しこれに基質試薬１１３２を加えるか、又は基質試薬１１３２をニトロセルロース溶液と混合しこの混合液を第３領域１１３の底部に注ぐことが出来、これにより第３ニトロセルロース層１１３０と基質試薬１１３２が形成される。同様の詳細な説明は省略する。
【００２９】
上記の第１実施形態のほかに、更に本発明は体液サンプルの検出方法を第２実施形態として提供する。第２実施形態における液体試験ストリップは第１実施形態の液体試験ストリップとほぼ同じであり、同様の詳細な説明は省略する。液体試験ストリップの構成要素を示す全ての符号は図１Ｂ〜図１Ｈに示されている。
【００３０】
図２は本発明の第２実施形態に係る検出方法のフローチャートである。本発明の検出方法の各ステップを下記に説明する。
ステップ２１：検体１１０１を含む体液サンプルを準備する（図１Ｂに示すように）。
ステップ２２：連続して配置された第１領域１１１、第２領域１１２、及び第３領域１１３を有する１つ以上のチャネル１１を有する基板１０を準備する。第１領域１１１は体液サンプルを導入するための領域であり、第１抗体１１１１を有する。第２領域１１２は中に第２抗体１１２１が固定されている。第１抗体１１１１と第２抗体１１２１とは体液サンプル中の検体１１０１の異なるエピトープを認識するよう構成されている。従って、第１抗体１１１１と第２抗体１１２１が同じ抗原を求めて互いに競合して抗原の認識を妨げない限り、第１抗体１１１１と第２抗体１１２１の両方が単クローン抗体（ｍＡｂｓ）か多クローン抗体（ｐＡｂｓ）のいずれかであってよい。光学基質１１３１と糖類オキシダーゼ１１３３からなる基質試薬１１３２とが第３領域１１３に入れられている。ペルオキシダーゼ１１１３はＨＲＰ（セイヨウワサビペルオキシダーゼ）、ＡＰ（アスコルビン酸ペルオキシダーゼ）、又は水素ペルオキシダーゼであってよい。光学基質１１３１は好ましくは５‐アミノ‐２，３‐ジヒドロ‐１，４‐フタラジンジオンであり、糖類１１１２は好ましくはグルコースであり、糖類オキシダーゼ１１３３はグルコースオキシダーゼである。また、糖類１１１２とペルオキシダーゼ１１１３は、第１実施形態で説明したのと同様にチャネル１１に亘って配置される（図１Ｂ、図１Ｆ、図１Ｇ、及び図１Ｈを参照）。
【００３１】
ステップ２３：チャネル１１の第１領域１１１に体液サンプルを導入する。この体液サンプルはチャネル１１に沿って第１領域１１１、第２領域１１２、及び第３領域１１３を連続して通って流れ、チャネル１１内の第１抗体１１１１、糖類１１１２、及びペルオキシダーゼ１１１３を運んで一緒に流れる。
【００３２】
ステップ２４：体液サンプル導入後、検体１１０１は体液サンプルと一緒に第２領域１１２へ流れる。第２抗体１１２１は検体１１０１と結合して、第１抗体１１１１と検体１１０１と第２抗体１１２１とからなる結合複合体が形成される。第２抗体１１２１は第２領域１１２内に固定されている。従って、検体１１０１と結合した第１抗体１１１１と、第２抗体１１２１と結合した検体１１０１と、第１抗体１１１１と共役するペルオキシダーゼ１１１３とが第２領域１１２内に保持される。しかし、体液サンプルは、糖類１１１２と、結合していない第１抗体１１１１と、結合していないペルオキシダーゼ１１１３とを第３領域１１３へ連続して運ぶ。第３領域１１３では、糖類１１１２が糖類オキシダーゼ１１３３の触媒作用により過酸化水素を生成する。光学基質１１３１は第３領域１１３に到達したペルオキシダーゼ１１１３の触媒作用により該過酸化水素と反応して光学信号を生成する。
【００３３】
ステップ２５：ステップ２４で生成された光学信号を検出する。生成された光学信号の強度を検出することで、反応に関与した酵素の濃度を決定する。言い換えると、生成された光学信号の強度を検出することで、第３領域１１３に到達し反応に関与したペルオキシダーゼ１１１３の量を決定できる。また、製造時、一定量のペルオキシダーゼ１１１３を液体試験ストリップ１に入れるので、簡単な引き算（第２領域１１２に保持されたペルオキシダーゼ１１１３の量＝ペルオキシダーゼ１１１３の全量−第３領域１１３へ流れるペルオキシダーゼ１１１３の量）により第２領域１１２に保持されたペルオキシダーゼ１１１３の量を決定することは容易である。最後に、第２領域１１２に保持されたペルオキシダーゼ１１１３の量を使うことで、体液サンプル中の検体１１０１の濃度を計算することが可能であり、これにより定量分析を完了する。
【００３４】
本発明の検出方法によれば、第１抗体１１１１、第２抗体１１２１、及びペルオキシダーゼ１１１３の好ましい構成と、第１抗体１１１１、第２抗体１１２１、及びペルオキシダーゼ１１１３の好ましい種類と、チャネル１１の各領域の好ましい構造と、ニトロセルロース層の形態及び製造方法と、ニトロセルロース溶液の組成及び好適な比率と、反応物質の組成と製造方法とは第１実施形態で説明したのと同様であり、それらの詳細な説明を省略する。
【００３５】
本発明を好適な実施形態を参照しながら説明した。これらの実施形態は本発明の範囲を限定する意図ではないことは理解されるであろう。また、当業者は本明細書に開示した内容を容易に理解し実施できるはずであり、本発明の着想から逸脱していない全ての等価な変更と変形は、添付の請求項に含まれるはずである。
【符号の説明】
【００３６】
１ 液体試験ストリップ
１０ 基板
１１ チャネル
１１１ 第１領域
１１２ 第２領域
１１３ 第３領域
１１０１ 検体
１１１１ 第１抗体
１１１２ 糖類
１１１３ ペルオキシダーゼ
１１２１ 第２抗体
１１３１ 光学基質
１１３２ 基質試薬
１１３３ 糖類オキシダーゼ
【特許請求の範囲】
【請求項１】
連続して配置された、体液サンプルを導入するために使用される第１領域と、第２領域と、第３領域とを有する１つ以上のチャネルを有する基板を備える液体試験ストリップであって、
該体液サンプル中の検体を認識するために該第１領域に入れられた第１抗体と、
該第１領域又は該第２領域に入れられた糖類と、
該第１領域又は該第２領域に入れられたペルオキシダーゼと、
該体液サンプル中の検体を認識するために該第２領域内に固定された第２抗体と、
該第３領域に入れられた光学基質及び基質試薬と
を備え、
該第１抗体と該第２抗体とは該体液サンプル中の該検体の異なるエピトープを認識するよう構成され、該基質試薬は糖類オキシダーゼからなり、
該検体を含む該体液サンプルを該チャネルに導入すると直ちに、該第１抗体、該糖類、及び該ペルオキシダーゼは該体液サンプルと一緒に流れ、該ペルオキシダーゼの一部は、該第１抗体、該検体、及び該第２抗体と結合して該第２領域内に保持され、該ペルオキシダーゼの残りは該体液サンプルと一緒に該第３領域へ流れ、該糖類は該第３領域に到達し該糖類オキシダーゼの触媒作用で過酸化水素を生成し、次に該光学基質は該第３領域に到達した該ペルオキシダーゼの触媒作用により該過酸化水素と反応して光学信号を生成する、液体試験ストリップ。
【請求項２】
前記第１抗体と前記ペルオキシダーゼは前記第１領域に入れられ、互いに共役する請求項１に記載の液体試験ストリップ。
【請求項３】
前記第１抗体はビオチンと更に共役し、前記ペルオキシダーゼはアビジン、ストレプトアビジン、及びニュートラアビジンからなるグループから選択された分子と共役する請求項１に記載の液体試験ストリップ。
【請求項４】
前記第１抗体は単クローン抗体又は多クローン抗体であり、前記第２抗体は単クローン抗体又は多クローン抗体である請求項１に記載の液体試験ストリップ。
【請求項５】
前記ペルオキシダーゼはＨＲＰ（セイヨウワサビペルオキシダーゼ）、ＡＰ（アスコルビン酸ペルオキシダーゼ）、及び水素ペルオキシダーゼからなるグループから選択される請求項１に記載の液体試験ストリップ。
【請求項６】
前記光学基質は５‐アミノ‐２，３‐ジヒドロ‐１，４‐フタラジンジオンである請求項１に記載の液体試験ストリップ。
【請求項７】
前記糖類はグルコースであり、前記糖類オキシダーゼはグルコースオキシダーゼである請求項１に記載の液体試験ストリップ。
【請求項８】
繊維層が前記第１領域の底部に設けられ、前記第１抗体は該繊維層に固定されている請求項１に記載の液体試験ストリップ。
【請求項９】
ニトロセルロース層が前記第２領域と第３領域の各々の底部に設けられ、前記第２抗体は該第２領域の該ニトロセルロース層に固定され、前記基質試薬は該第３領域の該ニトロセルロース層に固定されている請求項１に記載の液体試験ストリップ。
【請求項１０】
前記ニトロセルロース層はニトロセルロース膜である請求項９に記載の液体試験ストリップ。
【請求項１１】
前記ニトロセルロース層は、空洞マトリックス構造を有し、ニトロセルロース溶液を前記第２領域の底部と前記第３領域の底部に注ぎ込み、次に乾燥処理することで作られる請求項９に記載の液体試験ストリップ。
【請求項１２】
前記ニトロセルロース溶液はニトロセルロース粉末をエステル及びケトンを含む溶剤と混合することで調製される請求項１１に記載の液体試験ストリップ。
【請求項１３】
前記ニトロセルロース粉末はエステル及びケトンを含む溶剤と１：９の体積比で混合される請求項１２に記載の液体試験ストリップ。
【請求項１４】
前記第２抗体は、粉末の形態であり、該第２抗体を含む反応溶液を前記第２領域の前記ニトロセルロース層に注入し次に乾燥処理することで該第２領域の該ニトロセルロース層の空洞マトリックス構造内に入れられている請求項１３に記載の液体試験ストリップ。
【請求項１５】
前記乾燥処理は凍結乾燥処理である請求項１４に記載の液体試験ストリップ。
【請求項１６】
前記乾燥処理は空気乾燥処理である請求項１４に記載の液体試験ストリップ。
【請求項１７】
前記第２抗体は、粉末の形態であり、該第２抗体を含む反応溶液を前記ニトロセルロース溶液と混合し次に乾燥処理することで、該ニトロセルロース溶液が前記ニトロセルロース層を形成し該第２抗体は前記第２領域の該ニトロセルロース層内に粉末の形態で残され、これにより該第２抗体は該第２領域の該ニトロセルロース層の空洞マトリックス構造内に入れられている請求項１１に記載の液体試験ストリップ。
【請求項１８】
前記乾燥処理は凍結乾燥処理である請求項１７に記載の液体試験ストリップ。
【請求項１９】
前記乾燥処理は空気乾燥処理である請求項１７に記載の液体試験ストリップ。
【請求項２０】
前記基質試薬は、粉末の形態であり、該基質試薬を含む反応溶液を前記第３領域の前記ニトロセルロース層に注入し、次に乾燥処理することで該第３領域の該ニトロセルロース層の空洞マトリックス構造内に入れられている請求項１１に記載の液体試験ストリップ。
【請求項２１】
前記乾燥処理は凍結乾燥処理である請求項２０に記載の液体試験ストリップ。
【請求項２２】
前記乾燥処理は空気乾燥処理である請求項２０に記載の液体試験ストリップ。
【請求項２３】
前記基質試薬は、粉末の形態であり、該基質試薬を含む反応溶液を前記ニトロセルロース溶液と混合し次に乾燥処理することで、該ニトロセルロース溶液が前記ニトロセルロース層を形成し該基質試薬は前記第３領域の該ニトロセルロース層内に粉末の形態で残され、これにより該基質試薬は該第３領域の該ニトロセルロース層の空洞マトリックス構造内に入れられている請求項１１に記載の液体試験ストリップ。
【請求項２４】
前記乾燥処理は凍結乾燥処理である請求項２３に記載の液体試験ストリップ。
【請求項２５】
前記乾燥処理は空気乾燥処理である請求項２３に記載の液体試験ストリップ。
【請求項２６】
前記第２領域と第３領域は各々０．３ｍｍ以上の幅を有する請求項１１に記載の液体試験ストリップ。
【請求項２７】
前記基板は生体適合材料でできている請求項１１に記載の液体試験ストリップ。
【請求項２８】
前記チャネルは３μｍ〜５０μｍの範囲の表面粗さを有する請求項１１に記載の液体試験ストリップ。
【請求項２９】
前記第２領域の前記ニトロセルロース層は前記第３領域のニトロセルロース層と同じ平均厚みを有する請求項１１に記載の液体試験ストリップ。
【請求項３０】
前記チャネルは、余分な体液サンプルを収容するための空洞マトリックス構造を有するニトロセルロース層が底部に形成された第４領域を更に有する請求項２９に記載の液体試験ストリップ。
【請求項３１】
検体を含む体液サンプルを準備するステップと；
連続して配置された、体液サンプルを導入するために使用される第１領域と、第２領域と、第３領域とを有する１つ以上のチャネルを有する基板を準備するステップと、
ここで、該基板は、
該体液サンプル中の該検体を認識するために該第１領域に入れられた第１抗体と、
該第１領域又は該第２領域に入れられた糖類と、
該第１領域又は該第２領域に入れられたペルオキシダーゼと、
該体液サンプル中の該検体を認識するために該第２領域内に固定された第２抗体と、
該第３領域に入れられた光学基質及び基質試薬と
を更に備え、
該第１抗体と該第２抗体とは該検体の異なるエピトープを認識するよう構成され、該基質試薬は糖類オキシダーゼからなり；
該体液サンプルを該チャネルの該第１領域に導入して、該第１抗体、該糖類、及び該ペルオキシダーゼが該体液サンプルと一緒に流れるのを可能にするステップと；
該検体、該第１抗体、該第２抗体、及び該ペルオキシダーゼの一部は互いに結合して該第２領域内に保持され、
該糖類、結合していない第１抗体、及び該ペルオキシダーゼの結合していない残りは、該体液サンプルと一緒に該第３領域へ流れ、該糖類が該ペルオキシダーゼの触媒作用で過酸化水素を生成し、
次に該光学基質が該第３領域に到達した該ペルオキシダーゼの触媒作用により該過酸化水素と反応して光学信号を生成するようにさせるステップと；
該生成された光学信号を検出するステップと
を含む検出方法。
【請求項３２】
前記第１抗体と前記ペルオキシダーゼは前記第１領域に入れられ、互いに共役する請求項３１に記載の検出方法。
【請求項３３】
前記第１抗体はビオチンと更に共役し、前記ペルオキシダーゼはアビジン、ストレプトアビジン、及びニュートラアビジンからなるグループから選択されたアビジンと共役する請求項３１に記載の検出方法。
【請求項３４】
前記第１抗体は単クローン抗体又は多クローン抗体であり、前記第２抗体は単クローン抗体又は多クローン抗体である請求項３１に記載の検出方法。
【請求項３５】
前記ペルオキシダーゼはＨＲＰ（セイヨウワサビペルオキシダーゼ）、ＡＰ（アスコルビン酸ペルオキシダーゼ）、及び水素ペルオキシダーゼからなるグループから選択される請求項３１に記載の検出方法。
【請求項３６】
前記光学基質は５‐アミノ‐２，３‐ジヒドロ‐１，４‐フタラジンジオンである請求項３１に記載の検出方法。
【請求項３７】
前記糖類はグルコースであり、前記糖類オキシダーゼはグルコースオキシダーゼである請求項３１に記載の検出方法。
【請求項３８】
繊維層が前記第１領域の底部に設けられ、前記第１抗体は該繊維層に固定されている請求項３１に記載の検出方法。
【請求項３９】
ニトロセルロース層が前記第２領域と第３領域の各々の底部に設けられ、前記第２抗体は該第２領域の該ニトロセルロース層に固定され、前記基質試薬は該第３領域の該ニトロセルロース層に固定されている請求項３１に記載の検出方法。
【請求項４０】
前記ニトロセルロース層はニトロセルロース膜である請求項３９に記載の検出方法。
【請求項４１】
前記ニトロセルロース層は、空洞マトリックス構造を有し、ニトロセルロース溶液を前記第２領域の底部と前記第３領域の底部に注ぎ込み、次に乾燥処理することで作られる請求項３９に記載の検出方法。
【請求項４２】
前記ニトロセルロース溶液はニトロセルロース粉末をエステル及びケトンを含む溶剤と混合することで調製される請求項４１に記載の検出方法。
【請求項４３】
前記ニトロセルロース粉末はエステル及びケトンを含む溶剤と１：９の体積比で混合される請求項４２に記載の検出方法。
【請求項４４】
前記第２抗体は、粉末の形態であり、該第２抗体を含む反応溶液を前記第２領域の前記ニトロセルロース層に注入し次に乾燥処理することで該第２領域の該ニトロセルロース層の空洞マトリックス構造内に入れられている請求項４３に記載の検出方法。
【請求項４５】
前記乾燥処理は凍結乾燥処理である請求項４４に記載の検出方法。
【請求項４６】
前記乾燥処理は空気乾燥処理である請求項４４に記載の検出方法。
【請求項４７】
前記第２抗体は、粉末の形態であり、該第２抗体を含む反応溶液を前記ニトロセルロース溶液と混合し次に乾燥処理することで、該ニトロセルロース溶液が前記ニトロセルロース層を形成し該第２抗体は前記第２領域の該ニトロセルロース層内に粉末の形態で残され、これにより該第２抗体は該第２領域の該ニトロセルロース層の空洞マトリックス構造内に入れられている請求項４１に記載の検出方法。
【請求項４８】
前記乾燥処理は凍結乾燥処理である請求項４７に記載の検出方法。
【請求項４９】
前記乾燥処理は空気乾燥処理である請求項４７に記載の検出方法。
【請求項５０】
前記基質試薬は、粉末の形態であり、該基質試薬を含む反応溶液を前記第３領域の前記ニトロセルロース層に注入し、次に乾燥処理することで該第３領域の該ニトロセルロース層の空洞マトリックス構造内に入れられている請求項４１に記載の検出方法。
【請求項５１】
前記乾燥処理は凍結乾燥処理である請求項５０に記載の検出方法。
【請求項５２】
前記乾燥処理は空気乾燥処理である請求項５０に記載の検出方法。
【請求項５３】
前記基質試薬は、粉末の形態であり、該基質試薬を含む反応溶液を前記ニトロセルロース溶液と混合し次に乾燥処理することで、該ニトロセルロース溶液が前記ニトロセルロース層を形成し該基質試薬は前記第３領域の該ニトロセルロース層内に粉末の形態で残され、これにより該基質試薬は該第３領域の該ニトロセルロース層の空洞マトリックス構造内に入れられている請求項４１に記載の検出方法。
【請求項５４】
前記乾燥処理は凍結乾燥処理である請求項５３に記載の検出方法。
【請求項５５】
前記乾燥処理は空気乾燥処理である請求項５３に記載の検出方法。
【請求項５６】
前記第２領域と第３領域は各々０．３ｍｍ以上の幅を有する請求項４１に記載の検出方法。
【請求項５７】
前記基板は生体適合材料でできている請求項３９に記載の検出方法。
【請求項５８】
前記チャネルは３μｍ〜５０μｍの範囲の表面粗さを有する請求項４１に記載の検出方法。
【請求項５９】
前記第２領域の前記ニトロセルロース層は前記第３領域のニトロセルロース層と同じ平均厚みを有する請求項４１に記載の検出方法。
【請求項６０】
前記チャネルは、余分な体液サンプルを収容するための空洞マトリックス構造を有するニトロセルロース層が底部に形成された第４領域を更に有する請求項５９に記載の検出方法。
【請求項１】
連続して配置された、体液サンプルを導入するために使用される第１領域と、第２領域と、第３領域とを有する１つ以上のチャネルを有する基板を備える液体試験ストリップであって、
該体液サンプル中の検体を認識するために該第１領域に入れられた第１抗体と、
該第１領域又は該第２領域に入れられた糖類と、
該第１領域又は該第２領域に入れられたペルオキシダーゼと、
該体液サンプル中の検体を認識するために該第２領域内に固定された第２抗体と、
該第３領域に入れられた光学基質及び基質試薬と
を備え、
該第１抗体と該第２抗体とは該体液サンプル中の該検体の異なるエピトープを認識するよう構成され、該基質試薬は糖類オキシダーゼからなり、
該検体を含む該体液サンプルを該チャネルに導入すると直ちに、該第１抗体、該糖類、及び該ペルオキシダーゼは該体液サンプルと一緒に流れ、該ペルオキシダーゼの一部は、該第１抗体、該検体、及び該第２抗体と結合して該第２領域内に保持され、該ペルオキシダーゼの残りは該体液サンプルと一緒に該第３領域へ流れ、該糖類は該第３領域に到達し該糖類オキシダーゼの触媒作用で過酸化水素を生成し、次に該光学基質は該第３領域に到達した該ペルオキシダーゼの触媒作用により該過酸化水素と反応して光学信号を生成する、液体試験ストリップ。
【請求項２】
前記第１抗体と前記ペルオキシダーゼは前記第１領域に入れられ、互いに共役する請求項１に記載の液体試験ストリップ。
【請求項３】
前記第１抗体はビオチンと更に共役し、前記ペルオキシダーゼはアビジン、ストレプトアビジン、及びニュートラアビジンからなるグループから選択された分子と共役する請求項１に記載の液体試験ストリップ。
【請求項４】
前記第１抗体は単クローン抗体又は多クローン抗体であり、前記第２抗体は単クローン抗体又は多クローン抗体である請求項１に記載の液体試験ストリップ。
【請求項５】
前記ペルオキシダーゼはＨＲＰ（セイヨウワサビペルオキシダーゼ）、ＡＰ（アスコルビン酸ペルオキシダーゼ）、及び水素ペルオキシダーゼからなるグループから選択される請求項１に記載の液体試験ストリップ。
【請求項６】
前記光学基質は５‐アミノ‐２，３‐ジヒドロ‐１，４‐フタラジンジオンである請求項１に記載の液体試験ストリップ。
【請求項７】
前記糖類はグルコースであり、前記糖類オキシダーゼはグルコースオキシダーゼである請求項１に記載の液体試験ストリップ。
【請求項８】
繊維層が前記第１領域の底部に設けられ、前記第１抗体は該繊維層に固定されている請求項１に記載の液体試験ストリップ。
【請求項９】
ニトロセルロース層が前記第２領域と第３領域の各々の底部に設けられ、前記第２抗体は該第２領域の該ニトロセルロース層に固定され、前記基質試薬は該第３領域の該ニトロセルロース層に固定されている請求項１に記載の液体試験ストリップ。
【請求項１０】
前記ニトロセルロース層はニトロセルロース膜である請求項９に記載の液体試験ストリップ。
【請求項１１】
前記ニトロセルロース層は、空洞マトリックス構造を有し、ニトロセルロース溶液を前記第２領域の底部と前記第３領域の底部に注ぎ込み、次に乾燥処理することで作られる請求項９に記載の液体試験ストリップ。
【請求項１２】
前記ニトロセルロース溶液はニトロセルロース粉末をエステル及びケトンを含む溶剤と混合することで調製される請求項１１に記載の液体試験ストリップ。
【請求項１３】
前記ニトロセルロース粉末はエステル及びケトンを含む溶剤と１：９の体積比で混合される請求項１２に記載の液体試験ストリップ。
【請求項１４】
前記第２抗体は、粉末の形態であり、該第２抗体を含む反応溶液を前記第２領域の前記ニトロセルロース層に注入し次に乾燥処理することで該第２領域の該ニトロセルロース層の空洞マトリックス構造内に入れられている請求項１３に記載の液体試験ストリップ。
【請求項１５】
前記乾燥処理は凍結乾燥処理である請求項１４に記載の液体試験ストリップ。
【請求項１６】
前記乾燥処理は空気乾燥処理である請求項１４に記載の液体試験ストリップ。
【請求項１７】
前記第２抗体は、粉末の形態であり、該第２抗体を含む反応溶液を前記ニトロセルロース溶液と混合し次に乾燥処理することで、該ニトロセルロース溶液が前記ニトロセルロース層を形成し該第２抗体は前記第２領域の該ニトロセルロース層内に粉末の形態で残され、これにより該第２抗体は該第２領域の該ニトロセルロース層の空洞マトリックス構造内に入れられている請求項１１に記載の液体試験ストリップ。
【請求項１８】
前記乾燥処理は凍結乾燥処理である請求項１７に記載の液体試験ストリップ。
【請求項１９】
前記乾燥処理は空気乾燥処理である請求項１７に記載の液体試験ストリップ。
【請求項２０】
前記基質試薬は、粉末の形態であり、該基質試薬を含む反応溶液を前記第３領域の前記ニトロセルロース層に注入し、次に乾燥処理することで該第３領域の該ニトロセルロース層の空洞マトリックス構造内に入れられている請求項１１に記載の液体試験ストリップ。
【請求項２１】
前記乾燥処理は凍結乾燥処理である請求項２０に記載の液体試験ストリップ。
【請求項２２】
前記乾燥処理は空気乾燥処理である請求項２０に記載の液体試験ストリップ。
【請求項２３】
前記基質試薬は、粉末の形態であり、該基質試薬を含む反応溶液を前記ニトロセルロース溶液と混合し次に乾燥処理することで、該ニトロセルロース溶液が前記ニトロセルロース層を形成し該基質試薬は前記第３領域の該ニトロセルロース層内に粉末の形態で残され、これにより該基質試薬は該第３領域の該ニトロセルロース層の空洞マトリックス構造内に入れられている請求項１１に記載の液体試験ストリップ。
【請求項２４】
前記乾燥処理は凍結乾燥処理である請求項２３に記載の液体試験ストリップ。
【請求項２５】
前記乾燥処理は空気乾燥処理である請求項２３に記載の液体試験ストリップ。
【請求項２６】
前記第２領域と第３領域は各々０．３ｍｍ以上の幅を有する請求項１１に記載の液体試験ストリップ。
【請求項２７】
前記基板は生体適合材料でできている請求項１１に記載の液体試験ストリップ。
【請求項２８】
前記チャネルは３μｍ〜５０μｍの範囲の表面粗さを有する請求項１１に記載の液体試験ストリップ。
【請求項２９】
前記第２領域の前記ニトロセルロース層は前記第３領域のニトロセルロース層と同じ平均厚みを有する請求項１１に記載の液体試験ストリップ。
【請求項３０】
前記チャネルは、余分な体液サンプルを収容するための空洞マトリックス構造を有するニトロセルロース層が底部に形成された第４領域を更に有する請求項２９に記載の液体試験ストリップ。
【請求項３１】
検体を含む体液サンプルを準備するステップと；
連続して配置された、体液サンプルを導入するために使用される第１領域と、第２領域と、第３領域とを有する１つ以上のチャネルを有する基板を準備するステップと、
ここで、該基板は、
該体液サンプル中の該検体を認識するために該第１領域に入れられた第１抗体と、
該第１領域又は該第２領域に入れられた糖類と、
該第１領域又は該第２領域に入れられたペルオキシダーゼと、
該体液サンプル中の該検体を認識するために該第２領域内に固定された第２抗体と、
該第３領域に入れられた光学基質及び基質試薬と
を更に備え、
該第１抗体と該第２抗体とは該検体の異なるエピトープを認識するよう構成され、該基質試薬は糖類オキシダーゼからなり；
該体液サンプルを該チャネルの該第１領域に導入して、該第１抗体、該糖類、及び該ペルオキシダーゼが該体液サンプルと一緒に流れるのを可能にするステップと；
該検体、該第１抗体、該第２抗体、及び該ペルオキシダーゼの一部は互いに結合して該第２領域内に保持され、
該糖類、結合していない第１抗体、及び該ペルオキシダーゼの結合していない残りは、該体液サンプルと一緒に該第３領域へ流れ、該糖類が該ペルオキシダーゼの触媒作用で過酸化水素を生成し、
次に該光学基質が該第３領域に到達した該ペルオキシダーゼの触媒作用により該過酸化水素と反応して光学信号を生成するようにさせるステップと；
該生成された光学信号を検出するステップと
を含む検出方法。
【請求項３２】
前記第１抗体と前記ペルオキシダーゼは前記第１領域に入れられ、互いに共役する請求項３１に記載の検出方法。
【請求項３３】
前記第１抗体はビオチンと更に共役し、前記ペルオキシダーゼはアビジン、ストレプトアビジン、及びニュートラアビジンからなるグループから選択されたアビジンと共役する請求項３１に記載の検出方法。
【請求項３４】
前記第１抗体は単クローン抗体又は多クローン抗体であり、前記第２抗体は単クローン抗体又は多クローン抗体である請求項３１に記載の検出方法。
【請求項３５】
前記ペルオキシダーゼはＨＲＰ（セイヨウワサビペルオキシダーゼ）、ＡＰ（アスコルビン酸ペルオキシダーゼ）、及び水素ペルオキシダーゼからなるグループから選択される請求項３１に記載の検出方法。
【請求項３６】
前記光学基質は５‐アミノ‐２，３‐ジヒドロ‐１，４‐フタラジンジオンである請求項３１に記載の検出方法。
【請求項３７】
前記糖類はグルコースであり、前記糖類オキシダーゼはグルコースオキシダーゼである請求項３１に記載の検出方法。
【請求項３８】
繊維層が前記第１領域の底部に設けられ、前記第１抗体は該繊維層に固定されている請求項３１に記載の検出方法。
【請求項３９】
ニトロセルロース層が前記第２領域と第３領域の各々の底部に設けられ、前記第２抗体は該第２領域の該ニトロセルロース層に固定され、前記基質試薬は該第３領域の該ニトロセルロース層に固定されている請求項３１に記載の検出方法。
【請求項４０】
前記ニトロセルロース層はニトロセルロース膜である請求項３９に記載の検出方法。
【請求項４１】
前記ニトロセルロース層は、空洞マトリックス構造を有し、ニトロセルロース溶液を前記第２領域の底部と前記第３領域の底部に注ぎ込み、次に乾燥処理することで作られる請求項３９に記載の検出方法。
【請求項４２】
前記ニトロセルロース溶液はニトロセルロース粉末をエステル及びケトンを含む溶剤と混合することで調製される請求項４１に記載の検出方法。
【請求項４３】
前記ニトロセルロース粉末はエステル及びケトンを含む溶剤と１：９の体積比で混合される請求項４２に記載の検出方法。
【請求項４４】
前記第２抗体は、粉末の形態であり、該第２抗体を含む反応溶液を前記第２領域の前記ニトロセルロース層に注入し次に乾燥処理することで該第２領域の該ニトロセルロース層の空洞マトリックス構造内に入れられている請求項４３に記載の検出方法。
【請求項４５】
前記乾燥処理は凍結乾燥処理である請求項４４に記載の検出方法。
【請求項４６】
前記乾燥処理は空気乾燥処理である請求項４４に記載の検出方法。
【請求項４７】
前記第２抗体は、粉末の形態であり、該第２抗体を含む反応溶液を前記ニトロセルロース溶液と混合し次に乾燥処理することで、該ニトロセルロース溶液が前記ニトロセルロース層を形成し該第２抗体は前記第２領域の該ニトロセルロース層内に粉末の形態で残され、これにより該第２抗体は該第２領域の該ニトロセルロース層の空洞マトリックス構造内に入れられている請求項４１に記載の検出方法。
【請求項４８】
前記乾燥処理は凍結乾燥処理である請求項４７に記載の検出方法。
【請求項４９】
前記乾燥処理は空気乾燥処理である請求項４７に記載の検出方法。
【請求項５０】
前記基質試薬は、粉末の形態であり、該基質試薬を含む反応溶液を前記第３領域の前記ニトロセルロース層に注入し、次に乾燥処理することで該第３領域の該ニトロセルロース層の空洞マトリックス構造内に入れられている請求項４１に記載の検出方法。
【請求項５１】
前記乾燥処理は凍結乾燥処理である請求項５０に記載の検出方法。
【請求項５２】
前記乾燥処理は空気乾燥処理である請求項５０に記載の検出方法。
【請求項５３】
前記基質試薬は、粉末の形態であり、該基質試薬を含む反応溶液を前記ニトロセルロース溶液と混合し次に乾燥処理することで、該ニトロセルロース溶液が前記ニトロセルロース層を形成し該基質試薬は前記第３領域の該ニトロセルロース層内に粉末の形態で残され、これにより該基質試薬は該第３領域の該ニトロセルロース層の空洞マトリックス構造内に入れられている請求項４１に記載の検出方法。
【請求項５４】
前記乾燥処理は凍結乾燥処理である請求項５３に記載の検出方法。
【請求項５５】
前記乾燥処理は空気乾燥処理である請求項５３に記載の検出方法。
【請求項５６】
前記第２領域と第３領域は各々０．３ｍｍ以上の幅を有する請求項４１に記載の検出方法。
【請求項５７】
前記基板は生体適合材料でできている請求項３９に記載の検出方法。
【請求項５８】
前記チャネルは３μｍ〜５０μｍの範囲の表面粗さを有する請求項４１に記載の検出方法。
【請求項５９】
前記第２領域の前記ニトロセルロース層は前記第３領域のニトロセルロース層と同じ平均厚みを有する請求項４１に記載の検出方法。
【請求項６０】
前記チャネルは、余分な体液サンプルを収容するための空洞マトリックス構造を有するニトロセルロース層が底部に形成された第４領域を更に有する請求項５９に記載の検出方法。
【図１Ａ】
【図１Ｂ】
【図１Ｃ】
【図１Ｄ】
【図１Ｅ】
【図１Ｆ】
【図１Ｇ】
【図１Ｈ】
【図１Ｉ】
【図２】
【図１Ｂ】
【図１Ｃ】
【図１Ｄ】
【図１Ｅ】
【図１Ｆ】
【図１Ｇ】
【図１Ｈ】
【図１Ｉ】
【図２】
【公表番号】特表２０１２−５０５４１８（Ｐ２０１２−５０５４１８Ａ）
【公表日】平成２４年３月１日（２０１２．３．１）
【国際特許分類】
【出願番号】特願２０１１−５３１３２１（Ｐ２０１１−５３１３２１）
【出願日】平成２０年１０月１７日（２００８．１０．１７）
【国際出願番号】ＰＣＴ／ＣＮ２００８／００１７５０
【国際公開番号】ＷＯ２０１０／０４３０７５
【国際公開日】平成２２年４月２２日（２０１０．４．２２）
【出願人】（５０８０９９２５４）紅電醫學科技股▲分▼有限公司 (13)
【Ｆターム（参考）】
【公表日】平成２４年３月１日（２０１２．３．１）
【国際特許分類】
【出願日】平成２０年１０月１７日（２００８．１０．１７）
【国際出願番号】ＰＣＴ／ＣＮ２００８／００１７５０
【国際公開番号】ＷＯ２０１０／０４３０７５
【国際公開日】平成２２年４月２２日（２０１０．４．２２）
【出願人】（５０８０９９２５４）紅電醫學科技股▲分▼有限公司 (13)
【Ｆターム（参考）】
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