細胞処理装置
【課題】外気中の異物や菌が混入するリスクを高めることなく、必要な量の細胞を得ることができる細胞処理装置を提供する。
【解決手段】消化容器内において生体組織を消化して細胞懸濁液を生成する組織消化部１１と、組織消化部１１で生成された細胞懸濁液を収容して回転させ、細胞懸濁液を上清と細胞群とに遠心分離する遠心分離容器２ａ，２ｂと、遠心分離容器２ａ，２ｂ内の細胞群を保温するシートヒータ２２とを備える細胞処理装置１を採用する。
【解決手段】消化容器内において生体組織を消化して細胞懸濁液を生成する組織消化部１１と、組織消化部１１で生成された細胞懸濁液を収容して回転させ、細胞懸濁液を上清と細胞群とに遠心分離する遠心分離容器２ａ，２ｂと、遠心分離容器２ａ，２ｂ内の細胞群を保温するシートヒータ２２とを備える細胞処理装置１を採用する。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、細胞処理装置に関するものである。
【背景技術】
【０００２】
従来、患者から吸引した脂肪組織内に存在する脂肪組織由来細胞を分離、濃縮する細胞処理装置が知られている（例えば、特許文献１および２参照）。この細胞処理装置を用いて分離された細胞を患者の疾患部位に移植することにより、細胞治療を実施することができる。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００３】
【特許文献１】特表２００５−５１９８８３号公報
【特許文献２】特開平９−１８７２６９号公報
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００４】
ところで、患者から吸引した脂肪組織が少量であった場合、細胞治療に必要な細胞数に満たない場合がある。また、免疫治療に細胞を使用する場合、細胞が大量に必要となり、かつ数回に分けて投与することもあるが、細胞分離は吸引手術を伴うので、回数が少ない方が患者の負担を低減することができるため好ましい。
【０００５】
しかしながら、上記の特許文献１および２に開示されている細胞処理装置によれば、最終生成物である細胞の量は患者から吸引した脂肪組織の量に依存するため、吸引手術の回数が多くなり、患者の負担を増大させてしまうという不都合があった。
また、細胞を培養装置で増殖させる場合には、最終生成物である細胞を遠心分離容器から取り出して培養装置に入れ替えなければならず、作業者の手間がかかる上、外気中の異物や菌が混入するリスクが高くなるという不都合があった。
【０００６】
本発明は上述した事情に鑑みてなされたものであって、外気中の異物や菌が混入するリスクを高めることなく、必要な量の細胞を得ることができる細胞処理装置を提供することを目的としている。
【課題を解決するための手段】
【０００７】
上記目的を達成するために、本発明は以下の手段を採用する。
本発明は、生体組織を消化して細胞懸濁液を生成する消化容器と、該消化容器で生成された細胞懸濁液を収容して回転させ、細胞懸濁液を上清と細胞群とに遠心分離する遠心分離容器と、該遠心分離容器内の細胞群を保温する保温手段とを備える細胞処理装置を採用する。
【０００８】
本発明によれば、消化容器内において生体組織が消化されて生成された細胞懸濁液を、遠心分離容器内に収容して回転することで、比重の違いにより細胞懸濁液の各成分が遠心分離される。具体的には、遠心分離容器の底部最下層には比重の大きな細胞群が集められ、その上層には脂質や血漿等の上清が集められる。そして、このように分離された細胞群を、遠心分離容器内において保温手段により保温して培養することができる。
【０００９】
このようにすることで、生体組織から取り出した細胞群を培養して増やすことができ、患者から採取する生体組織量を少なく済ませて、組織採取時の患者の負担を軽減することができる。さらに、遠心分離容器内において細胞群の培養を行うことができるため、一連の処理を閉鎖系により行うことができ、コンタミネーションの危険性を低減するとともに、作業者の手間を省くことができる。
【００１０】
上記発明において、洗浄水を貯留する洗浄液容器と、培地を貯留する培地容器と、前記遠心分離容器内へ液体を供給する給液手段と、前記洗浄液容器と前記培地容器と前記給液手段とを接続する配管と、該配管に設けられ、前記遠心分離容器への給液を洗浄水と培地とで切り替える給液切替手段とを備えることとしてもよい。
【００１１】
このようにすることで、給液切替手段により、遠心分離容器への給液を洗浄水と培地とで切り替えることができる。これにより、遠心分離容器内に洗浄水を供給することで、細胞群の洗浄を行うことができる。また、遠心分離容器内に培地を供給することで、細胞群の培養を促進することができる。
【００１２】
上記発明において、前記遠心分離容器内の液体を排出する排液手段と、該排液手段より排出された液体を貯留する排液容器とを備えることとしてもよい。
このようにすることで、排液手段より、遠心分離容器内の液体を排液容器に排出することができる。これにより、遠心分離容器内の洗浄液を入れ替えて細胞群の洗浄性を向上するとともに、遠心分離容器内の培地を入れ替えて細胞群の培養を促進することができる。
【００１３】
上記発明において、前記遠心分離容器内にスキャホールドを供給するスキャホールド供給手段を備えることとしてもよい。
遠心分離容器内にスキャホールドを供給することで、遠心分離容器の内壁ではなく、スキャホールド表面に細胞を培養させることができる。これにより、遠心分離容器の内壁から細胞群を剥離する必要性を排除することができ、細胞群を容易に回収することができる。なお、スキャホールドは、培地に混入させて遠心分離容器内に供給することとしてもよく、培地とは別系統で遠心分離容器内に供給することとしてもよい。
【発明の効果】
【００１４】
本発明によれば、外気中の異物や菌が混入するリスクを高めることなく、必要な量の細胞を得ることができるという効果を奏する。
【図面の簡単な説明】
【００１５】
【図１】本発明の一実施形態に係る細胞処理装置を示す全体構成図である。
【図２】図１の細胞処理装置により実行される処理を示すフローチャートである。
【図３】図１の遠心処理容器の詳細図である。
【発明を実施するための形態】
【００１６】
以下、本発明の一実施形態に係る細胞処理装置について、図面を参照して説明する。
本実施形態に係る細胞処理装置１は、図１に示されるように、生体組織を消化して細胞懸濁液を生成する組織消化部（消化容器）１１と、細胞懸濁液を遠心分離する遠心分離機５と、洗浄液を貯留する洗浄液バッグ（洗浄液容器）６ａ，６ｂと、排液を貯留する排液バッグ（排液容器）２５と、培地を貯留する培地バッグ（培地容器）２０と、これらを接続するチューブ（配管）７，１５と、チューブ７，１５に設けられたチューブポンプ（給液手段、排液手段）８と、チューブ７に設けられたバルブＶ１〜Ｖ７と、これらを制御する制御部（給液切替手段）１０とを備えている。
【００１７】
組織消化部１１は、図１に示されるように、脂肪組織等の生体組織を消化処理するための装置であり、脂肪組織Ａを収容する処理容器１２と、処理容器１２内に配置されたフィルタ１３と、処理容器１２が載置された振とう機１４と、処理容器１２に接続されたチューブ１５と、チューブ１５の途中位置に設けられたバルブＶ６とを備えている。
【００１８】
処理容器１２は、円筒状の容器であり、生体から採取された脂肪組織Ａと該脂肪組織Ａを消化する消化酵素液Ｂとの混合液を収容するようになっている。処理容器１２は、底面１２ａが一方向に傾斜し、底面１２ａの最も低い位置に、チューブ１５に接続される排出口１２ｂが開口している。また、処理容器１２は、上部が蓋１２ｃにより塞がれており、蓋１２ｃには、処理容器１２内に消化酵素を投入するための投入口１２ｄと、処理容器１２内に脂肪組織Ａを注入するための脂肪注入ポート１２ｅとが設けられている。処理容器１２内では、消化酵素液Ｂによる細胞処理の進行とともに、脂肪組織Ａを構成する脂肪由来細胞等（細胞群）が単離されて浮遊し、細胞懸濁液Ｃが生成される。
【００１９】
フィルタ１３は、脂肪組織Ａよりも小さい径の孔を多数有しており、底面１２ａの上方に略水平に配置されて、排出口１２ｂを覆っている。これにより、脂肪組織Ａは、体内から採取されたままの状態では排出口１２ｂからの排出が制限され、消化酵素液Ｂにより細胞群が単離された状態でフィルタ１３の孔を通過して排出口１２ｂから排出されるようになっている。
【００２０】
振とう機１４は、処理容器１２を所定の円周軌道に沿って水平回転させるようになっている。また、処理容器１２と振とう機１４との間（処理容器１２の底面）には、シートヒータ１６が設けられ、処理容器１２内を約３７℃に保温するようになっている。
【００２１】
振とう機１４を作動させると、振とう機１４に載置された処理容器１２が所定の円周軌道に沿って水平回転させられる。これにより、脂肪組織Ａが消化酵素液Ｂ内において撹拌させられて、消化が促進される。そして、振とう機１４を停止して処理容器１２を静置すると、比重の差により、消化された脂肪組織Ａが上層に、脂肪組織Ａから分離された細胞群を含む消化酵素液Ｂ、すなわち細胞懸濁液Ｃが下層に層分離させられる。このように生成された細胞懸濁液Ｃは、チューブポンプ８を作動させることにより、チューブ７，１５を通って遠心分離機５の遠心分離容器２ａ，２ｂ内に送られる。
【００２２】
遠心分離機５は、２つの遠心分離容器２ａ，２ｂと、これら遠心分離容器２ａ，２ｂに接続されたロータ３と、ロータ３を回転駆動させるモータ４とを備えている。
遠心分離容器２ａ，２ｂ内には、組織消化部１１により生成され、チューブポンプ８によりチューブ７，１５を介して送られた細胞懸濁液Ｃが収容されている。また、各遠心分離容器２ａ，２ｂ内には、チューブ７の一端が挿入されている。
【００２３】
ロータ３は、モータ４により鉛直方向の軸線回りに回転駆動させられる支柱３ａと、支柱３ａから半径方向外方に延びた２本のアーム３ｂと備えている。
アーム３ｂの両端の間には、遠心分離容器２ａ，２ｂを収納するバケット３ｃが１つずつ設けられ、水平方向の軸線回りに揺動可能に支持されている。
【００２４】
上記構成を有することで、モータ４によりロータ３を回転駆動させると、バケット３ｃおよび遠心分離容器２ａ，２ｂが、鉛直方向の軸線回りに一体的に回転させられる。そして、遠心力により、バケット３ｃおよび遠心分離容器２ａ，２ｂの底部が支柱３ａから離間する方向へ揺動し、底部を半径方向外方に向けて回転させられる。これにより、遠心分離容器２ａ，２ｂ内の細胞懸濁液Ｃは、比重の違いによりその成分が遠心分離される。具体的には、遠心分離容器２ａ，２ｂの底部最下層には比重の大きな細胞群が集められ、その上層には脂質や血漿等の上清が集められる。
【００２５】
各遠心分離容器２ａ，２ｂに接続されたチューブ７の他端は、支柱３ａ内の管路を介して遠心分離機５の外部に接続されている。支柱３ａのチューブ７接続部には、例えばロータリージョイントが採用されており、支柱３ａが回転しても、外部に接続されたチューブ７が捩じれることなく給排液可能になっている。
【００２６】
チューブポンプ８は、複数のローラ（図示略）によりチューブ７を押しつぶしながら回転させることで、チューブ７内の液体を送るようになっている。チューブポンプ８は、正逆運転が可能であり、回転方向を変えることで遠心分離容器２ａ，２ｂへ給液および排液を行うことができる。
【００２７】
遠心分離機５は筐体２１内に収容されており、筐体２１の周囲にはシートヒータ（保温手段）２２が設けられ、筐体２１内を約３７℃に保温するようになっている。これにより、遠心分離容器２ａ，２ｂ内の細胞懸濁液Ｃ（細胞群）を約３７℃に保温して培養するようになっている。
【００２８】
制御部１０は、バルブＶ１〜Ｖ７の開閉動作およびチューブポンプ８の回転方向を制御するようになっている。
具体的には、組織消化部１１から遠心分離容器２ａ，２ｂ内に細胞懸濁液Ｃを送る場合には、制御部１０は、バルブＶ１，Ｖ２，Ｖ６を開くとともに、チューブポンプ８を正回転させる。
【００２９】
また、洗浄液バッグ６ａから遠心分離容器２ａ，２ｂ内に洗浄液を供給する場合には、制御部１０は、バルブＶ１，Ｖ２，Ｖ３を開くとともに、チューブポンプ８を正回転させる。また、洗浄液バッグ６ｂから遠心分離容器２ａ，２ｂ内に洗浄液を供給する場合には、制御部１０は、バルブＶ１，Ｖ２，Ｖ４を開くとともに、チューブポンプ８を正回転させる。
【００３０】
また、培地バッグ２０から遠心分離容器２ａ，２ｂ内に培地を供給する場合には、制御部１０は、バルブＶ１，Ｖ２，Ｖ５を開くとともに、チューブポンプ８を正回転させる。また、遠心分離容器２ａ，２ｂ内の液体を排液バッグ２５に排出する場合には、制御部１０は、バルブＶ１，Ｖ２，Ｖ７を開くとともに、チューブポンプ８を逆回転させる。
【００３１】
このように構成された細胞処理装置１の作用について、図２に示すフローチャートを用いて以下に説明する。
まず、カニューレ等を患者の体内に挿入して、生体内の脂肪組織Ａを吸引する（ステップＳ１）。以下、このように吸引した脂肪組織Ａを消化して細胞群を取り出す細胞処理工程（ステップＳ１０）と、細胞処理工程により得られた細胞群を培養する培養工程（ステップＳ２０）とに分けて説明する。
【００３２】
ステップＳ１０に示す細胞処理工程では、まず、処理容器１２の蓋１２ｃに設けられた脂肪注入ポート１２ｅから、処理容器１２内に脂肪組織Ａ（チューメセント液入り）を注入する（ステップＳ２）。
【００３３】
次に、処理容器１２内の脂肪組織Ａの洗浄を行う（ステップＳ３）。
具体的には、処理容器１２内のチューメッセント液を排出した後に、処理容器１２内に洗浄液を供給し、脂肪組織Ａ内の赤血球を洗浄液中に浮遊させ、この洗浄液を処理容器１２から排出する。この動作を数回繰り返すことで、脂肪組織Ａの洗浄を行う。
【００３４】
次に、処理容器１２内の脂肪組織Ａの消化を行う（ステップＳ４）。
具体的には、処理容器１２内に消化酵素液Ｂを投入し、振とう機１４を作動させて、処理容器１２内で脂肪組織Ａと消化酵素液Ｂとを攪拌させて、消化酵素による脂肪組織Ａの消化を促進する。そして、振とう機１４を停止して放置することにより、処理容器１２内の脂肪組織Ａを２層（上層は成熟脂肪組織Ａ、下層は消化後の細胞懸濁液Ｃ）に分離する。
【００３５】
次に、バルブＶ１，Ｖ２，Ｖ６を開くとともに、チューブポンプ８を正回転させることで、組織消化部１１から遠心分離容器２ａ，２ｂ内へ細胞懸濁液Ｃを移送する（ステップＳ５）。
【００３６】
次に、遠心分離容器２ａ，２ｂの細胞懸濁液Ｃの洗浄を行う（ステップＳ６）。
具体的には、まず、モータ４を作動させ、遠心分離容器２ａ，２ｂを底部が半径方向外方に向かうように回転させる。これにより、遠心分離容器２ａ，２ｂ内の細胞懸濁液Ｃは、その成分の比重の差によって細胞群と上澄み液とに遠心分離される。
【００３７】
次に、モータ４を停止して遠心回転を止めた後、バルブＶ１，Ｖ２，Ｖ７を開くとともに、チューブポンプ８を逆回転させることで、遠心分離容器２ａ，２ｂ内の上澄み液を排液バッグ２５に排出する。
そして、バルブＶ１，Ｖ２，Ｖ３（Ｖ４）を開くとともに、チューブポンプ８を正回転させることで、洗浄液バッグ６ａ（洗浄液バッグ６ｂ）から遠心分離容器２ａ，２ｂ内に洗浄液を供給し、再びモータ４を作動させて遠心分離を行う。
上記の動作を複数回繰り返すことで、遠心分離容器２ａ，２ｂの細胞懸濁液Ｃの洗浄が行われる。
【００３８】
次に、遠心分離容器２ａ，２ｂの細胞懸濁液Ｃの濃縮を行う（ステップＳ７）。
具体的には、ステップＳ６の洗浄工程と同様に、まず、モータ４を作動させ、遠心分離容器２ａ，２ｂを底部が半径方向外方に向かうように回転させる。これにより、遠心分離容器２ａ，２ｂ内の細胞懸濁液Ｃは、その成分の比重の差によって細胞群と上澄み液とに遠心分離される。
【００３９】
次に、モータ４を停止して遠心回転を止めた後、バルブＶ１，Ｖ２，Ｖ７を開くとともに、チューブポンプ８を逆回転させることで、遠心分離容器２ａ，２ｂ内の上澄み液を排液バッグ２５に排出する。
これにより、遠心分離容器２ａ，２ｂの細胞懸濁液Ｃ（細胞群）の濃縮が行われる。
【００４０】
次に、遠心分離容器２ａ，２ｂ内において遠心分離された細胞群（最終生成物）を取り出す（ステップＳ８）。
この場合において、最終生成物として得られた細胞群の量が必要量よりも少ない場合には、ステップＳ２０に示す培養工程において、この細胞群の培養を行う。
【００４１】
ステップＳ２０に示す培養工程では、まず、バルブＶ１，Ｖ２，Ｖ５を開くとともに、チューブポンプ８を正回転させることで、培地バッグ２０から遠心分離容器２ａ，２ｂ内に培地を供給し、細胞群を洗浄液から培地に付け替える（ステップＳ１１）。
【００４２】
次に、モータ４を作動させ、遠心分離容器２ａ，２ｂを回転させることで、細胞群の再懸濁が行われる（ステップＳ１２）。
次に、図３に示すように、細胞培養の足場材Ｃを、例えばシリンジ（スキャホールド供給手段）２６を使用して、遠心分離容器２ａ，２ｂ内に注入する（ステップＳ１３）。この足場材Ｃは、マイクロキャリア、コラーゲン、アルギン酸ビーズ等で一般的にスキャホールドとして機能するものであればよく、治療の目的により変更してもよい。具体的には、骨再生にはリン酸三カルシウムもしくはハイドロキシアパタイトの顆粒体（いずれも例えばオリンパステルモバイオマテリアル社製）、軟骨再生にはコラーゲン（例えばコラーゲン社製）、アルギン酸（例えば共成製薬社製）をゲル状もしくはビーズ状にして足場材Ｃとして用いる。
【００４３】
次に、モータ４を作動させ、遠心分離容器２ａ，２ｂを回転させることで、足場材Ｃに細胞群が均一に播種される（ステップＳ１４）。
なお、上記のステップＳ１３〜ステップＳ１４は必須の工程ではなく、これらの工程を行うことなく細胞群を培養することとしてもよい。
【００４４】
次に、シートヒータ２２を作動させ、遠心分離容器２ａ，２ｂ内の細胞群を約３７℃に保温して培養する（ステップＳ１５）。
この際、細胞群の培養を促進するために、遠心分離容器２ａ，２ｂ内の培地の交換を行うことが好ましい。
【００４５】
培地を交換する場合（ステップＳ２１）には、まず、モータ４を作動させ、遠心分離容器２ａ，２ｂを底部が半径方向外方に向かうように回転させる。これにより、遠心分離容器２ａ，２ｂ内の細胞懸濁液Ｃは、その成分の比重の差によって細胞群（足場Ｄを含む）と上澄み液（培地を含む）とに遠心分離される。
【００４６】
この培地を含む上澄み液を排出することで、遠心分離容器２ａ，２ｂから古い培地が除去される（ステップＳ１６）。
そして、古い培地を取り除いた後に、新しい培地を遠心分離容器２ａ，２ｂ内に再度供給することで、細胞群の培養を効果的に行うことができる（ステップＳ１７）。
【００４７】
以上のように、本実施形態に係る細胞処理装置１によれば、組織消化部１１内において生体組織が消化されて生成された細胞懸濁液Ｃを、遠心分離容器２ａ，２ｂ内に収容して回転することで、比重の違いにより細胞懸濁液Ｃの各成分が遠心分離される。具体的には、遠心分離容器２ａ，２ｂの底部最下層には比重の大きな細胞群が集められ、その上層には脂質や血漿等の上清が集められる。そして、このように分離された細胞群を、遠心分離容器２ａ，２ｂ内においてシートヒータ２２により保温して培養することができる。
【００４８】
このようにすることで、生体組織から取り出した細胞群を培養して増やすことができ、患者から採取する生体組織量を少なく済ませて、組織採取時の患者の負担を軽減することができる。さらに、遠心分離容器２ａ，２ｂ内において細胞群の培養を行うことができるため、一連の処理を閉鎖系により行うことができ、コンタミネーションの危険性を低減するとともに、作業者の手間を省くことができる。
【００４９】
また、制御部１０によりバルブＶ１〜Ｖ７の開閉動作およびチューブポンプ８の回転方向を制御することで、遠心分離容器２ａ，２ｂへの給液を洗浄水と培地とで切り替えることができる。これにより、遠心分離容器２ａ，２ｂ内に洗浄水を供給することで、細胞群の洗浄を行うことができる。また、遠心分離容器２ａ，２ｂ内に培地を供給することで、細胞群の培養を促進することができる。
【００５０】
また、チューブポンプ８より、遠心分離容器２ａ，２ｂ内の液体を排液容器に排出することができる。これにより、遠心分離容器２ａ，２ｂ内の洗浄液を入れ替えて細胞群の洗浄性を向上するとともに、遠心分離容器２ａ，２ｂ内の培地を入れ替えて細胞群の培養を促進することができる。
【００５１】
また、遠心分離容器２ａ，２ｂ内に足場Ｄを供給することで、遠心分離容器２ａ，２ｂの内壁ではなく、足場Ｄ表面に細胞を培養させることができる。これにより、遠心分離容器２ａ，２ｂの内壁から細胞群を剥離する必要性を排除することができ、細胞群を容易に回収することができる。なお、足場Ｄは、培地に混入させて遠心分離容器２ａ，２ｂ内に供給することとしてもよく、培地とは別系統で遠心分離容器２ａ，２ｂ内に供給することとしてもよい。
【００５２】
以上、本発明の実施形態について図面を参照して詳述してきたが、具体的な構成はこの実施形態に限られるものではなく、本発明の要旨を逸脱しない範囲の設計変更等も含まれる。
例えば、遠心分離容器２ａ，２ｂ内の細胞群を培養するための保温手段として、遠心分離機５全体を収容する筐体にシートヒータ２２を設けることとしたが、これに代えて、遠心分離容器のそれぞれに保温手段を設けることとしてもよい。
【００５３】
また、本実施形態において、２つの洗浄液バッグと１つの培地バッグとを備えた構成を例示したが、本発明はこれらバッグの数に限定されるものではない。例えば、洗浄液バッグを１つあるいは３つ以上設けることとしてもよく、２つ以上の培地バッグを設けることとしてもよい。また、培地バッグ２０を設けない構成として、培地を供給することなく保温のみで細胞群を培養することとしてもよい。
【符号の説明】
【００５４】
１ 細胞処理装置
２ａ，２ｂ 遠心分離容器
３ ロータ
３ａ 支柱
３ｂ アーム
３ｃ バケット
４ モータ
５ 遠心分離機
６ａ，６ｂ 洗浄液バッグ（洗浄液容器）
７ チューブ（配管）
８ チューブポンプ（給液手段、排液手段）
１０ 制御部（給液切替手段）
１１ 組織消化部（消化容器）
１２ 処理容器
１３ フィルタ
１４ 振とう機
１５ チューブ（配管）
１６ シートヒータ
２０ 培地バッグ（培地容器）
２１ 筐体
２２ シートヒータ（保温手段）
２５ 排液バッグ（排液容器）
２６ シリンジ（スキャホールド供給手段）
Ａ 脂肪組織
Ｂ 消化酵素液
Ｃ 細胞懸濁液
Ｄ 足場（スキャホールド）
Ｖ１〜Ｖ７ バルブ
【技術分野】
【０００１】
本発明は、細胞処理装置に関するものである。
【背景技術】
【０００２】
従来、患者から吸引した脂肪組織内に存在する脂肪組織由来細胞を分離、濃縮する細胞処理装置が知られている（例えば、特許文献１および２参照）。この細胞処理装置を用いて分離された細胞を患者の疾患部位に移植することにより、細胞治療を実施することができる。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００３】
【特許文献１】特表２００５−５１９８８３号公報
【特許文献２】特開平９−１８７２６９号公報
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００４】
ところで、患者から吸引した脂肪組織が少量であった場合、細胞治療に必要な細胞数に満たない場合がある。また、免疫治療に細胞を使用する場合、細胞が大量に必要となり、かつ数回に分けて投与することもあるが、細胞分離は吸引手術を伴うので、回数が少ない方が患者の負担を低減することができるため好ましい。
【０００５】
しかしながら、上記の特許文献１および２に開示されている細胞処理装置によれば、最終生成物である細胞の量は患者から吸引した脂肪組織の量に依存するため、吸引手術の回数が多くなり、患者の負担を増大させてしまうという不都合があった。
また、細胞を培養装置で増殖させる場合には、最終生成物である細胞を遠心分離容器から取り出して培養装置に入れ替えなければならず、作業者の手間がかかる上、外気中の異物や菌が混入するリスクが高くなるという不都合があった。
【０００６】
本発明は上述した事情に鑑みてなされたものであって、外気中の異物や菌が混入するリスクを高めることなく、必要な量の細胞を得ることができる細胞処理装置を提供することを目的としている。
【課題を解決するための手段】
【０００７】
上記目的を達成するために、本発明は以下の手段を採用する。
本発明は、生体組織を消化して細胞懸濁液を生成する消化容器と、該消化容器で生成された細胞懸濁液を収容して回転させ、細胞懸濁液を上清と細胞群とに遠心分離する遠心分離容器と、該遠心分離容器内の細胞群を保温する保温手段とを備える細胞処理装置を採用する。
【０００８】
本発明によれば、消化容器内において生体組織が消化されて生成された細胞懸濁液を、遠心分離容器内に収容して回転することで、比重の違いにより細胞懸濁液の各成分が遠心分離される。具体的には、遠心分離容器の底部最下層には比重の大きな細胞群が集められ、その上層には脂質や血漿等の上清が集められる。そして、このように分離された細胞群を、遠心分離容器内において保温手段により保温して培養することができる。
【０００９】
このようにすることで、生体組織から取り出した細胞群を培養して増やすことができ、患者から採取する生体組織量を少なく済ませて、組織採取時の患者の負担を軽減することができる。さらに、遠心分離容器内において細胞群の培養を行うことができるため、一連の処理を閉鎖系により行うことができ、コンタミネーションの危険性を低減するとともに、作業者の手間を省くことができる。
【００１０】
上記発明において、洗浄水を貯留する洗浄液容器と、培地を貯留する培地容器と、前記遠心分離容器内へ液体を供給する給液手段と、前記洗浄液容器と前記培地容器と前記給液手段とを接続する配管と、該配管に設けられ、前記遠心分離容器への給液を洗浄水と培地とで切り替える給液切替手段とを備えることとしてもよい。
【００１１】
このようにすることで、給液切替手段により、遠心分離容器への給液を洗浄水と培地とで切り替えることができる。これにより、遠心分離容器内に洗浄水を供給することで、細胞群の洗浄を行うことができる。また、遠心分離容器内に培地を供給することで、細胞群の培養を促進することができる。
【００１２】
上記発明において、前記遠心分離容器内の液体を排出する排液手段と、該排液手段より排出された液体を貯留する排液容器とを備えることとしてもよい。
このようにすることで、排液手段より、遠心分離容器内の液体を排液容器に排出することができる。これにより、遠心分離容器内の洗浄液を入れ替えて細胞群の洗浄性を向上するとともに、遠心分離容器内の培地を入れ替えて細胞群の培養を促進することができる。
【００１３】
上記発明において、前記遠心分離容器内にスキャホールドを供給するスキャホールド供給手段を備えることとしてもよい。
遠心分離容器内にスキャホールドを供給することで、遠心分離容器の内壁ではなく、スキャホールド表面に細胞を培養させることができる。これにより、遠心分離容器の内壁から細胞群を剥離する必要性を排除することができ、細胞群を容易に回収することができる。なお、スキャホールドは、培地に混入させて遠心分離容器内に供給することとしてもよく、培地とは別系統で遠心分離容器内に供給することとしてもよい。
【発明の効果】
【００１４】
本発明によれば、外気中の異物や菌が混入するリスクを高めることなく、必要な量の細胞を得ることができるという効果を奏する。
【図面の簡単な説明】
【００１５】
【図１】本発明の一実施形態に係る細胞処理装置を示す全体構成図である。
【図２】図１の細胞処理装置により実行される処理を示すフローチャートである。
【図３】図１の遠心処理容器の詳細図である。
【発明を実施するための形態】
【００１６】
以下、本発明の一実施形態に係る細胞処理装置について、図面を参照して説明する。
本実施形態に係る細胞処理装置１は、図１に示されるように、生体組織を消化して細胞懸濁液を生成する組織消化部（消化容器）１１と、細胞懸濁液を遠心分離する遠心分離機５と、洗浄液を貯留する洗浄液バッグ（洗浄液容器）６ａ，６ｂと、排液を貯留する排液バッグ（排液容器）２５と、培地を貯留する培地バッグ（培地容器）２０と、これらを接続するチューブ（配管）７，１５と、チューブ７，１５に設けられたチューブポンプ（給液手段、排液手段）８と、チューブ７に設けられたバルブＶ１〜Ｖ７と、これらを制御する制御部（給液切替手段）１０とを備えている。
【００１７】
組織消化部１１は、図１に示されるように、脂肪組織等の生体組織を消化処理するための装置であり、脂肪組織Ａを収容する処理容器１２と、処理容器１２内に配置されたフィルタ１３と、処理容器１２が載置された振とう機１４と、処理容器１２に接続されたチューブ１５と、チューブ１５の途中位置に設けられたバルブＶ６とを備えている。
【００１８】
処理容器１２は、円筒状の容器であり、生体から採取された脂肪組織Ａと該脂肪組織Ａを消化する消化酵素液Ｂとの混合液を収容するようになっている。処理容器１２は、底面１２ａが一方向に傾斜し、底面１２ａの最も低い位置に、チューブ１５に接続される排出口１２ｂが開口している。また、処理容器１２は、上部が蓋１２ｃにより塞がれており、蓋１２ｃには、処理容器１２内に消化酵素を投入するための投入口１２ｄと、処理容器１２内に脂肪組織Ａを注入するための脂肪注入ポート１２ｅとが設けられている。処理容器１２内では、消化酵素液Ｂによる細胞処理の進行とともに、脂肪組織Ａを構成する脂肪由来細胞等（細胞群）が単離されて浮遊し、細胞懸濁液Ｃが生成される。
【００１９】
フィルタ１３は、脂肪組織Ａよりも小さい径の孔を多数有しており、底面１２ａの上方に略水平に配置されて、排出口１２ｂを覆っている。これにより、脂肪組織Ａは、体内から採取されたままの状態では排出口１２ｂからの排出が制限され、消化酵素液Ｂにより細胞群が単離された状態でフィルタ１３の孔を通過して排出口１２ｂから排出されるようになっている。
【００２０】
振とう機１４は、処理容器１２を所定の円周軌道に沿って水平回転させるようになっている。また、処理容器１２と振とう機１４との間（処理容器１２の底面）には、シートヒータ１６が設けられ、処理容器１２内を約３７℃に保温するようになっている。
【００２１】
振とう機１４を作動させると、振とう機１４に載置された処理容器１２が所定の円周軌道に沿って水平回転させられる。これにより、脂肪組織Ａが消化酵素液Ｂ内において撹拌させられて、消化が促進される。そして、振とう機１４を停止して処理容器１２を静置すると、比重の差により、消化された脂肪組織Ａが上層に、脂肪組織Ａから分離された細胞群を含む消化酵素液Ｂ、すなわち細胞懸濁液Ｃが下層に層分離させられる。このように生成された細胞懸濁液Ｃは、チューブポンプ８を作動させることにより、チューブ７，１５を通って遠心分離機５の遠心分離容器２ａ，２ｂ内に送られる。
【００２２】
遠心分離機５は、２つの遠心分離容器２ａ，２ｂと、これら遠心分離容器２ａ，２ｂに接続されたロータ３と、ロータ３を回転駆動させるモータ４とを備えている。
遠心分離容器２ａ，２ｂ内には、組織消化部１１により生成され、チューブポンプ８によりチューブ７，１５を介して送られた細胞懸濁液Ｃが収容されている。また、各遠心分離容器２ａ，２ｂ内には、チューブ７の一端が挿入されている。
【００２３】
ロータ３は、モータ４により鉛直方向の軸線回りに回転駆動させられる支柱３ａと、支柱３ａから半径方向外方に延びた２本のアーム３ｂと備えている。
アーム３ｂの両端の間には、遠心分離容器２ａ，２ｂを収納するバケット３ｃが１つずつ設けられ、水平方向の軸線回りに揺動可能に支持されている。
【００２４】
上記構成を有することで、モータ４によりロータ３を回転駆動させると、バケット３ｃおよび遠心分離容器２ａ，２ｂが、鉛直方向の軸線回りに一体的に回転させられる。そして、遠心力により、バケット３ｃおよび遠心分離容器２ａ，２ｂの底部が支柱３ａから離間する方向へ揺動し、底部を半径方向外方に向けて回転させられる。これにより、遠心分離容器２ａ，２ｂ内の細胞懸濁液Ｃは、比重の違いによりその成分が遠心分離される。具体的には、遠心分離容器２ａ，２ｂの底部最下層には比重の大きな細胞群が集められ、その上層には脂質や血漿等の上清が集められる。
【００２５】
各遠心分離容器２ａ，２ｂに接続されたチューブ７の他端は、支柱３ａ内の管路を介して遠心分離機５の外部に接続されている。支柱３ａのチューブ７接続部には、例えばロータリージョイントが採用されており、支柱３ａが回転しても、外部に接続されたチューブ７が捩じれることなく給排液可能になっている。
【００２６】
チューブポンプ８は、複数のローラ（図示略）によりチューブ７を押しつぶしながら回転させることで、チューブ７内の液体を送るようになっている。チューブポンプ８は、正逆運転が可能であり、回転方向を変えることで遠心分離容器２ａ，２ｂへ給液および排液を行うことができる。
【００２７】
遠心分離機５は筐体２１内に収容されており、筐体２１の周囲にはシートヒータ（保温手段）２２が設けられ、筐体２１内を約３７℃に保温するようになっている。これにより、遠心分離容器２ａ，２ｂ内の細胞懸濁液Ｃ（細胞群）を約３７℃に保温して培養するようになっている。
【００２８】
制御部１０は、バルブＶ１〜Ｖ７の開閉動作およびチューブポンプ８の回転方向を制御するようになっている。
具体的には、組織消化部１１から遠心分離容器２ａ，２ｂ内に細胞懸濁液Ｃを送る場合には、制御部１０は、バルブＶ１，Ｖ２，Ｖ６を開くとともに、チューブポンプ８を正回転させる。
【００２９】
また、洗浄液バッグ６ａから遠心分離容器２ａ，２ｂ内に洗浄液を供給する場合には、制御部１０は、バルブＶ１，Ｖ２，Ｖ３を開くとともに、チューブポンプ８を正回転させる。また、洗浄液バッグ６ｂから遠心分離容器２ａ，２ｂ内に洗浄液を供給する場合には、制御部１０は、バルブＶ１，Ｖ２，Ｖ４を開くとともに、チューブポンプ８を正回転させる。
【００３０】
また、培地バッグ２０から遠心分離容器２ａ，２ｂ内に培地を供給する場合には、制御部１０は、バルブＶ１，Ｖ２，Ｖ５を開くとともに、チューブポンプ８を正回転させる。また、遠心分離容器２ａ，２ｂ内の液体を排液バッグ２５に排出する場合には、制御部１０は、バルブＶ１，Ｖ２，Ｖ７を開くとともに、チューブポンプ８を逆回転させる。
【００３１】
このように構成された細胞処理装置１の作用について、図２に示すフローチャートを用いて以下に説明する。
まず、カニューレ等を患者の体内に挿入して、生体内の脂肪組織Ａを吸引する（ステップＳ１）。以下、このように吸引した脂肪組織Ａを消化して細胞群を取り出す細胞処理工程（ステップＳ１０）と、細胞処理工程により得られた細胞群を培養する培養工程（ステップＳ２０）とに分けて説明する。
【００３２】
ステップＳ１０に示す細胞処理工程では、まず、処理容器１２の蓋１２ｃに設けられた脂肪注入ポート１２ｅから、処理容器１２内に脂肪組織Ａ（チューメセント液入り）を注入する（ステップＳ２）。
【００３３】
次に、処理容器１２内の脂肪組織Ａの洗浄を行う（ステップＳ３）。
具体的には、処理容器１２内のチューメッセント液を排出した後に、処理容器１２内に洗浄液を供給し、脂肪組織Ａ内の赤血球を洗浄液中に浮遊させ、この洗浄液を処理容器１２から排出する。この動作を数回繰り返すことで、脂肪組織Ａの洗浄を行う。
【００３４】
次に、処理容器１２内の脂肪組織Ａの消化を行う（ステップＳ４）。
具体的には、処理容器１２内に消化酵素液Ｂを投入し、振とう機１４を作動させて、処理容器１２内で脂肪組織Ａと消化酵素液Ｂとを攪拌させて、消化酵素による脂肪組織Ａの消化を促進する。そして、振とう機１４を停止して放置することにより、処理容器１２内の脂肪組織Ａを２層（上層は成熟脂肪組織Ａ、下層は消化後の細胞懸濁液Ｃ）に分離する。
【００３５】
次に、バルブＶ１，Ｖ２，Ｖ６を開くとともに、チューブポンプ８を正回転させることで、組織消化部１１から遠心分離容器２ａ，２ｂ内へ細胞懸濁液Ｃを移送する（ステップＳ５）。
【００３６】
次に、遠心分離容器２ａ，２ｂの細胞懸濁液Ｃの洗浄を行う（ステップＳ６）。
具体的には、まず、モータ４を作動させ、遠心分離容器２ａ，２ｂを底部が半径方向外方に向かうように回転させる。これにより、遠心分離容器２ａ，２ｂ内の細胞懸濁液Ｃは、その成分の比重の差によって細胞群と上澄み液とに遠心分離される。
【００３７】
次に、モータ４を停止して遠心回転を止めた後、バルブＶ１，Ｖ２，Ｖ７を開くとともに、チューブポンプ８を逆回転させることで、遠心分離容器２ａ，２ｂ内の上澄み液を排液バッグ２５に排出する。
そして、バルブＶ１，Ｖ２，Ｖ３（Ｖ４）を開くとともに、チューブポンプ８を正回転させることで、洗浄液バッグ６ａ（洗浄液バッグ６ｂ）から遠心分離容器２ａ，２ｂ内に洗浄液を供給し、再びモータ４を作動させて遠心分離を行う。
上記の動作を複数回繰り返すことで、遠心分離容器２ａ，２ｂの細胞懸濁液Ｃの洗浄が行われる。
【００３８】
次に、遠心分離容器２ａ，２ｂの細胞懸濁液Ｃの濃縮を行う（ステップＳ７）。
具体的には、ステップＳ６の洗浄工程と同様に、まず、モータ４を作動させ、遠心分離容器２ａ，２ｂを底部が半径方向外方に向かうように回転させる。これにより、遠心分離容器２ａ，２ｂ内の細胞懸濁液Ｃは、その成分の比重の差によって細胞群と上澄み液とに遠心分離される。
【００３９】
次に、モータ４を停止して遠心回転を止めた後、バルブＶ１，Ｖ２，Ｖ７を開くとともに、チューブポンプ８を逆回転させることで、遠心分離容器２ａ，２ｂ内の上澄み液を排液バッグ２５に排出する。
これにより、遠心分離容器２ａ，２ｂの細胞懸濁液Ｃ（細胞群）の濃縮が行われる。
【００４０】
次に、遠心分離容器２ａ，２ｂ内において遠心分離された細胞群（最終生成物）を取り出す（ステップＳ８）。
この場合において、最終生成物として得られた細胞群の量が必要量よりも少ない場合には、ステップＳ２０に示す培養工程において、この細胞群の培養を行う。
【００４１】
ステップＳ２０に示す培養工程では、まず、バルブＶ１，Ｖ２，Ｖ５を開くとともに、チューブポンプ８を正回転させることで、培地バッグ２０から遠心分離容器２ａ，２ｂ内に培地を供給し、細胞群を洗浄液から培地に付け替える（ステップＳ１１）。
【００４２】
次に、モータ４を作動させ、遠心分離容器２ａ，２ｂを回転させることで、細胞群の再懸濁が行われる（ステップＳ１２）。
次に、図３に示すように、細胞培養の足場材Ｃを、例えばシリンジ（スキャホールド供給手段）２６を使用して、遠心分離容器２ａ，２ｂ内に注入する（ステップＳ１３）。この足場材Ｃは、マイクロキャリア、コラーゲン、アルギン酸ビーズ等で一般的にスキャホールドとして機能するものであればよく、治療の目的により変更してもよい。具体的には、骨再生にはリン酸三カルシウムもしくはハイドロキシアパタイトの顆粒体（いずれも例えばオリンパステルモバイオマテリアル社製）、軟骨再生にはコラーゲン（例えばコラーゲン社製）、アルギン酸（例えば共成製薬社製）をゲル状もしくはビーズ状にして足場材Ｃとして用いる。
【００４３】
次に、モータ４を作動させ、遠心分離容器２ａ，２ｂを回転させることで、足場材Ｃに細胞群が均一に播種される（ステップＳ１４）。
なお、上記のステップＳ１３〜ステップＳ１４は必須の工程ではなく、これらの工程を行うことなく細胞群を培養することとしてもよい。
【００４４】
次に、シートヒータ２２を作動させ、遠心分離容器２ａ，２ｂ内の細胞群を約３７℃に保温して培養する（ステップＳ１５）。
この際、細胞群の培養を促進するために、遠心分離容器２ａ，２ｂ内の培地の交換を行うことが好ましい。
【００４５】
培地を交換する場合（ステップＳ２１）には、まず、モータ４を作動させ、遠心分離容器２ａ，２ｂを底部が半径方向外方に向かうように回転させる。これにより、遠心分離容器２ａ，２ｂ内の細胞懸濁液Ｃは、その成分の比重の差によって細胞群（足場Ｄを含む）と上澄み液（培地を含む）とに遠心分離される。
【００４６】
この培地を含む上澄み液を排出することで、遠心分離容器２ａ，２ｂから古い培地が除去される（ステップＳ１６）。
そして、古い培地を取り除いた後に、新しい培地を遠心分離容器２ａ，２ｂ内に再度供給することで、細胞群の培養を効果的に行うことができる（ステップＳ１７）。
【００４７】
以上のように、本実施形態に係る細胞処理装置１によれば、組織消化部１１内において生体組織が消化されて生成された細胞懸濁液Ｃを、遠心分離容器２ａ，２ｂ内に収容して回転することで、比重の違いにより細胞懸濁液Ｃの各成分が遠心分離される。具体的には、遠心分離容器２ａ，２ｂの底部最下層には比重の大きな細胞群が集められ、その上層には脂質や血漿等の上清が集められる。そして、このように分離された細胞群を、遠心分離容器２ａ，２ｂ内においてシートヒータ２２により保温して培養することができる。
【００４８】
このようにすることで、生体組織から取り出した細胞群を培養して増やすことができ、患者から採取する生体組織量を少なく済ませて、組織採取時の患者の負担を軽減することができる。さらに、遠心分離容器２ａ，２ｂ内において細胞群の培養を行うことができるため、一連の処理を閉鎖系により行うことができ、コンタミネーションの危険性を低減するとともに、作業者の手間を省くことができる。
【００４９】
また、制御部１０によりバルブＶ１〜Ｖ７の開閉動作およびチューブポンプ８の回転方向を制御することで、遠心分離容器２ａ，２ｂへの給液を洗浄水と培地とで切り替えることができる。これにより、遠心分離容器２ａ，２ｂ内に洗浄水を供給することで、細胞群の洗浄を行うことができる。また、遠心分離容器２ａ，２ｂ内に培地を供給することで、細胞群の培養を促進することができる。
【００５０】
また、チューブポンプ８より、遠心分離容器２ａ，２ｂ内の液体を排液容器に排出することができる。これにより、遠心分離容器２ａ，２ｂ内の洗浄液を入れ替えて細胞群の洗浄性を向上するとともに、遠心分離容器２ａ，２ｂ内の培地を入れ替えて細胞群の培養を促進することができる。
【００５１】
また、遠心分離容器２ａ，２ｂ内に足場Ｄを供給することで、遠心分離容器２ａ，２ｂの内壁ではなく、足場Ｄ表面に細胞を培養させることができる。これにより、遠心分離容器２ａ，２ｂの内壁から細胞群を剥離する必要性を排除することができ、細胞群を容易に回収することができる。なお、足場Ｄは、培地に混入させて遠心分離容器２ａ，２ｂ内に供給することとしてもよく、培地とは別系統で遠心分離容器２ａ，２ｂ内に供給することとしてもよい。
【００５２】
以上、本発明の実施形態について図面を参照して詳述してきたが、具体的な構成はこの実施形態に限られるものではなく、本発明の要旨を逸脱しない範囲の設計変更等も含まれる。
例えば、遠心分離容器２ａ，２ｂ内の細胞群を培養するための保温手段として、遠心分離機５全体を収容する筐体にシートヒータ２２を設けることとしたが、これに代えて、遠心分離容器のそれぞれに保温手段を設けることとしてもよい。
【００５３】
また、本実施形態において、２つの洗浄液バッグと１つの培地バッグとを備えた構成を例示したが、本発明はこれらバッグの数に限定されるものではない。例えば、洗浄液バッグを１つあるいは３つ以上設けることとしてもよく、２つ以上の培地バッグを設けることとしてもよい。また、培地バッグ２０を設けない構成として、培地を供給することなく保温のみで細胞群を培養することとしてもよい。
【符号の説明】
【００５４】
１ 細胞処理装置
２ａ，２ｂ 遠心分離容器
３ ロータ
３ａ 支柱
３ｂ アーム
３ｃ バケット
４ モータ
５ 遠心分離機
６ａ，６ｂ 洗浄液バッグ（洗浄液容器）
７ チューブ（配管）
８ チューブポンプ（給液手段、排液手段）
１０ 制御部（給液切替手段）
１１ 組織消化部（消化容器）
１２ 処理容器
１３ フィルタ
１４ 振とう機
１５ チューブ（配管）
１６ シートヒータ
２０ 培地バッグ（培地容器）
２１ 筐体
２２ シートヒータ（保温手段）
２５ 排液バッグ（排液容器）
２６ シリンジ（スキャホールド供給手段）
Ａ 脂肪組織
Ｂ 消化酵素液
Ｃ 細胞懸濁液
Ｄ 足場（スキャホールド）
Ｖ１〜Ｖ７ バルブ
【特許請求の範囲】
【請求項１】
生体組織を消化して細胞懸濁液を生成する消化容器と、
該消化容器で生成された細胞懸濁液を収容して回転させ、細胞懸濁液を上清と細胞群とに遠心分離する遠心分離容器と、
該遠心分離容器内の細胞群を保温する保温手段とを備える細胞処理装置。
【請求項２】
洗浄水を貯留する洗浄液容器と、
培地を貯留する培地容器と、
前記遠心分離容器内へ液体を供給する給液手段と、
前記洗浄液容器と前記培地容器と前記給液手段とを接続する配管と、
該配管に設けられ、前記遠心分離容器への給液を洗浄水と培地とで切り替える給液切替手段とを備える請求項１に記載の細胞処理装置。
【請求項３】
前記遠心分離容器内の液体を排出する排液手段と、
該排液手段より排出された液体を貯留する排液容器とを備える請求項２に記載の細胞処理装置。
【請求項４】
前記遠心分離容器内にスキャホールドを供給するスキャホールド供給手段を備える請求項１に記載の細胞処理装置。
【請求項１】
生体組織を消化して細胞懸濁液を生成する消化容器と、
該消化容器で生成された細胞懸濁液を収容して回転させ、細胞懸濁液を上清と細胞群とに遠心分離する遠心分離容器と、
該遠心分離容器内の細胞群を保温する保温手段とを備える細胞処理装置。
【請求項２】
洗浄水を貯留する洗浄液容器と、
培地を貯留する培地容器と、
前記遠心分離容器内へ液体を供給する給液手段と、
前記洗浄液容器と前記培地容器と前記給液手段とを接続する配管と、
該配管に設けられ、前記遠心分離容器への給液を洗浄水と培地とで切り替える給液切替手段とを備える請求項１に記載の細胞処理装置。
【請求項３】
前記遠心分離容器内の液体を排出する排液手段と、
該排液手段より排出された液体を貯留する排液容器とを備える請求項２に記載の細胞処理装置。
【請求項４】
前記遠心分離容器内にスキャホールドを供給するスキャホールド供給手段を備える請求項１に記載の細胞処理装置。
【図１】
【図２】
【図３】
【図２】
【図３】
【公開番号】特開２０１２−５５２２７（Ｐ２０１２−５５２２７Ａ）
【公開日】平成２４年３月２２日（２０１２．３．２２）
【国際特許分類】
【出願番号】特願２０１０−２０１１９７（Ｐ２０１０−２０１１９７）
【出願日】平成２２年９月８日（２０１０．９．８）
【出願人】（００００００３７６）オリンパス株式会社 (11,466)
【Ｆターム（参考）】
【公開日】平成２４年３月２２日（２０１２．３．２２）
【国際特許分類】
【出願日】平成２２年９月８日（２０１０．９．８）
【出願人】（００００００３７６）オリンパス株式会社 (11,466)
【Ｆターム（参考）】
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