芳香族スルホン酸を用いて塩を沈殿および再結晶させることによって３−ヒドロキシ−アミジノ−フェニルアラニン誘導体を精製する方法
本発明は、次の工程：（ａ）芳香族スルホン酸を場合によっては汚染された３−ヒドロキシアミジノフェニルアラニン誘導体の溶液に添加し、沈殿物を形成させる工程、（ｂ）工程（ａ）で形成された沈殿物を分離する工程、および（ｃ）この沈殿物から遊離３−ヒドロキシアミジノフェニルアラニン誘導体を回収する工程を含む３−ヒドロキシアミジノフェニルアラニン誘導体の精製法に関する。３−ヒドロキシアミジノフェニルアラニン誘導体は、例えばウロキナーゼ阻害剤として使用されてよい。更に、本発明は、３−アミジノフェニルアラニン誘導体を製造するための高純度の３−ヒドロキシアミジノフェニルアラニン誘導体の使用に関する。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、例えばウロキナーゼ阻害剤として使用されることができる３−ヒドロキシアミジノフェニルアラニン誘導体を高純度な形で製造することに関する。更に、本発明は、３−アミジノフェニルアラニン誘導体を製造するための高純度な３−ヒドロキシアミジノフェニルアラニン誘導体の使用に関する。
【０００２】
ウロキナーゼプラスミノゲン活性剤系（ＵＰＡ系）は、転移の場合ならびにさらに一次腫瘍、例えば肺癌、胃癌、腸癌、膵臓癌、卵巣癌および別の充実性腫瘍が成長した場合に中心的な役を演じる。ＵＰＡ系を阻害することによって、２つのレベルで医学的な作用を発揮することができる：一面で、転移の遮断ならびに他面、一次腫瘍の成長の減少。３−アミジノフェニルアラニン誘導体は、高度な作用を有するウロキナーゼ阻害剤の１つの種類である。
【０００３】
３−アミジノフェニルアラニン誘導体、殊にＮ−α−（２，４，６−トリイソプロピルフェニルスルホニル）−３−アミジノ−（Ｌ）−フェニルアラニン−４−エトシキカルボニルピペラジド（WX-UK１）の製造およびそのウロキナーゼ阻害剤としての使用は、例えばスイス国特許第６８９６１１号明細書、ＷＯ ００／０４９５４およびＷＯ ００／１７１５８ならびに出版物Stuerzebecher et al. (Bioorg. Med. Chem. Lei 0 (1999), 3147-3152)中に記載されている。しかし、前記刊行物中で使用された合成方法は、一般に比較的僅かな生成物収量を生じる。それというのも、加水分解されたTIPPS-OHは、望ましくない副生成物を生じるからである。１つの問題は、望ましい反応生成物を費用のかかるクロマトグラフィー法によってのみ副生成物を分離することができることにある。
【０００４】
ＰＣＴ／ＥＰ０３／０８２３０には、３−アミジノフェニルアラニン誘導体を３−ヒドロキシアミジノフェニルアラニン中間化合物を経て製造するための方法が記載されている。前記のオキサミジン誘導体は、高度に特異的な選択的ウロキナーゼ阻害剤であり、その上、経口的生体使用可能性の利点を提供する。しかし、ＰＣＴ／ＥＰ０３／０８２３０の記載から公知の製造法において、オキサミジン中間化合物を純粋な形で得ることができず、例えばアミド副生成物の分離のために費用のかかる精製方法が必要であるという問題が存在する。しかしながら、さらに、３−アミジノフェニルアラニン誘導体の合成ならびにオキサミジン誘導体それ自体の製薬学的使用のためには、前記オキサミジン誘導体を良好な収量および高い純度で製造することができる方法を提供することが好ましい。
【０００５】
従って、本発明の課題は、オキサミジン誘導体を高純度な形で得ることができる方法を提供することであった。
【０００６】
この課題は、次の工程：
（ａ）芳香族スルホン酸を場合によっては汚染された３−ヒドロキシアミジノフェニルアラニン誘導体の溶液に添加し、塩を形成させる工程、
（ｂ）工程（ａ）で形成された沈殿物を分離する工程、および
（ｃ）この沈殿物から３−ヒドロキシアミジノフェニルアラニン誘導体を回収する工程を含む３−ヒドロキシアミジノフェニルアラニン誘導体の精製法によって解決される。
【０００７】
本発明の範囲内で、"芳香族スルホン酸"は、芳香族またはヘテロ芳香族のモノ環系またはオリゴ環式環系であり、これらの環系は、少なくとも１つのスルホン酸基および／またはスルホネート基で置換されている。更に、芳香族環系またはヘテロ芳香族環系は、例えばＣ1〜Ｃ6−アルキル、Ｃ1〜Ｃ3−アルコキシ、ヒドロキシル、カルボキシル、スルホニル、ニトロ、シアノ、オキソおよび／またはハロゲンから選択されていてよい他の置換基を有することができる。適当な芳香族環系またはヘテロ芳香族環系は、例えば６〜２０個の炭素原子および特にＮ、ＯおよびＳから選択されていてよい０〜４個のヘテロ原子を有する単環および二環を含む。
【０００８】
適当な芳香族スルホン酸の例は、トルエンモノスルホン酸およびベンゼンモノスルホン酸および／またはトルエンジスルホン酸およびベンゼンジスルホン酸ならびにナフタリンモノスルホン酸誘導体および／またはナフタリンジスルホン酸である。好ましいのは、良好な結晶化傾向を有するジスルホン酸、例えばナフタリンジスルホン酸である。最も好ましいのは、ナフタリン−１，５−ジスルホン酸（アームストロングの酸）である。芳香族ジスルホン酸は、しばしば染料工業において使用され、そこで種々の、殊にナフタリンをベースとする染料の中間体およびカップリング試薬を製出する。
【０００９】
ところで、意外なことに、芳香族スルホン酸、殊にアームストロングの酸は、特に相応する塩の形で３−ヒドロキシアミジノフェニルアラニン誘導体（オキサミジン）の良好な沈殿に適している。即ち、形成された塩は、場合によっては汚染された３−ヒドロキシアミジノフェニルアラニン誘導体の溶液から粗製生成物を沈殿させる。この場合、溶剤としては、例えばケトン、例えばアセトンおよびペンタノン、エステル、例えばエチルアセテート、極性エーテル、例えばテトラヒドロフラン、ビス−（２−メトキシエチル）−エーテル（ジグリメ）、ジオキサンおよびメチル第三ブチルエーテル、ハロゲン化溶剤、例えばジクロロメタンが適当であるが、ニトリルおよび非極性アルコールも適当である。この沈殿物は、簡単な方法で次に続く工程（ｂ）で、例えば濾過によって溶液と分離されることができる。
【００１０】
引続き、分離された塩は、公知技術水準で通常の精製方法によってさらに精製されてよく、乾燥されてよい。こうして、本発明によれば、３−ヒドロキシアミジノフェニルアラニン誘導体の純度は、なおさらに改善されてよい。
【００１１】
引続き、工程（ｃ）で３−ヒドロキシアミジノフェニルアラニン誘導体は、回収される。このために、本発明によれば、相応するスルホン酸塩は、例えばヒドロキシアミジノフェニルアラニン誘導体よりも塩基性である塩基、即ち例えば炭酸水素ナトリウムと反応されてよいが、しかし、無機塩基および有機塩基と反応されてもよい。
【００１２】
従って、本発明は、簡単で洗練された方法で、汚染されたエダクト、中間化合物および望ましくない生成物、なかんずく望ましくないアミド汚染物をオキサミジンと分離することを可能にする。
【００１３】
本発明の方法は、殊にラセミ化合物ならびにＬ配置された化合物またはＤ配置された化合物として存在していてよい、式（Ｉ）
【化１】
〔式中、
Ｒ1は、式
【化２】
で示される基であり、
上記式中、Ｒ4は、
（ｉ）非置換又は例えばＣ1〜Ｃ6−アルキル、Ｃ1〜Ｃ3−アルコキシ、ヒドロキシル、カルボキシル、スルホニル、ニトロ、シアノ、オキソおよび／またはハロゲンで置換されたＣ1〜Ｃ6−アルキル基、例えばエトキシカルボニル基、またはアリール基、例えばフェニル、ｐ−ハロゲンフェニル、ナフチル、
（ｉｉ）飽和または不飽和の、分枝鎖状または非分枝鎖状のＣ1〜Ｃ6−アルコキシ基または
（ｉｉｉ）非置換または例えばＣ1〜Ｃ6−アルキル、Ｃ1〜Ｃ3−アルコキシ、ヒドロキシル、カルボキシル、スルホニル、ニトロ、シアノ、オキソおよび／またはハロゲンで置換されたフェノキシ基またはベンジルオキシカルボニル基を表わし、
Ｒ2は、非置換または例えばＣ1〜Ｃ6−アルキル、Ｃ1〜Ｃ3−アルコキシ、ヒドロキシル、カルボキシル、スルホニル、ニトロ、シアノ、オキソおよび／またはハロゲンで置換されたフェニル基、例えばフェニル、４−メチルフェニル、２，４，６−トリメチルフェニル、２，４，６−トリイソプロピルフェニル、４−メトキシ−２，３，６−トリメチルフェニルを表わし、
Ｒ3は、Ｈまたは分枝鎖状もしくは非分枝鎖状のＣ1〜Ｃ4−アルキルであり、
ｎは、０または１を表わし、
Ｚは、ＮまたはＣＲ9を表わし、この場合Ｒ9はＨ又は分枝鎖状もしくは非分枝鎖状のＣ1〜Ｃ4−アルキルである〕で示されるオキサミジン化合物の精製に適している。
【００１４】
本発明の視点によれば、前記精製方法は、有利にＮ−α−（２，４，６−トリイソプロピルフェニルスルホニル）−３−ヒドロキシアミジノ−（Ｌ）−フェニルアラニン−４−エトシキカルボニルピペラジドを高純度な形で単離するために使用されてよい。
【００１５】
オキサミジン誘導体を製造するためのこれまでに公知の合成方法の場合、オキサミジン化合物は、低い純度で生成され、３０％までの大量分のアミド不純物ならびにエダクトによる不純物および公知でない化合物を有する。本発明の方法によれば、純粋なオキサミジンを得ることに成功する。好ましくは、オキサミジンは、９０を上廻る純度、さらに有利には９５％を上廻る純度、大抵の場合に有利には９９％を上廻る純度で生成される。
【００１６】
更に、本発明の視点によれば、本発明による精製方法の場合には、ラセミ化は行なわれず、したがってエナンチオマー純粋のオキサミジン生成物が得られる。
【００１７】
本発明の実施態様によれば、本発明による精製は、３−ヒドロキシアミジノフェニルアラニン誘導体を製造するための方法の一部分であることができる。好ましい製造方法は、次の工程：
（ｉ）Ｎ−保護された３−シアノフェニルアラニンピペラジドの形成下でＮ−保護された３−シアノフェニルアラニンとピペラジン誘導体とを反応させる工程、
（ｉｉ）非置換または置換フェニルスルホニルハロゲン化物、殊にＴＩＰＰＳハロゲン化物と反応させる工程；
（ｉｉｉ）シアノ基をヒドロキシアミジノ基に変換する工程、
（ｉｖ）上記の記載と同様に芳香族スルホン酸で精製する工程を含む。
【００１８】
本発明による方法の工程（ｉ）によれば、Ｎ−保護された３−シアノフェニルアラニンとピペラジン誘導体との反応が行なわれる。"ピペラジン誘導体"の名称は、本発明の範囲内でピペラジンおよびその誘導体を含み、この場合には、場合によっては環状化合物の４個までの炭素位置および／または環の１個以下の窒素原子は、置換されていてよい。好ましくは、環の２個の窒素原子の一方に置換基を有するピペラジン誘導体が使用される。
【００１９】
適当な置換基の例は、Ｃ1〜Ｃ6アルキル基、飽和または不飽和の分枝鎖状または非分枝鎖状のＣ1〜Ｃ6アルコキシ基、フェノキシ基またはフェニルオキシカルボニル基、およびアリール基、例えばフェニル、ｐ−ハロゲン化フェニルおよびナフチルを含む。前記置換基は、その側でそれぞれ無関係に場合によっては、例えばＣ1〜Ｃ6アルキル、Ｃ1〜Ｃ3アルコキシ、ヒドロキシル、カルボキシル、スルホニル、ニトロ、シアノ、オキソおよび／またはハロゲンで置換されていてよい。
【００２０】
本発明によれば、工程（ｉ）で使用された３−シアノフェニルアラニンのアミノ窒素原子を保護するために、任意の保護基が使用されてよい。アミノ官能基に適した保護基の例は、公知技術水準で公知であり、例えばＣｂｚ（ベンジルオキシカルボニル）、Ｂｏｃ（Ｔ−ブチルオキシカルボニル）、ＤＩＭＯＺ（ジメトキシベンジルオキシカルボニル）、Ｔｆａｃ（トリフルオロアセチル）、ＣｙＯＣ（シアン−ｔ−ブチルオキシカルボニル）、Ｐｈｔｈ（フタロイル）、Ｂｐｏｃ（２−ビフェニル−４−イソプロポキシカルボニル）、Ｄｄｚ（３，５−ジメトキシフェニルイソプロポキシカルボニル）、Ｆｍｏｃ（フルオレニル−９−メチルオキシカルボニル）、ＰＡＬＯＣ（３−（３−ピリジル）−アリルオキシカルボニル）、Ｔｏｓ（ｐ−トルエンスルホニル）、ＮＰＳ（２−ニトロフェニルスルフェニル）、ＤＮＰＳ（２，４−ジニトロフェニルスルフェニル）を含む。本発明によれば、特に有利には、保護基Ｂｏｃが使用される。
【００２１】
本発明による方法の工程（ｉ）での反応の場合には、Ｎ−保護された３−シアノフェニルアラニン−ピペラジドが形成される。
【００２２】
引続き、本発明の実施態様によれば、Ｎ−保護基は、再び除去されてよい。それぞれの保護基の脱離に必要な条件は、当業者に公知である。
【００２３】
本発明により特に有利に使用される保護基Ｂｏｃは、例えば酸性媒体中、例えばＨＣｌガスまたはトリフルオロアセテートで飽和されている有機溶剤、例えばジオキサンまたはメタノール中で、特に有利にジオキサン中の４ＭのＨＣｌ（ｇ）で脱離されてよい。また、次に続く反応工程（ｉｉ）において、原位置で保護基の脱離が行なわれるように条件が選択されてよい。
【００２４】
工程（ｉｉ）において、工程（ｉ）で形成された３−シアノフェニルアラニン−ピペラジドは、場合によっては置換されていてよいフェニルスルホニルハロゲン化物と反応される。
【００２５】
この場合、好ましいハロゲン化物は、弗化物、塩化物、臭化物および沃化物である。フェニルスルホニルハロゲン化物に対する置換基の例は、Ｃ1〜Ｃ6アルキル、Ｃ1〜Ｃ3アルコキシ、ヒドロキシル、カルボニル、スルホニル、ニトロ、シアノ、オキソおよびハロゲンを含む。有利に使用されるフェニルスルホニルハロゲン化物は、フェニルハロゲン化物、４−メチルフェニルハロゲン化物、２，４，６−トリメチルフェニルハロゲン化物、４−メトキシ−２，３，６−トリメチルフェニルハロゲン化物および殊に２，４，６−トリイソプロピルフェニルスルホニル（TIPPS）ハロゲン化物である。
【００２６】
工程（ｉｉｉ）において、ヒドキシアミジノ官能基へのシアノ基の変換が行なわれる。この変換は、例えばヒドロキシルアミン塩酸塩により炭酸ナトリウムまたはトリエチルアミンの存在下で実施されてよい。この種の反応に適した方法は、公知技術水準で公知であり、例えばＷＯ ０３／０７２５５９中に記載されている。
【００２７】
引続き、工程（ｉｉｉ）で形成された３−ヒドロキシアミジノフェニルアラニン誘導体は、上記の精製方法に相応して有機スルホン酸を用いて高純度な形で得られる。この場合、３−ヒドロキシアミジノフェニルアラニン誘導体を工程（ｉｉｉ）から最初に単離することは、不要である。
【００２８】
こうして、３−ヒドロキシアミジノフェニルアラニン誘導体は、僅かな装置的費用で高い化学的収量および化学的純度で得られる。
【００２９】
本発明による方法で高純度で得られるオキサミジン化合物は、例えば経口的に使用可能なウロキナーゼ阻害剤として使用されてよい。
【００３０】
更に、本発明の視点によれば、オキサミジン化合物は、さらに反応されてよく、３−アミジノフェニルアラニン誘導体に変わってよい。本発明によれば、オキサミジンは、高純度な形で存在するので、アミジノ最終製品の収量も、さらに合成の経過で明らかに高められている。
【００３１】
それによって、本発明は、次の工程：
（ｉ）上記の方法により３−ヒドロキシアミジノフェニルアラニン誘導体を製造する工程および
（ｉｉ）ヒドロキシアミジノ基をアミジノ基に変換する工程を含む３−アミジノフェニルアラニン誘導体の製造法を提供する。
【００３２】
ヒドロキシアミジノ基は、還元によってアミジノ誘導体に変換されうる。これは、通常、例えばＷＯ ０３／０７６３９１、ＷＯ ０３／０７２５５９、欧州特許第１２９４７４２号明細書ならびにSteinmetzer et al., J. Enzyme Inhibition, 16, 2001, 241-249, Kent et al., J. Peptide Res., 52, 1998, 201-207およびStueber et al., Peptide Res., 8, 1995, 78-85の記載と同様に当業者によく知られた反応により、接触水素化によって行なわれる。
【００３３】
従って、本発明の方法によって、相応する３−アミジノフェニルアラニン誘導体は、公知技術水準の公知方法と比較して明らかに改善された収量で高純度な形で単離されてよい。
【００３４】
図１は、Ｎ−α−（２，４，６−トリイソプロピルフェニルスルホニル）−３−ヒドロキシアミジノ−（Ｌ）−フェニルアラニン−４−エトシキカルボニルピペラジドの従来の合成で得られる生成物混合物のＨＰＬＣのプロフィールを示す。オキサミジンは、約２１．４分間の保留時間で検出され、続いて２４．３分間でアミド不純物が検出される。
【００３５】
図２は、本発明による方法により得られたオキサミジンＮ−α−（２，４，６−トリイソプロピルフェニルスルホニル）−３−ヒドロキシアミジノ−（Ｌ）−フェニルアラニン−４−エトシキカルボニルピペラジドのＨＰＬＣのプロフィールを示す。
【００３６】
実施例
工程１：アルキル化および脱カルボキシル
【化３】
【００３７】
ジエチルアセトアミドマロネート（４０７ｇ）を室温で窒素雰囲気中でエタノール（１ ｌ）に添加する。懸濁液を約７０℃に加熱し、エタノール（９００ｍｌ）中のナトリウムメトキシド（１３０ｇ）の溶液を添加する。反応混合物をさらに３０分間前記温度で攪拌する。引続き、エタノール（１．４ ｌ）中の３−ブロムメチルベンゾニトリル（３００ｇ）の懸濁液を反応容器に添加する。この反応容器中の温度をさらに２．５時間、約７０℃に維持する。引続き、１．５時間で希釈された水素化ナトリウム溶液（２Ｎ；２．２ ｌ）を滴加する。更に、約７０℃で３０分間攪拌し、引続き懸濁液を室温に冷却する。室温で反応混合物のｐＨ値を、濃塩酸の添加（約１時間で）によって徐々に約７に低下させる。有機溶剤を蒸留によって減圧下（１００ミリバール未満；Ｔmax＝６０℃）で除去する。残存する残留物を１Ｎ ＮａＯＨ（１ ｌ）中に溶解する。水溶液を３回エチルアセテート（それぞれ３５０ｍｌ）で抽出する。引続き、１０℃に冷却する。水溶液を濃厚なＨＣｌで酸性にする（ｐＨ＝１）。望ましい生成物をエチルアセテートで抽出する（それぞれエチルアセテート１．２ ｌを用いての３回の抽出）。あわせた有機相を減圧下で濃縮する。望ましい生成物は、白色の固体として沈殿する。結晶物を５℃で吸引漏斗中に捕集し、少量のエチルアセテートで洗浄し、４５℃で窒素雰囲気中で乾燥させる。収量：２４３ｇ（６８％）。
【００３８】
工程２：酵素的ラセミ分割
【化４】
【００３９】
アセチル−シアノフェニル−アラニン（９４０ｇ）を１Ｎ ＮａＯＨ（４ ｌ）中に３７℃で溶解する。１２．８の初期のｐＨ値を４Ｎ ＨＣｌ（約１２０ｍｌ）の添加によって７．２に低下させる。アシラーゼＩ（３７．８ｇ）を添加する。反応混合物のｐＨ値を約７．２に一定に維持するために、連続的にＮａＯＨ（１Ｎ）を反応混合物に添加する。３７℃で７２時間後、沈殿した生成物を濾過によって２０℃で単離する。結晶物を水で洗浄し、減少された圧力で約４０℃で乾燥させる。濾液を減圧下で元来の体積の三分の一に濃縮した場合には、他の生成物が沈殿する。全収量：２６１ｇ（３４％）。
【００４０】
工程３：ＢｏｃでのＮＨ2官能価の保護
【化５】
【００４１】
メタノール（４．５ ｌ）中のシアノフェニル−Ｌ−アラニン（４２５ｇ）の懸濁液にトリエチルアミン（３１０ｍｌ）を添加する。２５℃でジ−第三ブチルジカーボネート（４８８ｇ）を添加する。反応混合物を一晩中、攪拌する。有機溶剤を減圧下で４０℃で除去する。残存するオレンジ色の油をエチルアセテート（３ ｌ）で希釈する。１Ｎ ＨＣｌ（２．３ ｌ）を添加し、不均質な溶液を３０分間強く攪拌する。相分離を実施する。有機相を単離し、水で抽出し、ＭｇＳＯ4で乾燥させる。濾過後、有機相を４０℃で減圧下で蒸発させ、乾燥物に変える。ジクロロメタンを残留物に添加した場合には、結晶物を得ることができる。この結晶物を濾過によって捕集し、窒素の下で４５℃で乾燥させる。収量：５５４ｇ（８５％）。
【００４２】
工程４：カップリング反応
【化６】
【００４３】
Ｂｏｃ−シアノフェニルアラニン（５５４ｇ）およびＨＯＢＴ（５２ｇ）をジクロロメタン（２．７ ｌ）中に懸濁させる。ジクロロメタン（１ ｌ）中のＤＣＣ（４５３ｇ）の溶液を添加する。引続き、この懸濁液を１０〜１５℃に冷却し、３０分間でエトキシカルボニルピペラジン（３４７ｇ）を滴加し、一方で、上記の温度範囲を維持する。反応混合物を一晩中、攪拌する。尿素を濾別し、廃棄する。飽和ＮａＨＣＯ3溶液（１．８ ｌ）を濾液に添加する。不均質な混合物を３０分間攪拌し、引続き相を分離する。有機相を水（２ ｌ）で抽出し、引続きＭｇＳＯ4で乾燥する。ＭｇＳＯ4を濾別し、溶液を減圧下で３０℃で濃縮する。残存する油をエチルアセテート（３００ｍｌ）中に溶解する。溶液に沸点に加熱する。ジイソプロピルエーテル（７５０ｍｌ）を溶液が混濁するまで徐々に添加する。温度を５０℃に低下させ、混合物を放置させる。引続き、温度を５時間で２５℃に低下させる。生成物を濾別し、ジイソプロピルエーテルで洗浄し、引続き窒素の下で４０℃で乾燥させる。収量：６６０ｇ（８０％）。
【００４４】
工程５：脱保護
【化７】
【００４５】
Ｂｏｃ−Ｌ−シアノフェニルアラニン−ピパミド（４４２ｇ）をジオキサン（４Ｍ；１．２ ｌ）中のＨＣｌの溶液中に溶解する。温度は、添加中に２５℃から３２℃へ上昇する。３時間後、反応は終結し、ジクロロメタン（１ ｌ）を溶液に添加する。望まし生成物は、沈殿を開始する。懸濁液を一晩中、攪拌する。ＨＣｌの過剰量を混合物の排気によって除去する。この生成物を濾過によって単離し、ジイソプロピルエーテル（０．７ ｌ）で洗浄し、４５℃で高真空中で乾燥させる。収量：５５２ｇ（９８％）。
【００４６】
工程６：スルホンアミドの形成
【化８】
【００４７】
２，４，６−トリイソプロピルフェニルスルホニルクロリド（２１２ｇ）をジクロロメタン（１．６ ｌ）中のシアノフェニル−Ｌ−アラニン−ピパミド−ＨＣｌ（２５７ｇ）の懸濁液に２５℃で添加する。Ｎ−エチルジイソプロピルアミン（２３８ｍｌ）の添加によって、澄明な溶液が得られる。添加は、発熱的に進行する（２５℃から３５℃への温度上昇）。反応混合物を室温で２時間攪拌した後に、水（１．１ ｌ）を反応混合物に添加する。相を分離し、有機相を１回飽和ＮａＨＣＯ3溶液（１．６ ｌ）で抽出し、１回水（０．５ ｌ）で抽出する。有機相をＭｇＳＯ4で乾燥させ、濾過し、減圧下で濃縮する。無色の油が得られ、この油を室温での放置で徐々に晶出させる。収量：４２３ｇ（約１００％）。
【００４８】
工程７：アミドキシムの形成；Ｎ−α−（２，４，６−トリイソプロピルフェニルスルホニル）−３−ヒドロキシアミジノ−（Ｌ）−フェニルアラニン−４−エトシキカルボニルピペラジド
【化９】
【００４９】
ＴＩＰＰＳ−Ｌ−シアノフェニルアラニン−ピパミド（５０ｇ）をエタノール（３５０ｍｌ）中に溶解する。順次にヒドロキシルアミン−ＨＣｌ（７．３ｇ）およびトリエチルアミン（１４．５ｍｌ）を添加する。反応混合物を沸点に加熱し（約７５℃）、還流下に６時間加熱する。引続き、４０℃に冷却し、溶剤を交換する。エタノールを減圧下で除去し、残留物にジクロロメタン（３００ｍｌ）および水（１００ｍｌ）を添加する。相分離を実施する。有機相をＭｇＳＯ4で乾燥させる。濾過後、溶剤を減圧下で除去する。
【００５０】
白色の固体（５７ｇ）が得られ、この固体をアセトン（２００ｍｌ）中に溶解する。アセトン（１５０ｍｌ）中のアームストロングの酸（１５ｇ）の溶液を添加する。この混合物を３０分間アセトンの沸点に加熱する。望ましい生成物のアームストロングの酸は、白色の固体として結晶化する。懸濁液を室温に冷却し、１時間攪拌し、引続き濾過を実施する。
【００５１】
結晶物をアセトン（７５ｍｌ）で洗浄し、乾燥し、引続きジクロロメタン（６００ｍｌ）中に溶解する。飽和ＮａＨＣＯ3溶液（４００ｍｌ）を添加する。不均質な混合物を２０分間強く攪拌し、引続き相を分離する。有機相を水（４００ｍｌ）で抽出し、引続きジクロロメタンを蒸留によって除去する。白色の固体（４５ｇ）が得られる。生成物をエチルアセテート／ジイソプロピルエーテルから再結晶化させ、４５ｇは、エチルアセテート（６０ｍｌ）中に溶解されている。ジイソプロピルエーテル（２５０ｍｌ）を添加する。こうして形成された懸濁液を３０分間沸点に加熱し、引続き徐々に室温に冷却する。
【００５２】
無定形の白色の固体を濾別し、ジイソプロピルエーテルで洗浄し、４５℃で真空中で乾燥させる。収量：３４ｇ（６５％）。
【図面の簡単な説明】
【００５３】
【図１】Ｎ−α−（２，４，６−トリイソプロピルフェニルスルホニル）−３−ヒドロキシアミジノ−（Ｌ）−フェニルアラニン−４−エトシキカルボニルピペラジドの従来の合成で得られる生成物混合物のＨＰＬＣのプロフィールを示す略図。
【図２】本発明による方法により得られたオキサミジンＮ−α−（２，４，６−トリイソプロピルフェニルスルホニル）−３−ヒドロキシアミジノ−（Ｌ）−フェニルアラニン−４−エトシキカルボニルピペラジドのＨＰＬＣのプロフィールを示す略図。
【技術分野】
【０００１】
本発明は、例えばウロキナーゼ阻害剤として使用されることができる３−ヒドロキシアミジノフェニルアラニン誘導体を高純度な形で製造することに関する。更に、本発明は、３−アミジノフェニルアラニン誘導体を製造するための高純度な３−ヒドロキシアミジノフェニルアラニン誘導体の使用に関する。
【０００２】
ウロキナーゼプラスミノゲン活性剤系（ＵＰＡ系）は、転移の場合ならびにさらに一次腫瘍、例えば肺癌、胃癌、腸癌、膵臓癌、卵巣癌および別の充実性腫瘍が成長した場合に中心的な役を演じる。ＵＰＡ系を阻害することによって、２つのレベルで医学的な作用を発揮することができる：一面で、転移の遮断ならびに他面、一次腫瘍の成長の減少。３−アミジノフェニルアラニン誘導体は、高度な作用を有するウロキナーゼ阻害剤の１つの種類である。
【０００３】
３−アミジノフェニルアラニン誘導体、殊にＮ−α−（２，４，６−トリイソプロピルフェニルスルホニル）−３−アミジノ−（Ｌ）−フェニルアラニン−４−エトシキカルボニルピペラジド（WX-UK１）の製造およびそのウロキナーゼ阻害剤としての使用は、例えばスイス国特許第６８９６１１号明細書、ＷＯ ００／０４９５４およびＷＯ ００／１７１５８ならびに出版物Stuerzebecher et al. (Bioorg. Med. Chem. Lei 0 (1999), 3147-3152)中に記載されている。しかし、前記刊行物中で使用された合成方法は、一般に比較的僅かな生成物収量を生じる。それというのも、加水分解されたTIPPS-OHは、望ましくない副生成物を生じるからである。１つの問題は、望ましい反応生成物を費用のかかるクロマトグラフィー法によってのみ副生成物を分離することができることにある。
【０００４】
ＰＣＴ／ＥＰ０３／０８２３０には、３−アミジノフェニルアラニン誘導体を３−ヒドロキシアミジノフェニルアラニン中間化合物を経て製造するための方法が記載されている。前記のオキサミジン誘導体は、高度に特異的な選択的ウロキナーゼ阻害剤であり、その上、経口的生体使用可能性の利点を提供する。しかし、ＰＣＴ／ＥＰ０３／０８２３０の記載から公知の製造法において、オキサミジン中間化合物を純粋な形で得ることができず、例えばアミド副生成物の分離のために費用のかかる精製方法が必要であるという問題が存在する。しかしながら、さらに、３−アミジノフェニルアラニン誘導体の合成ならびにオキサミジン誘導体それ自体の製薬学的使用のためには、前記オキサミジン誘導体を良好な収量および高い純度で製造することができる方法を提供することが好ましい。
【０００５】
従って、本発明の課題は、オキサミジン誘導体を高純度な形で得ることができる方法を提供することであった。
【０００６】
この課題は、次の工程：
（ａ）芳香族スルホン酸を場合によっては汚染された３−ヒドロキシアミジノフェニルアラニン誘導体の溶液に添加し、塩を形成させる工程、
（ｂ）工程（ａ）で形成された沈殿物を分離する工程、および
（ｃ）この沈殿物から３−ヒドロキシアミジノフェニルアラニン誘導体を回収する工程を含む３−ヒドロキシアミジノフェニルアラニン誘導体の精製法によって解決される。
【０００７】
本発明の範囲内で、"芳香族スルホン酸"は、芳香族またはヘテロ芳香族のモノ環系またはオリゴ環式環系であり、これらの環系は、少なくとも１つのスルホン酸基および／またはスルホネート基で置換されている。更に、芳香族環系またはヘテロ芳香族環系は、例えばＣ1〜Ｃ6−アルキル、Ｃ1〜Ｃ3−アルコキシ、ヒドロキシル、カルボキシル、スルホニル、ニトロ、シアノ、オキソおよび／またはハロゲンから選択されていてよい他の置換基を有することができる。適当な芳香族環系またはヘテロ芳香族環系は、例えば６〜２０個の炭素原子および特にＮ、ＯおよびＳから選択されていてよい０〜４個のヘテロ原子を有する単環および二環を含む。
【０００８】
適当な芳香族スルホン酸の例は、トルエンモノスルホン酸およびベンゼンモノスルホン酸および／またはトルエンジスルホン酸およびベンゼンジスルホン酸ならびにナフタリンモノスルホン酸誘導体および／またはナフタリンジスルホン酸である。好ましいのは、良好な結晶化傾向を有するジスルホン酸、例えばナフタリンジスルホン酸である。最も好ましいのは、ナフタリン−１，５−ジスルホン酸（アームストロングの酸）である。芳香族ジスルホン酸は、しばしば染料工業において使用され、そこで種々の、殊にナフタリンをベースとする染料の中間体およびカップリング試薬を製出する。
【０００９】
ところで、意外なことに、芳香族スルホン酸、殊にアームストロングの酸は、特に相応する塩の形で３−ヒドロキシアミジノフェニルアラニン誘導体（オキサミジン）の良好な沈殿に適している。即ち、形成された塩は、場合によっては汚染された３−ヒドロキシアミジノフェニルアラニン誘導体の溶液から粗製生成物を沈殿させる。この場合、溶剤としては、例えばケトン、例えばアセトンおよびペンタノン、エステル、例えばエチルアセテート、極性エーテル、例えばテトラヒドロフラン、ビス−（２−メトキシエチル）−エーテル（ジグリメ）、ジオキサンおよびメチル第三ブチルエーテル、ハロゲン化溶剤、例えばジクロロメタンが適当であるが、ニトリルおよび非極性アルコールも適当である。この沈殿物は、簡単な方法で次に続く工程（ｂ）で、例えば濾過によって溶液と分離されることができる。
【００１０】
引続き、分離された塩は、公知技術水準で通常の精製方法によってさらに精製されてよく、乾燥されてよい。こうして、本発明によれば、３−ヒドロキシアミジノフェニルアラニン誘導体の純度は、なおさらに改善されてよい。
【００１１】
引続き、工程（ｃ）で３−ヒドロキシアミジノフェニルアラニン誘導体は、回収される。このために、本発明によれば、相応するスルホン酸塩は、例えばヒドロキシアミジノフェニルアラニン誘導体よりも塩基性である塩基、即ち例えば炭酸水素ナトリウムと反応されてよいが、しかし、無機塩基および有機塩基と反応されてもよい。
【００１２】
従って、本発明は、簡単で洗練された方法で、汚染されたエダクト、中間化合物および望ましくない生成物、なかんずく望ましくないアミド汚染物をオキサミジンと分離することを可能にする。
【００１３】
本発明の方法は、殊にラセミ化合物ならびにＬ配置された化合物またはＤ配置された化合物として存在していてよい、式（Ｉ）
【化１】
〔式中、
Ｒ1は、式
【化２】
で示される基であり、
上記式中、Ｒ4は、
（ｉ）非置換又は例えばＣ1〜Ｃ6−アルキル、Ｃ1〜Ｃ3−アルコキシ、ヒドロキシル、カルボキシル、スルホニル、ニトロ、シアノ、オキソおよび／またはハロゲンで置換されたＣ1〜Ｃ6−アルキル基、例えばエトキシカルボニル基、またはアリール基、例えばフェニル、ｐ−ハロゲンフェニル、ナフチル、
（ｉｉ）飽和または不飽和の、分枝鎖状または非分枝鎖状のＣ1〜Ｃ6−アルコキシ基または
（ｉｉｉ）非置換または例えばＣ1〜Ｃ6−アルキル、Ｃ1〜Ｃ3−アルコキシ、ヒドロキシル、カルボキシル、スルホニル、ニトロ、シアノ、オキソおよび／またはハロゲンで置換されたフェノキシ基またはベンジルオキシカルボニル基を表わし、
Ｒ2は、非置換または例えばＣ1〜Ｃ6−アルキル、Ｃ1〜Ｃ3−アルコキシ、ヒドロキシル、カルボキシル、スルホニル、ニトロ、シアノ、オキソおよび／またはハロゲンで置換されたフェニル基、例えばフェニル、４−メチルフェニル、２，４，６−トリメチルフェニル、２，４，６−トリイソプロピルフェニル、４−メトキシ−２，３，６−トリメチルフェニルを表わし、
Ｒ3は、Ｈまたは分枝鎖状もしくは非分枝鎖状のＣ1〜Ｃ4−アルキルであり、
ｎは、０または１を表わし、
Ｚは、ＮまたはＣＲ9を表わし、この場合Ｒ9はＨ又は分枝鎖状もしくは非分枝鎖状のＣ1〜Ｃ4−アルキルである〕で示されるオキサミジン化合物の精製に適している。
【００１４】
本発明の視点によれば、前記精製方法は、有利にＮ−α−（２，４，６−トリイソプロピルフェニルスルホニル）−３−ヒドロキシアミジノ−（Ｌ）−フェニルアラニン−４−エトシキカルボニルピペラジドを高純度な形で単離するために使用されてよい。
【００１５】
オキサミジン誘導体を製造するためのこれまでに公知の合成方法の場合、オキサミジン化合物は、低い純度で生成され、３０％までの大量分のアミド不純物ならびにエダクトによる不純物および公知でない化合物を有する。本発明の方法によれば、純粋なオキサミジンを得ることに成功する。好ましくは、オキサミジンは、９０を上廻る純度、さらに有利には９５％を上廻る純度、大抵の場合に有利には９９％を上廻る純度で生成される。
【００１６】
更に、本発明の視点によれば、本発明による精製方法の場合には、ラセミ化は行なわれず、したがってエナンチオマー純粋のオキサミジン生成物が得られる。
【００１７】
本発明の実施態様によれば、本発明による精製は、３−ヒドロキシアミジノフェニルアラニン誘導体を製造するための方法の一部分であることができる。好ましい製造方法は、次の工程：
（ｉ）Ｎ−保護された３−シアノフェニルアラニンピペラジドの形成下でＮ−保護された３−シアノフェニルアラニンとピペラジン誘導体とを反応させる工程、
（ｉｉ）非置換または置換フェニルスルホニルハロゲン化物、殊にＴＩＰＰＳハロゲン化物と反応させる工程；
（ｉｉｉ）シアノ基をヒドロキシアミジノ基に変換する工程、
（ｉｖ）上記の記載と同様に芳香族スルホン酸で精製する工程を含む。
【００１８】
本発明による方法の工程（ｉ）によれば、Ｎ−保護された３−シアノフェニルアラニンとピペラジン誘導体との反応が行なわれる。"ピペラジン誘導体"の名称は、本発明の範囲内でピペラジンおよびその誘導体を含み、この場合には、場合によっては環状化合物の４個までの炭素位置および／または環の１個以下の窒素原子は、置換されていてよい。好ましくは、環の２個の窒素原子の一方に置換基を有するピペラジン誘導体が使用される。
【００１９】
適当な置換基の例は、Ｃ1〜Ｃ6アルキル基、飽和または不飽和の分枝鎖状または非分枝鎖状のＣ1〜Ｃ6アルコキシ基、フェノキシ基またはフェニルオキシカルボニル基、およびアリール基、例えばフェニル、ｐ−ハロゲン化フェニルおよびナフチルを含む。前記置換基は、その側でそれぞれ無関係に場合によっては、例えばＣ1〜Ｃ6アルキル、Ｃ1〜Ｃ3アルコキシ、ヒドロキシル、カルボキシル、スルホニル、ニトロ、シアノ、オキソおよび／またはハロゲンで置換されていてよい。
【００２０】
本発明によれば、工程（ｉ）で使用された３−シアノフェニルアラニンのアミノ窒素原子を保護するために、任意の保護基が使用されてよい。アミノ官能基に適した保護基の例は、公知技術水準で公知であり、例えばＣｂｚ（ベンジルオキシカルボニル）、Ｂｏｃ（Ｔ−ブチルオキシカルボニル）、ＤＩＭＯＺ（ジメトキシベンジルオキシカルボニル）、Ｔｆａｃ（トリフルオロアセチル）、ＣｙＯＣ（シアン−ｔ−ブチルオキシカルボニル）、Ｐｈｔｈ（フタロイル）、Ｂｐｏｃ（２−ビフェニル−４−イソプロポキシカルボニル）、Ｄｄｚ（３，５−ジメトキシフェニルイソプロポキシカルボニル）、Ｆｍｏｃ（フルオレニル−９−メチルオキシカルボニル）、ＰＡＬＯＣ（３−（３−ピリジル）−アリルオキシカルボニル）、Ｔｏｓ（ｐ−トルエンスルホニル）、ＮＰＳ（２−ニトロフェニルスルフェニル）、ＤＮＰＳ（２，４−ジニトロフェニルスルフェニル）を含む。本発明によれば、特に有利には、保護基Ｂｏｃが使用される。
【００２１】
本発明による方法の工程（ｉ）での反応の場合には、Ｎ−保護された３−シアノフェニルアラニン−ピペラジドが形成される。
【００２２】
引続き、本発明の実施態様によれば、Ｎ−保護基は、再び除去されてよい。それぞれの保護基の脱離に必要な条件は、当業者に公知である。
【００２３】
本発明により特に有利に使用される保護基Ｂｏｃは、例えば酸性媒体中、例えばＨＣｌガスまたはトリフルオロアセテートで飽和されている有機溶剤、例えばジオキサンまたはメタノール中で、特に有利にジオキサン中の４ＭのＨＣｌ（ｇ）で脱離されてよい。また、次に続く反応工程（ｉｉ）において、原位置で保護基の脱離が行なわれるように条件が選択されてよい。
【００２４】
工程（ｉｉ）において、工程（ｉ）で形成された３−シアノフェニルアラニン−ピペラジドは、場合によっては置換されていてよいフェニルスルホニルハロゲン化物と反応される。
【００２５】
この場合、好ましいハロゲン化物は、弗化物、塩化物、臭化物および沃化物である。フェニルスルホニルハロゲン化物に対する置換基の例は、Ｃ1〜Ｃ6アルキル、Ｃ1〜Ｃ3アルコキシ、ヒドロキシル、カルボニル、スルホニル、ニトロ、シアノ、オキソおよびハロゲンを含む。有利に使用されるフェニルスルホニルハロゲン化物は、フェニルハロゲン化物、４−メチルフェニルハロゲン化物、２，４，６−トリメチルフェニルハロゲン化物、４−メトキシ−２，３，６−トリメチルフェニルハロゲン化物および殊に２，４，６−トリイソプロピルフェニルスルホニル（TIPPS）ハロゲン化物である。
【００２６】
工程（ｉｉｉ）において、ヒドキシアミジノ官能基へのシアノ基の変換が行なわれる。この変換は、例えばヒドロキシルアミン塩酸塩により炭酸ナトリウムまたはトリエチルアミンの存在下で実施されてよい。この種の反応に適した方法は、公知技術水準で公知であり、例えばＷＯ ０３／０７２５５９中に記載されている。
【００２７】
引続き、工程（ｉｉｉ）で形成された３−ヒドロキシアミジノフェニルアラニン誘導体は、上記の精製方法に相応して有機スルホン酸を用いて高純度な形で得られる。この場合、３−ヒドロキシアミジノフェニルアラニン誘導体を工程（ｉｉｉ）から最初に単離することは、不要である。
【００２８】
こうして、３−ヒドロキシアミジノフェニルアラニン誘導体は、僅かな装置的費用で高い化学的収量および化学的純度で得られる。
【００２９】
本発明による方法で高純度で得られるオキサミジン化合物は、例えば経口的に使用可能なウロキナーゼ阻害剤として使用されてよい。
【００３０】
更に、本発明の視点によれば、オキサミジン化合物は、さらに反応されてよく、３−アミジノフェニルアラニン誘導体に変わってよい。本発明によれば、オキサミジンは、高純度な形で存在するので、アミジノ最終製品の収量も、さらに合成の経過で明らかに高められている。
【００３１】
それによって、本発明は、次の工程：
（ｉ）上記の方法により３−ヒドロキシアミジノフェニルアラニン誘導体を製造する工程および
（ｉｉ）ヒドロキシアミジノ基をアミジノ基に変換する工程を含む３−アミジノフェニルアラニン誘導体の製造法を提供する。
【００３２】
ヒドロキシアミジノ基は、還元によってアミジノ誘導体に変換されうる。これは、通常、例えばＷＯ ０３／０７６３９１、ＷＯ ０３／０７２５５９、欧州特許第１２９４７４２号明細書ならびにSteinmetzer et al., J. Enzyme Inhibition, 16, 2001, 241-249, Kent et al., J. Peptide Res., 52, 1998, 201-207およびStueber et al., Peptide Res., 8, 1995, 78-85の記載と同様に当業者によく知られた反応により、接触水素化によって行なわれる。
【００３３】
従って、本発明の方法によって、相応する３−アミジノフェニルアラニン誘導体は、公知技術水準の公知方法と比較して明らかに改善された収量で高純度な形で単離されてよい。
【００３４】
図１は、Ｎ−α−（２，４，６−トリイソプロピルフェニルスルホニル）−３−ヒドロキシアミジノ−（Ｌ）−フェニルアラニン−４−エトシキカルボニルピペラジドの従来の合成で得られる生成物混合物のＨＰＬＣのプロフィールを示す。オキサミジンは、約２１．４分間の保留時間で検出され、続いて２４．３分間でアミド不純物が検出される。
【００３５】
図２は、本発明による方法により得られたオキサミジンＮ−α−（２，４，６−トリイソプロピルフェニルスルホニル）−３−ヒドロキシアミジノ−（Ｌ）−フェニルアラニン−４−エトシキカルボニルピペラジドのＨＰＬＣのプロフィールを示す。
【００３６】
実施例
工程１：アルキル化および脱カルボキシル
【化３】
【００３７】
ジエチルアセトアミドマロネート（４０７ｇ）を室温で窒素雰囲気中でエタノール（１ ｌ）に添加する。懸濁液を約７０℃に加熱し、エタノール（９００ｍｌ）中のナトリウムメトキシド（１３０ｇ）の溶液を添加する。反応混合物をさらに３０分間前記温度で攪拌する。引続き、エタノール（１．４ ｌ）中の３−ブロムメチルベンゾニトリル（３００ｇ）の懸濁液を反応容器に添加する。この反応容器中の温度をさらに２．５時間、約７０℃に維持する。引続き、１．５時間で希釈された水素化ナトリウム溶液（２Ｎ；２．２ ｌ）を滴加する。更に、約７０℃で３０分間攪拌し、引続き懸濁液を室温に冷却する。室温で反応混合物のｐＨ値を、濃塩酸の添加（約１時間で）によって徐々に約７に低下させる。有機溶剤を蒸留によって減圧下（１００ミリバール未満；Ｔmax＝６０℃）で除去する。残存する残留物を１Ｎ ＮａＯＨ（１ ｌ）中に溶解する。水溶液を３回エチルアセテート（それぞれ３５０ｍｌ）で抽出する。引続き、１０℃に冷却する。水溶液を濃厚なＨＣｌで酸性にする（ｐＨ＝１）。望ましい生成物をエチルアセテートで抽出する（それぞれエチルアセテート１．２ ｌを用いての３回の抽出）。あわせた有機相を減圧下で濃縮する。望ましい生成物は、白色の固体として沈殿する。結晶物を５℃で吸引漏斗中に捕集し、少量のエチルアセテートで洗浄し、４５℃で窒素雰囲気中で乾燥させる。収量：２４３ｇ（６８％）。
【００３８】
工程２：酵素的ラセミ分割
【化４】
【００３９】
アセチル−シアノフェニル−アラニン（９４０ｇ）を１Ｎ ＮａＯＨ（４ ｌ）中に３７℃で溶解する。１２．８の初期のｐＨ値を４Ｎ ＨＣｌ（約１２０ｍｌ）の添加によって７．２に低下させる。アシラーゼＩ（３７．８ｇ）を添加する。反応混合物のｐＨ値を約７．２に一定に維持するために、連続的にＮａＯＨ（１Ｎ）を反応混合物に添加する。３７℃で７２時間後、沈殿した生成物を濾過によって２０℃で単離する。結晶物を水で洗浄し、減少された圧力で約４０℃で乾燥させる。濾液を減圧下で元来の体積の三分の一に濃縮した場合には、他の生成物が沈殿する。全収量：２６１ｇ（３４％）。
【００４０】
工程３：ＢｏｃでのＮＨ2官能価の保護
【化５】
【００４１】
メタノール（４．５ ｌ）中のシアノフェニル−Ｌ−アラニン（４２５ｇ）の懸濁液にトリエチルアミン（３１０ｍｌ）を添加する。２５℃でジ−第三ブチルジカーボネート（４８８ｇ）を添加する。反応混合物を一晩中、攪拌する。有機溶剤を減圧下で４０℃で除去する。残存するオレンジ色の油をエチルアセテート（３ ｌ）で希釈する。１Ｎ ＨＣｌ（２．３ ｌ）を添加し、不均質な溶液を３０分間強く攪拌する。相分離を実施する。有機相を単離し、水で抽出し、ＭｇＳＯ4で乾燥させる。濾過後、有機相を４０℃で減圧下で蒸発させ、乾燥物に変える。ジクロロメタンを残留物に添加した場合には、結晶物を得ることができる。この結晶物を濾過によって捕集し、窒素の下で４５℃で乾燥させる。収量：５５４ｇ（８５％）。
【００４２】
工程４：カップリング反応
【化６】
【００４３】
Ｂｏｃ−シアノフェニルアラニン（５５４ｇ）およびＨＯＢＴ（５２ｇ）をジクロロメタン（２．７ ｌ）中に懸濁させる。ジクロロメタン（１ ｌ）中のＤＣＣ（４５３ｇ）の溶液を添加する。引続き、この懸濁液を１０〜１５℃に冷却し、３０分間でエトキシカルボニルピペラジン（３４７ｇ）を滴加し、一方で、上記の温度範囲を維持する。反応混合物を一晩中、攪拌する。尿素を濾別し、廃棄する。飽和ＮａＨＣＯ3溶液（１．８ ｌ）を濾液に添加する。不均質な混合物を３０分間攪拌し、引続き相を分離する。有機相を水（２ ｌ）で抽出し、引続きＭｇＳＯ4で乾燥する。ＭｇＳＯ4を濾別し、溶液を減圧下で３０℃で濃縮する。残存する油をエチルアセテート（３００ｍｌ）中に溶解する。溶液に沸点に加熱する。ジイソプロピルエーテル（７５０ｍｌ）を溶液が混濁するまで徐々に添加する。温度を５０℃に低下させ、混合物を放置させる。引続き、温度を５時間で２５℃に低下させる。生成物を濾別し、ジイソプロピルエーテルで洗浄し、引続き窒素の下で４０℃で乾燥させる。収量：６６０ｇ（８０％）。
【００４４】
工程５：脱保護
【化７】
【００４５】
Ｂｏｃ−Ｌ−シアノフェニルアラニン−ピパミド（４４２ｇ）をジオキサン（４Ｍ；１．２ ｌ）中のＨＣｌの溶液中に溶解する。温度は、添加中に２５℃から３２℃へ上昇する。３時間後、反応は終結し、ジクロロメタン（１ ｌ）を溶液に添加する。望まし生成物は、沈殿を開始する。懸濁液を一晩中、攪拌する。ＨＣｌの過剰量を混合物の排気によって除去する。この生成物を濾過によって単離し、ジイソプロピルエーテル（０．７ ｌ）で洗浄し、４５℃で高真空中で乾燥させる。収量：５５２ｇ（９８％）。
【００４６】
工程６：スルホンアミドの形成
【化８】
【００４７】
２，４，６−トリイソプロピルフェニルスルホニルクロリド（２１２ｇ）をジクロロメタン（１．６ ｌ）中のシアノフェニル−Ｌ−アラニン−ピパミド−ＨＣｌ（２５７ｇ）の懸濁液に２５℃で添加する。Ｎ−エチルジイソプロピルアミン（２３８ｍｌ）の添加によって、澄明な溶液が得られる。添加は、発熱的に進行する（２５℃から３５℃への温度上昇）。反応混合物を室温で２時間攪拌した後に、水（１．１ ｌ）を反応混合物に添加する。相を分離し、有機相を１回飽和ＮａＨＣＯ3溶液（１．６ ｌ）で抽出し、１回水（０．５ ｌ）で抽出する。有機相をＭｇＳＯ4で乾燥させ、濾過し、減圧下で濃縮する。無色の油が得られ、この油を室温での放置で徐々に晶出させる。収量：４２３ｇ（約１００％）。
【００４８】
工程７：アミドキシムの形成；Ｎ−α−（２，４，６−トリイソプロピルフェニルスルホニル）−３−ヒドロキシアミジノ−（Ｌ）−フェニルアラニン−４−エトシキカルボニルピペラジド
【化９】
【００４９】
ＴＩＰＰＳ−Ｌ−シアノフェニルアラニン−ピパミド（５０ｇ）をエタノール（３５０ｍｌ）中に溶解する。順次にヒドロキシルアミン−ＨＣｌ（７．３ｇ）およびトリエチルアミン（１４．５ｍｌ）を添加する。反応混合物を沸点に加熱し（約７５℃）、還流下に６時間加熱する。引続き、４０℃に冷却し、溶剤を交換する。エタノールを減圧下で除去し、残留物にジクロロメタン（３００ｍｌ）および水（１００ｍｌ）を添加する。相分離を実施する。有機相をＭｇＳＯ4で乾燥させる。濾過後、溶剤を減圧下で除去する。
【００５０】
白色の固体（５７ｇ）が得られ、この固体をアセトン（２００ｍｌ）中に溶解する。アセトン（１５０ｍｌ）中のアームストロングの酸（１５ｇ）の溶液を添加する。この混合物を３０分間アセトンの沸点に加熱する。望ましい生成物のアームストロングの酸は、白色の固体として結晶化する。懸濁液を室温に冷却し、１時間攪拌し、引続き濾過を実施する。
【００５１】
結晶物をアセトン（７５ｍｌ）で洗浄し、乾燥し、引続きジクロロメタン（６００ｍｌ）中に溶解する。飽和ＮａＨＣＯ3溶液（４００ｍｌ）を添加する。不均質な混合物を２０分間強く攪拌し、引続き相を分離する。有機相を水（４００ｍｌ）で抽出し、引続きジクロロメタンを蒸留によって除去する。白色の固体（４５ｇ）が得られる。生成物をエチルアセテート／ジイソプロピルエーテルから再結晶化させ、４５ｇは、エチルアセテート（６０ｍｌ）中に溶解されている。ジイソプロピルエーテル（２５０ｍｌ）を添加する。こうして形成された懸濁液を３０分間沸点に加熱し、引続き徐々に室温に冷却する。
【００５２】
無定形の白色の固体を濾別し、ジイソプロピルエーテルで洗浄し、４５℃で真空中で乾燥させる。収量：３４ｇ（６５％）。
【図面の簡単な説明】
【００５３】
【図１】Ｎ−α−（２，４，６−トリイソプロピルフェニルスルホニル）−３−ヒドロキシアミジノ−（Ｌ）−フェニルアラニン−４−エトシキカルボニルピペラジドの従来の合成で得られる生成物混合物のＨＰＬＣのプロフィールを示す略図。
【図２】本発明による方法により得られたオキサミジンＮ−α−（２，４，６−トリイソプロピルフェニルスルホニル）−３−ヒドロキシアミジノ−（Ｌ）−フェニルアラニン−４−エトシキカルボニルピペラジドのＨＰＬＣのプロフィールを示す略図。
【特許請求の範囲】
【請求項１】
３−ヒドロキシアミジノフェニルアラニン誘導体の精製法において、次の工程：
（ａ）芳香族スルホン酸を場合によっては汚染された３−ヒドロキシアミジノフェニルアラニン誘導体の溶液に添加し、沈殿物を形成させる工程、
（ｂ）工程（ａ）で形成された沈殿物を分離する工程、および
（ｃ）この沈殿物から遊離３−ヒドロキシアミジノフェニルアラニン誘導体を回収する工程を含む３−ヒドロキシアミジノフェニルアラニン誘導体の精製法。
【請求項２】
工程（ａ）の芳香族スルホン酸がアームストロングの酸である、請求項１記載の方法。
【請求項３】
３−ヒドロキシアミジノフェニルアラニン誘導体が式（Ｉ）：
【化１】
〔式中、Ｒ1は、式
【化２】
で示される基であり、
上記式中、Ｒ4は、
（ｉ）非置換又は例えばＣ1〜Ｃ6−アルキル、Ｃ1〜Ｃ3−アルコキシ、ヒドロキシル、カルボキシル、スルホニル、ニトロ、シアノ、オキソおよび／またはハロゲンで置換されたＣ1〜Ｃ6−アルキル基、例えばエトキシカルボニル基、またはアリール基、例えばフェニル、ｐ−ハロゲンフェニル、ナフチル、
（ｉｉ）飽和または不飽和の分枝鎖状または非分枝鎖状のＣ1〜C6−アルコキシ基または
（ｉｉｉ）非置換または例えばＣ1〜Ｃ6−アルキル、Ｃ1〜Ｃ3−アルコキシ、ヒドロキシル、カルボキシル、スルホニル、ニトロ、シアノ、オキソおよび／またはハロゲンで置換されたフェノキシ基またはベンジルオキシカルボニル基を表わし、
Ｒ2は、非置換または例えばＣ1〜Ｃ6−アルキル、Ｃ1〜Ｃ3−アルコキシ、ヒドロキシル、カルボキシル、スルホニル、ニトロ、シアノ、オキソ又は／及びハロゲンで置換されたフェニル基、例えばフェニル、４−メチルフェニル、２，４，６−トリメチルフェニル、２，４，６−トリイソプロピルフェニル、４−メトキシ−２，３，６−トリメチルフェニルを表わし、
Ｒ3は、Ｈまたは分枝鎖状もしくは非分枝鎖状のＣ1〜Ｃ4−アルキルであり、
ｎは０または１を表わし、
Ｚは、ＮまたはＣＲ9を表わし、この場合Ｒ9はＨまたは分枝鎖状もしくは非分枝鎖状のＣ1〜Ｃ4−アルキルである〕を有する、請求項１または２記載の方法。
【請求項４】
３−ヒドロキシアミジノフェニルアラニン誘導体がＮ−α−（２，４，６−トリイソプロピルフェニルスルホニル）−３−ヒドロキシアミジノ−（Ｄ，Ｌ）−フェニルアラニン誘導体またはそのＬ−エナンチオマーである、請求項１から３までのいずれか１項に記載の方法。
【請求項５】
３−ヒドロキシアミジノフェニルアラニン誘導体がＮ−α−ＴＩＰＰＳ−３−ヒドロキシ−５−アミジノ−（Ｄ，Ｌ）−フェニルアラニン−４−エトキシカルボニルピペラジドまたはそのＬ−エナンチオマーである、請求項１から４までのいずれか１項に記載の方法。
【請求項６】
工程（ａ）でアセトン中の３−ヒドロキシアミジノフェニルアラニン誘導体の溶液を使用する、請求項１から５までのいずれか１項に記載の方法。
【請求項７】
沈殿物の分離を工程（ｂ）で濾過によって行なう、請求項１から６までのいずれか１項に記載の方法。
【請求項８】
回収を工程（ｃ）でＮａＨＣＯ3との反応によって行なう、請求項１から７までのいずれか１項に記載の方法。
【請求項９】
３−ヒドロキシアミジノフェニルアラニン誘導体を９０％を上廻る純度で得る、請求項１から８までのいずれか１項に記載の方法。
【請求項１０】
３−ヒドロキシアミジノフェニルアラニン誘導体を９５％を上廻る純度で得る、請求項１から９までのいずれか１項に記載の方法。
【請求項１１】
３−ヒドロキシアミジノフェニルアラニン誘導体を９９％を上廻る純度で得る、請求項１から１０までのいずれか１項に記載の方法。
【請求項１２】
３−ヒドロキシアミジノフェニルアラニン誘導体の製造法において、次の工程：
（ｉ）Ｎ−保護された３−シアノフェニルアラニンをピペラジン誘導体とＮ−保護された３−シアノフェニルアラニンピペラジドの形成下で反応させる工程；
（ｉｉ）非置換または置換フェニルスルホニルハロゲン化物と反応させる工程；
（ｉｉｉ）シアノ基をヒドロキシアミジノ基に変換させる工程、
（ｉｖ）形成された３−ヒドロキシアミジノフェニルアラニン誘導体を請求項１から１１までのいずれか１項に記載の方法により精製する工程を含む３−ヒドロキシアミジノフェニルアラニン誘導体の製造法。
【請求項１３】
工程（ｉ）でＢｏｃ Ｎ−保護された３−シアノフェニルアラニン誘導体を使用する、請求項１２記載の方法。
【請求項１４】
工程（ｉ）のピペラジン誘導体がエトキシカルボニルピペラジンである、請求項１２または１３記載の方法。
【請求項１５】
工程（ｉｉ）で２，４，６−トリイソプロピルベンゼンスルホニルクロリドとの反応を行なう、請求項１２から１４までのいずれか１項に記載の方法。
【請求項１６】
シアノ基を工程（ｉｉｉ）でヒドロキシルアミン塩酸塩を用いてナトリウムカーボネートまたはトリエチルアミンの存在下でヒドロキシアミジノ基に変換する、請求項１２から１５までのいずれか１項に記載の方法。
【請求項１７】
３−ヒドロキシアミジノフェニルアラニン誘導体を９０％を上廻る純度で生じる、請求項１２から１６までのいずれか１項に記載の方法。
【請求項１８】
３−ヒドロキシアミジノフェニルアラニン誘導体を９５％を上廻る純度で生じる、請求項１２から１７までのいずれか１項に記載の方法。
【請求項１９】
３−ヒドロキシアミジノフェニルアラニン誘導体を９９％を上廻る純度で生じる、請求項７から１１までのいずれか１項に記載の方法。
【請求項２０】
３−アミジノフェニルアラニン誘導体の製造法において、次の工程：
（ｉ）請求項９から１９までのいずれか１項に記載の方法により３−ヒドロキシアミジノフェニルアラニン誘導体を製造する工程、および
（ｉｉ）ヒドロキシアミジノ基をアミジノ基に変換する工程を含む３−アミジノフェニルアラニン誘導体の製造法。
【請求項２１】
ヒドロキシアミジノ基を工程（ｉｉ）で無水酢酸との反応および引続く接触水素化によってアミジノ基に変換する、請求項２０記載の方法。
【請求項１】
３−ヒドロキシアミジノフェニルアラニン誘導体の精製法において、次の工程：
（ａ）芳香族スルホン酸を場合によっては汚染された３−ヒドロキシアミジノフェニルアラニン誘導体の溶液に添加し、沈殿物を形成させる工程、
（ｂ）工程（ａ）で形成された沈殿物を分離する工程、および
（ｃ）この沈殿物から遊離３−ヒドロキシアミジノフェニルアラニン誘導体を回収する工程を含む３−ヒドロキシアミジノフェニルアラニン誘導体の精製法。
【請求項２】
工程（ａ）の芳香族スルホン酸がアームストロングの酸である、請求項１記載の方法。
【請求項３】
３−ヒドロキシアミジノフェニルアラニン誘導体が式（Ｉ）：
【化１】
〔式中、Ｒ1は、式
【化２】
で示される基であり、
上記式中、Ｒ4は、
（ｉ）非置換又は例えばＣ1〜Ｃ6−アルキル、Ｃ1〜Ｃ3−アルコキシ、ヒドロキシル、カルボキシル、スルホニル、ニトロ、シアノ、オキソおよび／またはハロゲンで置換されたＣ1〜Ｃ6−アルキル基、例えばエトキシカルボニル基、またはアリール基、例えばフェニル、ｐ−ハロゲンフェニル、ナフチル、
（ｉｉ）飽和または不飽和の分枝鎖状または非分枝鎖状のＣ1〜C6−アルコキシ基または
（ｉｉｉ）非置換または例えばＣ1〜Ｃ6−アルキル、Ｃ1〜Ｃ3−アルコキシ、ヒドロキシル、カルボキシル、スルホニル、ニトロ、シアノ、オキソおよび／またはハロゲンで置換されたフェノキシ基またはベンジルオキシカルボニル基を表わし、
Ｒ2は、非置換または例えばＣ1〜Ｃ6−アルキル、Ｃ1〜Ｃ3−アルコキシ、ヒドロキシル、カルボキシル、スルホニル、ニトロ、シアノ、オキソ又は／及びハロゲンで置換されたフェニル基、例えばフェニル、４−メチルフェニル、２，４，６−トリメチルフェニル、２，４，６−トリイソプロピルフェニル、４−メトキシ−２，３，６−トリメチルフェニルを表わし、
Ｒ3は、Ｈまたは分枝鎖状もしくは非分枝鎖状のＣ1〜Ｃ4−アルキルであり、
ｎは０または１を表わし、
Ｚは、ＮまたはＣＲ9を表わし、この場合Ｒ9はＨまたは分枝鎖状もしくは非分枝鎖状のＣ1〜Ｃ4−アルキルである〕を有する、請求項１または２記載の方法。
【請求項４】
３−ヒドロキシアミジノフェニルアラニン誘導体がＮ−α−（２，４，６−トリイソプロピルフェニルスルホニル）−３−ヒドロキシアミジノ−（Ｄ，Ｌ）−フェニルアラニン誘導体またはそのＬ−エナンチオマーである、請求項１から３までのいずれか１項に記載の方法。
【請求項５】
３−ヒドロキシアミジノフェニルアラニン誘導体がＮ−α−ＴＩＰＰＳ−３−ヒドロキシ−５−アミジノ−（Ｄ，Ｌ）−フェニルアラニン−４−エトキシカルボニルピペラジドまたはそのＬ−エナンチオマーである、請求項１から４までのいずれか１項に記載の方法。
【請求項６】
工程（ａ）でアセトン中の３−ヒドロキシアミジノフェニルアラニン誘導体の溶液を使用する、請求項１から５までのいずれか１項に記載の方法。
【請求項７】
沈殿物の分離を工程（ｂ）で濾過によって行なう、請求項１から６までのいずれか１項に記載の方法。
【請求項８】
回収を工程（ｃ）でＮａＨＣＯ3との反応によって行なう、請求項１から７までのいずれか１項に記載の方法。
【請求項９】
３−ヒドロキシアミジノフェニルアラニン誘導体を９０％を上廻る純度で得る、請求項１から８までのいずれか１項に記載の方法。
【請求項１０】
３−ヒドロキシアミジノフェニルアラニン誘導体を９５％を上廻る純度で得る、請求項１から９までのいずれか１項に記載の方法。
【請求項１１】
３−ヒドロキシアミジノフェニルアラニン誘導体を９９％を上廻る純度で得る、請求項１から１０までのいずれか１項に記載の方法。
【請求項１２】
３−ヒドロキシアミジノフェニルアラニン誘導体の製造法において、次の工程：
（ｉ）Ｎ−保護された３−シアノフェニルアラニンをピペラジン誘導体とＮ−保護された３−シアノフェニルアラニンピペラジドの形成下で反応させる工程；
（ｉｉ）非置換または置換フェニルスルホニルハロゲン化物と反応させる工程；
（ｉｉｉ）シアノ基をヒドロキシアミジノ基に変換させる工程、
（ｉｖ）形成された３−ヒドロキシアミジノフェニルアラニン誘導体を請求項１から１１までのいずれか１項に記載の方法により精製する工程を含む３−ヒドロキシアミジノフェニルアラニン誘導体の製造法。
【請求項１３】
工程（ｉ）でＢｏｃ Ｎ−保護された３−シアノフェニルアラニン誘導体を使用する、請求項１２記載の方法。
【請求項１４】
工程（ｉ）のピペラジン誘導体がエトキシカルボニルピペラジンである、請求項１２または１３記載の方法。
【請求項１５】
工程（ｉｉ）で２，４，６−トリイソプロピルベンゼンスルホニルクロリドとの反応を行なう、請求項１２から１４までのいずれか１項に記載の方法。
【請求項１６】
シアノ基を工程（ｉｉｉ）でヒドロキシルアミン塩酸塩を用いてナトリウムカーボネートまたはトリエチルアミンの存在下でヒドロキシアミジノ基に変換する、請求項１２から１５までのいずれか１項に記載の方法。
【請求項１７】
３−ヒドロキシアミジノフェニルアラニン誘導体を９０％を上廻る純度で生じる、請求項１２から１６までのいずれか１項に記載の方法。
【請求項１８】
３−ヒドロキシアミジノフェニルアラニン誘導体を９５％を上廻る純度で生じる、請求項１２から１７までのいずれか１項に記載の方法。
【請求項１９】
３−ヒドロキシアミジノフェニルアラニン誘導体を９９％を上廻る純度で生じる、請求項７から１１までのいずれか１項に記載の方法。
【請求項２０】
３−アミジノフェニルアラニン誘導体の製造法において、次の工程：
（ｉ）請求項９から１９までのいずれか１項に記載の方法により３−ヒドロキシアミジノフェニルアラニン誘導体を製造する工程、および
（ｉｉ）ヒドロキシアミジノ基をアミジノ基に変換する工程を含む３−アミジノフェニルアラニン誘導体の製造法。
【請求項２１】
ヒドロキシアミジノ基を工程（ｉｉ）で無水酢酸との反応および引続く接触水素化によってアミジノ基に変換する、請求項２０記載の方法。
【図１】
【図２】
【図２】
【公表番号】特表２００８−５１６９０８（Ｐ２００８−５１６９０８Ａ）
【公表日】平成２０年５月２２日（２００８．５．２２）
【国際特許分類】
【出願番号】特願２００７−５３６０８０（Ｐ２００７−５３６０８０）
【出願日】平成１７年１０月１４日（２００５．１０．１４）
【国際出願番号】ＰＣＴ／ＥＰ２００５／０１０９７０
【国際公開番号】ＷＯ２００６／０４２６７８
【国際公開日】平成１８年４月２７日（２００６．４．２７）
【出願人】（５０１０２２３４３）ヴィレックス アクチェンゲゼルシャフト (9)
【氏名又は名称原語表記】Ｗｉｌｅｘ ＡＧ
【住所又は居所原語表記】Ｇｒｉｌｌｐａｒｚｅｒ Ｓｔｒａｓｓｅ １６， Ｄ−８１６７５ Ｍｕｅｎｃｈｅｎ，Ｇｅｒｍａｎｙ
【公表日】平成２０年５月２２日（２００８．５．２２）
【国際特許分類】
【出願日】平成１７年１０月１４日（２００５．１０．１４）
【国際出願番号】ＰＣＴ／ＥＰ２００５／０１０９７０
【国際公開番号】ＷＯ２００６／０４２６７８
【国際公開日】平成１８年４月２７日（２００６．４．２７）
【出願人】（５０１０２２３４３）ヴィレックス アクチェンゲゼルシャフト (9)
【氏名又は名称原語表記】Ｗｉｌｅｘ ＡＧ
【住所又は居所原語表記】Ｇｒｉｌｌｐａｒｚｅｒ Ｓｔｒａｓｓｅ １６， Ｄ−８１６７５ Ｍｕｅｎｃｈｅｎ，Ｇｅｒｍａｎｙ
[ Back to top ]