血糖値降下剤

【発明の詳細な説明】
【０００１】
【産業上の利用分野】本発明は血糖値降下剤に関する。
【０００２】
【従来の技術】糖尿病は成人病の一つとされ、完治乃至治療の難しい病気の一つとなっていることは周知のところである。従来からこの糖尿病治療薬、惹いては血糖値降下剤について種々の薬剤が開発されているがその効果は不充分であり、有効な薬剤の開発が強く要望されている。
【０００３】
【発明が解決しようとする課題】本発明はこの糖尿病によく効く薬剤、即ち血糖値を降下させうる薬剤を新たに提供せんとするものである。
【０００４】
【課題を解決するための手段】この課題は下記一般式（Ｉ）
【化３】

で表される化合物（以下化合物１という）、又は下記一般式（ＩＩ）
【化４】

で表される化合物（以下化合物２という）を血糖値降下剤の有効成分として使用することにより解決される。
【０００５】本発明者の研究によると上記化合物１及び２の少なくとも１種の化合物は血糖値を降下させることができる特性を有することが判明した。本発明はこの新しい事実に基づいて完成されている。
【０００６】
【発明の作用並びに構成】まず化合物１及び２について説明する。化合物１及び２はいずれも天然植物である景天科燕子掌から抽出して製造される。本発明において使用する燕子掌は景天科に属し、学名はCrassula argentea であり、「In Bailey. Mauu. Cult. PI. 456. 1949」に記載されている。また属としては景天属、青鎖龍属、紅景天属に属するものである。更に詳しくは、常緑肉質の亜潅木であり、株の高さは５０〜１００cm、大きいものは２ｍ位となる。茎が太く円柱状であり、木質化する。枝が対照的に分かれて樹の形になる。葉は厚くペアで成長し、逆さまの卵のようにスプーンの形になる。長さは２〜５cm、巾は 1.5〜 2.5cm程度であり、葉の先端が丸く、茎に近づくにつれて狭くなる。完全な縁で緑色、毛がない。十数輪の花で円錐状で咲き、花色は白或いは淡いピンクであり、長さは８〜１０cm、花びらが狭く、短い先端がある。原産地は南アフリカである。鑑賞植物として栽培されているところもある。
【０００７】本発明においてはこの景天科燕子掌は特にその葉を用いて抽出することが好ましい。即ちこの葉そのもの、葉の粉砕物等を抽出溶媒により抽出する。この景天科燕子掌から抽出成分を抽出する原則的な方法は以下の通りである。
【０００８】新鮮な天然植物燕子掌を粉砕、好ましくは高速で粉砕して１０〜５０メッシュパス程度となし、抽出溶媒たとえばアルコール又はその水溶液や水等を加えて有効成分を抽出する。アルコールの濃度は５０〜９８％、好ましくは７０〜９６％、蛋白質を沈殿させる最良濃度は７０％である。
【０００９】アルコールとしては、メチルアルコール、エチルアルコールを代表例として例示でき、その他ブドウ糖も使用できる。このアルコールに浸漬する時間は１〜２４時間、好ましくは４〜６時間程度である。
【００１０】抽出液は通常濃縮する。この際の抽出液の濃縮温度は３０〜１００℃、最良濃縮温度は３０〜４０℃である。抽出液を濃縮させる時には減圧でも常圧でもよい。濃縮温度は低温で抽出液を濃縮する。１００℃位の温度で蒸発させてから乾燥冷凍すると効果が一番よい。
【００１１】本発明においては科学的方法で有効成分を抽出し、濃縮しても濃縮液の有効成分が変わらないことが保証される。本発明において濃度５０〜９８％のアルコールで燕子掌中の植物蛋白質を先に沈殿させることが好ましいが、これは酵素によって有効成分が分解されることを防ぐためである。粉砕物を抽出溶媒、たとえばアルコールに１〜３時間、或いは一晩漬けてから遠心分離器で高速分離し、傾斜法で上層の透明液を分離する。もし上層の透明液にまだ沈殿物が残っていれば透明になるまで濾過する。次いで減圧濃縮し、冷蔵庫で保存する。保存しやすく、運びやすくするなら冷凍粉末或いは、１００℃で蒸発乾燥で得た粉末にすればよい。
【００１２】以下に具体的な抽出方法の例を実験例として例示する。
実験例１２０００ｇの新鮮な燕子掌の葉を洗浄後水に一晩漬ける。翌日に粉砕器に６００ml、７０％濃度の薬用アルコール（エチルアルコール）を入れて高速粉砕し、これを３時間含浸後遠心分離器で高速分離し、傾斜法で黄緑色の透明液を分離して、緑色の残液を再抽出に使う。透明液を回転蒸発器で減圧濃縮（水浴温度は６０℃より低い）する。
【００１３】実験例２実験例１の残液に６００ml、７０％の同じアルコールで３回に分けて抽出してから混合液を遠心分離して緑色の透明液について葉緑素除去作業（方法は実験例３）をなし、淡い黄色の溶液を濃縮する。
【００１４】実験例３（葉緑素の除去方法）
（１）実験例２において遠心分離で得た緑色透明液を６００ml分取して、分液濾斗に入れて６００ml石油エーテル（６０〜９０）で３回に分けて抽出する。淡い黄色の抽出液を濃縮してから残りの石油エーテル混合液を合わせて、常圧で石油エーテルを蒸発させ、固体葉緑素を得て、石油エーテルを回収し、後で使う。
（２）実験例２の緑色透明液６００mlを１００℃水浴で５分間加熱（浴液温度は約８０℃位）した。緑色が除去され、溶液は淡い黄色に変わる。葉緑素は葉黄素に変わる。
【００１５】実験例４１７００ｇの新鮮な燕子掌の葉を充分に洗浄後粉砕器に入れ、６００ml、９５％のエチルアルコールを加え、高速粉砕してから３時間漬けて、遠心分離し、上層の透明液を分離して、それを１５００ml、９５％ｎｏ同じアルコールで３回に分けて抽出し、夫々１時間漬けてから掻き混ぜて遠心分離して上の透明液を分離する。３回の透明液に石油エーテル（６０〜９０）を加えて葉緑素を除去して、１回目の透明液に合わせて実験例１のように濃縮し、濃縮液６８ｇを得た。黄色である。それを2.99ｇ有効成分／mlとする。
【００１６】実験例５実験例４の方法に従って得た１０４０ｇの燕子掌抽出液を葉緑素を除去せずに濃縮して、64.6ｇの濃縮液を得る。
【００１７】実験例６１６００ｇの新鮮な燕子掌の葉を充分に洗浄後、５００ml、９５％のエチルアルコールに漬けてから粉砕し、１時間漬けて、遠心分離して、上の透明液を分離する。緑色残液を６００ml、９５％の同じアルコールで３回に分けて抽出し、３回の全部の透明液を合わせて、実験例１のように濃縮させ、濃縮液 222.7ｇを得る。
【００１８】実験例７３２８ｇの新鮮な燕子掌の葉を充分に洗浄後１００ml、５０％のエチルアルコールに漬けてから粉砕し、これを１時間漬けて、８０℃位まで加熱し、濾過して黄緑色の同じ透明液を得る。３回に分けて残液を１００ml、５０％の同じアルコールで抽出してから１時間放置後、濾過する。濾液を実験例１のように１２３mlまで濃縮し、2.99有効成分／mlとする。
【００１９】実験例８３１９ｇの新鮮な燕子掌の葉を充分に洗浄後５０mlの水を入れて粉砕してからすぐ圧力鍋に入れて５分間加熱する（圧力鍋中の温度は１２０〜１２５℃）。得られた黄色の混合液を濾過する。濾液を実験例１のように濃縮させる。残液を１００ml、９６％のエチルアルコールで３回に分けて抽出してから濾過して３回の濾液を合わせて１２０mlまで濃縮する。濃度は2.66有効成分／mlである。
【００２０】実験例９３６９ｇの新鮮な燕子掌の葉を充分に洗浄後１２０ml、６０％のエチルアルコールを加え、粉砕してから３時間放置し、濾過する。残液に１００ml、６０％の同じアルコールを３回に分けて加えて抽出し、濾過する。抽出液は緑黄色である。３回の濾液を合わせてから実験例１のように濾過する。抽出液は緑黄色である。３回の濾液を合わせてから実験例のように濃縮させる。（濃縮時の水浴温度が６５℃を越えないようにする）。１２３mlまで濃縮する。
【００２１】実験例１０（１）１０４０ｇの新鮮な燕子掌の葉を充分に洗浄後６００ml、９５％のエチルアルコールで洗い、実験例１のように濃縮させた。濃縮液の重量は64.6ｇであり、この抽出液の濃度は10.4ｇ有効成分／mlである。
（２） 269.5ｇの新鮮な燕子掌の葉を洗ってから１５０ml、７０％の同じアルコールで３回に分けて抽出し、実験例１の方法で濃縮させて（水浴８０℃で、減圧或いは常圧で）濃縮液の濃度が2.99葉重／mlである。
（３）紅景天の茎を粉にし、乾燥させる。 0.5kgの粉を７０％のエチルアルコール３０００mlで３回に分けて抽出した（毎回３０分）。抽出液を濾過し、アルコールを回収する。５５０ｇの濃縮液が得られた。これに等量の水を入れて、放置してから濾過し、濾液をＣＨ₃ＣＯ−ＯＣ₂Ｈ₅ で抽出し、浴剤を回収して紅景天▲だい▼を得る。
【００２２】本発明において使用する抽出溶液は、水、アルコール又はその水溶液を原則として使用し、更に詳しくはメチルアルコール、エチルアルコール、ブドウ糖又はその水溶液が好ましく使用され、特に好ましくは通常薬用アルコールとして使用されるものである。またその他石油エーテル、イソ酪酸も使用することができる。
【００２３】本発明において化合物１及び２を同定した根拠を以下に示す。抽出液からＨＰＬＣを用いて２種類の化合物の混合物を分離し、まず水を用いて化合物２の結晶を得る。溶残をメタノールで溶かして化合物１の結晶（結晶Ａという）を得る。
【００２４】これら化合物１及び２の構造式の決定は以下の方法によった。
（１）ＮＭＲ測定■結晶Ａをメタノールで溶かし、¹Ｈ−ＮＭＲ、¹³Ｃ−ＮＭＲ測定を行う。測定結果として、−ＯＣＨ₃ 、−ＯＣ₂Ｈ₅、−ＯＣＨ₃ＣＨ₂ＣＨ₃ 、−ＯＣＨ₃ＣＨ₂ＣＨ₃ＣＨ₃、−ＯＨ、−ＨＰＬＣ、
【化５】

の存在が確認された。このＮＭＲのチャートを図１に示す。
■結晶（Ｂ）の中に−ＯＨ、−ＣＯＯＨの存在が確認された。このＮＭＲのチャートを図２に示す。
【００２５】
（２）ＥＤＡＸ（元素の電子エネルギー）測定■結晶Ａの中にＮａ⁺ が確認された。チャートを図３に示す。
■結晶Ｂの中にもＮａ⁺ の存在が認められた。チャートを図４に示す。
【００２６】（３）ＵＶ測定結晶Ａ、Ｂとも吸収ピークが認められず、共役系はないことが確認された。結晶Ａのチャートを図５に、結晶Ｂのチャートを図６に示した。
【００２７】（４）ＩＲ測定■結晶Ａの中に−ＣＯ₂Ｈ、
【化６】

−ＯＨの存在が確認された。チャートは図７の通り。
■結晶Ｂの中に−ＯＨ、−ＣＯ₃Ｈ、−Ｏ−が検出された。チャートは図８の通り。
【００２８】（５）ＨＰＬＣとＭＳ（Mass spectrometer)との共用による測定（ＨＰＬＣ−ＭＳ）
■結晶Ａの溶液をＨＰＬＣ−ＭＳに入れて分離と測定を行う。チャートを図９及び１０に示す。以下の分子式が得られる（括弧内は分子量である）。
Ｃ₈Ｈ₁₆Ｏ₈（２３８）、Ｃ₉Ｈ₁₈Ｏ₈（２５２）、Ｃ₁₀Ｈ₂₀Ｏ₈（２６６）、Ｃ₁₁Ｈ₂₂Ｏ₈（２８０）、Ｃ₈Ｈ₁₅Ｏ₈Ｎａ（２６０）。
■結晶Ｂの分子式はＣ₁₅Ｈ₂₃Ｏ₁₃（４１１）である。これらのチャートを図１１及び１２に示す。
以上のようにＮＭＲ、ＩＲ、ＵＶ、ＨＰＬＣ−ＭＳ、ＥＤＡＸなどの総合分析により、以上の結晶Ａはグルコヘプトニックエステル（Glucoheptonic ester ）の誘導体であることが認められた。即ち、Glucoheptonic acid sodium 、Methylglucoheptonic ester、 Ethyl glucoheptonic ester、N-propyl glucoheptonicester、 N-Butyl glucoheptonic ester等である。結晶Ｂは燕子掌▲だい▼（glucoside)であると判断された。
【００２９】〈Ｇｌｕｃｏｈｅｐｔｏｎｉｃｅｓｔｅｒ誘導体の構造式〉化合物１（結晶Ａ）は以下の構造を有する。但し式中Ｒはアルカリ金属、低級アルキル基を示す。
【化７】この立体構造式（二次構造共通式）は以下の通りであり、すべて椅子型構造式である。
【化８】上記アルカリ金属としてはＮａが、またアルキル基としてはメチル、エチル、プロピル、ブチルを使用でき、プロピル及びブチルとしてはｎ−プロピル、ｎ−ブチルである。
【００３０】〈化合物２（結晶Ｂ）の構造式〉化合物２の構造式は以下の通りである。
【化９】

その立体構造式（二次構造式）は以下の通りである。
【化１０】

分子式はＣ₁₅Ｈ₂₃Ｏ₁₃で表される。二次構造式中の６員環はすべて椅子型構造を採り、Ａ環とＢ環とは反型で結合する。
【００３１】上記化合物１（結晶Ａ）及び化合物２（結晶Ｂ）の元素分析値を以下に示す。
化合物１（Ｃ₈Ｈ₁₆Ｏ₈として）
理論値Ｃ：40.3％Ｈ：6.72％実測値Ｃ：40.6％Ｈ：6.50％化合物２（Ｃ₁₅Ｈ₂₃Ｏ₁₃として）
理論値Ｃ：43.80％Ｈ：5.32％実測値Ｃ：43.60％Ｈ：5.20％上記元素分析値の測定から実測値と理論値とがよく一致している。上記化合物１及び２は既に述べた通り景天燕子掌から抽出して製造することができるが、本発明においては上記方法以外でも製造できる方法であればいかなる方法でもよい。
【００３２】実験例以下に実験例を挙げて詳しく説明する。
１．毒性実験（Ａ）方法急性毒性ＬＤ₅₀で測定した。
（Ｂ）結果毒性は全くなかった。
【００３３】２．動物実験抽出液の濃縮エキスをSephadex ＬＨ₂₀柱に入れて分子量の差で６成分に分離した。夫々をＡ、Ｂ、Ｃ、Ｄ、Ｅ、Ｆとした。これらを乾燥して粉末とする。分子量によりＢが化合物１と２との混合物である。次に２５％のブドウ糖溶液で粉末を溶かし、 0.2ml溶液ごとに各成分の粉末0.21mgが入るようにする。この溶液を判定実験に用いる。
実験方法：体重２０〜２５ｇのMus musculus（スイス種実験用ネズミ）７７匹をランダムに７組に分けて、すべての子ネズミの腹に１mg Tetraoxidicpyrimidineを注射して、４日間で糖尿病モデルを作り上げる。１日１匹の子ネズミにつき0.2 ml／日ずつ２５％のブドウ糖溶液を胃に詰め込む。対照組については毎日２５％のブドウ糖溶液0.2ml／日ずつを胃に詰め込むだけである。双盲法を用いて血糖値を測定し、生物統計を行う。本実験の結果は次の表１に示す通りである。
【００３４】
【表１】

但し表１中の下記記号は以下のことを示す。
＊１：−は血糖値の上昇を意味する。
＊２：−のマークがついていないのは血糖値下降率を示す。ＢＣ成分により明らかに血糖値が下げられ、生物統計Ｐ値が＜0.01、他の成分による明らかな血糖値降下作用が見られない。
【００３５】以上の実験において１匹の子ネズミにつき４mgのTetraoxidicpyrimidineが注射され、１日に２５％ブドウ糖溶液0.2ml／日も胃に詰め込まれる。できた糖尿病モデルがインシュリン依頼型であると考えられる。従ってＣ成分がインシュリン依頼型糖尿病の血糖値を大幅に下げることができ、臨床実験の結果も考慮してＣ成分に血糖値を下げる有効成分が入っていると判断される。
【００３６】３．臨床実験１９９０年８月から青島市人民医院において血糖値降下剤の臨床実験を行った。臨床実験において成人型糖尿病がインシュリン依存型と非インシュリン依存型とに分かれる。青島市人民医院の最近５年間の統計によると、青島市地域の罹患率は6.74％であり、患者の大半が５０〜７０才の人である。今度の臨床実験に参加された糖尿病患者は５０〜７０才までの人である。２０名の患者は以前中国国内にある色々な糖尿病用の薬を服用してきたが、明らかな効果がなかった。以上の患者に対して毎日２０mg／回の錠剤（化合物１及び２、１：１の混合物）を１日３回与える。食事前２０分位に服用し、毎週１回血糖値と尿糖との検査をし、同時に症状などの検査もする。これを３週間続けて行う。今度の臨床実験の結果をインシュリン依存型と非依存型に分けて表２及び３にまとめた。
【表２】

【表３】

【００３７】上記表２及び表３から以下のことが判る。臨床実験用の本錠剤は１粒２０mgで、中国北京市東風製薬場にて製造した。
（１）臨床実験によって血糖値を下げる以外、滋養強壮の効果も証明された。虚弱体質の患者たちは体質がよくなった。本剤を服用する前後の正常肝効能などに変化がない。
（２）尿糖が定性結果であり、＋、−で示される。
（３）正常の人間の血糖値は一般には血液１００mlごとに８０〜１２０mgのブドウ糖であり、最低値が７０mg／１００mlでこれ以下が低血糖である。最高値が１５０mg／１００mlでこれ以上が高血糖症である。本臨床実験の前の１０例が非インシュリン依存型糖尿病患者で、３週間服用してから、８例が正常になり、他の２例の第３週の血糖値が正常値の最低値に近づいた。
（４）非インシュリン依存型患者にとって効果が明らかで、統計学の統計結果が１００％である。
（５）インシュリン依存型患者に対しても血糖値を下げる効果があることが明らかである。糖尿病の症状もかなり改善された。
以上説明してきた通り本発明の降下剤は優れた血糖値降下作用を有するが、通常この効果は成人には0.5mg／１日以上で充分に発揮される。
【００３８】
【発明の効果】本発明による血糖値降下剤は極めて優れた血糖値降下作用を有し、糖尿病に最適である。
【００３９】
【図面の簡単な説明】
【図１】図１は化合物１（結晶Ａ）のＮＭＲ測定チャートである。
【図２】図２は化合物２（結晶Ｂ）のＮＭＲ測定チャートである。
【図３】図３は化合物１（結晶Ａ）のＥＤＡＸ測定チャートである。
【図４】図４は化合物２（結晶Ｂ）のＥＤＡＸ測定チャートである。
【図５】図５は化合物１（結晶Ａ）のＵＶ測定チャートである。
【図６】図６は化合物２（結晶Ｂ）のＵＶ測定チャートである。
【図７】図７は化合物１（結晶Ａ）のＩＲ測定チャートである。
【図８】図８は化合物２（結晶Ｂ）のＩＲ測定チャートである。
【図９】図９は化合物１（結晶Ａ）のＨＰＬＣ測定チャートである。
【図１０】図１０は化合物１（結晶Ａ）のＭＳ測定チャートである。
【図１１】図１１は化合物２（結晶Ｂ）のＨＰＬＣ測定チャートである。
【図１２】図１２は化合物２（結晶Ｂ）のＭＳ測定チャートである。

【特許請求の範囲】
【請求項１】下記一般式（Ｉ）
【化１】（但し式中Ｒはメチル、エチル、ｎ−プロピル、ｎ−ブチル又はＮａを示す。）で表される化合物、及び下記一般式（ＩＩ）
【化２】で表される化合物の少なくとも１種を有効成分として含有してなる血糖値降下剤。

【図１】