複数誘導性遺伝子調節系
【課題】同じ細胞中の２種以上の遺伝子の発現を同時に調節する手段を提供する。
【解決手段】複数誘導性遺伝子発現系で使用するための数種の遺伝子発現カセットを構築した。本法は、複数遺伝子調節が重要である用途において有用である。すなわち、遺伝子発現の分野における欠点を克服し、機能的ゲノミクス、プロテオミクス、メタボロミクス、毒性スクリーニング、細胞系高処理能スクリーニングアッセイ、蛋白質製造および遺伝子治療等の分野において有用である。同じ細胞中での複数遺伝子の並行制御用の手段を提供し、当業者が、複数遺伝子または経路が含まれる複合的生物学的現象を分析し、また新規治療的用途を創造することを可能にする。バイオテクノロジーまたは遺伝子工学の分野に関する。さらに詳細には、本発明は、複数遺伝子の定量的発現を同時に制御するために細胞内で機能する複数誘導性遺伝子調節系に関する。
【解決手段】複数誘導性遺伝子発現系で使用するための数種の遺伝子発現カセットを構築した。本法は、複数遺伝子調節が重要である用途において有用である。すなわち、遺伝子発現の分野における欠点を克服し、機能的ゲノミクス、プロテオミクス、メタボロミクス、毒性スクリーニング、細胞系高処理能スクリーニングアッセイ、蛋白質製造および遺伝子治療等の分野において有用である。同じ細胞中での複数遺伝子の並行制御用の手段を提供し、当業者が、複数遺伝子または経路が含まれる複合的生物学的現象を分析し、また新規治療的用途を創造することを可能にする。バイオテクノロジーまたは遺伝子工学の分野に関する。さらに詳細には、本発明は、複数遺伝子の定量的発現を同時に制御するために細胞内で機能する複数誘導性遺伝子調節系に関する。
Notice: Undefined index: DEJ in /mnt/www/gzt_disp.php on line 298
【特許請求の範囲】
【請求項１】
複数の個々に操作可能な遺伝子調節系を含む複数誘導性遺伝子調節系であって、
ａ）個々に操作可能な遺伝子調節系の各々が、
ｉ）Ａ）ＤＮＡ結合ドメイン、
Ｂ）リガンド結合ドメイン、および
Ｃ）トランス活性化ドメイン、
を含む受容体複合体をコードする一種以上のポリヌクレオチド；
ｉｉ）リガンド；および
ｉｉｉ）Ａ）外因性または内因性ポリヌクレオチド、および
Ｂ）応答エレメント、
を含むポリヌクレオチド；
を含み、ここで、
Ａ）外因性または内因性ポリヌクレオチドは応答エレメントに操作可能に結合し；さらに
Ｂ）リガンドの存在下または非存在下における、応答エレメントへのＤＮＡ結合ドメインの結合が、外因性もしくは内因性ポリヌクレオチドの活性化または抑制を生じさせ；さらに
ｂ）個々に操作可能な遺伝子調節系の各々が、複数誘導性遺伝子調節系において存在する他の個々に操作可能な遺伝子調節系に対してオルトゴナルである、
前記複数誘導性遺伝子調節系。
【請求項２】
操作可能な遺伝子発現調節系の各々が下記ａ）、ｂ）またはｃ）を含む請求項１に記載の複数誘導性遺伝子調節系：
ａ）
ｉ）トランス活性化ドメイン、その発現が調節されるべき遺伝子と関連する応答エレメントを認識するＤＮＡ結合ドメイン、および核受容体リガンド結合ドメインを含むポリペプチドをコードするポリヌクレオチド、を含む第１の遺伝子発現カセット、
ｉｉ）リガンド、および
ｉｉｉ）Ａ）第１の遺伝子発現カセットのコードされたポリペプチドのＤＮＡ結合ドメインにより認識される応答エレメント、Ｂ）第１の遺伝子発現カセットのコードされたポリペプチドのトランス活性化ドメインにより活性化されるプロモータ、およびＣ）その発現が調節されるべき遺伝子、を含む第２の遺伝子発現カセット；
ｂ）
ｉ）トランス活性化ドメイン、その発現が調節されるべき遺伝子と関連する応答エレメントを認識するＤＮＡ結合ドメイン、および核受容体リガンド結合ドメインを含むポリペプチドをコードするポリヌクレオチド、を含む第１の遺伝子発現カセット、
ｉｉ）脊椎動物レチノイドＸ受容体リガンド結合ドメイン、無脊椎動物レチノイドＸ受容体リガンド結合ドメイン、ウルトラスパイラクル蛋白質リガンド結合ドメイン、および、キメラリガンド結合ドメイン（当該キメラリガンド結合ドメインは、２つのポリペプチドフラグメントを含み、ここで第１のポリペプチドフラグメントが、脊椎動物レチノイドＸ受容体リガンド結合ドメイン、無脊椎動物レチノイドＸ受容体リガンド結合ドメインまたはウルトラスパイラクル蛋白質リガンド結合ドメインからのものであり、また第２のポリペプチドフラグメントが、異なる脊椎動物レチノイドＸ受容体リガンド結合ドメイン、無脊椎動物レチノイドＸ受容体リガンド結合ドメインまたはウルトラスパイラクル蛋白質リガンド結合ドメインからのものである）からなる群より選択される第２の核受容体リガンド結合ドメイン、
ｉｉｉ）リガンド、および
ｉｖ）Ａ）第１の遺伝子発現カセットのコードされたポリペプチドのＤＮＡ結合ドメインにより認識される応答エレメント、Ｂ）第１の遺伝子発現カセットのコードされたポリペプチドのトランス活性化ドメインにより活性化されるプロモータ、およびＣ）その発現が調節されるべき遺伝子、を含む第２の遺伝子発現カセット；または
ｃ）
ｉ）その発現が調節されるべき遺伝子と関連する応答エレメントを認識するＤＮＡ結合ドメインおよび核受容体リガンド結合ドメインを含む第１のポリペプチドをコードするポリヌクレオチドを含む第１の遺伝子発現カセット、
ｉｉ）トランス活性化ドメインおよび核受容体リガンド結合ドメインを含む第２のポリペプチドをコードするポリヌクレオチドを含む第２の遺伝子発現カセット、
ｉｉｉ）リガンド、および
ｉｖ）Ａ）第１の遺伝子発現カセットの第１のポリペプチドのＤＮＡ結合ドメインにより認識される応答エレメント、Ｂ）第２の遺伝子発現カセットの第２のポリペプチドのトランス活性化ドメインにより活性化されるプロモータおよびＣ）その発現が調節されるべき遺伝子、を含む第３の遺伝子発現カセット；
ここで、ｃ）ｉ）またはｃ）ｉｉ）の核受容体リガンド結合ドメインの一つはＨ群核受容体リガンド結合ドメインである。
【請求項３】
請求項１に記載の複数遺伝子調節系を含むウイルス。
【請求項４】
請求項１に記載の複数遺伝子調節系を含む細胞。
【請求項５】
請求項４に記載の細胞の一種以上を含むトランスジェニック生物体。
【請求項６】
受容体複合体をコードするポリヌクレオチドの一種以上が核受容体複合体をコードする、請求項１に記載の複数誘導性遺伝子調節系。
【請求項７】
受容体複合体をコードするポリヌクレオチドの一種以上が非哺乳動物受容体複合体をコードする、請求項１に記載の複数誘導性遺伝子調節系。
【請求項８】
受容体複合体がエクジソン受容体複合体である、請求項６に記載の複数誘導性遺伝子調節系。
【請求項９】
複数の個々に操作可能な遺伝子調節系を含む複数誘導性遺伝子調節系であって、
ａ）個々に操作可能な遺伝子調節系の各々が
ｉ）一種以上の受容体複合体であって、各々が、
Ａ）ＤＮＡ結合ドメイン、
Ｂ）リガンド結合ドメイン、および
Ｃ）トランス活性化ドメイン、
を含む当該受容体複合体；
ｉｉ）リガンド；
ｉｉｉ）
Ａ）外因性または内因性遺伝子、および
Ｂ）応答エレメント、
を含むポリヌクレオチド；
を含み、
ここで、
Ａ）外因性または内因性遺伝子は応答エレメントの制御下にあり；さらに
Ｂ）リガンドの存在下または非存在下における応答エレメントへのＤＮＡ結合ドメインの結合が、遺伝子の活性化または抑制を生じさせ；さらに、
ｂ）個々に操作可能な遺伝子調節系の各々が、複数誘導性遺伝子調節系において存在する他の個々に操作可能な遺伝子調節系に対してオルトゴナルである、
前記複数誘導性遺伝子調節系。
【請求項１０】
操作可能な遺伝子発現調節系の各々が下記ａ）、ｂ）またはｃ）を含む請求項９に記載の複数誘導性遺伝子調節系：
ａ）
ｉ）トランス活性化ドメイン、その発現が調節されるべき遺伝子と関連する応答エレメントを認識するＤＮＡ結合ドメイン、および核受容体リガンド結合ドメイン、を含むポリペプチド、
ｉｉ）リガンド、および
ｉｉｉ）Ａ）ａ）ｉ）のポリペプチドのＤＮＡ結合ドメインにより認識される応答エレメント、Ｂ）ａ）ｉ）のポリペプチドのトランス活性化ドメインにより活性化されるプロモータ、およびＣ）その発現が調節されるべき遺伝子、を含む遺伝子発現カセット；
ｂ）
ｉ）トランス活性化ドメイン、その発現が調節されるべき遺伝子と関連する応答エレメントを認識するＤＮＡ結合ドメイン、および核受容体リガンド結合ドメインを含むポリペプチド、
ｉｉ）脊椎動物レチノイドＸ受容体リガンド結合ドメイン、無脊椎動物レチノイドＸ受容体リガンド結合ドメイン、ウルトラスパイラクル蛋白質リガンド結合ドメイン、および、キメラリガンド結合ドメイン（当該キメラリガンド結合ドメインは、２つのポリペプチドフラグメントを含み、ここで第１のポリペプチドフラグメントが、脊椎動物レチノイドＸ受容体リガンド結合ドメイン、無脊椎動物レチノイドＸ受容体リガンド結合ドメインまたはウルトラスパイラクル蛋白質リガンド結合ドメインからのものであり、また第２のポリペプチドフラグメントが、異なる脊椎動物レチノイドＸ受容体リガンド結合ドメイン、無脊椎動物レチノイドＸ受容体リガンド結合ドメインまたはウルトラスパイラクル蛋白質リガンド結合ドメインからのものである）からなる群より選択される第２の核受容体リガンド結合ドメイン、
ｉｉｉ）リガンド、および
ｉｖ）Ａ）ｂ）ｉ）のポリペプチドのＤＮＡ結合ドメインにより認識される応答エレメント、Ｂ）ｂ）ｉ）のポリペプチドのトランス活性化ドメインにより活性化されるプロモータ、およびＣ）その発現が調節されるべき遺伝子を含む遺伝子発現カセット；または
ｃ）
ｉ）その発現が調節されるべき遺伝子と関連する応答エレメントを認識するＤＮＡ結合ドメインおよび核受容体リガンド結合ドメインを含む第１のポリペプチド、
ｉｉ）トランス活性化ドメインおよび核受容体リガンド結合ドメインを含む第２のポリペプチド、
ｉｉｉ）リガンド、および
ｉｖ）Ａ）ｃ）ｉ）の第１のポリペプチドのＤＮＡ結合ドメインにより認識される応答エレメント、Ｂ）ｃ）ｉｉ）の第２のポリペプチドのトランス活性化ドメインにより活性化されるプロモータおよびＣ）その発現が調節されるべき遺伝子、を含む遺伝子発現カセット；
ここで、ｃ）ｉ）またはｃ）ｉｉ）の核受容体リガンド結合ドメインの一つがＨ群核受容体リガンド結合ドメインである。
【請求項１１】
請求項９に記載の複数遺伝子調節系を含むウイルス。
【請求項１２】
請求項９に記載の複数遺伝子調節系を含む細胞。
【請求項１３】
請求項１２に記載の細胞の一種以上を含むトランスジェニック生物体。
【請求項１４】
受容体複合体の一種以上がＨ群受容体複合体である、請求項９に記載の複数誘導性遺伝子調節系。
【請求項１５】
Ｈ群受容体複合体がエクジソン受容体複合体である、請求項１４に記載の複数誘導性遺伝子調節系。
【請求項１６】
ａ）インクリメンタルファルマコフォアエレメント変化に基づいて、種々に改変されたリガンドの組を定める工程、
ｂ）各受容体ポリペプチドが、下記ｉ）〜ｖ）であるリガンド結合ドメインを含む受容体ポリペプチドの第１の組を調製する工程、
ｉ）天然に存在するもの、
ｉｉ）欠失、挿入または突然変異により改変されたもの、
ｉｉｉ）キメラ、
ｉｖ）合成物、または
ｖ）これらの組み合わせ、
ｃ）任意に、受容体ポリペプチドを細胞内に導入する工程、
ｄ）種々に改変されたリガンドの組を用いて、ｃ）の細胞内でまたはインビトロで、遺伝子調節について、もしくはリガンド結合ドメインの結合について、または両方について、受容体ポリペプチドを検査する工程、
ｅ）受容体ポリペプチド／リガンド組み合わせのオルトゴナリティーを決めて、種々の遺伝子調節特性を有するリガンドのサブセットを定める工程、
ｆ）任意に、改変されたリガンドの組および改変された受容体ポリペプチドの組を用いて工程ａ）〜ｅ）を繰り返す工程、
ｇ）各受容体ポリペプチドが、下記ｉ）〜ｖ）であるＤＮＡ結合ドメインを含む受容体ポリペプチドの第２の組を調製する工程、
ｉ）天然に存在するもの、
ｉｉ）欠失、挿入または突然変異により改変されたもの、
ｉｉｉ）キメラ、
ｉｖ）合成物、または
ｖ）これらの組み合わせ、
ｈ）外因性または内因性遺伝子および、下記ｉ）〜ｖ）である応答エレメントを含むＤＮＡ構造体の組を調製する工程：
ｉ）天然に存在するもの、
ｉｉ）欠失、挿入または突然変異により改変されたもの、
ｉｉｉ）キメラ、
ｉｖ）合成物、または
ｖ）これらの組み合わせ、
ｉ）受容体ポリペプチドの第１の組、受容体ポリペプチドの第２の組およびＤＮＡ構造体をクローニングし、次にクローンを細胞内に導入する工程、
ｊ）工程ｅ）で同定されたリガンドへの共反応性について細胞をアッセイする工程、および
ｋ）オルトゴナルな組の、リガンド、リガンド結合ドメイン、ＤＮＡ結合ドメイン、および応答エレメントを、工程ｅ）およびｊ）の結果に基づいて選択して、複数誘導性遺伝子調節系を構成する工程
を含む複数遺伝子調節系を開発する方法。
【請求項１７】
受容体ポリペプチドの一種以上が核受容体ポリペプチドである請求項１６に記載の方法。
【請求項１８】
受容体ポリペプチドの一種以上が非哺乳動物受容体ポリペプチドである請求項１７に記載の方法。
【請求項１９】
核受容体ポリペプチドの一種以上がＨ群核受容体ポリペプチドである請求項１７に記載の方法。
【請求項２０】
核受容体ポリペプチドの一種以上がエクジソン受容体ポリペプチドである請求項１７に記載の方法。
【請求項１】
複数の個々に操作可能な遺伝子調節系を含む複数誘導性遺伝子調節系であって、
ａ）個々に操作可能な遺伝子調節系の各々が、
ｉ）Ａ）ＤＮＡ結合ドメイン、
Ｂ）リガンド結合ドメイン、および
Ｃ）トランス活性化ドメイン、
を含む受容体複合体をコードする一種以上のポリヌクレオチド；
ｉｉ）リガンド；および
ｉｉｉ）Ａ）外因性または内因性ポリヌクレオチド、および
Ｂ）応答エレメント、
を含むポリヌクレオチド；
を含み、ここで、
Ａ）外因性または内因性ポリヌクレオチドは応答エレメントに操作可能に結合し；さらに
Ｂ）リガンドの存在下または非存在下における、応答エレメントへのＤＮＡ結合ドメインの結合が、外因性もしくは内因性ポリヌクレオチドの活性化または抑制を生じさせ；さらに
ｂ）個々に操作可能な遺伝子調節系の各々が、複数誘導性遺伝子調節系において存在する他の個々に操作可能な遺伝子調節系に対してオルトゴナルである、
前記複数誘導性遺伝子調節系。
【請求項２】
操作可能な遺伝子発現調節系の各々が下記ａ）、ｂ）またはｃ）を含む請求項１に記載の複数誘導性遺伝子調節系：
ａ）
ｉ）トランス活性化ドメイン、その発現が調節されるべき遺伝子と関連する応答エレメントを認識するＤＮＡ結合ドメイン、および核受容体リガンド結合ドメインを含むポリペプチドをコードするポリヌクレオチド、を含む第１の遺伝子発現カセット、
ｉｉ）リガンド、および
ｉｉｉ）Ａ）第１の遺伝子発現カセットのコードされたポリペプチドのＤＮＡ結合ドメインにより認識される応答エレメント、Ｂ）第１の遺伝子発現カセットのコードされたポリペプチドのトランス活性化ドメインにより活性化されるプロモータ、およびＣ）その発現が調節されるべき遺伝子、を含む第２の遺伝子発現カセット；
ｂ）
ｉ）トランス活性化ドメイン、その発現が調節されるべき遺伝子と関連する応答エレメントを認識するＤＮＡ結合ドメイン、および核受容体リガンド結合ドメインを含むポリペプチドをコードするポリヌクレオチド、を含む第１の遺伝子発現カセット、
ｉｉ）脊椎動物レチノイドＸ受容体リガンド結合ドメイン、無脊椎動物レチノイドＸ受容体リガンド結合ドメイン、ウルトラスパイラクル蛋白質リガンド結合ドメイン、および、キメラリガンド結合ドメイン（当該キメラリガンド結合ドメインは、２つのポリペプチドフラグメントを含み、ここで第１のポリペプチドフラグメントが、脊椎動物レチノイドＸ受容体リガンド結合ドメイン、無脊椎動物レチノイドＸ受容体リガンド結合ドメインまたはウルトラスパイラクル蛋白質リガンド結合ドメインからのものであり、また第２のポリペプチドフラグメントが、異なる脊椎動物レチノイドＸ受容体リガンド結合ドメイン、無脊椎動物レチノイドＸ受容体リガンド結合ドメインまたはウルトラスパイラクル蛋白質リガンド結合ドメインからのものである）からなる群より選択される第２の核受容体リガンド結合ドメイン、
ｉｉｉ）リガンド、および
ｉｖ）Ａ）第１の遺伝子発現カセットのコードされたポリペプチドのＤＮＡ結合ドメインにより認識される応答エレメント、Ｂ）第１の遺伝子発現カセットのコードされたポリペプチドのトランス活性化ドメインにより活性化されるプロモータ、およびＣ）その発現が調節されるべき遺伝子、を含む第２の遺伝子発現カセット；または
ｃ）
ｉ）その発現が調節されるべき遺伝子と関連する応答エレメントを認識するＤＮＡ結合ドメインおよび核受容体リガンド結合ドメインを含む第１のポリペプチドをコードするポリヌクレオチドを含む第１の遺伝子発現カセット、
ｉｉ）トランス活性化ドメインおよび核受容体リガンド結合ドメインを含む第２のポリペプチドをコードするポリヌクレオチドを含む第２の遺伝子発現カセット、
ｉｉｉ）リガンド、および
ｉｖ）Ａ）第１の遺伝子発現カセットの第１のポリペプチドのＤＮＡ結合ドメインにより認識される応答エレメント、Ｂ）第２の遺伝子発現カセットの第２のポリペプチドのトランス活性化ドメインにより活性化されるプロモータおよびＣ）その発現が調節されるべき遺伝子、を含む第３の遺伝子発現カセット；
ここで、ｃ）ｉ）またはｃ）ｉｉ）の核受容体リガンド結合ドメインの一つはＨ群核受容体リガンド結合ドメインである。
【請求項３】
請求項１に記載の複数遺伝子調節系を含むウイルス。
【請求項４】
請求項１に記載の複数遺伝子調節系を含む細胞。
【請求項５】
請求項４に記載の細胞の一種以上を含むトランスジェニック生物体。
【請求項６】
受容体複合体をコードするポリヌクレオチドの一種以上が核受容体複合体をコードする、請求項１に記載の複数誘導性遺伝子調節系。
【請求項７】
受容体複合体をコードするポリヌクレオチドの一種以上が非哺乳動物受容体複合体をコードする、請求項１に記載の複数誘導性遺伝子調節系。
【請求項８】
受容体複合体がエクジソン受容体複合体である、請求項６に記載の複数誘導性遺伝子調節系。
【請求項９】
複数の個々に操作可能な遺伝子調節系を含む複数誘導性遺伝子調節系であって、
ａ）個々に操作可能な遺伝子調節系の各々が
ｉ）一種以上の受容体複合体であって、各々が、
Ａ）ＤＮＡ結合ドメイン、
Ｂ）リガンド結合ドメイン、および
Ｃ）トランス活性化ドメイン、
を含む当該受容体複合体；
ｉｉ）リガンド；
ｉｉｉ）
Ａ）外因性または内因性遺伝子、および
Ｂ）応答エレメント、
を含むポリヌクレオチド；
を含み、
ここで、
Ａ）外因性または内因性遺伝子は応答エレメントの制御下にあり；さらに
Ｂ）リガンドの存在下または非存在下における応答エレメントへのＤＮＡ結合ドメインの結合が、遺伝子の活性化または抑制を生じさせ；さらに、
ｂ）個々に操作可能な遺伝子調節系の各々が、複数誘導性遺伝子調節系において存在する他の個々に操作可能な遺伝子調節系に対してオルトゴナルである、
前記複数誘導性遺伝子調節系。
【請求項１０】
操作可能な遺伝子発現調節系の各々が下記ａ）、ｂ）またはｃ）を含む請求項９に記載の複数誘導性遺伝子調節系：
ａ）
ｉ）トランス活性化ドメイン、その発現が調節されるべき遺伝子と関連する応答エレメントを認識するＤＮＡ結合ドメイン、および核受容体リガンド結合ドメイン、を含むポリペプチド、
ｉｉ）リガンド、および
ｉｉｉ）Ａ）ａ）ｉ）のポリペプチドのＤＮＡ結合ドメインにより認識される応答エレメント、Ｂ）ａ）ｉ）のポリペプチドのトランス活性化ドメインにより活性化されるプロモータ、およびＣ）その発現が調節されるべき遺伝子、を含む遺伝子発現カセット；
ｂ）
ｉ）トランス活性化ドメイン、その発現が調節されるべき遺伝子と関連する応答エレメントを認識するＤＮＡ結合ドメイン、および核受容体リガンド結合ドメインを含むポリペプチド、
ｉｉ）脊椎動物レチノイドＸ受容体リガンド結合ドメイン、無脊椎動物レチノイドＸ受容体リガンド結合ドメイン、ウルトラスパイラクル蛋白質リガンド結合ドメイン、および、キメラリガンド結合ドメイン（当該キメラリガンド結合ドメインは、２つのポリペプチドフラグメントを含み、ここで第１のポリペプチドフラグメントが、脊椎動物レチノイドＸ受容体リガンド結合ドメイン、無脊椎動物レチノイドＸ受容体リガンド結合ドメインまたはウルトラスパイラクル蛋白質リガンド結合ドメインからのものであり、また第２のポリペプチドフラグメントが、異なる脊椎動物レチノイドＸ受容体リガンド結合ドメイン、無脊椎動物レチノイドＸ受容体リガンド結合ドメインまたはウルトラスパイラクル蛋白質リガンド結合ドメインからのものである）からなる群より選択される第２の核受容体リガンド結合ドメイン、
ｉｉｉ）リガンド、および
ｉｖ）Ａ）ｂ）ｉ）のポリペプチドのＤＮＡ結合ドメインにより認識される応答エレメント、Ｂ）ｂ）ｉ）のポリペプチドのトランス活性化ドメインにより活性化されるプロモータ、およびＣ）その発現が調節されるべき遺伝子を含む遺伝子発現カセット；または
ｃ）
ｉ）その発現が調節されるべき遺伝子と関連する応答エレメントを認識するＤＮＡ結合ドメインおよび核受容体リガンド結合ドメインを含む第１のポリペプチド、
ｉｉ）トランス活性化ドメインおよび核受容体リガンド結合ドメインを含む第２のポリペプチド、
ｉｉｉ）リガンド、および
ｉｖ）Ａ）ｃ）ｉ）の第１のポリペプチドのＤＮＡ結合ドメインにより認識される応答エレメント、Ｂ）ｃ）ｉｉ）の第２のポリペプチドのトランス活性化ドメインにより活性化されるプロモータおよびＣ）その発現が調節されるべき遺伝子、を含む遺伝子発現カセット；
ここで、ｃ）ｉ）またはｃ）ｉｉ）の核受容体リガンド結合ドメインの一つがＨ群核受容体リガンド結合ドメインである。
【請求項１１】
請求項９に記載の複数遺伝子調節系を含むウイルス。
【請求項１２】
請求項９に記載の複数遺伝子調節系を含む細胞。
【請求項１３】
請求項１２に記載の細胞の一種以上を含むトランスジェニック生物体。
【請求項１４】
受容体複合体の一種以上がＨ群受容体複合体である、請求項９に記載の複数誘導性遺伝子調節系。
【請求項１５】
Ｈ群受容体複合体がエクジソン受容体複合体である、請求項１４に記載の複数誘導性遺伝子調節系。
【請求項１６】
ａ）インクリメンタルファルマコフォアエレメント変化に基づいて、種々に改変されたリガンドの組を定める工程、
ｂ）各受容体ポリペプチドが、下記ｉ）〜ｖ）であるリガンド結合ドメインを含む受容体ポリペプチドの第１の組を調製する工程、
ｉ）天然に存在するもの、
ｉｉ）欠失、挿入または突然変異により改変されたもの、
ｉｉｉ）キメラ、
ｉｖ）合成物、または
ｖ）これらの組み合わせ、
ｃ）任意に、受容体ポリペプチドを細胞内に導入する工程、
ｄ）種々に改変されたリガンドの組を用いて、ｃ）の細胞内でまたはインビトロで、遺伝子調節について、もしくはリガンド結合ドメインの結合について、または両方について、受容体ポリペプチドを検査する工程、
ｅ）受容体ポリペプチド／リガンド組み合わせのオルトゴナリティーを決めて、種々の遺伝子調節特性を有するリガンドのサブセットを定める工程、
ｆ）任意に、改変されたリガンドの組および改変された受容体ポリペプチドの組を用いて工程ａ）〜ｅ）を繰り返す工程、
ｇ）各受容体ポリペプチドが、下記ｉ）〜ｖ）であるＤＮＡ結合ドメインを含む受容体ポリペプチドの第２の組を調製する工程、
ｉ）天然に存在するもの、
ｉｉ）欠失、挿入または突然変異により改変されたもの、
ｉｉｉ）キメラ、
ｉｖ）合成物、または
ｖ）これらの組み合わせ、
ｈ）外因性または内因性遺伝子および、下記ｉ）〜ｖ）である応答エレメントを含むＤＮＡ構造体の組を調製する工程：
ｉ）天然に存在するもの、
ｉｉ）欠失、挿入または突然変異により改変されたもの、
ｉｉｉ）キメラ、
ｉｖ）合成物、または
ｖ）これらの組み合わせ、
ｉ）受容体ポリペプチドの第１の組、受容体ポリペプチドの第２の組およびＤＮＡ構造体をクローニングし、次にクローンを細胞内に導入する工程、
ｊ）工程ｅ）で同定されたリガンドへの共反応性について細胞をアッセイする工程、および
ｋ）オルトゴナルな組の、リガンド、リガンド結合ドメイン、ＤＮＡ結合ドメイン、および応答エレメントを、工程ｅ）およびｊ）の結果に基づいて選択して、複数誘導性遺伝子調節系を構成する工程
を含む複数遺伝子調節系を開発する方法。
【請求項１７】
受容体ポリペプチドの一種以上が核受容体ポリペプチドである請求項１６に記載の方法。
【請求項１８】
受容体ポリペプチドの一種以上が非哺乳動物受容体ポリペプチドである請求項１７に記載の方法。
【請求項１９】
核受容体ポリペプチドの一種以上がＨ群核受容体ポリペプチドである請求項１７に記載の方法。
【請求項２０】
核受容体ポリペプチドの一種以上がエクジソン受容体ポリペプチドである請求項１７に記載の方法。
【図１】
【図２】
【図２】
【公開番号】特開２０１３−４８６２３（Ｐ２０１３−４８６２３Ａ）
【公開日】平成２５年３月１４日（２０１３．３．１４）
【国際特許分類】
【外国語出願】
【出願番号】特願２０１２−２２１１７３（Ｐ２０１２−２２１１７３）
【出願日】平成２４年１０月３日（２０１２．１０．３）
【分割の表示】特願２００２−５３２６４４（Ｐ２００２−５３２６４４）の分割
【原出願日】平成１３年９月２８日（２００１．９．２８）
【出願人】（５０８０８７０４４）イントレキソン コーポレーション (12)
【Ｆターム（参考）】
【公開日】平成２５年３月１４日（２０１３．３．１４）
【国際特許分類】
【出願番号】特願２０１２−２２１１７３（Ｐ２０１２−２２１１７３）
【出願日】平成２４年１０月３日（２０１２．１０．３）
【分割の表示】特願２００２−５３２６４４（Ｐ２００２−５３２６４４）の分割
【原出願日】平成１３年９月２８日（２００１．９．２８）
【出願人】（５０８０８７０４４）イントレキソン コーポレーション (12)
【Ｆターム（参考）】
[ Back to top ]