２−Ｏ−α−Ｄ−グルコピラノシル−Ｌ−アスコルビン酸高含有物の製造方法
【発明の詳細な説明】
【０００１】
【産業上の利用分野】本発明は、２−Ｏ−α−Ｄ−グルコピラノシル−Ｌ−アスコルビン酸高含有物の製造方法に関し、詳細には、２−Ｏ−α−Ｄ−グルコピラノシル−Ｌ−アスコルビン酸とともに直接還元性を示すＬ−アスコルビン酸糖誘導体を含有する溶液からの２−Ｏ−α−Ｄ−グルコピラノシル−Ｌ−アスコルビン酸高含有物の製造方法に関する。
【０００２】
【従来の技術】２−Ｏ−α−Ｄ−グルコピラノシル−Ｌ−アスコルビン酸は、特開平３−１３５９９２号公報、特開平３−１３９２８８号公報などで開示されているように、化Ｉで示される化学構造を有し、直接還元性を示さず、安定性に優れ、しかも生体内で容易に加水分解され、Ｌ−アスコルビン酸本来の生理活性を発揮するＬ−アスコルビン酸の新規糖誘導体である。
【０００３】
【化１】
【０００４】その工業的製造方法は、特開平３−１８３４９２号公報に開示されているように、例えば、Ｌ−アスコルビン酸とα−グルコシル糖化合物とを含有する溶液に糖転移酵素または糖転移酵素とグルコアミラーゼとを作用させて得られる２−Ｏ−α−Ｄ−グルコピラノシル−Ｌ−アスコルビン酸とともにそれ以外の夾雑物を含有する溶液を原料溶液として、強酸性カチオン交換樹脂を用いるカラムクロマトグラフィーを行ない、この溶出液の２−Ｏ−α−Ｄ−グルコピラノシル−Ｌ−アスコルビン酸高含有画分を採取することにより、２−Ｏ−α−Ｄ−グルコピラノシル−Ｌ−アスコルビン酸高含有物含有溶液を製造しうること、更に、これを濃縮して過飽和とし、結晶２−Ｏ−α−Ｄ−グルコピラノシル−Ｌ−アスコルビン酸を製造しうることが開示されている。
【０００５】しかしながら、本発明者等は、２−Ｏ−α−Ｄ−グルコピラノシル−Ｌ−アスコルビン酸高含有物の製造方法について研究を続けていたところ、原料溶液である２−Ｏ−α−Ｄ−グルコピラノシル−Ｌ−アスコルビン酸とともにそれ以外の夾雑物を含有する溶液には、強酸性カチオン交換樹脂を用いるカラムクロマトグラフィーにおいて、Ｌ−アスコルビン酸、グルコースなどのように、２−Ｏ−α−Ｄ−グルコピラノシル−Ｌ−アスコルビン酸との分離が比較的容易な夾雑物以外に、分離が困難で２−Ｏ−α−Ｄ−グルコピラノシル−Ｌ−アスコルビン酸高含有画分の純度向上を妨げ、更に、過飽和溶液からの結晶２−Ｏ−α−Ｄ−グルコピラノシル−Ｌ−アスコルビン酸の析出を阻害する比較的少量の未知夾雑物が混在していることを見いだした。
【０００６】更に、本未知物質は、結晶２−Ｏ−α−Ｄ−グルコピラノシル−Ｌ−アスコルビン酸を分離除去した母液中に蓄積され、母液からの結晶２−Ｏ−α−Ｄ−グルコピラノシル−Ｌ−アスコルビン酸の析出を阻害し、２番晶、３番晶の析出量を著しく低下させることを見いだした。
【０００７】
【発明が解決しようとする課題】糖転移反応により得られた２−Ｏ−α−Ｄ−グルコピラノシル−Ｌ−アスコルビン酸含有溶液に混在する未知夾雑物を解明し、併せて、２−Ｏ−α−Ｄ−グルコピラノシル−Ｌ−アスコルビン酸とともに夾雑物を含有する溶液からその夾雑物を容易に除去し、より高純度の２−Ｏ−α−Ｄ−グルコピラノシル−Ｌ−アスコルビン酸高含有物を工業的により高収率で大量生産する方法の確立が望まれる。
【０００８】
【課題を解決するための手段】本発明者等は、糖転移反応により得られた２−Ｏ−α−Ｄ−グルコピラノシル−Ｌ−アスコルビン酸とともにそれ以外の夾雑物を含有する溶液を用いて、強酸性カチオン交換樹脂を用いるカラムクロマトグラフィーにより、より高純度の２−Ｏ−α−Ｄ−グルコピラノシル−Ｌ−アスコルビン酸高含有物を工業的に容易に製造する方法の確立を目指して鋭意研究を続けた。
【０００９】その結果、強酸性カチオン交換樹脂を用いるカラムクロマトグラフィーにおいて、２−Ｏ−α−Ｄ−グルコピラノシル−Ｌ−アスコルビン酸との分離が困難で、２−Ｏ−α−Ｄ−グルコピラノシル−Ｌ−アスコルビン酸高含有画分の純度向上を妨げ、更に、過飽和溶液からの結晶２−Ｏ−α−Ｄ−グルコピラノシル−Ｌ−アスコルビン酸の析出を阻害する夾雑物として、５−Ｏ−α−Ｄ−グルコピラノシル−Ｌ−アスコルビン酸および６−Ｏ−α−Ｄ−グルコピラノシル−Ｌ−アスコルビン酸を見い出した。
【００１０】５−Ｏ−α−Ｄ−グルコピラノシル−Ｌ−アスコルビン酸は、文献未記載の新規物質であり、６−Ｏ−α−Ｄ−グルコピラノシル−Ｌ−アスコルビン酸は、特公昭４８−３８１５８号公報に開示されている公知物質であり、これらは、２−Ｏ−α−Ｄ−グルコピラノシル−Ｌ−アスコルビン酸の場合とは違って、直接還元性を示すＬ−アスコルビン酸糖誘導体であることが判明した。
【００１１】更に、直接還元性を示さない２−Ｏ−α−Ｄ−グルコピラノシル−Ｌ−アスコルビン酸と直接還元性を示す５−Ｏ−α−Ｄ−グルコピラノシル−Ｌ−アスコルビン酸、６−Ｏ−α−Ｄ−グルコピラノシル−Ｌ−アスコルビン酸などのＬ−アスコルビン酸糖誘導体との性質の違いに着目して研究を続け、２−Ｏ−α−Ｄ−グルコピラノシル−Ｌ−アスコルビン酸とともに直接還元性を示すＬ−アスコルビン酸糖誘導体を含有する溶液を酸化処理して、直接還元性を示すＬ−アスコルビン酸糖誘導体だけを酸化せしめ、次いで、強酸性カチオン交換樹脂を用いるカラムクロマトグラフィーを行うことにより、２−Ｏ−α−Ｄ−グルコピラノシル−Ｌ−アスコルビン酸と直接還元性を示すＬ−アスコルビン酸糖誘導体の酸化物とを容易に分離できることを見いだし、併せて、より高純度の２−Ｏ−α−Ｄ−グルコピラノシル−Ｌ−アスコルビン酸高含有物を工業的規模でより高収率で製造しうることを見いだし、本発明を完成した。
【００１２】また、このようにして得られるより高純度の２−Ｏ−α−Ｄ−グルコピラノシル−Ｌ−アスコルビン酸高含有物の過飽和溶液は、結晶の析出が容易で収率も高く、結晶２−Ｏ−α−Ｄ−グルコピラノシル−Ｌ−アスコルビン酸の工業的製造方法としてきわめて有利であることが判明した。
【００１３】本発明において、２−Ｏ−α−Ｄ−グルコピラノシル−Ｌ−アスコルビン酸とともに直接還元性を示すＬ−アスコルビン酸糖誘導体を含有する溶液とは、２−Ｏ−α−Ｄ−グルコピラノシル−Ｌ−アスコルビン酸とともに直接還元性を示す５−Ｏ−α−Ｄ−グルコピラノシル−Ｌ−アスコルビン酸、６−Ｏ−α−Ｄ−グルコピラノシル−Ｌ−アスコルビン酸などのＬ−アスコルビン酸糖誘導体を含有する溶液であって、例えば、Ｌ−アスコルビン酸とα−グルコシル糖化合物とを含有する溶液に糖転移酵素または糖転移酵素とグルコアミラーゼとを作用させて得られる溶液、この溶液を強酸性カチオン交換樹脂を用いるカラムクロマトグラフィーにより得られる２−Ｏ−α−Ｄ−グルコピラノシル−Ｌ−アスコルビン酸高含有溶液、または、この溶液を濃縮、過飽和にし、結晶２−Ｏ−α−Ｄ−グルコピラノシル−Ｌ−アスコルビン酸を析出、分離して得られる母液などを意味する。
【００１４】本明細書でいう直接還元性を示すとは、Ｌ−アスコルビン酸の場合と同様に、そのままで、２，６−ジクロルフェノールインドフェノールを還元脱色することを意味する。
【００１５】また、本明細書でいうＬ−アスコルビン酸とは、Ｌ−アスコルビン酸のみならず、Ｌ−アスコルビン酸のアルカリ金属塩若しくはアルカリ土類金属塩などのＬ−アスコルビン酸塩、または、それらの混合物を意味する。
【００１６】従って、糖転移反応に用いるＬ−アスコルビン酸としては、通常、遊離のＬ−アスコルビン酸だけでなく、必要に応じて、Ｌ−アスコルビン酸ナトリウム、Ｌ−アスコルビン酸カルシウムなどが適宜用いられる。
【００１７】また、同様に、本明細書でいう２−Ｏ−α−Ｄ−グルコピラノシル−Ｌ−アスコルビン酸、５−Ｏ−α−Ｄ−グルコピラノシル−Ｌ−アスコルビン酸、６−Ｏ−α−Ｄ−グルコピラノシル−Ｌ−アスコルビン酸、α−グリコシル−Ｌ−アスコルビン酸などについても、特に不都合が生じない限り、遊離の酸のみならず、それらの塩をも意味する。
【００１８】２−Ｏ−α−Ｄ−グルコピラノシル−Ｌ−アスコルビン酸とともに直接還元性を示すＬ−アスコルビン酸糖誘導体を含有する溶液を酸化処理するには、できるだけ、２−Ｏ−α−Ｄ−グルコピラノシル−Ｌ−アスコルビン酸に作用することなく、直接還元性を示すＬ−アスコルビン酸糖誘導体を優先的に酸化する条件が選ばれ、例えば、通気撹拌などの好気的条件にさらす方法が有利に採用できる。
【００１９】この際、ｐＨを弱酸性乃至アルカリ性にしたり、銅塩、鉄塩などの金属塩、水蒸気炭、塩化亜鉛炭などの活性炭など酸化促進剤の共存下で酸化を促進することも有利に実施できる。
【００２０】必要ならば、過酸化水素、過マンガン酸カリウムなどの酸化剤を添加することも有利に実施できる。
【００２１】このようにして得られる２−Ｏ−α−Ｄ−グルコピラノシル−Ｌ−アスコルビン酸とともに直接還元性を示すＬ−アスコルビン酸糖誘導体の酸化物（以下、単にＬ−アスコルビン酸糖誘導体酸化物と略称する。）を含有する溶液は、強酸性カチオン交換樹脂を用いるカラムクロマトグラフィーによって、２−Ｏ−α−Ｄ−グルコピラノシル−Ｌ−アスコルビン酸とＬ−アスコルビン酸糖誘導体酸化物とを容易に分離できることが判明した。
【００２２】以下、本発明で採用される強酸性カチオン交換樹脂を用いるカラムクロマトグラフィーについて、より具体的に説明する。
【００２３】強酸性カチオン交換樹脂は、公知の、例えば、スルホン酸基を結合したスチレン−ジビニルベンゼン架橋共重合体樹脂のＮａ＋型、Ｋ＋型などのアルカリ金属塩型、または、Ｃａ＋＋型、Ｍｇ＋＋型などのアルカリ土類金属塩型、またはＨ＋型などが適宜使用され、市販品としては、例えば、ダウケミカル社製造の商品名ダウエックス ５０Ｗ×８、ローム＆ハース社製造の商品名アンバーライトＣＧ−１２０、東京有機化学工業社製造の商品名 ＸＴ−１０２２Ｅ、三菱化成工業社製造の商品名ダイヤイオン ＳＫ１０４などがある。
【００２４】これら樹脂は、２−Ｏ−α−Ｄ−グルコピラノシル−Ｌ−アスコルビン酸高含有画分の分画に優れているだけでなく、耐熱性、耐摩耗性にも優れ、２−Ｏ−α−Ｄ−グルコピラノシル−Ｌ−アスコルビン酸高含有物の工業的大量生産に極めて有利である。
【００２５】原料溶液として、例えば、目的とする２−Ｏ−α−Ｄ−グルコピラノシル−Ｌ−アスコルビン酸とともにＬ−アスコルビン酸糖誘導体酸化物、Ｄ−グルコースなどの夾雑物を含有する溶液を用いる場合には、強酸性カチオン交換樹脂を充填したカラムに原料溶液を流し、次いで、水で溶出し、Ｌ−アスコルビン酸糖誘導体酸化物高含有画分、Ｌ−アスコルビン酸糖誘導体酸化物・２−Ｏ−α−Ｄ−グルコピラノシル−Ｌ−アスコルビン酸高含有画分、２−Ｏ−α−Ｄ−グルコピラノシル−Ｌ−アスコルビン酸高含有画分、２−Ｏ−α−Ｄ−グルコピラノシル−Ｌ−アスコルビン酸・Ｄ−グルコース高含有画分、Ｄ−グルコース高含有画分などの順に複数の画分に分画して、この２−Ｏ−α−Ｄ−グルコピラノシル−Ｌ−アスコルビン酸高含有画分を採取することにより、容易に２−Ｏ−α−Ｄ−グルコピラノシル−Ｌ−アスコルビン酸高含有物が製造される。
【００２６】また、原料溶液をカラムに流して分画するに際し、既に得られているＬ−アスコルビン酸糖誘導体酸化物・２−Ｏ−α−Ｄ−グルコピラノシル−Ｌ−アスコルビン酸高含有画分、２−Ｏ−α−Ｄ−グルコピラノシル−Ｌ−アスコルビン酸・Ｄ−グルコース高含有画分などの２−Ｏ−α−Ｄ−グルコピラノシル−Ｌ−アスコルビン酸含有画分を原料溶液の前後に、または、原料溶液とともに流すことにより、分画に要する水の使用量を減少させ、原料溶液から２−Ｏ−α−Ｄ−グルコピラノシル−Ｌ−アスコルビン酸高含有物を高濃度、高収率で採取することも有利に実施できる。
【００２７】本発明で使用される分画方式は固定床方式、移動床方式、擬似移動床方式のいずれであってもよい。
【００２８】このようにして得られた本発明の２−Ｏ−α−Ｄ−グルコピラノシル−Ｌ−アスコルビン酸高含有物、望ましくは、純度７０％以上の高含有物は、溶液上であっても、また濃縮してシラップ状にあっても、はるかに安定であり、その取扱いは、容易である。
【００２９】次に、２−Ｏ−α−Ｄ−グルコピラノシル−Ｌ−アスコルビン酸高含有物とそれの結晶２−Ｏ−α−Ｄ−グルコピラノシル−Ｌ−アスコルビン酸の製造方法について述べる。
【００３０】本発明で使用する晶出用２−Ｏ−α−Ｄ−グルコピラノシル−Ｌ−アスコルビン酸高含有物は、結晶２−Ｏ−α−Ｄ−グルコピラノシル−Ｌ−アスコルビン酸の析出を阻害していた直接還元性を示すＬ−アスコルビン酸糖誘導体を実質的に除去しているので、その結晶の析出は、きわめて容易であり、結晶収率も高い。晶出方法は、通常２０乃至６０℃の比較的高温の過飽和２−Ｏ−α−Ｄ−グルコピラノシル−Ｌ−アスコルビン酸を助晶缶にとり、これに種晶を望ましくは、０．１乃至１０％共存せしめて、ゆっくり撹拌しつつ徐冷し、晶出を促してマスキットにすればよい。
【００３１】このように、本発明の結晶２−Ｏ−α−Ｄ−グルコピラノシル−Ｌ−アスコルビン酸は、過飽和２−Ｏ−α−Ｄ−グルコピラノシル−Ｌ−アスコルビン酸溶液に結晶２−Ｏ−α−Ｄ−グルコピラノシル−Ｌ−アスコルビン酸を種晶として加えることにより容易に晶出させることができる。
【００３２】晶出したマスキットから結晶２−Ｏ−α−Ｄ−グルコピラノシル−Ｌ−アスコルビン酸を製造する方法は、結晶２−Ｏ−α−Ｄ−グルコピラノシル−Ｌ−アスコルビン酸が採取できればよく、例えば、分蜜方法、ブロック粉砕方法、流動造粒方法、噴霧乾燥方法などの公知方法を利用すればよい。
【００３３】このようにして得られる結晶２−Ｏ−α−Ｄ−グルコピラノシル−Ｌ−アスコルビン酸は、その純度、晶出率によって多少変動するものの、実質的に非吸湿性または、難吸湿性であり、流動性であり、固着の懸念もなく、その優れた特長は、次の通りである。
【００３４】（１）直接還元性を示さず、きわめて安定である。
【００３５】Ｌ−アスコルビン酸とは違って、メイラード反応を起こしにくい。
【００３６】従って、アミノ酸、ペプチド、蛋白質、脂質、糖質、生理活性物質などが共存しても無用の反応を起こさず、むしろ、これら物質を安定化する。
【００３７】（２）加水分解を受けてＬ−アスコルビン酸を生成し、Ｌ−アスコルビン酸と同様の還元作用、抗酸化作用を示す。
【００３８】（３）体内の酵素により、Ｌ−アスコルビン酸とＤ−グルコースとに容易に加水分解され、Ｌ−アスコルビン酸本来の生理活性を示す。
【００３９】また、ビタミンＥ、ビタミンＰなどとの併用により、その生理活性を増強することができる。
【００４０】（４）Ｌ−アスコルビン酸とα−グルコシル糖化合物などとを経口摂取することにより、生体内で生成され、代謝される物質であることから、その安全性は極めて高い。
【００４１】（５）実質的に、非吸湿性、難吸湿性であるにもかかわらず、水に対して大きな溶解速度、溶解度を有しており、粉末、顆粒、錠剤などのビタミン剤、サンドクリーム、チョコレート、チューインガム、即席ジュース、即席調味料など飲食物のビタミンＣ強化剤、呈未改善剤、酸味剤、安定剤などとして有利に利用できる。
【００４２】（６）実質的に非吸湿性または難吸湿性であり、固結しないことから流動性であり、その取扱いは容易で非晶質の場合と比較して、その包装、輸送、貯蔵に要する物的、人的経費が大幅に削減できる。
【００４３】以下、本発明を実験で詳細に説明する。
【００４４】
【実験１】
未知物質の生成と単離
【００４５】デキストリン（ＤＥ約６）３０重量部を水４０重量部に加熱溶解し、還元下に保って、Ｌ−アスコルビン酸７重量部を加え、ｐＨ５．６、６０℃に維持しつつ、これに、シクロマルトデキストリン・グルカノトランスフェラーゼ（株式会社林原生物化学研究所販売）をデキストリングラム当り２５０単位加えて、４０時間反応させた。
【００４６】反応液を、高速液体クロマトグラフィー［ポンプ；島津製作所ＬＣ−６Ａ，カラム；Ｗａｋｏｐａｋ ＷＢ Ｔ−３３０，溶離液；０．０１Ｗ／Ｖ％硝酸，流速；毎分０．５ミリリットル，検出；示差屈折計ＲＩ−７５２０（エルマ），ＵＶ検出器８７５−ＵＶ（ＪＡＳＣＯ）］で分析したところ、Ｌ−アスコルビン酸の約６５％が、α−グリコシル−Ｌ−アスコルビン酸に変換していた。
【００４７】本反応液をＵＦ膜で濾過して酵素を回収除去した後、５０℃、ｐＨ５．０に調整し、これにグルコアミラーゼをデキストリングラム当り１００単位加えて６時間反応させた。
【００４８】本反応液を加熱して酵素を失活させ、活性炭で脱色濾過し、濾液を濃縮し、次いで、特開昭５８−２３７９９号公報に開示されているカラムクロマトグラフィーの方法に準じて、強酸性カチオン交換樹脂（ダウケミカル社製造、商品名ダウエックス ５０Ｗ×４、Ｃａ＋＋型）を充填したカラムを用いてカラムクロマトグラフィーを行ない、この溶出液の２−Ｏ−α−Ｄ−グルコピラノシル−Ｌ−アスコルビン酸高含有画分を採取し、これをカチオン交換樹脂（Ｈ＋型）で脱ミネラルして精製し、減圧濃縮して、濃度約７７Ｗ／Ｗ％とし、これを助晶缶にとり、２−Ｏ−α−Ｄ−グルコピラノシル−Ｌ−アスコルビン酸の種晶を加えて、４０℃とし、ゆっくり撹拌しつつ、徐冷して２日間を要して２０℃まで下げ、更に、バスケット型遠心分離機にかけ、結晶２−Ｏ−α−Ｄ−グルコピラノシル−Ｌ−アスコルビン酸を分離除去し、一番母液を原料のＬ−アスコルビン酸に対して固形物当り約５０％の収率で得た。
【００４９】この母液を、同様に、減圧濃縮し、２−Ｏ−α−Ｄ−グルコピラノシル−Ｌ−アスコルビン酸の二番晶を晶出させ、これを分離除去して二番母液を原料のＬ−アスコルビン酸に対して固形物当り約２５％の収率で得た。
【００５０】この二番母液を高速液体クロマトグラフィーで分析したところ、２−Ｏ−α−Ｄ−グルコピラノシル−Ｌ−アスコルビン酸が１８．７分の位置に現われ、Ｌ−アスコルビン酸が２９．７分の位置に現われたのに対し、この中間の２１．７分と２３．１分の位置に未知物質のピークが認められ、それぞれ、物質Ｘ、物質Ｙと仮に命名した。
【００５１】物質Ｘおよび物質Ｙの含量は、それぞれ、固形物当り約１０％であり、２−Ｏ−α−Ｄ−グルコピラノシル−Ｌ−アスコルビン酸の含量は約６５％であった。
【００５２】次に、二番母液から物質Ｘおよび物質Ｙを単離するためには、大量に共存する２−Ｏ−α−Ｄ−グルコピラノシル−Ｌ−アスコルビン酸を除去する必要があった。
【００５３】そこで、２−Ｏ−α−Ｄ−グルコピラノシル−Ｌ−アスコルビン酸を除去する条件を種々検討したところ、強酸性、高温条件で２−Ｏ−α−Ｄ−グルコピラノシル−Ｌ−アスコルビン酸が、物質Ｘ、物質Ｙと比較して加水分解を受け易いことを見出し、この方法を利用して２−Ｏ−α−Ｄ−グルコピラノシル−Ｌ−アスコルビン酸を除去した。
【００５４】即ち、二番母液を濃度２５Ｗ／Ｗ％とし、これを塩酸でｐＨ１．７に調整後、１００℃に保って、２−Ｏ−α−Ｄ−グルコピラノシル−Ｌ−アスコルビン酸を優先的に加水分解した後、冷却し、アニオン交換樹脂（ＯＨ−型）を充填したカラムに流して物質Ｘおよび物質Ｙを吸着させ、水洗し、次いで、０．５Ｎ塩酸で溶出し、物質Ｘおよび物質Ｙを含有する溶液を得た。
【００５５】次いで、本溶液を調製用高速液体クロマトグラフィー［ポンプ；Ｍｏｄｅｌ５１０（ウォーターズ），カラム；Ｄ−ＯＤＳ−５（ワイエムシィ），溶離液；０．０１ＭＮａＨ２ＰＯ４−Ｈ３ＰＯ４（ｐＨ２．０），流速；毎分４．５ミリリットル，検出；ＵＶ検出器］にかけ、物質Ｘまたは物質Ｙの高含有画分を採取し、脱塩装置（旭化成株式会社、マイクロアシライザーＧ１、カートリッジＡＣ−１１０使用）により脱塩し、濃縮、凍結乾燥して、粉末状の物質Ｘおよび物質Ｙを原料母液に含まれるそれぞれに対して、約２０％の収率で得た。
【００５６】これを、前述の高速液体クロマトグラフィーで分析したところ、物質Ｘは純度約９８％、物質Ｙは純度約９７％の高純度品であった。
【００５７】
【実験２】
理化学的性質
【００５８】実験１で調製した高純度の物質Ｘおよび物質Ｙを用いて、次に示す理化学的性質を調べた。
【００５９】（ａ）元素分析：Ｃ１２Ｈ１８Ｏ１１として理論値 Ｃ＝４２．６％ Ｈ＝５．３６％物質Ｘ実測値 Ｃ＝４２．４％ Ｈ＝５．３７％物質Ｙ実測値 Ｃ＝４２．５％ Ｈ＝５．３７％
【００６０】
（ｂ）グルコースとＬ−アスコルビン酸の構成比 理論値 グルコース：Ｌ−アスコルビン酸＝１：１ 物質Ｘ実測値 グルコース：Ｌ−アスコルビン酸＝１．００：１．０５ 物質Ｙ実測値 グルコース：Ｌ−アスコルビン酸＝１．００：０．９９（注）グルコースはアンスロン硫酸法により測定し、Ｌ−アスコルビン酸はインドフェノール・キシレン法により測定した。
【００６１】（ｃ）紫外線吸収スペクトル物質Ｘ、物質Ｙともに、ｐＨ２．０で２４３ｎｍに、ｐＨ７．０で２６５ｎｍに吸収極大を示す。
【００６２】（ｄ）小腸粘膜酵素による加水分解岡田等が日本栄養・食糧学会誌、 第４３巻、第１号、第２３乃至２９頁（１９９０年）で報告している方法に準じて、小腸粘膜酵素による物質Ｘまたは物質Ｙの加水分解試験を行なったところ、物質Ｘはよく加水分解されるのに対し、物質Ｙはほとんど加水分解されなかった。
【００６３】（ｅ）ＮＭＲ核磁気共鳴分析（１３Ｃ−ＮＭＲ）により、１２本のシグナルが得られ、本物質の１２個の炭素はすべて異なる化学シフトを示した。得られた各シグナルを、標準物質、α−Ｄ−グルコピラノースおよびＬ−アスコルビン酸に帰属し、両標準物質の化学シフトとともに表１に示した。
【００６４】
【表１】
【００６５】表１の結果より、物質Ｘは化２で示される新規物質、５−Ｏ−α−Ｄ−グルコピラノシル−Ｌ−アスコルビン酸の構造を有し、物質Ｙは、化３で示される公知物質、６−Ｏ−α−Ｄ−グルコピラノシル−Ｌ−アスコルビン酸の構造を有しているものと判断される。
【００６６】
【化２】
【００６７】
【化３】
【００６８】
【実験３】
酸化処理
【００６９】実験１の方法で調製した２−Ｏ−α−Ｄ−グルコピラノシル−Ｌ−アスコルビン酸、５−Ｏ−α−Ｄ−グルコピラノシル−Ｌ−アスコルビン酸、６−Ｏ−α−Ｄ−グルコピラノシル−Ｌ−アスコルビン酸および二番母液を、それぞれ濃度１０Ｗ／Ｗ％、ｐＨ５．０に調整し、それぞれに水蒸気炭を固形物当り５％加えて２７℃で２４時間通気撹拌したところ、直接還元性を示すＬ−アスコルビン酸糖誘導体である５−Ｏ−α−Ｄ−グルコピラノシル−Ｌ−アスコルビン酸、６−Ｏ−α−Ｄ−グルコピラノシル−Ｌ−アスコルビン酸および二番母液中に含まれるこれらの直接還元性を示すＬ−アスコルビン酸糖誘導体は酸化され、それらが持つ特有の紫外部吸収が消失した。
【００７０】これに対し、２−Ｏ−α−Ｄ−グルコピラノシル−Ｌ−アスコルビン酸は、単独溶液中、二番母液中いずれの場合も安定で、量的にも、質的にも変化がなかった。
【００７１】
【実験４】
強酸性カチオン交換樹脂を用いるカラムクロマトグラフィー
【００７２】実験１の方法で調製した二番母液未処理液、または該母液を実験３の方法で酸化処理した後、水蒸気炭を除去、強酸性カチオン交換樹脂（Ｈ＋型）で脱ミネラルした溶液を原料溶液として、特開昭５８−２３７９９号公報に開示されている強酸性カチオン交換樹脂を用いるカラムクロマトグラフィーの方法に準じて、強酸性カチオン交換樹脂（東京有機化学工業製造、商品名ＸＴ−１０１６、Ｈ＋型）を充填したカラムを用いてカラムクロマトグラフィーを行った。
【００７３】未処理液の場合には、２−Ｏ−α−Ｄ−グルコピラノシル−Ｌ−アスコルビン酸と比較的少量含まれている直接還元性を示す５−Ｏ−α−Ｄ−グルコピラノシル−Ｌ−アスコルビン酸および６−Ｏ−α−Ｄ−グルコピラノシル−Ｌ−アスコルビン酸とは同一挙動を示し、分離困難であった。
【００７４】これに対し、酸化処理液の場合には、溶出液が、Ｌ−アスコルビン酸糖誘導体酸化物高含有画分、Ｌ−アスコルビン酸糖誘導体酸化物・２−Ｏ−α−Ｄ−グルコピラノシル−Ｌ−アスコルビン酸高含有画分、２−Ｏ−α−Ｄ−グルコピラノシル−Ｌ−アスコルビン酸高含有画分の順に溶出し、２−Ｏ−α−Ｄ−グルコピラノシル−Ｌ−アスコルビン酸とＬ−アスコルビン酸糖誘導体酸化物との分離が達成され、工業的に実施容易であることが判明した。
【００７５】以下、本発明の実施例を述べる。
【００７６】
【実施例１】デキストリン（ＤＥ約６）３０重量部を水４０重量部に加熱溶解し、還元下に保って、Ｌ−アスコルビン酸７重量部を加え、ｐＨ５．６、６０℃に維持しつつ、これに、シクロマルトデキストリン グルカノトランスフェラーゼをデキストリングラム当り２５０単位加えて、４０時間反応させた。
【００７７】本反応液をＵＦ膜で濾過して酵素を回収除去した後、５０℃、ｐＨ５．０に調整し、これにグルコアミラーゼをデキストリングラム当り１００単位加えて６時間反応させた。
【００７８】本反応液を加熱して酵素を失活させ、活性炭で脱色濾過し、濾液を濃縮し、次いで、強酸性カチオン交換樹脂（ダウケミカル社製造、商品名ダウエックス ５０Ｗ×４、Ｃａ＋＋型）を充填したカラムを用いてカラムクロマトグラフィーを行ない、この溶出液の２−Ｏ−α−Ｄ−グルコピラノシル−Ｌ−アスコルビン酸高含有画分を採取した。
【００７９】本画分を高速液体クロマトグラフィーで分析したところ、固形物当り２−Ｏ−α−Ｄ−グルコピラノシル−Ｌ−アスコルビン酸９０％、５−Ｏ−α−Ｄ−グルコピラノシル−Ｌ−アスコルビン酸２．５％、および６−Ｏ−α−Ｄ−グルコピラノシル−Ｌ−アスコルビン酸２．５％を含有する溶液であった。
【００８０】本溶液を濃度約３６Ｗ／Ｗ％、ｐＨ４．０に調整し、これに硫酸第二鉄を固形物当り０．１％加えて３０℃で２０時間通気撹拌して酸化処理し、次いで、前記方法に準じて、強酸性カチオン交換樹脂を用いるカラムクロマトグラフィーを行ない、この溶出液の２−Ｏ−α−Ｄ−グルコピラノシル−Ｌ−アスコルビン酸高含有画分を採取した。
【００８１】これを強酸性カチオン交換樹脂（Ｈ＋型）で脱ミネラルして精製し、減圧濃縮して、濃度約７７Ｗ／Ｗ％とし、これを助晶缶にとり、２−Ｏ−α−Ｄ−グルコピラノシル−Ｌ−アスコルビン酸を種晶として２％加えて４０℃とし、ゆっくり撹拌しつつ徐冷して２日間を要して２０℃まで下げ、更にバスケット型遠心分離機にかけ、結晶２−Ｏ−α−Ｄ−グルコピラノシル−Ｌ−アスコルビン酸を原料のＬ−アスコルビン酸に対して収率約５０％で得た。
【００８２】本品は、直接還元性を示さず、安定性、生理活性も充分で、ビタミンＣ強化剤としてばかりでなく、呈味改善剤、酸味剤、安定剤、品質改良剤、抗酸化剤、生理活性剤、紫外線吸収剤、医薬原料、化学品などとして、飲食物、抗感受性疾患剤、化粧品などに有利に利用できる。
【００８３】
【実施例２】デキストリン（ＤＥ１０）９重量部を水２０重量部に加熱溶解し、還元下に保って、Ｌ−アスコルビン酸３重量部を加え、ｐＨ５．５、６５℃に維持しつつ、これにシクロマルトデキストリン・グルカノトランスフェラーゼをデキストリングラム当り１５０単位加えて４０時間反応させた。
【００８４】反応液を高速液体クロマトグラフィーで分析したところ、Ｌ−アスコルビン酸の約６５％がα−グリコシル−Ｌ−アスコルビン酸へ変換していた。
【００８５】本反応液を加熱して酵素を失活させた後、５５℃、ｐＨ４．５に調整し、これにグルコアミラーゼをデキストリングラム当り５０単位加えて、２４時間反応させた。
【００８６】本反応液を加熱して酵素を失活させ、活性炭で脱色濾過し、濾液をカチオン交換樹脂（Ｈ＋型）のカラムにかけ脱ミネラルし、次いで、アニオン交換樹脂（ＯＨ−型）のカラムにかけアニオンを樹脂に吸着させ、水洗してＤ−グルコースなどを除去後、０．５Ｎ−塩酸溶液で溶出、濃縮し、この濃縮液を原料溶液として、強酸性カチオン交換樹脂（Ｈ＋型）を充填したカラムを用いてカラムクロマトグラフィーを行ない、この溶出液の２−Ｏ−α−Ｄ−グルコピラノシル−Ｌ−アスコルビン酸高含有画分を採取した。
【００８７】次いで、これを濃度約７６Ｗ／Ｗ％に減圧濃縮して助晶缶にとり、結晶２−Ｏ−α−Ｄ−グルコピラノシル−Ｌ−アスコルビン酸を種晶として１％加えて４０℃とし、ゆっくり撹拌しつつ徐冷して２日間を要して２０℃まで下げ、バスケット型遠心分離機にかけ、結晶２−Ｏ−α−Ｄ−グルコピラノシル−Ｌ−アスコルビン酸を分離し、母液を固形物収率約５５％で得た。
【００８８】本母液を高速液体クロマトグラフィーで分析したところ、２−Ｏ−α−Ｄ−グルコピラノシル−Ｌ−アスコルビン酸約８０％、５−Ｏ−α−Ｄ−グルコピラノシル−Ｌ−アスコルビン酸約５％、６−Ｏ−α−Ｄ−グルコピラノシル−Ｌ−アスコルビン酸約５％を含有していた。
【００８９】本母液を濃度１８Ｗ／Ｗ％、ｐＨ５．０に調整し、これに塩化亜鉛炭を固形物当り０．５％加えて５０℃で２０時間通気撹拌して酸化処理し、次いで、前記方法に準じて、強酸性カチオン交換樹脂を用いるカラムクロマトグラフィーを行ない、この溶出液の２−Ｏ−α−Ｄ−グルコピラノシル−Ｌ−アスコルビン酸高含有画分を採取し、これをイオン交換樹脂で脱ミネラルし、減圧濃縮して、実施例１の方法に準じて晶出、分蜜し、結晶２−Ｏ−α−Ｄ−グルコピラノシル−Ｌ−アスコルビン酸を、母液固形物当り収率約５５％で得た。
【００９０】本品は、実施例１の場合と同様に、飲食物、抗感受性疾患剤、化粧品などに有利に利用できる。
【００９１】
【実施例３】実施例２の方法で調製した母液を濃度２０Ｗ／Ｗ％、ｐＨ７．５に調整し、５０℃で４８時間通気撹拌して酸化処理し、次いで、実施例２の方法に準じて、強酸性カチオン交換樹脂を用いるカラムクロマトグラフィーを行ない、この溶出液の２−Ｏ−α−Ｄ−グルコピラノシル−Ｌ−アスコルビン酸高含有画分を採取し、これをイオン交換樹脂で脱ミネラルし、減圧濃縮して、実施例１の方法に準じて晶出、分蜜し、結晶２−Ｏ−α−Ｄ−グルコピラノシル−Ｌ−アスコルビン酸を母液固形物当り収率約５３％で得た。
【００９２】本品は、実施例１の場合と同様に、飲食物、抗感受性疾患剤、化粧品などに有利に利用できる。
【００９３】
【発明の効果】本文で述べたことく、本発明において、２−Ｏ−α−Ｄ−グルコピラノシル−Ｌ−アスコルビン酸とともに直接還元性を示すＬ−アスコルビン酸糖誘導体とを含有する溶液を酸化処理し、次いで、強酸性カチオン交換樹脂を用いるカラムクロマトグラフィーを行うことにより、２−Ｏ−α−Ｄ−グルコピラノシル−Ｌ−アスコルビン酸とＬ−アスコルビン酸糖誘導体酸化物とが容易に分離できることから、得られる２−Ｏ−α−Ｄ−グルコピラノシル−Ｌ−アスコルビン酸高含有画分の純度が向上し、結晶２−Ｏ−α−Ｄ−グルコピラノシル−Ｌ−アスコルビン酸の析出が容易になり、その収率も向上する。
【００９４】従って、本発明は、２−Ｏ−α−Ｄ−グルコピラノシル−Ｌ−アスコルビン酸高含有物の製造方法としての工業的意義がきわめて大きい。
【０００１】
【産業上の利用分野】本発明は、２−Ｏ−α−Ｄ−グルコピラノシル−Ｌ−アスコルビン酸高含有物の製造方法に関し、詳細には、２−Ｏ−α−Ｄ−グルコピラノシル−Ｌ−アスコルビン酸とともに直接還元性を示すＬ−アスコルビン酸糖誘導体を含有する溶液からの２−Ｏ−α−Ｄ−グルコピラノシル−Ｌ−アスコルビン酸高含有物の製造方法に関する。
【０００２】
【従来の技術】２−Ｏ−α−Ｄ−グルコピラノシル−Ｌ−アスコルビン酸は、特開平３−１３５９９２号公報、特開平３−１３９２８８号公報などで開示されているように、化Ｉで示される化学構造を有し、直接還元性を示さず、安定性に優れ、しかも生体内で容易に加水分解され、Ｌ−アスコルビン酸本来の生理活性を発揮するＬ−アスコルビン酸の新規糖誘導体である。
【０００３】
【化１】
【０００４】その工業的製造方法は、特開平３−１８３４９２号公報に開示されているように、例えば、Ｌ−アスコルビン酸とα−グルコシル糖化合物とを含有する溶液に糖転移酵素または糖転移酵素とグルコアミラーゼとを作用させて得られる２−Ｏ−α−Ｄ−グルコピラノシル−Ｌ−アスコルビン酸とともにそれ以外の夾雑物を含有する溶液を原料溶液として、強酸性カチオン交換樹脂を用いるカラムクロマトグラフィーを行ない、この溶出液の２−Ｏ−α−Ｄ−グルコピラノシル−Ｌ−アスコルビン酸高含有画分を採取することにより、２−Ｏ−α−Ｄ−グルコピラノシル−Ｌ−アスコルビン酸高含有物含有溶液を製造しうること、更に、これを濃縮して過飽和とし、結晶２−Ｏ−α−Ｄ−グルコピラノシル−Ｌ−アスコルビン酸を製造しうることが開示されている。
【０００５】しかしながら、本発明者等は、２−Ｏ−α−Ｄ−グルコピラノシル−Ｌ−アスコルビン酸高含有物の製造方法について研究を続けていたところ、原料溶液である２−Ｏ−α−Ｄ−グルコピラノシル−Ｌ−アスコルビン酸とともにそれ以外の夾雑物を含有する溶液には、強酸性カチオン交換樹脂を用いるカラムクロマトグラフィーにおいて、Ｌ−アスコルビン酸、グルコースなどのように、２−Ｏ−α−Ｄ−グルコピラノシル−Ｌ−アスコルビン酸との分離が比較的容易な夾雑物以外に、分離が困難で２−Ｏ−α−Ｄ−グルコピラノシル−Ｌ−アスコルビン酸高含有画分の純度向上を妨げ、更に、過飽和溶液からの結晶２−Ｏ−α−Ｄ−グルコピラノシル−Ｌ−アスコルビン酸の析出を阻害する比較的少量の未知夾雑物が混在していることを見いだした。
【０００６】更に、本未知物質は、結晶２−Ｏ−α−Ｄ−グルコピラノシル−Ｌ−アスコルビン酸を分離除去した母液中に蓄積され、母液からの結晶２−Ｏ−α−Ｄ−グルコピラノシル−Ｌ−アスコルビン酸の析出を阻害し、２番晶、３番晶の析出量を著しく低下させることを見いだした。
【０００７】
【発明が解決しようとする課題】糖転移反応により得られた２−Ｏ−α−Ｄ−グルコピラノシル−Ｌ−アスコルビン酸含有溶液に混在する未知夾雑物を解明し、併せて、２−Ｏ−α−Ｄ−グルコピラノシル−Ｌ−アスコルビン酸とともに夾雑物を含有する溶液からその夾雑物を容易に除去し、より高純度の２−Ｏ−α−Ｄ−グルコピラノシル−Ｌ−アスコルビン酸高含有物を工業的により高収率で大量生産する方法の確立が望まれる。
【０００８】
【課題を解決するための手段】本発明者等は、糖転移反応により得られた２−Ｏ−α−Ｄ−グルコピラノシル−Ｌ−アスコルビン酸とともにそれ以外の夾雑物を含有する溶液を用いて、強酸性カチオン交換樹脂を用いるカラムクロマトグラフィーにより、より高純度の２−Ｏ−α−Ｄ−グルコピラノシル−Ｌ−アスコルビン酸高含有物を工業的に容易に製造する方法の確立を目指して鋭意研究を続けた。
【０００９】その結果、強酸性カチオン交換樹脂を用いるカラムクロマトグラフィーにおいて、２−Ｏ−α−Ｄ−グルコピラノシル−Ｌ−アスコルビン酸との分離が困難で、２−Ｏ−α−Ｄ−グルコピラノシル−Ｌ−アスコルビン酸高含有画分の純度向上を妨げ、更に、過飽和溶液からの結晶２−Ｏ−α−Ｄ−グルコピラノシル−Ｌ−アスコルビン酸の析出を阻害する夾雑物として、５−Ｏ−α−Ｄ−グルコピラノシル−Ｌ−アスコルビン酸および６−Ｏ−α−Ｄ−グルコピラノシル−Ｌ−アスコルビン酸を見い出した。
【００１０】５−Ｏ−α−Ｄ−グルコピラノシル−Ｌ−アスコルビン酸は、文献未記載の新規物質であり、６−Ｏ−α−Ｄ−グルコピラノシル−Ｌ−アスコルビン酸は、特公昭４８−３８１５８号公報に開示されている公知物質であり、これらは、２−Ｏ−α−Ｄ−グルコピラノシル−Ｌ−アスコルビン酸の場合とは違って、直接還元性を示すＬ−アスコルビン酸糖誘導体であることが判明した。
【００１１】更に、直接還元性を示さない２−Ｏ−α−Ｄ−グルコピラノシル−Ｌ−アスコルビン酸と直接還元性を示す５−Ｏ−α−Ｄ−グルコピラノシル−Ｌ−アスコルビン酸、６−Ｏ−α−Ｄ−グルコピラノシル−Ｌ−アスコルビン酸などのＬ−アスコルビン酸糖誘導体との性質の違いに着目して研究を続け、２−Ｏ−α−Ｄ−グルコピラノシル−Ｌ−アスコルビン酸とともに直接還元性を示すＬ−アスコルビン酸糖誘導体を含有する溶液を酸化処理して、直接還元性を示すＬ−アスコルビン酸糖誘導体だけを酸化せしめ、次いで、強酸性カチオン交換樹脂を用いるカラムクロマトグラフィーを行うことにより、２−Ｏ−α−Ｄ−グルコピラノシル−Ｌ−アスコルビン酸と直接還元性を示すＬ−アスコルビン酸糖誘導体の酸化物とを容易に分離できることを見いだし、併せて、より高純度の２−Ｏ−α−Ｄ−グルコピラノシル−Ｌ−アスコルビン酸高含有物を工業的規模でより高収率で製造しうることを見いだし、本発明を完成した。
【００１２】また、このようにして得られるより高純度の２−Ｏ−α−Ｄ−グルコピラノシル−Ｌ−アスコルビン酸高含有物の過飽和溶液は、結晶の析出が容易で収率も高く、結晶２−Ｏ−α−Ｄ−グルコピラノシル−Ｌ−アスコルビン酸の工業的製造方法としてきわめて有利であることが判明した。
【００１３】本発明において、２−Ｏ−α−Ｄ−グルコピラノシル−Ｌ−アスコルビン酸とともに直接還元性を示すＬ−アスコルビン酸糖誘導体を含有する溶液とは、２−Ｏ−α−Ｄ−グルコピラノシル−Ｌ−アスコルビン酸とともに直接還元性を示す５−Ｏ−α−Ｄ−グルコピラノシル−Ｌ−アスコルビン酸、６−Ｏ−α−Ｄ−グルコピラノシル−Ｌ−アスコルビン酸などのＬ−アスコルビン酸糖誘導体を含有する溶液であって、例えば、Ｌ−アスコルビン酸とα−グルコシル糖化合物とを含有する溶液に糖転移酵素または糖転移酵素とグルコアミラーゼとを作用させて得られる溶液、この溶液を強酸性カチオン交換樹脂を用いるカラムクロマトグラフィーにより得られる２−Ｏ−α−Ｄ−グルコピラノシル−Ｌ−アスコルビン酸高含有溶液、または、この溶液を濃縮、過飽和にし、結晶２−Ｏ−α−Ｄ−グルコピラノシル−Ｌ−アスコルビン酸を析出、分離して得られる母液などを意味する。
【００１４】本明細書でいう直接還元性を示すとは、Ｌ−アスコルビン酸の場合と同様に、そのままで、２，６−ジクロルフェノールインドフェノールを還元脱色することを意味する。
【００１５】また、本明細書でいうＬ−アスコルビン酸とは、Ｌ−アスコルビン酸のみならず、Ｌ−アスコルビン酸のアルカリ金属塩若しくはアルカリ土類金属塩などのＬ−アスコルビン酸塩、または、それらの混合物を意味する。
【００１６】従って、糖転移反応に用いるＬ−アスコルビン酸としては、通常、遊離のＬ−アスコルビン酸だけでなく、必要に応じて、Ｌ−アスコルビン酸ナトリウム、Ｌ−アスコルビン酸カルシウムなどが適宜用いられる。
【００１７】また、同様に、本明細書でいう２−Ｏ−α−Ｄ−グルコピラノシル−Ｌ−アスコルビン酸、５−Ｏ−α−Ｄ−グルコピラノシル−Ｌ−アスコルビン酸、６−Ｏ−α−Ｄ−グルコピラノシル−Ｌ−アスコルビン酸、α−グリコシル−Ｌ−アスコルビン酸などについても、特に不都合が生じない限り、遊離の酸のみならず、それらの塩をも意味する。
【００１８】２−Ｏ−α−Ｄ−グルコピラノシル−Ｌ−アスコルビン酸とともに直接還元性を示すＬ−アスコルビン酸糖誘導体を含有する溶液を酸化処理するには、できるだけ、２−Ｏ−α−Ｄ−グルコピラノシル−Ｌ−アスコルビン酸に作用することなく、直接還元性を示すＬ−アスコルビン酸糖誘導体を優先的に酸化する条件が選ばれ、例えば、通気撹拌などの好気的条件にさらす方法が有利に採用できる。
【００１９】この際、ｐＨを弱酸性乃至アルカリ性にしたり、銅塩、鉄塩などの金属塩、水蒸気炭、塩化亜鉛炭などの活性炭など酸化促進剤の共存下で酸化を促進することも有利に実施できる。
【００２０】必要ならば、過酸化水素、過マンガン酸カリウムなどの酸化剤を添加することも有利に実施できる。
【００２１】このようにして得られる２−Ｏ−α−Ｄ−グルコピラノシル−Ｌ−アスコルビン酸とともに直接還元性を示すＬ−アスコルビン酸糖誘導体の酸化物（以下、単にＬ−アスコルビン酸糖誘導体酸化物と略称する。）を含有する溶液は、強酸性カチオン交換樹脂を用いるカラムクロマトグラフィーによって、２−Ｏ−α−Ｄ−グルコピラノシル−Ｌ−アスコルビン酸とＬ−アスコルビン酸糖誘導体酸化物とを容易に分離できることが判明した。
【００２２】以下、本発明で採用される強酸性カチオン交換樹脂を用いるカラムクロマトグラフィーについて、より具体的に説明する。
【００２３】強酸性カチオン交換樹脂は、公知の、例えば、スルホン酸基を結合したスチレン−ジビニルベンゼン架橋共重合体樹脂のＮａ＋型、Ｋ＋型などのアルカリ金属塩型、または、Ｃａ＋＋型、Ｍｇ＋＋型などのアルカリ土類金属塩型、またはＨ＋型などが適宜使用され、市販品としては、例えば、ダウケミカル社製造の商品名ダウエックス ５０Ｗ×８、ローム＆ハース社製造の商品名アンバーライトＣＧ−１２０、東京有機化学工業社製造の商品名 ＸＴ−１０２２Ｅ、三菱化成工業社製造の商品名ダイヤイオン ＳＫ１０４などがある。
【００２４】これら樹脂は、２−Ｏ−α−Ｄ−グルコピラノシル−Ｌ−アスコルビン酸高含有画分の分画に優れているだけでなく、耐熱性、耐摩耗性にも優れ、２−Ｏ−α−Ｄ−グルコピラノシル−Ｌ−アスコルビン酸高含有物の工業的大量生産に極めて有利である。
【００２５】原料溶液として、例えば、目的とする２−Ｏ−α−Ｄ−グルコピラノシル−Ｌ−アスコルビン酸とともにＬ−アスコルビン酸糖誘導体酸化物、Ｄ−グルコースなどの夾雑物を含有する溶液を用いる場合には、強酸性カチオン交換樹脂を充填したカラムに原料溶液を流し、次いで、水で溶出し、Ｌ−アスコルビン酸糖誘導体酸化物高含有画分、Ｌ−アスコルビン酸糖誘導体酸化物・２−Ｏ−α−Ｄ−グルコピラノシル−Ｌ−アスコルビン酸高含有画分、２−Ｏ−α−Ｄ−グルコピラノシル−Ｌ−アスコルビン酸高含有画分、２−Ｏ−α−Ｄ−グルコピラノシル−Ｌ−アスコルビン酸・Ｄ−グルコース高含有画分、Ｄ−グルコース高含有画分などの順に複数の画分に分画して、この２−Ｏ−α−Ｄ−グルコピラノシル−Ｌ−アスコルビン酸高含有画分を採取することにより、容易に２−Ｏ−α−Ｄ−グルコピラノシル−Ｌ−アスコルビン酸高含有物が製造される。
【００２６】また、原料溶液をカラムに流して分画するに際し、既に得られているＬ−アスコルビン酸糖誘導体酸化物・２−Ｏ−α−Ｄ−グルコピラノシル−Ｌ−アスコルビン酸高含有画分、２−Ｏ−α−Ｄ−グルコピラノシル−Ｌ−アスコルビン酸・Ｄ−グルコース高含有画分などの２−Ｏ−α−Ｄ−グルコピラノシル−Ｌ−アスコルビン酸含有画分を原料溶液の前後に、または、原料溶液とともに流すことにより、分画に要する水の使用量を減少させ、原料溶液から２−Ｏ−α−Ｄ−グルコピラノシル−Ｌ−アスコルビン酸高含有物を高濃度、高収率で採取することも有利に実施できる。
【００２７】本発明で使用される分画方式は固定床方式、移動床方式、擬似移動床方式のいずれであってもよい。
【００２８】このようにして得られた本発明の２−Ｏ−α−Ｄ−グルコピラノシル−Ｌ−アスコルビン酸高含有物、望ましくは、純度７０％以上の高含有物は、溶液上であっても、また濃縮してシラップ状にあっても、はるかに安定であり、その取扱いは、容易である。
【００２９】次に、２−Ｏ−α−Ｄ−グルコピラノシル−Ｌ−アスコルビン酸高含有物とそれの結晶２−Ｏ−α−Ｄ−グルコピラノシル−Ｌ−アスコルビン酸の製造方法について述べる。
【００３０】本発明で使用する晶出用２−Ｏ−α−Ｄ−グルコピラノシル−Ｌ−アスコルビン酸高含有物は、結晶２−Ｏ−α−Ｄ−グルコピラノシル−Ｌ−アスコルビン酸の析出を阻害していた直接還元性を示すＬ−アスコルビン酸糖誘導体を実質的に除去しているので、その結晶の析出は、きわめて容易であり、結晶収率も高い。晶出方法は、通常２０乃至６０℃の比較的高温の過飽和２−Ｏ−α−Ｄ−グルコピラノシル−Ｌ−アスコルビン酸を助晶缶にとり、これに種晶を望ましくは、０．１乃至１０％共存せしめて、ゆっくり撹拌しつつ徐冷し、晶出を促してマスキットにすればよい。
【００３１】このように、本発明の結晶２−Ｏ−α−Ｄ−グルコピラノシル−Ｌ−アスコルビン酸は、過飽和２−Ｏ−α−Ｄ−グルコピラノシル−Ｌ−アスコルビン酸溶液に結晶２−Ｏ−α−Ｄ−グルコピラノシル−Ｌ−アスコルビン酸を種晶として加えることにより容易に晶出させることができる。
【００３２】晶出したマスキットから結晶２−Ｏ−α−Ｄ−グルコピラノシル−Ｌ−アスコルビン酸を製造する方法は、結晶２−Ｏ−α−Ｄ−グルコピラノシル−Ｌ−アスコルビン酸が採取できればよく、例えば、分蜜方法、ブロック粉砕方法、流動造粒方法、噴霧乾燥方法などの公知方法を利用すればよい。
【００３３】このようにして得られる結晶２−Ｏ−α−Ｄ−グルコピラノシル−Ｌ−アスコルビン酸は、その純度、晶出率によって多少変動するものの、実質的に非吸湿性または、難吸湿性であり、流動性であり、固着の懸念もなく、その優れた特長は、次の通りである。
【００３４】（１）直接還元性を示さず、きわめて安定である。
【００３５】Ｌ−アスコルビン酸とは違って、メイラード反応を起こしにくい。
【００３６】従って、アミノ酸、ペプチド、蛋白質、脂質、糖質、生理活性物質などが共存しても無用の反応を起こさず、むしろ、これら物質を安定化する。
【００３７】（２）加水分解を受けてＬ−アスコルビン酸を生成し、Ｌ−アスコルビン酸と同様の還元作用、抗酸化作用を示す。
【００３８】（３）体内の酵素により、Ｌ−アスコルビン酸とＤ−グルコースとに容易に加水分解され、Ｌ−アスコルビン酸本来の生理活性を示す。
【００３９】また、ビタミンＥ、ビタミンＰなどとの併用により、その生理活性を増強することができる。
【００４０】（４）Ｌ−アスコルビン酸とα−グルコシル糖化合物などとを経口摂取することにより、生体内で生成され、代謝される物質であることから、その安全性は極めて高い。
【００４１】（５）実質的に、非吸湿性、難吸湿性であるにもかかわらず、水に対して大きな溶解速度、溶解度を有しており、粉末、顆粒、錠剤などのビタミン剤、サンドクリーム、チョコレート、チューインガム、即席ジュース、即席調味料など飲食物のビタミンＣ強化剤、呈未改善剤、酸味剤、安定剤などとして有利に利用できる。
【００４２】（６）実質的に非吸湿性または難吸湿性であり、固結しないことから流動性であり、その取扱いは容易で非晶質の場合と比較して、その包装、輸送、貯蔵に要する物的、人的経費が大幅に削減できる。
【００４３】以下、本発明を実験で詳細に説明する。
【００４４】
【実験１】
未知物質の生成と単離
【００４５】デキストリン（ＤＥ約６）３０重量部を水４０重量部に加熱溶解し、還元下に保って、Ｌ−アスコルビン酸７重量部を加え、ｐＨ５．６、６０℃に維持しつつ、これに、シクロマルトデキストリン・グルカノトランスフェラーゼ（株式会社林原生物化学研究所販売）をデキストリングラム当り２５０単位加えて、４０時間反応させた。
【００４６】反応液を、高速液体クロマトグラフィー［ポンプ；島津製作所ＬＣ−６Ａ，カラム；Ｗａｋｏｐａｋ ＷＢ Ｔ−３３０，溶離液；０．０１Ｗ／Ｖ％硝酸，流速；毎分０．５ミリリットル，検出；示差屈折計ＲＩ−７５２０（エルマ），ＵＶ検出器８７５−ＵＶ（ＪＡＳＣＯ）］で分析したところ、Ｌ−アスコルビン酸の約６５％が、α−グリコシル−Ｌ−アスコルビン酸に変換していた。
【００４７】本反応液をＵＦ膜で濾過して酵素を回収除去した後、５０℃、ｐＨ５．０に調整し、これにグルコアミラーゼをデキストリングラム当り１００単位加えて６時間反応させた。
【００４８】本反応液を加熱して酵素を失活させ、活性炭で脱色濾過し、濾液を濃縮し、次いで、特開昭５８−２３７９９号公報に開示されているカラムクロマトグラフィーの方法に準じて、強酸性カチオン交換樹脂（ダウケミカル社製造、商品名ダウエックス ５０Ｗ×４、Ｃａ＋＋型）を充填したカラムを用いてカラムクロマトグラフィーを行ない、この溶出液の２−Ｏ−α−Ｄ−グルコピラノシル−Ｌ−アスコルビン酸高含有画分を採取し、これをカチオン交換樹脂（Ｈ＋型）で脱ミネラルして精製し、減圧濃縮して、濃度約７７Ｗ／Ｗ％とし、これを助晶缶にとり、２−Ｏ−α−Ｄ−グルコピラノシル−Ｌ−アスコルビン酸の種晶を加えて、４０℃とし、ゆっくり撹拌しつつ、徐冷して２日間を要して２０℃まで下げ、更に、バスケット型遠心分離機にかけ、結晶２−Ｏ−α−Ｄ−グルコピラノシル−Ｌ−アスコルビン酸を分離除去し、一番母液を原料のＬ−アスコルビン酸に対して固形物当り約５０％の収率で得た。
【００４９】この母液を、同様に、減圧濃縮し、２−Ｏ−α−Ｄ−グルコピラノシル−Ｌ−アスコルビン酸の二番晶を晶出させ、これを分離除去して二番母液を原料のＬ−アスコルビン酸に対して固形物当り約２５％の収率で得た。
【００５０】この二番母液を高速液体クロマトグラフィーで分析したところ、２−Ｏ−α−Ｄ−グルコピラノシル−Ｌ−アスコルビン酸が１８．７分の位置に現われ、Ｌ−アスコルビン酸が２９．７分の位置に現われたのに対し、この中間の２１．７分と２３．１分の位置に未知物質のピークが認められ、それぞれ、物質Ｘ、物質Ｙと仮に命名した。
【００５１】物質Ｘおよび物質Ｙの含量は、それぞれ、固形物当り約１０％であり、２−Ｏ−α−Ｄ−グルコピラノシル−Ｌ−アスコルビン酸の含量は約６５％であった。
【００５２】次に、二番母液から物質Ｘおよび物質Ｙを単離するためには、大量に共存する２−Ｏ−α−Ｄ−グルコピラノシル−Ｌ−アスコルビン酸を除去する必要があった。
【００５３】そこで、２−Ｏ−α−Ｄ−グルコピラノシル−Ｌ−アスコルビン酸を除去する条件を種々検討したところ、強酸性、高温条件で２−Ｏ−α−Ｄ−グルコピラノシル−Ｌ−アスコルビン酸が、物質Ｘ、物質Ｙと比較して加水分解を受け易いことを見出し、この方法を利用して２−Ｏ−α−Ｄ−グルコピラノシル−Ｌ−アスコルビン酸を除去した。
【００５４】即ち、二番母液を濃度２５Ｗ／Ｗ％とし、これを塩酸でｐＨ１．７に調整後、１００℃に保って、２−Ｏ−α−Ｄ−グルコピラノシル−Ｌ−アスコルビン酸を優先的に加水分解した後、冷却し、アニオン交換樹脂（ＯＨ−型）を充填したカラムに流して物質Ｘおよび物質Ｙを吸着させ、水洗し、次いで、０．５Ｎ塩酸で溶出し、物質Ｘおよび物質Ｙを含有する溶液を得た。
【００５５】次いで、本溶液を調製用高速液体クロマトグラフィー［ポンプ；Ｍｏｄｅｌ５１０（ウォーターズ），カラム；Ｄ−ＯＤＳ−５（ワイエムシィ），溶離液；０．０１ＭＮａＨ２ＰＯ４−Ｈ３ＰＯ４（ｐＨ２．０），流速；毎分４．５ミリリットル，検出；ＵＶ検出器］にかけ、物質Ｘまたは物質Ｙの高含有画分を採取し、脱塩装置（旭化成株式会社、マイクロアシライザーＧ１、カートリッジＡＣ−１１０使用）により脱塩し、濃縮、凍結乾燥して、粉末状の物質Ｘおよび物質Ｙを原料母液に含まれるそれぞれに対して、約２０％の収率で得た。
【００５６】これを、前述の高速液体クロマトグラフィーで分析したところ、物質Ｘは純度約９８％、物質Ｙは純度約９７％の高純度品であった。
【００５７】
【実験２】
理化学的性質
【００５８】実験１で調製した高純度の物質Ｘおよび物質Ｙを用いて、次に示す理化学的性質を調べた。
【００５９】（ａ）元素分析：Ｃ１２Ｈ１８Ｏ１１として理論値 Ｃ＝４２．６％ Ｈ＝５．３６％物質Ｘ実測値 Ｃ＝４２．４％ Ｈ＝５．３７％物質Ｙ実測値 Ｃ＝４２．５％ Ｈ＝５．３７％
【００６０】
（ｂ）グルコースとＬ−アスコルビン酸の構成比 理論値 グルコース：Ｌ−アスコルビン酸＝１：１ 物質Ｘ実測値 グルコース：Ｌ−アスコルビン酸＝１．００：１．０５ 物質Ｙ実測値 グルコース：Ｌ−アスコルビン酸＝１．００：０．９９（注）グルコースはアンスロン硫酸法により測定し、Ｌ−アスコルビン酸はインドフェノール・キシレン法により測定した。
【００６１】（ｃ）紫外線吸収スペクトル物質Ｘ、物質Ｙともに、ｐＨ２．０で２４３ｎｍに、ｐＨ７．０で２６５ｎｍに吸収極大を示す。
【００６２】（ｄ）小腸粘膜酵素による加水分解岡田等が日本栄養・食糧学会誌、 第４３巻、第１号、第２３乃至２９頁（１９９０年）で報告している方法に準じて、小腸粘膜酵素による物質Ｘまたは物質Ｙの加水分解試験を行なったところ、物質Ｘはよく加水分解されるのに対し、物質Ｙはほとんど加水分解されなかった。
【００６３】（ｅ）ＮＭＲ核磁気共鳴分析（１３Ｃ−ＮＭＲ）により、１２本のシグナルが得られ、本物質の１２個の炭素はすべて異なる化学シフトを示した。得られた各シグナルを、標準物質、α−Ｄ−グルコピラノースおよびＬ−アスコルビン酸に帰属し、両標準物質の化学シフトとともに表１に示した。
【００６４】
【表１】
【００６５】表１の結果より、物質Ｘは化２で示される新規物質、５−Ｏ−α−Ｄ−グルコピラノシル−Ｌ−アスコルビン酸の構造を有し、物質Ｙは、化３で示される公知物質、６−Ｏ−α−Ｄ−グルコピラノシル−Ｌ−アスコルビン酸の構造を有しているものと判断される。
【００６６】
【化２】
【００６７】
【化３】
【００６８】
【実験３】
酸化処理
【００６９】実験１の方法で調製した２−Ｏ−α−Ｄ−グルコピラノシル−Ｌ−アスコルビン酸、５−Ｏ−α−Ｄ−グルコピラノシル−Ｌ−アスコルビン酸、６−Ｏ−α−Ｄ−グルコピラノシル−Ｌ−アスコルビン酸および二番母液を、それぞれ濃度１０Ｗ／Ｗ％、ｐＨ５．０に調整し、それぞれに水蒸気炭を固形物当り５％加えて２７℃で２４時間通気撹拌したところ、直接還元性を示すＬ−アスコルビン酸糖誘導体である５−Ｏ−α−Ｄ−グルコピラノシル−Ｌ−アスコルビン酸、６−Ｏ−α−Ｄ−グルコピラノシル−Ｌ−アスコルビン酸および二番母液中に含まれるこれらの直接還元性を示すＬ−アスコルビン酸糖誘導体は酸化され、それらが持つ特有の紫外部吸収が消失した。
【００７０】これに対し、２−Ｏ−α−Ｄ−グルコピラノシル−Ｌ−アスコルビン酸は、単独溶液中、二番母液中いずれの場合も安定で、量的にも、質的にも変化がなかった。
【００７１】
【実験４】
強酸性カチオン交換樹脂を用いるカラムクロマトグラフィー
【００７２】実験１の方法で調製した二番母液未処理液、または該母液を実験３の方法で酸化処理した後、水蒸気炭を除去、強酸性カチオン交換樹脂（Ｈ＋型）で脱ミネラルした溶液を原料溶液として、特開昭５８−２３７９９号公報に開示されている強酸性カチオン交換樹脂を用いるカラムクロマトグラフィーの方法に準じて、強酸性カチオン交換樹脂（東京有機化学工業製造、商品名ＸＴ−１０１６、Ｈ＋型）を充填したカラムを用いてカラムクロマトグラフィーを行った。
【００７３】未処理液の場合には、２−Ｏ−α−Ｄ−グルコピラノシル−Ｌ−アスコルビン酸と比較的少量含まれている直接還元性を示す５−Ｏ−α−Ｄ−グルコピラノシル−Ｌ−アスコルビン酸および６−Ｏ−α−Ｄ−グルコピラノシル−Ｌ−アスコルビン酸とは同一挙動を示し、分離困難であった。
【００７４】これに対し、酸化処理液の場合には、溶出液が、Ｌ−アスコルビン酸糖誘導体酸化物高含有画分、Ｌ−アスコルビン酸糖誘導体酸化物・２−Ｏ−α−Ｄ−グルコピラノシル−Ｌ−アスコルビン酸高含有画分、２−Ｏ−α−Ｄ−グルコピラノシル−Ｌ−アスコルビン酸高含有画分の順に溶出し、２−Ｏ−α−Ｄ−グルコピラノシル−Ｌ−アスコルビン酸とＬ−アスコルビン酸糖誘導体酸化物との分離が達成され、工業的に実施容易であることが判明した。
【００７５】以下、本発明の実施例を述べる。
【００７６】
【実施例１】デキストリン（ＤＥ約６）３０重量部を水４０重量部に加熱溶解し、還元下に保って、Ｌ−アスコルビン酸７重量部を加え、ｐＨ５．６、６０℃に維持しつつ、これに、シクロマルトデキストリン グルカノトランスフェラーゼをデキストリングラム当り２５０単位加えて、４０時間反応させた。
【００７７】本反応液をＵＦ膜で濾過して酵素を回収除去した後、５０℃、ｐＨ５．０に調整し、これにグルコアミラーゼをデキストリングラム当り１００単位加えて６時間反応させた。
【００７８】本反応液を加熱して酵素を失活させ、活性炭で脱色濾過し、濾液を濃縮し、次いで、強酸性カチオン交換樹脂（ダウケミカル社製造、商品名ダウエックス ５０Ｗ×４、Ｃａ＋＋型）を充填したカラムを用いてカラムクロマトグラフィーを行ない、この溶出液の２−Ｏ−α−Ｄ−グルコピラノシル−Ｌ−アスコルビン酸高含有画分を採取した。
【００７９】本画分を高速液体クロマトグラフィーで分析したところ、固形物当り２−Ｏ−α−Ｄ−グルコピラノシル−Ｌ−アスコルビン酸９０％、５−Ｏ−α−Ｄ−グルコピラノシル−Ｌ−アスコルビン酸２．５％、および６−Ｏ−α−Ｄ−グルコピラノシル−Ｌ−アスコルビン酸２．５％を含有する溶液であった。
【００８０】本溶液を濃度約３６Ｗ／Ｗ％、ｐＨ４．０に調整し、これに硫酸第二鉄を固形物当り０．１％加えて３０℃で２０時間通気撹拌して酸化処理し、次いで、前記方法に準じて、強酸性カチオン交換樹脂を用いるカラムクロマトグラフィーを行ない、この溶出液の２−Ｏ−α−Ｄ−グルコピラノシル−Ｌ−アスコルビン酸高含有画分を採取した。
【００８１】これを強酸性カチオン交換樹脂（Ｈ＋型）で脱ミネラルして精製し、減圧濃縮して、濃度約７７Ｗ／Ｗ％とし、これを助晶缶にとり、２−Ｏ−α−Ｄ−グルコピラノシル−Ｌ−アスコルビン酸を種晶として２％加えて４０℃とし、ゆっくり撹拌しつつ徐冷して２日間を要して２０℃まで下げ、更にバスケット型遠心分離機にかけ、結晶２−Ｏ−α−Ｄ−グルコピラノシル−Ｌ−アスコルビン酸を原料のＬ−アスコルビン酸に対して収率約５０％で得た。
【００８２】本品は、直接還元性を示さず、安定性、生理活性も充分で、ビタミンＣ強化剤としてばかりでなく、呈味改善剤、酸味剤、安定剤、品質改良剤、抗酸化剤、生理活性剤、紫外線吸収剤、医薬原料、化学品などとして、飲食物、抗感受性疾患剤、化粧品などに有利に利用できる。
【００８３】
【実施例２】デキストリン（ＤＥ１０）９重量部を水２０重量部に加熱溶解し、還元下に保って、Ｌ−アスコルビン酸３重量部を加え、ｐＨ５．５、６５℃に維持しつつ、これにシクロマルトデキストリン・グルカノトランスフェラーゼをデキストリングラム当り１５０単位加えて４０時間反応させた。
【００８４】反応液を高速液体クロマトグラフィーで分析したところ、Ｌ−アスコルビン酸の約６５％がα−グリコシル−Ｌ−アスコルビン酸へ変換していた。
【００８５】本反応液を加熱して酵素を失活させた後、５５℃、ｐＨ４．５に調整し、これにグルコアミラーゼをデキストリングラム当り５０単位加えて、２４時間反応させた。
【００８６】本反応液を加熱して酵素を失活させ、活性炭で脱色濾過し、濾液をカチオン交換樹脂（Ｈ＋型）のカラムにかけ脱ミネラルし、次いで、アニオン交換樹脂（ＯＨ−型）のカラムにかけアニオンを樹脂に吸着させ、水洗してＤ−グルコースなどを除去後、０．５Ｎ−塩酸溶液で溶出、濃縮し、この濃縮液を原料溶液として、強酸性カチオン交換樹脂（Ｈ＋型）を充填したカラムを用いてカラムクロマトグラフィーを行ない、この溶出液の２−Ｏ−α−Ｄ−グルコピラノシル−Ｌ−アスコルビン酸高含有画分を採取した。
【００８７】次いで、これを濃度約７６Ｗ／Ｗ％に減圧濃縮して助晶缶にとり、結晶２−Ｏ−α−Ｄ−グルコピラノシル−Ｌ−アスコルビン酸を種晶として１％加えて４０℃とし、ゆっくり撹拌しつつ徐冷して２日間を要して２０℃まで下げ、バスケット型遠心分離機にかけ、結晶２−Ｏ−α−Ｄ−グルコピラノシル−Ｌ−アスコルビン酸を分離し、母液を固形物収率約５５％で得た。
【００８８】本母液を高速液体クロマトグラフィーで分析したところ、２−Ｏ−α−Ｄ−グルコピラノシル−Ｌ−アスコルビン酸約８０％、５−Ｏ−α−Ｄ−グルコピラノシル−Ｌ−アスコルビン酸約５％、６−Ｏ−α−Ｄ−グルコピラノシル−Ｌ−アスコルビン酸約５％を含有していた。
【００８９】本母液を濃度１８Ｗ／Ｗ％、ｐＨ５．０に調整し、これに塩化亜鉛炭を固形物当り０．５％加えて５０℃で２０時間通気撹拌して酸化処理し、次いで、前記方法に準じて、強酸性カチオン交換樹脂を用いるカラムクロマトグラフィーを行ない、この溶出液の２−Ｏ−α−Ｄ−グルコピラノシル−Ｌ−アスコルビン酸高含有画分を採取し、これをイオン交換樹脂で脱ミネラルし、減圧濃縮して、実施例１の方法に準じて晶出、分蜜し、結晶２−Ｏ−α−Ｄ−グルコピラノシル−Ｌ−アスコルビン酸を、母液固形物当り収率約５５％で得た。
【００９０】本品は、実施例１の場合と同様に、飲食物、抗感受性疾患剤、化粧品などに有利に利用できる。
【００９１】
【実施例３】実施例２の方法で調製した母液を濃度２０Ｗ／Ｗ％、ｐＨ７．５に調整し、５０℃で４８時間通気撹拌して酸化処理し、次いで、実施例２の方法に準じて、強酸性カチオン交換樹脂を用いるカラムクロマトグラフィーを行ない、この溶出液の２−Ｏ−α−Ｄ−グルコピラノシル−Ｌ−アスコルビン酸高含有画分を採取し、これをイオン交換樹脂で脱ミネラルし、減圧濃縮して、実施例１の方法に準じて晶出、分蜜し、結晶２−Ｏ−α−Ｄ−グルコピラノシル−Ｌ−アスコルビン酸を母液固形物当り収率約５３％で得た。
【００９２】本品は、実施例１の場合と同様に、飲食物、抗感受性疾患剤、化粧品などに有利に利用できる。
【００９３】
【発明の効果】本文で述べたことく、本発明において、２−Ｏ−α−Ｄ−グルコピラノシル−Ｌ−アスコルビン酸とともに直接還元性を示すＬ−アスコルビン酸糖誘導体とを含有する溶液を酸化処理し、次いで、強酸性カチオン交換樹脂を用いるカラムクロマトグラフィーを行うことにより、２−Ｏ−α−Ｄ−グルコピラノシル−Ｌ−アスコルビン酸とＬ−アスコルビン酸糖誘導体酸化物とが容易に分離できることから、得られる２−Ｏ−α−Ｄ−グルコピラノシル−Ｌ−アスコルビン酸高含有画分の純度が向上し、結晶２−Ｏ−α−Ｄ−グルコピラノシル−Ｌ−アスコルビン酸の析出が容易になり、その収率も向上する。
【００９４】従って、本発明は、２−Ｏ−α−Ｄ−グルコピラノシル−Ｌ−アスコルビン酸高含有物の製造方法としての工業的意義がきわめて大きい。
【特許請求の範囲】
【請求項１】 ２−Ｏ−α−Ｄ−グルコピラノシル−Ｌ−アスコルビン酸とともに直接還元性を示すＬ−アスコルビン酸糖誘導体を含有する溶液から２−Ｏ−α−Ｄ−グルコピラノシル−Ｌ−アスコルビン酸高含有物を採取するに際し、２−Ｏ−α−Ｄ−グルコピラノシル−Ｌ−アスコルビン酸とともに直接還元性を示すＬ−アスコルビン酸糖誘導体を含有する溶液を酸化処理し、次いで、強酸性カチオン交換樹脂を用いるカラムクロマトグラフィーを行ない、この溶出液の２−Ｏ−α−Ｄ−グルコピラノシル−Ｌ−アスコルビン酸高含有画分を採取することを特徴とする２−Ｏ−α−Ｄ−グルコピラノシル−Ｌ−アスコルビン酸高含有物の製造方法。
【請求項２】 直接還元性を示すＬ−アスコルビン酸糖誘導体が、５−Ｏ−α−Ｄ−グルコピラノシル−Ｌ−アスコルビン酸および６−Ｏ−α−Ｄ−グルコピラノシル−Ｌ−アスコルビン酸から選ばれる１種以上の直接還元性を示すＬ−アスコルビン酸糖誘導体であることを特徴とする請求項１記載の２−Ｏ−α−Ｄ−グルコピラノシル−Ｌ−アスコルビン酸高含有物の製造方法。
【請求項３】 ２−Ｏ−α−Ｄ−グルコピラノシル−Ｌ−アスコルビン酸とともに直接還元性を示すＬ−アスコルビン酸糖誘導体を含有する溶液から２−Ｏ−α−Ｄ−グルコピラノシル−Ｌ−アスコルビン酸高含有物を採取するに際し、２−Ｏ−α−Ｄ−グルコピラノシル−Ｌ−アスコルビン酸とともに直接還元性を示すＬ−アスコルビン酸糖誘導体を含有する溶液を酸化処理し、次いで、強酸性カチオン交換樹脂を用いるカラムクロマトグラフィーを行ない、この溶出液の２−Ｏ−α−Ｄ−グルコピラノシル−Ｌ−アスコルビン酸高含有画分を採取し、これを濃縮、過飽和にし、結晶２−Ｏ−α−Ｄ−グルコピラノシル−Ｌ−アスコルビン酸を析出せしめることを特微とする２−Ｏ−α−Ｄ−グルコピラノシル−Ｌ−アスコルビン酸高含有物の製造方法。
【請求項４】 直接還元性を示すＬ−アスコルビン酸糖誘導体が、５−Ｏ−α−Ｄ−グルコピラノシル−Ｌ−アスコルビン酸および６−Ｏ−α−Ｄ−グルコピラノシル−Ｌ−アスコルビン酸から選ばれる１種以上の直接還元性を示すＬ−アスコルビン酸糖誘導体であることを特徴とする請求項３記載の２−Ｏ−α−Ｄ−グルコピラノシル−Ｌ−アスコルビン酸高含有物の製造方法。
【請求項１】 ２−Ｏ−α−Ｄ−グルコピラノシル−Ｌ−アスコルビン酸とともに直接還元性を示すＬ−アスコルビン酸糖誘導体を含有する溶液から２−Ｏ−α−Ｄ−グルコピラノシル−Ｌ−アスコルビン酸高含有物を採取するに際し、２−Ｏ−α−Ｄ−グルコピラノシル−Ｌ−アスコルビン酸とともに直接還元性を示すＬ−アスコルビン酸糖誘導体を含有する溶液を酸化処理し、次いで、強酸性カチオン交換樹脂を用いるカラムクロマトグラフィーを行ない、この溶出液の２−Ｏ−α−Ｄ−グルコピラノシル−Ｌ−アスコルビン酸高含有画分を採取することを特徴とする２−Ｏ−α−Ｄ−グルコピラノシル−Ｌ−アスコルビン酸高含有物の製造方法。
【請求項２】 直接還元性を示すＬ−アスコルビン酸糖誘導体が、５−Ｏ−α−Ｄ−グルコピラノシル−Ｌ−アスコルビン酸および６−Ｏ−α−Ｄ−グルコピラノシル−Ｌ−アスコルビン酸から選ばれる１種以上の直接還元性を示すＬ−アスコルビン酸糖誘導体であることを特徴とする請求項１記載の２−Ｏ−α−Ｄ−グルコピラノシル−Ｌ−アスコルビン酸高含有物の製造方法。
【請求項３】 ２−Ｏ−α−Ｄ−グルコピラノシル−Ｌ−アスコルビン酸とともに直接還元性を示すＬ−アスコルビン酸糖誘導体を含有する溶液から２−Ｏ−α−Ｄ−グルコピラノシル−Ｌ−アスコルビン酸高含有物を採取するに際し、２−Ｏ−α−Ｄ−グルコピラノシル−Ｌ−アスコルビン酸とともに直接還元性を示すＬ−アスコルビン酸糖誘導体を含有する溶液を酸化処理し、次いで、強酸性カチオン交換樹脂を用いるカラムクロマトグラフィーを行ない、この溶出液の２−Ｏ−α−Ｄ−グルコピラノシル−Ｌ−アスコルビン酸高含有画分を採取し、これを濃縮、過飽和にし、結晶２−Ｏ−α−Ｄ−グルコピラノシル−Ｌ−アスコルビン酸を析出せしめることを特微とする２−Ｏ−α−Ｄ−グルコピラノシル−Ｌ−アスコルビン酸高含有物の製造方法。
【請求項４】 直接還元性を示すＬ−アスコルビン酸糖誘導体が、５−Ｏ−α−Ｄ−グルコピラノシル−Ｌ−アスコルビン酸および６−Ｏ−α−Ｄ−グルコピラノシル−Ｌ−アスコルビン酸から選ばれる１種以上の直接還元性を示すＬ−アスコルビン酸糖誘導体であることを特徴とする請求項３記載の２−Ｏ−α−Ｄ−グルコピラノシル−Ｌ−アスコルビン酸高含有物の製造方法。
【特許番号】特許第３１３４２３５号（Ｐ３１３４２３５）
【登録日】平成１２年１２月１日（２０００．１２．１）
【発行日】平成１３年２月１３日（２００１．２．１３）
【国際特許分類】
【出願番号】特願平３−３３９２８２
【出願日】平成３年１０月２３日（１９９１．１０．２３）
【公開番号】特開平５−１１７２９０
【公開日】平成５年５月１４日（１９９３．５．１４）
【審査請求日】平成１０年１０月１日（１９９８．１０．１）
【出願人】（０００１５５９０８）株式会社林原生物化学研究所 (168)
【登録日】平成１２年１２月１日（２０００．１２．１）
【発行日】平成１３年２月１３日（２００１．２．１３）
【国際特許分類】
【出願日】平成３年１０月２３日（１９９１．１０．２３）
【公開番号】特開平５−１１７２９０
【公開日】平成５年５月１４日（１９９３．５．１４）
【審査請求日】平成１０年１０月１日（１９９８．１０．１）
【出願人】（０００１５５９０８）株式会社林原生物化学研究所 (168)
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