ＰＤＸ１発現背側及び腹側前腸内胚葉
本明細書中に開示されるのは、背側ＰＤＸ１陽性前腸内胚葉細胞及び／又は腹側ＰＤＸ１陽性前腸内胚葉細胞を含む細胞培養物、並びにその製造方法である。さらに、実質的に精製された背側ＰＤＸ１陽性前腸内胚葉細胞及び／又は腹側ＰＤＸ１陽性前腸内胚葉細胞、並びに背側ＰＤＸ１陽性前腸内胚葉細胞及び／又は腹側ＰＤＸ１陽性前腸内胚葉細胞を他の細胞型から富化、単離、及び精製するための方法も、本明細書中に開示される。背側ＰＤＸ１陽性前腸内胚葉細胞及び／又は腹側ＰＤＸ１陽性前腸内胚葉細胞の分化を促進し得る分化因子を同定する方法も開示される。
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【特許請求の範囲】
【請求項１】
ヒト細胞を含む細胞培養物であって、該ヒト細胞のうちの少なくとも約２６％がＣＤＨ６、ＧＡＢＲＡ２、ＧＲＩＡ３、ＩＬ６Ｒ、ＫＣＮＪ２、ＬＧＡＬＳ３、ＬＧＡＬＳ３／ＧＡＬＩＧ、ＳＥＲＰＩＮＦ２、ＳＬＣ２７Ａ２、ＳＥＲＰＩＮＦ２、ＤＵＳＰ９、ＣＤＨ６及びＳＯＸ９から成る群から選択される少なくとも１つのマーカーを発現する膵臓−十二指腸ホメオボックス因子−１（ＰＤＸ１）陽性背側偏向前腸内胚葉細胞であり、該ＰＤＸ１陽性背側偏向前腸内胚葉細胞が背側膵芽の細胞に分化することができる複能性細胞である細胞培養物。
【請求項２】
前記マーカーがＳＥＲＰＩＮＦ２、ＤＵＳＰ９、ＣＤＨ６及びＳＯＸ９から成る群から選択される、請求項１に記載の細胞培養物。
【請求項３】
前記マーカーがＣＤＨ６、ＧＡＢＲＡ２、ＧＲＩＡ３、ＩＬ６Ｒ、ＫＣＮＪ２、ＬＧＡＬＳ３、ＬＧＡＬＳ３／ＧＡＬＩＧ、ＳＥＲＰＩＮＦ２及びＳＬＣ２７Ａ２から成る群から選択される細胞表面マーカーである、請求項１に記載の細胞培養物。
【請求項４】
前記ＰＤＸ１陽性背側偏向前腸内胚葉細胞がＡＤＯＲＡ２Ａ、ＣＤ４７、ＥＰＢ４１Ｌ１、ＭＡＧ、ＳＦＲＰ５、ＳＬＣ１６Ａ１０、ＳＬＣ１６Ａ２、ＳＬＣ１Ａ３、ＳＬＣ３０Ａ４、ＳＬＩＣＫ、ＳＬＩＴＲＫ４、ＸＰＲ１、ＨＯＸＡ１、ＰＤＥ１１Ａ、ＦＡＭ４９Ａ及びＷＮＴ５Ａから成る群から選択される少なくとも１つのマーカーを発現する、請求項１に記載の細胞培養物。
【請求項５】
前記マーカーがＨＯＸＡ１、ＰＤＥ１１Ａ、ＦＡＭ４９Ａ及びＷＮＴ５Ａから成る群から選択される、請求項４に記載の細胞培養物。
【請求項６】
前記マーカーがＡＤＯＲＡ２Ａ、ＣＤ４７、ＥＰＢ４１Ｌ１、ＭＡＧ、ＳＦＲＰ５、ＳＬＣ１６Ａ１０、ＳＬＣ１６Ａ２、ＳＬＣ１Ａ３、ＳＬＣ３０Ａ４、ＳＬＩＣＫ、ＳＬＩＴＲＫ４及びＸＰＲ１から成る群から選択される細胞表面マーカーである、請求項４に記載の細胞培養物。
【請求項７】
前記ヒト細胞の少なくとも３０％がＰＤＸ１陽性背側偏向前腸内胚葉細胞である、請求項１に記載の細胞培養物。
【請求項８】
前記ヒト細胞の少なくとも４０％がＰＤＸ１陽性背側偏向前腸内胚葉細胞である、請求項１に記載の細胞培養物。
【請求項９】
前記ヒト細胞の少なくとも５０％がＰＤＸ１陽性背側偏向前腸内胚葉細胞である、請求項１に記載の細胞培養物。
【請求項１０】
前記ヒト細胞の少なくとも６０％がＰＤＸ１陽性背側偏向前腸内胚葉細胞である、請求項１に記載の細胞培養物。
【請求項１１】
前記ヒト細胞の少なくとも７５％がＰＤＸ１陽性背側偏向前腸内胚葉細胞である、請求項１に記載の細胞培養物。
【請求項１２】
ヒトフィーダー細胞が前記培養物中に存在し、そして該ヒトフィーダー細胞以外のヒト細胞の少なくとも約２％がＰＤＸ１陽性背側偏向前腸内胚葉細胞である、請求項１に記載の細胞培養物。
【請求項１３】
ＰＤＸ１の発現が前記ＰＤＸ１陽性背側偏向前腸内胚葉細胞中のα−フェトプロテイン（ＡＦＰ）、ＳＯＸ７、ＳＯＸ１、ＺＩＣ１及びＮＦＭから成る群から選択されるマーカーの発現より大きい、請求項１に記載の細胞培養物。
【請求項１４】
前記細胞培養物が臓側内胚葉細胞、壁側内胚葉細胞及び神経細胞から成る群から選択される細胞を実質的に含有しない、請求項１に記載の細胞培養物。
【請求項１５】
レチノイドをさらに含む、請求項１に記載の細胞培養物。
【請求項１６】
前記レチノイドがレチノイン酸（ＲＡ）である、請求項１５に記載の細胞培養物。
【請求項１７】
Ｂ２７をさらに含む、請求項１６に記載の細胞培養物。
【請求項１８】
ヒト細胞を含む細胞培養物であって、該ヒト細胞のうちの少なくとも約２％がＣＤＨ６、ＧＡＢＲＡ２、ＧＲＩＡ３、ＩＬ６Ｒ、ＫＣＮＪ２、ＬＧＡＬＳ３、ＬＧＡＬＳ３／ＧＡＬＩＧ、ＳＥＲＰＩＮＦ２、ＳＬＣ２７Ａ２、ＳＥＲＰＩＮＦ２、ＤＵＳＰ９、ＣＤＨ６及びＳＯＸ９から成る群から選択される少なくとも１つのマーカーを発現する膵臓−十二指腸ホメオボックス因子−１（ＰＤＸ１）陽性腹側偏向（ventrally-biased）前腸内胚葉細胞であり、該ＰＤＸ１陽性腹側偏向前腸内胚葉細胞が腹側膵芽の細胞に分化することができる複能性細胞である、細胞培養物。
【請求項１９】
前記マーカーがＳＥＲＰＩＮＦ２、ＤＵＳＰ９、ＣＤＨ６及びＳＯＸ９から成る群から選択される、請求項１８に記載の細胞培養物。
【請求項２０】
前記マーカーがＣＤＨ６、ＧＡＢＲＡ２、ＧＲＩＡ３、ＩＬ６Ｒ、ＫＣＮＪ２、ＬＧＡＬＳ３、ＬＧＡＬＳ３／ＧＡＬＩＧ、ＳＥＲＰＩＮＦ２及びＳＬＣ２７Ａ２から成る群から選択される細胞表面マーカーである、請求項１８に記載の細胞培養物。
【請求項２１】
前記ＰＤＸ１陽性腹側偏向前腸内胚葉細胞がＡＤＯＲＡ２Ａ、ＣＤ４７、ＥＰＢ４１Ｌ１、ＭＡＧ、ＳＦＲＰ５、ＳＬＣ１６Ａ１０、ＳＬＣ１６Ａ２、ＳＬＣ１Ａ３、ＳＬＣ３０Ａ４、ＳＬＩＣＫ、ＳＬＩＴＲＫ４、ＸＰＲ１、ＨＯＸＡ１、ＰＤＥ１１Ａ、ＦＡＭ４９Ａ及びＷＮＴ５Ａから成る群から選択される1つ又は複数のマーカーを実質的に発現しない、請求項１８に記載の細胞培養物。
【請求項２２】
前記ヒト細胞の少なくとも５％がＰＤＸ１陽性腹側偏向前腸内胚葉細胞である、請求項１８に記載の細胞培養物。
【請求項２３】
前記ヒト細胞の少なくとも１０％がＰＤＸ１陽性腹側偏向前腸内胚葉細胞である、請求項１８に記載の細胞培養物。
【請求項２４】
前記ヒト細胞の少なくとも２５％がＰＤＸ１陽性腹側偏向前腸内胚葉細胞である、請求項１８に記載の細胞培養物。
【請求項２５】
前記ヒト細胞の少なくとも５０％がＰＤＸ１陽性腹側偏向前腸内胚葉細胞である、請求項１８に記載の細胞培養物。
【請求項２６】
前記ヒト細胞の少なくとも７５％がＰＤＸ１陽性腹側偏向前腸内胚葉細胞である、請求項１８に記載の細胞培養物。
【請求項２７】
ヒトフィーダー細胞が前記培養物中に存在し、そして該ヒトフィーダー細胞以外のヒト
細胞の少なくとも約２％がＰＤＸ１陽性腹側偏向前腸内胚葉細胞である、請求項１８に記載の細胞培養物。
【請求項２８】
ＰＤＸ１の発現が前記ＰＤＸ１陽性腹側偏向前腸内胚葉細胞中のα−フェトプロテイン（ＡＦＰ）、ＳＯＸ７、ＳＯＸ１、ＺＩＣ１及びＮＦＭから成る群から選択されるマーカーの発現より大きい、請求項１８に記載の細胞培養物。
【請求項２９】
前記細胞培養物が臓側内胚葉細胞、壁側内胚葉細胞及び神経細胞から成る群から選択される細胞を実質的に含有しない、請求項１８に記載の細胞培養物。
【請求項３０】
レチノイドをさらに含む、請求項１８に記載の細胞培養物。
【請求項３１】
前記レチノイドがレチノイン酸（ＲＡ）である、請求項３０に記載の細胞培養物。
【請求項３２】
Ｂ２７をさらに含む、請求項３１に記載の細胞培養物。
【請求項３３】
細胞を含む細胞集団であって、該細胞のうちの少なくとも約９０％がＣＤＨ６、ＧＡＢＲＡ２、ＧＲＩＡ３、ＩＬ６Ｒ、ＫＣＮＪ２、ＬＧＡＬＳ３、ＬＧＡＬＳ３／ＧＡＬＩＧ、ＳＥＲＰＩＮＦ２、ＳＬＣ２７Ａ２、ＳＥＲＰＩＮＦ２、ＤＵＳＰ９、ＣＤＨ６及びＳＯＸ９から成る群から選択される少なくとも１つのマーカーを発現するヒトＰＤＸ１陽性背側偏向前腸内胚葉細胞であり、該ＰＤＸ１陽性背側偏向前腸内胚葉細胞が背側膵芽の細胞に分化することができる複能性細胞である細胞集団。
【請求項３４】
前記マーカーがＳＥＲＰＩＮＦ２、ＤＵＳＰ９、ＣＤＨ６及びＳＯＸ９から成る群から選択される、請求項３３に記載の細胞集団。
【請求項３５】
前記マーカーがＣＤＨ６、ＧＡＢＲＡ２、ＧＲＩＡ３、ＩＬ６Ｒ、ＫＣＮＪ２、ＬＧＡＬＳ３、ＬＧＡＬＳ３／ＧＡＬＩＧ、ＳＥＲＰＩＮＦ２及びＳＬＣ２７Ａ２から成る群から選択される細胞表面マーカーである、請求項３３に記載の細胞集団。
【請求項３６】
前記ＰＤＸ１陽性背側偏向前腸内胚葉細胞がＡＤＯＲＡ２Ａ、ＣＤ４７、ＥＰＢ４１Ｌ１、ＭＡＧ、ＳＦＲＰ５、ＳＬＣ１６Ａ１０、ＳＬＣ１６Ａ２、ＳＬＣ１Ａ３、ＳＬＣ３０Ａ４、ＳＬＩＣＫ、ＳＬＩＴＲＫ４、ＸＰＲ１、ＨＯＸＡ１、ＰＤＥ１１Ａ、ＦＡＭ４９Ａ及びＷＮＴ５Ａから成る群から選択される少なくとも１つのマーカーを発現する、請求項３３に記載の細胞集団。
【請求項３７】
前記マーカーがＨＯＸＡ１、ＰＤＥ１１Ａ、ＦＡＭ４９Ａ及びＷＮＴ５Ａから成る群から選択される、請求項３６に記載の細胞集団。
【請求項３８】
前記マーカーがＡＤＯＲＡ２Ａ、ＣＤ４７、ＥＰＢ４１Ｌ１、ＭＡＧ、ＳＦＲＰ５、ＳＬＣ１６Ａ１０、ＳＬＣ１６Ａ２、ＳＬＣ１Ａ３、ＳＬＣ３０Ａ４、ＳＬＩＣＫ、ＳＬＩＴＲＫ４及びＸＰＲ１から成る群から選択される細胞表面マーカーである、請求項３６に記載の細胞集団。
【請求項３９】
前記細胞の少なくとも約９５％がＰＤＸ１陽性背側偏向前腸内胚葉細胞である、請求項３３に記載の細胞集団。
【請求項４０】
前記細胞の少なくとも約９８％がＰＤＸ１陽性背側偏向前腸内胚葉細胞である、請求項３３に記載の細胞集団。
【請求項４１】
ＰＤＸ１の発現が前記ＰＤＸ１陽性背側偏向前腸内胚葉細胞中のＡＦＰ、ＳＯＸ７、ＳＯＸ１、ＺＩＣ１及びＮＦＭから成る群から選択されるマーカーの発現より大きい、請求項３３に記載の細胞集団。
【請求項４２】
細胞を含む細胞集団であって、該細胞のうちの少なくとも約９０％がＣＤＨ６、ＧＡＢＲＡ２、ＧＲＩＡ３、ＩＬ６Ｒ、ＫＣＮＪ２、ＬＧＡＬＳ３、ＬＧＡＬＳ３／ＧＡＬＩＧ、ＳＥＲＰＩＮＦ２、ＳＬＣ２７Ａ２、ＳＥＲＰＩＮＦ２、ＤＵＳＰ９、ＣＤＨ６及びＳＯＸ９から成る群から選択される少なくとも１つのマーカーを発現するヒトＰＤＸ１陽性腹側偏向前腸内胚葉細胞であり、該ＰＤＸ１陽性腹側偏向前腸内胚葉細胞が腹側膵芽の細胞に分化することができる複能性細胞である細胞集団。
【請求項４３】
前記マーカーがＳＥＲＰＩＮＦ２、ＤＵＳＰ９、ＣＤＨ６及びＳＯＸ９から成る群から選択される、請求項４２に記載の細胞集団。
【請求項４４】
前記マーカーがＣＤＨ６、ＧＡＢＲＡ２、ＧＲＩＡ３、ＩＬ６Ｒ、ＫＣＮＪ２、ＬＧＡＬＳ３、ＬＧＡＬＳ３／ＧＡＬＩＧ、ＳＥＲＰＩＮＦ２及びＳＬＣ２７Ａ２から成る群から選択される細胞表面マーカーである、請求項４２に記載の細胞集団。
【請求項４５】
前記ＰＤＸ１陽性腹側偏向前腸内胚葉細胞がＡＤＯＲＡ２Ａ、ＣＤ４７、ＥＰＢ４１Ｌ１、ＭＡＧ、ＳＦＲＰ５、ＳＬＣ１６Ａ１０、ＳＬＣ１６Ａ２、ＳＬＣ１Ａ３、ＳＬＣ３０Ａ４、ＳＬＩＣＫ、ＳＬＩＴＲＫ４、ＸＰＲ１、ＨＯＸＡ１、ＰＤＥ１１Ａ、ＦＡＭ４９Ａ及びＷＮＴ５Ａから成る群から選択される1つ又は複数のマーカーを実質的に発現しない、請求項４２に記載の細胞集団。
【請求項４６】
前記細胞の少なくとも約９５％がＰＤＸ１陽性腹側偏向前腸内胚葉細胞である、請求項４２に記載の細胞集団。
【請求項４７】
前記細胞の少なくとも約９８％がＰＤＸ１陽性腹側偏向前腸内胚葉細胞である、請求項４２に記載の細胞集団。
【請求項４８】
ＰＤＸ１の発現が前記ＰＤＸ１陽性腹側偏向前腸内胚葉細胞中のＡＦＰ、ＳＯＸ７、ＳＯＸ１、ＺＩＣ１及びＮＦＭから成る群から選択されるマーカーの発現より大きい、請求項４２に記載の細胞集団。
【請求項４９】
ＰＤＸ１陽性背側偏向前腸内胚葉細胞を産生する方法であって、以下の：
ＰＤＸ１陰性胚体内胚葉細胞を含む細胞集団を得る工程；そして
ＣＤＨ６、ＧＡＢＲＡ２、ＧＲＩＡ３、ＩＬ６Ｒ、ＫＣＮＪ２、ＬＧＡＬＳ３、ＬＧＡＬＳ３／ＧＡＬＩＧ、ＳＥＲＰＩＮＦ２、ＳＬＣ２７Ａ２、ＳＥＲＰＩＮＦ２、ＤＵＳＰ９、ＣＤＨ６及びＳＯＸ９から成る群から選択される少なくとも１つのマーカーを発現するＰＤＸ１陽性背側偏向前腸内胚葉細胞への前記ＰＤＸ１陰性胚体内胚葉細胞集団の少なくとも約２６％の分化を促進するのに十分な量でレチノイドを前記細胞集団に供給する工程であって、該ＰＤＸ１陽性背側偏向前腸内胚葉細胞が背側膵芽の細胞に分化することができる複能性細胞である工程
を包含する方法。
【請求項５０】
前記ＰＤＸ１陽性背側偏向前腸内胚葉細胞がＡＤＯＲＡ２Ａ、ＣＤ４７、ＥＰＢ４１Ｌ１、ＭＡＧ、ＳＦＲＰ５、ＳＬＣ１６Ａ１０、ＳＬＣ１６Ａ２、ＳＬＣ１Ａ３、ＳＬＣ３０Ａ４、ＳＬＩＣＫ、ＳＬＩＴＲＫ４、ＸＰＲ１、ＨＯＸＡ１、ＰＤＥ１１Ａ、ＦＡＭ４９Ａ及びＷＮＴ５Ａから成る群から選択される少なくとも１つのマーカーも発現する、請求項４９に記載の方法。
【請求項５１】
ＰＤＸ１陽性背側偏向前腸内胚葉細胞が形成されるのに十分な時間を与える工程をさらに包含し、該ＰＤＸ１陽性背側偏向前腸内胚葉細胞が形成されるのに十分な時間が、前記細胞集団中の背側偏向前腸内胚葉細胞中のＡＤＯＲＡ２Ａ、ＣＤ４７、ＥＰＢ４１Ｌ１、ＭＡＧ、ＳＦＲＰ５、ＳＬＣ１６Ａ１０、ＳＬＣ１６Ａ２、ＳＬＣ１Ａ３、ＳＬＣ３０Ａ４、ＳＬＩＣＫ、ＳＬＩＴＲＫ４、ＸＰＲ１、ＨＯＸＡ１、ＰＤＥ１１Ａ、ＦＡＭ４９Ａ及びＷＮＴ５Ａから成る群から選択されるマーカーの存在を検出することにより確定される、請求項５０に記載の方法。
【請求項５２】
ＣＤＨ６、ＧＡＢＲＡ２、ＧＲＩＡ３、ＩＬ６Ｒ、ＫＣＮＪ２、ＬＧＡＬＳ３、ＬＧＡＬＳ３／ＧＡＬＩＧ、ＳＥＲＰＩＮＦ２、ＳＬＣ２７Ａ２、ＳＥＲＰＩＮＦ２、ＤＵＳＰ９、ＣＤＨ６及びＳＯＸ９から成る群から選択される前記マーカー、或いはＡＤＯＲＡ２Ａ、ＣＤ４７、ＥＰＢ４１Ｌ１、ＭＡＧ、ＳＦＲＰ５、ＳＬＣ１６Ａ１０、ＳＬＣ１６Ａ２、ＳＬＣ１Ａ３、ＳＬＣ３０Ａ４、ＳＬＩＣＫ、ＳＬＩＴＲＫ４、ＸＰＲ１、ＨＯＸＡ１、ＰＤＥ１１Ａ、ＦＡＭ４９Ａ及びＷＮＴ５Ａから成る群から選択される前記マーカーの発現が定量的ポリメラーゼ連鎖反応（Ｑ−ＰＣＲ）により確定される、請求項５０に記載の方法。
【請求項５３】
ＣＤＨ６、ＧＡＢＲＡ２、ＧＲＩＡ３、ＩＬ６Ｒ、ＫＣＮＪ２、ＬＧＡＬＳ３、ＬＧＡＬＳ３／ＧＡＬＩＧ、ＳＥＲＰＩＮＦ２、ＳＬＣ２７Ａ２、ＳＥＲＰＩＮＦ２、ＤＵＳＰ９、ＣＤＨ６及びＳＯＸ９から成る群から選択される前記マーカー、或いはＡＤＯＲＡ２Ａ、ＣＤ４７、ＥＰＢ４１Ｌ１、ＭＡＧ、ＳＦＲＰ５、ＳＬＣ１６Ａ１０、ＳＬＣ１６Ａ２、ＳＬＣ１Ａ３、ＳＬＣ３０Ａ４、ＳＬＩＣＫ、ＳＬＩＴＲＫ４、ＸＰＲ１、ＨＯＸＡ１、ＰＤＥ１１Ａ、ＦＡＭ４９Ａ及びＷＮＴ５Ａから成る群から選択される、前記マーカーの発現が免疫細胞化学により確定される、請求項５０に記載の方法。
【請求項５４】
ＰＤＸ１の発現が前記ＰＤＸ１陽性背側偏向前腸内胚葉細胞中のα−フェトプロテイン（ＡＦＰ）、ＳＯＸ７、ＳＯＸ１、ＺＩＣ１及びＮＦＭから成る群から選択されるマーカーの発現より大きい、請求項４９に記載の方法。
【請求項５５】
前記レチノイドがＲＡである、請求項４９に記載の方法。
【請求項５６】
ＲＡが約０．５μＭ〜約５０μＭの範囲の濃度で供給される、請求項５５に記載の方法。
【請求項５７】
ＲＡが約１μＭ〜約２０μＭの範囲の濃度で供給される、請求項５６に記載の方法。
【請求項５８】
ＲＡが約２μＭの濃度で供給される、請求項５７に記載の方法。
【請求項５９】
前記培養物が約５日齢である場合にＲＡが供給される、請求項５５に記載の方法。
【請求項６０】
前記培養物にＢ２７を供給することをさらに包含する、請求項４９に記載の方法。
【請求項６１】
前記Ｂ２７が総培地の約０．１％〜約２０％の範囲の濃度で供給される、請求項６０に記載の方法。
【請求項６２】
Ｂ２７が総培地の約０．５％〜約２％の範囲の濃度で供給される、請求項６１に記載の方法。
【請求項６３】
Ｂ２７が総培地の約０．５％の濃度で供給される、請求項６２に記載の方法。
【請求項６４】
Ｂ２７が前記レチノイドとほぼ同時に供給される、請求項６０に記載の方法。
【請求項６５】
前記培養物にアクチビンＡを供給することをさらに包含する、請求項４９に記載の方法。
【請求項６６】
アクチビンＡが約１０ｎｇ／ｍｌ〜約２００ｎｇ／ｍｌの範囲の濃度で供給される、請求項６５に記載の方法。
【請求項６７】
アクチビンＡが約２０ｎｇ／ｍｌ〜約１００ｎｇ／ｍｌの範囲の濃度で供給される、請求項６６に記載の方法。
【請求項６８】
アクチビンＡが約２５ｎｇ／ｍｌの濃度で供給される、請求項６７に記載の方法。
【請求項６９】
前記ＰＤＸ１陽性背側偏向前腸内胚葉細胞がＣＭＲＬ培地中で増殖される、請求項４９に記載の方法。
【請求項７０】
前記ＣＭＲＬ培地が約２μＭのＲＡ、約２５ｎｇ／ｍｌのアクチビンＡ及び総培地の約０．５％のＢ２７を含む、請求項６９に記載の方法。
【請求項７１】
前記ＰＤＸ１陰性胚体内胚葉細胞を含む細胞集団を得る工程が、多能性（pluripotent）ヒト細胞を含む細胞集団を得ること、胚体内胚葉細胞への該多能性細胞の分化を促進するのに十分な量でＴＧＦβスーパーファミリーの少なくとも１つの増殖因子を該細胞集団に供給すること、そして胚体内胚葉細胞が形成されるのに十分な時間を与えることを包含し、該胚体内胚葉細胞が形成されるのに十分な時間が該細胞集団中の胚体内胚葉細胞の存在を検出することにより確定される、請求項４９に記載の方法。
【請求項７２】
請求項４９に記載の方法により産生されるＰＤＸ１陽性背側偏向前腸内胚葉細胞。
【請求項７３】
ＰＤＸ１陽性腹側偏向前腸内胚葉細胞を産生する方法であって、以下の：
ＰＤＸ１陰性胚体内胚葉細胞を含む細胞集団を得る工程；そして
ＣＤＨ６、ＧＡＢＲＡ２、ＧＲＩＡ３、ＩＬ６Ｒ、ＫＣＮＪ２、ＬＧＡＬＳ３、ＬＧＡＬＳ３／ＧＡＬＩＧ、ＳＥＲＰＩＮＦ２、ＳＬＣ２７Ａ２、ＳＥＲＰＩＮＦ２、ＤＵＳＰ９、ＣＤＨ６及びＳＯＸ９から成る群から選択される少なくとも１つのマーカーを発現するＰＤＸ１陽性腹側偏向前腸内胚葉細胞への前記ＰＤＸ１陰性胚体内胚葉細胞集団の少なくとも一部の分化を促進するのに十分な量でＦＧＦ−１０を前記細胞集団に供給する工程であって、該ＰＤＸ１陽性腹側偏向前腸内胚葉細胞が腹側膵芽の細胞に分化することができる複能性細胞である工程
を包含する方法。
【請求項７４】
前記細胞集団がＲＡの非存在下で分化される、請求項７３に記載の方法。
【請求項７５】
前記ＰＤＸ１陽性腹側偏向前腸内胚葉細胞がＡＤＯＲＡ２Ａ、ＣＤ４７、ＥＰＢ４１Ｌ１、ＭＡＧ、ＳＦＲＰ５、ＳＬＣ１６Ａ１０、ＳＬＣ１６Ａ２、ＳＬＣ１Ａ３、ＳＬＣ３０Ａ４、ＳＬＩＣＫ、ＳＬＩＴＲＫ４、ＸＰＲ１、ＨＯＸＡ１、ＰＤＥ１１Ａ、ＦＡＭ４９Ａ及びＷＮＴ５Ａから成る群から選択される１つ又は複数のマーカーを発現しない、請求項７３に記載の方法。
【請求項７６】
ＰＤＸ１陽性腹側偏向前腸内胚葉細胞が形成されるのに十分な時間を与える工程をさらに包含し、該ＰＤＸ１陽性腹側偏向前腸内胚葉細胞が形成されるのに十分な時間が、前記
細胞集団中の腹側偏向前腸内胚葉細胞中のＣＤＨ６、ＧＡＢＲＡ２、ＧＲＩＡ３、ＩＬ６Ｒ、ＫＣＮＪ２、ＬＧＡＬＳ３、ＬＧＡＬＳ３／ＧＡＬＩＧ、ＳＥＲＰＩＮＦ２、ＳＬＣ２７Ａ２、ＳＥＲＰＩＮＦ２、ＤＵＳＰ９、ＣＤＨ６及びＳＯＸ９から成る群から選択されるマーカーの存在を検出することにより確定される、請求項７５に記載の方法。
【請求項７７】
ＣＤＨ６、ＧＡＢＲＡ２、ＧＲＩＡ３、ＩＬ６Ｒ、ＫＣＮＪ２、ＬＧＡＬＳ３、ＬＧＡＬＳ３／ＧＡＬＩＧ、ＳＥＲＰＩＮＦ２、ＳＬＣ２７Ａ２、ＳＥＲＰＩＮＦ２、ＤＵＳＰ９、ＣＤＨ６及びＳＯＸ９から成る群から選択される前記マーカーの発現が定量的ポリメラーゼ連鎖反応（Ｑ−ＰＣＲ）により確定される、請求項７６に記載の方法。
【請求項７８】
ＣＤＨ６、ＧＡＢＲＡ２、ＧＲＩＡ３、ＩＬ６Ｒ、ＫＣＮＪ２、ＬＧＡＬＳ３、ＬＧＡＬＳ３／ＧＡＬＩＧ、ＳＥＲＰＩＮＦ２、ＳＬＣ２７Ａ２、ＳＥＲＰＩＮＦ２、ＤＵＳＰ９、ＣＤＨ６及びＳＯＸ９から成る群から選択される前記マーカーの発現が免疫細胞化学により確定される、請求項７６に記載の方法。
【請求項７９】
ＰＤＸ１の発現が前記ＰＤＸ１陽性腹側偏向前腸内胚葉細胞中のα−フェトプロテイン（ＡＦＰ）、ＳＯＸ７、ＳＯＸ１、ＺＩＣ１及びＮＦＭから成る群から選択されるマーカーの発現より大きい、請求項７３に記載の方法。
【請求項８０】
ＦＧＦ−１０が約５ｎｇ／ｍｌ〜約５００ｎｇ／ｍｌの範囲の濃度で供給される、請求項７３に記載の方法。
【請求項８１】
ＦＧＦ−１０が約１０ｎｇ／ｍｌ〜約１００ｎｇ／ｍｌの範囲の濃度で供給される、請求項８０に記載の方法。
【請求項８２】
ＦＧＦ−１０が約５０ｎｇ／ｍｌの濃度で供給される、請求項８１に記載の方法。
【請求項８３】
前記培養物が約３日齢である場合にＦＧＦ−１０が供給される、請求項７３に記載の方法。
【請求項８４】
前記培養物にＢ２７を供給することをさらに包含する、請求項７３に記載の方法。
【請求項８５】
前記Ｂ２７が総培地の約０．１％〜約２０％の範囲の濃度で供給される、請求項８４に記載の方法。
【請求項８６】
Ｂ２７が総培地の約０．５％〜約２％の範囲の濃度で供給される、請求項８５に記載の方法。
【請求項８７】
Ｂ２７が総培地の約０．５％の濃度で供給される、請求項８６に記載の方法。
【請求項８８】
Ｂ２７が前記ＦＧＦ−１０とほぼ同時に供給される、請求項８４に記載の方法。
【請求項８９】
前記培養物にＫＡＡＤ−シクロパミンを供給することをさらに包含する、請求項７３に記載の方法。
【請求項９０】
ＫＡＡＤ−シクロパミンが約０．１μＭ〜約５０μＭの濃度で供給される、請求項８９に記載の方法。
【請求項９１】
ＫＡＡＤ−シクロパミンが約０．５μＭ〜約１０μＭの範囲の濃度で供給される、請求項９０に記載の方法。
【請求項９２】
ＫＡＡＤ−シクロパミンが約０．５μＭの濃度で供給される、請求項９１に記載の方法。
【請求項９３】
前記ＰＤＸ１陽性腹側偏向前腸内胚葉細胞がＣＭＲＬ培地中で増殖される、請求項７３に記載の方法。
【請求項９４】
前記ＣＭＲＬ培地が約５０ｎｇ／ｍｌのＦＧＦ−１０、約０．５μＭのＫＡＡＤ−シクロパミン及び総培地の約０．５％のＢ２７を含む、請求項９３に記載の方法。
【請求項９５】
前記ＣＭＲＬ培地がＲＡを欠く、請求項９４に記載の方法。
【請求項９６】
前記ＰＤＸ１陰性胚体内胚葉細胞を含む細胞集団を得る工程が、多能性ヒト細胞を含む細胞集団を得ること、胚体内胚葉細胞への該多能性細胞の分化を促進するのに十分な量でＴＧＦβスーパーファミリーの少なくとも１つの増殖因子を該細胞集団に供給すること、そして胚体内胚葉細胞が形成されるのに十分な時間を与えることを包含し、該胚体内胚葉細胞が生成するのに十分な時間が該細胞集団中の胚体内胚葉細胞の存在を検出することにより確定される、請求項７３に記載の方法。
【請求項９７】
請求項７３に記載の方法により産生されるＰＤＸ１陽性腹側偏向前腸内胚葉細胞。
【請求項９８】
ＰＤＸ１陽性背側偏向前腸内胚葉細胞に富んだ細胞集団を産生する方法であって、以下の：
ＰＤＸ１陽性背側偏向前腸内胚葉細胞を産生するようにＰＤＸ１陰性胚体内胚葉細胞集団中の細胞を分化させる工程であって、該ＰＤＸ１陽性背側偏向前腸内胚葉細胞が背側膵芽の細胞に分化することができる複能性細胞である工程
前記ＰＤＸ１陽性背側偏向前腸内胚葉細胞中で発現されるが前記細胞集団中に存在する他の細胞型中では実質的に発現されないマーカーと結合する試薬を該細胞集団に供給する工程；そして
前記細胞集団中に存在する前記他の細胞型から、前記試薬と結合された前記ＰＤＸ１陽性背側偏向前腸内胚葉細胞を分離し、それによりＰＤＸ１陽性背側偏向前腸内胚葉細胞に富んだ細胞集団を産生する工程
を包含する方法。
【請求項９９】
前記マーカーがＡＤＯＲＡ２Ａ、ＣＤ４７、ＥＰＢ４１Ｌ１、ＭＡＧ、ＳＦＲＰ５、ＳＬＣ１６Ａ１０、ＳＬＣ１６Ａ２、ＳＬＣ１Ａ３、ＳＬＣ３０Ａ４、ＳＬＩＣＫ、ＳＬＩＴＲＫ４及びＸＰＲ１から成る群から選択される、請求項９８に記載の方法。
【請求項１００】
前記マーカーがＣＤＨ６、ＧＡＢＲＡ２、ＧＲＩＡ３、ＩＬ６Ｒ、ＫＣＮＪ２、ＬＧＡＬＳ３、ＬＧＡＬＳ３／ＧＡＬＩＧ、ＳＥＲＰＩＮＦ２及びＳＬＣ２７Ａ２から成る群から選択される、請求項９８に記載の方法。
【請求項１０１】
前記分化させる工程がＰＤＸ１陰性胚体内胚葉細胞を含む細胞集団を得ること、背側膵芽の細胞に分化することができる複能性細胞であるＰＤＸ１陽性背側偏向前腸内胚葉細胞へのＰＤＸ１陰性胚体内胚葉細胞の分化を促進するのに十分な量でレチノイドを該細胞集団に供給すること、そしてＰＤＸ１陽性背側偏向前腸内胚葉細胞が形成されるのに十分な時間を与えることをさらに包含し、該ＰＤＸ１陽性背側偏向前腸内胚葉細胞が形成されるのに十分な時間が該細胞集団中のＰＤＸ１陽性背側偏向前腸内胚葉細胞の存在を検出することにより確定される、請求項９８に記載の方法。
【請求項１０２】
前記供給する工程がＢ２７を供給することをさらに包含する、請求項１０１に記載の方法。
【請求項１０３】
検出することがＡＤＯＲＡ２Ａ、ＣＤ４７、ＥＰＢ４１Ｌ１、ＭＡＧ、ＳＦＲＰ５、ＳＬＣ１６Ａ１０、ＳＬＣ１６Ａ２、ＳＬＣ１Ａ３、ＳＬＣ３０Ａ４、ＳＬＩＣＫ、ＳＬＩＴＲＫ４、ＸＰＲ１、ＨＯＸＡ１、ＰＤＥ１１Ａ、ＦＡＭ４９Ａ及びＷＮＴ５Ａから成る群から選択される少なくとも１つのマーカーの発現を検出することを包含する、請求項１０１に記載の方法。
【請求項１０４】
前記細胞の少なくとも約９５％がＰＤＸ１陽性背側偏向前腸内胚葉細胞である、請求項９８に記載の方法。
【請求項１０５】
前記細胞の少なくとも約９８％がＰＤＸ１陽性背側偏向前腸内胚葉細胞である、請求項９８に記載の方法。
【請求項１０６】
前記試薬が抗体である、請求項９８に記載の方法。
【請求項１０７】
前記抗体がＡＤＯＲＡ２Ａ、ＣＤ４７、ＥＰＢ４１Ｌ１、ＭＡＧ、ＳＦＲＰ５、ＳＬＣ１６Ａ１０、ＳＬＣ１６Ａ２、ＳＬＣ１Ａ３、ＳＬＣ３０Ａ４、ＳＬＩＣＫ、ＳＬＩＴＲＫ４、ＸＰＲ１、ＣＤＨ６、ＧＡＢＲＡ２、ＧＲＩＡ３、ＩＬ６Ｒ、ＫＣＮＪ２、ＬＧＡＬＳ３、ＬＧＡＬＳ３／ＧＡＬＩＧ、ＳＥＲＰＩＮＦ２及びＳＬＣ２７Ａ２から成る群から選択される細胞表面ポリペプチドに対する親和性を有する、請求項１０６に記載の方法。
【請求項１０８】
請求項９８に記載の方法により産生されるＰＤＸ１陽性背側偏向前腸内胚葉細胞の富化集団。
【請求項１０９】
ＰＤＸ１陽性腹側偏向前腸内胚葉細胞に富んだ細胞集団を産生する方法であって、以下の：
ＰＤＸ１陽性腹側偏向前腸内胚葉細胞を産生するようにＰＤＸ１陰性胚体内胚葉細胞の集団中の細胞を分化させる工程であって、該ＰＤＸ１陽性腹側偏向前腸内胚葉細胞が腹側膵芽の細胞に分化することができる複能性細胞である工程
前記ＰＤＸ１陽性腹側偏向前腸内胚葉細胞中で発現されるが、前記細胞集団中に存在する他の細胞型中では実質的に発現されないマーカーと結合する試薬を該細胞集団に供給する工程；そして
前記細胞集団中に存在する前記他の細胞型から前記試薬と結合された前記ＰＤＸ１陽性腹側偏向前腸内胚葉細胞を分離し、それによりＰＤＸ１陽性腹側偏向前腸内胚葉細胞に富んだ細胞集団を産生する工程
を包含する方法。
【請求項１１０】
前記マーカーがＣＤＨ６、ＧＡＢＲＡ２、ＧＲＩＡ３、ＩＬ６Ｒ、ＫＣＮＪ２、ＬＧＡＬＳ３、ＬＧＡＬＳ３／ＧＡＬＩＧ、ＳＥＲＰＩＮＦ２及びＳＬＣ２７Ａ２から成る群から選択される、請求項１０９に記載の方法。
【請求項１１１】
前記分化させる工程がＰＤＸ１陰性胚体内胚葉細胞を含む細胞集団を得ること、腹側膵芽の細胞に分化することができる複能性細胞であるＰＤＸ１陽性腹側偏向前腸内胚葉細胞へのＰＤＸ１陰性胚体内胚葉細胞の分化を促進するのに十分な量でＦＧＦ−１０を該細胞集団に供給すること、そしてＰＤＸ１陽性腹側偏向前腸内胚葉細胞が形成されるのに十分な時間を与えることをさらに包含し、該ＰＤＸ１陽性腹側偏向前腸内胚葉細胞が形成されるのに十分な時間が該細胞集団中のＰＤＸ１陽性腹側偏向前腸内胚葉細胞の存在を検出す
ることにより確定される、請求項１０９に記載の方法。
【請求項１１２】
前記供給する工程がＢ２７を供給することをさらに包含する、請求項１１１に記載の方法。
【請求項１１３】
検出することがＣＤＨ６、ＧＡＢＲＡ２、ＧＲＩＡ３、ＩＬ６Ｒ、ＫＣＮＪ２、ＬＧＡＬＳ３、ＬＧＡＬＳ３／ＧＡＬＩＧ、ＳＥＲＰＩＮＦ２、ＳＬＣ２７Ａ２、ＳＥＲＰＩＮＦ２、ＤＵＳＰ９、ＣＤＨ６及びＳＯＸ９から成る群から選択される少なくとも１つのマーカーの発現を検出することを包含する、請求項１１１に記載の方法。
【請求項１１４】
前記細胞の少なくとも約９５％がＰＤＸ１陽性腹側偏向前腸内胚葉細胞である、請求項１０９に記載の方法。
【請求項１１５】
前記細胞の少なくとも約９８％がＰＤＸ１陽性腹側偏向前腸内胚葉細胞である、請求項１０９に記載の方法。
【請求項１１６】
前記試薬が抗体である、請求項１０９に記載の方法。
【請求項１１７】
前記抗体がＣＤＨ６、ＧＡＢＲＡ２、ＧＲＩＡ３、ＩＬ６Ｒ、ＫＣＮＪ２、ＬＧＡＬＳ３、ＬＧＡＬＳ３／ＧＡＬＩＧ、ＳＥＲＰＩＮＦ２及びＳＬＣ２７Ａ２から成る群から選択される細胞表面ポリペプチドに対する親和性を有する、請求項１１６に記載の方法。
【請求項１１８】
請求項１０９に記載の方法により産生されるＰＤＸ１陽性腹側偏向前腸内胚葉細胞の富化集団。
【請求項１１９】
ＰＤＸ１陽性背側偏向前腸内胚葉細胞に富んだ細胞集団を産生する方法であって、以下の：
多能性細胞の集団を得る工程であって、該多能性細胞集団の少なくとも１つの細胞がＡＤＯＲＡ２Ａ、ＣＤ４７、ＥＰＢ４１Ｌ１、ＭＡＧ、ＳＦＲＰ５、ＳＬＣ１６Ａ１０、ＳＬＣ１６Ａ２、ＳＬＣ１Ａ３、ＳＬＣ３０Ａ４、ＳＬＩＣＫ、ＳＬＩＴＲＫ４、ＸＰＲ１、ＨＯＸＡ１、ＰＤＥ１１Ａ、ＦＡＭ４９Ａ及びＷＮＴ５Ａから成る群から選択されるマーカー遺伝子のいずれか１つのプロモーターの制御下にある核酸の少なくとも１つのコピーを含み、該核酸は蛍光タンパク質をコードする配列又はその生物学的活性断片を含む工程；
ＰＤＸ１陽性背側偏向前腸内胚葉細胞を産生するように前記多能性細胞を分化させる工程であって、該ＰＤＸ１陽性背側偏向前腸内胚葉細胞は背側膵芽の細胞に分化することができる複能性細胞である工程；そして
前記細胞集団中に存在する他の細胞型から前記ＰＤＸ１陽性背側偏向前腸内胚葉細胞を分離する工程
を包含する方法。
【請求項１２０】
前記富化細胞集団が少なくとも約９５％のＰＤＸ１陽性背側偏向前腸内胚葉細胞を含む、請求項１１９に記載の方法。
【請求項１２１】
前記富化細胞集団が少なくとも約９８％のＰＤＸ１陽性背側偏向前腸内胚葉細胞を含む、請求項１１９に記載の方法。
【請求項１２２】
前記分化させる工程がＰＤＸ１陰性胚体内胚葉細胞への前記多能性細胞の分化を促進するのに十分な量でＴＧＦβスーパーファミリーの少なくとも１つの増殖因子を前記多能性細胞集団に供給すること、そしてＰＤＸ１陽性背側偏向前腸内胚葉細胞へのＰＤＸ１陰性
胚体内胚葉細胞の分化を促進するのに十分な量でレチノイドを該ＰＤＸ１陰性胚体内胚葉細胞に供給することをさらに包含する、請求項１１９に記載の方法。
【請求項１２３】
前記レチノイドがＲＡである、請求項１２２に記載の方法。
【請求項１２４】
前記供給する工程がＢ２７を供給することをさらに包含する、請求項１２３に記載の方法。
【請求項１２５】
前記蛍光タンパク質が緑色蛍光タンパク質（ＧＦＰ）である、請求項１１９に記載の方法。
【請求項１２６】
前記ＰＤＸ１陽性背側偏向前腸内胚葉細胞が蛍光活性化細胞選別器（ＦＡＣＳ）により前記細胞集団中に存在する他の細胞型から分離される、請求項１１９に記載の方法。
【請求項１２７】
請求項１１９に記載の方法により産生されるＰＤＸ１陽性背側偏向前腸内胚葉細胞の富化集団。
【請求項１２８】
ＰＤＸ１陽性腹側偏向前腸内胚葉細胞に富んだ細胞集団を産生する方法であって、以下の：
多能性細胞の集団を得る工程であって、該多能性細胞集団の少なくとも１つの細胞はＣＤＨ６、ＧＡＢＲＡ２、ＧＲＩＡ３、ＩＬ６Ｒ、ＫＣＮＪ２、ＬＧＡＬＳ３、ＬＧＡＬＳ３／ＧＡＬＩＧ、ＳＥＲＰＩＮＦ２、ＳＬＣ２７Ａ２、ＳＥＲＰＩＮＦ２、ＤＵＳＰ９、ＣＤＨ６及びＳＯＸ９から成る群から選択されるマーカー遺伝子のいずれか１つのプロモーターの制御下にある核酸の少なくとも１つのコピーを含み、該核酸は蛍光タンパク質をコードする配列又はその生物学的活性断片を含む工程；
ＰＤＸ１陽性腹側偏向前腸内胚葉細胞を産生するように前記多能性細胞を分化させる工程であって、該ＰＤＸ１陽性腹側偏向前腸内胚葉細胞は腹側膵芽の細胞に分化することができる複能性細胞である工程；そして
非腹側偏向前腸内胚葉細胞から前記ＰＤＸ１陽性腹側偏向前腸内胚葉細胞を分離する工程
を包含する方法。
【請求項１２９】
前記富化細胞集団が少なくとも約９５％のＰＤＸ１陽性腹側偏向前腸内胚葉細胞を含む、請求項１２８に記載の方法。
【請求項１３０】
前記富化細胞集団が少なくとも約９８％のＰＤＸ１陽性腹側偏向前腸内胚葉細胞を含む、請求項１２８に記載の方法。
【請求項１３１】
前記分化させる工程がＰＤＸ１陰性胚体内胚葉細胞への前記多能性細胞の分化を促進するために十分な量でＴＧＦβスーパーファミリーの少なくとも１つの増殖因子を前記多能性細胞集団に供給すること、そしてＰＤＸ１陽性腹側偏向前腸内胚葉細胞へのＰＤＸ１陰性胚体内胚葉細胞の分化を促進するのに十分な量でＦＧＦ−１０を該ＰＤＸ１陰性胚体内胚葉細胞に供給することをさらに包含する、請求項１２８に記載の方法。
【請求項１３２】
前記供給する工程がＢ２７を供給することをさらに包含する、請求項１２８に記載の方法。
【請求項１３３】
前記蛍光タンパク質が緑色蛍光タンパク質（ＧＦＰ）である、請求項１２８に記載の方法。
【請求項１３４】
前記ＰＤＸ１陽性背側偏向前腸内胚葉細胞が蛍光活性化細胞選別器（ＦＡＣＳ）により前記細胞集団中に存在する他の細胞型から分離される、請求項１２８に記載の方法。
【請求項１３５】
請求項１２８に記載の方法により産生されるＰＤＸ１陽性背側偏向前腸内胚葉細胞の富化集団。
【請求項１３６】
ヒト細胞を含む細胞集団中のヒトＰＤＸ１陽性背側偏向前腸内胚葉細胞の分化を促進することができる分化因子を同定する方法であって、以下の：
ヒトＰＤＸ１陽性背側偏向前腸内胚葉細胞を含む細胞集団を得る工程；
前記細胞集団に候補分化因子を供給する工程；
第１の時点での前記細胞集団中のマーカーの発現を決定する工程；
第２の時点での前記細胞集団中の同一マーカーの発現を確定する工程であって、該第２の時点は前記第１の時点の次に起こり、そして該第２の時点は前記候補分化因子を該細胞集団に供給することの後である工程；そして
前記第２の時点での前記細胞集団中のマーカーの発現が前記第１の時点での前記細胞集団中のマーカーの発現と比較した場合に増大又は低減されるかを判定する工程であって、該細胞集団中の該マーカーの発現の増大又は低減は候補分化因子が前記ヒトＰＤＸ１陽性背側偏向前腸内胚葉細胞の分化を促進することができることを示す工程
を包含する方法。
【請求項１３７】
前記マーカーがＡＤＯＲＡ２Ａ、ＣＤ４７、ＥＰＢ４１Ｌ１、ＭＡＧ、ＳＦＲＰ５、ＳＬＣ１６Ａ１０、ＳＬＣ１６Ａ２、ＳＬＣ１Ａ３、ＳＬＣ３０Ａ４、ＳＬＩＣＫ、ＳＬＩＴＲＫ４、ＸＰＲ１、ＨＯＸＡ１、ＰＤＥ１１Ａ、ＦＡＭ４９Ａ及びＷＮＴ５Ａから成る群から選択される、請求項１３６に記載の方法。
【請求項１３８】
前記ヒトＰＤＸ１陽性背側偏向前腸内胚葉細胞が前記細胞集団中のヒト細胞の少なくとも約１０％を含む、請求項１３６に記載の方法。
【請求項１３９】
ヒトフィーダー細胞が前記細胞集団中に存在し、そして該フィーダー細胞以外のヒト細胞の少なくとも約１０％がＰＤＸ１陽性背側偏向前腸内胚葉細胞である、請求項１３６に記載の方法。
【請求項１４０】
前記ヒトＰＤＸ１陽性背側偏向前腸内胚葉細胞が前記細胞集団中のヒト細胞の少なくとも約９０％を含む、請求項１３６に記載の方法。
【請求項１４１】
前記ヒトフィーダー細胞が前記細胞集団中に存在し、そして前記フィーダー細胞以外のヒト細胞の少なくとも約９０％がＰＤＸ１陽性背側偏向前腸内胚葉細胞である、請求項１３６に記載の方法。
【請求項１４２】
前記ヒトＰＤＸ１陽性背側偏向前腸内胚葉細胞が背側膵芽の細胞に分化することができる、請求項１３６に記載の方法。
【請求項１４３】
前記ヒト胚体内胚葉細胞が前記候補分化因子に応答して膵臓前駆体細胞に分化する、請求項１３６に記載の方法。
【請求項１４４】
前記第１の時点が、前記候補分化因子を前記細胞集団に供給することより前である、請求項１３６に記載の方法。
【請求項１４５】
前記第１の時点が、前記候補分化因子を前記細胞集団に供給するのとほぼ同時である、請求項１３６に記載の方法。
【請求項１４６】
前記第１の時点が、前記候補分化因子を前記細胞集団に供給することの後である、請求項１３６に記載の方法。
【請求項１４７】
前記マーカーの発現が増大される、請求項１３６に記載の方法。
【請求項１４８】
前記マーカーの発現が減少される、請求項１３６に記載の方法。
【請求項１４９】
前記マーカーの発現が、定量的ポリメラーゼ連鎖反応（Ｑ−ＰＣＲ）により確定される、請求項１３６に記載の方法。
【請求項１５０】
前記マーカーの発現が、免疫細胞化学により確定される、請求項１３６に記載の方法。
【請求項１５１】
前記分化因子が小分子を含む、請求項１３６に記載の方法。
【請求項１５２】
前記分化因子がポリペプチドを含む、請求項１３６に記載の方法。
【請求項１５３】
前記分化因子が増殖因子を含む、請求項１３６に記載の方法。
【請求項１５４】
ヒト細胞を含む細胞集団中のヒトＰＤＸ１陽性腹側偏向の前腸内胚葉細胞の分化を促進することができる分化因子を同定する方法であって、
ヒトＰＤＸ１陽性腹側偏向前腸内胚葉細胞を含む細胞集団を得る工程；
候補分化因子を前記細胞集団に供給する工程；
第１の時点で前記細胞集団中のマーカーの発現を確定する工程；
第２の時点で前記細胞集団中の同一マーカーの発現を確定する工程であって、該第２の時点が前記第１の時点の後であり、且つ該第２の時点が該細胞集団に前記候補分化因子を供給することの後である、工程；そして
前記第２の時点での前記細胞集団中の前記マーカーの発現が、前記第１の時点での該細胞集団中の該マーカーの発現と比較して増大又は低減されているかを判定する工程であって、該細胞集団中の該マーカーの発現の増大又は低減は、前記候補分化因子が、前記ヒトＰＤＸ１陽性腹側偏向前腸内胚葉細胞の分化を促進することができることを示す方法。
【請求項１５５】
前記マーカーがＣＤＨ６、ＧＡＢＲＡ２、ＧＲＩＡ３、ＩＬ６Ｒ、ＫＣＮＪ２、ＬＧＡＬＳ３、ＬＧＡＬＳ３／ＧＡＬＩＧ、ＳＥＲＰＩＮＦ２、ＳＬＣ２７Ａ２、ＳＥＲＰＩＮＦ２、ＤＵＳＰ９、ＣＤＨ６及びＳＯＸ９から成る群から選択される、請求項１５４に記載の方法。
【請求項１５６】
前記ヒトＰＤＸ１陽性腹側偏向前腸内胚葉細胞が前記細胞集団中のヒト細胞の少なくとも約１０％を含む、請求項１５４に記載の方法。
【請求項１５７】
ヒトフィーダー細胞が前記細胞集団中に存在し、そして該フィーダー細胞以外のヒト細胞の少なくとも約１０％がＰＤＸ１陽性腹側偏向前腸内胚葉細胞である、請求項１５４に記載の方法。
【請求項１５８】
前記ヒトＰＤＸ１陽性腹側偏向前腸内胚葉細胞が前記細胞集団中のヒト細胞の少なくとも約９０％を含む、請求項１５４に記載の方法。
【請求項１５９】
前記ヒトフィーダー細胞が前記細胞集団中に存在し、そして該フィーダー細胞以外のヒト細胞の少なくとも約９０％がＰＤＸ１陽性腹側偏向前腸内胚葉細胞である、請求項１５４に記載の方法。
【請求項１６０】
前記ヒトＰＤＸ１陽性腹側偏向前腸内胚葉細胞が腹側膵芽の細胞に分化することができる、請求項１５４に記載の方法。
【請求項１６１】
前記ヒト胚体内胚葉細胞が、前記候補分化因子に応答して、膵臓前駆体細胞に分化する、請求項１５４に記載の方法。
【請求項１６２】
前記第１の時点が、前記候補分化因子を前記細胞集団に供給することより前である、請求項１５４に記載の方法。
【請求項１６３】
前記第１の時点が、前記候補分化因子を前記細胞集団に供給するのとほぼ同時である、請求項１５４に記載の方法。
【請求項１６４】
前記第１の時点が、前記候補分化因子を前記細胞集団に供給することの後である、請求項１５４に記載の方法。
【請求項１６５】
前記マーカーの発現が増大される、請求項１５４に記載の方法。
【請求項１６６】
前記マーカーの発現が低減される、請求項１５４に記載の方法。
【請求項１６７】
前記マーカーの発現が、定量的ポリメラーゼ連鎖反応（Ｑ−ＰＣＲ）により確定される、請求項１５４に記載の方法。
【請求項１６８】
前記マーカーの発現が、免疫細胞化学により確定される、請求項１５４に記載の方法。
【請求項１６９】
前記分化因子が小分子を含む、請求項１５４に記載の方法。
【請求項１７０】
前記分化因子がポリペプチドを含む、請求項１５４に記載の方法。
【請求項１７１】
前記分化因子が増殖因子を含む、請求項１５４に記載の方法。
【請求項１】
ヒト細胞を含む細胞培養物であって、該ヒト細胞のうちの少なくとも約２６％がＣＤＨ６、ＧＡＢＲＡ２、ＧＲＩＡ３、ＩＬ６Ｒ、ＫＣＮＪ２、ＬＧＡＬＳ３、ＬＧＡＬＳ３／ＧＡＬＩＧ、ＳＥＲＰＩＮＦ２、ＳＬＣ２７Ａ２、ＳＥＲＰＩＮＦ２、ＤＵＳＰ９、ＣＤＨ６及びＳＯＸ９から成る群から選択される少なくとも１つのマーカーを発現する膵臓−十二指腸ホメオボックス因子−１（ＰＤＸ１）陽性背側偏向前腸内胚葉細胞であり、該ＰＤＸ１陽性背側偏向前腸内胚葉細胞が背側膵芽の細胞に分化することができる複能性細胞である細胞培養物。
【請求項２】
前記マーカーがＳＥＲＰＩＮＦ２、ＤＵＳＰ９、ＣＤＨ６及びＳＯＸ９から成る群から選択される、請求項１に記載の細胞培養物。
【請求項３】
前記マーカーがＣＤＨ６、ＧＡＢＲＡ２、ＧＲＩＡ３、ＩＬ６Ｒ、ＫＣＮＪ２、ＬＧＡＬＳ３、ＬＧＡＬＳ３／ＧＡＬＩＧ、ＳＥＲＰＩＮＦ２及びＳＬＣ２７Ａ２から成る群から選択される細胞表面マーカーである、請求項１に記載の細胞培養物。
【請求項４】
前記ＰＤＸ１陽性背側偏向前腸内胚葉細胞がＡＤＯＲＡ２Ａ、ＣＤ４７、ＥＰＢ４１Ｌ１、ＭＡＧ、ＳＦＲＰ５、ＳＬＣ１６Ａ１０、ＳＬＣ１６Ａ２、ＳＬＣ１Ａ３、ＳＬＣ３０Ａ４、ＳＬＩＣＫ、ＳＬＩＴＲＫ４、ＸＰＲ１、ＨＯＸＡ１、ＰＤＥ１１Ａ、ＦＡＭ４９Ａ及びＷＮＴ５Ａから成る群から選択される少なくとも１つのマーカーを発現する、請求項１に記載の細胞培養物。
【請求項５】
前記マーカーがＨＯＸＡ１、ＰＤＥ１１Ａ、ＦＡＭ４９Ａ及びＷＮＴ５Ａから成る群から選択される、請求項４に記載の細胞培養物。
【請求項６】
前記マーカーがＡＤＯＲＡ２Ａ、ＣＤ４７、ＥＰＢ４１Ｌ１、ＭＡＧ、ＳＦＲＰ５、ＳＬＣ１６Ａ１０、ＳＬＣ１６Ａ２、ＳＬＣ１Ａ３、ＳＬＣ３０Ａ４、ＳＬＩＣＫ、ＳＬＩＴＲＫ４及びＸＰＲ１から成る群から選択される細胞表面マーカーである、請求項４に記載の細胞培養物。
【請求項７】
前記ヒト細胞の少なくとも３０％がＰＤＸ１陽性背側偏向前腸内胚葉細胞である、請求項１に記載の細胞培養物。
【請求項８】
前記ヒト細胞の少なくとも４０％がＰＤＸ１陽性背側偏向前腸内胚葉細胞である、請求項１に記載の細胞培養物。
【請求項９】
前記ヒト細胞の少なくとも５０％がＰＤＸ１陽性背側偏向前腸内胚葉細胞である、請求項１に記載の細胞培養物。
【請求項１０】
前記ヒト細胞の少なくとも６０％がＰＤＸ１陽性背側偏向前腸内胚葉細胞である、請求項１に記載の細胞培養物。
【請求項１１】
前記ヒト細胞の少なくとも７５％がＰＤＸ１陽性背側偏向前腸内胚葉細胞である、請求項１に記載の細胞培養物。
【請求項１２】
ヒトフィーダー細胞が前記培養物中に存在し、そして該ヒトフィーダー細胞以外のヒト細胞の少なくとも約２％がＰＤＸ１陽性背側偏向前腸内胚葉細胞である、請求項１に記載の細胞培養物。
【請求項１３】
ＰＤＸ１の発現が前記ＰＤＸ１陽性背側偏向前腸内胚葉細胞中のα−フェトプロテイン（ＡＦＰ）、ＳＯＸ７、ＳＯＸ１、ＺＩＣ１及びＮＦＭから成る群から選択されるマーカーの発現より大きい、請求項１に記載の細胞培養物。
【請求項１４】
前記細胞培養物が臓側内胚葉細胞、壁側内胚葉細胞及び神経細胞から成る群から選択される細胞を実質的に含有しない、請求項１に記載の細胞培養物。
【請求項１５】
レチノイドをさらに含む、請求項１に記載の細胞培養物。
【請求項１６】
前記レチノイドがレチノイン酸（ＲＡ）である、請求項１５に記載の細胞培養物。
【請求項１７】
Ｂ２７をさらに含む、請求項１６に記載の細胞培養物。
【請求項１８】
ヒト細胞を含む細胞培養物であって、該ヒト細胞のうちの少なくとも約２％がＣＤＨ６、ＧＡＢＲＡ２、ＧＲＩＡ３、ＩＬ６Ｒ、ＫＣＮＪ２、ＬＧＡＬＳ３、ＬＧＡＬＳ３／ＧＡＬＩＧ、ＳＥＲＰＩＮＦ２、ＳＬＣ２７Ａ２、ＳＥＲＰＩＮＦ２、ＤＵＳＰ９、ＣＤＨ６及びＳＯＸ９から成る群から選択される少なくとも１つのマーカーを発現する膵臓−十二指腸ホメオボックス因子−１（ＰＤＸ１）陽性腹側偏向（ventrally-biased）前腸内胚葉細胞であり、該ＰＤＸ１陽性腹側偏向前腸内胚葉細胞が腹側膵芽の細胞に分化することができる複能性細胞である、細胞培養物。
【請求項１９】
前記マーカーがＳＥＲＰＩＮＦ２、ＤＵＳＰ９、ＣＤＨ６及びＳＯＸ９から成る群から選択される、請求項１８に記載の細胞培養物。
【請求項２０】
前記マーカーがＣＤＨ６、ＧＡＢＲＡ２、ＧＲＩＡ３、ＩＬ６Ｒ、ＫＣＮＪ２、ＬＧＡＬＳ３、ＬＧＡＬＳ３／ＧＡＬＩＧ、ＳＥＲＰＩＮＦ２及びＳＬＣ２７Ａ２から成る群から選択される細胞表面マーカーである、請求項１８に記載の細胞培養物。
【請求項２１】
前記ＰＤＸ１陽性腹側偏向前腸内胚葉細胞がＡＤＯＲＡ２Ａ、ＣＤ４７、ＥＰＢ４１Ｌ１、ＭＡＧ、ＳＦＲＰ５、ＳＬＣ１６Ａ１０、ＳＬＣ１６Ａ２、ＳＬＣ１Ａ３、ＳＬＣ３０Ａ４、ＳＬＩＣＫ、ＳＬＩＴＲＫ４、ＸＰＲ１、ＨＯＸＡ１、ＰＤＥ１１Ａ、ＦＡＭ４９Ａ及びＷＮＴ５Ａから成る群から選択される1つ又は複数のマーカーを実質的に発現しない、請求項１８に記載の細胞培養物。
【請求項２２】
前記ヒト細胞の少なくとも５％がＰＤＸ１陽性腹側偏向前腸内胚葉細胞である、請求項１８に記載の細胞培養物。
【請求項２３】
前記ヒト細胞の少なくとも１０％がＰＤＸ１陽性腹側偏向前腸内胚葉細胞である、請求項１８に記載の細胞培養物。
【請求項２４】
前記ヒト細胞の少なくとも２５％がＰＤＸ１陽性腹側偏向前腸内胚葉細胞である、請求項１８に記載の細胞培養物。
【請求項２５】
前記ヒト細胞の少なくとも５０％がＰＤＸ１陽性腹側偏向前腸内胚葉細胞である、請求項１８に記載の細胞培養物。
【請求項２６】
前記ヒト細胞の少なくとも７５％がＰＤＸ１陽性腹側偏向前腸内胚葉細胞である、請求項１８に記載の細胞培養物。
【請求項２７】
ヒトフィーダー細胞が前記培養物中に存在し、そして該ヒトフィーダー細胞以外のヒト
細胞の少なくとも約２％がＰＤＸ１陽性腹側偏向前腸内胚葉細胞である、請求項１８に記載の細胞培養物。
【請求項２８】
ＰＤＸ１の発現が前記ＰＤＸ１陽性腹側偏向前腸内胚葉細胞中のα−フェトプロテイン（ＡＦＰ）、ＳＯＸ７、ＳＯＸ１、ＺＩＣ１及びＮＦＭから成る群から選択されるマーカーの発現より大きい、請求項１８に記載の細胞培養物。
【請求項２９】
前記細胞培養物が臓側内胚葉細胞、壁側内胚葉細胞及び神経細胞から成る群から選択される細胞を実質的に含有しない、請求項１８に記載の細胞培養物。
【請求項３０】
レチノイドをさらに含む、請求項１８に記載の細胞培養物。
【請求項３１】
前記レチノイドがレチノイン酸（ＲＡ）である、請求項３０に記載の細胞培養物。
【請求項３２】
Ｂ２７をさらに含む、請求項３１に記載の細胞培養物。
【請求項３３】
細胞を含む細胞集団であって、該細胞のうちの少なくとも約９０％がＣＤＨ６、ＧＡＢＲＡ２、ＧＲＩＡ３、ＩＬ６Ｒ、ＫＣＮＪ２、ＬＧＡＬＳ３、ＬＧＡＬＳ３／ＧＡＬＩＧ、ＳＥＲＰＩＮＦ２、ＳＬＣ２７Ａ２、ＳＥＲＰＩＮＦ２、ＤＵＳＰ９、ＣＤＨ６及びＳＯＸ９から成る群から選択される少なくとも１つのマーカーを発現するヒトＰＤＸ１陽性背側偏向前腸内胚葉細胞であり、該ＰＤＸ１陽性背側偏向前腸内胚葉細胞が背側膵芽の細胞に分化することができる複能性細胞である細胞集団。
【請求項３４】
前記マーカーがＳＥＲＰＩＮＦ２、ＤＵＳＰ９、ＣＤＨ６及びＳＯＸ９から成る群から選択される、請求項３３に記載の細胞集団。
【請求項３５】
前記マーカーがＣＤＨ６、ＧＡＢＲＡ２、ＧＲＩＡ３、ＩＬ６Ｒ、ＫＣＮＪ２、ＬＧＡＬＳ３、ＬＧＡＬＳ３／ＧＡＬＩＧ、ＳＥＲＰＩＮＦ２及びＳＬＣ２７Ａ２から成る群から選択される細胞表面マーカーである、請求項３３に記載の細胞集団。
【請求項３６】
前記ＰＤＸ１陽性背側偏向前腸内胚葉細胞がＡＤＯＲＡ２Ａ、ＣＤ４７、ＥＰＢ４１Ｌ１、ＭＡＧ、ＳＦＲＰ５、ＳＬＣ１６Ａ１０、ＳＬＣ１６Ａ２、ＳＬＣ１Ａ３、ＳＬＣ３０Ａ４、ＳＬＩＣＫ、ＳＬＩＴＲＫ４、ＸＰＲ１、ＨＯＸＡ１、ＰＤＥ１１Ａ、ＦＡＭ４９Ａ及びＷＮＴ５Ａから成る群から選択される少なくとも１つのマーカーを発現する、請求項３３に記載の細胞集団。
【請求項３７】
前記マーカーがＨＯＸＡ１、ＰＤＥ１１Ａ、ＦＡＭ４９Ａ及びＷＮＴ５Ａから成る群から選択される、請求項３６に記載の細胞集団。
【請求項３８】
前記マーカーがＡＤＯＲＡ２Ａ、ＣＤ４７、ＥＰＢ４１Ｌ１、ＭＡＧ、ＳＦＲＰ５、ＳＬＣ１６Ａ１０、ＳＬＣ１６Ａ２、ＳＬＣ１Ａ３、ＳＬＣ３０Ａ４、ＳＬＩＣＫ、ＳＬＩＴＲＫ４及びＸＰＲ１から成る群から選択される細胞表面マーカーである、請求項３６に記載の細胞集団。
【請求項３９】
前記細胞の少なくとも約９５％がＰＤＸ１陽性背側偏向前腸内胚葉細胞である、請求項３３に記載の細胞集団。
【請求項４０】
前記細胞の少なくとも約９８％がＰＤＸ１陽性背側偏向前腸内胚葉細胞である、請求項３３に記載の細胞集団。
【請求項４１】
ＰＤＸ１の発現が前記ＰＤＸ１陽性背側偏向前腸内胚葉細胞中のＡＦＰ、ＳＯＸ７、ＳＯＸ１、ＺＩＣ１及びＮＦＭから成る群から選択されるマーカーの発現より大きい、請求項３３に記載の細胞集団。
【請求項４２】
細胞を含む細胞集団であって、該細胞のうちの少なくとも約９０％がＣＤＨ６、ＧＡＢＲＡ２、ＧＲＩＡ３、ＩＬ６Ｒ、ＫＣＮＪ２、ＬＧＡＬＳ３、ＬＧＡＬＳ３／ＧＡＬＩＧ、ＳＥＲＰＩＮＦ２、ＳＬＣ２７Ａ２、ＳＥＲＰＩＮＦ２、ＤＵＳＰ９、ＣＤＨ６及びＳＯＸ９から成る群から選択される少なくとも１つのマーカーを発現するヒトＰＤＸ１陽性腹側偏向前腸内胚葉細胞であり、該ＰＤＸ１陽性腹側偏向前腸内胚葉細胞が腹側膵芽の細胞に分化することができる複能性細胞である細胞集団。
【請求項４３】
前記マーカーがＳＥＲＰＩＮＦ２、ＤＵＳＰ９、ＣＤＨ６及びＳＯＸ９から成る群から選択される、請求項４２に記載の細胞集団。
【請求項４４】
前記マーカーがＣＤＨ６、ＧＡＢＲＡ２、ＧＲＩＡ３、ＩＬ６Ｒ、ＫＣＮＪ２、ＬＧＡＬＳ３、ＬＧＡＬＳ３／ＧＡＬＩＧ、ＳＥＲＰＩＮＦ２及びＳＬＣ２７Ａ２から成る群から選択される細胞表面マーカーである、請求項４２に記載の細胞集団。
【請求項４５】
前記ＰＤＸ１陽性腹側偏向前腸内胚葉細胞がＡＤＯＲＡ２Ａ、ＣＤ４７、ＥＰＢ４１Ｌ１、ＭＡＧ、ＳＦＲＰ５、ＳＬＣ１６Ａ１０、ＳＬＣ１６Ａ２、ＳＬＣ１Ａ３、ＳＬＣ３０Ａ４、ＳＬＩＣＫ、ＳＬＩＴＲＫ４、ＸＰＲ１、ＨＯＸＡ１、ＰＤＥ１１Ａ、ＦＡＭ４９Ａ及びＷＮＴ５Ａから成る群から選択される1つ又は複数のマーカーを実質的に発現しない、請求項４２に記載の細胞集団。
【請求項４６】
前記細胞の少なくとも約９５％がＰＤＸ１陽性腹側偏向前腸内胚葉細胞である、請求項４２に記載の細胞集団。
【請求項４７】
前記細胞の少なくとも約９８％がＰＤＸ１陽性腹側偏向前腸内胚葉細胞である、請求項４２に記載の細胞集団。
【請求項４８】
ＰＤＸ１の発現が前記ＰＤＸ１陽性腹側偏向前腸内胚葉細胞中のＡＦＰ、ＳＯＸ７、ＳＯＸ１、ＺＩＣ１及びＮＦＭから成る群から選択されるマーカーの発現より大きい、請求項４２に記載の細胞集団。
【請求項４９】
ＰＤＸ１陽性背側偏向前腸内胚葉細胞を産生する方法であって、以下の：
ＰＤＸ１陰性胚体内胚葉細胞を含む細胞集団を得る工程；そして
ＣＤＨ６、ＧＡＢＲＡ２、ＧＲＩＡ３、ＩＬ６Ｒ、ＫＣＮＪ２、ＬＧＡＬＳ３、ＬＧＡＬＳ３／ＧＡＬＩＧ、ＳＥＲＰＩＮＦ２、ＳＬＣ２７Ａ２、ＳＥＲＰＩＮＦ２、ＤＵＳＰ９、ＣＤＨ６及びＳＯＸ９から成る群から選択される少なくとも１つのマーカーを発現するＰＤＸ１陽性背側偏向前腸内胚葉細胞への前記ＰＤＸ１陰性胚体内胚葉細胞集団の少なくとも約２６％の分化を促進するのに十分な量でレチノイドを前記細胞集団に供給する工程であって、該ＰＤＸ１陽性背側偏向前腸内胚葉細胞が背側膵芽の細胞に分化することができる複能性細胞である工程
を包含する方法。
【請求項５０】
前記ＰＤＸ１陽性背側偏向前腸内胚葉細胞がＡＤＯＲＡ２Ａ、ＣＤ４７、ＥＰＢ４１Ｌ１、ＭＡＧ、ＳＦＲＰ５、ＳＬＣ１６Ａ１０、ＳＬＣ１６Ａ２、ＳＬＣ１Ａ３、ＳＬＣ３０Ａ４、ＳＬＩＣＫ、ＳＬＩＴＲＫ４、ＸＰＲ１、ＨＯＸＡ１、ＰＤＥ１１Ａ、ＦＡＭ４９Ａ及びＷＮＴ５Ａから成る群から選択される少なくとも１つのマーカーも発現する、請求項４９に記載の方法。
【請求項５１】
ＰＤＸ１陽性背側偏向前腸内胚葉細胞が形成されるのに十分な時間を与える工程をさらに包含し、該ＰＤＸ１陽性背側偏向前腸内胚葉細胞が形成されるのに十分な時間が、前記細胞集団中の背側偏向前腸内胚葉細胞中のＡＤＯＲＡ２Ａ、ＣＤ４７、ＥＰＢ４１Ｌ１、ＭＡＧ、ＳＦＲＰ５、ＳＬＣ１６Ａ１０、ＳＬＣ１６Ａ２、ＳＬＣ１Ａ３、ＳＬＣ３０Ａ４、ＳＬＩＣＫ、ＳＬＩＴＲＫ４、ＸＰＲ１、ＨＯＸＡ１、ＰＤＥ１１Ａ、ＦＡＭ４９Ａ及びＷＮＴ５Ａから成る群から選択されるマーカーの存在を検出することにより確定される、請求項５０に記載の方法。
【請求項５２】
ＣＤＨ６、ＧＡＢＲＡ２、ＧＲＩＡ３、ＩＬ６Ｒ、ＫＣＮＪ２、ＬＧＡＬＳ３、ＬＧＡＬＳ３／ＧＡＬＩＧ、ＳＥＲＰＩＮＦ２、ＳＬＣ２７Ａ２、ＳＥＲＰＩＮＦ２、ＤＵＳＰ９、ＣＤＨ６及びＳＯＸ９から成る群から選択される前記マーカー、或いはＡＤＯＲＡ２Ａ、ＣＤ４７、ＥＰＢ４１Ｌ１、ＭＡＧ、ＳＦＲＰ５、ＳＬＣ１６Ａ１０、ＳＬＣ１６Ａ２、ＳＬＣ１Ａ３、ＳＬＣ３０Ａ４、ＳＬＩＣＫ、ＳＬＩＴＲＫ４、ＸＰＲ１、ＨＯＸＡ１、ＰＤＥ１１Ａ、ＦＡＭ４９Ａ及びＷＮＴ５Ａから成る群から選択される前記マーカーの発現が定量的ポリメラーゼ連鎖反応（Ｑ−ＰＣＲ）により確定される、請求項５０に記載の方法。
【請求項５３】
ＣＤＨ６、ＧＡＢＲＡ２、ＧＲＩＡ３、ＩＬ６Ｒ、ＫＣＮＪ２、ＬＧＡＬＳ３、ＬＧＡＬＳ３／ＧＡＬＩＧ、ＳＥＲＰＩＮＦ２、ＳＬＣ２７Ａ２、ＳＥＲＰＩＮＦ２、ＤＵＳＰ９、ＣＤＨ６及びＳＯＸ９から成る群から選択される前記マーカー、或いはＡＤＯＲＡ２Ａ、ＣＤ４７、ＥＰＢ４１Ｌ１、ＭＡＧ、ＳＦＲＰ５、ＳＬＣ１６Ａ１０、ＳＬＣ１６Ａ２、ＳＬＣ１Ａ３、ＳＬＣ３０Ａ４、ＳＬＩＣＫ、ＳＬＩＴＲＫ４、ＸＰＲ１、ＨＯＸＡ１、ＰＤＥ１１Ａ、ＦＡＭ４９Ａ及びＷＮＴ５Ａから成る群から選択される、前記マーカーの発現が免疫細胞化学により確定される、請求項５０に記載の方法。
【請求項５４】
ＰＤＸ１の発現が前記ＰＤＸ１陽性背側偏向前腸内胚葉細胞中のα−フェトプロテイン（ＡＦＰ）、ＳＯＸ７、ＳＯＸ１、ＺＩＣ１及びＮＦＭから成る群から選択されるマーカーの発現より大きい、請求項４９に記載の方法。
【請求項５５】
前記レチノイドがＲＡである、請求項４９に記載の方法。
【請求項５６】
ＲＡが約０．５μＭ〜約５０μＭの範囲の濃度で供給される、請求項５５に記載の方法。
【請求項５７】
ＲＡが約１μＭ〜約２０μＭの範囲の濃度で供給される、請求項５６に記載の方法。
【請求項５８】
ＲＡが約２μＭの濃度で供給される、請求項５７に記載の方法。
【請求項５９】
前記培養物が約５日齢である場合にＲＡが供給される、請求項５５に記載の方法。
【請求項６０】
前記培養物にＢ２７を供給することをさらに包含する、請求項４９に記載の方法。
【請求項６１】
前記Ｂ２７が総培地の約０．１％〜約２０％の範囲の濃度で供給される、請求項６０に記載の方法。
【請求項６２】
Ｂ２７が総培地の約０．５％〜約２％の範囲の濃度で供給される、請求項６１に記載の方法。
【請求項６３】
Ｂ２７が総培地の約０．５％の濃度で供給される、請求項６２に記載の方法。
【請求項６４】
Ｂ２７が前記レチノイドとほぼ同時に供給される、請求項６０に記載の方法。
【請求項６５】
前記培養物にアクチビンＡを供給することをさらに包含する、請求項４９に記載の方法。
【請求項６６】
アクチビンＡが約１０ｎｇ／ｍｌ〜約２００ｎｇ／ｍｌの範囲の濃度で供給される、請求項６５に記載の方法。
【請求項６７】
アクチビンＡが約２０ｎｇ／ｍｌ〜約１００ｎｇ／ｍｌの範囲の濃度で供給される、請求項６６に記載の方法。
【請求項６８】
アクチビンＡが約２５ｎｇ／ｍｌの濃度で供給される、請求項６７に記載の方法。
【請求項６９】
前記ＰＤＸ１陽性背側偏向前腸内胚葉細胞がＣＭＲＬ培地中で増殖される、請求項４９に記載の方法。
【請求項７０】
前記ＣＭＲＬ培地が約２μＭのＲＡ、約２５ｎｇ／ｍｌのアクチビンＡ及び総培地の約０．５％のＢ２７を含む、請求項６９に記載の方法。
【請求項７１】
前記ＰＤＸ１陰性胚体内胚葉細胞を含む細胞集団を得る工程が、多能性（pluripotent）ヒト細胞を含む細胞集団を得ること、胚体内胚葉細胞への該多能性細胞の分化を促進するのに十分な量でＴＧＦβスーパーファミリーの少なくとも１つの増殖因子を該細胞集団に供給すること、そして胚体内胚葉細胞が形成されるのに十分な時間を与えることを包含し、該胚体内胚葉細胞が形成されるのに十分な時間が該細胞集団中の胚体内胚葉細胞の存在を検出することにより確定される、請求項４９に記載の方法。
【請求項７２】
請求項４９に記載の方法により産生されるＰＤＸ１陽性背側偏向前腸内胚葉細胞。
【請求項７３】
ＰＤＸ１陽性腹側偏向前腸内胚葉細胞を産生する方法であって、以下の：
ＰＤＸ１陰性胚体内胚葉細胞を含む細胞集団を得る工程；そして
ＣＤＨ６、ＧＡＢＲＡ２、ＧＲＩＡ３、ＩＬ６Ｒ、ＫＣＮＪ２、ＬＧＡＬＳ３、ＬＧＡＬＳ３／ＧＡＬＩＧ、ＳＥＲＰＩＮＦ２、ＳＬＣ２７Ａ２、ＳＥＲＰＩＮＦ２、ＤＵＳＰ９、ＣＤＨ６及びＳＯＸ９から成る群から選択される少なくとも１つのマーカーを発現するＰＤＸ１陽性腹側偏向前腸内胚葉細胞への前記ＰＤＸ１陰性胚体内胚葉細胞集団の少なくとも一部の分化を促進するのに十分な量でＦＧＦ−１０を前記細胞集団に供給する工程であって、該ＰＤＸ１陽性腹側偏向前腸内胚葉細胞が腹側膵芽の細胞に分化することができる複能性細胞である工程
を包含する方法。
【請求項７４】
前記細胞集団がＲＡの非存在下で分化される、請求項７３に記載の方法。
【請求項７５】
前記ＰＤＸ１陽性腹側偏向前腸内胚葉細胞がＡＤＯＲＡ２Ａ、ＣＤ４７、ＥＰＢ４１Ｌ１、ＭＡＧ、ＳＦＲＰ５、ＳＬＣ１６Ａ１０、ＳＬＣ１６Ａ２、ＳＬＣ１Ａ３、ＳＬＣ３０Ａ４、ＳＬＩＣＫ、ＳＬＩＴＲＫ４、ＸＰＲ１、ＨＯＸＡ１、ＰＤＥ１１Ａ、ＦＡＭ４９Ａ及びＷＮＴ５Ａから成る群から選択される１つ又は複数のマーカーを発現しない、請求項７３に記載の方法。
【請求項７６】
ＰＤＸ１陽性腹側偏向前腸内胚葉細胞が形成されるのに十分な時間を与える工程をさらに包含し、該ＰＤＸ１陽性腹側偏向前腸内胚葉細胞が形成されるのに十分な時間が、前記
細胞集団中の腹側偏向前腸内胚葉細胞中のＣＤＨ６、ＧＡＢＲＡ２、ＧＲＩＡ３、ＩＬ６Ｒ、ＫＣＮＪ２、ＬＧＡＬＳ３、ＬＧＡＬＳ３／ＧＡＬＩＧ、ＳＥＲＰＩＮＦ２、ＳＬＣ２７Ａ２、ＳＥＲＰＩＮＦ２、ＤＵＳＰ９、ＣＤＨ６及びＳＯＸ９から成る群から選択されるマーカーの存在を検出することにより確定される、請求項７５に記載の方法。
【請求項７７】
ＣＤＨ６、ＧＡＢＲＡ２、ＧＲＩＡ３、ＩＬ６Ｒ、ＫＣＮＪ２、ＬＧＡＬＳ３、ＬＧＡＬＳ３／ＧＡＬＩＧ、ＳＥＲＰＩＮＦ２、ＳＬＣ２７Ａ２、ＳＥＲＰＩＮＦ２、ＤＵＳＰ９、ＣＤＨ６及びＳＯＸ９から成る群から選択される前記マーカーの発現が定量的ポリメラーゼ連鎖反応（Ｑ−ＰＣＲ）により確定される、請求項７６に記載の方法。
【請求項７８】
ＣＤＨ６、ＧＡＢＲＡ２、ＧＲＩＡ３、ＩＬ６Ｒ、ＫＣＮＪ２、ＬＧＡＬＳ３、ＬＧＡＬＳ３／ＧＡＬＩＧ、ＳＥＲＰＩＮＦ２、ＳＬＣ２７Ａ２、ＳＥＲＰＩＮＦ２、ＤＵＳＰ９、ＣＤＨ６及びＳＯＸ９から成る群から選択される前記マーカーの発現が免疫細胞化学により確定される、請求項７６に記載の方法。
【請求項７９】
ＰＤＸ１の発現が前記ＰＤＸ１陽性腹側偏向前腸内胚葉細胞中のα−フェトプロテイン（ＡＦＰ）、ＳＯＸ７、ＳＯＸ１、ＺＩＣ１及びＮＦＭから成る群から選択されるマーカーの発現より大きい、請求項７３に記載の方法。
【請求項８０】
ＦＧＦ−１０が約５ｎｇ／ｍｌ〜約５００ｎｇ／ｍｌの範囲の濃度で供給される、請求項７３に記載の方法。
【請求項８１】
ＦＧＦ−１０が約１０ｎｇ／ｍｌ〜約１００ｎｇ／ｍｌの範囲の濃度で供給される、請求項８０に記載の方法。
【請求項８２】
ＦＧＦ−１０が約５０ｎｇ／ｍｌの濃度で供給される、請求項８１に記載の方法。
【請求項８３】
前記培養物が約３日齢である場合にＦＧＦ−１０が供給される、請求項７３に記載の方法。
【請求項８４】
前記培養物にＢ２７を供給することをさらに包含する、請求項７３に記載の方法。
【請求項８５】
前記Ｂ２７が総培地の約０．１％〜約２０％の範囲の濃度で供給される、請求項８４に記載の方法。
【請求項８６】
Ｂ２７が総培地の約０．５％〜約２％の範囲の濃度で供給される、請求項８５に記載の方法。
【請求項８７】
Ｂ２７が総培地の約０．５％の濃度で供給される、請求項８６に記載の方法。
【請求項８８】
Ｂ２７が前記ＦＧＦ−１０とほぼ同時に供給される、請求項８４に記載の方法。
【請求項８９】
前記培養物にＫＡＡＤ−シクロパミンを供給することをさらに包含する、請求項７３に記載の方法。
【請求項９０】
ＫＡＡＤ−シクロパミンが約０．１μＭ〜約５０μＭの濃度で供給される、請求項８９に記載の方法。
【請求項９１】
ＫＡＡＤ−シクロパミンが約０．５μＭ〜約１０μＭの範囲の濃度で供給される、請求項９０に記載の方法。
【請求項９２】
ＫＡＡＤ−シクロパミンが約０．５μＭの濃度で供給される、請求項９１に記載の方法。
【請求項９３】
前記ＰＤＸ１陽性腹側偏向前腸内胚葉細胞がＣＭＲＬ培地中で増殖される、請求項７３に記載の方法。
【請求項９４】
前記ＣＭＲＬ培地が約５０ｎｇ／ｍｌのＦＧＦ−１０、約０．５μＭのＫＡＡＤ−シクロパミン及び総培地の約０．５％のＢ２７を含む、請求項９３に記載の方法。
【請求項９５】
前記ＣＭＲＬ培地がＲＡを欠く、請求項９４に記載の方法。
【請求項９６】
前記ＰＤＸ１陰性胚体内胚葉細胞を含む細胞集団を得る工程が、多能性ヒト細胞を含む細胞集団を得ること、胚体内胚葉細胞への該多能性細胞の分化を促進するのに十分な量でＴＧＦβスーパーファミリーの少なくとも１つの増殖因子を該細胞集団に供給すること、そして胚体内胚葉細胞が形成されるのに十分な時間を与えることを包含し、該胚体内胚葉細胞が生成するのに十分な時間が該細胞集団中の胚体内胚葉細胞の存在を検出することにより確定される、請求項７３に記載の方法。
【請求項９７】
請求項７３に記載の方法により産生されるＰＤＸ１陽性腹側偏向前腸内胚葉細胞。
【請求項９８】
ＰＤＸ１陽性背側偏向前腸内胚葉細胞に富んだ細胞集団を産生する方法であって、以下の：
ＰＤＸ１陽性背側偏向前腸内胚葉細胞を産生するようにＰＤＸ１陰性胚体内胚葉細胞集団中の細胞を分化させる工程であって、該ＰＤＸ１陽性背側偏向前腸内胚葉細胞が背側膵芽の細胞に分化することができる複能性細胞である工程
前記ＰＤＸ１陽性背側偏向前腸内胚葉細胞中で発現されるが前記細胞集団中に存在する他の細胞型中では実質的に発現されないマーカーと結合する試薬を該細胞集団に供給する工程；そして
前記細胞集団中に存在する前記他の細胞型から、前記試薬と結合された前記ＰＤＸ１陽性背側偏向前腸内胚葉細胞を分離し、それによりＰＤＸ１陽性背側偏向前腸内胚葉細胞に富んだ細胞集団を産生する工程
を包含する方法。
【請求項９９】
前記マーカーがＡＤＯＲＡ２Ａ、ＣＤ４７、ＥＰＢ４１Ｌ１、ＭＡＧ、ＳＦＲＰ５、ＳＬＣ１６Ａ１０、ＳＬＣ１６Ａ２、ＳＬＣ１Ａ３、ＳＬＣ３０Ａ４、ＳＬＩＣＫ、ＳＬＩＴＲＫ４及びＸＰＲ１から成る群から選択される、請求項９８に記載の方法。
【請求項１００】
前記マーカーがＣＤＨ６、ＧＡＢＲＡ２、ＧＲＩＡ３、ＩＬ６Ｒ、ＫＣＮＪ２、ＬＧＡＬＳ３、ＬＧＡＬＳ３／ＧＡＬＩＧ、ＳＥＲＰＩＮＦ２及びＳＬＣ２７Ａ２から成る群から選択される、請求項９８に記載の方法。
【請求項１０１】
前記分化させる工程がＰＤＸ１陰性胚体内胚葉細胞を含む細胞集団を得ること、背側膵芽の細胞に分化することができる複能性細胞であるＰＤＸ１陽性背側偏向前腸内胚葉細胞へのＰＤＸ１陰性胚体内胚葉細胞の分化を促進するのに十分な量でレチノイドを該細胞集団に供給すること、そしてＰＤＸ１陽性背側偏向前腸内胚葉細胞が形成されるのに十分な時間を与えることをさらに包含し、該ＰＤＸ１陽性背側偏向前腸内胚葉細胞が形成されるのに十分な時間が該細胞集団中のＰＤＸ１陽性背側偏向前腸内胚葉細胞の存在を検出することにより確定される、請求項９８に記載の方法。
【請求項１０２】
前記供給する工程がＢ２７を供給することをさらに包含する、請求項１０１に記載の方法。
【請求項１０３】
検出することがＡＤＯＲＡ２Ａ、ＣＤ４７、ＥＰＢ４１Ｌ１、ＭＡＧ、ＳＦＲＰ５、ＳＬＣ１６Ａ１０、ＳＬＣ１６Ａ２、ＳＬＣ１Ａ３、ＳＬＣ３０Ａ４、ＳＬＩＣＫ、ＳＬＩＴＲＫ４、ＸＰＲ１、ＨＯＸＡ１、ＰＤＥ１１Ａ、ＦＡＭ４９Ａ及びＷＮＴ５Ａから成る群から選択される少なくとも１つのマーカーの発現を検出することを包含する、請求項１０１に記載の方法。
【請求項１０４】
前記細胞の少なくとも約９５％がＰＤＸ１陽性背側偏向前腸内胚葉細胞である、請求項９８に記載の方法。
【請求項１０５】
前記細胞の少なくとも約９８％がＰＤＸ１陽性背側偏向前腸内胚葉細胞である、請求項９８に記載の方法。
【請求項１０６】
前記試薬が抗体である、請求項９８に記載の方法。
【請求項１０７】
前記抗体がＡＤＯＲＡ２Ａ、ＣＤ４７、ＥＰＢ４１Ｌ１、ＭＡＧ、ＳＦＲＰ５、ＳＬＣ１６Ａ１０、ＳＬＣ１６Ａ２、ＳＬＣ１Ａ３、ＳＬＣ３０Ａ４、ＳＬＩＣＫ、ＳＬＩＴＲＫ４、ＸＰＲ１、ＣＤＨ６、ＧＡＢＲＡ２、ＧＲＩＡ３、ＩＬ６Ｒ、ＫＣＮＪ２、ＬＧＡＬＳ３、ＬＧＡＬＳ３／ＧＡＬＩＧ、ＳＥＲＰＩＮＦ２及びＳＬＣ２７Ａ２から成る群から選択される細胞表面ポリペプチドに対する親和性を有する、請求項１０６に記載の方法。
【請求項１０８】
請求項９８に記載の方法により産生されるＰＤＸ１陽性背側偏向前腸内胚葉細胞の富化集団。
【請求項１０９】
ＰＤＸ１陽性腹側偏向前腸内胚葉細胞に富んだ細胞集団を産生する方法であって、以下の：
ＰＤＸ１陽性腹側偏向前腸内胚葉細胞を産生するようにＰＤＸ１陰性胚体内胚葉細胞の集団中の細胞を分化させる工程であって、該ＰＤＸ１陽性腹側偏向前腸内胚葉細胞が腹側膵芽の細胞に分化することができる複能性細胞である工程
前記ＰＤＸ１陽性腹側偏向前腸内胚葉細胞中で発現されるが、前記細胞集団中に存在する他の細胞型中では実質的に発現されないマーカーと結合する試薬を該細胞集団に供給する工程；そして
前記細胞集団中に存在する前記他の細胞型から前記試薬と結合された前記ＰＤＸ１陽性腹側偏向前腸内胚葉細胞を分離し、それによりＰＤＸ１陽性腹側偏向前腸内胚葉細胞に富んだ細胞集団を産生する工程
を包含する方法。
【請求項１１０】
前記マーカーがＣＤＨ６、ＧＡＢＲＡ２、ＧＲＩＡ３、ＩＬ６Ｒ、ＫＣＮＪ２、ＬＧＡＬＳ３、ＬＧＡＬＳ３／ＧＡＬＩＧ、ＳＥＲＰＩＮＦ２及びＳＬＣ２７Ａ２から成る群から選択される、請求項１０９に記載の方法。
【請求項１１１】
前記分化させる工程がＰＤＸ１陰性胚体内胚葉細胞を含む細胞集団を得ること、腹側膵芽の細胞に分化することができる複能性細胞であるＰＤＸ１陽性腹側偏向前腸内胚葉細胞へのＰＤＸ１陰性胚体内胚葉細胞の分化を促進するのに十分な量でＦＧＦ−１０を該細胞集団に供給すること、そしてＰＤＸ１陽性腹側偏向前腸内胚葉細胞が形成されるのに十分な時間を与えることをさらに包含し、該ＰＤＸ１陽性腹側偏向前腸内胚葉細胞が形成されるのに十分な時間が該細胞集団中のＰＤＸ１陽性腹側偏向前腸内胚葉細胞の存在を検出す
ることにより確定される、請求項１０９に記載の方法。
【請求項１１２】
前記供給する工程がＢ２７を供給することをさらに包含する、請求項１１１に記載の方法。
【請求項１１３】
検出することがＣＤＨ６、ＧＡＢＲＡ２、ＧＲＩＡ３、ＩＬ６Ｒ、ＫＣＮＪ２、ＬＧＡＬＳ３、ＬＧＡＬＳ３／ＧＡＬＩＧ、ＳＥＲＰＩＮＦ２、ＳＬＣ２７Ａ２、ＳＥＲＰＩＮＦ２、ＤＵＳＰ９、ＣＤＨ６及びＳＯＸ９から成る群から選択される少なくとも１つのマーカーの発現を検出することを包含する、請求項１１１に記載の方法。
【請求項１１４】
前記細胞の少なくとも約９５％がＰＤＸ１陽性腹側偏向前腸内胚葉細胞である、請求項１０９に記載の方法。
【請求項１１５】
前記細胞の少なくとも約９８％がＰＤＸ１陽性腹側偏向前腸内胚葉細胞である、請求項１０９に記載の方法。
【請求項１１６】
前記試薬が抗体である、請求項１０９に記載の方法。
【請求項１１７】
前記抗体がＣＤＨ６、ＧＡＢＲＡ２、ＧＲＩＡ３、ＩＬ６Ｒ、ＫＣＮＪ２、ＬＧＡＬＳ３、ＬＧＡＬＳ３／ＧＡＬＩＧ、ＳＥＲＰＩＮＦ２及びＳＬＣ２７Ａ２から成る群から選択される細胞表面ポリペプチドに対する親和性を有する、請求項１１６に記載の方法。
【請求項１１８】
請求項１０９に記載の方法により産生されるＰＤＸ１陽性腹側偏向前腸内胚葉細胞の富化集団。
【請求項１１９】
ＰＤＸ１陽性背側偏向前腸内胚葉細胞に富んだ細胞集団を産生する方法であって、以下の：
多能性細胞の集団を得る工程であって、該多能性細胞集団の少なくとも１つの細胞がＡＤＯＲＡ２Ａ、ＣＤ４７、ＥＰＢ４１Ｌ１、ＭＡＧ、ＳＦＲＰ５、ＳＬＣ１６Ａ１０、ＳＬＣ１６Ａ２、ＳＬＣ１Ａ３、ＳＬＣ３０Ａ４、ＳＬＩＣＫ、ＳＬＩＴＲＫ４、ＸＰＲ１、ＨＯＸＡ１、ＰＤＥ１１Ａ、ＦＡＭ４９Ａ及びＷＮＴ５Ａから成る群から選択されるマーカー遺伝子のいずれか１つのプロモーターの制御下にある核酸の少なくとも１つのコピーを含み、該核酸は蛍光タンパク質をコードする配列又はその生物学的活性断片を含む工程；
ＰＤＸ１陽性背側偏向前腸内胚葉細胞を産生するように前記多能性細胞を分化させる工程であって、該ＰＤＸ１陽性背側偏向前腸内胚葉細胞は背側膵芽の細胞に分化することができる複能性細胞である工程；そして
前記細胞集団中に存在する他の細胞型から前記ＰＤＸ１陽性背側偏向前腸内胚葉細胞を分離する工程
を包含する方法。
【請求項１２０】
前記富化細胞集団が少なくとも約９５％のＰＤＸ１陽性背側偏向前腸内胚葉細胞を含む、請求項１１９に記載の方法。
【請求項１２１】
前記富化細胞集団が少なくとも約９８％のＰＤＸ１陽性背側偏向前腸内胚葉細胞を含む、請求項１１９に記載の方法。
【請求項１２２】
前記分化させる工程がＰＤＸ１陰性胚体内胚葉細胞への前記多能性細胞の分化を促進するのに十分な量でＴＧＦβスーパーファミリーの少なくとも１つの増殖因子を前記多能性細胞集団に供給すること、そしてＰＤＸ１陽性背側偏向前腸内胚葉細胞へのＰＤＸ１陰性
胚体内胚葉細胞の分化を促進するのに十分な量でレチノイドを該ＰＤＸ１陰性胚体内胚葉細胞に供給することをさらに包含する、請求項１１９に記載の方法。
【請求項１２３】
前記レチノイドがＲＡである、請求項１２２に記載の方法。
【請求項１２４】
前記供給する工程がＢ２７を供給することをさらに包含する、請求項１２３に記載の方法。
【請求項１２５】
前記蛍光タンパク質が緑色蛍光タンパク質（ＧＦＰ）である、請求項１１９に記載の方法。
【請求項１２６】
前記ＰＤＸ１陽性背側偏向前腸内胚葉細胞が蛍光活性化細胞選別器（ＦＡＣＳ）により前記細胞集団中に存在する他の細胞型から分離される、請求項１１９に記載の方法。
【請求項１２７】
請求項１１９に記載の方法により産生されるＰＤＸ１陽性背側偏向前腸内胚葉細胞の富化集団。
【請求項１２８】
ＰＤＸ１陽性腹側偏向前腸内胚葉細胞に富んだ細胞集団を産生する方法であって、以下の：
多能性細胞の集団を得る工程であって、該多能性細胞集団の少なくとも１つの細胞はＣＤＨ６、ＧＡＢＲＡ２、ＧＲＩＡ３、ＩＬ６Ｒ、ＫＣＮＪ２、ＬＧＡＬＳ３、ＬＧＡＬＳ３／ＧＡＬＩＧ、ＳＥＲＰＩＮＦ２、ＳＬＣ２７Ａ２、ＳＥＲＰＩＮＦ２、ＤＵＳＰ９、ＣＤＨ６及びＳＯＸ９から成る群から選択されるマーカー遺伝子のいずれか１つのプロモーターの制御下にある核酸の少なくとも１つのコピーを含み、該核酸は蛍光タンパク質をコードする配列又はその生物学的活性断片を含む工程；
ＰＤＸ１陽性腹側偏向前腸内胚葉細胞を産生するように前記多能性細胞を分化させる工程であって、該ＰＤＸ１陽性腹側偏向前腸内胚葉細胞は腹側膵芽の細胞に分化することができる複能性細胞である工程；そして
非腹側偏向前腸内胚葉細胞から前記ＰＤＸ１陽性腹側偏向前腸内胚葉細胞を分離する工程
を包含する方法。
【請求項１２９】
前記富化細胞集団が少なくとも約９５％のＰＤＸ１陽性腹側偏向前腸内胚葉細胞を含む、請求項１２８に記載の方法。
【請求項１３０】
前記富化細胞集団が少なくとも約９８％のＰＤＸ１陽性腹側偏向前腸内胚葉細胞を含む、請求項１２８に記載の方法。
【請求項１３１】
前記分化させる工程がＰＤＸ１陰性胚体内胚葉細胞への前記多能性細胞の分化を促進するために十分な量でＴＧＦβスーパーファミリーの少なくとも１つの増殖因子を前記多能性細胞集団に供給すること、そしてＰＤＸ１陽性腹側偏向前腸内胚葉細胞へのＰＤＸ１陰性胚体内胚葉細胞の分化を促進するのに十分な量でＦＧＦ−１０を該ＰＤＸ１陰性胚体内胚葉細胞に供給することをさらに包含する、請求項１２８に記載の方法。
【請求項１３２】
前記供給する工程がＢ２７を供給することをさらに包含する、請求項１２８に記載の方法。
【請求項１３３】
前記蛍光タンパク質が緑色蛍光タンパク質（ＧＦＰ）である、請求項１２８に記載の方法。
【請求項１３４】
前記ＰＤＸ１陽性背側偏向前腸内胚葉細胞が蛍光活性化細胞選別器（ＦＡＣＳ）により前記細胞集団中に存在する他の細胞型から分離される、請求項１２８に記載の方法。
【請求項１３５】
請求項１２８に記載の方法により産生されるＰＤＸ１陽性背側偏向前腸内胚葉細胞の富化集団。
【請求項１３６】
ヒト細胞を含む細胞集団中のヒトＰＤＸ１陽性背側偏向前腸内胚葉細胞の分化を促進することができる分化因子を同定する方法であって、以下の：
ヒトＰＤＸ１陽性背側偏向前腸内胚葉細胞を含む細胞集団を得る工程；
前記細胞集団に候補分化因子を供給する工程；
第１の時点での前記細胞集団中のマーカーの発現を決定する工程；
第２の時点での前記細胞集団中の同一マーカーの発現を確定する工程であって、該第２の時点は前記第１の時点の次に起こり、そして該第２の時点は前記候補分化因子を該細胞集団に供給することの後である工程；そして
前記第２の時点での前記細胞集団中のマーカーの発現が前記第１の時点での前記細胞集団中のマーカーの発現と比較した場合に増大又は低減されるかを判定する工程であって、該細胞集団中の該マーカーの発現の増大又は低減は候補分化因子が前記ヒトＰＤＸ１陽性背側偏向前腸内胚葉細胞の分化を促進することができることを示す工程
を包含する方法。
【請求項１３７】
前記マーカーがＡＤＯＲＡ２Ａ、ＣＤ４７、ＥＰＢ４１Ｌ１、ＭＡＧ、ＳＦＲＰ５、ＳＬＣ１６Ａ１０、ＳＬＣ１６Ａ２、ＳＬＣ１Ａ３、ＳＬＣ３０Ａ４、ＳＬＩＣＫ、ＳＬＩＴＲＫ４、ＸＰＲ１、ＨＯＸＡ１、ＰＤＥ１１Ａ、ＦＡＭ４９Ａ及びＷＮＴ５Ａから成る群から選択される、請求項１３６に記載の方法。
【請求項１３８】
前記ヒトＰＤＸ１陽性背側偏向前腸内胚葉細胞が前記細胞集団中のヒト細胞の少なくとも約１０％を含む、請求項１３６に記載の方法。
【請求項１３９】
ヒトフィーダー細胞が前記細胞集団中に存在し、そして該フィーダー細胞以外のヒト細胞の少なくとも約１０％がＰＤＸ１陽性背側偏向前腸内胚葉細胞である、請求項１３６に記載の方法。
【請求項１４０】
前記ヒトＰＤＸ１陽性背側偏向前腸内胚葉細胞が前記細胞集団中のヒト細胞の少なくとも約９０％を含む、請求項１３６に記載の方法。
【請求項１４１】
前記ヒトフィーダー細胞が前記細胞集団中に存在し、そして前記フィーダー細胞以外のヒト細胞の少なくとも約９０％がＰＤＸ１陽性背側偏向前腸内胚葉細胞である、請求項１３６に記載の方法。
【請求項１４２】
前記ヒトＰＤＸ１陽性背側偏向前腸内胚葉細胞が背側膵芽の細胞に分化することができる、請求項１３６に記載の方法。
【請求項１４３】
前記ヒト胚体内胚葉細胞が前記候補分化因子に応答して膵臓前駆体細胞に分化する、請求項１３６に記載の方法。
【請求項１４４】
前記第１の時点が、前記候補分化因子を前記細胞集団に供給することより前である、請求項１３６に記載の方法。
【請求項１４５】
前記第１の時点が、前記候補分化因子を前記細胞集団に供給するのとほぼ同時である、請求項１３６に記載の方法。
【請求項１４６】
前記第１の時点が、前記候補分化因子を前記細胞集団に供給することの後である、請求項１３６に記載の方法。
【請求項１４７】
前記マーカーの発現が増大される、請求項１３６に記載の方法。
【請求項１４８】
前記マーカーの発現が減少される、請求項１３６に記載の方法。
【請求項１４９】
前記マーカーの発現が、定量的ポリメラーゼ連鎖反応（Ｑ−ＰＣＲ）により確定される、請求項１３６に記載の方法。
【請求項１５０】
前記マーカーの発現が、免疫細胞化学により確定される、請求項１３６に記載の方法。
【請求項１５１】
前記分化因子が小分子を含む、請求項１３６に記載の方法。
【請求項１５２】
前記分化因子がポリペプチドを含む、請求項１３６に記載の方法。
【請求項１５３】
前記分化因子が増殖因子を含む、請求項１３６に記載の方法。
【請求項１５４】
ヒト細胞を含む細胞集団中のヒトＰＤＸ１陽性腹側偏向の前腸内胚葉細胞の分化を促進することができる分化因子を同定する方法であって、
ヒトＰＤＸ１陽性腹側偏向前腸内胚葉細胞を含む細胞集団を得る工程；
候補分化因子を前記細胞集団に供給する工程；
第１の時点で前記細胞集団中のマーカーの発現を確定する工程；
第２の時点で前記細胞集団中の同一マーカーの発現を確定する工程であって、該第２の時点が前記第１の時点の後であり、且つ該第２の時点が該細胞集団に前記候補分化因子を供給することの後である、工程；そして
前記第２の時点での前記細胞集団中の前記マーカーの発現が、前記第１の時点での該細胞集団中の該マーカーの発現と比較して増大又は低減されているかを判定する工程であって、該細胞集団中の該マーカーの発現の増大又は低減は、前記候補分化因子が、前記ヒトＰＤＸ１陽性腹側偏向前腸内胚葉細胞の分化を促進することができることを示す方法。
【請求項１５５】
前記マーカーがＣＤＨ６、ＧＡＢＲＡ２、ＧＲＩＡ３、ＩＬ６Ｒ、ＫＣＮＪ２、ＬＧＡＬＳ３、ＬＧＡＬＳ３／ＧＡＬＩＧ、ＳＥＲＰＩＮＦ２、ＳＬＣ２７Ａ２、ＳＥＲＰＩＮＦ２、ＤＵＳＰ９、ＣＤＨ６及びＳＯＸ９から成る群から選択される、請求項１５４に記載の方法。
【請求項１５６】
前記ヒトＰＤＸ１陽性腹側偏向前腸内胚葉細胞が前記細胞集団中のヒト細胞の少なくとも約１０％を含む、請求項１５４に記載の方法。
【請求項１５７】
ヒトフィーダー細胞が前記細胞集団中に存在し、そして該フィーダー細胞以外のヒト細胞の少なくとも約１０％がＰＤＸ１陽性腹側偏向前腸内胚葉細胞である、請求項１５４に記載の方法。
【請求項１５８】
前記ヒトＰＤＸ１陽性腹側偏向前腸内胚葉細胞が前記細胞集団中のヒト細胞の少なくとも約９０％を含む、請求項１５４に記載の方法。
【請求項１５９】
前記ヒトフィーダー細胞が前記細胞集団中に存在し、そして該フィーダー細胞以外のヒト細胞の少なくとも約９０％がＰＤＸ１陽性腹側偏向前腸内胚葉細胞である、請求項１５４に記載の方法。
【請求項１６０】
前記ヒトＰＤＸ１陽性腹側偏向前腸内胚葉細胞が腹側膵芽の細胞に分化することができる、請求項１５４に記載の方法。
【請求項１６１】
前記ヒト胚体内胚葉細胞が、前記候補分化因子に応答して、膵臓前駆体細胞に分化する、請求項１５４に記載の方法。
【請求項１６２】
前記第１の時点が、前記候補分化因子を前記細胞集団に供給することより前である、請求項１５４に記載の方法。
【請求項１６３】
前記第１の時点が、前記候補分化因子を前記細胞集団に供給するのとほぼ同時である、請求項１５４に記載の方法。
【請求項１６４】
前記第１の時点が、前記候補分化因子を前記細胞集団に供給することの後である、請求項１５４に記載の方法。
【請求項１６５】
前記マーカーの発現が増大される、請求項１５４に記載の方法。
【請求項１６６】
前記マーカーの発現が低減される、請求項１５４に記載の方法。
【請求項１６７】
前記マーカーの発現が、定量的ポリメラーゼ連鎖反応（Ｑ−ＰＣＲ）により確定される、請求項１５４に記載の方法。
【請求項１６８】
前記マーカーの発現が、免疫細胞化学により確定される、請求項１５４に記載の方法。
【請求項１６９】
前記分化因子が小分子を含む、請求項１５４に記載の方法。
【請求項１７０】
前記分化因子がポリペプチドを含む、請求項１５４に記載の方法。
【請求項１７１】
前記分化因子が増殖因子を含む、請求項１５４に記載の方法。
【図１】
【図２】
【図３】
【図４】
【図５】
【図６】
【図７】
【図８】
【図９】
【図１０】
【図１１】
【図１２】
【図１３】
【図１４】
【図１５】
【図１６】
【図１７】
【図１８】
【図１９】
【図２０】
【図２１】
【図２２】
【図２３】
【図２４】
【図２５】
【図２６】
【図２７】
【図２８】
【図２９】
【図３０】
【図３１】
【図３２】
【図３３】
【図３４−１】
【図３４−２】
【図３４−３】
【図３５】
【図３６】
【図３７】
【図３８】
【図３９】
【図４０】
【図４１】
【図４２】
【図４３】
【図４４】
【図４５】
【図４６】
【図４７】
【図４８】
【図４９】
【図５０】
【図５１−１】
【図５１−２】
【図５２】
【図５３】
【図５４】
【図２】
【図３】
【図４】
【図５】
【図６】
【図７】
【図８】
【図９】
【図１０】
【図１１】
【図１２】
【図１３】
【図１４】
【図１５】
【図１６】
【図１７】
【図１８】
【図１９】
【図２０】
【図２１】
【図２２】
【図２３】
【図２４】
【図２５】
【図２６】
【図２７】
【図２８】
【図２９】
【図３０】
【図３１】
【図３２】
【図３３】
【図３４−１】
【図３４−２】
【図３４−３】
【図３５】
【図３６】
【図３７】
【図３８】
【図３９】
【図４０】
【図４１】
【図４２】
【図４３】
【図４４】
【図４５】
【図４６】
【図４７】
【図４８】
【図４９】
【図５０】
【図５１−１】
【図５１−２】
【図５２】
【図５３】
【図５４】
【公表番号】特表２００９−５１３１４３（Ｐ２００９−５１３１４３Ａ）
【公表日】平成２１年４月２日（２００９．４．２）
【国際特許分類】
【出願番号】特願２００８−５３８０９５（Ｐ２００８−５３８０９５）
【出願日】平成１８年１０月２７日（２００６．１０．２７）
【国際出願番号】ＰＣＴ／ＵＳ２００６／０４２４１３
【国際公開番号】ＷＯ２００７／０５１０３８
【国際公開日】平成１９年５月３日（２００７．５．３）
【出願人】（５０３４３１７９２）サイセラ，インコーポレイテッド (9)
【Ｆターム（参考）】
【公表日】平成２１年４月２日（２００９．４．２）
【国際特許分類】
【出願日】平成１８年１０月２７日（２００６．１０．２７）
【国際出願番号】ＰＣＴ／ＵＳ２００６／０４２４１３
【国際公開番号】ＷＯ２００７／０５１０３８
【国際公開日】平成１９年５月３日（２００７．５．３）
【出願人】（５０３４３１７９２）サイセラ，インコーポレイテッド (9)
【Ｆターム（参考）】
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