本発明は、医学、免疫学、ウイルス学及び分子生物学の分野に関連する。本発明は、ＲＮＡバクテリオファージのウイルス様粒子(ＶＬＰ)と少なくとも一の抗原を含有してなる組成物であって、ＶＬＰが宿主内で組み換えて産生されるものであり、ＶＬＰに含有される二次構造を有する宿主ＲＮＡの量が、ＶＬＰに当初より含有される二次構造を有する宿主ＲＮＡの量の最大２０％であり、ＶＬＰと少なくとも一の抗原が互いに結合している組成物を提供する。また、本発明は、本発明の組成物の産生方法を提供する。本発明の組成物は、疾患、障害及び症状の治療のためのワクチンの産生に有用である。さらに、本発明の組成物は、望ましくないＴ細胞応答を低減するか排除しながら、示した範囲内の抗原に対して強い抗体応答を効率よく誘発するために特に有用である。

【特許請求の範囲】
【請求項１】
(a) 少なくとも一の第一付着部位を有するＲＮＡバクテリオファージのコートタンパク質、そのムテインないしはその断片を含有してなるウイルス様粒子(ＶＬＰ)であって、該ＶＬＰが宿主内で組み換えて産生されるものであり、該ＶＬＰに含有される二次構造を有する該宿主ＲＮＡの量が、該ＶＬＰに当初より含有される二次構造を有する宿主ＲＮＡの量の最大２０％である、ウイルス様粒子；
(b) 少なくとも一の第二付着部位を有する少なくとも一の抗原；
を含んでなる組成物であって、該少なくとも一の抗原(b)が該少なくとも一の第一付着部位と該少なくとも一の第二付着部位を介して該ＶＬＰ(a)に結合している、組成物。
【請求項２】
(a) 少なくとも一の第一付着部位を有するＲＮＡバクテリオファージのコートタンパク質、そのムテインないしはその断片を含有してなるウイルス様粒子(ＶＬＰ)であって、該ＶＬＰが宿主内で組み換えて産生されるものであり、該ＶＬＰは宿主ＲＮＡ、好ましくは宿主の核酸を本質的に含有しない、ウイルス様粒子；
(b) 少なくとも一の第二付着部位を有する少なくとも一の抗原；
を含んでなる組成物であって、該少なくとも一の抗原(b)が該少なくとも一の第一付着部位と該少なくとも一の第二付着部位を介して該ＶＬＰ(a)に結合している、組成物。
【請求項３】
さらに、前記ＶＬＰに結合された少なくとも一のポリ陰イオン性高分子を含んでなり、好ましくは該ポリ陰イオン性高分子が該ＶＬＰ内にパッケージ化されている、請求項２又は３に記載の組成物。
【請求項４】
前記ポリ陰イオン性高分子の分子量が１００００から１０００００ダルトンである、請求項３に記載の組成物。
【請求項５】
前記ポリ陰イオン性高分子が、
(a) ポリ陰イオン性ポリペプチド；
(b) ポリ陰イオン性糖類；
(c) ポリ陰イオン性有機ポリマー；及び
(d) ｔｏｌｌ様レセプターリガンドでない核酸、
からなる群から選択されるものである、請求項３又は４に記載の組成物。
【請求項６】
前記核酸がｔＲＮＡである、請求項５に記載の組成物。
【請求項７】
前記ポリ陰イオン性ポリペプチドが、
(a) ポリグルタミン酸；
(b) ポリアスパラギン酸；
(c) ポリ(ＧｌｕＡｓｐ)；及び
(d) (a)−(c)の任意の化学的修飾、
からなる群から選択されるものである、請求項５に記載の組成物。
【請求項８】
前記ポリ陰イオン性高分子がポリグルタミン酸及び／又はポリアスパラギン酸であり、好ましくは該ポリ陰イオン性高分子がポリグルタミン酸である、請求項３又は４に記載の組成物。
【請求項９】
前記ポリ陰イオン性糖類が、
(a) 陰イオン性デキストラン；
(b) ホスホセルロース；
(c) ポリグルクロン酸；
(d) ポリガラクツロン酸；
(e) ポリシアル酸；
(f) ヒアルロン酸；及び
(g) グリコサミノグリカン
からなる群から選択されるものである、請求項５に記載の組成物。
【請求項１０】
前記の陰イオン性デキストランが、
(a) 硫酸デキストラン；
(b) カルボキシルメチルデキストラン；
(c) スルホプロピルデキストラン；
(d) メチルスルホン酸デキストラン；及び
(e) リン酸デキストラン
からなる群から選択されるものである、請求項９に記載の組成物。
【請求項１１】
前記グリコサミノグリカンが、
(a) ヘパリン；
(b) ヘパラン硫酸；
(c) デルマタン硫酸；
(d) コンドロイチン硫酸；及び
(e) ケラタン硫酸
からなる群から選択されるものである、請求項９に記載の組成物。
【請求項１２】
前記ポリ陰イオン性有機ポリマーが、
(a) ポリビニル硫酸；及び
(b) ポリアクリラート
からなる群から選択されるものである、請求項５に記載の組成物。
【請求項１３】
前記ＲＮＡファージが、
(a) バクテリオファージＱβ；
(b) バクテリオファージＲ１７；
(c) バクテリオファージｆｒ；
(d) バクテリオファージＧＡ；
(e) バクテリオファージＳＰ；
(f) バクテリオファージＭＳ２；
(g) バクテリオファージＭ１１；
(h) バクテリオファージＭＸ１；
(i) バクテリオファージＮＬ９５；
(j) バクテリオファージｆ２；
(k) バクテリオファージＰＰ７；および、
(l) バクテリオファージＡＰ２０５
からなる群から選択されるものである、請求項１ないし１２の何れか一に記載の組成物。
【請求項１４】
前記ＶＬＰがＲＮＡファージＱβ、ｆｒ、ＡＰ２０５又はＧＡのコートタンパク質、及び／又はそのムテイン、及び／又はその断片を含んでなる、請求項１ないし１３の何れか一に記載の組成物。
【請求項１５】
前記第一付着部位が、少なくとも一の共有結合、好ましくは少なくとも一の非ペプチド共有結合を介して前記第二付着部位に結合する、請求項１ないし１４の何れか一に記載の組成物。
【請求項１６】
前記第一付着部位がアミノ基、好ましくはリジンのアミノ基を含有する、請求項１ないし１５の何れか一に記載の組成物。
【請求項１７】
前記第二付着部位がスルフヒドリル基、好ましくはシステインのスルフヒドリル基を含有する、請求項１ないし１６の何れか一に記載の組成物。
【請求項１８】
前記第一付着部位がリジンのアミノ基を含有し、前記第二付着部位がシステインのスルフヒドリル基を含有する、請求項１ないし１７の何れか一に記載の組成物。
【請求項１９】
さらに、リンカーを含んでなる、請求項１ないし１８の何れか一に記載の組成物。
【請求項２０】
前記の少なくとも一の抗原が、
(a) ポリペプチド；
(b) 炭水化物；
(c) ステロイドホルモン；
(d) 有機分子；及び
(e) ハプテン
からなる群から選択されるものである、請求項１ないし１９の何れか一に記載の組成物。
【請求項２１】
前記の少なくとも一の抗原が自己抗原又はその断片ないしはその変異体である、請求項１ないし２０の何れか一に記載の組成物。
【請求項２２】
前記自己抗原が、
(a) リンホトキシン(好ましくはリンホトキシンα(ＬＴα)、リンホトキシンβ(ＬＴβ))；
(b) リンホトキシンレセプター；
(c) 核因子ｋＢリガンド(ＲＡＮＫＬ)のレセプター活性化因子；
(d) 血管内皮成長因子(ＶＥＧＦ)；
(e) 血管内皮成長因子レセプター(ＶＥＧＦ-Ｒ)；
(f) インターロイキン-５；
(g) インターロイキン-１７；
(h) インターロイキン-１３；
(i) ＩＬ-２３ｐ１９；
(j) グレリン；
(k) ＣＣＬ２１；
(l) ＣＸＣＬ１２；
(m) ＳＤＦ-１；
(n) Ｍ-ＣＳＦ；
(o) ＭＣＰ-１；
(p) エンドグリン；
(q) ＧｎＲＨ；
(r) ＴＲＨ；
(s) エオタキシン；
(t) ブラジキニン；
(u) ＢＬＣ；
(v) 腫瘍壊死因子α；
(w) アミロイドβペプチド(Ａβ_１−４２)；
(x) Ａβ_１−６；
(y) アンギオテンシン；
(z) ガストリン及び／又はプロガストリン；
(aa) ＣＥＴＰ；
(bb) ＣＣＲ５；
(cc) Ｃ５ａ；
(dd) ＣＸＣＲ４；
(ee) Ｄｅｓ-Ａｒｇブラジキニン；
(ff) ＧｎＲＨペプチド；
(gg) アンギオテンシンペプチド；
(hh) ＴＮＦ-ペプチド；
(ii) 前述の抗原(a)−(hh)の断片；及び、
(jj) 前述の抗原(a)−(hh)の変異体
からなる群から選択されるものである、請求項１ないし２１の何れか一に記載の組成物。
【請求項２３】
請求項１ないし２２の何れか一に記載の組成物を含んでなるワクチン組成物。
【請求項２４】
前記ワクチンがアジュバントを欠いている、請求項２３に記載のワクチン組成物。
【請求項２５】
さらに、少なくとも一のアジュバントを含んでなる、請求項２３に記載のワクチン組成物。
【請求項２６】
ＲＮＡバクテリオファージ-抗原コンジュゲートのＶＬＰと本発明の組成物をそれぞれ調整する方法であって、
(a) 少なくとも一の第一付着部位を有するウイルス様粒子(ＶＬＰ)を宿主によって組み換えて産生させる工程、このときの該ＶＬＰはＲＮＡバクテリオファージのコートタンパク質、そのムテインないしはその断片を含有するものである；
(b) 該ＲＮＡバクテリオファージのコートタンパク質、そのムテインないしはその断片にウイルス様粒子を分解させる工程；
(c) 該コートタンパク質、そのムテインないしはその断片を精製する工程；
(d) 精製した該ＲＮＡバクテリオファージのコートタンパク質、そのムテインないしはその断片をウイルス様粒子に再構築させる工程、このときの該ウイルス様粒子は宿主ＲＮＡ、好ましくは宿主核酸を本質的に欠いているものである；そして
(e) 少なくとも一の第二付着部位を有する少なくとも一の抗原を工程(d)より得た該ＶＬＰに結合させる工程、
を含む、方法。
【請求項２７】
前記の精製されたコートタンパク質は、少なくとも一のポリ陰イオン性高分子の存在下で再構築される、請求項２６に記載の方法。
【請求項２８】
ＲＮＡバクテリオファージ-抗原コンジュゲートのＶＬＰを調整する方法であって、
(a) ウイルス様粒子(ＶＬＰ)を宿主によって組み換えて産生させる工程、このときの該ＶＬＰはＲＮＡバクテリオファージのコートタンパク質、そのムテインないしはその断片と、少なくとも一の抗原を含有する融合タンパク質を含んでなるものである；
(b) 該ＶＬＰを該融合タンパク質に分解させる工程；
(c) 該融合タンパク質を精製する工程；
(d) 該精製された融合タンパク質をＶＬＰに再構築させる工程、このときの該ウイルス様粒子は宿主ＲＮＡ、好ましくは宿主核酸を本質的に欠いているものである
を含む、方法。
【請求項２９】
前記の精製されたコートタンパク質は、少なくとも一のポリ陰イオン性高分子の存在下で再構築される、請求項２８に記載の方法。
【請求項３０】
前記ＶＬＰがＲＮＡバクテリオファージＡＰ２０５のＶＬＰである、請求項２８又は２９に記載の方法。
【請求項３１】
請求項２３ないし２５の何れか一に記載のワクチン組成物が動物又はヒトに投与されることを含む、免疫化方法。
【請求項３２】
疾患の治療のための医薬の製造における、請求項１ないし２２の何れか一に記載の組成物又は請求項２３ないし２５の何れか一に記載のワクチン組成物の使用であって、好ましくは該疾患が炎症性疾患及び／又は慢性自己免疫性疾患である、使用。
【請求項３３】
請求項１ないし２２の何れか一に記載の組成物又は請求項２３ないし２５の何れか一に記載のワクチン組成物が動物又はヒトに投与されることを含む疾患の治療方法であって、好ましくは該疾患が炎症性疾患及び／又は慢性自己免疫性疾患である、治療方法。
【請求項３４】
(a) 請求項１ないし２２の何れか一に記載の組成物；及び
(b) 受容可能な製薬的担体
を含有してなる薬剤組成物。
【請求項３５】
請求項２６ないし３０の何れか一に記載の方法によって入手可能な組成物。

【図１】

【図２】

【図３】

【図４】

【図５】

【公表番号】特表２００８−５１５８５１（Ｐ２００８−５１５８５１Ａ）
【公表日】平成２０年５月１５日（２００８．５．１５）
【国際特許分類】
【出願番号】特願２００７−５３５１５８（Ｐ２００７−５３５１５８）
【出願日】平成１７年１０月５日（２００５．１０．５）
【国際出願番号】ＰＣＴ／ＥＰ２００５／０５５００９
【国際公開番号】ＷＯ２００６／０３７７８７
【国際公開日】平成１８年４月１３日（２００６．４．１３）
【出願人】（３０４０４２３７５）サイトス　バイオテクノロジー　アーゲー (26)
【Ｆターム（参考）】