本発明は、タンパク質の組み合わせを含有する細胞培養培地、ならびにそれらの細胞培養培地を作製する方法、および培養細胞の成長特性を改善するためにそれらの細胞培養培地を使用する方法に関する。

【特許請求の範囲】
【請求項１】
培養中の細胞の細胞成長を高めるための方法であって、前記細胞培養培地への栄養補助剤の添加を含み、前記栄養補助剤は、組換えアルブミンとトランスフェリン関連タンパク質との混合物を含み、前記組換えアルブミンは、
ｉ） 植物中で産生され、
ｉｉ） アルブミン１ｍｇ当たり約１ＥＵ未満の内毒素を有し、かつ
ｉｉｉ） 約２％未満の凝集アルブミンを有し、前記栄養補助剤は、約１対５，０００〜約１対０．５の前記トランスフェリン関連タンパク質と前記組換えアルブミンとの比率（重量／重量）から成る、方法。
【請求項２】
無血清培地に適応した細胞の生産性を高めるための方法であって、前記無血清培地への栄養補助剤の添加を含み、前記栄養補助剤は、組換えアルブミンとトランスフェリン関連タンパク質との混合物を含み、前記組換えアルブミンは、
ｉ） 植物中で産生され、
ｉｉ） アルブミン１ｍｇ当たり約１ＥＵ未満の内毒素を有し、かつ
ｉｉｉ） 約２％未満の凝集アルブミンを有し、前記栄養補助剤は、約１対５，０００〜約１対０．５の前記トランスフェリン関連タンパク質対前記組換えアルブミンの比率（重量／重量）から成る、方法。
【請求項３】
培養中の細胞から産生される組換え産物の収率を改善するための方法であって、前記培養への栄養補助剤の添加を含み、前記栄養補助剤は、組換えアルブミンとトランスフェリン関連タンパク質との混合物を含み、
前記組換えアルブミンは、ｉ）植物中で産生され、ｉｉ）アルブミン１ｍｇ当たり約１ＥＵ未満の内毒素を有し、かつｉｉｉ）約２％未満の凝集アルブミンを有し、
前記栄養補助剤は、約１対５，０００〜約１対０．５の
前記トランスフェリン関連タンパク質と前記組換えアルブミンとの比率（重量／重量）から成る、方法。
【請求項４】
バイオリアクター内で培養中の細胞の生存率を改善するための方法であって、前記バイオリアクター内での前記培養への栄養補助剤の添加を含み、前記栄養補助剤は、
組換えアルブミンとトランスフェリン関連タンパク質との混合物を含み、
前記組換えアルブミンは、ｉ）植物中で産生され、ｉｉ）アルブミン１ｍｇ当たり約１ＥＵ未満の内毒素を有し、かつｉｉｉ）約２％未満の凝集アルブミンを有し、
前記栄養補助剤は、約１対５，０００〜約１対０．５の
前記トランスフェリン関連タンパク質と前記組換えアルブミンとの比率（重量／重量）から成る、方法。
【請求項５】
無血清培地中で成長する細胞の生存率を改善するための方法であって、前記無血清培地への栄養補助剤の添加を含み、前記栄養補助剤は、
組換えアルブミンとトランスフェリン関連タンパク質との混合物を含み、
前記組換えアルブミンは、ｉ）植物中で産生され、ｉｉ）アルブミン１ｍｇ当たり約１ＥＵ未満の内毒素
を有し、かつｉｉｉ）約２％未満の凝集アルブミンを有し、
前記栄養補助剤は、約１対５，０００〜約１対０．５の
前記トランスフェリン関連タンパク質と前記組換えアルブミンとの比率（重量／重量）から成り、
前記栄養補助剤は、約１対５，０００〜約１対０．５の前記トランスフェリン関連タンパク質と前記組換えアルブミンとの比率（重量／重量）から成る、方法。
【請求項６】
前記培養中の細胞の生存率が増加する、請求項２または３に記載の方法。
【請求項７】
前記栄養補助剤は、インスリンをさらに含む、請求項１〜５のいずれかに記載の方法。
【請求項８】
前記栄養補助剤は、セレンおよびエタノールアミンをさらに含む、請求項１〜５のいずれかに記載の方法。
【請求項９】
前記細胞は、組織培養細胞である、請求項１〜５のいずれかに記載の方法。
【請求項１０】
前記細胞は、ＣＨＯ細胞である、請求項１〜５のいずれかに記載の方法。
【請求項１１】
前記細胞は、ハイブリドーマ細胞である、請求項１〜５のいずれかに記載の方法。
【請求項１２】
前記タンパク質は、抗体である、請求項３に記載の方法。
【請求項１３】
前記組換えアルブミンは、少なくとも約０．０１重量／重量％の熱ショックタンパク質を含む、請求項１〜５のいずれかに記載の方法。
【請求項１４】
前記熱ショックタンパク質は、イネ熱ショックタンパク質である、請求項１３に記載の方法。
【請求項１５】
前記熱ショックタンパク質は、イネＨＳＰ７０遺伝子と、イネ胚乳内腔結合タンパク質とから成る群から選択される、請求項１３に記載の方法。
【請求項１６】
前記熱ショックタンパク質は、イネ（ｇｂ｜ＡＣＪ５４８９０．１｜）と、ＥＥＣ６９０７３／ＯｓＩ＿３７９３８と、ＡＡＢ６３４６９とから成る群から選択される、請求項１３に記載の方法。
【請求項１７】
前記トランスフェリン関連タンパク質は、ラクトフェリンである、請求項１３に記載の方法。
【請求項１８】
前記トランスフェリン関連タンパク質は、トランスフェリンである、請求項１３に記載の方法。
【請求項１９】
前記トランスフェリンと前記組換えアルブミンとの前記比率は、約１対５０〜約１対５０００である、請求項１８に記載の方法。
【請求項２０】
前記ラクトフェリンは、組換えラクトフェリンである、請求項１７に記載の方法。
【請求項２１】
前記ラクトフェリンと前記組換えアルブミンとの前記比率は、約１対３〜約１対０．３３である、請求項２０に記載の方法。
【請求項２２】
細胞生存率における前記改善は、同一の培養条件下で測定される時に、単独で添加された場合の前記組換えアルブミンおよび前記トランスフェリン関連タンパク質の合算効果と比較して、３０％より大きい、請求項４〜６のいずれかに記載の方法。
【請求項２３】
組換えアルブミンとトランスフェリン関連タンパク質との混合物を含む栄養補助剤であって、前記組換えアルブミンは、ｉ）植物中で産生され、ｉｉ）アルブミン１ｍｇ当たり約１ＥＵ未満の内毒素を有し、かつｉｉｉ）約２％未満の凝集アルブミンを有し、前記栄養補助剤は、約１対５，０００〜約１対０．５の前記トランスフェリン関連タンパク質と前記組換えアルブミンとの比率（重量／重量）から成る、栄養補助剤。
【請求項２４】
前記組換えアルブミンは、少なくとも約０．０１重量／重量％の熱ショックタンパク質を含む、請求項２３に記載の栄養補助剤。
【請求項２５】
前記熱ショックタンパク質は、イネ熱ショックタンパク質である、請求項２４に記載の栄養補助剤。
【請求項２６】
前記熱ショックタンパク質は、イネＨＳＰ７０遺伝子と、イネ胚乳内腔結合タンパク質とから成る群から選択される、請求項２４に記載の栄養補助剤。
【請求項２７】
前記熱ショックタンパク質は、イネ（ｇｂ｜ＡＣＪ５４８９０．１｜）と、ＥＥＣ６９０７３／ＯｓＩ＿３７９３８と、ＡＡＢ６３４６９とから成る群から選択される、請求項２４に記載の栄養補助剤。
【請求項２８】
前記栄養補助剤は、少なくとも約０．０４重量／重量％のＨＳＰ７０を含む、請求項２４に記載の栄養補助剤。
【請求項２９】
前記トランスフェリン関連タンパク質は、ラクトフェリンである、請求項２４に記載の栄養補助剤。
【請求項３０】
前記トランスフェリン関連タンパク質は、トランスフェリンである、請求項２４に記載の栄養補助剤。
【請求項３１】
前記トランスフェリンと前記組換えアルブミンとの前記比率は、約１対５０〜約１対５０００である、請求項３０に記載の栄養補助剤。
【請求項３２】
前記ラクトフェリンと前記組換えアルブミンとの前記比率は、約１対３〜約１対０．３３である、請求項３１に記載の栄養補助剤。

【図２】

【図３】

【図４】

【図５Ａ】

【図５Ｂ】

【図５Ｃ】

【図５Ｄ】

【図６】

【図７】

【図８】

【図８（ＩＩ）】

【図９】

【図１０】

【図１１】

【図１２】

【図１３】

【公表番号】特表２０１２−５１８４０９（Ｐ２０１２−５１８４０９Ａ）
【公表日】平成２４年８月１６日（２０１２．８．１６）
【国際特許分類】
【出願番号】特願２０１１−５５１２２５（Ｐ２０１１−５５１２２５）
【出願日】平成２２年２月１８日（２０１０．２．１８）
【国際出願番号】ＰＣＴ／ＵＳ２０１０／０２４６２６
【国際公開番号】ＷＯ２０１０／０９６５８８
【国際公開日】平成２２年８月２６日（２０１０．８．２６）
【出願人】（５１１２０３５７０）ベントリア・バイオサイエンス (2)
【氏名又は名称原語表記】Ｖｅｎｔｒｉａ　Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅ
【Ｆターム（参考）】