プロテアーゼバリアント
本発明は、改変された特異性および／または活性を有する野生型ヒトネプリライシンのプロテアーゼバリアントを含むポリペプチドに関する。 特に、本発明は、特定の物質、特に、アミロイドベータに対して増大した特異性および／または活性を有するヒトのネプリライシンから誘導したプロテアーゼバリアントを含むポリペプチドに関する。
Notice: Undefined index: DEJ in /mnt/www/gzt_disp.php on line 298
【特許請求の範囲】
【請求項１】
配列番号：２に示した野生型ヒトネプリライシン細胞外ドメインのプロテアーゼバリアントを含むポリペプチドであって、野生型ヒトネプリライシンと比較して、ネプリライシン基質に対して少なくとも１０倍大きな特異性を有するポリペプチド。
【請求項２】
前記ポリペプチドが、野生型ヒトネプリライシン(配列番号：１)と比較して、アミロイドベータに対して少なくとも１０倍大きな特異性を有する、請求項１に記載のプロテアーゼバリアントを含むポリペプチド。
【請求項３】
野生型ヒトネプリライシン細胞外触媒ドメイン(配列番号：２)のプロテアーゼバリアントを含むポリペプチドであって、野生型ヒトネプリライシンと比較して、アミロイドベータペプチドに対して大きな特異性を有し、T99、S100、S101、G104、D107、G195、T206、H211、H214、H217、D219、Q220、G224、S227、R228、D229、F247、A287、R292、L323、Y346、M376、D377、L378、S380、S381、F393、R394、A396、G399、E403、T404、A405、Y413、N415、G416、N417、E419、V422、A468、I485、I510、L514、F516、S517、Q518、Q521、L522、K524、E533、W534、S536、G537、V540、Y545、S546、S547、G548、D590、D591、N592、G593、F596、G600、W606、Q624、A649、V692、W693、Y697、Y701、N704、S705、T708、D709、V710、S712、G714、R735、および、K745の位置にある一つまたはそれ以上のアミノ酸が、天然に存在するその他のアミノ酸と置換されているポリペプチド。
【請求項４】
ヒトネプリライシン細胞外触媒ドメイン(配列番号：２)のプロテアーゼバリアントを含むポリペプチドであって、野生型ヒトネプリライシンと比較して、アミロイドベータペプチドに対して大きな特異性を有し、一つまたはそれ以上の位置において、
T99をD、
S100をI、
S101を、L、V、Y、または、I、
G104を、L、M、R、V、または、W、
D107を、N、V、または、W、
G195を、V、
T206を、R、
H211を、N、
H214を、N、
H217を、N、
D219を、A、
Q220を、K、
G224を、W、
S227を、L、または、R、
R228を、G、
D229を、N、
F247を、C、または、L、
A287を、S、
R292を、M、
L323を、F、
Y346を、W、
M376を、Y、
D377を、F、H、T、Y、または、G、
L378を、E、K、または、R、
S380を、K、または、R、
S381を、R、
F393を、S、
R394を、C、E、G、M、または、P、
A396を、D、
G399を、V、
E403を、H、L、または、S、
T404を、D、または、F、
A405を、T、
Y413を、D、
N415を、A、
G416を、R、または、W、
N417を、W、
E419を、L、M、F、または、K、
V422を、M、
A468を、S、
I485を、V、
I510を、D、E、F、または、R、
L514を、K、または、F、
F516を、R、
S517を、D、F、R、W、または、Y、
Q518を、R、または、P、
Q521を、R、または、E、
L522を、Y、
K524を、R、
E533を、F、A、または、R、
W534を、C、
S536を、G、P、R、E、E、または、W、
G537を、E、または、T、
V540を、C、E、F、または、G、
Y545を、S、または、V、
S546を、D、E、I、R、W、または、Y、
S547を、D、E、F、G、または、K、
G548を、C、E、R、または、W、
D590を、F、M、または、W、
D591を、E、または、L、
N592を、P、
G593を、V、または、D、
F596を、P、
G600を、D、V、または、W、
W606を、S、
Q624を、H、
A649を、G、
V692を、M、
W693を、C、F、N、Q、V、または、L、
Y697を、G、
Y701を、G、または、R、
N704を、E、G、R、または、W、
S705を、R、
T708を、K、
D709を、K、または、V、
V710を、F、
S712を、H、L、Q、または、G、
G714を、H、または、K、
R735を、H、および、
K745を、N へと交換するアミノ酸の交換が行われているポリペプチド。
【請求項５】
野生型ヒトネプリライシン細胞外触媒ドメイン(配列番号：２)のプロテアーゼバリアントを含むポリペプチドであって、野生型ヒトネプリライシンと比較して、アミロイドベータペプチドに対して大きな特異性を有し、G399が、その他の天然に存在するアミノ酸と置換され、および／または、G714が、その他の天然に存在するアミノ酸と置換され、前記天然に存在するアミノ酸が、所望により、アラニン(A)以外である、ポリペプチド。
【請求項６】
G399が、バリン(V)と置換され、および／または、G714が、リシン(K)と置換される、請求項５に記載のプロテアーゼバリアントを含むポリペプチド。
【請求項７】
前記ポリペプチドが、アミロイドβ４０、アミロイドβ４２、アンジオテンシン-１および-２、ANP、BNP、ブラジキニン、エンドセリン-１および-２、ニューロペプチドＹ、ニューロテンシン、アドレノメデュリン、ボンベシン、BLP、CGRP、エンケファリン、FGF-２、fMLP、GRP、ニューロキニンＡ、ニューロメジンＣ、オキシトシン、PAMP、サブスタンスＰまたはVIPに対する変化した特異性を有する、配列番号：２に示した野生型ヒトネプリライシン細胞外触媒ドメインのプロテアーゼバリアントを含む、請求項１乃至６のいずれかに記載のポリペプチド。
【請求項８】
アミロイドβ４０、アミロイドβ４２、アンジオテンシン-１および-２、ANP、BNP、ブラジキニン、エンドセリン-１および-２、ニューロペプチドＹ、または、ニューロテンシンに対する変化した特異性を有する、配列番号：２に示した野生型ヒトネプリライシン細胞外ドメインのプロテアーゼバリアントを含む、請求項１乃至６のいずれかに記載のポリペプチド。
【請求項９】
プロテアーゼバリアントのＮ末端に半減期調節部位を含み、好ましくは、前記半減期調節部位が、Fcドメイン、HSA、または、これらの変異体から選択され、所望により、前記半減期調節部位とプロテアーゼバリアントがリンカーによって結合している、請求項１乃至８のいずれかに記載のポリペプチド。
【請求項１０】
請求項１乃至９のいずれかに記載のポリペプチドをコードする核酸。
【請求項１１】
請求項１０に記載の核酸を含むベクター。
【請求項１２】
請求項１１に記載のベクターを含む宿主細胞。
【請求項１３】
請求項１乃至９のいずれかに記載のポリペプチドを製造する方法であって、当該方法が、以下の工程、すなわち；
ａ．プロテアーゼバリアントの発現に好適な条件下で、請求項１２に記載の宿主細胞を培養する工程、および、
ｂ．宿主細胞培養物からプロテアーゼバリアントを回収する工程、を含む方法。
【請求項１４】
請求項１乃至９のいずれかに記載のポリペプチドを含む医薬組成物。
【請求項１５】
アルツハイマー病といったアミロイドベータ関連病などのヒトのネプリライシン基質が関連する疾患を治療する方法であって、治療有効量の請求項１乃至９のいずれかに記載のプロテアーゼバリアントを含むポリペプチドを、治療を必要とする患者に投与することを含み、それにより、ヒトのネプリライシン基質が関連する疾患の症状を緩和する方法。
【請求項１６】
アルツハイマー病といったアミロイドベータ関連病などのヒトのネプリライシン基質が関連する疾患のための薬剤として用いられる、請求項１乃至９のいずれかに記載のポリペプチド。
【請求項１７】
アルツハイマー病などのアミロイドベータ関連病を予防、および／または、治療するために用いられる、請求項１乃至９のいずれかに記載のアミロイドベータに対して増大した特異性を有するポリペプチド。
【請求項１】
配列番号：２に示した野生型ヒトネプリライシン細胞外ドメインのプロテアーゼバリアントを含むポリペプチドであって、野生型ヒトネプリライシンと比較して、ネプリライシン基質に対して少なくとも１０倍大きな特異性を有するポリペプチド。
【請求項２】
前記ポリペプチドが、野生型ヒトネプリライシン(配列番号：１)と比較して、アミロイドベータに対して少なくとも１０倍大きな特異性を有する、請求項１に記載のプロテアーゼバリアントを含むポリペプチド。
【請求項３】
野生型ヒトネプリライシン細胞外触媒ドメイン(配列番号：２)のプロテアーゼバリアントを含むポリペプチドであって、野生型ヒトネプリライシンと比較して、アミロイドベータペプチドに対して大きな特異性を有し、T99、S100、S101、G104、D107、G195、T206、H211、H214、H217、D219、Q220、G224、S227、R228、D229、F247、A287、R292、L323、Y346、M376、D377、L378、S380、S381、F393、R394、A396、G399、E403、T404、A405、Y413、N415、G416、N417、E419、V422、A468、I485、I510、L514、F516、S517、Q518、Q521、L522、K524、E533、W534、S536、G537、V540、Y545、S546、S547、G548、D590、D591、N592、G593、F596、G600、W606、Q624、A649、V692、W693、Y697、Y701、N704、S705、T708、D709、V710、S712、G714、R735、および、K745の位置にある一つまたはそれ以上のアミノ酸が、天然に存在するその他のアミノ酸と置換されているポリペプチド。
【請求項４】
ヒトネプリライシン細胞外触媒ドメイン(配列番号：２)のプロテアーゼバリアントを含むポリペプチドであって、野生型ヒトネプリライシンと比較して、アミロイドベータペプチドに対して大きな特異性を有し、一つまたはそれ以上の位置において、
T99をD、
S100をI、
S101を、L、V、Y、または、I、
G104を、L、M、R、V、または、W、
D107を、N、V、または、W、
G195を、V、
T206を、R、
H211を、N、
H214を、N、
H217を、N、
D219を、A、
Q220を、K、
G224を、W、
S227を、L、または、R、
R228を、G、
D229を、N、
F247を、C、または、L、
A287を、S、
R292を、M、
L323を、F、
Y346を、W、
M376を、Y、
D377を、F、H、T、Y、または、G、
L378を、E、K、または、R、
S380を、K、または、R、
S381を、R、
F393を、S、
R394を、C、E、G、M、または、P、
A396を、D、
G399を、V、
E403を、H、L、または、S、
T404を、D、または、F、
A405を、T、
Y413を、D、
N415を、A、
G416を、R、または、W、
N417を、W、
E419を、L、M、F、または、K、
V422を、M、
A468を、S、
I485を、V、
I510を、D、E、F、または、R、
L514を、K、または、F、
F516を、R、
S517を、D、F、R、W、または、Y、
Q518を、R、または、P、
Q521を、R、または、E、
L522を、Y、
K524を、R、
E533を、F、A、または、R、
W534を、C、
S536を、G、P、R、E、E、または、W、
G537を、E、または、T、
V540を、C、E、F、または、G、
Y545を、S、または、V、
S546を、D、E、I、R、W、または、Y、
S547を、D、E、F、G、または、K、
G548を、C、E、R、または、W、
D590を、F、M、または、W、
D591を、E、または、L、
N592を、P、
G593を、V、または、D、
F596を、P、
G600を、D、V、または、W、
W606を、S、
Q624を、H、
A649を、G、
V692を、M、
W693を、C、F、N、Q、V、または、L、
Y697を、G、
Y701を、G、または、R、
N704を、E、G、R、または、W、
S705を、R、
T708を、K、
D709を、K、または、V、
V710を、F、
S712を、H、L、Q、または、G、
G714を、H、または、K、
R735を、H、および、
K745を、N へと交換するアミノ酸の交換が行われているポリペプチド。
【請求項５】
野生型ヒトネプリライシン細胞外触媒ドメイン(配列番号：２)のプロテアーゼバリアントを含むポリペプチドであって、野生型ヒトネプリライシンと比較して、アミロイドベータペプチドに対して大きな特異性を有し、G399が、その他の天然に存在するアミノ酸と置換され、および／または、G714が、その他の天然に存在するアミノ酸と置換され、前記天然に存在するアミノ酸が、所望により、アラニン(A)以外である、ポリペプチド。
【請求項６】
G399が、バリン(V)と置換され、および／または、G714が、リシン(K)と置換される、請求項５に記載のプロテアーゼバリアントを含むポリペプチド。
【請求項７】
前記ポリペプチドが、アミロイドβ４０、アミロイドβ４２、アンジオテンシン-１および-２、ANP、BNP、ブラジキニン、エンドセリン-１および-２、ニューロペプチドＹ、ニューロテンシン、アドレノメデュリン、ボンベシン、BLP、CGRP、エンケファリン、FGF-２、fMLP、GRP、ニューロキニンＡ、ニューロメジンＣ、オキシトシン、PAMP、サブスタンスＰまたはVIPに対する変化した特異性を有する、配列番号：２に示した野生型ヒトネプリライシン細胞外触媒ドメインのプロテアーゼバリアントを含む、請求項１乃至６のいずれかに記載のポリペプチド。
【請求項８】
アミロイドβ４０、アミロイドβ４２、アンジオテンシン-１および-２、ANP、BNP、ブラジキニン、エンドセリン-１および-２、ニューロペプチドＹ、または、ニューロテンシンに対する変化した特異性を有する、配列番号：２に示した野生型ヒトネプリライシン細胞外ドメインのプロテアーゼバリアントを含む、請求項１乃至６のいずれかに記載のポリペプチド。
【請求項９】
プロテアーゼバリアントのＮ末端に半減期調節部位を含み、好ましくは、前記半減期調節部位が、Fcドメイン、HSA、または、これらの変異体から選択され、所望により、前記半減期調節部位とプロテアーゼバリアントがリンカーによって結合している、請求項１乃至８のいずれかに記載のポリペプチド。
【請求項１０】
請求項１乃至９のいずれかに記載のポリペプチドをコードする核酸。
【請求項１１】
請求項１０に記載の核酸を含むベクター。
【請求項１２】
請求項１１に記載のベクターを含む宿主細胞。
【請求項１３】
請求項１乃至９のいずれかに記載のポリペプチドを製造する方法であって、当該方法が、以下の工程、すなわち；
ａ．プロテアーゼバリアントの発現に好適な条件下で、請求項１２に記載の宿主細胞を培養する工程、および、
ｂ．宿主細胞培養物からプロテアーゼバリアントを回収する工程、を含む方法。
【請求項１４】
請求項１乃至９のいずれかに記載のポリペプチドを含む医薬組成物。
【請求項１５】
アルツハイマー病といったアミロイドベータ関連病などのヒトのネプリライシン基質が関連する疾患を治療する方法であって、治療有効量の請求項１乃至９のいずれかに記載のプロテアーゼバリアントを含むポリペプチドを、治療を必要とする患者に投与することを含み、それにより、ヒトのネプリライシン基質が関連する疾患の症状を緩和する方法。
【請求項１６】
アルツハイマー病といったアミロイドベータ関連病などのヒトのネプリライシン基質が関連する疾患のための薬剤として用いられる、請求項１乃至９のいずれかに記載のポリペプチド。
【請求項１７】
アルツハイマー病などのアミロイドベータ関連病を予防、および／または、治療するために用いられる、請求項１乃至９のいずれかに記載のアミロイドベータに対して増大した特異性を有するポリペプチド。
【図４】
【図５】
【図６】
【図７】
【図８】
【図９】
【図１０】
【図１１】
【図１２】
【図１３】
【図５】
【図６】
【図７】
【図８】
【図９】
【図１０】
【図１１】
【図１２】
【図１３】
【公表番号】特表２０１２−５３０４９８（Ｐ２０１２−５３０４９８Ａ）
【公表日】平成２４年１２月６日（２０１２．１２．６）
【国際特許分類】
【出願番号】特願２０１２−５１６３７７（Ｐ２０１２−５１６３７７）
【出願日】平成２２年６月２１日（２０１０．６．２１）
【国際出願番号】ＰＣＴ／ＵＳ２０１０／０３９３９２
【国際公開番号】ＷＯ２０１０／１４８４１３
【国際公開日】平成２２年１２月２３日（２０１０．１２．２３）
【出願人】（５０４３３３９７２）メディミューン，エルエルシー (108)
【Ｆターム（参考）】
【公表日】平成２４年１２月６日（２０１２．１２．６）
【国際特許分類】
【出願日】平成２２年６月２１日（２０１０．６．２１）
【国際出願番号】ＰＣＴ／ＵＳ２０１０／０３９３９２
【国際公開番号】ＷＯ２０１０／１４８４１３
【国際公開日】平成２２年１２月２３日（２０１０．１２．２３）
【出願人】（５０４３３３９７２）メディミューン，エルエルシー (108)
【Ｆターム（参考）】
[ Back to top ]