体重管理のための併用療法
体重管理のための組成物および方法を提供する。組成物は一般にＭＣＨＲ拮抗薬を、ＣＢ１拮抗薬と組み合わせて、またはＣＢ１拮抗薬と同時投与されるように製剤化して、含む。ある方法はＭＣＨＲ拮抗薬とＣＢ１拮抗薬を患者に同時投与する工程を含む。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は一般的には、体重管理において使用するための薬学的組成物および治療法に関する。
【背景技術】
【０００２】
肥満は先進国において最も一般的な栄養上の問題である。ある推定におよれば、肥満は合衆国の人口の半分以上に影響し、毎年３００，０００名がこの状態が原因で死亡している。肥満は、しばしば深刻な健康状態、例えば、糖尿病、アテローム性動脈硬化症、肺塞症、冠動脈疾患、高血圧症、脳卒中、糖尿病、睡眠時無呼吸症、深部静脈血栓症、高脂血症およびいくつかの癌、ならびに合併症、多くの慢性状態、例えば呼吸器疾患、変形性関節症、骨粗鬆症、胆嚢疾患および異常脂質血症に至る。幸いにも、肥満により引き起こされるまたは悪化する状態の多くは、減量により解決され、または劇的に改善される。
【０００３】
以前は単なる行動的問題（すなわち、自発的過食症の結果）であると考えられていたが、現在では、肥満は、食物摂取、食物が引き起こすエネルギー消費および脂肪体と徐脂肪体同化の間の均衡の調節不全が関係する複雑な多因子疾患であると認識されている。環境因子および遺伝因子の両方が肥満の発現に重要な役割を果たす。その結果、完全に行動修正に焦点を当てた治療プログラムは制限された効果しか有さず、常習率が９５％を超える。薬物療法が現在では、減量およびその後の体重管理の重要な構成要素であると考えられている。
【０００４】
肥満の原因となる１つのシグナル伝達経路は、メラミン凝集ホルモン（ＭＣＨ）、環状１９アミノ酸視床下部ペプチドにより調節される。ＭＣＨは食物摂取およびエネルギーバランスのレギュレータとして機能し、外側および後部視床下部における神経伝達物質として働く。ＭＣＨ活性は、特定の受容体への結合により媒介され、ＭＣＨ１型（ＭＣＨＲ１）および２型（ＭＣＨＲ２）が識別されている。ＭＣＨＲ１は、コラコウスキー（Ｋｏｌａｋｏｗｓｋｉ）ら（１９９６）ＦＥＢＳ Ｌｅｔｔ．３９８：２５３−５８、ラカエ（Ｌａｋａｙｅ）ら（１９９８）Ｂｉｏｃｈｉｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ａｃｔａ １４０１：２１６−２２０、チャンバース（Ｃｈａｍｂｅｒｓ）ら、ネイチャー（Ｎａｔｕｒｅ）４００；２６１−６５、およびサイトウ（Ｓａｉｔｏ）ら（１９９９）ネイチャー４００：２６５−６９により最初に報告された。ＭＣＨＲ２はアン（Ａｎ）ら（２００１）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ９８：７５７６−７５８１、セイラー（Ｓａｉｌｅｒ）ら（２００１）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ９８：７５６４−７５６９、ヒル（Ｈｉｌｌ）ら（２００１）Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７６：２０１２５−２０１２９、およびモリ（Ｍｏｒｉ）ら（２００１）Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ｒｅｓ．Ｃｏｍｍｕｎ．２８３：１０１３−１０１８により記述されており、ＭＣＨＲ１と３０％を超えるアミノ酸が同一である。ＭＣＨが結合すると、ＭＣＨＲ１およびＭＣＨＲ２は、用量依存的細胞内カルシウム放出を媒介する。抗肥満薬として使用するために、様々なＭＣＨ受容体拮抗薬が報告されており、ＰＣＴ国際公開番号ＷＯ０３／０５９２８９、ＷＯ０３／０６０４７５、ＷＯ０２／０９４７９９およびＷＯ０２／０４４３３において記述されているものが挙げられる。
【０００５】
【特許文献１】国際公開第０３／０５９２８９号パンフレット
【特許文献２】国際公開第０３／０６０４７５号パンフレット
【特許文献３】国際公開第０２／０９４７９９号パンフレット
【特許文献４】国際公開第０２／０４４３３号パンフレット
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００６】
ＭＣＨ受容体拮抗薬は、肥満治療において有望であるが、当技術分野では、食欲を減少させるための、および体重管理のための（例えば、肥満および他の摂食障害を治療および予防するための）改良された薬学的組成物および方法が依然として必要である。本発明はこの要求を満たし、さらに関連する利点を提供する。
【課題を解決するための手段】
【０００７】
本発明は体重管理（例えば、肥満の治療および予防）、食欲減少および摂食障害の治療のために有益な組成物および方法を提供する。
【０００８】
一定の観点では、本明細書で提供した組成物は第１の治療的有効量の少なくとも１つの非毒性ＭＣＨＲ拮抗薬と第２の治療的有効量の少なくとも１つの非毒性ＣＢ１拮抗薬とを、生理学的に許容される担体または賦形剤と共に含む。
【０００９】
パッケージ薬学的調製物もまた提供する。一定のそのようなパッケージ薬学的調製物は（ｉ）少なくとも１つの非毒性ＭＣＨＲ拮抗薬を含む組成物を保持する容器と、（ｉｉ）第１の治療的有効量のＭＣＨＲ拮抗薬を、第２の治療的有効量の非毒性ＣＢ１拮抗薬と同時に患者に投与することを示す使用説明書とを含む。
【００１０】
他のパッケージ薬学的調製物は、（ｉ）少なくとも１つの非毒性ＭＣＨＲ拮抗薬と、（ｉｉ）少なくとも１つの非毒性ＣＢ１拮抗薬と、（ｉｉｉ）第１の治療的有効量のＭＣＨＲ拮抗薬と第２の治療的有効量の非毒性ＣＢ１拮抗薬を、肥満治療のためにまたは食物摂取および/または食欲を減少させるために患者に投与することを示す使用説明書とを含む。
【００１１】
別の観点では、（ｉ）第１の治療的有効量の少なくとも１つの非毒性ＭＣＨＲ拮抗薬と、（ｉｉ）第２の治療的有効量の少なくとも１つの非毒性ＣＢ１拮抗薬を同時に患者に投与する工程を含む、患者における食物摂取および／または食欲を減少させるための方法を提供する。
【００１２】
別の観点では、（ｉ）第１の治療的有効量の少なくとも１つの非毒性ＭＣＨＲ拮抗薬と、（ｉｉ）第２の治療的有効量の少なくとも１つの非毒性ＣＢ１拮抗薬を同時に患者に投与する工程を含む、患者における肥満を治療するための方法を提供する。
【００１３】
本明細書で提供した組成物、パッケージ薬学的調製物および方法の一定の実施形態では、第１の治療的有効量はＭＣＨＲ拮抗薬に対する最大推奨量の１／２未満であり、および／または第２の治療的有効量はＣＢ１拮抗薬に対する最大推奨用量の１／２未満である。
【００１４】
組成物の別の実施形態では、本明細書で提供したパッケージ薬学的調製物および方法では、第１の治療的有効量は、第２の抗肥満薬の同時投与無しで、ＭＣＨＲ拮抗薬の米国臨床試験で有効性が証明されたＭＣＨＲ拮抗薬の最小用量より少なく、および／または第２の治療的有効量は、第２の抗肥満薬の同時投与無しで、ＣＢ１拮抗薬の米国臨床試験で有効性が証明されたＣＢ１拮抗薬の最小用量より少ない。
【００１５】
本明細書で提供したパッケージ薬学的調製物および方法のさらに別の態様では、第１の治療的有効量は、第２の抗肥満薬の同時投与無しで患者に投与するためのＭＣＨＲ拮抗薬の最小市販用量（ｍｉｎｉｍｕｍ ｍａｒｋｅｔｅｄ ｄｏｓｅ）より少なく、および／または第２の治療的有効量は、第２の抗肥満薬の同時投与無しで患者に投与するためのＣＢ１拮抗薬の最小市販用量より少ない。
【００１６】
他の観点では、ＭＣＨＲ拮抗薬とＣＢ１拮抗薬とを含む薬物組成物に対する活性成分を識別するため、または患者に同時投与するための治療薬を選択するための方法もまた提供し、そのような方法は、哺乳類に治療的有効量で同時に投与されると、哺乳類における食物摂取に少なくとも相加効果を示すＭＣＨＲ拮抗薬とＣＢ１拮抗薬を選択する工程を含む。
【００１７】
関連する観点では、本発明は、（ｉ）哺乳類に治療的有効量で同時に投与されると、哺乳類の食物摂取に少なくとも相加効果を示すＭＣＨＲ拮抗薬とＣＢ１拮抗薬を識別（または同定）する工程と、（ｉｉ）第１の治療的有効量のＭＣＨＲ拮抗薬と第２の治療的有効量のＣＢ１拮抗薬とを生理学的に許容される担体または賦形剤と組み合わせる工程と、を含む、薬学的組成物を調製するための方法を提供する。
【００１８】
本明細書では、（ｉ）哺乳類に治療的有効量で同時に投与されると、哺乳類の食物摂取に少なくとも相加効果を有するＭＣＨＲ拮抗薬とＣＢ１拮抗薬を識別（または同定）する工程と、（ｉｉ）ＭＣＨＲ拮抗薬とＣＢ１拮抗薬とを、第１の治療的有効量のＭＣＨＲ拮抗薬と第２の治療的有効量のＣＢ１拮抗薬を、食物摂取または食欲を減少させるため、または肥満治療のために、患者に同時に投与することを示した使用説明書と共にパッケージする工程と、を含む、パッケージ薬学的調製物を調製するための方法も提供する。
【００１９】
（ｉ）第１の治療的有効量のＭＣＨＲ拮抗薬を用い、ＣＢ１拮抗薬の同時投与無しで処置した哺乳類における食物摂取に対するＭＣＨＲ拮抗薬の効果を決定する工程と、（ｉｉ）第２の治療的有効量のＣＢ１拮抗薬を用いて、ＭＣＨＲ拮抗薬の同時投与無しで処置した哺乳類における食物摂取に対するＣＢ１拮抗薬の効果を決定する工程と、（ｉｉｉ）第１の治療的有効量のＭＣＨＲ拮抗薬と第２の治療的有効量のＣＢ１拮抗薬により同時に処置した哺乳類における食物摂取に対するＭＣＨＲ拮抗薬とＣＢ１拮抗薬の効果を決定する工程と、（ｉｖ）必要に応じて、異なるＭＣＨＲ拮抗薬またはＣＢ１拮抗薬を用いて（ｉ）〜（ｉｉｉ）の工程を繰り返す工程と、（ｖ）工程（ｉｉｉ）で決定した食物摂取に対する効果が、工程（ｉ）および（ｉｉ）で決定した食物摂取に対する効果の和と等しい、またはそれ以上であるＭＣＨＲ拮抗薬とＣＢ１拮抗薬を選択する工程と、を含む、ＭＣＨＲ拮抗薬とＣＢ１拮抗薬とを含む薬学的組成物に対する活性成分を識別するための方法をさらに提供する。
【００２０】
別の観点では、（ａ）ＣＢ１を含む第１の細胞膜調製物を、（ｉ）標識ＧＴＰと、（ｉｉ）ＣＢ１作用薬と、（ｉｉｉ）試験化合物とに接触させ、試験膜調製物を獲得する工程と、（ｂ）ＣＢ１を含む第２の細胞膜調製物を（ｉ）標識ＧＴＰと、（ｉｉ）ＣＢ１作用薬とに接触させ、対照膜調製物を獲得する工程とを含み、工程（ａ）および（ｂ）は、同時にまたはいずれかの順で、ＧＴＰがＣＢ１に結合するのに適した条件下で実施し、さらに（ｃ）同時にまたはいずれかの順で、（ｉ）試験膜調製物中の結合した標識ＧＴＰ量を示す試験シグナルと、（ｉｉ）対照膜調製物中の結合した標識ＧＴＰの量を示す対照シグナルと、を検出する工程と、（ｄ）試験シグナルを対照シグナルと比較する工程とを含む、試験化合物のＣＢ１拮抗薬活性を決定するための方法をさらに提供する。そのような方法を使用して、新規ＣＢ１拮抗薬を識別（または同定）し、公知のＣＢ１拮抗薬の活性のキャラクタリゼーションを実施してもよい。
【００２１】
本発明のこれらのおよび他の観点は、下記の詳細な説明を参照すれば明らかになると思われる。
【発明を実施するための最良の形態】
【００２２】
上記のように、本発明は食欲減少および体重管理のための併用療法を提供する。ある観点では、本発明は肥満を予防または治療するため、および／または食欲または食物摂取を減少させるための組成物および方法を提供する。そのような組成物および方法を使用して、肥満になる危険のある（例えば、以前は肥満患者）非肥満患者における肥満の発現を予防してもよく、または肥満患者の体重減少を促進してもよい。本明細書で提供した一定の組成物は、非毒性ＭＣＨＲ拮抗薬と非毒性ＣＢ１拮抗薬とを、生理学的に許容される担体または賦形剤と共に含む。本明細書で提供した方法は一般に、治療的有効量のＭＣＨＲ拮抗薬とＣＢ１拮抗薬とを患者に同時投与する工程を含む。
【００２３】
〈専門用語〉
「患者」という用語は、本明細書で記述されるように、治療を受ける、または治療が考えられる任意の個人である。患者にはヒト、ならびに他の哺乳類、例えば、コンパニオンアニマル（ｃｏｍｐａｎｉｏｎ ａｎｉｍａｌ）および家畜（ｌｉｖｅｓｔｏｃｋ）が含まれ、一般に肥満であるか、肥満になる危険性がある。
【００２４】
本明細書で使用されるように、患者は、肥満度指数が２８を超えると「肥満」と考えられる。肥満度指数（ＢＭＩ）は下記式を用いて容易に計算することができる：
ＢＭＩ＝（体重ｋｇ）／（身長ｍ）２
【００２５】
患者が、肥満の可能性を増加させる１つまたは複数の危険因子を有する場合、患者は「肥満になる危険がある」と考えられる。そのような危険因子としては、以前の肥満症、家族性の肥満症、および体重増加を促進する副作用のある薬剤による治療が挙げられる。
【００２６】
「ＭＣＨ受容体」または「ＭＣＨＲ」という用語は、上記で記述したように、天然の哺乳類（例えば、ヒト、イヌ、ネコまたはサル）のＭＣＨ１型または２型受容体、例えばＭＣＨＲ１およびＭＣＨＲ２を示す。ＰＣＴ国際出願公開番号第ＷＯ０３／０６０４７５号の配列番号１および２は、それぞれ、カニクイザル・マカク（Ｃｙｎｏｍｏｌｇｕｓ ｍａｃａｑｕｅ）ＭＣＨＲ１のＤＮＡおよびアミノ酸配列を示す。
【００２７】
「ＭＣＨ受容体拮抗薬」または「ＭＣＨＲ拮抗薬」は、ＭＣＨ受容体−媒介シグナル伝達を検出可能なほど（ｄｅｔｅｃｔａｂｌｙ）阻害する化合物である。そのような阻害は、実施例３で示した代表的な機能アッセイ法を用いて、またはＭＣＨが１つまたは複数のＭＣＨ受容体に結合するのを阻害する化合物の能力を検出するアッセイ法、例えば、実施例２で示したアッセイ法を用いて決定してもよい。「ＭＣＨＲ拮抗薬」という用語は中性（ｎｅｕｔｒａｌ）拮抗薬および逆作用薬を含む。本明細書で記述したように使用するためのＭＣＨＲ拮抗薬は一般に非毒性である。ある実施形態では、ＭＣＨＲ拮抗薬はかなり低い分子量（例えば、７００ａｍｕ未満）を有し、マルチアリール（すなわち、複数の非縮合または縮合アリール基を有する）であり、アミノ酸を有さない（例えば、ペプチドではない）。好ましいＭＣＨＲ拮抗薬は特異的に、高い親和性で１つまたは複数のＭＣＨ受容体と結合する。
【００２８】
「逆作用薬」は、ＭＣＨ受容体の活性を減少させ、添加したリガンドがない場合の基本的な活性レベルより低くする化合物である。逆作用薬はまた、ＭＣＨ受容体でＭＣＨの活性を阻害してもよく、および／またはＭＣＨのＭＣＨ受容体への結合を阻害してもよい。ＭＣＨがＭＣＨ受容体に結合するのを阻害する化合物の能力は、結合アッセイ法、例えば実施例２で示した結合アッセイ法により測定してもよい。ＭＣＨ受容体の基本活性、ならびに拮抗薬の存在によるＭＣＨ受容体活性の減少は、カルシウム移動（ｍｏｂｉｌｉｚａｔｉｏｎ）アッセイ法、例えば実施例３のアッセイ法により決定してもよい。
【００２９】
ＭＣＨ受容体の「中性拮抗薬」は、ＭＣＨ受容体でのＭＣＨの活性を阻害するが、受容体の基本活性には有意の変化を与えない（例えば、リガンド無しで実施した実施例３で記述したアッセイ法では、ＭＣＨ受容体活性は、わずか１０％しか、より好ましくは５％しか、さらにより好ましくは２％しか減少せず、最も好ましくは、活性の検出可能な減少はない）化合物である。中性拮抗薬はまた、リガンドのＭＣＨ受容体へのリガンド結合を阻害してもよい。
【００３０】
ＭＣＨＲ拮抗薬が、他のＧ蛋白質結合受容体（例えば、神経ペプチドＹ、ドーパミンおよびβ−アドレナリン受容体）に対する結合で測定されるＫｉよりも、１０倍、好ましくは１００倍、より好ましくは１０００倍低いＫｉでＭＣＨ受容体に結合する場合（総結合−非特異的結合）、ＭＣＨＲ拮抗薬は「特異的に」ＭＣＨ受容体に結合する。
【００３１】
ＭＣＨＲ拮抗薬は、ＭＣＨ受容体でのＫｉが１μＭ未満、好ましくは５００ｎＭ、１００ｎＭまたは１０ｎＭ未満である場合、「高い親和性で」結合する。ＭＣＨＲ拮抗薬は好ましくは、最小の作用薬活性を有する（すなわち、誘導するＭＣＨ受容体の基本活性の増加が、ＭＣＨの１つのＥＣ５０により誘導される増加の５％未満であり、より好ましくは実施例３で記述したアッセイ法では検出可能な作用薬活性を有さない）。ＭＣＨＲ拮抗薬は特別なＭＣＨ受容体（例えば、１型または２型）に対し特異的であってもよく、または複数のＭＣＨ受容体において機能してもよい。一定の実施形態では、本発明で使用するＭＣＨＲ拮抗薬はＭＣＨＲ１拮抗薬である。
【００３２】
「ＣＢ１拮抗薬」は、カンナビノイド受容体ＣＢ１により媒介されるシグナル伝達を検出できるほど阻害する化合物である。そのような阻害は、実施例８で提供した代表的な作用薬誘導ＧＴＰ結合アッセイ法を用いて、またはＣＢ１へのリガンドの結合を阻害する化合物の能力を検出するアッセイ法、例えば実施例７で提供したアッセイ法により決定してもよい。「ＣＢ１拮抗薬」という用語は、中性拮抗薬、逆作用薬および部分作用薬を含む。中性拮抗薬であるＣＢ１拮抗薬は、作用薬刺激ＧＴＰ結合活性を減少させるが、結合活性はベースライン（このアッセイ法において、添加した作用薬無しで膜が結合するＧＴＰのレベル）より低くはならない。逆作用薬であるＣＢ１拮抗薬は、添加した作用薬無しで、受容体含有膜のＧＴＰ結合活性を減少させベースラインより低くする。添加したＣＰ５５，９４０無しでベースラインよりＧＴＰ結合活性を上昇させるＣＢ１拮抗薬は部分作用薬活性を有すると特徴づけられる。
【００３３】
好ましいＣＢ１拮抗薬は１μＭまたはそれ以下のＫｉでＣＢ１に結合する。Ｋｉは本明細書で、実施例７において記述されているように決定されてもよく、またはフェルダー（Ｆｅｌｄｅｒ）ら（１９９８）Ｊ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ Ｅｘｐ． Ｔｈｅｒ．２８４：２９１−２９７により記述されているように実施されるアッセイ法で決定されてもよい。ある実施形態では、ＣＢ１拮抗薬はＣＢ１に対し特異的である（すなわち、主な末梢性カンナビノイド受容体ＣＢ２でのＫｉ値が１μＭを超え、および／またはＫｉ比（ＣＢ２／ＣＢ１）が少なくとも１００、好ましくは少なくとも１０００である）。ＣＢ１拮抗薬に対するＩＣ５０は好ましくは、本明細書の実施例８で記述したように実施した機能アッセイ法、またはフェルダー（Ｆｅｌｄｅｒ）らにより記述されているアッセイ法では、１μＭまたはそれ以下である。ＣＢ１拮抗薬は好ましくは最小作用薬活性を有する（すなわち、誘導するＣＢ１の基本活性の増加は、作用薬ＣＰ５５，９４０の１つのＥＣ５０により誘導される増加の１０％未満、好ましくは５％未満およびより好ましくは２％未満であり、より好ましくは、実施例８で記述したアッセイ法では検出可能な作用薬活性を有さない）。本明細書で記述したように使用するためのＣＢ１拮抗薬は一般に非毒性である。
【００３４】
本明細書で使用されるように「非毒性」という用語は、相対的な意味で理解され、哺乳類（好ましくはヒト）への投与に対し合衆国食品医薬品局（ＦＤＡ）により認可されており、または、確立された基準に沿い、ＦＤＡにより哺乳類（好ましくはヒト）への投与の認可を受けることができる任意の物質を示すものである。さらに、非常に好ましい非毒性化合物は一般に、下記の基準の１つまたは複数を満たす：（１）実質的に細胞ＡＴＰ産生を阻害しない、（２）実質的に心臓ＱＴ間隔を延長しない、（３）実質的な肝肥大を引き起こさない、または（４）肝酵素の実質的な放出を引き起こさない。
【００３５】
本明細書で使用されるように、細胞ＡＴＰ産生を実質的に阻害しない化合物は、本明細書の実施例９で記述した基準を満たす化合物である。言い換えれば、１００μＭのそのような化合物により実施例９で記述したように処置した細胞は、未処置細胞で検出されたＡＴＰレベルの少なくとも５０％であるＡＴＰレベルを示す。より好ましい実施形態では、そのような細胞は、未処置細胞で検出されるＡＴＰレベルの少なくとも８０％であるＡＴＰレベルを示す。
【００３６】
心臓ＱＴ間隔が有意なほど延長されない化合物は、治療的有効量のインビボ濃度が得られる最小用量の２倍投与で、モルモット、ミニブタまたはイヌにおいて（心電図記録により決定される）心臓ＱＴ間隔の統計学的に有意の延長が見られない化合物である。ある好ましい態様では、非経口で、または経口で投与された０．０１、０．０５、０．１、０．５、１、５、１０、４０または５０ｍｇ／ｋｇの用量では、統計学的に有意な心臓ＱＴ間隔の延長は得られない。「統計学的に有意」という用語は、スチューデントＴ試験などの統計学的有意性の標準パラメータアッセイ法を用いて測定すると、ｐ＜０．１レベル、より好ましくはｐ＜０．０５レベルの有意性で対照から変動する結果を意味する。
【００３７】
研究室用齧歯類（例えば、マウスまたはラット）に、治療的に有効なインビボ（ｉｎ ｖｏｖｏ）濃度が得られる最小用量の２倍で５〜１０日間毎日処置しても、対応対照に比べ、体重に対する肝臓の比率の増加が１００％にすぎない場合、化合物は実質的に肝肥大を引き起こさない。より好ましい実施形態では、そのような用量では、対応対照に比べ、７５％または５０％を超える肝肥大は起こらない。非齧歯類哺乳類（例えば、イヌ）を使用する場合、そのような用量では、肝臓対体重比の増加は、対応未処置対照に比べ、５０％以下、好ましくは２５％以下、より好ましくは１０％以下の増加となるべきである。そのようなアッセイ法では好ましい用量としては、非経口または経口投与で０．０１、０．０５、０．１、０．５、１、５、１０、４０または５０ｍｇ／ｋｇが挙げられる。
【００３８】
同様に、治療的に有効なインビボ濃度が得られる最小用量の２倍を投与しても、研究室用齧歯類のＡＬＴ、ＬＤＨまたはＡＳＴの血清レベルの増加が対応するニセ処置対照に比べ１００％にすぎなければ、化合物は肝酵素の実質的な放出を促進しない。より好ましい実施形態では、そのような用量では、そのような血清レベルは、対応対照に比べ７５％以下または５０％以下しか上昇しない。また、インビトロ肝細胞アッセイ法では、化合物の最小インビボ治療濃度の２倍に等しい濃度（インビトロ（ｉｎ ｖｉｔｒｏ）で肝細胞と接触させ、インキュベートさせた培地または他のそのような溶液中）では、対応するニセ処置対照細胞由来の培地で見られるベースラインレベルを超える、そのような肝酵素のいずれの培地中への放出も検出されない。より好ましい実施形態では、そのような化合物濃度が、化合物の最小インビボ治療濃度の５倍、好ましくは１０倍である場合、ベースラインレベルを超える、そのような肝酵素のいずれの培地中への放出も検出されない。
【００３９】
「プロドラッグ」はＭＣＨ受容体拮抗薬またはＣＢ１拮抗薬でなくてもよいが、患者に投与された後、インビボで修飾され、そのような拮抗薬を生成する化合物である。例えば、プロドラッグはＭＣＨＲ拮抗薬またはＣＢ１拮抗薬のアシル化誘導体としてもよい。プロドラッグは、ヒドロキシ、アミンまたはスルフヒドリル基が任意の官能基に結合されており、哺乳類被験者に投与されると、開裂してそれぞれ、遊離ヒドロキシル、アミノまたはスルフヒドリル基が形成する化合物を含む。プロドラッグの例としては、ＭＣＨＲ拮抗薬またはＣＢ１拮抗薬中のアルコールおよびアミン官能基の酢酸、ギ酸、リン酸および安息香酸誘導体が挙げられるが、それらに限定されない。
【００４０】
〈ＭＣＨ受容体拮抗薬〉
上記のように、本発明は体重管理のために有益な組成物および方法を提供する。本明細書で提供する組成物は一般に、上記のように非毒性ＭＣＨＲ拮抗薬を含む。好ましくは、本明細書で使用するためのＭＣＨＲ拮抗薬は、（標準インビトロＭＣＨ受容体リガンド結合アッセイ法および／またはカルシウム移動アッセイ法を用いて決定されるように）、サブμＭ以下の濃度で、好ましくはｎＭ濃度で、より好ましくはサブｎＭ以下の濃度で、ＭＣＨがＭＣＨＲ１および／またはＭＣＨＲ２に結合するのを検出可能な程阻害する。ある好ましい実施形態では、本明細書で使用するためのＭＣＨＲ拮抗薬は、検出可能な程、ＭＣＨのＭＣＨＲ１への結合を阻害する。本明細書において「ＭＣＨ受容体リガンド結合アッセイ法」というと、実施例２で示した標準インビトロ受容体結合アッセイ法を示す。簡単に言うと、ＭＣＨ受容体調製物を標識（例えば、１２５Ｉ）ＭＣＨおよび非標識試験化合物と共にインキュベートする競合アッセイ法を実施する。本明細書で提供したアッセイ法では、使用したＭＣＨ受容体は好ましくは哺乳類ＭＣＨＲ１またはＭＣＨＲ２、より好ましくはヒトまたはサルＭＣＨＲ１またはＭＣＨＲ２である。ＭＣＨ受容体調製物は、例えば、組換えによりヒトＭＣＨ受容体（例えば、ジェンバンク アクセッション番号Ｚ８６０９０）、サルＭＣＨＲ１（例えば、ＷＯ０３／０６０４７５の配列番号１で提供されるＭＣＨＲ１配列）、またはヒトＭＣＨＲ１／ヒトβ−２−アドレナリンキメラ受容体を発現するＨＥＫ２９３細胞由来の膜調製物としてもよい。
【００４１】
実施例２で記述したようにＭＣＨＲ拮抗薬とインキュベートすると、拮抗薬無しで結合した標識の量に比べ、ＭＣＨ受容体調製物に結合した標識の量が減少する。好ましくは、ＭＣＨＲ拮抗薬はＭＣＨ受容体で、１μＭ未満のＫｉを示し、ＭＣＨ受容体に特異的に、高い親和性で結合する。より好ましくは、そのような化合物は、実施例２で記述したＭＣＨ受容体リガンド結合アッセイ法において、ＭＣＨ受容体で５００ｎＭ、１００ｎＭ、２０ｎＭまたは１０ｎＭ未満のＫｉを示す。
【００４２】
代表的なカルシウム移動アッセイ法を実施例３に示す。好ましいＭＣＨＲ拮抗薬は、実施例３で示した標準インビトロＭＣＨ受容体媒介カルシウム移動アッセイ法において、１μＭまたはそれ以下、より好ましくは１００ｎＭまたはそれ以下、１０ｎＭまたはそれ以下、または１ｎＭまたはそれ以下のＩＣ５０値を示す。
【００４３】
ある実施形態では、ＭＣＨＲ拮抗薬は、係属中の米国特許出願第１０／１５２，１８９号で記述されているような、置換１−ベンジル−４−アリールピペラジンおよびピペリジン類似体を含む。２００２年１１月２８日にＷＯ０２／０９４７９９として公開された対応するＰＣＴ出願の開示内容は、ＭＣＨＲ拮抗薬の教示（３〜５ページ、２０〜２５ページおよび７４〜１０７ページ）およびその調製（２９〜４２ページおよび５０〜７３ページ）について、参照により本明細書に組み入れられる。本明細書で記述したあるＭＣＨＲ拮抗薬は下記化学式を満たし：
または、それらの薬学的に許容される塩であり、式において、
Ｖは結合または−（Ｃ＝Ｏ）−であり、
Ｗは窒素、ＣＨ、ＣＯＨまたはＣＣＮであり、
Ｘはハロゲン、ヒドロキシ、ニトロ、シアノ、−ＣＯＯＨ、オキソおよび化学式Ｌ−Ｍの基であり、
ＹおよびＺはそれぞれ独立して（ｉ）ＣＨ、（ｉｉ）窒素であり、または（ｉｉｉ）Ｒ５と一緒になり、ＷおよびＶを含み、５〜８の環員を有する炭素環または複素環を形成し、ただし、ＹおよびＺはどちらも窒素ではないことを条件とし、
ｎは１または２であり
Ｒ１およびＲ２はそれぞれ独立して、水素、ハロゲン、ヒドロキシ、ニトロ、シアノ、オキソ、−ＣＯＯＨおよび化学式Ｌ−Ｍの基から選択され、
Ｒ３は（ｉ）水素、（Ｃ１〜Ｃ６）アルキル、（Ｃ２〜Ｃ６）アルケニルおよびハロ（Ｃ１〜Ｃ６）アルキルから選択され、または（ｉｉ）Ｒ６およびＲ１０のうちの１つまたは両方と一緒になり、１つの環または２つの縮合環を有する炭素環または複素環基を形成し、ここで各環は５〜８環員および酸素、窒素および硫黄から独立して選択される０、１または２のヘテロ原子を含み、
Ｒ４は水素、（Ｃ１〜Ｃ６）アルキルまたはハロ（Ｃ１〜Ｃ６）アルキルであり、
Ｒ５は（ｉ）各事象で、水素、ハロゲン、ヒドロキシ、ニトロ、シアノ、アミノ、オキソ、（Ｃ１〜Ｃ６）アルキル、（Ｃ２〜Ｃ６）アルケニル、（Ｃ２〜Ｃ６）アルキニル、（Ｃ１〜Ｃ６）アルコキシ、ハロ（Ｃ１〜Ｃ６）アルキル、ハロ（Ｃ１〜Ｃ６）アルコキシ、モノおよびジ（Ｃ１〜Ｃ６）アルキルアミノ、およびアミノ（Ｃ１〜Ｃ６）アルキルから独立して選択され、または（ｉｉ）Ｒ６、ＹまたはＺと一緒になり、５〜８の環員を有する炭素環または複素環を形成し、
Ｒ６は（ｉ）水素、ハロゲン、ヒドロキシ、ニトロ、シアノ、アミノ、オキソ、（Ｃ１〜Ｃ６）アルキル、（Ｃ２〜Ｃ６）アルケニル、（Ｃ２〜Ｃ６）アルキニル、（Ｃ１〜Ｃ６）アルコキシ、ハロ（Ｃ１〜Ｃ６）アルキル、ハロ（Ｃ１〜Ｃ６）アルコキシ、モノおよびジ（Ｃ１〜Ｃ６）アルキルアミノ、およびアミノ（Ｃ１〜Ｃ６）アルキルから選択され、または（ｉｉ）Ｒ３またはＲ５と一緒になり、上記のように炭素環または複素環を形成し、
Ｒ７は（ｉ）水素、ハロゲン、ヒドロキシ、ニトロ、シアノ、−ＣＯＯＨ、オキソおよび化学式Ｌ−Ｍの基から選択され、または（ｉｉ）Ｒ８またはＲ１２と一緒になり、縮合５−または６−員炭素環または複素環基を形成し、
Ｒ８は（ｉ）水素、ハロゲン、ヒドロキシ、ニトロ、シアノ、−ＣＯＯＨ、オキソおよび化学式Ｌ−Ｍの基から選択され、または（ｉｉ）Ｒ７またはＲ１１と一緒になり、縮合５−〜１０−員炭素環または複素環基を形成し、
ＵはＮ、ＯまたはＣＲ９であり、
ＴはＮ、ＯまたはＣＲ１０であり、
Ｒ９は（ｉ）水素、ハロゲン、ヒドロキシ、ニトロ、シアノ、−ＣＯＯＨ、オキソおよび化学式Ｌ−Ｍの基から選択され、または（ｉｉ）Ｒ１０またはＲ１１と一緒になり、縮合５−〜１０−員炭素環または複素環基を形成し、
Ｒ１０は（ｉ）水素、ハロゲン、ヒドロキシ、ニトロ、シアノ、−ＣＯＯＨ、オキソおよび化学式Ｌ−Ｍの基から選択され、または（ｉｉ）Ｒ３、Ｒ８またはＲ９と一緒になり、炭素環または複素環基を形成し、
Ｒ１１は（ｉ）水素、ハロゲン、ヒドロキシ、ニトロ、シアノ、−ＣＯＯＨ、オキソおよび化学式Ｌ−Ｍの基から選択され、または（ｉｉ）Ｒ８またはＲ９のうちの１つまたは両方と一緒になり、縮合５−〜１０−員炭素環または複素環基を形成し、
Ｒ１２は（ｉ）各事象で、水素、ハロゲン、ヒドロキシ、ニトロ、シアノ、アミノ、オキソ、（Ｃ１〜Ｃ６）アルキル、（Ｃ２〜Ｃ６）アルケニル、（Ｃ２〜Ｃ６）アルキニル、（Ｃ１〜Ｃ６）アルコキシ、ハロ（Ｃ１〜Ｃ６）アルキル、ハロ（Ｃ１〜Ｃ６）アルコキシ、モノおよびジ（Ｃ１〜Ｃ６）アルキルアミノ、およびアミノ（Ｃ１〜Ｃ６）アルキルから独立して選択され、または（ｉｉ）Ｒ７と一緒になり、縮合炭素環または複素環を形成し、
Ｌは各事象で、結合、ＮＲ１３、Ｏ、ＳＯ２，ＳＯ２ＮＨ、Ｃ（＝Ｏ）ＮＲ１３およびＮＲ１３Ｃ（＝Ｏ）から独立して選択され、ここで、Ｒ１３は各事象で、水素、（Ｃ１〜Ｃ６）アルキル、（Ｃ２〜Ｃ６）アルケニル、（Ｃ２〜Ｃ６）アルキニル、およびハロ（Ｃ１〜Ｃ６）アルキルから独立して選択され、
Ｍは各事象で、水素、（Ｃ１〜Ｃ６）アルキル、（Ｃ２〜Ｃ６）アルケニル、（Ｃ２〜Ｃ６）アルキニル、ハロ（Ｃ１〜Ｃ６）アルキル、アミノ（Ｃ１〜Ｃ６）アルキルおよび５〜１０員炭素環から独立して選択される。
【００４４】
上記化学式を満たす代表的なＭＣＨＲ拮抗薬としては、例えば下記が挙げられる：１−（４−ブロモ−３−メトキシフェニル）−４−（３，４−ジメトキシベンジル）ピペラジン、１−（４−ブロモ−３−メトキシフェニル）−４−（４−クロロベンジル）ピペラジン、１−［４−クロロ−３−（トリフルオロメチル）フェニル］−４−（３，４−ジメトキシベンジル）ピペラジン、１−（３，４−ジクロロフェニル）−４−（３，４−ジメトキシベンジル）ピペラジン、１−（４−ブロモ−３−メトキシフェニル）−４−（４−メトキシ−２，５−ジメチルベンジル）ピペラジン、１−（４−ブロモ−３−メトキシフェニル）−４−（４−メトキシ−２，３−ジメチルベンジル）ピペラジン、１−（３−ブロモ−４−メトキシ−ベンジル）−４−（４−ブロモ−３−メトキシフェニル）ピペラジン、４−｛［４−（４−ブロモ−３−メトキシ−フェニル）ピペラジン−１−イル］メチル｝−２−メトキシフェノール、４−（｛４−［４−クロロ−３−（トリフルオロメチル）フェニル］−ピペラジン−１−イル｝メチル）−２−メトキシフェノール、１−［４−クロロ−３−（トリフルオロメチル）フェニル］−４−（４−メトキシ−２，３−ジメチルベンジル）ピペラジン、１−（３−ブロモ−４−メトキシベンジル）−４−［４−クロロ−３−（トリフルオロメチル）フェニル］ピペラジン、１−（４−ブロモ−３−メトキシフェニル）−４−（４−メトキシ−３−メチルベンジル）ピペラジン、１−［４−クロロ−３−（トリフルオロメチル）フェニル］−４−（４−メトキシ−３−メチルベンジル）ピペラジン、１−（４−クロロ−３−トリフルオロメトキシフェニル）−４−［１−（３，４−ジメトキシ−ベンジル）］−２−メチル−ピペラジン、４−（４−クロロ−３−トリフルオロメチル−フェニル）−１−（３，４−ジメトキシ−ベンジル）−２−メチル−ピペラジン、４−（４−クロロ−３−メトキシ−フェニル）−１−（３，４−ジメトキシ−ベンジル）−２−メチル−ピペラジン、４−（４−クロロ−３−メトキシ−フェニル）−［１−（３，４−ジメトキシ−ベンジル）−エチル］−２−メチル−ピペラジン、３−｛［４−（４−ブロモ−３−メトキシフェニル）ピペラジン−１−イル］メチル｝−９−エチル−９Ｈ−カルバゾール、１−（５−ブロモ−６−メトキシピリジン−２−イル）−４−（３，４−ジメトキシベンジル）ピペラジン、１−（５−ブロモ−６−メトキシピリジン−２−イル）−４−（４−クロロベンジル）ピペラジン、１−（５−ブロモ−６−メトキシピリジン−２−イル）−４−（４−メトキシ−２，５−ジメチルベンジル）ピペラジン、１−（５−ブロモ−６−メトキシピリジン−２−イル）−４−（４−メトキシ−２，３−ジメチルベンジル）ピペラジン、１−（３−ブロモ−４−メトキシベンジル）−４−（５−ブロモ−６−メトキシピリジン−２−イル）ピペラジン、４−（５−ブロモ−６−メトキシピリジン−２−イル）−１−（３，４−ジメトキシ−ベンジル）−２−メチルピペラジン、４−（５−ブロモ−６−メトキシピリジン−２−イル）−１−（３，４−ジメトキシ−ベンジル）−２−メチルピペラジン、１−（５−ブロモ−６−メトキシピリジン−２−イル）−４−（４−メトキシ−３−メチルベンジル）ピペラジン、３−｛［４−（５−ブロモ−６−メトキシピリジン−２−イル）ピペラジン−１−イル］メチル｝−９−エチル−９Ｈ−カルバゾール、４−｛［４−（５−ブロモ−６−メトキシピリジン−２−イル）ピペラジン−１−イル］メチル｝−２−メトキシフェノール、１−（４−ブロモ−３−メトキシフェニル）−４−（３，４−ジメトキシベンジル）−１，４−ジアゼパン、１−（４−ブロモ−３−メトキシフェニル）−４−［１−（３，４−ジメトキシフェニル）−エチル］ピペラジン、１−［４−クロロ−３−（トリフルオロメチル）フェニル］−４−［１−（３，４−ジメトキシフェニル）エチル］ピペラジン、１−（４−ブロモ−３−メトキシフェニル）−４−［１−（４−メトキシフェニル）エチル］ピペラジン、１−（４−クロロ−３−メトキシフェニル）−４−［１−（３，４−ジメトキシフェニル）エチル］ピペラジン、１−（４−ブロモ−３−メトキシフェニル）−４−［１−（３，４−ジフルオロフェニル）エチル］ピペラジン、４−｛１−［４−（４−ブロモ−３−メトキシフェニル）ピペラジン−１−イル］エチル｝−２−メチルフェノール、１−（４−ブロモ−３−メトキシフェニル）−４−［１−（４−フルオロ−３−メトキシフェニル）−エチル］ピペラジン、１−（４−クロロ−３−メトキシフェニル）−４−［１−（３，４−ジメトキシフェニル）エチル］ピペラジン、１−（４−クロロ−３−メトキシフェニル）−４−［１−（３，４−ジメトキシフェニル）エチル］ピペラジン、１−（４−ブロモ−３−トリフルオロメトキシフェニル）−４−［１−（３−フルオロ−４−メトキシフェニル）エチル］ピペラジン、１−（４−ブロモ−３−トリフルオロメトキシフェニル）−４−［１−（３−フルオロ−４−メトキシフェニル）エチル］ピペラジン、１−（４−ブロモ−３−トリフルオロメチルフェニル）−４−［１−（３−フルオロ−４−メトキシフェニル）エチル］ピペラジン、１−（４−メトキシ−フェニル）−４−［１−（３，４−ジメトキシフェニル）エチル］ピペラジン、１−（４−メトキシ−フェニル）−４−［１−（３，４−ジメトキシフェニル）エチル］ピペラジン、１−（４−ブロモ−３−メトキシ−フェニル）−４−［１−（４−クロロ−フェニル）−エチル］−ピペラジン、１−（４−クロロ−３−メトキシ−フェニル）−４−［１−（４−メトキシ−２，３−ジメチル−フェニル）−エチル］−ピペラジン、１−（４−クロロ−３−メトキシ−フェニル）−４−［１−（４−クロロ−３−メトキシ−フェニル）−エチル］−ピペラジン、１−（４−ブロモ−３−メトキシ−フェニル）−４−［１−（４−メトキシ−２，５−ジメチル−フェニル）−エチル］−ピペラジン、１−（４−フルオロ−３−トリフルオロメチル−フェニル）−４−［１−（３，４−ジメトキシ−フェニル）−エチル］−ピペラジン、１−（４−ブロモ−３−メトキシ−フェニル）−４−［１−（３，４−ジメトキシ−フェニル）−エチル］−ピペラジン、１−（４−クロロ−３−トリフルオロメチル−フェニル）−４−［１−（３，４−ジメトキシ−フェニル）−エチル］−ピペラジン、１−（４−ブロモ−３−メトキシ−フェニル）−４−［１−（４−エトキシ−３−メトキシ−フェニル）−エチル］−ピペラジン、１−（４−クロロ−３−メトキシ−フェニル）−４−［１−（４−フルオロ−３−メトキシ−フェニル）−エチル］−ピペラジン、１−（４−ブロモ−３−メトキシ−フェニル）−４−［１−（２，４，５−トリメチル−フェニル）−エチル］−ピペラジン、１−（４−ブロモ−３−メトキシ−フェニル）−４−［１−（３−フルオロ−４−メトキシ−フェニル）−エチル］−ピペラジン、１−（４−クロロ−３−トリフルオロメチル−フェニル）−４−［１−（４−メトキシ−２，３−ジメチル−フェニル）−エチル］−ピペラジン、１−（４−フルオロ−３−メトキシ−フェニル）−４−［１−（３，４−ジメトキシ−フェニル）−エチル］−ピペラジン、１−（４−クロロ−３−トリフルオロメチル−フェニル）−４−［１−（４−クロロ−３−メトキシ−フェニル）−エチル］−ピペラジン、１−（４−クロロ−３−トリフルオロメチル−フェニル）−４−［１−（４−メトキシ−３−メチル−フェニル）−エチル］−ピペラジン、１−（４−ブロモ−３−メトキシ−フェニル）−４−［１−（３−メトキシ−フェニル）−エチル］−ピペラジン、１−（４−ブロモ−３−メトキシ−フェニル）−４−［１−（４−トリフルオロメチル−フェニル）−エチル］−ピペラジン、４−（４−フルオロ−３−トリフルオロメチル−フェニル）−１−［１−（３，４−ジメトキシ−フェニル）−エチル］−ピペラジン、１−（４−クロロ−３−メトキシ−フェニル）−４−［１−（３−フルオロ−４−メトキシ−フェニル）−エチル］−ピペラジン、１−（４−ブロモ−３−メトキシ−フェニル）−４−［１−（３−エトキシ−フェニル）−エチル］−ピペラジン、１−（５−｛１−［４−（４−ブロモ−３−メトキシ−フェニル）−ピペラジン−１−イル］−エチル｝−２−フルオロ−フェニル）−エタノン、１−（４−クロロ−３−メチル−フェニル）−４−［１−（４−メトキシ−３−メチル−フェニル）−エチル］−ピペラジン、１−（４−ブロモ−３−メトキシ−フェニル）−４−［１−（３，５−ジメトキシ−フェニル）−エチル］−ピペラジン、１−（４−メトキシ−３−メチル−フェニル）−４−［１−（４−メトキシ−２，３−ジメチル−フェニル）−エチル］−ピペラジン、１−（４−クロロ−３−メチル−フェニル）−４−［１−（３，４−ジメトキシ−フェニル）−エチル］−ピペラジン、１−（４−ブロモ−３−メトキシ−フェニル）−４−［１−（３，４−ジエトキシ−フェニル）−エチル］−ピペラジン、１−（４−クロロ−３−フルオロ−フェニル）−４−［１−（４−メトキシ−２，３−ジメチル−フェニル）−エチル］−ピペラジン、１−（４−クロロ−３−メチル−フェニル）−４−［１−（４−メトキシ−２，３−ジメチル−フェニル）−エチル］−ピペラジン、１−（４−クロロ−３−フルオロ−フェニル）−４−［１−（３，４−ジメトキシ−フェニル）−エチル］−ピペラジン、１−（４−メトキシ−３−メチル−フェニル）−４−［１−（３−メチル−４−メトキシ−フェニル）−エチル］−ピペラジン、１−（４−メトキシ−３−メチル−フェニル）−４−［１−（３，４−ジメトキシ−フェニル）−エチル］−ピペラジン、１−（３，４−ジメトキシ−フェニル）−４−［１−（４−メトキシ−２，３−ジメチル−フェニル）−エチル］−ピペラジン、１−（４−フルオロ−３−トリフルオロメチル−フェニル）−４−［１−（３，４−ジメトキシ−フェニル）−エチル］−ピペラジン、１−（４−ブロモ−３−メトキシ−フェニル）−４−｛１−［４−（４−ブロモ−フェニル）−フェニル］−エチル｝−ピペラジン、４−（４−クロロ−３−トリフルオロメチル−フェニル）−［１−（３，４−ジメトキシ−ベンジル）−エチル］−ピペラジン、１−（１−ベンゾ［１，３］ジオキソール−５−イル−エチル）−４−（４−ブロモ−３−メトキシ−フェニル）−ピペラジン、１−（４−ブロモ−３−メトキシ−フェニル）−４−［１−（３，４−ジメトキシ−フェニル）−エチル］−［１，４］ジアゼパン、１−（４−ブロモ−３−メトキシ−フェニル）−４−［１−（３−フルオロ−４−メトキシ−フェニル）−エチル］−［１，４］ジアゼパン、１−［１−（３，４−ジメトキシ−フェニル）−エチル］−４−（３−メトキシ−フェニル）−ピペラジン−２，５−ジオン、１−（４−ブロモ−３−メトキシ−フェニル）−４−［１−（３，４−ジメトキシ−フェニル）−プロピル］−ピペラジン、１−（４−クロロ−３−トリフルオロメチル−フェニル）−４−［１−（３，４−ジメトキシ−フェニル）−プロピル］−ピペラジン、１−（５−ブロモ−６−メトキシピリジン−２−イル）−４−［１−（３，４−ジメトキシフェニル）エチル］ピペラジン、１−（５−ブロモ−６−メトキシ−ピリジン−２−イル）−４−［１−（４−トリフルオロメチル−フェニル）−エチル］ピペラジン、１−（４−ブロモ−３−メトキシ−フェニル）−４−［１−（６−メトキシ−ナフタレン−２−イル）−エチル］ピペラジン、１−（４−クロロ−３−メトキシ−フェニル）−４−［１−（３，４−ジメトキシ−フェニル）−エチル］−ピペラジン、１−（４−ブロモ−３−メトキシ−フェニル）−４−［１−（４−フルオロ−３−メトキシ−フェニル）−エチル］−ピペラジン、１−（４−ブロモ−３−メトキシ−フェニル）−４−［１−（６−メトキシ−ピリジン−２−イル）−エチル］−ピペラジン、４−（４−クロロ−３−トリフルオロメチル−フェニル）−１−［１−（３，４−ジメトキシ−フェニル）−エチル］−ピペラジン、
４−［４−クロロ−３−（トリフルオロメチル）フェニル］−１−（３，４−ジメトキシベンジル）ピペリジン−４−オール、２−（４−クロロ−３−メトキシ−フェニル）−６−（３，４−ジメトキシ−フェニル）−オクタヒドロ−ピリド［１，２−a］ピラジン、２−（４−クロロ−３−トリフルオロメチル−フェニル）−６−（３，４−ジメトキシ−フェニル）−オクタヒドロ−ピリド［１，２−a］ピラジン、２−（４−クロロ−３−メトキシ−フェニル）−６−（３−フルオロ，４−メトキシ−フェニル）−オクタヒドロ−ピリド［１，２−a］ピラジン、２−（４−フルオロ−３−メトキシ−フェニル）−６−（３，４−ジメトキシ−フェニル）−オクタヒドロ−ピリド［１，２−a］ピラジン、２−（４−フルオロ−３−トリフルオロメチル−フェニル）−６−（３，４−ジメトキシ−フェニル）−オクタヒドロ−ピリド［１，２−a］ピラジン、２−（４−クロロ−３−メトキシ−フェニル）−６−メトキシ−ナフタレン−２−イル）−オクタヒドロ−ピリド［１，２−a］ピラジン、２−（４−クロロ−３−メチル−フェニル）−６−（３，４−ジメトキシ−フェニル）−オクタヒドロ−ピリド［１，２−a］ピラジン、２−（４−メトキシ−３−メチル−フェニル）−６−（３，４−ジメトキシ−フェニル）−オクタヒドロ−ピリド［１，２−a］ピラジン、２−（４−クロロ−３−メトキシ−フェニル）−６−（３−メトキシ−フェニル）−オクタヒドロ−ピリド［１，２−a］ピラジン、２−（２，４−ジブロモ−５−メトキシ−フェニル）−６−（３，４−ジメトキシ−フェニル）−オクタヒドロ−ピリド［１，２−a］ピラジン、２−（３，４−ジメトキシ−フェニル）−６−（３，４−ジメトキシ−フェニル）−オクタヒドロ−ピリド［１，２−a］ピラジン、２−（４−クロロ−３−フルオロ−フェニル）−６−（３，４−ジメトキシ−フェニル）−オクタヒドロ−ピリド［１，２−a］ピラジン、１−（４−フルオロ−３−メトキシ−フェニル）−６−（３，４−ジメトキシ−フェニル）−オクタヒドロ−ピリド［１，２−a］ピラジン、２−（４−クロロ−３−メトキシ−フェニル）−６−（３，４−ジメトキシ−フェニル）−オクタヒドロ−ピリド［１，２−a］ピラジン−８−オール、２−（４−クロロ−３−メトキシ−フェニル）−６−（３，４−ジメトキシ−フェニル）−オクタヒドロ−ピリド［１，２−a］ピラジン−８−オン、２−（４−クロロ−３−メトキシ−フェニル）−６−（３−フルオロ−４−メトキシ−フェニル）−オクタヒドロ−ピリド［１，２−a］ピラジン−８−オン、２−（４−クロロ−３−メトキシ−フェニル）−６−（６−メトキシ−ナフタレン−２−イル）−オクタヒドロ−ピリド［１，２−a］ピラジン−８−オン、８−（４−クロロ−３−メトキシ−フェニル）−４−（３，４−ジメトキシ−フェニル）−オクタヒドロ−ピラジノ［２，１−ｃ］［１，４］チアジン、２−（４−クロロ−３−メトキシ−フェニル）−６−（３，４−ジメトキシ−フェニル）−オクタヒドロ−ピロロ［１，２−a］ピラジン、２−（４−クロロ−３−メトキシ−フェニル）−６−（３，４−ジメトキシ−フェニル）−１，３，４，６，９，９ａ−ヘキサヒドロ−２Ｈ−ピリド［１，２−a］ピラジン、８−ブロモ−３−（３，４−ジメトキシ−ベンジル）−９−メトキシ−２，３，４，４ａ−テトラヒドロ−１Ｈ，６Ｈ−ピラジノ［１，２−a］キノキサリン−５−オン、７−（４−クロロ−３−メトキシ−フェニル）−４−（３，４−ジメトキシ−フェニル）−デカヒドロ−ナフタレン−２−オール、２−（４−クロロ−３−メトキシ−フェニル）−６−（３，４−ジメトキシ−フェニル）−８−フルオロ−オクタヒドロ−ピリド［１，２−a］ピラジン、１−（４−ブロモ−３−メトキシフェニル）−４−（５，６−ジメトキシ−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−インダン−１−イル）ピペラジン、１−（５−ブロモ−６−メトキシピリジン−２−イル）−４−（５，６−ジメトキシ−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−インダン−１−イル）ピペラジン、１−（４−クロロ−３−トリフルオロメチル−フェニル）−４−（４，５−ジメトキシ−インダン−１−イル）−ピペラジン、１−（４−ブロモ−３−メトキシ−フェニル）−４−（４，５−ジメトキシ−インダン−１−イル）−ピペラジン、（４−クロロ−フェニル）−｛４−［１−（２，３−ジメチル−フェニル）−エチル］−ピペラジン−１−イル｝−メタノン、（４−クロロ−フェニル）−｛４−［１−（４−メトキシ−２，３−ジメチル−フェニル）−エチル］−ピペラジン−１−イル｝−メタノン、（４−トリフルオロ−メチル−フェニル）−｛４−［１−（４−メトキシ−２，３−ジメチル−フェニル）−エチル］−ピペラジン−１−イル｝−メタノン、（３，４−ジクロロ−フェニル）−｛４−［１−（４−メトキシ−２，３−ジメチル−フェニル）−エチル］−ピペラジン−１−イル｝−メタノン、（４−クロロ−フェニル）−｛４−［１−（４−メチル−ナフタレン−１−イル）−エチル］−ピペラジン−１−イル｝−メタノン、（４−トリフルオロ−メチル−フェニル）−｛４−［１−（４−メトキシ−２−メチル−フェニル）−エチル］−ピペラジン−１−イル｝−メタノン、（４−トリフルオロメチル−フェニル）−｛４−［１−（４−メトキシ−２，３−ジメチル−フェニル）−エチル］−ピペラジン−１−イル｝−メタノン、（４−トリフルオロ−メチル−フェニル）−｛４−［１−（４−メトキシ−３−メチル−フェニル）−エチル］−ピペラジン−１−イル｝−メタノン、（４−クロロ−フェニル）−｛４−［１−（４−メトキシ−ナフタレン−１−イル）−エチル］−ピペラジン−１−イル｝−メタノン、（４−トリフルオロメチル−フェニル）−｛４−［１−（４−メトキシ−２，３−ジメチル−フェニル）−プロピル］−ピペラジン−１−イル｝−メタノン、（４−クロロ−フェニル）−｛４−［１−（４−メトキシ−２，３−ジメチル−フェニル）−アリル］−ピペラジン−１−イル｝−メタノン、（４−フルオロ−フェニル）−｛４−［１−（４−メトキシ−２，３−ジメチル−フェニル）−エチル］−ピペラジン−１−イル｝−メタノン、（４−ブロモ−３−メチル−フェニル）−｛４−［１−（４−メトキシ−２，３−ジメチル−フェニル）−エチル］−ピペラジン−１−イル｝−メタノン、（３，４−ジクロロ−フェニル）−｛４−［１−（４−メチル−ナフタレン−１−イル）−エチル］−ピペラジン−１−イル｝−メタノン、［６−（３，４−ジメトキシ−フェニル）−オクタヒドロ−ピリド［１，２−ａ］ピラジン−２−イル］−（４−トリフルオロメチル−フェニル）−メタノン、（４−クロロ−フェニル）−｛４−［１−（４−メトキシ−２，３−ジメチル−フェニル）−プロピル］−ピペラジン−１−イル｝−メタノン、｛４−［１−（４−メトキシ−２，３−ジメチル−フェニル）−エチル］−［１，４］ジアゼパン−１−イル｝−（４−トリフルオロメチル−フェニル）−メタノン、｛５−［１−４−メトキシ−２，３−ジメチル−フェニル）−エチル］−２，５−ジアザ−ビシクロ［２．２．１］ヘプト−２−イル｝−（４−トリフルオロメチル−フェニル）−メタノン、３−｛１−［４−（４−ブロモ−３−メトキシ−フェニル）−ピペラジン−１−イル］−エチル｝−６−メトキシ−キノリン、３−｛１−［４−（４−ブロモ−３−メトキシ−フェニル）−ピペラジン−１−イル］−エチル｝−２−クロロ−６−メトキシ−キノリン、３−｛１−［４−（４−ブロモ−３−メトキシ−フェニル）−ピペラジン−１−イル］−エチル｝−キノリン、１−（４−ブロモ−３−メトキシ−フェニル）−４−［１−（６−メトキシ−ピリジン−３−イル）−エチル］−ピペラジン、３−｛１−［４−（４−ブロモ−３−メトキシ−フェニル）−ピペラジン−１−イル］−エチル｝−６−フルオロ−４−メチル−２Ｈ−クロメン−２−オール、（３Ｓ）−１−（４−クロロ−３−トリフルオロメトキシフェニル）−４−［１−（３，４−ジメトキシ−ベンジル）］−２−メチル−ピペラジン、（２Ｓ）−４−（５−ブロモ−６−メトキシピリジン−２−イル）−１−（３，４−ジメトキシ−ベンジル）−２−メチルピペラジン、Ｒ−１−（４−クロロ−３−メトキシフェニル）−４−［１−（３，４−ジメトキシフェニル）エチル］ピペラジン、Ｓ−１−（４−クロロ−３−メトキシフェニル）−４−［１−（３，４−ジメトキシフェニル）エチル］ピペラジン、Ｒ−１−（４−ブロモ−３−トリフルオロメトキシフェニル）−４−［１−（３−フルオロ−４−メトキシフェニル）エチル］ピペラジン、Ｓ−１−（４−ブロモ−３−トリフルオロメチルフェニル）−４−［１−（３−フルオロ−４−メトキシフェニル）エチル］ピペラジン、Ｓ−１−（４−メトキシ−フェニル）−４−［１−（３，４−ジメトキシフェニル）エチル］ピペラジン、Ｒ−１−（４−メトキシ−フェニル）−４−［１−（３，４−ジメトキシフェニル）エチル］ピペラジン、Ｒ−１−（４−クロロ−３−メトキシ−フェニル）−４−［１−（３，４−ジメトキシフェニル）−エチル］ピペラジン、｛５−［１−４−メトキシ−２，３−ジメチル−フェニル］−エチル｝−（１Ｓ，４Ｓ）−２，５−ジアザ−ビシクロ［２．２．１］ヘプト−２−イル｝−（４−トリフルオロメチル−フェニル）−メタノン、（６Ｒ，１０Ｓ）−２−（４−クロロ−３−メトキシ−フェニル）−６−（３，４−ジメトキシ−フェニル）−オクタヒドロ−ピリド［１，２−ａ］ピラジン−８−オン、Ｒ−１−（４−ブロモ−３−メトキシフェニル）−４−［１−（３，４−ジメトキシフェニル）エチル］ピペラジン、（２Ｓ）−４−（４−クロロ−３−メトキシフェニル）−１−（３，４−ジメトキシベンジル）−２−メチル−ピペラジン、（２Ｒ）−４−（４−クロロ−３−メトキシフェニル）−１−（３，４−ジメトキシベンジル）−２−メチル−ピペラジン、（３Ｒ）−１−（４−フルオロ−３−トリフルオロメチル−フェニル）−４−［１−（３，４−ジメトキシフェニル）−エチル］ピペラジン、（３Ｓ）−１−（４−フルオロ−３−トリフルオロメチル−フェニル）−４−［１−（３，４−ジメトキシフェニル）−エチル］ピペラジン、（３Ｒ）−１−（４−クロロ−３−トリフルオロメチル−フェニル）−４−［１−（３，４−ジメトキシフェニル）−エチル］ピペラジン、（３Ｓ）−１−（４−クロロ−３−トリフルオロメチル−フェニル）−４−［１−（３，４−ジメトキシフェニル）−エチル］ピペラジン、（６Ｒ，１０Ｓ）−２−（４−クロロ−３−メトキシ−フェニル）−６−（３，４−ジメトキシ−フェニル）−オクタヒドロ−ピリド［１，２−ａ］ピラジン、（３Ｒ）−１−（４−フルオロ−３−メトキシ−フェニル）−４−［１−（３，４−ジメトキシフェニル）−エチル］ピペラジン、（２Ｒ）−４−（４−クロロ−３−トリフルオロメチルフェニル）−［１−（３，４−ジメトキシベンジル）−エチル］ピペラジン、（６Ｒ，９Ｓ）−２−（４−クロロ−３−メトキシ−フェニル）−６−（３，４−ジメトキシ−フェニル）−オクタヒドロ−ピロロ［１，２−ａ］ピラジン、（６Ｒ，１０Ｓ）−２−（４−クロロ−３−メトキシ−フェニル）−６−（３，４−ジメトキシ−フェニル）−オクタヒドロ−ピリド［１，２−ａ］ピラジン−８−オール、（６Ｒ，１０Ｓ）−［６−（３，４−ジメトキシ−フェニル）−オクタヒドロ−ピリド［１，２−ａ］ピラジン−２−イル］−（４−トリフルオロメチル−フェニル）−メタノン、（６Ｒ，１０Ｓ）−２−（４−クロロ−３−メトキシ−フェニル）−６−（３−フルオロ，４−メトキシ−フェニル）−オクタヒドロ−ピリド［１，２−ａ］ピラジン、および｛５−［１−４−メトキシ−２，３−ジメチル−フェニル］−エチル｝−（１Ｓ，４Ｓ）−２，５−ジアザ−ビシクロ［２．２．１］ヘプト−２−イル｝−（４−トリフルオロメチル−フェニル）−メタノン、ならびに薬学的に許容されるそれらの塩。
【００４５】
別の実施形態では、本発明の組成物および方法において使用するためのＭＣＨＲ拮抗薬は、２００３年１月９日に出願された係属中の米国特許出願第１０／３９９，４９９で記述されている置換ベンズイミダゾール類似体である。２００３年７月２４日にＷＯ０３／０６０４７５として公開された対応するＰＣＴ出願、およびこの開示内容は、ＭＣＨＲ拮抗薬（２〜５ページ、表１（１４〜１９ページ）および表２（３８〜４８ページ））およびその調製（２３〜２４ページおよび３２〜３８ページ）を教示するために、参照により本明細書に組み入れられる。
【００４６】
別の実施形態では、本発明で使用するための化合物は２００３年１月９日に出願された係属中の米国特許出願第１０／３９９，１１１号で記述されている。２００３年７月２４日にＷＯ０３／０５９２８９として公開された対応するＰＣＴ出願、およびこの開示内容は、ＭＣＨＲ拮抗薬（３〜４ページおよび３１〜５０ページ）およびその調製（１９〜２０ページおよび２８〜３１ページ）を教示するために、参照により本明細書に組み入れられる。別の実施形態では、本発明で使用するためのＭＣＨＲ拮抗薬は米国特許第６，５６９，８６１号で記述されており、この特許は、フェニルシクロアルキルメチルアミノおよびフェニルアルケニルアミノＭＣＨＲ拮抗薬（３〜９欄および１８〜１９欄）およびその調製（１６〜１８欄）を教示するために、参照により本明細書に組み入れられる。
【００４７】
さらに別のＭＣＲ拮抗薬が、例えば、下記の公開されたＰＣＴ出願で記述されている：ＷＯ０３／０９７０４７、ＷＯ０３／０８７０４６、ＷＯ０３／０８７０４５、ＷＯ０３／０８７０４４、ＷＯ０３／０７２７８０、ＷＯ０３／０７０２４４、ＷＯ０３／０４７５６８、ＷＯ０３／０４５９２０、ＷＯ０３／０４５９１８、ＷＯ０３／０４５３１３、ＷＯ０３／０３５０５５、ＷＯ０３／０３３４８０、ＷＯ０３／０１５７６９、ＷＯ０３／０２８６４１、ＷＯ０３／０１３５７４、ＷＯ０３／００４０２７、ＷＯ０２／０８９７２９、ＷＯ０２／０８３１３４、ＷＯ０２／０７６９４７、ＷＯ０２／０７６９２９、ＷＯ０２／０５７２３３、ＷＯ０２／０５１８０９、ＷＯ０２／１０１４６、ＷＯ０２／０６２４５、ＷＯ０２／０４４３３、ＷＯ０１／８７８３４、ＷＯ０１／８２９２５、ＷＯ０１／５７０７０、ＷＯ０１／２１５７７およびＷＯ０１／２１１６９、ならびに日本の特許出願番号２００１−２２６２６９。上記はＭＣＨＲ拮抗薬の例示的な例にすぎず、本発明の範囲を制限するものではないことは明かであろう。
【００４８】
〈ＣＢ１拮抗薬〉
ＣＢ１は中枢神経系で主に発現され、食欲および摂食量の調節に関与するカンナビノイド受容体である。任意のＣＢ１拮抗薬を本明細書で提供した組成物および方法で使用してもよい。一般に、本明細書で記述したように使用するためのＣＢ１拮抗薬は、ＣＢ１に対し高い親和性を有するべきである（すなわち、ＣＢ１受容体でのＫｉ値が１μＭまたはそれ以下、好ましくは１００ｎＭまたはそれ以下、より好ましくは１０ｎＭまたはそれ以下である）。一定の実施形態では、ＣＢ１拮抗薬はＣＢ１に対し特異的である（すなわち、ＣＢ２でのＫｉ値が１μＭを超え、および／またはＫｉ比（ＣＢ２／ＣＢ１）が少なくとも１００、好ましくは少なくとも１０００である）。ＣＢ１拮抗薬に対するＩＣ５０値は好ましくは１μＭまたはそれ以下である。
【００４９】
本明細書で記述されるように使用するための代表的なＣＢ１拮抗薬としては、例えば、あるピリミジン類（例えば、ＰＣＴ国際出願公開番号第ＷＯ０４／０２９，２０４号）、ピラジン類（例えば、ＰＣＴ国際出願公開番号第ＷＯ０１／１１１，０３８、ＷＯ０４／１１１，０３４およびＷＯ０４／１１１，０３３号）、アゼチジン誘導体類（例えば、合衆国特許第６，５１８，２６４号、同第６，４７９，４７９号および同第６，３５５，６３１号、ならびにＰＣＴ国際出願公開番号第ＷＯ０３／０５３４３１号）、ピラゾール誘導体類（例えば、米国特許第６，５０９，３６７号および同第６，４７６，０６０号、ならびにＰＣＴ国際出願公開番号第ＷＯ０３／０２０２１７号および第ＷＯ０１／０２９００７号）、ピラゾールカルボン酸およびピラゾールカルボキサミド誘導体類（例えば、米国特許第６，６４５，９８５号、同第６，４３２，９８４号、同第６，３４４，４７４号、同第６，０２８，０８４号、同第５，９２５，７６８号、同第５，６２４，９４１号および同第５，４６２，９６０号、公開された米国特許出願ＵＳ２００４／００３９０２４、ＵＳ２００３／０１９９５３６およびＵＳ２００３／０００３１４５およびＰＣＴ国際出願公開番号第ＷＯ０３／０７８４１３号、同第ＷＯ０３／０２７０７６号、同第ＷＯ０３／０２６６４８号および同第ＷＯ０３／０２６６４７号）、アロイル置換ベンゾフラン類（例えばＬＹ−３２０１３５、米国特許第５，７４７，５２４号）、置換イミダゾール類（例えば、公開されたＵＳ特許出願第ＵＳ２００３／０１１４４９５号およびＰＣＴ国際出願公開番号第ＷＯ０３／０６３７８１号および同第ＷＯ０３／０４０１０７号）、置換フロ［２，３−ｂ］ピリジン誘導体類（例えば、ＰＣＴ国際出願公開番号第ＷＯ０４／０１２６７１号）、置換アリールアミド類（例えば、ＰＣＴ国際出願公開番号第ＷＯ０３／０８７０３７号および同第ＷＯ０３／０７７８４７号）、置換二環またはスピロ環アミド類（例えば、ＰＣＴ国際出願公開番号第ＷＯ０３／０８６２８８号および同第ＷＯ０３／０８２１９０号）、および置換２，３−ジフェニルピリジン類（例えば、ＰＣＴ国際出願公開番号第ＷＯ０３／０８２１９１号）が挙げられる。他のＣＢ１拮抗薬はカンナビジオールおよびその誘導体である。好ましいＣＢ１拮抗薬としては、例えば、ＳＲ−１４１７１６Ａ（（Ｎ−ピペリジン−１−イル）−５−（４−クロロフェニル）−１−（２，４−ジクロロフェニル）−４−メチル−１Ｈ−ピラゾール−３−カルボキサミド、リモナバント（ＲＩＭＯＮＡＢＡＮＴ、商標）またはアコムプリア（ＡＣＯＭＰＬＩＡ、商標）としても公知）などのアリール置換ピラゾールカルボキサミド類ならびにＡＭ２５１（（Ｎ−ピペリジン−１−イル）−５−（４−ヨードフェニル）−１−（２，４−ジクロロフェニル）−４−メチル−１−Ｈ−ピラゾール−３−カルボキサミド）およびＡＭ２８１（Ｎ−（モルホリン−４−イル）−１−（２，４−ジクロロフェニル）−５−（４−ヨードフェニル）−４−メチル−１Ｈ−ピラゾール−３−カルボキサミド）などのそれらの類似体、様々なアゼチジン化合物類（例えば、米国特許第６，５１８，２６４号、同第６，４７９，４７９号および同第６，３５５，６３１号）およびイミダゾール類１−（４−クロロフェニル）−２−（２−クロロフェニル）−Ｎ−［（１Ｓ，２Ｓ）−２−ヒドロキシシクロヘキシル］−１Ｈ−イミダゾール−４−カルボキサミドおよび２−（２−クロロフェニル）−１−（４−クロロフェニル）−Ｎ’−［４−（トリフルオロメチル）フェニル］−１Ｈ−イミダゾール−４−カルボヒドラジドが挙げられる。
【００５０】
ＣＢ１拮抗薬は、作用薬誘導ＧＴＰ結合アッセイ法、例えば本明細書の実施例８で記述したアッセイ法を用いて識別してもよく、または同定してもよい。そのようなアッセイ法では、ＣＢ１へのＣＢ１作用薬誘導ＧＴＰ結合に対する試験化合物の効果を決定するために、ＣＢ１含有細胞膜調製物（例えば、組換えによりＣＢ１を発現する昆虫細胞の膜調製物）が使用される。簡単に説明すると、ＣＢ１を含む第１の細胞膜調製物を（ｉ）標識ＧＴＰと、（ｉｉ）ＣＢ１作用薬と、（ｉｉｉ）試験化合物とに接触させ、試験膜調製物を得る。同時に、またはいずれかの順で、ＣＢ１を含む第２の膜調製物を（ｉ）標識ＧＴＰと、（ｉｉ）ＣＢ１作用薬とに接触させ、対照膜調製物を得る。標識ＧＴＰは好ましくはＧＴＰ−γ３５Ｓであり、代表的なＣＢ１作用薬はＣＰ５５，９４０である。そのような接触は、ＧＴＰがＣＢ１に結合するのに適した条件下、例えば実施例８で記述した条件下で実施される。使用した標識ＧＴＰおよびＣＢ１作用薬濃度は一般に、ＣＢ１作用薬の存在下で膜調製物に結合する標識ＧＴＰの量の検出可能な増加が得られるのに十分なものである。そのような濃度は、ルーチン実験により決定してもよい。代表的な適した濃度を実施例８に示す。一般に、一定範囲の試験化合物濃度を使用する（例えば、１０−１０Ｍ〜１０−５Ｍの範囲）。
【００５１】
ＧＴＰを膜調製物に結合させるように十分接触（例えば、インキュベーション）した後、結合した標識ＧＴＰの量に対応する（その量を示す）シグナルを検出する（典型的には、非結合標識ＧＴＰを洗浄工程により最初に除去する）。言い換えると、同時またはいずれかの順で、（ｉ）試験膜調製物中の結合標識ＧＴＰ量を示す試験シグナルを検出し、および（ｉｉ）対照膜調製物中の結合標識ＧＴＰ量を示す対照シグナルを検出する。検出したシグナルの性質を、使用した標識の型により決定する。例えば、ＧＴＰが放射標識されている場合、検出されるシグナルは放射性崩壊（例えば、液体シンチレーション分光法による）である。試験化合物のＣＢ１拮抗薬活性をその後、試験シグナルを対照シグナルと比較することにより決定する。対照シグナルより低い試験シグナルは試験化合物がＣＢ１拮抗薬であることを示す。
【００５２】
本明細書で記述した組成物および方法では、ＭＣＨＲ拮抗薬および／またはＣＢ１拮抗薬は薬学的に許容される塩またはプロドラッグとして存在してもよい。本明細書で使用されるように、「薬学的に許容される塩」は、過剰の毒性、炎症、アレルギー反応、または他の問題あるいは合併症無しで、ヒトまたは動物の組織と接触させて使用するのに適していると、一般に当技術分野で考えられている酸または塩基塩である。そのような塩としてはアミン類などの塩基性残基の無機および有機酸塩類、ならびにカルボン酸類などの酸性残基のアルカリまたは有機塩類が挙げられる。特定の薬学的塩としては、塩酸、リン酸、臭化水素酸、リンゴ酸、グリコール酸、フマル酸、硫酸、スルファミン酸、スルファニル酸、ギ酸、トルエンスルホン酸、メタンスルホン酸、エタンジスルホン酸、２−ヒドロキシエチルスルホン酸、硝酸、安息香酸、２−アセトキシ安息香酸、クエン酸、酒石酸、乳酸、ステアリン酸、サリチル酸、グルタミン酸、アスコルビン酸、パモン酸、コハク酸、フマル酸、マレイン酸、プロピオン酸、ヒドロキシマレイン酸、ヨウ化水素酸、フェニル酢酸、アルカン酸、例えば酢酸、ＨＯＯＣ−（ＣＨ２）ｎ−ＣＯＯＨ（式においてｎは０〜４である）、などの酸の塩が挙げられるが、それらに限定されない。同様に、薬学的に許容されるカチオンとしては、ナトリウム、カリウム、カルシウム、アルミニウム、リチウムおよびアンモニウムが挙げられるが、それらに限定されない。当業者であれば、レミントンの薬学（Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ）、第１７版、マック出版社（Ｍａｃｋ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ Ｃｏｍｐａｎｙ）、ペンシルバニア州イーストン、ｐ．１４１８（１９８５）により列挙されているものを含む、別の薬学的に許容される塩も認識されると思われる。したがって、本発明の開示は、ＭＣＨＲおよびＣＢ１拮抗薬の薬学的に許容される塩をすべて含むものと考えるべきである。
【００５３】
広範囲にわたる合成手順が、薬学的に許容される塩の調製に有効である。一般に、薬学的に許容される塩は、塩基性または酸性部分を含む親化合物から、任意の従来の化学法により合成することができる。簡単に言うと、そのような塩は、これらの化合物の遊離酸または塩基形態を化学量論量の、水または有機溶媒、あるいはそれらの混合物に溶解した適当な塩基または酸と反応させることにより、調製することができ、一般的に、エーテル、酢酸エチル、エタノール、イソプロパノール、またはアセトニトリルのような非水媒質が好ましい。
【００５４】
ＭＣＨＲ拮抗薬および／またはＣＢ１拮抗薬のプロドラッグは、修飾物が開裂して親化合物となるように、化合物中に存在する官能基を修飾することにより調製してもよい。当業者であれば、ＭＣＨＲ拮抗薬またはＣＢ１拮抗薬のプロドラッグを調製するのに使用してもよい様々な合成法を認識するであろう。当業者であれば、そのようなプロドラッグを、本明細書で提供した組成物および方法で活性拮抗薬の代わりに使用してもよいことは認識されるであろう。
【００５５】
〈薬学的組成物〉
本発明の実施では、少なくとも１つの非毒性ＭＣＨＲ拮抗薬を、少なくとも生理学的に許容される担体または賦形剤と共に含む薬学的組成物、ならびに少なくとも１つの非毒性ＣＢ１拮抗薬を、少なくとも１つの生理学的に許容される担体または賦形剤と共に含む薬学的組成物を使用する。ある観点では、ＭＣＨＲ拮抗薬とＣＢ１拮抗薬は同じ薬学的組成物に存在し、別の観点では、ＭＣＨＲ拮抗薬は１つの薬学的組成物中に存在し、ＣＢ１拮抗薬は別の薬学的組成物中に存在する。
【００５６】
薬学的組成物は、例えば、水、緩衝液類（例えば、中性緩衝生理食塩水またはリン酸緩衝生理食塩水）、エタノール、鉱物油、植物油、ジメチルスルホキシド、炭水化物(例えば、ブドウ糖、マンノース、ショ糖またはデキストラン)、マンニトール、蛋白質類、アジュバント類、ポリペプチド類またはアミノ酸類、例えばグリシン、抗酸化剤類、キレート化剤類、例えばＥＤＴＡまたはグルタチオンおよび／または保存薬類を含んでもよい。ある薬学組成物はヒトまたは他の動物（例えば、イヌなどのコンパニオン・アニマル）への経口送達用に製剤化される。
【００５７】
所望であれば、他の抗肥満薬、例えばレプチン、レプチン受容体作用薬、メラノコルチン受容体４（ＭＣＭ４）作用薬、シブトラミン、デクスフェンフルラミン、成長ホルモン分泌促進薬、β−３作用薬、５ＨＴ−２作用薬、オレキシン拮抗薬、神経ペプチドＹ１またはＹ５拮抗薬、ガラニン拮抗薬、ＣＣＫ作用薬、ＧＬＰ−１作用薬および／またはコルチコトロピン放出ホルモン作用薬もまた含有させてもよい。
【００５８】
薬学的組成物は、例えば、局所、経口、鼻内、直腸または非経口投与を含む任意の適した投与様式用に製剤化してもよい。本明細書で使用されるように非経口という用語は、皮下、皮内、血管内（例えば、静脈内）、筋内、脊髄、頭蓋内、くも膜下および腹腔内注入、ならびに任意の同様の注射または注入技術を含む。一定の実施形態では、経口使用のために適した形態の組成物が好ましい。そのような形態としては、例えば、錠剤、トローチ、ロゼンジ、水性または油性懸濁液、分散性粉末または顆粒、エマルジョン、ハードまたはソフトカプセル、またはシロップもしくはエリキシルが挙げられる。さらに別の実施形態では、本発明の組成物は凍結乾燥物として製剤化してもよい。
【００５９】
経口使用のための組成物はさらに、魅力的および口当たりのよい調製物を提供するために甘味剤、香味剤、着色剤および保存剤などの１つまたは複数の成分を含んでもよい。錠剤は、活性成分を、錠剤の製造に適した生理学的に許容される賦形剤との混合物として含む。そのような賦形剤としては、例えば、不活性希釈剤（例えば、炭酸カルシウム、炭酸ナトリウム、乳糖（ラクトース）、リン酸カルシウムまたはリン酸ナトリウム）、顆粒化剤および崩壊剤（例えば、トウモロコシデンプンまたはアルギニン酸）、結合剤（例えば、デンプン、ゼラチンまたはアカシアゴム）および潤滑剤（例えば、ステアリン酸マグネシウム、ステアリン酸またはタルク）が挙げられる。錠剤は未コートであってもよく、または、公知の技術によりコートし、胃腸管での崩壊および吸収を遅らせ、これにより長期にわたる持続作用を提供させてもよい。例えば、モノステアリン酸グリセリルまたはジステアリン酸グリセリルなどの時間遅延材料を使用してもよい。
【００６０】
経口用の製剤はまた、ハードゼラチンカプセルとして提供してもよく、この場合、活性成分は不活性固体希釈剤（例えば、炭酸カルシウム、リン酸カルシウムまたはカオリン）と混合され、またはソフトゼラチンカプセルとして提供してもよく、この場合、活性成分は水または油性媒質（例えば、ピーナッツ油、流動パラフィンまたはオリーブ油）と混合される。
【００６１】
水性懸濁液は、適した賦形剤、例えば懸濁化剤（例えば、カルボキシメチルセルロースナトリウム、メチルセルロース、ヒドロプロピルメチルセルロース、アルギン酸ナトリウム、ポリビニルピロリドン、トラガカントゴムおよびアカシアゴム）、および分散または湿潤剤（例えば、天然ホスファチド類、例えばレシチン、アルキレンオキシドの脂肪酸との縮合生成物、例えばポリオキシエチレンステアレート、エチレンオキシドと長鎖脂肪族アルコール類との縮合生成物、例えばヘプタデカエチレンオキシセタノール、エチレンオキシドと脂肪酸類およびヘキシトール由来の部分エステル類との縮合生成物、例えばポリオキシエチレンソルビトールモノオレアート、またはエチレンオキシドと脂肪酸類およびヘキシトール無水物由来の部分エステル類との縮合生成物、例えばポリエチレンソルビタンモノオレアート）と混合された活性材料を含む。水性懸濁液はまた、１つまたは複数の保存剤、例えばエチル、またはｎ−プロピルｐ−ヒドロキシベンゾエート、１つまたは複数の着色剤、１つまたは複数の香味剤、ならびに１つまたは複数の甘味剤、例えばショ糖またはサッカリンを含んでもよい。
【００６２】
油性懸濁液は、活性成分を植物油（例えば、ラッカセイ油、オリーブ油、ゴマ油またはココナッツ油）中、または流動パラフィンなど鉱物油中に懸濁させることにより製剤化してもよい。油性懸濁液はまた、蜜蝋、固形パラフィンまたはセチルアルコールなどの増粘剤を含んでもよい。上記のような甘味剤、および／または香味剤を添加し、口当たりのよい経口調製物を提供してもよい。そのような懸濁液は、アスコルビン酸などの抗酸化剤を添加することにより保存してもよい。
【００６３】
水を添加することにより水性懸濁液を調製するのに適した分散性粉末および顆粒は、分散または湿潤剤、懸濁化剤、および１つまたは複数の保存剤と混合された活性成分を提供する。適した分散または湿潤剤および懸濁化剤は、上記ですでに言及したものにより例示される。別の賦形剤、例えば甘味剤、香味剤および／または着色剤もまた、存在させてもよい。
【００６４】
薬学的組成物はまた、水中油型エマルジョン形態としてもよい。油相は植物油（例えば、オリーブ油またはラッカセイ油）または鉱物油（例えば、流動パラフィン）またはそれらの混合物としてもよい。適した乳化剤は天然由来ゴム（例えば、アカシアゴムまたはトラガカントゴム）、天然由来ホスファチド類（例えば、大豆、レシチンならびに脂肪酸およびヘキシトール由来のエステル類または部分エステル類）、無水物（例えば、ソルビタンモノオレアート）および脂肪酸およびヘキシトール由来の部分エステル類のエチレンオキシドとの縮合生成物（例えば、ポリオキシエチレンソルビタンモノオレアート）としてもよい。エマルジョンはまた甘味剤および／または香味剤を含んでもよい。
【００６５】
シロップおよびエリキシルは甘味剤、例えばグリセロール、プロピレングリコール、ソルビトールまたはショ糖と共に製剤化してもよい。そのような製剤はまた、１つまたは複数の粘滑剤、保存剤、香味剤および／または着色剤を含んでもよい。
【００６６】
薬学的組成物は滅菌注入水性懸濁液または油性懸濁液として調製してもよい。使用するビヒクルおよび濃度により、活性成分はビヒクルに懸濁または溶解させることができる。そのような組成物は、公知の技術に従い、適した分散剤、湿潤剤および／または懸濁化剤、例えば上記で記述したものを用いて製剤化してもよい。使用してもよい許容されるビヒクルおよび溶媒には、水、１，３−ブタンジオール、リンガー液および等張塩化ナトリウム溶液が含まれる。さらに、溶媒または懸濁媒質として滅菌不揮発性油を使用してもよい。この目的のために、合成モノまたはジグリセリドを含む任意の無菌性不揮発性油を使用してよい。さらに、オレイン酸などの脂肪酸が注入組成物の調製において使用され、局所麻酔薬、保存剤および／または緩衝剤などのアジュバントはビヒクルに溶解させることができる。
【００６７】
組成物はまた坐薬形態で調製してもよい（例えば、直腸投与用）。そのような組成物は、常温では固体であるが直腸温度では液体であり、そのため直腸で融解し薬物を放出する適した非刺激賦形剤と、薬物を混合することにより調製することができる。適した賦形剤としては、例えば、ココアバターおよびポリエチレングリコール類が挙げられる。
【００６８】
非ヒト動物に投与するために、組成物はまた動物用飼料または飲料水に添加してもよい。動物が食餌と共に適当な量の組成物を摂取するように動物用飼料および飲料水組成物を調合すると好都合である場合がある。食餌または飲料水に添加するための予混合物として組成物を提供することも好都合である場合がある。
【００６９】
薬学的組成物は持続放出製剤または制御放出製剤として製剤化してもよい（すなわち、ＭＣＨＲ拮抗薬および／またはＣＢ１拮抗薬を投与後持続放出するカプセルなどの製剤）。そのような製剤は一般に周知の技術を用いて調製してもよく、例えば、経口、直腸投与してもよく、または移植により、皮下または所望の標的部位のいずれかで投与してもよい。そのような製剤中で使用するための担体は生体適合性であり、生体分解性であってもよく、好ましくは、製剤はかなり一定レベルのＭＣＨＲ拮抗薬および／またはＣＢ１拮抗薬の放出を提供する。持続放出製剤中に含まれる拮抗薬の量は、移植部位、放出の速度および予定期間、ならびに治療または予防する状態の性質に依存する。
【００７０】
単回投与ユニット（例えば、錠剤またはカプセル）で製剤化した薬学的組成物では、ＭＣＨＲ拮抗薬および／またはＣＢ１拮抗薬は一般に、各ユニット中、治療的有効量で存在する。治療的有効量（または用量）はＭＣＨＲ拮抗薬およびＣＢ１拮抗薬を処方した頻度（例えば、１日につき１〜４回を数週間または数ヶ月）で患者に同時におよび繰り返し投与した場合に、患者において利益が識別できる量である。そのような利益としては、ＢＭＩの減少、食欲または食物摂取の減少および／または体重減少のうちの１つまたは複数が挙げられる。ＭＣＨＲ拮抗薬の治療的有効量は、そのように投与されると、ＣＢ１拮抗薬のみを投与した後に観察される患者の利益に比べ、識別可能な患者の利益が得られる量である。同様に、ＣＢ１拮抗薬の治療的有効量は、そのように投与されると、ＭＣＨＲ拮抗薬のみを投与した後に観察される患者の利益に比べ、識別可能な患者の利益が得られる量である。本明細書で使用されるように、「同時に」という用語は、ＣＢ１拮抗薬が体液中に（ＣＢ１リガンドのＣＢ１への結合および／またはインビトロでのＣＢ１媒介シグナル伝達を検出可能な程変更させるのに十分な濃度で）存在すると同時にＭＣＨＲ拮抗薬が患者の体液中に（ＭＣＨのＭＣＨ受容体への結合および／またはインビトロでのＭＣＨ媒介シグナル伝達を変更させるのに十分な濃度で）存在する時間枠を示す。同時投与（ｃｏｎｔｅｍｐｏｒａｎｅｏｕｓ ａｄｍｉｎｉｓｔｒａｔｉｏｎ）はまた、本明細書では「同時投与（ｃｏａｄｍｉｎｉｓｔｒａｔｉｏｎ）」とも呼ばれる。
【００７１】
患者の体液中のＭＣＨＲ拮抗薬の好ましい濃度は、ＭＣＨのＭＣＨＲ１への結合を阻害するのに十分なものである。約０．１ｍｇ〜約１４０ｍｇ／ｋｇ体重／日の範囲の投与量レベルを提供する組成物が好ましい（約０．５ｍｇ〜約７ｇ／ヒト患者／日）。単回剤形を生成するために担体材料と組み合わせてもよい活性剤の量は、治療されるホストおよび特別な投与様式に依存して変化する。投与ユニット形態は一般に約１ｍｇ〜約５００ｍｇの活性成分を含む。最適用量は、ルーチン試験および周知の手順を用いて確立してもよい。
【００７２】
ある実施形態では、ＭＣＨＲ拮抗薬の治療的有効量はＣＢ１拮抗薬無しで同等の患者の利益を得るために投与する必要がある量よりも低い。本明細書で提供した一定の組成物および方法では、少なくとも相加効果が観察される（すなわち、患者の利益は少なくとも、同じ量のＭＣＨＲ拮抗薬およびＣＢ１拮抗薬の別個の投与により達成される利益の和である）。
【００７３】
ある実施形態では、ＭＣＨＲ拮抗薬の治療的有効量は、ＭＣＨＲ拮抗薬に対する最大推奨用量（すなわち、製造者または米国食品医薬品局（ＦＤＡ）により勧告される最大用量）の３／４、１／２、１／４または１０％未満である。同様に、ある実施形態では、ＣＢ１拮抗薬の治療的有効量は、ＭＣＨＲ拮抗薬無しで同等の患者の利益を達成するために投与する必要がある量よりも少ない。ある実施形態では、ＣＢ１拮抗薬の治療的有効量は、ＣＢ１拮抗薬に対する最大推奨用量（すなわち、製造者またはＦＤＡにより勧告される最大用量）の３／４、１／２、１／４または１０％未満である。
【００７４】
別の実施形態では、ＭＣＨＲ拮抗薬の治療的有効量は、ＭＣＨＲ拮抗薬の合衆国臨床試験で有効性が証明されたＭＣＨＲ拮抗薬の最小用量より低く、ここで、ＭＣＨＲ拮抗薬の合衆国臨床試験は、第２の抗肥満薬、例えばＣＢ１拮抗薬の同時投与無しで実施される（例えば、治療的有効量は、そのような臨床試験で有効性が証明された最小用量の９５％未満、９０％未満、７５％未満または５０％未満である）。別の実施形態では、ＣＢ１拮抗薬の治療的有効量は、ＣＢ１拮抗薬の合衆国臨床試験で有効性が証明されたＣＢ１拮抗薬の最小用量より低く、ここで、ＣＢ１拮抗薬の合衆国臨床試験は、第２の抗肥満薬、例えばＭＣＨＲ拮抗薬の同時投与無しで実施される（例えば、治療的有効量は、そのような臨床試験で有効性が証明された最小用量の９５％未満、９０％未満、７５％未満または５０％未満である）。さらに別のそのような実施形態では、ＭＣＨＲ拮抗薬とＣＢ１拮抗薬の両方を、そのような臨床試験で有効性が証明された最小用量よりも低い用量で使用する。本明細書で使用されるように「臨床試験」という句は、薬物の製造、使用または販売を管理する連邦法の下、情報の発展および提出に関連する目的のために実施される、ヒト被験者での実験研究を示す。
【００７５】
別の実施形態では、ＭＣＨＲ拮抗薬の治療的有効量は、第２の抗肥満薬の同時投与無しで使用するための最小市販用量（患者のサイズに対する）よりも低く、および／またはＣＢ１拮抗薬の治療的有効量は、第２の抗肥満薬の同時投与無しで使用するための最小市販用量（患者のサイズに対する）よりも低い。例えば、ＭＣＨＲ拮抗薬およびＣＢ１拮抗薬の１つまたは両方の治療的有効量は、最小市販用量の９５％未満、９０％未満、７５％未満または５０％未満としてもよい。あるそのような実施形態では、患者は非ヒト動物、例えばコンパニオンアニマル（例えば、イヌまたはネコ）である。
【００７６】
本明細書で提供したパッケージ薬学的調製物は一般に、少なくとも１つのＭＣＨＲ拮抗薬を含む組成物を保持する容器と、容器内の組成物を、患者において食欲を減少させ、または肥満を治療するために、治療的有効量で使用することを示す使用説明書（例えば、ラベリング）とを含む。ある実施形態では、使用説明書はさらに、容器内の組成物を治療的有効量のＣＢ１拮抗薬と組み合わせて使用することを明記する。別の実施形態では、パッケージ薬学的調製物はさらに、１つまたは複数のＣＢ１拮抗薬を、パッケージ内の同じ容器内、または別個の容器内に含む。好ましい混合物は経口投与用に製剤化される（例えば、ピル、カプセル、錠剤などとして）。パッケージ薬学的調製物で使用するための治療的有効量は一般に上記で記述した通りである。
【００７７】
〈治療法〉
ある観点では、本発明は、体重管理に有益な方法を提供する。そのような方法では、本明細書で提供される組成物を患者に投与し、食欲および／または食物摂取を減少させ、または肥満を予防もしくは治療する（例えば、体重減少を促進する）。患者としては、ヒト、飼い慣らされたコンパニオンアニマル（ペット、例えばイヌ）および家畜が挙げられ、投与および治療レジメンは上記で規定した通りである。
【００７８】
本発明は、体重管理のために、１つまたは複数のＭＣＨＲ拮抗薬を１つまたは複数のＣＢ１拮抗薬と組み合わせて使用するための方法を提供する。ＭＣＨＲ拮抗薬を患者に、ＣＢ１拮抗薬と同時に投与してもよく（例えば、単回投与ユニットとして）、または別個に投与してもよい（ＣＢ１拮抗薬の前または後）。好ましい態様では、ＭＣＨＲ拮抗薬およびＣＢ１拮抗薬は最終的には、患者の体液（例えば、血液）中に有効濃度で同時に存在する。ＭＣＨＲ拮抗薬またはＣＢ１拮抗薬の有効濃度は、本明細書で記述したように繰り返し同時投与すると、患者における摂食量、食欲および／または肥満度指数のうちの１つまたは複数を減少させるのに十分な濃度である。上記で記述したように、ＭＣＨＲ拮抗薬の有効濃度は、ＣＢ１拮抗薬無しで同等の患者の利益が達成されるように投与する必要がある量よりも低い治療的有効量のＭＣＨＲ拮抗薬を投与することにより達成してもよく、および／またはＣＢ１拮抗薬の有効濃度は、ＭＣＨＲ拮抗薬無しで同等の患者の利益が達成されるように投与する必要がある量よりも低い治療的有効量のＣＢ１拮抗薬を投与することにより達成してもよい。
【００７９】
そのような方法において使用するための治療的有効量は一般に、上記で記述した通りである。ある実施形態では、ＭＣＨＲ拮抗薬およびＣＢ１拮抗薬の１つまたは両方の治療的有効量は、上記で記述したように、最大推奨用量の３／４、１／２、１／４または１０％未満である。別の態様では、ＭＣＨＲ拮抗薬およびＣＢ１拮抗薬の１つまたは両方の治療的有効量は、合衆国臨床試験で有効性が証明されている最小用量より低い。別の実施形態では、ＭＣＨＲ拮抗薬およびＣＢ１拮抗薬の１つまたは両方の治療的有効量は、治療を受ける患者のサイズに対する最小市販用量よりも低い。
【００８０】
患者へのＭＣＨＲ拮抗薬およびＣＢ１拮抗薬の投与は、経口、局所、鼻内または経皮投与、または静脈内、筋内、皮下、くも膜下腔内、硬膜外、脳室内または同様の注入を含む、上記で記述した任意の手段によって実施することができる。ある実施形態では、上記のように、１つまたは複数のＭＣＨＲ拮抗薬または１つまたは複数のＣＢ１拮抗薬の混合物を投与する。そのような方法で使用するための好ましい混合物は経口投与用に（例えば、ピル、カプセル、錠剤などとして）または静脈内投与用に製剤化される。
【００８１】
投与頻度は、使用する化合物および患者の肥満度により変動させてもよい。一般に、１日あたり４回またはそれ以下の投与計画が好ましく、１日１または２回が特に好ましい。任意の特別な患者に対する特定用量は上記で記述したように、様々な因子に依存する。患者は一般に、治療または予防される状態に適したアッセイ法を用いて治療効果がモニタされてもよく、そのような方法は当業者には周知である。例えば、体重、ＢＭＩまた食物摂取で統計学的に有意の減少が得られると、治療は有効であると考えられる。
【００８２】
〈ＭＣＨＲ拮抗薬／ＣＢ１拮抗薬の組み合わせを識別するための方法〉
本発明はさらに、上記薬学的組成物、パッケージ薬学的調製物および方法において使用するためのＭＣＨＲ拮抗薬／ＣＢ１拮抗薬の組み合わせを選択するための方法を提供する。そのような方法は一般に、ＭＣＨＲ拮抗薬とＣＢ１拮抗薬が哺乳類の食物摂取に対し少なくとも相加効果を示す組み合わせの選択に基づく。例えば、本発明は、同時に哺乳類に、治療的有効量で投与すると哺乳類の食物摂取に少なくとも相加効果を示すＭＣＨＲ拮抗薬とＣＢ１拮抗薬を識別（または同定）する工程と、それから、体重調整に使用するためのＭＣＨＲ拮抗薬／ＣＢ１拮抗薬の組み合わせを識別（または同定）する工程とを含む、体重の調整に使用するためのＭＣＨＲ拮抗薬／ＣＢ１拮抗薬の組み合わせを識別するための方法を提供する。
【００８３】
一般に、哺乳類に治療的有効量で同時に投与すると哺乳類の食物摂取に少なくとも相加効果を示すＭＣＨＲ拮抗薬とＣＢ１拮抗薬を選択する工程を含む、薬学的組成物のための活性成分を選択するための、または患者に同時投与するための治療薬を選択するための方法をさらに提供する。ある実施形態では、薬学的組成物のための活性成分を選択するための方法は、（ｉ）第１の治療的有効量のＭＣＨＲ拮抗薬を用いて、ＣＢ１拮抗薬の同時投与無しで処置した哺乳類（例えば、非ヒト哺乳類）における食物摂取に対するＭＣＨＲ拮抗薬の効果を決定する工程と、（ｉｉ）第２の治療的有効量のＣＢ１拮抗薬を用いて、ＭＣＨＲ拮抗薬の同時投与無しで処置した哺乳類における食物摂取に対するＣＢ１拮抗薬の効果を決定する工程と、（ｉｉｉ）第１の治療的有効量のＭＣＨＲ拮抗薬と第２の治療的有効量のＣＢ１拮抗薬を用いて同時に処置した哺乳類における食物摂取に対するＭＣＨＲ拮抗薬とＣＢ１拮抗薬の効果を決定する工程と、（ｉｖ）必要に応じて、異なるＭＣＨＲ拮抗薬または異なるＣＢ１拮抗薬を用いて工程（ｉ）〜（ｉｉｉ）を繰り返す工程と、（ｖ）工程（ｉｉｉ）で決定した食物摂取に対する効果が工程（ｉ）および（ｉｉ）で決定した食物摂取に対する効果の和と等しいまたはそれ以上であるＭＣＨＲ拮抗薬とＣＢ１拮抗薬を選択する工程と、を含む。
【００８４】
そのような活性成分を含む薬学的組成物を調製するための方法は一般に、（ｉ）哺乳類に治療的有効量で同時に投与すると哺乳類における食物摂取に対し少なくとも相加効果を有するＭＣＨＲ拮抗薬とＣＢ１拮抗薬を識別（または同定）する工程と、（ｉｉ）治療的有効量のＭＣＨＲ拮抗薬と治療的有効量のＣＢ１拮抗薬とを生理学的に許容される担体または賦形剤と組み合わせる工程と、を含む。そのような活性成分を含むパッケージ薬学的組成物を調製するための方法は一般に、（ｉ）哺乳類に治療的有効量で同時に投与すると哺乳類における食物摂取に対し少なくとも相加効果を有するＭＣＨＲ拮抗薬とＣＢ１拮抗薬を識別（または同定）する工程と、（ｉｉ）ＭＣＨＲ拮抗薬とＣＢ１拮抗薬とを、第１の治療的有効量のＭＣＨＲ拮抗薬と第２の治療的有効量のＣＢ１拮抗薬を、食物摂取または食欲を減少させ、または肥満を治療する、患者に同時に投与することを示す使用説明書と共にパッケージする工程と、を含む。
【００８５】
下記実施例は、説明のために提供するものであり、制限するものではない。特に記載がなければ、試薬および溶媒は全て標準市販グレードであり、さらに精製せずに使用する。
【実施例】
【００８６】
〔実施例１〕
〈ＭＣＨＲ拮抗薬とＣＢ１拮抗薬の摂食量に対する効果〉
この実施例では、飽食させたラットにおける１２時間にわたる食物摂取および体重変化を測定するインビボアッセイ法について説明する。このアッセイ法は、ＭＣＨＲ拮抗薬とＣＢ１拮抗薬の同時投与により過剰摂食量を阻止することができることを確認するために使用する。
【００８７】
ラット（３月齢、２５０〜３００ｇ）の体重を測定する。アッセイ法の前に、ラットには正常な食餌および水を自由に与える。対照および試験化合物溶液をその後に経口投与し、３０分後ラットを代謝給餌ケージ（ｍｅｔａｂｏｌｉｃ ｆｅｅｄｉｎｇ ｃａｇｅ）（ナルゲン（Ｎａｌｇｅｎｅ）代謝ケージ、ＶＷＲサイエンティフィック（Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ））に１２時間の給餌セッションの間、入れ、明かりを消し、その間、食餌および水を自由に与える。与えた食餌は、トリトス（Ｔｒｉｔｏｓ）らの糖尿病（Ｄｉａｂｅｔｅｓ）４７：１６８７（１９９８）により本質的に記述されているように、口当たりのよい固形飼料である。１２時間後、食物摂取、水摂取、尿および大便排出および体重変化を測定する。
【００８８】
図１は１つのそのようなアッセイ法の結果を示し、この場合、動物を４つの処置グループに分け、各グループ毎８〜１０匹の動物とする。第１のグループでは、ラットをビヒクルのみ（０．１％トリアセチン、湿潤剤を含む５％メチルセルロース）で処置する。これらのビヒクル処置動物は１２時間の給餌セッション中、平均２８ｇの食餌を食べる。第２のグループでは、動物を５ｍｇ／ｋｇＣＢ１拮抗薬の１回投与で処置する。これらの動物は、平均１３％の食物摂取の減少を示す。第３グループの動物は１０ｍｇ／ｋｇ ＭＣＨＴ１拮抗薬の１回投与で処置する。これらの動物は平均１６％の食物摂取の減少を示す。第４のグループでは、動物をＣＢ１拮抗薬およびＭＣＨＲ１拮抗薬の両方で、上記のように処置し、３１％の食物摂取の減少を示す。この結果から、これらの２つの薬剤を同時投与すると、食物摂取において少なくとも相加減少が得られることが証明される。
【００８９】
〔実施例２〕
〈メラミン凝集ホルモン受容体結合アッセイ法〉
この実施例では、ＭＣＨ受容体に対する化合物の結合親和性を決定するために使用してもよいＭＣＨ受容体結合の標準アッセイ法を説明する。
【００９０】
カニクイザルマカク視床下部ＭＣＨＲ１ ｃＤＮＡを調製し、ＰＣＤＮＡ３．１（インビトロゲン社（ＩＮＶＩＴＲＯＧＥＮ Ｃｏｒｐ．）、カルフォルニア州カールズバッド）にクローン化し、ＨＥＫ２９３細胞（アメリカンタイプカルチャーコレクション（Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｔｙｐｅ Ｃｕｌｔｕｒｅ Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ、バージニア州マナッサス）を、２００３年７月２４日に公開されたＰＣＴ国際出願公開番号第ＷＯ０３／０５９２８９号で記述されているようにＭＣＨＲ１発現ベクターにより安定にトランスフェクトさせる。トランスフェクトしたＨＥＫ２９３細胞の調製および貯蔵に関するＷＯ０３／０５９２８９号の５２ページの開示内容は参照により本明細書に組み入れられる。
【００９１】
アッセイ法の時点では、ＨＥＫ２９３細胞膜ペレットを、洗浄緩衝液（ｗａｓｈ ｂｕｆｆｅｒ）（１．０ｍＭ ＣａＣｌ２、５．０ｍＭ ＭｇＣｌ２、１２０ｍＭ ＮａＣｌを有する２５ｍＭ ＨＥＰＥＳ、ｐＨ７．４）を添加することにより解凍し、ブリンクマンポリトロン（ＢＲＩＮＫＭＡＮ ＰＯＬＹＴＲＯＮ）セッティング５を用いて３０秒間ホモジナイズする。細胞を１０分間４８，０００×ｇで遠心分離する。上清を廃棄し、ペレットを新鮮な洗浄緩衝液中に再懸濁させ、再びホモジナイズする。この膜ホモジネートのアリコート（ａｌｉｑｕｏｔ）を使用して、ブラッドフォード法（ＢＩＯ−ＲＡＤ蛋白質アッセイキット、＃５００−０００１、ＢＩＯ−ＲＡＤ、カリフォルニア州ハーキュリーズ）により蛋白質濃度を決定する。この測定により、１リットルの細胞培養物から、典型的に５０〜７５ｍｇの総膜蛋白質が得られる。ホモジネートを前のように遠心分離し、結合緩衝液（洗浄緩衝液＋０．１％ＢＳＡと１．０μＭ最終ホスホラミドン）中３３３μｇ／ｍＬの蛋白質濃度で懸濁させ、５０μｇ膜蛋白質／１５０μＬ結合緩衝液のアッセイ体積とする。ホスホラミドンはシグマバイオケミカルズ（ＳＩＧＭＡ ＢＩＯＣＨＥＭＩＣＡＬＳ、ミズーリ州セントルイス）（ｃａｔ＃Ｒ−７３８５）からのものとした。
【００９２】
競合結合アッセイ法は、ファルコン（Ｆａｌｃｏｎ）９６ウエル丸底ポリプロピレンプレートにおいて、室温で実施する。各アッセイウエルは、上記のように調製した１５０μＬのＭＣＨ受容体含有膜と、５０μＬの１２５Ｉ−Ｔｙｒ ＭＣＨと、５０μＬの結合緩衝液と、２μＬのＤＭＳＯに溶解した試験化合物を含む。１２５Ｉ−Ｔｙｒ ＭＣＨ（比活性＝２２００Ｃｉ／ｍｍｏｌ）はＮＥＮ、マサチューセッツ州ボストン（Ｃａｔ＃ＮＥＸ ３７３）から購入し、結合緩衝液中で希釈し、最終アッセイ濃度３０ｐＭとする。
【００９３】
非特異的結合は、１μＭの非標識ＭＣＨの存在下で測定した結合として規定される。ＭＣＨはバケム（ＢＡＣＨＥＭ）Ｕ．Ｓ．Ａ、ペンシルバニア州キングオブプロシア（ｃａｔ＃Ｈ−１４８２）から購入する。ＭＣＨ結合を決定するために使用するアッセイウエルは１５０μＬのＭＣＨ受容体含有膜と、５０μＬの１２５Ｉ−Ｔｙｒ ＭＣＨと、２５μＬの結合緩衝液と、２５μＬの結合緩衝液とを含む。
【００９４】
アッセイプレートを１時間室温でインキュベートする。膜を、使用前２時間１．０％ ＰＥＩ（ポリエチレンイミン）で予め浸したワラック（ＷＡＬＬＡＣ、商標）ガラス繊維フィルタ（パーキンエルマー（ＰＥＲＫＩＮ−ＥＬＭＥＲ）、メリーランド州ゲイサーズバーグ）上に収集する。フィルタを一晩中乾燥させ、その後、ワラックベータシント（ＷＡＬＬＡＣ ＢＥＴＡ ＳＣＩＮＴ）（商標）シンチレーション流体を添加した後、ワラック１２０５ベータプレート（ＢＥＴＡ ＰＬＡＴＥ）カウンタで計数する。
【００９５】
飽和結合のために、１２５Ｉ−Ｔｙｒ ＭＣＨの濃度を７〜１０００ｐＭまで変動させる。典型的には、飽和結合曲線１つあたり１１の濃度点を収集する。コンピュータプログラムフィットＰ（ＦｉｔＰ、商標）（バイオソフト（ＢＩＯＳＯＦＴ）、ミズーリ州ファーガソン）の助けを借り、ヒル（Ｈｉｌｌ）式を測定した値に適合させることにより、平衡結合パラメータを決定する。好ましいＭＣＨＲ拮抗薬では、Ｋｉ値が１μＭ未満、好ましくは５００ｎＭ未満、より好ましくは１００ｎＭ未満である。
【００９６】
〔実施例３〕
〈ＭＣＨ受容体カルシウム移動アッセイ法〉
この実施例では、メラミン凝集ホルモンに対するメラニン凝集ホルモン受容体を発現する細胞の応答をモニタするための代表的な機能アッセイ法について説明する。このアッセイ法はまた、試験化合物がメラニン凝集ホルモン受容体の作用薬または拮抗薬として作用するかどうかを決定するのに使用することができる。
【００９７】
チャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞（アメリカンタイプカルチャーコレクション、バージニア州マナッサス）を、リン酸カルシウム沈澱法によりＭＣＨ受容体発現ベクターを用い安定にトランスフェクトさせる。最も良好に発現するトランスフェクタントを選択し、このトランスフェクタント（すなわち、クローン）を、ファルコン（ＦＡＬＣＯＮ、商標）の黒壁、透明底の９６−ウエルプレート（＃３９０４、ベクトン−ディキンソン（ＢＥＣＴＯＮ−ＤＩＣＫＩＮＳＯＮ）、ニュージャージー州フランクリンレイクス）において、１０％ウシ胎児血清、２５ｍＭ ＨＥＰＥＳおよび５００μｇ／ｍＬ（活性）Ｇ４１８を補充したハム（Ｈａｍ）Ｆ１２培地（メディアテク（ＭＥＤＩＡＴＥＣＨ）、バージニア州ハーンドン）中増幅、増殖させ、１５，０００細胞／ウエルの密度とする。アッセイ法を実施する前、培地を９６ウエルプレートから除去する。Ｆｌｕｏ−３カルシウム感受性染料（モレキュラープローブズ（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｐｒｏｂｅｓ）、オレゴン州ユージーン）を各ウエルに添加する（染料溶液：１ｍｇ ＦＬＵＯ−３ ＡＭ、４４０μＬ ＤＭＳＯおよび４４０μＬ ２０％プルロニック酸（ｐｌｕｒｏｎｉｃ ａｃｉｄ）を含むＤＭＳＯ、１：４希釈、５０μＬ 希釈溶液／ウエル）。プレートをアルミニウム箔で覆い、３７℃で１〜２時間インキュベートする。インキュベート後、染料をプレートから除去し、細胞を１００μＬ ＫＲＨ緩衝液（０．０５ｍＭ ＫＣｌ、０．１１５Ｍ ＮａＣｌ、９．６ｍＭ ＮａＨ２ＰＯ４、０．０１ｍＭ ＭｇＳＯ４、２５ｍＭ ＨＥＰＥＳ、ｐＨ７．４）で１度洗浄し、過剰の染料を除去し、洗浄後、各ウエルに８０μＬのＫＲＨ緩衝液を添加する。
【００９８】
蛍光応答を、ヒトＭＣＨ受容体または試験化合物のいずれかを添加し、ＦＬＩＰＲ（商標）プレートリーダー（モレキュラーデバイス（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｄｅｖｉｃｅｓ）、カリフォルニア州サニーベール）により、４８０ｎｍで励起し、５３０ｎｍで発光させることによりモニタする。
【００９９】
試験化合物の、ＭＣＨに対するＭＣＨ受容体を発現する細胞の応答に拮抗する能力を測定するために、ＭＣＨのＥＣ５０を最初に決定する。追加の２０μＬのＫＲＨ緩衝液および１μＬのＤＭＳＯを、上記のように調製した各ウエルの細胞に添加する。１００μＬのヒトＭＣＨを含むＫＲＨ緩衝液をＦＬＩＰＲ機器により各ウエルに自動的に移す。最終ＭＣＨ濃度が１ｎＭ〜３μＭの８点濃度応答曲線を使用してＭＣＨ ＥＣ５０を決定する。
【０１００】
試験化合物をＤＭＳＯに溶解させ、２０μＬのＫＲＨ緩衝液中に希釈し、上記のように調製した細胞に添加する。調製した細胞および試験化合物を含む９６ウエルプレートを暗闇、室温で０．５〜６時間インキュベートする。インキュベーションを６時間を超えて続けないことが重要である。蛍光応答を決定する直前に、２×ＥＣ５０までＫＲＨ緩衝液中に希釈したヒトＭＣＨ１００μＬをＦＬＩＰＲ機器により、９６ウエルプレートの各ウエルに自動的に添加し、２００μＬの最終試料体積およびＥＣ５０の最終ＭＣＨＲ濃度とする。アッセイウエル中の試験化合物の最終濃度は１ｎＭと５μＭとの間である。典型的には、１つのＭＣＨのＥＣ５０に曝露させた細胞は、約１０，０００相対蛍光単位の蛍光応答を示す。ＭＣＨ受容体の拮抗薬を用いてインキュベートした細胞は、統計的有意性のパラメータ試験を用いて測定すると、ｐ≦０．０５レベルまで対照細胞よりも有意に低い応答を示す。典型的には、ＭＣＨ受容体の拮抗薬は、対応対照に比べ約２０％、好ましくは約５０％、最も好ましくは少なくとも８０％だけ蛍光応答を減少させる。ＭＣＨＲ拮抗薬に対するＩＣ５０値を、シグマプロット（ＳＩＧＭＡＰＬＯＴ）ソフトウエア（ＳＰＳＳ社、イリノイ州シカゴ）および標準技術を用いて決定する。その後、ＩＣ５０値を用いて、チェン（Ｃｈｅｎｇ）およびプルゾフ（Ｐｒｕｓｏｆｆ）（１９７３）Ｂｉｏｃｈｅｍ Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．２２（２３）：３０９９−１０８により記述されているようにＫｉを生成させる。
【０１０１】
化合物のＭＣＨ受容体の作用薬として作用する能力は、ＭＣＨ無しで、上記方法を用い、ＭＣＨ受容体を発現する細胞の蛍光応答を測定することにより決定する。細胞を、バックグラウンドより高い蛍光を示すようにする化合物はＭＣＨ受容体作用薬である（試験化合物のバックグラウンド自己蛍光は標準方法を用いて評価してもよい）。ＭＣＨ受容体の基本活性の検出可能な増加を誘発しないＭＣＨＲ拮抗薬は、検出可能な作用薬活性を有さず、好ましい。
【０１０２】
〔実施例４〕
〈ＣＢ１発現のためのバキュロウイルス調製物〉
この実施例では、ＣＢ１−発現昆虫細胞を作成するのに使用するための組換えバキュロウイルスの調製について説明する。
【０１０３】
ヒトＣＢ１配列はジェンバンクアクセッション番号ＨＳＵ７３３０４を有し、ホエー（Ｈｏｅｈｅ）ら（１９９１）Ｎｅｗ Ｂｉｏｌ．３（９）：８８０−８５により報告された。ヒトＣＢ１（ｈＣＢ１）ｃＤＮＡをヒト脳ｃＤＮＡライブラリー（ギブコ（Ｇｉｂｃｏ）ＢＲＬ、メリーランド州ゲイサーズバーグ）からＰＣＲを用いて増幅させ、ここで、５’プライマーは最適コザック（Ｋｏｚａｋ）配列ＣＣＡＣＣを含む。得られたＰＣＲ産物を、マルチプルクローニングサイトを用いｐｃＤＮＡ３．１／Ｖ５−Ｈｉｓ−ＴＯＰＯ（インビトロジェン社（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ Ｃｏｒｐ．）カリフォルニア州カールズバッド）にクローン化し、その後、Ｂａｍ／ＸｈｏサイトでｐＢＡＣＰＡＫ８（ＢＤバイオサイエンス（Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）、カルフォルニア州パロアルト）にサブクローン化すると、ｈＣＢ１バキュロウイルス発現ベクターが得られる。
【０１０４】
ｈＣＢ１バキュロウイルス発現ベクターを、Ｓｆ９細胞にＢＡＣＵＬＯＧＯＬＤ ＤＮＡ（ＢＤファーミンゲン（ＰｈａｒＭｉｎｇｅｎ）、カリフォルニア州サンディエゴ）と共にコトランスフェクトさせる。Ｓｆ９細胞培養上清をトランスフェクション後３日目に採取する。組換えウイルス含有上清を、グレース（Ｇｒａｃｅ）塩および４．１ｍＭのＬ−Ｇｌｎ、３．３ｇ／Ｌの限外濾過イーストレート（ｙｅｓｔｏｌａｔｅ）および１０％の熱により不活性化したウシ胎児血清を補充したヒンク（Ｈｉｎｋ）ＴＮＭ−ＦＨ昆虫媒地（ＪＲＨバイオサイエンス、ミズーリ州カンザスシティ）（以後、「昆虫媒地」）中で連続して希釈し、プラークを組換えプラークに対しアッセイする。４日後、組換えプラークを選択し、１ｍｌの昆虫培地中に採取し、増幅させる。各１ｍｌ体積の組換えバキュロウイルス（継代０）を使用して、５ｍｌの昆虫培地中に２×１０６Ｓｆ９細胞を含む別のＴ２５フラスコに感染（インフェクション）させる。２７℃で５日間インキュベートした後、各Ｔ２５感染物から上清媒地を採取し、第１継代接種材料として使用する。
【０１０５】
その後、２組の７つの換えバキュロウイルスクローンを第２ラウンドの増幅のために選択し、１ｍｌの第１継代ストックを用いて、２つのＴ１７５フラスコに分割した１００ｍｌの昆虫媒地中の１×１０８細胞に感染させる。感染後４８時間目に、各１００ｍｌの調製物由来の第２継代媒地を採取し、プラークを力価に対しアッセイする。第２ラウンドの増幅から得られた細胞ペレットを、下記で記述したように親和性結合によりアッセイし、組換え受容体発現を証明する。その後、第３ラウンドの増幅を０．１の感染効率を用いて開始し、１リットルのＳｆ９細胞を感染させる。感染後７２時間目に、上清培地を採取し、第３継代バキュロウイルスストックを獲得する。
【０１０６】
残りの細胞ペレットについて、親和性結合に対しアッセイする。放射性リガンドは、飽和結合では２５ｐＭ−５．０ｎＭ［３Ｈ］ＣＰ５５，９４０であり、競合結合では０．５ｎＭであり（ニューイングランドニュークリア社（Ｎｅｗ Ｅｎｇｌａｎｄ Ｎｕｃｌｅａｒ Ｃｏｒｐ．、マサチューセッツ州ボストン）、ｈＣＢ１−発現バキュロウイルス細胞を使用し、アッセイ緩衝液は５０ｍＭのＴｒｉｓ ｐＨ７．４、１２０ｍＭのＮａＣｌ、５ｍＭのＭｇＣｌ２、０．５％ ＢＳＡおよび０．２ｍｇ／ｍｌのバシトラシンを含み、ＧＦ／Ｃ ホワットマン（ＷＨＡＴＭＡＮ）フィルタ（使用前２時間０．３％脱脂粉乳（Ｈ２Ｏ）に予め浸漬させる）を用いて濾過を実施し、フィルタを５ｍＬの冷５０ｍＭ Ｔｒｉｓ ｐＨ７．４で２度洗浄する。
【０１０７】
第３継代バキュロウイルスストックの力価をプラークアッセイ法により決定し、感染効率、インキュベーション期間、結合アッセイ法実験を実施し、最適受容体発現のための条件を決定する。
【０１０８】
〔実施例５〕
〈バキュロウイルス感染〉
対数期Ｓｆ９細胞（インビトロゲン社、カリフォルニア州カールスバッド）に、組換えバキュロウイルスの１つまたは複数のストックを感染させ、昆虫培地中、２７℃で培養する。感染はｈＣＢ１の発現に導くウイルスのみ、またはこのウイルスと３つのＧ−蛋白質サブユニット発現ウイルスストック、１）ラットＧα１２Ｇ−蛋白質−エンコードウイルスストック（バイオシグナル（ＢＩＯＳＩＧＮＡＬ）＃Ｖ５Ｊ００８）、２）ウシβ１Ｇ−蛋白質−エンコードウイルスストック（バイオシグナル＃Ｖ５Ｈ０１２）および３）ヒトγ２Ｇ−蛋白質−エンコードウイルスストック（バイオシグナル＃Ｖ６Ｂ００３）、これらは全てバイオシグナル社、カナダモントリオールから入手される、と組み合わせたもののいずれかを用いて実施する。
【０１０９】
典型的なｈＣＢ１感染は、上記のように加熱して不活性化した１０％ウシ胎児血清（ＦＢＳ）を補充した昆虫培地で培養したＳｆ９細胞を使用して実施する。Ｓｆ９細胞を５％ ＦＢＳおよび５％ギブコ無血清培地（インビトロゲン社、カルフォルニア州カールスバッド）を含む昆虫培地で培養すると、より高い受容体およびＧ−蛋白質（Ｇα、Ｇβ、Ｇγ）発現を得ることができる。Ｓｆ９細胞をＦＢＳ無しで１０％ギブコ無血清培地を含む昆虫培地で培養すると、最大ＣＢ１受容体発現および機能活性が達成される。感染は０．１：１．０：０．５：０．５の感染効率で実施する。感染後７２時間で、細胞懸濁液試料に対し、トリパンブルー染料排除により生存率について分析し、残りのＳｆ９細胞を遠心分離により採取する（３０００ｒｐｍ／１０分／４℃）。
【０１１０】
〔実施例６〕
〈精製した組換え昆虫細胞膜〉
Ｓｆ９細胞ペレットをホモジナイズ緩衝液（１０ｍＭ ＨＥＰＥＳ、２５０ｍＭ ショ糖、０．５μｇ／ｍｌ ロイペプチン、２μｇ／ｍｌ アプロチニン、２００μＭ ＰＭＳＦおよび２．５ｍＭ ＥＤＴＡ、ｐＨ７．４）中に再懸濁させ、ポリトロン（ＰＯＬＹＴＲＯＮ）ホモジナイザを用いてホモジナイズする（セッティング５で３０秒間）。ホモジナイズされたものを遠心分離し（５３６×ｇ／１０分／４℃）、核をペレット化する。単離した膜を含む上清を清浄な遠心分離管にデカントし、遠心分離し（４８，０００×ｇ／３０分、４℃）、得られたペレットを３０ｍｌのホモジナイズ緩衝液に再懸濁させる。この遠心分離および再懸濁工程を２度繰り返す。最終ペレットを、５ｍＭ ＥＤＴＡを含む氷冷ダルベッコ（Ｄｕｌｂｅｃｃｏ）ＰＢＳ中に再懸濁させ、必要となるまで−８０℃で、凍結アリコートで保存する。得られた膜調製物（以後、「Ｐ２膜」）の蛋白質濃度を、ブラッドフォード蛋白質アッセイ法（バイオラッドラボラトリーズ、カリフォルニア州ハーキュリーズ）を用いて測定する。この測定により、１リットルの細胞培養物では典型的には１００〜１５０ｍｇの総膜蛋白質が得られる。
【０１１１】
〔実施例７〕
〈放射性リガンド結合アッセイ法〉
Ｐ２膜をダウンス（Ｄｏｕｎｃｅ）ホモジナイゼーション（タイトな乳鉢（ｔｉｇｈｔ ｐｅｓｔｌｅ））により、結合緩衝液（５０ｍＭ Ｔｒｉｓ ｐＨ７．４、１２０ｍＭ ＮａＣｌ、５ｍＭ ＭｇＣｌ２、０．５％ＢＳＡおよび０．２ｍｇ／ｍｌバシトラシン）中に再懸濁させる。
【０１１２】
飽和結合分析では、膜（１０μｇ）を２５ｐＭ〜０．５ｎＭ［３Ｈ］ＣＰ５５，９４０（ニューイングランドニュークリア社、マサチューセッツ州ボストン）を含むポリプロピレン管に添加する。非特異的結合を、１０μＭ ＣＰ５５，９４０（トクリスクックソン社（Ｔｏｃｒｉｓ Ｃｏｏｋｓｏｎ Ｉｎｃ．）、ミズーリ州エリスヴィル）の存在下で決定すると、総結合の１０％未満を占めた。受容体親和性に対するグアニンヌクレオチド効果を評価するために、ＧＴＰγＳを添加し、最終濃度５０μＭで管を複製する（ｄｕｐｌｉｃａｔｅ）。
【０１１３】
競合分析では、膜（１０μｇ）を０．５ｎＭ［３Ｈ］ＣＰ５５，９４０を含むポリプロピレン管に添加する。非放射性標識ディスプレーサーを添加し、１０−１０Ｍ〜１０−５Ｍの範囲の濃度でアッセイ物を分離すると、０．２５０ｍＬの最終体積が得られる。非特異的結合を、１０μＭ ＣＰ５５，９４０の存在下で決定すると、総結合の１０％未満を占めた。室温で１時間インキュベートした後、反応を急速減圧濾過により中止させる。試料を予め浸漬させた（０．３％脱脂粉乳で使用前２時間）ＧＦ／Ｃホワットマンフィルター上で濾過し、５ｍＬの５０ｍＭ冷Ｔｒｉｓ ｐＨ７．４で２度すすぐ。残りの結合放射活性を、γ計数により定量する。Ｋｉおよびヒル（Ｈｉｌｌ）係数（ｎＨ）を、シグマプロットソフトウエアの助けを借りて、測定値にヒル式を適合させることにより決定する。
【０１１４】
〔実施例８〕
〈作用薬誘導ＧＴＰ結合〉
この実施例では、ＣＢ１作用薬および拮抗薬を識別（または同定）し、逆作用薬活性を有する拮抗薬から中性拮抗薬を区別するための作用薬刺激ＧＴＰ−γ３５Ｓ結合（「ＧＴＰ結合」）活性の使用について説明する。このアッセイ法を使用し、拮抗薬化合物により媒介される部分アゴニズムを検出することもできる。このアッセイ法で分析する化合物は本明細書では「試験化合物」と呼ばれる。作用薬刺激ＧＴＰ結合活性は次のように測定する。４つの独立したバキュロウイルスストック（１つはｈＣＢ１の発現を誘導し、３つはヘテロ三量体Ｇ−蛋白質の３つのサブユニットの各々の発現を誘導する）を使用し、実施例５で記述したようにＳｆ９細胞培養物に感染させる。
【０１１５】
精製膜（実施例６で記述したように調製）に対する作用薬刺激ＧＴＰ結合を最初に、ＣＢ１作用薬ＣＰ５５，９４０を用いて評価し、受容体／Ｇ−蛋白質−α−β−γの組み合わせでは、ＧＴＰ結合により測定されるような機能応答が得られることを確認する。
【０１１６】
Ｐ２膜をダウンスホモジナイゼーション（タイトな乳鉢）により、ＧＴＰ結合緩衝液（５０ｍＭ Ｔｒｉｓ ｐＨ７．４、１２０ｍＭ ＮａＣｌ、５ｍＭ ＭｇＣｌ２、２ｍＭ ＥＧＴＡ、０．１％ ＢＳＡ、０．１ｍＭバシトラシン、１００ＫＩＵ／ｍＬアプロチニン、５μＭ ＧＤＰ）中に再懸濁させ、反応管に１０μｇ蛋白質／反応管の濃度で添加する。漸増用量の作用薬ＣＰ５５，９４０を１０−１２Ｍ〜１０−６Ｍの範囲の濃度で添加した後、１００ｐＭのＧＴＰ−γ３５Ｓを添加することにより反応を開始する。競合実験では、非放射標識試験化合物を別個のアッセイ物に１０−１０Ｍ〜１０−５Ｍの範囲の濃度で１ｎＭ ＣＰ５５，９４０と共に添加すると、０．２５ｍＬの最終体積が得られる。
【０１１７】
室温で６０分インキュベートした後、ＧＦ／Ｃフィルタ（洗浄緩衝液、０．１％ＢＳＡに予め浸す）上での急速減圧濾過により反応を中止させ、その後、氷冷洗浄緩衝液（５０ｍＭ Ｔｒｉｓ ｐＨ７．０、１２０ｍＭ ＮａＣｌ）で洗浄する。受容体結合（これにより膜結合）ＧＴＰ−γ３５Ｓの量を、結合放射活性を測定することにより、好ましくは洗浄したフィルタの液体シンチレーション分光法により決定する。非特異結合を１０ｍＭ ＧＴＰ−γ３５Ｓを用いて決定すると、非特異結合は典型的には総結合の５％未満を示す。データは基礎（ベースライン）上の割合（パーセント）として表される。これらのＧＴＰ結合実験結果を、シグマプロットソフトウエアを用いて解析し、ＩＣ５０を決定する。その後、ＩＣ５０を使用して、チェンおよびプルゾフ（１９７３）Ｂｉｏｃｈｅｍ Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．２２（２３）：３０９９−１０８により記述されているようにＫｉを生成する。
【０１１８】
中性拮抗薬は、ＣＰ５５，９４０刺激ＧＴＰ結合活性をベースライン（このアッセイ法では添加するＣＰ５５，９４０または他の作用薬無しで、さらにいずれの試験化合物も無しで、膜に結合するＧＴＰレベル）に向かって、しかしそれ以下にならないように減少させる試験化合物である。
【０１１９】
対照的に、添加するＣＰ５５，９４０無しで、ＣＢ１逆作用薬は、受容体含有膜のＧＴＰ結合活性をベースライン未満まで減少させる。拮抗薬活性を示す試験化合物が、ＣＢ１作用薬無しではベースライン未満にＧＴＰ結合活性を減少させない場合、中性拮抗薬として特徴づけられる。
【０１２０】
このＧＴＰ結合アッセイ法において添加ＣＰ５５，９４０無しでＧＴＰ結合活性をベースラインより上に上昇させる拮抗薬試験化合物は、部分作用薬活性を有するものと特徴づけられる。好ましいＣＢ１拮抗薬は、そのような条件下では、作用薬ＣＰ５５，９４０により引き起こされる最大応答の１０％を超えてＧＴＰ結合活性を上昇させず、より好ましくは５％未満、最も好ましくは２％未満である。
【０１２１】
〔実施例９〕
〈ＭＤＣＫ細胞毒性アッセイ法〉
この実施例では、メイディン・ダービー・イヌ腎臓（Ｍａｄｉｎ Ｄａｒｂｙ ｃａｎｉｎｅ ｋｉｄｎｅｙ）（ＭＤＣＫ）細胞の細胞毒性アッセイ法を用いた化合物毒性の評価について説明する。
【０１２２】
１μＬの試験化合物を底が透明な９６−ウエルプレート（パッカード（ＰＡＣＫＡＲＤ）、コネチカット州メリデン）の各ウエルに添加し、アッセイ物中の化合物の最終濃度を１０μＭ、１００μＭまたは２００μＭとする。試験化合物を有さない溶媒を対照ウエルに添加する。
【０１２３】
ＭＤＣＫ細胞、ＡＴＣＣ番号ＣＣＬ−３４（アメリカンタイプカルチャーコレクション、バージニア州マナッサス）をＡＴＣＣ製品情報シートの指示に従い、滅菌条件で維持する。集密ＭＤＣＫ細胞をトリプシン処理し、採取し、温かい（３７℃）培地（ビタセル（ＶＥＴＡＣＥＬＬ）最小必須培地イーグル（Ｅａｇｌｅ）、ＡＴＣＣカタログ＃３０−２００３）を用い０．１×１０６細胞／ｍＬの濃度まで希釈する。細胞を有さない１００μＬの温かい培地を含む５つの標準曲線対照ウエルを除き、１００μＬの希釈細胞を各ウエルに添加する。その後、プレートを３７℃、９５％Ｏ２、５％ＣＯ２下で２時間、絶えず振盪させてインキュベートする。インキュベート後、５０μＬの哺乳類細胞溶解溶液（パッカード（ＰＡＣＫＡＲＤ）（コネチカット州メリデン）ＡＴＰ−ＬＩＴＥ−ＭルミネセントＡＴＰ検出キットから）を各ウエル毎に添加し、ウエルをパッカードトップシール（ＴＯＰＳＥＡＬ）ステッカーで被覆し、プレートを約７００ｒｐｍで適した振盪機上で２分間、振盪させる。
【０１２４】
未処置細胞に比べ、化合物により引き起こされる毒性によりＡＴＰ産生が減少する。ＡＴＰ−ＬＩＴＥ−ＭルミネセントＡＴＰ検出キットを一般に、製造者の指示に従い使用し、処置および未処置ＭＤＣＫ細胞中でのＡＴＰ産生を測定する。パッカードＡＴＰ ＬＩＴＥ−Ｍ試薬は、室温で平衡化される。平衡化されるとすぐに、凍結乾燥基質溶液を５．５ｍＬの基質緩衝液（キットから）中で再構成（ｒｅｃｏｎｓｔｉｔｕｔｅ）させる。凍結乾燥ＡＴＰ標準溶液を脱イオン水中で再構成させると、１０ｍＭストックが得られる。５つの対照ウエルでは、１０μＬの連続して希釈したパッカード標準を標準曲線対照ウエルの各々に添加し、その後の各ウエルの最終濃度を２００ｎＭ、１００ｎＭ、５０ｎＭ、２５ｎＭ、および１２．５ｎＭとする。パッカード基質溶液（５０μＬ）を全てのウエルに添加し、その後、被覆し、プレートを約７００ｒｐｍで、適した振盪機上、２分間振盪させる。白色パッカードステッカーを各プレートの底に付着させ、プレートを箔で包み、１０分間暗所に置くことにより試料を暗順応させる。その後、ルミネセンスカウンタ（例えば、パッカードトップカウントマイクロプレートシンチレーションおよびルミネセンスカウンタ（ＰＡＣＫＡＲＤ ＴＯＰＣＯＵＮＴ Ｍｉｃｒｏｐｌａｔｅ Ｓｃｉｎｔｉｌｌａｔｉｏｎ ａｎｄ Ｌｕｍｉｎｅｓｃｅｎｃｅ Ｃｏｕｎｔｅｒ）またはテカンスペクトラフルオアプラス（ＴＥＣＡＮ ＳＰＥＣＴＲＡＦＬＵＯＲ ＰＬＵＳ））を用いて２２℃でルミネセンスを測定し、ＡＴＰレベルを標準曲線から計算する。試験化合物で処置した細胞のＡＴＰレベルを、未処置細胞に対し決定したレベルと比較する。１０μＭの好ましい試験化合物で処置した細胞は未処置細胞の少なくとも８０％、好ましくは少なくとも９０％であるＡＴＰレベルを示す。１００μＭ濃度の試験化合物を使用する場合、好ましい試験化合物で処置した細胞は、未処置細胞で検出されるＡＴＰレベルの少なくとも５０％、好ましくは少なくとも８０％のＡＴＰレベルを示す。
【図面の簡単な説明】
【０１２５】
【図１】ラットにおけるＭＣＨＲ拮抗薬とＣＢ１拮抗薬の同時投与による、過剰摂食量の阻止を示すグラフであり、結果は、ビヒクルのみ、ＣＢ１拮抗薬のみ、ＭＣＨＲ１拮抗薬のみ、または示したような、ＣＢ１拮抗薬とＭＣＲＨ１拮抗薬の組み合わせの投与後１２時間の間の、ｇで表した摂取量として表し、「＊」はＰ＜０．０５を示し、「＊＊」はＰ＜０．００１を示すものである。
【技術分野】
【０００１】
本発明は一般的には、体重管理において使用するための薬学的組成物および治療法に関する。
【背景技術】
【０００２】
肥満は先進国において最も一般的な栄養上の問題である。ある推定におよれば、肥満は合衆国の人口の半分以上に影響し、毎年３００，０００名がこの状態が原因で死亡している。肥満は、しばしば深刻な健康状態、例えば、糖尿病、アテローム性動脈硬化症、肺塞症、冠動脈疾患、高血圧症、脳卒中、糖尿病、睡眠時無呼吸症、深部静脈血栓症、高脂血症およびいくつかの癌、ならびに合併症、多くの慢性状態、例えば呼吸器疾患、変形性関節症、骨粗鬆症、胆嚢疾患および異常脂質血症に至る。幸いにも、肥満により引き起こされるまたは悪化する状態の多くは、減量により解決され、または劇的に改善される。
【０００３】
以前は単なる行動的問題（すなわち、自発的過食症の結果）であると考えられていたが、現在では、肥満は、食物摂取、食物が引き起こすエネルギー消費および脂肪体と徐脂肪体同化の間の均衡の調節不全が関係する複雑な多因子疾患であると認識されている。環境因子および遺伝因子の両方が肥満の発現に重要な役割を果たす。その結果、完全に行動修正に焦点を当てた治療プログラムは制限された効果しか有さず、常習率が９５％を超える。薬物療法が現在では、減量およびその後の体重管理の重要な構成要素であると考えられている。
【０００４】
肥満の原因となる１つのシグナル伝達経路は、メラミン凝集ホルモン（ＭＣＨ）、環状１９アミノ酸視床下部ペプチドにより調節される。ＭＣＨは食物摂取およびエネルギーバランスのレギュレータとして機能し、外側および後部視床下部における神経伝達物質として働く。ＭＣＨ活性は、特定の受容体への結合により媒介され、ＭＣＨ１型（ＭＣＨＲ１）および２型（ＭＣＨＲ２）が識別されている。ＭＣＨＲ１は、コラコウスキー（Ｋｏｌａｋｏｗｓｋｉ）ら（１９９６）ＦＥＢＳ Ｌｅｔｔ．３９８：２５３−５８、ラカエ（Ｌａｋａｙｅ）ら（１９９８）Ｂｉｏｃｈｉｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ａｃｔａ １４０１：２１６−２２０、チャンバース（Ｃｈａｍｂｅｒｓ）ら、ネイチャー（Ｎａｔｕｒｅ）４００；２６１−６５、およびサイトウ（Ｓａｉｔｏ）ら（１９９９）ネイチャー４００：２６５−６９により最初に報告された。ＭＣＨＲ２はアン（Ａｎ）ら（２００１）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ９８：７５７６−７５８１、セイラー（Ｓａｉｌｅｒ）ら（２００１）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ９８：７５６４−７５６９、ヒル（Ｈｉｌｌ）ら（２００１）Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７６：２０１２５−２０１２９、およびモリ（Ｍｏｒｉ）ら（２００１）Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ｒｅｓ．Ｃｏｍｍｕｎ．２８３：１０１３−１０１８により記述されており、ＭＣＨＲ１と３０％を超えるアミノ酸が同一である。ＭＣＨが結合すると、ＭＣＨＲ１およびＭＣＨＲ２は、用量依存的細胞内カルシウム放出を媒介する。抗肥満薬として使用するために、様々なＭＣＨ受容体拮抗薬が報告されており、ＰＣＴ国際公開番号ＷＯ０３／０５９２８９、ＷＯ０３／０６０４７５、ＷＯ０２／０９４７９９およびＷＯ０２／０４４３３において記述されているものが挙げられる。
【０００５】
【特許文献１】国際公開第０３／０５９２８９号パンフレット
【特許文献２】国際公開第０３／０６０４７５号パンフレット
【特許文献３】国際公開第０２／０９４７９９号パンフレット
【特許文献４】国際公開第０２／０４４３３号パンフレット
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００６】
ＭＣＨ受容体拮抗薬は、肥満治療において有望であるが、当技術分野では、食欲を減少させるための、および体重管理のための（例えば、肥満および他の摂食障害を治療および予防するための）改良された薬学的組成物および方法が依然として必要である。本発明はこの要求を満たし、さらに関連する利点を提供する。
【課題を解決するための手段】
【０００７】
本発明は体重管理（例えば、肥満の治療および予防）、食欲減少および摂食障害の治療のために有益な組成物および方法を提供する。
【０００８】
一定の観点では、本明細書で提供した組成物は第１の治療的有効量の少なくとも１つの非毒性ＭＣＨＲ拮抗薬と第２の治療的有効量の少なくとも１つの非毒性ＣＢ１拮抗薬とを、生理学的に許容される担体または賦形剤と共に含む。
【０００９】
パッケージ薬学的調製物もまた提供する。一定のそのようなパッケージ薬学的調製物は（ｉ）少なくとも１つの非毒性ＭＣＨＲ拮抗薬を含む組成物を保持する容器と、（ｉｉ）第１の治療的有効量のＭＣＨＲ拮抗薬を、第２の治療的有効量の非毒性ＣＢ１拮抗薬と同時に患者に投与することを示す使用説明書とを含む。
【００１０】
他のパッケージ薬学的調製物は、（ｉ）少なくとも１つの非毒性ＭＣＨＲ拮抗薬と、（ｉｉ）少なくとも１つの非毒性ＣＢ１拮抗薬と、（ｉｉｉ）第１の治療的有効量のＭＣＨＲ拮抗薬と第２の治療的有効量の非毒性ＣＢ１拮抗薬を、肥満治療のためにまたは食物摂取および/または食欲を減少させるために患者に投与することを示す使用説明書とを含む。
【００１１】
別の観点では、（ｉ）第１の治療的有効量の少なくとも１つの非毒性ＭＣＨＲ拮抗薬と、（ｉｉ）第２の治療的有効量の少なくとも１つの非毒性ＣＢ１拮抗薬を同時に患者に投与する工程を含む、患者における食物摂取および／または食欲を減少させるための方法を提供する。
【００１２】
別の観点では、（ｉ）第１の治療的有効量の少なくとも１つの非毒性ＭＣＨＲ拮抗薬と、（ｉｉ）第２の治療的有効量の少なくとも１つの非毒性ＣＢ１拮抗薬を同時に患者に投与する工程を含む、患者における肥満を治療するための方法を提供する。
【００１３】
本明細書で提供した組成物、パッケージ薬学的調製物および方法の一定の実施形態では、第１の治療的有効量はＭＣＨＲ拮抗薬に対する最大推奨量の１／２未満であり、および／または第２の治療的有効量はＣＢ１拮抗薬に対する最大推奨用量の１／２未満である。
【００１４】
組成物の別の実施形態では、本明細書で提供したパッケージ薬学的調製物および方法では、第１の治療的有効量は、第２の抗肥満薬の同時投与無しで、ＭＣＨＲ拮抗薬の米国臨床試験で有効性が証明されたＭＣＨＲ拮抗薬の最小用量より少なく、および／または第２の治療的有効量は、第２の抗肥満薬の同時投与無しで、ＣＢ１拮抗薬の米国臨床試験で有効性が証明されたＣＢ１拮抗薬の最小用量より少ない。
【００１５】
本明細書で提供したパッケージ薬学的調製物および方法のさらに別の態様では、第１の治療的有効量は、第２の抗肥満薬の同時投与無しで患者に投与するためのＭＣＨＲ拮抗薬の最小市販用量（ｍｉｎｉｍｕｍ ｍａｒｋｅｔｅｄ ｄｏｓｅ）より少なく、および／または第２の治療的有効量は、第２の抗肥満薬の同時投与無しで患者に投与するためのＣＢ１拮抗薬の最小市販用量より少ない。
【００１６】
他の観点では、ＭＣＨＲ拮抗薬とＣＢ１拮抗薬とを含む薬物組成物に対する活性成分を識別するため、または患者に同時投与するための治療薬を選択するための方法もまた提供し、そのような方法は、哺乳類に治療的有効量で同時に投与されると、哺乳類における食物摂取に少なくとも相加効果を示すＭＣＨＲ拮抗薬とＣＢ１拮抗薬を選択する工程を含む。
【００１７】
関連する観点では、本発明は、（ｉ）哺乳類に治療的有効量で同時に投与されると、哺乳類の食物摂取に少なくとも相加効果を示すＭＣＨＲ拮抗薬とＣＢ１拮抗薬を識別（または同定）する工程と、（ｉｉ）第１の治療的有効量のＭＣＨＲ拮抗薬と第２の治療的有効量のＣＢ１拮抗薬とを生理学的に許容される担体または賦形剤と組み合わせる工程と、を含む、薬学的組成物を調製するための方法を提供する。
【００１８】
本明細書では、（ｉ）哺乳類に治療的有効量で同時に投与されると、哺乳類の食物摂取に少なくとも相加効果を有するＭＣＨＲ拮抗薬とＣＢ１拮抗薬を識別（または同定）する工程と、（ｉｉ）ＭＣＨＲ拮抗薬とＣＢ１拮抗薬とを、第１の治療的有効量のＭＣＨＲ拮抗薬と第２の治療的有効量のＣＢ１拮抗薬を、食物摂取または食欲を減少させるため、または肥満治療のために、患者に同時に投与することを示した使用説明書と共にパッケージする工程と、を含む、パッケージ薬学的調製物を調製するための方法も提供する。
【００１９】
（ｉ）第１の治療的有効量のＭＣＨＲ拮抗薬を用い、ＣＢ１拮抗薬の同時投与無しで処置した哺乳類における食物摂取に対するＭＣＨＲ拮抗薬の効果を決定する工程と、（ｉｉ）第２の治療的有効量のＣＢ１拮抗薬を用いて、ＭＣＨＲ拮抗薬の同時投与無しで処置した哺乳類における食物摂取に対するＣＢ１拮抗薬の効果を決定する工程と、（ｉｉｉ）第１の治療的有効量のＭＣＨＲ拮抗薬と第２の治療的有効量のＣＢ１拮抗薬により同時に処置した哺乳類における食物摂取に対するＭＣＨＲ拮抗薬とＣＢ１拮抗薬の効果を決定する工程と、（ｉｖ）必要に応じて、異なるＭＣＨＲ拮抗薬またはＣＢ１拮抗薬を用いて（ｉ）〜（ｉｉｉ）の工程を繰り返す工程と、（ｖ）工程（ｉｉｉ）で決定した食物摂取に対する効果が、工程（ｉ）および（ｉｉ）で決定した食物摂取に対する効果の和と等しい、またはそれ以上であるＭＣＨＲ拮抗薬とＣＢ１拮抗薬を選択する工程と、を含む、ＭＣＨＲ拮抗薬とＣＢ１拮抗薬とを含む薬学的組成物に対する活性成分を識別するための方法をさらに提供する。
【００２０】
別の観点では、（ａ）ＣＢ１を含む第１の細胞膜調製物を、（ｉ）標識ＧＴＰと、（ｉｉ）ＣＢ１作用薬と、（ｉｉｉ）試験化合物とに接触させ、試験膜調製物を獲得する工程と、（ｂ）ＣＢ１を含む第２の細胞膜調製物を（ｉ）標識ＧＴＰと、（ｉｉ）ＣＢ１作用薬とに接触させ、対照膜調製物を獲得する工程とを含み、工程（ａ）および（ｂ）は、同時にまたはいずれかの順で、ＧＴＰがＣＢ１に結合するのに適した条件下で実施し、さらに（ｃ）同時にまたはいずれかの順で、（ｉ）試験膜調製物中の結合した標識ＧＴＰ量を示す試験シグナルと、（ｉｉ）対照膜調製物中の結合した標識ＧＴＰの量を示す対照シグナルと、を検出する工程と、（ｄ）試験シグナルを対照シグナルと比較する工程とを含む、試験化合物のＣＢ１拮抗薬活性を決定するための方法をさらに提供する。そのような方法を使用して、新規ＣＢ１拮抗薬を識別（または同定）し、公知のＣＢ１拮抗薬の活性のキャラクタリゼーションを実施してもよい。
【００２１】
本発明のこれらのおよび他の観点は、下記の詳細な説明を参照すれば明らかになると思われる。
【発明を実施するための最良の形態】
【００２２】
上記のように、本発明は食欲減少および体重管理のための併用療法を提供する。ある観点では、本発明は肥満を予防または治療するため、および／または食欲または食物摂取を減少させるための組成物および方法を提供する。そのような組成物および方法を使用して、肥満になる危険のある（例えば、以前は肥満患者）非肥満患者における肥満の発現を予防してもよく、または肥満患者の体重減少を促進してもよい。本明細書で提供した一定の組成物は、非毒性ＭＣＨＲ拮抗薬と非毒性ＣＢ１拮抗薬とを、生理学的に許容される担体または賦形剤と共に含む。本明細書で提供した方法は一般に、治療的有効量のＭＣＨＲ拮抗薬とＣＢ１拮抗薬とを患者に同時投与する工程を含む。
【００２３】
〈専門用語〉
「患者」という用語は、本明細書で記述されるように、治療を受ける、または治療が考えられる任意の個人である。患者にはヒト、ならびに他の哺乳類、例えば、コンパニオンアニマル（ｃｏｍｐａｎｉｏｎ ａｎｉｍａｌ）および家畜（ｌｉｖｅｓｔｏｃｋ）が含まれ、一般に肥満であるか、肥満になる危険性がある。
【００２４】
本明細書で使用されるように、患者は、肥満度指数が２８を超えると「肥満」と考えられる。肥満度指数（ＢＭＩ）は下記式を用いて容易に計算することができる：
ＢＭＩ＝（体重ｋｇ）／（身長ｍ）２
【００２５】
患者が、肥満の可能性を増加させる１つまたは複数の危険因子を有する場合、患者は「肥満になる危険がある」と考えられる。そのような危険因子としては、以前の肥満症、家族性の肥満症、および体重増加を促進する副作用のある薬剤による治療が挙げられる。
【００２６】
「ＭＣＨ受容体」または「ＭＣＨＲ」という用語は、上記で記述したように、天然の哺乳類（例えば、ヒト、イヌ、ネコまたはサル）のＭＣＨ１型または２型受容体、例えばＭＣＨＲ１およびＭＣＨＲ２を示す。ＰＣＴ国際出願公開番号第ＷＯ０３／０６０４７５号の配列番号１および２は、それぞれ、カニクイザル・マカク（Ｃｙｎｏｍｏｌｇｕｓ ｍａｃａｑｕｅ）ＭＣＨＲ１のＤＮＡおよびアミノ酸配列を示す。
【００２７】
「ＭＣＨ受容体拮抗薬」または「ＭＣＨＲ拮抗薬」は、ＭＣＨ受容体−媒介シグナル伝達を検出可能なほど（ｄｅｔｅｃｔａｂｌｙ）阻害する化合物である。そのような阻害は、実施例３で示した代表的な機能アッセイ法を用いて、またはＭＣＨが１つまたは複数のＭＣＨ受容体に結合するのを阻害する化合物の能力を検出するアッセイ法、例えば、実施例２で示したアッセイ法を用いて決定してもよい。「ＭＣＨＲ拮抗薬」という用語は中性（ｎｅｕｔｒａｌ）拮抗薬および逆作用薬を含む。本明細書で記述したように使用するためのＭＣＨＲ拮抗薬は一般に非毒性である。ある実施形態では、ＭＣＨＲ拮抗薬はかなり低い分子量（例えば、７００ａｍｕ未満）を有し、マルチアリール（すなわち、複数の非縮合または縮合アリール基を有する）であり、アミノ酸を有さない（例えば、ペプチドではない）。好ましいＭＣＨＲ拮抗薬は特異的に、高い親和性で１つまたは複数のＭＣＨ受容体と結合する。
【００２８】
「逆作用薬」は、ＭＣＨ受容体の活性を減少させ、添加したリガンドがない場合の基本的な活性レベルより低くする化合物である。逆作用薬はまた、ＭＣＨ受容体でＭＣＨの活性を阻害してもよく、および／またはＭＣＨのＭＣＨ受容体への結合を阻害してもよい。ＭＣＨがＭＣＨ受容体に結合するのを阻害する化合物の能力は、結合アッセイ法、例えば実施例２で示した結合アッセイ法により測定してもよい。ＭＣＨ受容体の基本活性、ならびに拮抗薬の存在によるＭＣＨ受容体活性の減少は、カルシウム移動（ｍｏｂｉｌｉｚａｔｉｏｎ）アッセイ法、例えば実施例３のアッセイ法により決定してもよい。
【００２９】
ＭＣＨ受容体の「中性拮抗薬」は、ＭＣＨ受容体でのＭＣＨの活性を阻害するが、受容体の基本活性には有意の変化を与えない（例えば、リガンド無しで実施した実施例３で記述したアッセイ法では、ＭＣＨ受容体活性は、わずか１０％しか、より好ましくは５％しか、さらにより好ましくは２％しか減少せず、最も好ましくは、活性の検出可能な減少はない）化合物である。中性拮抗薬はまた、リガンドのＭＣＨ受容体へのリガンド結合を阻害してもよい。
【００３０】
ＭＣＨＲ拮抗薬が、他のＧ蛋白質結合受容体（例えば、神経ペプチドＹ、ドーパミンおよびβ−アドレナリン受容体）に対する結合で測定されるＫｉよりも、１０倍、好ましくは１００倍、より好ましくは１０００倍低いＫｉでＭＣＨ受容体に結合する場合（総結合−非特異的結合）、ＭＣＨＲ拮抗薬は「特異的に」ＭＣＨ受容体に結合する。
【００３１】
ＭＣＨＲ拮抗薬は、ＭＣＨ受容体でのＫｉが１μＭ未満、好ましくは５００ｎＭ、１００ｎＭまたは１０ｎＭ未満である場合、「高い親和性で」結合する。ＭＣＨＲ拮抗薬は好ましくは、最小の作用薬活性を有する（すなわち、誘導するＭＣＨ受容体の基本活性の増加が、ＭＣＨの１つのＥＣ５０により誘導される増加の５％未満であり、より好ましくは実施例３で記述したアッセイ法では検出可能な作用薬活性を有さない）。ＭＣＨＲ拮抗薬は特別なＭＣＨ受容体（例えば、１型または２型）に対し特異的であってもよく、または複数のＭＣＨ受容体において機能してもよい。一定の実施形態では、本発明で使用するＭＣＨＲ拮抗薬はＭＣＨＲ１拮抗薬である。
【００３２】
「ＣＢ１拮抗薬」は、カンナビノイド受容体ＣＢ１により媒介されるシグナル伝達を検出できるほど阻害する化合物である。そのような阻害は、実施例８で提供した代表的な作用薬誘導ＧＴＰ結合アッセイ法を用いて、またはＣＢ１へのリガンドの結合を阻害する化合物の能力を検出するアッセイ法、例えば実施例７で提供したアッセイ法により決定してもよい。「ＣＢ１拮抗薬」という用語は、中性拮抗薬、逆作用薬および部分作用薬を含む。中性拮抗薬であるＣＢ１拮抗薬は、作用薬刺激ＧＴＰ結合活性を減少させるが、結合活性はベースライン（このアッセイ法において、添加した作用薬無しで膜が結合するＧＴＰのレベル）より低くはならない。逆作用薬であるＣＢ１拮抗薬は、添加した作用薬無しで、受容体含有膜のＧＴＰ結合活性を減少させベースラインより低くする。添加したＣＰ５５，９４０無しでベースラインよりＧＴＰ結合活性を上昇させるＣＢ１拮抗薬は部分作用薬活性を有すると特徴づけられる。
【００３３】
好ましいＣＢ１拮抗薬は１μＭまたはそれ以下のＫｉでＣＢ１に結合する。Ｋｉは本明細書で、実施例７において記述されているように決定されてもよく、またはフェルダー（Ｆｅｌｄｅｒ）ら（１９９８）Ｊ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ Ｅｘｐ． Ｔｈｅｒ．２８４：２９１−２９７により記述されているように実施されるアッセイ法で決定されてもよい。ある実施形態では、ＣＢ１拮抗薬はＣＢ１に対し特異的である（すなわち、主な末梢性カンナビノイド受容体ＣＢ２でのＫｉ値が１μＭを超え、および／またはＫｉ比（ＣＢ２／ＣＢ１）が少なくとも１００、好ましくは少なくとも１０００である）。ＣＢ１拮抗薬に対するＩＣ５０は好ましくは、本明細書の実施例８で記述したように実施した機能アッセイ法、またはフェルダー（Ｆｅｌｄｅｒ）らにより記述されているアッセイ法では、１μＭまたはそれ以下である。ＣＢ１拮抗薬は好ましくは最小作用薬活性を有する（すなわち、誘導するＣＢ１の基本活性の増加は、作用薬ＣＰ５５，９４０の１つのＥＣ５０により誘導される増加の１０％未満、好ましくは５％未満およびより好ましくは２％未満であり、より好ましくは、実施例８で記述したアッセイ法では検出可能な作用薬活性を有さない）。本明細書で記述したように使用するためのＣＢ１拮抗薬は一般に非毒性である。
【００３４】
本明細書で使用されるように「非毒性」という用語は、相対的な意味で理解され、哺乳類（好ましくはヒト）への投与に対し合衆国食品医薬品局（ＦＤＡ）により認可されており、または、確立された基準に沿い、ＦＤＡにより哺乳類（好ましくはヒト）への投与の認可を受けることができる任意の物質を示すものである。さらに、非常に好ましい非毒性化合物は一般に、下記の基準の１つまたは複数を満たす：（１）実質的に細胞ＡＴＰ産生を阻害しない、（２）実質的に心臓ＱＴ間隔を延長しない、（３）実質的な肝肥大を引き起こさない、または（４）肝酵素の実質的な放出を引き起こさない。
【００３５】
本明細書で使用されるように、細胞ＡＴＰ産生を実質的に阻害しない化合物は、本明細書の実施例９で記述した基準を満たす化合物である。言い換えれば、１００μＭのそのような化合物により実施例９で記述したように処置した細胞は、未処置細胞で検出されたＡＴＰレベルの少なくとも５０％であるＡＴＰレベルを示す。より好ましい実施形態では、そのような細胞は、未処置細胞で検出されるＡＴＰレベルの少なくとも８０％であるＡＴＰレベルを示す。
【００３６】
心臓ＱＴ間隔が有意なほど延長されない化合物は、治療的有効量のインビボ濃度が得られる最小用量の２倍投与で、モルモット、ミニブタまたはイヌにおいて（心電図記録により決定される）心臓ＱＴ間隔の統計学的に有意の延長が見られない化合物である。ある好ましい態様では、非経口で、または経口で投与された０．０１、０．０５、０．１、０．５、１、５、１０、４０または５０ｍｇ／ｋｇの用量では、統計学的に有意な心臓ＱＴ間隔の延長は得られない。「統計学的に有意」という用語は、スチューデントＴ試験などの統計学的有意性の標準パラメータアッセイ法を用いて測定すると、ｐ＜０．１レベル、より好ましくはｐ＜０．０５レベルの有意性で対照から変動する結果を意味する。
【００３７】
研究室用齧歯類（例えば、マウスまたはラット）に、治療的に有効なインビボ（ｉｎ ｖｏｖｏ）濃度が得られる最小用量の２倍で５〜１０日間毎日処置しても、対応対照に比べ、体重に対する肝臓の比率の増加が１００％にすぎない場合、化合物は実質的に肝肥大を引き起こさない。より好ましい実施形態では、そのような用量では、対応対照に比べ、７５％または５０％を超える肝肥大は起こらない。非齧歯類哺乳類（例えば、イヌ）を使用する場合、そのような用量では、肝臓対体重比の増加は、対応未処置対照に比べ、５０％以下、好ましくは２５％以下、より好ましくは１０％以下の増加となるべきである。そのようなアッセイ法では好ましい用量としては、非経口または経口投与で０．０１、０．０５、０．１、０．５、１、５、１０、４０または５０ｍｇ／ｋｇが挙げられる。
【００３８】
同様に、治療的に有効なインビボ濃度が得られる最小用量の２倍を投与しても、研究室用齧歯類のＡＬＴ、ＬＤＨまたはＡＳＴの血清レベルの増加が対応するニセ処置対照に比べ１００％にすぎなければ、化合物は肝酵素の実質的な放出を促進しない。より好ましい実施形態では、そのような用量では、そのような血清レベルは、対応対照に比べ７５％以下または５０％以下しか上昇しない。また、インビトロ肝細胞アッセイ法では、化合物の最小インビボ治療濃度の２倍に等しい濃度（インビトロ（ｉｎ ｖｉｔｒｏ）で肝細胞と接触させ、インキュベートさせた培地または他のそのような溶液中）では、対応するニセ処置対照細胞由来の培地で見られるベースラインレベルを超える、そのような肝酵素のいずれの培地中への放出も検出されない。より好ましい実施形態では、そのような化合物濃度が、化合物の最小インビボ治療濃度の５倍、好ましくは１０倍である場合、ベースラインレベルを超える、そのような肝酵素のいずれの培地中への放出も検出されない。
【００３９】
「プロドラッグ」はＭＣＨ受容体拮抗薬またはＣＢ１拮抗薬でなくてもよいが、患者に投与された後、インビボで修飾され、そのような拮抗薬を生成する化合物である。例えば、プロドラッグはＭＣＨＲ拮抗薬またはＣＢ１拮抗薬のアシル化誘導体としてもよい。プロドラッグは、ヒドロキシ、アミンまたはスルフヒドリル基が任意の官能基に結合されており、哺乳類被験者に投与されると、開裂してそれぞれ、遊離ヒドロキシル、アミノまたはスルフヒドリル基が形成する化合物を含む。プロドラッグの例としては、ＭＣＨＲ拮抗薬またはＣＢ１拮抗薬中のアルコールおよびアミン官能基の酢酸、ギ酸、リン酸および安息香酸誘導体が挙げられるが、それらに限定されない。
【００４０】
〈ＭＣＨ受容体拮抗薬〉
上記のように、本発明は体重管理のために有益な組成物および方法を提供する。本明細書で提供する組成物は一般に、上記のように非毒性ＭＣＨＲ拮抗薬を含む。好ましくは、本明細書で使用するためのＭＣＨＲ拮抗薬は、（標準インビトロＭＣＨ受容体リガンド結合アッセイ法および／またはカルシウム移動アッセイ法を用いて決定されるように）、サブμＭ以下の濃度で、好ましくはｎＭ濃度で、より好ましくはサブｎＭ以下の濃度で、ＭＣＨがＭＣＨＲ１および／またはＭＣＨＲ２に結合するのを検出可能な程阻害する。ある好ましい実施形態では、本明細書で使用するためのＭＣＨＲ拮抗薬は、検出可能な程、ＭＣＨのＭＣＨＲ１への結合を阻害する。本明細書において「ＭＣＨ受容体リガンド結合アッセイ法」というと、実施例２で示した標準インビトロ受容体結合アッセイ法を示す。簡単に言うと、ＭＣＨ受容体調製物を標識（例えば、１２５Ｉ）ＭＣＨおよび非標識試験化合物と共にインキュベートする競合アッセイ法を実施する。本明細書で提供したアッセイ法では、使用したＭＣＨ受容体は好ましくは哺乳類ＭＣＨＲ１またはＭＣＨＲ２、より好ましくはヒトまたはサルＭＣＨＲ１またはＭＣＨＲ２である。ＭＣＨ受容体調製物は、例えば、組換えによりヒトＭＣＨ受容体（例えば、ジェンバンク アクセッション番号Ｚ８６０９０）、サルＭＣＨＲ１（例えば、ＷＯ０３／０６０４７５の配列番号１で提供されるＭＣＨＲ１配列）、またはヒトＭＣＨＲ１／ヒトβ−２−アドレナリンキメラ受容体を発現するＨＥＫ２９３細胞由来の膜調製物としてもよい。
【００４１】
実施例２で記述したようにＭＣＨＲ拮抗薬とインキュベートすると、拮抗薬無しで結合した標識の量に比べ、ＭＣＨ受容体調製物に結合した標識の量が減少する。好ましくは、ＭＣＨＲ拮抗薬はＭＣＨ受容体で、１μＭ未満のＫｉを示し、ＭＣＨ受容体に特異的に、高い親和性で結合する。より好ましくは、そのような化合物は、実施例２で記述したＭＣＨ受容体リガンド結合アッセイ法において、ＭＣＨ受容体で５００ｎＭ、１００ｎＭ、２０ｎＭまたは１０ｎＭ未満のＫｉを示す。
【００４２】
代表的なカルシウム移動アッセイ法を実施例３に示す。好ましいＭＣＨＲ拮抗薬は、実施例３で示した標準インビトロＭＣＨ受容体媒介カルシウム移動アッセイ法において、１μＭまたはそれ以下、より好ましくは１００ｎＭまたはそれ以下、１０ｎＭまたはそれ以下、または１ｎＭまたはそれ以下のＩＣ５０値を示す。
【００４３】
ある実施形態では、ＭＣＨＲ拮抗薬は、係属中の米国特許出願第１０／１５２，１８９号で記述されているような、置換１−ベンジル−４−アリールピペラジンおよびピペリジン類似体を含む。２００２年１１月２８日にＷＯ０２／０９４７９９として公開された対応するＰＣＴ出願の開示内容は、ＭＣＨＲ拮抗薬の教示（３〜５ページ、２０〜２５ページおよび７４〜１０７ページ）およびその調製（２９〜４２ページおよび５０〜７３ページ）について、参照により本明細書に組み入れられる。本明細書で記述したあるＭＣＨＲ拮抗薬は下記化学式を満たし：
または、それらの薬学的に許容される塩であり、式において、
Ｖは結合または−（Ｃ＝Ｏ）−であり、
Ｗは窒素、ＣＨ、ＣＯＨまたはＣＣＮであり、
Ｘはハロゲン、ヒドロキシ、ニトロ、シアノ、−ＣＯＯＨ、オキソおよび化学式Ｌ−Ｍの基であり、
ＹおよびＺはそれぞれ独立して（ｉ）ＣＨ、（ｉｉ）窒素であり、または（ｉｉｉ）Ｒ５と一緒になり、ＷおよびＶを含み、５〜８の環員を有する炭素環または複素環を形成し、ただし、ＹおよびＺはどちらも窒素ではないことを条件とし、
ｎは１または２であり
Ｒ１およびＲ２はそれぞれ独立して、水素、ハロゲン、ヒドロキシ、ニトロ、シアノ、オキソ、−ＣＯＯＨおよび化学式Ｌ−Ｍの基から選択され、
Ｒ３は（ｉ）水素、（Ｃ１〜Ｃ６）アルキル、（Ｃ２〜Ｃ６）アルケニルおよびハロ（Ｃ１〜Ｃ６）アルキルから選択され、または（ｉｉ）Ｒ６およびＲ１０のうちの１つまたは両方と一緒になり、１つの環または２つの縮合環を有する炭素環または複素環基を形成し、ここで各環は５〜８環員および酸素、窒素および硫黄から独立して選択される０、１または２のヘテロ原子を含み、
Ｒ４は水素、（Ｃ１〜Ｃ６）アルキルまたはハロ（Ｃ１〜Ｃ６）アルキルであり、
Ｒ５は（ｉ）各事象で、水素、ハロゲン、ヒドロキシ、ニトロ、シアノ、アミノ、オキソ、（Ｃ１〜Ｃ６）アルキル、（Ｃ２〜Ｃ６）アルケニル、（Ｃ２〜Ｃ６）アルキニル、（Ｃ１〜Ｃ６）アルコキシ、ハロ（Ｃ１〜Ｃ６）アルキル、ハロ（Ｃ１〜Ｃ６）アルコキシ、モノおよびジ（Ｃ１〜Ｃ６）アルキルアミノ、およびアミノ（Ｃ１〜Ｃ６）アルキルから独立して選択され、または（ｉｉ）Ｒ６、ＹまたはＺと一緒になり、５〜８の環員を有する炭素環または複素環を形成し、
Ｒ６は（ｉ）水素、ハロゲン、ヒドロキシ、ニトロ、シアノ、アミノ、オキソ、（Ｃ１〜Ｃ６）アルキル、（Ｃ２〜Ｃ６）アルケニル、（Ｃ２〜Ｃ６）アルキニル、（Ｃ１〜Ｃ６）アルコキシ、ハロ（Ｃ１〜Ｃ６）アルキル、ハロ（Ｃ１〜Ｃ６）アルコキシ、モノおよびジ（Ｃ１〜Ｃ６）アルキルアミノ、およびアミノ（Ｃ１〜Ｃ６）アルキルから選択され、または（ｉｉ）Ｒ３またはＲ５と一緒になり、上記のように炭素環または複素環を形成し、
Ｒ７は（ｉ）水素、ハロゲン、ヒドロキシ、ニトロ、シアノ、−ＣＯＯＨ、オキソおよび化学式Ｌ−Ｍの基から選択され、または（ｉｉ）Ｒ８またはＲ１２と一緒になり、縮合５−または６−員炭素環または複素環基を形成し、
Ｒ８は（ｉ）水素、ハロゲン、ヒドロキシ、ニトロ、シアノ、−ＣＯＯＨ、オキソおよび化学式Ｌ−Ｍの基から選択され、または（ｉｉ）Ｒ７またはＲ１１と一緒になり、縮合５−〜１０−員炭素環または複素環基を形成し、
ＵはＮ、ＯまたはＣＲ９であり、
ＴはＮ、ＯまたはＣＲ１０であり、
Ｒ９は（ｉ）水素、ハロゲン、ヒドロキシ、ニトロ、シアノ、−ＣＯＯＨ、オキソおよび化学式Ｌ−Ｍの基から選択され、または（ｉｉ）Ｒ１０またはＲ１１と一緒になり、縮合５−〜１０−員炭素環または複素環基を形成し、
Ｒ１０は（ｉ）水素、ハロゲン、ヒドロキシ、ニトロ、シアノ、−ＣＯＯＨ、オキソおよび化学式Ｌ−Ｍの基から選択され、または（ｉｉ）Ｒ３、Ｒ８またはＲ９と一緒になり、炭素環または複素環基を形成し、
Ｒ１１は（ｉ）水素、ハロゲン、ヒドロキシ、ニトロ、シアノ、−ＣＯＯＨ、オキソおよび化学式Ｌ−Ｍの基から選択され、または（ｉｉ）Ｒ８またはＲ９のうちの１つまたは両方と一緒になり、縮合５−〜１０−員炭素環または複素環基を形成し、
Ｒ１２は（ｉ）各事象で、水素、ハロゲン、ヒドロキシ、ニトロ、シアノ、アミノ、オキソ、（Ｃ１〜Ｃ６）アルキル、（Ｃ２〜Ｃ６）アルケニル、（Ｃ２〜Ｃ６）アルキニル、（Ｃ１〜Ｃ６）アルコキシ、ハロ（Ｃ１〜Ｃ６）アルキル、ハロ（Ｃ１〜Ｃ６）アルコキシ、モノおよびジ（Ｃ１〜Ｃ６）アルキルアミノ、およびアミノ（Ｃ１〜Ｃ６）アルキルから独立して選択され、または（ｉｉ）Ｒ７と一緒になり、縮合炭素環または複素環を形成し、
Ｌは各事象で、結合、ＮＲ１３、Ｏ、ＳＯ２，ＳＯ２ＮＨ、Ｃ（＝Ｏ）ＮＲ１３およびＮＲ１３Ｃ（＝Ｏ）から独立して選択され、ここで、Ｒ１３は各事象で、水素、（Ｃ１〜Ｃ６）アルキル、（Ｃ２〜Ｃ６）アルケニル、（Ｃ２〜Ｃ６）アルキニル、およびハロ（Ｃ１〜Ｃ６）アルキルから独立して選択され、
Ｍは各事象で、水素、（Ｃ１〜Ｃ６）アルキル、（Ｃ２〜Ｃ６）アルケニル、（Ｃ２〜Ｃ６）アルキニル、ハロ（Ｃ１〜Ｃ６）アルキル、アミノ（Ｃ１〜Ｃ６）アルキルおよび５〜１０員炭素環から独立して選択される。
【００４４】
上記化学式を満たす代表的なＭＣＨＲ拮抗薬としては、例えば下記が挙げられる：１−（４−ブロモ−３−メトキシフェニル）−４−（３，４−ジメトキシベンジル）ピペラジン、１−（４−ブロモ−３−メトキシフェニル）−４−（４−クロロベンジル）ピペラジン、１−［４−クロロ−３−（トリフルオロメチル）フェニル］−４−（３，４−ジメトキシベンジル）ピペラジン、１−（３，４−ジクロロフェニル）−４−（３，４−ジメトキシベンジル）ピペラジン、１−（４−ブロモ−３−メトキシフェニル）−４−（４−メトキシ−２，５−ジメチルベンジル）ピペラジン、１−（４−ブロモ−３−メトキシフェニル）−４−（４−メトキシ−２，３−ジメチルベンジル）ピペラジン、１−（３−ブロモ−４−メトキシ−ベンジル）−４−（４−ブロモ−３−メトキシフェニル）ピペラジン、４−｛［４−（４−ブロモ−３−メトキシ−フェニル）ピペラジン−１−イル］メチル｝−２−メトキシフェノール、４−（｛４−［４−クロロ−３−（トリフルオロメチル）フェニル］−ピペラジン−１−イル｝メチル）−２−メトキシフェノール、１−［４−クロロ−３−（トリフルオロメチル）フェニル］−４−（４−メトキシ−２，３−ジメチルベンジル）ピペラジン、１−（３−ブロモ−４−メトキシベンジル）−４−［４−クロロ−３−（トリフルオロメチル）フェニル］ピペラジン、１−（４−ブロモ−３−メトキシフェニル）−４−（４−メトキシ−３−メチルベンジル）ピペラジン、１−［４−クロロ−３−（トリフルオロメチル）フェニル］−４−（４−メトキシ−３−メチルベンジル）ピペラジン、１−（４−クロロ−３−トリフルオロメトキシフェニル）−４−［１−（３，４−ジメトキシ−ベンジル）］−２−メチル−ピペラジン、４−（４−クロロ−３−トリフルオロメチル−フェニル）−１−（３，４−ジメトキシ−ベンジル）−２−メチル−ピペラジン、４−（４−クロロ−３−メトキシ−フェニル）−１−（３，４−ジメトキシ−ベンジル）−２−メチル−ピペラジン、４−（４−クロロ−３−メトキシ−フェニル）−［１−（３，４−ジメトキシ−ベンジル）−エチル］−２−メチル−ピペラジン、３−｛［４−（４−ブロモ−３−メトキシフェニル）ピペラジン−１−イル］メチル｝−９−エチル−９Ｈ−カルバゾール、１−（５−ブロモ−６−メトキシピリジン−２−イル）−４−（３，４−ジメトキシベンジル）ピペラジン、１−（５−ブロモ−６−メトキシピリジン−２−イル）−４−（４−クロロベンジル）ピペラジン、１−（５−ブロモ−６−メトキシピリジン−２−イル）−４−（４−メトキシ−２，５−ジメチルベンジル）ピペラジン、１−（５−ブロモ−６−メトキシピリジン−２−イル）−４−（４−メトキシ−２，３−ジメチルベンジル）ピペラジン、１−（３−ブロモ−４−メトキシベンジル）−４−（５−ブロモ−６−メトキシピリジン−２−イル）ピペラジン、４−（５−ブロモ−６−メトキシピリジン−２−イル）−１−（３，４−ジメトキシ−ベンジル）−２−メチルピペラジン、４−（５−ブロモ−６−メトキシピリジン−２−イル）−１−（３，４−ジメトキシ−ベンジル）−２−メチルピペラジン、１−（５−ブロモ−６−メトキシピリジン−２−イル）−４−（４−メトキシ−３−メチルベンジル）ピペラジン、３−｛［４−（５−ブロモ−６−メトキシピリジン−２−イル）ピペラジン−１−イル］メチル｝−９−エチル−９Ｈ−カルバゾール、４−｛［４−（５−ブロモ−６−メトキシピリジン−２−イル）ピペラジン−１−イル］メチル｝−２−メトキシフェノール、１−（４−ブロモ−３−メトキシフェニル）−４−（３，４−ジメトキシベンジル）−１，４−ジアゼパン、１−（４−ブロモ−３−メトキシフェニル）−４−［１−（３，４−ジメトキシフェニル）−エチル］ピペラジン、１−［４−クロロ−３−（トリフルオロメチル）フェニル］−４−［１−（３，４−ジメトキシフェニル）エチル］ピペラジン、１−（４−ブロモ−３−メトキシフェニル）−４−［１−（４−メトキシフェニル）エチル］ピペラジン、１−（４−クロロ−３−メトキシフェニル）−４−［１−（３，４−ジメトキシフェニル）エチル］ピペラジン、１−（４−ブロモ−３−メトキシフェニル）−４−［１−（３，４−ジフルオロフェニル）エチル］ピペラジン、４−｛１−［４−（４−ブロモ−３−メトキシフェニル）ピペラジン−１−イル］エチル｝−２−メチルフェノール、１−（４−ブロモ−３−メトキシフェニル）−４−［１−（４−フルオロ−３−メトキシフェニル）−エチル］ピペラジン、１−（４−クロロ−３−メトキシフェニル）−４−［１−（３，４−ジメトキシフェニル）エチル］ピペラジン、１−（４−クロロ−３−メトキシフェニル）−４−［１−（３，４−ジメトキシフェニル）エチル］ピペラジン、１−（４−ブロモ−３−トリフルオロメトキシフェニル）−４−［１−（３−フルオロ−４−メトキシフェニル）エチル］ピペラジン、１−（４−ブロモ−３−トリフルオロメトキシフェニル）−４−［１−（３−フルオロ−４−メトキシフェニル）エチル］ピペラジン、１−（４−ブロモ−３−トリフルオロメチルフェニル）−４−［１−（３−フルオロ−４−メトキシフェニル）エチル］ピペラジン、１−（４−メトキシ−フェニル）−４−［１−（３，４−ジメトキシフェニル）エチル］ピペラジン、１−（４−メトキシ−フェニル）−４−［１−（３，４−ジメトキシフェニル）エチル］ピペラジン、１−（４−ブロモ−３−メトキシ−フェニル）−４−［１−（４−クロロ−フェニル）−エチル］−ピペラジン、１−（４−クロロ−３−メトキシ−フェニル）−４−［１−（４−メトキシ−２，３−ジメチル−フェニル）−エチル］−ピペラジン、１−（４−クロロ−３−メトキシ−フェニル）−４−［１−（４−クロロ−３−メトキシ−フェニル）−エチル］−ピペラジン、１−（４−ブロモ−３−メトキシ−フェニル）−４−［１−（４−メトキシ−２，５−ジメチル−フェニル）−エチル］−ピペラジン、１−（４−フルオロ−３−トリフルオロメチル−フェニル）−４−［１−（３，４−ジメトキシ−フェニル）−エチル］−ピペラジン、１−（４−ブロモ−３−メトキシ−フェニル）−４−［１−（３，４−ジメトキシ−フェニル）−エチル］−ピペラジン、１−（４−クロロ−３−トリフルオロメチル−フェニル）−４−［１−（３，４−ジメトキシ−フェニル）−エチル］−ピペラジン、１−（４−ブロモ−３−メトキシ−フェニル）−４−［１−（４−エトキシ−３−メトキシ−フェニル）−エチル］−ピペラジン、１−（４−クロロ−３−メトキシ−フェニル）−４−［１−（４−フルオロ−３−メトキシ−フェニル）−エチル］−ピペラジン、１−（４−ブロモ−３−メトキシ−フェニル）−４−［１−（２，４，５−トリメチル−フェニル）−エチル］−ピペラジン、１−（４−ブロモ−３−メトキシ−フェニル）−４−［１−（３−フルオロ−４−メトキシ−フェニル）−エチル］−ピペラジン、１−（４−クロロ−３−トリフルオロメチル−フェニル）−４−［１−（４−メトキシ−２，３−ジメチル−フェニル）−エチル］−ピペラジン、１−（４−フルオロ−３−メトキシ−フェニル）−４−［１−（３，４−ジメトキシ−フェニル）−エチル］−ピペラジン、１−（４−クロロ−３−トリフルオロメチル−フェニル）−４−［１−（４−クロロ−３−メトキシ−フェニル）−エチル］−ピペラジン、１−（４−クロロ−３−トリフルオロメチル−フェニル）−４−［１−（４−メトキシ−３−メチル−フェニル）−エチル］−ピペラジン、１−（４−ブロモ−３−メトキシ−フェニル）−４−［１−（３−メトキシ−フェニル）−エチル］−ピペラジン、１−（４−ブロモ−３−メトキシ−フェニル）−４−［１−（４−トリフルオロメチル−フェニル）−エチル］−ピペラジン、４−（４−フルオロ−３−トリフルオロメチル−フェニル）−１−［１−（３，４−ジメトキシ−フェニル）−エチル］−ピペラジン、１−（４−クロロ−３−メトキシ−フェニル）−４−［１−（３−フルオロ−４−メトキシ−フェニル）−エチル］−ピペラジン、１−（４−ブロモ−３−メトキシ−フェニル）−４−［１−（３−エトキシ−フェニル）−エチル］−ピペラジン、１−（５−｛１−［４−（４−ブロモ−３−メトキシ−フェニル）−ピペラジン−１−イル］−エチル｝−２−フルオロ−フェニル）−エタノン、１−（４−クロロ−３−メチル−フェニル）−４−［１−（４−メトキシ−３−メチル−フェニル）−エチル］−ピペラジン、１−（４−ブロモ−３−メトキシ−フェニル）−４−［１−（３，５−ジメトキシ−フェニル）−エチル］−ピペラジン、１−（４−メトキシ−３−メチル−フェニル）−４−［１−（４−メトキシ−２，３−ジメチル−フェニル）−エチル］−ピペラジン、１−（４−クロロ−３−メチル−フェニル）−４−［１−（３，４−ジメトキシ−フェニル）−エチル］−ピペラジン、１−（４−ブロモ−３−メトキシ−フェニル）−４−［１−（３，４−ジエトキシ−フェニル）−エチル］−ピペラジン、１−（４−クロロ−３−フルオロ−フェニル）−４−［１−（４−メトキシ−２，３−ジメチル−フェニル）−エチル］−ピペラジン、１−（４−クロロ−３−メチル−フェニル）−４−［１−（４−メトキシ−２，３−ジメチル−フェニル）−エチル］−ピペラジン、１−（４−クロロ−３−フルオロ−フェニル）−４−［１−（３，４−ジメトキシ−フェニル）−エチル］−ピペラジン、１−（４−メトキシ−３−メチル−フェニル）−４−［１−（３−メチル−４−メトキシ−フェニル）−エチル］−ピペラジン、１−（４−メトキシ−３−メチル−フェニル）−４−［１−（３，４−ジメトキシ−フェニル）−エチル］−ピペラジン、１−（３，４−ジメトキシ−フェニル）−４−［１−（４−メトキシ−２，３−ジメチル−フェニル）−エチル］−ピペラジン、１−（４−フルオロ−３−トリフルオロメチル−フェニル）−４−［１−（３，４−ジメトキシ−フェニル）−エチル］−ピペラジン、１−（４−ブロモ−３−メトキシ−フェニル）−４−｛１−［４−（４−ブロモ−フェニル）−フェニル］−エチル｝−ピペラジン、４−（４−クロロ−３−トリフルオロメチル−フェニル）−［１−（３，４−ジメトキシ−ベンジル）−エチル］−ピペラジン、１−（１−ベンゾ［１，３］ジオキソール−５−イル−エチル）−４−（４−ブロモ−３−メトキシ−フェニル）−ピペラジン、１−（４−ブロモ−３−メトキシ−フェニル）−４−［１−（３，４−ジメトキシ−フェニル）−エチル］−［１，４］ジアゼパン、１−（４−ブロモ−３−メトキシ−フェニル）−４−［１−（３−フルオロ−４−メトキシ−フェニル）−エチル］−［１，４］ジアゼパン、１−［１−（３，４−ジメトキシ−フェニル）−エチル］−４−（３−メトキシ−フェニル）−ピペラジン−２，５−ジオン、１−（４−ブロモ−３−メトキシ−フェニル）−４−［１−（３，４−ジメトキシ−フェニル）−プロピル］−ピペラジン、１−（４−クロロ−３−トリフルオロメチル−フェニル）−４−［１−（３，４−ジメトキシ−フェニル）−プロピル］−ピペラジン、１−（５−ブロモ−６−メトキシピリジン−２−イル）−４−［１−（３，４−ジメトキシフェニル）エチル］ピペラジン、１−（５−ブロモ−６−メトキシ−ピリジン−２−イル）−４−［１−（４−トリフルオロメチル−フェニル）−エチル］ピペラジン、１−（４−ブロモ−３−メトキシ−フェニル）−４−［１−（６−メトキシ−ナフタレン−２−イル）−エチル］ピペラジン、１−（４−クロロ−３−メトキシ−フェニル）−４−［１−（３，４−ジメトキシ−フェニル）−エチル］−ピペラジン、１−（４−ブロモ−３−メトキシ−フェニル）−４−［１−（４−フルオロ−３−メトキシ−フェニル）−エチル］−ピペラジン、１−（４−ブロモ−３−メトキシ−フェニル）−４−［１−（６−メトキシ−ピリジン−２−イル）−エチル］−ピペラジン、４−（４−クロロ−３−トリフルオロメチル−フェニル）−１−［１−（３，４−ジメトキシ−フェニル）−エチル］−ピペラジン、
４−［４−クロロ−３−（トリフルオロメチル）フェニル］−１−（３，４−ジメトキシベンジル）ピペリジン−４−オール、２−（４−クロロ−３−メトキシ−フェニル）−６−（３，４−ジメトキシ−フェニル）−オクタヒドロ−ピリド［１，２−a］ピラジン、２−（４−クロロ−３−トリフルオロメチル−フェニル）−６−（３，４−ジメトキシ−フェニル）−オクタヒドロ−ピリド［１，２−a］ピラジン、２−（４−クロロ−３−メトキシ−フェニル）−６−（３−フルオロ，４−メトキシ−フェニル）−オクタヒドロ−ピリド［１，２−a］ピラジン、２−（４−フルオロ−３−メトキシ−フェニル）−６−（３，４−ジメトキシ−フェニル）−オクタヒドロ−ピリド［１，２−a］ピラジン、２−（４−フルオロ−３−トリフルオロメチル−フェニル）−６−（３，４−ジメトキシ−フェニル）−オクタヒドロ−ピリド［１，２−a］ピラジン、２−（４−クロロ−３−メトキシ−フェニル）−６−メトキシ−ナフタレン−２−イル）−オクタヒドロ−ピリド［１，２−a］ピラジン、２−（４−クロロ−３−メチル−フェニル）−６−（３，４−ジメトキシ−フェニル）−オクタヒドロ−ピリド［１，２−a］ピラジン、２−（４−メトキシ−３−メチル−フェニル）−６−（３，４−ジメトキシ−フェニル）−オクタヒドロ−ピリド［１，２−a］ピラジン、２−（４−クロロ−３−メトキシ−フェニル）−６−（３−メトキシ−フェニル）−オクタヒドロ−ピリド［１，２−a］ピラジン、２−（２，４−ジブロモ−５−メトキシ−フェニル）−６−（３，４−ジメトキシ−フェニル）−オクタヒドロ−ピリド［１，２−a］ピラジン、２−（３，４−ジメトキシ−フェニル）−６−（３，４−ジメトキシ−フェニル）−オクタヒドロ−ピリド［１，２−a］ピラジン、２−（４−クロロ−３−フルオロ−フェニル）−６−（３，４−ジメトキシ−フェニル）−オクタヒドロ−ピリド［１，２−a］ピラジン、１−（４−フルオロ−３−メトキシ−フェニル）−６−（３，４−ジメトキシ−フェニル）−オクタヒドロ−ピリド［１，２−a］ピラジン、２−（４−クロロ−３−メトキシ−フェニル）−６−（３，４−ジメトキシ−フェニル）−オクタヒドロ−ピリド［１，２−a］ピラジン−８−オール、２−（４−クロロ−３−メトキシ−フェニル）−６−（３，４−ジメトキシ−フェニル）−オクタヒドロ−ピリド［１，２−a］ピラジン−８−オン、２−（４−クロロ−３−メトキシ−フェニル）−６−（３−フルオロ−４−メトキシ−フェニル）−オクタヒドロ−ピリド［１，２−a］ピラジン−８−オン、２−（４−クロロ−３−メトキシ−フェニル）−６−（６−メトキシ−ナフタレン−２−イル）−オクタヒドロ−ピリド［１，２−a］ピラジン−８−オン、８−（４−クロロ−３−メトキシ−フェニル）−４−（３，４−ジメトキシ−フェニル）−オクタヒドロ−ピラジノ［２，１−ｃ］［１，４］チアジン、２−（４−クロロ−３−メトキシ−フェニル）−６−（３，４−ジメトキシ−フェニル）−オクタヒドロ−ピロロ［１，２−a］ピラジン、２−（４−クロロ−３−メトキシ−フェニル）−６−（３，４−ジメトキシ−フェニル）−１，３，４，６，９，９ａ−ヘキサヒドロ−２Ｈ−ピリド［１，２−a］ピラジン、８−ブロモ−３−（３，４−ジメトキシ−ベンジル）−９−メトキシ−２，３，４，４ａ−テトラヒドロ−１Ｈ，６Ｈ−ピラジノ［１，２−a］キノキサリン−５−オン、７−（４−クロロ−３−メトキシ−フェニル）−４−（３，４−ジメトキシ−フェニル）−デカヒドロ−ナフタレン−２−オール、２−（４−クロロ−３−メトキシ−フェニル）−６−（３，４−ジメトキシ−フェニル）−８−フルオロ−オクタヒドロ−ピリド［１，２−a］ピラジン、１−（４−ブロモ−３−メトキシフェニル）−４−（５，６−ジメトキシ−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−インダン−１−イル）ピペラジン、１−（５−ブロモ−６−メトキシピリジン−２−イル）−４−（５，６−ジメトキシ−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−インダン−１−イル）ピペラジン、１−（４−クロロ−３−トリフルオロメチル−フェニル）−４−（４，５−ジメトキシ−インダン−１−イル）−ピペラジン、１−（４−ブロモ−３−メトキシ−フェニル）−４−（４，５−ジメトキシ−インダン−１−イル）−ピペラジン、（４−クロロ−フェニル）−｛４−［１−（２，３−ジメチル−フェニル）−エチル］−ピペラジン−１−イル｝−メタノン、（４−クロロ−フェニル）−｛４−［１−（４−メトキシ−２，３−ジメチル−フェニル）−エチル］−ピペラジン−１−イル｝−メタノン、（４−トリフルオロ−メチル−フェニル）−｛４−［１−（４−メトキシ−２，３−ジメチル−フェニル）−エチル］−ピペラジン−１−イル｝−メタノン、（３，４−ジクロロ−フェニル）−｛４−［１−（４−メトキシ−２，３−ジメチル−フェニル）−エチル］−ピペラジン−１−イル｝−メタノン、（４−クロロ−フェニル）−｛４−［１−（４−メチル−ナフタレン−１−イル）−エチル］−ピペラジン−１−イル｝−メタノン、（４−トリフルオロ−メチル−フェニル）−｛４−［１−（４−メトキシ−２−メチル−フェニル）−エチル］−ピペラジン−１−イル｝−メタノン、（４−トリフルオロメチル−フェニル）−｛４−［１−（４−メトキシ−２，３−ジメチル−フェニル）−エチル］−ピペラジン−１−イル｝−メタノン、（４−トリフルオロ−メチル−フェニル）−｛４−［１−（４−メトキシ−３−メチル−フェニル）−エチル］−ピペラジン−１−イル｝−メタノン、（４−クロロ−フェニル）−｛４−［１−（４−メトキシ−ナフタレン−１−イル）−エチル］−ピペラジン−１−イル｝−メタノン、（４−トリフルオロメチル−フェニル）−｛４−［１−（４−メトキシ−２，３−ジメチル−フェニル）−プロピル］−ピペラジン−１−イル｝−メタノン、（４−クロロ−フェニル）−｛４−［１−（４−メトキシ−２，３−ジメチル−フェニル）−アリル］−ピペラジン−１−イル｝−メタノン、（４−フルオロ−フェニル）−｛４−［１−（４−メトキシ−２，３−ジメチル−フェニル）−エチル］−ピペラジン−１−イル｝−メタノン、（４−ブロモ−３−メチル−フェニル）−｛４−［１−（４−メトキシ−２，３−ジメチル−フェニル）−エチル］−ピペラジン−１−イル｝−メタノン、（３，４−ジクロロ−フェニル）−｛４−［１−（４−メチル−ナフタレン−１−イル）−エチル］−ピペラジン−１−イル｝−メタノン、［６−（３，４−ジメトキシ−フェニル）−オクタヒドロ−ピリド［１，２−ａ］ピラジン−２−イル］−（４−トリフルオロメチル−フェニル）−メタノン、（４−クロロ−フェニル）−｛４−［１−（４−メトキシ−２，３−ジメチル−フェニル）−プロピル］−ピペラジン−１−イル｝−メタノン、｛４−［１−（４−メトキシ−２，３−ジメチル−フェニル）−エチル］−［１，４］ジアゼパン−１−イル｝−（４−トリフルオロメチル−フェニル）−メタノン、｛５−［１−４−メトキシ−２，３−ジメチル−フェニル）−エチル］−２，５−ジアザ−ビシクロ［２．２．１］ヘプト−２−イル｝−（４−トリフルオロメチル−フェニル）−メタノン、３−｛１−［４−（４−ブロモ−３−メトキシ−フェニル）−ピペラジン−１−イル］−エチル｝−６−メトキシ−キノリン、３−｛１−［４−（４−ブロモ−３−メトキシ−フェニル）−ピペラジン−１−イル］−エチル｝−２−クロロ−６−メトキシ−キノリン、３−｛１−［４−（４−ブロモ−３−メトキシ−フェニル）−ピペラジン−１−イル］−エチル｝−キノリン、１−（４−ブロモ−３−メトキシ−フェニル）−４−［１−（６−メトキシ−ピリジン−３−イル）−エチル］−ピペラジン、３−｛１−［４−（４−ブロモ−３−メトキシ−フェニル）−ピペラジン−１−イル］−エチル｝−６−フルオロ−４−メチル−２Ｈ−クロメン−２−オール、（３Ｓ）−１−（４−クロロ−３−トリフルオロメトキシフェニル）−４−［１−（３，４−ジメトキシ−ベンジル）］−２−メチル−ピペラジン、（２Ｓ）−４−（５−ブロモ−６−メトキシピリジン−２−イル）−１−（３，４−ジメトキシ−ベンジル）−２−メチルピペラジン、Ｒ−１−（４−クロロ−３−メトキシフェニル）−４−［１−（３，４−ジメトキシフェニル）エチル］ピペラジン、Ｓ−１−（４−クロロ−３−メトキシフェニル）−４−［１−（３，４−ジメトキシフェニル）エチル］ピペラジン、Ｒ−１−（４−ブロモ−３−トリフルオロメトキシフェニル）−４−［１−（３−フルオロ−４−メトキシフェニル）エチル］ピペラジン、Ｓ−１−（４−ブロモ−３−トリフルオロメチルフェニル）−４−［１−（３−フルオロ−４−メトキシフェニル）エチル］ピペラジン、Ｓ−１−（４−メトキシ−フェニル）−４−［１−（３，４−ジメトキシフェニル）エチル］ピペラジン、Ｒ−１−（４−メトキシ−フェニル）−４−［１−（３，４−ジメトキシフェニル）エチル］ピペラジン、Ｒ−１−（４−クロロ−３−メトキシ−フェニル）−４−［１−（３，４−ジメトキシフェニル）−エチル］ピペラジン、｛５−［１−４−メトキシ−２，３−ジメチル−フェニル］−エチル｝−（１Ｓ，４Ｓ）−２，５−ジアザ−ビシクロ［２．２．１］ヘプト−２−イル｝−（４−トリフルオロメチル−フェニル）−メタノン、（６Ｒ，１０Ｓ）−２−（４−クロロ−３−メトキシ−フェニル）−６−（３，４−ジメトキシ−フェニル）−オクタヒドロ−ピリド［１，２−ａ］ピラジン−８−オン、Ｒ−１−（４−ブロモ−３−メトキシフェニル）−４−［１−（３，４−ジメトキシフェニル）エチル］ピペラジン、（２Ｓ）−４−（４−クロロ−３−メトキシフェニル）−１−（３，４−ジメトキシベンジル）−２−メチル−ピペラジン、（２Ｒ）−４−（４−クロロ−３−メトキシフェニル）−１−（３，４−ジメトキシベンジル）−２−メチル−ピペラジン、（３Ｒ）−１−（４−フルオロ−３−トリフルオロメチル−フェニル）−４−［１−（３，４−ジメトキシフェニル）−エチル］ピペラジン、（３Ｓ）−１−（４−フルオロ−３−トリフルオロメチル−フェニル）−４−［１−（３，４−ジメトキシフェニル）−エチル］ピペラジン、（３Ｒ）−１−（４−クロロ−３−トリフルオロメチル−フェニル）−４−［１−（３，４−ジメトキシフェニル）−エチル］ピペラジン、（３Ｓ）−１−（４−クロロ−３−トリフルオロメチル−フェニル）−４−［１−（３，４−ジメトキシフェニル）−エチル］ピペラジン、（６Ｒ，１０Ｓ）−２−（４−クロロ−３−メトキシ−フェニル）−６−（３，４−ジメトキシ−フェニル）−オクタヒドロ−ピリド［１，２−ａ］ピラジン、（３Ｒ）−１−（４−フルオロ−３−メトキシ−フェニル）−４−［１−（３，４−ジメトキシフェニル）−エチル］ピペラジン、（２Ｒ）−４−（４−クロロ−３−トリフルオロメチルフェニル）−［１−（３，４−ジメトキシベンジル）−エチル］ピペラジン、（６Ｒ，９Ｓ）−２−（４−クロロ−３−メトキシ−フェニル）−６−（３，４−ジメトキシ−フェニル）−オクタヒドロ−ピロロ［１，２−ａ］ピラジン、（６Ｒ，１０Ｓ）−２−（４−クロロ−３−メトキシ−フェニル）−６−（３，４−ジメトキシ−フェニル）−オクタヒドロ−ピリド［１，２−ａ］ピラジン−８−オール、（６Ｒ，１０Ｓ）−［６−（３，４−ジメトキシ−フェニル）−オクタヒドロ−ピリド［１，２−ａ］ピラジン−２−イル］−（４−トリフルオロメチル−フェニル）−メタノン、（６Ｒ，１０Ｓ）−２−（４−クロロ−３−メトキシ−フェニル）−６−（３−フルオロ，４−メトキシ−フェニル）−オクタヒドロ−ピリド［１，２−ａ］ピラジン、および｛５−［１−４−メトキシ−２，３−ジメチル−フェニル］−エチル｝−（１Ｓ，４Ｓ）−２，５−ジアザ−ビシクロ［２．２．１］ヘプト−２−イル｝−（４−トリフルオロメチル−フェニル）−メタノン、ならびに薬学的に許容されるそれらの塩。
【００４５】
別の実施形態では、本発明の組成物および方法において使用するためのＭＣＨＲ拮抗薬は、２００３年１月９日に出願された係属中の米国特許出願第１０／３９９，４９９で記述されている置換ベンズイミダゾール類似体である。２００３年７月２４日にＷＯ０３／０６０４７５として公開された対応するＰＣＴ出願、およびこの開示内容は、ＭＣＨＲ拮抗薬（２〜５ページ、表１（１４〜１９ページ）および表２（３８〜４８ページ））およびその調製（２３〜２４ページおよび３２〜３８ページ）を教示するために、参照により本明細書に組み入れられる。
【００４６】
別の実施形態では、本発明で使用するための化合物は２００３年１月９日に出願された係属中の米国特許出願第１０／３９９，１１１号で記述されている。２００３年７月２４日にＷＯ０３／０５９２８９として公開された対応するＰＣＴ出願、およびこの開示内容は、ＭＣＨＲ拮抗薬（３〜４ページおよび３１〜５０ページ）およびその調製（１９〜２０ページおよび２８〜３１ページ）を教示するために、参照により本明細書に組み入れられる。別の実施形態では、本発明で使用するためのＭＣＨＲ拮抗薬は米国特許第６，５６９，８６１号で記述されており、この特許は、フェニルシクロアルキルメチルアミノおよびフェニルアルケニルアミノＭＣＨＲ拮抗薬（３〜９欄および１８〜１９欄）およびその調製（１６〜１８欄）を教示するために、参照により本明細書に組み入れられる。
【００４７】
さらに別のＭＣＲ拮抗薬が、例えば、下記の公開されたＰＣＴ出願で記述されている：ＷＯ０３／０９７０４７、ＷＯ０３／０８７０４６、ＷＯ０３／０８７０４５、ＷＯ０３／０８７０４４、ＷＯ０３／０７２７８０、ＷＯ０３／０７０２４４、ＷＯ０３／０４７５６８、ＷＯ０３／０４５９２０、ＷＯ０３／０４５９１８、ＷＯ０３／０４５３１３、ＷＯ０３／０３５０５５、ＷＯ０３／０３３４８０、ＷＯ０３／０１５７６９、ＷＯ０３／０２８６４１、ＷＯ０３／０１３５７４、ＷＯ０３／００４０２７、ＷＯ０２／０８９７２９、ＷＯ０２／０８３１３４、ＷＯ０２／０７６９４７、ＷＯ０２／０７６９２９、ＷＯ０２／０５７２３３、ＷＯ０２／０５１８０９、ＷＯ０２／１０１４６、ＷＯ０２／０６２４５、ＷＯ０２／０４４３３、ＷＯ０１／８７８３４、ＷＯ０１／８２９２５、ＷＯ０１／５７０７０、ＷＯ０１／２１５７７およびＷＯ０１／２１１６９、ならびに日本の特許出願番号２００１−２２６２６９。上記はＭＣＨＲ拮抗薬の例示的な例にすぎず、本発明の範囲を制限するものではないことは明かであろう。
【００４８】
〈ＣＢ１拮抗薬〉
ＣＢ１は中枢神経系で主に発現され、食欲および摂食量の調節に関与するカンナビノイド受容体である。任意のＣＢ１拮抗薬を本明細書で提供した組成物および方法で使用してもよい。一般に、本明細書で記述したように使用するためのＣＢ１拮抗薬は、ＣＢ１に対し高い親和性を有するべきである（すなわち、ＣＢ１受容体でのＫｉ値が１μＭまたはそれ以下、好ましくは１００ｎＭまたはそれ以下、より好ましくは１０ｎＭまたはそれ以下である）。一定の実施形態では、ＣＢ１拮抗薬はＣＢ１に対し特異的である（すなわち、ＣＢ２でのＫｉ値が１μＭを超え、および／またはＫｉ比（ＣＢ２／ＣＢ１）が少なくとも１００、好ましくは少なくとも１０００である）。ＣＢ１拮抗薬に対するＩＣ５０値は好ましくは１μＭまたはそれ以下である。
【００４９】
本明細書で記述されるように使用するための代表的なＣＢ１拮抗薬としては、例えば、あるピリミジン類（例えば、ＰＣＴ国際出願公開番号第ＷＯ０４／０２９，２０４号）、ピラジン類（例えば、ＰＣＴ国際出願公開番号第ＷＯ０１／１１１，０３８、ＷＯ０４／１１１，０３４およびＷＯ０４／１１１，０３３号）、アゼチジン誘導体類（例えば、合衆国特許第６，５１８，２６４号、同第６，４７９，４７９号および同第６，３５５，６３１号、ならびにＰＣＴ国際出願公開番号第ＷＯ０３／０５３４３１号）、ピラゾール誘導体類（例えば、米国特許第６，５０９，３６７号および同第６，４７６，０６０号、ならびにＰＣＴ国際出願公開番号第ＷＯ０３／０２０２１７号および第ＷＯ０１／０２９００７号）、ピラゾールカルボン酸およびピラゾールカルボキサミド誘導体類（例えば、米国特許第６，６４５，９８５号、同第６，４３２，９８４号、同第６，３４４，４７４号、同第６，０２８，０８４号、同第５，９２５，７６８号、同第５，６２４，９４１号および同第５，４６２，９６０号、公開された米国特許出願ＵＳ２００４／００３９０２４、ＵＳ２００３／０１９９５３６およびＵＳ２００３／０００３１４５およびＰＣＴ国際出願公開番号第ＷＯ０３／０７８４１３号、同第ＷＯ０３／０２７０７６号、同第ＷＯ０３／０２６６４８号および同第ＷＯ０３／０２６６４７号）、アロイル置換ベンゾフラン類（例えばＬＹ−３２０１３５、米国特許第５，７４７，５２４号）、置換イミダゾール類（例えば、公開されたＵＳ特許出願第ＵＳ２００３／０１１４４９５号およびＰＣＴ国際出願公開番号第ＷＯ０３／０６３７８１号および同第ＷＯ０３／０４０１０７号）、置換フロ［２，３−ｂ］ピリジン誘導体類（例えば、ＰＣＴ国際出願公開番号第ＷＯ０４／０１２６７１号）、置換アリールアミド類（例えば、ＰＣＴ国際出願公開番号第ＷＯ０３／０８７０３７号および同第ＷＯ０３／０７７８４７号）、置換二環またはスピロ環アミド類（例えば、ＰＣＴ国際出願公開番号第ＷＯ０３／０８６２８８号および同第ＷＯ０３／０８２１９０号）、および置換２，３−ジフェニルピリジン類（例えば、ＰＣＴ国際出願公開番号第ＷＯ０３／０８２１９１号）が挙げられる。他のＣＢ１拮抗薬はカンナビジオールおよびその誘導体である。好ましいＣＢ１拮抗薬としては、例えば、ＳＲ−１４１７１６Ａ（（Ｎ−ピペリジン−１−イル）−５−（４−クロロフェニル）−１−（２，４−ジクロロフェニル）−４−メチル−１Ｈ−ピラゾール−３−カルボキサミド、リモナバント（ＲＩＭＯＮＡＢＡＮＴ、商標）またはアコムプリア（ＡＣＯＭＰＬＩＡ、商標）としても公知）などのアリール置換ピラゾールカルボキサミド類ならびにＡＭ２５１（（Ｎ−ピペリジン−１−イル）−５−（４−ヨードフェニル）−１−（２，４−ジクロロフェニル）−４−メチル−１−Ｈ−ピラゾール−３−カルボキサミド）およびＡＭ２８１（Ｎ−（モルホリン−４−イル）−１−（２，４−ジクロロフェニル）−５−（４−ヨードフェニル）−４−メチル−１Ｈ−ピラゾール−３−カルボキサミド）などのそれらの類似体、様々なアゼチジン化合物類（例えば、米国特許第６，５１８，２６４号、同第６，４７９，４７９号および同第６，３５５，６３１号）およびイミダゾール類１−（４−クロロフェニル）−２−（２−クロロフェニル）−Ｎ−［（１Ｓ，２Ｓ）−２−ヒドロキシシクロヘキシル］−１Ｈ−イミダゾール−４−カルボキサミドおよび２−（２−クロロフェニル）−１−（４−クロロフェニル）−Ｎ’−［４−（トリフルオロメチル）フェニル］−１Ｈ−イミダゾール−４−カルボヒドラジドが挙げられる。
【００５０】
ＣＢ１拮抗薬は、作用薬誘導ＧＴＰ結合アッセイ法、例えば本明細書の実施例８で記述したアッセイ法を用いて識別してもよく、または同定してもよい。そのようなアッセイ法では、ＣＢ１へのＣＢ１作用薬誘導ＧＴＰ結合に対する試験化合物の効果を決定するために、ＣＢ１含有細胞膜調製物（例えば、組換えによりＣＢ１を発現する昆虫細胞の膜調製物）が使用される。簡単に説明すると、ＣＢ１を含む第１の細胞膜調製物を（ｉ）標識ＧＴＰと、（ｉｉ）ＣＢ１作用薬と、（ｉｉｉ）試験化合物とに接触させ、試験膜調製物を得る。同時に、またはいずれかの順で、ＣＢ１を含む第２の膜調製物を（ｉ）標識ＧＴＰと、（ｉｉ）ＣＢ１作用薬とに接触させ、対照膜調製物を得る。標識ＧＴＰは好ましくはＧＴＰ−γ３５Ｓであり、代表的なＣＢ１作用薬はＣＰ５５，９４０である。そのような接触は、ＧＴＰがＣＢ１に結合するのに適した条件下、例えば実施例８で記述した条件下で実施される。使用した標識ＧＴＰおよびＣＢ１作用薬濃度は一般に、ＣＢ１作用薬の存在下で膜調製物に結合する標識ＧＴＰの量の検出可能な増加が得られるのに十分なものである。そのような濃度は、ルーチン実験により決定してもよい。代表的な適した濃度を実施例８に示す。一般に、一定範囲の試験化合物濃度を使用する（例えば、１０−１０Ｍ〜１０−５Ｍの範囲）。
【００５１】
ＧＴＰを膜調製物に結合させるように十分接触（例えば、インキュベーション）した後、結合した標識ＧＴＰの量に対応する（その量を示す）シグナルを検出する（典型的には、非結合標識ＧＴＰを洗浄工程により最初に除去する）。言い換えると、同時またはいずれかの順で、（ｉ）試験膜調製物中の結合標識ＧＴＰ量を示す試験シグナルを検出し、および（ｉｉ）対照膜調製物中の結合標識ＧＴＰ量を示す対照シグナルを検出する。検出したシグナルの性質を、使用した標識の型により決定する。例えば、ＧＴＰが放射標識されている場合、検出されるシグナルは放射性崩壊（例えば、液体シンチレーション分光法による）である。試験化合物のＣＢ１拮抗薬活性をその後、試験シグナルを対照シグナルと比較することにより決定する。対照シグナルより低い試験シグナルは試験化合物がＣＢ１拮抗薬であることを示す。
【００５２】
本明細書で記述した組成物および方法では、ＭＣＨＲ拮抗薬および／またはＣＢ１拮抗薬は薬学的に許容される塩またはプロドラッグとして存在してもよい。本明細書で使用されるように、「薬学的に許容される塩」は、過剰の毒性、炎症、アレルギー反応、または他の問題あるいは合併症無しで、ヒトまたは動物の組織と接触させて使用するのに適していると、一般に当技術分野で考えられている酸または塩基塩である。そのような塩としてはアミン類などの塩基性残基の無機および有機酸塩類、ならびにカルボン酸類などの酸性残基のアルカリまたは有機塩類が挙げられる。特定の薬学的塩としては、塩酸、リン酸、臭化水素酸、リンゴ酸、グリコール酸、フマル酸、硫酸、スルファミン酸、スルファニル酸、ギ酸、トルエンスルホン酸、メタンスルホン酸、エタンジスルホン酸、２−ヒドロキシエチルスルホン酸、硝酸、安息香酸、２−アセトキシ安息香酸、クエン酸、酒石酸、乳酸、ステアリン酸、サリチル酸、グルタミン酸、アスコルビン酸、パモン酸、コハク酸、フマル酸、マレイン酸、プロピオン酸、ヒドロキシマレイン酸、ヨウ化水素酸、フェニル酢酸、アルカン酸、例えば酢酸、ＨＯＯＣ−（ＣＨ２）ｎ−ＣＯＯＨ（式においてｎは０〜４である）、などの酸の塩が挙げられるが、それらに限定されない。同様に、薬学的に許容されるカチオンとしては、ナトリウム、カリウム、カルシウム、アルミニウム、リチウムおよびアンモニウムが挙げられるが、それらに限定されない。当業者であれば、レミントンの薬学（Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ）、第１７版、マック出版社（Ｍａｃｋ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ Ｃｏｍｐａｎｙ）、ペンシルバニア州イーストン、ｐ．１４１８（１９８５）により列挙されているものを含む、別の薬学的に許容される塩も認識されると思われる。したがって、本発明の開示は、ＭＣＨＲおよびＣＢ１拮抗薬の薬学的に許容される塩をすべて含むものと考えるべきである。
【００５３】
広範囲にわたる合成手順が、薬学的に許容される塩の調製に有効である。一般に、薬学的に許容される塩は、塩基性または酸性部分を含む親化合物から、任意の従来の化学法により合成することができる。簡単に言うと、そのような塩は、これらの化合物の遊離酸または塩基形態を化学量論量の、水または有機溶媒、あるいはそれらの混合物に溶解した適当な塩基または酸と反応させることにより、調製することができ、一般的に、エーテル、酢酸エチル、エタノール、イソプロパノール、またはアセトニトリルのような非水媒質が好ましい。
【００５４】
ＭＣＨＲ拮抗薬および／またはＣＢ１拮抗薬のプロドラッグは、修飾物が開裂して親化合物となるように、化合物中に存在する官能基を修飾することにより調製してもよい。当業者であれば、ＭＣＨＲ拮抗薬またはＣＢ１拮抗薬のプロドラッグを調製するのに使用してもよい様々な合成法を認識するであろう。当業者であれば、そのようなプロドラッグを、本明細書で提供した組成物および方法で活性拮抗薬の代わりに使用してもよいことは認識されるであろう。
【００５５】
〈薬学的組成物〉
本発明の実施では、少なくとも１つの非毒性ＭＣＨＲ拮抗薬を、少なくとも生理学的に許容される担体または賦形剤と共に含む薬学的組成物、ならびに少なくとも１つの非毒性ＣＢ１拮抗薬を、少なくとも１つの生理学的に許容される担体または賦形剤と共に含む薬学的組成物を使用する。ある観点では、ＭＣＨＲ拮抗薬とＣＢ１拮抗薬は同じ薬学的組成物に存在し、別の観点では、ＭＣＨＲ拮抗薬は１つの薬学的組成物中に存在し、ＣＢ１拮抗薬は別の薬学的組成物中に存在する。
【００５６】
薬学的組成物は、例えば、水、緩衝液類（例えば、中性緩衝生理食塩水またはリン酸緩衝生理食塩水）、エタノール、鉱物油、植物油、ジメチルスルホキシド、炭水化物(例えば、ブドウ糖、マンノース、ショ糖またはデキストラン)、マンニトール、蛋白質類、アジュバント類、ポリペプチド類またはアミノ酸類、例えばグリシン、抗酸化剤類、キレート化剤類、例えばＥＤＴＡまたはグルタチオンおよび／または保存薬類を含んでもよい。ある薬学組成物はヒトまたは他の動物（例えば、イヌなどのコンパニオン・アニマル）への経口送達用に製剤化される。
【００５７】
所望であれば、他の抗肥満薬、例えばレプチン、レプチン受容体作用薬、メラノコルチン受容体４（ＭＣＭ４）作用薬、シブトラミン、デクスフェンフルラミン、成長ホルモン分泌促進薬、β−３作用薬、５ＨＴ−２作用薬、オレキシン拮抗薬、神経ペプチドＹ１またはＹ５拮抗薬、ガラニン拮抗薬、ＣＣＫ作用薬、ＧＬＰ−１作用薬および／またはコルチコトロピン放出ホルモン作用薬もまた含有させてもよい。
【００５８】
薬学的組成物は、例えば、局所、経口、鼻内、直腸または非経口投与を含む任意の適した投与様式用に製剤化してもよい。本明細書で使用されるように非経口という用語は、皮下、皮内、血管内（例えば、静脈内）、筋内、脊髄、頭蓋内、くも膜下および腹腔内注入、ならびに任意の同様の注射または注入技術を含む。一定の実施形態では、経口使用のために適した形態の組成物が好ましい。そのような形態としては、例えば、錠剤、トローチ、ロゼンジ、水性または油性懸濁液、分散性粉末または顆粒、エマルジョン、ハードまたはソフトカプセル、またはシロップもしくはエリキシルが挙げられる。さらに別の実施形態では、本発明の組成物は凍結乾燥物として製剤化してもよい。
【００５９】
経口使用のための組成物はさらに、魅力的および口当たりのよい調製物を提供するために甘味剤、香味剤、着色剤および保存剤などの１つまたは複数の成分を含んでもよい。錠剤は、活性成分を、錠剤の製造に適した生理学的に許容される賦形剤との混合物として含む。そのような賦形剤としては、例えば、不活性希釈剤（例えば、炭酸カルシウム、炭酸ナトリウム、乳糖（ラクトース）、リン酸カルシウムまたはリン酸ナトリウム）、顆粒化剤および崩壊剤（例えば、トウモロコシデンプンまたはアルギニン酸）、結合剤（例えば、デンプン、ゼラチンまたはアカシアゴム）および潤滑剤（例えば、ステアリン酸マグネシウム、ステアリン酸またはタルク）が挙げられる。錠剤は未コートであってもよく、または、公知の技術によりコートし、胃腸管での崩壊および吸収を遅らせ、これにより長期にわたる持続作用を提供させてもよい。例えば、モノステアリン酸グリセリルまたはジステアリン酸グリセリルなどの時間遅延材料を使用してもよい。
【００６０】
経口用の製剤はまた、ハードゼラチンカプセルとして提供してもよく、この場合、活性成分は不活性固体希釈剤（例えば、炭酸カルシウム、リン酸カルシウムまたはカオリン）と混合され、またはソフトゼラチンカプセルとして提供してもよく、この場合、活性成分は水または油性媒質（例えば、ピーナッツ油、流動パラフィンまたはオリーブ油）と混合される。
【００６１】
水性懸濁液は、適した賦形剤、例えば懸濁化剤（例えば、カルボキシメチルセルロースナトリウム、メチルセルロース、ヒドロプロピルメチルセルロース、アルギン酸ナトリウム、ポリビニルピロリドン、トラガカントゴムおよびアカシアゴム）、および分散または湿潤剤（例えば、天然ホスファチド類、例えばレシチン、アルキレンオキシドの脂肪酸との縮合生成物、例えばポリオキシエチレンステアレート、エチレンオキシドと長鎖脂肪族アルコール類との縮合生成物、例えばヘプタデカエチレンオキシセタノール、エチレンオキシドと脂肪酸類およびヘキシトール由来の部分エステル類との縮合生成物、例えばポリオキシエチレンソルビトールモノオレアート、またはエチレンオキシドと脂肪酸類およびヘキシトール無水物由来の部分エステル類との縮合生成物、例えばポリエチレンソルビタンモノオレアート）と混合された活性材料を含む。水性懸濁液はまた、１つまたは複数の保存剤、例えばエチル、またはｎ−プロピルｐ−ヒドロキシベンゾエート、１つまたは複数の着色剤、１つまたは複数の香味剤、ならびに１つまたは複数の甘味剤、例えばショ糖またはサッカリンを含んでもよい。
【００６２】
油性懸濁液は、活性成分を植物油（例えば、ラッカセイ油、オリーブ油、ゴマ油またはココナッツ油）中、または流動パラフィンなど鉱物油中に懸濁させることにより製剤化してもよい。油性懸濁液はまた、蜜蝋、固形パラフィンまたはセチルアルコールなどの増粘剤を含んでもよい。上記のような甘味剤、および／または香味剤を添加し、口当たりのよい経口調製物を提供してもよい。そのような懸濁液は、アスコルビン酸などの抗酸化剤を添加することにより保存してもよい。
【００６３】
水を添加することにより水性懸濁液を調製するのに適した分散性粉末および顆粒は、分散または湿潤剤、懸濁化剤、および１つまたは複数の保存剤と混合された活性成分を提供する。適した分散または湿潤剤および懸濁化剤は、上記ですでに言及したものにより例示される。別の賦形剤、例えば甘味剤、香味剤および／または着色剤もまた、存在させてもよい。
【００６４】
薬学的組成物はまた、水中油型エマルジョン形態としてもよい。油相は植物油（例えば、オリーブ油またはラッカセイ油）または鉱物油（例えば、流動パラフィン）またはそれらの混合物としてもよい。適した乳化剤は天然由来ゴム（例えば、アカシアゴムまたはトラガカントゴム）、天然由来ホスファチド類（例えば、大豆、レシチンならびに脂肪酸およびヘキシトール由来のエステル類または部分エステル類）、無水物（例えば、ソルビタンモノオレアート）および脂肪酸およびヘキシトール由来の部分エステル類のエチレンオキシドとの縮合生成物（例えば、ポリオキシエチレンソルビタンモノオレアート）としてもよい。エマルジョンはまた甘味剤および／または香味剤を含んでもよい。
【００６５】
シロップおよびエリキシルは甘味剤、例えばグリセロール、プロピレングリコール、ソルビトールまたはショ糖と共に製剤化してもよい。そのような製剤はまた、１つまたは複数の粘滑剤、保存剤、香味剤および／または着色剤を含んでもよい。
【００６６】
薬学的組成物は滅菌注入水性懸濁液または油性懸濁液として調製してもよい。使用するビヒクルおよび濃度により、活性成分はビヒクルに懸濁または溶解させることができる。そのような組成物は、公知の技術に従い、適した分散剤、湿潤剤および／または懸濁化剤、例えば上記で記述したものを用いて製剤化してもよい。使用してもよい許容されるビヒクルおよび溶媒には、水、１，３−ブタンジオール、リンガー液および等張塩化ナトリウム溶液が含まれる。さらに、溶媒または懸濁媒質として滅菌不揮発性油を使用してもよい。この目的のために、合成モノまたはジグリセリドを含む任意の無菌性不揮発性油を使用してよい。さらに、オレイン酸などの脂肪酸が注入組成物の調製において使用され、局所麻酔薬、保存剤および／または緩衝剤などのアジュバントはビヒクルに溶解させることができる。
【００６７】
組成物はまた坐薬形態で調製してもよい（例えば、直腸投与用）。そのような組成物は、常温では固体であるが直腸温度では液体であり、そのため直腸で融解し薬物を放出する適した非刺激賦形剤と、薬物を混合することにより調製することができる。適した賦形剤としては、例えば、ココアバターおよびポリエチレングリコール類が挙げられる。
【００６８】
非ヒト動物に投与するために、組成物はまた動物用飼料または飲料水に添加してもよい。動物が食餌と共に適当な量の組成物を摂取するように動物用飼料および飲料水組成物を調合すると好都合である場合がある。食餌または飲料水に添加するための予混合物として組成物を提供することも好都合である場合がある。
【００６９】
薬学的組成物は持続放出製剤または制御放出製剤として製剤化してもよい（すなわち、ＭＣＨＲ拮抗薬および／またはＣＢ１拮抗薬を投与後持続放出するカプセルなどの製剤）。そのような製剤は一般に周知の技術を用いて調製してもよく、例えば、経口、直腸投与してもよく、または移植により、皮下または所望の標的部位のいずれかで投与してもよい。そのような製剤中で使用するための担体は生体適合性であり、生体分解性であってもよく、好ましくは、製剤はかなり一定レベルのＭＣＨＲ拮抗薬および／またはＣＢ１拮抗薬の放出を提供する。持続放出製剤中に含まれる拮抗薬の量は、移植部位、放出の速度および予定期間、ならびに治療または予防する状態の性質に依存する。
【００７０】
単回投与ユニット（例えば、錠剤またはカプセル）で製剤化した薬学的組成物では、ＭＣＨＲ拮抗薬および／またはＣＢ１拮抗薬は一般に、各ユニット中、治療的有効量で存在する。治療的有効量（または用量）はＭＣＨＲ拮抗薬およびＣＢ１拮抗薬を処方した頻度（例えば、１日につき１〜４回を数週間または数ヶ月）で患者に同時におよび繰り返し投与した場合に、患者において利益が識別できる量である。そのような利益としては、ＢＭＩの減少、食欲または食物摂取の減少および／または体重減少のうちの１つまたは複数が挙げられる。ＭＣＨＲ拮抗薬の治療的有効量は、そのように投与されると、ＣＢ１拮抗薬のみを投与した後に観察される患者の利益に比べ、識別可能な患者の利益が得られる量である。同様に、ＣＢ１拮抗薬の治療的有効量は、そのように投与されると、ＭＣＨＲ拮抗薬のみを投与した後に観察される患者の利益に比べ、識別可能な患者の利益が得られる量である。本明細書で使用されるように、「同時に」という用語は、ＣＢ１拮抗薬が体液中に（ＣＢ１リガンドのＣＢ１への結合および／またはインビトロでのＣＢ１媒介シグナル伝達を検出可能な程変更させるのに十分な濃度で）存在すると同時にＭＣＨＲ拮抗薬が患者の体液中に（ＭＣＨのＭＣＨ受容体への結合および／またはインビトロでのＭＣＨ媒介シグナル伝達を変更させるのに十分な濃度で）存在する時間枠を示す。同時投与（ｃｏｎｔｅｍｐｏｒａｎｅｏｕｓ ａｄｍｉｎｉｓｔｒａｔｉｏｎ）はまた、本明細書では「同時投与（ｃｏａｄｍｉｎｉｓｔｒａｔｉｏｎ）」とも呼ばれる。
【００７１】
患者の体液中のＭＣＨＲ拮抗薬の好ましい濃度は、ＭＣＨのＭＣＨＲ１への結合を阻害するのに十分なものである。約０．１ｍｇ〜約１４０ｍｇ／ｋｇ体重／日の範囲の投与量レベルを提供する組成物が好ましい（約０．５ｍｇ〜約７ｇ／ヒト患者／日）。単回剤形を生成するために担体材料と組み合わせてもよい活性剤の量は、治療されるホストおよび特別な投与様式に依存して変化する。投与ユニット形態は一般に約１ｍｇ〜約５００ｍｇの活性成分を含む。最適用量は、ルーチン試験および周知の手順を用いて確立してもよい。
【００７２】
ある実施形態では、ＭＣＨＲ拮抗薬の治療的有効量はＣＢ１拮抗薬無しで同等の患者の利益を得るために投与する必要がある量よりも低い。本明細書で提供した一定の組成物および方法では、少なくとも相加効果が観察される（すなわち、患者の利益は少なくとも、同じ量のＭＣＨＲ拮抗薬およびＣＢ１拮抗薬の別個の投与により達成される利益の和である）。
【００７３】
ある実施形態では、ＭＣＨＲ拮抗薬の治療的有効量は、ＭＣＨＲ拮抗薬に対する最大推奨用量（すなわち、製造者または米国食品医薬品局（ＦＤＡ）により勧告される最大用量）の３／４、１／２、１／４または１０％未満である。同様に、ある実施形態では、ＣＢ１拮抗薬の治療的有効量は、ＭＣＨＲ拮抗薬無しで同等の患者の利益を達成するために投与する必要がある量よりも少ない。ある実施形態では、ＣＢ１拮抗薬の治療的有効量は、ＣＢ１拮抗薬に対する最大推奨用量（すなわち、製造者またはＦＤＡにより勧告される最大用量）の３／４、１／２、１／４または１０％未満である。
【００７４】
別の実施形態では、ＭＣＨＲ拮抗薬の治療的有効量は、ＭＣＨＲ拮抗薬の合衆国臨床試験で有効性が証明されたＭＣＨＲ拮抗薬の最小用量より低く、ここで、ＭＣＨＲ拮抗薬の合衆国臨床試験は、第２の抗肥満薬、例えばＣＢ１拮抗薬の同時投与無しで実施される（例えば、治療的有効量は、そのような臨床試験で有効性が証明された最小用量の９５％未満、９０％未満、７５％未満または５０％未満である）。別の実施形態では、ＣＢ１拮抗薬の治療的有効量は、ＣＢ１拮抗薬の合衆国臨床試験で有効性が証明されたＣＢ１拮抗薬の最小用量より低く、ここで、ＣＢ１拮抗薬の合衆国臨床試験は、第２の抗肥満薬、例えばＭＣＨＲ拮抗薬の同時投与無しで実施される（例えば、治療的有効量は、そのような臨床試験で有効性が証明された最小用量の９５％未満、９０％未満、７５％未満または５０％未満である）。さらに別のそのような実施形態では、ＭＣＨＲ拮抗薬とＣＢ１拮抗薬の両方を、そのような臨床試験で有効性が証明された最小用量よりも低い用量で使用する。本明細書で使用されるように「臨床試験」という句は、薬物の製造、使用または販売を管理する連邦法の下、情報の発展および提出に関連する目的のために実施される、ヒト被験者での実験研究を示す。
【００７５】
別の実施形態では、ＭＣＨＲ拮抗薬の治療的有効量は、第２の抗肥満薬の同時投与無しで使用するための最小市販用量（患者のサイズに対する）よりも低く、および／またはＣＢ１拮抗薬の治療的有効量は、第２の抗肥満薬の同時投与無しで使用するための最小市販用量（患者のサイズに対する）よりも低い。例えば、ＭＣＨＲ拮抗薬およびＣＢ１拮抗薬の１つまたは両方の治療的有効量は、最小市販用量の９５％未満、９０％未満、７５％未満または５０％未満としてもよい。あるそのような実施形態では、患者は非ヒト動物、例えばコンパニオンアニマル（例えば、イヌまたはネコ）である。
【００７６】
本明細書で提供したパッケージ薬学的調製物は一般に、少なくとも１つのＭＣＨＲ拮抗薬を含む組成物を保持する容器と、容器内の組成物を、患者において食欲を減少させ、または肥満を治療するために、治療的有効量で使用することを示す使用説明書（例えば、ラベリング）とを含む。ある実施形態では、使用説明書はさらに、容器内の組成物を治療的有効量のＣＢ１拮抗薬と組み合わせて使用することを明記する。別の実施形態では、パッケージ薬学的調製物はさらに、１つまたは複数のＣＢ１拮抗薬を、パッケージ内の同じ容器内、または別個の容器内に含む。好ましい混合物は経口投与用に製剤化される（例えば、ピル、カプセル、錠剤などとして）。パッケージ薬学的調製物で使用するための治療的有効量は一般に上記で記述した通りである。
【００７７】
〈治療法〉
ある観点では、本発明は、体重管理に有益な方法を提供する。そのような方法では、本明細書で提供される組成物を患者に投与し、食欲および／または食物摂取を減少させ、または肥満を予防もしくは治療する（例えば、体重減少を促進する）。患者としては、ヒト、飼い慣らされたコンパニオンアニマル（ペット、例えばイヌ）および家畜が挙げられ、投与および治療レジメンは上記で規定した通りである。
【００７８】
本発明は、体重管理のために、１つまたは複数のＭＣＨＲ拮抗薬を１つまたは複数のＣＢ１拮抗薬と組み合わせて使用するための方法を提供する。ＭＣＨＲ拮抗薬を患者に、ＣＢ１拮抗薬と同時に投与してもよく（例えば、単回投与ユニットとして）、または別個に投与してもよい（ＣＢ１拮抗薬の前または後）。好ましい態様では、ＭＣＨＲ拮抗薬およびＣＢ１拮抗薬は最終的には、患者の体液（例えば、血液）中に有効濃度で同時に存在する。ＭＣＨＲ拮抗薬またはＣＢ１拮抗薬の有効濃度は、本明細書で記述したように繰り返し同時投与すると、患者における摂食量、食欲および／または肥満度指数のうちの１つまたは複数を減少させるのに十分な濃度である。上記で記述したように、ＭＣＨＲ拮抗薬の有効濃度は、ＣＢ１拮抗薬無しで同等の患者の利益が達成されるように投与する必要がある量よりも低い治療的有効量のＭＣＨＲ拮抗薬を投与することにより達成してもよく、および／またはＣＢ１拮抗薬の有効濃度は、ＭＣＨＲ拮抗薬無しで同等の患者の利益が達成されるように投与する必要がある量よりも低い治療的有効量のＣＢ１拮抗薬を投与することにより達成してもよい。
【００７９】
そのような方法において使用するための治療的有効量は一般に、上記で記述した通りである。ある実施形態では、ＭＣＨＲ拮抗薬およびＣＢ１拮抗薬の１つまたは両方の治療的有効量は、上記で記述したように、最大推奨用量の３／４、１／２、１／４または１０％未満である。別の態様では、ＭＣＨＲ拮抗薬およびＣＢ１拮抗薬の１つまたは両方の治療的有効量は、合衆国臨床試験で有効性が証明されている最小用量より低い。別の実施形態では、ＭＣＨＲ拮抗薬およびＣＢ１拮抗薬の１つまたは両方の治療的有効量は、治療を受ける患者のサイズに対する最小市販用量よりも低い。
【００８０】
患者へのＭＣＨＲ拮抗薬およびＣＢ１拮抗薬の投与は、経口、局所、鼻内または経皮投与、または静脈内、筋内、皮下、くも膜下腔内、硬膜外、脳室内または同様の注入を含む、上記で記述した任意の手段によって実施することができる。ある実施形態では、上記のように、１つまたは複数のＭＣＨＲ拮抗薬または１つまたは複数のＣＢ１拮抗薬の混合物を投与する。そのような方法で使用するための好ましい混合物は経口投与用に（例えば、ピル、カプセル、錠剤などとして）または静脈内投与用に製剤化される。
【００８１】
投与頻度は、使用する化合物および患者の肥満度により変動させてもよい。一般に、１日あたり４回またはそれ以下の投与計画が好ましく、１日１または２回が特に好ましい。任意の特別な患者に対する特定用量は上記で記述したように、様々な因子に依存する。患者は一般に、治療または予防される状態に適したアッセイ法を用いて治療効果がモニタされてもよく、そのような方法は当業者には周知である。例えば、体重、ＢＭＩまた食物摂取で統計学的に有意の減少が得られると、治療は有効であると考えられる。
【００８２】
〈ＭＣＨＲ拮抗薬／ＣＢ１拮抗薬の組み合わせを識別するための方法〉
本発明はさらに、上記薬学的組成物、パッケージ薬学的調製物および方法において使用するためのＭＣＨＲ拮抗薬／ＣＢ１拮抗薬の組み合わせを選択するための方法を提供する。そのような方法は一般に、ＭＣＨＲ拮抗薬とＣＢ１拮抗薬が哺乳類の食物摂取に対し少なくとも相加効果を示す組み合わせの選択に基づく。例えば、本発明は、同時に哺乳類に、治療的有効量で投与すると哺乳類の食物摂取に少なくとも相加効果を示すＭＣＨＲ拮抗薬とＣＢ１拮抗薬を識別（または同定）する工程と、それから、体重調整に使用するためのＭＣＨＲ拮抗薬／ＣＢ１拮抗薬の組み合わせを識別（または同定）する工程とを含む、体重の調整に使用するためのＭＣＨＲ拮抗薬／ＣＢ１拮抗薬の組み合わせを識別するための方法を提供する。
【００８３】
一般に、哺乳類に治療的有効量で同時に投与すると哺乳類の食物摂取に少なくとも相加効果を示すＭＣＨＲ拮抗薬とＣＢ１拮抗薬を選択する工程を含む、薬学的組成物のための活性成分を選択するための、または患者に同時投与するための治療薬を選択するための方法をさらに提供する。ある実施形態では、薬学的組成物のための活性成分を選択するための方法は、（ｉ）第１の治療的有効量のＭＣＨＲ拮抗薬を用いて、ＣＢ１拮抗薬の同時投与無しで処置した哺乳類（例えば、非ヒト哺乳類）における食物摂取に対するＭＣＨＲ拮抗薬の効果を決定する工程と、（ｉｉ）第２の治療的有効量のＣＢ１拮抗薬を用いて、ＭＣＨＲ拮抗薬の同時投与無しで処置した哺乳類における食物摂取に対するＣＢ１拮抗薬の効果を決定する工程と、（ｉｉｉ）第１の治療的有効量のＭＣＨＲ拮抗薬と第２の治療的有効量のＣＢ１拮抗薬を用いて同時に処置した哺乳類における食物摂取に対するＭＣＨＲ拮抗薬とＣＢ１拮抗薬の効果を決定する工程と、（ｉｖ）必要に応じて、異なるＭＣＨＲ拮抗薬または異なるＣＢ１拮抗薬を用いて工程（ｉ）〜（ｉｉｉ）を繰り返す工程と、（ｖ）工程（ｉｉｉ）で決定した食物摂取に対する効果が工程（ｉ）および（ｉｉ）で決定した食物摂取に対する効果の和と等しいまたはそれ以上であるＭＣＨＲ拮抗薬とＣＢ１拮抗薬を選択する工程と、を含む。
【００８４】
そのような活性成分を含む薬学的組成物を調製するための方法は一般に、（ｉ）哺乳類に治療的有効量で同時に投与すると哺乳類における食物摂取に対し少なくとも相加効果を有するＭＣＨＲ拮抗薬とＣＢ１拮抗薬を識別（または同定）する工程と、（ｉｉ）治療的有効量のＭＣＨＲ拮抗薬と治療的有効量のＣＢ１拮抗薬とを生理学的に許容される担体または賦形剤と組み合わせる工程と、を含む。そのような活性成分を含むパッケージ薬学的組成物を調製するための方法は一般に、（ｉ）哺乳類に治療的有効量で同時に投与すると哺乳類における食物摂取に対し少なくとも相加効果を有するＭＣＨＲ拮抗薬とＣＢ１拮抗薬を識別（または同定）する工程と、（ｉｉ）ＭＣＨＲ拮抗薬とＣＢ１拮抗薬とを、第１の治療的有効量のＭＣＨＲ拮抗薬と第２の治療的有効量のＣＢ１拮抗薬を、食物摂取または食欲を減少させ、または肥満を治療する、患者に同時に投与することを示す使用説明書と共にパッケージする工程と、を含む。
【００８５】
下記実施例は、説明のために提供するものであり、制限するものではない。特に記載がなければ、試薬および溶媒は全て標準市販グレードであり、さらに精製せずに使用する。
【実施例】
【００８６】
〔実施例１〕
〈ＭＣＨＲ拮抗薬とＣＢ１拮抗薬の摂食量に対する効果〉
この実施例では、飽食させたラットにおける１２時間にわたる食物摂取および体重変化を測定するインビボアッセイ法について説明する。このアッセイ法は、ＭＣＨＲ拮抗薬とＣＢ１拮抗薬の同時投与により過剰摂食量を阻止することができることを確認するために使用する。
【００８７】
ラット（３月齢、２５０〜３００ｇ）の体重を測定する。アッセイ法の前に、ラットには正常な食餌および水を自由に与える。対照および試験化合物溶液をその後に経口投与し、３０分後ラットを代謝給餌ケージ（ｍｅｔａｂｏｌｉｃ ｆｅｅｄｉｎｇ ｃａｇｅ）（ナルゲン（Ｎａｌｇｅｎｅ）代謝ケージ、ＶＷＲサイエンティフィック（Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ））に１２時間の給餌セッションの間、入れ、明かりを消し、その間、食餌および水を自由に与える。与えた食餌は、トリトス（Ｔｒｉｔｏｓ）らの糖尿病（Ｄｉａｂｅｔｅｓ）４７：１６８７（１９９８）により本質的に記述されているように、口当たりのよい固形飼料である。１２時間後、食物摂取、水摂取、尿および大便排出および体重変化を測定する。
【００８８】
図１は１つのそのようなアッセイ法の結果を示し、この場合、動物を４つの処置グループに分け、各グループ毎８〜１０匹の動物とする。第１のグループでは、ラットをビヒクルのみ（０．１％トリアセチン、湿潤剤を含む５％メチルセルロース）で処置する。これらのビヒクル処置動物は１２時間の給餌セッション中、平均２８ｇの食餌を食べる。第２のグループでは、動物を５ｍｇ／ｋｇＣＢ１拮抗薬の１回投与で処置する。これらの動物は、平均１３％の食物摂取の減少を示す。第３グループの動物は１０ｍｇ／ｋｇ ＭＣＨＴ１拮抗薬の１回投与で処置する。これらの動物は平均１６％の食物摂取の減少を示す。第４のグループでは、動物をＣＢ１拮抗薬およびＭＣＨＲ１拮抗薬の両方で、上記のように処置し、３１％の食物摂取の減少を示す。この結果から、これらの２つの薬剤を同時投与すると、食物摂取において少なくとも相加減少が得られることが証明される。
【００８９】
〔実施例２〕
〈メラミン凝集ホルモン受容体結合アッセイ法〉
この実施例では、ＭＣＨ受容体に対する化合物の結合親和性を決定するために使用してもよいＭＣＨ受容体結合の標準アッセイ法を説明する。
【００９０】
カニクイザルマカク視床下部ＭＣＨＲ１ ｃＤＮＡを調製し、ＰＣＤＮＡ３．１（インビトロゲン社（ＩＮＶＩＴＲＯＧＥＮ Ｃｏｒｐ．）、カルフォルニア州カールズバッド）にクローン化し、ＨＥＫ２９３細胞（アメリカンタイプカルチャーコレクション（Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｔｙｐｅ Ｃｕｌｔｕｒｅ Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ、バージニア州マナッサス）を、２００３年７月２４日に公開されたＰＣＴ国際出願公開番号第ＷＯ０３／０５９２８９号で記述されているようにＭＣＨＲ１発現ベクターにより安定にトランスフェクトさせる。トランスフェクトしたＨＥＫ２９３細胞の調製および貯蔵に関するＷＯ０３／０５９２８９号の５２ページの開示内容は参照により本明細書に組み入れられる。
【００９１】
アッセイ法の時点では、ＨＥＫ２９３細胞膜ペレットを、洗浄緩衝液（ｗａｓｈ ｂｕｆｆｅｒ）（１．０ｍＭ ＣａＣｌ２、５．０ｍＭ ＭｇＣｌ２、１２０ｍＭ ＮａＣｌを有する２５ｍＭ ＨＥＰＥＳ、ｐＨ７．４）を添加することにより解凍し、ブリンクマンポリトロン（ＢＲＩＮＫＭＡＮ ＰＯＬＹＴＲＯＮ）セッティング５を用いて３０秒間ホモジナイズする。細胞を１０分間４８，０００×ｇで遠心分離する。上清を廃棄し、ペレットを新鮮な洗浄緩衝液中に再懸濁させ、再びホモジナイズする。この膜ホモジネートのアリコート（ａｌｉｑｕｏｔ）を使用して、ブラッドフォード法（ＢＩＯ−ＲＡＤ蛋白質アッセイキット、＃５００−０００１、ＢＩＯ−ＲＡＤ、カリフォルニア州ハーキュリーズ）により蛋白質濃度を決定する。この測定により、１リットルの細胞培養物から、典型的に５０〜７５ｍｇの総膜蛋白質が得られる。ホモジネートを前のように遠心分離し、結合緩衝液（洗浄緩衝液＋０．１％ＢＳＡと１．０μＭ最終ホスホラミドン）中３３３μｇ／ｍＬの蛋白質濃度で懸濁させ、５０μｇ膜蛋白質／１５０μＬ結合緩衝液のアッセイ体積とする。ホスホラミドンはシグマバイオケミカルズ（ＳＩＧＭＡ ＢＩＯＣＨＥＭＩＣＡＬＳ、ミズーリ州セントルイス）（ｃａｔ＃Ｒ−７３８５）からのものとした。
【００９２】
競合結合アッセイ法は、ファルコン（Ｆａｌｃｏｎ）９６ウエル丸底ポリプロピレンプレートにおいて、室温で実施する。各アッセイウエルは、上記のように調製した１５０μＬのＭＣＨ受容体含有膜と、５０μＬの１２５Ｉ−Ｔｙｒ ＭＣＨと、５０μＬの結合緩衝液と、２μＬのＤＭＳＯに溶解した試験化合物を含む。１２５Ｉ−Ｔｙｒ ＭＣＨ（比活性＝２２００Ｃｉ／ｍｍｏｌ）はＮＥＮ、マサチューセッツ州ボストン（Ｃａｔ＃ＮＥＸ ３７３）から購入し、結合緩衝液中で希釈し、最終アッセイ濃度３０ｐＭとする。
【００９３】
非特異的結合は、１μＭの非標識ＭＣＨの存在下で測定した結合として規定される。ＭＣＨはバケム（ＢＡＣＨＥＭ）Ｕ．Ｓ．Ａ、ペンシルバニア州キングオブプロシア（ｃａｔ＃Ｈ−１４８２）から購入する。ＭＣＨ結合を決定するために使用するアッセイウエルは１５０μＬのＭＣＨ受容体含有膜と、５０μＬの１２５Ｉ−Ｔｙｒ ＭＣＨと、２５μＬの結合緩衝液と、２５μＬの結合緩衝液とを含む。
【００９４】
アッセイプレートを１時間室温でインキュベートする。膜を、使用前２時間１．０％ ＰＥＩ（ポリエチレンイミン）で予め浸したワラック（ＷＡＬＬＡＣ、商標）ガラス繊維フィルタ（パーキンエルマー（ＰＥＲＫＩＮ−ＥＬＭＥＲ）、メリーランド州ゲイサーズバーグ）上に収集する。フィルタを一晩中乾燥させ、その後、ワラックベータシント（ＷＡＬＬＡＣ ＢＥＴＡ ＳＣＩＮＴ）（商標）シンチレーション流体を添加した後、ワラック１２０５ベータプレート（ＢＥＴＡ ＰＬＡＴＥ）カウンタで計数する。
【００９５】
飽和結合のために、１２５Ｉ−Ｔｙｒ ＭＣＨの濃度を７〜１０００ｐＭまで変動させる。典型的には、飽和結合曲線１つあたり１１の濃度点を収集する。コンピュータプログラムフィットＰ（ＦｉｔＰ、商標）（バイオソフト（ＢＩＯＳＯＦＴ）、ミズーリ州ファーガソン）の助けを借り、ヒル（Ｈｉｌｌ）式を測定した値に適合させることにより、平衡結合パラメータを決定する。好ましいＭＣＨＲ拮抗薬では、Ｋｉ値が１μＭ未満、好ましくは５００ｎＭ未満、より好ましくは１００ｎＭ未満である。
【００９６】
〔実施例３〕
〈ＭＣＨ受容体カルシウム移動アッセイ法〉
この実施例では、メラミン凝集ホルモンに対するメラニン凝集ホルモン受容体を発現する細胞の応答をモニタするための代表的な機能アッセイ法について説明する。このアッセイ法はまた、試験化合物がメラニン凝集ホルモン受容体の作用薬または拮抗薬として作用するかどうかを決定するのに使用することができる。
【００９７】
チャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞（アメリカンタイプカルチャーコレクション、バージニア州マナッサス）を、リン酸カルシウム沈澱法によりＭＣＨ受容体発現ベクターを用い安定にトランスフェクトさせる。最も良好に発現するトランスフェクタントを選択し、このトランスフェクタント（すなわち、クローン）を、ファルコン（ＦＡＬＣＯＮ、商標）の黒壁、透明底の９６−ウエルプレート（＃３９０４、ベクトン−ディキンソン（ＢＥＣＴＯＮ−ＤＩＣＫＩＮＳＯＮ）、ニュージャージー州フランクリンレイクス）において、１０％ウシ胎児血清、２５ｍＭ ＨＥＰＥＳおよび５００μｇ／ｍＬ（活性）Ｇ４１８を補充したハム（Ｈａｍ）Ｆ１２培地（メディアテク（ＭＥＤＩＡＴＥＣＨ）、バージニア州ハーンドン）中増幅、増殖させ、１５，０００細胞／ウエルの密度とする。アッセイ法を実施する前、培地を９６ウエルプレートから除去する。Ｆｌｕｏ−３カルシウム感受性染料（モレキュラープローブズ（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｐｒｏｂｅｓ）、オレゴン州ユージーン）を各ウエルに添加する（染料溶液：１ｍｇ ＦＬＵＯ−３ ＡＭ、４４０μＬ ＤＭＳＯおよび４４０μＬ ２０％プルロニック酸（ｐｌｕｒｏｎｉｃ ａｃｉｄ）を含むＤＭＳＯ、１：４希釈、５０μＬ 希釈溶液／ウエル）。プレートをアルミニウム箔で覆い、３７℃で１〜２時間インキュベートする。インキュベート後、染料をプレートから除去し、細胞を１００μＬ ＫＲＨ緩衝液（０．０５ｍＭ ＫＣｌ、０．１１５Ｍ ＮａＣｌ、９．６ｍＭ ＮａＨ２ＰＯ４、０．０１ｍＭ ＭｇＳＯ４、２５ｍＭ ＨＥＰＥＳ、ｐＨ７．４）で１度洗浄し、過剰の染料を除去し、洗浄後、各ウエルに８０μＬのＫＲＨ緩衝液を添加する。
【００９８】
蛍光応答を、ヒトＭＣＨ受容体または試験化合物のいずれかを添加し、ＦＬＩＰＲ（商標）プレートリーダー（モレキュラーデバイス（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｄｅｖｉｃｅｓ）、カリフォルニア州サニーベール）により、４８０ｎｍで励起し、５３０ｎｍで発光させることによりモニタする。
【００９９】
試験化合物の、ＭＣＨに対するＭＣＨ受容体を発現する細胞の応答に拮抗する能力を測定するために、ＭＣＨのＥＣ５０を最初に決定する。追加の２０μＬのＫＲＨ緩衝液および１μＬのＤＭＳＯを、上記のように調製した各ウエルの細胞に添加する。１００μＬのヒトＭＣＨを含むＫＲＨ緩衝液をＦＬＩＰＲ機器により各ウエルに自動的に移す。最終ＭＣＨ濃度が１ｎＭ〜３μＭの８点濃度応答曲線を使用してＭＣＨ ＥＣ５０を決定する。
【０１００】
試験化合物をＤＭＳＯに溶解させ、２０μＬのＫＲＨ緩衝液中に希釈し、上記のように調製した細胞に添加する。調製した細胞および試験化合物を含む９６ウエルプレートを暗闇、室温で０．５〜６時間インキュベートする。インキュベーションを６時間を超えて続けないことが重要である。蛍光応答を決定する直前に、２×ＥＣ５０までＫＲＨ緩衝液中に希釈したヒトＭＣＨ１００μＬをＦＬＩＰＲ機器により、９６ウエルプレートの各ウエルに自動的に添加し、２００μＬの最終試料体積およびＥＣ５０の最終ＭＣＨＲ濃度とする。アッセイウエル中の試験化合物の最終濃度は１ｎＭと５μＭとの間である。典型的には、１つのＭＣＨのＥＣ５０に曝露させた細胞は、約１０，０００相対蛍光単位の蛍光応答を示す。ＭＣＨ受容体の拮抗薬を用いてインキュベートした細胞は、統計的有意性のパラメータ試験を用いて測定すると、ｐ≦０．０５レベルまで対照細胞よりも有意に低い応答を示す。典型的には、ＭＣＨ受容体の拮抗薬は、対応対照に比べ約２０％、好ましくは約５０％、最も好ましくは少なくとも８０％だけ蛍光応答を減少させる。ＭＣＨＲ拮抗薬に対するＩＣ５０値を、シグマプロット（ＳＩＧＭＡＰＬＯＴ）ソフトウエア（ＳＰＳＳ社、イリノイ州シカゴ）および標準技術を用いて決定する。その後、ＩＣ５０値を用いて、チェン（Ｃｈｅｎｇ）およびプルゾフ（Ｐｒｕｓｏｆｆ）（１９７３）Ｂｉｏｃｈｅｍ Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．２２（２３）：３０９９−１０８により記述されているようにＫｉを生成させる。
【０１０１】
化合物のＭＣＨ受容体の作用薬として作用する能力は、ＭＣＨ無しで、上記方法を用い、ＭＣＨ受容体を発現する細胞の蛍光応答を測定することにより決定する。細胞を、バックグラウンドより高い蛍光を示すようにする化合物はＭＣＨ受容体作用薬である（試験化合物のバックグラウンド自己蛍光は標準方法を用いて評価してもよい）。ＭＣＨ受容体の基本活性の検出可能な増加を誘発しないＭＣＨＲ拮抗薬は、検出可能な作用薬活性を有さず、好ましい。
【０１０２】
〔実施例４〕
〈ＣＢ１発現のためのバキュロウイルス調製物〉
この実施例では、ＣＢ１−発現昆虫細胞を作成するのに使用するための組換えバキュロウイルスの調製について説明する。
【０１０３】
ヒトＣＢ１配列はジェンバンクアクセッション番号ＨＳＵ７３３０４を有し、ホエー（Ｈｏｅｈｅ）ら（１９９１）Ｎｅｗ Ｂｉｏｌ．３（９）：８８０−８５により報告された。ヒトＣＢ１（ｈＣＢ１）ｃＤＮＡをヒト脳ｃＤＮＡライブラリー（ギブコ（Ｇｉｂｃｏ）ＢＲＬ、メリーランド州ゲイサーズバーグ）からＰＣＲを用いて増幅させ、ここで、５’プライマーは最適コザック（Ｋｏｚａｋ）配列ＣＣＡＣＣを含む。得られたＰＣＲ産物を、マルチプルクローニングサイトを用いｐｃＤＮＡ３．１／Ｖ５−Ｈｉｓ−ＴＯＰＯ（インビトロジェン社（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ Ｃｏｒｐ．）カリフォルニア州カールズバッド）にクローン化し、その後、Ｂａｍ／ＸｈｏサイトでｐＢＡＣＰＡＫ８（ＢＤバイオサイエンス（Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）、カルフォルニア州パロアルト）にサブクローン化すると、ｈＣＢ１バキュロウイルス発現ベクターが得られる。
【０１０４】
ｈＣＢ１バキュロウイルス発現ベクターを、Ｓｆ９細胞にＢＡＣＵＬＯＧＯＬＤ ＤＮＡ（ＢＤファーミンゲン（ＰｈａｒＭｉｎｇｅｎ）、カリフォルニア州サンディエゴ）と共にコトランスフェクトさせる。Ｓｆ９細胞培養上清をトランスフェクション後３日目に採取する。組換えウイルス含有上清を、グレース（Ｇｒａｃｅ）塩および４．１ｍＭのＬ−Ｇｌｎ、３．３ｇ／Ｌの限外濾過イーストレート（ｙｅｓｔｏｌａｔｅ）および１０％の熱により不活性化したウシ胎児血清を補充したヒンク（Ｈｉｎｋ）ＴＮＭ−ＦＨ昆虫媒地（ＪＲＨバイオサイエンス、ミズーリ州カンザスシティ）（以後、「昆虫媒地」）中で連続して希釈し、プラークを組換えプラークに対しアッセイする。４日後、組換えプラークを選択し、１ｍｌの昆虫培地中に採取し、増幅させる。各１ｍｌ体積の組換えバキュロウイルス（継代０）を使用して、５ｍｌの昆虫培地中に２×１０６Ｓｆ９細胞を含む別のＴ２５フラスコに感染（インフェクション）させる。２７℃で５日間インキュベートした後、各Ｔ２５感染物から上清媒地を採取し、第１継代接種材料として使用する。
【０１０５】
その後、２組の７つの換えバキュロウイルスクローンを第２ラウンドの増幅のために選択し、１ｍｌの第１継代ストックを用いて、２つのＴ１７５フラスコに分割した１００ｍｌの昆虫媒地中の１×１０８細胞に感染させる。感染後４８時間目に、各１００ｍｌの調製物由来の第２継代媒地を採取し、プラークを力価に対しアッセイする。第２ラウンドの増幅から得られた細胞ペレットを、下記で記述したように親和性結合によりアッセイし、組換え受容体発現を証明する。その後、第３ラウンドの増幅を０．１の感染効率を用いて開始し、１リットルのＳｆ９細胞を感染させる。感染後７２時間目に、上清培地を採取し、第３継代バキュロウイルスストックを獲得する。
【０１０６】
残りの細胞ペレットについて、親和性結合に対しアッセイする。放射性リガンドは、飽和結合では２５ｐＭ−５．０ｎＭ［３Ｈ］ＣＰ５５，９４０であり、競合結合では０．５ｎＭであり（ニューイングランドニュークリア社（Ｎｅｗ Ｅｎｇｌａｎｄ Ｎｕｃｌｅａｒ Ｃｏｒｐ．、マサチューセッツ州ボストン）、ｈＣＢ１−発現バキュロウイルス細胞を使用し、アッセイ緩衝液は５０ｍＭのＴｒｉｓ ｐＨ７．４、１２０ｍＭのＮａＣｌ、５ｍＭのＭｇＣｌ２、０．５％ ＢＳＡおよび０．２ｍｇ／ｍｌのバシトラシンを含み、ＧＦ／Ｃ ホワットマン（ＷＨＡＴＭＡＮ）フィルタ（使用前２時間０．３％脱脂粉乳（Ｈ２Ｏ）に予め浸漬させる）を用いて濾過を実施し、フィルタを５ｍＬの冷５０ｍＭ Ｔｒｉｓ ｐＨ７．４で２度洗浄する。
【０１０７】
第３継代バキュロウイルスストックの力価をプラークアッセイ法により決定し、感染効率、インキュベーション期間、結合アッセイ法実験を実施し、最適受容体発現のための条件を決定する。
【０１０８】
〔実施例５〕
〈バキュロウイルス感染〉
対数期Ｓｆ９細胞（インビトロゲン社、カリフォルニア州カールスバッド）に、組換えバキュロウイルスの１つまたは複数のストックを感染させ、昆虫培地中、２７℃で培養する。感染はｈＣＢ１の発現に導くウイルスのみ、またはこのウイルスと３つのＧ−蛋白質サブユニット発現ウイルスストック、１）ラットＧα１２Ｇ−蛋白質−エンコードウイルスストック（バイオシグナル（ＢＩＯＳＩＧＮＡＬ）＃Ｖ５Ｊ００８）、２）ウシβ１Ｇ−蛋白質−エンコードウイルスストック（バイオシグナル＃Ｖ５Ｈ０１２）および３）ヒトγ２Ｇ−蛋白質−エンコードウイルスストック（バイオシグナル＃Ｖ６Ｂ００３）、これらは全てバイオシグナル社、カナダモントリオールから入手される、と組み合わせたもののいずれかを用いて実施する。
【０１０９】
典型的なｈＣＢ１感染は、上記のように加熱して不活性化した１０％ウシ胎児血清（ＦＢＳ）を補充した昆虫培地で培養したＳｆ９細胞を使用して実施する。Ｓｆ９細胞を５％ ＦＢＳおよび５％ギブコ無血清培地（インビトロゲン社、カルフォルニア州カールスバッド）を含む昆虫培地で培養すると、より高い受容体およびＧ−蛋白質（Ｇα、Ｇβ、Ｇγ）発現を得ることができる。Ｓｆ９細胞をＦＢＳ無しで１０％ギブコ無血清培地を含む昆虫培地で培養すると、最大ＣＢ１受容体発現および機能活性が達成される。感染は０．１：１．０：０．５：０．５の感染効率で実施する。感染後７２時間で、細胞懸濁液試料に対し、トリパンブルー染料排除により生存率について分析し、残りのＳｆ９細胞を遠心分離により採取する（３０００ｒｐｍ／１０分／４℃）。
【０１１０】
〔実施例６〕
〈精製した組換え昆虫細胞膜〉
Ｓｆ９細胞ペレットをホモジナイズ緩衝液（１０ｍＭ ＨＥＰＥＳ、２５０ｍＭ ショ糖、０．５μｇ／ｍｌ ロイペプチン、２μｇ／ｍｌ アプロチニン、２００μＭ ＰＭＳＦおよび２．５ｍＭ ＥＤＴＡ、ｐＨ７．４）中に再懸濁させ、ポリトロン（ＰＯＬＹＴＲＯＮ）ホモジナイザを用いてホモジナイズする（セッティング５で３０秒間）。ホモジナイズされたものを遠心分離し（５３６×ｇ／１０分／４℃）、核をペレット化する。単離した膜を含む上清を清浄な遠心分離管にデカントし、遠心分離し（４８，０００×ｇ／３０分、４℃）、得られたペレットを３０ｍｌのホモジナイズ緩衝液に再懸濁させる。この遠心分離および再懸濁工程を２度繰り返す。最終ペレットを、５ｍＭ ＥＤＴＡを含む氷冷ダルベッコ（Ｄｕｌｂｅｃｃｏ）ＰＢＳ中に再懸濁させ、必要となるまで−８０℃で、凍結アリコートで保存する。得られた膜調製物（以後、「Ｐ２膜」）の蛋白質濃度を、ブラッドフォード蛋白質アッセイ法（バイオラッドラボラトリーズ、カリフォルニア州ハーキュリーズ）を用いて測定する。この測定により、１リットルの細胞培養物では典型的には１００〜１５０ｍｇの総膜蛋白質が得られる。
【０１１１】
〔実施例７〕
〈放射性リガンド結合アッセイ法〉
Ｐ２膜をダウンス（Ｄｏｕｎｃｅ）ホモジナイゼーション（タイトな乳鉢（ｔｉｇｈｔ ｐｅｓｔｌｅ））により、結合緩衝液（５０ｍＭ Ｔｒｉｓ ｐＨ７．４、１２０ｍＭ ＮａＣｌ、５ｍＭ ＭｇＣｌ２、０．５％ＢＳＡおよび０．２ｍｇ／ｍｌバシトラシン）中に再懸濁させる。
【０１１２】
飽和結合分析では、膜（１０μｇ）を２５ｐＭ〜０．５ｎＭ［３Ｈ］ＣＰ５５，９４０（ニューイングランドニュークリア社、マサチューセッツ州ボストン）を含むポリプロピレン管に添加する。非特異的結合を、１０μＭ ＣＰ５５，９４０（トクリスクックソン社（Ｔｏｃｒｉｓ Ｃｏｏｋｓｏｎ Ｉｎｃ．）、ミズーリ州エリスヴィル）の存在下で決定すると、総結合の１０％未満を占めた。受容体親和性に対するグアニンヌクレオチド効果を評価するために、ＧＴＰγＳを添加し、最終濃度５０μＭで管を複製する（ｄｕｐｌｉｃａｔｅ）。
【０１１３】
競合分析では、膜（１０μｇ）を０．５ｎＭ［３Ｈ］ＣＰ５５，９４０を含むポリプロピレン管に添加する。非放射性標識ディスプレーサーを添加し、１０−１０Ｍ〜１０−５Ｍの範囲の濃度でアッセイ物を分離すると、０．２５０ｍＬの最終体積が得られる。非特異的結合を、１０μＭ ＣＰ５５，９４０の存在下で決定すると、総結合の１０％未満を占めた。室温で１時間インキュベートした後、反応を急速減圧濾過により中止させる。試料を予め浸漬させた（０．３％脱脂粉乳で使用前２時間）ＧＦ／Ｃホワットマンフィルター上で濾過し、５ｍＬの５０ｍＭ冷Ｔｒｉｓ ｐＨ７．４で２度すすぐ。残りの結合放射活性を、γ計数により定量する。Ｋｉおよびヒル（Ｈｉｌｌ）係数（ｎＨ）を、シグマプロットソフトウエアの助けを借りて、測定値にヒル式を適合させることにより決定する。
【０１１４】
〔実施例８〕
〈作用薬誘導ＧＴＰ結合〉
この実施例では、ＣＢ１作用薬および拮抗薬を識別（または同定）し、逆作用薬活性を有する拮抗薬から中性拮抗薬を区別するための作用薬刺激ＧＴＰ−γ３５Ｓ結合（「ＧＴＰ結合」）活性の使用について説明する。このアッセイ法を使用し、拮抗薬化合物により媒介される部分アゴニズムを検出することもできる。このアッセイ法で分析する化合物は本明細書では「試験化合物」と呼ばれる。作用薬刺激ＧＴＰ結合活性は次のように測定する。４つの独立したバキュロウイルスストック（１つはｈＣＢ１の発現を誘導し、３つはヘテロ三量体Ｇ−蛋白質の３つのサブユニットの各々の発現を誘導する）を使用し、実施例５で記述したようにＳｆ９細胞培養物に感染させる。
【０１１５】
精製膜（実施例６で記述したように調製）に対する作用薬刺激ＧＴＰ結合を最初に、ＣＢ１作用薬ＣＰ５５，９４０を用いて評価し、受容体／Ｇ−蛋白質−α−β−γの組み合わせでは、ＧＴＰ結合により測定されるような機能応答が得られることを確認する。
【０１１６】
Ｐ２膜をダウンスホモジナイゼーション（タイトな乳鉢）により、ＧＴＰ結合緩衝液（５０ｍＭ Ｔｒｉｓ ｐＨ７．４、１２０ｍＭ ＮａＣｌ、５ｍＭ ＭｇＣｌ２、２ｍＭ ＥＧＴＡ、０．１％ ＢＳＡ、０．１ｍＭバシトラシン、１００ＫＩＵ／ｍＬアプロチニン、５μＭ ＧＤＰ）中に再懸濁させ、反応管に１０μｇ蛋白質／反応管の濃度で添加する。漸増用量の作用薬ＣＰ５５，９４０を１０−１２Ｍ〜１０−６Ｍの範囲の濃度で添加した後、１００ｐＭのＧＴＰ−γ３５Ｓを添加することにより反応を開始する。競合実験では、非放射標識試験化合物を別個のアッセイ物に１０−１０Ｍ〜１０−５Ｍの範囲の濃度で１ｎＭ ＣＰ５５，９４０と共に添加すると、０．２５ｍＬの最終体積が得られる。
【０１１７】
室温で６０分インキュベートした後、ＧＦ／Ｃフィルタ（洗浄緩衝液、０．１％ＢＳＡに予め浸す）上での急速減圧濾過により反応を中止させ、その後、氷冷洗浄緩衝液（５０ｍＭ Ｔｒｉｓ ｐＨ７．０、１２０ｍＭ ＮａＣｌ）で洗浄する。受容体結合（これにより膜結合）ＧＴＰ−γ３５Ｓの量を、結合放射活性を測定することにより、好ましくは洗浄したフィルタの液体シンチレーション分光法により決定する。非特異結合を１０ｍＭ ＧＴＰ−γ３５Ｓを用いて決定すると、非特異結合は典型的には総結合の５％未満を示す。データは基礎（ベースライン）上の割合（パーセント）として表される。これらのＧＴＰ結合実験結果を、シグマプロットソフトウエアを用いて解析し、ＩＣ５０を決定する。その後、ＩＣ５０を使用して、チェンおよびプルゾフ（１９７３）Ｂｉｏｃｈｅｍ Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．２２（２３）：３０９９−１０８により記述されているようにＫｉを生成する。
【０１１８】
中性拮抗薬は、ＣＰ５５，９４０刺激ＧＴＰ結合活性をベースライン（このアッセイ法では添加するＣＰ５５，９４０または他の作用薬無しで、さらにいずれの試験化合物も無しで、膜に結合するＧＴＰレベル）に向かって、しかしそれ以下にならないように減少させる試験化合物である。
【０１１９】
対照的に、添加するＣＰ５５，９４０無しで、ＣＢ１逆作用薬は、受容体含有膜のＧＴＰ結合活性をベースライン未満まで減少させる。拮抗薬活性を示す試験化合物が、ＣＢ１作用薬無しではベースライン未満にＧＴＰ結合活性を減少させない場合、中性拮抗薬として特徴づけられる。
【０１２０】
このＧＴＰ結合アッセイ法において添加ＣＰ５５，９４０無しでＧＴＰ結合活性をベースラインより上に上昇させる拮抗薬試験化合物は、部分作用薬活性を有するものと特徴づけられる。好ましいＣＢ１拮抗薬は、そのような条件下では、作用薬ＣＰ５５，９４０により引き起こされる最大応答の１０％を超えてＧＴＰ結合活性を上昇させず、より好ましくは５％未満、最も好ましくは２％未満である。
【０１２１】
〔実施例９〕
〈ＭＤＣＫ細胞毒性アッセイ法〉
この実施例では、メイディン・ダービー・イヌ腎臓（Ｍａｄｉｎ Ｄａｒｂｙ ｃａｎｉｎｅ ｋｉｄｎｅｙ）（ＭＤＣＫ）細胞の細胞毒性アッセイ法を用いた化合物毒性の評価について説明する。
【０１２２】
１μＬの試験化合物を底が透明な９６−ウエルプレート（パッカード（ＰＡＣＫＡＲＤ）、コネチカット州メリデン）の各ウエルに添加し、アッセイ物中の化合物の最終濃度を１０μＭ、１００μＭまたは２００μＭとする。試験化合物を有さない溶媒を対照ウエルに添加する。
【０１２３】
ＭＤＣＫ細胞、ＡＴＣＣ番号ＣＣＬ−３４（アメリカンタイプカルチャーコレクション、バージニア州マナッサス）をＡＴＣＣ製品情報シートの指示に従い、滅菌条件で維持する。集密ＭＤＣＫ細胞をトリプシン処理し、採取し、温かい（３７℃）培地（ビタセル（ＶＥＴＡＣＥＬＬ）最小必須培地イーグル（Ｅａｇｌｅ）、ＡＴＣＣカタログ＃３０−２００３）を用い０．１×１０６細胞／ｍＬの濃度まで希釈する。細胞を有さない１００μＬの温かい培地を含む５つの標準曲線対照ウエルを除き、１００μＬの希釈細胞を各ウエルに添加する。その後、プレートを３７℃、９５％Ｏ２、５％ＣＯ２下で２時間、絶えず振盪させてインキュベートする。インキュベート後、５０μＬの哺乳類細胞溶解溶液（パッカード（ＰＡＣＫＡＲＤ）（コネチカット州メリデン）ＡＴＰ−ＬＩＴＥ−ＭルミネセントＡＴＰ検出キットから）を各ウエル毎に添加し、ウエルをパッカードトップシール（ＴＯＰＳＥＡＬ）ステッカーで被覆し、プレートを約７００ｒｐｍで適した振盪機上で２分間、振盪させる。
【０１２４】
未処置細胞に比べ、化合物により引き起こされる毒性によりＡＴＰ産生が減少する。ＡＴＰ−ＬＩＴＥ−ＭルミネセントＡＴＰ検出キットを一般に、製造者の指示に従い使用し、処置および未処置ＭＤＣＫ細胞中でのＡＴＰ産生を測定する。パッカードＡＴＰ ＬＩＴＥ−Ｍ試薬は、室温で平衡化される。平衡化されるとすぐに、凍結乾燥基質溶液を５．５ｍＬの基質緩衝液（キットから）中で再構成（ｒｅｃｏｎｓｔｉｔｕｔｅ）させる。凍結乾燥ＡＴＰ標準溶液を脱イオン水中で再構成させると、１０ｍＭストックが得られる。５つの対照ウエルでは、１０μＬの連続して希釈したパッカード標準を標準曲線対照ウエルの各々に添加し、その後の各ウエルの最終濃度を２００ｎＭ、１００ｎＭ、５０ｎＭ、２５ｎＭ、および１２．５ｎＭとする。パッカード基質溶液（５０μＬ）を全てのウエルに添加し、その後、被覆し、プレートを約７００ｒｐｍで、適した振盪機上、２分間振盪させる。白色パッカードステッカーを各プレートの底に付着させ、プレートを箔で包み、１０分間暗所に置くことにより試料を暗順応させる。その後、ルミネセンスカウンタ（例えば、パッカードトップカウントマイクロプレートシンチレーションおよびルミネセンスカウンタ（ＰＡＣＫＡＲＤ ＴＯＰＣＯＵＮＴ Ｍｉｃｒｏｐｌａｔｅ Ｓｃｉｎｔｉｌｌａｔｉｏｎ ａｎｄ Ｌｕｍｉｎｅｓｃｅｎｃｅ Ｃｏｕｎｔｅｒ）またはテカンスペクトラフルオアプラス（ＴＥＣＡＮ ＳＰＥＣＴＲＡＦＬＵＯＲ ＰＬＵＳ））を用いて２２℃でルミネセンスを測定し、ＡＴＰレベルを標準曲線から計算する。試験化合物で処置した細胞のＡＴＰレベルを、未処置細胞に対し決定したレベルと比較する。１０μＭの好ましい試験化合物で処置した細胞は未処置細胞の少なくとも８０％、好ましくは少なくとも９０％であるＡＴＰレベルを示す。１００μＭ濃度の試験化合物を使用する場合、好ましい試験化合物で処置した細胞は、未処置細胞で検出されるＡＴＰレベルの少なくとも５０％、好ましくは少なくとも８０％のＡＴＰレベルを示す。
【図面の簡単な説明】
【０１２５】
【図１】ラットにおけるＭＣＨＲ拮抗薬とＣＢ１拮抗薬の同時投与による、過剰摂食量の阻止を示すグラフであり、結果は、ビヒクルのみ、ＣＢ１拮抗薬のみ、ＭＣＨＲ１拮抗薬のみ、または示したような、ＣＢ１拮抗薬とＭＣＲＨ１拮抗薬の組み合わせの投与後１２時間の間の、ｇで表した摂取量として表し、「＊」はＰ＜０．０５を示し、「＊＊」はＰ＜０．００１を示すものである。
【特許請求の範囲】
【請求項１】
第１の治療的有効量の非毒性ＭＣＨＲ拮抗薬と第２の治療的有効量の非毒性ＣＢ１拮抗薬とを、生理学的に許容される担体または賦形剤と共に含み、前記第１の治療的有効量は最大推奨用量の１／２未満である、薬学的組成物。
【請求項２】
前記第１の治療的有効量は前記ＭＣＨＲ拮抗薬に対する最大推奨用量の１／４未満である、請求項１記載の薬学的組成物。
【請求項３】
前記第１の治療的有効量は前記ＭＣＨＲ拮抗薬に対する最大推奨用量の１０％未満である、請求項２記載の薬学的組成物。
【請求項４】
前記第２の治療的有効量は前記ＣＢ１拮抗薬に対する最大推奨用量の１／２未満である、請求項１記載の薬学的組成物。
【請求項５】
第１の治療的有効量の非毒性ＭＣＨＲ拮抗薬と第２の治療的有効量の非毒性ＣＢ１拮抗薬とを、生理学的に許容される担体または賦形剤と共に含み、前記第２の治療的有効量は前記ＣＢ１拮抗薬に対する最大推奨用量の１／２未満である、薬学的組成物。
【請求項６】
前記第２の治療的有効量は前記ＣＢ１拮抗薬に対する最大推奨用量の１／４未満である、請求項５記載の薬学的組成物。
【請求項７】
前記第２の治療的有効量は前記ＣＢ１拮抗薬に対する最大推奨用量の１０％未満である、請求項６記載の薬学的組成物。
【請求項８】
前記ＭＣＨＲ拮抗薬は検出可能なＭＣＨ受容体作用薬活性を有さない、請求項１〜７のいずれか一項記載の組成物。
【請求項９】
前記ＭＣＨＲ拮抗薬はＭＣＨＲ１拮抗薬である、請求項１〜７のいずれか一項記載の組成物。
【請求項１０】
持続放出剤形の請求項１〜９のいずれか一項記載の組成物。
【請求項１１】
経口投与用に製剤化された請求項１〜１０のいずれか一項記載の組成物。
【請求項１２】
（ｉ）非毒性ＭＣＨＲ拮抗薬を含む組成物を保持する容器と、
（ｉｉ）第１の治療的有効量のＭＣＨＲ拮抗薬を、第２の治療的有効量の非毒性ＣＢ１拮抗薬の投与と同時に、患者に投与することを示す使用説明書と、
を備え、前記第１の治療的有効量は前記ＭＣＨＲ拮抗薬に対する最大推奨用量の１／２未満である、パッケージ薬学的調製物。
【請求項１３】
前記第１の治療的有効量は前記ＭＣＨＲ拮抗薬に対する最大推奨用量の１／４未満である、請求項１２記載のパッケージ薬学的調製物。
【請求項１４】
前記第１の治療的有効量は前記ＭＣＨＲ拮抗薬に対する最大推奨用量の１０％未満である、請求項１３記載のパッケージ薬学的調製物。
【請求項１５】
前記ＭＣＨＲ拮抗薬は検出可能なＭＣＨ受容体作用薬活性を有さない、請求項１２〜１４のいずれか一項記載のパッケージ薬学的調製物。
【請求項１６】
前記ＭＣＨＲ拮抗薬はＭＣＨＲ１拮抗薬である、請求項１２〜１５のいずれか一項記載のパッケージ薬学的調製物。
【請求項１７】
持続放出剤形の請求項１２〜１６のいずれか一項記載のパッケージ薬学的調製物。
【請求項１８】
経口投与用に製剤化された請求項１２〜１７のいずれか一項記載のパッケージ薬学的調製物。
【請求項１９】
使用説明書は、患者における食物摂取または食欲を減少させるためにＭＣＨＲ拮抗薬を使用することを示す、請求項１２〜１８のいずれか一項記載のパッケージ薬学的調製物。
【請求項２０】
使用説明書は、患者における肥満を治療するためにＭＣＨＲ拮抗薬を使用することを示す、請求項１２〜１８のいずれか一項記載のパッケージ薬学的調製物。
【請求項２１】
（ｉ）非毒性ＭＣＨＲ拮抗薬と、
（ｉｉ）非毒性ＣＢ１拮抗薬と、
（ｉｉｉ）第１の治療的有効量のＭＣＨＲ拮抗薬と第２の治療的有効量のＣＢ１拮抗薬とを、食物摂取もしくは食欲を減少させるために、または肥満治療のために患者に同時投与することを示す使用説明書と、
を備え、前記第１の治療的有効量は前記ＭＣＨＲ拮抗薬に対する最大推奨用量の１／２未満である、パッケージ薬学的調製物。
【請求項２２】
前記第１の治療的有効量は前記ＭＣＨＲ拮抗薬に対する最大推奨用量の１／４未満である、請求項２１記載のパッケージ薬学的調製物。
【請求項２３】
前記第１の治療的有効量は前記ＭＣＨＲ拮抗薬に対する最大推奨用量の１０％未満である、請求項２２記載のパッケージ薬学的調製物。
【請求項２４】
前記第２の治療的有効量は前記ＣＢ１拮抗薬に対する最大推奨用量の１／２未満である、請求項２１記載のパッケージ薬学的調製物。
【請求項２５】
（ｉ）非毒性ＭＣＨＲ拮抗薬と、
（ｉｉ）非毒性ＣＢ１拮抗薬と、
（ｉｉｉ）第１の治療的有効量のＭＣＨＲ拮抗薬と第２の治療的有効量のＣＢ１拮抗薬とを、食物摂取もしくは食欲を減少させるために、または肥満治療のために患者に同時投与することを示す使用説明書と、
を備え、前記第２の治療的有効量は前記ＣＢ１拮抗薬に対する最大推奨用量の１／２未満である、パッケージ薬学的調製物。
【請求項２６】
前記第２の治療的有効量は前記ＣＢ１拮抗薬に対する最大推奨用量の１／４未満である、請求項２５記載のパッケージ薬学的調製物。
【請求項２７】
前記第２の治療的有効量は前記ＣＢ１拮抗薬に対する最大推奨用量の１０％未満である、請求項２６記載のパッケージ薬学的調製物。
【請求項２８】
前記ＭＣＨＲ拮抗薬とＣＢ１拮抗薬は同じ組成物中に存在する、請求項２１〜２７のいずれか一項記載のパッケージ薬学的調製物。
【請求項２９】
前記ＭＣＨＲ拮抗薬とＣＢ１拮抗薬は異なる容器中に存在する、請求項２１〜２７のいずれか一項記載のパッケージ薬学的調製物。
【請求項３０】
前記ＭＣＨＲ拮抗薬は検出可能なＭＣＨ受容体作用薬活性を有さない、請求項２１〜２９のいずれか一項記載のパッケージ薬学的調製物。
【請求項３１】
前記ＭＣＨＲ拮抗薬はＭＣＨＲ１拮抗薬である、請求項２１〜３０のいずれか一項記載のパッケージ薬学的調製物。
【請求項３２】
前記ＭＣＨＲ拮抗薬とＣＢ１拮抗薬は持続放出剤形で製剤化される、請求項２１〜３１のいずれか一項記載のパッケージ薬学的調製物。
【請求項３３】
前記ＭＣＨＲ拮抗薬とＣＢ１拮抗薬は経口投与用に製剤化される、請求項２１〜３２のいずれか一項記載のパッケージ薬学的調製物。
【請求項３４】
（ｉ）第１の治療的有効量の非毒性ＭＣＨＲ拮抗薬と、
（ｉｉ）第２の治療的有効量の非毒性ＣＢ１拮抗薬と、
を同時に患者に投与し、前記第１の治療的有効量は前記ＭＣＨＲ拮抗薬に対する最大推奨用量の１／２未満である工程と、
これにより前記患者における食欲または食物摂取を減少させる工程と、
を含む、患者における食欲または食物摂取を減少させるための方法。
【請求項３５】
前記第１の治療的有効量は前記ＭＣＨＲ拮抗薬に対する最大推奨用量の１／４未満である、請求項３４記載の方法。
【請求項３６】
前記第１の治療的有効量は前記ＭＣＨＲ拮抗薬に対する最大推奨用量の１０％未満である、請求項３５記載の方法。
【請求項３７】
前記第２の治療的有効量は前記ＣＢ１拮抗薬に対する最大推奨用量の１／２未満である、請求項３４記載の方法。
【請求項３８】
（ｉ）第１の治療的有効量の非毒性ＭＣＨＲ拮抗薬と、
（ｉｉ）第２の治療的有効量の非毒性ＣＢ１拮抗薬と、
を同時に患者に投与し、前記第２の治療的有効量は前記ＣＢ１拮抗薬に対する最大推奨用量の１／２未満である工程と、
これにより前記患者における食欲または食物摂取を減少させる工程と、
を含む、患者における食欲または食物摂取を減少させるための方法。
【請求項３９】
前記第２の治療的有効量は前記ＣＢ１拮抗薬に対する最大推奨用量の１／４未満である、請求項３８記載の方法。
【請求項４０】
前記第２の治療的有効量は前記ＣＢ１拮抗薬に対する最大推奨用量の１０％未満である、請求項３８記載の方法。
【請求項４１】
前記ＭＣＨＲ拮抗薬は検出可能なＭＣＨ受容体作用薬活性を有さない、請求項３４〜４０のいずれか一項記載の方法。
【請求項４２】
前記ＭＣＨＲ拮抗薬はＭＣＨＲ１拮抗薬である、請求項３４〜４０のいずれか一項記載の方法。
【請求項４３】
（ｉ）第１の治療的有効量の非毒性ＭＣＨＲ拮抗薬と、
（ｉｉ）第２の治療的有効量の非毒性ＣＢ１拮抗薬と、
を同時に患者に投与し、前記第１の治療的有効量は前記ＭＣＨＲ拮抗薬に対する最大推奨用量の１／２未満である工程と、
これにより前記患者における肥満度を減少させる工程と、
を含む、患者における肥満を治療するための方法。
【請求項４４】
前記第１の治療的有効量は前記ＭＣＨＲ拮抗薬に対する最大推奨用量の１／４未満である、請求項４３記載の方法。
【請求項４５】
前記第１の治療的有効量は前記ＭＣＨＲ拮抗薬に対する最大推奨用量の１０％未満である、請求項４４記載の方法。
【請求項４６】
前記第２の治療的有効量は前記ＣＢ１拮抗薬に対する最大推奨用量の１／２未満である、請求項４３記載の方法。
【請求項４７】
（ｉ）第１の治療的有効量の非毒性ＭＣＨＲ拮抗薬と、
（ｉｉ）第２の治療的有効量の非毒性ＣＢ１拮抗薬と、
を同時に患者に投与し、前記第２の治療的有効量は前記ＣＢ１拮抗薬に対する最大推奨用量の１／２未満である工程と、
これにより前記患者における肥満度を減少させる工程と、
を含む、患者における肥満を治療するための方法。
【請求項４８】
前記第２の治療的有効量は前記ＣＢ１拮抗薬に対する最大推奨用量の１／４未満である、請求項４７記載の方法。
【請求項４９】
前記第２の治療的有効量は前記ＣＢ１拮抗薬に対する最大推奨用量の１０％未満である、請求項４７記載の方法。
【請求項５０】
前記ＭＣＨＲ拮抗薬は検出可能なＭＣＨ受容体作用薬活性を有さない、請求項４３〜４９のいずれか一項記載の方法。
【請求項５１】
前記ＭＣＨＲ拮抗薬はＭＣＨＲ１拮抗薬である、請求項４３〜４９のいずれか一項記載の方法。
【請求項５２】
第１の治療的有効量の非毒性ＭＣＨＲ拮抗薬と第２の治療的有効量の非毒性ＣＢ１拮抗薬とを、生理学的に許容される担体または賦形剤と共に含み、前記第１の治療的有効量は、第２の抗肥満薬の同時投与無しで実施された、前記ＭＣＨＲ拮抗薬の合衆国臨床試験で有効性が証明された前記ＭＣＨＲ拮抗薬の最小用量より少ない組成物。
【請求項５３】
前記第２の治療的有効量は、第２の抗肥満薬の同時投与無しで実施された、前記ＣＢ１拮抗薬の合衆国臨床試験で有効性が証明された前記ＣＢ１拮抗薬の最小用量より少ない、請求項５２記載の組成物。
【請求項５４】
第１の治療的有効量の非毒性ＭＣＨＲ拮抗薬と第２の治療的有効量の非毒性ＣＢ１拮抗薬とを、生理学的に許容される担体または賦形剤と共に含み、前記第２の治療的有効量は、第２の抗肥満薬の同時投与無しで実施された、前記ＣＢ１拮抗薬の合衆国臨床試験で有効性が証明された前記ＣＢ１拮抗薬の最小用量より少ない組成物。
【請求項５５】
前記ＭＣＨＲ拮抗薬はＭＣＨＲ１拮抗薬である、請求項５２〜５４のいずれか一項記載の組成物。
【請求項５６】
持続放出剤形の請求項５２〜５５のいずれか一項記載の組成物。
【請求項５７】
経口投与用に製剤化された請求項５２〜５６のいずれか一項記載の組成物。
【請求項５８】
（ｉ）非毒性ＭＣＨＲ拮抗薬を含む組成物を保持する容器と、
（ｉｉ）第１の治療的有効量のＭＣＨＲ拮抗薬を、第２の治療的有効量の非毒性ＣＢ１拮抗薬の投与と同時に、患者に投与することを示す使用説明書と、
を備え、前記第１の治療的有効量は第２の抗肥満薬の同時投与無しで実施された、前記ＭＣＨＲ拮抗薬の合衆国臨床試験で有効性が証明された前記ＭＣＨＲ拮抗薬の最小用量より少ない、パッケージ薬学的調製物。
【請求項５９】
前記ＭＣＨＲ拮抗薬はＭＣＨＲ１拮抗薬である、請求項５８記載のパッケージ薬学的調製物。
【請求項６０】
持続放出剤形の請求項５８または請求項５９記載のパッケージ薬学的調製物。
【請求項６１】
経口投与用に製剤化された請求項５８〜６０のいずれか一項記載のパッケージ薬学的調製物。
【請求項６２】
前記使用説明書は、前記ＭＣＨＲを患者の食物摂取または食欲を減少させるために使用することを示す、請求項５８〜６１のいずれか一項記載のパッケージ薬学的調製物。
【請求項６３】
前記使用説明書は、前記ＭＣＨＲを患者において肥満を治療するために使用することを示す、請求項５８〜６１のいずれか一項記載のパッケージ薬学的調製物。
【請求項６４】
（ｉ）非毒性ＭＣＨＲ拮抗薬と、
（ｉｉ）非毒性ＣＢ１拮抗薬と、
（ｉｉｉ）第１の治療的有効量のＭＣＨＲ拮抗薬と第２の治療的有効量のＣＢ１拮抗薬とを、食物摂取もしくは食欲を減少させるために、または肥満治療のために患者に同時投与することを示す使用説明書と、
を備え、前記第１の治療的有効量は第２の抗肥満薬の同時投与無しで実施された、前記ＭＣＨＲ拮抗薬の合衆国臨床試験で有効性が証明された前記ＭＣＨＲ拮抗薬の最小用量より少ない、パッケージ薬学的調製物。
【請求項６５】
前記第２の治療的有効量は、第２の抗肥満薬の同時投与無しで実施された、前記ＣＢ１拮抗薬の合衆国臨床試験で有効性が証明された前記ＣＢ１拮抗薬の最小用量より少ない、請求項６４記載のパッケージ薬学的調製物。
【請求項６６】
（ｉ）非毒性ＭＣＨＲ拮抗薬と、
（ｉｉ）非毒性ＣＢ１拮抗薬と、
（ｉｉｉ）第１の治療的有効量のＭＣＨＲ拮抗薬と第２の治療的有効量のＣＢ１拮抗薬とを、食物摂取もしくは食欲を減少させるために、または肥満治療のために患者に同時投与することを示す使用説明書と、
を備え、前記第２の治療的有効量は、第２の抗肥満薬の同時投与無しで実施された、前記ＣＢ１拮抗薬の合衆国臨床試験で有効性が証明された前記ＣＢ１拮抗薬の最小用量より少ない、パッケージ薬学的調製物。
【請求項６７】
前記ＭＣＨＲ拮抗薬とＣＢ１拮抗薬は同じ組成物中に存在する、請求項６４〜６６のいずれか一項記載のパッケージ薬学的調製物。
【請求項６８】
前記ＭＣＨＲ拮抗薬とＣＢ１拮抗薬は異なる容器中に存在する、請求項６４〜６６のいずれか一項記載のパッケージ薬学的調製物。
【請求項６９】
前記ＭＣＨＲ拮抗薬はＭＣＨＲ１拮抗薬である、請求項６４〜６８のいずれか一項記載のパッケージ薬学的調製物。
【請求項７０】
前記ＭＣＨＲ拮抗薬とＣＢ１拮抗薬は持続放出剤形で製剤化される、請求項６４〜６９のいずれか一項記載のパッケージ薬学的調製物。
【請求項７１】
前記ＭＣＨＲ拮抗薬とＣＢ１拮抗薬は経口投与用に製剤化される、請求項６４〜７０のいずれか一項記載のパッケージ薬学的調製物。
【請求項７２】
（ｉ）第１の治療的有効量の非毒性ＭＣＨＲ拮抗薬と、
（ｉｉ）第２の治療的有効量の非毒性ＣＢ１拮抗薬と、
を同時に患者に投与し、前記第１の治療的有効量は第２の抗肥満薬の同時投与無しで実施された、前記ＭＣＨＲ拮抗薬の合衆国臨床試験で有効性が証明された前記ＭＣＨＲ拮抗薬の最小用量より少ない、工程と、
これにより前記患者における食欲または食物摂取を減少させる工程と、
を含む、患者における食欲または食物摂取を減少させるための方法。
【請求項７３】
前記第２の治療的有効量は、第２の抗肥満薬の同時投与無しで実施された、前記ＣＢ１拮抗薬の合衆国臨床試験で有効性が証明された前記ＣＢ１拮抗薬の最小用量より少ない、請求項７２記載の方法。
【請求項７４】
（ｉ）第１の治療的有効量の非毒性ＭＣＨＲ拮抗薬と、
（ｉｉ）第２の治療的有効量の非毒性ＣＢ１拮抗薬と、
を同時に患者に投与し、前記第２の治療的有効量は、第２の抗肥満薬の同時投与無しで実施された、前記ＣＢ１拮抗薬の合衆国臨床試験で有効性が証明された前記ＣＢ１拮抗薬の最小用量より少ない、工程と、
これにより前記患者における食欲または食物摂取を減少させる工程と、
を含む、患者における食欲または食物摂取を減少させるための方法。
【請求項７５】
前記ＭＣＨＲ拮抗薬はＭＣＨＲ１拮抗薬である、請求項７２〜７４のいずれか一項記載の方法。
【請求項７６】
（ｉ）第１の治療的有効量の非毒性ＭＣＨＲ拮抗薬と、
（ｉｉ）第２の治療的有効量の非毒性ＣＢ１拮抗薬と、
を同時に患者に投与し、前記第１の治療的有効量は第２の抗肥満薬の同時投与無しで実施された、前記ＭＣＨＲ拮抗薬の合衆国臨床試験で有効性が証明された前記ＭＣＨＲ拮抗薬の最小用量より少ない、工程と、
これにより前記患者における肥満度を減少させる工程と、
を含む、患者における肥満を治療するための方法。
【請求項７７】
前記第２の治療的有効量は、第２の抗肥満薬の同時投与無しで実施された、前記ＣＢ１拮抗薬の合衆国臨床試験で有効性が証明された前記ＣＢ１拮抗薬の最小用量より少ない、請求項７６記載の方法。
【請求項７８】
（ｉ）第１の治療的有効量の非毒性ＭＣＨＲ拮抗薬と、
（ｉｉ）第２の治療的有効量の非毒性ＣＢ１拮抗薬と、
を同時に患者に投与し、第２の抗肥満薬の同時投与無しで実施された、前記ＣＢ１拮抗薬の合衆国臨床試験で有効性が証明された前記ＣＢ１拮抗薬の最小用量より少ない、工程と、
これにより前記患者における肥満度を減少させる工程と、
を含む、患者における肥満を治療するための方法。
【請求項７９】
前記ＭＣＨＲ拮抗薬はＭＣＨＲ１拮抗薬である、請求項７６〜７８のいずれか一項記載の方法。
【請求項８０】
（ｉ）非毒性ＭＣＨＲ拮抗薬を含む組成物を保持する容器と、
（ｉｉ）第１の治療的有効量のＭＣＨＲ拮抗薬を、第２の治療的有効量の非毒性ＣＢ１拮抗薬の投与と同時に、患者に投与することを示す使用説明書と、
を備え、前記第１の治療的有効量は第２の抗肥満薬の同時投与無しで患者に投与するための前記ＭＣＨＲ拮抗薬の最小市場用量より少ない、パッケージ薬学的調製物。
【請求項８１】
前記ＭＣＨＲ拮抗薬はＭＣＨＲ１拮抗薬である、請求項８０記載のパッケージ薬学的調製物。
【請求項８２】
持続放出剤形の請求項８０または請求項８１記載のパッケージ薬学的調製物。
【請求項８３】
経口投与用に製剤化された請求項８０〜８２のいずれか一項記載のパッケージ薬学的調製物。
【請求項８４】
前記使用説明書は、前記ＭＣＨＲ拮抗薬を患者における食物摂取または食欲を減少させるために使用することを示す、請求項８０〜８３のいずれか一項記載のパッケージ薬学的調製物。
【請求項８５】
前記使用説明書は、前記ＭＣＨＲ拮抗薬を患者において肥満を治療するために使用することを示す、請求項８０〜８３のいずれか一項記載のパッケージ薬学的調製物。
【請求項８６】
（ｉ）非毒性ＭＣＨＲ拮抗薬と、
（ｉｉ）非毒性ＣＢ１拮抗薬と、
（ｉｉｉ）第１の治療的有効量のＭＣＨＲ拮抗薬と第２の治療的有効量のＣＢ１拮抗薬とを、食物摂取もしくは食欲を減少させるために、または肥満治療のために患者に同時投与することを示す使用説明書と、
を備え、前記第１の治療的有効量は第２の抗肥満薬の同時投与無しで患者に投与するための前記ＭＣＨＲ拮抗薬の最小市場用量より少ない、パッケージ薬学的調製物。
【請求項８７】
前記第２の治療的有効量は第２の抗肥満薬の同時投与無しで患者に投与するための前記ＣＢ１拮抗薬の最小市場用量より少ない、請求項８６記載のパッケージ薬学的調製物。
【請求項８８】
（ｉ）非毒性ＭＣＨＲ拮抗薬と、
（ｉｉ）非毒性ＣＢ１拮抗薬と、
（ｉｉｉ）第１の治療的有効量のＭＣＨＲ拮抗薬と第２の治療的有効量のＣＢ１拮抗薬とを、食物摂取もしくは食欲を減少させるために、または肥満治療のために患者に同時投与することを示す使用説明書と、
を備え、前記第２の治療的有効量は第２の抗肥満薬の同時投与無しで患者に投与するための前記ＣＢ１拮抗薬の最小市場用量より少ない、パッケージ薬学的調製物。
【請求項８９】
前記ＭＣＨＲ拮抗薬とＣＢ１拮抗薬は同じ組成物中に存在する、請求項８６〜８８のいずれか一項記載のパッケージ薬学的調製物。
【請求項９０】
前記ＭＣＨＲ拮抗薬とＣＢ１拮抗薬は異なる容器中に存在する、請求項８６〜８８のいずれか一項記載のパッケージ薬学的調製物。
【請求項９１】
前記ＭＣＨＲ拮抗薬はＭＣＨＲ１拮抗薬である、請求項８６〜９０のいずれか一項記載のパッケージ薬学的調製物。
【請求項９２】
前記ＭＣＨＲ拮抗薬とＣＢ１拮抗薬は持続放出剤形で製剤化される、請求項８６〜９１のいずれか一項記載のパッケージ薬学的調製物。
【請求項９３】
前記ＭＣＨＲ拮抗薬とＣＢ１拮抗薬は経口投与用に製剤化される、請求項８６〜９２のいずれか一項記載のパッケージ薬学的調製物。
【請求項９４】
（ｉ）第１の治療的有効量の非毒性ＭＣＨＲ拮抗薬と、
（ｉｉ）第２の治療的有効量の非毒性ＣＢ１拮抗薬と、
を同時に患者に投与し、前記第１の治療的有効量は第２の抗肥満薬の同時投与無しで患者に投与するための前記ＭＣＨＲ拮抗薬の最小市場用量より少ない、工程と、
これにより前記患者における食欲または食物摂取を減少させる工程と、
を含む、患者における食欲または食物摂取を減少させるための方法。
【請求項９５】
前記第２の治療的有効量は第２の抗肥満薬の同時投与無しで患者に投与するための前記ＣＢ１拮抗薬の最小市場用量より少ない、請求項９４記載の方法。
【請求項９６】
（ｉ）第１の治療的有効量の非毒性ＭＣＨＲ拮抗薬と、
（ｉｉ）第２の治療的有効量の非毒性ＣＢ１拮抗薬と、
を同時に患者に投与し、前記第２の治療的有効量は第２の抗肥満薬の同時投与無しで患者に投与するための前記ＣＢ１拮抗薬の最小市場用量より少ない、工程と、
これにより前記患者における食欲または食物摂取を減少させる工程と、
を含む、患者における食欲または食物摂取を減少させるための方法。
【請求項９７】
前記ＭＣＨＲ拮抗薬はＭＣＨＲ１拮抗薬である、請求項９４〜９６のいずれか一項記載の方法。
【請求項９８】
（ｉ）第１の治療的有効量の非毒性ＭＣＨＲ拮抗薬と、
（ｉｉ）第２の治療的有効量の非毒性ＣＢ１拮抗薬と、
を同時に患者に投与し、前記第１の治療的有効量は第２の抗肥満薬の同時投与無しで患者に投与するための前記ＭＣＨＲ拮抗薬の最小市場用量より少ない、工程と、
これにより前記患者における肥満度を減少させる工程と、
を含む、患者における肥満を治療するための方法。
【請求項９９】
前記第２の治療的有効量は第２の抗肥満薬の同時投与無しで患者に投与するための前記ＣＢ１拮抗薬の最小市場用量より少ない、請求項９８記載の方法。
【請求項１００】
（ｉ）第１の治療的有効量の非毒性ＭＣＨＲ拮抗薬と、
（ｉｉ）第２の治療的有効量の非毒性ＣＢ１拮抗薬と、
を同時に患者に投与し、前記第２の治療的有効量は第２の抗肥満薬の同時投与無しで患者に投与するための前記ＣＢ１拮抗薬の最小市場用量より少ない、工程と、
これにより前記患者における肥満度を減少させる工程と、
を含む、患者における肥満を治療するための方法。
【請求項１０１】
前記ＭＣＨＲ拮抗薬はＭＣＨＲ１拮抗薬である、請求項９８〜１００のいずれか一項記載の方法。
【請求項１０２】
哺乳類に治療的有効量で同時に投与すると哺乳類の食物摂取に少なくとも相加効果を示すＭＣＨＲ拮抗薬とＣＢ１拮抗薬を選択する工程と、それから、ＭＣＨＲ拮抗薬とＣＢ１拮抗薬とを含む薬学的組成物のための活性成分を同定する工程と、を含む、ＭＣＨＲ拮抗薬とＣＢ１拮抗薬とを含む薬学的組成物のための活性成分を同定するための方法。
【請求項１０３】
（ｉ）哺乳類に治療的有効量で同時に投与すると哺乳類の食物摂取に少なくとも相加効果を有するＭＣＨＲ拮抗薬とＣＢ１拮抗薬を同定する工程と、
（ｉｉ）第１の治療的有効量のＭＣＨＲ拮抗薬と第２の治療的有効量のＣＢ１拮抗薬とを生理学的に許容される担体または賦形剤と組み合わせる工程と、
を含む薬学的組成物を調製するための方法。
【請求項１０４】
（ｉ）哺乳類に治療的有効量で同時に投与すると哺乳類の食物摂取に少なくとも相加効果を有するＭＣＨＲ拮抗薬とＣＢ１拮抗薬を同定する工程と、
（ｉｉ）前記ＭＣＨＲ拮抗薬と前記ＣＢ１拮抗薬とを、第１の治療的有効量のＭＣＨＲ拮抗薬と第２の治療的有効量のＣＢ１拮抗薬を、食物摂取もしくは食欲を減少させるために、または肥満治療のために患者に同時投与することを示す使用説明書と共にパッケージする工程と、
を含むパッケージ薬学的調製物を調製するための方法。
【請求項１０５】
哺乳類に治療的有効量で同時に投与すると哺乳類の食物摂取に少なくとも相加効果を有するＭＣＨＲ拮抗薬とＣＢ１拮抗薬を選択する工程と、それから、患者に同時投与するための治療薬を同定する工程と、を含む、患者に同時投与するための治療薬を同定するための方法。
【請求項１０６】
（ｉ）第１の治療的有効量のＭＣＨＲ拮抗薬を用いて、ＣＢ１拮抗薬の同時投与無しで処置した哺乳類における食物摂取に対するＭＣＨＲ拮抗薬の効果を決定する工程と、
（ｉｉ）第２の治療的有効量のＣＢ１拮抗薬を用いて、ＭＣＨＲ拮抗薬の同時投与無しで処置した哺乳類における食物摂取に対するＣＢ１拮抗薬の効果を決定する工程と、
（ｉｉｉ）前記第１の治療的有効量の前記ＭＣＨＲ拮抗薬と前記第２の治療的有効量の前記ＣＢ１拮抗薬を用いて同時に処置した哺乳類における食物摂取に対するＭＣＨＲ拮抗薬とＣＢ１拮抗薬の効果を決定する工程と、
（ｉｖ）必要に応じて、異なるＭＣＨＲ拮抗薬または異なるＣＢ１拮抗薬を用いて工程（ｉ）〜（ｉｉｉ）を繰り返す工程と、
（ｖ）工程（ｉｉｉ）で決定した食物摂取に対する効果が工程（ｉ）および（ｉｉ）で決定した食物摂取に対する効果の和と等しいまたはそれ以上であるＭＣＨＲ拮抗薬とＣＢ１拮抗薬を選択する工程と、
以上から、ＭＣＨＲ拮抗薬とＣＢ１拮抗薬とを含む薬学的組成物に対する活性成分を同定する工程と、
を含む、ＭＣＨＲ拮抗薬とＣＢ１拮抗薬とを含む薬学的組成物に対する活性成分を同定するための方法。
【請求項１０７】
（ｉ）第１の治療的有効量のＭＣＨＲ拮抗薬を用いて、ＣＢ１拮抗薬の同時投与無しで処置した哺乳類における食物摂取に対するＭＣＨＲ拮抗薬の効果を決定する工程と、
（ｉｉ）第２の治療的有効量のＣＢ１拮抗薬を用いて、ＭＣＨＲ拮抗薬の同時投与無しで処置した哺乳類における食物摂取に対するＣＢ１拮抗薬の効果を決定する工程と、
（ｉｉｉ）前記第１の治療的有効量の前記ＭＣＨＲ拮抗薬と前記第２の治療的有効量の前記ＣＢ１拮抗薬を用いて同時に処置した哺乳類における食物摂取に対する前記ＭＣＨＲ拮抗薬と前記ＣＢ１拮抗薬の効果を決定する工程と、
（ｉｖ）必要に応じて、異なるＭＣＨＲ拮抗薬または異なるＣＢ１拮抗薬を用いて工程（ｉ）〜（ｉｉｉ）を繰り返す工程と、
（ｖ）工程（ｉｉｉ）で決定した食物摂取に対する効果が工程（ｉ）および（ｉｉ）で決定した食物摂取に対する効果の和と等しいまたはそれ以上であるＭＣＨＲ拮抗薬とＣＢ１拮抗薬を選択する工程と、
（ｖｉ）第１の治療的有効量のＭＣＨＲ拮抗薬と第２の治療的有効量のＣＢ１拮抗薬とを生理学的に許容される担体または賦形剤と共に組み合わせる工程と、
を含む薬学的組成物を調製するための方法。
【請求項１０８】
（ａ）ＣＢ１を含む第１の細胞膜調製物を、
（ｉ）標識ＧＴＰと、
（ｉｉ）ＣＢ１作用薬と、
（ｉｉｉ）試験化合物と、
に接触させ、試験膜調製物を獲得する工程と、
（ｂ）ＣＢ１を含む第２の細胞膜調製物を
（ｉ）標識ＧＴＰと、
（ｉｉ）ＣＢ１作用薬と、
に接触させ、対照膜調製物を獲得する工程と、
を含み、工程（ａ）および（ｂ）は、同時にまたはいずれかの順で、ＧＴＰがＣＢ１に結合するのに適した条件下で実施し、さらに
（ｃ）同時にまたはいずれかの順で、
（ｉ）前記試験膜調製物中の結合した標識ＧＴＰ量を示す試験シグナルと、
（ｉｉ）前記対照膜調製物中の結合した標識ＧＴＰの量を示す対照シグナルと、
を検出する工程と、
（ｄ）前記試験シグナルを前記対照シグナルと比較する工程と、
以上から、前記試験化合物のＣＢ１拮抗薬活性を決定する工程と、
を含む、試験化合物のＣＢ１拮抗薬活性を決定するための方法。
【請求項１０９】
前記ＧＴＰは放射活性ラベルを含み、前記シグナルは放射性崩壊である、請求項１０８記載の方法。
【請求項１１０】
前記試験シグナルおよび前記対照シグナルは液体シンチレーション分光法を用いて検出される、請求項１０９記載の方法。
【請求項１】
第１の治療的有効量の非毒性ＭＣＨＲ拮抗薬と第２の治療的有効量の非毒性ＣＢ１拮抗薬とを、生理学的に許容される担体または賦形剤と共に含み、前記第１の治療的有効量は最大推奨用量の１／２未満である、薬学的組成物。
【請求項２】
前記第１の治療的有効量は前記ＭＣＨＲ拮抗薬に対する最大推奨用量の１／４未満である、請求項１記載の薬学的組成物。
【請求項３】
前記第１の治療的有効量は前記ＭＣＨＲ拮抗薬に対する最大推奨用量の１０％未満である、請求項２記載の薬学的組成物。
【請求項４】
前記第２の治療的有効量は前記ＣＢ１拮抗薬に対する最大推奨用量の１／２未満である、請求項１記載の薬学的組成物。
【請求項５】
第１の治療的有効量の非毒性ＭＣＨＲ拮抗薬と第２の治療的有効量の非毒性ＣＢ１拮抗薬とを、生理学的に許容される担体または賦形剤と共に含み、前記第２の治療的有効量は前記ＣＢ１拮抗薬に対する最大推奨用量の１／２未満である、薬学的組成物。
【請求項６】
前記第２の治療的有効量は前記ＣＢ１拮抗薬に対する最大推奨用量の１／４未満である、請求項５記載の薬学的組成物。
【請求項７】
前記第２の治療的有効量は前記ＣＢ１拮抗薬に対する最大推奨用量の１０％未満である、請求項６記載の薬学的組成物。
【請求項８】
前記ＭＣＨＲ拮抗薬は検出可能なＭＣＨ受容体作用薬活性を有さない、請求項１〜７のいずれか一項記載の組成物。
【請求項９】
前記ＭＣＨＲ拮抗薬はＭＣＨＲ１拮抗薬である、請求項１〜７のいずれか一項記載の組成物。
【請求項１０】
持続放出剤形の請求項１〜９のいずれか一項記載の組成物。
【請求項１１】
経口投与用に製剤化された請求項１〜１０のいずれか一項記載の組成物。
【請求項１２】
（ｉ）非毒性ＭＣＨＲ拮抗薬を含む組成物を保持する容器と、
（ｉｉ）第１の治療的有効量のＭＣＨＲ拮抗薬を、第２の治療的有効量の非毒性ＣＢ１拮抗薬の投与と同時に、患者に投与することを示す使用説明書と、
を備え、前記第１の治療的有効量は前記ＭＣＨＲ拮抗薬に対する最大推奨用量の１／２未満である、パッケージ薬学的調製物。
【請求項１３】
前記第１の治療的有効量は前記ＭＣＨＲ拮抗薬に対する最大推奨用量の１／４未満である、請求項１２記載のパッケージ薬学的調製物。
【請求項１４】
前記第１の治療的有効量は前記ＭＣＨＲ拮抗薬に対する最大推奨用量の１０％未満である、請求項１３記載のパッケージ薬学的調製物。
【請求項１５】
前記ＭＣＨＲ拮抗薬は検出可能なＭＣＨ受容体作用薬活性を有さない、請求項１２〜１４のいずれか一項記載のパッケージ薬学的調製物。
【請求項１６】
前記ＭＣＨＲ拮抗薬はＭＣＨＲ１拮抗薬である、請求項１２〜１５のいずれか一項記載のパッケージ薬学的調製物。
【請求項１７】
持続放出剤形の請求項１２〜１６のいずれか一項記載のパッケージ薬学的調製物。
【請求項１８】
経口投与用に製剤化された請求項１２〜１７のいずれか一項記載のパッケージ薬学的調製物。
【請求項１９】
使用説明書は、患者における食物摂取または食欲を減少させるためにＭＣＨＲ拮抗薬を使用することを示す、請求項１２〜１８のいずれか一項記載のパッケージ薬学的調製物。
【請求項２０】
使用説明書は、患者における肥満を治療するためにＭＣＨＲ拮抗薬を使用することを示す、請求項１２〜１８のいずれか一項記載のパッケージ薬学的調製物。
【請求項２１】
（ｉ）非毒性ＭＣＨＲ拮抗薬と、
（ｉｉ）非毒性ＣＢ１拮抗薬と、
（ｉｉｉ）第１の治療的有効量のＭＣＨＲ拮抗薬と第２の治療的有効量のＣＢ１拮抗薬とを、食物摂取もしくは食欲を減少させるために、または肥満治療のために患者に同時投与することを示す使用説明書と、
を備え、前記第１の治療的有効量は前記ＭＣＨＲ拮抗薬に対する最大推奨用量の１／２未満である、パッケージ薬学的調製物。
【請求項２２】
前記第１の治療的有効量は前記ＭＣＨＲ拮抗薬に対する最大推奨用量の１／４未満である、請求項２１記載のパッケージ薬学的調製物。
【請求項２３】
前記第１の治療的有効量は前記ＭＣＨＲ拮抗薬に対する最大推奨用量の１０％未満である、請求項２２記載のパッケージ薬学的調製物。
【請求項２４】
前記第２の治療的有効量は前記ＣＢ１拮抗薬に対する最大推奨用量の１／２未満である、請求項２１記載のパッケージ薬学的調製物。
【請求項２５】
（ｉ）非毒性ＭＣＨＲ拮抗薬と、
（ｉｉ）非毒性ＣＢ１拮抗薬と、
（ｉｉｉ）第１の治療的有効量のＭＣＨＲ拮抗薬と第２の治療的有効量のＣＢ１拮抗薬とを、食物摂取もしくは食欲を減少させるために、または肥満治療のために患者に同時投与することを示す使用説明書と、
を備え、前記第２の治療的有効量は前記ＣＢ１拮抗薬に対する最大推奨用量の１／２未満である、パッケージ薬学的調製物。
【請求項２６】
前記第２の治療的有効量は前記ＣＢ１拮抗薬に対する最大推奨用量の１／４未満である、請求項２５記載のパッケージ薬学的調製物。
【請求項２７】
前記第２の治療的有効量は前記ＣＢ１拮抗薬に対する最大推奨用量の１０％未満である、請求項２６記載のパッケージ薬学的調製物。
【請求項２８】
前記ＭＣＨＲ拮抗薬とＣＢ１拮抗薬は同じ組成物中に存在する、請求項２１〜２７のいずれか一項記載のパッケージ薬学的調製物。
【請求項２９】
前記ＭＣＨＲ拮抗薬とＣＢ１拮抗薬は異なる容器中に存在する、請求項２１〜２７のいずれか一項記載のパッケージ薬学的調製物。
【請求項３０】
前記ＭＣＨＲ拮抗薬は検出可能なＭＣＨ受容体作用薬活性を有さない、請求項２１〜２９のいずれか一項記載のパッケージ薬学的調製物。
【請求項３１】
前記ＭＣＨＲ拮抗薬はＭＣＨＲ１拮抗薬である、請求項２１〜３０のいずれか一項記載のパッケージ薬学的調製物。
【請求項３２】
前記ＭＣＨＲ拮抗薬とＣＢ１拮抗薬は持続放出剤形で製剤化される、請求項２１〜３１のいずれか一項記載のパッケージ薬学的調製物。
【請求項３３】
前記ＭＣＨＲ拮抗薬とＣＢ１拮抗薬は経口投与用に製剤化される、請求項２１〜３２のいずれか一項記載のパッケージ薬学的調製物。
【請求項３４】
（ｉ）第１の治療的有効量の非毒性ＭＣＨＲ拮抗薬と、
（ｉｉ）第２の治療的有効量の非毒性ＣＢ１拮抗薬と、
を同時に患者に投与し、前記第１の治療的有効量は前記ＭＣＨＲ拮抗薬に対する最大推奨用量の１／２未満である工程と、
これにより前記患者における食欲または食物摂取を減少させる工程と、
を含む、患者における食欲または食物摂取を減少させるための方法。
【請求項３５】
前記第１の治療的有効量は前記ＭＣＨＲ拮抗薬に対する最大推奨用量の１／４未満である、請求項３４記載の方法。
【請求項３６】
前記第１の治療的有効量は前記ＭＣＨＲ拮抗薬に対する最大推奨用量の１０％未満である、請求項３５記載の方法。
【請求項３７】
前記第２の治療的有効量は前記ＣＢ１拮抗薬に対する最大推奨用量の１／２未満である、請求項３４記載の方法。
【請求項３８】
（ｉ）第１の治療的有効量の非毒性ＭＣＨＲ拮抗薬と、
（ｉｉ）第２の治療的有効量の非毒性ＣＢ１拮抗薬と、
を同時に患者に投与し、前記第２の治療的有効量は前記ＣＢ１拮抗薬に対する最大推奨用量の１／２未満である工程と、
これにより前記患者における食欲または食物摂取を減少させる工程と、
を含む、患者における食欲または食物摂取を減少させるための方法。
【請求項３９】
前記第２の治療的有効量は前記ＣＢ１拮抗薬に対する最大推奨用量の１／４未満である、請求項３８記載の方法。
【請求項４０】
前記第２の治療的有効量は前記ＣＢ１拮抗薬に対する最大推奨用量の１０％未満である、請求項３８記載の方法。
【請求項４１】
前記ＭＣＨＲ拮抗薬は検出可能なＭＣＨ受容体作用薬活性を有さない、請求項３４〜４０のいずれか一項記載の方法。
【請求項４２】
前記ＭＣＨＲ拮抗薬はＭＣＨＲ１拮抗薬である、請求項３４〜４０のいずれか一項記載の方法。
【請求項４３】
（ｉ）第１の治療的有効量の非毒性ＭＣＨＲ拮抗薬と、
（ｉｉ）第２の治療的有効量の非毒性ＣＢ１拮抗薬と、
を同時に患者に投与し、前記第１の治療的有効量は前記ＭＣＨＲ拮抗薬に対する最大推奨用量の１／２未満である工程と、
これにより前記患者における肥満度を減少させる工程と、
を含む、患者における肥満を治療するための方法。
【請求項４４】
前記第１の治療的有効量は前記ＭＣＨＲ拮抗薬に対する最大推奨用量の１／４未満である、請求項４３記載の方法。
【請求項４５】
前記第１の治療的有効量は前記ＭＣＨＲ拮抗薬に対する最大推奨用量の１０％未満である、請求項４４記載の方法。
【請求項４６】
前記第２の治療的有効量は前記ＣＢ１拮抗薬に対する最大推奨用量の１／２未満である、請求項４３記載の方法。
【請求項４７】
（ｉ）第１の治療的有効量の非毒性ＭＣＨＲ拮抗薬と、
（ｉｉ）第２の治療的有効量の非毒性ＣＢ１拮抗薬と、
を同時に患者に投与し、前記第２の治療的有効量は前記ＣＢ１拮抗薬に対する最大推奨用量の１／２未満である工程と、
これにより前記患者における肥満度を減少させる工程と、
を含む、患者における肥満を治療するための方法。
【請求項４８】
前記第２の治療的有効量は前記ＣＢ１拮抗薬に対する最大推奨用量の１／４未満である、請求項４７記載の方法。
【請求項４９】
前記第２の治療的有効量は前記ＣＢ１拮抗薬に対する最大推奨用量の１０％未満である、請求項４７記載の方法。
【請求項５０】
前記ＭＣＨＲ拮抗薬は検出可能なＭＣＨ受容体作用薬活性を有さない、請求項４３〜４９のいずれか一項記載の方法。
【請求項５１】
前記ＭＣＨＲ拮抗薬はＭＣＨＲ１拮抗薬である、請求項４３〜４９のいずれか一項記載の方法。
【請求項５２】
第１の治療的有効量の非毒性ＭＣＨＲ拮抗薬と第２の治療的有効量の非毒性ＣＢ１拮抗薬とを、生理学的に許容される担体または賦形剤と共に含み、前記第１の治療的有効量は、第２の抗肥満薬の同時投与無しで実施された、前記ＭＣＨＲ拮抗薬の合衆国臨床試験で有効性が証明された前記ＭＣＨＲ拮抗薬の最小用量より少ない組成物。
【請求項５３】
前記第２の治療的有効量は、第２の抗肥満薬の同時投与無しで実施された、前記ＣＢ１拮抗薬の合衆国臨床試験で有効性が証明された前記ＣＢ１拮抗薬の最小用量より少ない、請求項５２記載の組成物。
【請求項５４】
第１の治療的有効量の非毒性ＭＣＨＲ拮抗薬と第２の治療的有効量の非毒性ＣＢ１拮抗薬とを、生理学的に許容される担体または賦形剤と共に含み、前記第２の治療的有効量は、第２の抗肥満薬の同時投与無しで実施された、前記ＣＢ１拮抗薬の合衆国臨床試験で有効性が証明された前記ＣＢ１拮抗薬の最小用量より少ない組成物。
【請求項５５】
前記ＭＣＨＲ拮抗薬はＭＣＨＲ１拮抗薬である、請求項５２〜５４のいずれか一項記載の組成物。
【請求項５６】
持続放出剤形の請求項５２〜５５のいずれか一項記載の組成物。
【請求項５７】
経口投与用に製剤化された請求項５２〜５６のいずれか一項記載の組成物。
【請求項５８】
（ｉ）非毒性ＭＣＨＲ拮抗薬を含む組成物を保持する容器と、
（ｉｉ）第１の治療的有効量のＭＣＨＲ拮抗薬を、第２の治療的有効量の非毒性ＣＢ１拮抗薬の投与と同時に、患者に投与することを示す使用説明書と、
を備え、前記第１の治療的有効量は第２の抗肥満薬の同時投与無しで実施された、前記ＭＣＨＲ拮抗薬の合衆国臨床試験で有効性が証明された前記ＭＣＨＲ拮抗薬の最小用量より少ない、パッケージ薬学的調製物。
【請求項５９】
前記ＭＣＨＲ拮抗薬はＭＣＨＲ１拮抗薬である、請求項５８記載のパッケージ薬学的調製物。
【請求項６０】
持続放出剤形の請求項５８または請求項５９記載のパッケージ薬学的調製物。
【請求項６１】
経口投与用に製剤化された請求項５８〜６０のいずれか一項記載のパッケージ薬学的調製物。
【請求項６２】
前記使用説明書は、前記ＭＣＨＲを患者の食物摂取または食欲を減少させるために使用することを示す、請求項５８〜６１のいずれか一項記載のパッケージ薬学的調製物。
【請求項６３】
前記使用説明書は、前記ＭＣＨＲを患者において肥満を治療するために使用することを示す、請求項５８〜６１のいずれか一項記載のパッケージ薬学的調製物。
【請求項６４】
（ｉ）非毒性ＭＣＨＲ拮抗薬と、
（ｉｉ）非毒性ＣＢ１拮抗薬と、
（ｉｉｉ）第１の治療的有効量のＭＣＨＲ拮抗薬と第２の治療的有効量のＣＢ１拮抗薬とを、食物摂取もしくは食欲を減少させるために、または肥満治療のために患者に同時投与することを示す使用説明書と、
を備え、前記第１の治療的有効量は第２の抗肥満薬の同時投与無しで実施された、前記ＭＣＨＲ拮抗薬の合衆国臨床試験で有効性が証明された前記ＭＣＨＲ拮抗薬の最小用量より少ない、パッケージ薬学的調製物。
【請求項６５】
前記第２の治療的有効量は、第２の抗肥満薬の同時投与無しで実施された、前記ＣＢ１拮抗薬の合衆国臨床試験で有効性が証明された前記ＣＢ１拮抗薬の最小用量より少ない、請求項６４記載のパッケージ薬学的調製物。
【請求項６６】
（ｉ）非毒性ＭＣＨＲ拮抗薬と、
（ｉｉ）非毒性ＣＢ１拮抗薬と、
（ｉｉｉ）第１の治療的有効量のＭＣＨＲ拮抗薬と第２の治療的有効量のＣＢ１拮抗薬とを、食物摂取もしくは食欲を減少させるために、または肥満治療のために患者に同時投与することを示す使用説明書と、
を備え、前記第２の治療的有効量は、第２の抗肥満薬の同時投与無しで実施された、前記ＣＢ１拮抗薬の合衆国臨床試験で有効性が証明された前記ＣＢ１拮抗薬の最小用量より少ない、パッケージ薬学的調製物。
【請求項６７】
前記ＭＣＨＲ拮抗薬とＣＢ１拮抗薬は同じ組成物中に存在する、請求項６４〜６６のいずれか一項記載のパッケージ薬学的調製物。
【請求項６８】
前記ＭＣＨＲ拮抗薬とＣＢ１拮抗薬は異なる容器中に存在する、請求項６４〜６６のいずれか一項記載のパッケージ薬学的調製物。
【請求項６９】
前記ＭＣＨＲ拮抗薬はＭＣＨＲ１拮抗薬である、請求項６４〜６８のいずれか一項記載のパッケージ薬学的調製物。
【請求項７０】
前記ＭＣＨＲ拮抗薬とＣＢ１拮抗薬は持続放出剤形で製剤化される、請求項６４〜６９のいずれか一項記載のパッケージ薬学的調製物。
【請求項７１】
前記ＭＣＨＲ拮抗薬とＣＢ１拮抗薬は経口投与用に製剤化される、請求項６４〜７０のいずれか一項記載のパッケージ薬学的調製物。
【請求項７２】
（ｉ）第１の治療的有効量の非毒性ＭＣＨＲ拮抗薬と、
（ｉｉ）第２の治療的有効量の非毒性ＣＢ１拮抗薬と、
を同時に患者に投与し、前記第１の治療的有効量は第２の抗肥満薬の同時投与無しで実施された、前記ＭＣＨＲ拮抗薬の合衆国臨床試験で有効性が証明された前記ＭＣＨＲ拮抗薬の最小用量より少ない、工程と、
これにより前記患者における食欲または食物摂取を減少させる工程と、
を含む、患者における食欲または食物摂取を減少させるための方法。
【請求項７３】
前記第２の治療的有効量は、第２の抗肥満薬の同時投与無しで実施された、前記ＣＢ１拮抗薬の合衆国臨床試験で有効性が証明された前記ＣＢ１拮抗薬の最小用量より少ない、請求項７２記載の方法。
【請求項７４】
（ｉ）第１の治療的有効量の非毒性ＭＣＨＲ拮抗薬と、
（ｉｉ）第２の治療的有効量の非毒性ＣＢ１拮抗薬と、
を同時に患者に投与し、前記第２の治療的有効量は、第２の抗肥満薬の同時投与無しで実施された、前記ＣＢ１拮抗薬の合衆国臨床試験で有効性が証明された前記ＣＢ１拮抗薬の最小用量より少ない、工程と、
これにより前記患者における食欲または食物摂取を減少させる工程と、
を含む、患者における食欲または食物摂取を減少させるための方法。
【請求項７５】
前記ＭＣＨＲ拮抗薬はＭＣＨＲ１拮抗薬である、請求項７２〜７４のいずれか一項記載の方法。
【請求項７６】
（ｉ）第１の治療的有効量の非毒性ＭＣＨＲ拮抗薬と、
（ｉｉ）第２の治療的有効量の非毒性ＣＢ１拮抗薬と、
を同時に患者に投与し、前記第１の治療的有効量は第２の抗肥満薬の同時投与無しで実施された、前記ＭＣＨＲ拮抗薬の合衆国臨床試験で有効性が証明された前記ＭＣＨＲ拮抗薬の最小用量より少ない、工程と、
これにより前記患者における肥満度を減少させる工程と、
を含む、患者における肥満を治療するための方法。
【請求項７７】
前記第２の治療的有効量は、第２の抗肥満薬の同時投与無しで実施された、前記ＣＢ１拮抗薬の合衆国臨床試験で有効性が証明された前記ＣＢ１拮抗薬の最小用量より少ない、請求項７６記載の方法。
【請求項７８】
（ｉ）第１の治療的有効量の非毒性ＭＣＨＲ拮抗薬と、
（ｉｉ）第２の治療的有効量の非毒性ＣＢ１拮抗薬と、
を同時に患者に投与し、第２の抗肥満薬の同時投与無しで実施された、前記ＣＢ１拮抗薬の合衆国臨床試験で有効性が証明された前記ＣＢ１拮抗薬の最小用量より少ない、工程と、
これにより前記患者における肥満度を減少させる工程と、
を含む、患者における肥満を治療するための方法。
【請求項７９】
前記ＭＣＨＲ拮抗薬はＭＣＨＲ１拮抗薬である、請求項７６〜７８のいずれか一項記載の方法。
【請求項８０】
（ｉ）非毒性ＭＣＨＲ拮抗薬を含む組成物を保持する容器と、
（ｉｉ）第１の治療的有効量のＭＣＨＲ拮抗薬を、第２の治療的有効量の非毒性ＣＢ１拮抗薬の投与と同時に、患者に投与することを示す使用説明書と、
を備え、前記第１の治療的有効量は第２の抗肥満薬の同時投与無しで患者に投与するための前記ＭＣＨＲ拮抗薬の最小市場用量より少ない、パッケージ薬学的調製物。
【請求項８１】
前記ＭＣＨＲ拮抗薬はＭＣＨＲ１拮抗薬である、請求項８０記載のパッケージ薬学的調製物。
【請求項８２】
持続放出剤形の請求項８０または請求項８１記載のパッケージ薬学的調製物。
【請求項８３】
経口投与用に製剤化された請求項８０〜８２のいずれか一項記載のパッケージ薬学的調製物。
【請求項８４】
前記使用説明書は、前記ＭＣＨＲ拮抗薬を患者における食物摂取または食欲を減少させるために使用することを示す、請求項８０〜８３のいずれか一項記載のパッケージ薬学的調製物。
【請求項８５】
前記使用説明書は、前記ＭＣＨＲ拮抗薬を患者において肥満を治療するために使用することを示す、請求項８０〜８３のいずれか一項記載のパッケージ薬学的調製物。
【請求項８６】
（ｉ）非毒性ＭＣＨＲ拮抗薬と、
（ｉｉ）非毒性ＣＢ１拮抗薬と、
（ｉｉｉ）第１の治療的有効量のＭＣＨＲ拮抗薬と第２の治療的有効量のＣＢ１拮抗薬とを、食物摂取もしくは食欲を減少させるために、または肥満治療のために患者に同時投与することを示す使用説明書と、
を備え、前記第１の治療的有効量は第２の抗肥満薬の同時投与無しで患者に投与するための前記ＭＣＨＲ拮抗薬の最小市場用量より少ない、パッケージ薬学的調製物。
【請求項８７】
前記第２の治療的有効量は第２の抗肥満薬の同時投与無しで患者に投与するための前記ＣＢ１拮抗薬の最小市場用量より少ない、請求項８６記載のパッケージ薬学的調製物。
【請求項８８】
（ｉ）非毒性ＭＣＨＲ拮抗薬と、
（ｉｉ）非毒性ＣＢ１拮抗薬と、
（ｉｉｉ）第１の治療的有効量のＭＣＨＲ拮抗薬と第２の治療的有効量のＣＢ１拮抗薬とを、食物摂取もしくは食欲を減少させるために、または肥満治療のために患者に同時投与することを示す使用説明書と、
を備え、前記第２の治療的有効量は第２の抗肥満薬の同時投与無しで患者に投与するための前記ＣＢ１拮抗薬の最小市場用量より少ない、パッケージ薬学的調製物。
【請求項８９】
前記ＭＣＨＲ拮抗薬とＣＢ１拮抗薬は同じ組成物中に存在する、請求項８６〜８８のいずれか一項記載のパッケージ薬学的調製物。
【請求項９０】
前記ＭＣＨＲ拮抗薬とＣＢ１拮抗薬は異なる容器中に存在する、請求項８６〜８８のいずれか一項記載のパッケージ薬学的調製物。
【請求項９１】
前記ＭＣＨＲ拮抗薬はＭＣＨＲ１拮抗薬である、請求項８６〜９０のいずれか一項記載のパッケージ薬学的調製物。
【請求項９２】
前記ＭＣＨＲ拮抗薬とＣＢ１拮抗薬は持続放出剤形で製剤化される、請求項８６〜９１のいずれか一項記載のパッケージ薬学的調製物。
【請求項９３】
前記ＭＣＨＲ拮抗薬とＣＢ１拮抗薬は経口投与用に製剤化される、請求項８６〜９２のいずれか一項記載のパッケージ薬学的調製物。
【請求項９４】
（ｉ）第１の治療的有効量の非毒性ＭＣＨＲ拮抗薬と、
（ｉｉ）第２の治療的有効量の非毒性ＣＢ１拮抗薬と、
を同時に患者に投与し、前記第１の治療的有効量は第２の抗肥満薬の同時投与無しで患者に投与するための前記ＭＣＨＲ拮抗薬の最小市場用量より少ない、工程と、
これにより前記患者における食欲または食物摂取を減少させる工程と、
を含む、患者における食欲または食物摂取を減少させるための方法。
【請求項９５】
前記第２の治療的有効量は第２の抗肥満薬の同時投与無しで患者に投与するための前記ＣＢ１拮抗薬の最小市場用量より少ない、請求項９４記載の方法。
【請求項９６】
（ｉ）第１の治療的有効量の非毒性ＭＣＨＲ拮抗薬と、
（ｉｉ）第２の治療的有効量の非毒性ＣＢ１拮抗薬と、
を同時に患者に投与し、前記第２の治療的有効量は第２の抗肥満薬の同時投与無しで患者に投与するための前記ＣＢ１拮抗薬の最小市場用量より少ない、工程と、
これにより前記患者における食欲または食物摂取を減少させる工程と、
を含む、患者における食欲または食物摂取を減少させるための方法。
【請求項９７】
前記ＭＣＨＲ拮抗薬はＭＣＨＲ１拮抗薬である、請求項９４〜９６のいずれか一項記載の方法。
【請求項９８】
（ｉ）第１の治療的有効量の非毒性ＭＣＨＲ拮抗薬と、
（ｉｉ）第２の治療的有効量の非毒性ＣＢ１拮抗薬と、
を同時に患者に投与し、前記第１の治療的有効量は第２の抗肥満薬の同時投与無しで患者に投与するための前記ＭＣＨＲ拮抗薬の最小市場用量より少ない、工程と、
これにより前記患者における肥満度を減少させる工程と、
を含む、患者における肥満を治療するための方法。
【請求項９９】
前記第２の治療的有効量は第２の抗肥満薬の同時投与無しで患者に投与するための前記ＣＢ１拮抗薬の最小市場用量より少ない、請求項９８記載の方法。
【請求項１００】
（ｉ）第１の治療的有効量の非毒性ＭＣＨＲ拮抗薬と、
（ｉｉ）第２の治療的有効量の非毒性ＣＢ１拮抗薬と、
を同時に患者に投与し、前記第２の治療的有効量は第２の抗肥満薬の同時投与無しで患者に投与するための前記ＣＢ１拮抗薬の最小市場用量より少ない、工程と、
これにより前記患者における肥満度を減少させる工程と、
を含む、患者における肥満を治療するための方法。
【請求項１０１】
前記ＭＣＨＲ拮抗薬はＭＣＨＲ１拮抗薬である、請求項９８〜１００のいずれか一項記載の方法。
【請求項１０２】
哺乳類に治療的有効量で同時に投与すると哺乳類の食物摂取に少なくとも相加効果を示すＭＣＨＲ拮抗薬とＣＢ１拮抗薬を選択する工程と、それから、ＭＣＨＲ拮抗薬とＣＢ１拮抗薬とを含む薬学的組成物のための活性成分を同定する工程と、を含む、ＭＣＨＲ拮抗薬とＣＢ１拮抗薬とを含む薬学的組成物のための活性成分を同定するための方法。
【請求項１０３】
（ｉ）哺乳類に治療的有効量で同時に投与すると哺乳類の食物摂取に少なくとも相加効果を有するＭＣＨＲ拮抗薬とＣＢ１拮抗薬を同定する工程と、
（ｉｉ）第１の治療的有効量のＭＣＨＲ拮抗薬と第２の治療的有効量のＣＢ１拮抗薬とを生理学的に許容される担体または賦形剤と組み合わせる工程と、
を含む薬学的組成物を調製するための方法。
【請求項１０４】
（ｉ）哺乳類に治療的有効量で同時に投与すると哺乳類の食物摂取に少なくとも相加効果を有するＭＣＨＲ拮抗薬とＣＢ１拮抗薬を同定する工程と、
（ｉｉ）前記ＭＣＨＲ拮抗薬と前記ＣＢ１拮抗薬とを、第１の治療的有効量のＭＣＨＲ拮抗薬と第２の治療的有効量のＣＢ１拮抗薬を、食物摂取もしくは食欲を減少させるために、または肥満治療のために患者に同時投与することを示す使用説明書と共にパッケージする工程と、
を含むパッケージ薬学的調製物を調製するための方法。
【請求項１０５】
哺乳類に治療的有効量で同時に投与すると哺乳類の食物摂取に少なくとも相加効果を有するＭＣＨＲ拮抗薬とＣＢ１拮抗薬を選択する工程と、それから、患者に同時投与するための治療薬を同定する工程と、を含む、患者に同時投与するための治療薬を同定するための方法。
【請求項１０６】
（ｉ）第１の治療的有効量のＭＣＨＲ拮抗薬を用いて、ＣＢ１拮抗薬の同時投与無しで処置した哺乳類における食物摂取に対するＭＣＨＲ拮抗薬の効果を決定する工程と、
（ｉｉ）第２の治療的有効量のＣＢ１拮抗薬を用いて、ＭＣＨＲ拮抗薬の同時投与無しで処置した哺乳類における食物摂取に対するＣＢ１拮抗薬の効果を決定する工程と、
（ｉｉｉ）前記第１の治療的有効量の前記ＭＣＨＲ拮抗薬と前記第２の治療的有効量の前記ＣＢ１拮抗薬を用いて同時に処置した哺乳類における食物摂取に対するＭＣＨＲ拮抗薬とＣＢ１拮抗薬の効果を決定する工程と、
（ｉｖ）必要に応じて、異なるＭＣＨＲ拮抗薬または異なるＣＢ１拮抗薬を用いて工程（ｉ）〜（ｉｉｉ）を繰り返す工程と、
（ｖ）工程（ｉｉｉ）で決定した食物摂取に対する効果が工程（ｉ）および（ｉｉ）で決定した食物摂取に対する効果の和と等しいまたはそれ以上であるＭＣＨＲ拮抗薬とＣＢ１拮抗薬を選択する工程と、
以上から、ＭＣＨＲ拮抗薬とＣＢ１拮抗薬とを含む薬学的組成物に対する活性成分を同定する工程と、
を含む、ＭＣＨＲ拮抗薬とＣＢ１拮抗薬とを含む薬学的組成物に対する活性成分を同定するための方法。
【請求項１０７】
（ｉ）第１の治療的有効量のＭＣＨＲ拮抗薬を用いて、ＣＢ１拮抗薬の同時投与無しで処置した哺乳類における食物摂取に対するＭＣＨＲ拮抗薬の効果を決定する工程と、
（ｉｉ）第２の治療的有効量のＣＢ１拮抗薬を用いて、ＭＣＨＲ拮抗薬の同時投与無しで処置した哺乳類における食物摂取に対するＣＢ１拮抗薬の効果を決定する工程と、
（ｉｉｉ）前記第１の治療的有効量の前記ＭＣＨＲ拮抗薬と前記第２の治療的有効量の前記ＣＢ１拮抗薬を用いて同時に処置した哺乳類における食物摂取に対する前記ＭＣＨＲ拮抗薬と前記ＣＢ１拮抗薬の効果を決定する工程と、
（ｉｖ）必要に応じて、異なるＭＣＨＲ拮抗薬または異なるＣＢ１拮抗薬を用いて工程（ｉ）〜（ｉｉｉ）を繰り返す工程と、
（ｖ）工程（ｉｉｉ）で決定した食物摂取に対する効果が工程（ｉ）および（ｉｉ）で決定した食物摂取に対する効果の和と等しいまたはそれ以上であるＭＣＨＲ拮抗薬とＣＢ１拮抗薬を選択する工程と、
（ｖｉ）第１の治療的有効量のＭＣＨＲ拮抗薬と第２の治療的有効量のＣＢ１拮抗薬とを生理学的に許容される担体または賦形剤と共に組み合わせる工程と、
を含む薬学的組成物を調製するための方法。
【請求項１０８】
（ａ）ＣＢ１を含む第１の細胞膜調製物を、
（ｉ）標識ＧＴＰと、
（ｉｉ）ＣＢ１作用薬と、
（ｉｉｉ）試験化合物と、
に接触させ、試験膜調製物を獲得する工程と、
（ｂ）ＣＢ１を含む第２の細胞膜調製物を
（ｉ）標識ＧＴＰと、
（ｉｉ）ＣＢ１作用薬と、
に接触させ、対照膜調製物を獲得する工程と、
を含み、工程（ａ）および（ｂ）は、同時にまたはいずれかの順で、ＧＴＰがＣＢ１に結合するのに適した条件下で実施し、さらに
（ｃ）同時にまたはいずれかの順で、
（ｉ）前記試験膜調製物中の結合した標識ＧＴＰ量を示す試験シグナルと、
（ｉｉ）前記対照膜調製物中の結合した標識ＧＴＰの量を示す対照シグナルと、
を検出する工程と、
（ｄ）前記試験シグナルを前記対照シグナルと比較する工程と、
以上から、前記試験化合物のＣＢ１拮抗薬活性を決定する工程と、
を含む、試験化合物のＣＢ１拮抗薬活性を決定するための方法。
【請求項１０９】
前記ＧＴＰは放射活性ラベルを含み、前記シグナルは放射性崩壊である、請求項１０８記載の方法。
【請求項１１０】
前記試験シグナルおよび前記対照シグナルは液体シンチレーション分光法を用いて検出される、請求項１０９記載の方法。
【図１】
【公表番号】特表２００７−５３３６６１（Ｐ２００７−５３３６６１Ａ）
【公表日】平成１９年１１月２２日（２００７．１１．２２）
【国際特許分類】
【出願番号】特願２００７−５０６４３０（Ｐ２００７−５０６４３０）
【出願日】平成１７年３月２８日（２００５．３．２８）
【国際出願番号】ＰＣＴ／ＵＳ２００５／０１０３２５
【国際公開番号】ＷＯ２００５／０９４３０５
【国際公開日】平成１７年１０月１３日（２００５．１０．１３）
【出願人】（５０００１５４５６）ニューロジェン・コーポレーション (48)
【Ｆターム（参考）】
【公表日】平成１９年１１月２２日（２００７．１１．２２）
【国際特許分類】
【出願日】平成１７年３月２８日（２００５．３．２８）
【国際出願番号】ＰＣＴ／ＵＳ２００５／０１０３２５
【国際公開番号】ＷＯ２００５／０９４３０５
【国際公開日】平成１７年１０月１３日（２００５．１０．１３）
【出願人】（５０００１５４５６）ニューロジェン・コーポレーション (48)
【Ｆターム（参考）】
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