免疫アジュバントとして有用な糖脂質の類似体
本発明は、さまざまな抗原によって誘発される免疫応答を増大させるアルファガラクトシルセラミドの類似体を提供する。本発明は、ワクチンの有効性を増加させるためにこうした化合物を使用する方法も提供する。一局面において、本明細書に記載される一般的な構造に対応する、α−ＧａｌＣｅｒの類似体である新たなクラスの免疫原性化合物と、その化合物の調製のための新しい合成法と、ワクチンの有効性を高めるためのその化合物の使用とを提供する。これらの化合物はα−ＧａｌＣｅｒよりも改善された薬物動態学的性質を提供し、抗原またはワクチンが投与されるときには免疫応答を同様に高める効果がある。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、ＮＫＴ細胞（ナチュラルキラー（ｎａｔｕｒａｌ ｋｉｌｌｅｒ）Ｔ細胞）に対するリガンドである糖脂質類似体と、その糖脂質類似体を作製する方法と、ワクチン接種の際に抗体価のレベルを上げるための免疫増強剤としてその糖脂質類似体を使用する方法とに関する。
【背景技術】
【０００２】
近年、糖脂質にはいくつかの異なる免疫学的特性があることが明らかになった。中でも、糖脂質はＣＤ１分子によって提示されるときに抗原として作用できること、およびワクチンと組合せて投与されるときに免疫応答を改善できることが示された。
【０００３】
ＣＤ１分子は、周知の主要組織適合遺伝子複合体（Ｍａｊｏｒ Ｈｉｓｔｏｃｏｍｐａｔｉｂｉｌｉｔｙ Ｃｏｍｐｌｅｘ：ＭＨＣ）分子と同様の機能を有する高度に保存された抗原提示タンパク質のファミリーである。ＭＨＣタンパク質がペプチドを提示するのに対し、ＣＤ１タンパク質はＴリンパ球に結合してさまざまな脂質および糖脂質を表示する。
【０００４】
ヒトにおいては、さまざまなＣＤ１アイソフォームが配列の類似性に基づいて、グループＩ（ＣＤ１ａ、ｂ、ｃおよびｅ）ならびにグループＩＩ（ＣＤ１ｄ）と分類されている［非特許文献１］。ヒトＣＤ１ａ［非特許文献２］、ｈＣＤ１ｂ［非特許文献３］、ｈＣＤ１ｄ［非特許文献４］およびマウス（ｍｏｕｓｅ）ＣＤ１ｄ（ｍＣＤ１ｄ）［非特許文献５；非特許文献６］の、しばしばそれぞれの抗原と複合体となった結晶構造から、それらのそれぞれの結合溝の形態の違いによってある程度のリガンド特異性が得られる一方で、多様な組の抗原脂質を提示する能力を維持できることが明らかになった。
【０００５】
特に、ｍＣＤ１ｄは全体的な折り畳みがＭＨＣクラスＩタンパク質に似ていることが明らかになった。α鎖は３つのドメイン（α１、α２およびα３）に折り畳まれてβ２ｍと密接に関係している。膜遠位のα１およびα２ドメインは結合溝を形成し、これは８鎖の逆平行βシートフロアを２つの逆平行αへリックスが横切ったものからなる［非特許文献５］。ｍＣＤ１ｄはさらに、結合溝に存在するＡ’およびＦ’と呼ばれる２つの疎水性ポケットの中に長い脂質尾部を収容できることが示された。さらに、ｈＣＤ１ｂおよびｈＣＤ１ａの構造から、ＣＤ１は抗原糖脂質を与えられると疎水性溝中に脂質部分を結合しながら親水性の糖部分がＴ細胞受容体に接触できるようにすることが示された。
【０００６】
哺乳動物およびマイコバクテリアの脂質は、ヒトＣＤ１ａ、ＣＤ１ｂ、ＣＤ１ｃおよびＣＤ１ｄによって提示されることが公知である［非特許文献７］。海綿のＡｇｅｌａｓ ｍａｕｒｉｔｉａｎｕｓに見出された脂質であるアルファガラクトシルセラミド（Ａｌｐｈａ−ｇａｌａｃｔｏｓｙｌ ｃｅｒａｍｉｄｅ：α−ＧａｌＣｅｒ）は、これまでのところ最も広く研究されたＣＤ１ｄに対するリガンドである。α−ＧａｌＣｅｒはＣＤ１ｄに結合すると、マウスにおけるＶα１４ｚナチュラルキラーＴ細胞（Ｖα１４ｚ ＮＫＴ細胞）およびヒト相同体Ｖα２４ｚ ＮＫＴ細胞による迅速なＴｈ１およびＴｈ２サイトカイン生成を刺激し、現在ではモデル抗原と考えることができる。しかし、海を起源とするαガラクトシルセラミドがなぜこんなに強力な作用薬であるのかは謎であるため、哺乳動物におけるその生理的重要性はなおも不明である。
【０００７】
【化１】
ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞は典型的に、正常な末梢血中の単核細胞画分のおよそ１０％から１５％を含む。歴史的には、ＮＫ細胞は最初、予め免疫化または活性化することなく特定の腫瘍細胞を溶解する能力によって同定された。ＮＫ細胞はサイトカイン生成においても重要な役割をしており、これは癌および感染の制御、ならびにおそらくは胎児の着床に関与している可能性がある。
【０００８】
α−ＧａｌＣｅｒを免疫原性タンパク質とともに投与することによって、樹状細胞との相互作用を通じた可溶性抗原に対するＣＤ４＋およびＣＤ８＋ＮＫＴ細胞応答が高められた［非特許文献８］。α−ＧａｌＣｅｒの投与によってＢリンパ球の応答も高められ、追加免疫に応答してより高い頻度のメモリーＢ細胞およびより高い抗体レベルを誘発した［非特許文献９］。これは特定のペプチド抗原の効力を高めるために用いられた。特許文献１。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００９】
【特許文献１】国際公開第２００５／０００３４８号
【非特許文献】
【００１０】
【非特許文献１】Ｃａｌａｂｉ，Ｆ．；Ｊａｒｖｉｓ，Ｊ．Ｍ．；Ｍａｒｔｉｎ，Ｌ．；Ｍｉｌｓｔｅｉｎ，Ｃ．，Ｔｗｏ ｃｌａｓｓｅｓ ｏｆ ＣＤ１ ｇｅｎｅｓ，Ｅｕｒ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１９８９，１９，（２），２８５−９２
【非特許文献２】Ｚａｊｏｎｃ，Ｄ．Ｍ．ら、Ｎａｔ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．（２００３），４，８０８−８１５
【非特許文献３】Ｇａｄｏｌａ，Ｓ．Ｄ．ら、．Ｎａｔ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．（２００２），３，７２１−７２６
【非特許文献４】Ｋｏｃｈ，Ｍ．ら、Ｎａｔ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．（２００５），６，８１９−８２６
【非特許文献５】Ｚｅｎｇ，Ｚ．−Ｈ．ら、Ｓｃｉｅｎｃｅ（１９９７），２７７，３３９−３４５
【非特許文献６】Ｚａｊｏｎｃ，Ｄ．Ｍ．ら、Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．（２００５），２０２，１５１７−１５２６
【非特許文献７】Ｐｏｒｃｅｌｌｉ，Ｓ．Ａ．＆ Ｍｏｄｌｉｎ，Ｒ．Ｌ．（１９９９）Ａｎｎｕ．Ｒｅｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１７，２９７−３２９
【非特許文献８】Ｉａｎ Ｆ．Ｈｅｒｍａｎｓ，Ｉ．Ｆ．ら、，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．（２００３），１７１，５１４０−５１４７
【非特許文献９】Ｇａｌｌｉ Ｇ．ら、ＰＮＡＳ，（２００７），１０４；３９８４−３９８９
【発明の概要】
【課題を解決するための手段】
【００１１】
本発明は、以下に示す一般的な構造に対応する、α−ＧａｌＣｅｒの類似体である新たなクラスの免疫原性化合物と、その化合物の調製のための新しい合成法と、ワクチンの有効性を高めるためのその化合物の使用とに関する。これらの化合物はα−ＧａｌＣｅｒよりも改善された薬物動態学的性質を提供し、抗原またはワクチンが投与されるときには免疫応答を同様に高める効果がある。
【００１２】
１つの局面において、本発明は、式Ｉの化合物およびこうした化合物またはその薬学的に受容可能な塩を含有する組成物に関する：
【００１３】
【化２】
ここでＲ２、Ｒ３、Ｒ４、およびＲ５は各々独立にＨまたは保護基を表わし；
Ｘは置換可能なＣ４−Ｃ３０ヒドロカルビル基（ｈｙｄｒｏｃａｒｂｙｌ ｇｒｏｕｐ）であり；
Ｙは２つまでの基で置換可能なＣ１−Ｃ６アルキレンまたはＣ２−Ｃ６アルケニレンリンカーであり；
Ｚは−ＯＲ１であり、ここでＲ１は骨格にヘテロ原子を含み得るＣ４−Ｃ２０ヒドロカルビル基であり、任意に置換される。
【００１４】
式Ｉの化合物を含有する組成物は薬学的組成物であってもよく、しばしば薬学的に受容可能な担体を含む。いくつかの実施形態において、この組成物は少なくとも１つの抗原をさらに含み、この抗原は所望の免疫応答を誘発できる能力によって選択される。本発明の特定の実施形態は、ワクチンと混合された式Ｉの化合物を含む。
【００１５】
別の局面において、本発明は式Ｉの化合物を作製する方法と、式Ｉの化合物を作製するために有用な新規の中間体とに関する。
【００１６】
別の局面において、本発明は、抗原に露出される対象に式Ｉの化合物を投与することによって抗原に対する免疫応答を高めるために、式Ｉの化合物を使用する方法に関する。特定の実施形態において、この方法はヒト対象への投与のためのワクチンの有効性を増加させるために有用である。
【図面の簡単な説明】
【００１７】
【図１】ＡＰＣ（ＴＨＰ１）によって提示されるときのマウスＴ細胞ハイブリドーマＦＦ１３の活性化によって合成化合物の活性を示す図である。Ｔ細胞活性化の尺度として、ＥＬＩＳＡアッセイによって４８時間培養後の培養培地へのＩＬ２放出を定めた。ｙ軸はＩＬ２レベルをｐｇ／ｍｌで示す。ｘ軸は糖脂質の量をμｇ／ｍｌで示す。
【図２】化合物またはａ−ＧａｌＣｅｒに露出したＡＰＣと接触したＮＫＴハイブリドーマ細胞によるＩＬ−２放出を測定するアッセイにおいてテストされた４つの合成化合物の活性データをまとめた図である。
【図３】Ｂａｌｂ／ＣマウスにおけるＨＩ力価を測定するアッセイにおいてテストされた合成ａ−Ｇａｌ ＧＧおよびａ−Ｇａｌ ＬＰのインビボ活性データをまとめた図である。抗−Ｈ３Ｎ２ ＨＩ力価を示す。
【図４】Ｂａｌｂ／ＣマウスにおけるＩｇＧ力価を測定するアッセイにおいてテストされた合成ａ−Ｇａｌ ＧＧおよびａ−Ｇａｌ ＬＰのインビボ活性データをまとめた図である。ＩｇＧ力価はＥＵ／ｍｌで示される。グラフ中の３つ組の各々について、列は左から右にＢ、Ｈ１Ｎ１およびＨ３Ｎ２を表わす。
【図５】Ｂａｌｂ／ＣマウスにおけるＩｇＧ２ａ／ＩｇＧ１力価を測定するアッセイにおいてテストされた合成ａ−Ｇａｌ ＧＧおよびａ−Ｇａｌ ＬＰのインビボ活性データをまとめた図である。ＩｇＧ力価はＥＵ／ｍｌで示される。グラフ中の対の各々について、列は左から右にＩｇＧ２ａおよびＩｇＧ１を表わす。
【発明を実施するための形態】
【００１８】
本発明の化合物
本明細書において用いられる「ヒドロカルビル残基」とは、別様に指定されない限り、炭素および水素のみを含有する残基を示す。この残基は、脂肪族または芳香族であっても、直鎖、環状、分岐鎖、飽和または不飽和であっても、これらのあらゆる組合せであってもよい。しかし、そうした記載がある場合には、ヒドロカルビル残基はヒドロカルビル基自身の炭素および水素の構成員に加えて、またはその代わりにヘテロ原子を含有してもよい。よって、ヘテロ原子を含有することが特定的に示されているとき、ヒドロカルビル基はヒドロカルビル残基の「骨格」にヘテロ原子を含有してもよく、任意に置換されているとき、ヒドロカルビル残基は親ヒドロカルビル残基の１つまたはそれ以上の水素の代わりに１つまたはそれ以上のカルボニル基、アミノ基、ヒドロキシル基なども有していてもよい。
【００１９】
本明細書において用いられる「無機残基」とは、炭素を含有しない残基を示す。その例にはハロ、ヒドロキシ、ＮＯ２またはＮＨ２が含まれるがこれに限定されない。
【００２０】
本明細書において用いられる「アルキル」、「アルケニル」および「アルキニル」という用語は、直鎖、分岐鎖および環状の一価のヒドロカルビルラジカル、ならびにこれらの組合せを含み、これらは未置換のときにはＣおよびＨのみを含有する。その例にはメチル、エチル、イソブチル、シクロヘキシル、シクロペンチルエチル、２−プロペニル、３−ブチニルなどが含まれる。本明細書においてはこうした基の各々における炭素原子の総数をしばしば記載しており、たとえばその基が最高１０個の炭素原子を含有できるとき、それは１−１０ＣまたはＣ１−Ｃ１０もしくはＣ１−１０と表わすことができる。たとえば、ヘテロアルキル基のようにヘテロ原子（典型的にはＮ、ＯおよびＳ）が炭素原子を置換できるとき、その基を説明する数はなおもたとえばＣ１−Ｃ６などと書かれるが、その数は基の中の炭素原子の数と、記載される環または鎖の中の炭素原子に対する置換として含まれるこうしたヘテロ原子の数との和を表わす。
【００２１】
典型的に、本発明のアルキル、アルケニルおよびアルキニル置換基は、１−１０Ｃ（アルキル）または２−１０Ｃ（アルケニルもしくはアルキニル）を含有する。好ましくは、それらの置換基は１−８Ｃ（アルキル）または２−８Ｃ（アルケニルもしくはアルキニル）を含有する。時には、それらの置換基は１−４Ｃ（アルキル）または２−４Ｃ（アルケニルもしくはアルキニル）を含有する。単一の基が２つ以上のタイプの多重結合または２つ以上の多重結合を含んでもよい；こうした基は、少なくとも１つの炭素−炭素二重結合を含有するときには「アルケニル」という用語の定義に含まれ、少なくとも１つの炭素−炭素三重結合を含有するときには「アルキニル」という用語に含まれる。
【００２２】
アルキル、アルケニルおよびアルキニル基はしばしば、その置換が化学的に意味をなす程度まで置換される。典型的な置換基は、以下を含むがこれに限定されない：ハロ、＝Ｏ、＝Ｎ−ＣＮ、＝Ｎ−ＯＲ、＝ＮＲ、ＯＲ、ＮＲ２、ＳＲ、ＳＯ２Ｒ、ＳＯ２ＮＲ２、ＮＲＳＯ２Ｒ、ＮＲＣＯＮＲ２、ＮＲＣＯＯＲ、ＮＲＣＯＲ、ＣＮ、ＣＯＯＲ、ＣＯＮＲ２、ＯＯＣＲ、ＣＯＲ、およびＮＯ２、ここで各Ｒは独立にＨ、Ｃ１−Ｃ８アルキル、Ｃ２−Ｃ８ヘテロアルキル、Ｃ１−Ｃ８アシル、Ｃ２−Ｃ８ヘテロアシル、Ｃ２−Ｃ８アルケニル、Ｃ２−Ｃ８ヘテロアルケニル、Ｃ２−Ｃ８アルキニル、Ｃ２−Ｃ８ヘテロアルキニル、Ｃ６−Ｃ１０アリール、またはＣ５−Ｃ１０ヘテロアリールであり、各Ｒは任意にハロ、＝Ｏ、＝Ｎ−ＣＮ、＝Ｎ−ＯＲ’、＝ＮＲ’、ＯＲ’、ＮＲ’２、ＳＲ’、ＳＯ２Ｒ’、ＳＯ２ＮＲ’２、ＮＲ’ＳＯ２Ｒ’、ＮＲ’ＣＯＮＲ’２、ＮＲ’ＣＯＯＲ’、ＮＲ’ＣＯＲ’、ＣＮ、ＣＯＯＲ’、ＣＯＮＲ’２、ＯＯＣＲ’、ＣＯＲ’、およびＮＯ２で置換され、ここで各Ｒ’は独立にＨ、Ｃ１−Ｃ８アルキル、Ｃ２−Ｃ８ヘテロアルキル、Ｃ１−Ｃ８アシル、Ｃ２−Ｃ８ヘテロアシル、Ｃ６−Ｃ１０アリール、またはＣ５−Ｃ１０ヘテロアリールである。アルキル、アルケニルおよびアルキニル基は、Ｃ１−Ｃ８アシル、Ｃ２−Ｃ８ヘテロアシル、Ｃ６−Ｃ１０アリールまたはＣ５−Ｃ１０ヘテロアリールで置換されてもよく、その各々が特定の基に対して適切な置換基によって置換されてもよい。
【００２３】
「ヘテロアルキル」、「ヘテロアルケニル」および「ヘテロアルキニル」などは、対応するヒドロカルビル（アルキル、アルケニルおよびアルキニル）基と同様に定義されるが、「ヘテロ」という用語は、骨格残基に１〜３個のＯ、ＳもしくはＮヘテロ原子またはその組合せを含有する基を示す；つまり、対応するアルキル、アルケニルまたはアルキニル基の少なくとも１つの炭素原子が指定のヘテロ原子の１つによって置換されて、ヘテロアルキル、ヘテロアルケニルまたはヘテロアルキニル基を形成する。一般的に、アルキル、アルケニルおよびアルキニル基のヘテロ形に対する典型的かつ好ましいサイズは、対応するヒドロカルビル基と同じであり、ヘテロ形に存在し得る置換基はヒドロカルビル基に対して上述した置換基と同じである。化学的安定性の理由から、別様に指定されない限り、ニトロまたはスルホニル基のようにＮまたはＳにオキソ基が存在する場合を除き、こうした基は２つより多くの隣接するヘテロ原子を含まないことも理解される。
【００２４】
本明細書において用いられる「アルキル」はシクロアルキルおよびシクロアルキルアルキル基を含むが、本明細書において「シクロアルキル」という用語は、環状炭素原子を介して接続される炭素環式非芳香族基を説明するために用いられてもよく、「シクロアルキルアルキル」はアルキルリンカーを通じて分子に接続された炭素環式非芳香族基を説明するために用いられてもよい。同様に、「ヘテロシクリル」は、少なくとも１つのヘテロ原子を環の構成員として含有し、かつＣまたはＮであってもよい環の原子を介して分子に接続される非芳香族環状基を説明するために用いられてもよく；「ヘテロシクリルアルキル」は、リンカーを通じて別の分子に接続されるこうした基を説明するために用いられてもよい。シクロアルキル、シクロアルキルアルキル、ヘテロシクリル、およびヘテロシクリルアルキル基に対して好適なサイズおよび置換基は、アルキル基に対して上述したものと同じである。本明細書において用いられるこれらの用語は、１つまたは２つの二重結合を含有する芳香族でない環も含む。
【００２５】
本明細書において用いられる「アシル」は、カルボニル炭素原子の２つの利用可能な原子価位置の一方において付着されたアルキル、アルケニル、アルキニル、アリールまたはアリールアルキルラジカルを含む基を包含し、ヘテロアシルとはカルボニル炭素以外の少なくとも１つの炭素がＮ、ＯおよびＳから選択されるヘテロ原子によって置換された対応する基を示す。よってヘテロアシルは、たとえば−Ｃ（＝Ｏ）ＯＲおよび−Ｃ（＝Ｏ）ＮＲ２ならびに−Ｃ（＝Ｏ）−ヘテロアリールなどを含む。
【００２６】
アシルおよびヘテロアシル基は、カルボニル炭素原子の開いた原子価を通じてあらゆる基または分子に付着して結合される。典型的に、それらはホルミル、アセチル、ピバロイルおよびベンゾイルを含むＣ１−Ｃ８アシル基、ならびにメトキシアセチル、エトキシカルボニルおよび４−ピリジノイルを含むＣ２−Ｃ８ヘテロアシル基である。アシルまたはヘテロアシル基を含むヒドロカルビル基、アリール基、およびこうした基のヘテロ形は、アシルまたはヘテロアシル基の対応する構成要素の各々に対する一般的に好適な置換基として本明細書に記載される置換基で置換されてもよい。
【００２７】
「芳香族」部分または「アリール」部分とは、芳香性の周知の特徴を有する単環式または融合二環式の部分を示す；その例にはフェニルおよびナフチルが含まれる。同様に、「芳香族複素環」および「ヘテロアリール」とは、環の構成員としてＯ、ＳおよびＮから選択される１つまたはそれ以上のヘテロ原子を含有するこうした単環式または融合二環式の環系を示す。ヘテロ原子を含むことによって、６員環だけでなく５員環の芳香性も可能になる。典型的な芳香族複素環系は、単環式Ｃ５−Ｃ６芳香族基、たとえばピリジル、ピリミジル、ピラジニル、チエニル、フラニル、ピロリル、ピラゾリル、チアゾリル、オキサゾリルおよびイミダゾリルなど、ならびにこれらの単環基の１つをフェニル環または芳香族複素環単環基のいずれかと融合してＣ８−Ｃ１０二環基を形成することによって形成される融合二環式部分、たとえばインドリル、ベンズイミダゾリル、インダゾリル、ベンゾトリアゾリル、イソキノリル、キノリル、ベンゾチアゾリル、ベンゾフラニル、ピラゾロピリジル、キナゾリニル、キノキサリニル、シンノリニルなどを含む。環系全体の電子分布の観点から芳香性の特徴を有するあらゆる単環式または融合環二環式の系がこの定義に含まれる。この定義は、少なくとも分子の残り部分に直接付着する環が芳香性の特徴を有するような二環基も含む。典型的に、この環系は５〜１２個の環構成員原子を含有する。好ましくは、単環式ヘテロアリールは５〜６個の環構成員を含有し、二環式ヘテロアリールは８〜１０個の環構成員を含有する。
【００２８】
アリールおよびヘテロアリール部分は、Ｃ１−Ｃ８アルキル、Ｃ２−Ｃ８アルケニル、Ｃ２−Ｃ８アルキニル、Ｃ５−Ｃ１２アリール、Ｃ１−Ｃ８アシル、およびこれらのヘテロ形を含むさまざまな置換基で置換されてもよく、これらの置換基の各々自身がさらに置換されてもよい；アリールおよびヘテロアリール部分に対するその他の置換基はハロ、ＯＲ、ＮＲ２、ＳＲ、ＳＯ２Ｒ、ＳＯ２ＮＲ２、ＮＲＳＯ２Ｒ、ＮＲＣＯＮＲ２、ＮＲＣＯＯＲ、ＮＲＣＯＲ、ＣＮ、ＣＯＯＲ、ＣＯＮＲ２、ＯＯＣＲ、ＣＯＲ、およびＮＯ２を含み、ここで各Ｒは独立にＨ、Ｃ１−Ｃ８アルキル、Ｃ２−Ｃ８ヘテロアルキル、Ｃ２−Ｃ８アルケニル、Ｃ２−Ｃ８ヘテロアルケニル、Ｃ２−Ｃ８アルキニル、Ｃ２−Ｃ８ヘテロアルキニル、Ｃ６−Ｃ１０アリール、Ｃ５−Ｃ１０ヘテロアリール、Ｃ７−Ｃ１２アリールアルキル、またはＣ６−Ｃ１２ヘテロアリールアルキルであり、各Ｒは任意に、アルキル基に対して前述したとおりに置換される。アリールまたはヘテロアリール基上の置換基は当然、各種のこうした置換基または置換基の各構成要素に対して好適であると本明細書に記載される基によってさらに置換されてもよい。よって、たとえばアリールアルキル置換基は、アリール部分において、アリール基に対して典型的であると本明細書に記載される置換基によって置換されてもよく、アルキル部分において、アルキル基に対して典型的または好適であると本明細書に記載される置換基によってさらに置換されてもよい。
【００２９】
同様に、「アリールアルキル」および「ヘテロアリールアルキル」とは、置換または未置換の、飽和または不飽和の、環式または非環式のリンカーを含む、アルキレンなどのリンク基を通じて付着点に結合された芳香族および芳香族複素環系を示す。典型的に、リンカーはＣ１−Ｃ８アルキルまたはそのヘテロ形である。これらのリンカーは、カルボニル基をも含むことによって、アシルまたはヘテロアシル部分としての置換基を提供できるようにしてもよい。アリールアルキルまたはヘテロアリールアルキル基中のアリールまたはヘテロアリール環は、アリール基に対して上述したものと同じ置換基で置換されてもよい。好ましくは、アリールアルキル基は、アリール基に対して上に定義された基で任意に置換されるフェニル環と、未置換であるかまたは１つもしくは２つのＣ１−Ｃ４アルキル基もしくはヘテロアルキル基で置換されるＣ１−Ｃ４アルキレンとを含み、アルキルまたはヘテロアルキル基は任意に環化してシクロプロパン、ジオキソランまたはオキサシクロペンタンなどの環を形成してもよい。同様に、ヘテロアリールアルキル基は好ましくは、アリール基の典型的な置換基として上述された基で任意に置換されるＣ５−Ｃ６単環式ヘテロアリール基と、未置換であるかまたは１つもしくは２つのＣ１−Ｃ４アルキル基もしくはヘテロアルキル基で置換されるＣ１−Ｃ４アルキレンとを含むか、または任意に置換されるフェニル環もしくはＣ５−Ｃ６単環式ヘテロアリールと、未置換であるかまたは１つもしくは２つのＣ１−Ｃ４アルキルもしくはヘテロアルキル基で置換されるＣ１−Ｃ４ヘテロアルキレンとを含み、アルキルまたはヘテロアルキル基は任意に環化してシクロプロパン、ジオキソランまたはオキサシクロペンタンなどの環を形成してもよい。
【００３０】
アリールアルキルまたはヘテロアリールアルキル基が任意に置換されると記載されるとき、置換基はその基のアルキルまたはヘテロアルキル部分にあっても、アリールまたはヘテロアリール部分にあってもよい。アルキルまたはヘテロアルキル部分に任意に存在する置換基は、アルキル基に対して一般的に上述されたものと同じである；アリールまたはヘテロアリール部分に任意に存在する置換基は、アリール基に対して一般的に上述されたものと同じである。
【００３１】
本明細書において用いられる「アリールアルキル」基は、未置換のときにはヒドロカルビル基であり、環およびアルキレンまたは類似のリンカー中の炭素原子の総数によって記載される。つまりベンジル基はＣ７アリールアルキル基であり、フェニルエチルはＣ８アリールアルキルである。
【００３２】
上述の「ヘテロアリールアルキル」はリンク基を通じて付着されるアリール基を含む部分を示し、「アリールアルキル」と異なる点は、アリール部分の少なくとも１つの環原子またはリンク基の１つの原子がＮ、ＯおよびＳから選択されるヘテロ原子であるところである。本明細書において、ヘテロアリールアルキル基は環および組合されるリンカーの原子の総数によって記載され、それはヘテロアルキルリンカーを通じて結合されたアリール基と；アルキレンなどのヒドロカルビルリンカーを通じて結合されたヘテロアリール基と；ヘテロアルキルリンカーを通じて結合されたヘテロアリール基とを含む。よって、たとえばＣ７ヘテロアリールアルキルは、ピリジルメチル、フェノキシ、およびＮ−ピロリルメトキシを含む。
【００３３】
本明細書において用いられる「アルキレン」とは、二価のヒドロカルビル基を示す；二価であるため、アルキレンは２つの他の基をつなぎ合せることができる。典型的にアルキレンは−（ＣＨ２）ｎ−を示し、ここでｎは１〜８であり、好ましくはｎは１〜４であるが、指定されるときにはアルキレンは他の基で置換されてもよいし、他の長さであってもよいし、開いた原子価は鎖の反対側端部になくてもよい。よって−ＣＨ（Ｍｅ）−および−Ｃ（Ｍｅ）２−もアルキレンと呼ばれてもよく、シクロプロパン−１，１−ジイルなどの環状基も同様である。アルキレン基が置換されるとき、置換基は、本明細書に記載されるとおり典型的にアルキル基に存在する置換基を含む。
【００３４】
一般的に、置換基に含有されるあらゆるアルキル、アルケニル、アルキニル、アシル、またはアリールもしくはアリールアルキル基またはこれらの基の１つのあらゆるヘテロ形自身が、付加的な置換基によって任意に置換されてもよい。置換基が別様に記載されていなければ、これらの置換基の性質は一次置換基自体に関して挙げられるものと同様である。よって、たとえばＲ７の実施形態がアルキルであるとき、このアルキルはＲ７に対する実施形態として列挙される残りの置換基によって任意に置換されてもよく、ここではこの置換が化学的に意味をなし、かつこの置換がアルキル自身に対して与えられたサイズ制限を損なわないものとする；たとえば、アルキルまたはアルケニルによって置換されたアルキルは、これらの実施形態に対する炭素原子の上限を単純に超えるために含まれない。しかし、アリール、アミノ、アルコキシ、＝Ｏなどによって置換されたアルキルは本発明の範囲に含まれ、これらの置換基の原子は、記載されるアルキル、アルケニルなどの基を説明するために用いられる数に入れられない。置換基の数が指定されていないとき、こうしたアルキル、アルケニル、アルキニル、アシルまたはアリール基の各々が、その利用可能な原子価に従っていくつかの置換基で置換されてもよい；特に、たとえばこれらの基のいずれかが、その利用可能な原子価のいずれかまたはすべてにおいてフッ素原子で置換されてもよい。
【００３５】
本明細書において用いられる「ヘテロ形」とは、アルキル、アリールまたはアシルなどの基の誘導体を示し、ヘテロ形では所定の炭素環基の少なくとも１つの炭素原子がＮ、ＯおよびＳから選択されるヘテロ原子によって置換されている。よってアルキル、アルケニル、アルキニル、アシル、アリールおよびアリールアルキルのヘテロ形は、それぞれヘテロアルキル、ヘテロアルケニル、ヘテロアルキニル、ヘテロアシル、ヘテロアリールおよびヘテロアリールアルキルである。オキソ基がＮまたはＳに付けられてニトロまたはスルホニル基を形成する場合を除いて、通常３つ以上のＮ、ＯまたはＳ原子が連続的に接続されることはないことが理解される。たとえば、記載される基が骨格またはアルキル鎖に任意のヘテロ原子を含有できるとき、別様に指定されない限りそのヘテロ原子はＮ、ＯおよびＳから選択される。
【００３６】
本明細書において用いられる「任意に置換される」とは、記載される特定の基または複数の基が非水素置換基を有さなくてもよいし、その基または複数の基が１つまたはそれ以上の非水素置換基を有してもよいことを示す。別様に指定されていないとき、存在し得るこうした置換基の総数は、記載される基の非置換形に存在するＨ原子の数に等しい。カルボニル酸素（＝Ｏ）などのように、任意の置換基が二重結合を介して付着されるとき、この基は２個の利用可能な原子価を取るため、利用可能な原子価の数に従って、含まれ得る置換基の総数が減る。
【００３７】
本明細書において用いられる「ハロ」は、フルオロ、クロロ、ブロモおよびヨードを含む。しばしばフルオロおよびクロロが好まれる。
【００３８】
本明細書において用いられる「アミノ」はＮＨ２を示すが、アミノが「置換される」または「任意に置換される」と記載されるとき、この用語はＮＲ’Ｒ’’を含み、ここでＲ’およびＲ’’は独立にＨであるか、またはアルキル、アルケニル、アルキニル、アシル、アリール、もしくはアリールアルキル基であるか、またはこれらの基の１つのヘテロ形であり、このアルキル、アルケニル、アルキニル、アシル、アリール、もしくはアリールアルキル基、またはこれらの基の１つのヘテロ形の各々は、本明細書において対応の基に対して好適であると記載される置換基で任意に置換される。この用語は、Ｒ’およびＲ’’がともにつながれて３〜８員環を形成した形も含み、この形は飽和、不飽和または芳香族であってもよく、環構成員としてＮ、ＯおよびＳから独立に選択される１〜３個のヘテロ原子を含有し、アルキル基に対して好適であると記載される置換基で任意に置換されるか、またはＮＲ’Ｒ’’が芳香族基であるときには、ヘテロアリール基に対して典型的であると記載される置換基で任意に置換される。
【００３９】
１つの局面において、本発明は式Ｉの化合物またはその薬学的に受容可能な塩を提供する：
【００４０】
【化３】
ここでＲ２、Ｒ３、Ｒ４、およびＲ５は各々独立にＨまたは保護基を表わし；
Ｘは置換可能なＣ４−Ｃ３０ヒドロカルビル基であり；
Ｙは２つまでの基で置換可能なＣ１−Ｃ６アルキレンまたはＣ２−Ｃ６アルケニレンリンカーであり；
Ｚは−ＯＲ１であり、ここでＲ１は骨格にヘテロ原子を含み得るＣ４−Ｃ２０ヒドロカルビル基であり、かつ任意に置換される。
【００４１】
式Ｉにおいて、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、およびＲ５の各々がＨであってもよく、またはこれらのうちの１つもしくはそれ以上が保護基であってもよい。いくつかの実施形態において、Ｒ２およびＲ３；またはＲ３およびＲ４；またはＲ４およびＲ５がともに結合して環になってもよい；たとえば、これらの対のいずれかがアセトニド保護基を表わしてもよい。「保護基」は、従来のアシル、アルキル、アリールアルキル、シリル、および有機合成の際のヒドロキシルの保護のために典型的に用いられるその他の基を含む。特定の例は、メチル、ホルミル、アセチル、メトキシアセチル、トリメチルシリル、ｔ−ブチルジメチルシリル、メトキシメチル、２−トリメチルシリルエトキシメチル、ベンジル、ジメトキシベンジル、アリル、メトキシカルボニル、アリルオキシカルボニル、トリクロロエトキシカルボニル、ベンジルオキシカルボニルなどを含む。特に、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、およびＲ５の各々が任意に置換されたＣ１−Ｃ１０アシル基、たとえばホルミル、アセチル、プロピオニル、ピバロイル、ベンゾイル、メトキシカルボニル、ベンジルオキシカルボニルまたは置換ベンジルオキシカルボニル、ｔ−ブトキシカルボニルなどであるか；または任意に置換されたアリールメチル基、たとえばベンジル、メトキシベンジルまたはジメトキシベンジルなどであってもよい。Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、およびＲ５の１つまたはそれ以上がこれらの保護基の１つを表わし、残りの基の各々はＨであるような化合物が特に好ましい。なぜならこうした化合物は、さらなる脱保護を含む当該技術分野において周知の修飾によって、本発明のさらなる化合物の合成のための中間体の役割ができるためである；さらにこうした化合物は、直接作用するか、またはＲ２、Ｒ３、Ｒ４、およびＲ５の各々がＨであるような化合物にインビボ転換された後に作用する免疫増強剤として投与されてもよい。
【００４２】
式Ｉにおいて、Ｘは好ましくは４〜３０個の炭素を有する直鎖または分岐鎖炭化水素であり、好ましくは１０〜３０個の炭素を含有する。２０〜３０個の炭素を有する直鎖アルキル基が好ましく、時には２５炭素アルキル基が好ましい。Ｘはしばしばアルキル基であるが、いくつかの実施形態においてはアルケニル基またはアルキニル基である。Ｘは未置換であってもよいし、アルキル基に対する１つまたはそれ以上の好適な置換基によって置換されてもよい。Ｘに対する好ましい置換基は、ハロ、特にＦ；およびアルコキシ、特にＣ１−Ｃ６アルコキシ、たとえばメトキシ、エトキシ、イソプロポキシなどを含む。
【００４３】
ＹはＣ１−Ｃ６アルキレンまたはＣ２−Ｃ６アルケニレンであってもよく、未置換であってもよいし、Ｙがアルキレンのときにはしばしばハロ、Ｃ１−Ｃ６アルキル、Ｃ１−Ｃ６アルコキシ、Ｃ１−Ｃ６ハロアルキル、およびヒドロキシルから選択される１つまたはそれ以上の基によって置換されてもよい。Ｙがアルケニレンのとき、好ましい置換基はハロ、Ｃ１−Ｃ６アルキル、Ｃ１−Ｃ６アルコキシ、およびＣ１−Ｃ６ハロアルキルを含む。Ｙの単一の炭素または隣接して接続される炭素の上に２つの置換基が存在するとき、置換基はともに結合されて、５〜６個の構成員を有し、任意にＮ、ＯおよびＳから選択される２つまでのヘテロ原子を環構成員として有する環を形成してもよい。いくつかの実施形態において、ＹはＣＨ２もしくはＣＨ２ＣＨ２もしくは（ＣＨ２）３もしくは（ＣＨ２）４、またはこれらの１つのヒドロキシル置換バージョンである。他の実施形態において、Ｙは−ＣＨ（ＯＨ）−ＣＨ（ＯＨ）−ＣＨ２−である。特定の実施形態において、−Ｙ−Ｚはこの式で表わされ、ここでＺは上に定義されるとおりである。
【００４４】
【化４】
Ｚは−ＯＲ１基であり、ここでＲ１は骨格にヘテロ原子を含み得るＣ４−Ｃ２０ヒドロカルビル基であり、このヘテロ原子はときにはＯであり、ときにはＮまたはＳであり、Ｒ１は未置換であっても置換されてもよい。好ましくは、Ｒ１は未置換であっても置換されてもよいＣ４−Ｃ２０アルキル基であるか、または一般式−（ＣＨ２）ｍ−Ｏ−Ｒ１ｂの基であり、ここでｍは１〜６であり、Ｒ１ｂはＣ１−Ｃ１６アルキル、シクロアルキルまたはシクロアルキルアルキル基であり、Ｒ１ｂは未置換であってもよいし、典型的にアルキル基に存在する基、たとえばヒドロキシル、Ｃ１−Ｃ６アルコキシ、ハロなどで置換されてもよい。
【００４５】
Ｚのいくつかの実施形態において、Ｒ１はシクロアルキルまたはアリールまたはヘテロアリール環に結合されたＣ１−Ｃ６アルキレン鎖、たとえば式−（ＣＨ２）ｒ−Ｒｇなどの基であり、ここでｒは１〜６の整数であり、Ｒｇは３〜８構成員の脂環式もしくは複素環式の環、または５〜１０構成員の芳香族もしくは芳香族複素環基であってもよい環を表わし；Ｒｇは置換されてもよい。好適な例は−（ＣＨ２）２−４−Ｒｇを含み、ここでＲｇは３〜８構成員の単環基、たとえばシクロプロピル、シクロペンチル、シクロヘキシル、フラニル、テトラヒドロフラニル、ピラニル、テトラヒドロピラニル、フェニル、ピリジル、ピリミジニル、チエニルなどである。
【００４６】
本発明は、スフィンゴシン部分の脂質部分の形成前にガラクトシル環のアノマー炭素に付着するアグリコン部分とガラクトースとの間にグリコシド結合を形成することを伴う新たな合成アプローチも提供する。本発明は、本発明の化合物を作製するために有用な、式（ＩＩａ）および式（ＩＩｂ）の中間体も提供する。よって、本発明は１つの局面において、一般式ＩＩａまたはＩＩｂの中間体を用いて上述の式Ｉの化合物を作製するための方法を提供する：
【００４７】
【化５】
【００４８】
【化６】
ここでＮｘは保護された窒素基、たとえばＮ３、ＮＨＣ（Ｏ）Ｘ、ＮＨＣ（Ｏ）Ｊなど、またはイミド、たとえばスクシンイミドまたはフタルイミドなどであり；Ｊは任意に置換されたＣ１−Ｃ１０アルキルまたは任意に置換されたＣ１−Ｃ１０アルコキシまたは任意に置換されたベンジルオキシ基であり；ＹならびにＲ２、Ｒ３、Ｒ４、およびＲ５は式Ｉに対して定義されたものと同様である。
【００４９】
式ＩＩａおよびＩＩｂの化合物に対して、Ｒ２−Ｒ６の各々は好ましくは保護基であってＨではない。好ましい保護基は、還元または水素化分解の条件下で容易に除去される基、たとえばベンジル、ジフェニルメチル、ベンジルオキシメチル、ベンジルオキシカルボニルなどを含む。
【００５０】
本発明の特定の化合物は、当該技術分野において一般的に公知の方法を用いて、化合物７および１０と例示されるようなこのタイプの一般的な中間体から得ることができる。化合物７および１０によって例示される中間体は、適切に保護したα−Ｄ−ガラクトピラノシル−（１−５）−リキソフラノース二糖類から便利よく誘導され、ここでは下記に例示されるとおり、リキソース部分がスフィンゴシン類似体の極性部分の前駆体である。リキソフラノースの代わりに代替的な出発材料を用いてＩＩａおよびＩＩｂのような中間体を与えることによって、本発明の他の化合物を同様に作製できる。これらの中間体は基Ｎｘを含有し、これは式Ｉのアシルアミン−ＮＨＣ（Ｏ）Ｘであってもよいし、保護された窒素、たとえばアジ化物（−Ｎ３）など、またはスクシンイミドもしくはアシル化アミン−ＮＨＣ（Ｏ）Ｊであってもよく、これは従来の方法によって遊離アミン（−ＮＨ２）または式Ｉのアシルアミン−ＮＨＣ（Ｏ）Ｘに転換できる。これらのアシル化アミンにおいて、Ｊは任意に置換されたＣ１−Ｃ１０アルキル基、たとえばトリフルオロメチルまたはトリクロロメチルなどであってもよく；または任意に置換されたＣ１−Ｃ１０アルコキシ基、たとえばメトキシ、エトキシ、２，２，２−トリクロロエトキシ、またはｔ−ブトキシなどであってもよく；または任意に置換されたベンジルオキシ基、たとえばベンジルオキシ、メトキシベンジルオキシ、ジメトキシベンジルオキシなどであってもよい。これらを当該技術分野において広く公知の方法によって窒素から取除いて遊離アミン（ＮＨ２）を与えることができ、次いでこの遊離アミン（ＮＨ２）を従来のアシル化条件を用いてアシル化して式Ｉの−Ｃ（Ｏ）Ｘ基を導入できる。本明細書の実施例に示されるとおり、アジ化物も同様に還元およびアシル化できる。Ｎｘがイミドであるとき、それはヒドラジンによる処理などの公知の方法によって遊離アミンに転換できる。
【００５１】
実施形態の１つにおいて、中間体７または１０を遊離ヒドロキシル基でアルキル化するか、または多数の他の態様のいずれかで修飾することによって、直鎖または分岐鎖、飽和または不飽和であってもよいさまざまなＲ１基を含み、かつ脂肪族もしくは芳香族の環、ヘテロ原子またはさまざまなその他の官能基を含み得る本発明のさまざまな化合物をもたらしてもよい。こうした方法の代表例には、アルキル化剤Ｒ１−ＬＧ１による式ＩＩａのアルコール化合物のアルキル化、および式ＩＩｂの化合物による式Ｒ１−ＯＨのアルコールのアルキル化が含まれ、この方法は、たとえば塩基を用いてアルキル化反応を促進するＷｉｌｌｉａｍｓｏｎエーテル条件、ならびに典型的にホスフィンおよびアゾジカルボン酸を用いてアルキル化反応を促進するＭｉｔｓｕｎｏｂｕ条件などの公知の条件下で行なわれる。
【００５２】
いくつかの実施形態において、式ＩＩａの中間体はアルキル化剤ＬＧ１−Ｒ１によってＯ−アルキル化されて式Ｉの化合物を生じる。Ｒ１は式ＩのＲ１に対して上述される基のいずれかであってもよい。他の実施形態においては、脱離基ＬＧ２を有する式ＩＩｂの中間体が調製され、これはたとえば、塩化スルホニルまたはスルホン無水物によるスルホン化、またはＣＢｒ４およびトリフェニルホスフィンなどの公知の条件を用いたハロゲン化物への転換などの従来の手段によって、式ＩＩａの化合物から作製されてもよい。次いで、式ＩＩｂの化合物を用いて式ＨＯ−Ｒ１のアルコールをアルキル化して、式Ｉの化合物を与える。これらの反応におけるＲ１は上記に定義したとおりであり、遊離ヒドロキシルまたは遊離アミンを含むときには保護された形であってもよい。これらの反応におけるＬＧ１およびＬＧ２は従来の離脱基を表わし、これはしばしばＣｌ、Ｂｒ、Ｉ、および任意に置換されたアルキルまたはアリールスルホン酸塩、たとえば−ＯＳＯ２−Ｊ’などから選択され、ここでＪ’は任意に置換されたＣ１−Ｃ１０アルキルまたは任意に置換されたアリールである。ＬＧ１および／またはＬＧ２が表わし得る好適なアルキルまたはアリールスルホン酸塩は、たとえばメシル酸塩（メタンスルホン酸塩）、トシル化物（トルエンスルホン酸塩）、フェニルスルホン酸塩、トリフルオロメチルスルホン酸塩（トリフレート）などを含む。
【００５３】
ガラクトース基上の特定の保護基を用いたスキームおよび例によって例示しているが、当該技術分野において周知であり本明細書において簡単に考察されるとおり、他の保護基を代わりに用いることもできる。好適な保護基ならびにその取り付けおよび除去のための方法は、本明細書において引用により援用されるＷｕｔｓおよびＧｒｅｅｎｅ，Ｐｒｏｔｅｃｔｉｖｅ Ｇｒｏｕｐｓ ｉｎ Ｏｒｇａｎｉｃ Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ，第４版，Ｗｉｌｅｙ Ｐｒｅｓｓ（２００６）に記載されている。
【００５４】
スキーム１は中間体７の調製を例示している。試薬および条件：ａ）トリ−（１−ピロリジン）−ホスフィンオキシド、ｂ）ｉ．ｔＢｕＯＫ、ＤＭＳＯ、８０℃；ｉｉ．Ｉ２、ピリジン／Ｈ２Ｏ；ｃ）ＮａＢＨ４、ＥｔＯＨ；ｄ）ＰｉｖＣｌ、ピリジン、ＤＣＭ、ｒ．ｔ．；ｅ）クロロメタンスルホニルクロリド、ピリジン；ｆ）ＮａＮ３、ＤＭＦ、８５℃；ｇ）Ｂｕ４ＮＯＨ（４０％ａｑ）、ジオキサン。スキーム１は次のとおりである：
【００５５】
【化７】
通常の当業者が認めるとおり、スキーム１の第１ステップにおける保護されたリキソースの代わりに他のアルコールを用いることによって、式Ｉの化合物に対するさまざまなＹ基を導入できる。特に、他の保護された糖の使用を用いて、このスキームに示されるリキソースによって与えられるものとは異なる相対または絶対立体化学を有するＹの変形物を導入できる。
【００５６】
ヒドロキシ基のアルキル化の後にアジ化物を還元してアミンにすることによって、化合物７から本発明のさまざまな化合物を容易に調製でき、ここでアミンを従来の方法によってアシル化して、式Ｉの化合物の−Ｃ（Ｏ）Ｘ−部分を取り付けてもよい。次いでガラクトシル環上のベンジル保護基を水素化分解によって、またはＴＭＳＩなどの他の手段によって除去でき；さらに以下に例示され、当該技術分野において公知であるとおり、穏やかな水性酸性条件下でアセトニド基を除去できる。これらの脱保護ステップの順序はここに挙げられる順序に限定されない。ベンジルの代わりに他の保護基が用いられるとき、その保護基は当該技術分野において公知の従来の手段によって除去できる。
【００５７】
スキーム２は中間体１０の調製を例示している。試薬および条件：ａ）Ｌｉｎｄｌａｒ触媒、Ｈ２、ＥｔＯＨ；ｂ）ヘキサコサン酸、ＥＤＣ、ＨＯＢＴ、ＤＩＰＥＡ；ｃ）Ｂｕ４ＮＯＨ（４０％ａｑ）、ジオキサン。スキーム２は次のとおりである：
【００５８】
【化８】
同様に、基Ｚが異なる化合物の合成に対する前駆体として、化合物１０または異なるＸ基を有する化合物１０の類似体を用いることができる。さまざまな公知の方法によってＺを導入でき、中でも注目すべき方法は、たとえばハロゲン化アルキルまたは硫酸アルキルまたはスルホン酸アルキル（例、メシル酸塩またはトシル化物など）などの従来のアルキル化剤を用いて、塩基性条件下で化合物１０の一級ヒドロキシルを直接アルキル化するものである。所望のＸおよびＺ基が取り付けられてから、上に考察したとおりに化合物を脱保護してもよい。よって、本明細書に例示される方法を用いることによって、本発明のさまざまな化合物を調製できる。
【００５９】
スキーム３は、２つの一般的な中間体７および１０を用いて、ヒドロキシル基をアルキル化し、（１１に対してのみ）脂肪酸を導入し、最後に脱保護して式Ｉの選択された化合物を与えることによって、α−ＧａｌＣｅｒの特定のオキサ類似体を与える様子を例示する。
【００６０】
【化９】
試薬および条件：ａ）ＫＯＨ、１８−クラウン−６、ｎＢｕＯＣＨ２ＣＨ２ＯＭｓ、ＴＨＦ；ｂ）ＮａＨ、ｎＢｕＯＣＨ２ＣＨ２ＯＭｓ、ＤＭＦ；ｃ）ｉ．Ｌｉｎｄｌａｒ触媒、Ｈ２、ＥｔＯＨ；ｉｉ．ヘキサコサン酸、ＥＤＣ、ＨＯＢＴ、ＤＩＰＥＡ；ｃ）ｉ．ジオキサン中の４Ｎ ＨＣｌ、ＤＣＭ−ＭｅＯＨ ５：１、ｉｉ．Ｈ２、Ｐｄ（ＯＨ）２／Ｃ、ＣＨＣｌ３−ＭｅＯＨ １：３。
【００６１】
【化１０】
ステップ（ｂ）に対する異なるアルキル化剤を用いて、同様に化合物１４〜１６を作製した。当該技術分野において容易に入手可能な出発材料を用いて、これらの方法によって、異なるＸ、ＹおよびＺ基を有する式Ｉのその他の化合物が容易に調製される。
【００６２】
いくつかの実施形態において、本発明の化合物は水および水溶液に可溶性である。たとえば、化合物１５は水に可溶性である。いくつかの実施形態において、本発明の化合物は、水溶液中で少なくとも約０．５ｍｇ／ｍＬ、１ｍｇ／ｍＬ、２ｍｇ／ｍＬ、５ｍｇ／ｍＬ、７．５ｍｇ／ｍＬ、１０ｍｇ／ｍＬ、１２．５ｍｇ／ｍＬ、１５ｍｇ／ｍＬ、１７．５ｍｇ／ｍＬ、２０ｍｇ／ｍＬ、２５ｍｇ／ｍＬ、３０ｍｇ／ｍＬ、４０ｍｇ／ｍＬ、５０ｍｇ／ｍＬ、７５ｍｇ／ｍＬ、１００ｍｇ／ｍＬ、１５０ｍｇ／ｍＬ、または２００ｍｇ／ｍＬの溶解度を有する。他の実施形態において、本発明の化合物は他の相当する化合物よりも改善された水溶性を有する。
【００６３】
本発明の化合物の生物学的評価には、細胞融合によって不死化されたマウスＶα１４ｉＮＫＴ細胞を用いて、ＡＰＣ（ＴＨＰ１）による提示に対するハイブリドーマＦＦ１３を与える。Ｔ細胞活性化の尺度として、ＥＬＩＳＡアッセイによって４８時間培養後の培養培地へのＩＬ２放出を定めた。
【００６４】
その結果、α−ＧａｌＣｅｒの合成糖脂質オキサ類似体は、ＡＰＣによってマウスハイブリドーマに提示されるときにＩＬ２の顕著な放出を刺激できることが示された。α−ＧａｌＣｅｒとの比較から、それらは類似の活性を有し、本発明の新規の化合物のいくつかはより効率的であることが明らかになった。酸素原子によるα−ＧａｌＣｅｒのメチレン基の置換は、これらの化合物がＣＤ１ｄに与えられた後にはこれらの化合物の機能を妨げず、この置換はこれらの化合物がＣＤ１ｄに与えられる際の生存性を高めてその薬物動態学的性質を改善できる。したがって、式Ｉの化合物を少なくとも１つの抗原とともに用いることによって、抗原によって誘発される免疫応答を増大できる。よって、本発明の化合物をワクチン投与に用いられる１つまたはそれ以上の抗原と組合せて用いることによって、抗原およびワクチンの能力を高めることができる。
【００６５】
送達系
本発明の組成物は、少なくとも１つの式１の化合物が１つまたはそれ以上の薬学的に受容可能な賦形剤と混合されたものを含んでもよい。こうした組成物は対象にワクチン投与するためのワクチンとともに投与されてもよいし、ワクチン投与される対象にワクチンが投与されるのと同じ日に投与されてもよい。しばしば化合物は抗原またはワクチンと混合され、この２つは単一用量として、注射または経口摂取によって、または別様で投与される。典型的に、化合物は抗原送達系の部分として投与され、最も典型的には化合物は単一の組成物中で抗原またはワクチンと混合され、その組成物はあらゆる好適なワクチン組成物であってもよい。好適な系はエマルション、リポソームおよび微粒子を含む。よって組成物は、たとえば上述の作用薬を加えた水中油型エマルション、上述の作用薬を含むリポソーム、または上述の作用薬を含有および／または表示する微粒子などを含んでもよい。
【００６６】
エマルション
水中油型（Ｏｉｌ−ｉｎ−ｗａｔｅｒ）および油中水型エマルションをワクチンに用いることは公知である。Ｏ／Ｗエマルションが好ましく、これは典型的に少なくとも１つの油と少なくとも１つの界面活性剤とを含み、この油（類）および界面活性剤（類）は生分解性（代謝性）かつ生体適合性である。エマルション中の油滴は一般的に直径５μｍ未満であり、サブミクロンの直径であってもよく、こうした小さいサイズは安定なエマルションを与えるためのマイクロ流動化装置によって達成される。２２０ｎｍ未満のサイズの小滴は、フィルター滅菌を受けられるので好ましい。
【００６７】
本発明は、たとえば動物（魚など）または植物供給源からの油などの油とともに用いられてもよい。植物油に対する供給源は、ナッツ、種子および穀物を含む。落花生油、大豆油、ヤシ油、およびオリーブ油は最も一般的に入手可能であり、ナッツ油を例示する。たとえばホホバ豆から得られるホホバ油が用いられてもよい。種子油はサフラワー油、綿実油、ヒマワリ種子油、ゴマ種子油などを含む。穀物群の中ではトウモロコシ油が最も容易に入手可能だが、他の穀類、たとえば小麦、カラスムギ、ライ麦、米、テフ、ライ小麦などの油も用いられてよい。グリセロールおよび１，２−プロパンジオールの６−１０炭素脂肪酸エステルは、種子油では自然発生しないが、ナッツおよび種子油から出発する適切な材料の加水分解、分離およびエステル化によって調製されてもよい。哺乳動物の乳からの脂肪および油は代謝性であるため、本発明の実施において用いられてもよい。動物供給源から純粋な油を得るために必要な分離、精製、ケン化およびその他の手段に対する手順は、当該技術分野において周知である。ほとんどの魚は、容易に回収され得る代謝性油を含有する。たとえばタラ肝油、サメ肝油、およびクジラ蝋などのクジラ油などは、本明細書において用いられてもよい魚油のいくつかを例示するものである。いくつかの分岐鎖油は、５炭素イソプレン単位で生化学的に合成されて、一般的にテルペノイドと呼ばれる。サメ肝油は、スクアレン、２，６，１０，１５、１９，２３−ヘキサメチル−２，６，１０，１４，１８，２２−テトラコサヘキサエンとして公知の分岐不飽和テルペノイドを含有し、これは本明細書において特に好ましい。スクアレンの飽和類似体であるスクアランも好ましい油である。スクアレンおよびスクアランを含む魚油は、商業的供給源から容易に入手可能であるし、当該技術分野において公知の方法によって得られてもよい。その他の好ましい油はトコフェロールであり、α、β、γ、δ、εまたはξトコフェロールのいずれが用いられてもよいが、α−トコフェロールが好ましい（例、ＤＬ−α−トコフェロール）。油の混合物が用いられてもよい。
【００６８】
界面活性剤はその「ＨＬＢ」（親水性／新油性バランス（ｈｙｄｒｏｐｈｉｌｅ／ｌｉｐｏｐｈｉｌｅ ｂａｌａｎｃｅ）によって分類できる。本発明の好ましい界面活性剤は、ＨＬＢが少なくとも１０、好ましくは少なくとも１５、より好ましくは少なくとも１６である。本発明は、以下を含むがそれに限定されない界面活性剤とともに用いられてもよい：ポリオキシエチレンソルビタンエステル界面活性剤（一般的にＴｗｅｅｎと呼ばれる）、特にポリソルベート２０およびポリソルベート８０；エチレンオキシド（ｅｔｈｙｌｅｎｅ ｏｘｉｄｅ：ＥＯ）、プロピレンオキシド（ｐｒｏｐｙｌｅｎｅ ｏｘｉｄｅ：ＰＯ）、および／またはブチレンオキシド（ｂｕｔｙｌｅｎｅ ｏｘｉｄｅ：ＢＯ）の共重合体、ＤＯＷＦＡＸ（商標）の商品名で販売、たとえば直鎖ＥＯ／ＰＯブロック共重合体など；オクトキシノール、これは反復エトキシ（オキシ−１，２−エタンジイル）基の数が変動し得るが、オクトキシノール９（Ｔｒｉｔｏｎ Ｘ−１００、またはｔ−オクチルフェノキシポリエトキシエタノール）が特に興味深い；（オクチルフェノキシ）ポリエトキシエタノール（ＩＧＥＰＡＬ ＣＡ−６３０／ＮＰ−４０）；リン脂質、たとえばホスファチジルコリン（レシチン）など；ノニルフェノールエトキシレート、たとえばＴｅｒｇｉｔｏｌ（商標）ＮＰシリーズなど；ラウリル、セチル、ステアリルおよびオレイルアルコールに由来するポリオキシエチレン脂肪エーテル（Ｂｒｉｊ界面活性剤として公知）、たとえばトリエチレングリコールモノラウリルエーテル（Ｂｒｉｊ３０）など；ならびにソルビタンエステル（一般的にはＳＰＡＮとして公知）、たとえばソルビタントリオレエート（Ｓｐａｎ８５）およびソルビタンモノラウレートなど。非イオン性の界面活性剤が好ましい。エマルションに含ませるために好ましい界面活性剤は、Ｔｗｅｅｎ８０（ポリオキシエチレンソルビタンモノオレエート）、Ｓｐａｎ８５（ソルビタントリオレエート）、レシチンまたはＴｒｉｔｏｎ Ｘ−１００である。
【００６９】
たとえばＴｗｅｅｎ８０／Ｓｐａｎ８５混合物などの界面活性剤の混合物が用いられてもよい。ポリオキシエチレンソルビタンエステル、たとえばポリオキシエチレンソルビタンモノオレエート（Ｔｗｅｅｎ８０）などと、オクトキシノール、たとえばｔ−オクチルフェノキシポリエトキシエタノール（Ｔｒｉｔｏｎ Ｘ−１００）などとの組合せも好適である。別の有用な組合せは、ラウレス９と、ポリオキシエチレンソルビタンエステルおよび／またはオクトキシノールとを含む。
【００７０】
界面活性剤の好ましい量（重量％）は次のとおりである：ポリオキシエチレンソルビタンエステル（Ｔｗｅｅｎ８０など）が０．０１％から１％、特に約０．１％；オクチル−またはノニルフェノキシポリオキシエタノール（Ｔｒｉｔｏｎ Ｘ−１００またはＴｒｉｔｏｎシリーズの他の界面活性剤など）が０．００１％から０．１％、特に０．００５％から０．０２％；ポリオキシエチレンエーテル（ラウレス９など）が０．１％から２０％、好ましくは０．１％から１０％、特に０．１％から１％または約０．５％。本発明とともに有用な特定の水中油型エマルションアジュバントは、以下を含むがこれに限定されない：
・スクアレン、Ｔｗｅｅｎ８０、およびＳｐａｎ８５のサブミクロンエマルション。体積によるエマルションの組成は、約５％のスクアレン、約０．５％のポリソルベート８０および約０．５％のＳｐａｎ８５であってもよい。重量では、これらの比率は４．３％のスクアレン、０．５％のポリソルベート８０および０．４８％のＳｐａｎ８５となる。このアジュバントは「ＭＦ５９」として公知である。ＭＦ５９エマルションは有利にはクエン酸イオン、たとえば１０ｍＭクエン酸ナトリウム緩衝液などを含む。
【００７１】
・スクアレン、トコフェロール、およびＴｗｅｅｎ８０のエマルション。このエマルションはリン酸緩衝食塩水を含んでもよい。このエマルションはＳｐａｎ８５（例、１％で）および／またはレシチンも含んでもよい。これらのエマルションは、２％から１０％のスクアレン、２％から１０％のトコフェロール、および０．３％から３％のＴｗｅｅｎ８０を有してもよく、スクアレン：トコフェロールの重量比は好ましくは≦１であり、これはその方がより安定なエマルションが与えられるためである。スクアレンおよびＴｗｅｅｎ８０は約５：２の体積比で存在してもよい。こうしたエマルションの１つは、Ｔｗｅｅｎ８０をＰＢＳに溶解して２％溶液を与え、次いでこの溶液９０ｍｌを（５ｇのＤＬ−α−トコフェロールおよび５ｍｌのスクアレン）の混合物と混合し、次いで混合物をマイクロ流動化することによって作製できる。その結果得られるエマルションはサブミクロンの油滴を有してもよく、その油滴はたとえば平均直径が１００ｎｍから２５０ｎｍ、好ましくは約１８０ｎｍなどである。
【００７２】
・ポリソルベート（例、ポリソルベート８０）、Ｔｒｉｔｏｎ界面活性剤（例、Ｔｒｉｔｏｎ Ｘ−１００）およびトコフェロール（例、α−トコフェロールコハク酸塩）を含むエマルション。このエマルションは、これら３つの構成要素を約７５：１１：１０の質量比で含んでもよく（例、７５０μｇ／ｍｌのポリソルベート８０、１１０μｇ／ｍｌのＴｒｉｔｏｎ Ｘ−１００、および１００μｇ／ｍｌのα−トコフェロールコハク酸塩）、これらの濃度は抗原からのこれらの構成要素のあらゆる寄与を含むべきである。このエマルションンはスクアレンも含んでもよい。このエマルションンは３ｄ−ＭＰＬも含んでもよい。水相はリン酸緩衝液を含んでもよい。
【００７３】
・スクアラン、ポリソルベート８０およびポロキサマー４０１（「Ｐｌｕｒｏｎｉｃ（商標）Ｌ１２１」）のエマルション。このエマルションはリン酸緩衝食塩水、ｐＨ７．４中で調合されてもよい。このエマルションはムラミルジペプチドに対する有用な送達媒体であり、「ＳＡＦ−１」アジュバント中でスレオニルＭＤＰとともに用いられてきた（０．０５〜１％のＴｈｒ−ＭＤＰ、５％のスクアラン、２．５％のＰｌｕｒｏｎｉｃ Ｌ１２１および０．２％のポリソルベート８０）。このエマルションはＴｈｒ−ＭＤＰなしで、「ＡＦ」アジュバント中などで用いられてもよい（５％のスクアラン、１．２５％のＰｌｕｒｏｎｉｃ Ｌ１２１および０．２％のポリソルベート８０）。マイクロ流動化が好ましい。Ｈａｒｉｈａｒａｎ，ら、，Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．Ｖｏｌ５５，３４８６−８９（１９９５）。
【００７４】
・スクアレン、トコフェロール、およびＴｒｉｔｏｎ界面活性剤（例、Ｔｒｉｔｏｎ Ｘ−１００）のエマルション。このエマルションは３ｄ−ＭＰＬも含んでもよい。このエマルションはリン酸緩衝液を含有してもよい。
【００７５】
・０．５〜５０％の油、０．１〜１０％のリン脂質、および０．０５〜５％の非イオン性界面活性剤を有するエマルション。国際公開９５／１１７００号に記載されるとおり、好ましいリン脂質構成要素は、ホスファチジルコリン、ホスファチジルエタノールアミン、ホスファチジルセリン、ホスファチジルイノシトール、ホスファチジルグリセロール、ホスファチジン酸、スフィンゴミエリンおよびカルジオリピンである。サブミクロンの小滴サイズが有利である。
【００７６】
・非代謝性の油（軽油など）および少なくとも１つの界面活性剤（レシチン、Ｔｗｅｅｎ８０またはＳｐａｎ８０など）の、サブミクロン水中油型エマルション。添加剤、たとえばＱｕｉｌＡサポニン、コレステロール、サポニン親油性複合物（ＧＰＩ−０１００など、グルクロン酸のカルボキシル基を介してデスアシルサポニンに脂肪族アミンを加えることによって生成される）、ジメチルジオクタデシルアンモニウムブロミドおよび／またはＮ，Ｎ−ジオクタデシル−Ｎ，Ｎ−ビス（２−ヒドロキシエチル）プロパンジアミンなどが含まれてもよい。
【００７７】
・サポニン（例、ＱｕｉｌＡまたはＱＳ２１）およびステロール（例、コレステロール）がヘリカルミセルとして関わっているエマルション。国際公開２００５／０９７１８１号を参照。
【００７８】
・鉱油、非イオン性親油性エトキシル化脂肪アルコール、および非イオン性親水性界面活性剤（例、エトキシル化脂肪アルコールおよび／またはポリオキシエチレン−ポリオキシプロピレンブロック共重合体）を含むエマルション。国際公開２００６／１１３３７３号を参照。
【００７９】
・鉱油、非イオン性親水性エトキシル化脂肪アルコール、および非イオン性親油性界面活性剤（例、エトキシル化脂肪アルコールおよび／またはポリオキシエチレン−ポリオキシプロピレンブロック共重合体）を含むエマルション。国際公開２００６／１１３３７３号を参照。
【００８０】
サブミクロンの油滴直径を有する、スクアレンを含む水中油型エマルションが理想的である。
【００８１】
リポソーム
リポソームは、水性の区画を囲む脂質二重層に基づく小胞構造である。当該技術分野においてはさまざまなタイプのリポソームが公知である。リポソームは、そのサイズ、脂質組成、表面電荷（カチオン性、中性またはアニオン性）、ならびにリン脂質二重層の数および流動性などの物理化学的性質が広く変動し得る。たとえば、リポソームはリン脂質（中性および／または負に帯電）および／またはコレステロールのみで構成されていてもよい。リポソームは単層膜または多重膜であってもよい。アジュバントとしてのリポソームの使用は、たとえばＵ．Ｓ．６，０９０，４０６号；ＵＳ５，９１６，５８８号；ＥＰ−Ａ−０６２６１６９号などに記載される。
【００８２】
微粒子
微粒子をアジュバントとして使用することが記載されており、たとえば国際公開９８／３３４８７号およびＶａｃｃｉｎｅ Ａｄｊｕｖａｎｔｓ：Ｐｒｅｐａｒａｔｉｏｎ Ｍｅｔｈｏｄｓ ａｎｄ Ｒｅｓｅａｒｃｈ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ，Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ，第４２号、Ｏ’Ｈａｇａｎ編などを参照されたい。好ましい微粒子は生分解性の非毒性ポリマーから作られる。たとえば、微粒子は以下からなる群より選択されるポリマーから作られてもよい：ポリ（α−ヒドロキシ酸）、ポリヒドロキシ酪酸、ポリカプロラクトン、ポリオルトエステル、ポリ無水物、およびポリシアノアクリレート。これらのポリマーの共重合体、またはたとえばＤ，Ｌ−ラクチドとカプロラクトンとの共重合体などが用いられてもよい。
【００８３】
好ましいポリマーはポリ（α−ヒドロキシ酸）であり、より好ましくはポリ（Ｌ−ラクチド）、ポリ（Ｄ，Ｌ−ラクチド）、およびポリ（Ｄ，Ｌ−ラクチド−コ−グリコリド）からなる群より選択されるポリマーである。最も好ましいポリマーはポリ（Ｄ，Ｌ−ラクチド−コ−グリコリド）（ｐｏｌｙ（Ｄ，Ｌ−ｌａｃｔｉｄｅ−ｃｏ−ｇｌｙｃｏｌｉｄｅ））ポリマーであり、「ＰＬＧ」と呼ばれる。好ましいポリ（Ｄ，Ｌ−ラクチド−コ−グリコリド）ポリマーは、そのラクチド／グリコリドのモル比の範囲が２５：７５から７５：２５、より好ましくは４０：６０から６０：４０、たとえば約５０：５０のものである。５０：５０のＰＬＧポリマーは５０％のＤ，Ｌ−ラクチドと５０％のグリコリドとを含有し、迅速に再吸収する共重合体を与えるのに対し、７５：２５ＰＬＧはもっとゆっくり分解し、８５：１５および９０：１０はさらにもっとゆっくり分解するが、これはラクチド成分が増加したためである。
【００８４】
これらのポリマーはさまざまな分子量のものが入手可能であり、所与の抗原に対する適切な分子量は当業者によって容易に決定される。たとえばポリラクチドに対する好適な分子量は、約２０００から５０００のオーダーである。ＰＬＧに対する好適な分子量は一般的に約１０，０００から約２００，０００、好ましくは約１５，０００から約１５０，０００、最も好ましくは約５０，０００から約１００，０００の範囲である。有用な範囲は３０，０００ダルトンから７０，０００ダルトンである。
【００８５】
微粒子は直径が約１００ｎｍから約１５０μｍの範囲であってもよく、より好ましくは直径が約２００ｎｍから約３０μｍ、最も好ましくは直径が約５００ｎｍから約１０μｍの範囲であってもよい。微粒子は典型的に実質的に球形となる。
【００８６】
微粒子はさまざまな態様で作製できる。たとえば、ダブルエマルション／溶媒蒸発技術が公知であり、これはポリマー溶液の小滴からなる一次エマルションの形成を含み、その後この一次エマルションが粒子安定剤／界面活性剤を含有する連続的な水相と混合される。より特定的には、水中油中水型（ｗａｔｅｒ−ｉｎ−ｏｉｌ−ｉｎ−ｗａｔｅｒ：ｗ／ｏ／ｗ）溶媒蒸発系を用いて微粒子を形成してもよい。この技術においては、特定のポリマーを、たとえば酢酸エチル、ジメチルクロリド（塩化メチレンおよびジクロロメタンとも呼ばれる）、アセトニトリル、アセトン、クロロホルムなどの有機溶媒と組合せる。ポリマーは有機溶媒中に約２〜１５％、より好ましくは約４〜１０％、最も好ましくは６％の溶液で与えられる。ポリマー溶液は、たとえばホモジナイザーなどを用いて乳化される。次いでこのエマルションを、より大量の、たとえばポリビニルアルコール（ｐｏｌｙｖｉｎｙｌ ａｌｃｏｈｏｌ：ＰＶＡ）またはポリビニルピロリドンなどのエマルション安定剤の水溶液と組合せる。エマルション安定剤は典型的に約２〜１５％溶液で、より典型的には約４〜１０％溶液で与えられる。次いで混合物をホモジナイズして安定なｗ／ｏ／ｗダブルエマルションを生成する。次いで有機溶媒を蒸発させる。製剤パラメータを操作して、小さい（＜５μｍ）微粒子および大きい（＞３０μｍ）微粒子を調製させてもよい。たとえば、撹拌を減少させると、内側相体積の増加と同様に、より大きな微粒子がもたらされる。粒子サイズはルーチンの方法によって決定できる。
【００８７】
ダブルエマルション技術の使用と同様に、単一エマルション技術も用いられてもよい。噴霧乾燥およびコアセルベーションを用いて、またはエアサスペンションコーティング技術、たとえばパンコーティングおよびＷｕｒｓｔｅｒコーティングなどによって微粒子を形成することもできる。イオン性ゲル化を用いてもよい。
【００８８】
調製後、微粒子はそのまま保存されてもよいし、さらなる使用のために凍結乾燥されてもよい。
【００８９】
微粒子を任意に処理して、（例、ＳＤＳによって）負に帯電した表面または（例、ＣＴＡＢなどのカチオン性界面活性剤によって）正に帯電した表面を有するようにさせてもよい。表面特性の変化によって、吸着すべき抗原に従って吸着特性が変化し得る。
【００９０】
さらなる免疫活性構成要素
本明細書に記載される化合物に加えて、本発明の組成物は付加的な免疫賦活性構成要素を含んでもよい。たとえば、本発明の組成物は以下の１つまたはそれ以上を含んでもよい：アルミニウム塩；カルシウム塩；サイトカイン；ＣＤ４０リガンド；サポニン；および／または免疫賦活性複合体（ｉｍｍｕｎｏｓｔｉｍｕｌａｔｏｒｙ ｃｏｍｐｌｅｘ：ＩＳＣＯＭ）。しかし、いくつかの実施形態において、組成物はこうした付加的な免疫賦活性構成要素を含有しない。
【００９１】
アルミニウム塩
アルミニウム塩は本発明の組成物に含まれても含まれなくてもよい。好適な塩は、水酸化アルミニウムおよびリン酸アルミニウムとして当該技術分野において公知のアジュバントを含む。これらは従来からの名前であるが、どちらも存在する実際の化学的化合物を正確に説明するものではないため、単に便宜上用いられるものである。本発明は、一般的にアジュバントとして用いられる「水酸化物」または「リン酸塩」アジュバントのいずれかを用いてもよい。
【００９２】
「水酸化アルミニウム」として公知のアジュバントは典型的にオキシ水酸化アルミニウム塩であり、これは通常少なくとも部分的に結晶である。オキシ水酸化アルミニウムは式ＡｌＯ（ＯＨ）で表わすことができ、他のアルミニウム化合物、たとえば水酸化アルミニウムＡｌ（ＯＨ）３などとの区別は、赤外線（ｉｎｆｒａｒｅｄ：ＩＲ）分光法によって、特に１０７０ｃｍ−１の吸着バンドおよび３０９０〜３１００ｃｍ−１の強い肩部の存在によって付けられる。Ｖａｃｃｉｎｅ Ｄｅｓｉｇｎ，第９章。水酸化アルミニウムアジュバントの結晶化度は、半分の高さにおける回折バンドの幅（ｗｉｄｔｈ ｏｆ ｔｈｅ ｄｉｆｆｒａｃｔｉｏｎ ｂａｎｄ ａｔ ｈａｌｆ ｈｅｉｇｈｔ：ＷＨＨ）によって反映され、結晶性の低い粒子は微結晶サイズがより小さいために、より大きな線の広がりを見せる。ＷＨＨが増加すると表面積が増加し、より高いＷＨＨ値を有するアジュバントは抗原吸着に対する容量が大きいことが示されている。（例、透過型電子顕微鏡写真に見られるとおり）繊維状の形態は水酸化アルミニウムアジュバントにとって典型的である。水酸化アルミニウムアジュバントのｐＩは典型的に約１１であり、すなわちアジュバント自身が生理的ｐＨにおいて正の表面電荷を有する。
【００９３】
「リン酸アルミニウム」として公知のアジュバントは典型的にアルミニウムヒドロキシリン酸塩であり、しばしば少量の硫酸塩も含有する（すなわち硫酸アルミニウムヒドロキシリン酸塩）。それらは析出によって得られてもよく、析出の際の反応条件および濃度は、塩中のヒドロキシルに対するリン酸の置換度に影響する。ヒドロキシリン酸塩は一般的に、ＰＯ４／Ａｌモル比が０．３から１．２の間である。ヒドロキシリン酸塩は、ヒドロキシル基の存在によって厳密なＡｌＰＯ４と区別できる。たとえば、（例、２００℃に加熱されたときの）３１６４ｃｍ−１におけるＩＲスペクトルバンドは、構造的ヒドロキシルの存在を示す。ＶＡＣＣＩＮＥ ＤＥＳＩＧＮ：ＴＨＥ ＳＵＢＵＮＩＴ ＡＮＤ ＡＤＪＵＶＡＮＴ ＡＰＰＲＯＡＣＨ（Ｐｏｗｅｌｌ ＆ Ｎｅｗｍａｎ編），第９章、Ｐｌｅｎｕｍ Ｐｒｅｓｓ（１９９５）。
【００９４】
リン酸アルミニウムアジュバントのＰＯ４／Ａｌ３＋モル比は一般的に０．３から１．２の間、好ましくは０．８から１．２の間、より好ましくは０．９５±０．１である。リン酸アルミニウムは一般的に、特にヒドロキシリン酸塩に対して、アモルファスである。典型的なアジュバントは、０．６ｍｇのＡｌ３＋／ｍｌが含まれる、ＰＯ４／Ａｌモル比が０．８４から０．９２の間のアモルファスアルミニウムヒドロキシリン酸塩である。リン酸アルミニウムは一般的に粒子状である（例、透過型電子顕微鏡写真に見られるプレート様の形態）。粒子の典型的な直径は、あらゆる抗原吸着後に０．５〜２０μｍ（例、約５〜１０μｍ）の範囲である。
【００９５】
リン酸アルミニウムのゼロ電荷点（ｐｏｉｎｔ ｏｆ ｚｅｒｏ ｃｈａｒｇｅ：ＰＺＣ）は、ヒドロキシルに対するリン酸の置換度に反比例し、この置換度は析出によって塩を調製するために用いられた反応条件および反応物の濃度に依存して変動し得る。ＰＺＣは、溶液中の遊離リン酸イオンの濃度を変えることによって（リン酸が多い＝より酸性のＰＺＣ）、またはヒスチジン緩衝液などの緩衝液を加える（ＰＺＣをより塩基性にする）ことによっても変えられる。本発明に従って用いられるリン酸アルミニウムは、一般的にＰＺＣが４．０から７．０の間、より好ましくは５．０から６．５の間であり、たとえば約５．７などである。
【００９６】
水酸化アルミニウムおよびリン酸アルミニウム両方の混合物を用いることも可能である。この場合、リン酸アルミニウムの方が水酸化アルミニウムより多くてもよく、たとえば重量比が少なくとも２：１、たとえば≧５：１、≧６：１、≧７：１、≧８：１、≧９：１などであってもよい。
【００９７】
患者への投与のための組成物におけるＡｌ＋＋＋の濃度は、好ましくは１０ｍｇ／ｍｌ未満、たとえば≦５ｍｇ／ｍｌ、≦４ｍｇ／ｍｌ、≦３ｍｇ／ｍｌ、≦２ｍｇ／ｍｌ、≦１ｍｇ／ｍｌなどである。好ましい範囲は０．３ｍｇ／ｍｌから１ｍｇ／ｍｌの間である。最大０．８５ｍｇ／用量であることが好ましい。
【００９８】
カルシウム塩
本発明の組成物はリン酸カルシウムアジュバントを含んでも含まなくてもよい。以下により詳細に説明するとおり、さまざまな好適な形のリン酸カルシウムが公知である。
【００９９】
Ｖａｃｃｉｎｅ Ｄｅｓｉｇｎの第８章は、抗原の存在下での塩のインサイツ析出によって、または予め形成された塩への吸着によって、抗原がリン酸カルシウムに吸着できる様子を考察している。
【０１００】
その他の公知のアジュバントはリン酸カルシウムを含む。アジュバントは厳密なＣａ３（ＰＯ４）２ではなく、式Ｃａ１０−ｘ（ＨＰＯ４）ｘ（ＰＯ４）６−ｘ（ＯＨ）２−ｘの不定比性ヒドロキシアパタイトであることが報告されており、そのｐＨ依存性表面電荷はゼロ電荷点（ＰＺＣ）が５．５である。このアジュバントは約１０ｎｍ×１５０ｎｍの寸法の針様粒子、および直径約２０〜３０ｎｍの不規則な形のプレートを形成できる。好適なリン酸カルシウム組成物は、たとえば米国特許第５，６７６，９７６号；国際公開００／４６１４７号；国際公開０３／０５１３９４号；米国特許第６，３５５，２７１号；および米国特許第５，８５１，６７０号などに記載される。
【０１０１】
リン酸カルシウムアジュバントのＣａのＰに対するモル比は、たとえば１．３５から１．８３の間などで変動できる。アジュバントの吸着特性は、析出の際に用いられる条件に依存して変動することが見出されており、たとえばゆっくりした混合で得られるアジュバントは、速い混合によって形成されるアジュバントよりも吸着容量が低くなる可能性がある。
【０１０２】
Ｃａ＋＋として測定されるリン酸カルシウムの量は、０．１ｍｇ／ｍｌから１０ｍｇ／ｍｌの間であってもよく、たとえば０．５〜５ｍｇ／ｍｌの間、好ましくは０．７５〜３ｍｇ／ｍｌ、０．９〜１．５ｍｇ／ｍｌ、または約１ｍｇ／ｍｌであってもよい。
【０１０３】
リン酸カルシウムアジュバントは抗原を吸着する能力を有する。所与の抗原に対して、その抗原の総量の少なくとも８０重量％（例、≧８５％、≧９０％、≧９２．５％、≧９５％、≧９７．５％、≧９７．５％、≧９８％、≧９９％、≧９９．５％など）が吸着される。リン酸カルシウムアジュバントは不溶性で、典型的には粒子状のため、遠心分離の後に固体または可溶性材料の１つ（または両方）における抗原の量を定めるステップを含む方法によって、吸着度を便利よく測定できる。
【０１０４】
抗原
本発明は、細菌抗原、ウイルス抗原、真菌抗原、原生動物抗原、腫瘍関連抗原などを含むさまざまな異なる抗原とともに使用できる。
【０１０５】
細菌抗原は、以下を含むがこれに限定されないバクテリアからの抗原であってもよい：Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ、Ｎ．ｇｏｎｏｒｒｈｏｅａｅなど）、Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ（Ｓ．ａｇａｌａｃｔｉａｅ、Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ、Ｓ．ｐｙｏｇｅｎｅｓ、Ｓ．ｍｕｔａｎｓなど）、Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ（Ｓ．ａｕｒｅｕｓなど）、Ｃｏｒｙｎｅｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｄｉｐｈｔｈｅｒｉａｅ、Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ（Ｃ．ｄｉｆｆｉｃｌｅ、Ｃ．ｔｅｔａｎｉなど）、Ｖｉｂｒｉｏ ｃｈｏｌｅｒａｅ、Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ（Ｍ．ｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓなど）、Ｂｏｒｄｅｔｅｌｌａ ｐｅｒｔｕｓｓｉｓ、Ｈｅｌｉｃｏｂａｃｔｅｒ ｐｙｌｏｒｉ、Ｈａｅｍｏｐｈｉｌｕｓ ｉｎｆｌｕｅｎｚａｅ、Ｂｏｒｒｅｌｉａ ｂｕｒｇｄｏｒｆｅｒｉ、Ｃｈｌａｍｙｄｉａ（Ｃ．ｔｒａｃｈｏｍａｔｉｓ、Ｃ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅなど）、Ｙｅｒｓｉｎｉａ ｐｅｓｔｉｓ、Ｐｏｒｐｈｙｒａｍｏｎａｓ ｇｉｎｇｉｖａｌｉｓ、Ｍｏｒａｘｅｌｌａ ｃａｔａｒｒｈａｌｉｓ。
【０１０６】
原生動物抗原は、以下を含むがこれに限定されない原生動物からの抗原であってもよい：Ｐｌａｓｍｏｄｉｕｍ（Ｐ．ｆａｌｃｉｐａｒｕｍ、Ｐ．ｖｉｖａｘ、Ｐ．ｍａｌａｒｉａｅ、Ｐ．ｏｖａｌｅなど）。
【０１０７】
ウイルス抗原は、以下を含むがこれに限定されないウイルスからの抗原であってもよい：Ａ型肝炎ウイルス、Ｂ型肝炎ウイルス、Ｃ型肝炎ウイルス、ポリオウイルス、狂犬病ウイルス、麻疹ウイルス、流行性耳下腺炎ウイルス、風疹ウイルス、水痘帯状疱疹ウイルス、インフルエンザウイルス、ウエストナイルウイルス、ＳＡＲＳコロナウイルス、ヒト免疫不全症ウイルス、呼吸器合胞体ウイルス、デング熱ウイルス、黄熱ウイルス、日本脳炎ウイルス、ダニ媒介脳炎ウイルス、単純疱疹ウイルス、エプスタインバーウイルス、ヒトサイトメガロウイルス、ヒト乳頭腫ウイルス。
【０１０８】
抗原は、たとえばバクテリア全体、ビリオン全体、不活性化バクテリア、不活性化ビリオン、精製タンパク質、精製糖類、複合糖質などのさまざまな形を取ってもよい。しかし、タンパク質を投与する代わりに、インビボで翻訳されてインサイツでタンパク質を与える核酸を投与することも可能である。
【０１０９】
糖抗原が用いられるとき、その抗原は免疫原性を高めるために担体タンパク質に結合されることが好ましい。必要であればあらゆる好適なリンカーとともに、あらゆる好適な結合反応が用いられてもよい。
【０１１０】
いくつかの実施形態において、抗原は免疫賦活薬の１つに結合されてもよい。
【０１１１】
薬学的組成物
本発明の組成物は薬学的に受容可能である。本発明の組成物は、式Ｉの免疫賦活薬に加えて構成要素を含んでもよい。本発明の組成物は典型的に、１つまたはそれ以上の医薬担体（単数または複数）および／または賦形剤（単数または複数）を含む。こうした構成要素の詳細な考察は、ＲＥＭＩＮＧＴＩＯＮ：ＴＨＥ ＳＣＩＥＮＣＥ ＡＮＤ ＰＲＡＣＴＩＣＥ ＯＦ ＰＨＡＲＭＡＣＹ，第２０版（２０００）において得られる。
【０１１２】
組成物は一般的に水性の形であり、しばしば等張性である。浸透圧を調節するために、ナトリウム塩などの生理学的な塩を含むことが好ましい。塩化ナトリウム（ＮａＣｌ）が好ましく、これは１ｍｇ／ｍｌから２０ｍｇ／ｍｌの間で存在してもよい。存在し得るその他の塩には、塩化カリウム、リン酸二水素カリウム、リン酸二ナトリウム無水物、塩化マグネシウム、塩化カルシウムなどが含まれる。
【０１１３】
組成物は一般的に、重量オスモル濃度が２００ｍＯｓｍ／ｋｇから４００ｍＯｓｍ／ｋｇの間、好ましくは２４０〜３６０ｍＯｓｍ／ｋｇの間、より好ましくは２９０〜３１０ｍＯｓｍ／ｋｇの範囲内である。
【０１１４】
組成物は１つまたはそれ以上の緩衝液を含んでもよい。典型的な緩衝液は以下を含む：リン酸緩衝液；Ｔｒｉｓ緩衝液；ホウ酸塩緩衝液；コハク酸塩緩衝液；ヒスチジン緩衝液（特に水酸化アルミニウムアジュバントとともに）；またはクエン酸塩緩衝液。緩衝液は典型的には５〜２０ｍＭの範囲で含まれる。
【０１１５】
組成物のｐＨは、一般的には５．０から８．１の間であり、より典型的には６．０から８．０の間、たとえば６．５から７．５など、または７．０から７．８の間である。
【０１１６】
組成物は好ましくは無菌である。組成物は好ましくは非発熱性であり、たとえば用量当り＜１ＥＵ（エンドトキシン単位（ｅｎｄｏｔｏｘｉｎ ｕｎｉｔ）、標準的尺度）など、好ましくは用量当り＜０．１ＥＵを含有する。組成物は好ましくはグルテンを含まない。組成物は保存剤を含んでもよい。
【０１１７】
全身投与に好適な態様で製剤が調製されてもよい。全身性製剤は、注射（例、筋肉内、静脈内、または皮下注射）のために設計されたものを含み、または経皮（ｔｒａｎｓｄｅｒｍａｌ）、経皮（ｔｒａｎｓｃｕｔａｎｅｏｕｓ）、経粘膜もしくは経口投与のために調製されてもよい。注射方法は、静脈内、筋肉内、皮下、および内部送達のためのその他の方法を含む。粘膜投与はあらゆる好適な粘膜表面に対するものであってもよい。全身投与は、たとえば坐薬、経皮パッチ、経粘膜送達および鼻腔内投与の使用などの比較的非侵襲性の方法を含んでもよい。経口投与も好適である。当該技術分野において理解されるとおり、好適な形はシロップ、カプセル、錠剤などを含む。所与の対象に対する特定の経路の選択は、当業者の通常のレベルの範囲内である。たとえば、対象が有効な経口投与を妨げる悪心および嘔吐を有するときには、しばしば坐薬としての直腸送達が適切である。経皮パッチは一般的に数日間にわたって徐放性の用量を送達することができるため、それが適切であるような対象に対して好適である。
【０１１８】
処置の方法
本発明の組成物はヒト患者への投与のために好適であり、本発明は患者における免疫応答を高める方法を提供し、この方法は本発明の組成物を患者に投与するステップを含む。このステップは、（ａ）免疫賦活薬および抗原（単数または複数）の両方を含む組成物を投与するステップか、または（ｂ）抗原を含まない免疫賦活薬組成物と抗原含有組成物とを同時投与するステップのいずれかを含んでもよい。
【０１１９】
本発明は、薬物として使用するための本発明の組成物も提供する。
【０１２０】
本発明は、患者における免疫応答を高めるための薬物の製造における、２つまたはそれ以上の（上に定義したとおりの）免疫賦活薬の組合せの使用も提供する。
【０１２１】
本発明は、（ｉ）２つまたはそれ以上の、上に定義したとおりの免疫賦活薬の組合せ、および（ｉｉ）免疫化における同時使用、別個の使用または連続的な使用のための抗原も提供する。
【０１２２】
本発明は、（ａ）患者における免疫応答を高めるための薬物の製造、または（ｂ）患者における抗原に対する免疫応答を高める方法において使用するための、上に定義したとおりの抗原および免疫賦活薬も提供する。
【０１２３】
これらの方法および使用によって高められる免疫応答は一般的に、抗体（Ｂ細胞応答）応答および／またはＴ細胞応答を含む。
【０１２４】
たとえば分泌型ＩｇＡ応答などのＩｇＡ応答などを含む粘膜免疫応答を高めるために、本発明が用いられてもよい。その代わりに、またはその上に、ＩｇＧ応答が高められてもよい。
【０１２５】
以下の実施例は本発明の特定の局面および実施形態の理解を増すために提供されるが、本発明の範囲を制限するものと解釈されるべきではない。
【０１２６】
試薬
すべての化学物質は試薬用として購入され、さらなる精製なしに用いられた。すべての溶媒は新たに活性化された４Å分子ふるいの上で乾燥された。
【０１２７】
一般的な情報
Ｍｅｒｃｋシリカゲルプレート６０Ｆ２５４上で、分析薄層クロマトグラフィ（ｔｈｉｎ ｌａｙｅｒ ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ：ＴＬＣ）によって反応をモニタし、ＵＶ（２５４）下で、および／またはＭｅＯＨ、酸性セリウムアンモニウムモリブデン酸塩もしくはＫＭｎＯ４中の５％Ｈ２ＳＯ４による染色によって視覚化した。Ｍａｃｈｅｒｅｙ−Ｎａｇｅｌ ６０シリカゲル上でフラッシュカラムクロマトグラフィを行なった。２５℃にて３００ＭＨｚのＮＭＲ分光計においてＮＭＲスペクトルを記録した。重水素化溶媒において化学シフト（ｐｐｍ）を決定した。３００（７５ＭＨｚ）分光計において１３Ｃ付着プロトンテスト（ａｔｔａｃｈｅｄ ｐｒｏｔｏｎ ｔｅｓｔ：ＡＰＴ）スペクトルを得て、重水素化溶媒に関して較正した。
【実施例】
【０１２８】
（実施例１）
一般的中間体７の合成
アリル２，３，４，６−テトラ−Ｏ−ベンジル−α−Ｄ−ガラクトピラノシル−（ｌ→５）−２，３−Ｏ−イソプロピリデン−α−Ｄ−リキソフラノシド（１）。
【０１２９】
ＤＣＭ中の５ｇの２，３，４，６−テトラ−Ｏ−ベンジル−α−Ｄ−ガラクトピラノシルブロミド［Ｇｒａｙｓｏｎ，Ｅ．Ｊ．ら、Ｊ．Ｏｒｇ．Ｃｈｅｍ．（２００５），７０，９７４０−９７５４］（８．３４ｍｍｏｌ）および１．５ｇのアリル２，３−Ｏ−イソプロピリデン−α−Ｄ−リキソフラノシド（６．４２ｍｍｏｌ）の溶液に、４．４ｍＬのトリ−（１−ピロリジン）−ホスフィンオキシド（１９．６ｍｍｏｌ）を加えた［Ｍｕｋａｉｙａｍａ，Ｔ．ａｎｄ Ｋｏｂａｓｈｉ，Ｙ．，Ｃｈｅｍ． Ｌｅｔｔ．（２００４），３３，１０−１１］。混合物を室温で２４時間撹拌し、次いでＥｔＯＡｃで希釈してセライト上でろ過した。溶媒の蒸発後、未精製品を入念なフラッシュクロマトグラフィ（トルエン／ＥｔＯＡｃ ９５／５）によって精製し、４．１２ｇの１（８５％）を得た。
【０１３０】
【化１１】
２，３，４，６−テトラ−Ｏ−ベンジル−α−Ｄ−ガラクトピラノシル−（ｌ→５）−２，３−Ｏ−イソプロピリデン−Ｄ−リキソフラノース（２）。
【０１３１】
アルゴン下の３４ｍＬの乾性ＤＭＳＯ中の２，５０９ｇ（３．３３ｍｍｏｌ）の１の溶液に、０．５６ｇ（５ｍｍｏｌ）のｔＢｕＯＫを加えた。混合物を８０℃にて１．５時間撹拌した。冷却後に混合物をＥｔＯＡｃで希釈し、有機溶液を水（ｘ１）および塩水（ｘ３）で洗浄し、硫酸ナトリウム上で乾燥させて蒸発させた。残留物を６５ｍＬのＴＨＦに溶解し、この溶液に１３ｍＬの水、１．１ｍＬのピリジンおよび１．６９ｇ（６．６６ｍｍｏｌ）のヨウ素を加えた。室温にて３時間後、混合物をＥｔＯＡｃで希釈し、５％のチオ硫酸ナトリウム水溶液、１ＮのＨＣｌ、重炭酸ナトリウムの飽和溶液、および水で洗浄した。溶液を硫酸ナトリウムで乾燥して溶媒を蒸発させた。フラッシュクロマトグラフィ（トルエン／ＡｃＯＥｔ ９０／１０）によって２．１６ｇの２（９１％）を得た。
【０１３２】
【化１２】
（２Ｒ，３Ｓ，４Ｒ）−３，４−Ｏ−イソプロピリデン−１−Ｏ−（２，３，４，６−テトラ−Ｏ−ベンジル−α−Ｄ−ガラクトピラノシル）−１，２，３，４，５−ペンタンペントール（３）。
【０１３３】
２０ｍＬのＥｔＯＨ中の２．１ｇ（２．８５ｍｍｏｌ）の２の溶液に、１４０ｍｇ（３．５６ｍｍｏｌ）の水素化ホウ素ナトリウムを加えた。混合物を室温にて２時間撹拌した。混合物をＥｔＯＡｃで希釈し、１ＮのＨＣｌ、重炭酸ナトリウムの飽和溶液、および水で洗浄した。溶液を硫酸ナトリウムで乾燥して溶媒を蒸発させた。フラッシュクロマトグラフィ（ＤＣＭ／ＭｅＯＨ ９７：３）によって１．６５ｇの３（８１％）を得た。
【０１３４】
【化１３】
（２Ｒ，３Ｓ，４Ｒ）−３，４−Ｏ−イソプロピリデン−５−Ｏ−ピバロイル−１−Ｏ−（２，３，４，６−テトラ−Ｏ−ベンジル−α−Ｄ−ガラクトピラノシル）−１，２，３，４，５−ペンタンペントール（４）。
【０１３５】
０℃のアルゴン下の２８ｍＬの乾性ＤＣＭ中の１，２６５ｇ（１．７７ｍｍｏｌ）の３の溶液に、０．６５ｍＬのピリジンおよび０．６６ｍＬ（５．３ｍｍｏｌ）の塩化ピバロイルを加えた。混合物を室温まで温め、一晩撹拌した。２６時間後に混合物をＥｔＯＡｃで希釈し、１ＮのＨＣｌおよび塩水（３ｘ）で洗浄した。有機層を硫酸ナトリウムで乾燥して蒸発させた。フラッシュクロマトグラフィ（Ｐｅｔ．エーテル／ＥｔＯＡｃ ７５：２５）によって１．２２ｇの４（８６％）を得た。
【０１３６】
【化１４】
（２Ｓ，３Ｓ，４Ｒ）−２−アジド−３，４−Ｏ−イソプロピリデン−５−Ｏ−ピバロイル−１−Ｏ−（２，３，４，６−テトラ−Ｏ−ベンジル−α−Ｄ−ガラクトピラノシル）−１，３，４，５−ペンタンテトロール（６）。
【０１３７】
０℃に冷却されたアルゴン下の３０ｍＬの乾性ピリジン中の１，２１ｇ（１．５２ｍｍｏｌ）の４の溶液に、１．６ｍＬ（１．７７ｍｍｏｌ）のクロロメタンスルホニルクロリドを加えた。反応を室温に温め、５時間撹拌した。混合物をＥｔＯＡｃで希釈した。有機層を１ＮのＨＣｌ、重炭酸ナトリウムおよび塩水で洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥して蒸発させた。未精製物をシリカゲルの短いパッドでろ過し、さらなる精製なしに次のステップに用いた。
【０１３８】
未精製物をアルゴン下で乾性ＤＭＦ（１２ｍＬ）に溶解した。アジ化ナトリウム（０．４５ｇ）を加え、混合物を８５℃で温めた。２．５時間後に混合物をＤＣＭで希釈し、水（３ｘ）で洗浄し、有機層を硫酸ナトリウムで乾燥して蒸発させた。フラッシュクロマトグラフィ（Ｐｅｔ．エーテル／ＥｔＯＡｃ ８５：１５）０．８５ｇの４（２ステップにわたって７２％）。
【０１３９】
【化１５】
（２Ｓ，３Ｓ，４Ｒ）−２−アジド−３，４−Ｏ−イソプロピリデン−１−Ｏ−（２，３，４，６−テトラ−Ｏ−ベンジル−α−Ｄ−ガラクトピラノシル）−１，３，４，５−ペンタンテトロール（７）。
【０１４０】
ジオキサン（２０ｍＬ）中の０．５ｇ（０．６ｍｍｏｌ）の６の溶液に、１．７ｍＬの水酸化テトラブチルアンモニウムの溶液を加えた。混合物を７２時間撹拌し、次いでＥｔＯＡｃで希釈した。有機層を１ＮのＨＣｌ、塩水で洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥して蒸発させた。未精製物のフラッシュクロマトグラフィ（Ｐｅｔ．エーテル／ＥｔＯＡｃ ７０：３０）によって０．３５ｇ（７８％）の７を得た。
【０１４１】
【化１６】
（実施例２）
一般的中間体１０の合成
（２Ｓ，３Ｓ，４Ｒ）−２−（Ｎ−エサコサノイルアミノ）−３，４−Ｏ−イソプロピリデン−５−Ｏ−ピバロイル−１−Ｏ−（２，３，４，６−テトラ−Ｏ−ベンジル−α−Ｄ−ガラクトピラノシル）−１，３，４，５−ペンタンテトラオール（９）。
【０１４２】
ＥｔＯＨ（４０ｍＬ）中の０．５ｇ（０．６ｍｍｏｌ）の６の溶液に、触媒的量のＬｉｎｄｌａｒ触媒を加え、混合物を水素雰囲気下で４．５時間撹拌した。０，１０７ｇのジ（１５）０，０７）。混合物をＤＣＭで希釈してセライトでろ過し、得られた０．５ｇの未精製アミン８を次のステップに直接使用した。
【０１４３】
０℃のアルゴン下の乾性ＤＣＭ−ＤＭＦの３：１混合物２０ｍＬにおける化合物８の溶液に、２９６ｍｇ（０．７５ｍｍｏｌ）のヘキサコサン酸を加えた。この懸濁液に、ＥＤＣ（１４５ｍｇ、０．７５ｍｍｏｌ）、ＨＯＢＴ（１０２ｍｇ、０．７５ｍｍｏｌ）、および最後にＤＣＭ中のＤＩＰＥＡ溶液（０．２６ｍｌ、１．５ｍｍｏｌ）を加えた。２０時間後に混合物をＥｔＯＡｃで希釈し、１ＮのＨＣｌ、重炭酸ナトリウムの飽和溶液および塩水で洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥して溶媒を蒸発させた。フラッシュクロマトグラフィ（Ｐｅｔ．エーテル／ＡｃＯＥｔ ８０：２０）によって５３４ｍｇの９（２ステップにわたって７２％）を得た。
【０１４４】
【化１７】
（２Ｓ，３Ｓ，４Ｒ）−２−（Ｎ−エサコサノイルアミノ）−３，４−Ｏ−イソプロピリデン−１−Ｏ−（２，３，４，６−テトラ−Ｏ−ベンジル−α−Ｄ−ガラクトピラノシル）−１，３，４，５−ペンタンテトラオール（１０）。
【０１４５】
５００ｍｇの９から出発して、化合物７の調製に対して記載されるとおりに化合物１０を得た。生成物をフラッシュクロマトグラフィ（Ｐｅｔ．エーテル／ＥｔＯＡｃ ５０：５０）によって精製し、３４５ｍｇ（７６％）の化合物１０を得た。
【０１４６】
【化１８】
（実施例３）
α−ＧａｌＣｅｒのオキサ類似体の合成
（２Ｓ，３Ｓ，４Ｒ）−２−アジド−５−（２−ブトキシエチル）−３，４−Ｏ−イソプロピリデン−１−Ｏ−（２，３，４，６−テトラ−Ｏ−ベンジル−α−Ｄ−ガラクトピラノシル）−１，３，４，５−ペンタンテトラオール（１１）。
【０１４７】
アルゴン下の乾性ＤＭＦ（３ｍＬ）中の１００ｍｇ（０．１３５ｍｍｏｌ）の７の溶液に、６０％のＮａＨ（１１ｍｇ、０．２７ｍｍｏｌ）および２−ブトキシエチルメシラート（７５ｍｇ、０．４ｍｍｏｌ）を加えた。混合物を１００℃にて２時間撹拌した。別の２ｅｑのＮａＨおよび２−ブトキシエチルメシラートを加えた。さらに２時間後に、ＥｔＯＡｃで希釈した塩化アンモニウム（飽和溶液）で混合物をクエンチし、水（４ｘ）で洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥して蒸発させた。フラッシュクロマトグラフィ（Ｐｅｔ．エーテル／ＡｃＯＥｔ ８０：２０）は７４ｍｇ（６５％）の１１を与えた。
【０１４８】
【化１９】
（２Ｓ，３Ｓ，４Ｒ）−５−Ｏ−（２−ブトキシエチル）−２−（Ｎ−エキサコサノイルアミノ）−３，４−Ｏ−イソプロピリデン−１−Ｏ−（２，３，４，６−テトラ−Ｏ−ベンジル−α−Ｄ−ガラクトピラノシル）−１，３，４，５−ペンタエンテトラオール（１２）。
【０１４９】
１０より：１００ｍｇ（９２ｍｍｏｌ）の１０の溶液に、１０ｍｇのＫＯＨおよび２０ｍｇ（０．１ｍｍｏｌ）の２−ブトキシエチルメシラートを加えた。混合物を４０℃にて２０時間撹拌し、次いでＥｔＯＡｃで希釈した。有機層を塩水で洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥して蒸発させた。フラッシュクロマトグラフィ（トルエン／ＥｔＯＡｃ ８０：２０）は７５ｍｇ（６８％）の１２を与えた。
【０１５０】
１１より：６からの９の調製に対して記載されたものと同じ手順に従って、６９％の収率の化合物１２を得た。
【０１５１】
【化２０】
（２Ｓ，３Ｓ，４Ｒ）−５−Ｏ−（２−ブトキシエチル）−２−（Ｎ−エキサコサノイルアミノ）−１−Ｏ−（α−Ｄ−ガラクトピラノシル）−１，３，４，５−ペンタンテトラオール（１３）。
【０１５２】
０℃の４ｍＬのジオキサン中の７０ｍｇ（０．０６ｍｍｏｌ）の１２の溶液に、ジオキサン中の４ＮのＨＣｌを０．０８ｍＬ加えた。混合物を室温まで温めて４時間撹拌した。溶媒を蒸発させて未精製生成物を次のステップに直接供した。
【０１５３】
未精製物を２ｍＬのＣＨＣｌ３／ＭｅＯＨ混合物に溶解した。３０ｍｇの１０％Ｐｄ（ＯＨ）２／Ｃを加えて、混合物を水素雰囲気下で３時間撹拌した。混合物をセライトでろ過し、溶媒を蒸発させた。フラッシュクロマトグラフィ（ＤＣＭ／ＭｅＯＨ ９０：１０）は２９ｍｇ（２ステップにわたって６２％）の１３を与えた。
【０１５４】
【化２１】
類似の態様で、化合物１４および１５を得ることができる。
【０１５５】
（実施例４）
ネズミＮＫＴ細胞系による糖脂質の認識によるＩＬ−２分泌
糖脂質：すべてのα−ＧａｌＣｅｒ類似体を記載されるとおりに合成した。α−ＧａｌＣｅｒは文献の方法に従って合成した［Ｆｉｇｕｅｒｏａ−Ｐｅｒｅｚ，Ｓ．＆ Ｓｃｈｍｉｄｔ，Ｒ．Ｒ．（２０００）Ｃａｒｂｏｈｙｄｒ．Ｒｅｓ．，３２８，９５−１０２］。
【０１５６】
ＣＤ１ｄ受容体を過剰発現するＴＨＰ１（ヒト急性単球白血病細胞系）をＡＰＣ（抗原提示細胞（ａｎｔｉｇｅｎ ｐｒｅｓｅｎｔｉｎｇ ｃｅｌｌｓ））として用いて、ＲＰＭＩ培地（グルタミン２ｍＭ、ＮａＰｙｒｕｖａｔｅ１ｍＭ、非必須アミノ酸１％、カナマイシン１００μｌ／ｍｌ、ＦＢＳ１０％、β−メルカプトエタノール０．０１ｍＭ）中で培養した。
【０１５７】
活性化に対する応答としてＩＬ２を分泌するＣＤ１ｄ反応性マウスＴ細胞ハイブリドーマＦＦ１３を化合物の評価に用いた。ＦＦ１３細胞をＲＰＭＩ１６４０培地（グルタミン２ｍＭ、ＮａＰｙｒｕｖａｔｅ１ｍＭ、非必須アミノ酸１％、カナマイシン１００μｌ／ｍｌ、ＦＢＳ１０％、β−メルカプトエタノール０．０１ｍＭ）中で培養した。
【０１５８】
ＴＨＰ１ ｈＣＤ１ｄ（ヒト（ｈｕｍａｎ）ＣＤ１Ｄで形質移入したヒトＴＨＰ−１細胞）およびマウスＮＫＴ細胞ハイブリドーマＦＦ１３は、Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ Ｈｏｓｐｉｔａｌ Ｂａｓｅｌより提供された。
【０１５９】
化合物のＤＭＳＯストック溶液（１ｍｇ／ｍＬ）を調製し、異なる濃度に希釈した：１０μｇ／ｍｌ；１，１μｇ／ｍｌ；０．３７μｇ／ｍｌ；０．１２μｇ／ｍｌ；０．０４μｇ／ｍｌ；０．０１μｇ／ｍｌ。
【０１６０】
ＦＦ１３刺激
９６マルチウェル中で、９０μｌの無血清培地中のＴＨＰ１（ＡＰＣ）（５ｘ１０４細胞）に１０μｌの化合物の溶液を加え、２時間インキュベートした。
【０１６１】
完全培地中の１００μｌのＦＦ１３を加え（ウェル当り１０ｘ１０４）、４８時間後にＩＬ２生成に対するテストを評価した。
【０１６２】
ＩＬ２濃度はＥＬＩＳＡによって、一次モノクローナル抗マウスＩＬ−２抗体（Ｒ＆Ｄ Ｓｙｓｔｅｍ）と、ビオチン化検出抗マウスＩＬ−２抗体（Ｒ＆Ｄ Ｓｙｓｔｅｍ）と、発色剤としてＳＩＧＭＡ ＦＡＳＴ ＯＰＤとを用いて評価された。標準として組換えマウスＩＬ２（Ｒ＆Ｄ Ｓｙｓｔｅｍ）を用い、すべてのテストを３回行なった。
【０１６３】
図２は、ＮＫＴ細胞ハイブリドーマテストにおいてアルファＧａｌＣｅｒ自身の効果と比較したときの、化合物１３〜１６で処置された細胞によって放出されるＩＬ２レベルを示す。さまざまな用量のテスト化合物（約０．１μｇ／ｍＬから約１０μｇ／ｍＬ）に２時間露出させたＣＤ１ｄ形質移入ＴＨＰ−１細胞に、ａ−ＧａｌＣｅｒ特異的なＮＫＴハイブリドーマ細胞を加え、４８時間後に培地中のＩＬ−２レベルを定めた。化合物１３および１６は１０マイクロモル濃度においてａ−ＧａｌＣｅｒと同様に効果的であり、他の化合物は少しだけ効果が低かった。よって、セラミド化合物のアルキル基に挿入された酸素は活性に悪影響を与えず、アルキル基の顕著な変更は活性に少しの変化しか与えずに行なわれ得る。
【０１６４】
（実施例５）
合成アルファＧａｌ ＧＧおよびアルファＧａｌ ＬＰのインビボ比較。
【０１６５】
合成α−ＧａｌＣｅｒの２つの異なる供給源を比較した。成体Ｂａｌｂ／Ｃマウスにおいて、インフルエンザ抗原の存在下での合成「アルファＧａｌ ＧＧ」および「アルファＧａｌ ＬＰ」の効果のインビボ比較を行なった。両方のα−ＧａｌＣｅｒは最初に、Ｈ２Ｏおよび０．５％のＴｗｅｅｎ２０に溶解した形で与えられた。このＴｗｅｅｎ２０溶解材料を単独で、または水中ＭＦ５９スクアレンエマルションと組合せて投与した。α−ＧａｌＣｅｒをＭＦ５９（非製剤）に加えるか、またはＭＦ５９（製剤）に組み込んだ。
【０１６６】
８匹の成体マウス（７週）のグループを３週間間隔で２回免疫化した。加えて、マウスのあるグループにはいずれのワクチン組成物も投与せずに対照として用いた。免疫化組成物はインフルエンザ抗原「Ｆｌｕ」を含み、各免疫化に対して各マウスは０．１μｇのＡ／Ｓｏｌｏｍｏｎ Ｈ１Ｎ１、０．１μｇのＡ／Ｗｉｓｃｏｎｓｉｎ Ｈ３Ｎ２、または０．１μｇのＢ／Ｍａｌａｙｓｉａインフルエンザ抗原を受けた。ａ−ＧａｌＣｅｒで処置されたマウスについては、各マウスは各免疫化に対して０．１μｇのａ−ＧａｌＣｅｒを受けた。免疫化は、脚への５０μＬ組成物の筋肉内注射によって投与された。第１の投与の３週間後に第２の免疫化を送達し、ここでは異なる脚に付加的な５０μＬのワクチンを投与した。マウスのグループに以下の組成物の各々を投与した：
Ｆｌｕ；
ＦｌｕおよびＭＦ５９；
Ｆｌｕおよびａ−Ｇａｌ ＧＧ；
ＦｌｕおよびＭＦ５９およびａ−Ｇａｌ ＧＧ；
ＦｌｕおよびＭＦ５９およびａ−Ｇａｌ ＧＧ、製剤；
Ｆｌｕおよびａ−Ｇａｌ ＬＰ；
ＦｌｕおよびＭＦ５９およびａ−Ｇａｌ ＬＰ；
ＦｌｕおよびＭＦ５９およびａ−Ｇａｌ ＬＰ（製剤）。
【０１６７】
第２の免疫化投与の２週間後にワクチン投与組成物に対する免疫応答を評価した。ＨＩ（赤血球凝集阻止（ｈｅｍａｇｇｌｕｔｉｎａｔｉｏｎ−ｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎ））力価およびＩｇＧ力価の測定値を記録して、免疫応答の指標として用いた。ＨＩ力価はＨＩアッセイを用いて測定し、ＩｇＧ力価はＥＬＩＳＡによって測定した。結果をまとめたものを図３、図４および図５に示しており、これらはそれぞれＨ３Ｎ２（Ａ／Ｗｉｓｃｏｎｓｉｎ）に応答したＨＩ力価、Ｂ（Ｂ／Ｍａｌａｙｓｉａ）、Ｈ１Ｎ１（Ａ／Ｓｏｌｏｍｏｎ）およびＨ３Ｎ２（Ａ／Ｗｉｓｃｏｎｓｉｎ）に応答したＩｇＧ力価、ならびにＩｇＧ力価のサブクラスを示す。
【０１６８】
（実施例６）
合成アルファＧａｌ ＬＰおよびその誘導体のインビボ比較。
【０１６９】
インフルエンザ抗原によって、成体Ｂａｌｂ／Ｃマウスにおいて、化合物ａ−Ｇａｌ ＬＰ、１３、１４、１５および１６の効果のインビボ比較を行なう。化合物１３〜１６は明細書に記載されるとおりに合成される。
【０１７０】
８匹の成体マウス（７週）のグループを３週間間隔で２回免疫化する。加えて、４匹のマウスにはいずれのワクチン組成物も投与せずに対照グループとして用いる。免疫化組成物は、２００８／０９株、すなわちＡ／Ｂｒｉｓｂａｎｅ／５９／２００７様、Ａ／Ｂｒｉｓｂａｎｅ／／１０／２００７様およびＢ／Ｆｌｏｒｉｄａ／４／２００６様の各々からの０．１μｇの赤血球凝集素を含むインフルエンザ抗原「Ｆｌｕ」を含む。ａ−ＧａｌＣｅｒで処置すべきマウスについては、各マウスは各免疫化に対して０．１μｇのａ−ＧａｌＣｅｒを受ける。免疫化は、脚への５０μＬ組成物の筋肉内注射によって投与される。第１の投与の３週間後に第２の免疫化を送達し、ここでは異なる脚に付加的な５０μＬの組成物を投与する。マウスのグループに以下の組成物の各々を投与する：
Ｆｌｕ；
ＦｌｕおよびＭＦ５９アジュバント；
Ｆｌｕおよびａ−Ｇａｌ ＬＰ；
Ｆｌｕおよび化合物１３（Ｈ２Ｏ／Ｔｗｅｅｎ２０ ０．５％）、１４（Ｈ２Ｏ／Ｔｗｅｅｎ２０ ０．５％）、１５（Ｈ２Ｏ）、または１６（Ｈ２Ｏ／Ｔｗｅｅｎ２０ ０．５％）；
ＦｌｕおよびＭＦ５９／ａ−Ｇａｌ ＬＰ；ならびに
ＦｌｕおよびＭＦ５９／化合物１３、１４、１５、または１６。
【０１７１】
第２の免疫化投与の２週間後にワクチン投与組成物に対する免疫応答を評価する。ＨＩ（赤血球凝集阻止）力価、ＩｇＧおよびＩｇＧサブクラス力価の測定値を記録して、免疫応答の指標として用いる。ＨＩ力価はＨＩアッセイを用いて測定し、ＩｇＧ力価はＥＬＩＳＡによって測定する。
【技術分野】
【０００１】
本発明は、ＮＫＴ細胞（ナチュラルキラー（ｎａｔｕｒａｌ ｋｉｌｌｅｒ）Ｔ細胞）に対するリガンドである糖脂質類似体と、その糖脂質類似体を作製する方法と、ワクチン接種の際に抗体価のレベルを上げるための免疫増強剤としてその糖脂質類似体を使用する方法とに関する。
【背景技術】
【０００２】
近年、糖脂質にはいくつかの異なる免疫学的特性があることが明らかになった。中でも、糖脂質はＣＤ１分子によって提示されるときに抗原として作用できること、およびワクチンと組合せて投与されるときに免疫応答を改善できることが示された。
【０００３】
ＣＤ１分子は、周知の主要組織適合遺伝子複合体（Ｍａｊｏｒ Ｈｉｓｔｏｃｏｍｐａｔｉｂｉｌｉｔｙ Ｃｏｍｐｌｅｘ：ＭＨＣ）分子と同様の機能を有する高度に保存された抗原提示タンパク質のファミリーである。ＭＨＣタンパク質がペプチドを提示するのに対し、ＣＤ１タンパク質はＴリンパ球に結合してさまざまな脂質および糖脂質を表示する。
【０００４】
ヒトにおいては、さまざまなＣＤ１アイソフォームが配列の類似性に基づいて、グループＩ（ＣＤ１ａ、ｂ、ｃおよびｅ）ならびにグループＩＩ（ＣＤ１ｄ）と分類されている［非特許文献１］。ヒトＣＤ１ａ［非特許文献２］、ｈＣＤ１ｂ［非特許文献３］、ｈＣＤ１ｄ［非特許文献４］およびマウス（ｍｏｕｓｅ）ＣＤ１ｄ（ｍＣＤ１ｄ）［非特許文献５；非特許文献６］の、しばしばそれぞれの抗原と複合体となった結晶構造から、それらのそれぞれの結合溝の形態の違いによってある程度のリガンド特異性が得られる一方で、多様な組の抗原脂質を提示する能力を維持できることが明らかになった。
【０００５】
特に、ｍＣＤ１ｄは全体的な折り畳みがＭＨＣクラスＩタンパク質に似ていることが明らかになった。α鎖は３つのドメイン（α１、α２およびα３）に折り畳まれてβ２ｍと密接に関係している。膜遠位のα１およびα２ドメインは結合溝を形成し、これは８鎖の逆平行βシートフロアを２つの逆平行αへリックスが横切ったものからなる［非特許文献５］。ｍＣＤ１ｄはさらに、結合溝に存在するＡ’およびＦ’と呼ばれる２つの疎水性ポケットの中に長い脂質尾部を収容できることが示された。さらに、ｈＣＤ１ｂおよびｈＣＤ１ａの構造から、ＣＤ１は抗原糖脂質を与えられると疎水性溝中に脂質部分を結合しながら親水性の糖部分がＴ細胞受容体に接触できるようにすることが示された。
【０００６】
哺乳動物およびマイコバクテリアの脂質は、ヒトＣＤ１ａ、ＣＤ１ｂ、ＣＤ１ｃおよびＣＤ１ｄによって提示されることが公知である［非特許文献７］。海綿のＡｇｅｌａｓ ｍａｕｒｉｔｉａｎｕｓに見出された脂質であるアルファガラクトシルセラミド（Ａｌｐｈａ−ｇａｌａｃｔｏｓｙｌ ｃｅｒａｍｉｄｅ：α−ＧａｌＣｅｒ）は、これまでのところ最も広く研究されたＣＤ１ｄに対するリガンドである。α−ＧａｌＣｅｒはＣＤ１ｄに結合すると、マウスにおけるＶα１４ｚナチュラルキラーＴ細胞（Ｖα１４ｚ ＮＫＴ細胞）およびヒト相同体Ｖα２４ｚ ＮＫＴ細胞による迅速なＴｈ１およびＴｈ２サイトカイン生成を刺激し、現在ではモデル抗原と考えることができる。しかし、海を起源とするαガラクトシルセラミドがなぜこんなに強力な作用薬であるのかは謎であるため、哺乳動物におけるその生理的重要性はなおも不明である。
【０００７】
【化１】
ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞は典型的に、正常な末梢血中の単核細胞画分のおよそ１０％から１５％を含む。歴史的には、ＮＫ細胞は最初、予め免疫化または活性化することなく特定の腫瘍細胞を溶解する能力によって同定された。ＮＫ細胞はサイトカイン生成においても重要な役割をしており、これは癌および感染の制御、ならびにおそらくは胎児の着床に関与している可能性がある。
【０００８】
α−ＧａｌＣｅｒを免疫原性タンパク質とともに投与することによって、樹状細胞との相互作用を通じた可溶性抗原に対するＣＤ４＋およびＣＤ８＋ＮＫＴ細胞応答が高められた［非特許文献８］。α−ＧａｌＣｅｒの投与によってＢリンパ球の応答も高められ、追加免疫に応答してより高い頻度のメモリーＢ細胞およびより高い抗体レベルを誘発した［非特許文献９］。これは特定のペプチド抗原の効力を高めるために用いられた。特許文献１。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００９】
【特許文献１】国際公開第２００５／０００３４８号
【非特許文献】
【００１０】
【非特許文献１】Ｃａｌａｂｉ，Ｆ．；Ｊａｒｖｉｓ，Ｊ．Ｍ．；Ｍａｒｔｉｎ，Ｌ．；Ｍｉｌｓｔｅｉｎ，Ｃ．，Ｔｗｏ ｃｌａｓｓｅｓ ｏｆ ＣＤ１ ｇｅｎｅｓ，Ｅｕｒ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１９８９，１９，（２），２８５−９２
【非特許文献２】Ｚａｊｏｎｃ，Ｄ．Ｍ．ら、Ｎａｔ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．（２００３），４，８０８−８１５
【非特許文献３】Ｇａｄｏｌａ，Ｓ．Ｄ．ら、．Ｎａｔ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．（２００２），３，７２１−７２６
【非特許文献４】Ｋｏｃｈ，Ｍ．ら、Ｎａｔ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．（２００５），６，８１９−８２６
【非特許文献５】Ｚｅｎｇ，Ｚ．−Ｈ．ら、Ｓｃｉｅｎｃｅ（１９９７），２７７，３３９−３４５
【非特許文献６】Ｚａｊｏｎｃ，Ｄ．Ｍ．ら、Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．（２００５），２０２，１５１７−１５２６
【非特許文献７】Ｐｏｒｃｅｌｌｉ，Ｓ．Ａ．＆ Ｍｏｄｌｉｎ，Ｒ．Ｌ．（１９９９）Ａｎｎｕ．Ｒｅｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１７，２９７−３２９
【非特許文献８】Ｉａｎ Ｆ．Ｈｅｒｍａｎｓ，Ｉ．Ｆ．ら、，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．（２００３），１７１，５１４０−５１４７
【非特許文献９】Ｇａｌｌｉ Ｇ．ら、ＰＮＡＳ，（２００７），１０４；３９８４−３９８９
【発明の概要】
【課題を解決するための手段】
【００１１】
本発明は、以下に示す一般的な構造に対応する、α−ＧａｌＣｅｒの類似体である新たなクラスの免疫原性化合物と、その化合物の調製のための新しい合成法と、ワクチンの有効性を高めるためのその化合物の使用とに関する。これらの化合物はα−ＧａｌＣｅｒよりも改善された薬物動態学的性質を提供し、抗原またはワクチンが投与されるときには免疫応答を同様に高める効果がある。
【００１２】
１つの局面において、本発明は、式Ｉの化合物およびこうした化合物またはその薬学的に受容可能な塩を含有する組成物に関する：
【００１３】
【化２】
ここでＲ２、Ｒ３、Ｒ４、およびＲ５は各々独立にＨまたは保護基を表わし；
Ｘは置換可能なＣ４−Ｃ３０ヒドロカルビル基（ｈｙｄｒｏｃａｒｂｙｌ ｇｒｏｕｐ）であり；
Ｙは２つまでの基で置換可能なＣ１−Ｃ６アルキレンまたはＣ２−Ｃ６アルケニレンリンカーであり；
Ｚは−ＯＲ１であり、ここでＲ１は骨格にヘテロ原子を含み得るＣ４−Ｃ２０ヒドロカルビル基であり、任意に置換される。
【００１４】
式Ｉの化合物を含有する組成物は薬学的組成物であってもよく、しばしば薬学的に受容可能な担体を含む。いくつかの実施形態において、この組成物は少なくとも１つの抗原をさらに含み、この抗原は所望の免疫応答を誘発できる能力によって選択される。本発明の特定の実施形態は、ワクチンと混合された式Ｉの化合物を含む。
【００１５】
別の局面において、本発明は式Ｉの化合物を作製する方法と、式Ｉの化合物を作製するために有用な新規の中間体とに関する。
【００１６】
別の局面において、本発明は、抗原に露出される対象に式Ｉの化合物を投与することによって抗原に対する免疫応答を高めるために、式Ｉの化合物を使用する方法に関する。特定の実施形態において、この方法はヒト対象への投与のためのワクチンの有効性を増加させるために有用である。
【図面の簡単な説明】
【００１７】
【図１】ＡＰＣ（ＴＨＰ１）によって提示されるときのマウスＴ細胞ハイブリドーマＦＦ１３の活性化によって合成化合物の活性を示す図である。Ｔ細胞活性化の尺度として、ＥＬＩＳＡアッセイによって４８時間培養後の培養培地へのＩＬ２放出を定めた。ｙ軸はＩＬ２レベルをｐｇ／ｍｌで示す。ｘ軸は糖脂質の量をμｇ／ｍｌで示す。
【図２】化合物またはａ−ＧａｌＣｅｒに露出したＡＰＣと接触したＮＫＴハイブリドーマ細胞によるＩＬ−２放出を測定するアッセイにおいてテストされた４つの合成化合物の活性データをまとめた図である。
【図３】Ｂａｌｂ／ＣマウスにおけるＨＩ力価を測定するアッセイにおいてテストされた合成ａ−Ｇａｌ ＧＧおよびａ−Ｇａｌ ＬＰのインビボ活性データをまとめた図である。抗−Ｈ３Ｎ２ ＨＩ力価を示す。
【図４】Ｂａｌｂ／ＣマウスにおけるＩｇＧ力価を測定するアッセイにおいてテストされた合成ａ−Ｇａｌ ＧＧおよびａ−Ｇａｌ ＬＰのインビボ活性データをまとめた図である。ＩｇＧ力価はＥＵ／ｍｌで示される。グラフ中の３つ組の各々について、列は左から右にＢ、Ｈ１Ｎ１およびＨ３Ｎ２を表わす。
【図５】Ｂａｌｂ／ＣマウスにおけるＩｇＧ２ａ／ＩｇＧ１力価を測定するアッセイにおいてテストされた合成ａ−Ｇａｌ ＧＧおよびａ−Ｇａｌ ＬＰのインビボ活性データをまとめた図である。ＩｇＧ力価はＥＵ／ｍｌで示される。グラフ中の対の各々について、列は左から右にＩｇＧ２ａおよびＩｇＧ１を表わす。
【発明を実施するための形態】
【００１８】
本発明の化合物
本明細書において用いられる「ヒドロカルビル残基」とは、別様に指定されない限り、炭素および水素のみを含有する残基を示す。この残基は、脂肪族または芳香族であっても、直鎖、環状、分岐鎖、飽和または不飽和であっても、これらのあらゆる組合せであってもよい。しかし、そうした記載がある場合には、ヒドロカルビル残基はヒドロカルビル基自身の炭素および水素の構成員に加えて、またはその代わりにヘテロ原子を含有してもよい。よって、ヘテロ原子を含有することが特定的に示されているとき、ヒドロカルビル基はヒドロカルビル残基の「骨格」にヘテロ原子を含有してもよく、任意に置換されているとき、ヒドロカルビル残基は親ヒドロカルビル残基の１つまたはそれ以上の水素の代わりに１つまたはそれ以上のカルボニル基、アミノ基、ヒドロキシル基なども有していてもよい。
【００１９】
本明細書において用いられる「無機残基」とは、炭素を含有しない残基を示す。その例にはハロ、ヒドロキシ、ＮＯ２またはＮＨ２が含まれるがこれに限定されない。
【００２０】
本明細書において用いられる「アルキル」、「アルケニル」および「アルキニル」という用語は、直鎖、分岐鎖および環状の一価のヒドロカルビルラジカル、ならびにこれらの組合せを含み、これらは未置換のときにはＣおよびＨのみを含有する。その例にはメチル、エチル、イソブチル、シクロヘキシル、シクロペンチルエチル、２−プロペニル、３−ブチニルなどが含まれる。本明細書においてはこうした基の各々における炭素原子の総数をしばしば記載しており、たとえばその基が最高１０個の炭素原子を含有できるとき、それは１−１０ＣまたはＣ１−Ｃ１０もしくはＣ１−１０と表わすことができる。たとえば、ヘテロアルキル基のようにヘテロ原子（典型的にはＮ、ＯおよびＳ）が炭素原子を置換できるとき、その基を説明する数はなおもたとえばＣ１−Ｃ６などと書かれるが、その数は基の中の炭素原子の数と、記載される環または鎖の中の炭素原子に対する置換として含まれるこうしたヘテロ原子の数との和を表わす。
【００２１】
典型的に、本発明のアルキル、アルケニルおよびアルキニル置換基は、１−１０Ｃ（アルキル）または２−１０Ｃ（アルケニルもしくはアルキニル）を含有する。好ましくは、それらの置換基は１−８Ｃ（アルキル）または２−８Ｃ（アルケニルもしくはアルキニル）を含有する。時には、それらの置換基は１−４Ｃ（アルキル）または２−４Ｃ（アルケニルもしくはアルキニル）を含有する。単一の基が２つ以上のタイプの多重結合または２つ以上の多重結合を含んでもよい；こうした基は、少なくとも１つの炭素−炭素二重結合を含有するときには「アルケニル」という用語の定義に含まれ、少なくとも１つの炭素−炭素三重結合を含有するときには「アルキニル」という用語に含まれる。
【００２２】
アルキル、アルケニルおよびアルキニル基はしばしば、その置換が化学的に意味をなす程度まで置換される。典型的な置換基は、以下を含むがこれに限定されない：ハロ、＝Ｏ、＝Ｎ−ＣＮ、＝Ｎ−ＯＲ、＝ＮＲ、ＯＲ、ＮＲ２、ＳＲ、ＳＯ２Ｒ、ＳＯ２ＮＲ２、ＮＲＳＯ２Ｒ、ＮＲＣＯＮＲ２、ＮＲＣＯＯＲ、ＮＲＣＯＲ、ＣＮ、ＣＯＯＲ、ＣＯＮＲ２、ＯＯＣＲ、ＣＯＲ、およびＮＯ２、ここで各Ｒは独立にＨ、Ｃ１−Ｃ８アルキル、Ｃ２−Ｃ８ヘテロアルキル、Ｃ１−Ｃ８アシル、Ｃ２−Ｃ８ヘテロアシル、Ｃ２−Ｃ８アルケニル、Ｃ２−Ｃ８ヘテロアルケニル、Ｃ２−Ｃ８アルキニル、Ｃ２−Ｃ８ヘテロアルキニル、Ｃ６−Ｃ１０アリール、またはＣ５−Ｃ１０ヘテロアリールであり、各Ｒは任意にハロ、＝Ｏ、＝Ｎ−ＣＮ、＝Ｎ−ＯＲ’、＝ＮＲ’、ＯＲ’、ＮＲ’２、ＳＲ’、ＳＯ２Ｒ’、ＳＯ２ＮＲ’２、ＮＲ’ＳＯ２Ｒ’、ＮＲ’ＣＯＮＲ’２、ＮＲ’ＣＯＯＲ’、ＮＲ’ＣＯＲ’、ＣＮ、ＣＯＯＲ’、ＣＯＮＲ’２、ＯＯＣＲ’、ＣＯＲ’、およびＮＯ２で置換され、ここで各Ｒ’は独立にＨ、Ｃ１−Ｃ８アルキル、Ｃ２−Ｃ８ヘテロアルキル、Ｃ１−Ｃ８アシル、Ｃ２−Ｃ８ヘテロアシル、Ｃ６−Ｃ１０アリール、またはＣ５−Ｃ１０ヘテロアリールである。アルキル、アルケニルおよびアルキニル基は、Ｃ１−Ｃ８アシル、Ｃ２−Ｃ８ヘテロアシル、Ｃ６−Ｃ１０アリールまたはＣ５−Ｃ１０ヘテロアリールで置換されてもよく、その各々が特定の基に対して適切な置換基によって置換されてもよい。
【００２３】
「ヘテロアルキル」、「ヘテロアルケニル」および「ヘテロアルキニル」などは、対応するヒドロカルビル（アルキル、アルケニルおよびアルキニル）基と同様に定義されるが、「ヘテロ」という用語は、骨格残基に１〜３個のＯ、ＳもしくはＮヘテロ原子またはその組合せを含有する基を示す；つまり、対応するアルキル、アルケニルまたはアルキニル基の少なくとも１つの炭素原子が指定のヘテロ原子の１つによって置換されて、ヘテロアルキル、ヘテロアルケニルまたはヘテロアルキニル基を形成する。一般的に、アルキル、アルケニルおよびアルキニル基のヘテロ形に対する典型的かつ好ましいサイズは、対応するヒドロカルビル基と同じであり、ヘテロ形に存在し得る置換基はヒドロカルビル基に対して上述した置換基と同じである。化学的安定性の理由から、別様に指定されない限り、ニトロまたはスルホニル基のようにＮまたはＳにオキソ基が存在する場合を除き、こうした基は２つより多くの隣接するヘテロ原子を含まないことも理解される。
【００２４】
本明細書において用いられる「アルキル」はシクロアルキルおよびシクロアルキルアルキル基を含むが、本明細書において「シクロアルキル」という用語は、環状炭素原子を介して接続される炭素環式非芳香族基を説明するために用いられてもよく、「シクロアルキルアルキル」はアルキルリンカーを通じて分子に接続された炭素環式非芳香族基を説明するために用いられてもよい。同様に、「ヘテロシクリル」は、少なくとも１つのヘテロ原子を環の構成員として含有し、かつＣまたはＮであってもよい環の原子を介して分子に接続される非芳香族環状基を説明するために用いられてもよく；「ヘテロシクリルアルキル」は、リンカーを通じて別の分子に接続されるこうした基を説明するために用いられてもよい。シクロアルキル、シクロアルキルアルキル、ヘテロシクリル、およびヘテロシクリルアルキル基に対して好適なサイズおよび置換基は、アルキル基に対して上述したものと同じである。本明細書において用いられるこれらの用語は、１つまたは２つの二重結合を含有する芳香族でない環も含む。
【００２５】
本明細書において用いられる「アシル」は、カルボニル炭素原子の２つの利用可能な原子価位置の一方において付着されたアルキル、アルケニル、アルキニル、アリールまたはアリールアルキルラジカルを含む基を包含し、ヘテロアシルとはカルボニル炭素以外の少なくとも１つの炭素がＮ、ＯおよびＳから選択されるヘテロ原子によって置換された対応する基を示す。よってヘテロアシルは、たとえば−Ｃ（＝Ｏ）ＯＲおよび−Ｃ（＝Ｏ）ＮＲ２ならびに−Ｃ（＝Ｏ）−ヘテロアリールなどを含む。
【００２６】
アシルおよびヘテロアシル基は、カルボニル炭素原子の開いた原子価を通じてあらゆる基または分子に付着して結合される。典型的に、それらはホルミル、アセチル、ピバロイルおよびベンゾイルを含むＣ１−Ｃ８アシル基、ならびにメトキシアセチル、エトキシカルボニルおよび４−ピリジノイルを含むＣ２−Ｃ８ヘテロアシル基である。アシルまたはヘテロアシル基を含むヒドロカルビル基、アリール基、およびこうした基のヘテロ形は、アシルまたはヘテロアシル基の対応する構成要素の各々に対する一般的に好適な置換基として本明細書に記載される置換基で置換されてもよい。
【００２７】
「芳香族」部分または「アリール」部分とは、芳香性の周知の特徴を有する単環式または融合二環式の部分を示す；その例にはフェニルおよびナフチルが含まれる。同様に、「芳香族複素環」および「ヘテロアリール」とは、環の構成員としてＯ、ＳおよびＮから選択される１つまたはそれ以上のヘテロ原子を含有するこうした単環式または融合二環式の環系を示す。ヘテロ原子を含むことによって、６員環だけでなく５員環の芳香性も可能になる。典型的な芳香族複素環系は、単環式Ｃ５−Ｃ６芳香族基、たとえばピリジル、ピリミジル、ピラジニル、チエニル、フラニル、ピロリル、ピラゾリル、チアゾリル、オキサゾリルおよびイミダゾリルなど、ならびにこれらの単環基の１つをフェニル環または芳香族複素環単環基のいずれかと融合してＣ８−Ｃ１０二環基を形成することによって形成される融合二環式部分、たとえばインドリル、ベンズイミダゾリル、インダゾリル、ベンゾトリアゾリル、イソキノリル、キノリル、ベンゾチアゾリル、ベンゾフラニル、ピラゾロピリジル、キナゾリニル、キノキサリニル、シンノリニルなどを含む。環系全体の電子分布の観点から芳香性の特徴を有するあらゆる単環式または融合環二環式の系がこの定義に含まれる。この定義は、少なくとも分子の残り部分に直接付着する環が芳香性の特徴を有するような二環基も含む。典型的に、この環系は５〜１２個の環構成員原子を含有する。好ましくは、単環式ヘテロアリールは５〜６個の環構成員を含有し、二環式ヘテロアリールは８〜１０個の環構成員を含有する。
【００２８】
アリールおよびヘテロアリール部分は、Ｃ１−Ｃ８アルキル、Ｃ２−Ｃ８アルケニル、Ｃ２−Ｃ８アルキニル、Ｃ５−Ｃ１２アリール、Ｃ１−Ｃ８アシル、およびこれらのヘテロ形を含むさまざまな置換基で置換されてもよく、これらの置換基の各々自身がさらに置換されてもよい；アリールおよびヘテロアリール部分に対するその他の置換基はハロ、ＯＲ、ＮＲ２、ＳＲ、ＳＯ２Ｒ、ＳＯ２ＮＲ２、ＮＲＳＯ２Ｒ、ＮＲＣＯＮＲ２、ＮＲＣＯＯＲ、ＮＲＣＯＲ、ＣＮ、ＣＯＯＲ、ＣＯＮＲ２、ＯＯＣＲ、ＣＯＲ、およびＮＯ２を含み、ここで各Ｒは独立にＨ、Ｃ１−Ｃ８アルキル、Ｃ２−Ｃ８ヘテロアルキル、Ｃ２−Ｃ８アルケニル、Ｃ２−Ｃ８ヘテロアルケニル、Ｃ２−Ｃ８アルキニル、Ｃ２−Ｃ８ヘテロアルキニル、Ｃ６−Ｃ１０アリール、Ｃ５−Ｃ１０ヘテロアリール、Ｃ７−Ｃ１２アリールアルキル、またはＣ６−Ｃ１２ヘテロアリールアルキルであり、各Ｒは任意に、アルキル基に対して前述したとおりに置換される。アリールまたはヘテロアリール基上の置換基は当然、各種のこうした置換基または置換基の各構成要素に対して好適であると本明細書に記載される基によってさらに置換されてもよい。よって、たとえばアリールアルキル置換基は、アリール部分において、アリール基に対して典型的であると本明細書に記載される置換基によって置換されてもよく、アルキル部分において、アルキル基に対して典型的または好適であると本明細書に記載される置換基によってさらに置換されてもよい。
【００２９】
同様に、「アリールアルキル」および「ヘテロアリールアルキル」とは、置換または未置換の、飽和または不飽和の、環式または非環式のリンカーを含む、アルキレンなどのリンク基を通じて付着点に結合された芳香族および芳香族複素環系を示す。典型的に、リンカーはＣ１−Ｃ８アルキルまたはそのヘテロ形である。これらのリンカーは、カルボニル基をも含むことによって、アシルまたはヘテロアシル部分としての置換基を提供できるようにしてもよい。アリールアルキルまたはヘテロアリールアルキル基中のアリールまたはヘテロアリール環は、アリール基に対して上述したものと同じ置換基で置換されてもよい。好ましくは、アリールアルキル基は、アリール基に対して上に定義された基で任意に置換されるフェニル環と、未置換であるかまたは１つもしくは２つのＣ１−Ｃ４アルキル基もしくはヘテロアルキル基で置換されるＣ１−Ｃ４アルキレンとを含み、アルキルまたはヘテロアルキル基は任意に環化してシクロプロパン、ジオキソランまたはオキサシクロペンタンなどの環を形成してもよい。同様に、ヘテロアリールアルキル基は好ましくは、アリール基の典型的な置換基として上述された基で任意に置換されるＣ５−Ｃ６単環式ヘテロアリール基と、未置換であるかまたは１つもしくは２つのＣ１−Ｃ４アルキル基もしくはヘテロアルキル基で置換されるＣ１−Ｃ４アルキレンとを含むか、または任意に置換されるフェニル環もしくはＣ５−Ｃ６単環式ヘテロアリールと、未置換であるかまたは１つもしくは２つのＣ１−Ｃ４アルキルもしくはヘテロアルキル基で置換されるＣ１−Ｃ４ヘテロアルキレンとを含み、アルキルまたはヘテロアルキル基は任意に環化してシクロプロパン、ジオキソランまたはオキサシクロペンタンなどの環を形成してもよい。
【００３０】
アリールアルキルまたはヘテロアリールアルキル基が任意に置換されると記載されるとき、置換基はその基のアルキルまたはヘテロアルキル部分にあっても、アリールまたはヘテロアリール部分にあってもよい。アルキルまたはヘテロアルキル部分に任意に存在する置換基は、アルキル基に対して一般的に上述されたものと同じである；アリールまたはヘテロアリール部分に任意に存在する置換基は、アリール基に対して一般的に上述されたものと同じである。
【００３１】
本明細書において用いられる「アリールアルキル」基は、未置換のときにはヒドロカルビル基であり、環およびアルキレンまたは類似のリンカー中の炭素原子の総数によって記載される。つまりベンジル基はＣ７アリールアルキル基であり、フェニルエチルはＣ８アリールアルキルである。
【００３２】
上述の「ヘテロアリールアルキル」はリンク基を通じて付着されるアリール基を含む部分を示し、「アリールアルキル」と異なる点は、アリール部分の少なくとも１つの環原子またはリンク基の１つの原子がＮ、ＯおよびＳから選択されるヘテロ原子であるところである。本明細書において、ヘテロアリールアルキル基は環および組合されるリンカーの原子の総数によって記載され、それはヘテロアルキルリンカーを通じて結合されたアリール基と；アルキレンなどのヒドロカルビルリンカーを通じて結合されたヘテロアリール基と；ヘテロアルキルリンカーを通じて結合されたヘテロアリール基とを含む。よって、たとえばＣ７ヘテロアリールアルキルは、ピリジルメチル、フェノキシ、およびＮ−ピロリルメトキシを含む。
【００３３】
本明細書において用いられる「アルキレン」とは、二価のヒドロカルビル基を示す；二価であるため、アルキレンは２つの他の基をつなぎ合せることができる。典型的にアルキレンは−（ＣＨ２）ｎ−を示し、ここでｎは１〜８であり、好ましくはｎは１〜４であるが、指定されるときにはアルキレンは他の基で置換されてもよいし、他の長さであってもよいし、開いた原子価は鎖の反対側端部になくてもよい。よって−ＣＨ（Ｍｅ）−および−Ｃ（Ｍｅ）２−もアルキレンと呼ばれてもよく、シクロプロパン−１，１−ジイルなどの環状基も同様である。アルキレン基が置換されるとき、置換基は、本明細書に記載されるとおり典型的にアルキル基に存在する置換基を含む。
【００３４】
一般的に、置換基に含有されるあらゆるアルキル、アルケニル、アルキニル、アシル、またはアリールもしくはアリールアルキル基またはこれらの基の１つのあらゆるヘテロ形自身が、付加的な置換基によって任意に置換されてもよい。置換基が別様に記載されていなければ、これらの置換基の性質は一次置換基自体に関して挙げられるものと同様である。よって、たとえばＲ７の実施形態がアルキルであるとき、このアルキルはＲ７に対する実施形態として列挙される残りの置換基によって任意に置換されてもよく、ここではこの置換が化学的に意味をなし、かつこの置換がアルキル自身に対して与えられたサイズ制限を損なわないものとする；たとえば、アルキルまたはアルケニルによって置換されたアルキルは、これらの実施形態に対する炭素原子の上限を単純に超えるために含まれない。しかし、アリール、アミノ、アルコキシ、＝Ｏなどによって置換されたアルキルは本発明の範囲に含まれ、これらの置換基の原子は、記載されるアルキル、アルケニルなどの基を説明するために用いられる数に入れられない。置換基の数が指定されていないとき、こうしたアルキル、アルケニル、アルキニル、アシルまたはアリール基の各々が、その利用可能な原子価に従っていくつかの置換基で置換されてもよい；特に、たとえばこれらの基のいずれかが、その利用可能な原子価のいずれかまたはすべてにおいてフッ素原子で置換されてもよい。
【００３５】
本明細書において用いられる「ヘテロ形」とは、アルキル、アリールまたはアシルなどの基の誘導体を示し、ヘテロ形では所定の炭素環基の少なくとも１つの炭素原子がＮ、ＯおよびＳから選択されるヘテロ原子によって置換されている。よってアルキル、アルケニル、アルキニル、アシル、アリールおよびアリールアルキルのヘテロ形は、それぞれヘテロアルキル、ヘテロアルケニル、ヘテロアルキニル、ヘテロアシル、ヘテロアリールおよびヘテロアリールアルキルである。オキソ基がＮまたはＳに付けられてニトロまたはスルホニル基を形成する場合を除いて、通常３つ以上のＮ、ＯまたはＳ原子が連続的に接続されることはないことが理解される。たとえば、記載される基が骨格またはアルキル鎖に任意のヘテロ原子を含有できるとき、別様に指定されない限りそのヘテロ原子はＮ、ＯおよびＳから選択される。
【００３６】
本明細書において用いられる「任意に置換される」とは、記載される特定の基または複数の基が非水素置換基を有さなくてもよいし、その基または複数の基が１つまたはそれ以上の非水素置換基を有してもよいことを示す。別様に指定されていないとき、存在し得るこうした置換基の総数は、記載される基の非置換形に存在するＨ原子の数に等しい。カルボニル酸素（＝Ｏ）などのように、任意の置換基が二重結合を介して付着されるとき、この基は２個の利用可能な原子価を取るため、利用可能な原子価の数に従って、含まれ得る置換基の総数が減る。
【００３７】
本明細書において用いられる「ハロ」は、フルオロ、クロロ、ブロモおよびヨードを含む。しばしばフルオロおよびクロロが好まれる。
【００３８】
本明細書において用いられる「アミノ」はＮＨ２を示すが、アミノが「置換される」または「任意に置換される」と記載されるとき、この用語はＮＲ’Ｒ’’を含み、ここでＲ’およびＲ’’は独立にＨであるか、またはアルキル、アルケニル、アルキニル、アシル、アリール、もしくはアリールアルキル基であるか、またはこれらの基の１つのヘテロ形であり、このアルキル、アルケニル、アルキニル、アシル、アリール、もしくはアリールアルキル基、またはこれらの基の１つのヘテロ形の各々は、本明細書において対応の基に対して好適であると記載される置換基で任意に置換される。この用語は、Ｒ’およびＲ’’がともにつながれて３〜８員環を形成した形も含み、この形は飽和、不飽和または芳香族であってもよく、環構成員としてＮ、ＯおよびＳから独立に選択される１〜３個のヘテロ原子を含有し、アルキル基に対して好適であると記載される置換基で任意に置換されるか、またはＮＲ’Ｒ’’が芳香族基であるときには、ヘテロアリール基に対して典型的であると記載される置換基で任意に置換される。
【００３９】
１つの局面において、本発明は式Ｉの化合物またはその薬学的に受容可能な塩を提供する：
【００４０】
【化３】
ここでＲ２、Ｒ３、Ｒ４、およびＲ５は各々独立にＨまたは保護基を表わし；
Ｘは置換可能なＣ４−Ｃ３０ヒドロカルビル基であり；
Ｙは２つまでの基で置換可能なＣ１−Ｃ６アルキレンまたはＣ２−Ｃ６アルケニレンリンカーであり；
Ｚは−ＯＲ１であり、ここでＲ１は骨格にヘテロ原子を含み得るＣ４−Ｃ２０ヒドロカルビル基であり、かつ任意に置換される。
【００４１】
式Ｉにおいて、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、およびＲ５の各々がＨであってもよく、またはこれらのうちの１つもしくはそれ以上が保護基であってもよい。いくつかの実施形態において、Ｒ２およびＲ３；またはＲ３およびＲ４；またはＲ４およびＲ５がともに結合して環になってもよい；たとえば、これらの対のいずれかがアセトニド保護基を表わしてもよい。「保護基」は、従来のアシル、アルキル、アリールアルキル、シリル、および有機合成の際のヒドロキシルの保護のために典型的に用いられるその他の基を含む。特定の例は、メチル、ホルミル、アセチル、メトキシアセチル、トリメチルシリル、ｔ−ブチルジメチルシリル、メトキシメチル、２−トリメチルシリルエトキシメチル、ベンジル、ジメトキシベンジル、アリル、メトキシカルボニル、アリルオキシカルボニル、トリクロロエトキシカルボニル、ベンジルオキシカルボニルなどを含む。特に、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、およびＲ５の各々が任意に置換されたＣ１−Ｃ１０アシル基、たとえばホルミル、アセチル、プロピオニル、ピバロイル、ベンゾイル、メトキシカルボニル、ベンジルオキシカルボニルまたは置換ベンジルオキシカルボニル、ｔ−ブトキシカルボニルなどであるか；または任意に置換されたアリールメチル基、たとえばベンジル、メトキシベンジルまたはジメトキシベンジルなどであってもよい。Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、およびＲ５の１つまたはそれ以上がこれらの保護基の１つを表わし、残りの基の各々はＨであるような化合物が特に好ましい。なぜならこうした化合物は、さらなる脱保護を含む当該技術分野において周知の修飾によって、本発明のさらなる化合物の合成のための中間体の役割ができるためである；さらにこうした化合物は、直接作用するか、またはＲ２、Ｒ３、Ｒ４、およびＲ５の各々がＨであるような化合物にインビボ転換された後に作用する免疫増強剤として投与されてもよい。
【００４２】
式Ｉにおいて、Ｘは好ましくは４〜３０個の炭素を有する直鎖または分岐鎖炭化水素であり、好ましくは１０〜３０個の炭素を含有する。２０〜３０個の炭素を有する直鎖アルキル基が好ましく、時には２５炭素アルキル基が好ましい。Ｘはしばしばアルキル基であるが、いくつかの実施形態においてはアルケニル基またはアルキニル基である。Ｘは未置換であってもよいし、アルキル基に対する１つまたはそれ以上の好適な置換基によって置換されてもよい。Ｘに対する好ましい置換基は、ハロ、特にＦ；およびアルコキシ、特にＣ１−Ｃ６アルコキシ、たとえばメトキシ、エトキシ、イソプロポキシなどを含む。
【００４３】
ＹはＣ１−Ｃ６アルキレンまたはＣ２−Ｃ６アルケニレンであってもよく、未置換であってもよいし、Ｙがアルキレンのときにはしばしばハロ、Ｃ１−Ｃ６アルキル、Ｃ１−Ｃ６アルコキシ、Ｃ１−Ｃ６ハロアルキル、およびヒドロキシルから選択される１つまたはそれ以上の基によって置換されてもよい。Ｙがアルケニレンのとき、好ましい置換基はハロ、Ｃ１−Ｃ６アルキル、Ｃ１−Ｃ６アルコキシ、およびＣ１−Ｃ６ハロアルキルを含む。Ｙの単一の炭素または隣接して接続される炭素の上に２つの置換基が存在するとき、置換基はともに結合されて、５〜６個の構成員を有し、任意にＮ、ＯおよびＳから選択される２つまでのヘテロ原子を環構成員として有する環を形成してもよい。いくつかの実施形態において、ＹはＣＨ２もしくはＣＨ２ＣＨ２もしくは（ＣＨ２）３もしくは（ＣＨ２）４、またはこれらの１つのヒドロキシル置換バージョンである。他の実施形態において、Ｙは−ＣＨ（ＯＨ）−ＣＨ（ＯＨ）−ＣＨ２−である。特定の実施形態において、−Ｙ−Ｚはこの式で表わされ、ここでＺは上に定義されるとおりである。
【００４４】
【化４】
Ｚは−ＯＲ１基であり、ここでＲ１は骨格にヘテロ原子を含み得るＣ４−Ｃ２０ヒドロカルビル基であり、このヘテロ原子はときにはＯであり、ときにはＮまたはＳであり、Ｒ１は未置換であっても置換されてもよい。好ましくは、Ｒ１は未置換であっても置換されてもよいＣ４−Ｃ２０アルキル基であるか、または一般式−（ＣＨ２）ｍ−Ｏ−Ｒ１ｂの基であり、ここでｍは１〜６であり、Ｒ１ｂはＣ１−Ｃ１６アルキル、シクロアルキルまたはシクロアルキルアルキル基であり、Ｒ１ｂは未置換であってもよいし、典型的にアルキル基に存在する基、たとえばヒドロキシル、Ｃ１−Ｃ６アルコキシ、ハロなどで置換されてもよい。
【００４５】
Ｚのいくつかの実施形態において、Ｒ１はシクロアルキルまたはアリールまたはヘテロアリール環に結合されたＣ１−Ｃ６アルキレン鎖、たとえば式−（ＣＨ２）ｒ−Ｒｇなどの基であり、ここでｒは１〜６の整数であり、Ｒｇは３〜８構成員の脂環式もしくは複素環式の環、または５〜１０構成員の芳香族もしくは芳香族複素環基であってもよい環を表わし；Ｒｇは置換されてもよい。好適な例は−（ＣＨ２）２−４−Ｒｇを含み、ここでＲｇは３〜８構成員の単環基、たとえばシクロプロピル、シクロペンチル、シクロヘキシル、フラニル、テトラヒドロフラニル、ピラニル、テトラヒドロピラニル、フェニル、ピリジル、ピリミジニル、チエニルなどである。
【００４６】
本発明は、スフィンゴシン部分の脂質部分の形成前にガラクトシル環のアノマー炭素に付着するアグリコン部分とガラクトースとの間にグリコシド結合を形成することを伴う新たな合成アプローチも提供する。本発明は、本発明の化合物を作製するために有用な、式（ＩＩａ）および式（ＩＩｂ）の中間体も提供する。よって、本発明は１つの局面において、一般式ＩＩａまたはＩＩｂの中間体を用いて上述の式Ｉの化合物を作製するための方法を提供する：
【００４７】
【化５】
【００４８】
【化６】
ここでＮｘは保護された窒素基、たとえばＮ３、ＮＨＣ（Ｏ）Ｘ、ＮＨＣ（Ｏ）Ｊなど、またはイミド、たとえばスクシンイミドまたはフタルイミドなどであり；Ｊは任意に置換されたＣ１−Ｃ１０アルキルまたは任意に置換されたＣ１−Ｃ１０アルコキシまたは任意に置換されたベンジルオキシ基であり；ＹならびにＲ２、Ｒ３、Ｒ４、およびＲ５は式Ｉに対して定義されたものと同様である。
【００４９】
式ＩＩａおよびＩＩｂの化合物に対して、Ｒ２−Ｒ６の各々は好ましくは保護基であってＨではない。好ましい保護基は、還元または水素化分解の条件下で容易に除去される基、たとえばベンジル、ジフェニルメチル、ベンジルオキシメチル、ベンジルオキシカルボニルなどを含む。
【００５０】
本発明の特定の化合物は、当該技術分野において一般的に公知の方法を用いて、化合物７および１０と例示されるようなこのタイプの一般的な中間体から得ることができる。化合物７および１０によって例示される中間体は、適切に保護したα−Ｄ−ガラクトピラノシル−（１−５）−リキソフラノース二糖類から便利よく誘導され、ここでは下記に例示されるとおり、リキソース部分がスフィンゴシン類似体の極性部分の前駆体である。リキソフラノースの代わりに代替的な出発材料を用いてＩＩａおよびＩＩｂのような中間体を与えることによって、本発明の他の化合物を同様に作製できる。これらの中間体は基Ｎｘを含有し、これは式Ｉのアシルアミン−ＮＨＣ（Ｏ）Ｘであってもよいし、保護された窒素、たとえばアジ化物（−Ｎ３）など、またはスクシンイミドもしくはアシル化アミン−ＮＨＣ（Ｏ）Ｊであってもよく、これは従来の方法によって遊離アミン（−ＮＨ２）または式Ｉのアシルアミン−ＮＨＣ（Ｏ）Ｘに転換できる。これらのアシル化アミンにおいて、Ｊは任意に置換されたＣ１−Ｃ１０アルキル基、たとえばトリフルオロメチルまたはトリクロロメチルなどであってもよく；または任意に置換されたＣ１−Ｃ１０アルコキシ基、たとえばメトキシ、エトキシ、２，２，２−トリクロロエトキシ、またはｔ−ブトキシなどであってもよく；または任意に置換されたベンジルオキシ基、たとえばベンジルオキシ、メトキシベンジルオキシ、ジメトキシベンジルオキシなどであってもよい。これらを当該技術分野において広く公知の方法によって窒素から取除いて遊離アミン（ＮＨ２）を与えることができ、次いでこの遊離アミン（ＮＨ２）を従来のアシル化条件を用いてアシル化して式Ｉの−Ｃ（Ｏ）Ｘ基を導入できる。本明細書の実施例に示されるとおり、アジ化物も同様に還元およびアシル化できる。Ｎｘがイミドであるとき、それはヒドラジンによる処理などの公知の方法によって遊離アミンに転換できる。
【００５１】
実施形態の１つにおいて、中間体７または１０を遊離ヒドロキシル基でアルキル化するか、または多数の他の態様のいずれかで修飾することによって、直鎖または分岐鎖、飽和または不飽和であってもよいさまざまなＲ１基を含み、かつ脂肪族もしくは芳香族の環、ヘテロ原子またはさまざまなその他の官能基を含み得る本発明のさまざまな化合物をもたらしてもよい。こうした方法の代表例には、アルキル化剤Ｒ１−ＬＧ１による式ＩＩａのアルコール化合物のアルキル化、および式ＩＩｂの化合物による式Ｒ１−ＯＨのアルコールのアルキル化が含まれ、この方法は、たとえば塩基を用いてアルキル化反応を促進するＷｉｌｌｉａｍｓｏｎエーテル条件、ならびに典型的にホスフィンおよびアゾジカルボン酸を用いてアルキル化反応を促進するＭｉｔｓｕｎｏｂｕ条件などの公知の条件下で行なわれる。
【００５２】
いくつかの実施形態において、式ＩＩａの中間体はアルキル化剤ＬＧ１−Ｒ１によってＯ−アルキル化されて式Ｉの化合物を生じる。Ｒ１は式ＩのＲ１に対して上述される基のいずれかであってもよい。他の実施形態においては、脱離基ＬＧ２を有する式ＩＩｂの中間体が調製され、これはたとえば、塩化スルホニルまたはスルホン無水物によるスルホン化、またはＣＢｒ４およびトリフェニルホスフィンなどの公知の条件を用いたハロゲン化物への転換などの従来の手段によって、式ＩＩａの化合物から作製されてもよい。次いで、式ＩＩｂの化合物を用いて式ＨＯ−Ｒ１のアルコールをアルキル化して、式Ｉの化合物を与える。これらの反応におけるＲ１は上記に定義したとおりであり、遊離ヒドロキシルまたは遊離アミンを含むときには保護された形であってもよい。これらの反応におけるＬＧ１およびＬＧ２は従来の離脱基を表わし、これはしばしばＣｌ、Ｂｒ、Ｉ、および任意に置換されたアルキルまたはアリールスルホン酸塩、たとえば−ＯＳＯ２−Ｊ’などから選択され、ここでＪ’は任意に置換されたＣ１−Ｃ１０アルキルまたは任意に置換されたアリールである。ＬＧ１および／またはＬＧ２が表わし得る好適なアルキルまたはアリールスルホン酸塩は、たとえばメシル酸塩（メタンスルホン酸塩）、トシル化物（トルエンスルホン酸塩）、フェニルスルホン酸塩、トリフルオロメチルスルホン酸塩（トリフレート）などを含む。
【００５３】
ガラクトース基上の特定の保護基を用いたスキームおよび例によって例示しているが、当該技術分野において周知であり本明細書において簡単に考察されるとおり、他の保護基を代わりに用いることもできる。好適な保護基ならびにその取り付けおよび除去のための方法は、本明細書において引用により援用されるＷｕｔｓおよびＧｒｅｅｎｅ，Ｐｒｏｔｅｃｔｉｖｅ Ｇｒｏｕｐｓ ｉｎ Ｏｒｇａｎｉｃ Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ，第４版，Ｗｉｌｅｙ Ｐｒｅｓｓ（２００６）に記載されている。
【００５４】
スキーム１は中間体７の調製を例示している。試薬および条件：ａ）トリ−（１−ピロリジン）−ホスフィンオキシド、ｂ）ｉ．ｔＢｕＯＫ、ＤＭＳＯ、８０℃；ｉｉ．Ｉ２、ピリジン／Ｈ２Ｏ；ｃ）ＮａＢＨ４、ＥｔＯＨ；ｄ）ＰｉｖＣｌ、ピリジン、ＤＣＭ、ｒ．ｔ．；ｅ）クロロメタンスルホニルクロリド、ピリジン；ｆ）ＮａＮ３、ＤＭＦ、８５℃；ｇ）Ｂｕ４ＮＯＨ（４０％ａｑ）、ジオキサン。スキーム１は次のとおりである：
【００５５】
【化７】
通常の当業者が認めるとおり、スキーム１の第１ステップにおける保護されたリキソースの代わりに他のアルコールを用いることによって、式Ｉの化合物に対するさまざまなＹ基を導入できる。特に、他の保護された糖の使用を用いて、このスキームに示されるリキソースによって与えられるものとは異なる相対または絶対立体化学を有するＹの変形物を導入できる。
【００５６】
ヒドロキシ基のアルキル化の後にアジ化物を還元してアミンにすることによって、化合物７から本発明のさまざまな化合物を容易に調製でき、ここでアミンを従来の方法によってアシル化して、式Ｉの化合物の−Ｃ（Ｏ）Ｘ−部分を取り付けてもよい。次いでガラクトシル環上のベンジル保護基を水素化分解によって、またはＴＭＳＩなどの他の手段によって除去でき；さらに以下に例示され、当該技術分野において公知であるとおり、穏やかな水性酸性条件下でアセトニド基を除去できる。これらの脱保護ステップの順序はここに挙げられる順序に限定されない。ベンジルの代わりに他の保護基が用いられるとき、その保護基は当該技術分野において公知の従来の手段によって除去できる。
【００５７】
スキーム２は中間体１０の調製を例示している。試薬および条件：ａ）Ｌｉｎｄｌａｒ触媒、Ｈ２、ＥｔＯＨ；ｂ）ヘキサコサン酸、ＥＤＣ、ＨＯＢＴ、ＤＩＰＥＡ；ｃ）Ｂｕ４ＮＯＨ（４０％ａｑ）、ジオキサン。スキーム２は次のとおりである：
【００５８】
【化８】
同様に、基Ｚが異なる化合物の合成に対する前駆体として、化合物１０または異なるＸ基を有する化合物１０の類似体を用いることができる。さまざまな公知の方法によってＺを導入でき、中でも注目すべき方法は、たとえばハロゲン化アルキルまたは硫酸アルキルまたはスルホン酸アルキル（例、メシル酸塩またはトシル化物など）などの従来のアルキル化剤を用いて、塩基性条件下で化合物１０の一級ヒドロキシルを直接アルキル化するものである。所望のＸおよびＺ基が取り付けられてから、上に考察したとおりに化合物を脱保護してもよい。よって、本明細書に例示される方法を用いることによって、本発明のさまざまな化合物を調製できる。
【００５９】
スキーム３は、２つの一般的な中間体７および１０を用いて、ヒドロキシル基をアルキル化し、（１１に対してのみ）脂肪酸を導入し、最後に脱保護して式Ｉの選択された化合物を与えることによって、α−ＧａｌＣｅｒの特定のオキサ類似体を与える様子を例示する。
【００６０】
【化９】
試薬および条件：ａ）ＫＯＨ、１８−クラウン−６、ｎＢｕＯＣＨ２ＣＨ２ＯＭｓ、ＴＨＦ；ｂ）ＮａＨ、ｎＢｕＯＣＨ２ＣＨ２ＯＭｓ、ＤＭＦ；ｃ）ｉ．Ｌｉｎｄｌａｒ触媒、Ｈ２、ＥｔＯＨ；ｉｉ．ヘキサコサン酸、ＥＤＣ、ＨＯＢＴ、ＤＩＰＥＡ；ｃ）ｉ．ジオキサン中の４Ｎ ＨＣｌ、ＤＣＭ−ＭｅＯＨ ５：１、ｉｉ．Ｈ２、Ｐｄ（ＯＨ）２／Ｃ、ＣＨＣｌ３−ＭｅＯＨ １：３。
【００６１】
【化１０】
ステップ（ｂ）に対する異なるアルキル化剤を用いて、同様に化合物１４〜１６を作製した。当該技術分野において容易に入手可能な出発材料を用いて、これらの方法によって、異なるＸ、ＹおよびＺ基を有する式Ｉのその他の化合物が容易に調製される。
【００６２】
いくつかの実施形態において、本発明の化合物は水および水溶液に可溶性である。たとえば、化合物１５は水に可溶性である。いくつかの実施形態において、本発明の化合物は、水溶液中で少なくとも約０．５ｍｇ／ｍＬ、１ｍｇ／ｍＬ、２ｍｇ／ｍＬ、５ｍｇ／ｍＬ、７．５ｍｇ／ｍＬ、１０ｍｇ／ｍＬ、１２．５ｍｇ／ｍＬ、１５ｍｇ／ｍＬ、１７．５ｍｇ／ｍＬ、２０ｍｇ／ｍＬ、２５ｍｇ／ｍＬ、３０ｍｇ／ｍＬ、４０ｍｇ／ｍＬ、５０ｍｇ／ｍＬ、７５ｍｇ／ｍＬ、１００ｍｇ／ｍＬ、１５０ｍｇ／ｍＬ、または２００ｍｇ／ｍＬの溶解度を有する。他の実施形態において、本発明の化合物は他の相当する化合物よりも改善された水溶性を有する。
【００６３】
本発明の化合物の生物学的評価には、細胞融合によって不死化されたマウスＶα１４ｉＮＫＴ細胞を用いて、ＡＰＣ（ＴＨＰ１）による提示に対するハイブリドーマＦＦ１３を与える。Ｔ細胞活性化の尺度として、ＥＬＩＳＡアッセイによって４８時間培養後の培養培地へのＩＬ２放出を定めた。
【００６４】
その結果、α−ＧａｌＣｅｒの合成糖脂質オキサ類似体は、ＡＰＣによってマウスハイブリドーマに提示されるときにＩＬ２の顕著な放出を刺激できることが示された。α−ＧａｌＣｅｒとの比較から、それらは類似の活性を有し、本発明の新規の化合物のいくつかはより効率的であることが明らかになった。酸素原子によるα−ＧａｌＣｅｒのメチレン基の置換は、これらの化合物がＣＤ１ｄに与えられた後にはこれらの化合物の機能を妨げず、この置換はこれらの化合物がＣＤ１ｄに与えられる際の生存性を高めてその薬物動態学的性質を改善できる。したがって、式Ｉの化合物を少なくとも１つの抗原とともに用いることによって、抗原によって誘発される免疫応答を増大できる。よって、本発明の化合物をワクチン投与に用いられる１つまたはそれ以上の抗原と組合せて用いることによって、抗原およびワクチンの能力を高めることができる。
【００６５】
送達系
本発明の組成物は、少なくとも１つの式１の化合物が１つまたはそれ以上の薬学的に受容可能な賦形剤と混合されたものを含んでもよい。こうした組成物は対象にワクチン投与するためのワクチンとともに投与されてもよいし、ワクチン投与される対象にワクチンが投与されるのと同じ日に投与されてもよい。しばしば化合物は抗原またはワクチンと混合され、この２つは単一用量として、注射または経口摂取によって、または別様で投与される。典型的に、化合物は抗原送達系の部分として投与され、最も典型的には化合物は単一の組成物中で抗原またはワクチンと混合され、その組成物はあらゆる好適なワクチン組成物であってもよい。好適な系はエマルション、リポソームおよび微粒子を含む。よって組成物は、たとえば上述の作用薬を加えた水中油型エマルション、上述の作用薬を含むリポソーム、または上述の作用薬を含有および／または表示する微粒子などを含んでもよい。
【００６６】
エマルション
水中油型（Ｏｉｌ−ｉｎ−ｗａｔｅｒ）および油中水型エマルションをワクチンに用いることは公知である。Ｏ／Ｗエマルションが好ましく、これは典型的に少なくとも１つの油と少なくとも１つの界面活性剤とを含み、この油（類）および界面活性剤（類）は生分解性（代謝性）かつ生体適合性である。エマルション中の油滴は一般的に直径５μｍ未満であり、サブミクロンの直径であってもよく、こうした小さいサイズは安定なエマルションを与えるためのマイクロ流動化装置によって達成される。２２０ｎｍ未満のサイズの小滴は、フィルター滅菌を受けられるので好ましい。
【００６７】
本発明は、たとえば動物（魚など）または植物供給源からの油などの油とともに用いられてもよい。植物油に対する供給源は、ナッツ、種子および穀物を含む。落花生油、大豆油、ヤシ油、およびオリーブ油は最も一般的に入手可能であり、ナッツ油を例示する。たとえばホホバ豆から得られるホホバ油が用いられてもよい。種子油はサフラワー油、綿実油、ヒマワリ種子油、ゴマ種子油などを含む。穀物群の中ではトウモロコシ油が最も容易に入手可能だが、他の穀類、たとえば小麦、カラスムギ、ライ麦、米、テフ、ライ小麦などの油も用いられてよい。グリセロールおよび１，２−プロパンジオールの６−１０炭素脂肪酸エステルは、種子油では自然発生しないが、ナッツおよび種子油から出発する適切な材料の加水分解、分離およびエステル化によって調製されてもよい。哺乳動物の乳からの脂肪および油は代謝性であるため、本発明の実施において用いられてもよい。動物供給源から純粋な油を得るために必要な分離、精製、ケン化およびその他の手段に対する手順は、当該技術分野において周知である。ほとんどの魚は、容易に回収され得る代謝性油を含有する。たとえばタラ肝油、サメ肝油、およびクジラ蝋などのクジラ油などは、本明細書において用いられてもよい魚油のいくつかを例示するものである。いくつかの分岐鎖油は、５炭素イソプレン単位で生化学的に合成されて、一般的にテルペノイドと呼ばれる。サメ肝油は、スクアレン、２，６，１０，１５、１９，２３−ヘキサメチル−２，６，１０，１４，１８，２２−テトラコサヘキサエンとして公知の分岐不飽和テルペノイドを含有し、これは本明細書において特に好ましい。スクアレンの飽和類似体であるスクアランも好ましい油である。スクアレンおよびスクアランを含む魚油は、商業的供給源から容易に入手可能であるし、当該技術分野において公知の方法によって得られてもよい。その他の好ましい油はトコフェロールであり、α、β、γ、δ、εまたはξトコフェロールのいずれが用いられてもよいが、α−トコフェロールが好ましい（例、ＤＬ−α−トコフェロール）。油の混合物が用いられてもよい。
【００６８】
界面活性剤はその「ＨＬＢ」（親水性／新油性バランス（ｈｙｄｒｏｐｈｉｌｅ／ｌｉｐｏｐｈｉｌｅ ｂａｌａｎｃｅ）によって分類できる。本発明の好ましい界面活性剤は、ＨＬＢが少なくとも１０、好ましくは少なくとも１５、より好ましくは少なくとも１６である。本発明は、以下を含むがそれに限定されない界面活性剤とともに用いられてもよい：ポリオキシエチレンソルビタンエステル界面活性剤（一般的にＴｗｅｅｎと呼ばれる）、特にポリソルベート２０およびポリソルベート８０；エチレンオキシド（ｅｔｈｙｌｅｎｅ ｏｘｉｄｅ：ＥＯ）、プロピレンオキシド（ｐｒｏｐｙｌｅｎｅ ｏｘｉｄｅ：ＰＯ）、および／またはブチレンオキシド（ｂｕｔｙｌｅｎｅ ｏｘｉｄｅ：ＢＯ）の共重合体、ＤＯＷＦＡＸ（商標）の商品名で販売、たとえば直鎖ＥＯ／ＰＯブロック共重合体など；オクトキシノール、これは反復エトキシ（オキシ−１，２−エタンジイル）基の数が変動し得るが、オクトキシノール９（Ｔｒｉｔｏｎ Ｘ−１００、またはｔ−オクチルフェノキシポリエトキシエタノール）が特に興味深い；（オクチルフェノキシ）ポリエトキシエタノール（ＩＧＥＰＡＬ ＣＡ−６３０／ＮＰ−４０）；リン脂質、たとえばホスファチジルコリン（レシチン）など；ノニルフェノールエトキシレート、たとえばＴｅｒｇｉｔｏｌ（商標）ＮＰシリーズなど；ラウリル、セチル、ステアリルおよびオレイルアルコールに由来するポリオキシエチレン脂肪エーテル（Ｂｒｉｊ界面活性剤として公知）、たとえばトリエチレングリコールモノラウリルエーテル（Ｂｒｉｊ３０）など；ならびにソルビタンエステル（一般的にはＳＰＡＮとして公知）、たとえばソルビタントリオレエート（Ｓｐａｎ８５）およびソルビタンモノラウレートなど。非イオン性の界面活性剤が好ましい。エマルションに含ませるために好ましい界面活性剤は、Ｔｗｅｅｎ８０（ポリオキシエチレンソルビタンモノオレエート）、Ｓｐａｎ８５（ソルビタントリオレエート）、レシチンまたはＴｒｉｔｏｎ Ｘ−１００である。
【００６９】
たとえばＴｗｅｅｎ８０／Ｓｐａｎ８５混合物などの界面活性剤の混合物が用いられてもよい。ポリオキシエチレンソルビタンエステル、たとえばポリオキシエチレンソルビタンモノオレエート（Ｔｗｅｅｎ８０）などと、オクトキシノール、たとえばｔ−オクチルフェノキシポリエトキシエタノール（Ｔｒｉｔｏｎ Ｘ−１００）などとの組合せも好適である。別の有用な組合せは、ラウレス９と、ポリオキシエチレンソルビタンエステルおよび／またはオクトキシノールとを含む。
【００７０】
界面活性剤の好ましい量（重量％）は次のとおりである：ポリオキシエチレンソルビタンエステル（Ｔｗｅｅｎ８０など）が０．０１％から１％、特に約０．１％；オクチル−またはノニルフェノキシポリオキシエタノール（Ｔｒｉｔｏｎ Ｘ−１００またはＴｒｉｔｏｎシリーズの他の界面活性剤など）が０．００１％から０．１％、特に０．００５％から０．０２％；ポリオキシエチレンエーテル（ラウレス９など）が０．１％から２０％、好ましくは０．１％から１０％、特に０．１％から１％または約０．５％。本発明とともに有用な特定の水中油型エマルションアジュバントは、以下を含むがこれに限定されない：
・スクアレン、Ｔｗｅｅｎ８０、およびＳｐａｎ８５のサブミクロンエマルション。体積によるエマルションの組成は、約５％のスクアレン、約０．５％のポリソルベート８０および約０．５％のＳｐａｎ８５であってもよい。重量では、これらの比率は４．３％のスクアレン、０．５％のポリソルベート８０および０．４８％のＳｐａｎ８５となる。このアジュバントは「ＭＦ５９」として公知である。ＭＦ５９エマルションは有利にはクエン酸イオン、たとえば１０ｍＭクエン酸ナトリウム緩衝液などを含む。
【００７１】
・スクアレン、トコフェロール、およびＴｗｅｅｎ８０のエマルション。このエマルションはリン酸緩衝食塩水を含んでもよい。このエマルションはＳｐａｎ８５（例、１％で）および／またはレシチンも含んでもよい。これらのエマルションは、２％から１０％のスクアレン、２％から１０％のトコフェロール、および０．３％から３％のＴｗｅｅｎ８０を有してもよく、スクアレン：トコフェロールの重量比は好ましくは≦１であり、これはその方がより安定なエマルションが与えられるためである。スクアレンおよびＴｗｅｅｎ８０は約５：２の体積比で存在してもよい。こうしたエマルションの１つは、Ｔｗｅｅｎ８０をＰＢＳに溶解して２％溶液を与え、次いでこの溶液９０ｍｌを（５ｇのＤＬ−α−トコフェロールおよび５ｍｌのスクアレン）の混合物と混合し、次いで混合物をマイクロ流動化することによって作製できる。その結果得られるエマルションはサブミクロンの油滴を有してもよく、その油滴はたとえば平均直径が１００ｎｍから２５０ｎｍ、好ましくは約１８０ｎｍなどである。
【００７２】
・ポリソルベート（例、ポリソルベート８０）、Ｔｒｉｔｏｎ界面活性剤（例、Ｔｒｉｔｏｎ Ｘ−１００）およびトコフェロール（例、α−トコフェロールコハク酸塩）を含むエマルション。このエマルションは、これら３つの構成要素を約７５：１１：１０の質量比で含んでもよく（例、７５０μｇ／ｍｌのポリソルベート８０、１１０μｇ／ｍｌのＴｒｉｔｏｎ Ｘ−１００、および１００μｇ／ｍｌのα−トコフェロールコハク酸塩）、これらの濃度は抗原からのこれらの構成要素のあらゆる寄与を含むべきである。このエマルションンはスクアレンも含んでもよい。このエマルションンは３ｄ−ＭＰＬも含んでもよい。水相はリン酸緩衝液を含んでもよい。
【００７３】
・スクアラン、ポリソルベート８０およびポロキサマー４０１（「Ｐｌｕｒｏｎｉｃ（商標）Ｌ１２１」）のエマルション。このエマルションはリン酸緩衝食塩水、ｐＨ７．４中で調合されてもよい。このエマルションはムラミルジペプチドに対する有用な送達媒体であり、「ＳＡＦ−１」アジュバント中でスレオニルＭＤＰとともに用いられてきた（０．０５〜１％のＴｈｒ−ＭＤＰ、５％のスクアラン、２．５％のＰｌｕｒｏｎｉｃ Ｌ１２１および０．２％のポリソルベート８０）。このエマルションはＴｈｒ−ＭＤＰなしで、「ＡＦ」アジュバント中などで用いられてもよい（５％のスクアラン、１．２５％のＰｌｕｒｏｎｉｃ Ｌ１２１および０．２％のポリソルベート８０）。マイクロ流動化が好ましい。Ｈａｒｉｈａｒａｎ，ら、，Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．Ｖｏｌ５５，３４８６−８９（１９９５）。
【００７４】
・スクアレン、トコフェロール、およびＴｒｉｔｏｎ界面活性剤（例、Ｔｒｉｔｏｎ Ｘ−１００）のエマルション。このエマルションは３ｄ−ＭＰＬも含んでもよい。このエマルションはリン酸緩衝液を含有してもよい。
【００７５】
・０．５〜５０％の油、０．１〜１０％のリン脂質、および０．０５〜５％の非イオン性界面活性剤を有するエマルション。国際公開９５／１１７００号に記載されるとおり、好ましいリン脂質構成要素は、ホスファチジルコリン、ホスファチジルエタノールアミン、ホスファチジルセリン、ホスファチジルイノシトール、ホスファチジルグリセロール、ホスファチジン酸、スフィンゴミエリンおよびカルジオリピンである。サブミクロンの小滴サイズが有利である。
【００７６】
・非代謝性の油（軽油など）および少なくとも１つの界面活性剤（レシチン、Ｔｗｅｅｎ８０またはＳｐａｎ８０など）の、サブミクロン水中油型エマルション。添加剤、たとえばＱｕｉｌＡサポニン、コレステロール、サポニン親油性複合物（ＧＰＩ−０１００など、グルクロン酸のカルボキシル基を介してデスアシルサポニンに脂肪族アミンを加えることによって生成される）、ジメチルジオクタデシルアンモニウムブロミドおよび／またはＮ，Ｎ−ジオクタデシル−Ｎ，Ｎ−ビス（２−ヒドロキシエチル）プロパンジアミンなどが含まれてもよい。
【００７７】
・サポニン（例、ＱｕｉｌＡまたはＱＳ２１）およびステロール（例、コレステロール）がヘリカルミセルとして関わっているエマルション。国際公開２００５／０９７１８１号を参照。
【００７８】
・鉱油、非イオン性親油性エトキシル化脂肪アルコール、および非イオン性親水性界面活性剤（例、エトキシル化脂肪アルコールおよび／またはポリオキシエチレン−ポリオキシプロピレンブロック共重合体）を含むエマルション。国際公開２００６／１１３３７３号を参照。
【００７９】
・鉱油、非イオン性親水性エトキシル化脂肪アルコール、および非イオン性親油性界面活性剤（例、エトキシル化脂肪アルコールおよび／またはポリオキシエチレン−ポリオキシプロピレンブロック共重合体）を含むエマルション。国際公開２００６／１１３３７３号を参照。
【００８０】
サブミクロンの油滴直径を有する、スクアレンを含む水中油型エマルションが理想的である。
【００８１】
リポソーム
リポソームは、水性の区画を囲む脂質二重層に基づく小胞構造である。当該技術分野においてはさまざまなタイプのリポソームが公知である。リポソームは、そのサイズ、脂質組成、表面電荷（カチオン性、中性またはアニオン性）、ならびにリン脂質二重層の数および流動性などの物理化学的性質が広く変動し得る。たとえば、リポソームはリン脂質（中性および／または負に帯電）および／またはコレステロールのみで構成されていてもよい。リポソームは単層膜または多重膜であってもよい。アジュバントとしてのリポソームの使用は、たとえばＵ．Ｓ．６，０９０，４０６号；ＵＳ５，９１６，５８８号；ＥＰ−Ａ−０６２６１６９号などに記載される。
【００８２】
微粒子
微粒子をアジュバントとして使用することが記載されており、たとえば国際公開９８／３３４８７号およびＶａｃｃｉｎｅ Ａｄｊｕｖａｎｔｓ：Ｐｒｅｐａｒａｔｉｏｎ Ｍｅｔｈｏｄｓ ａｎｄ Ｒｅｓｅａｒｃｈ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ，Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ，第４２号、Ｏ’Ｈａｇａｎ編などを参照されたい。好ましい微粒子は生分解性の非毒性ポリマーから作られる。たとえば、微粒子は以下からなる群より選択されるポリマーから作られてもよい：ポリ（α−ヒドロキシ酸）、ポリヒドロキシ酪酸、ポリカプロラクトン、ポリオルトエステル、ポリ無水物、およびポリシアノアクリレート。これらのポリマーの共重合体、またはたとえばＤ，Ｌ−ラクチドとカプロラクトンとの共重合体などが用いられてもよい。
【００８３】
好ましいポリマーはポリ（α−ヒドロキシ酸）であり、より好ましくはポリ（Ｌ−ラクチド）、ポリ（Ｄ，Ｌ−ラクチド）、およびポリ（Ｄ，Ｌ−ラクチド−コ−グリコリド）からなる群より選択されるポリマーである。最も好ましいポリマーはポリ（Ｄ，Ｌ−ラクチド−コ−グリコリド）（ｐｏｌｙ（Ｄ，Ｌ−ｌａｃｔｉｄｅ−ｃｏ−ｇｌｙｃｏｌｉｄｅ））ポリマーであり、「ＰＬＧ」と呼ばれる。好ましいポリ（Ｄ，Ｌ−ラクチド−コ−グリコリド）ポリマーは、そのラクチド／グリコリドのモル比の範囲が２５：７５から７５：２５、より好ましくは４０：６０から６０：４０、たとえば約５０：５０のものである。５０：５０のＰＬＧポリマーは５０％のＤ，Ｌ−ラクチドと５０％のグリコリドとを含有し、迅速に再吸収する共重合体を与えるのに対し、７５：２５ＰＬＧはもっとゆっくり分解し、８５：１５および９０：１０はさらにもっとゆっくり分解するが、これはラクチド成分が増加したためである。
【００８４】
これらのポリマーはさまざまな分子量のものが入手可能であり、所与の抗原に対する適切な分子量は当業者によって容易に決定される。たとえばポリラクチドに対する好適な分子量は、約２０００から５０００のオーダーである。ＰＬＧに対する好適な分子量は一般的に約１０，０００から約２００，０００、好ましくは約１５，０００から約１５０，０００、最も好ましくは約５０，０００から約１００，０００の範囲である。有用な範囲は３０，０００ダルトンから７０，０００ダルトンである。
【００８５】
微粒子は直径が約１００ｎｍから約１５０μｍの範囲であってもよく、より好ましくは直径が約２００ｎｍから約３０μｍ、最も好ましくは直径が約５００ｎｍから約１０μｍの範囲であってもよい。微粒子は典型的に実質的に球形となる。
【００８６】
微粒子はさまざまな態様で作製できる。たとえば、ダブルエマルション／溶媒蒸発技術が公知であり、これはポリマー溶液の小滴からなる一次エマルションの形成を含み、その後この一次エマルションが粒子安定剤／界面活性剤を含有する連続的な水相と混合される。より特定的には、水中油中水型（ｗａｔｅｒ−ｉｎ−ｏｉｌ−ｉｎ−ｗａｔｅｒ：ｗ／ｏ／ｗ）溶媒蒸発系を用いて微粒子を形成してもよい。この技術においては、特定のポリマーを、たとえば酢酸エチル、ジメチルクロリド（塩化メチレンおよびジクロロメタンとも呼ばれる）、アセトニトリル、アセトン、クロロホルムなどの有機溶媒と組合せる。ポリマーは有機溶媒中に約２〜１５％、より好ましくは約４〜１０％、最も好ましくは６％の溶液で与えられる。ポリマー溶液は、たとえばホモジナイザーなどを用いて乳化される。次いでこのエマルションを、より大量の、たとえばポリビニルアルコール（ｐｏｌｙｖｉｎｙｌ ａｌｃｏｈｏｌ：ＰＶＡ）またはポリビニルピロリドンなどのエマルション安定剤の水溶液と組合せる。エマルション安定剤は典型的に約２〜１５％溶液で、より典型的には約４〜１０％溶液で与えられる。次いで混合物をホモジナイズして安定なｗ／ｏ／ｗダブルエマルションを生成する。次いで有機溶媒を蒸発させる。製剤パラメータを操作して、小さい（＜５μｍ）微粒子および大きい（＞３０μｍ）微粒子を調製させてもよい。たとえば、撹拌を減少させると、内側相体積の増加と同様に、より大きな微粒子がもたらされる。粒子サイズはルーチンの方法によって決定できる。
【００８７】
ダブルエマルション技術の使用と同様に、単一エマルション技術も用いられてもよい。噴霧乾燥およびコアセルベーションを用いて、またはエアサスペンションコーティング技術、たとえばパンコーティングおよびＷｕｒｓｔｅｒコーティングなどによって微粒子を形成することもできる。イオン性ゲル化を用いてもよい。
【００８８】
調製後、微粒子はそのまま保存されてもよいし、さらなる使用のために凍結乾燥されてもよい。
【００８９】
微粒子を任意に処理して、（例、ＳＤＳによって）負に帯電した表面または（例、ＣＴＡＢなどのカチオン性界面活性剤によって）正に帯電した表面を有するようにさせてもよい。表面特性の変化によって、吸着すべき抗原に従って吸着特性が変化し得る。
【００９０】
さらなる免疫活性構成要素
本明細書に記載される化合物に加えて、本発明の組成物は付加的な免疫賦活性構成要素を含んでもよい。たとえば、本発明の組成物は以下の１つまたはそれ以上を含んでもよい：アルミニウム塩；カルシウム塩；サイトカイン；ＣＤ４０リガンド；サポニン；および／または免疫賦活性複合体（ｉｍｍｕｎｏｓｔｉｍｕｌａｔｏｒｙ ｃｏｍｐｌｅｘ：ＩＳＣＯＭ）。しかし、いくつかの実施形態において、組成物はこうした付加的な免疫賦活性構成要素を含有しない。
【００９１】
アルミニウム塩
アルミニウム塩は本発明の組成物に含まれても含まれなくてもよい。好適な塩は、水酸化アルミニウムおよびリン酸アルミニウムとして当該技術分野において公知のアジュバントを含む。これらは従来からの名前であるが、どちらも存在する実際の化学的化合物を正確に説明するものではないため、単に便宜上用いられるものである。本発明は、一般的にアジュバントとして用いられる「水酸化物」または「リン酸塩」アジュバントのいずれかを用いてもよい。
【００９２】
「水酸化アルミニウム」として公知のアジュバントは典型的にオキシ水酸化アルミニウム塩であり、これは通常少なくとも部分的に結晶である。オキシ水酸化アルミニウムは式ＡｌＯ（ＯＨ）で表わすことができ、他のアルミニウム化合物、たとえば水酸化アルミニウムＡｌ（ＯＨ）３などとの区別は、赤外線（ｉｎｆｒａｒｅｄ：ＩＲ）分光法によって、特に１０７０ｃｍ−１の吸着バンドおよび３０９０〜３１００ｃｍ−１の強い肩部の存在によって付けられる。Ｖａｃｃｉｎｅ Ｄｅｓｉｇｎ，第９章。水酸化アルミニウムアジュバントの結晶化度は、半分の高さにおける回折バンドの幅（ｗｉｄｔｈ ｏｆ ｔｈｅ ｄｉｆｆｒａｃｔｉｏｎ ｂａｎｄ ａｔ ｈａｌｆ ｈｅｉｇｈｔ：ＷＨＨ）によって反映され、結晶性の低い粒子は微結晶サイズがより小さいために、より大きな線の広がりを見せる。ＷＨＨが増加すると表面積が増加し、より高いＷＨＨ値を有するアジュバントは抗原吸着に対する容量が大きいことが示されている。（例、透過型電子顕微鏡写真に見られるとおり）繊維状の形態は水酸化アルミニウムアジュバントにとって典型的である。水酸化アルミニウムアジュバントのｐＩは典型的に約１１であり、すなわちアジュバント自身が生理的ｐＨにおいて正の表面電荷を有する。
【００９３】
「リン酸アルミニウム」として公知のアジュバントは典型的にアルミニウムヒドロキシリン酸塩であり、しばしば少量の硫酸塩も含有する（すなわち硫酸アルミニウムヒドロキシリン酸塩）。それらは析出によって得られてもよく、析出の際の反応条件および濃度は、塩中のヒドロキシルに対するリン酸の置換度に影響する。ヒドロキシリン酸塩は一般的に、ＰＯ４／Ａｌモル比が０．３から１．２の間である。ヒドロキシリン酸塩は、ヒドロキシル基の存在によって厳密なＡｌＰＯ４と区別できる。たとえば、（例、２００℃に加熱されたときの）３１６４ｃｍ−１におけるＩＲスペクトルバンドは、構造的ヒドロキシルの存在を示す。ＶＡＣＣＩＮＥ ＤＥＳＩＧＮ：ＴＨＥ ＳＵＢＵＮＩＴ ＡＮＤ ＡＤＪＵＶＡＮＴ ＡＰＰＲＯＡＣＨ（Ｐｏｗｅｌｌ ＆ Ｎｅｗｍａｎ編），第９章、Ｐｌｅｎｕｍ Ｐｒｅｓｓ（１９９５）。
【００９４】
リン酸アルミニウムアジュバントのＰＯ４／Ａｌ３＋モル比は一般的に０．３から１．２の間、好ましくは０．８から１．２の間、より好ましくは０．９５±０．１である。リン酸アルミニウムは一般的に、特にヒドロキシリン酸塩に対して、アモルファスである。典型的なアジュバントは、０．６ｍｇのＡｌ３＋／ｍｌが含まれる、ＰＯ４／Ａｌモル比が０．８４から０．９２の間のアモルファスアルミニウムヒドロキシリン酸塩である。リン酸アルミニウムは一般的に粒子状である（例、透過型電子顕微鏡写真に見られるプレート様の形態）。粒子の典型的な直径は、あらゆる抗原吸着後に０．５〜２０μｍ（例、約５〜１０μｍ）の範囲である。
【００９５】
リン酸アルミニウムのゼロ電荷点（ｐｏｉｎｔ ｏｆ ｚｅｒｏ ｃｈａｒｇｅ：ＰＺＣ）は、ヒドロキシルに対するリン酸の置換度に反比例し、この置換度は析出によって塩を調製するために用いられた反応条件および反応物の濃度に依存して変動し得る。ＰＺＣは、溶液中の遊離リン酸イオンの濃度を変えることによって（リン酸が多い＝より酸性のＰＺＣ）、またはヒスチジン緩衝液などの緩衝液を加える（ＰＺＣをより塩基性にする）ことによっても変えられる。本発明に従って用いられるリン酸アルミニウムは、一般的にＰＺＣが４．０から７．０の間、より好ましくは５．０から６．５の間であり、たとえば約５．７などである。
【００９６】
水酸化アルミニウムおよびリン酸アルミニウム両方の混合物を用いることも可能である。この場合、リン酸アルミニウムの方が水酸化アルミニウムより多くてもよく、たとえば重量比が少なくとも２：１、たとえば≧５：１、≧６：１、≧７：１、≧８：１、≧９：１などであってもよい。
【００９７】
患者への投与のための組成物におけるＡｌ＋＋＋の濃度は、好ましくは１０ｍｇ／ｍｌ未満、たとえば≦５ｍｇ／ｍｌ、≦４ｍｇ／ｍｌ、≦３ｍｇ／ｍｌ、≦２ｍｇ／ｍｌ、≦１ｍｇ／ｍｌなどである。好ましい範囲は０．３ｍｇ／ｍｌから１ｍｇ／ｍｌの間である。最大０．８５ｍｇ／用量であることが好ましい。
【００９８】
カルシウム塩
本発明の組成物はリン酸カルシウムアジュバントを含んでも含まなくてもよい。以下により詳細に説明するとおり、さまざまな好適な形のリン酸カルシウムが公知である。
【００９９】
Ｖａｃｃｉｎｅ Ｄｅｓｉｇｎの第８章は、抗原の存在下での塩のインサイツ析出によって、または予め形成された塩への吸着によって、抗原がリン酸カルシウムに吸着できる様子を考察している。
【０１００】
その他の公知のアジュバントはリン酸カルシウムを含む。アジュバントは厳密なＣａ３（ＰＯ４）２ではなく、式Ｃａ１０−ｘ（ＨＰＯ４）ｘ（ＰＯ４）６−ｘ（ＯＨ）２−ｘの不定比性ヒドロキシアパタイトであることが報告されており、そのｐＨ依存性表面電荷はゼロ電荷点（ＰＺＣ）が５．５である。このアジュバントは約１０ｎｍ×１５０ｎｍの寸法の針様粒子、および直径約２０〜３０ｎｍの不規則な形のプレートを形成できる。好適なリン酸カルシウム組成物は、たとえば米国特許第５，６７６，９７６号；国際公開００／４６１４７号；国際公開０３／０５１３９４号；米国特許第６，３５５，２７１号；および米国特許第５，８５１，６７０号などに記載される。
【０１０１】
リン酸カルシウムアジュバントのＣａのＰに対するモル比は、たとえば１．３５から１．８３の間などで変動できる。アジュバントの吸着特性は、析出の際に用いられる条件に依存して変動することが見出されており、たとえばゆっくりした混合で得られるアジュバントは、速い混合によって形成されるアジュバントよりも吸着容量が低くなる可能性がある。
【０１０２】
Ｃａ＋＋として測定されるリン酸カルシウムの量は、０．１ｍｇ／ｍｌから１０ｍｇ／ｍｌの間であってもよく、たとえば０．５〜５ｍｇ／ｍｌの間、好ましくは０．７５〜３ｍｇ／ｍｌ、０．９〜１．５ｍｇ／ｍｌ、または約１ｍｇ／ｍｌであってもよい。
【０１０３】
リン酸カルシウムアジュバントは抗原を吸着する能力を有する。所与の抗原に対して、その抗原の総量の少なくとも８０重量％（例、≧８５％、≧９０％、≧９２．５％、≧９５％、≧９７．５％、≧９７．５％、≧９８％、≧９９％、≧９９．５％など）が吸着される。リン酸カルシウムアジュバントは不溶性で、典型的には粒子状のため、遠心分離の後に固体または可溶性材料の１つ（または両方）における抗原の量を定めるステップを含む方法によって、吸着度を便利よく測定できる。
【０１０４】
抗原
本発明は、細菌抗原、ウイルス抗原、真菌抗原、原生動物抗原、腫瘍関連抗原などを含むさまざまな異なる抗原とともに使用できる。
【０１０５】
細菌抗原は、以下を含むがこれに限定されないバクテリアからの抗原であってもよい：Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ、Ｎ．ｇｏｎｏｒｒｈｏｅａｅなど）、Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ（Ｓ．ａｇａｌａｃｔｉａｅ、Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ、Ｓ．ｐｙｏｇｅｎｅｓ、Ｓ．ｍｕｔａｎｓなど）、Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ（Ｓ．ａｕｒｅｕｓなど）、Ｃｏｒｙｎｅｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｄｉｐｈｔｈｅｒｉａｅ、Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ（Ｃ．ｄｉｆｆｉｃｌｅ、Ｃ．ｔｅｔａｎｉなど）、Ｖｉｂｒｉｏ ｃｈｏｌｅｒａｅ、Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ（Ｍ．ｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓなど）、Ｂｏｒｄｅｔｅｌｌａ ｐｅｒｔｕｓｓｉｓ、Ｈｅｌｉｃｏｂａｃｔｅｒ ｐｙｌｏｒｉ、Ｈａｅｍｏｐｈｉｌｕｓ ｉｎｆｌｕｅｎｚａｅ、Ｂｏｒｒｅｌｉａ ｂｕｒｇｄｏｒｆｅｒｉ、Ｃｈｌａｍｙｄｉａ（Ｃ．ｔｒａｃｈｏｍａｔｉｓ、Ｃ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅなど）、Ｙｅｒｓｉｎｉａ ｐｅｓｔｉｓ、Ｐｏｒｐｈｙｒａｍｏｎａｓ ｇｉｎｇｉｖａｌｉｓ、Ｍｏｒａｘｅｌｌａ ｃａｔａｒｒｈａｌｉｓ。
【０１０６】
原生動物抗原は、以下を含むがこれに限定されない原生動物からの抗原であってもよい：Ｐｌａｓｍｏｄｉｕｍ（Ｐ．ｆａｌｃｉｐａｒｕｍ、Ｐ．ｖｉｖａｘ、Ｐ．ｍａｌａｒｉａｅ、Ｐ．ｏｖａｌｅなど）。
【０１０７】
ウイルス抗原は、以下を含むがこれに限定されないウイルスからの抗原であってもよい：Ａ型肝炎ウイルス、Ｂ型肝炎ウイルス、Ｃ型肝炎ウイルス、ポリオウイルス、狂犬病ウイルス、麻疹ウイルス、流行性耳下腺炎ウイルス、風疹ウイルス、水痘帯状疱疹ウイルス、インフルエンザウイルス、ウエストナイルウイルス、ＳＡＲＳコロナウイルス、ヒト免疫不全症ウイルス、呼吸器合胞体ウイルス、デング熱ウイルス、黄熱ウイルス、日本脳炎ウイルス、ダニ媒介脳炎ウイルス、単純疱疹ウイルス、エプスタインバーウイルス、ヒトサイトメガロウイルス、ヒト乳頭腫ウイルス。
【０１０８】
抗原は、たとえばバクテリア全体、ビリオン全体、不活性化バクテリア、不活性化ビリオン、精製タンパク質、精製糖類、複合糖質などのさまざまな形を取ってもよい。しかし、タンパク質を投与する代わりに、インビボで翻訳されてインサイツでタンパク質を与える核酸を投与することも可能である。
【０１０９】
糖抗原が用いられるとき、その抗原は免疫原性を高めるために担体タンパク質に結合されることが好ましい。必要であればあらゆる好適なリンカーとともに、あらゆる好適な結合反応が用いられてもよい。
【０１１０】
いくつかの実施形態において、抗原は免疫賦活薬の１つに結合されてもよい。
【０１１１】
薬学的組成物
本発明の組成物は薬学的に受容可能である。本発明の組成物は、式Ｉの免疫賦活薬に加えて構成要素を含んでもよい。本発明の組成物は典型的に、１つまたはそれ以上の医薬担体（単数または複数）および／または賦形剤（単数または複数）を含む。こうした構成要素の詳細な考察は、ＲＥＭＩＮＧＴＩＯＮ：ＴＨＥ ＳＣＩＥＮＣＥ ＡＮＤ ＰＲＡＣＴＩＣＥ ＯＦ ＰＨＡＲＭＡＣＹ，第２０版（２０００）において得られる。
【０１１２】
組成物は一般的に水性の形であり、しばしば等張性である。浸透圧を調節するために、ナトリウム塩などの生理学的な塩を含むことが好ましい。塩化ナトリウム（ＮａＣｌ）が好ましく、これは１ｍｇ／ｍｌから２０ｍｇ／ｍｌの間で存在してもよい。存在し得るその他の塩には、塩化カリウム、リン酸二水素カリウム、リン酸二ナトリウム無水物、塩化マグネシウム、塩化カルシウムなどが含まれる。
【０１１３】
組成物は一般的に、重量オスモル濃度が２００ｍＯｓｍ／ｋｇから４００ｍＯｓｍ／ｋｇの間、好ましくは２４０〜３６０ｍＯｓｍ／ｋｇの間、より好ましくは２９０〜３１０ｍＯｓｍ／ｋｇの範囲内である。
【０１１４】
組成物は１つまたはそれ以上の緩衝液を含んでもよい。典型的な緩衝液は以下を含む：リン酸緩衝液；Ｔｒｉｓ緩衝液；ホウ酸塩緩衝液；コハク酸塩緩衝液；ヒスチジン緩衝液（特に水酸化アルミニウムアジュバントとともに）；またはクエン酸塩緩衝液。緩衝液は典型的には５〜２０ｍＭの範囲で含まれる。
【０１１５】
組成物のｐＨは、一般的には５．０から８．１の間であり、より典型的には６．０から８．０の間、たとえば６．５から７．５など、または７．０から７．８の間である。
【０１１６】
組成物は好ましくは無菌である。組成物は好ましくは非発熱性であり、たとえば用量当り＜１ＥＵ（エンドトキシン単位（ｅｎｄｏｔｏｘｉｎ ｕｎｉｔ）、標準的尺度）など、好ましくは用量当り＜０．１ＥＵを含有する。組成物は好ましくはグルテンを含まない。組成物は保存剤を含んでもよい。
【０１１７】
全身投与に好適な態様で製剤が調製されてもよい。全身性製剤は、注射（例、筋肉内、静脈内、または皮下注射）のために設計されたものを含み、または経皮（ｔｒａｎｓｄｅｒｍａｌ）、経皮（ｔｒａｎｓｃｕｔａｎｅｏｕｓ）、経粘膜もしくは経口投与のために調製されてもよい。注射方法は、静脈内、筋肉内、皮下、および内部送達のためのその他の方法を含む。粘膜投与はあらゆる好適な粘膜表面に対するものであってもよい。全身投与は、たとえば坐薬、経皮パッチ、経粘膜送達および鼻腔内投与の使用などの比較的非侵襲性の方法を含んでもよい。経口投与も好適である。当該技術分野において理解されるとおり、好適な形はシロップ、カプセル、錠剤などを含む。所与の対象に対する特定の経路の選択は、当業者の通常のレベルの範囲内である。たとえば、対象が有効な経口投与を妨げる悪心および嘔吐を有するときには、しばしば坐薬としての直腸送達が適切である。経皮パッチは一般的に数日間にわたって徐放性の用量を送達することができるため、それが適切であるような対象に対して好適である。
【０１１８】
処置の方法
本発明の組成物はヒト患者への投与のために好適であり、本発明は患者における免疫応答を高める方法を提供し、この方法は本発明の組成物を患者に投与するステップを含む。このステップは、（ａ）免疫賦活薬および抗原（単数または複数）の両方を含む組成物を投与するステップか、または（ｂ）抗原を含まない免疫賦活薬組成物と抗原含有組成物とを同時投与するステップのいずれかを含んでもよい。
【０１１９】
本発明は、薬物として使用するための本発明の組成物も提供する。
【０１２０】
本発明は、患者における免疫応答を高めるための薬物の製造における、２つまたはそれ以上の（上に定義したとおりの）免疫賦活薬の組合せの使用も提供する。
【０１２１】
本発明は、（ｉ）２つまたはそれ以上の、上に定義したとおりの免疫賦活薬の組合せ、および（ｉｉ）免疫化における同時使用、別個の使用または連続的な使用のための抗原も提供する。
【０１２２】
本発明は、（ａ）患者における免疫応答を高めるための薬物の製造、または（ｂ）患者における抗原に対する免疫応答を高める方法において使用するための、上に定義したとおりの抗原および免疫賦活薬も提供する。
【０１２３】
これらの方法および使用によって高められる免疫応答は一般的に、抗体（Ｂ細胞応答）応答および／またはＴ細胞応答を含む。
【０１２４】
たとえば分泌型ＩｇＡ応答などのＩｇＡ応答などを含む粘膜免疫応答を高めるために、本発明が用いられてもよい。その代わりに、またはその上に、ＩｇＧ応答が高められてもよい。
【０１２５】
以下の実施例は本発明の特定の局面および実施形態の理解を増すために提供されるが、本発明の範囲を制限するものと解釈されるべきではない。
【０１２６】
試薬
すべての化学物質は試薬用として購入され、さらなる精製なしに用いられた。すべての溶媒は新たに活性化された４Å分子ふるいの上で乾燥された。
【０１２７】
一般的な情報
Ｍｅｒｃｋシリカゲルプレート６０Ｆ２５４上で、分析薄層クロマトグラフィ（ｔｈｉｎ ｌａｙｅｒ ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ：ＴＬＣ）によって反応をモニタし、ＵＶ（２５４）下で、および／またはＭｅＯＨ、酸性セリウムアンモニウムモリブデン酸塩もしくはＫＭｎＯ４中の５％Ｈ２ＳＯ４による染色によって視覚化した。Ｍａｃｈｅｒｅｙ−Ｎａｇｅｌ ６０シリカゲル上でフラッシュカラムクロマトグラフィを行なった。２５℃にて３００ＭＨｚのＮＭＲ分光計においてＮＭＲスペクトルを記録した。重水素化溶媒において化学シフト（ｐｐｍ）を決定した。３００（７５ＭＨｚ）分光計において１３Ｃ付着プロトンテスト（ａｔｔａｃｈｅｄ ｐｒｏｔｏｎ ｔｅｓｔ：ＡＰＴ）スペクトルを得て、重水素化溶媒に関して較正した。
【実施例】
【０１２８】
（実施例１）
一般的中間体７の合成
アリル２，３，４，６−テトラ−Ｏ−ベンジル−α−Ｄ−ガラクトピラノシル−（ｌ→５）−２，３−Ｏ−イソプロピリデン−α−Ｄ−リキソフラノシド（１）。
【０１２９】
ＤＣＭ中の５ｇの２，３，４，６−テトラ−Ｏ−ベンジル−α−Ｄ−ガラクトピラノシルブロミド［Ｇｒａｙｓｏｎ，Ｅ．Ｊ．ら、Ｊ．Ｏｒｇ．Ｃｈｅｍ．（２００５），７０，９７４０−９７５４］（８．３４ｍｍｏｌ）および１．５ｇのアリル２，３−Ｏ−イソプロピリデン−α−Ｄ−リキソフラノシド（６．４２ｍｍｏｌ）の溶液に、４．４ｍＬのトリ−（１−ピロリジン）−ホスフィンオキシド（１９．６ｍｍｏｌ）を加えた［Ｍｕｋａｉｙａｍａ，Ｔ．ａｎｄ Ｋｏｂａｓｈｉ，Ｙ．，Ｃｈｅｍ． Ｌｅｔｔ．（２００４），３３，１０−１１］。混合物を室温で２４時間撹拌し、次いでＥｔＯＡｃで希釈してセライト上でろ過した。溶媒の蒸発後、未精製品を入念なフラッシュクロマトグラフィ（トルエン／ＥｔＯＡｃ ９５／５）によって精製し、４．１２ｇの１（８５％）を得た。
【０１３０】
【化１１】
２，３，４，６−テトラ−Ｏ−ベンジル−α−Ｄ−ガラクトピラノシル−（ｌ→５）−２，３−Ｏ−イソプロピリデン−Ｄ−リキソフラノース（２）。
【０１３１】
アルゴン下の３４ｍＬの乾性ＤＭＳＯ中の２，５０９ｇ（３．３３ｍｍｏｌ）の１の溶液に、０．５６ｇ（５ｍｍｏｌ）のｔＢｕＯＫを加えた。混合物を８０℃にて１．５時間撹拌した。冷却後に混合物をＥｔＯＡｃで希釈し、有機溶液を水（ｘ１）および塩水（ｘ３）で洗浄し、硫酸ナトリウム上で乾燥させて蒸発させた。残留物を６５ｍＬのＴＨＦに溶解し、この溶液に１３ｍＬの水、１．１ｍＬのピリジンおよび１．６９ｇ（６．６６ｍｍｏｌ）のヨウ素を加えた。室温にて３時間後、混合物をＥｔＯＡｃで希釈し、５％のチオ硫酸ナトリウム水溶液、１ＮのＨＣｌ、重炭酸ナトリウムの飽和溶液、および水で洗浄した。溶液を硫酸ナトリウムで乾燥して溶媒を蒸発させた。フラッシュクロマトグラフィ（トルエン／ＡｃＯＥｔ ９０／１０）によって２．１６ｇの２（９１％）を得た。
【０１３２】
【化１２】
（２Ｒ，３Ｓ，４Ｒ）−３，４−Ｏ−イソプロピリデン−１−Ｏ−（２，３，４，６−テトラ−Ｏ−ベンジル−α−Ｄ−ガラクトピラノシル）−１，２，３，４，５−ペンタンペントール（３）。
【０１３３】
２０ｍＬのＥｔＯＨ中の２．１ｇ（２．８５ｍｍｏｌ）の２の溶液に、１４０ｍｇ（３．５６ｍｍｏｌ）の水素化ホウ素ナトリウムを加えた。混合物を室温にて２時間撹拌した。混合物をＥｔＯＡｃで希釈し、１ＮのＨＣｌ、重炭酸ナトリウムの飽和溶液、および水で洗浄した。溶液を硫酸ナトリウムで乾燥して溶媒を蒸発させた。フラッシュクロマトグラフィ（ＤＣＭ／ＭｅＯＨ ９７：３）によって１．６５ｇの３（８１％）を得た。
【０１３４】
【化１３】
（２Ｒ，３Ｓ，４Ｒ）−３，４−Ｏ−イソプロピリデン−５−Ｏ−ピバロイル−１−Ｏ−（２，３，４，６−テトラ−Ｏ−ベンジル−α−Ｄ−ガラクトピラノシル）−１，２，３，４，５−ペンタンペントール（４）。
【０１３５】
０℃のアルゴン下の２８ｍＬの乾性ＤＣＭ中の１，２６５ｇ（１．７７ｍｍｏｌ）の３の溶液に、０．６５ｍＬのピリジンおよび０．６６ｍＬ（５．３ｍｍｏｌ）の塩化ピバロイルを加えた。混合物を室温まで温め、一晩撹拌した。２６時間後に混合物をＥｔＯＡｃで希釈し、１ＮのＨＣｌおよび塩水（３ｘ）で洗浄した。有機層を硫酸ナトリウムで乾燥して蒸発させた。フラッシュクロマトグラフィ（Ｐｅｔ．エーテル／ＥｔＯＡｃ ７５：２５）によって１．２２ｇの４（８６％）を得た。
【０１３６】
【化１４】
（２Ｓ，３Ｓ，４Ｒ）−２−アジド−３，４−Ｏ−イソプロピリデン−５−Ｏ−ピバロイル−１−Ｏ−（２，３，４，６−テトラ−Ｏ−ベンジル−α−Ｄ−ガラクトピラノシル）−１，３，４，５−ペンタンテトロール（６）。
【０１３７】
０℃に冷却されたアルゴン下の３０ｍＬの乾性ピリジン中の１，２１ｇ（１．５２ｍｍｏｌ）の４の溶液に、１．６ｍＬ（１．７７ｍｍｏｌ）のクロロメタンスルホニルクロリドを加えた。反応を室温に温め、５時間撹拌した。混合物をＥｔＯＡｃで希釈した。有機層を１ＮのＨＣｌ、重炭酸ナトリウムおよび塩水で洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥して蒸発させた。未精製物をシリカゲルの短いパッドでろ過し、さらなる精製なしに次のステップに用いた。
【０１３８】
未精製物をアルゴン下で乾性ＤＭＦ（１２ｍＬ）に溶解した。アジ化ナトリウム（０．４５ｇ）を加え、混合物を８５℃で温めた。２．５時間後に混合物をＤＣＭで希釈し、水（３ｘ）で洗浄し、有機層を硫酸ナトリウムで乾燥して蒸発させた。フラッシュクロマトグラフィ（Ｐｅｔ．エーテル／ＥｔＯＡｃ ８５：１５）０．８５ｇの４（２ステップにわたって７２％）。
【０１３９】
【化１５】
（２Ｓ，３Ｓ，４Ｒ）−２−アジド−３，４−Ｏ−イソプロピリデン−１−Ｏ−（２，３，４，６−テトラ−Ｏ−ベンジル−α−Ｄ−ガラクトピラノシル）−１，３，４，５−ペンタンテトロール（７）。
【０１４０】
ジオキサン（２０ｍＬ）中の０．５ｇ（０．６ｍｍｏｌ）の６の溶液に、１．７ｍＬの水酸化テトラブチルアンモニウムの溶液を加えた。混合物を７２時間撹拌し、次いでＥｔＯＡｃで希釈した。有機層を１ＮのＨＣｌ、塩水で洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥して蒸発させた。未精製物のフラッシュクロマトグラフィ（Ｐｅｔ．エーテル／ＥｔＯＡｃ ７０：３０）によって０．３５ｇ（７８％）の７を得た。
【０１４１】
【化１６】
（実施例２）
一般的中間体１０の合成
（２Ｓ，３Ｓ，４Ｒ）−２−（Ｎ−エサコサノイルアミノ）−３，４−Ｏ−イソプロピリデン−５−Ｏ−ピバロイル−１−Ｏ−（２，３，４，６−テトラ−Ｏ−ベンジル−α−Ｄ−ガラクトピラノシル）−１，３，４，５−ペンタンテトラオール（９）。
【０１４２】
ＥｔＯＨ（４０ｍＬ）中の０．５ｇ（０．６ｍｍｏｌ）の６の溶液に、触媒的量のＬｉｎｄｌａｒ触媒を加え、混合物を水素雰囲気下で４．５時間撹拌した。０，１０７ｇのジ（１５）０，０７）。混合物をＤＣＭで希釈してセライトでろ過し、得られた０．５ｇの未精製アミン８を次のステップに直接使用した。
【０１４３】
０℃のアルゴン下の乾性ＤＣＭ−ＤＭＦの３：１混合物２０ｍＬにおける化合物８の溶液に、２９６ｍｇ（０．７５ｍｍｏｌ）のヘキサコサン酸を加えた。この懸濁液に、ＥＤＣ（１４５ｍｇ、０．７５ｍｍｏｌ）、ＨＯＢＴ（１０２ｍｇ、０．７５ｍｍｏｌ）、および最後にＤＣＭ中のＤＩＰＥＡ溶液（０．２６ｍｌ、１．５ｍｍｏｌ）を加えた。２０時間後に混合物をＥｔＯＡｃで希釈し、１ＮのＨＣｌ、重炭酸ナトリウムの飽和溶液および塩水で洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥して溶媒を蒸発させた。フラッシュクロマトグラフィ（Ｐｅｔ．エーテル／ＡｃＯＥｔ ８０：２０）によって５３４ｍｇの９（２ステップにわたって７２％）を得た。
【０１４４】
【化１７】
（２Ｓ，３Ｓ，４Ｒ）−２−（Ｎ−エサコサノイルアミノ）−３，４−Ｏ−イソプロピリデン−１−Ｏ−（２，３，４，６−テトラ−Ｏ−ベンジル−α−Ｄ−ガラクトピラノシル）−１，３，４，５−ペンタンテトラオール（１０）。
【０１４５】
５００ｍｇの９から出発して、化合物７の調製に対して記載されるとおりに化合物１０を得た。生成物をフラッシュクロマトグラフィ（Ｐｅｔ．エーテル／ＥｔＯＡｃ ５０：５０）によって精製し、３４５ｍｇ（７６％）の化合物１０を得た。
【０１４６】
【化１８】
（実施例３）
α−ＧａｌＣｅｒのオキサ類似体の合成
（２Ｓ，３Ｓ，４Ｒ）−２−アジド−５−（２−ブトキシエチル）−３，４−Ｏ−イソプロピリデン−１−Ｏ−（２，３，４，６−テトラ−Ｏ−ベンジル−α−Ｄ−ガラクトピラノシル）−１，３，４，５−ペンタンテトラオール（１１）。
【０１４７】
アルゴン下の乾性ＤＭＦ（３ｍＬ）中の１００ｍｇ（０．１３５ｍｍｏｌ）の７の溶液に、６０％のＮａＨ（１１ｍｇ、０．２７ｍｍｏｌ）および２−ブトキシエチルメシラート（７５ｍｇ、０．４ｍｍｏｌ）を加えた。混合物を１００℃にて２時間撹拌した。別の２ｅｑのＮａＨおよび２−ブトキシエチルメシラートを加えた。さらに２時間後に、ＥｔＯＡｃで希釈した塩化アンモニウム（飽和溶液）で混合物をクエンチし、水（４ｘ）で洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥して蒸発させた。フラッシュクロマトグラフィ（Ｐｅｔ．エーテル／ＡｃＯＥｔ ８０：２０）は７４ｍｇ（６５％）の１１を与えた。
【０１４８】
【化１９】
（２Ｓ，３Ｓ，４Ｒ）−５−Ｏ−（２−ブトキシエチル）−２−（Ｎ−エキサコサノイルアミノ）−３，４−Ｏ−イソプロピリデン−１−Ｏ−（２，３，４，６−テトラ−Ｏ−ベンジル−α−Ｄ−ガラクトピラノシル）−１，３，４，５−ペンタエンテトラオール（１２）。
【０１４９】
１０より：１００ｍｇ（９２ｍｍｏｌ）の１０の溶液に、１０ｍｇのＫＯＨおよび２０ｍｇ（０．１ｍｍｏｌ）の２−ブトキシエチルメシラートを加えた。混合物を４０℃にて２０時間撹拌し、次いでＥｔＯＡｃで希釈した。有機層を塩水で洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥して蒸発させた。フラッシュクロマトグラフィ（トルエン／ＥｔＯＡｃ ８０：２０）は７５ｍｇ（６８％）の１２を与えた。
【０１５０】
１１より：６からの９の調製に対して記載されたものと同じ手順に従って、６９％の収率の化合物１２を得た。
【０１５１】
【化２０】
（２Ｓ，３Ｓ，４Ｒ）−５−Ｏ−（２−ブトキシエチル）−２−（Ｎ−エキサコサノイルアミノ）−１−Ｏ−（α−Ｄ−ガラクトピラノシル）−１，３，４，５−ペンタンテトラオール（１３）。
【０１５２】
０℃の４ｍＬのジオキサン中の７０ｍｇ（０．０６ｍｍｏｌ）の１２の溶液に、ジオキサン中の４ＮのＨＣｌを０．０８ｍＬ加えた。混合物を室温まで温めて４時間撹拌した。溶媒を蒸発させて未精製生成物を次のステップに直接供した。
【０１５３】
未精製物を２ｍＬのＣＨＣｌ３／ＭｅＯＨ混合物に溶解した。３０ｍｇの１０％Ｐｄ（ＯＨ）２／Ｃを加えて、混合物を水素雰囲気下で３時間撹拌した。混合物をセライトでろ過し、溶媒を蒸発させた。フラッシュクロマトグラフィ（ＤＣＭ／ＭｅＯＨ ９０：１０）は２９ｍｇ（２ステップにわたって６２％）の１３を与えた。
【０１５４】
【化２１】
類似の態様で、化合物１４および１５を得ることができる。
【０１５５】
（実施例４）
ネズミＮＫＴ細胞系による糖脂質の認識によるＩＬ−２分泌
糖脂質：すべてのα−ＧａｌＣｅｒ類似体を記載されるとおりに合成した。α−ＧａｌＣｅｒは文献の方法に従って合成した［Ｆｉｇｕｅｒｏａ−Ｐｅｒｅｚ，Ｓ．＆ Ｓｃｈｍｉｄｔ，Ｒ．Ｒ．（２０００）Ｃａｒｂｏｈｙｄｒ．Ｒｅｓ．，３２８，９５−１０２］。
【０１５６】
ＣＤ１ｄ受容体を過剰発現するＴＨＰ１（ヒト急性単球白血病細胞系）をＡＰＣ（抗原提示細胞（ａｎｔｉｇｅｎ ｐｒｅｓｅｎｔｉｎｇ ｃｅｌｌｓ））として用いて、ＲＰＭＩ培地（グルタミン２ｍＭ、ＮａＰｙｒｕｖａｔｅ１ｍＭ、非必須アミノ酸１％、カナマイシン１００μｌ／ｍｌ、ＦＢＳ１０％、β−メルカプトエタノール０．０１ｍＭ）中で培養した。
【０１５７】
活性化に対する応答としてＩＬ２を分泌するＣＤ１ｄ反応性マウスＴ細胞ハイブリドーマＦＦ１３を化合物の評価に用いた。ＦＦ１３細胞をＲＰＭＩ１６４０培地（グルタミン２ｍＭ、ＮａＰｙｒｕｖａｔｅ１ｍＭ、非必須アミノ酸１％、カナマイシン１００μｌ／ｍｌ、ＦＢＳ１０％、β−メルカプトエタノール０．０１ｍＭ）中で培養した。
【０１５８】
ＴＨＰ１ ｈＣＤ１ｄ（ヒト（ｈｕｍａｎ）ＣＤ１Ｄで形質移入したヒトＴＨＰ−１細胞）およびマウスＮＫＴ細胞ハイブリドーマＦＦ１３は、Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ Ｈｏｓｐｉｔａｌ Ｂａｓｅｌより提供された。
【０１５９】
化合物のＤＭＳＯストック溶液（１ｍｇ／ｍＬ）を調製し、異なる濃度に希釈した：１０μｇ／ｍｌ；１，１μｇ／ｍｌ；０．３７μｇ／ｍｌ；０．１２μｇ／ｍｌ；０．０４μｇ／ｍｌ；０．０１μｇ／ｍｌ。
【０１６０】
ＦＦ１３刺激
９６マルチウェル中で、９０μｌの無血清培地中のＴＨＰ１（ＡＰＣ）（５ｘ１０４細胞）に１０μｌの化合物の溶液を加え、２時間インキュベートした。
【０１６１】
完全培地中の１００μｌのＦＦ１３を加え（ウェル当り１０ｘ１０４）、４８時間後にＩＬ２生成に対するテストを評価した。
【０１６２】
ＩＬ２濃度はＥＬＩＳＡによって、一次モノクローナル抗マウスＩＬ−２抗体（Ｒ＆Ｄ Ｓｙｓｔｅｍ）と、ビオチン化検出抗マウスＩＬ−２抗体（Ｒ＆Ｄ Ｓｙｓｔｅｍ）と、発色剤としてＳＩＧＭＡ ＦＡＳＴ ＯＰＤとを用いて評価された。標準として組換えマウスＩＬ２（Ｒ＆Ｄ Ｓｙｓｔｅｍ）を用い、すべてのテストを３回行なった。
【０１６３】
図２は、ＮＫＴ細胞ハイブリドーマテストにおいてアルファＧａｌＣｅｒ自身の効果と比較したときの、化合物１３〜１６で処置された細胞によって放出されるＩＬ２レベルを示す。さまざまな用量のテスト化合物（約０．１μｇ／ｍＬから約１０μｇ／ｍＬ）に２時間露出させたＣＤ１ｄ形質移入ＴＨＰ−１細胞に、ａ−ＧａｌＣｅｒ特異的なＮＫＴハイブリドーマ細胞を加え、４８時間後に培地中のＩＬ−２レベルを定めた。化合物１３および１６は１０マイクロモル濃度においてａ−ＧａｌＣｅｒと同様に効果的であり、他の化合物は少しだけ効果が低かった。よって、セラミド化合物のアルキル基に挿入された酸素は活性に悪影響を与えず、アルキル基の顕著な変更は活性に少しの変化しか与えずに行なわれ得る。
【０１６４】
（実施例５）
合成アルファＧａｌ ＧＧおよびアルファＧａｌ ＬＰのインビボ比較。
【０１６５】
合成α−ＧａｌＣｅｒの２つの異なる供給源を比較した。成体Ｂａｌｂ／Ｃマウスにおいて、インフルエンザ抗原の存在下での合成「アルファＧａｌ ＧＧ」および「アルファＧａｌ ＬＰ」の効果のインビボ比較を行なった。両方のα−ＧａｌＣｅｒは最初に、Ｈ２Ｏおよび０．５％のＴｗｅｅｎ２０に溶解した形で与えられた。このＴｗｅｅｎ２０溶解材料を単独で、または水中ＭＦ５９スクアレンエマルションと組合せて投与した。α−ＧａｌＣｅｒをＭＦ５９（非製剤）に加えるか、またはＭＦ５９（製剤）に組み込んだ。
【０１６６】
８匹の成体マウス（７週）のグループを３週間間隔で２回免疫化した。加えて、マウスのあるグループにはいずれのワクチン組成物も投与せずに対照として用いた。免疫化組成物はインフルエンザ抗原「Ｆｌｕ」を含み、各免疫化に対して各マウスは０．１μｇのＡ／Ｓｏｌｏｍｏｎ Ｈ１Ｎ１、０．１μｇのＡ／Ｗｉｓｃｏｎｓｉｎ Ｈ３Ｎ２、または０．１μｇのＢ／Ｍａｌａｙｓｉａインフルエンザ抗原を受けた。ａ−ＧａｌＣｅｒで処置されたマウスについては、各マウスは各免疫化に対して０．１μｇのａ−ＧａｌＣｅｒを受けた。免疫化は、脚への５０μＬ組成物の筋肉内注射によって投与された。第１の投与の３週間後に第２の免疫化を送達し、ここでは異なる脚に付加的な５０μＬのワクチンを投与した。マウスのグループに以下の組成物の各々を投与した：
Ｆｌｕ；
ＦｌｕおよびＭＦ５９；
Ｆｌｕおよびａ−Ｇａｌ ＧＧ；
ＦｌｕおよびＭＦ５９およびａ−Ｇａｌ ＧＧ；
ＦｌｕおよびＭＦ５９およびａ−Ｇａｌ ＧＧ、製剤；
Ｆｌｕおよびａ−Ｇａｌ ＬＰ；
ＦｌｕおよびＭＦ５９およびａ−Ｇａｌ ＬＰ；
ＦｌｕおよびＭＦ５９およびａ−Ｇａｌ ＬＰ（製剤）。
【０１６７】
第２の免疫化投与の２週間後にワクチン投与組成物に対する免疫応答を評価した。ＨＩ（赤血球凝集阻止（ｈｅｍａｇｇｌｕｔｉｎａｔｉｏｎ−ｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎ））力価およびＩｇＧ力価の測定値を記録して、免疫応答の指標として用いた。ＨＩ力価はＨＩアッセイを用いて測定し、ＩｇＧ力価はＥＬＩＳＡによって測定した。結果をまとめたものを図３、図４および図５に示しており、これらはそれぞれＨ３Ｎ２（Ａ／Ｗｉｓｃｏｎｓｉｎ）に応答したＨＩ力価、Ｂ（Ｂ／Ｍａｌａｙｓｉａ）、Ｈ１Ｎ１（Ａ／Ｓｏｌｏｍｏｎ）およびＨ３Ｎ２（Ａ／Ｗｉｓｃｏｎｓｉｎ）に応答したＩｇＧ力価、ならびにＩｇＧ力価のサブクラスを示す。
【０１６８】
（実施例６）
合成アルファＧａｌ ＬＰおよびその誘導体のインビボ比較。
【０１６９】
インフルエンザ抗原によって、成体Ｂａｌｂ／Ｃマウスにおいて、化合物ａ−Ｇａｌ ＬＰ、１３、１４、１５および１６の効果のインビボ比較を行なう。化合物１３〜１６は明細書に記載されるとおりに合成される。
【０１７０】
８匹の成体マウス（７週）のグループを３週間間隔で２回免疫化する。加えて、４匹のマウスにはいずれのワクチン組成物も投与せずに対照グループとして用いる。免疫化組成物は、２００８／０９株、すなわちＡ／Ｂｒｉｓｂａｎｅ／５９／２００７様、Ａ／Ｂｒｉｓｂａｎｅ／／１０／２００７様およびＢ／Ｆｌｏｒｉｄａ／４／２００６様の各々からの０．１μｇの赤血球凝集素を含むインフルエンザ抗原「Ｆｌｕ」を含む。ａ−ＧａｌＣｅｒで処置すべきマウスについては、各マウスは各免疫化に対して０．１μｇのａ−ＧａｌＣｅｒを受ける。免疫化は、脚への５０μＬ組成物の筋肉内注射によって投与される。第１の投与の３週間後に第２の免疫化を送達し、ここでは異なる脚に付加的な５０μＬの組成物を投与する。マウスのグループに以下の組成物の各々を投与する：
Ｆｌｕ；
ＦｌｕおよびＭＦ５９アジュバント；
Ｆｌｕおよびａ−Ｇａｌ ＬＰ；
Ｆｌｕおよび化合物１３（Ｈ２Ｏ／Ｔｗｅｅｎ２０ ０．５％）、１４（Ｈ２Ｏ／Ｔｗｅｅｎ２０ ０．５％）、１５（Ｈ２Ｏ）、または１６（Ｈ２Ｏ／Ｔｗｅｅｎ２０ ０．５％）；
ＦｌｕおよびＭＦ５９／ａ−Ｇａｌ ＬＰ；ならびに
ＦｌｕおよびＭＦ５９／化合物１３、１４、１５、または１６。
【０１７１】
第２の免疫化投与の２週間後にワクチン投与組成物に対する免疫応答を評価する。ＨＩ（赤血球凝集阻止）力価、ＩｇＧおよびＩｇＧサブクラス力価の測定値を記録して、免疫応答の指標として用いる。ＨＩ力価はＨＩアッセイを用いて測定し、ＩｇＧ力価はＥＬＩＳＡによって測定する。
【特許請求の範囲】
【請求項１】
式Ｉ：
【化２２】
の化合物またはその薬学的に受容可能な塩であって、ここで、
Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、およびＲ５は各々独立にＨまたは保護基を表わし；
Ｘは置換可能なＣ４−Ｃ３０ヒドロカルビル基であり；
Ｙは２つまでの基で置換可能なＣ１−Ｃ６アルキレンまたはＣ２−Ｃ６アルケニレンリンカーであり；
Ｚは−ＯＲ１であり、ここでＲ１は骨格にヘテロ原子を含み得るＣ４−Ｃ２０ヒドロカルビル基であり、任意に置換される、
化合物またはその薬学的に受容可能な塩。
【請求項２】
Ｘは１０〜３０個の炭素を有する未置換アルキル基である、請求項１に記載の化合物。
【請求項３】
Ｙは任意に置換されるＣ２アルキレンである、請求項１または２に記載の化合物。
【請求項４】
−Ｙ−Ｚは
【化２３】
である、請求項３に記載の化合物。
【請求項５】
Ｚは−Ｏ−Ｒ１であり、ここでＲ１はＣ４−Ｃ２０ヒドロカルビルである、請求項１〜４のいずれか１項に記載の化合物。
【請求項６】
Ｚは−Ｏ−Ｒ１であり、ここでＲ１は（ＣＨ２）ｍ−Ｏ−Ｒ１ｂであり、ここでｍは１〜６であり、Ｒ１ｂはＣ１−Ｃ１６アルキル、シクロアルキルまたはシクロアルキルアルキルである、請求項１〜４のいずれか１項に記載の化合物。
【請求項７】
Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、およびＲ５の各々はＨである、請求項１〜６のいずれか１項に記載の化合物。
【請求項８】
化合物１３、１４、１５および１６からなる群より選択される、請求項１に記載の化合物。
【請求項９】
請求項１〜８のいずれか１項に記載の化合物および抗原を含む、免疫原性組成物。
【請求項１０】
抗原によって誘発される免疫応答を増大するための方法であって、該方法は、該抗原を受容する対象に有効量の式Ｉ：
【化２４】
の化合物またはその薬学的に受容可能な塩を投与するステップを含み、ここで、
Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、およびＲ５は各々独立にＨまたは保護基を表わし；
Ｘは置換可能なＣ４−Ｃ３０ヒドロカルビル基であり；
Ｙは２つまでの基で置換可能なＣ１−Ｃ６アルキレンまたはＣ２−Ｃ６アルケニレンリンカーであり；
Ｚは−ＯＲ１であり、ここでＲ１は骨格にヘテロ原子を含み得るＣ４−Ｃ２０ヒドロカルビル基であり、任意に置換される、
方法。
【請求項１１】
前記抗原および式Ｉの化合物は、同時または同じ日に投与される、請求項１０に記載の方法。
【請求項１２】
前記抗原は、細菌抗原、ウイルス抗原、真菌抗原、原生動物抗原、および腫瘍関連抗原から選択される、請求項１０に記載の方法。
【請求項１】
式Ｉ：
【化２２】
の化合物またはその薬学的に受容可能な塩であって、ここで、
Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、およびＲ５は各々独立にＨまたは保護基を表わし；
Ｘは置換可能なＣ４−Ｃ３０ヒドロカルビル基であり；
Ｙは２つまでの基で置換可能なＣ１−Ｃ６アルキレンまたはＣ２−Ｃ６アルケニレンリンカーであり；
Ｚは−ＯＲ１であり、ここでＲ１は骨格にヘテロ原子を含み得るＣ４−Ｃ２０ヒドロカルビル基であり、任意に置換される、
化合物またはその薬学的に受容可能な塩。
【請求項２】
Ｘは１０〜３０個の炭素を有する未置換アルキル基である、請求項１に記載の化合物。
【請求項３】
Ｙは任意に置換されるＣ２アルキレンである、請求項１または２に記載の化合物。
【請求項４】
−Ｙ−Ｚは
【化２３】
である、請求項３に記載の化合物。
【請求項５】
Ｚは−Ｏ−Ｒ１であり、ここでＲ１はＣ４−Ｃ２０ヒドロカルビルである、請求項１〜４のいずれか１項に記載の化合物。
【請求項６】
Ｚは−Ｏ−Ｒ１であり、ここでＲ１は（ＣＨ２）ｍ−Ｏ−Ｒ１ｂであり、ここでｍは１〜６であり、Ｒ１ｂはＣ１−Ｃ１６アルキル、シクロアルキルまたはシクロアルキルアルキルである、請求項１〜４のいずれか１項に記載の化合物。
【請求項７】
Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、およびＲ５の各々はＨである、請求項１〜６のいずれか１項に記載の化合物。
【請求項８】
化合物１３、１４、１５および１６からなる群より選択される、請求項１に記載の化合物。
【請求項９】
請求項１〜８のいずれか１項に記載の化合物および抗原を含む、免疫原性組成物。
【請求項１０】
抗原によって誘発される免疫応答を増大するための方法であって、該方法は、該抗原を受容する対象に有効量の式Ｉ：
【化２４】
の化合物またはその薬学的に受容可能な塩を投与するステップを含み、ここで、
Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、およびＲ５は各々独立にＨまたは保護基を表わし；
Ｘは置換可能なＣ４−Ｃ３０ヒドロカルビル基であり；
Ｙは２つまでの基で置換可能なＣ１−Ｃ６アルキレンまたはＣ２−Ｃ６アルケニレンリンカーであり；
Ｚは−ＯＲ１であり、ここでＲ１は骨格にヘテロ原子を含み得るＣ４−Ｃ２０ヒドロカルビル基であり、任意に置換される、
方法。
【請求項１１】
前記抗原および式Ｉの化合物は、同時または同じ日に投与される、請求項１０に記載の方法。
【請求項１２】
前記抗原は、細菌抗原、ウイルス抗原、真菌抗原、原生動物抗原、および腫瘍関連抗原から選択される、請求項１０に記載の方法。
【図１】
【図２】
【図３】
【図４】
【図５】
【図２】
【図３】
【図４】
【図５】
【公表番号】特表２０１１−５１０９１０（Ｐ２０１１−５１０９１０Ａ）
【公表日】平成２３年４月７日（２０１１．４．７）
【国際特許分類】
【出願番号】特願２０１０−５２８５０４（Ｐ２０１０−５２８５０４）
【出願日】平成２０年１０月１０日（２００８．１０．１０）
【国際出願番号】ＰＣＴ／ＩＢ２００８／００３２６３
【国際公開番号】ＷＯ２００９／０６０３０５
【国際公開日】平成２１年５月１４日（２００９．５．１４）
【出願人】（５１０１０２１００）
【Ｆターム（参考）】
【公表日】平成２３年４月７日（２０１１．４．７）
【国際特許分類】
【出願日】平成２０年１０月１０日（２００８．１０．１０）
【国際出願番号】ＰＣＴ／ＩＢ２００８／００３２６３
【国際公開番号】ＷＯ２００９／０６０３０５
【国際公開日】平成２１年５月１４日（２００９．５．１４）
【出願人】（５１０１０２１００）
【Ｆターム（参考）】
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