即効性インシュリン製剤
【課題】作用発現が有意に短縮された即効性のインシュリン製剤を提供する。
【解決手段】本発明は、インシュリンと、カルボキシル官能基を有する多糖類との複合体であって、前記多糖類は、少なくとも１つのフェニルアラニン誘導体（Ｐｈｅと記す）により官能化された多糖類より選択され、とりわけ前記フェニルアラニン誘導体は、フェニルアラニン及びそのアルカリカチオン塩、フェニルアラニノール、フェニルアラニンアミド、エチルベンジルアミンから成る群より選択されるか、又はフェニルアラニンエステルより選択され、そして前記インシュリンは、ヒトインシュリン又は同等のものである。本発明はまた、特に注射液の形態にある、少なくとも１種の本発明に従う複合体を含有する医薬組成物にも関する。
【解決手段】本発明は、インシュリンと、カルボキシル官能基を有する多糖類との複合体であって、前記多糖類は、少なくとも１つのフェニルアラニン誘導体（Ｐｈｅと記す）により官能化された多糖類より選択され、とりわけ前記フェニルアラニン誘導体は、フェニルアラニン及びそのアルカリカチオン塩、フェニルアラニノール、フェニルアラニンアミド、エチルベンジルアミンから成る群より選択されるか、又はフェニルアラニンエステルより選択され、そして前記インシュリンは、ヒトインシュリン又は同等のものである。本発明はまた、特に注射液の形態にある、少なくとも１種の本発明に従う複合体を含有する医薬組成物にも関する。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、即効性のヒト組換え体インシュリン製剤に関する。
【背景技術】
【０００２】
１９８０年代初頭の遺伝子工学によるインシュリンの製造以来、糖尿病患者は、治療のためヒトインシュリンから恩恵を受けてきた。この製造物は、非ヒトインシュリン、特にブタインシュリンの使用に関連した免疫学的危険性が解消されるため、その治療を大きく改善してきた。
【０００３】
糖尿病患者の健康を改善するために解決されるべき問題の１つが、彼らに食事の開始時間を予測させることなく、食事開始時にインシュリン注射を行うために、食事開始により生ずる生理学的反応と動態的に類似する低血糖反応を与えるインシュリン製剤を彼らに与えることである。
【０００４】
今や、そのような製剤の提供は、かような疾病の最も可能性の高い管理に不可欠であると受け入れられている。
【０００５】
遺伝子工学は、即効性インシュリン類似体の開発に伴う反応を提供してきた。これらインシュリンは、皮下注射後の血液中に、より急速に分布されるように、１種又は２種のアミノ酸で変性されている。これらのインシュリンリスプロ（Ｌｉｓｐｒｏ）（リリー（Ｌｉｌｌｙ））、ノボログ（Ｎｏｖｏｌｏｇ）（ノボ（Ｎｏｖｏ））及びアピドラ（Ａｐｉｄｒａ）（アベンチス（Ａｖｅｎｔｉｓ））は、食事開始により生ずる生理学的反応と動態的に類似する低血糖反応を有する安定なインシュリン溶液である。結果として、これら即効性インシュリン類似体を用いて治療された患者は、彼らの食事時間を予測する必要がなく、食事開始時にインシュリン注射を行うことができるようになった。
【０００６】
即効性インシュリン類似体の原理は、１００ＩＵ／ｍＬの濃度にてヘキサマーを形成して、市販品中のインシュリンの安定性を確実にする一方で、同時に、即効性を得るために、注射後にこれらヘキサマーのモノマーへの非常に急速な解離を促進することである。
【０００７】
市販形態に配合されたヒトインシュリンは、使用濃度（１００ＩＵ／ｍＬ）にて、亜鉛及びフェノール又はクレゾールのような他の賦形剤の存在中においては、モノマー及びダイマー形態において活性であるが、ヘキサマーの形態においては凝集してしまうため、食事開始により生ずる生理学的反応と動態的に近似する低血糖反応が得られなかった。ヒトインシュリンは、モノマー形態においては、凝集し、そしてその後に繊維状化する非常に高い傾向にあり、それによってその活性を失うため、４℃にて２年間まで安定であるヘキサマー形態に製造される。さらには、この凝集形態においては、ヒトインシュリンは、患者に対して免疫学的危険性を与えてしまう。
【０００８】
ダイマーへのヘキサマーの解離及びモノマーへのダイマーの解離は、即効性インシュリン類似体と比較した場合、ほぼ２０分も作用が遅い（非特許文献１）。
【０００９】
即効性インシュリン類似体の欠点は、ヒトインシュリンの主要構造の変性である。身体内におけるインシュリンの役割が、その低血糖活性に限定されないことが既知であるため、この変性は、非常に多数の細胞株上に存在するインシュリン受容体との種々の相互作用をもたらしてしまう。この分野において多くの研究が行われてきたが、これらインシュリン類似体がヒトインシュリンの生理学的特性を全て有しているかどうかは、現在のところ決定されていない。
【００１０】
さらには、血液中へインシュリン類似体の通過の動態、及び血糖低下のその動態は最適ではなく、且つ健康患者の動態に取り組むためにより短い作用時間を有する製剤が実際に必要である。
【００１１】
バイオデル社（Ｂｉｏｄｅｌ）は、特許文献１に記載されるとおり、ＥＤＴＡ及びクエン酸を含有するヒトインシュリン製剤によって、かかる問題に対する解決法を提案した。亜鉛原子と錯体形成する能力によるＥＤＴＡ、及びカチオン部分との相互作用によるクエン酸は、インシュリンのヘキサマー形態を不安定化し、このことが作用時間を短くするものと記載されている。
【先行技術文献】
【特許文献】
【００１２】
【特許文献１】米国特許出願第２００８／３９３６５
【非特許文献】
【００１３】
【非特許文献１】Ｂｒａｎｇｅ Ｊ．他，Ａｄｖａｎｃｅｄ Ｄｒｕｇ Ｄｅｌｉｖｅｒｙ Ｒｅｖｉｅｗ，３５，１９９９，３０７−３３５
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【００１４】
しかしながら、そのような製剤は幾つかの欠点を有している。
【００１５】
第一に、クエン酸を含有する溶液の注射は、注射部位に痛みを引き起こし、このことはバイオデル，ビジネスワイヤー（Ｂｉｏｄｅｌ，Ｂｕｓｉｎｅｓｓ Ｗｉｒｅ）により行われた種々の臨床実験中に実際に報告されている（２００８年９月８日）。
【００１６】
さらには、亜鉛原子に特異的ではないＥＤＴＡのようなキレート剤の使用は、副作用を引き起こしてしまう。
【００１７】
即効性インシュリンの使用は、Ｉ型及びＩＩ型の糖尿病患者について、１日に３回行われるため、生成物投与に関わる痛みが患者には受け入れられず、且つ賦形剤による副作用の危険性を何としても回避しなければならない。
【００１８】
これは現実であり、ヒトインシュリン又は類似体であるかにかかわらず、注射されたインシュリンの作用発現を有意に短縮させ得る製剤として不満足である。
【課題を解決するための手段】
【００１９】
本発明は、１００ＩＵ／ｍＬの溶液として６．０ないし７．８の、好ましくは６．５ないし７．５のｐＨのヒトインシュリン製剤であって、前記製剤は、投与後に、市販のヒトインシュリン製品と比較して、血液中へのインシュリンの通過及び／又は血糖値の低下を促進し得る製剤をとりわけ製造し得るため、上記概説した種々の問題を解決し得る。
【００２０】
本発明はまた、即効性インシュリン類似体製剤の作用発現を有意に短縮させ得る。
【００２１】
本発明は、部分的に置換されたカルボキシル官能基を有する多糖類とのインシュリンの複合体を形成することから成る。
【００２２】
かかる複合体の形成はさらに、インシュリン水溶液と多糖類水溶液とを単に混合することによって行われ得る。
【００２３】
本発明はまた、インシュリンと、部分的に置換されたカルボキシル官能基を有する多糖類との複合体にも関する。
【００２４】
一の態様において、インシュリンは、ヒトインシュリンである。
【００２５】
用語「ヒトインシュリン」とは、ペプチド配列が、対立遺伝子変異及びホモログを包含する、ヒトインシュリンの配列である、合成又は組換え体により得られたインシュリンを意味する。
【００２６】
一の態様において、本発明は、ヒトインシュリンと、部分的に置換されたカルボキシル官能基を有する多糖類との複合体に関する。
【００２７】
本発明はまた、投与後に、市販のヒトインシュリン製品と比較して、血液中へのインシュリンの通過及び／又は血糖値の低下を促進し得るヒトインシュリン製剤を製造するための、かかる複合体の使用にも関する。
【００２８】
６００μＭ（１００ＩＵ／ｍＬ）の濃度の市販の「通常の」ヒトインシュリン製剤は、３０ないし６０分の作用発現及び２ないし４時間の最低血糖値到達時間（ｇｌｙｃｅｍｉｃ ｎａｄｉｒ）を有している。
【００２９】
６００μＭ（１００ＩＵ／ｍＬ）の濃度の市販の即効性インシュリン類似体製剤は、１０ないし１５分の作用発現、及び６０ないし９０分の最低血糖値到達時間を有している。
【００３０】
本発明はさらに特に、「即効性」ヒトインシュリン製剤の製造のための、本発明に従う複合体の使用にも関する。
【００３１】
本発明は、作用発現が３０分未満、好ましくは２０分未満、及びより好ましくは１５分未満である、およそ６００μＭ（１００ＩＵ／ｍＬ）の濃度のヒトインシュリン製剤を製造するための、本発明に従う複合体の使用に関する。
【００３２】
本発明は、最低血糖値到達時間が１２０分未満、好ましくは１０５分未満、及びより好ましくは９０分未満である、およそ６００μＭ（１００ＩＵ／ｍＬ）の濃度のヒトインシュリン製剤を製造するための、本発明に従う複合体の使用に関する。
【００３３】
一の態様において、インシュリンは、インシュリン類似体である。用語「インシュリン類似体（ｉｎｓｕｌｉｎ ａｎａｌｏｇ）」とは、ヒトインシュリンの一次配列と比較して、一次配列が少なくとも１つの変性を含む組換え体インシュリンを意味する。
【００３４】
一の態様において、インシュリン類似体は、インシュリン リスプロ（ｉｎｓｕｌｉｎ Ｌｉｓｐｒｏ）（ヒューマログ（Ｈｕｍａｌｏｇ：登録商標））、インシュリン アスパルト（ｉｎｓｕｌｉｎ Ａｓｐａｒｔ）（ノボログ（Ｎｏｖｏｌｏｇ：登録商標）、ノボラピッド（Ｎｏｖｏｒａｐｉｄ：登録商標））及びインシュリン グルリジン（ｉｎｓｕｌｉｎ ｇｌｕｌｉｓｉｎｅ）（アピドラ（Ａｐｉｄｒａ：登録商標））から成る群より選択される。
【００３５】
一の態様において、本発明は、インシュリン類似体と、カルボキシル官能基を有する多糖類との複合体に関する。
【００３６】
一の態様において、本発明は、インシュリン リスプロ（ヒューマログ：登録商標））、インシュリン アスパルト（ノボログ：登録商標、ノボラピッド：登録商標）及びインシュリン グルリジン（アピドラ：登録商標）から成る群より選択されるインシュリン類似体と、カルボキシル官能基を有する多糖類との複合体に関する。
【００３７】
本発明はまた、投与後に、インシュリン類似体製剤よりもずっと迅速にインシュリンの血漿濃度及び／又はブドウ糖の低下を行い得る、インシュリン類似体製剤を製造するための、かかる複合体の使用にも関する。
【００３８】
６００μＭ（１００ＩＵ／ｍＬ）の濃度の市販の即効性インシュリン類似体製剤は、１０ないし１５分の作用発現及び６０ないし９０分の最低血糖値到達時間を有する。
【００３９】
本発明はさらに特に、即効性インシュリン類似体製剤の製造のための、本発明に従う複合体の使用に関する。
【００４０】
本発明は、作用発現が１５分未満、及び好ましくは１０分未満である、およそ６００μＭ（１００ＩＵ／ｍＬ）の濃度のインシュリン類似体製剤を製造するための、本発明に従う複合体の使用に関する。
【００４１】
本発明は、最低血糖値到達時間が９０分未満、好ましくは８０分未満である、およそ６００μＭ（１００ＩＵ／ｍＬ）の濃度のインシュリン類似体製剤を製造するための、本発明に従う複合体の使用に関する。
【００４２】
一の態様において、カルボキシル官能基を有する多糖類は、大部分が（１，６）型のグリコシド結合から成る官能化された多糖類より選択され、一の態様においては、大部分が（１，６）型のグリコシド結合から成る多糖類は、カルボキシル官能基を有する官能化されたデキストランである。
【００４３】
前記多糖類は、少なくとも１種のフェニルアラニン誘導体（Ｐｈｅと記す）によって官能化された多糖類より選択され、
前記フェニルアラニン誘導体は、酸官能基とのカップリングにより前記多糖類にグラフトしているか又は結合しており、前記酸官能基は、官能基Ｆを介して前記多糖類に結合したリンカーアームＲにより生じた酸官能基であり、前記官能基Ｆは、リンカーアームＲと、前記多糖類の−ＯＨ官能基との間のカップリング由来のものであり、
Ｆは、エステル、チオエステル、カーボネート、カルバメート又はエーテル官能基であり、
Ｒは、枝分れ状及び／又は不飽和であっても、Ｏ、Ｎ及び／又はＳのような１つ以上のヘテロ原子を有していてもよく、少なくとも１つのカルボキシル官能基を有する１ないし１８個の炭素原子を有する鎖であり、
Ｐｈｅは、フェニルアラニンアミンと、基Ｒにより生じた少なくとも１つの酸及び／又はカルボキシル官能基を有する前記多糖類により生じた酸との間のカップリングから生じた、Ｌ体又はＤ体のフェニルアラニン誘導体の残基である。
【００４４】
本発明に従うと、官能化された多糖類は、下記一般式Ｉ：
【化１】
（式中、
多糖類は、デキストランであり、
Ｆは、リンカーアームＲと、前記多糖類の−ＯＨ官能基との間のカップリング由来のものであって、エステル、チオエステル、カーボネート、カルバメート又はエーテル官能基であり、
Ｒは、枝分れ状及び／又は不飽和であっても、Ｏ、Ｎ及び／又はＳのような１つ以上のヘテロ原子を有していてもよく、少なくとも１つのカルボキシル官能基を有する１ないし１８個の炭素原子を有する鎖であり、
Ｐｈｅは、フェニルアラニン誘導体のアミンと、基Ｒにより生じた少なくとも１つの酸及び／又はカルボキシル官能基を有する前記多糖類により生じた酸との間のカップリングから生じた、Ｌ体又はＤ体のフェニルアラニン誘導体の残基であり、
ｎは、Ｐｈｅにより置換されたＲのモル分率を表すものであって、０．３ないし０．９であり、好ましくは０．４ないし０．８であり、そしてより好ましくは０．４ないし０．６であり、
ｉは、糖単位当りに生じた基Ｆ−Ｒ−［Ｐｈｅ］ｎの平均モル分率を表すものであって、０．５ないし２．５であり、好ましくは０．８ないし１．６であり、好ましくは１．０ないし１．４であり、そして好ましくは１．０ないし１．２であり、
ＲがＰｈｅにより置換されていない場合、基Ｒの酸（群）は、カチオン、好ましくは、Ｎａ＋又はＫ＋のようなアルカリ金属カチオンのカルボン酸塩である）
に対応し得る。
【００４５】
一の態様において、Ｐｈｅにより置換されたＲのモル分率を表すｎは、０．３ないし０．９であり、好ましくは０．４ないし０．８であり、そしてより好ましくは０．４ないし０．６である。
【００４６】
多糖類は、１００糖単位当り、少なくとも平均６０個の置換されたか又は未置換のカルボキシレート単位を有する。
【００４７】
一の態様において、Ｆは、エステル、カーボネート、カルバメート又はエーテルである。
【００４８】
一の態様において、本発明に従う多糖類は、基Ｒが下記基：
【化２】
及びそのアルカリ金属カチオン塩
より選択される。
【００４９】
一の態様において、本発明に従う多糖類は、フェニルアラニン誘導体が、フェニルアラニン及びそのアルカリ金属カチオン塩、フェニルアラニノール、フェニルアラニンアミド及びエチルベンジルアミンから成る群より選択される、
【００５０】
一の態様において、本発明に従う多糖類は、フェニルアラニン誘導体が、式ＩＩ：
【化３】
（式中、Ｅは、直鎖状又は枝分れ状の炭素原子数１ないし６のアルキル基を表す）
で表されるフェニルアラニンエステルより選択される。
【００５１】
多糖類は、１０ないし３０００の重合度を有し得る。
【００５２】
一の態様において、多糖類は、１０ないし４００の重合度を有する。
【００５３】
別の態様において、多糖類は、１０ないし２００の重合度を有する。
【００５４】
別の態様において、多糖類は、３０ないし５０の重合度を有する。
【００５５】
一の態様において、多糖類は、９ないし５０ｋＤ、及び好ましくは１０ないし４０ｋＤの分子量を有する。
【００５６】
一の態様において、インシュリンは、欧州薬局方（Ｅｕｒｏｐｅａｎ Ｐｈａｒｍａｃｏｐｅａ）に記載されるヒト組換え体インシュリンである。
【００５７】
一の態様において、インシュリンは、インシュリン リスプロ（ヒューマログ：登録商標））、インシュリン アスパルト（ノボログ：登録商標、ノボラピッド：登録商標）及びインシュリン グルリジン（アピドラ：登録商標）から成る群より選択されるインシュリン類似体である。
【００５８】
一の態様において、ポリマー／インシュリンモル比は０．２ないし５である。
【００５９】
一の態様において、前記モル比は、０．２ないし３である。
【００６０】
一の態様において、前記モル比は、０．６ないし２．５である。
【００６１】
一の態様において、前記モル比は、０．８ないし２である。
【００６２】
一の態様において、前記モル比は、０．８ないし１．４である。
【００６３】
一の態様において、前記モル比は、１である。
【００６４】
一の態様において、前記モル比は、２である。
【００６５】
一の態様において、ポリマー／インシュリン質量比は、０．４ないし１０である。
【００６６】
一の態様において、前記質量比は、０．４ないし６である。
【００６７】
一の態様において、前記質量比は、１．２ないし５である。
【００６８】
一の態様において、前記質量比は、１．６ないし４である。
【００６９】
一の態様において、前記質量比は、１．６ないし２．８である。
【００７０】
好ましくは、本組成物は、注射液の形態にある。
【００７１】
一の態様において、溶液のインシュリン濃度は、６００μＭ、即ち１００ＩＵ／ｍＬである。
【００７２】
一の態様において、６００μＭのインシュリン濃度は、特に小児用途のために、簡単な希釈によって低下され得る。
【００７３】
本発明はまた、乾燥及び／又は凍結乾燥により得られることを特徴とする、本発明に従う医薬組成物にも関する。
【００７４】
局所的及び全身的な放出の場合には、考えられる投与様式は、静脈内、皮下、皮内又は筋肉内である。
【００７５】
経皮、経口、経鼻、膣内、眼、口腔及び肺投与がまた考えられる。
【００７６】
本発明はまた、注入又は可搬型のインシュリンポンプ用の１００ＩＵ／ｍＬの濃度を有するヒトインシュリンの溶液の製剤のための、本発明に従う複合体の使用にも関する。
【図面の簡単な説明】
【００７７】
【図１】本発明に従うポリマー１とヒトインシュリンとの複合体製剤（実施例５に対応する矩形でプロットされた曲線）及び市販のヒトインシュリン製剤（実施例２に対応する三角形でプロットされた曲線）の作用発現を示すグラフである。
【図２】本発明に従うポリマー２とヒトインシュリンとの複合体製剤（実施例６に対応する矩形でプロットされた曲線）及び市販のヒトインシュリン製剤（実施例２に対応する三角形でプロットされた曲線）の作用発現を示すグラフである。
【図３】本発明に従うポリマー３とヒトインシュリンとの複合体（実施例７に対応する矩形でプロットされた曲線）及び市販のヒトインシュリン製剤（実施例２に対応する三角形でプロットされた曲線）の作用発現を示すグラフである。
【図４】本発明に従うポリマー３とインシュリン類似体との複合体製剤（実施例８に対応する矩形でプロットされた曲線）及び市販のインシュリン類似体製剤（実施例１に対応する三角形でプロットされた曲線）の作用発現を示すグラフである。
【図５】本発明に従うポリマー１とヒトインシュリンとの複合体製剤（実施例９に対応する矩形でプロットされた曲線）及び市販のヒトインシュリン製剤（実施例２に対応する三角形でプロットされた曲線）の作用発現を示すグラフである。
【発明を実施するための形態】
【００７８】
実施例１：１００ＩＵ／ｍＬの即効性インシュリン類似体溶液
かかる溶液は、米国においてノボログ（登録商標）の名称の下で、及び欧州においてノボラピッド（登録商標）の名称の下で、ノボ（Ｎｏｖｏ）社より販売されているアスパルトインシュリンの市販溶液である。かかる製品は、即効性インシュリン類似体である。
【００７９】
実施例２：１００ＩＵ／ｍＬのヒトインシュリン溶液
かかる溶液は、アクトラピッド（Ａｃｔｒａｐｉｄ）の名称の下で販売されているノボ社からの市販溶液である。かかる製品はヒトインシュリンである。
【００８０】
実施例３：２００ＩＵ／ｍＬのヒトインシュリン溶液の製造
水６０．４ｇを、ヘキサマー当り２つのＺｎ２＋を有するヒトインシュリンの８８４．７ｍｇに添加し、そしてその後、０．１ＮのＨＣｌの８ｍＬを添加することによって、ｐＨを５．７ないし３に調節した。０．１ＮのＮａＯＨの１０ｍＬを添加することによって、溶液をｐＨ７に中和した。その後、水４３．０８ｍＬを用いて２００ＩＵ／ｍＬに濃度を調節した。かかる溶液の最終的なｐＨは７．０２であった。該溶液を、最後に０．２２μｍメンブランで濾過した。
【００８１】
実施例４：賦形剤の製造
２００ｍＭ ｐＨ７のホスフェート緩衝液の製造
目盛り付きフラスコ内で、ＮａＨ２ＰＯ４の１．２ｇ（１０ｍｍｏｌ）を水５０ｍＬに溶解することによって、リン酸ナトリウム溶液Ａを製造した。
【００８２】
目盛り付きフラスコ内で、Ｎａ２ＨＰＯ４の１．４２ｇ（１０ｍｍｏｌ）を水５０ｍＬに溶解することによって、リン酸二ナトリウム溶液Ｂを製造した。
【００８３】
溶液Ａの３ｍＬを溶液Ｂの７ｍＬと混合することによって、２００ｍＭ ｐＨ７のホスフェート緩衝液を得た。
【００８４】
１３０ｍＭ ｍ−クレゾール溶液の製造
目盛り付きフランスコ内で、ｍ−クレゾールの０．２８１ｇ（２．６ｍｍｏｌ）を水２０ｍＬに溶解することによって、ｍ−クレゾール溶液を得た。
【００８５】
０．８ｍＭ Ｔｗｅｅｎ２０溶液の製造
目盛り付きフラスコ内で、Ｔｗｅｅｎ２０の９８ｍｇ（８０μｍｏｌ）を水１００ｍＬに溶解することによって、Ｔｗｅｅｎ２０溶液を得た。
【００８６】
１．５Ｍ グリセロール溶液の製造
目盛り付きフラスコ内で、グリセロールの１３．８２ｇ（１５０ｍｍｏｌ）を水１００ｍＬに溶解することによって、グリセロール溶液を得た。
【００８７】
多糖類溶液の製造
本発明に従う２種の多糖類を用いた。
ポリマー１は、特許出願仏国第０７／０２３１６号に記載される方法に従い、１０ｋｇ／ｍｏｌの質量平均分子量、即ち３９の重合度を有するデキストラン（ファルマコスモス（Ｐｈａｒｍａｃｏｓｍｏｓ））から得られた、Ｌ−フェニルアラニンのナトリウム塩で変性されたナトリウムデキストランメチルカルボキシレートである。フェニルアラニンで変性されていてもよいナトリウムメチルカルボキシレートの平均モル分率、即ち式Ｉ中のｉは、１．０６であった。フェニルアラニンで変性されたナトリウムメチルカルボキシレートの平均モル分率、即ち式Ｉ中のｎは０．４３であった。
【００８８】
５０ｍＬ試験管内で、ポリマー１（水分含量１０％）の２．７９ｇを水２５．３ｍＬに溶解させることによって、ポリマー１の溶液を得た（ポリマー１の濃度は９９．２ｍｇ／ｍＬ）。
【００８９】
ポリマー２は、Ｌ−フェニルアラニンエチルエステルヒドロクロリドを用いて、特許出願仏国第０７／０２３１６号中のポリマー１について記載されるのと同様の方法に従い、４０ｋｇ／ｍｏｌの質量平均分子量、即ち１５４の重合度を有するデキストラン（ファルマコスモス）から得られたＬ−フェニルアラニンのエチルエステルにより変性された、ナトリウムデキストランメチルカルボキシレートである。フェニルアラニンで変性されていてもよいナトリウムメチルカルボキシレートの平均モル分率、即ち、式Ｉ中のｉは、１．００であった。Ｌ−フェニルアラニンエチルエステルで変性されたナトリウムメチルカルボキシレートの平均モル分率、即ち式Ｉ中のｎは、０．３６であった。
【００９０】
５０ｍＬ試験管内で、ポリマー２（水分含量＝１０％）を水１６．８３ｍＬに溶解させることによって、ポリマー２の溶液を得た（ポリマー２の濃度は７１．０ｍｇ／ｍＬ）。
【００９１】
ポリマー３は、特許出願仏国第０７／０２３１６号に記載される方法に従い、１０ｋｇ／ｍｏｌの質量平均分子量、即ち３９の重合度を有するデキストラン（ファルマコスモス）から得られたＬ−フェニルアラニンのナトリウム塩により変性された、ナトリウムデキストランメチルカルボキシレートである。フェニルアラニンで変性されていてもよいナトリウムメチルカルボキシレートの平均モル分率、即ち、式Ｉ中のｉは１．０６であった。ヘフェニルアラニンで変性されたナトリウムメチルカルボキシレートの平均モル分率、即ち、式Ｉ中のｎは０．５４であった。
【００９２】
５０ｍＬ試験管内で、ポリマー３（水分含量＝１０％）の１．５ｇを水４２．７ｍＬに溶解させることによって、ポリマー３の溶液を得た（ポリマー３の濃度は３１．６ｍｇ／ｍＬ）。
【００９３】
ポリマー４は、特許出願仏国第０７／０２３１６号に記載される方法に従い、１０ｋｇ／ｍｏｌの質量平均分子量、即ち３９の重合度を有するデキストラン（ファルマコスモス）から得られたＬ−フェニルアラニンのナトリウム塩により変性された、ナトリウムデキストランメチルカルボキシレートである。フェニルアラニンで変性されていてもよいナトリウムメチルカルボキシレートの平均モル分率、即ち、式Ｉ中のｉは１．６９であった。フェニルアラニンで変性されていてもよいナトリウムメチルカルボキシレートの平均モル分率、即ち、式Ｉ中のｎは０．６４であった。
【００９４】
５０ｍＬ試験管内で、ポリマー４（水分含量＝１０％）の２．０ｇを水５６．９ｍＬに溶解することによって、ポリマー４の溶液を得た（ポリマー３の濃度は３１．６ｍｇ／ｍＬ）。
【００９５】
実施例５：ポリマー１の存在中での１００ＩＵ／ｍＬのヒトインシュリン溶液の製造
１．０の［ポリマー１］／［インシュリン］モル比を有する、最終容量５０ｍＬの製剤について、下記表で特定される量で、及び次の順序で、種々の試薬を一緒に混合した。
２００ＩＵ／ｍＬヒトインシュリン ２５ｍＬ
９９．２ｍｇ／ｍＬポリマー１ ３．６１ｍＬ
１Ｍホスフェート緩衝液ｐＨ７ ５００μＬ
０．７８ｍＭ Ｔｗｅｅｎ２０ ５１６μＬ
１．５Ｍグリセロール ６２１μＬ
１３０ｍＭ ｍ−クレゾール １１．１５ｍＬ
水（希釈容量−水酸化ナトリウム容量） ８．５５ｍＬ
【００９６】
最終ｐＨは７±０．３であった。
かかる清澄な溶液を０．２２μｍメンブランに通して濾過し、その後、＋４℃に置いた。
【００９７】
実施例６：ポリマー２の存在中での１００ＩＵ／ｍＬのヒトインシュリン溶液の製造
０．５の［ポリマー２］／［インシュリン］モル比を有する、最終容量５０ｍＬの製剤について、下記表で特定される量で、及び次の順序で、種々の試薬を一緒に混合した。
２００ＩＵ／ｍＬヒトインシュリン １０ｍＬ
７１．０ｍｇ／ｍＬポリマー２ ９．６６ｍＬ
１Ｍホスフェート緩衝液ｐＨ７ ５００μＬ
０．７８ｍＭ Ｔｗｅｅｎ２０ ４００μＬ
１．５Ｍグリセロール ５．６７μＬ
１３０ｍＭ ｍ−クレゾール １１．１６ｍＬ
水（希釈容量−水酸化ナトリウム容量） １２．６ｍＬ
【００９８】
最終ｐＨは７±０．３であった。
かかる清澄な溶液を０．２２μｍメンブランに通して濾過し、そしてその後、＋４℃に置いた。
【００９９】
実施例７：ポリマー３の存在中での１００ＩＵ／ｍＬヒトインシュリン溶液の製造
１．０の［ポリマー３］／［インシュリン］モル比を有する、５０ｍＬの最終容量の製剤について、下記表で特定される量で、及び次の順序で、種々の試薬を一緒に混合した。
５００ＩＵ／ｍＬヒトインシュリン １０ｍＬ
３１．６ｍｇ／ｍＬポリマー３ １１．９ｍＬ
１Ｍホスフェート緩衝液ｐＨ７ ５００μＬ
１．５Ｍグリセロール ５．６７ｍＬ
１３０ｍＭ ｍ−クレゾール １１．１６ｍＬ
１ｍＭ Ｔｗｅｅｎ２０ ０．４ｍＬ
水（希釈容量−水酸化ナトリウム容量） １０．４ｍＬ
【０１００】
最終ｐＨは７±０．３であった。
かかる清澄な溶液を０．２２μｍメンブランに通して濾過し、そしてその後、＋４℃に置いた。
【０１０１】
実施例８：ポリマー３の存在中での１００ＩＵ／ｍＬインシュリン類似体溶液の製造
１．０の［ポリマー３］／［インシュリン類似体］モル比を有する、最終容量１０ｍＬの製剤について、下記表で特定される量で、及び次の順序で、種々の試薬を一緒に混合した。
市販製品ノボログ溶液 １０ｍＬ
凍結乾燥されたポリマー３ ３７６ｍｇ
Ｔｗｅｅｎ２０ ９８μｇ
【０１０２】
最終ｐＨは７±０．３であった。
かかる清澄な溶液を０．２２μｍｍンブランに通して濾過し、そしてその後、＋４℃に置いた。
【０１０３】
実施例９：ポリマー１の存在中での１００ＩＵ／ｍＬヒトインシュリン溶液の製造
２．０の［ポリマー１］／［インシュリン］モル比を有する最終容量５０ｍＬの製剤について、下記表で特定される量で、及び次の順序で、種々の試薬を一緒に混合した。
２００ＩＵ／ｍＬヒトインシュリン ２５ｍＬ
９９．２ｍｇ／ｍＬポリマー１ ７．２２ｍＬ
１Ｍホスフェート緩衝液ｐＨ７ ５００μＬ
０．７８ｍＭ Ｔｗｅｅｎ２０ ５１６μＬ
１．５Ｍグリセロール ６２１μＬ
１３０ｍＭ ｍ−クレゾール １１．１５ｍＬ
水（希釈容量−水酸化ナトリウム容量） ４．９４ｍＬ
【０１０４】
最終ｐＨは７±０．３であった。
かかる清澄な溶液を０．２２μｍメンブランに通して濾過し、そしてその後、＋４℃に置いた。
【０１０５】
実施例１０：ポリマー３の存在中での１００ＩＵ／ｍＬヒトインシュリン溶液の製造
実施例７に記載のポリマー３を有するヒトインシュリン製剤の変更例をホスフェート無しに製造した。かかる溶液は、その他は同様の組成であり、そしてｐＨも７±０．３であった。
【０１０６】
実施例１１：ポリマー３の存在中での１００ＩＵ／ｍＬヒトインシュリン溶液の製造
実施例７に記載のポリマー３を有するヒトインシュリン製剤の変更例を、ホスフェート及びＴｗｅｅｎ無しに製造した。かかる溶液は、その他は同様の組成であり、そしてｐＨも７±０．３であった。
【０１０７】
実施例１２：ポリマー４の存在中での１００ＩＵ／ｍＬヒトインシュリン溶液の製造
ポリマー３溶液の代わりにポリマー４溶液を用いて、実施例７に記載のヒトインシュリン製剤の変更例を製造した。かかる溶液は、その他は同様の組成であり、そしてｐＨも７±０．３であった。
【０１０８】
実施例１３：溶液の注射可能性
全てのこれら溶液は、通常のインシュリン注射系を用いて注射可能であった。実施例１、２、５及び６に記載の溶液は、３１ゲージ（ｇａｕｇｅ）の測定針付きの、ノボペン（Ｎｏｖｏｐｅｎ）という名称の下で販売されているノボインシュリンペンを用いたように、３１ゲージの測定針を有するインシュリンシリンジを用いて全く容易に注射された。
【０１０９】
実施例１４：インシュリン溶液の薬物力学を測定するためのプロトコル
予め頸静脈にカテーテル挿入した、体重およそ５０ｋｇの６頭の国産ブタを、実験開始前の２、３時間、絶食させた。基礎グルコース濃度を決定するために、インシュリンの注射を行うに先立つ時間で、３種の血液試料を採取した。
【０１１０】
３１ゲージの測定針付きのノボペンインシュリンペンを用いて、０．１２５ＩＵ／ｋｇの投与量のインシュリン注射を、動物の耳の下、首皮下に行った。
【０１１１】
血液試料はその後、１０分間毎に３時間以上、そしてその後、３０分毎に５時間まで採取した。各々の試料を採取した後、希釈ヘパリン溶液を用いてカテーテルを洗浄した。
【０１１２】
一滴の血液を採取して、グルコメーター（ｇｌｕｃｏｍｅｔｅｒ）を用いて血糖値を決定した。
【０１１３】
グルコースの薬物力学曲線をその後プロットした。
【０１１４】
実施例１５：インシュリン溶液についての薬物力学の結果
【表１】
【０１１５】
実施例５に記載されるヒトインシュリン製剤を用いて得られた結果を、図１の曲線により表した。該曲線は、本発明に従うポリマー１とヒトインシュリンとの複合体製剤（実施例５に対応する矩形でプロットされた曲線）が、市販のヒトインシュリン製剤（実施例２に対応する三角形でプロットされた曲線）よりも、より短い作用発現を得ることを可能にしたことを示している。
【０１１６】
実施例６に記載されたヒトインシュリン製剤を用いて得られた結果を、図２の曲線により表した。該曲線は、本発明に従うポリマー２とヒトインシュリンとの複合体製剤（実施例６に対応する矩形でプロットされた曲線）が、市販のヒトインシュリン製剤（実施例２に対応する三角形でプロットされた曲線）よりも、より短い作用発現を得ることを可能にしたことを示している。
【０１１７】
実施例７に記載されたヒトインシュリン製剤を用いて得られた結果を、図３の曲線により表した。該曲線は、本発明に従うポリマー３とヒトインシュリンとの複合体（実施例７に対応する矩形でプロットされた曲線）が、市販のヒトインシュリン製剤（実施例２に対応する三角形でプロットされた曲線）よりも、より短い作用発現を得ることを可能にしたことを示している。
【０１１８】
実施例８に記載されるインシュリン類似体製剤を用いて得られた結果を、図４の曲線により表した。本発明に従うポリマー３とインシュリン類似体との複合体製剤（実施例８に対応する矩形でプロットされた曲線）が、市販のインシュリン類似体製剤（実施例１に対応する三角形でプロットされた曲線）よりも、より短い作用発現を得ることを可能にしたことを示している。
【０１１９】
実施例９に記載されるヒトインシュリン製剤を用いて得られた結果を、図５の曲線により表した。本発明に従うポリマー１とヒトインシュリンとの複合体製剤（実施例９に対応する矩形でプロットされた曲線）が、市販のヒトインシュリン製剤（実施例２に対応する三角形でプロットされた曲線）よりも、より短い作用発現を得ることを可能にしたことを示している。
【技術分野】
【０００１】
本発明は、即効性のヒト組換え体インシュリン製剤に関する。
【背景技術】
【０００２】
１９８０年代初頭の遺伝子工学によるインシュリンの製造以来、糖尿病患者は、治療のためヒトインシュリンから恩恵を受けてきた。この製造物は、非ヒトインシュリン、特にブタインシュリンの使用に関連した免疫学的危険性が解消されるため、その治療を大きく改善してきた。
【０００３】
糖尿病患者の健康を改善するために解決されるべき問題の１つが、彼らに食事の開始時間を予測させることなく、食事開始時にインシュリン注射を行うために、食事開始により生ずる生理学的反応と動態的に類似する低血糖反応を与えるインシュリン製剤を彼らに与えることである。
【０００４】
今や、そのような製剤の提供は、かような疾病の最も可能性の高い管理に不可欠であると受け入れられている。
【０００５】
遺伝子工学は、即効性インシュリン類似体の開発に伴う反応を提供してきた。これらインシュリンは、皮下注射後の血液中に、より急速に分布されるように、１種又は２種のアミノ酸で変性されている。これらのインシュリンリスプロ（Ｌｉｓｐｒｏ）（リリー（Ｌｉｌｌｙ））、ノボログ（Ｎｏｖｏｌｏｇ）（ノボ（Ｎｏｖｏ））及びアピドラ（Ａｐｉｄｒａ）（アベンチス（Ａｖｅｎｔｉｓ））は、食事開始により生ずる生理学的反応と動態的に類似する低血糖反応を有する安定なインシュリン溶液である。結果として、これら即効性インシュリン類似体を用いて治療された患者は、彼らの食事時間を予測する必要がなく、食事開始時にインシュリン注射を行うことができるようになった。
【０００６】
即効性インシュリン類似体の原理は、１００ＩＵ／ｍＬの濃度にてヘキサマーを形成して、市販品中のインシュリンの安定性を確実にする一方で、同時に、即効性を得るために、注射後にこれらヘキサマーのモノマーへの非常に急速な解離を促進することである。
【０００７】
市販形態に配合されたヒトインシュリンは、使用濃度（１００ＩＵ／ｍＬ）にて、亜鉛及びフェノール又はクレゾールのような他の賦形剤の存在中においては、モノマー及びダイマー形態において活性であるが、ヘキサマーの形態においては凝集してしまうため、食事開始により生ずる生理学的反応と動態的に近似する低血糖反応が得られなかった。ヒトインシュリンは、モノマー形態においては、凝集し、そしてその後に繊維状化する非常に高い傾向にあり、それによってその活性を失うため、４℃にて２年間まで安定であるヘキサマー形態に製造される。さらには、この凝集形態においては、ヒトインシュリンは、患者に対して免疫学的危険性を与えてしまう。
【０００８】
ダイマーへのヘキサマーの解離及びモノマーへのダイマーの解離は、即効性インシュリン類似体と比較した場合、ほぼ２０分も作用が遅い（非特許文献１）。
【０００９】
即効性インシュリン類似体の欠点は、ヒトインシュリンの主要構造の変性である。身体内におけるインシュリンの役割が、その低血糖活性に限定されないことが既知であるため、この変性は、非常に多数の細胞株上に存在するインシュリン受容体との種々の相互作用をもたらしてしまう。この分野において多くの研究が行われてきたが、これらインシュリン類似体がヒトインシュリンの生理学的特性を全て有しているかどうかは、現在のところ決定されていない。
【００１０】
さらには、血液中へインシュリン類似体の通過の動態、及び血糖低下のその動態は最適ではなく、且つ健康患者の動態に取り組むためにより短い作用時間を有する製剤が実際に必要である。
【００１１】
バイオデル社（Ｂｉｏｄｅｌ）は、特許文献１に記載されるとおり、ＥＤＴＡ及びクエン酸を含有するヒトインシュリン製剤によって、かかる問題に対する解決法を提案した。亜鉛原子と錯体形成する能力によるＥＤＴＡ、及びカチオン部分との相互作用によるクエン酸は、インシュリンのヘキサマー形態を不安定化し、このことが作用時間を短くするものと記載されている。
【先行技術文献】
【特許文献】
【００１２】
【特許文献１】米国特許出願第２００８／３９３６５
【非特許文献】
【００１３】
【非特許文献１】Ｂｒａｎｇｅ Ｊ．他，Ａｄｖａｎｃｅｄ Ｄｒｕｇ Ｄｅｌｉｖｅｒｙ Ｒｅｖｉｅｗ，３５，１９９９，３０７−３３５
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【００１４】
しかしながら、そのような製剤は幾つかの欠点を有している。
【００１５】
第一に、クエン酸を含有する溶液の注射は、注射部位に痛みを引き起こし、このことはバイオデル，ビジネスワイヤー（Ｂｉｏｄｅｌ，Ｂｕｓｉｎｅｓｓ Ｗｉｒｅ）により行われた種々の臨床実験中に実際に報告されている（２００８年９月８日）。
【００１６】
さらには、亜鉛原子に特異的ではないＥＤＴＡのようなキレート剤の使用は、副作用を引き起こしてしまう。
【００１７】
即効性インシュリンの使用は、Ｉ型及びＩＩ型の糖尿病患者について、１日に３回行われるため、生成物投与に関わる痛みが患者には受け入れられず、且つ賦形剤による副作用の危険性を何としても回避しなければならない。
【００１８】
これは現実であり、ヒトインシュリン又は類似体であるかにかかわらず、注射されたインシュリンの作用発現を有意に短縮させ得る製剤として不満足である。
【課題を解決するための手段】
【００１９】
本発明は、１００ＩＵ／ｍＬの溶液として６．０ないし７．８の、好ましくは６．５ないし７．５のｐＨのヒトインシュリン製剤であって、前記製剤は、投与後に、市販のヒトインシュリン製品と比較して、血液中へのインシュリンの通過及び／又は血糖値の低下を促進し得る製剤をとりわけ製造し得るため、上記概説した種々の問題を解決し得る。
【００２０】
本発明はまた、即効性インシュリン類似体製剤の作用発現を有意に短縮させ得る。
【００２１】
本発明は、部分的に置換されたカルボキシル官能基を有する多糖類とのインシュリンの複合体を形成することから成る。
【００２２】
かかる複合体の形成はさらに、インシュリン水溶液と多糖類水溶液とを単に混合することによって行われ得る。
【００２３】
本発明はまた、インシュリンと、部分的に置換されたカルボキシル官能基を有する多糖類との複合体にも関する。
【００２４】
一の態様において、インシュリンは、ヒトインシュリンである。
【００２５】
用語「ヒトインシュリン」とは、ペプチド配列が、対立遺伝子変異及びホモログを包含する、ヒトインシュリンの配列である、合成又は組換え体により得られたインシュリンを意味する。
【００２６】
一の態様において、本発明は、ヒトインシュリンと、部分的に置換されたカルボキシル官能基を有する多糖類との複合体に関する。
【００２７】
本発明はまた、投与後に、市販のヒトインシュリン製品と比較して、血液中へのインシュリンの通過及び／又は血糖値の低下を促進し得るヒトインシュリン製剤を製造するための、かかる複合体の使用にも関する。
【００２８】
６００μＭ（１００ＩＵ／ｍＬ）の濃度の市販の「通常の」ヒトインシュリン製剤は、３０ないし６０分の作用発現及び２ないし４時間の最低血糖値到達時間（ｇｌｙｃｅｍｉｃ ｎａｄｉｒ）を有している。
【００２９】
６００μＭ（１００ＩＵ／ｍＬ）の濃度の市販の即効性インシュリン類似体製剤は、１０ないし１５分の作用発現、及び６０ないし９０分の最低血糖値到達時間を有している。
【００３０】
本発明はさらに特に、「即効性」ヒトインシュリン製剤の製造のための、本発明に従う複合体の使用にも関する。
【００３１】
本発明は、作用発現が３０分未満、好ましくは２０分未満、及びより好ましくは１５分未満である、およそ６００μＭ（１００ＩＵ／ｍＬ）の濃度のヒトインシュリン製剤を製造するための、本発明に従う複合体の使用に関する。
【００３２】
本発明は、最低血糖値到達時間が１２０分未満、好ましくは１０５分未満、及びより好ましくは９０分未満である、およそ６００μＭ（１００ＩＵ／ｍＬ）の濃度のヒトインシュリン製剤を製造するための、本発明に従う複合体の使用に関する。
【００３３】
一の態様において、インシュリンは、インシュリン類似体である。用語「インシュリン類似体（ｉｎｓｕｌｉｎ ａｎａｌｏｇ）」とは、ヒトインシュリンの一次配列と比較して、一次配列が少なくとも１つの変性を含む組換え体インシュリンを意味する。
【００３４】
一の態様において、インシュリン類似体は、インシュリン リスプロ（ｉｎｓｕｌｉｎ Ｌｉｓｐｒｏ）（ヒューマログ（Ｈｕｍａｌｏｇ：登録商標））、インシュリン アスパルト（ｉｎｓｕｌｉｎ Ａｓｐａｒｔ）（ノボログ（Ｎｏｖｏｌｏｇ：登録商標）、ノボラピッド（Ｎｏｖｏｒａｐｉｄ：登録商標））及びインシュリン グルリジン（ｉｎｓｕｌｉｎ ｇｌｕｌｉｓｉｎｅ）（アピドラ（Ａｐｉｄｒａ：登録商標））から成る群より選択される。
【００３５】
一の態様において、本発明は、インシュリン類似体と、カルボキシル官能基を有する多糖類との複合体に関する。
【００３６】
一の態様において、本発明は、インシュリン リスプロ（ヒューマログ：登録商標））、インシュリン アスパルト（ノボログ：登録商標、ノボラピッド：登録商標）及びインシュリン グルリジン（アピドラ：登録商標）から成る群より選択されるインシュリン類似体と、カルボキシル官能基を有する多糖類との複合体に関する。
【００３７】
本発明はまた、投与後に、インシュリン類似体製剤よりもずっと迅速にインシュリンの血漿濃度及び／又はブドウ糖の低下を行い得る、インシュリン類似体製剤を製造するための、かかる複合体の使用にも関する。
【００３８】
６００μＭ（１００ＩＵ／ｍＬ）の濃度の市販の即効性インシュリン類似体製剤は、１０ないし１５分の作用発現及び６０ないし９０分の最低血糖値到達時間を有する。
【００３９】
本発明はさらに特に、即効性インシュリン類似体製剤の製造のための、本発明に従う複合体の使用に関する。
【００４０】
本発明は、作用発現が１５分未満、及び好ましくは１０分未満である、およそ６００μＭ（１００ＩＵ／ｍＬ）の濃度のインシュリン類似体製剤を製造するための、本発明に従う複合体の使用に関する。
【００４１】
本発明は、最低血糖値到達時間が９０分未満、好ましくは８０分未満である、およそ６００μＭ（１００ＩＵ／ｍＬ）の濃度のインシュリン類似体製剤を製造するための、本発明に従う複合体の使用に関する。
【００４２】
一の態様において、カルボキシル官能基を有する多糖類は、大部分が（１，６）型のグリコシド結合から成る官能化された多糖類より選択され、一の態様においては、大部分が（１，６）型のグリコシド結合から成る多糖類は、カルボキシル官能基を有する官能化されたデキストランである。
【００４３】
前記多糖類は、少なくとも１種のフェニルアラニン誘導体（Ｐｈｅと記す）によって官能化された多糖類より選択され、
前記フェニルアラニン誘導体は、酸官能基とのカップリングにより前記多糖類にグラフトしているか又は結合しており、前記酸官能基は、官能基Ｆを介して前記多糖類に結合したリンカーアームＲにより生じた酸官能基であり、前記官能基Ｆは、リンカーアームＲと、前記多糖類の−ＯＨ官能基との間のカップリング由来のものであり、
Ｆは、エステル、チオエステル、カーボネート、カルバメート又はエーテル官能基であり、
Ｒは、枝分れ状及び／又は不飽和であっても、Ｏ、Ｎ及び／又はＳのような１つ以上のヘテロ原子を有していてもよく、少なくとも１つのカルボキシル官能基を有する１ないし１８個の炭素原子を有する鎖であり、
Ｐｈｅは、フェニルアラニンアミンと、基Ｒにより生じた少なくとも１つの酸及び／又はカルボキシル官能基を有する前記多糖類により生じた酸との間のカップリングから生じた、Ｌ体又はＤ体のフェニルアラニン誘導体の残基である。
【００４４】
本発明に従うと、官能化された多糖類は、下記一般式Ｉ：
【化１】
（式中、
多糖類は、デキストランであり、
Ｆは、リンカーアームＲと、前記多糖類の−ＯＨ官能基との間のカップリング由来のものであって、エステル、チオエステル、カーボネート、カルバメート又はエーテル官能基であり、
Ｒは、枝分れ状及び／又は不飽和であっても、Ｏ、Ｎ及び／又はＳのような１つ以上のヘテロ原子を有していてもよく、少なくとも１つのカルボキシル官能基を有する１ないし１８個の炭素原子を有する鎖であり、
Ｐｈｅは、フェニルアラニン誘導体のアミンと、基Ｒにより生じた少なくとも１つの酸及び／又はカルボキシル官能基を有する前記多糖類により生じた酸との間のカップリングから生じた、Ｌ体又はＤ体のフェニルアラニン誘導体の残基であり、
ｎは、Ｐｈｅにより置換されたＲのモル分率を表すものであって、０．３ないし０．９であり、好ましくは０．４ないし０．８であり、そしてより好ましくは０．４ないし０．６であり、
ｉは、糖単位当りに生じた基Ｆ−Ｒ−［Ｐｈｅ］ｎの平均モル分率を表すものであって、０．５ないし２．５であり、好ましくは０．８ないし１．６であり、好ましくは１．０ないし１．４であり、そして好ましくは１．０ないし１．２であり、
ＲがＰｈｅにより置換されていない場合、基Ｒの酸（群）は、カチオン、好ましくは、Ｎａ＋又はＫ＋のようなアルカリ金属カチオンのカルボン酸塩である）
に対応し得る。
【００４５】
一の態様において、Ｐｈｅにより置換されたＲのモル分率を表すｎは、０．３ないし０．９であり、好ましくは０．４ないし０．８であり、そしてより好ましくは０．４ないし０．６である。
【００４６】
多糖類は、１００糖単位当り、少なくとも平均６０個の置換されたか又は未置換のカルボキシレート単位を有する。
【００４７】
一の態様において、Ｆは、エステル、カーボネート、カルバメート又はエーテルである。
【００４８】
一の態様において、本発明に従う多糖類は、基Ｒが下記基：
【化２】
及びそのアルカリ金属カチオン塩
より選択される。
【００４９】
一の態様において、本発明に従う多糖類は、フェニルアラニン誘導体が、フェニルアラニン及びそのアルカリ金属カチオン塩、フェニルアラニノール、フェニルアラニンアミド及びエチルベンジルアミンから成る群より選択される、
【００５０】
一の態様において、本発明に従う多糖類は、フェニルアラニン誘導体が、式ＩＩ：
【化３】
（式中、Ｅは、直鎖状又は枝分れ状の炭素原子数１ないし６のアルキル基を表す）
で表されるフェニルアラニンエステルより選択される。
【００５１】
多糖類は、１０ないし３０００の重合度を有し得る。
【００５２】
一の態様において、多糖類は、１０ないし４００の重合度を有する。
【００５３】
別の態様において、多糖類は、１０ないし２００の重合度を有する。
【００５４】
別の態様において、多糖類は、３０ないし５０の重合度を有する。
【００５５】
一の態様において、多糖類は、９ないし５０ｋＤ、及び好ましくは１０ないし４０ｋＤの分子量を有する。
【００５６】
一の態様において、インシュリンは、欧州薬局方（Ｅｕｒｏｐｅａｎ Ｐｈａｒｍａｃｏｐｅａ）に記載されるヒト組換え体インシュリンである。
【００５７】
一の態様において、インシュリンは、インシュリン リスプロ（ヒューマログ：登録商標））、インシュリン アスパルト（ノボログ：登録商標、ノボラピッド：登録商標）及びインシュリン グルリジン（アピドラ：登録商標）から成る群より選択されるインシュリン類似体である。
【００５８】
一の態様において、ポリマー／インシュリンモル比は０．２ないし５である。
【００５９】
一の態様において、前記モル比は、０．２ないし３である。
【００６０】
一の態様において、前記モル比は、０．６ないし２．５である。
【００６１】
一の態様において、前記モル比は、０．８ないし２である。
【００６２】
一の態様において、前記モル比は、０．８ないし１．４である。
【００６３】
一の態様において、前記モル比は、１である。
【００６４】
一の態様において、前記モル比は、２である。
【００６５】
一の態様において、ポリマー／インシュリン質量比は、０．４ないし１０である。
【００６６】
一の態様において、前記質量比は、０．４ないし６である。
【００６７】
一の態様において、前記質量比は、１．２ないし５である。
【００６８】
一の態様において、前記質量比は、１．６ないし４である。
【００６９】
一の態様において、前記質量比は、１．６ないし２．８である。
【００７０】
好ましくは、本組成物は、注射液の形態にある。
【００７１】
一の態様において、溶液のインシュリン濃度は、６００μＭ、即ち１００ＩＵ／ｍＬである。
【００７２】
一の態様において、６００μＭのインシュリン濃度は、特に小児用途のために、簡単な希釈によって低下され得る。
【００７３】
本発明はまた、乾燥及び／又は凍結乾燥により得られることを特徴とする、本発明に従う医薬組成物にも関する。
【００７４】
局所的及び全身的な放出の場合には、考えられる投与様式は、静脈内、皮下、皮内又は筋肉内である。
【００７５】
経皮、経口、経鼻、膣内、眼、口腔及び肺投与がまた考えられる。
【００７６】
本発明はまた、注入又は可搬型のインシュリンポンプ用の１００ＩＵ／ｍＬの濃度を有するヒトインシュリンの溶液の製剤のための、本発明に従う複合体の使用にも関する。
【図面の簡単な説明】
【００７７】
【図１】本発明に従うポリマー１とヒトインシュリンとの複合体製剤（実施例５に対応する矩形でプロットされた曲線）及び市販のヒトインシュリン製剤（実施例２に対応する三角形でプロットされた曲線）の作用発現を示すグラフである。
【図２】本発明に従うポリマー２とヒトインシュリンとの複合体製剤（実施例６に対応する矩形でプロットされた曲線）及び市販のヒトインシュリン製剤（実施例２に対応する三角形でプロットされた曲線）の作用発現を示すグラフである。
【図３】本発明に従うポリマー３とヒトインシュリンとの複合体（実施例７に対応する矩形でプロットされた曲線）及び市販のヒトインシュリン製剤（実施例２に対応する三角形でプロットされた曲線）の作用発現を示すグラフである。
【図４】本発明に従うポリマー３とインシュリン類似体との複合体製剤（実施例８に対応する矩形でプロットされた曲線）及び市販のインシュリン類似体製剤（実施例１に対応する三角形でプロットされた曲線）の作用発現を示すグラフである。
【図５】本発明に従うポリマー１とヒトインシュリンとの複合体製剤（実施例９に対応する矩形でプロットされた曲線）及び市販のヒトインシュリン製剤（実施例２に対応する三角形でプロットされた曲線）の作用発現を示すグラフである。
【発明を実施するための形態】
【００７８】
実施例１：１００ＩＵ／ｍＬの即効性インシュリン類似体溶液
かかる溶液は、米国においてノボログ（登録商標）の名称の下で、及び欧州においてノボラピッド（登録商標）の名称の下で、ノボ（Ｎｏｖｏ）社より販売されているアスパルトインシュリンの市販溶液である。かかる製品は、即効性インシュリン類似体である。
【００７９】
実施例２：１００ＩＵ／ｍＬのヒトインシュリン溶液
かかる溶液は、アクトラピッド（Ａｃｔｒａｐｉｄ）の名称の下で販売されているノボ社からの市販溶液である。かかる製品はヒトインシュリンである。
【００８０】
実施例３：２００ＩＵ／ｍＬのヒトインシュリン溶液の製造
水６０．４ｇを、ヘキサマー当り２つのＺｎ２＋を有するヒトインシュリンの８８４．７ｍｇに添加し、そしてその後、０．１ＮのＨＣｌの８ｍＬを添加することによって、ｐＨを５．７ないし３に調節した。０．１ＮのＮａＯＨの１０ｍＬを添加することによって、溶液をｐＨ７に中和した。その後、水４３．０８ｍＬを用いて２００ＩＵ／ｍＬに濃度を調節した。かかる溶液の最終的なｐＨは７．０２であった。該溶液を、最後に０．２２μｍメンブランで濾過した。
【００８１】
実施例４：賦形剤の製造
２００ｍＭ ｐＨ７のホスフェート緩衝液の製造
目盛り付きフラスコ内で、ＮａＨ２ＰＯ４の１．２ｇ（１０ｍｍｏｌ）を水５０ｍＬに溶解することによって、リン酸ナトリウム溶液Ａを製造した。
【００８２】
目盛り付きフラスコ内で、Ｎａ２ＨＰＯ４の１．４２ｇ（１０ｍｍｏｌ）を水５０ｍＬに溶解することによって、リン酸二ナトリウム溶液Ｂを製造した。
【００８３】
溶液Ａの３ｍＬを溶液Ｂの７ｍＬと混合することによって、２００ｍＭ ｐＨ７のホスフェート緩衝液を得た。
【００８４】
１３０ｍＭ ｍ−クレゾール溶液の製造
目盛り付きフランスコ内で、ｍ−クレゾールの０．２８１ｇ（２．６ｍｍｏｌ）を水２０ｍＬに溶解することによって、ｍ−クレゾール溶液を得た。
【００８５】
０．８ｍＭ Ｔｗｅｅｎ２０溶液の製造
目盛り付きフラスコ内で、Ｔｗｅｅｎ２０の９８ｍｇ（８０μｍｏｌ）を水１００ｍＬに溶解することによって、Ｔｗｅｅｎ２０溶液を得た。
【００８６】
１．５Ｍ グリセロール溶液の製造
目盛り付きフラスコ内で、グリセロールの１３．８２ｇ（１５０ｍｍｏｌ）を水１００ｍＬに溶解することによって、グリセロール溶液を得た。
【００８７】
多糖類溶液の製造
本発明に従う２種の多糖類を用いた。
ポリマー１は、特許出願仏国第０７／０２３１６号に記載される方法に従い、１０ｋｇ／ｍｏｌの質量平均分子量、即ち３９の重合度を有するデキストラン（ファルマコスモス（Ｐｈａｒｍａｃｏｓｍｏｓ））から得られた、Ｌ−フェニルアラニンのナトリウム塩で変性されたナトリウムデキストランメチルカルボキシレートである。フェニルアラニンで変性されていてもよいナトリウムメチルカルボキシレートの平均モル分率、即ち式Ｉ中のｉは、１．０６であった。フェニルアラニンで変性されたナトリウムメチルカルボキシレートの平均モル分率、即ち式Ｉ中のｎは０．４３であった。
【００８８】
５０ｍＬ試験管内で、ポリマー１（水分含量１０％）の２．７９ｇを水２５．３ｍＬに溶解させることによって、ポリマー１の溶液を得た（ポリマー１の濃度は９９．２ｍｇ／ｍＬ）。
【００８９】
ポリマー２は、Ｌ−フェニルアラニンエチルエステルヒドロクロリドを用いて、特許出願仏国第０７／０２３１６号中のポリマー１について記載されるのと同様の方法に従い、４０ｋｇ／ｍｏｌの質量平均分子量、即ち１５４の重合度を有するデキストラン（ファルマコスモス）から得られたＬ−フェニルアラニンのエチルエステルにより変性された、ナトリウムデキストランメチルカルボキシレートである。フェニルアラニンで変性されていてもよいナトリウムメチルカルボキシレートの平均モル分率、即ち、式Ｉ中のｉは、１．００であった。Ｌ−フェニルアラニンエチルエステルで変性されたナトリウムメチルカルボキシレートの平均モル分率、即ち式Ｉ中のｎは、０．３６であった。
【００９０】
５０ｍＬ試験管内で、ポリマー２（水分含量＝１０％）を水１６．８３ｍＬに溶解させることによって、ポリマー２の溶液を得た（ポリマー２の濃度は７１．０ｍｇ／ｍＬ）。
【００９１】
ポリマー３は、特許出願仏国第０７／０２３１６号に記載される方法に従い、１０ｋｇ／ｍｏｌの質量平均分子量、即ち３９の重合度を有するデキストラン（ファルマコスモス）から得られたＬ−フェニルアラニンのナトリウム塩により変性された、ナトリウムデキストランメチルカルボキシレートである。フェニルアラニンで変性されていてもよいナトリウムメチルカルボキシレートの平均モル分率、即ち、式Ｉ中のｉは１．０６であった。ヘフェニルアラニンで変性されたナトリウムメチルカルボキシレートの平均モル分率、即ち、式Ｉ中のｎは０．５４であった。
【００９２】
５０ｍＬ試験管内で、ポリマー３（水分含量＝１０％）の１．５ｇを水４２．７ｍＬに溶解させることによって、ポリマー３の溶液を得た（ポリマー３の濃度は３１．６ｍｇ／ｍＬ）。
【００９３】
ポリマー４は、特許出願仏国第０７／０２３１６号に記載される方法に従い、１０ｋｇ／ｍｏｌの質量平均分子量、即ち３９の重合度を有するデキストラン（ファルマコスモス）から得られたＬ−フェニルアラニンのナトリウム塩により変性された、ナトリウムデキストランメチルカルボキシレートである。フェニルアラニンで変性されていてもよいナトリウムメチルカルボキシレートの平均モル分率、即ち、式Ｉ中のｉは１．６９であった。フェニルアラニンで変性されていてもよいナトリウムメチルカルボキシレートの平均モル分率、即ち、式Ｉ中のｎは０．６４であった。
【００９４】
５０ｍＬ試験管内で、ポリマー４（水分含量＝１０％）の２．０ｇを水５６．９ｍＬに溶解することによって、ポリマー４の溶液を得た（ポリマー３の濃度は３１．６ｍｇ／ｍＬ）。
【００９５】
実施例５：ポリマー１の存在中での１００ＩＵ／ｍＬのヒトインシュリン溶液の製造
１．０の［ポリマー１］／［インシュリン］モル比を有する、最終容量５０ｍＬの製剤について、下記表で特定される量で、及び次の順序で、種々の試薬を一緒に混合した。
２００ＩＵ／ｍＬヒトインシュリン ２５ｍＬ
９９．２ｍｇ／ｍＬポリマー１ ３．６１ｍＬ
１Ｍホスフェート緩衝液ｐＨ７ ５００μＬ
０．７８ｍＭ Ｔｗｅｅｎ２０ ５１６μＬ
１．５Ｍグリセロール ６２１μＬ
１３０ｍＭ ｍ−クレゾール １１．１５ｍＬ
水（希釈容量−水酸化ナトリウム容量） ８．５５ｍＬ
【００９６】
最終ｐＨは７±０．３であった。
かかる清澄な溶液を０．２２μｍメンブランに通して濾過し、その後、＋４℃に置いた。
【００９７】
実施例６：ポリマー２の存在中での１００ＩＵ／ｍＬのヒトインシュリン溶液の製造
０．５の［ポリマー２］／［インシュリン］モル比を有する、最終容量５０ｍＬの製剤について、下記表で特定される量で、及び次の順序で、種々の試薬を一緒に混合した。
２００ＩＵ／ｍＬヒトインシュリン １０ｍＬ
７１．０ｍｇ／ｍＬポリマー２ ９．６６ｍＬ
１Ｍホスフェート緩衝液ｐＨ７ ５００μＬ
０．７８ｍＭ Ｔｗｅｅｎ２０ ４００μＬ
１．５Ｍグリセロール ５．６７μＬ
１３０ｍＭ ｍ−クレゾール １１．１６ｍＬ
水（希釈容量−水酸化ナトリウム容量） １２．６ｍＬ
【００９８】
最終ｐＨは７±０．３であった。
かかる清澄な溶液を０．２２μｍメンブランに通して濾過し、そしてその後、＋４℃に置いた。
【００９９】
実施例７：ポリマー３の存在中での１００ＩＵ／ｍＬヒトインシュリン溶液の製造
１．０の［ポリマー３］／［インシュリン］モル比を有する、５０ｍＬの最終容量の製剤について、下記表で特定される量で、及び次の順序で、種々の試薬を一緒に混合した。
５００ＩＵ／ｍＬヒトインシュリン １０ｍＬ
３１．６ｍｇ／ｍＬポリマー３ １１．９ｍＬ
１Ｍホスフェート緩衝液ｐＨ７ ５００μＬ
１．５Ｍグリセロール ５．６７ｍＬ
１３０ｍＭ ｍ−クレゾール １１．１６ｍＬ
１ｍＭ Ｔｗｅｅｎ２０ ０．４ｍＬ
水（希釈容量−水酸化ナトリウム容量） １０．４ｍＬ
【０１００】
最終ｐＨは７±０．３であった。
かかる清澄な溶液を０．２２μｍメンブランに通して濾過し、そしてその後、＋４℃に置いた。
【０１０１】
実施例８：ポリマー３の存在中での１００ＩＵ／ｍＬインシュリン類似体溶液の製造
１．０の［ポリマー３］／［インシュリン類似体］モル比を有する、最終容量１０ｍＬの製剤について、下記表で特定される量で、及び次の順序で、種々の試薬を一緒に混合した。
市販製品ノボログ溶液 １０ｍＬ
凍結乾燥されたポリマー３ ３７６ｍｇ
Ｔｗｅｅｎ２０ ９８μｇ
【０１０２】
最終ｐＨは７±０．３であった。
かかる清澄な溶液を０．２２μｍｍンブランに通して濾過し、そしてその後、＋４℃に置いた。
【０１０３】
実施例９：ポリマー１の存在中での１００ＩＵ／ｍＬヒトインシュリン溶液の製造
２．０の［ポリマー１］／［インシュリン］モル比を有する最終容量５０ｍＬの製剤について、下記表で特定される量で、及び次の順序で、種々の試薬を一緒に混合した。
２００ＩＵ／ｍＬヒトインシュリン ２５ｍＬ
９９．２ｍｇ／ｍＬポリマー１ ７．２２ｍＬ
１Ｍホスフェート緩衝液ｐＨ７ ５００μＬ
０．７８ｍＭ Ｔｗｅｅｎ２０ ５１６μＬ
１．５Ｍグリセロール ６２１μＬ
１３０ｍＭ ｍ−クレゾール １１．１５ｍＬ
水（希釈容量−水酸化ナトリウム容量） ４．９４ｍＬ
【０１０４】
最終ｐＨは７±０．３であった。
かかる清澄な溶液を０．２２μｍメンブランに通して濾過し、そしてその後、＋４℃に置いた。
【０１０５】
実施例１０：ポリマー３の存在中での１００ＩＵ／ｍＬヒトインシュリン溶液の製造
実施例７に記載のポリマー３を有するヒトインシュリン製剤の変更例をホスフェート無しに製造した。かかる溶液は、その他は同様の組成であり、そしてｐＨも７±０．３であった。
【０１０６】
実施例１１：ポリマー３の存在中での１００ＩＵ／ｍＬヒトインシュリン溶液の製造
実施例７に記載のポリマー３を有するヒトインシュリン製剤の変更例を、ホスフェート及びＴｗｅｅｎ無しに製造した。かかる溶液は、その他は同様の組成であり、そしてｐＨも７±０．３であった。
【０１０７】
実施例１２：ポリマー４の存在中での１００ＩＵ／ｍＬヒトインシュリン溶液の製造
ポリマー３溶液の代わりにポリマー４溶液を用いて、実施例７に記載のヒトインシュリン製剤の変更例を製造した。かかる溶液は、その他は同様の組成であり、そしてｐＨも７±０．３であった。
【０１０８】
実施例１３：溶液の注射可能性
全てのこれら溶液は、通常のインシュリン注射系を用いて注射可能であった。実施例１、２、５及び６に記載の溶液は、３１ゲージ（ｇａｕｇｅ）の測定針付きの、ノボペン（Ｎｏｖｏｐｅｎ）という名称の下で販売されているノボインシュリンペンを用いたように、３１ゲージの測定針を有するインシュリンシリンジを用いて全く容易に注射された。
【０１０９】
実施例１４：インシュリン溶液の薬物力学を測定するためのプロトコル
予め頸静脈にカテーテル挿入した、体重およそ５０ｋｇの６頭の国産ブタを、実験開始前の２、３時間、絶食させた。基礎グルコース濃度を決定するために、インシュリンの注射を行うに先立つ時間で、３種の血液試料を採取した。
【０１１０】
３１ゲージの測定針付きのノボペンインシュリンペンを用いて、０．１２５ＩＵ／ｋｇの投与量のインシュリン注射を、動物の耳の下、首皮下に行った。
【０１１１】
血液試料はその後、１０分間毎に３時間以上、そしてその後、３０分毎に５時間まで採取した。各々の試料を採取した後、希釈ヘパリン溶液を用いてカテーテルを洗浄した。
【０１１２】
一滴の血液を採取して、グルコメーター（ｇｌｕｃｏｍｅｔｅｒ）を用いて血糖値を決定した。
【０１１３】
グルコースの薬物力学曲線をその後プロットした。
【０１１４】
実施例１５：インシュリン溶液についての薬物力学の結果
【表１】
【０１１５】
実施例５に記載されるヒトインシュリン製剤を用いて得られた結果を、図１の曲線により表した。該曲線は、本発明に従うポリマー１とヒトインシュリンとの複合体製剤（実施例５に対応する矩形でプロットされた曲線）が、市販のヒトインシュリン製剤（実施例２に対応する三角形でプロットされた曲線）よりも、より短い作用発現を得ることを可能にしたことを示している。
【０１１６】
実施例６に記載されたヒトインシュリン製剤を用いて得られた結果を、図２の曲線により表した。該曲線は、本発明に従うポリマー２とヒトインシュリンとの複合体製剤（実施例６に対応する矩形でプロットされた曲線）が、市販のヒトインシュリン製剤（実施例２に対応する三角形でプロットされた曲線）よりも、より短い作用発現を得ることを可能にしたことを示している。
【０１１７】
実施例７に記載されたヒトインシュリン製剤を用いて得られた結果を、図３の曲線により表した。該曲線は、本発明に従うポリマー３とヒトインシュリンとの複合体（実施例７に対応する矩形でプロットされた曲線）が、市販のヒトインシュリン製剤（実施例２に対応する三角形でプロットされた曲線）よりも、より短い作用発現を得ることを可能にしたことを示している。
【０１１８】
実施例８に記載されるインシュリン類似体製剤を用いて得られた結果を、図４の曲線により表した。本発明に従うポリマー３とインシュリン類似体との複合体製剤（実施例８に対応する矩形でプロットされた曲線）が、市販のインシュリン類似体製剤（実施例１に対応する三角形でプロットされた曲線）よりも、より短い作用発現を得ることを可能にしたことを示している。
【０１１９】
実施例９に記載されるヒトインシュリン製剤を用いて得られた結果を、図５の曲線により表した。本発明に従うポリマー１とヒトインシュリンとの複合体製剤（実施例９に対応する矩形でプロットされた曲線）が、市販のヒトインシュリン製剤（実施例２に対応する三角形でプロットされた曲線）よりも、より短い作用発現を得ることを可能にしたことを示している。
【特許請求の範囲】
【請求項１】
インシュリンと、カルボキシル基を有する多糖類との複合体であって、
前記多糖類は、少なくとも１種のフェニルアラニン誘導体（Ｐｈｅと記す）によって官能化された多糖類より選択され、
前記フェニルアラニン誘導体は、酸官能基とのカップリングにより前記多糖類にグラフトしているか又は結合しており、前記酸官能基は、官能基Ｆを介して前記多糖類に結合したリンカーアームＲにより生じた酸官能基であり、前記官能基Ｆは、リンカーアームＲと、前記多糖類の−ＯＨ官能基との間のカップリング由来のものであり、
Ｆは、エステル、チオエステル、カーボネート、カルバメート又はエーテル官能基であり、
Ｒは、枝分れ状及び／又は不飽和であっても、Ｏ、Ｎ及び／又はＳのような１つ以上のヘテロ原子を有していてもよく、少なくとも１つのカルボキシル官能基を有する１ないし１８個の炭素原子を有する鎖であり、
Ｐｈｅは、フェニルアラニンアミンと、基Ｒにより生じた少なくとも１つの酸及び／又はカルボキシル官能基を有する前記多糖類により生じた酸との間のカップリングから生じた、Ｌ体又はＤ体のフェニルアラニン誘導体の残基である、
前記複合体。
【請求項２】
前記多糖類は、式Ｉ：
【化１】
（式中、
多糖類は、デキストランであり、
Ｆは、リンカーアームＲと、前記多糖類の−ＯＨ官能基との間のカップリング由来のものであって、エステル、チオエステル、カーボネート、カルバメート又はエーテル官能基であり、
Ｒは、枝分れ状及び／又は不飽和であっても、Ｏ、Ｎ及び／又はＳのような１つ以上のヘテロ原子を有していてもよく、少なくとも１つのカルボキシル官能基を有する１ないし１８個の炭素原子を有する鎖であり、
Ｐｈｅは、フェニルアラニン誘導体のアミンと、基Ｒにより生じた少なくとも１つの酸及び／又はカルボキシル官能基を有する前記多糖類により生じた酸との間のカップリングから生じた、Ｌ体又はＤ体のフェニルアラニン誘導体の残基であり、
ｎは、Ｐｈｅにより置換されたＲのモル分率を表すものであって、０．３ないし０．９であり、好ましくは０．４ないし０．８であり、そしてより好ましくは０．４ないし０．６であり、
ｉは、糖単位当りに生じた基Ｆ−Ｒ−［Ｐｈｅ］ｎの平均モル分率を表すものであって、０．５ないし２．５であり、好ましくは０．８ないし１．６であり、好ましくは１．０ないし１．４であり、そして好ましくは１．０ないし１．２であり、
ＲがＰｈｅにより置換されていない場合、基Ｒの酸（群）は、カチオン、好ましくは、Ｎａ＋又はＫ＋のようなアルカリ金属カチオンのカルボン酸塩である）
で表される多糖類より選択される、請求項１に記載の複合体。
【請求項３】
Ｆは、エステル、カーボネート、カルバメート又はエーテルである、請求項１又は２に記載の複合体。
【請求項４】
基Ｒは、下記基：
【化２】
及びそのアルカリ金属カチオン塩
より選択される、請求項１ないし３のうちいずれか１項に記載の複合体。
【請求項５】
前記フェニルアラニン誘導体は、フェニルアラニン及びそのアルカリ金属カチオン塩、フェニルアラニノール、フェニルアラニンアミド及びエチルベンジルアミンから成る群より選択される、請求項１ないし４のうちいずれか１項に記載の複合体。
【請求項６】
前記フェニルアラニン誘導体は、式ＩＩ：
【化３】
（式中、Ｅは、直鎖状又は枝分れ状の炭素原子数１ないし６のアルキル基であり得る基を表す）
で表されるフェニルアラニンエステルより選択される、請求項１ないし５のうちいずれか１項に記載の複合体。
【請求項７】
前記インシュリンは、ヒト組換え体インシュリンである、請求項１ないし６のうちいずれか１項に記載の複合体。
【請求項８】
前記インシュリンは、インシュリン類似体である、請求項１ないし７のうちいずれか１項に記載の複合体。
【請求項９】
前記インシュリン類似体は、インシュリン リスプロ（ｉｎｓｕｌｉｎ Ｌｉｓｐｒｏ）（ヒューマログ（Ｈｕｍａｌｏｇ：登録商標））、インシュリン アスパルト（ｉｎｓｕｌｉｎ Ａｓｐａｒｔ）（ノボログ（Ｎｏｖｏｌｏｇ：登録商標）、ノボラピッド（Ｎｏｖｏｒａｐｉｄ：登録商標））及びインシュリン グルリジン（ｉｎｓｕｌｉｎ ｇｌｕｌｉｓｉｎｅ）（アピドラ（Ａｐｉｄｒａ：登録商標））から成る群より選択される、請求項８に記載の複合体。
【請求項１０】
ポリマー／インシュリンのモル比は、０．２ないし５である、請求項１ないし９のうちいずれか１項に記載の複合体。
【請求項１１】
ポリマー／インシュリンのモル比は、０．２ないし３であり、好ましくは０．６ないし２．５であり、そしてより好ましくは０．８ないし２である、請求項１ないし９のうちいずれか１項に記載の複合体。
【請求項１２】
前記モル比は、１である、請求項１ないし９のうちいずれか１項に記載の複合体。
【請求項１３】
前記モル比は、２である、請求項１ないし９のうちいずれか１項に記載の複合体。
【請求項１４】
ポリマー／インシュリン質量比は、０．４ないし１０である、請求項１ないし９のうちいずれか１項に記載の複合体。
【請求項１５】
ポリマー／インシュリン質量比は、０．４ないし６であり、好ましくは１．２ないし５であり、そしてより好ましくは１．６ないし２．８である、請求項１ないし７のうちいずれか１項に記載の複合体。
【請求項１６】
少なくとも１種の本発明の複合体を含有する医薬組成物。
【請求項１７】
注射液の形態にある、請求項１６に記載の組成物。
【請求項１８】
前記溶液のインシュリン濃度は、６００μｍｏｌ／ｍＬ、即ち１００ＩＵ／ｍＬである、請求項１６又は１７に記載の組成物。
【請求項１９】
作用発現が、３０分未満、好ましくは２０分未満及びより好ましくは１５分未満である、およそ６００μＭ（１００ＩＵ／ｍＬ）のインシュリン濃度のヒトインシュリン製剤の製造のための、請求項１ないし７及び１０ないし１５のうちいずれか１項に記載の複合体の使用。
【請求項２０】
最低血糖値到達時間（ｇｌｙｃｅｍｉｃ ｎａｄｉｒ）が１２０分未満であり、好ましくは１０５分未満であり、そしてより好ましくは９０分未満である、およそ６００μｍｏｌ／Ｌ（１００ＩＵ／ｍＬ）のインシュリン濃度のヒトインシュリン製剤の製造のための、請求項１ないし７及び１０ないし１５のうちいずれか１項に記載の複合体の使用。
【請求項２１】
作用発現が、１５分未満、及び好ましくは１０分未満である、およそ６００μＭ（１００ＩＵ／ｍＬ）のインシュリン濃度のインシュリン類似体製剤の製造のための、請求項１ないし６及び８ないし１５のうちいずれか１項に記載の複合体の使用。
【請求項２２】
最低血糖値到達時間が９０分未満であり、及び好ましくは８０分未満である、およそ６００μｍｏｌ／Ｌ（１００ＩＵ／ｍＬ）のインシュリン濃度のインシュリン類似体製剤の製造のための、請求項１ないし７及び１０ないし１５のうちいずれか１項に記載の複合体の使用。
【請求項２３】
注入ポンプ用の１００ＩＵ／ｍＬのインシュリン製剤の製造のための、請求項１ないし８のうちいずれか１項に記載の複合体の使用。
【請求項１】
インシュリンと、カルボキシル基を有する多糖類との複合体であって、
前記多糖類は、少なくとも１種のフェニルアラニン誘導体（Ｐｈｅと記す）によって官能化された多糖類より選択され、
前記フェニルアラニン誘導体は、酸官能基とのカップリングにより前記多糖類にグラフトしているか又は結合しており、前記酸官能基は、官能基Ｆを介して前記多糖類に結合したリンカーアームＲにより生じた酸官能基であり、前記官能基Ｆは、リンカーアームＲと、前記多糖類の−ＯＨ官能基との間のカップリング由来のものであり、
Ｆは、エステル、チオエステル、カーボネート、カルバメート又はエーテル官能基であり、
Ｒは、枝分れ状及び／又は不飽和であっても、Ｏ、Ｎ及び／又はＳのような１つ以上のヘテロ原子を有していてもよく、少なくとも１つのカルボキシル官能基を有する１ないし１８個の炭素原子を有する鎖であり、
Ｐｈｅは、フェニルアラニンアミンと、基Ｒにより生じた少なくとも１つの酸及び／又はカルボキシル官能基を有する前記多糖類により生じた酸との間のカップリングから生じた、Ｌ体又はＤ体のフェニルアラニン誘導体の残基である、
前記複合体。
【請求項２】
前記多糖類は、式Ｉ：
【化１】
（式中、
多糖類は、デキストランであり、
Ｆは、リンカーアームＲと、前記多糖類の−ＯＨ官能基との間のカップリング由来のものであって、エステル、チオエステル、カーボネート、カルバメート又はエーテル官能基であり、
Ｒは、枝分れ状及び／又は不飽和であっても、Ｏ、Ｎ及び／又はＳのような１つ以上のヘテロ原子を有していてもよく、少なくとも１つのカルボキシル官能基を有する１ないし１８個の炭素原子を有する鎖であり、
Ｐｈｅは、フェニルアラニン誘導体のアミンと、基Ｒにより生じた少なくとも１つの酸及び／又はカルボキシル官能基を有する前記多糖類により生じた酸との間のカップリングから生じた、Ｌ体又はＤ体のフェニルアラニン誘導体の残基であり、
ｎは、Ｐｈｅにより置換されたＲのモル分率を表すものであって、０．３ないし０．９であり、好ましくは０．４ないし０．８であり、そしてより好ましくは０．４ないし０．６であり、
ｉは、糖単位当りに生じた基Ｆ−Ｒ−［Ｐｈｅ］ｎの平均モル分率を表すものであって、０．５ないし２．５であり、好ましくは０．８ないし１．６であり、好ましくは１．０ないし１．４であり、そして好ましくは１．０ないし１．２であり、
ＲがＰｈｅにより置換されていない場合、基Ｒの酸（群）は、カチオン、好ましくは、Ｎａ＋又はＫ＋のようなアルカリ金属カチオンのカルボン酸塩である）
で表される多糖類より選択される、請求項１に記載の複合体。
【請求項３】
Ｆは、エステル、カーボネート、カルバメート又はエーテルである、請求項１又は２に記載の複合体。
【請求項４】
基Ｒは、下記基：
【化２】
及びそのアルカリ金属カチオン塩
より選択される、請求項１ないし３のうちいずれか１項に記載の複合体。
【請求項５】
前記フェニルアラニン誘導体は、フェニルアラニン及びそのアルカリ金属カチオン塩、フェニルアラニノール、フェニルアラニンアミド及びエチルベンジルアミンから成る群より選択される、請求項１ないし４のうちいずれか１項に記載の複合体。
【請求項６】
前記フェニルアラニン誘導体は、式ＩＩ：
【化３】
（式中、Ｅは、直鎖状又は枝分れ状の炭素原子数１ないし６のアルキル基であり得る基を表す）
で表されるフェニルアラニンエステルより選択される、請求項１ないし５のうちいずれか１項に記載の複合体。
【請求項７】
前記インシュリンは、ヒト組換え体インシュリンである、請求項１ないし６のうちいずれか１項に記載の複合体。
【請求項８】
前記インシュリンは、インシュリン類似体である、請求項１ないし７のうちいずれか１項に記載の複合体。
【請求項９】
前記インシュリン類似体は、インシュリン リスプロ（ｉｎｓｕｌｉｎ Ｌｉｓｐｒｏ）（ヒューマログ（Ｈｕｍａｌｏｇ：登録商標））、インシュリン アスパルト（ｉｎｓｕｌｉｎ Ａｓｐａｒｔ）（ノボログ（Ｎｏｖｏｌｏｇ：登録商標）、ノボラピッド（Ｎｏｖｏｒａｐｉｄ：登録商標））及びインシュリン グルリジン（ｉｎｓｕｌｉｎ ｇｌｕｌｉｓｉｎｅ）（アピドラ（Ａｐｉｄｒａ：登録商標））から成る群より選択される、請求項８に記載の複合体。
【請求項１０】
ポリマー／インシュリンのモル比は、０．２ないし５である、請求項１ないし９のうちいずれか１項に記載の複合体。
【請求項１１】
ポリマー／インシュリンのモル比は、０．２ないし３であり、好ましくは０．６ないし２．５であり、そしてより好ましくは０．８ないし２である、請求項１ないし９のうちいずれか１項に記載の複合体。
【請求項１２】
前記モル比は、１である、請求項１ないし９のうちいずれか１項に記載の複合体。
【請求項１３】
前記モル比は、２である、請求項１ないし９のうちいずれか１項に記載の複合体。
【請求項１４】
ポリマー／インシュリン質量比は、０．４ないし１０である、請求項１ないし９のうちいずれか１項に記載の複合体。
【請求項１５】
ポリマー／インシュリン質量比は、０．４ないし６であり、好ましくは１．２ないし５であり、そしてより好ましくは１．６ないし２．８である、請求項１ないし７のうちいずれか１項に記載の複合体。
【請求項１６】
少なくとも１種の本発明の複合体を含有する医薬組成物。
【請求項１７】
注射液の形態にある、請求項１６に記載の組成物。
【請求項１８】
前記溶液のインシュリン濃度は、６００μｍｏｌ／ｍＬ、即ち１００ＩＵ／ｍＬである、請求項１６又は１７に記載の組成物。
【請求項１９】
作用発現が、３０分未満、好ましくは２０分未満及びより好ましくは１５分未満である、およそ６００μＭ（１００ＩＵ／ｍＬ）のインシュリン濃度のヒトインシュリン製剤の製造のための、請求項１ないし７及び１０ないし１５のうちいずれか１項に記載の複合体の使用。
【請求項２０】
最低血糖値到達時間（ｇｌｙｃｅｍｉｃ ｎａｄｉｒ）が１２０分未満であり、好ましくは１０５分未満であり、そしてより好ましくは９０分未満である、およそ６００μｍｏｌ／Ｌ（１００ＩＵ／ｍＬ）のインシュリン濃度のヒトインシュリン製剤の製造のための、請求項１ないし７及び１０ないし１５のうちいずれか１項に記載の複合体の使用。
【請求項２１】
作用発現が、１５分未満、及び好ましくは１０分未満である、およそ６００μＭ（１００ＩＵ／ｍＬ）のインシュリン濃度のインシュリン類似体製剤の製造のための、請求項１ないし６及び８ないし１５のうちいずれか１項に記載の複合体の使用。
【請求項２２】
最低血糖値到達時間が９０分未満であり、及び好ましくは８０分未満である、およそ６００μｍｏｌ／Ｌ（１００ＩＵ／ｍＬ）のインシュリン濃度のインシュリン類似体製剤の製造のための、請求項１ないし７及び１０ないし１５のうちいずれか１項に記載の複合体の使用。
【請求項２３】
注入ポンプ用の１００ＩＵ／ｍＬのインシュリン製剤の製造のための、請求項１ないし８のうちいずれか１項に記載の複合体の使用。
【図１】
【図２】
【図３】
【図４】
【図５】
【図２】
【図３】
【図４】
【図５】
【公表番号】特表２０１２−５２１９８０（Ｐ２０１２−５２１９８０Ａ）
【公表日】平成２４年９月２０日（２０１２．９．２０）
【国際特許分類】
【出願番号】特願２０１２−５０１４０７（Ｐ２０１２−５０１４０７）
【出願日】平成２２年３月２９日（２０１０．３．２９）
【国際出願番号】ＰＣＴ／ＩＢ２０１０／０００７１１
【国際公開番号】ＷＯ２０１０／１２２３８５
【国際公開日】平成２２年１０月２８日（２０１０．１０．２８）
【出願人】（５０８０９００８８）
【Ｆターム（参考）】
【公表日】平成２４年９月２０日（２０１２．９．２０）
【国際特許分類】
【出願日】平成２２年３月２９日（２０１０．３．２９）
【国際出願番号】ＰＣＴ／ＩＢ２０１０／０００７１１
【国際公開番号】ＷＯ２０１０／１２２３８５
【国際公開日】平成２２年１０月２８日（２０１０．１０．２８）
【出願人】（５０８０９００８８）
【Ｆターム（参考）】
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