多発性硬化症を処置するためのヒアルロン酸亜鉛錯体を含む医薬組成物
本発明は多発性硬化症を処置するための医薬組成物に関し、この組成物は活性成分としてのヒアルロン酸亜鉛錯体（好ましくは８００〜１２００ｋＤａの分子量を有するヒアルロン酸亜鉛錯体）と医薬上許容しうるキャリアおよび／または添加剤とからなっている。この医薬組成物の製造方法、並びに多発性硬化症を処置するためのその治療用途も本発明の範囲内である。
【発明の詳細な説明】
【発明の詳細な説明】
【０００１】
本発明は多発性硬化症を処置するための医薬組成物に関し、この組成物は活性成分としてのヒアルロン酸亜鉛錯体と医薬上許容しうるキャリアおよび／または添加剤とからなることを特徴とする。前記医薬組成物の製造方法、並びに多発性硬化症を処置するためのその治療用途も本発明の範囲内である。
【０００２】
ヒアルロナン（ＨＡ）は、式（Ｉ）の反復Ｎ−アセチルグルコサミン−グルクロン酸ジサッカライド単位で構築されたグルコサミノグリカン型のホモポリマーである：
【化１】
【０００３】
ＨＡにおいて単糖類はβ（１→３）結合であるのに対し、二糖類単位はβ（１→４）結合であって、交互のβ（１→３）およびβ（１→４）結合を有する線状多糖類を形成する。
【０００４】
生物におけるＨＡはカチオン（通常ナトリウム）で形成された塩として生じ、その分子量は１０〜２０ｋＤａ〜数千ｋＤａの範囲とすることができる。ＨＡのグルクロン酸部分におけるカルボキシル基、並びにグルコサミンのＮ−アセチル基におけるカルボニルおよびアミノ基、更に存在するヒドロキシル基の存在は数個の水素架橋の形成を容易化させる。これら分子内水素結合、並びに生物系に存在するＨＡと水との間の相互作用を介し形成される水素架橋に基づき、ＨＡは複雑な三次元構造を有する［Ｃ．Ｌ．ヒュー等、ヨーロピアン・ジャーナル・バイオケミストリー、第２０３巻、第３３−４２頁（１９９２）；Ｑ．リュー等、ジャーナル・アメリカン・ケミカル・ソサエティ、第１１８巻、第１２２７６−１２２８６頁（１９９６）］。その優れた水結合能力の結果として、比較的薄いＨＡの水溶液でさえ高い粘度を示す。水溶液において、その流動学的性質は分子の寸法に大きく依存する。たとえば１％水溶液において１０００ｋＤａ分子寸法のＨＡは３０００ｍＰａの粘度を有するのに対し、４０００ｋＤａ分子寸法のＨＡは同じ濃度にて４００，０００ｍＰａの粘度を有する［Ｈ．Ｂ．ウイックおよびＯ．ウイック；ヒアルロナンの流動学、ヒアルロナンおよびその誘導体の化学、生物学および医療用途（Ｔ．Ｃ．ローレント編）、第２５−３２頁、ポートランド・プレス、ロンドン（１９９８）］。従ってＨＡの２つの最も重要な物理的特徴はその粘度および分子寸法である。
【０００５】
細胞外マトリックスの主成分としてＨＡは人体の全部分に存在する。或る種の器官および組織（結合組織、皮膚、滑液、ガラス体液および血管壁）は増加量にてＨＡを含有する。ＨＡの生物学的役割はその物理的性質に由来すると長い間考えられていた。たとえば、これはその流動学的性質により関節に対し機械的保護を与えうる。その優秀な水結合能力に基づき、ＨＡはその浸透圧を介しおよび流動耐性を与えることにより、水バランスを調節することができる。更にＨＡは間質を充填すると共に種々異なる物理的衝撃から細胞を保護するという重要な役割を演ずる。最近の検討が示すところでは、人体に存在するＨＡと或る種の巨大分子との間の相互作用は数種の生理学的プロセスに結びつく。この種の巨大分子の例はプロテオグリカン（アグリカン、ベルシカン、ブレビカンなど）であって、細胞外マトリックスに位置すると共に細胞間の空間を占めて物質移動を容易化させるという主たる仕事を有する。ＨＡとの相互作用に入る巨大分子は細胞内の膜内外蛋白質（ＣＤ４４、ＲＨＡＭＭ）、並びにシトプラスムに存在するリセプト蛋白質（Ｃ１ｑ、Ｐ−３２，ＴＳＧ−６など）とすることができる。上記蛋白質を介し、ＨＡは細胞レベルもしくは人体レベルにて生ずる幾つかの調節プロセスに重要な役割を演ずる。
【０００６】
ＨＡの分子寸法および水溶液におけるその濃度は、物理的性質の場合と同様に、生物学的作用に対し相当な影響を有する。すなわち分子の寸法に応じ、ＨＡは同じ細胞プロセスに対しプラスもしくはマイナスの作用のいずれかを果たしうる。同様な作用の変化が、溶液のＨＡ濃度を変化させた場合にも見られた。所望の最適作用は明らかに、両パラメータを同時に考慮した際に達成することができる［Ｅ．Ａ．バラズス、ヒアルロナンおよびその誘導体の化学、生物学および医療用途（Ｔ．Ｃ．ローレント編）、第１８５−２０４頁、ポートランドプレス、ロンドン（１９９８）］。
【０００７】
ＨＡは上記生理学的プロセスにも参加するので治療の幾つかの分野（外傷治癒、慢性炎症の処置、眼科手術）にも使用して成功しうる。
【０００８】
ＨＡをヒト治療に適用しうる範囲は、上記範囲を越えて化学的に構造を改変することにより拡大することができる。この点に関し２つの主たる傾向が知られている。その１つによれば、脂肪族化合物（一般にジヒドラジド）を用いてヒドロゲルを形成させることにより、ＨＡ分子の２つの離間位置の間で架橋が達成させる。架橋は化学改変されたＨＡの粘弾性の増加を生ぜしめて、人体にて生ずる劣化作用に対し一層大きい耐性をもたらす。滑液を再取得すべく処置されるリューマチ性関節炎を有する患者につき或いは術後の接合を有する患者につき利点がある。他の重要な戦略においては、吸収し難い或いは作用位置まで特異的に移動し難い薬物はＨＡ（たとえばタキソール、ピロカルピン、インシュリン）に化学結合させる。これらの場合、ＨＡはＨＡに結合した活性薬物の向上した吸収をもたらすと共に、この物質がそれぞれ標的位置まで特異的に到達支援する。
【０００９】
亜鉛およびコバルトで形成されたＨＡの錯体が欧州特許第４１３０１６号明細書（ブルガー等、１９８９）に記載されており、これら２種のうち亜鉛−ＨＡが外傷処置のための組成物に活性薬物として使用される。活性薬物の更なる検討は、亜鉛の存在に基づき治療用途につき可能性が拡大されうることを示す。何故なら、亜鉛錯体はナトリウム−ＨＡ塩と比較して新たな或いは一層傑出した作用を有するからである［Ｊ．イレス等、Ａｃｔａ Ｐｈａｒｍ．Ｈｕｎｇ、第７２巻、第１５−２４頁（２００２）］。特に、この種の作用は亜鉛−ＨＡの酸化防止活性の増大［Ｇｙ．Ｔ．バローグ等、アーキテク．バイオケミカル．バイオフィジオロジー、第４１０巻、第７６−８２頁（２００３）］；浸襲細胞により増加量にて生成される組織損傷構造（マトリックス・メタロプロテナーゼ、特にＭＭＰ−９）に対する阻止作用である一方、ナトリウム−ＨＡは後者の作用を示さない（国際公開第００／５３１９４号パンフレット、イレス等、１９９９）。亜鉛−ＨＡの胃腸保護作用（消化性潰瘍の処置）が国際公開第９８／４８８１５号パンフレットに掲載された国際特許出願に開示されており、亜鉛−ＨＡ活性薬物の抗微生物作用が国際公開第９８／１０７７３号パンフレットに掲載された国際特許出願に記載されている。
【００１０】
多発性硬化症（ＭＳ）は中枢神経系の慢性自己免疫病である。この病気は先ず最初に１５歳と４０歳との間で出現し、婦人における発生の割合は２倍である［デュクエッテ等、カナディアン・ジャーナル・ニューロロジカル・サイエンス、第１９巻、第４６６−７１頁（１９９２）］。この病気の病理学は複雑であり、幾つかの面にて不明瞭である。遺伝的感受性および免疫学的プロセスの障害と言う明瞭な証拠も存在するが、環境因子（たとえば或る種のウィルス感染）の役割は不確定である［スチピンドンク等、ジャーナル・ニューロイミュノロジー、第１０５巻、第４６−５７頁（２０００）］。病気の臨床形態は大いに変化し、これら場合の殆どは再発性−寛解性型であり、全てが同じである。ＭＳ、すなわち感覚器官および運動器官、並びに自律神経系の障害により現れる神経退化症がゆっくり発現して精神および感情能力を阻害し、最終的に重度の不能をもたらす。組織病理学は最初に中枢神経系における炎症の中心を示し、この脱髄鞘および軸索の劣化が生ずる［エウイング等、イミュノロジカル・セル・バイオロジー、第７６巻、第４７−５４頁（１９９８）］。持続性の臨床徴候は髄鞘の劣化およびオリゴデンドロサイトの劣化により誘発されて複数の神経障害をもたらす［フュー等、ブレイン、第１２１巻、第１０３−１１３頁（１９９８）］。医薬における現在の知識状態によれば、ＭＳは治癒可能な病気である。日常の慣行において、病気の過程を変化させる非特異的免疫抑制物質（コルチコステロイド、シトスタティック剤）または一層特異的な組成物（β−インタフェロン、グラチラマーアセテート）が使用される。しかしながら、これら医薬の適用性は、効果の低さおよび重度の副作用により制限される。
【００１１】
現在まで１１種の薬剤が市販されており、これらは病気の過程を改変しうると共に臨床試験が２４種の組成物で行われている。２種の最も進歩した組成物、すなわちコパクソン（コポリマー−１またはグラチラマーアセテート）およびレビフもしくはアボネックス（インタフェロンβ−１ａ）、並びにインタフェロンβ−１ｂは病気の１つの形態（いわゆる良性もしくは再発性−感受性型）にのみ有益であり、病気の更なる形態は一次的および二次的進行型、並びに悪性ＭＳであり［オッテン等、多発性硬化症に対する薬剤処置の比較、オッタワ：カナディアン・コーディネイティング・オフィス・フォア・ヘルス・テクノロジー・アセスメント（１９９８）；パーキン等、ヘルス・テクノロジカル・アセスメント、第２（４）巻（１９９８）］、これらは約２０〜３０％だけ再発の頻度を減少させうる［カーン等、ＣＮＳドラッグス、第１６（８）巻、第５６３−５７８頁（２００２）］。更に組成物の両者は幾つかの望ましくない副作用を有する。インタフェロンβ−１を含有する組成物の場合、インフルエンザ様徴候、皮膚反応および腹部疼痛（皮下投与の結果として）が生じ更に血液ピクチャーの障害、肝臓酵素のレベル増大、並びに個人的障害も生じうる［エバー等、ランセット、第３５２巻、第１４９８−１５０４頁（１９９８）；ヤコブス等、多発性硬化症、第１巻、第１１８−１３５頁（１９９５）］。コポリマー−１の場合、最大の特徴的副作用はここでも皮膚反応および局部疼痛（皮下投与の結果として）が生じ、顔面の赤化、胸部における圧力、心悸亢進および呼吸過多も生じうる［ジョンソン等、ニューロロジー、第４５巻、第１２６８−１２７６頁（１９９５）；ボルンスタイン等、Ｎ．Ｅｎｇｌ．Ｊ．Ｍｅｄ、第３１７巻、第４０８−４１４頁（１９８７）］。これら薬剤は多かれ少なかれＣＮＳにて生ずる炎症（病気の一次形態）を減少させるが、これらは病気の進行に影響しない［クレッグ、ヘルス・テクノロジカル・アセスメント、第４（９）巻（２０００）］。
【００１２】
多発性硬化症の臨床検査の目的で用いうる唯一の充分かつ広範に使用されるモデルは実験的自己免疫エンセファロミエリチス（ＥＡＥ）［モクハタリアン等、ネイチャー、第３０９巻、第３５６−３５８頁（１９８４）；ライネ等、ラボラトリー・インベスティゲーション、第３１巻、第３６９−３８０頁（１９７４）］。すなわちＣＤ４＋Ｔ−リンパ球により伝達される中枢神経系の炎症病である。このモデルの臨床の複雑性は検査した病気と比較して中庸であるが、その使用はＭＳを目的とした研究にて不可避である。コポリマー−１（コパキソン）およびインタフェロンβ−１の臨床試験は既にヒト治療につき承認され、更に新規な薬剤の臨床試験が開発下にこのモデルを用いて行われた［ポポビック等、アニュアル・ニョーロロジー、第５１巻、第２１５−２２３頁（２００１）；ステンスラウス等、ニューロサイエンス・レタース、第３３３巻、第１６７−１７０頁（２００２）］。数種のＥＡＥモデルのうち、脱腎（すなわちＭＳの特徴）を試験すると共に免疫学的プロセスを検討する両者につき最も適すると証明されたのは慢性の再発性−寛解性型（ＣＲ ＥＡＥ）である。病気の臨床過程と同様に、ＣＲ ＥＡＥはＭＳに特に匹敵する［ウエケルレ等、アニュアル・ニューロロジー、第３６巻、第４７−５０頁（１９９４）］。この理由で、本発明の実験にてミエリン・オリゴデンドロサイト・グリコプロテイン（ＭＯＧ）により誘発されるＣＲ ＥＡＥがマウスで検討された［アモール等、ジャーナル・イミュノロジー、第１５３巻、第４３４９−４３５６頁（１９９４）］。１９６０年代の中頃、ヒアルロン酸ナトリウム塩の作用がローマ人の研究者によりＥＡＥモデルにつき検討された。彼らは、筋肉内投与されたＮａ−ＨＡ塩が阻害性でなく、或る場合にはウサギにてＥＡＥの発生を増長することを突き止めた［スザボ等、（１９６６）、Ｐａｔｏｌ．Ｆｉｚｉｏｌ．Ｅｋｓｐ．Ｔｅｒ．、第１０（５）巻、第４１−４４頁；モスコルシー等、（１９６５）、Ｓｔｕｄ．Ｃｅｒｃｅｔ．Ｎｅｕｒｏｌ、第１０（５）巻、第４９３−４９７頁）］。いずれも筋肉内もしくは経口投与された種々異なる亜鉛塩で行ったＥＡＥモデルにて検査の成功を示さなかった［シファー等、（１９９６）、Ｊ．Ｔｒａｃｅ．Ｅｌｅｍ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．、第９（１）巻、第１−９頁；ペンコワおよびヒダルゴ（２０００）、グリア、第３２（３）巻、第２４７−２６３頁］。
【００１３】
国際公開第９７／１１７１０号パンフレットに掲載された国際特許出願には、免疫学的プロセスに対する影響に関する試験が開示されている。これら試験はＮａ−ヒアルロン酸塩、ヒアルロン酸および種々異なる分子量を有するその結合体を用いる。特にマウスＴ−細胞の増殖、並びにグラフト対ホスト反応における阻止作用も検証され、ここでマウスの他の種類のドナーから採取された心筋組織のグラフトが使用された。多発性硬化症におけるそれぞれヒアルロン酸およびヒアルロン酸ナトリウムの可能な用途が明細書に挙げられているが、この仮説を支持する実験的証左は存在しない。更に本発明者等は、ヒアルロン酸とナトリウム塩（ヒアルロン酸ナトリウム）との間で形成された結合体を試験して上記記載をチェックしたが、この出願の表４に示されるようにＭＳにつき特異的であるＥＡＥモデルに対する影響は何ら示されなかった。
【００１４】
一方では従来技術の薬剤が有害な副作用を有すると共にＮａ−ＨＡ塩が無効果であることを考慮し、他方ではＺｎ−ＨＡ錯体が種々異なる治療分野にて有望な結果を与えることを考慮して、本発明の目的は特に匹敵しうるＥＡＥ動物モデルを用い、ＭＳにつきＺｎ−ＨＡ錯体を試験することであった。
【００１５】
驚くことに、Ｎａ−ＨＡおよびＺｎ２＋の両者は単独では無効果であったが、異なる分子量を有するＺｎ−ＨＡの種々の投与はモデル動物で誘発されるＥＡＥを阻止したことを突き止めた。最適条件におけるこの作用は顕著であった。
【００１６】
従って本発明は多発性硬化症を処置するための医薬組成物に関し、この組成物はヒアルロン酸亜鉛錯体、好ましくは８００〜１２００ｋＤａの分子量を有するヒアルロン酸亜鉛錯体を活性成分として含むと共に、医薬上許容しうるキャリアおよび／または添加剤を含むことを特徴とする。
【００１７】
本発明の他の課題は、ヒアルロン酸亜鉛錯体活性薬物を医薬に常用されるキャリアおよび／または添加剤と一緒に含有する混合物を形成させて組成物を得ることからなる医薬組成物の製造方法である。前記医薬組成物は好ましくは溶液、好適には注射もしくは還流のための溶液である。
【００１８】
本発明の更なる課題は、多発性硬化症を処置する医薬品の製造のためのヒアルロン酸亜鉛錯体の使用である。
【００１９】
本発明の更に他の課題は多発性硬化症の処置方法であり、ここでヒアルロン酸亜鉛錯体またはこれを含有する組成物の治療上有効量がこの種の処置を必要とする患者に投与される。前記処置は、たとえば８００〜１２００ｋＤａの分子量を有するヒアルロン酸亜鉛錯体を用いて静脈内投与を介し行うことができる。
【００２０】
本発明の実験において、種々異なる投与量における種々異なる分子量を有するＺｎ−ＨＡ錯体はＥＡＥモデルに投与されるサブカテイン（ｓ．ｃ．）であり、動物をＥＡＥが誘発された５日〜２２日間後に阻止作用につき試験した。すなわち４種の異なる平均分子量（１０、５０、２００および８００〜１２００ｋＤａ）のＺｎ−ＨＡ錯体（後者は、ここではＨＭＷと称する）を３種の異なる投与量（１、１０および５０ｍｇ／ｋｇ）で試験して、どの分子量およびどの投与量のＺｎ−ＨＡが選択種類のＥＡＥモデルにて最適作用を示すかを決定した。その結果を下表１に示す。
【００２１】
【表１】
【００２２】
阻止の程度および平均からの偏差の両者を考慮して、１０ｍｇ／ｋｇ投与量におけるＨＭＷ Ｚｎ−ＨＡ錯体が最も効果的であった（４１．３±７．１％阻止）。
【００２３】
次いで、臨床的徴候の出現時点に関するＨＭＷ Ｚｎ−ＨＡ（生理食塩水の２００μｌにおける１０ｍｇ／ｋｇ、皮下）の可能な作用を検討した。
【００２４】
２種類の処置を用いてマウスの群（ｎ＝６〜１０マウス／１群）につき試験を行った：（ｉ）予防、ここでは投与をＭＯＧの接種の５〜２２日間後に或いはその９−１０〜２８日間後に（表２および３には＃印で標識）投与を行い；更に（ｉｉ）治療処置、ここではＺｎ−ＨＡの投与をＥＡＥが誘発された１３〜２８日間後に行った（表２および３には＊印で標識）。
【００２５】
効果を確認するため、９回の独立した試験を表２および３に示した結果と共に行った。マウスには１０ｍｇ／ｋｇのＨＭＷ Ｚｎ−ＨＡをｓ．ｃ．にて毎日投与し、その臨床データをそれぞれＥＡＥが誘発された１０〜２８日後および５〜２２日後に得た。これらの結果を平均１日臨界データから計算して、平均合計臨床データ（ＡＳＣ）を得た。
【００２６】
【表２】
【００２７】
【表３】
【００２８】
表２および３は、１０ｍｇ／ｋｇ ｓ．ｃ．投与量におけるＨＭＷ Ｚｎ−ＨＡの投与により誘発ＥＡＥの重度の臨床徴候における顕著な阻止が達成され（４１．３±７．１％阻止および１２．１ＡＳＣ値がｐ＜０．００４にてマン−ホイットニーＵテストにより得られた）、更に臨床徴候の発生率も２２％だけ減少した（錯体につき６８．６％および対照につき８８％、ｔ試験によるｐ＜０．０１２にて）。他方、処置のタイミング（予防であるか或いは治療であるか）は、ＥＡＥにつき行われたＺｎ−ＨＡの作用にて顕著な変化を生じなかった。
【００２９】
前記諸実験にて、本発明者等はＨＭＷ Ｚｎ−ＨＡとは異なり１０ｍｇ／ｋｇのＨＭＷ Ｚｎ−ＨＡ（すなわち０．８ｍｇ／ｋｇのＺｎ２＋）に相当する量にてＺｎ２＋を含有する塩化亜鉛がＥＡＥモデルにつき顕著な効果を示さなかったことを突き止めた。更に本出願の導入部分にも記載したように、Ｎａ−ＨＡも示さなかった（その結果については下表４参照）。
【００３０】
【表４】
【００３１】
本発明によるＺｎ−ＨＡ錯体活性薬物を含有する医薬組成物は通常の慣用ルートにて（たとえば経口的、非経口的、経口粘膜を介し、舌下、鼻粘膜を介し、肛門経由、経皮、静脈内（還流）または筋肉内）で投与することができる。経口投与の目的の医薬組成物は液体または固体、たとえばシロップ、懸濁液、乳液、錠剤、カプセルおよびロゼンジの形態とすることができる。たとえば懸濁液もしくは溶剤のような液体組成物は、適する液体キャリア中に（たとえば水性溶剤（たとえば水、エタノールもしくはグリセリン）中に或いは非水性溶剤（たとえばポリエチレングリコールもしくはオイルまたはその混液）中にＺｎ−ＨＡ錯体活性成分を含有する。この組成物は更に懸濁剤、保存料、香料もしくは着色料をも含有することができる。医薬組成物を錠剤の形態で作成する場合、固体組成物の作成につき便利に使用される適するキャリヤを使用することができる。この種のキャリアの例はステアリン酸マグネシウム、澱粉、乳糖、蔗糖、セルロースなどである。
【００３２】
カプセル形態の固体組成物はそれ自体公知の方法で作成することができる。たとえば、活性成分を公知のキャリアと一緒に含有するピルを硬質ゼラチンカプセルに充填することができ、或いは活性薬物と医薬品に便利に使用される任意のキャリア（たとえばアラビヤゴム、セルロース、シリケートもしくはオイル）との分散物もしくは懸濁物を軟質ゼラチンにカプセル化することができる。
【００３３】
典型的な非経口組成物は、Ｚｎ−ＨＡ錯体と非経口用途につき許容しうる無菌の水性キャリアもしくはオイル（たとえばポリエチレングリコール、ポリビニルピロリドン、レシチン、アラキ油（ピーナッツ油）およびごま油）とを含有する溶液もしくは懸濁液である。他の方式によれば、得られる溶液を凍結させると共に使用直前に適する溶剤に再溶解させる。
【００３４】
鼻粘膜を介し投与するための組成物はエアロゾル、ドロップ、ゲルもしくはダストを与えるべく、それ自体公知の方法で処方される。エアロゾル組成物は活性成分を医薬上許容しうる水性もしくは非水性溶剤に活性成分を溶解型または微分散型にて含有し、次いでこれを無菌条件下で容器に充填する。前記容器はノズルを装着したカセットもしくは容器とすることができ、単一量もしくは複数量を含有することができる。口腔粘膜を介し投与するための或いは舌下吸収させるための組成物は錠剤、ピルもしくはパスチル型とすることができる。これら組成物は活性成分をたとえば砂糖、アラビヤゴム、トラガカントガム、ゼラチン、グリセリンなどのようなキャリアと一緒に含有する。
【００３５】
肛門用途のための組成物は座薬の形態でそれ自体公知の方法にて作成され、これは活性成分の他にキャリア（一般にココア脂）をも含有する。塗布用途の組成物はたとえば軟膏、ゲルおよびプラスタである。
【００３６】
検査の目的で、Ｚｎ−ＨＡ活性薬物を生理食塩水に溶解させると共に０．１〜５ｍｇ／ｍｌの濃度範囲にて使用した。
【００３７】
更に、緩衝液により生理学上許容しうる数値に維持されたｐＨにて生理学上許容しうる濃度でＺｎ−ＨＡ活性成分を含有する水溶液を使用することができる。生理学上許容しうると共に活性成分が適正に可溶性である他の非水性溶剤も使用することができる。この種の溶剤の例はエタノール、プロピレングリコール、動物および植物油など、並びにその水性混液である。この種の溶液はＺｎ−ＨＡを０．０１〜１００重量％の濃度範囲にて含有することができる。
【００３８】
活性成分の能力に対し直接的影響を持たない添加剤も用いることができる。この種の添加剤の例は緩衝溶液、保存料および吸収を支援する添加剤である。水溶性保存量の例は重亜硫酸ナトリウム、重硫酸ナトリウム、チオ硫酸ナトリウム、塩化ベンズアルコニウム、クロルブタノール、チメロサール、メチルパラデン、ポリビニルアルコール、フェニルエチルアルコールなどである。水溶液におけるこの種の添加剤の濃度は０．００１〜５重量％とすることができる。水溶性緩衝剤の例は炭酸ナトリウム、硼酸ナトリウム、燐酸ナトリウム、酢酸ナトリウム、重炭酸ナトリウムなどである。水溶液におけるこれら添加剤の最大濃度は、活性成分の濃度と比較して５重量％とすることができる。
【００３９】
実施例１
表１〜４に要約した検討において、ＥＡＥモデルとして使用した各マウスには２００μｌ ｓ．ｃ．の注射をそれぞれ接種し、注射液は活性成分もしくはキャリア（０．９％塩化ナトリウム水溶液）を含有した。ｍｇ／ｋｇ（体重）にて投与する投与量を得るため、種々異なる濃度の上記溶液を次のように作成した：
１ｍｇ／ｋｇ投与量につき：
１０００ｍｌの溶液当たり０．１ｇの活性成分（Ｚｎ−ＨＡ錯体、Ｎａ−ＨＡもしくはＺｎ−Ｃｌ２）を含有する溶液組成物を作成した；たとえば
０．１ｇのＺｎ−ＨＡ錯体、および
１０００ｍｌまでの蒸留水における０．９％の塩化ナトリウム溶液。
１０ｍｇ／ｋｇ投与量につき：
１０００ｍｌの溶液当たり１．０ｇの活性成分（Ｚｎ−ＨＡ錯体、Ｎａ−ＨＡもしくはＺｎ−Ｃｌ２）を含有する溶液組成物；たとえば
１．０ｇのＺｎ−ＨＡ錯体、および
１０００ｍｌまでの蒸留水における０．９％の塩化ナトリウム溶液。
５０ｍｇ／ｋｇ投与量につき：
１０００ｍｌの溶液当たり５．０ｇの活性成分（Ｚｎ−ＨＡ錯体、Ｎａ−ＨＡもしくはＺｎ−Ｃｌ２）を含有する溶液組成物；たとえば
５．０ｇのＺｎ−ＨＡ錯体、および
１０００ｍｌまでの蒸留水における０．９％の塩化ナトリウム溶液。
【発明の詳細な説明】
【０００１】
本発明は多発性硬化症を処置するための医薬組成物に関し、この組成物は活性成分としてのヒアルロン酸亜鉛錯体と医薬上許容しうるキャリアおよび／または添加剤とからなることを特徴とする。前記医薬組成物の製造方法、並びに多発性硬化症を処置するためのその治療用途も本発明の範囲内である。
【０００２】
ヒアルロナン（ＨＡ）は、式（Ｉ）の反復Ｎ−アセチルグルコサミン−グルクロン酸ジサッカライド単位で構築されたグルコサミノグリカン型のホモポリマーである：
【化１】
【０００３】
ＨＡにおいて単糖類はβ（１→３）結合であるのに対し、二糖類単位はβ（１→４）結合であって、交互のβ（１→３）およびβ（１→４）結合を有する線状多糖類を形成する。
【０００４】
生物におけるＨＡはカチオン（通常ナトリウム）で形成された塩として生じ、その分子量は１０〜２０ｋＤａ〜数千ｋＤａの範囲とすることができる。ＨＡのグルクロン酸部分におけるカルボキシル基、並びにグルコサミンのＮ−アセチル基におけるカルボニルおよびアミノ基、更に存在するヒドロキシル基の存在は数個の水素架橋の形成を容易化させる。これら分子内水素結合、並びに生物系に存在するＨＡと水との間の相互作用を介し形成される水素架橋に基づき、ＨＡは複雑な三次元構造を有する［Ｃ．Ｌ．ヒュー等、ヨーロピアン・ジャーナル・バイオケミストリー、第２０３巻、第３３−４２頁（１９９２）；Ｑ．リュー等、ジャーナル・アメリカン・ケミカル・ソサエティ、第１１８巻、第１２２７６−１２２８６頁（１９９６）］。その優れた水結合能力の結果として、比較的薄いＨＡの水溶液でさえ高い粘度を示す。水溶液において、その流動学的性質は分子の寸法に大きく依存する。たとえば１％水溶液において１０００ｋＤａ分子寸法のＨＡは３０００ｍＰａの粘度を有するのに対し、４０００ｋＤａ分子寸法のＨＡは同じ濃度にて４００，０００ｍＰａの粘度を有する［Ｈ．Ｂ．ウイックおよびＯ．ウイック；ヒアルロナンの流動学、ヒアルロナンおよびその誘導体の化学、生物学および医療用途（Ｔ．Ｃ．ローレント編）、第２５−３２頁、ポートランド・プレス、ロンドン（１９９８）］。従ってＨＡの２つの最も重要な物理的特徴はその粘度および分子寸法である。
【０００５】
細胞外マトリックスの主成分としてＨＡは人体の全部分に存在する。或る種の器官および組織（結合組織、皮膚、滑液、ガラス体液および血管壁）は増加量にてＨＡを含有する。ＨＡの生物学的役割はその物理的性質に由来すると長い間考えられていた。たとえば、これはその流動学的性質により関節に対し機械的保護を与えうる。その優秀な水結合能力に基づき、ＨＡはその浸透圧を介しおよび流動耐性を与えることにより、水バランスを調節することができる。更にＨＡは間質を充填すると共に種々異なる物理的衝撃から細胞を保護するという重要な役割を演ずる。最近の検討が示すところでは、人体に存在するＨＡと或る種の巨大分子との間の相互作用は数種の生理学的プロセスに結びつく。この種の巨大分子の例はプロテオグリカン（アグリカン、ベルシカン、ブレビカンなど）であって、細胞外マトリックスに位置すると共に細胞間の空間を占めて物質移動を容易化させるという主たる仕事を有する。ＨＡとの相互作用に入る巨大分子は細胞内の膜内外蛋白質（ＣＤ４４、ＲＨＡＭＭ）、並びにシトプラスムに存在するリセプト蛋白質（Ｃ１ｑ、Ｐ−３２，ＴＳＧ−６など）とすることができる。上記蛋白質を介し、ＨＡは細胞レベルもしくは人体レベルにて生ずる幾つかの調節プロセスに重要な役割を演ずる。
【０００６】
ＨＡの分子寸法および水溶液におけるその濃度は、物理的性質の場合と同様に、生物学的作用に対し相当な影響を有する。すなわち分子の寸法に応じ、ＨＡは同じ細胞プロセスに対しプラスもしくはマイナスの作用のいずれかを果たしうる。同様な作用の変化が、溶液のＨＡ濃度を変化させた場合にも見られた。所望の最適作用は明らかに、両パラメータを同時に考慮した際に達成することができる［Ｅ．Ａ．バラズス、ヒアルロナンおよびその誘導体の化学、生物学および医療用途（Ｔ．Ｃ．ローレント編）、第１８５−２０４頁、ポートランドプレス、ロンドン（１９９８）］。
【０００７】
ＨＡは上記生理学的プロセスにも参加するので治療の幾つかの分野（外傷治癒、慢性炎症の処置、眼科手術）にも使用して成功しうる。
【０００８】
ＨＡをヒト治療に適用しうる範囲は、上記範囲を越えて化学的に構造を改変することにより拡大することができる。この点に関し２つの主たる傾向が知られている。その１つによれば、脂肪族化合物（一般にジヒドラジド）を用いてヒドロゲルを形成させることにより、ＨＡ分子の２つの離間位置の間で架橋が達成させる。架橋は化学改変されたＨＡの粘弾性の増加を生ぜしめて、人体にて生ずる劣化作用に対し一層大きい耐性をもたらす。滑液を再取得すべく処置されるリューマチ性関節炎を有する患者につき或いは術後の接合を有する患者につき利点がある。他の重要な戦略においては、吸収し難い或いは作用位置まで特異的に移動し難い薬物はＨＡ（たとえばタキソール、ピロカルピン、インシュリン）に化学結合させる。これらの場合、ＨＡはＨＡに結合した活性薬物の向上した吸収をもたらすと共に、この物質がそれぞれ標的位置まで特異的に到達支援する。
【０００９】
亜鉛およびコバルトで形成されたＨＡの錯体が欧州特許第４１３０１６号明細書（ブルガー等、１９８９）に記載されており、これら２種のうち亜鉛−ＨＡが外傷処置のための組成物に活性薬物として使用される。活性薬物の更なる検討は、亜鉛の存在に基づき治療用途につき可能性が拡大されうることを示す。何故なら、亜鉛錯体はナトリウム−ＨＡ塩と比較して新たな或いは一層傑出した作用を有するからである［Ｊ．イレス等、Ａｃｔａ Ｐｈａｒｍ．Ｈｕｎｇ、第７２巻、第１５−２４頁（２００２）］。特に、この種の作用は亜鉛−ＨＡの酸化防止活性の増大［Ｇｙ．Ｔ．バローグ等、アーキテク．バイオケミカル．バイオフィジオロジー、第４１０巻、第７６−８２頁（２００３）］；浸襲細胞により増加量にて生成される組織損傷構造（マトリックス・メタロプロテナーゼ、特にＭＭＰ−９）に対する阻止作用である一方、ナトリウム−ＨＡは後者の作用を示さない（国際公開第００／５３１９４号パンフレット、イレス等、１９９９）。亜鉛−ＨＡの胃腸保護作用（消化性潰瘍の処置）が国際公開第９８／４８８１５号パンフレットに掲載された国際特許出願に開示されており、亜鉛−ＨＡ活性薬物の抗微生物作用が国際公開第９８／１０７７３号パンフレットに掲載された国際特許出願に記載されている。
【００１０】
多発性硬化症（ＭＳ）は中枢神経系の慢性自己免疫病である。この病気は先ず最初に１５歳と４０歳との間で出現し、婦人における発生の割合は２倍である［デュクエッテ等、カナディアン・ジャーナル・ニューロロジカル・サイエンス、第１９巻、第４６６−７１頁（１９９２）］。この病気の病理学は複雑であり、幾つかの面にて不明瞭である。遺伝的感受性および免疫学的プロセスの障害と言う明瞭な証拠も存在するが、環境因子（たとえば或る種のウィルス感染）の役割は不確定である［スチピンドンク等、ジャーナル・ニューロイミュノロジー、第１０５巻、第４６−５７頁（２０００）］。病気の臨床形態は大いに変化し、これら場合の殆どは再発性−寛解性型であり、全てが同じである。ＭＳ、すなわち感覚器官および運動器官、並びに自律神経系の障害により現れる神経退化症がゆっくり発現して精神および感情能力を阻害し、最終的に重度の不能をもたらす。組織病理学は最初に中枢神経系における炎症の中心を示し、この脱髄鞘および軸索の劣化が生ずる［エウイング等、イミュノロジカル・セル・バイオロジー、第７６巻、第４７−５４頁（１９９８）］。持続性の臨床徴候は髄鞘の劣化およびオリゴデンドロサイトの劣化により誘発されて複数の神経障害をもたらす［フュー等、ブレイン、第１２１巻、第１０３−１１３頁（１９９８）］。医薬における現在の知識状態によれば、ＭＳは治癒可能な病気である。日常の慣行において、病気の過程を変化させる非特異的免疫抑制物質（コルチコステロイド、シトスタティック剤）または一層特異的な組成物（β−インタフェロン、グラチラマーアセテート）が使用される。しかしながら、これら医薬の適用性は、効果の低さおよび重度の副作用により制限される。
【００１１】
現在まで１１種の薬剤が市販されており、これらは病気の過程を改変しうると共に臨床試験が２４種の組成物で行われている。２種の最も進歩した組成物、すなわちコパクソン（コポリマー−１またはグラチラマーアセテート）およびレビフもしくはアボネックス（インタフェロンβ−１ａ）、並びにインタフェロンβ−１ｂは病気の１つの形態（いわゆる良性もしくは再発性−感受性型）にのみ有益であり、病気の更なる形態は一次的および二次的進行型、並びに悪性ＭＳであり［オッテン等、多発性硬化症に対する薬剤処置の比較、オッタワ：カナディアン・コーディネイティング・オフィス・フォア・ヘルス・テクノロジー・アセスメント（１９９８）；パーキン等、ヘルス・テクノロジカル・アセスメント、第２（４）巻（１９９８）］、これらは約２０〜３０％だけ再発の頻度を減少させうる［カーン等、ＣＮＳドラッグス、第１６（８）巻、第５６３−５７８頁（２００２）］。更に組成物の両者は幾つかの望ましくない副作用を有する。インタフェロンβ−１を含有する組成物の場合、インフルエンザ様徴候、皮膚反応および腹部疼痛（皮下投与の結果として）が生じ更に血液ピクチャーの障害、肝臓酵素のレベル増大、並びに個人的障害も生じうる［エバー等、ランセット、第３５２巻、第１４９８−１５０４頁（１９９８）；ヤコブス等、多発性硬化症、第１巻、第１１８−１３５頁（１９９５）］。コポリマー−１の場合、最大の特徴的副作用はここでも皮膚反応および局部疼痛（皮下投与の結果として）が生じ、顔面の赤化、胸部における圧力、心悸亢進および呼吸過多も生じうる［ジョンソン等、ニューロロジー、第４５巻、第１２６８−１２７６頁（１９９５）；ボルンスタイン等、Ｎ．Ｅｎｇｌ．Ｊ．Ｍｅｄ、第３１７巻、第４０８−４１４頁（１９８７）］。これら薬剤は多かれ少なかれＣＮＳにて生ずる炎症（病気の一次形態）を減少させるが、これらは病気の進行に影響しない［クレッグ、ヘルス・テクノロジカル・アセスメント、第４（９）巻（２０００）］。
【００１２】
多発性硬化症の臨床検査の目的で用いうる唯一の充分かつ広範に使用されるモデルは実験的自己免疫エンセファロミエリチス（ＥＡＥ）［モクハタリアン等、ネイチャー、第３０９巻、第３５６−３５８頁（１９８４）；ライネ等、ラボラトリー・インベスティゲーション、第３１巻、第３６９−３８０頁（１９７４）］。すなわちＣＤ４＋Ｔ−リンパ球により伝達される中枢神経系の炎症病である。このモデルの臨床の複雑性は検査した病気と比較して中庸であるが、その使用はＭＳを目的とした研究にて不可避である。コポリマー−１（コパキソン）およびインタフェロンβ−１の臨床試験は既にヒト治療につき承認され、更に新規な薬剤の臨床試験が開発下にこのモデルを用いて行われた［ポポビック等、アニュアル・ニョーロロジー、第５１巻、第２１５−２２３頁（２００１）；ステンスラウス等、ニューロサイエンス・レタース、第３３３巻、第１６７−１７０頁（２００２）］。数種のＥＡＥモデルのうち、脱腎（すなわちＭＳの特徴）を試験すると共に免疫学的プロセスを検討する両者につき最も適すると証明されたのは慢性の再発性−寛解性型（ＣＲ ＥＡＥ）である。病気の臨床過程と同様に、ＣＲ ＥＡＥはＭＳに特に匹敵する［ウエケルレ等、アニュアル・ニューロロジー、第３６巻、第４７−５０頁（１９９４）］。この理由で、本発明の実験にてミエリン・オリゴデンドロサイト・グリコプロテイン（ＭＯＧ）により誘発されるＣＲ ＥＡＥがマウスで検討された［アモール等、ジャーナル・イミュノロジー、第１５３巻、第４３４９−４３５６頁（１９９４）］。１９６０年代の中頃、ヒアルロン酸ナトリウム塩の作用がローマ人の研究者によりＥＡＥモデルにつき検討された。彼らは、筋肉内投与されたＮａ−ＨＡ塩が阻害性でなく、或る場合にはウサギにてＥＡＥの発生を増長することを突き止めた［スザボ等、（１９６６）、Ｐａｔｏｌ．Ｆｉｚｉｏｌ．Ｅｋｓｐ．Ｔｅｒ．、第１０（５）巻、第４１−４４頁；モスコルシー等、（１９６５）、Ｓｔｕｄ．Ｃｅｒｃｅｔ．Ｎｅｕｒｏｌ、第１０（５）巻、第４９３−４９７頁）］。いずれも筋肉内もしくは経口投与された種々異なる亜鉛塩で行ったＥＡＥモデルにて検査の成功を示さなかった［シファー等、（１９９６）、Ｊ．Ｔｒａｃｅ．Ｅｌｅｍ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．、第９（１）巻、第１−９頁；ペンコワおよびヒダルゴ（２０００）、グリア、第３２（３）巻、第２４７−２６３頁］。
【００１３】
国際公開第９７／１１７１０号パンフレットに掲載された国際特許出願には、免疫学的プロセスに対する影響に関する試験が開示されている。これら試験はＮａ−ヒアルロン酸塩、ヒアルロン酸および種々異なる分子量を有するその結合体を用いる。特にマウスＴ−細胞の増殖、並びにグラフト対ホスト反応における阻止作用も検証され、ここでマウスの他の種類のドナーから採取された心筋組織のグラフトが使用された。多発性硬化症におけるそれぞれヒアルロン酸およびヒアルロン酸ナトリウムの可能な用途が明細書に挙げられているが、この仮説を支持する実験的証左は存在しない。更に本発明者等は、ヒアルロン酸とナトリウム塩（ヒアルロン酸ナトリウム）との間で形成された結合体を試験して上記記載をチェックしたが、この出願の表４に示されるようにＭＳにつき特異的であるＥＡＥモデルに対する影響は何ら示されなかった。
【００１４】
一方では従来技術の薬剤が有害な副作用を有すると共にＮａ−ＨＡ塩が無効果であることを考慮し、他方ではＺｎ−ＨＡ錯体が種々異なる治療分野にて有望な結果を与えることを考慮して、本発明の目的は特に匹敵しうるＥＡＥ動物モデルを用い、ＭＳにつきＺｎ−ＨＡ錯体を試験することであった。
【００１５】
驚くことに、Ｎａ−ＨＡおよびＺｎ２＋の両者は単独では無効果であったが、異なる分子量を有するＺｎ−ＨＡの種々の投与はモデル動物で誘発されるＥＡＥを阻止したことを突き止めた。最適条件におけるこの作用は顕著であった。
【００１６】
従って本発明は多発性硬化症を処置するための医薬組成物に関し、この組成物はヒアルロン酸亜鉛錯体、好ましくは８００〜１２００ｋＤａの分子量を有するヒアルロン酸亜鉛錯体を活性成分として含むと共に、医薬上許容しうるキャリアおよび／または添加剤を含むことを特徴とする。
【００１７】
本発明の他の課題は、ヒアルロン酸亜鉛錯体活性薬物を医薬に常用されるキャリアおよび／または添加剤と一緒に含有する混合物を形成させて組成物を得ることからなる医薬組成物の製造方法である。前記医薬組成物は好ましくは溶液、好適には注射もしくは還流のための溶液である。
【００１８】
本発明の更なる課題は、多発性硬化症を処置する医薬品の製造のためのヒアルロン酸亜鉛錯体の使用である。
【００１９】
本発明の更に他の課題は多発性硬化症の処置方法であり、ここでヒアルロン酸亜鉛錯体またはこれを含有する組成物の治療上有効量がこの種の処置を必要とする患者に投与される。前記処置は、たとえば８００〜１２００ｋＤａの分子量を有するヒアルロン酸亜鉛錯体を用いて静脈内投与を介し行うことができる。
【００２０】
本発明の実験において、種々異なる投与量における種々異なる分子量を有するＺｎ−ＨＡ錯体はＥＡＥモデルに投与されるサブカテイン（ｓ．ｃ．）であり、動物をＥＡＥが誘発された５日〜２２日間後に阻止作用につき試験した。すなわち４種の異なる平均分子量（１０、５０、２００および８００〜１２００ｋＤａ）のＺｎ−ＨＡ錯体（後者は、ここではＨＭＷと称する）を３種の異なる投与量（１、１０および５０ｍｇ／ｋｇ）で試験して、どの分子量およびどの投与量のＺｎ−ＨＡが選択種類のＥＡＥモデルにて最適作用を示すかを決定した。その結果を下表１に示す。
【００２１】
【表１】
【００２２】
阻止の程度および平均からの偏差の両者を考慮して、１０ｍｇ／ｋｇ投与量におけるＨＭＷ Ｚｎ−ＨＡ錯体が最も効果的であった（４１．３±７．１％阻止）。
【００２３】
次いで、臨床的徴候の出現時点に関するＨＭＷ Ｚｎ−ＨＡ（生理食塩水の２００μｌにおける１０ｍｇ／ｋｇ、皮下）の可能な作用を検討した。
【００２４】
２種類の処置を用いてマウスの群（ｎ＝６〜１０マウス／１群）につき試験を行った：（ｉ）予防、ここでは投与をＭＯＧの接種の５〜２２日間後に或いはその９−１０〜２８日間後に（表２および３には＃印で標識）投与を行い；更に（ｉｉ）治療処置、ここではＺｎ−ＨＡの投与をＥＡＥが誘発された１３〜２８日間後に行った（表２および３には＊印で標識）。
【００２５】
効果を確認するため、９回の独立した試験を表２および３に示した結果と共に行った。マウスには１０ｍｇ／ｋｇのＨＭＷ Ｚｎ−ＨＡをｓ．ｃ．にて毎日投与し、その臨床データをそれぞれＥＡＥが誘発された１０〜２８日後および５〜２２日後に得た。これらの結果を平均１日臨界データから計算して、平均合計臨床データ（ＡＳＣ）を得た。
【００２６】
【表２】
【００２７】
【表３】
【００２８】
表２および３は、１０ｍｇ／ｋｇ ｓ．ｃ．投与量におけるＨＭＷ Ｚｎ−ＨＡの投与により誘発ＥＡＥの重度の臨床徴候における顕著な阻止が達成され（４１．３±７．１％阻止および１２．１ＡＳＣ値がｐ＜０．００４にてマン−ホイットニーＵテストにより得られた）、更に臨床徴候の発生率も２２％だけ減少した（錯体につき６８．６％および対照につき８８％、ｔ試験によるｐ＜０．０１２にて）。他方、処置のタイミング（予防であるか或いは治療であるか）は、ＥＡＥにつき行われたＺｎ−ＨＡの作用にて顕著な変化を生じなかった。
【００２９】
前記諸実験にて、本発明者等はＨＭＷ Ｚｎ−ＨＡとは異なり１０ｍｇ／ｋｇのＨＭＷ Ｚｎ−ＨＡ（すなわち０．８ｍｇ／ｋｇのＺｎ２＋）に相当する量にてＺｎ２＋を含有する塩化亜鉛がＥＡＥモデルにつき顕著な効果を示さなかったことを突き止めた。更に本出願の導入部分にも記載したように、Ｎａ−ＨＡも示さなかった（その結果については下表４参照）。
【００３０】
【表４】
【００３１】
本発明によるＺｎ−ＨＡ錯体活性薬物を含有する医薬組成物は通常の慣用ルートにて（たとえば経口的、非経口的、経口粘膜を介し、舌下、鼻粘膜を介し、肛門経由、経皮、静脈内（還流）または筋肉内）で投与することができる。経口投与の目的の医薬組成物は液体または固体、たとえばシロップ、懸濁液、乳液、錠剤、カプセルおよびロゼンジの形態とすることができる。たとえば懸濁液もしくは溶剤のような液体組成物は、適する液体キャリア中に（たとえば水性溶剤（たとえば水、エタノールもしくはグリセリン）中に或いは非水性溶剤（たとえばポリエチレングリコールもしくはオイルまたはその混液）中にＺｎ−ＨＡ錯体活性成分を含有する。この組成物は更に懸濁剤、保存料、香料もしくは着色料をも含有することができる。医薬組成物を錠剤の形態で作成する場合、固体組成物の作成につき便利に使用される適するキャリヤを使用することができる。この種のキャリアの例はステアリン酸マグネシウム、澱粉、乳糖、蔗糖、セルロースなどである。
【００３２】
カプセル形態の固体組成物はそれ自体公知の方法で作成することができる。たとえば、活性成分を公知のキャリアと一緒に含有するピルを硬質ゼラチンカプセルに充填することができ、或いは活性薬物と医薬品に便利に使用される任意のキャリア（たとえばアラビヤゴム、セルロース、シリケートもしくはオイル）との分散物もしくは懸濁物を軟質ゼラチンにカプセル化することができる。
【００３３】
典型的な非経口組成物は、Ｚｎ−ＨＡ錯体と非経口用途につき許容しうる無菌の水性キャリアもしくはオイル（たとえばポリエチレングリコール、ポリビニルピロリドン、レシチン、アラキ油（ピーナッツ油）およびごま油）とを含有する溶液もしくは懸濁液である。他の方式によれば、得られる溶液を凍結させると共に使用直前に適する溶剤に再溶解させる。
【００３４】
鼻粘膜を介し投与するための組成物はエアロゾル、ドロップ、ゲルもしくはダストを与えるべく、それ自体公知の方法で処方される。エアロゾル組成物は活性成分を医薬上許容しうる水性もしくは非水性溶剤に活性成分を溶解型または微分散型にて含有し、次いでこれを無菌条件下で容器に充填する。前記容器はノズルを装着したカセットもしくは容器とすることができ、単一量もしくは複数量を含有することができる。口腔粘膜を介し投与するための或いは舌下吸収させるための組成物は錠剤、ピルもしくはパスチル型とすることができる。これら組成物は活性成分をたとえば砂糖、アラビヤゴム、トラガカントガム、ゼラチン、グリセリンなどのようなキャリアと一緒に含有する。
【００３５】
肛門用途のための組成物は座薬の形態でそれ自体公知の方法にて作成され、これは活性成分の他にキャリア（一般にココア脂）をも含有する。塗布用途の組成物はたとえば軟膏、ゲルおよびプラスタである。
【００３６】
検査の目的で、Ｚｎ−ＨＡ活性薬物を生理食塩水に溶解させると共に０．１〜５ｍｇ／ｍｌの濃度範囲にて使用した。
【００３７】
更に、緩衝液により生理学上許容しうる数値に維持されたｐＨにて生理学上許容しうる濃度でＺｎ−ＨＡ活性成分を含有する水溶液を使用することができる。生理学上許容しうると共に活性成分が適正に可溶性である他の非水性溶剤も使用することができる。この種の溶剤の例はエタノール、プロピレングリコール、動物および植物油など、並びにその水性混液である。この種の溶液はＺｎ−ＨＡを０．０１〜１００重量％の濃度範囲にて含有することができる。
【００３８】
活性成分の能力に対し直接的影響を持たない添加剤も用いることができる。この種の添加剤の例は緩衝溶液、保存料および吸収を支援する添加剤である。水溶性保存量の例は重亜硫酸ナトリウム、重硫酸ナトリウム、チオ硫酸ナトリウム、塩化ベンズアルコニウム、クロルブタノール、チメロサール、メチルパラデン、ポリビニルアルコール、フェニルエチルアルコールなどである。水溶液におけるこの種の添加剤の濃度は０．００１〜５重量％とすることができる。水溶性緩衝剤の例は炭酸ナトリウム、硼酸ナトリウム、燐酸ナトリウム、酢酸ナトリウム、重炭酸ナトリウムなどである。水溶液におけるこれら添加剤の最大濃度は、活性成分の濃度と比較して５重量％とすることができる。
【００３９】
実施例１
表１〜４に要約した検討において、ＥＡＥモデルとして使用した各マウスには２００μｌ ｓ．ｃ．の注射をそれぞれ接種し、注射液は活性成分もしくはキャリア（０．９％塩化ナトリウム水溶液）を含有した。ｍｇ／ｋｇ（体重）にて投与する投与量を得るため、種々異なる濃度の上記溶液を次のように作成した：
１ｍｇ／ｋｇ投与量につき：
１０００ｍｌの溶液当たり０．１ｇの活性成分（Ｚｎ−ＨＡ錯体、Ｎａ−ＨＡもしくはＺｎ−Ｃｌ２）を含有する溶液組成物を作成した；たとえば
０．１ｇのＺｎ−ＨＡ錯体、および
１０００ｍｌまでの蒸留水における０．９％の塩化ナトリウム溶液。
１０ｍｇ／ｋｇ投与量につき：
１０００ｍｌの溶液当たり１．０ｇの活性成分（Ｚｎ−ＨＡ錯体、Ｎａ−ＨＡもしくはＺｎ−Ｃｌ２）を含有する溶液組成物；たとえば
１．０ｇのＺｎ−ＨＡ錯体、および
１０００ｍｌまでの蒸留水における０．９％の塩化ナトリウム溶液。
５０ｍｇ／ｋｇ投与量につき：
１０００ｍｌの溶液当たり５．０ｇの活性成分（Ｚｎ−ＨＡ錯体、Ｎａ−ＨＡもしくはＺｎ−Ｃｌ２）を含有する溶液組成物；たとえば
５．０ｇのＺｎ−ＨＡ錯体、および
１０００ｍｌまでの蒸留水における０．９％の塩化ナトリウム溶液。
【特許請求の範囲】
【請求項１】
ヒアルロン酸亜鉛錯体を単独でまたは医薬上許容しうるキャリアおよび／または添加剤と一緒に含むことを特徴とする多発性硬化症の処置のための医薬組成物。
【請求項２】
ヒアルロン酸亜鉛錯体が８００〜１２００ｋＤａの分子量を有する請求項１に記載の医薬組成物。
【請求項３】
溶液の形態である請求項１または２に記載の医薬組成物。
【請求項４】
好ましくは皮下、筋肉内もしくは静脈内投与のための注射液の形態である請求項３に記載の医薬組成物。
【請求項５】
ヒアルロン酸亜鉛錯体活性薬物を医薬に常用されるキャリアおよび／または添加剤と一緒に含有する混合物を形成させて組成物を得ることを特徴とする医薬組成物の製造方法。
【請求項６】
作成される医薬組成物が溶液である請求項５に記載の方法。
【請求項７】
作成される医薬組成物が注射液もしくは還流液である請求項５に記載の方法。
【請求項８】
ヒアルロン酸亜鉛錯体またはこれを医薬上許容しうるキャリアおよび／または添加剤と一緒に含有する医薬組成物の多発性硬化症を処置するための使用。
【請求項１】
ヒアルロン酸亜鉛錯体を単独でまたは医薬上許容しうるキャリアおよび／または添加剤と一緒に含むことを特徴とする多発性硬化症の処置のための医薬組成物。
【請求項２】
ヒアルロン酸亜鉛錯体が８００〜１２００ｋＤａの分子量を有する請求項１に記載の医薬組成物。
【請求項３】
溶液の形態である請求項１または２に記載の医薬組成物。
【請求項４】
好ましくは皮下、筋肉内もしくは静脈内投与のための注射液の形態である請求項３に記載の医薬組成物。
【請求項５】
ヒアルロン酸亜鉛錯体活性薬物を医薬に常用されるキャリアおよび／または添加剤と一緒に含有する混合物を形成させて組成物を得ることを特徴とする医薬組成物の製造方法。
【請求項６】
作成される医薬組成物が溶液である請求項５に記載の方法。
【請求項７】
作成される医薬組成物が注射液もしくは還流液である請求項５に記載の方法。
【請求項８】
ヒアルロン酸亜鉛錯体またはこれを医薬上許容しうるキャリアおよび／または添加剤と一緒に含有する医薬組成物の多発性硬化症を処置するための使用。
【公表番号】特表２００７−５１２３１１（Ｐ２００７−５１２３１１Ａ）
【公表日】平成１９年５月１７日（２００７．５．１７）
【国際特許分類】
【出願番号】特願２００６−５４０６３４（Ｐ２００６−５４０６３４）
【出願日】平成１６年１１月１８日（２００４．１１．１８）
【国際出願番号】ＰＣＴ／ＨＵ２００４／０００１０７
【国際公開番号】ＷＯ２００５／０４９０４７
【国際公開日】平成１７年６月２日（２００５．６．２）
【出願人】（５９１１８０３１４）リヒター ゲデオン ベジェセティ ジャール アール．テー． (33)
【Ｆターム（参考）】
【公表日】平成１９年５月１７日（２００７．５．１７）
【国際特許分類】
【出願日】平成１６年１１月１８日（２００４．１１．１８）
【国際出願番号】ＰＣＴ／ＨＵ２００４／０００１０７
【国際公開番号】ＷＯ２００５／０４９０４７
【国際公開日】平成１７年６月２日（２００５．６．２）
【出願人】（５９１１８０３１４）リヒター ゲデオン ベジェセティ ジャール アール．テー． (33)
【Ｆターム（参考）】
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