子宮障害を処置するためのクロストリジウム神経毒
【課題】子宮組織、例えば過形成性組織などの異型性組織、筋腫および子宮新生物（腫瘍および癌を含む）の処置、発生防止および退行もしくは寛解、ならびに、良性および癌性の子宮障害の処置、ならびに過形成性および／または高張性子宮腺細胞の処置のための手段の提供。
【解決手段】ボツリヌス毒素を患部子宮組織またはその近傍に局所投与することにより、過形成性、高張性、嚢胞性および／または新生物性の子宮腺組織を包含する子宮障害を処置する。
【解決手段】ボツリヌス毒素を患部子宮組織またはその近傍に局所投与することにより、過形成性、高張性、嚢胞性および／または新生物性の子宮腺組織を包含する子宮障害を処置する。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、子宮障害を処置する方法に関する。本発明はとりわけ、子宮腺障害をボツリヌス毒素で処置する方法に関する。
【０００２】
本発明の目的は、子宮組織、例えば過形成性組織などの異型性組織、筋腫および子宮新生物（腫瘍および癌を含む）を処置することである。本発明の他の目的は、異型性子宮組織、筋腫および新生物の発生を防止すること、または異型性組織、筋腫および新生物の退行もしくは寛解を引き起こすことである。本発明の更なる目的は、患部子宮組織またはその近傍にクロストリジウム毒素を局所投与することによって、良性および癌性の子宮障害を処置すること、ならびに過形成性および／または高張性子宮腺細胞を処置することである。
【背景技術】
【０００３】
子宮は、腺組織の顕著な中空筋肉器官である。卵巣から放出された卵子は卵管を経て子宮に達し、受精した場合は、子宮の腺性内膜である子宮内膜に着床する。子宮頸管が、膣から子宮頸（子宮の下部）を経て子宮体に至る。子宮の頂部は子宮底である（卵管の間の部分）。子宮筋層は、子宮の筋肉壁である。
【０００４】
過形成性子宮組織は、処置しないと、癌性組織に発展しうることが知られている。例えば、非特許文献１を参照されたい。さらに、次のようなことも知られている：さまざまな過形成性、化生性または異型性乳房組織は癌に発展する場合がある（例えば、以下に詳しく述べる非特許文献２、ならびに非特許文献３などを参照されたい）；ポリープなどの過形成性腸組織は癌化して癌腫になる場合がある（例えば、非特許文献４を参照されたい）；口腔および中咽頭上皮過形成は前癌性病変を示す（非特許文献５）；腎臓および前立腺細胞過形成は、癌性細胞の発生につながる要因であることが実証されている（非特許文献６）。
【０００５】
よく見られる子宮癌には、子宮頸癌および子宮内膜癌がある。子宮内膜癌は50〜70歳の女性に多く、妊娠経験のない女性に特に多い。子宮内膜癌の通常の症状は、閉経後の膣からの出血である。生検または内膜掻爬によって診断ができる。
【０００６】
子宮頸癌は、長い年月を経て増殖しうる。そうなる前に、子宮頸細胞に初期変化が生じうる。この異常な非癌性の細胞（癌性となりうる）は、頸部上皮内腫瘍（CIN）または細胞核異常と呼ばれる。
【０００７】
子宮の平滑筋腫瘍は、粘膜下、筋層内および漿膜下の平滑筋腫（筋腫）でありうる。子宮の平滑筋腫（筋腫）は、女性生殖器の最も一般的な病理学的異常の一つである。筋腫は通例、子宮の筋肉内（筋層内）に多く、その大きさまたは位置によって、子宮内膜を侵して出血を起こすことがある。子宮筋腫は女性の約２５％に起こり、次のような場合は処置を要する：（ａ）その位置および大きさによって不正子宮出血を起こし、それをホルモン療法、または子宮鏡検査および子宮内膜掻爬術による子宮内部からのポリープ様筋腫（粘膜下）の除去によってコントロールできない場合；（ｂ）それが非常に大きく（通例ソフトボール大またはそれ以上）、骨盤圧、膀胱もしくは直腸圧または骨盤圧迫感の症状をもたらす場合；（ｃ）それが、ある位置（通例、卵巣の近傍）に存在するか、または増殖が速く悪性の疑いがある場合；（ｄ）血液供給が損なわれるために繰り返し痛みが起こる場合；（ｅ）筋腫が子宮内膜腔の歪みをもたらし、患者が妊娠中の問題を抱えるかまたは流産を繰り返す場合。
【０００８】
筋腫の位置は様々である。筋腫は筋層内に生じることが最も多く、子宮体部の不正な拡大によって発覚する。この筋腫はその経過において遅かれ早かれ子宮の表面から拡張して漿膜下筋腫となりうる。あるいは筋腫は子宮内膜腔に突出し子宮内膜腔を歪めることもある。粘膜下筋腫は、子宮内膜腔に突出し、拡大して、筋腫上に粘膜を拡張するために、粘膜下組織がなくなり、被っている内膜が潰瘍を起こしうるものである。粘膜下筋腫は必ずしも、臨床的出血を起こすかまたは受胎および正常妊娠を妨げるものではないが、この種の顕著な症候的障害が伴い、月経過多、貧血、骨盤痙攣痛、感染、不妊および流産ほか、一般に見られる障害が起こることは確かである。
【０００９】
筋腫切除術は、子宮を取り去ることなく筋腫を除去する。腹腔鏡筋腫切除術では、腹腔鏡を用いて、臍および腹部を通して有茎漿膜下筋腫を除去する。子宮鏡筋腫切除術では、子宮鏡を用いて、粘膜下筋腫を膣を通して除去する。腹壁切開（腹式筋腫切除術）では、腹部切開によって筋腫をその位置、大きさまたは数にかかわらず除去することができる。腹腔鏡筋腫切除術では、腹腔鏡のみで対処できるものよりも少し大きい漿膜下筋腫を除去することができ、通例、３インチまたはそれ以下の比較的小さい腹部切開を伴う。
【００１０】
腹腔鏡補助膣式筋腫摘出術（LAVM）では、腹腔鏡を用い、膣切開による筋腫全摘によって、漿膜下筋腫を子宮から除去することができる。子宮筋腫塞栓術（UFE、子宮動脈塞栓術UAEとしても知られる）は、インターベンショナル・ラジオロニスト（IR）によって行われる、殆んど非侵襲的な非外科的手術である。この手術では、カテーテルを動脈に挿入し、子宮まで導く。そして小さい粒子を動脈内に放射する。この粒子が、筋腫への血液供給を遮断する。
【００１１】
筋融解では、手術器具を腹腔鏡切開部から腹部に挿入し、高周波電流を筋腫に通す。この電流が血管を収縮させ（非常に細く、または閉塞させ）、それ故基本的に筋腫への血流を遮断する。筋腫はその場に残され、外科的に除去されない。血液供給がなければ、筋腫は結果的に死滅および収縮する。
【００１２】
子宮摘出術には主として三つの形態がある。亜全摘、全摘、および広汎子宮全摘である。亜全摘では、子宮の摘出のみ行う。骨盤構造靭帯は切らず、子宮頸を元の位置に残す。卵管および卵巣は摘出する場合としない場合がある。この手術は常に、腹部から行われる。
【００１３】
全摘の場合は、子宮体と、子宮の下部である子宮頸との両方を摘出する。これは膣を通して行われることもあるが（膣式摘出術）、それ以外の場合は腹部の外科的切開により行うことが好ましい。全摘および両側卵管卵巣摘除術では、子宮および子宮頸と共に卵巣および卵管も摘出される。
【００１４】
広汎子宮全摘の場合は、子宮全体と、通例、卵管および卵巣の両方、ならびに骨盤リンパ節が、腹部を通して摘出される。
【００１５】
直接的な手術の危険性があることに加えて、長期にわたる身体的および心理的影響（抑うつ、および性的快楽の欠如を包含しうる）がもたらされうる。閉経前に子宮と共に卵巣を取り去った場合、骨粗鬆症および心臓疾患の危険性も高まる。
【００１６】
子宮摘出および子宮筋腫切除の手術の危険性としては、発熱、膀胱感染および創傷感染が挙げられる。術前に貧血のために、または術中に失血のために、輸血が必要でありうる。麻酔に関連する合併症が起こりうる。他の合併症としては、凝血、術後出血、腸閉塞、尿路障害および死亡を挙げることができる（子宮摘出１００００例当たり１１人の女性が死亡している）。
【００１７】
臨床的に検出できない子宮癌細胞が癌の局所切除後も残っている可能性があるので、局所腫瘍制御のために放射線療法が通例行われる。放射線療法は、大きい子宮腫瘍を縮小させて、それらをより容易に切除できるようにするために、手術前に使用することもできる。緩和的放射線療法は、骨転移の疼痛を軽減するために、また脳などの他の部位への転移の症候管理に、よく用いられる。子宮への放射線治療の間およびその直後は、疲労、皮膚反応、皮膚の感覚、色および肌理の変化、ならびに子宮腫脹がよくみられる。
【００１８】
化学療法、ホルモン療法、またはそれら2つの組合せは、転移性子宮疾患の作用を一時的に軽減するために使用することができる。補助化学療法および／または補助ホルモン療法に関する勧告は、通常は、陽性腋窩リンパ節の数、閉経状態、原発腫瘍の大きさ、およびエストロゲン受容体アッセイに基づく。最もよく使用される化学療法剤は、アルキル化剤、代謝拮抗薬、抗腫瘍性抗生物質（ヘルセプチン）およびビンカアルカロイドである。ホルモン操作は主としてホルモン遮断薬によって行われ、まれに、性ホルモン産生腺の外科的除去（卵巣切除術、副腎切除術、または下垂体切除術）によって行われる。抗エストロゲンであるタモキシフェンは最も広く用いられているホルモン剤である。ER／PR陰性患者および／またはタモキシフェンが無効な患者には、現在、フェマラやアリミデックスなどの第二選択ホルモン剤を使用することができる。残念ながら、子宮癌の化学療法には、疲労、体重増加、悪心、嘔吐、脱毛症、食欲障害および味覚障害、ニューロパシー、下痢、骨髄抑制、閉経症状、脱毛および体重増加などの有害な副作用が数多く伴いうる。また、第一選択薬であるタモキシフェンは、子宮癌と凝血の危険を増大させる。
【００１９】
ボツリヌス毒素
嫌気性グラム陽性細菌であるボツリヌス菌（Clostridium botulinum）は、ボツリヌス中毒と呼ばれる神経麻痺性障害をヒトおよび動物において引き起こす強力なポリペプチド神経毒であるボツリヌス毒素を産生する。ボツリヌス菌の胞子は土壌中に見出され、滅菌と密閉が不適切な零細缶詰工場の食品容器内で成長する可能性があり、これが多くのボツリヌス中毒症例の原因である。ボツリヌス中毒の影響は、通例、ボツリヌス菌の培養物または胞子で汚染された食品を飲食した18時間後〜36時間後に現れる。ボツリヌス毒素は、消化管内を弱毒化されないで通過することができ、そして末梢運動ニューロンを攻撃することができるようである。ボツリヌス毒素中毒の症状は、歩行困難、嚥下困難および会話困難から、呼吸筋の麻痺および死にまで進行し得る。
【００２０】
A型ボツリヌス毒素は、人類に知られている最も致死性の天然の生物学的物質である。A型ボツリヌス毒素（精製された神経毒複合体）（BOTOX（登録商標）の商標でAllergan，Inc．（カリフォルニア州アービン）から入手可能である）の約50ピコグラムがマウスにおけるLD50である。1単位（U）のボツリヌス毒素は、それぞれが18グラム〜20グラムの体重を有するメスのSwiss Websterマウスに腹腔内注射されたときのLD50として定義される。7種類の血清学的に異なるボツリヌス神経毒が特徴付けられており、これらは、型特異的抗体による中和によってそのそれぞれが識別されるボツリヌス神経毒血清型A、B、C1、D、E、FおよびGである。ボツリヌス毒素のこれらの異なる血清型は、それらが冒す動物種、ならびにそれらが惹起する麻痺の重篤度および継続時間が異なる。例えば、A型ボツリヌス毒素は、ラットにおいて生じる麻痺率により評価された場合、B型ボツリヌス毒素よりも500倍強力であることが確認されている。また、B型ボツリヌス毒素は、霊長類では480U/kgの投与量で非毒性であることが確認されている。この投与量は、A型ボツリヌス毒素の霊長類LD50の約12倍である。ボツリヌス毒素は、コリン作動性の運動ニューロンに大きな親和性で結合して、ニューロンに移動し、アセチルコリンの放出を阻止するようである。
【００２１】
ボツリヌス毒素は、活動過多な骨格筋によって特徴付けられる神経筋障害を処置するために臨床的状況において使用されている。A型ボツリヌス毒素は、眼瞼痙攣、斜視、片側顔面痙攣および頸部ジストニーを処置するために米国食品医薬品局によって承認されている。A型以外のボツリヌス毒素血清型は、A型ボツリヌス毒素と比較した場合、効力が弱く、かつ／または活性の継続時間が短いようである。末梢筋肉内A型ボツリヌス毒素の臨床的効果は、通常、注射後1週間以内に認められる。A型ボツリヌス毒素の単回筋肉内注射による症候緩和の典型的な継続時間は平均して約3ヶ月である。
【００２２】
すべてのボツリヌス毒素血清型が神経筋接合部における神経伝達物質アセチルコリンの放出を阻害するようであるが、そのような阻害は、種々の神経分泌タンパク質に作用し、かつ／またはこれらのタンパク質を異なる部位で切断することによって行われる。例えば、A型ボツリヌス毒素およびE型ボツリヌス毒素はともに25キロダルトン（kD）のシナプトソーム会合タンパク質（SNAP-25）を切断するが、これらの毒素は、このタンパク質内の異なるアミノ酸配列を標的とする。B型、D型、F型およびG型のボツリヌス毒素は小胞会合タンパク質（VAMP、これはまたシナプトブレビンとも呼ばれる）に作用し、それぞれの血清型によってこのタンパク質は異なる部位で切断される。最後に、C1型ボツリヌス毒素は、シンタキシンおよびSNAP-25の両者を切断することが明らかにされている。作用機序におけるこれらの相違が、様々なボツリヌス毒素血清型の相対的な効力および／または作用の継続時間に影響していると考えられる。
【００２３】
ボツリヌス毒素タンパク質分子の分子量は、既知のボツリヌス毒素血清型の7つのすべてについて約150kDである。興味深いことに、これらのボツリヌス毒素は、会合する非毒素タンパク質とともに150kDのボツリヌス毒素タンパク質分子を含む複合体としてクロストリジウム属細菌によって放出される。例えば、A型ボツリヌス毒素複合体は、900kD、500kDおよび300kDの形態としてクロストリジウム属細菌によって産生され得る。B型およびC1型のボツリヌス毒素は500kDの複合体としてのみ産生されるようである。D型ボツリヌス毒素は300kDおよび500kDの両方の複合体として産生される。最後に、E型およびF型のボツリヌス毒素は約300kDの複合体としてのみ産生される。これらの複合体（すなわち、約150kDよりも大きな分子量）は、非毒素のヘマグルチニンタンパク質と、非毒素かつ非毒性の非ヘマグルチニンタンパク質とを含むと考えられる。これらの2つの非毒素タンパク質（これらは、ボツリヌス毒素分子とともに、関連する神経毒複合体を構成する）は、変性に対する安定性をボツリヌス毒素分子に与え、そして毒素が摂取されたときに消化酸からの保護を与えるように作用すると考えられる。また、より大きい（分子量が約150kDよりも大きい）ボツリヌス毒素複合体は、ボツリヌス毒素複合体の筋肉内注射部位からのボツリヌス毒素の拡散速度を低下させ得ると考えられる。
【００２４】
インビトロでの研究により、ボツリヌス毒素が、脳幹組織の初代細胞培養物からのアセチルコリンおよびノルエピネフリンの両方の、カリウムカチオンにより誘導される放出を阻害することが示されている。また、ボツリヌス毒素は、脊髄ニューロンの初代培養物におけるグリシンおよびグルタメートの両方の誘発された放出を阻害すること、そして脳のシナプトソーム調製物において、ボツリヌス毒素が神経伝達物質のアセチルコリン、ドーパミン、ノルエピネフリン、CGRPおよびグルタメートのそれぞれの放出を阻害することが報告されている。
【００２５】
A型ボツリヌス毒素は、既知の手順に従って、培養槽におけるボツリヌス菌の培養を確立して、生育させ、その後、発酵混合物を集め、精製することによって得ることができる。すべてのボツリヌス毒素血清型は、神経活性となるためにはプロテアーゼによって切断またはニッキングされなければならない不活性な単鎖タンパク質として最初に合成される。A型およびG型のボツリヌス毒素血清型を産生する細菌株は内因性プロテアーゼを有するので、A型およびG型の血清型は細菌培養物から主にその活性型で回収することができる。これに対して、C1型、D型およびE型のボツリヌス毒素血清型は非タンパク質分解性菌株によって合成されるので、培養から回収されたときには、典型的には不活性型である。B型およびF型の血清型はタンパク質分解性菌株および非タンパク質分解性菌株の両方によって産生されるので、活性型または不活性型のいずれでも回収することができる。しかし、例えば、B型ボツリヌス毒素を産生するタンパク質分解性菌株でさえも、産生された毒素の一部を切断するだけである。
【００２６】
切断型分子と非切断型分子との正確な比率は培養時間の長さおよび培養温度に依存する。したがって、例えばB型ボツリヌス毒素の製剤はいずれも一定割合が不活性であると考えられ、このことが、A型ボツリヌス毒素と比較したB型ボツリヌス毒素の知られている著しく低い効力の原因であると考えられる。臨床製剤中に存在する不活性なボツリヌス毒素分子は、その製剤の総タンパク質量の一部を占めることになるが、このことはその臨床的効力に寄与せず、抗原性の増大に関連づけられている。また、B型ボツリヌス毒素は、筋肉内注射された場合、同じ用量レベルのA型ボツリヌス毒素よりも、活性の継続期間が短く、そしてまた効力が低いことも知られている。
【００２７】
A型ボツリヌス毒素は下記のような臨床的状況において使用されていることが報告されている：
（1）頸部ジストニーを処置するための筋肉内注射（多数の筋肉）あたり約75単位〜125単位のBOTOX（登録商標）；
（2）眉間のしわを処置するための筋肉内注射あたり約5単位〜10単位のBOTOX（登録商標）（5単位が鼻根筋に筋肉内注射され、10単位がそれぞれの皺眉筋に筋肉内注射される）；
（3）恥骨直腸筋の括約筋内注射による便秘を処置するための約30単位〜80単位のBOTOX（登録商標）；
（4）上瞼の外側瞼板前部眼輪筋および下瞼の外側瞼板前部眼輪筋に注射することによって眼瞼痙攣を処置するために筋肉あたり約1単位〜5単位の筋肉内注射されるBOTOX（登録商標）；
【００２８】
（5）斜視を処置するために、外眼筋に、約1単位〜5単位のBOTOX（登録商標）が筋肉内注射されている。この場合、注射量は、注射される筋肉のサイズと所望する筋肉麻痺の程度（すなわち、所望するジオプター矯正量）との両方に基づいて変化する。
（6）卒中後の上肢痙性を処置するために、下記のように5つの異なる上肢屈筋にBOTOX（登録商標）が筋肉内注射される：
（a）深指屈筋：7.5U〜30U
（b）浅指屈筋：7.5U〜30U
（c）尺側手根屈筋：10U〜40U
（d）橈側手根屈筋：15U〜60U
（e）上腕二頭筋：50U〜200U。5つの示された筋肉のそれぞれには同じ処置時に注射されるので、患者には、それぞれの処置毎に筋肉内注射によって90U〜360Uの上肢屈筋BOTOX（登録商標）が投与される。
【００２９】
様々な臨床的状態を処置するためにA型ボツリヌス毒素が成功していることにより、他のボツリヌス毒素血清型が注目されている。2つの市販のA型ボツリヌス毒素製剤（BOTOX（登録商標）およびDysport（登録商標））ならびにB型およびF型のボツリヌス毒素の製剤（ともにWako Chemicals（日本）から得られる）の研究が、局所的な筋肉弱化効能、安全性および抗原性を明らかにするために行われた。ボツリヌス毒素製剤が右腓腹筋の頭部に注射（0.5単位／kg〜200.0単位／kg）され、筋肉の弱さが、マウスの指外転評価アッセイ（DAS）を使用して評価された。ED50値を用量応答曲線から計算した。さらなるマウスには、LD50量を決定するために筋肉内注射が行われた。治療指数をLD50／ED50として計算した。別のマウス群には、BOTOX（登録商標）（5.0単位／kg〜10.0単位／kg）またはB型ボツリヌス毒素（50.0単位／kg〜400.0単位／kg）が後肢に注射され、そして筋肉の弱さおよび増大した水の消費が調べられた。後者は、口渇の推定的なモデルである。抗原性は、ウサギに毎月筋肉内注射することによって評価された（B型ボツリヌス毒素については1.5ng／kgまたは6.5ng／kg、あるいはBOTOX（登録商標）については0.15ng／kg）。
【００３０】
最大筋肉弱さおよび継続期間はすべての血清型について用量に関連していた。水の消費は、B型ボツリヌス毒素が注射されたマウスが、BOTOX（登録商標）の場合よりも大きかったが、B型ボツリヌス毒素は、筋肉を弱くさせることにおいては効果が低かった。注射した4ヶ月後、4羽のうち2羽（1.5ng／kgで処置された場合）および4羽のうち4羽（6.5ng／kgで処置された場合）のウサギがB型ボツリヌス毒素に対する抗体を生じた。別の研究において、BOTOX（登録商標）で処置された9羽のウサギはどれも、A型ボツリヌス毒素に対する抗体を示さなかった。
【００３１】
DASの結果は、A型ボツリヌス毒素の相対的な最大効力がF型ボツリヌス毒素と同等で、F型ボツリヌス毒素の効力はB型ボツリヌス毒素よりも大きいことを示している。効果の継続期間については、A型ボツリヌス毒素はB型ボツリヌス毒素よりも大きく、B型ボツリヌス毒素の効果継続期間はF型ボツリヌス毒素よりも大きかった。治療指数値により示されるように、A型ボツリヌス毒素の2つの市販製剤（BOTOX（登録商標）およびDysport（登録商標））は異なる。B型ボツリヌス毒素を後肢に注射した後に認められる増大した水消費の挙動は、この血清型の臨床的に有意な量がネズミの全身循環に入ったことを示している。これらの結果はまた、A型ボツリヌス毒素と匹敵し得る効力を達成するためには、それ以外の調べられた血清型の量を増大する必要があることを示している。投薬量の増大は安全性を損なう可能性がある。さらに、ウサギにおいて、B型はBOTOX（登録商標）よりも抗原性が大きかった。これは、おそらくは、B型ボツリヌス毒素の効果的な用量を達成するために、より多量のタンパク質が注射されたためである。
【００３２】
ボツリヌス毒素を処置に使用することが知られている：蜘蛛膜下痛（例えば、特許文献１参照）；傍神経節腫（例えば、特許文献２参照）；耳疾患（例えば、特許文献３参照）；膵臓疾患（例えば、特許文献４および特許文献５参照）；偏頭痛（例えば、特許文献６参照）；平滑筋疾患（例えば、特許文献７参照）；前立腺肥大を含む前立腺疾患（例えば、特許文献８および非特許文献７参照）；過形成汗腺を含む自律神経疾患（例えば、特許文献９参照）；創傷治癒（例えば、特許文献１０参照）；脱毛軽減（例えば、特許文献１１参照）；皮膚病変（例えば、特許文献１２参照）；ならびに神経性炎症性疾患（例えば、特許文献１３参照）。特許文献１３は6欄39-42行に、炎症性関節症状、色素性絨毛結節性滑膜炎、およびある種の関節癌、滑膜細胞肉腫の処置を大ざっぱに開示している。特許文献１３の6欄53行にはまた、更なる説明なしに、「腫瘍」が処置できると開示されている。
【００３３】
更に、標的化ボツリヌス毒素（すなわち天然でない結合部分を持つもの）を種々の状態の処置に使用できることが開示されている（例えば、特許文献１４、ならびに特許文献１５;特許文献１６;特許文献１７;特許文献１８;特許文献１９;特許文献２０参照）。
【００３４】
ボツリヌス毒素が、胸部痙攣の抑制のために胸筋に注射されている。例えば非特許文献８参照。
【００３５】
液体の安定な製剤および純粋なボツリヌス毒素製剤のいずれも開示されており（例えば、特許文献２１および特許文献２２参照）、ボツリヌス毒素の局所適用も開示されている（例えば、特許文献２３参照）。
【００３６】
アセチルコリン
典型的には、または通常は、単一タイプの小分子の神経伝達物質のみが、哺乳動物の神経系において各タイプのニューロンによって放出される。神経伝達物質アセチルコリンが脳の多くの領域においてニューロンによって分泌されているが、具体的には運動皮質の大錐体細胞によって、基底核におけるいくつかの異なるニューロンによって、骨格筋を神経支配する運動ニューロンによって、自律神経系（交感神経系および副交感神経系の両方）の節前ニューロンによって、副交感神経系の節後ニューロンによって、そして交感神経系の一部の節後ニューロンによって分泌されている。本質的には、汗腺、立毛筋および少数の血管に至る節後交感神経線維のみがコリン作動性であり、交感神経系の節後ニューロンの大部分は神経伝達物質のエピネフリンを分泌する。ほとんどの場合、アセチルコリンは興奮作用を有する。しかし、アセチルコリンは、迷走神経による心臓の抑制のように、抑制作用を一部の末梢副交感神経終末において有することが知られている。
【００３７】
自律神経系の遠心性シグナルは交感神経系または副交感神経系のいずれかを介して身体に伝えられる。交感神経系の節前ニューロンは、脊髄の中間外側角に存在する節前交感神経ニューロン細胞体から伸びている。細胞体から伸びる節前交感神経線維は、脊椎傍交感神経節または脊椎前神経節のいずれかに存在する節後ニューロンとシナプスを形成する。交感神経系および副交感神経系の両方の節前ニューロンはコリン作動性であるので、神経節にアセチルコリンを適用することにより、交感神経および副交感神経の両方の節後ニューロンが興奮し得る。
【００３８】
アセチルコリンは、ムスカリン性受容体およびニコチン性受容体の2種類の受容体を活性化する。ムスカリン性受容体は、副交感神経系の節後ニューロンによって刺激されるすべてのエフェクター細胞において、また、交感神経系の節後コリン作動性ニューロンに刺激されるエフェクター細胞において見られる。ニコチン性受容体は、交感神経および副交感神経の両方の節前ニューロンと節後ニューロンとの間のシナプスに見られる。ニコチン性受容体はまた、神経筋接合部における骨格筋繊維の多くの膜にも存在する。
【００３９】
アセチルコリンは、小さい透明な細胞内小胞がシナプス前のニューロン細胞膜と融合したときにコリン作動性ニューロンから放出される。非常に様々な非ニューロン分泌細胞、例えば副腎髄質（PC12細胞株と同様に）および膵臓の島細胞が、それぞれカテコールアミン類およびインスリンを大きな高密度コア小胞から放出する。PC12細胞株は、交感神経副腎発達の研究のために組織培養モデルとして広範囲に使用されているラットのクロム親和性細胞腫細胞のクローンである。ボツリヌス毒素は、（エレクトロポレーションによるように）透過性にされた場合、または脱神経支配細胞に毒素を直接注射することによって、両タイプの細胞からの両タイプの化合物の放出をインビトロで阻害する。ボツリヌス毒素はまた、皮質シナプトソーム細胞培養物からの神経伝達物質グルタメートの放出を阻止することが知られている。
【００４０】
ボツリヌス毒素基質の広い分布
ボツリヌス毒素は、神経筋接合部におけるニュ−ロンからのアセチルコリン放出をシナプス前抑制することにより、筋細胞を神経麻痺させて弛緩性麻痺をもたらしうることが、知られている。ボツリヌス毒素のタンパク質分解ドメインは、標的細胞の細胞質ゾル中で特定の基質に作用し、その基質の切断は、アセチルコリン含有分泌小胞の膜ドッキングおよびエキソサイトーシスを妨げる。支配ニューロンと筋細胞の間のシナプス間隙にアセチルコリンが存在しないと、筋細胞の刺激が妨げられ、その結果、麻痺が起こる。
【００４１】
ボツリヌス毒素は、アセチルコリン含有分泌小胞のドッキングを制御する3種類のタンパク質の1つ以上に特異的に作用する細胞内プロテアーゼである。これらボツリヌス毒素の特異的基質は、シナプトブレビン、シンタキシンおよび／またはSNAP−25である。例えば、非特許文献９や、非特許文献１０などを参照されたい。B型、D型、F型およびG型ボツリヌス毒素の場合、その細胞内基質はシナプトブレビンである。SNAP−25、シナプトブレビンおよびシンタキシンはSNARE（可溶性N−エチルマレイミド感受性因子付着タンパク質受容体）と呼ばれている。
【００４２】
重要なことに、ボツリヌス毒素の基質を含有するのは、筋肉を支配している神経だけではない。すなわち「SNAP−25は多くのニューロンサブセットのシナプス前領域および神経冠細胞株に存在することから、このタンパク質はニューロン組織で重要な機能を補助していることが示唆される」非特許文献１１。
【００４３】
また、「SNAREタンパク質が内分泌細胞に広く存在することから、これらは内分泌腫瘍の一般的診断マーカーとしても役立ちうることが示唆される」非特許文献１２。例えば、SNAP−25は神経内分泌細胞（例えばクロム親和細胞、PC12、GH3およびインスリノーマなど）に広く分布することが知られている。さらに、ボツリヌス毒素基質であるシナプトブレビンは、線維芽細胞および骨髄性細胞（例えば肥満細胞）にも見いだされている。非特許文献９（前掲）。
【００４４】
実際、SNAREは、全ての分泌細胞ではないとしてもほとんどの分泌細胞で、分泌小胞の膜融合を左右または制御しているようである。非特許文献１３。
【００４５】
このように、ボツリヌス毒素の基質は、神経伝達物質アセチルコリンを放出するニューロン細胞に限定されない。したがってボツリヌス毒素基質は「膜−膜融合事象に広範に関与」しており、この証拠は「膜融合事象の普遍的機序」（すなわち分泌小胞と細胞壁とのドッキングに関する普遍的機序）を示している（非特許文献９，前掲）。
【００４６】
このように、ボツリヌス毒素の細胞内基質は、ニュ−ロン細胞にも非ニュ−ロン分泌細胞にも遍在的に分布している。このことは、SNAP−25（25キロダルトン・シナプトソーム関連タンパク質であり、少なくともA型ボツリヌス毒素の基質である）が少なくとも以下の組織または細胞に存在するという発見によって、明瞭に実証されている：
（1）膵臓（非特許文献１４）、
（2）下垂体（非特許文献１５）、
（3）副腎髄質（非特許文献１６）、
【００４７】
（4）胃細胞（非特許文献１７）、
（5）肺腫瘍（非特許文献１８（小細胞肺癌（SCLC）はSNAP−25を含んでいる）、
（6）腸腫瘍（非特許文献１９（ヒト大腸癌細胞はボツリヌス毒素を内部に取り入れる）、
【００４８】
（7）膵腫瘍（非特許文献２０（「...インスリン分泌には機能的なSNAP−25タンパク質が必要である」同書1060頁）。また、非特許文献２１、および非特許文献２２（「SNAP−25はニュ−ロン系および内分泌系におけるエキソサイトーシス事象を媒介するSNAREタンパク質である」）も参照されたい。
（8）下垂体腫瘍および正常下垂体細胞（非特許文献２３）、
（9）神経芽細胞腫（非特許文献２４）。また、非特許文献２５も参照されたい。Goodall（1992）は、ただ1つの神経芽細胞腫細胞株において一定の小胞ドッキングタンパク質のインビトロ同定だけを論じていることに注意されたい。
【００４９】
（10）腎細胞（非特許文献２６（SNAP−25は腎細胞の「調節性エキソサイトーシス」に関与する）、
（11）正常肺細胞（非特許文献２７）、
（12）すべての卵巣細胞（非特許文献２８（SNAP−25は「すべての卵母細胞と、大きい胞状卵胞の顆粒膜細胞（GC）および黄体細胞を含むステロイド産生細胞に」見いだされた）。
【００５０】
コリン作動性乳腺組織
さまざまな過形成性および新生物性乳腺細胞がコリン作動性機序による影響を受ける。例えば、「胞細胞活性にはコリン作動性機序」があることが発見されている（非特許文献２９）。また、乳腺異形成性（線維嚢胞）組織と乳癌組織の両方に対するコリン作動性の影響（非特許文献３０）ならびに胸動脈の「平滑筋細胞の直接コリン作動性刺激」（非特許文献３１）も存在する。
【００５１】
重要なことに、コリンエステラーゼの阻害によるアセチルコリンの増加は、乳腺細胞増殖の増加と、それに続く乳癌の発生に関連づけられている（非特許文献３２）。したがって、乳癌細胞増殖の減少は、コリン作動性機序によって媒介されるようである（非特許文献３３）。
【００５２】
副腎髄質
副腎、別名腎上体は、腎臓の上部に位置する小さい三角形の構造物である。各副腎は副腎皮質、すなちち外側と、副腎髄質、すなわち内側とからなる。皮質は髄質を取り囲んで封入している。
【００５３】
副腎皮質は、ホルモンであるコルチゾールとアルドステロンを分泌する。コルチゾールはストレス時に産生され、糖使用を調節し、正常血圧の維持に不可欠である。アルドステロンは塩、カリウムおよび水分平衡の主要調節因子の一つである。副腎を両方とも除去した場合は、コルチゾールおよびアルドステロン補充療法が必須である。
【００５４】
副腎髄質は、カテコールアミン類であるアドレナリン（同義語としてエピネフリン）とノルアドレナリン（同義語としてノルエピネフリン）を分泌する。これらのホルモンは、ストレス反応を含むさまざまな身体機能の正常な調節に重要であり、その場合、これらは血圧、心臓の拍出能力、および血糖レベルの上昇を引き起こす。副腎髄質を除去しても、体内の他の腺が補いうるので、ホルモン欠乏症はほとんどまたは全く起こらない。逆に、過剰なカテコールアミン産生は生死にかかわる。
【００５５】
正常成人男性では、副腎髄質によって産生される全カテコールアミンの約85％がアドレナリンであり、残り15％がノルアドレナリンである。髄質組織1gにつき約1.6mgのカテコールアミンが存在する。血中および尿中に見いだされるノルアドレナリンの大半は副腎髄質に由来するものではなく、節後交感神経終末に由来する。二クロム酸カリウムを含む固定液に、薄切したばかりの副腎を入れると、髄質は褐色に変化する。これをクロム親和反応と呼ぶが、この名前はクロム塩に対する副腎髄質組織の親和性を示唆するように付けられたものである。したがって、副腎髄質の細胞はしばしばクロム親和細胞と呼ばれる。クロム親和細胞は副腎髄質の外にも存在するが、通常はノルアドレナリンだけを分泌し、アドレナリンは分泌しない。
【００５６】
副腎髄質は、節前コリン作動性神経線維によって支配された交感神経節であると考えることもできる。これらの神経線維はアセチルコリンを放出し、そのアセチルコリンは、副腎髄質のクロム親和細胞からのエキソサイトーシスの過程によるカテコールアミン類（主としてアドレナリン）の分泌を引き起こす。正常な副腎髄質は、交感神経系の節前コリン作動性枝である内臓神経によって支配されている。副腎髄質の活性は、ほとんど完全に、そのようなコリン作動性神経の制御下にある。
【００５７】
クロム親和細胞腫
クロム親和細胞（副腎髄質のクロム親和細胞を含む）と交感神経節細胞は、以下に図解するように、どちらも共通する胚祖先、すなわち神経冠の交感神経産生細胞に由来するので、両者には共通点が多い。これらの各細胞タイプから発生しうる新生物のタイプの例を括弧内に示す。表示した細胞タイプはそれぞれ潜在的にカテコールアミン類を分泌することができる。
【００５８】
ほとんどのクロム親和細胞新生物は副腎髄質に発生するが、異所性および多部位性クロム親和細胞腫瘍も知られており、それらは、最も一般的には、小児に発生する。
【００５９】
1．傍神経節腫
傍神経節（同義語としてクロム親和体）は心臓（大動脈付近）、腎臓、肝臓、性腺、その他の場所に見いだすことができ、クロム親和細胞（神経冠細胞に由来すると思われ、自律神経系神経節細胞と密接な関係を持つように分布したもの）を含んでいる。傍神経節腫は傍神経節に由来するクロム親和細胞を含む新生物である。頚動脈小体傍神経節腫は頚動脈傍神経節腫と呼ばれ、副腎髄質傍神経節腫は褐色細胞腫またはクロム親和細胞腫と呼ばれる。
【００６０】
頚動脈小体は、総頚動脈の外膜に見いだされる丸い赤褐色〜黄褐色の構造物として観察されることが多い。これは、分岐部の血管の後内側壁に見いだすことができ、メーヤーの靱帯によって付着していて、供給血管はその靱帯を通って主に外頚動脈から流れこんでいる。正常頚動脈小体は直径3〜5mmである。舌咽神経（第IX脳神経）による求心性神経支配を受けているようである。舌咽神経は、運動線維を茎突咽頭筋に、副交感神経分泌促進線維を耳下腺に、そして感覚線維をとりわけ鼓室、軟口蓋の内面および扁桃腺に供給している。組織学的には、頚動脈小体は、多量の細胞質と大きな円形または長円形の核とを持つI型（主）細胞を含んでいる。細胞質はカテコールアミンを貯蔵し放出すると思われる有芯顆粒を含んでいる。正常頚動脈小体は、動脈血組成変化の検出を担っている。
【００６１】
頚動脈傍神経節腫は、全体からみれば稀な腫瘍であるが、頭頚部傍神経節腫の中では最も一般的な形態である。ほとんどの頚動脈小体傍神経節腫にとって選択処置は外科的切除である。しかし、重要な血管および神経のごく近くに位置するので、罹患（主に第X〜XII脳神経の欠損と血管損傷）および死亡（3〜9％と見積もられる）の危険は極めて現実的である。直径が5cmを超える腫瘍は合併症の発生率が著しく高いので、腫瘍サイズは重要である。術中αおよびβアドレナリン遮断薬が投与される（頚動脈傍神経節腫がカテコールアミン類を分泌している場合）か、それほど好ましくはないが、術前に血管造影塞栓術が行われる。放射線療法は、単独で行うにせよ、手術と併用するにせよ、第2の検討事項であり、多少議論のある部分である。残念ながら、傍神経節種は、頚動脈傍神経節腫を含めて、その位置および／または大きさゆえに、手術不能である場合もある。
【００６２】
2．褐色細胞腫
褐色細胞腫は副腎髄質に発生し、過剰なカテコールアミン産生に関係する臨床症状、例えば突発性高血圧（高血圧）、頭痛、頻脈、安静時の多汗、前屈姿勢から突然起きあがった後の症状の発現、および不安発作などを引き起こす。診断には、腹部撮像とカテコールアミン測定用の24時間尿採取で、通常は十分である。フェノキシベンザミンおよびメチロシンによるカテコールアミン遮断は一般に症状を改善し、現在の選択治療である手術中の高血圧発症を予防するのに必要である。標準処置は腹腔鏡下副腎摘出術であるが、家族性型の褐色細胞腫には部分副腎摘出術もしばしば用いられる。悪性（癌性）褐色細胞腫は稀な腫瘍である。
【００６３】
褐色細胞腫は、高血圧の副次的原因についての評価を受けている患者の約0.3％に存在すると見積もられている。褐色細胞腫は、診断されないか、または不適切な処置を受けた場合には、致死的になりうる。一連の剖検から、多くの褐色細胞腫は臨床的に疑われていないことと、診断を受けていない腫瘍が病的結果に明らかに関係していることが示唆される。
【００６４】
副腎髄質における変化の進行として、正常な副腎髄質から副腎髄質過形成（特異的な腫瘍の発生を伴わない副腎髄質の細胞数および大きさの全般的増加）を経て、副腎髄質の腫瘍（褐色細胞腫）への進行を挙げることができる。
【００６５】
褐色細胞種の処置は一方または両方の副腎の外科的除去である。両方の副腎を除去する必要があるかどうかは、疾患の程度に依存するだろう。両方の副腎を除去してしまった患者は、コルチゾールおよびアルドステロン補充を毎日受けなければならない。コルチゾールはヒドロコルチゾン、コルチゾンまたはプレドニゾンによって補充され、毎日投与しなければならない。アルドステロンは毎日経口フルドロコルチゾン（フロリネフ（商標））によって補充される。発熱、かぜ、インフルエンザ、外科手術または麻酔を含むストレス時は、そのような患者には、ヒドロコルチゾンまたはプレドニゾン補充量の増加が必要である。
【００６６】
3．グロムス腫瘍
グロムス腫瘍（傍神経節腫の一タイプ）は一般に良性新生物であり、やはり神経外胚葉組織から生じ、身体のさまざまな部分に見いだされる。グロムス腫瘍は、側頭骨内に生じる最も一般的な良性腫瘍であり、悪性になって転移するのはそれらの5％未満である。グロムス腫瘍は、頭蓋底、胸郭および首に、副交感神経に沿って分布する糸球から生じる。典型的には、各耳には3つの糸球がある。糸球は通常、ヤコブセン神経（CN IX）もしくはアーノルド神経（CN X）に付随して見いだされるか、または頚静脈球の外膜中に見いだされる。しかし物理的位置は、通常は、岬角（鼓室隆起）の粘膜または頚静脈球（頚静脈糸球）である。
【００６７】
頚静脈球腫瘍の発生率は約1：1,300,000人口であり、最も目につく疫学的事実は、女性での発生が優勢だということで、女性：男性の発生比は少なくとも4：1である。カテコールアミンを分泌する（すなわち機能的な）腫瘍は症例の約1％〜3％に生じる。
【００６８】
グロムス腫瘍はカテコールアミン類分泌能を持ち、この点は、やはり神経冠組織に由来し、やはりカテコールアミン類を分泌することができる副腎髄質に似ている。グロムス腫瘍に相当する副腎での新生物は褐色細胞腫であり、グロムス腫瘍は副腎外褐色細胞腫と呼ばれている。カテコールアミンを分泌するグロムス腫瘍は、不整脈、過剰発汗、頭痛、悪心および蒼白を引き起こしうる。
【００６９】
グロムス腫瘍は頭蓋底のさまざまな領域に生じうる。中耳腔に限局されている場合は、これを鼓室隆起腫瘍と呼ぶ。頚静脈孔の領域に生じた場合は、その程度とは無関係に、頚静脈糸球腫瘍と呼ばれる。頚静脈孔に向かって伸びる首の上部に発生した場合は、これを迷走神経糸球腫瘍と呼ぶ。頚動脈分岐部領域に発生した場合は、これを頚動脈糸球腫瘍と呼ぶ。グロムス腫瘍の部位としては、他にも、咽頭、眼窩、鼻、および大動脈弓などが知られている。
【００７０】
頚静脈糸球腫瘍は最も一般的な中耳の腫瘍である。これらの腫瘍は著しく血管性である傾向を示し、外頚動脈の枝によって血液が供給されている。頚静脈糸球腫瘍の症状には、拍動性の耳鳴りを伴う難聴、めまい、そして時には耳痛が含まれる。患者には、おそらく中耳の遮蔽による難聴がありうるが、腫瘍塊による神経損傷に起因する難聴も存在しうる。嚥下、開口、肩すくめおよび舌の動きを制御する神経の脳神経麻痺はいずれも、頚静脈糸球腫瘍の症状である。鼓膜を調べると、赤／青拍動性塊をしばしば見ることができる。症状は、最初は潜行性である。この腫瘍の位置と血管性のせいで、最も一般的な愁訴は、拍動性の耳鳴りである。この耳鳴りは、ほとんどの場合、鼓膜臍への機械的衝突に続発していると考えられる。他の一般的な症状は、耳の膨満および（伝音）難聴である。
【００７１】
カテコールアミン分泌性グロムス腫瘍の現在の治療法は、αおよびβ遮断薬を投与してからの放射線照射および／または外科的切除である。頚静脈糸球腫瘍の処置には、αおよびβ遮断薬の投与が含まれる。X線療法は、たとえ腫瘍塊が残ったとしても症状を改善するために用いることができる。血液供給を遮断する物質で腫瘍を塞栓させることもできるが、この手法には、腫瘍の膨潤が起こって脳幹および小脳を圧迫しうると共に、血液供給を失ったときに死ぬ細胞からカテコールアミンが放出されるという問題がある。小さい腫瘍が適当な位置にある場合は外科手術を行うことができる。頚静脈糸球腫瘍の外科手術の合併症は、耳から脳脊髄液が持続的に漏出することと、顔面の動き、感覚または聴覚を制御する脳神経の1つが麻痺することである。
【００７２】
たとえ外科手術が成功しうるとしても、頚静脈球腫瘍は再発率が高く、多重手術を要する場合があるので、多少問題がある。外科的切除には、主に医原性脳神経欠損とCSF漏出による傷害の危険がある。脳神経保護の欠如は、下部脳神経欠損という傷害を伴うので、おそらく最も重大な外科的介入の欠点だろう。放射線療法も、例えば側頭骨の骨放射線壊死、脳壊死、下垂体−視床下部機能不全、および二次悪性腫瘍などの重篤な合併症を持っている。他の術後合併症には、CSF漏出、吸引症候群、髄膜炎、肺炎および創感染などがある。
【先行技術文献】
【特許文献】
【００７３】
【特許文献１】米国特許第6113915号明細書
【特許文献２】米国特許第6139845号明細書
【特許文献３】米国特許第6265379号明細書
【特許文献４】米国特許第6143306号明細書
【特許文献５】米国特許第6261572号明細書
【特許文献６】米国特許第5714468号明細書
【特許文献７】米国特許第5437291号明細書
【特許文献８】国際公開第99/03483号パンフレット
【特許文献９】米国特許第5766606号明細書
【特許文献１０】国際公開第00/24419号パンフレット
【特許文献１１】国際公開第00/62746号パンフレット
【特許文献１２】米国特許第5670484号明細書
【特許文献１３】米国特許第6063768号明細書
【特許文献１４】米国特許第5989545号明細書
【特許文献１５】国際公開第96/33273号パンフレット
【特許文献１６】国際公開第99/17806号パンフレット
【特許文献１７】国際公開第98/07864号パンフレット
【特許文献１８】国際公開第00/57897号パンフレット
【特許文献１９】国際公開第01/21213号パンフレット
【特許文献２０】国際公開第00/10598号パンフレット
【特許文献２１】国際公開第00/15245号パンフレット
【特許文献２２】国際公開第74703号パンフレット
【特許文献２３】独国特許出願公開第19852981号明細書
【非特許文献】
【００７４】
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【非特許文献３】Fabian C. J.ら「タモキシフェンを超えた乳癌化学予防の新しい指標、新しい乳癌予防薬」Ann NY Acad Sci 2001 December;952:44−59
【非特許文献４】Chandraspma, P.「Gastrointestinal Pathology」（Appleton & Lange（1999））第5章（105〜144頁）のDer, R.ら「胃新生物」、特に106〜107頁
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【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【００７５】
良性子宮腺障害ならびに子宮癌および過形成性組織に対する従来の療法には、多くの短所および欠点がある。したがって、必要とされているのは、子宮腺新生物および前癌性過形成性子宮組織を処置するための有効な非外科切除的非放射線療法的療法である。
【課題を解決するための手段】
【００７６】
本発明はこの必要を満たし、さまざまな前癌性および癌性子宮組織を処置するための有効な非外科切除的非放射線療法的療法を提供する。したがって本発明は、過形成性組織などの異型性組織、嚢胞および新生物（腫瘍および癌を含む）を処置する方法、ならびに、異型性子宮組織、筋腫および新生物の発生を防止する方法または異型性子宮組織、筋腫および新生物の退行もしくは寛解を引き起こす方法を包含する。特に本発明は、患部子宮組織またはその近傍にクロストリジウム毒素を局所投与することによって、子宮腺障害、子宮筋腫、および良性および癌性新生物を処置する方法、ならびに過形成性および／または高張性子宮細胞を処置する方法を包含する。
【図面の簡単な説明】
【００７７】
【図１】ヒト女性の子宮の位置を隣接臓器との関連において示す部分断面図である。
【図２】図１の子宮の断面図である。
【図３】図２の子宮の断面図において、様々な種類の子宮筋腫の位置を示すものである。
【発明を実施するための形態】
【００７８】
本発明の一態様は、約10-3U／kg〜約2000U／kgのクロストリジウム神経毒を子宮腺組織に局所投与することによって子宮障害を処置する方法である。クロストリジウム神経毒は、ボツリヌス毒素であることができる。好ましくは、ボツリヌス毒素を約10-2U／kg〜約200U／kgの量で投与する。より好ましくは、ボツリヌス毒素を約10-1U／kg〜約35U／kgの量で投与する。ボツリヌス毒素はA型、B型、C型、D型、E型、F型およびG型ボツリヌス毒素からなる群より選択され、好ましいボツリヌス毒素はA型ボツリヌス毒素である。
【００７９】
ボツリヌス毒素の局所投与は、子宮腺中または子宮腺上へのボツリヌス毒素植込剤の植込みによって行うことができる。子宮腺障害は、前癌性子宮組織および子宮癌からなる群より選択される。したがって子宮障害は筋腫であることができる。ボツリヌス毒素は、子宮腺組織へのボツリヌス毒素の直接注入によって局所投与することができる。
【００８０】
より具体的な本発明の一態様は、約10-3U／kg〜約2000U／kgのA型ボツリヌス毒素をヒト患者の子宮腺に局所投与することによって子宮腺障害を処置する方法である。
【００８１】
本発明は、子宮腺にまたは前癌性子宮組織の近傍にボツリヌス毒素を局所投与し、その結果として、過形成性、高張性または新生物性子宮腺組織の大きさおよび／または活性を低下させることによって、子宮腺障害を処置する方法も包含する。この方法により、ボツリヌス毒素の局所投与後に、過形成性、高張性または新生物性子宮腺組織の直径を約20％〜約100％減少させることができる。
【００８２】
したがって、ここに記載する子宮腺障害の処置方法は、処置量のボツリヌス毒素を、過形成性、高張性または新生物性子宮腺組織に局所投与し、その結果として、前記過形成性、高張性または新生物性子宮腺組織の直径を約20％〜約100％減少させるステップを含むことができる。
【００８３】
さらに本発明は、子宮腺新生物の発生を防止する方法であって、過形成性または高張性子宮腺組織にボツリヌス毒素を局所投与し、その結果として、前記過形成性または高張性子宮腺組織からの分泌を減少させ、前記過形成性または高張性子宮腺組織が新生物に発展するのを防止するステップを含む方法を包含する。この方法では、ボツリヌス毒素を約10-3U／kg〜約2,000U／kgの量で投与し、ボツリヌス毒素はA型、B型、C型、D型、E型、F型およびG型ボツリヌス毒素からなる群より選択される。ボツリヌス毒素は、前記過形成性または高張性子宮腺組織にボツリヌス毒素を直接注入することによって、局所投与することができる。
【００８４】
繰り返すと、子宮腺新生物の発生を防止する方法は、処置量のA型ボツリヌス毒素をヒト患者の前癌性過形成性または高張性子宮腺組織に局所投与し、その結果として、子宮腺新生物の発生を防止するステップを含むことができる。
【００８５】
もう一つの選択肢として、子宮新生物の発生を防止する方法は、約10-3U／kg〜約2000U／kgのボツリヌス毒素を過形成性組織に局所投与するステップを含むことができ、この場合、ボツリヌス毒素は、前癌性過形成性子宮組織からの小胞エキソサイトーシスを阻害することによって前記過形成組織からの分泌を減少させ、その結果として、前記過形成性組織が新生物に発展するのを防止する。過形成性組織は、25キロダルトン・シナプトソーム関連タンパク質（SNAP−25）、シナプトブレビンおよびシンタキシンからなる小胞膜ドッキングタンパク質の群より選択されるボツリヌス毒素の基質を含みうる。さらにまた、ボツリヌス毒素は、約1U〜約40,000Uの量、例えば約10-3U／kg〜約35U／kg、約10-2U／kg〜約25U／kg、約10-2U／kg〜約15U／kg、または約1U／kg〜約10U／kgの量で投与することができ、ボツリヌス毒素の局所投与は、子宮組織の本体の中または上にボツリヌス毒素植込剤を植込むことによって行われる。
【００８６】
本発明の具体的一態様は、子宮腺癌の発生を防止（すなわち［過形成性、化生性または異型性ではあるが］良性の前癌性子宮組織が悪性新生物または癌腫に発展するのを防止することによって防止）する方法であって、約10-3U／kg〜約2000U／kgのA型ボツリヌス毒素を、ヒト患者の過形成性、化生性または異型性子宮組織（例えばアポクリン細胞で裏打ちされた嚢胞）に局所投与するステップを含む方法である。この場合、子宮組織は、25キロダルトン・シナプトソーム関連タンパク質（SNAP−25）、シナプトブレビンおよびシンタキシンからなる小胞膜ドッキングタンパク質の群より選択されるボツリヌス毒素の基質を含み、ボツリヌス毒素はその基質に作用して患部子宮組織からの分泌を減少させる。
【００８７】
本発明は、約10-3U／kg〜約2000U／kgのボツリヌス毒素を新生物に局所投与し、その結果として、新生物の大きさを減少させ、そして／または子宮新生物からの分泌を減少させることによって新生物を処置することによる、新生物の処置方法を、その範囲に包含する。
【００８８】
本発明の方法は、新生物の本体中にボツリヌス毒素を直接注入することによって、または子宮新生物の本体中または本体上にボツリヌス毒素植込剤を植込むことによって行うことができる。本発明の範囲に包含される方法を実施して、10-3U／kg〜約2000U／kgのボツリヌス毒素を新生物に局所投与することができる。U／kgとは、患者の総体重1kgあたりのボツリヌス毒素の単位数を意味する。ボツリヌス毒素はA型、B型、C１型、D型、E型、F型およびG型ボツリヌス毒素の1つであることができ、A型ボツリヌス毒素の臨床有効性は多くの適応症について知られていることと、容易に入手できることから、A型ボツリヌス毒素が好ましい。
【００８９】
好ましくは、ボツリヌス毒素を、約1U〜約40,000U（総単位数、患者の体重1kgあたりの単位数ではない）の量で投与する。高い方の用量範囲では、ボツリヌス毒素の投与量（すなわち40,000単位）を、ボツリヌス毒素デポーの部分量（すなわち約10単位のA型ボツリヌス毒素または約500単位のB型ボツリヌス毒素）が、制御放出送達系から、3〜4ヶ月かけて放出されるように（連続的放出送達系）、またはほぼ3〜4ヶ月の反復周期で多相的に制御放出送達系から放出されるように（拍動的放出送達系）、制御放出送達系（すなわち植込剤）の形で投与することができる。処置量のボツリヌス毒素を連続的または拍動的に新生物内または新生物周囲に放出させるために本発明で使用するのに適した制御放出送達系は、米国特許第6,306,423号および第6,312,708号に開示されている。
【００９０】
より好ましい本発明の一態様として、本発明に従って子宮新生物の本体にまたは子宮新生物の内部に局所投与されるA型ボツリヌス毒素の量は、約10-3U／kg〜約40U／kgの量であることができる。約10-3U／kg未満のA型ボツリヌス毒素は有意な処置有効性をもたらさないと予想され、約40U／kgを超えるA型ボツリヌス毒素は、この毒素の毒性用量またはほぼ毒性用量になると予想することができる。B型ボツリヌス毒素の場合、本発明に従って新生物に局所投与されるB型ボツリヌス毒素の量は、約10-3U／kg〜約2000U／kgの量であることができる。約10-3U／kg未満のB型ボツリヌス毒素は有意な処置有効性をもたらさないと予想され、約2000U／kgを超えるB型ボツリヌス毒素は、B型ボツリヌス毒素の毒性用量またはほぼ毒性用量になると予想することができる。市販B型ボツリヌス毒素製剤は約2000単位／kg（筋肉内）で、B型ボツリヌス毒素の霊長類致死用量に近づくと報告されている（Meyer K. E.ら「成体および若齢カニクイザルにおけるニューロブロックの比較全身毒性研究」Mov. Disord 15（Suppl 2）;54;2000）。C型、D型、E型、F型およびG型ボツリヌス毒素の場合、新生物に注入する量は、患者ごとに決定することができ、B型毒素の用量範囲を超えないと予想される。
【００９１】
より好ましい本発明の一態様では、ここに開示する方法に従って投与されるA型ボツリヌス毒素の量は、約10-2U／kg〜約25U／kgである。約1000U／kg未満のB型ボツリヌス毒素であれば、霊長類に筋肉内注入しても、全身作用は現れないと報告されているので（前掲）、所定の期間に連続的放出系によって投与されるB型ボツリヌス毒素の量は、好ましくは、約10-2U／kg〜約1000U／kgである。より好ましくは、A型ボツリヌス毒素を、約10-1U／kg〜約15U／kgの量で投与する。最も好ましくは、A型ボツリヌス毒素を約1U／kg〜約10U／kgの量で投与する。多くの場合、約1単位〜約100単位未満のA型ボツリヌス毒素を新生物内投与することによって、本明細書に説明する通り、有効で長時間持続する治療的改善が得られる。より好ましくは約5単位〜約75単位のボツリヌス毒素（例えばA型ボツリヌス毒素）を使用することができ、最も好ましくは、約5単位〜約50単位のA型ボツリヌス毒素を、標的新生物組織中に局所投与して、有効な結果を得ることができる。特に好ましい本発明の一態様として、約1単位〜約50単位のボツリヌス毒素（例えばA型ボツリヌス毒素）を、新生物標的組織に局所投与して、本明細書に記載する通り、治療的に有効な結果を得ることができる。
【００９２】
本発明の範囲に包含される具体的一方法は、約10-3U／kg〜約2000U／kgのA型ボツリヌス毒素をヒト患者の新生物に局所投与し、その結果として、子宮新生物からの分泌を減少させることによって行うことができる。
【００９３】
「局所投与」とは、標的子宮組織の局所領域内へのまたは局所領域への神経毒の直接注入を意味する。全身性の投与経路、例えば経口投与経路や静脈内投与経路は、本発明の範囲から除外される。
【００９４】
ボツリヌス毒素は修飾ボツリヌス毒素であることができる。すなわちボツリヌス毒素は、天然ボツリヌス毒素と比較して、そのアミノ酸の少なくとも1つが欠失しているか、修飾されているか、または置換されていてもよい。したがってボツリヌス毒素は組換え生産されたボツリヌス毒素またはその誘導体もしくは断片であることができる。
【００９５】
本発明は、過形成性、高張性、嚢胞性および／または新生物性子宮組織を、クロストリジウム毒素で処置し、その結果として、その過形成性、高張性、嚢胞性および／または新生物性状態を減少させるか排除することができるという発見に基づいている。処置対象組織は良性でも悪性でもよく、過形成には高張性状態が含まれる。したがって本発明は、子宮癌および筋腫を含む状態の処置に適用することができると共に、過形成性、化生性、異型性および異形成性前癌子宮組織に適用することができる。
【００９６】
また、1つ以上のボツリヌス毒素基質によって分泌活性が制御または左右される過剰分泌子宮細胞（過形成性または高張性）も、その過形成性または高張性子宮分泌組織が新生物に発展しないように、本発明の範囲に包含される方法で処置することができる。標的組織では、ボツリヌス毒素のタンパク質分解性軽鎖が、内部に取り入れられる。
【００９７】
理論による束縛は望まないが、本発明の効果の生理学的メカニズムを提示することができる。すなわち、子宮の筋肉組織はコリン作動性ニューロンの影響を受けることが知られている。例えば、Morris, J. ら、「ボツリヌス神経素Aは血管収縮ニューロンからのノルエピネフリン放出を抑制するがNPY放出は抑制しない」Am J Physiol Heart Circ Physiol 2002 Dec; 283(6)を参照されたい。さらに、子宮腺組織のコリン作動性神経支配は、そのような細胞の分泌活性に影響することが知られている。例えば、Hammarstron M.ら、「酸化窒素はモルモットのムスカリン性子宮内膜分泌における細胞メッセンジャーとして作用するか？」 Acta Physiol Scand 2002 Apr; 174(4):311-5を参照されたい。すなわち、子宮分泌細胞は少なくとも、交感神経コリン作動性分泌促進神経支配を受ける。したがって、ボツリヌス毒素を子宮腺組織に局所投与することにより、そのような腺細胞の分泌活性を低下することができ（これは、細胞に対する分泌促進性コリン作動性神経支配を抑制することによるか、または毒素が子宮腺細胞（該細胞中で、毒素基質SNAP-25またはVAMPが分泌小胞の膜ドッキングもしくは融合を促進する）に直接に作用することによる）、それによって子宮腺過形成が抑制される結果、筋腫の進行を抑制し、さらに過形成性（すなわち前癌性）子宮腺細胞が子宮癌、腫瘍または新生物に発展または移行するのを抑制することができると仮定することができる。
【００９８】
好ましい一態様として、本発明は、前癌性子宮組織などの子宮疾患を処置する方法である。本発明はどんな特定機序にも限定されないが、患部組織（例えば子宮筋腫）へのクロストリジウム毒素（例えばボツリヌス毒素）の局所投与は、子宮細胞を神経支配している刺激性コリン作動性線維に対する毒素の阻害作用によって、または筋腫細胞によって毒素（または少なくとも毒素軽鎖）が内部に取り入れられた時の筋腫に対する毒素の直接作用によって、筋腫の処置（すなわち、筋腫および／または子宮細胞過形成の大きさの減少［または完全な除去］）をもたらすという仮説を設けることができる。
【００９９】
したがって、本発明の好ましい一態様は、例えば子宮筋腫、腺症、乳頭腫および線維腺腫（小葉過形成）などの前癌性子宮障害を処置する方法である。前癌性とは、患部子宮組織は悪性ではない（すなわち癌性ではない）が、過形成性、肥厚性または化生性ではありうることを意味し、その患者が子宮癌を発生させる危険を前癌性組織の存在が増加させることを意味する。
【０１００】
したがって、コリン作動性の神経支配を受けている子宮標的組織は、クロストリジウム毒素（例えばボツリヌス毒素）の局所投与によって処置することができる。局所投与とは、神経毒が標的組織（すなわち前癌性子宮組織）または処置すべき局所組織領域の中に、またはその近傍に、直接投与されることを意味する。局所投与には、患部組織への神経毒の直接注入が含まれる。非癌性（良性）、前癌性、癌性（悪性）の過形成性および／または高張性分泌組織を、本発明の範囲に包含される方法で処置することができる。腫瘍の発生に先立って起こる結節性または散在性の過形成を、本発明によって処置することができる。
【０１０１】
ある特定の神経毒、すなわちボツリヌス毒素を使用して、さまざまな前癌性子宮組織を処置すると、劇的な改善効果が得られること、そしてその結果、これが現行の外科手術、化学療法および放射線療法による治療法に、かなりの部分、取って代わりうることを発見した。重要なことに、ボツリヌス毒素の単回局所投与によって、子宮疾患を有効に処置することができる。
【０１０２】
図1に示すように子宮は膀胱および腸の近くに位置する。図2に示すように、子宮は、子宮底、子宮体、子宮頸、子宮頸管、子宮内膜および子宮筋層を有する。様々な種類の筋腫が生じ得、これには、筋層内、有茎性粘膜下、有茎性漿膜下、粘膜下および漿膜下の筋腫が含まれる。子宮における典型的な位置を図3に示す。
【０１０３】
投与経路および投与されるボツリヌス毒素の量は、処置される特定の子宮腺障害ならびにサイズ、体重、年齢、障害の重篤度および処置に対する応答性を含む様々な患者パラメーターに応じて広範囲に変化させることができる。適切な投与経路および投薬量を決定する方法は、一般には主治医によって症例毎に決定される。そのような決定は当業者にとっては日常的なことである（例えば、Harrison's Principles of Internal Medicine （1997）（編者：Anthony Fauciら、第14版、発行：McGraw Hill）を参照のこと）。全身循環への毒素の進入が実質的に回避されるように処置を行う（すなわち、静脈内投与ではなく皮下または筋肉内注射によって）。
【０１０４】
投与に適切な具体的な投薬量は、上記に議論された要因に応じて当業者によって容易に決定される。投薬量はまた、処置または脱神経支配される腫瘍のサイズに、そして毒素の市販の製剤に依存し得る。また、ヒトにおける適切な投薬量の推定値は、他の非新生物組織の効果的な脱神経支配のために必要とされるボツリヌス毒素の量を決定することから推定することができる。したがって、注射されるA型ボツリヌス毒素の量は、処置される子宮組織の大きさおよび活性レベルに比例する。
【０１０５】
一般には、患者体重の1kgあたり約0.01単位〜2000単位のボツリヌス毒素（A型ボツリヌス毒など）を、神経毒が子宮標的組織またはその近傍に投与されたときに毒素により誘導される標的組織退行を効果的に達成するために投与することができる。約0.01U／kg未満のボツリヌス毒素は顕著な処置作用を有さず、一方、それぞれ約2000U／kgよりも多い、または約35U／kgよりも多いB型またはA型のボツリヌス毒素は該神経毒の毒性量に近づく。注射針の慎重な設置および使用される神経毒の少ない容量により、著量のボツリヌス毒素が全身に現れないようになる。より好ましい用量範囲は約0.01U／kg〜約25U／kgのボツリヌス毒素であり、例えば、BOTOX（登録商標）として配合された用量である。投与されるボツリヌス毒素のU／kgの実際の量は、例えば処置される過形成性子宮組織の範囲（大きさ）および活性レベルならびに選ばれた投与経路などの要因に依存する。A型ボツリヌス毒素は、本発明の方法において使用される好ましいボツリヌス毒素血清型である。
【０１０６】
ボツリヌス毒素の主要な作用部位は、毒素が迅速に結合して、アセチルコリンの放出を妨げる神経筋接合部である。したがって、ボツリヌス毒素がコリン作動性のシナプス前末梢運動ニューロンに対する結合親和性を有することが知られている一方で、本発明者が見出したところでは、ボツリヌス毒素はまた、様々な前癌性子宮組織に結合して、その中に移動し得、毒素はそこで、その後、知られている様式で、そのそれぞれの分泌管−膜ドッキングタンパク質に対するエンドプロテアーゼとして作用する。ある種の子宮組織に対するボツリヌス毒素の親和性は比較的低いために、毒素を分泌組織または腺様組織に注射して、毒素の濃度を局所的に大きくすることが好ましい。したがって、本発明は、コリン作動的な神経支配をほとんどまたは全く受けない前癌性子宮組織を処置するために適用することができる。
【０１０７】
好ましくは、本発明の範囲に含まれる方法を実施するために使用される神経毒はボツリヌス毒素であり、例えば、A型、B型、C型、D型、E型、F型またはG型の血清型のボツリヌス毒素のいずれかである。好ましくは、使用されるボツリヌス毒素は、ヒトにおけるその効果が高いこと、容易に入手できること、そして筋肉内注射により局所投与されて骨格筋および平滑筋の障害を処置するために使用されることが知られていることのために、A型ボツリヌス毒素である。
【０１０８】
前癌性子宮組織を処置するための本発明による神経毒の投与経路は、選ばれた神経毒毒素の溶解性特性ならびに投与される神経毒の量などの基準に基づいて選択することができる。神経毒の投与量は、処置される特定の障害、その重篤度、およびサイズ、体重、年齢および処置に対する応答性を含む他の様々な患者パラメーターに応じて広範囲に変化させることができる。例えば、影響を受ける前癌性子宮組織の範囲は、注射された神経毒の容量に比例すると考えられ、一方で、脱神経支配の程度は、ほとんどの用量範囲について、注射された神経毒の濃度に比例すると考えられる。適切な投与経路および投薬量を決定する方法は、一般には主治医によって症例毎に決定される。そのような決定は当業者にとっては日常的なことである（例えば、Harrison's Principles of Internal Medicine （1997）（編者：Anthony Fauciら、第14版、発行：McGraw Hill）を参照のこと）。
【０１０９】
本発明は、その範囲内において、患者の前癌性子宮組織に局所的に適用されたときに処置効果の継続時間が長い任意の神経毒の使用を包含する。例えば、ボツリヌス菌（Clostridium botulinum）、ボツリヌス・ブチリカム（Clostridium butyricum）およびクロストリジウム・ベラティ（Clostridium beratti）などの毒素産生性のクロストリジウム属細菌の種のいずれかによって作られる神経毒を本発明の方法において使用することができ、または本発明の方法における使用のために適合させることができる。また、A型、B型、C型、D型、E型、F型またはG型のボツリヌス毒素血清型はすべて、本発明の実施において好都合に使用することができるが、上記に説明されているように、A型が最も好ましい血清型である。本発明の実施により、標的組織の退行および緩解がヒトにおいて27ヶ月またはそれ以上にわたってもたらされ得る。
【０１１０】
透過処理された副腎髄質からのカテコールアミン放出がボツリヌス毒素によって阻害され得ることが知られている。また、（エレクトロポレーションよるように）透過処理されたインスリン分泌細胞からのインスリンの放出がボツリヌス毒素によって阻害され得ることが知られている。インビトロの場合、これらの非神経細胞の細胞膜は、ボツリヌス毒素に対する細胞表面受容体がないために、細胞の細胞質ゾルへのボツリヌス毒素の導入を助けるために透過性にすることができる。したがって、B型ボツリヌス毒素は、インスリン分泌細胞株HIT-15に存在するシナプトブレビンを切断することによってインスリン分泌を阻害するようである（Boyd R.S.ら、The Effect of Botulinum Neurotoxin-B On Insulin Release From a Beta Cell、Mov Disord 10（3）：376 （1995））。
【０１１１】
本発明者の論ずるところでは、ボツリヌス毒素の軽鎖が細胞内媒質に移動する限り、ボツリヌス毒素により、任意の分泌性（すなわち、ニューロン性、腺様、分泌性、クロム親和性）細胞タイプからの任意の小胞媒介エキソサイトーシスの放出が阻止され得る。例えば、細胞内タンパク質のSNAP−25はニューロン性および非ニューロン性の両方の分泌細胞に広く分布しており、そしてA型ボツリヌス毒素は、特異的な基質がSNAP−25であるエンドペプチダーゼである。したがって、コリン作動性ニューロンはボツリヌス毒素および破傷風毒素に対する高親和性の受容器を有する（したがって、分泌化合物の小胞媒介エキソサイトーシスの阻害に対して、他のニューロンおよび他の細胞よりも大きな感受性を有する）一方で、毒素濃度が上昇するに従い、非コリン作動性の交感神経ニューロン、クロム親和性細胞および他の細胞タイプがボツリヌス毒素を取り込むことができ、そして低下したエキソサイトーシスを示すことができる。
【０１１２】
したがって、本発明を実施することによって、非コリン作動性神経線維、ならびに神経支配されていないか、またはあまり神経支配されていない分泌性子宮新生物を、分泌性子宮新生物の退行処置をもたらすために適度により高い濃度のボツリヌス毒素を使用することによって処置することができる。
【０１１３】
さらに、本発明の範囲内に含まれる方法は、改善された患者機能を提供することができる。「改善された患者機能」は、疼痛の軽減、臥床時間の短縮、歩行運動の増大、より健康な態度、より多様なライフスタイル、および／または正常な筋肉緊張により可能になる治癒などの要因によって測定される改善として定義することができる。改善された患者機能は、改善された生活の質（QOL）と同義である。QOLは、例えば、知られているSF−12またはSF−36の健康調査評価手順を使用して評価することができる。SF−36は、身体的機能性、身体的問題による職務制限、社会的機能性、身体の痛み、一般的な精神的健康状態、精神的問題による職務制限、活力および一般的な健康認識の8項目において患者の身体的および精神的な健康状態を評価する。得られる評価点は、様々な一般的集団および患者集団について得られる公表された値と比較することができる。
【０１１４】
上記に示されているように、本発明者は、驚くほど効果的で長く持続する処置効果が、ヒト患者の前癌性子宮組織への神経毒の局所投与によって達成され得ることを発見した。本発明の最も好ましい実施形態において、本発明は、A型ボツリヌス毒素を標的組織または標的組織局部域に直接注射することによって実施される。神経腺結合部においては、A型ボツリヌス毒素などのボツリヌス毒素の化学的な脱神経支配効果は、作用の継続期間がかなり長いことが報告されている（すなわち、3ヶ月に対して27ヶ月）。
【０１１５】
本発明は、その範囲内において、（a）細菌培養、毒素抽出、濃縮、保存、凍結乾燥および／または再構成によって取得または処理された神経毒複合体ならびに純粋な神経毒、そして（b）修飾されたまたは組換え神経毒、すなわち、1つまたは複数のアミノ酸またはアミノ酸配列が、既知の化学的／生化学的なアミノ酸修飾法によって、または既知の宿主細胞／組換えベクター組換え技術の使用によって意図的に欠失、修飾または置換されている神経毒、ならびにそのようにして作製された神経毒の誘導体または断片を包含し、そして、クロム親和細胞種および新生物細胞種に対する1つまたは複数のターゲティング成分を有する神経毒を包含する。
【０１１６】
本発明に従って使用されるボツリヌス毒素は、減圧下の容器において凍結乾燥形態または真空乾燥形態で保存することができる。凍結乾燥に先立って、ボツリヌス毒素は、薬学的に受容可能な賦形剤、安定化剤および／またはキャリア（アルブミンなど）と一緒にすることができる。凍結乾燥物または真空乾燥物は生理的食塩水または水で再構成することができる。
【０１１７】
以下の各実施例では、ボツリヌス毒素の具体的投与量は、主治医の裁量で比較検討され考慮されるべきさまざまな要因に依存し、各実施例では、全身的に現れるボツリヌス毒素注入量はごくわずかで、有意な副作用をもたない。以下に示す1キログラムあたりの注入ボツリヌス毒素単位数（U／kg）は、患者の総体重1kgあたりの値である。例えば体重70kgの患者の場合、3U／kgなら、210単位のボツリヌス毒素を注入する必要がある。
【０１１８】
以下の実施例は、本発明の範囲に包含される好ましい本発明実施方法の具体例を、本発明の実施のために当業者に示すものであり、本発明者が本発明であるとみなす範囲を限定しようとするものではない。
【０１１９】
以下の各実施例では、ボツリヌス毒素（ボトックス（BOTOX（登録商標））など）の具体的投与量は、主治医の裁量で比較検討され考慮されるべきさまざまな要因に依存する。
【実施例１】
【０１２０】
ボツリヌス毒素を使った筋腫の処置
子宮筋腫を持つ46歳の女性が来院する。超音波検査および撮像により、多発性子宮筋腫が明らかになる。組織学的検査により、子宮内膜異型（過形成と化生の両方）が明らかになる。したがってこの患者は、癌を発生させる危険があると判断される。複数の位置の筋腫塊に10単位〜100単位のA型ボツリヌス毒素（ボトックスなど）を局所投与（注入）する。その後28日以内に筋腫は実質的に退行しており（筋腫直径が少なくとも80％減少）、その状態がその後2〜24ヶ月持続する。もう一つの選択肢として、B型、C型、D型、E型、F型またはG型ボツリヌス毒素を投与することもできる。ただし投与量は、効力がA型毒素とは異なる点を考慮して調節する。したがって、例えばB型ボツリヌス毒素の効力はA型ボツリヌス毒素の約50分の1であることがわかっているので、500〜5000単位のB型毒素を局所投与する。もう一つの選択肢として、長期間にわたって治療効果を得るために、米国特許第6,306,423号および第6,312,708号に記載されているように、制御放出植込剤を皮下に挿入することができ、そして／またはボツリヌス含有マイクロスフェアの懸濁液を注入することができる。
【実施例２】
【０１２１】
ボツリヌス毒素を使った高張性または過形成性子宮組織の処置
64歳の女性が、前癌性過形成性子宮組織を持つと診断される。過形成性組織に10単位〜100単位のA型ボツリヌス毒素（ボトックスなど）を局所投与（注入）する。その後28日以内に過形成は実質的に退行しており、その状態がその後2〜24ヶ月持続する。もう一つの選択肢として、B型、C型、D型、E型、F型またはG型ボツリヌス毒素を投与することもできる。ただし投与量は、効力がA型毒素とは異なる点を考慮して調節する。したがって、例えばB型ボツリヌス毒素の効力はA型ボツリヌス毒素の約50分の1であることがわかっているので、500〜5000単位のB型毒素を局所投与する。もう一つの選択肢として、長期間にわたって治療効果を得るために、米国特許第6,306,423号および第6,312,708号に記載されているように、制御放出植込剤を皮下に挿入することができ、そして／またはボツリヌス含有マイクロスフェアの懸濁液を注入することができる。子宮転移病変を処置するために、また、過形成性もしくは癌性子宮組織の外科的除去に先立って術前に、同様の局所投与法を実施することができる。
【０１２２】
本明細書中に開示される本発明による方法には多くの利点があり、例えば下記が含まれる：
（1）本発明は、過形成性、高張性および化生性子宮組織を含む様々な子宮障害の効果的な処置のために、外科的手法を不必要にする。
（2）全身的な薬物の作用を、本発明による神経毒の直接的な局所適用によって回避することができる。
（3）本発明の改善効果は、本明細書中に示されているように神経毒の単回局所投与から2年またはそれ以上持続させることができる。
【０１２３】
本発明は、いくつかの好ましい方法に関して詳しく記載されているが、本発明の範囲内に含まれる他の実施形態、変形および変更が可能である。例えば、広範囲の神経毒を本発明の方法において効果的に使用することができる。また、本発明は、2つ以上のボツリヌス毒素などの2つ以上の神経毒が同時または連続的に投与される局所的耳投与法を包含する。例えば、A型ボツリヌス毒素を、臨床的応答の喪失または中和抗体が生じるまで投与し、その後、E型ボツリヌス毒素を投与することができる。あるいは、A型〜G型のボツリヌス毒素の任意の2つ以上を組み合わせて、所望する処置結果の開始および継続期間を制御するために局所投与することができる。さらに、脱神経支配を増強するため、またはボツリヌス毒素などの神経毒がその処置効果を発揮し始めるよりも早く脱神経支配を開始するためなどの付随的な効果を生じさせるために、非神経毒化合物を、神経毒を投与する前に、または神経毒を投与すると同時に、または神経毒を投与した後に投与することができる。
【０１２４】
本発明はまた、その範囲内において、神経毒を局所投与することによって前癌性乳房組織を処置するための医薬品を調製するための、ボツリヌス毒素などの神経毒の使用を包含する。先に挙げた参考文献、論文、刊行物および特許はいずれも、参照によりそれら全体が本書に組み込まれる。
したがって、特許請求の範囲の精神および範囲は、上記に示された好ましい実施形態の記載に限定されるものではない。
【技術分野】
【０００１】
本発明は、子宮障害を処置する方法に関する。本発明はとりわけ、子宮腺障害をボツリヌス毒素で処置する方法に関する。
【０００２】
本発明の目的は、子宮組織、例えば過形成性組織などの異型性組織、筋腫および子宮新生物（腫瘍および癌を含む）を処置することである。本発明の他の目的は、異型性子宮組織、筋腫および新生物の発生を防止すること、または異型性組織、筋腫および新生物の退行もしくは寛解を引き起こすことである。本発明の更なる目的は、患部子宮組織またはその近傍にクロストリジウム毒素を局所投与することによって、良性および癌性の子宮障害を処置すること、ならびに過形成性および／または高張性子宮腺細胞を処置することである。
【背景技術】
【０００３】
子宮は、腺組織の顕著な中空筋肉器官である。卵巣から放出された卵子は卵管を経て子宮に達し、受精した場合は、子宮の腺性内膜である子宮内膜に着床する。子宮頸管が、膣から子宮頸（子宮の下部）を経て子宮体に至る。子宮の頂部は子宮底である（卵管の間の部分）。子宮筋層は、子宮の筋肉壁である。
【０００４】
過形成性子宮組織は、処置しないと、癌性組織に発展しうることが知られている。例えば、非特許文献１を参照されたい。さらに、次のようなことも知られている：さまざまな過形成性、化生性または異型性乳房組織は癌に発展する場合がある（例えば、以下に詳しく述べる非特許文献２、ならびに非特許文献３などを参照されたい）；ポリープなどの過形成性腸組織は癌化して癌腫になる場合がある（例えば、非特許文献４を参照されたい）；口腔および中咽頭上皮過形成は前癌性病変を示す（非特許文献５）；腎臓および前立腺細胞過形成は、癌性細胞の発生につながる要因であることが実証されている（非特許文献６）。
【０００５】
よく見られる子宮癌には、子宮頸癌および子宮内膜癌がある。子宮内膜癌は50〜70歳の女性に多く、妊娠経験のない女性に特に多い。子宮内膜癌の通常の症状は、閉経後の膣からの出血である。生検または内膜掻爬によって診断ができる。
【０００６】
子宮頸癌は、長い年月を経て増殖しうる。そうなる前に、子宮頸細胞に初期変化が生じうる。この異常な非癌性の細胞（癌性となりうる）は、頸部上皮内腫瘍（CIN）または細胞核異常と呼ばれる。
【０００７】
子宮の平滑筋腫瘍は、粘膜下、筋層内および漿膜下の平滑筋腫（筋腫）でありうる。子宮の平滑筋腫（筋腫）は、女性生殖器の最も一般的な病理学的異常の一つである。筋腫は通例、子宮の筋肉内（筋層内）に多く、その大きさまたは位置によって、子宮内膜を侵して出血を起こすことがある。子宮筋腫は女性の約２５％に起こり、次のような場合は処置を要する：（ａ）その位置および大きさによって不正子宮出血を起こし、それをホルモン療法、または子宮鏡検査および子宮内膜掻爬術による子宮内部からのポリープ様筋腫（粘膜下）の除去によってコントロールできない場合；（ｂ）それが非常に大きく（通例ソフトボール大またはそれ以上）、骨盤圧、膀胱もしくは直腸圧または骨盤圧迫感の症状をもたらす場合；（ｃ）それが、ある位置（通例、卵巣の近傍）に存在するか、または増殖が速く悪性の疑いがある場合；（ｄ）血液供給が損なわれるために繰り返し痛みが起こる場合；（ｅ）筋腫が子宮内膜腔の歪みをもたらし、患者が妊娠中の問題を抱えるかまたは流産を繰り返す場合。
【０００８】
筋腫の位置は様々である。筋腫は筋層内に生じることが最も多く、子宮体部の不正な拡大によって発覚する。この筋腫はその経過において遅かれ早かれ子宮の表面から拡張して漿膜下筋腫となりうる。あるいは筋腫は子宮内膜腔に突出し子宮内膜腔を歪めることもある。粘膜下筋腫は、子宮内膜腔に突出し、拡大して、筋腫上に粘膜を拡張するために、粘膜下組織がなくなり、被っている内膜が潰瘍を起こしうるものである。粘膜下筋腫は必ずしも、臨床的出血を起こすかまたは受胎および正常妊娠を妨げるものではないが、この種の顕著な症候的障害が伴い、月経過多、貧血、骨盤痙攣痛、感染、不妊および流産ほか、一般に見られる障害が起こることは確かである。
【０００９】
筋腫切除術は、子宮を取り去ることなく筋腫を除去する。腹腔鏡筋腫切除術では、腹腔鏡を用いて、臍および腹部を通して有茎漿膜下筋腫を除去する。子宮鏡筋腫切除術では、子宮鏡を用いて、粘膜下筋腫を膣を通して除去する。腹壁切開（腹式筋腫切除術）では、腹部切開によって筋腫をその位置、大きさまたは数にかかわらず除去することができる。腹腔鏡筋腫切除術では、腹腔鏡のみで対処できるものよりも少し大きい漿膜下筋腫を除去することができ、通例、３インチまたはそれ以下の比較的小さい腹部切開を伴う。
【００１０】
腹腔鏡補助膣式筋腫摘出術（LAVM）では、腹腔鏡を用い、膣切開による筋腫全摘によって、漿膜下筋腫を子宮から除去することができる。子宮筋腫塞栓術（UFE、子宮動脈塞栓術UAEとしても知られる）は、インターベンショナル・ラジオロニスト（IR）によって行われる、殆んど非侵襲的な非外科的手術である。この手術では、カテーテルを動脈に挿入し、子宮まで導く。そして小さい粒子を動脈内に放射する。この粒子が、筋腫への血液供給を遮断する。
【００１１】
筋融解では、手術器具を腹腔鏡切開部から腹部に挿入し、高周波電流を筋腫に通す。この電流が血管を収縮させ（非常に細く、または閉塞させ）、それ故基本的に筋腫への血流を遮断する。筋腫はその場に残され、外科的に除去されない。血液供給がなければ、筋腫は結果的に死滅および収縮する。
【００１２】
子宮摘出術には主として三つの形態がある。亜全摘、全摘、および広汎子宮全摘である。亜全摘では、子宮の摘出のみ行う。骨盤構造靭帯は切らず、子宮頸を元の位置に残す。卵管および卵巣は摘出する場合としない場合がある。この手術は常に、腹部から行われる。
【００１３】
全摘の場合は、子宮体と、子宮の下部である子宮頸との両方を摘出する。これは膣を通して行われることもあるが（膣式摘出術）、それ以外の場合は腹部の外科的切開により行うことが好ましい。全摘および両側卵管卵巣摘除術では、子宮および子宮頸と共に卵巣および卵管も摘出される。
【００１４】
広汎子宮全摘の場合は、子宮全体と、通例、卵管および卵巣の両方、ならびに骨盤リンパ節が、腹部を通して摘出される。
【００１５】
直接的な手術の危険性があることに加えて、長期にわたる身体的および心理的影響（抑うつ、および性的快楽の欠如を包含しうる）がもたらされうる。閉経前に子宮と共に卵巣を取り去った場合、骨粗鬆症および心臓疾患の危険性も高まる。
【００１６】
子宮摘出および子宮筋腫切除の手術の危険性としては、発熱、膀胱感染および創傷感染が挙げられる。術前に貧血のために、または術中に失血のために、輸血が必要でありうる。麻酔に関連する合併症が起こりうる。他の合併症としては、凝血、術後出血、腸閉塞、尿路障害および死亡を挙げることができる（子宮摘出１００００例当たり１１人の女性が死亡している）。
【００１７】
臨床的に検出できない子宮癌細胞が癌の局所切除後も残っている可能性があるので、局所腫瘍制御のために放射線療法が通例行われる。放射線療法は、大きい子宮腫瘍を縮小させて、それらをより容易に切除できるようにするために、手術前に使用することもできる。緩和的放射線療法は、骨転移の疼痛を軽減するために、また脳などの他の部位への転移の症候管理に、よく用いられる。子宮への放射線治療の間およびその直後は、疲労、皮膚反応、皮膚の感覚、色および肌理の変化、ならびに子宮腫脹がよくみられる。
【００１８】
化学療法、ホルモン療法、またはそれら2つの組合せは、転移性子宮疾患の作用を一時的に軽減するために使用することができる。補助化学療法および／または補助ホルモン療法に関する勧告は、通常は、陽性腋窩リンパ節の数、閉経状態、原発腫瘍の大きさ、およびエストロゲン受容体アッセイに基づく。最もよく使用される化学療法剤は、アルキル化剤、代謝拮抗薬、抗腫瘍性抗生物質（ヘルセプチン）およびビンカアルカロイドである。ホルモン操作は主としてホルモン遮断薬によって行われ、まれに、性ホルモン産生腺の外科的除去（卵巣切除術、副腎切除術、または下垂体切除術）によって行われる。抗エストロゲンであるタモキシフェンは最も広く用いられているホルモン剤である。ER／PR陰性患者および／またはタモキシフェンが無効な患者には、現在、フェマラやアリミデックスなどの第二選択ホルモン剤を使用することができる。残念ながら、子宮癌の化学療法には、疲労、体重増加、悪心、嘔吐、脱毛症、食欲障害および味覚障害、ニューロパシー、下痢、骨髄抑制、閉経症状、脱毛および体重増加などの有害な副作用が数多く伴いうる。また、第一選択薬であるタモキシフェンは、子宮癌と凝血の危険を増大させる。
【００１９】
ボツリヌス毒素
嫌気性グラム陽性細菌であるボツリヌス菌（Clostridium botulinum）は、ボツリヌス中毒と呼ばれる神経麻痺性障害をヒトおよび動物において引き起こす強力なポリペプチド神経毒であるボツリヌス毒素を産生する。ボツリヌス菌の胞子は土壌中に見出され、滅菌と密閉が不適切な零細缶詰工場の食品容器内で成長する可能性があり、これが多くのボツリヌス中毒症例の原因である。ボツリヌス中毒の影響は、通例、ボツリヌス菌の培養物または胞子で汚染された食品を飲食した18時間後〜36時間後に現れる。ボツリヌス毒素は、消化管内を弱毒化されないで通過することができ、そして末梢運動ニューロンを攻撃することができるようである。ボツリヌス毒素中毒の症状は、歩行困難、嚥下困難および会話困難から、呼吸筋の麻痺および死にまで進行し得る。
【００２０】
A型ボツリヌス毒素は、人類に知られている最も致死性の天然の生物学的物質である。A型ボツリヌス毒素（精製された神経毒複合体）（BOTOX（登録商標）の商標でAllergan，Inc．（カリフォルニア州アービン）から入手可能である）の約50ピコグラムがマウスにおけるLD50である。1単位（U）のボツリヌス毒素は、それぞれが18グラム〜20グラムの体重を有するメスのSwiss Websterマウスに腹腔内注射されたときのLD50として定義される。7種類の血清学的に異なるボツリヌス神経毒が特徴付けられており、これらは、型特異的抗体による中和によってそのそれぞれが識別されるボツリヌス神経毒血清型A、B、C1、D、E、FおよびGである。ボツリヌス毒素のこれらの異なる血清型は、それらが冒す動物種、ならびにそれらが惹起する麻痺の重篤度および継続時間が異なる。例えば、A型ボツリヌス毒素は、ラットにおいて生じる麻痺率により評価された場合、B型ボツリヌス毒素よりも500倍強力であることが確認されている。また、B型ボツリヌス毒素は、霊長類では480U/kgの投与量で非毒性であることが確認されている。この投与量は、A型ボツリヌス毒素の霊長類LD50の約12倍である。ボツリヌス毒素は、コリン作動性の運動ニューロンに大きな親和性で結合して、ニューロンに移動し、アセチルコリンの放出を阻止するようである。
【００２１】
ボツリヌス毒素は、活動過多な骨格筋によって特徴付けられる神経筋障害を処置するために臨床的状況において使用されている。A型ボツリヌス毒素は、眼瞼痙攣、斜視、片側顔面痙攣および頸部ジストニーを処置するために米国食品医薬品局によって承認されている。A型以外のボツリヌス毒素血清型は、A型ボツリヌス毒素と比較した場合、効力が弱く、かつ／または活性の継続時間が短いようである。末梢筋肉内A型ボツリヌス毒素の臨床的効果は、通常、注射後1週間以内に認められる。A型ボツリヌス毒素の単回筋肉内注射による症候緩和の典型的な継続時間は平均して約3ヶ月である。
【００２２】
すべてのボツリヌス毒素血清型が神経筋接合部における神経伝達物質アセチルコリンの放出を阻害するようであるが、そのような阻害は、種々の神経分泌タンパク質に作用し、かつ／またはこれらのタンパク質を異なる部位で切断することによって行われる。例えば、A型ボツリヌス毒素およびE型ボツリヌス毒素はともに25キロダルトン（kD）のシナプトソーム会合タンパク質（SNAP-25）を切断するが、これらの毒素は、このタンパク質内の異なるアミノ酸配列を標的とする。B型、D型、F型およびG型のボツリヌス毒素は小胞会合タンパク質（VAMP、これはまたシナプトブレビンとも呼ばれる）に作用し、それぞれの血清型によってこのタンパク質は異なる部位で切断される。最後に、C1型ボツリヌス毒素は、シンタキシンおよびSNAP-25の両者を切断することが明らかにされている。作用機序におけるこれらの相違が、様々なボツリヌス毒素血清型の相対的な効力および／または作用の継続時間に影響していると考えられる。
【００２３】
ボツリヌス毒素タンパク質分子の分子量は、既知のボツリヌス毒素血清型の7つのすべてについて約150kDである。興味深いことに、これらのボツリヌス毒素は、会合する非毒素タンパク質とともに150kDのボツリヌス毒素タンパク質分子を含む複合体としてクロストリジウム属細菌によって放出される。例えば、A型ボツリヌス毒素複合体は、900kD、500kDおよび300kDの形態としてクロストリジウム属細菌によって産生され得る。B型およびC1型のボツリヌス毒素は500kDの複合体としてのみ産生されるようである。D型ボツリヌス毒素は300kDおよび500kDの両方の複合体として産生される。最後に、E型およびF型のボツリヌス毒素は約300kDの複合体としてのみ産生される。これらの複合体（すなわち、約150kDよりも大きな分子量）は、非毒素のヘマグルチニンタンパク質と、非毒素かつ非毒性の非ヘマグルチニンタンパク質とを含むと考えられる。これらの2つの非毒素タンパク質（これらは、ボツリヌス毒素分子とともに、関連する神経毒複合体を構成する）は、変性に対する安定性をボツリヌス毒素分子に与え、そして毒素が摂取されたときに消化酸からの保護を与えるように作用すると考えられる。また、より大きい（分子量が約150kDよりも大きい）ボツリヌス毒素複合体は、ボツリヌス毒素複合体の筋肉内注射部位からのボツリヌス毒素の拡散速度を低下させ得ると考えられる。
【００２４】
インビトロでの研究により、ボツリヌス毒素が、脳幹組織の初代細胞培養物からのアセチルコリンおよびノルエピネフリンの両方の、カリウムカチオンにより誘導される放出を阻害することが示されている。また、ボツリヌス毒素は、脊髄ニューロンの初代培養物におけるグリシンおよびグルタメートの両方の誘発された放出を阻害すること、そして脳のシナプトソーム調製物において、ボツリヌス毒素が神経伝達物質のアセチルコリン、ドーパミン、ノルエピネフリン、CGRPおよびグルタメートのそれぞれの放出を阻害することが報告されている。
【００２５】
A型ボツリヌス毒素は、既知の手順に従って、培養槽におけるボツリヌス菌の培養を確立して、生育させ、その後、発酵混合物を集め、精製することによって得ることができる。すべてのボツリヌス毒素血清型は、神経活性となるためにはプロテアーゼによって切断またはニッキングされなければならない不活性な単鎖タンパク質として最初に合成される。A型およびG型のボツリヌス毒素血清型を産生する細菌株は内因性プロテアーゼを有するので、A型およびG型の血清型は細菌培養物から主にその活性型で回収することができる。これに対して、C1型、D型およびE型のボツリヌス毒素血清型は非タンパク質分解性菌株によって合成されるので、培養から回収されたときには、典型的には不活性型である。B型およびF型の血清型はタンパク質分解性菌株および非タンパク質分解性菌株の両方によって産生されるので、活性型または不活性型のいずれでも回収することができる。しかし、例えば、B型ボツリヌス毒素を産生するタンパク質分解性菌株でさえも、産生された毒素の一部を切断するだけである。
【００２６】
切断型分子と非切断型分子との正確な比率は培養時間の長さおよび培養温度に依存する。したがって、例えばB型ボツリヌス毒素の製剤はいずれも一定割合が不活性であると考えられ、このことが、A型ボツリヌス毒素と比較したB型ボツリヌス毒素の知られている著しく低い効力の原因であると考えられる。臨床製剤中に存在する不活性なボツリヌス毒素分子は、その製剤の総タンパク質量の一部を占めることになるが、このことはその臨床的効力に寄与せず、抗原性の増大に関連づけられている。また、B型ボツリヌス毒素は、筋肉内注射された場合、同じ用量レベルのA型ボツリヌス毒素よりも、活性の継続期間が短く、そしてまた効力が低いことも知られている。
【００２７】
A型ボツリヌス毒素は下記のような臨床的状況において使用されていることが報告されている：
（1）頸部ジストニーを処置するための筋肉内注射（多数の筋肉）あたり約75単位〜125単位のBOTOX（登録商標）；
（2）眉間のしわを処置するための筋肉内注射あたり約5単位〜10単位のBOTOX（登録商標）（5単位が鼻根筋に筋肉内注射され、10単位がそれぞれの皺眉筋に筋肉内注射される）；
（3）恥骨直腸筋の括約筋内注射による便秘を処置するための約30単位〜80単位のBOTOX（登録商標）；
（4）上瞼の外側瞼板前部眼輪筋および下瞼の外側瞼板前部眼輪筋に注射することによって眼瞼痙攣を処置するために筋肉あたり約1単位〜5単位の筋肉内注射されるBOTOX（登録商標）；
【００２８】
（5）斜視を処置するために、外眼筋に、約1単位〜5単位のBOTOX（登録商標）が筋肉内注射されている。この場合、注射量は、注射される筋肉のサイズと所望する筋肉麻痺の程度（すなわち、所望するジオプター矯正量）との両方に基づいて変化する。
（6）卒中後の上肢痙性を処置するために、下記のように5つの異なる上肢屈筋にBOTOX（登録商標）が筋肉内注射される：
（a）深指屈筋：7.5U〜30U
（b）浅指屈筋：7.5U〜30U
（c）尺側手根屈筋：10U〜40U
（d）橈側手根屈筋：15U〜60U
（e）上腕二頭筋：50U〜200U。5つの示された筋肉のそれぞれには同じ処置時に注射されるので、患者には、それぞれの処置毎に筋肉内注射によって90U〜360Uの上肢屈筋BOTOX（登録商標）が投与される。
【００２９】
様々な臨床的状態を処置するためにA型ボツリヌス毒素が成功していることにより、他のボツリヌス毒素血清型が注目されている。2つの市販のA型ボツリヌス毒素製剤（BOTOX（登録商標）およびDysport（登録商標））ならびにB型およびF型のボツリヌス毒素の製剤（ともにWako Chemicals（日本）から得られる）の研究が、局所的な筋肉弱化効能、安全性および抗原性を明らかにするために行われた。ボツリヌス毒素製剤が右腓腹筋の頭部に注射（0.5単位／kg〜200.0単位／kg）され、筋肉の弱さが、マウスの指外転評価アッセイ（DAS）を使用して評価された。ED50値を用量応答曲線から計算した。さらなるマウスには、LD50量を決定するために筋肉内注射が行われた。治療指数をLD50／ED50として計算した。別のマウス群には、BOTOX（登録商標）（5.0単位／kg〜10.0単位／kg）またはB型ボツリヌス毒素（50.0単位／kg〜400.0単位／kg）が後肢に注射され、そして筋肉の弱さおよび増大した水の消費が調べられた。後者は、口渇の推定的なモデルである。抗原性は、ウサギに毎月筋肉内注射することによって評価された（B型ボツリヌス毒素については1.5ng／kgまたは6.5ng／kg、あるいはBOTOX（登録商標）については0.15ng／kg）。
【００３０】
最大筋肉弱さおよび継続期間はすべての血清型について用量に関連していた。水の消費は、B型ボツリヌス毒素が注射されたマウスが、BOTOX（登録商標）の場合よりも大きかったが、B型ボツリヌス毒素は、筋肉を弱くさせることにおいては効果が低かった。注射した4ヶ月後、4羽のうち2羽（1.5ng／kgで処置された場合）および4羽のうち4羽（6.5ng／kgで処置された場合）のウサギがB型ボツリヌス毒素に対する抗体を生じた。別の研究において、BOTOX（登録商標）で処置された9羽のウサギはどれも、A型ボツリヌス毒素に対する抗体を示さなかった。
【００３１】
DASの結果は、A型ボツリヌス毒素の相対的な最大効力がF型ボツリヌス毒素と同等で、F型ボツリヌス毒素の効力はB型ボツリヌス毒素よりも大きいことを示している。効果の継続期間については、A型ボツリヌス毒素はB型ボツリヌス毒素よりも大きく、B型ボツリヌス毒素の効果継続期間はF型ボツリヌス毒素よりも大きかった。治療指数値により示されるように、A型ボツリヌス毒素の2つの市販製剤（BOTOX（登録商標）およびDysport（登録商標））は異なる。B型ボツリヌス毒素を後肢に注射した後に認められる増大した水消費の挙動は、この血清型の臨床的に有意な量がネズミの全身循環に入ったことを示している。これらの結果はまた、A型ボツリヌス毒素と匹敵し得る効力を達成するためには、それ以外の調べられた血清型の量を増大する必要があることを示している。投薬量の増大は安全性を損なう可能性がある。さらに、ウサギにおいて、B型はBOTOX（登録商標）よりも抗原性が大きかった。これは、おそらくは、B型ボツリヌス毒素の効果的な用量を達成するために、より多量のタンパク質が注射されたためである。
【００３２】
ボツリヌス毒素を処置に使用することが知られている：蜘蛛膜下痛（例えば、特許文献１参照）；傍神経節腫（例えば、特許文献２参照）；耳疾患（例えば、特許文献３参照）；膵臓疾患（例えば、特許文献４および特許文献５参照）；偏頭痛（例えば、特許文献６参照）；平滑筋疾患（例えば、特許文献７参照）；前立腺肥大を含む前立腺疾患（例えば、特許文献８および非特許文献７参照）；過形成汗腺を含む自律神経疾患（例えば、特許文献９参照）；創傷治癒（例えば、特許文献１０参照）；脱毛軽減（例えば、特許文献１１参照）；皮膚病変（例えば、特許文献１２参照）；ならびに神経性炎症性疾患（例えば、特許文献１３参照）。特許文献１３は6欄39-42行に、炎症性関節症状、色素性絨毛結節性滑膜炎、およびある種の関節癌、滑膜細胞肉腫の処置を大ざっぱに開示している。特許文献１３の6欄53行にはまた、更なる説明なしに、「腫瘍」が処置できると開示されている。
【００３３】
更に、標的化ボツリヌス毒素（すなわち天然でない結合部分を持つもの）を種々の状態の処置に使用できることが開示されている（例えば、特許文献１４、ならびに特許文献１５;特許文献１６;特許文献１７;特許文献１８;特許文献１９;特許文献２０参照）。
【００３４】
ボツリヌス毒素が、胸部痙攣の抑制のために胸筋に注射されている。例えば非特許文献８参照。
【００３５】
液体の安定な製剤および純粋なボツリヌス毒素製剤のいずれも開示されており（例えば、特許文献２１および特許文献２２参照）、ボツリヌス毒素の局所適用も開示されている（例えば、特許文献２３参照）。
【００３６】
アセチルコリン
典型的には、または通常は、単一タイプの小分子の神経伝達物質のみが、哺乳動物の神経系において各タイプのニューロンによって放出される。神経伝達物質アセチルコリンが脳の多くの領域においてニューロンによって分泌されているが、具体的には運動皮質の大錐体細胞によって、基底核におけるいくつかの異なるニューロンによって、骨格筋を神経支配する運動ニューロンによって、自律神経系（交感神経系および副交感神経系の両方）の節前ニューロンによって、副交感神経系の節後ニューロンによって、そして交感神経系の一部の節後ニューロンによって分泌されている。本質的には、汗腺、立毛筋および少数の血管に至る節後交感神経線維のみがコリン作動性であり、交感神経系の節後ニューロンの大部分は神経伝達物質のエピネフリンを分泌する。ほとんどの場合、アセチルコリンは興奮作用を有する。しかし、アセチルコリンは、迷走神経による心臓の抑制のように、抑制作用を一部の末梢副交感神経終末において有することが知られている。
【００３７】
自律神経系の遠心性シグナルは交感神経系または副交感神経系のいずれかを介して身体に伝えられる。交感神経系の節前ニューロンは、脊髄の中間外側角に存在する節前交感神経ニューロン細胞体から伸びている。細胞体から伸びる節前交感神経線維は、脊椎傍交感神経節または脊椎前神経節のいずれかに存在する節後ニューロンとシナプスを形成する。交感神経系および副交感神経系の両方の節前ニューロンはコリン作動性であるので、神経節にアセチルコリンを適用することにより、交感神経および副交感神経の両方の節後ニューロンが興奮し得る。
【００３８】
アセチルコリンは、ムスカリン性受容体およびニコチン性受容体の2種類の受容体を活性化する。ムスカリン性受容体は、副交感神経系の節後ニューロンによって刺激されるすべてのエフェクター細胞において、また、交感神経系の節後コリン作動性ニューロンに刺激されるエフェクター細胞において見られる。ニコチン性受容体は、交感神経および副交感神経の両方の節前ニューロンと節後ニューロンとの間のシナプスに見られる。ニコチン性受容体はまた、神経筋接合部における骨格筋繊維の多くの膜にも存在する。
【００３９】
アセチルコリンは、小さい透明な細胞内小胞がシナプス前のニューロン細胞膜と融合したときにコリン作動性ニューロンから放出される。非常に様々な非ニューロン分泌細胞、例えば副腎髄質（PC12細胞株と同様に）および膵臓の島細胞が、それぞれカテコールアミン類およびインスリンを大きな高密度コア小胞から放出する。PC12細胞株は、交感神経副腎発達の研究のために組織培養モデルとして広範囲に使用されているラットのクロム親和性細胞腫細胞のクローンである。ボツリヌス毒素は、（エレクトロポレーションによるように）透過性にされた場合、または脱神経支配細胞に毒素を直接注射することによって、両タイプの細胞からの両タイプの化合物の放出をインビトロで阻害する。ボツリヌス毒素はまた、皮質シナプトソーム細胞培養物からの神経伝達物質グルタメートの放出を阻止することが知られている。
【００４０】
ボツリヌス毒素基質の広い分布
ボツリヌス毒素は、神経筋接合部におけるニュ−ロンからのアセチルコリン放出をシナプス前抑制することにより、筋細胞を神経麻痺させて弛緩性麻痺をもたらしうることが、知られている。ボツリヌス毒素のタンパク質分解ドメインは、標的細胞の細胞質ゾル中で特定の基質に作用し、その基質の切断は、アセチルコリン含有分泌小胞の膜ドッキングおよびエキソサイトーシスを妨げる。支配ニューロンと筋細胞の間のシナプス間隙にアセチルコリンが存在しないと、筋細胞の刺激が妨げられ、その結果、麻痺が起こる。
【００４１】
ボツリヌス毒素は、アセチルコリン含有分泌小胞のドッキングを制御する3種類のタンパク質の1つ以上に特異的に作用する細胞内プロテアーゼである。これらボツリヌス毒素の特異的基質は、シナプトブレビン、シンタキシンおよび／またはSNAP−25である。例えば、非特許文献９や、非特許文献１０などを参照されたい。B型、D型、F型およびG型ボツリヌス毒素の場合、その細胞内基質はシナプトブレビンである。SNAP−25、シナプトブレビンおよびシンタキシンはSNARE（可溶性N−エチルマレイミド感受性因子付着タンパク質受容体）と呼ばれている。
【００４２】
重要なことに、ボツリヌス毒素の基質を含有するのは、筋肉を支配している神経だけではない。すなわち「SNAP−25は多くのニューロンサブセットのシナプス前領域および神経冠細胞株に存在することから、このタンパク質はニューロン組織で重要な機能を補助していることが示唆される」非特許文献１１。
【００４３】
また、「SNAREタンパク質が内分泌細胞に広く存在することから、これらは内分泌腫瘍の一般的診断マーカーとしても役立ちうることが示唆される」非特許文献１２。例えば、SNAP−25は神経内分泌細胞（例えばクロム親和細胞、PC12、GH3およびインスリノーマなど）に広く分布することが知られている。さらに、ボツリヌス毒素基質であるシナプトブレビンは、線維芽細胞および骨髄性細胞（例えば肥満細胞）にも見いだされている。非特許文献９（前掲）。
【００４４】
実際、SNAREは、全ての分泌細胞ではないとしてもほとんどの分泌細胞で、分泌小胞の膜融合を左右または制御しているようである。非特許文献１３。
【００４５】
このように、ボツリヌス毒素の基質は、神経伝達物質アセチルコリンを放出するニューロン細胞に限定されない。したがってボツリヌス毒素基質は「膜−膜融合事象に広範に関与」しており、この証拠は「膜融合事象の普遍的機序」（すなわち分泌小胞と細胞壁とのドッキングに関する普遍的機序）を示している（非特許文献９，前掲）。
【００４６】
このように、ボツリヌス毒素の細胞内基質は、ニュ−ロン細胞にも非ニュ−ロン分泌細胞にも遍在的に分布している。このことは、SNAP−25（25キロダルトン・シナプトソーム関連タンパク質であり、少なくともA型ボツリヌス毒素の基質である）が少なくとも以下の組織または細胞に存在するという発見によって、明瞭に実証されている：
（1）膵臓（非特許文献１４）、
（2）下垂体（非特許文献１５）、
（3）副腎髄質（非特許文献１６）、
【００４７】
（4）胃細胞（非特許文献１７）、
（5）肺腫瘍（非特許文献１８（小細胞肺癌（SCLC）はSNAP−25を含んでいる）、
（6）腸腫瘍（非特許文献１９（ヒト大腸癌細胞はボツリヌス毒素を内部に取り入れる）、
【００４８】
（7）膵腫瘍（非特許文献２０（「...インスリン分泌には機能的なSNAP−25タンパク質が必要である」同書1060頁）。また、非特許文献２１、および非特許文献２２（「SNAP−25はニュ−ロン系および内分泌系におけるエキソサイトーシス事象を媒介するSNAREタンパク質である」）も参照されたい。
（8）下垂体腫瘍および正常下垂体細胞（非特許文献２３）、
（9）神経芽細胞腫（非特許文献２４）。また、非特許文献２５も参照されたい。Goodall（1992）は、ただ1つの神経芽細胞腫細胞株において一定の小胞ドッキングタンパク質のインビトロ同定だけを論じていることに注意されたい。
【００４９】
（10）腎細胞（非特許文献２６（SNAP−25は腎細胞の「調節性エキソサイトーシス」に関与する）、
（11）正常肺細胞（非特許文献２７）、
（12）すべての卵巣細胞（非特許文献２８（SNAP−25は「すべての卵母細胞と、大きい胞状卵胞の顆粒膜細胞（GC）および黄体細胞を含むステロイド産生細胞に」見いだされた）。
【００５０】
コリン作動性乳腺組織
さまざまな過形成性および新生物性乳腺細胞がコリン作動性機序による影響を受ける。例えば、「胞細胞活性にはコリン作動性機序」があることが発見されている（非特許文献２９）。また、乳腺異形成性（線維嚢胞）組織と乳癌組織の両方に対するコリン作動性の影響（非特許文献３０）ならびに胸動脈の「平滑筋細胞の直接コリン作動性刺激」（非特許文献３１）も存在する。
【００５１】
重要なことに、コリンエステラーゼの阻害によるアセチルコリンの増加は、乳腺細胞増殖の増加と、それに続く乳癌の発生に関連づけられている（非特許文献３２）。したがって、乳癌細胞増殖の減少は、コリン作動性機序によって媒介されるようである（非特許文献３３）。
【００５２】
副腎髄質
副腎、別名腎上体は、腎臓の上部に位置する小さい三角形の構造物である。各副腎は副腎皮質、すなちち外側と、副腎髄質、すなわち内側とからなる。皮質は髄質を取り囲んで封入している。
【００５３】
副腎皮質は、ホルモンであるコルチゾールとアルドステロンを分泌する。コルチゾールはストレス時に産生され、糖使用を調節し、正常血圧の維持に不可欠である。アルドステロンは塩、カリウムおよび水分平衡の主要調節因子の一つである。副腎を両方とも除去した場合は、コルチゾールおよびアルドステロン補充療法が必須である。
【００５４】
副腎髄質は、カテコールアミン類であるアドレナリン（同義語としてエピネフリン）とノルアドレナリン（同義語としてノルエピネフリン）を分泌する。これらのホルモンは、ストレス反応を含むさまざまな身体機能の正常な調節に重要であり、その場合、これらは血圧、心臓の拍出能力、および血糖レベルの上昇を引き起こす。副腎髄質を除去しても、体内の他の腺が補いうるので、ホルモン欠乏症はほとんどまたは全く起こらない。逆に、過剰なカテコールアミン産生は生死にかかわる。
【００５５】
正常成人男性では、副腎髄質によって産生される全カテコールアミンの約85％がアドレナリンであり、残り15％がノルアドレナリンである。髄質組織1gにつき約1.6mgのカテコールアミンが存在する。血中および尿中に見いだされるノルアドレナリンの大半は副腎髄質に由来するものではなく、節後交感神経終末に由来する。二クロム酸カリウムを含む固定液に、薄切したばかりの副腎を入れると、髄質は褐色に変化する。これをクロム親和反応と呼ぶが、この名前はクロム塩に対する副腎髄質組織の親和性を示唆するように付けられたものである。したがって、副腎髄質の細胞はしばしばクロム親和細胞と呼ばれる。クロム親和細胞は副腎髄質の外にも存在するが、通常はノルアドレナリンだけを分泌し、アドレナリンは分泌しない。
【００５６】
副腎髄質は、節前コリン作動性神経線維によって支配された交感神経節であると考えることもできる。これらの神経線維はアセチルコリンを放出し、そのアセチルコリンは、副腎髄質のクロム親和細胞からのエキソサイトーシスの過程によるカテコールアミン類（主としてアドレナリン）の分泌を引き起こす。正常な副腎髄質は、交感神経系の節前コリン作動性枝である内臓神経によって支配されている。副腎髄質の活性は、ほとんど完全に、そのようなコリン作動性神経の制御下にある。
【００５７】
クロム親和細胞腫
クロム親和細胞（副腎髄質のクロム親和細胞を含む）と交感神経節細胞は、以下に図解するように、どちらも共通する胚祖先、すなわち神経冠の交感神経産生細胞に由来するので、両者には共通点が多い。これらの各細胞タイプから発生しうる新生物のタイプの例を括弧内に示す。表示した細胞タイプはそれぞれ潜在的にカテコールアミン類を分泌することができる。
【００５８】
ほとんどのクロム親和細胞新生物は副腎髄質に発生するが、異所性および多部位性クロム親和細胞腫瘍も知られており、それらは、最も一般的には、小児に発生する。
【００５９】
1．傍神経節腫
傍神経節（同義語としてクロム親和体）は心臓（大動脈付近）、腎臓、肝臓、性腺、その他の場所に見いだすことができ、クロム親和細胞（神経冠細胞に由来すると思われ、自律神経系神経節細胞と密接な関係を持つように分布したもの）を含んでいる。傍神経節腫は傍神経節に由来するクロム親和細胞を含む新生物である。頚動脈小体傍神経節腫は頚動脈傍神経節腫と呼ばれ、副腎髄質傍神経節腫は褐色細胞腫またはクロム親和細胞腫と呼ばれる。
【００６０】
頚動脈小体は、総頚動脈の外膜に見いだされる丸い赤褐色〜黄褐色の構造物として観察されることが多い。これは、分岐部の血管の後内側壁に見いだすことができ、メーヤーの靱帯によって付着していて、供給血管はその靱帯を通って主に外頚動脈から流れこんでいる。正常頚動脈小体は直径3〜5mmである。舌咽神経（第IX脳神経）による求心性神経支配を受けているようである。舌咽神経は、運動線維を茎突咽頭筋に、副交感神経分泌促進線維を耳下腺に、そして感覚線維をとりわけ鼓室、軟口蓋の内面および扁桃腺に供給している。組織学的には、頚動脈小体は、多量の細胞質と大きな円形または長円形の核とを持つI型（主）細胞を含んでいる。細胞質はカテコールアミンを貯蔵し放出すると思われる有芯顆粒を含んでいる。正常頚動脈小体は、動脈血組成変化の検出を担っている。
【００６１】
頚動脈傍神経節腫は、全体からみれば稀な腫瘍であるが、頭頚部傍神経節腫の中では最も一般的な形態である。ほとんどの頚動脈小体傍神経節腫にとって選択処置は外科的切除である。しかし、重要な血管および神経のごく近くに位置するので、罹患（主に第X〜XII脳神経の欠損と血管損傷）および死亡（3〜9％と見積もられる）の危険は極めて現実的である。直径が5cmを超える腫瘍は合併症の発生率が著しく高いので、腫瘍サイズは重要である。術中αおよびβアドレナリン遮断薬が投与される（頚動脈傍神経節腫がカテコールアミン類を分泌している場合）か、それほど好ましくはないが、術前に血管造影塞栓術が行われる。放射線療法は、単独で行うにせよ、手術と併用するにせよ、第2の検討事項であり、多少議論のある部分である。残念ながら、傍神経節種は、頚動脈傍神経節腫を含めて、その位置および／または大きさゆえに、手術不能である場合もある。
【００６２】
2．褐色細胞腫
褐色細胞腫は副腎髄質に発生し、過剰なカテコールアミン産生に関係する臨床症状、例えば突発性高血圧（高血圧）、頭痛、頻脈、安静時の多汗、前屈姿勢から突然起きあがった後の症状の発現、および不安発作などを引き起こす。診断には、腹部撮像とカテコールアミン測定用の24時間尿採取で、通常は十分である。フェノキシベンザミンおよびメチロシンによるカテコールアミン遮断は一般に症状を改善し、現在の選択治療である手術中の高血圧発症を予防するのに必要である。標準処置は腹腔鏡下副腎摘出術であるが、家族性型の褐色細胞腫には部分副腎摘出術もしばしば用いられる。悪性（癌性）褐色細胞腫は稀な腫瘍である。
【００６３】
褐色細胞腫は、高血圧の副次的原因についての評価を受けている患者の約0.3％に存在すると見積もられている。褐色細胞腫は、診断されないか、または不適切な処置を受けた場合には、致死的になりうる。一連の剖検から、多くの褐色細胞腫は臨床的に疑われていないことと、診断を受けていない腫瘍が病的結果に明らかに関係していることが示唆される。
【００６４】
副腎髄質における変化の進行として、正常な副腎髄質から副腎髄質過形成（特異的な腫瘍の発生を伴わない副腎髄質の細胞数および大きさの全般的増加）を経て、副腎髄質の腫瘍（褐色細胞腫）への進行を挙げることができる。
【００６５】
褐色細胞種の処置は一方または両方の副腎の外科的除去である。両方の副腎を除去する必要があるかどうかは、疾患の程度に依存するだろう。両方の副腎を除去してしまった患者は、コルチゾールおよびアルドステロン補充を毎日受けなければならない。コルチゾールはヒドロコルチゾン、コルチゾンまたはプレドニゾンによって補充され、毎日投与しなければならない。アルドステロンは毎日経口フルドロコルチゾン（フロリネフ（商標））によって補充される。発熱、かぜ、インフルエンザ、外科手術または麻酔を含むストレス時は、そのような患者には、ヒドロコルチゾンまたはプレドニゾン補充量の増加が必要である。
【００６６】
3．グロムス腫瘍
グロムス腫瘍（傍神経節腫の一タイプ）は一般に良性新生物であり、やはり神経外胚葉組織から生じ、身体のさまざまな部分に見いだされる。グロムス腫瘍は、側頭骨内に生じる最も一般的な良性腫瘍であり、悪性になって転移するのはそれらの5％未満である。グロムス腫瘍は、頭蓋底、胸郭および首に、副交感神経に沿って分布する糸球から生じる。典型的には、各耳には3つの糸球がある。糸球は通常、ヤコブセン神経（CN IX）もしくはアーノルド神経（CN X）に付随して見いだされるか、または頚静脈球の外膜中に見いだされる。しかし物理的位置は、通常は、岬角（鼓室隆起）の粘膜または頚静脈球（頚静脈糸球）である。
【００６７】
頚静脈球腫瘍の発生率は約1：1,300,000人口であり、最も目につく疫学的事実は、女性での発生が優勢だということで、女性：男性の発生比は少なくとも4：1である。カテコールアミンを分泌する（すなわち機能的な）腫瘍は症例の約1％〜3％に生じる。
【００６８】
グロムス腫瘍はカテコールアミン類分泌能を持ち、この点は、やはり神経冠組織に由来し、やはりカテコールアミン類を分泌することができる副腎髄質に似ている。グロムス腫瘍に相当する副腎での新生物は褐色細胞腫であり、グロムス腫瘍は副腎外褐色細胞腫と呼ばれている。カテコールアミンを分泌するグロムス腫瘍は、不整脈、過剰発汗、頭痛、悪心および蒼白を引き起こしうる。
【００６９】
グロムス腫瘍は頭蓋底のさまざまな領域に生じうる。中耳腔に限局されている場合は、これを鼓室隆起腫瘍と呼ぶ。頚静脈孔の領域に生じた場合は、その程度とは無関係に、頚静脈糸球腫瘍と呼ばれる。頚静脈孔に向かって伸びる首の上部に発生した場合は、これを迷走神経糸球腫瘍と呼ぶ。頚動脈分岐部領域に発生した場合は、これを頚動脈糸球腫瘍と呼ぶ。グロムス腫瘍の部位としては、他にも、咽頭、眼窩、鼻、および大動脈弓などが知られている。
【００７０】
頚静脈糸球腫瘍は最も一般的な中耳の腫瘍である。これらの腫瘍は著しく血管性である傾向を示し、外頚動脈の枝によって血液が供給されている。頚静脈糸球腫瘍の症状には、拍動性の耳鳴りを伴う難聴、めまい、そして時には耳痛が含まれる。患者には、おそらく中耳の遮蔽による難聴がありうるが、腫瘍塊による神経損傷に起因する難聴も存在しうる。嚥下、開口、肩すくめおよび舌の動きを制御する神経の脳神経麻痺はいずれも、頚静脈糸球腫瘍の症状である。鼓膜を調べると、赤／青拍動性塊をしばしば見ることができる。症状は、最初は潜行性である。この腫瘍の位置と血管性のせいで、最も一般的な愁訴は、拍動性の耳鳴りである。この耳鳴りは、ほとんどの場合、鼓膜臍への機械的衝突に続発していると考えられる。他の一般的な症状は、耳の膨満および（伝音）難聴である。
【００７１】
カテコールアミン分泌性グロムス腫瘍の現在の治療法は、αおよびβ遮断薬を投与してからの放射線照射および／または外科的切除である。頚静脈糸球腫瘍の処置には、αおよびβ遮断薬の投与が含まれる。X線療法は、たとえ腫瘍塊が残ったとしても症状を改善するために用いることができる。血液供給を遮断する物質で腫瘍を塞栓させることもできるが、この手法には、腫瘍の膨潤が起こって脳幹および小脳を圧迫しうると共に、血液供給を失ったときに死ぬ細胞からカテコールアミンが放出されるという問題がある。小さい腫瘍が適当な位置にある場合は外科手術を行うことができる。頚静脈糸球腫瘍の外科手術の合併症は、耳から脳脊髄液が持続的に漏出することと、顔面の動き、感覚または聴覚を制御する脳神経の1つが麻痺することである。
【００７２】
たとえ外科手術が成功しうるとしても、頚静脈球腫瘍は再発率が高く、多重手術を要する場合があるので、多少問題がある。外科的切除には、主に医原性脳神経欠損とCSF漏出による傷害の危険がある。脳神経保護の欠如は、下部脳神経欠損という傷害を伴うので、おそらく最も重大な外科的介入の欠点だろう。放射線療法も、例えば側頭骨の骨放射線壊死、脳壊死、下垂体−視床下部機能不全、および二次悪性腫瘍などの重篤な合併症を持っている。他の術後合併症には、CSF漏出、吸引症候群、髄膜炎、肺炎および創感染などがある。
【先行技術文献】
【特許文献】
【００７３】
【特許文献１】米国特許第6113915号明細書
【特許文献２】米国特許第6139845号明細書
【特許文献３】米国特許第6265379号明細書
【特許文献４】米国特許第6143306号明細書
【特許文献５】米国特許第6261572号明細書
【特許文献６】米国特許第5714468号明細書
【特許文献７】米国特許第5437291号明細書
【特許文献８】国際公開第99/03483号パンフレット
【特許文献９】米国特許第5766606号明細書
【特許文献１０】国際公開第00/24419号パンフレット
【特許文献１１】国際公開第00/62746号パンフレット
【特許文献１２】米国特許第5670484号明細書
【特許文献１３】米国特許第6063768号明細書
【特許文献１４】米国特許第5989545号明細書
【特許文献１５】国際公開第96/33273号パンフレット
【特許文献１６】国際公開第99/17806号パンフレット
【特許文献１７】国際公開第98/07864号パンフレット
【特許文献１８】国際公開第00/57897号パンフレット
【特許文献１９】国際公開第01/21213号パンフレット
【特許文献２０】国際公開第00/10598号パンフレット
【特許文献２１】国際公開第00/15245号パンフレット
【特許文献２２】国際公開第74703号パンフレット
【特許文献２３】独国特許出願公開第19852981号明細書
【非特許文献】
【００７４】
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【非特許文献３１】Pesic S.ら「ブタ内胸動脈におけるアセチルコリン誘発性収縮：考えうるムスカリン受容体の役割」Zentralbl Veterinarmed A 1999 October;46（8）:509−15
【非特許文献３２】Cabello G.ら「有機リン系農薬パラチオンおよびマラチオンがおそらくはアセチルコリンエステラーゼ阻害によって誘発するラット乳腺腫瘍モデル」Environ Health Perspect 2001 May;109（5）:471−9
【非特許文献３３】Panagiotou S.「オピオイド作用薬は細胞を細胞周期のG2／M期にブロックすることによって乳癌細胞増殖を変化させる：細胞骨格要素の関与」J Cell Biochem 1999 May 1;73（2）:204−11
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【００７５】
良性子宮腺障害ならびに子宮癌および過形成性組織に対する従来の療法には、多くの短所および欠点がある。したがって、必要とされているのは、子宮腺新生物および前癌性過形成性子宮組織を処置するための有効な非外科切除的非放射線療法的療法である。
【課題を解決するための手段】
【００７６】
本発明はこの必要を満たし、さまざまな前癌性および癌性子宮組織を処置するための有効な非外科切除的非放射線療法的療法を提供する。したがって本発明は、過形成性組織などの異型性組織、嚢胞および新生物（腫瘍および癌を含む）を処置する方法、ならびに、異型性子宮組織、筋腫および新生物の発生を防止する方法または異型性子宮組織、筋腫および新生物の退行もしくは寛解を引き起こす方法を包含する。特に本発明は、患部子宮組織またはその近傍にクロストリジウム毒素を局所投与することによって、子宮腺障害、子宮筋腫、および良性および癌性新生物を処置する方法、ならびに過形成性および／または高張性子宮細胞を処置する方法を包含する。
【図面の簡単な説明】
【００７７】
【図１】ヒト女性の子宮の位置を隣接臓器との関連において示す部分断面図である。
【図２】図１の子宮の断面図である。
【図３】図２の子宮の断面図において、様々な種類の子宮筋腫の位置を示すものである。
【発明を実施するための形態】
【００７８】
本発明の一態様は、約10-3U／kg〜約2000U／kgのクロストリジウム神経毒を子宮腺組織に局所投与することによって子宮障害を処置する方法である。クロストリジウム神経毒は、ボツリヌス毒素であることができる。好ましくは、ボツリヌス毒素を約10-2U／kg〜約200U／kgの量で投与する。より好ましくは、ボツリヌス毒素を約10-1U／kg〜約35U／kgの量で投与する。ボツリヌス毒素はA型、B型、C型、D型、E型、F型およびG型ボツリヌス毒素からなる群より選択され、好ましいボツリヌス毒素はA型ボツリヌス毒素である。
【００７９】
ボツリヌス毒素の局所投与は、子宮腺中または子宮腺上へのボツリヌス毒素植込剤の植込みによって行うことができる。子宮腺障害は、前癌性子宮組織および子宮癌からなる群より選択される。したがって子宮障害は筋腫であることができる。ボツリヌス毒素は、子宮腺組織へのボツリヌス毒素の直接注入によって局所投与することができる。
【００８０】
より具体的な本発明の一態様は、約10-3U／kg〜約2000U／kgのA型ボツリヌス毒素をヒト患者の子宮腺に局所投与することによって子宮腺障害を処置する方法である。
【００８１】
本発明は、子宮腺にまたは前癌性子宮組織の近傍にボツリヌス毒素を局所投与し、その結果として、過形成性、高張性または新生物性子宮腺組織の大きさおよび／または活性を低下させることによって、子宮腺障害を処置する方法も包含する。この方法により、ボツリヌス毒素の局所投与後に、過形成性、高張性または新生物性子宮腺組織の直径を約20％〜約100％減少させることができる。
【００８２】
したがって、ここに記載する子宮腺障害の処置方法は、処置量のボツリヌス毒素を、過形成性、高張性または新生物性子宮腺組織に局所投与し、その結果として、前記過形成性、高張性または新生物性子宮腺組織の直径を約20％〜約100％減少させるステップを含むことができる。
【００８３】
さらに本発明は、子宮腺新生物の発生を防止する方法であって、過形成性または高張性子宮腺組織にボツリヌス毒素を局所投与し、その結果として、前記過形成性または高張性子宮腺組織からの分泌を減少させ、前記過形成性または高張性子宮腺組織が新生物に発展するのを防止するステップを含む方法を包含する。この方法では、ボツリヌス毒素を約10-3U／kg〜約2,000U／kgの量で投与し、ボツリヌス毒素はA型、B型、C型、D型、E型、F型およびG型ボツリヌス毒素からなる群より選択される。ボツリヌス毒素は、前記過形成性または高張性子宮腺組織にボツリヌス毒素を直接注入することによって、局所投与することができる。
【００８４】
繰り返すと、子宮腺新生物の発生を防止する方法は、処置量のA型ボツリヌス毒素をヒト患者の前癌性過形成性または高張性子宮腺組織に局所投与し、その結果として、子宮腺新生物の発生を防止するステップを含むことができる。
【００８５】
もう一つの選択肢として、子宮新生物の発生を防止する方法は、約10-3U／kg〜約2000U／kgのボツリヌス毒素を過形成性組織に局所投与するステップを含むことができ、この場合、ボツリヌス毒素は、前癌性過形成性子宮組織からの小胞エキソサイトーシスを阻害することによって前記過形成組織からの分泌を減少させ、その結果として、前記過形成性組織が新生物に発展するのを防止する。過形成性組織は、25キロダルトン・シナプトソーム関連タンパク質（SNAP−25）、シナプトブレビンおよびシンタキシンからなる小胞膜ドッキングタンパク質の群より選択されるボツリヌス毒素の基質を含みうる。さらにまた、ボツリヌス毒素は、約1U〜約40,000Uの量、例えば約10-3U／kg〜約35U／kg、約10-2U／kg〜約25U／kg、約10-2U／kg〜約15U／kg、または約1U／kg〜約10U／kgの量で投与することができ、ボツリヌス毒素の局所投与は、子宮組織の本体の中または上にボツリヌス毒素植込剤を植込むことによって行われる。
【００８６】
本発明の具体的一態様は、子宮腺癌の発生を防止（すなわち［過形成性、化生性または異型性ではあるが］良性の前癌性子宮組織が悪性新生物または癌腫に発展するのを防止することによって防止）する方法であって、約10-3U／kg〜約2000U／kgのA型ボツリヌス毒素を、ヒト患者の過形成性、化生性または異型性子宮組織（例えばアポクリン細胞で裏打ちされた嚢胞）に局所投与するステップを含む方法である。この場合、子宮組織は、25キロダルトン・シナプトソーム関連タンパク質（SNAP−25）、シナプトブレビンおよびシンタキシンからなる小胞膜ドッキングタンパク質の群より選択されるボツリヌス毒素の基質を含み、ボツリヌス毒素はその基質に作用して患部子宮組織からの分泌を減少させる。
【００８７】
本発明は、約10-3U／kg〜約2000U／kgのボツリヌス毒素を新生物に局所投与し、その結果として、新生物の大きさを減少させ、そして／または子宮新生物からの分泌を減少させることによって新生物を処置することによる、新生物の処置方法を、その範囲に包含する。
【００８８】
本発明の方法は、新生物の本体中にボツリヌス毒素を直接注入することによって、または子宮新生物の本体中または本体上にボツリヌス毒素植込剤を植込むことによって行うことができる。本発明の範囲に包含される方法を実施して、10-3U／kg〜約2000U／kgのボツリヌス毒素を新生物に局所投与することができる。U／kgとは、患者の総体重1kgあたりのボツリヌス毒素の単位数を意味する。ボツリヌス毒素はA型、B型、C１型、D型、E型、F型およびG型ボツリヌス毒素の1つであることができ、A型ボツリヌス毒素の臨床有効性は多くの適応症について知られていることと、容易に入手できることから、A型ボツリヌス毒素が好ましい。
【００８９】
好ましくは、ボツリヌス毒素を、約1U〜約40,000U（総単位数、患者の体重1kgあたりの単位数ではない）の量で投与する。高い方の用量範囲では、ボツリヌス毒素の投与量（すなわち40,000単位）を、ボツリヌス毒素デポーの部分量（すなわち約10単位のA型ボツリヌス毒素または約500単位のB型ボツリヌス毒素）が、制御放出送達系から、3〜4ヶ月かけて放出されるように（連続的放出送達系）、またはほぼ3〜4ヶ月の反復周期で多相的に制御放出送達系から放出されるように（拍動的放出送達系）、制御放出送達系（すなわち植込剤）の形で投与することができる。処置量のボツリヌス毒素を連続的または拍動的に新生物内または新生物周囲に放出させるために本発明で使用するのに適した制御放出送達系は、米国特許第6,306,423号および第6,312,708号に開示されている。
【００９０】
より好ましい本発明の一態様として、本発明に従って子宮新生物の本体にまたは子宮新生物の内部に局所投与されるA型ボツリヌス毒素の量は、約10-3U／kg〜約40U／kgの量であることができる。約10-3U／kg未満のA型ボツリヌス毒素は有意な処置有効性をもたらさないと予想され、約40U／kgを超えるA型ボツリヌス毒素は、この毒素の毒性用量またはほぼ毒性用量になると予想することができる。B型ボツリヌス毒素の場合、本発明に従って新生物に局所投与されるB型ボツリヌス毒素の量は、約10-3U／kg〜約2000U／kgの量であることができる。約10-3U／kg未満のB型ボツリヌス毒素は有意な処置有効性をもたらさないと予想され、約2000U／kgを超えるB型ボツリヌス毒素は、B型ボツリヌス毒素の毒性用量またはほぼ毒性用量になると予想することができる。市販B型ボツリヌス毒素製剤は約2000単位／kg（筋肉内）で、B型ボツリヌス毒素の霊長類致死用量に近づくと報告されている（Meyer K. E.ら「成体および若齢カニクイザルにおけるニューロブロックの比較全身毒性研究」Mov. Disord 15（Suppl 2）;54;2000）。C型、D型、E型、F型およびG型ボツリヌス毒素の場合、新生物に注入する量は、患者ごとに決定することができ、B型毒素の用量範囲を超えないと予想される。
【００９１】
より好ましい本発明の一態様では、ここに開示する方法に従って投与されるA型ボツリヌス毒素の量は、約10-2U／kg〜約25U／kgである。約1000U／kg未満のB型ボツリヌス毒素であれば、霊長類に筋肉内注入しても、全身作用は現れないと報告されているので（前掲）、所定の期間に連続的放出系によって投与されるB型ボツリヌス毒素の量は、好ましくは、約10-2U／kg〜約1000U／kgである。より好ましくは、A型ボツリヌス毒素を、約10-1U／kg〜約15U／kgの量で投与する。最も好ましくは、A型ボツリヌス毒素を約1U／kg〜約10U／kgの量で投与する。多くの場合、約1単位〜約100単位未満のA型ボツリヌス毒素を新生物内投与することによって、本明細書に説明する通り、有効で長時間持続する治療的改善が得られる。より好ましくは約5単位〜約75単位のボツリヌス毒素（例えばA型ボツリヌス毒素）を使用することができ、最も好ましくは、約5単位〜約50単位のA型ボツリヌス毒素を、標的新生物組織中に局所投与して、有効な結果を得ることができる。特に好ましい本発明の一態様として、約1単位〜約50単位のボツリヌス毒素（例えばA型ボツリヌス毒素）を、新生物標的組織に局所投与して、本明細書に記載する通り、治療的に有効な結果を得ることができる。
【００９２】
本発明の範囲に包含される具体的一方法は、約10-3U／kg〜約2000U／kgのA型ボツリヌス毒素をヒト患者の新生物に局所投与し、その結果として、子宮新生物からの分泌を減少させることによって行うことができる。
【００９３】
「局所投与」とは、標的子宮組織の局所領域内へのまたは局所領域への神経毒の直接注入を意味する。全身性の投与経路、例えば経口投与経路や静脈内投与経路は、本発明の範囲から除外される。
【００９４】
ボツリヌス毒素は修飾ボツリヌス毒素であることができる。すなわちボツリヌス毒素は、天然ボツリヌス毒素と比較して、そのアミノ酸の少なくとも1つが欠失しているか、修飾されているか、または置換されていてもよい。したがってボツリヌス毒素は組換え生産されたボツリヌス毒素またはその誘導体もしくは断片であることができる。
【００９５】
本発明は、過形成性、高張性、嚢胞性および／または新生物性子宮組織を、クロストリジウム毒素で処置し、その結果として、その過形成性、高張性、嚢胞性および／または新生物性状態を減少させるか排除することができるという発見に基づいている。処置対象組織は良性でも悪性でもよく、過形成には高張性状態が含まれる。したがって本発明は、子宮癌および筋腫を含む状態の処置に適用することができると共に、過形成性、化生性、異型性および異形成性前癌子宮組織に適用することができる。
【００９６】
また、1つ以上のボツリヌス毒素基質によって分泌活性が制御または左右される過剰分泌子宮細胞（過形成性または高張性）も、その過形成性または高張性子宮分泌組織が新生物に発展しないように、本発明の範囲に包含される方法で処置することができる。標的組織では、ボツリヌス毒素のタンパク質分解性軽鎖が、内部に取り入れられる。
【００９７】
理論による束縛は望まないが、本発明の効果の生理学的メカニズムを提示することができる。すなわち、子宮の筋肉組織はコリン作動性ニューロンの影響を受けることが知られている。例えば、Morris, J. ら、「ボツリヌス神経素Aは血管収縮ニューロンからのノルエピネフリン放出を抑制するがNPY放出は抑制しない」Am J Physiol Heart Circ Physiol 2002 Dec; 283(6)を参照されたい。さらに、子宮腺組織のコリン作動性神経支配は、そのような細胞の分泌活性に影響することが知られている。例えば、Hammarstron M.ら、「酸化窒素はモルモットのムスカリン性子宮内膜分泌における細胞メッセンジャーとして作用するか？」 Acta Physiol Scand 2002 Apr; 174(4):311-5を参照されたい。すなわち、子宮分泌細胞は少なくとも、交感神経コリン作動性分泌促進神経支配を受ける。したがって、ボツリヌス毒素を子宮腺組織に局所投与することにより、そのような腺細胞の分泌活性を低下することができ（これは、細胞に対する分泌促進性コリン作動性神経支配を抑制することによるか、または毒素が子宮腺細胞（該細胞中で、毒素基質SNAP-25またはVAMPが分泌小胞の膜ドッキングもしくは融合を促進する）に直接に作用することによる）、それによって子宮腺過形成が抑制される結果、筋腫の進行を抑制し、さらに過形成性（すなわち前癌性）子宮腺細胞が子宮癌、腫瘍または新生物に発展または移行するのを抑制することができると仮定することができる。
【００９８】
好ましい一態様として、本発明は、前癌性子宮組織などの子宮疾患を処置する方法である。本発明はどんな特定機序にも限定されないが、患部組織（例えば子宮筋腫）へのクロストリジウム毒素（例えばボツリヌス毒素）の局所投与は、子宮細胞を神経支配している刺激性コリン作動性線維に対する毒素の阻害作用によって、または筋腫細胞によって毒素（または少なくとも毒素軽鎖）が内部に取り入れられた時の筋腫に対する毒素の直接作用によって、筋腫の処置（すなわち、筋腫および／または子宮細胞過形成の大きさの減少［または完全な除去］）をもたらすという仮説を設けることができる。
【００９９】
したがって、本発明の好ましい一態様は、例えば子宮筋腫、腺症、乳頭腫および線維腺腫（小葉過形成）などの前癌性子宮障害を処置する方法である。前癌性とは、患部子宮組織は悪性ではない（すなわち癌性ではない）が、過形成性、肥厚性または化生性ではありうることを意味し、その患者が子宮癌を発生させる危険を前癌性組織の存在が増加させることを意味する。
【０１００】
したがって、コリン作動性の神経支配を受けている子宮標的組織は、クロストリジウム毒素（例えばボツリヌス毒素）の局所投与によって処置することができる。局所投与とは、神経毒が標的組織（すなわち前癌性子宮組織）または処置すべき局所組織領域の中に、またはその近傍に、直接投与されることを意味する。局所投与には、患部組織への神経毒の直接注入が含まれる。非癌性（良性）、前癌性、癌性（悪性）の過形成性および／または高張性分泌組織を、本発明の範囲に包含される方法で処置することができる。腫瘍の発生に先立って起こる結節性または散在性の過形成を、本発明によって処置することができる。
【０１０１】
ある特定の神経毒、すなわちボツリヌス毒素を使用して、さまざまな前癌性子宮組織を処置すると、劇的な改善効果が得られること、そしてその結果、これが現行の外科手術、化学療法および放射線療法による治療法に、かなりの部分、取って代わりうることを発見した。重要なことに、ボツリヌス毒素の単回局所投与によって、子宮疾患を有効に処置することができる。
【０１０２】
図1に示すように子宮は膀胱および腸の近くに位置する。図2に示すように、子宮は、子宮底、子宮体、子宮頸、子宮頸管、子宮内膜および子宮筋層を有する。様々な種類の筋腫が生じ得、これには、筋層内、有茎性粘膜下、有茎性漿膜下、粘膜下および漿膜下の筋腫が含まれる。子宮における典型的な位置を図3に示す。
【０１０３】
投与経路および投与されるボツリヌス毒素の量は、処置される特定の子宮腺障害ならびにサイズ、体重、年齢、障害の重篤度および処置に対する応答性を含む様々な患者パラメーターに応じて広範囲に変化させることができる。適切な投与経路および投薬量を決定する方法は、一般には主治医によって症例毎に決定される。そのような決定は当業者にとっては日常的なことである（例えば、Harrison's Principles of Internal Medicine （1997）（編者：Anthony Fauciら、第14版、発行：McGraw Hill）を参照のこと）。全身循環への毒素の進入が実質的に回避されるように処置を行う（すなわち、静脈内投与ではなく皮下または筋肉内注射によって）。
【０１０４】
投与に適切な具体的な投薬量は、上記に議論された要因に応じて当業者によって容易に決定される。投薬量はまた、処置または脱神経支配される腫瘍のサイズに、そして毒素の市販の製剤に依存し得る。また、ヒトにおける適切な投薬量の推定値は、他の非新生物組織の効果的な脱神経支配のために必要とされるボツリヌス毒素の量を決定することから推定することができる。したがって、注射されるA型ボツリヌス毒素の量は、処置される子宮組織の大きさおよび活性レベルに比例する。
【０１０５】
一般には、患者体重の1kgあたり約0.01単位〜2000単位のボツリヌス毒素（A型ボツリヌス毒など）を、神経毒が子宮標的組織またはその近傍に投与されたときに毒素により誘導される標的組織退行を効果的に達成するために投与することができる。約0.01U／kg未満のボツリヌス毒素は顕著な処置作用を有さず、一方、それぞれ約2000U／kgよりも多い、または約35U／kgよりも多いB型またはA型のボツリヌス毒素は該神経毒の毒性量に近づく。注射針の慎重な設置および使用される神経毒の少ない容量により、著量のボツリヌス毒素が全身に現れないようになる。より好ましい用量範囲は約0.01U／kg〜約25U／kgのボツリヌス毒素であり、例えば、BOTOX（登録商標）として配合された用量である。投与されるボツリヌス毒素のU／kgの実際の量は、例えば処置される過形成性子宮組織の範囲（大きさ）および活性レベルならびに選ばれた投与経路などの要因に依存する。A型ボツリヌス毒素は、本発明の方法において使用される好ましいボツリヌス毒素血清型である。
【０１０６】
ボツリヌス毒素の主要な作用部位は、毒素が迅速に結合して、アセチルコリンの放出を妨げる神経筋接合部である。したがって、ボツリヌス毒素がコリン作動性のシナプス前末梢運動ニューロンに対する結合親和性を有することが知られている一方で、本発明者が見出したところでは、ボツリヌス毒素はまた、様々な前癌性子宮組織に結合して、その中に移動し得、毒素はそこで、その後、知られている様式で、そのそれぞれの分泌管−膜ドッキングタンパク質に対するエンドプロテアーゼとして作用する。ある種の子宮組織に対するボツリヌス毒素の親和性は比較的低いために、毒素を分泌組織または腺様組織に注射して、毒素の濃度を局所的に大きくすることが好ましい。したがって、本発明は、コリン作動的な神経支配をほとんどまたは全く受けない前癌性子宮組織を処置するために適用することができる。
【０１０７】
好ましくは、本発明の範囲に含まれる方法を実施するために使用される神経毒はボツリヌス毒素であり、例えば、A型、B型、C型、D型、E型、F型またはG型の血清型のボツリヌス毒素のいずれかである。好ましくは、使用されるボツリヌス毒素は、ヒトにおけるその効果が高いこと、容易に入手できること、そして筋肉内注射により局所投与されて骨格筋および平滑筋の障害を処置するために使用されることが知られていることのために、A型ボツリヌス毒素である。
【０１０８】
前癌性子宮組織を処置するための本発明による神経毒の投与経路は、選ばれた神経毒毒素の溶解性特性ならびに投与される神経毒の量などの基準に基づいて選択することができる。神経毒の投与量は、処置される特定の障害、その重篤度、およびサイズ、体重、年齢および処置に対する応答性を含む他の様々な患者パラメーターに応じて広範囲に変化させることができる。例えば、影響を受ける前癌性子宮組織の範囲は、注射された神経毒の容量に比例すると考えられ、一方で、脱神経支配の程度は、ほとんどの用量範囲について、注射された神経毒の濃度に比例すると考えられる。適切な投与経路および投薬量を決定する方法は、一般には主治医によって症例毎に決定される。そのような決定は当業者にとっては日常的なことである（例えば、Harrison's Principles of Internal Medicine （1997）（編者：Anthony Fauciら、第14版、発行：McGraw Hill）を参照のこと）。
【０１０９】
本発明は、その範囲内において、患者の前癌性子宮組織に局所的に適用されたときに処置効果の継続時間が長い任意の神経毒の使用を包含する。例えば、ボツリヌス菌（Clostridium botulinum）、ボツリヌス・ブチリカム（Clostridium butyricum）およびクロストリジウム・ベラティ（Clostridium beratti）などの毒素産生性のクロストリジウム属細菌の種のいずれかによって作られる神経毒を本発明の方法において使用することができ、または本発明の方法における使用のために適合させることができる。また、A型、B型、C型、D型、E型、F型またはG型のボツリヌス毒素血清型はすべて、本発明の実施において好都合に使用することができるが、上記に説明されているように、A型が最も好ましい血清型である。本発明の実施により、標的組織の退行および緩解がヒトにおいて27ヶ月またはそれ以上にわたってもたらされ得る。
【０１１０】
透過処理された副腎髄質からのカテコールアミン放出がボツリヌス毒素によって阻害され得ることが知られている。また、（エレクトロポレーションよるように）透過処理されたインスリン分泌細胞からのインスリンの放出がボツリヌス毒素によって阻害され得ることが知られている。インビトロの場合、これらの非神経細胞の細胞膜は、ボツリヌス毒素に対する細胞表面受容体がないために、細胞の細胞質ゾルへのボツリヌス毒素の導入を助けるために透過性にすることができる。したがって、B型ボツリヌス毒素は、インスリン分泌細胞株HIT-15に存在するシナプトブレビンを切断することによってインスリン分泌を阻害するようである（Boyd R.S.ら、The Effect of Botulinum Neurotoxin-B On Insulin Release From a Beta Cell、Mov Disord 10（3）：376 （1995））。
【０１１１】
本発明者の論ずるところでは、ボツリヌス毒素の軽鎖が細胞内媒質に移動する限り、ボツリヌス毒素により、任意の分泌性（すなわち、ニューロン性、腺様、分泌性、クロム親和性）細胞タイプからの任意の小胞媒介エキソサイトーシスの放出が阻止され得る。例えば、細胞内タンパク質のSNAP−25はニューロン性および非ニューロン性の両方の分泌細胞に広く分布しており、そしてA型ボツリヌス毒素は、特異的な基質がSNAP−25であるエンドペプチダーゼである。したがって、コリン作動性ニューロンはボツリヌス毒素および破傷風毒素に対する高親和性の受容器を有する（したがって、分泌化合物の小胞媒介エキソサイトーシスの阻害に対して、他のニューロンおよび他の細胞よりも大きな感受性を有する）一方で、毒素濃度が上昇するに従い、非コリン作動性の交感神経ニューロン、クロム親和性細胞および他の細胞タイプがボツリヌス毒素を取り込むことができ、そして低下したエキソサイトーシスを示すことができる。
【０１１２】
したがって、本発明を実施することによって、非コリン作動性神経線維、ならびに神経支配されていないか、またはあまり神経支配されていない分泌性子宮新生物を、分泌性子宮新生物の退行処置をもたらすために適度により高い濃度のボツリヌス毒素を使用することによって処置することができる。
【０１１３】
さらに、本発明の範囲内に含まれる方法は、改善された患者機能を提供することができる。「改善された患者機能」は、疼痛の軽減、臥床時間の短縮、歩行運動の増大、より健康な態度、より多様なライフスタイル、および／または正常な筋肉緊張により可能になる治癒などの要因によって測定される改善として定義することができる。改善された患者機能は、改善された生活の質（QOL）と同義である。QOLは、例えば、知られているSF−12またはSF−36の健康調査評価手順を使用して評価することができる。SF−36は、身体的機能性、身体的問題による職務制限、社会的機能性、身体の痛み、一般的な精神的健康状態、精神的問題による職務制限、活力および一般的な健康認識の8項目において患者の身体的および精神的な健康状態を評価する。得られる評価点は、様々な一般的集団および患者集団について得られる公表された値と比較することができる。
【０１１４】
上記に示されているように、本発明者は、驚くほど効果的で長く持続する処置効果が、ヒト患者の前癌性子宮組織への神経毒の局所投与によって達成され得ることを発見した。本発明の最も好ましい実施形態において、本発明は、A型ボツリヌス毒素を標的組織または標的組織局部域に直接注射することによって実施される。神経腺結合部においては、A型ボツリヌス毒素などのボツリヌス毒素の化学的な脱神経支配効果は、作用の継続期間がかなり長いことが報告されている（すなわち、3ヶ月に対して27ヶ月）。
【０１１５】
本発明は、その範囲内において、（a）細菌培養、毒素抽出、濃縮、保存、凍結乾燥および／または再構成によって取得または処理された神経毒複合体ならびに純粋な神経毒、そして（b）修飾されたまたは組換え神経毒、すなわち、1つまたは複数のアミノ酸またはアミノ酸配列が、既知の化学的／生化学的なアミノ酸修飾法によって、または既知の宿主細胞／組換えベクター組換え技術の使用によって意図的に欠失、修飾または置換されている神経毒、ならびにそのようにして作製された神経毒の誘導体または断片を包含し、そして、クロム親和細胞種および新生物細胞種に対する1つまたは複数のターゲティング成分を有する神経毒を包含する。
【０１１６】
本発明に従って使用されるボツリヌス毒素は、減圧下の容器において凍結乾燥形態または真空乾燥形態で保存することができる。凍結乾燥に先立って、ボツリヌス毒素は、薬学的に受容可能な賦形剤、安定化剤および／またはキャリア（アルブミンなど）と一緒にすることができる。凍結乾燥物または真空乾燥物は生理的食塩水または水で再構成することができる。
【０１１７】
以下の各実施例では、ボツリヌス毒素の具体的投与量は、主治医の裁量で比較検討され考慮されるべきさまざまな要因に依存し、各実施例では、全身的に現れるボツリヌス毒素注入量はごくわずかで、有意な副作用をもたない。以下に示す1キログラムあたりの注入ボツリヌス毒素単位数（U／kg）は、患者の総体重1kgあたりの値である。例えば体重70kgの患者の場合、3U／kgなら、210単位のボツリヌス毒素を注入する必要がある。
【０１１８】
以下の実施例は、本発明の範囲に包含される好ましい本発明実施方法の具体例を、本発明の実施のために当業者に示すものであり、本発明者が本発明であるとみなす範囲を限定しようとするものではない。
【０１１９】
以下の各実施例では、ボツリヌス毒素（ボトックス（BOTOX（登録商標））など）の具体的投与量は、主治医の裁量で比較検討され考慮されるべきさまざまな要因に依存する。
【実施例１】
【０１２０】
ボツリヌス毒素を使った筋腫の処置
子宮筋腫を持つ46歳の女性が来院する。超音波検査および撮像により、多発性子宮筋腫が明らかになる。組織学的検査により、子宮内膜異型（過形成と化生の両方）が明らかになる。したがってこの患者は、癌を発生させる危険があると判断される。複数の位置の筋腫塊に10単位〜100単位のA型ボツリヌス毒素（ボトックスなど）を局所投与（注入）する。その後28日以内に筋腫は実質的に退行しており（筋腫直径が少なくとも80％減少）、その状態がその後2〜24ヶ月持続する。もう一つの選択肢として、B型、C型、D型、E型、F型またはG型ボツリヌス毒素を投与することもできる。ただし投与量は、効力がA型毒素とは異なる点を考慮して調節する。したがって、例えばB型ボツリヌス毒素の効力はA型ボツリヌス毒素の約50分の1であることがわかっているので、500〜5000単位のB型毒素を局所投与する。もう一つの選択肢として、長期間にわたって治療効果を得るために、米国特許第6,306,423号および第6,312,708号に記載されているように、制御放出植込剤を皮下に挿入することができ、そして／またはボツリヌス含有マイクロスフェアの懸濁液を注入することができる。
【実施例２】
【０１２１】
ボツリヌス毒素を使った高張性または過形成性子宮組織の処置
64歳の女性が、前癌性過形成性子宮組織を持つと診断される。過形成性組織に10単位〜100単位のA型ボツリヌス毒素（ボトックスなど）を局所投与（注入）する。その後28日以内に過形成は実質的に退行しており、その状態がその後2〜24ヶ月持続する。もう一つの選択肢として、B型、C型、D型、E型、F型またはG型ボツリヌス毒素を投与することもできる。ただし投与量は、効力がA型毒素とは異なる点を考慮して調節する。したがって、例えばB型ボツリヌス毒素の効力はA型ボツリヌス毒素の約50分の1であることがわかっているので、500〜5000単位のB型毒素を局所投与する。もう一つの選択肢として、長期間にわたって治療効果を得るために、米国特許第6,306,423号および第6,312,708号に記載されているように、制御放出植込剤を皮下に挿入することができ、そして／またはボツリヌス含有マイクロスフェアの懸濁液を注入することができる。子宮転移病変を処置するために、また、過形成性もしくは癌性子宮組織の外科的除去に先立って術前に、同様の局所投与法を実施することができる。
【０１２２】
本明細書中に開示される本発明による方法には多くの利点があり、例えば下記が含まれる：
（1）本発明は、過形成性、高張性および化生性子宮組織を含む様々な子宮障害の効果的な処置のために、外科的手法を不必要にする。
（2）全身的な薬物の作用を、本発明による神経毒の直接的な局所適用によって回避することができる。
（3）本発明の改善効果は、本明細書中に示されているように神経毒の単回局所投与から2年またはそれ以上持続させることができる。
【０１２３】
本発明は、いくつかの好ましい方法に関して詳しく記載されているが、本発明の範囲内に含まれる他の実施形態、変形および変更が可能である。例えば、広範囲の神経毒を本発明の方法において効果的に使用することができる。また、本発明は、2つ以上のボツリヌス毒素などの2つ以上の神経毒が同時または連続的に投与される局所的耳投与法を包含する。例えば、A型ボツリヌス毒素を、臨床的応答の喪失または中和抗体が生じるまで投与し、その後、E型ボツリヌス毒素を投与することができる。あるいは、A型〜G型のボツリヌス毒素の任意の2つ以上を組み合わせて、所望する処置結果の開始および継続期間を制御するために局所投与することができる。さらに、脱神経支配を増強するため、またはボツリヌス毒素などの神経毒がその処置効果を発揮し始めるよりも早く脱神経支配を開始するためなどの付随的な効果を生じさせるために、非神経毒化合物を、神経毒を投与する前に、または神経毒を投与すると同時に、または神経毒を投与した後に投与することができる。
【０１２４】
本発明はまた、その範囲内において、神経毒を局所投与することによって前癌性乳房組織を処置するための医薬品を調製するための、ボツリヌス毒素などの神経毒の使用を包含する。先に挙げた参考文献、論文、刊行物および特許はいずれも、参照によりそれら全体が本書に組み込まれる。
したがって、特許請求の範囲の精神および範囲は、上記に示された好ましい実施形態の記載に限定されるものではない。
【特許請求の範囲】
【請求項１】
約10-3U／kg〜約2000U／kgのクロストリジウム神経毒を子宮腺に局所投与することにより子宮腺障害を処置するための医薬の製造におけるクロストリジウム神経毒の使用。
【請求項２】
クロストリジウム神経毒がボツリヌス毒素である請求項１に記載の使用。
【請求項３】
ボツリヌス毒素を約10-2U／kg〜約200U／kgの量で投与する請求項２に記載の使用。
【請求項４】
ボツリヌス毒素を約10-1U／kg〜約35U／kgの量で投与する請求項２に記載の使用。
【請求項５】
ボツリヌス毒素がA型、B型、C型、D型、E型、F型およびG型ボツリヌス毒素からなる群より選択される請求項２に記載の使用。
【請求項６】
ボツリヌス毒素がA型ボツリヌス毒素である請求項２に記載の使用。
【請求項７】
ボツリヌス毒素の局所投与を、子宮腺中または子宮腺上へのボツリヌス毒素植込剤の植込みによって行う請求項２に記載の使用。
【請求項８】
子宮腺障害が、前癌性子宮組織および子宮癌からなる群より選択される請求項１に記載の使用。
【請求項９】
約10-3U／kg〜約2000U／kgのA型ボツリヌス毒素をヒト患者の子宮に局所投与することによって子宮腺からの分泌を減少させることにより子宮腺障害を処置するための医薬の製造におけるA型ボツリヌス毒素の使用。
【請求項１０】
約10-3U／kg〜約2000U／kgのボツリヌス毒素を子宮筋腫に局所投与することにより子宮筋腫を処置するための医薬の製造におけるボツリヌス毒素の使用。
【請求項１１】
ボツリヌス毒素を子宮腺または前癌性子宮組織近傍に局所投与することによって、過形成性、高張性または新生物性子宮腺組織の大きさおよび／または活性を低下させることにより子宮腺障害を処置するための医薬の製造におけるボツリヌス毒素の使用。
【請求項１２】
処置有効量のボツリヌス毒素を過形成性、高張性または新生物性子宮腺組織に局所投与することによって、過形成性、高張性または新生物性子宮腺組織の直径を約20％〜約100％減少させることにより子宮腺障害を処置するための医薬の製造におけるボツリヌス毒素の使用。
【請求項１３】
ボツリヌス毒素を過形成性または高張性子宮腺組織に局所投与することによって、過形成性または高張性子宮腺組織からの分泌を減少させ、過形成性または高張性子宮腺組織が新生物に発展するのを防止することにより子宮腺新生物の発生を防止するための医薬の製造におけるボツリヌス毒素の使用。
【請求項１４】
処置有効量のA型ボツリヌス毒素をヒト患者の過形成性または高張性の前癌性子宮腺組織に局所投与することによって、子宮腺新生物の発生を防止することにより子宮新生物の発生を防止するための医薬の製造におけるA型ボツリヌス毒素の使用。
【請求項１５】
過形成性子宮組織が、25キロダルトン・シナプトソーム関連タンパク質（SNAP−25）、シナプトブレビンおよびシンタキシンからなる小胞膜ドッキングタンパク質の群より選択されるボツリヌス毒素の基質を含む請求項１４に記載の使用。
【請求項１６】
約10-3U／kg〜約2000U／kgのA型ボツリヌス毒素をヒト患者の過形成性子宮組織に局所投与することにより子宮癌の発生を防止するための医薬の製造におけるA型ボツリヌス毒素の使用であって、過形成性子宮組織が、25キロダルトン・シナプトソーム関連タンパク質（SNAP−25）、シナプトブレビンおよびシンタキシンからなる小胞膜ドッキングタンパク質の群より選択されるボツリヌス毒素の基質を含み、ボツリヌス毒素はその基質に作用して過形成性子宮組織からの分泌を減少させる使用。
【請求項１】
約10-3U／kg〜約2000U／kgのクロストリジウム神経毒を子宮腺に局所投与することにより子宮腺障害を処置するための医薬の製造におけるクロストリジウム神経毒の使用。
【請求項２】
クロストリジウム神経毒がボツリヌス毒素である請求項１に記載の使用。
【請求項３】
ボツリヌス毒素を約10-2U／kg〜約200U／kgの量で投与する請求項２に記載の使用。
【請求項４】
ボツリヌス毒素を約10-1U／kg〜約35U／kgの量で投与する請求項２に記載の使用。
【請求項５】
ボツリヌス毒素がA型、B型、C型、D型、E型、F型およびG型ボツリヌス毒素からなる群より選択される請求項２に記載の使用。
【請求項６】
ボツリヌス毒素がA型ボツリヌス毒素である請求項２に記載の使用。
【請求項７】
ボツリヌス毒素の局所投与を、子宮腺中または子宮腺上へのボツリヌス毒素植込剤の植込みによって行う請求項２に記載の使用。
【請求項８】
子宮腺障害が、前癌性子宮組織および子宮癌からなる群より選択される請求項１に記載の使用。
【請求項９】
約10-3U／kg〜約2000U／kgのA型ボツリヌス毒素をヒト患者の子宮に局所投与することによって子宮腺からの分泌を減少させることにより子宮腺障害を処置するための医薬の製造におけるA型ボツリヌス毒素の使用。
【請求項１０】
約10-3U／kg〜約2000U／kgのボツリヌス毒素を子宮筋腫に局所投与することにより子宮筋腫を処置するための医薬の製造におけるボツリヌス毒素の使用。
【請求項１１】
ボツリヌス毒素を子宮腺または前癌性子宮組織近傍に局所投与することによって、過形成性、高張性または新生物性子宮腺組織の大きさおよび／または活性を低下させることにより子宮腺障害を処置するための医薬の製造におけるボツリヌス毒素の使用。
【請求項１２】
処置有効量のボツリヌス毒素を過形成性、高張性または新生物性子宮腺組織に局所投与することによって、過形成性、高張性または新生物性子宮腺組織の直径を約20％〜約100％減少させることにより子宮腺障害を処置するための医薬の製造におけるボツリヌス毒素の使用。
【請求項１３】
ボツリヌス毒素を過形成性または高張性子宮腺組織に局所投与することによって、過形成性または高張性子宮腺組織からの分泌を減少させ、過形成性または高張性子宮腺組織が新生物に発展するのを防止することにより子宮腺新生物の発生を防止するための医薬の製造におけるボツリヌス毒素の使用。
【請求項１４】
処置有効量のA型ボツリヌス毒素をヒト患者の過形成性または高張性の前癌性子宮腺組織に局所投与することによって、子宮腺新生物の発生を防止することにより子宮新生物の発生を防止するための医薬の製造におけるA型ボツリヌス毒素の使用。
【請求項１５】
過形成性子宮組織が、25キロダルトン・シナプトソーム関連タンパク質（SNAP−25）、シナプトブレビンおよびシンタキシンからなる小胞膜ドッキングタンパク質の群より選択されるボツリヌス毒素の基質を含む請求項１４に記載の使用。
【請求項１６】
約10-3U／kg〜約2000U／kgのA型ボツリヌス毒素をヒト患者の過形成性子宮組織に局所投与することにより子宮癌の発生を防止するための医薬の製造におけるA型ボツリヌス毒素の使用であって、過形成性子宮組織が、25キロダルトン・シナプトソーム関連タンパク質（SNAP−25）、シナプトブレビンおよびシンタキシンからなる小胞膜ドッキングタンパク質の群より選択されるボツリヌス毒素の基質を含み、ボツリヌス毒素はその基質に作用して過形成性子宮組織からの分泌を減少させる使用。
【図１】
【図２】
【図３】
【図２】
【図３】
【公開番号】特開２０１２−８２２３１（Ｐ２０１２−８２２３１Ａ）
【公開日】平成２４年４月２６日（２０１２．４．２６）
【国際特許分類】
【外国語出願】
【出願番号】特願２０１２−１５６０４（Ｐ２０１２−１５６０４）
【出願日】平成２４年１月２７日（２０１２．１．２７）
【分割の表示】特願２００６−５０８８４７（Ｐ２００６−５０８８４７）の分割
【原出願日】平成１６年２月２５日（２００４．２．２５）
【出願人】（５９１０１８２６８）アラーガン、インコーポレイテッド (293)
【氏名又は名称原語表記】ＡＬＬＥＲＧＡＮ，ＩＮＣＯＲＰＯＲＡＴＥＤ
【Ｆターム（参考）】
【公開日】平成２４年４月２６日（２０１２．４．２６）
【国際特許分類】
【出願番号】特願２０１２−１５６０４（Ｐ２０１２−１５６０４）
【出願日】平成２４年１月２７日（２０１２．１．２７）
【分割の表示】特願２００６−５０８８４７（Ｐ２００６−５０８８４７）の分割
【原出願日】平成１６年２月２５日（２００４．２．２５）
【出願人】（５９１０１８２６８）アラーガン、インコーポレイテッド (293)
【氏名又は名称原語表記】ＡＬＬＥＲＧＡＮ，ＩＮＣＯＲＰＯＲＡＴＥＤ
【Ｆターム（参考）】
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