連結成分を介して互いに共有結合で連結された少なくとも２つのα−ガラクトシダーゼモノマーを含む多量体型タンパク質構造体、多量体型タンパク質構造体を調製するプロセス、および多量体型タンパク質構造体の投与を介した、ファブリー病を処置することを含む方法が開示される。開示された多量体型タンパク質構造体は、リソソーム条件下および血清環境中の両方における高まった活性および／またはより長く持続する活性の点で、改善された成績を示す。

【特許請求の範囲】
【請求項１】
連結成分を介して互いに共有結合で連結された少なくとも２つのα−ガラクトシダーゼモノマーを含む多量体型タンパク質構造体であって、下記の特性からなる群から選択される特性を特徴とする多量体型タンパク質構造体：
（ａ）天然型α−ガラクトシダーゼをヒト血漿条件に１時間さらしたときの天然型α−ガラクトシダーゼの活性よりも少なくとも１０％大きい、多量体型タンパク質構造体をヒト血漿条件に１時間さらしたときのα−ガラクトシダーゼ活性；
（ｂ）天然型α−ガラクトシダーゼの活性が、天然型α−ガラクトシダーゼをヒト血漿条件に１時間さらしたときに低下する割合よりも少なくとも１０％小さい割合で、多量体型タンパク質構造体をヒト血漿条件に１時間さらしたときに低下するα−ガラクトシダーゼ活性；
（ｃ）多量体型タンパク質構造体をヒト血漿条件に１時間さらしたとき、実質的に変化しないままであるα−ガラクトシダーゼ活性；
（ｄ）天然型α−ガラクトシダーゼをリソソーム条件に１週間さらしたときの天然型α−ガラクトシダーゼの活性よりも少なくとも１０％大きい、多量体型タンパク質構造体をリソソーム条件に１週間さらしたときのα−ガラクトシダーゼ活性；
（ｅ）天然型α−ガラクトシダーゼの活性が、天然型α−ガラクトシダーゼをリソソーム条件に１日間さらしたときに低下する割合よりも少なくとも１０％小さい割合で、多量体型タンパク質構造体をリソソーム条件に１日間さらしたときに低下するα−ガラクトシダーゼ活性；
（ｆ）多量体型タンパク質構造体をリソソーム条件に１日間さらしたとき、実質的に変化しないままであるα−ガラクトシダーゼ活性；
（ｇ）多量体型タンパク質の天然型形態をリソソーム条件にさらした直後の天然型α−ガラクトシダーゼの活性よりも少なくとも１０％大きい、多量体型タンパク質構造体をリソソーム条件にさらした直後のα−ガラクトシダーゼ活性；
（ｈ）天然型α−ガラクトシダーゼを、７のｐＨおよび３７℃の温度を有する水溶液にさらした直後の天然型α−ガラクトシダーゼの活性よりも少なくとも１０％大きい、多量体型タンパク質構造体を、７のｐＨおよび３７℃の温度を有する水溶液にさらした直後のα−ガラクトシダーゼ活性；および
（ｉ）天然型α−ガラクトシダーゼの循環半減期よりも少なくとも２０％大きい生理学的システムにおける循環半減期。
【請求項２】
多量体型タンパク質構造体をリソソーム条件に１日間さらしたとき、実質的に変化しないままである多量体型タンパク質構造体のα−ガラクトシダーゼ活性はさらに、多量体型タンパク質構造体をリソソーム条件に１週間さらしたとき、実質的に変化しないままである、請求項１に記載の多量体型タンパク質構造体。
【請求項３】
連結成分は天然型α−ガラクトシダーゼにおいて存在しない、請求項１または２に記載の多量体型タンパク質構造体。
【請求項４】
連結成分を介して互いに共有結合で連結された少なくとも２つのα−ガラクトシダーゼモノマーを含む多量体型タンパク質構造体であって、連結成分が天然型α−ガラクトシダーゼにおいて存在しない多量体型タンパク質構造体。
【請求項５】
下記の特性からなる群から選択される特性を特徴とする、請求項４に記載の多量体型タンパク質構造体：
（ａ）天然型α−ガラクトシダーゼをヒト血漿条件に１時間さらしたときの天然型α−ガラクトシダーゼの活性よりも少なくとも１０％大きい、多量体型タンパク質構造体をヒト血漿条件に１時間さらしたときのα−ガラクトシダーゼ活性；
（ｂ）天然型α−ガラクトシダーゼの活性が、天然型α−ガラクトシダーゼをヒト血漿条件に１時間さらしたときに低下する割合よりも少なくとも１０％小さい割合で、多量体型タンパク質構造体をヒト血漿条件に１時間さらしたときに低下するα−ガラクトシダーゼ活性；
（ｃ）多量体型タンパク質構造体をヒト血漿条件に１時間さらしたとき、実質的に変化しないままであるα−ガラクトシダーゼ活性；
（ｄ）天然型α−ガラクトシダーゼをリソソーム条件に１週間さらしたときの天然型α−ガラクトシダーゼの活性よりも少なくとも１０％大きい、多量体型タンパク質構造体をリソソーム条件に１週間さらしたときのα−ガラクトシダーゼ活性；
（ｅ）天然型α−ガラクトシダーゼの活性が、天然型α−ガラクトシダーゼをリソソーム条件に１日間さらしたときに低下する割合よりも少なくとも１０％小さい割合で、多量体型タンパク質構造体をリソソーム条件に１日間さらしたときに低下するα−ガラクトシダーゼ活性；
（ｆ）多量体型タンパク質構造体をリソソーム条件に１日間さらしたとき、実質的に変化しないままであるα−ガラクトシダーゼ活性；
（ｇ）天然型α−ガラクトシダーゼをリソソーム条件にさらした直後の天然型α−ガラクトシダーゼの活性よりも少なくとも１０％大きい、多量体型タンパク質構造体をリソソーム条件にさらした直後のα−ガラクトシダーゼ活性；
（ｈ）天然型α−ガラクトシダーゼを、７のｐＨおよび３７℃の温度を有する水溶液にさらした直後の天然型α−ガラクトシダーゼの活性よりも少なくとも１０％大きい、多量体型タンパク質構造体を、７のｐＨおよび３７℃の温度を有する水溶液にさらした直後のα−ガラクトシダーゼ活性；および
（ｉ）天然型α−ガラクトシダーゼの循環半減期よりも大きい生理学的システムにおける循環半減期。
【請求項６】
多量体型タンパク質構造体をリソソーム条件に１日間さらしたとき、実質的に変化しないままである多量体型タンパク質構造体のα−ガラクトシダーゼ活性はさらに、多量体型タンパク質構造体をリソソーム条件に１週間さらしたとき、実質的に変化しないままである、請求項５に記載の多量体型タンパク質構造体。
【請求項７】
天然型α−ガラクトシダーゼの循環半減期よりも大きい多量体型タンパク質構造体の循環半減期は、天然型α−ガラクトシダーゼの循環半減期よりも少なくとも２０％大きい、請求項５または６に記載の多量体型タンパク質構造体。
【請求項８】
天然型α−ガラクトシダーゼの循環半減期よりも大きい多量体型タンパク質構造体の循環半減期は、天然型α−ガラクトシダーゼの循環半減期よりも少なくとも５０％大きい、請求項７に記載の多量体型タンパク質構造体。
【請求項９】
多量体型タンパク質構造体は、多量体型タンパク質構造体を脊椎動物に投与したときの器官におけるα−ガラクトシダーゼ活性によって特徴づけられ、器官は、脾臓、心臓および腎臓からなる群から選択される、請求項１〜８のいずれかに記載の多量体型タンパク質構造体。
【請求項１０】
多量体型タンパク質構造体は２つのα−ガラクトシダーゼモノマーを含み、タンパク質構造体はダイマー型タンパク質構造体である、請求項１〜９のいずれかに記載の多量体型タンパク質構造体。
【請求項１１】
α−ガラクトシダーゼはヒトα−ガラクトシダーゼである、請求項１〜１０のいずれかに記載の多量体型タンパク質構造体。
【請求項１２】
α−ガラクトシダーゼは植物組換えα−ガラクトシダーゼである、請求項１〜１０のいずれかに記載の多量体型タンパク質構造体。
【請求項１３】
α−ガラクトシダーゼは、配列番号１、配列番号２および配列番号３からなる群から選択されるアミノ酸配列を有する、請求項１〜１２のいずれかに記載の多量体型タンパク質構造体。
【請求項１４】
α−ガラクトシダーゼはアルカリ性α−ガラクトシダーゼである、請求項１〜１２のいずれかに記載の多量体型タンパク質構造体。
【請求項１５】
α−ガラクトシダーゼは酸性α−ガラクトシダーゼである、請求項１〜１２のいずれかに記載の多量体型タンパク質構造体。
【請求項１６】
連結成分はポリ（アルキレングリコール）を含む、請求項１〜１５のいずれかに記載の多量体型タンパク質構造体。
【請求項１７】
ポリ（アルキレングリコール）は少なくとも２つの官能基を含み、それぞれの官能基がα−ガラクトシダーゼモノマーの１つとの共有結合を形成する、請求項１６に記載の多量体型タンパク質構造体。
【請求項１８】
少なくとも２つの官能基はポリ（アルキレングリコール）の末端基である、請求項１７に記載の多量体型タンパク質構造体。
【請求項１９】
少なくとも１つの連結成分は下記一般式を有する、請求項１〜１５のいずれかに記載の多量体型タンパク質構造体：
−Ｘ_１−（ＣＲ_１Ｒ_２−ＣＲ_３Ｒ_４−Ｙ）ｎ−Ｘ_２−
式中、Ｘ_１およびＸ_２の各々は、少なくとも１つのα−ガラクトシダーゼモノマーとの共有結合を形成する官能基であり；
ＹはＯ，ＳまたはＮＲ_５であり；
ｎは１〜２００の整数であり：および
Ｒ_１，Ｒ_２，Ｒ_３，Ｒ_４およびＲ_５の各々は、水素、アルキル、シクロアルキル、アルケニル、アルキニル、アルコキシ、ヒドロキシ、オキソ、チオールおよびチオアルコキシからなる群から独立して選択される。
【請求項２０】
官能基の少なくとも１つがα−ガラクトシダーゼモノマーとのアミド結合を形成する、請求項１７〜１９のいずれかに記載の多量体型タンパク質構造体。
【請求項２１】
ｎは５〜１５０の整数である、請求項１９に記載の多量体型タンパク質構造体。
【請求項２２】
ｎは４０〜７０の整数である、請求項１９に記載の多量体型タンパク質構造体。
【請求項２３】
請求項１〜２２のいずれかに記載の多量体型タンパク質構造体と、医薬的に許容され得る担体とを含む医薬組成物。
【請求項２４】
ガラクトースをさらに含む、請求項２３に記載の医薬組成物。
【請求項２５】
医薬品として使用されるためのものである、請求項１〜２２のいずれかに記載の多量体型タンパク質構造体。
【請求項２６】
医薬品は、ファブリー病を処置するためのものである、請求項２５に記載の多量体型タンパク質構造体。
【請求項２７】
ファブリー病を処置する際に使用されるためのものである、請求項１〜２２のいずれかに記載の多量体型タンパク質構造体。
【請求項２８】
ファブリー病を処置する方法であって、請求項１〜２２のいずれかに記載の多量体型タンパク質構造体の治療効果的な量をその必要性のある対象に投与し、それにより、ファブリー病を処置することを含む方法。
【請求項２９】
請求項１〜２２のいずれかに記載の多量体型タンパク質構造体を調製するプロセスであって、α−ガラクトシダーゼを、連結成分と、少なくとも２つの反応基とを含む架橋剤と反応させることを含むプロセス。
【請求項３０】
ダイマー型α−ガラクトシダーゼを架橋剤と反応させることを含む、請求項２９に記載のプロセス。
【請求項３１】
反応基は脱離基を含む、請求項２９または３０に記載のプロセス。
【請求項３２】
反応基はアミノ基と反応して、アミド結合を形成する、請求項２９〜３１のいずれかに記載のプロセス。
【請求項３３】
反応基のそれぞれが、共有結合を、連結成分と、少なくとも１つのα−ガラクトシダーゼモノマーとの間で形成することができる、請求項２９〜３２のいずれかに記載のプロセス。
【請求項３４】
α−ガラクトシダーゼのモノマーに対する架橋剤のモル比が５：１〜５００：１の範囲にある、請求項２９〜３３のいずれかに記載のプロセス。
【請求項３５】
モル比は７５：１〜３００：１の範囲にある、請求項３４に記載のプロセス。

【図３２Ａ−３２Ｂ】

【図３３Ａ−３３Ｂ】

【図３３Ｃ−３３Ｄ】

【図１】

【図２】

【図３】

【図４】

【図５】

【図６】

【図７】

【図８】

【図９】

【図１０】

【図１１】

【図１２Ａ−１２Ｂ】

【図１２Ｃ】

【図１３】

【図１４Ａ−１４Ｂ】

【図１５Ａ−１５Ｂ】

【図１６】

【図１７】

【図１８】

【図１９】

【図２０】

【図２１】

【図２２】

【図２３】

【図２４Ａ−２４Ｂ】

【図２５】

【図２６Ａ−２６Ｂ】

【図２７Ａ−２７Ｂ】

【図２７Ｃ−２７Ｄ】

【図２８Ａ−２８Ｂ】

【図２８Ｃ−２８Ｄ】

【図２９Ａ−２９Ｂ】

【図３０Ａ−３０Ｃ】

【図３１Ａ−３１Ｂ】

【図３１Ｃ−３１Ｄ】

【図３３Ｅ−３３Ｆ】

【図３３Ｇ−３３Ｈ】

【図３３Ｉ−３３Ｊ】

【図３３Ｋ−３３Ｌ】

【図３４Ａ−３４Ｂ】

【図３４Ｃ】

【図３５】

【図３６Ａ−３６Ｂ】

【図３７】

【図３８】

【図３９】

【図４０Ａ−４０Ｂ】

【図４１】

【図４２】

【図４３Ａ−４３Ｃ】

【図４３Ｄ−４３Ｆ】

【図４４】

【公表番号】特表２０１３−５２０９８６（Ｐ２０１３−５２０９８６Ａ）
【公表日】平成２５年６月１０日（２０１３．６．１０）
【国際特許分類】
【出願番号】特願２０１２−５５５５４２（Ｐ２０１２−５５５５４２）
【出願日】平成２３年３月２日（２０１１．３．２）
【国際出願番号】ＰＣＴ／ＩＬ２０１１／０００２０９
【国際公開番号】ＷＯ２０１１／１０７９９０
【国際公開日】平成２３年９月９日（２０１１．９．９）
【出願人】（５０５１６１９１０）プロタリクス　リミテッド (8)
【Ｆターム（参考）】