抗原および細菌分泌シグナルポリペプチドを含む融合タンパク質をコードする組換え核酸分子、発現カセット、および細菌、ならびにこれらを使用する方法
本発明は、細菌における、抗原のような異種ポリペプチドを含めたポリペプチドの発現で有用な、組換え核酸分子、発現カセット、およびベクターを提供する。組換え核酸分子、発現カセットおよびベクターのいくつかは、ポリペプチドおよび／またはシグナルペプチドをコードするコドン最適化配列を含む。組換え核酸分子、発現カセット、および発現ベクターのいくつかは、ポリペプチドの分泌のための、非リステリアル（Ｌｉｓｔｅｒｉａｌ）および／または非ｓｅｃＡ１シグナルペプチドをコードする配列を含む。本発明は、核酸分子、発現カセット、および発現ベクターを含む細菌、ならびに該細菌を含むワクチンのような組成物も提供する。該細菌、組換え核酸分子、および発現カセットを製造し、使用する方法も提供される。
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【特許請求の範囲】
【請求項１】
組換え核酸分子であって、該組換え核酸分子は、
（ａ）細菌本来のシグナルペプチドをコードする第一のポリヌクレオチドであって、ここに、該第一のポリヌクレオチドは細菌における発現に対してコドン最適化されいる、第一のポリヌクレオチド；および
（ｂ）ポリペプチドをコードする第二のポリヌクレオチドであって、ここに、該第二のポリヌクレオチドは該第一のポリヌクレオチドと同一の翻訳リーディングフレームにある、第二のポリヌクレオチド
を含み、ここに、該組換え核酸分子は該シグナルペプチドおよび該ポリペプチドを含む融合タンパク質をコードする、組換え核酸分子。
【請求項２】
前記細菌がＬｉｓｔｅｒｉａ細菌である、請求項１に記載の組換え核酸分子。
【請求項３】
前記第二のポリヌクレオチドによってコードされるポリペプチドが、腫瘍関連抗原、腫瘍関連抗原に由来するポリペプチド、感染症抗原、および感染症抗原に由来するポリペプチドからなる群より選択される抗原を含む、請求項１に記載の組換え核酸分子。
【請求項４】
前記第二のポリヌクレオチドによってコードされるポリペプチドが、シグナルペプチドに対して異種であるか、細菌に対して外来性であるか、または双方である、請求項１に記載の組換え核酸分子。
【請求項５】
前記シグナルペプチドが、Ｌｉｓｔｅｒｉａ ｍｏｎｏｃｙｔｏｇｅｎｅｓからのＬＬＯシグナルペプチドであるか、またはＬｉｓｔｅｒｉａ ｍｏｎｏｃｙｔｏｇｅｎｅｓからのｐ６０シグナルペプチドである、請求項１に記載の組換え核酸分子。
【請求項６】
前記組換え核酸分子の第一のポリヌクレオチドおよび第二のポリヌクレオチドに作動可能に連結されたプロモーターをさらに含む、請求項１に記載の組換え核酸分子を含む発現カセット。
【請求項７】
前記第一のポリヌクレオチドが、前記組換え細菌における発現に対してコドン最適化されている、請求項１に記載の組換え核酸分子を含む組換え細菌。
【請求項８】
抗原に対する宿主における免疫応答を誘導する方法であって、該方法は、
該宿主に有効量の請求項７に記載の組換え細菌を含む組成物を投与する工程
を包含し、ここに、前記第二のポリヌクレオチドによってコードされるポリペプチドが、該抗原を含む、方法。
【請求項９】
組換え核酸分子を含む組換えＬｉｓｔｅｒｉａ細菌であって、ここに、該組換え核酸分子は、
（ａ）シグナルペプチドをコードする第一のポリヌクレオチドであって、ここに、該第一のポリヌクレオチドは、Ｌｉｓｔｅｒｉａ細菌における発現に対してコドン最適化されている、第一のポリヌクレオチド；および
（ｂ）ポリペプチドをコードする第二のポリヌクレオチドであって、ここに、該第二のポリヌクレオチドは該第一のポリヌクレオチドと同一の翻訳リーディングフレームにある、第二のポリヌクレオチド
を含み、
ここに、該組換え核酸分子は、該シグナルペプチドおよび該ポリペプチドを含む融合タンパク質をコードする、組換えＬｉｓｔｅｒｉａ細菌。
【請求項１０】
前記組換え核酸分子を含む発現カセットを含み、ここに、該発現カセットは、該組換え核酸分子の第一のポリヌクレオチドおよび第二のポリヌクレオチドの双方に作動可能に連結されたプロモーターをさらに含む、請求項９に記載の組換えＬｉｓｔｅｒｉａ細菌。
【請求項１１】
前記Ｌｉｓｔｅｒｉａ細菌が、Ｌｉｓｔｅｒｉａ ｍｏｎｏｃｙｔｏｇｅｎｅｓ種に属する、請求項９に記載の組換えＬｉｓｔｅｒｉａ細菌。
【請求項１２】
前記第二のポリヌクレオチドによってコードされるポリペプチドが、腫瘍関連抗原、腫瘍関連抗原に由来するポリペプチド、感染症抗原、および感染症抗原に由来するポリペプチドからなる群より選択される抗原を含む、請求項９に記載の組換えＬｉｓｔｅｒｉａ細菌。
【請求項１３】
前記第二のポリヌクレオチドによってコードされるポリペプチドが、Ｋ−Ｒａｓ、Ｈ−Ｒａｓ、Ｎ−Ｒａｓ、１２−Ｋ−Ｒａｓ、メソセリン、ＰＳＣＡ、ＮＹ−ＥＳＯ−１、ＷＴ−１、スルビビン、ｇｐ１００、ＰＡＰ、プロテイナーゼ３、ＳＰＡＳ−１、ＳＰ−１７、ＰＡＧＥ−４、ＴＡＲＰ、およびＣＥＡからなる群より選択される抗原を含むか、あるいはＫ−Ｒａｓ、Ｈ−Ｒａｓ、Ｎ−Ｒａｓ、１２−Ｋ−Ｒａｓ、メソセリン、ＰＳＣＡ、ＮＹ−ＥＳＯ−１、ＷＴ−１、スルビビン、ｇｐ１００、ＰＡＰ、プロテイナーゼ３、ＳＰＡＳ−１、ＳＰ−１７、ＰＡＧＥ−４、ＴＡＲＰ、およびＣＥＡからなる群より選択される抗原に由来するポリペプチドを含む、請求項１２に記載の組換えＬｉｓｔｅｒｉａ細菌。
【請求項１４】
前記第二のポリヌクレオチドによってコードされるポリペプチドが、メソセリン、またはその抗原性フラグメントもしくは抗原性改変体を含むか、あるいはＮＹ−ＥＳＯ−１、またはその抗原性フラグメントもしくは抗原性改変体を含む、請求項１３に記載の組換えＬｉｓｔｅｒｉａ細菌。
【請求項１５】
前記第二のポリヌクレオチドによってコードされるポリペプチドが、そのシグナルペプチドおよびＧＰＩリンカードメインを欠失したヒトメソセリンを含む、請求項１４に記載の組換えＬｉｓｔｅｒｉａ細菌。
【請求項１６】
前記第二のポリヌクレオチドによってコードされるポリペプチドが、前記シグナルペプチドに対して異種である、請求項９に記載の組換えＬｉｓｔｅｒｉａ細菌。
【請求項１７】
前記シグナルペプチドが、Ｌｉｓｔｅｒｉａ細菌に対して外来性である、請求項９に記載の組換えＬｉｓｔｅｒｉａ細菌。
【請求項１８】
前記シグナルペプチドが、Ｌｉｓｔｅｒｉａ細菌本来のものである、請求項９に記載の組換えＬｉｓｔｅｒｉａ細菌。
【請求項１９】
前記シグナルペプチドが、Ｌｉｓｔｅｒｉａ ｍｏｎｏｃｙｔｏｇｅｎｅｓからのＬＬＯシグナルペプチド、Ｌａｃｔｏｃｏｃｃｕｓ ｌａｃｔｉｓからのＵｓｐ４５シグナルペプチド、Ｂａｃｉｌｌｕｓ ａｎｔｈｒａｃｉｓからの保護抗原シグナルペプチド、Ｌｉｓｔｅｒｉａ ｍｏｎｏｃｙｔｏｇｅｎｅｓからのｐ６０シグナルペプチド、およびＢ．ｓｕｂｔｉｌｉｓからのＰｈｏＤシグナルペプチドからなる群より選択されるシグナルペプチドである、請求項９に記載の組換えＬｉｓｔｅｒｉａ細菌。
【請求項２０】
細胞間拡大、非食細胞への進入、または増殖に対して減弱化されている、請求項９に記載の組換えＬｉｓｔｅｒｉａ細菌。
【請求項２１】
ＡｃｔＡ、インターナリンＢ、またはＡｃｔＡおよびインターナリンＢ双方が欠損した、請求項９に記載の組換えＬｉｓｔｅｒｉａ細菌。
【請求項２２】
前記組換え細菌の核酸が、核酸標的化合物との反応によって修飾されている、請求項９に記載の組換えＬｉｓｔｅｒｉａ細菌。
【請求項２３】
請求項９に記載の組換えＬｉｓｔｅｒｉａ細菌を含む、免疫原性組成物またはワクチン。
【請求項２４】
抗原に対する宿主における免疫応答を誘導する方法であって、該方法は、
該宿主に有効量の請求項９に記載の組換えＬｉｓｔｅｒｉａ細菌を含む組成物を投与する工程
を包含し、ここに、前記第二のポリヌクレオチドによってコードされるポリペプチドが、該抗原を含む、方法。
【請求項２５】
宿主において疾患を予防または処置する方法であって、該方法は、
該宿主に有効量の請求項９に記載の組換えＬｉｓｔｅｒｉａ細菌を含む組成物を投与する工程
を包含する、方法。
【請求項２６】
組換え核酸分子であって、該組換え核酸分子は、
（ａ）非ｓｅｃＡ１細菌シグナルペプチドをコードする第一のポリヌクレオチド；および
（ｂ）該シグナルペプチドに対して異種であるポリペプチドをコードする第二のポリヌクレオチドであって、ここに、該第二のポリヌクレオチドは該第一のポリヌクレオチドと同一の翻訳リーディングフレームにある、第二のポリヌクレオチド
を含み、そして、
ここに、該組換え核酸分子は、該シグナルペプチドおよび該ポリペプチドを含む融合タンパク質をコードする、組換え核酸分子。
【請求項２７】
前記第一のポリヌクレオチド、前記第二のポリヌクレオチド、または該第一のポリヌクレオチドおよび第二のポリヌクレオチド双方が、細菌における発現に対してコドン最適化されている、請求項２６に記載の組換え核酸分子。
【請求項２８】
前記シグナルペプチドが、Ｌｉｓｔｅｒｉａシグナルペプチドである、請求項２６に記載の組換え核酸分子。
【請求項２９】
前記シグナルペプチドが、ｓｅｃＡ２シグナルペプチドまたはＴａｔシグナルペプチドである、請求項２６に記載の組換え核酸分子。
【請求項３０】
前記シグナルペプチドが、Ｌｉｓｔｅｒｉａ ｍｏｎｏｃｙｔｏｇｅｎｅｓからのｐ６０シグナルペプチドであるか、またはＢ．ｓｕｂｔｉｌｉｓからのｐｈｏＤシグナルペプチドである、請求項２６に記載の組換え核酸分子。
【請求項３１】
前記第二のポリヌクレオチドによってコードされるポリペプチドが、腫瘍関連抗原、腫瘍関連抗原に由来するポリペプチド、感染症抗原、および感染症抗原に由来するポリペプチドからなる群より選択される抗原を含む、請求項２６に記載の組換え核酸分子。
【請求項３２】
前記組換え核酸分子の第一のポリヌクレオチドおよび第二のポリヌクレオチドに作動可能に連結されたプロモーターをさらに含む、請求項２６に記載の組換え核酸分子を含む発現カセット。
【請求項３３】
請求項２６に記載の組換え核酸分子を含む、組換え細菌。
【請求項３４】
Ｌｉｓｔｅｒｉａ細菌である、請求項３３に記載の組換え細菌。
【請求項３５】
抗原に対する宿主における免疫応答を誘導する方法であって、該方法は、
該宿主に有効量の請求項３３に記載の組換え細菌を含む組成物を投与する工程
を包含し、ここに、前記第二のポリヌクレオチドによってコードされるポリペプチドが、該抗原を含む、方法。
【請求項３６】
組換え核酸分子を含む組換えＬｉｓｔｅｒｉａ細菌であって、ここに、該組換え核酸分子は、
（ａ）非ｓｅｃＡ１細菌シグナルペプチドをコードする第一のポリヌクレオチド；および
（ｂ）該シグナルペプチドに対して異種であるか、または該細菌に対して外来性であるか、または双方であるポリペプチドをコードする第二のポリヌクレオチドであって、ここに、該第二のポリヌクレオチドは該第一のポリヌクレオチドと同一の翻訳リーディングフレームにある、第二のポリヌクレオチド
を含み、
ここに、該組換え核酸分子は、該シグナルペプチドおよび該ポリペプチドを含む融合タンパク質をコードする、組換えＬｉｓｔｅｒｉａ細菌。
【請求項３７】
前記組換え核酸分子を含む発現カセットを含み、ここに、該発現カセットは、該組換え核酸分子の第一のポリヌクレオチドおよび第二のポリヌクレオチド双方に作動可能に連結されたプロモーターをさらに含む、請求項３６に記載の組換えＬｉｓｔｅｒｉａ細菌。
【請求項３８】
前記第一のポリヌクレオチド、前記第二のポリヌクレオチド、または該第一のポリヌクレオチドおよび第二のポリヌクレオチド双方が、Ｌｉｓｔｅｒｉａ細菌における発現に対してコドン最適化されている、請求項３６に記載の組換えＬｉｓｔｅｒｉａ細菌。
【請求項３９】
前記細菌が、Ｌｉｓｔｅｒｉａ ｍｏｎｏｃｙｔｏｇｅｎｅｓ種に属する、請求項３６に記載の組換えＬｉｓｔｅｒｉａ細菌。
【請求項４０】
前記非ｓｅｃＡ１シグナルペプチドが、非Ｌｉｓｔｅｒｉａシグナルペプチドである、請求項３６に記載の組換えＬｉｓｔｅｒｉａ細菌。
【請求項４１】
前記非ｓｅｃＡ１シグナルペプチドが、Ｌｉｓｔｅｒｉａシグナルペプチドである、請求項３６に記載の組換えＬｉｓｔｅｒｉａ細菌。
【請求項４２】
前記シグナルペプチドが、ｓｅｃＡ２シグナルペプチドである、請求項３６に記載の組換えＬｉｓｔｅｒｉａ細菌。
【請求項４３】
前記組換え核酸分子が、さらに、
（ｃ）前記第一のポリヌクレオチドおよび第二のポリヌクレオチドと同一の翻訳リーディングフレームにある、ｓｅｃＡ２自己溶解素、またはそのフラグメントをコードする第三のポリヌクレオチド
を含み、ここに、該第二のポリヌクレオチドは、該第三のポリヌクレオチド内に位置するか、または該第一のポリヌクレオチドと該第三のポリヌクレオチドとの間に位置する、請求項４２に記載の組換えＬｉｓｔｅｒｉａ細菌。
【請求項４４】
前記シグナルペプチドが、Ｔａｔシグナルペプチドである、請求項３６に記載の組換えＬｉｓｔｅｒｉａ細菌。
【請求項４５】
前記シグナルペプチドが、Ｂ．ｓｕｂｔｉｌｉｓからのＰｈｏＤシグナルペプチドであるか、またはＬｉｓｔｅｒｉａ ｍｏｎｏｃｙｔｏｇｅｎｅｓからのｐ６０シグナルペプチドである、請求項３６に記載の組換えＬｉｓｔｅｒｉａ細菌。
【請求項４６】
前記第二のポリヌクレオチドによってコードされるポリヌクレオチドが、腫瘍関連抗原、腫瘍関連抗原に由来するポリペプチド、感染症抗原、および感染症抗原に由来するポリペプチドからなる群より選択される抗原を含む、請求項３６に記載の組換えＬｉｓｔｅｒｉａ細菌。
【請求項４７】
前記第二のポリヌクレオチドによってコードされるポリペプチドが、Ｋ−Ｒａｓ、Ｈ−Ｒａｓ、Ｎ−Ｒａｓ、１２−Ｋ−Ｒａｓ、メソセリン、ＰＳＣＡ、ＮＹ−ＥＳＯ−１、ＷＴ−１、スルビビン、ｇｐ１００、ＰＡＰ、プロテイナーゼ３、ＳＰＡＳ−１、ＳＰ−１７、ＰＡＧＥ−４、ＴＡＲＰ、およびＣＥＡからなる群より選択される抗原を含むか、あるいはＫ−Ｒａｓ、Ｈ−Ｒａｓ、Ｎ−Ｒａｓ、１２−Ｋ−Ｒａｓ、メソセリン、ＰＳＣＡ、ＮＹ−ＥＳＯ−１、ＷＴ−１、スルビビン、ｇｐ１００、ＰＡＰ、プロテイナーゼ３、ＳＰＡＳ−１、ＳＰ−１７、ＰＡＧＥ−４、ＴＡＲＰ、およびＣＥＡからなる群より選択される抗原に由来するポリペプチドを含む、請求項４６に記載の組換えＬｉｓｔｅｒｉａ細菌。
【請求項４８】
前記第二のポリヌクレオチドによってコードされるポリペプチドが、メソセリン、またはその抗原性フラグメントもしくは抗原性改変体を含む、請求項４７に記載の組換えＬｉｓｔｅｒｉａ細菌。
【請求項４９】
前記第二のポリヌクレオチドによってコードされるポリペプチドが、そのシグナルペプチドおよびＧＰＩアンカーを欠失したヒトメソセリンを含む、請求項４８に記載の組換えＬｉｓｔｅｒｉａ細菌。
【請求項５０】
細胞間拡大、非食細胞への進入、または増殖に対して減弱化されている、請求項３６に記載の組換えＬｉｓｔｅｒｉａ細菌。
【請求項５１】
ＡｃｔＡ、インターナリンＢ、またはＡｃｔＡおよびインターナリンＢ双方が欠損している、請求項３６に記載の組換えＬｉｓｔｅｒｉａ細菌。
【請求項５２】
前記組換え細菌の核酸が、核酸標的化合物との反応によって修飾されている、請求項３６に記載の組換えＬｉｓｔｅｒｉａ細菌。
【請求項５３】
請求項３６に記載の組換えＬｉｓｔｅｒｉａ細菌を含む、免疫原性組成物またはワクチン。
【請求項５４】
抗原に対する宿主における免疫応答を誘導する方法であって、該方法は、
該宿主に有効量の請求項３６に記載の組換えＬｉｓｔｅｒｉａ細菌を含む組成物を投与する工程
を包含し、ここに、前記第二のポリヌクレオチドによってコードされるポリペプチドが、該抗原を含む、方法。
【請求項５５】
宿主において疾患を予防または処置する方法であって、該方法は、
該宿主に有効量の請求項３６に記載の組換えＬｉｓｔｅｒｉａ細菌を含む組成物を投与する工程
を包含する、方法。
【請求項５６】
組換え核酸分子を含む組換えＬｉｓｔｅｒｉａ細菌であって、ここに、該組換え核酸分子は、
（ａ）非Ｌｉｓｔｅｒｉａシグナルペプチドをコードする第一のポリヌクレオチド；および
（ｂ）該第一のポリヌクレオチドと同一の翻訳リーディングフレームにあるポリペプチドをコードする第二のポリヌクレオチド
を含み、
ここに、該組換え核酸分子は、該非Ｌｉｓｔｅｒｉａシグナルペプチドおよび該ポリペプチド双方を含む融合タンパク質をコードする、組換えＬｉｓｔｅｒｉａ細菌。
【請求項５７】
前記組換え核酸分子を含む発現カセットを含み、ここに、該発現カセットは、該組換え核酸分子の第一のポリヌクレオチドおよび第二のポリヌクレオチド双方に作動可能に連結されたプロモーターをさらに含む、請求項５６に記載の組換えＬｉｓｔｅｒｉａ細菌。
【請求項５８】
前記第一のポリヌクレオチド、前記第二のポリヌクレオチド、または該第一のポリヌクレオチドおよび第二のポリヌクレオチド双方が、Ｌｉｓｔｅｒｉａ細菌における発現に対してコドン最適化されている、請求項５６に記載の組換えＬｉｓｔｅｒｉａ細菌。
【請求項５９】
前記細菌が、Ｌｉｓｔｅｒｉａ ｍｏｎｏｃｙｔｏｇｅｎｅｓである、請求項５６に記載の組換えＬｉｓｔｅｒｉａ細菌。
【請求項６０】
前記シグナルペプチドが細菌性である、請求項５６に記載の組換えＬｉｓｔｅｒｉａ細菌。
【請求項６１】
前記シグナルペプチドがグラム陽性菌に由来する、請求項６０に記載の組換えＬｉｓｔｅｒｉａ細菌。
【請求項６２】
前記シグナルペプチドが、Ｂａｃｉｌｌｕｓ属、Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ属、またはＬａｃｔｏｃｏｃｃｕｓ属に属する細菌に由来する、請求項６１に記載の組換えＬｉｓｔｅｒｉａ細菌。
【請求項６３】
前記シグナルペプチドが、Ｌａｃｔｏｃｏｃｃｕｓ ｌａｃｔｉｓに由来するＵｓｐ４５シグナルペプチド、Ｂａｃｉｌｌｕｓ ａｎｔｈｒａｃｉｓに由来する保護抗原シグナルペプチド、およびＢａｃｉｌｌｕｓ ｓｕｂｔｉｌｉｓからのＰｈｏＤシグナルペプチドからなる群より選択されるシグナルペプチドである、請求項６２に記載の組換えＬｉｓｔｅｒｉａ細菌。
【請求項６４】
前記第二のポリヌクレオチドによってコードされるポリペプチドが、腫瘍関連抗原、腫瘍関連抗原に由来するポリペプチド、感染症抗原、および感染症抗原に由来するポリペプチドからなる群より選択される抗原を含む、請求項５６に記載の組換えＬｉｓｔｅｒｉａ細菌。
【請求項６５】
前記第二のポリヌクレオチドによってコードされるポリペプチドが、Ｋ−Ｒａｓ、Ｈ−Ｒａｓ、Ｎ−Ｒａｓ、１２−Ｋ−Ｒａｓ、メソセリン、ＰＳＣＡ、ＮＹ−ＥＳＯ−１、ＷＴ−１、スルビビン、ｇｐ１００、ＰＡＰ、プロテイナーゼ３、ＳＰＡＳ−１、ＳＰ−１７、ＰＡＧＥ−４、ＴＡＲＰ、およびＣＥＡからなる群より選択される抗原を含むか、またはＫ−Ｒａｓ、Ｈ−Ｒａｓ、Ｎ−Ｒａｓ、１２−Ｋ−Ｒａｓ、メソセリン、ＰＳＣＡ、ＮＹ−ＥＳＯ−１、ＷＴ−１、スルビビン、ｇｐ１００、ＰＡＰ、プロテイナーゼ３、ＳＰＡＳ−１、ＳＰ−１７、ＰＡＧＥ−４、ＴＡＲＰ、およびＣＥＡからなる群より選択される抗原に由来するポリペプチドを含む、請求項６４に記載の組換えＬｉｓｔｅｒｉａ細菌。
【請求項６６】
前記第二のポリヌクレオチドによってコードされるポリペプチドが、メソセリン、またはその抗原性フラグメントまたは抗原性改変体を含む、請求項６５に記載の組換えＬｉｓｔｅｒｉａ細菌。
【請求項６７】
前記第二のポリヌクレオチドによってコードされるポリペプチドが、そのシグナルペプチドおよびＧＰＩアンカーを欠失したヒトメソセリンを含む、請求項６６に記載の組換えＬｉｓｔｅｒｉａ細菌。
【請求項６８】
細胞間拡大、非食細胞への進入、または増殖に対して減弱化されている、請求項５６に記載の組換えＬｉｓｔｅｒｉａ細菌。
【請求項６９】
ＡｃｔＡ、インターナリンＢ、またはＡｃｔＡおよびインターナリンＢ双方が欠損している、請求項５６に記載の組換えＬｉｓｔｅｒｉａ細菌。
【請求項７０】
前記組換え細菌の核酸が、核酸標的化合物との反応によって修飾されている、請求項５６に記載の組換えＬｉｓｔｅｒｉａ細菌。
【請求項７１】
請求項５６に記載の組換えＬｉｓｔｅｒｉａ細菌を含む、免疫原性組成物またはワクチン。
【請求項７２】
抗原に対する宿主における免疫応答を誘導する方法であって、該方法は、
該宿主に有効量の請求項５６に記載の組換えＬｉｓｔｅｒｉａ細菌を含む組成物を投与する工程
を包含し、ここに、前記第二のポリヌクレオチドによってコードされるポリペプチドが、該抗原を含む、方法。
【請求項７３】
宿主において疾患を予防または処置する方法であって、該方法は、
該宿主に有効量の請求項５６に記載の組換えＬｉｓｔｅｒｉａ細菌を含む組成物を投与する工程
を包含する、方法。
【請求項７４】
組換え核酸分子であって、該組換え核酸分子は、
（ａ）細菌自己溶解素、またはその触媒的に活性なフラグメントもしくは触媒的に活性な改変体をコードする第一のポリヌクレオチド；および
（ｂ）該細菌自己溶解素に対して異種であるポリペプチドをコードする第二のポリヌクレオチドであって、ここに、該第二のポリヌクレオチドは、該第一のポリヌクレオチドと同一の翻訳リーディングフレームにある、第二のポリヌクレオチド
を含み、
ここに、該組換え核酸分子は、該第二のポリヌクレオチドによってコードされるポリペプチド、および該自己溶解素、またはその触媒的に活性なフラグメントもしくは触媒的に活性な改変体を含むタンパク質キメラをコードし、ここに、該タンパク質キメラにおいて、該ポリペプチドは、該自己溶解素、またはその触媒的に活性なフラグメントもしくは触媒的に活性な改変体に融合しているか、あるいは該自己溶解素、またはその触媒的に活性なフラグメントもしくは触媒的に活性な改変体内に位置している、組換え核酸分子。
【請求項７５】
請求項７４に記載の組換え核酸分子を含む、組換え細菌。
【請求項７６】
抗原に対する宿主における免疫応答を誘導する方法であって、該方法は、
該宿主に有効量の請求項７５に記載の組換え細菌を含む組成物を投与する工程
を包含し、ここに、該第二のポリヌクレオチドによってコードされるポリペプチドが、該抗原を含む、方法。
【請求項７７】
ポリシストロニック発現カセットを含む組換えＬｉｓｔｅｒｉａ細菌であって、ここに、該ポリシストロニック発現カセットは、少なくとも２つの別個の非Ｌｉｓｔｅｒｉａポリペプチドをコードする、組換えＬｉｓｔｅｒｉａ細菌。
【請求項７８】
抗原に対する宿主における免疫応答を誘導する方法であって、該方法は、
該宿主に有効量の請求項７７に記載の組換えＬｉｓｔｅｒｉａ細菌を含む組成物を投与する工程
を包含し、ここに、前記ポリシストロニック発現カセットによってコードされる非Ｌｉｓｔｅｒｉａポリペプチドの少なくとも１つが、該抗原を含む、方法。
【請求項７９】
組換え核酸分子を含む組換えＬｉｓｔｅｒｉａ細菌であって、ここに、該組換え核酸分子は、該Ｌｉｓｔｅｒｉａ細菌に対して外来性であるポリペプチドをコードするポリヌクレオチドを含み、ここに、該ポリヌクレオチドはＬｉｓｔｅｒｉａにおける発現に対してコドン最適化されている、組換えＬｉｓｔｅｒｉａ細菌。
【請求項８０】
抗原に対する宿主における免疫応答を誘導する方法であって、該方法は、
該宿主に有効量の請求項７９に記載の組換えＬｉｓｔｅｒｉａ細菌を含む組成物を投与する工程
を包含し、ここに、前記外来性ポリペプチドが、該抗原を含む、方法。
【請求項８１】
組換え核酸分子であって、該組換え核酸分子は、
（ａ）シグナルペプチドをコードする第一のポリヌクレオチド；
（ｂ）分泌されたタンパク質、またはそのフラグメントをコードする第二のポリヌクレオチドであって、ここに、該第二のポリヌクレオチドは、該第一のポリヌクレオチドと同一の翻訳リーディングフレームにある、第二のポリヌクレオチド；および
（ｃ）該分泌されたタンパク質、またはそのフラグメントに対して異種であるポリペプチドをコードする第三のポリヌクレオチドであって、ここに、該第三のポリヌクレオチドは、該第一のポリヌクレオチドおよび第二のポリヌクレオチドと同一の翻訳リーディングフレームにある、第三のポリヌクレオチド
を含み、
ここに、該組換え核酸分子は、該シグナルペプチド、該第三のポリヌクレオチドによってコードされるポリペプチド、および該分泌されたタンパク質、またはそのフラグメントを含むタンパク質キメラをコードし、そして、該タンパク質キメラにおいて、該第三のポリヌクレオチドによってコードされるポリペプチドは、該分泌されたタンパク質、またはそのフラグメントに融合しているか、あるいは該分泌されたタンパク質、またはそのフラグメント内に位置する、組換え核酸分子。
【請求項８２】
請求項８１に記載の組換え核酸分子を含む、組換え細菌。
【請求項８３】
抗原に対する宿主における免疫応答を誘導する方法であって、該方法は、
該宿主に有効量の請求項８２に記載の組換え細菌を含む組成物を投与する工程
を包含し、ここに、前記第三のポリヌクレオチドによってコードされるポリペプチドが、該抗原を含む、方法。
【請求項８４】
抗原に対する宿主における免疫応答を誘導するための医薬を製造する際の請求項７、９、３３、３６、５６または７５に記載の組換え細菌の使用であって、ここに、該第二のポリヌクレオチドによってコードされるポリペプチドは、該抗原を含む、使用。
【請求項８５】
抗原に対する宿主における免疫応答を誘導するための医薬を製造する際の請求項７７に記載の組換えＬｉｓｔｅｒｉａ細菌の使用であって、ここに、前記ポリシストロニック発現カセットによってコードされる非Ｌｉｓｔｅｒｉａポリペプチドの少なくとも１つは、該抗原を含む、使用。
【請求項８６】
抗原に対する宿主における免疫応答を誘導するための医薬を製造する際の請求項７９に記載の組換えＬｉｓｔｅｒｉａ細菌の使用であって、ここに、前記外来性ポリペプチドは、該抗原を含む、使用。
【請求項８７】
抗原に対する宿主における免疫応答を誘導するための医薬を製造する際の請求項８２に記載の組換え細菌の使用であって、ここに、前記第三のポリヌクレオチドによってコードされるポリペプチドは、該抗原を含む、使用。
【請求項８８】
宿主において疾患を予防または処置するための医薬を製造する際の請求項７、９、３３、３６、５６、７５、７７、７９または８２に記載の組換え細菌の使用。
【請求項１】
組換え核酸分子であって、該組換え核酸分子は、
（ａ）細菌本来のシグナルペプチドをコードする第一のポリヌクレオチドであって、ここに、該第一のポリヌクレオチドは細菌における発現に対してコドン最適化されいる、第一のポリヌクレオチド；および
（ｂ）ポリペプチドをコードする第二のポリヌクレオチドであって、ここに、該第二のポリヌクレオチドは該第一のポリヌクレオチドと同一の翻訳リーディングフレームにある、第二のポリヌクレオチド
を含み、ここに、該組換え核酸分子は該シグナルペプチドおよび該ポリペプチドを含む融合タンパク質をコードする、組換え核酸分子。
【請求項２】
前記細菌がＬｉｓｔｅｒｉａ細菌である、請求項１に記載の組換え核酸分子。
【請求項３】
前記第二のポリヌクレオチドによってコードされるポリペプチドが、腫瘍関連抗原、腫瘍関連抗原に由来するポリペプチド、感染症抗原、および感染症抗原に由来するポリペプチドからなる群より選択される抗原を含む、請求項１に記載の組換え核酸分子。
【請求項４】
前記第二のポリヌクレオチドによってコードされるポリペプチドが、シグナルペプチドに対して異種であるか、細菌に対して外来性であるか、または双方である、請求項１に記載の組換え核酸分子。
【請求項５】
前記シグナルペプチドが、Ｌｉｓｔｅｒｉａ ｍｏｎｏｃｙｔｏｇｅｎｅｓからのＬＬＯシグナルペプチドであるか、またはＬｉｓｔｅｒｉａ ｍｏｎｏｃｙｔｏｇｅｎｅｓからのｐ６０シグナルペプチドである、請求項１に記載の組換え核酸分子。
【請求項６】
前記組換え核酸分子の第一のポリヌクレオチドおよび第二のポリヌクレオチドに作動可能に連結されたプロモーターをさらに含む、請求項１に記載の組換え核酸分子を含む発現カセット。
【請求項７】
前記第一のポリヌクレオチドが、前記組換え細菌における発現に対してコドン最適化されている、請求項１に記載の組換え核酸分子を含む組換え細菌。
【請求項８】
抗原に対する宿主における免疫応答を誘導する方法であって、該方法は、
該宿主に有効量の請求項７に記載の組換え細菌を含む組成物を投与する工程
を包含し、ここに、前記第二のポリヌクレオチドによってコードされるポリペプチドが、該抗原を含む、方法。
【請求項９】
組換え核酸分子を含む組換えＬｉｓｔｅｒｉａ細菌であって、ここに、該組換え核酸分子は、
（ａ）シグナルペプチドをコードする第一のポリヌクレオチドであって、ここに、該第一のポリヌクレオチドは、Ｌｉｓｔｅｒｉａ細菌における発現に対してコドン最適化されている、第一のポリヌクレオチド；および
（ｂ）ポリペプチドをコードする第二のポリヌクレオチドであって、ここに、該第二のポリヌクレオチドは該第一のポリヌクレオチドと同一の翻訳リーディングフレームにある、第二のポリヌクレオチド
を含み、
ここに、該組換え核酸分子は、該シグナルペプチドおよび該ポリペプチドを含む融合タンパク質をコードする、組換えＬｉｓｔｅｒｉａ細菌。
【請求項１０】
前記組換え核酸分子を含む発現カセットを含み、ここに、該発現カセットは、該組換え核酸分子の第一のポリヌクレオチドおよび第二のポリヌクレオチドの双方に作動可能に連結されたプロモーターをさらに含む、請求項９に記載の組換えＬｉｓｔｅｒｉａ細菌。
【請求項１１】
前記Ｌｉｓｔｅｒｉａ細菌が、Ｌｉｓｔｅｒｉａ ｍｏｎｏｃｙｔｏｇｅｎｅｓ種に属する、請求項９に記載の組換えＬｉｓｔｅｒｉａ細菌。
【請求項１２】
前記第二のポリヌクレオチドによってコードされるポリペプチドが、腫瘍関連抗原、腫瘍関連抗原に由来するポリペプチド、感染症抗原、および感染症抗原に由来するポリペプチドからなる群より選択される抗原を含む、請求項９に記載の組換えＬｉｓｔｅｒｉａ細菌。
【請求項１３】
前記第二のポリヌクレオチドによってコードされるポリペプチドが、Ｋ−Ｒａｓ、Ｈ−Ｒａｓ、Ｎ−Ｒａｓ、１２−Ｋ−Ｒａｓ、メソセリン、ＰＳＣＡ、ＮＹ−ＥＳＯ−１、ＷＴ−１、スルビビン、ｇｐ１００、ＰＡＰ、プロテイナーゼ３、ＳＰＡＳ−１、ＳＰ−１７、ＰＡＧＥ−４、ＴＡＲＰ、およびＣＥＡからなる群より選択される抗原を含むか、あるいはＫ−Ｒａｓ、Ｈ−Ｒａｓ、Ｎ−Ｒａｓ、１２−Ｋ−Ｒａｓ、メソセリン、ＰＳＣＡ、ＮＹ−ＥＳＯ−１、ＷＴ−１、スルビビン、ｇｐ１００、ＰＡＰ、プロテイナーゼ３、ＳＰＡＳ−１、ＳＰ−１７、ＰＡＧＥ−４、ＴＡＲＰ、およびＣＥＡからなる群より選択される抗原に由来するポリペプチドを含む、請求項１２に記載の組換えＬｉｓｔｅｒｉａ細菌。
【請求項１４】
前記第二のポリヌクレオチドによってコードされるポリペプチドが、メソセリン、またはその抗原性フラグメントもしくは抗原性改変体を含むか、あるいはＮＹ−ＥＳＯ−１、またはその抗原性フラグメントもしくは抗原性改変体を含む、請求項１３に記載の組換えＬｉｓｔｅｒｉａ細菌。
【請求項１５】
前記第二のポリヌクレオチドによってコードされるポリペプチドが、そのシグナルペプチドおよびＧＰＩリンカードメインを欠失したヒトメソセリンを含む、請求項１４に記載の組換えＬｉｓｔｅｒｉａ細菌。
【請求項１６】
前記第二のポリヌクレオチドによってコードされるポリペプチドが、前記シグナルペプチドに対して異種である、請求項９に記載の組換えＬｉｓｔｅｒｉａ細菌。
【請求項１７】
前記シグナルペプチドが、Ｌｉｓｔｅｒｉａ細菌に対して外来性である、請求項９に記載の組換えＬｉｓｔｅｒｉａ細菌。
【請求項１８】
前記シグナルペプチドが、Ｌｉｓｔｅｒｉａ細菌本来のものである、請求項９に記載の組換えＬｉｓｔｅｒｉａ細菌。
【請求項１９】
前記シグナルペプチドが、Ｌｉｓｔｅｒｉａ ｍｏｎｏｃｙｔｏｇｅｎｅｓからのＬＬＯシグナルペプチド、Ｌａｃｔｏｃｏｃｃｕｓ ｌａｃｔｉｓからのＵｓｐ４５シグナルペプチド、Ｂａｃｉｌｌｕｓ ａｎｔｈｒａｃｉｓからの保護抗原シグナルペプチド、Ｌｉｓｔｅｒｉａ ｍｏｎｏｃｙｔｏｇｅｎｅｓからのｐ６０シグナルペプチド、およびＢ．ｓｕｂｔｉｌｉｓからのＰｈｏＤシグナルペプチドからなる群より選択されるシグナルペプチドである、請求項９に記載の組換えＬｉｓｔｅｒｉａ細菌。
【請求項２０】
細胞間拡大、非食細胞への進入、または増殖に対して減弱化されている、請求項９に記載の組換えＬｉｓｔｅｒｉａ細菌。
【請求項２１】
ＡｃｔＡ、インターナリンＢ、またはＡｃｔＡおよびインターナリンＢ双方が欠損した、請求項９に記載の組換えＬｉｓｔｅｒｉａ細菌。
【請求項２２】
前記組換え細菌の核酸が、核酸標的化合物との反応によって修飾されている、請求項９に記載の組換えＬｉｓｔｅｒｉａ細菌。
【請求項２３】
請求項９に記載の組換えＬｉｓｔｅｒｉａ細菌を含む、免疫原性組成物またはワクチン。
【請求項２４】
抗原に対する宿主における免疫応答を誘導する方法であって、該方法は、
該宿主に有効量の請求項９に記載の組換えＬｉｓｔｅｒｉａ細菌を含む組成物を投与する工程
を包含し、ここに、前記第二のポリヌクレオチドによってコードされるポリペプチドが、該抗原を含む、方法。
【請求項２５】
宿主において疾患を予防または処置する方法であって、該方法は、
該宿主に有効量の請求項９に記載の組換えＬｉｓｔｅｒｉａ細菌を含む組成物を投与する工程
を包含する、方法。
【請求項２６】
組換え核酸分子であって、該組換え核酸分子は、
（ａ）非ｓｅｃＡ１細菌シグナルペプチドをコードする第一のポリヌクレオチド；および
（ｂ）該シグナルペプチドに対して異種であるポリペプチドをコードする第二のポリヌクレオチドであって、ここに、該第二のポリヌクレオチドは該第一のポリヌクレオチドと同一の翻訳リーディングフレームにある、第二のポリヌクレオチド
を含み、そして、
ここに、該組換え核酸分子は、該シグナルペプチドおよび該ポリペプチドを含む融合タンパク質をコードする、組換え核酸分子。
【請求項２７】
前記第一のポリヌクレオチド、前記第二のポリヌクレオチド、または該第一のポリヌクレオチドおよび第二のポリヌクレオチド双方が、細菌における発現に対してコドン最適化されている、請求項２６に記載の組換え核酸分子。
【請求項２８】
前記シグナルペプチドが、Ｌｉｓｔｅｒｉａシグナルペプチドである、請求項２６に記載の組換え核酸分子。
【請求項２９】
前記シグナルペプチドが、ｓｅｃＡ２シグナルペプチドまたはＴａｔシグナルペプチドである、請求項２６に記載の組換え核酸分子。
【請求項３０】
前記シグナルペプチドが、Ｌｉｓｔｅｒｉａ ｍｏｎｏｃｙｔｏｇｅｎｅｓからのｐ６０シグナルペプチドであるか、またはＢ．ｓｕｂｔｉｌｉｓからのｐｈｏＤシグナルペプチドである、請求項２６に記載の組換え核酸分子。
【請求項３１】
前記第二のポリヌクレオチドによってコードされるポリペプチドが、腫瘍関連抗原、腫瘍関連抗原に由来するポリペプチド、感染症抗原、および感染症抗原に由来するポリペプチドからなる群より選択される抗原を含む、請求項２６に記載の組換え核酸分子。
【請求項３２】
前記組換え核酸分子の第一のポリヌクレオチドおよび第二のポリヌクレオチドに作動可能に連結されたプロモーターをさらに含む、請求項２６に記載の組換え核酸分子を含む発現カセット。
【請求項３３】
請求項２６に記載の組換え核酸分子を含む、組換え細菌。
【請求項３４】
Ｌｉｓｔｅｒｉａ細菌である、請求項３３に記載の組換え細菌。
【請求項３５】
抗原に対する宿主における免疫応答を誘導する方法であって、該方法は、
該宿主に有効量の請求項３３に記載の組換え細菌を含む組成物を投与する工程
を包含し、ここに、前記第二のポリヌクレオチドによってコードされるポリペプチドが、該抗原を含む、方法。
【請求項３６】
組換え核酸分子を含む組換えＬｉｓｔｅｒｉａ細菌であって、ここに、該組換え核酸分子は、
（ａ）非ｓｅｃＡ１細菌シグナルペプチドをコードする第一のポリヌクレオチド；および
（ｂ）該シグナルペプチドに対して異種であるか、または該細菌に対して外来性であるか、または双方であるポリペプチドをコードする第二のポリヌクレオチドであって、ここに、該第二のポリヌクレオチドは該第一のポリヌクレオチドと同一の翻訳リーディングフレームにある、第二のポリヌクレオチド
を含み、
ここに、該組換え核酸分子は、該シグナルペプチドおよび該ポリペプチドを含む融合タンパク質をコードする、組換えＬｉｓｔｅｒｉａ細菌。
【請求項３７】
前記組換え核酸分子を含む発現カセットを含み、ここに、該発現カセットは、該組換え核酸分子の第一のポリヌクレオチドおよび第二のポリヌクレオチド双方に作動可能に連結されたプロモーターをさらに含む、請求項３６に記載の組換えＬｉｓｔｅｒｉａ細菌。
【請求項３８】
前記第一のポリヌクレオチド、前記第二のポリヌクレオチド、または該第一のポリヌクレオチドおよび第二のポリヌクレオチド双方が、Ｌｉｓｔｅｒｉａ細菌における発現に対してコドン最適化されている、請求項３６に記載の組換えＬｉｓｔｅｒｉａ細菌。
【請求項３９】
前記細菌が、Ｌｉｓｔｅｒｉａ ｍｏｎｏｃｙｔｏｇｅｎｅｓ種に属する、請求項３６に記載の組換えＬｉｓｔｅｒｉａ細菌。
【請求項４０】
前記非ｓｅｃＡ１シグナルペプチドが、非Ｌｉｓｔｅｒｉａシグナルペプチドである、請求項３６に記載の組換えＬｉｓｔｅｒｉａ細菌。
【請求項４１】
前記非ｓｅｃＡ１シグナルペプチドが、Ｌｉｓｔｅｒｉａシグナルペプチドである、請求項３６に記載の組換えＬｉｓｔｅｒｉａ細菌。
【請求項４２】
前記シグナルペプチドが、ｓｅｃＡ２シグナルペプチドである、請求項３６に記載の組換えＬｉｓｔｅｒｉａ細菌。
【請求項４３】
前記組換え核酸分子が、さらに、
（ｃ）前記第一のポリヌクレオチドおよび第二のポリヌクレオチドと同一の翻訳リーディングフレームにある、ｓｅｃＡ２自己溶解素、またはそのフラグメントをコードする第三のポリヌクレオチド
を含み、ここに、該第二のポリヌクレオチドは、該第三のポリヌクレオチド内に位置するか、または該第一のポリヌクレオチドと該第三のポリヌクレオチドとの間に位置する、請求項４２に記載の組換えＬｉｓｔｅｒｉａ細菌。
【請求項４４】
前記シグナルペプチドが、Ｔａｔシグナルペプチドである、請求項３６に記載の組換えＬｉｓｔｅｒｉａ細菌。
【請求項４５】
前記シグナルペプチドが、Ｂ．ｓｕｂｔｉｌｉｓからのＰｈｏＤシグナルペプチドであるか、またはＬｉｓｔｅｒｉａ ｍｏｎｏｃｙｔｏｇｅｎｅｓからのｐ６０シグナルペプチドである、請求項３６に記載の組換えＬｉｓｔｅｒｉａ細菌。
【請求項４６】
前記第二のポリヌクレオチドによってコードされるポリヌクレオチドが、腫瘍関連抗原、腫瘍関連抗原に由来するポリペプチド、感染症抗原、および感染症抗原に由来するポリペプチドからなる群より選択される抗原を含む、請求項３６に記載の組換えＬｉｓｔｅｒｉａ細菌。
【請求項４７】
前記第二のポリヌクレオチドによってコードされるポリペプチドが、Ｋ−Ｒａｓ、Ｈ−Ｒａｓ、Ｎ−Ｒａｓ、１２−Ｋ−Ｒａｓ、メソセリン、ＰＳＣＡ、ＮＹ−ＥＳＯ−１、ＷＴ−１、スルビビン、ｇｐ１００、ＰＡＰ、プロテイナーゼ３、ＳＰＡＳ−１、ＳＰ−１７、ＰＡＧＥ−４、ＴＡＲＰ、およびＣＥＡからなる群より選択される抗原を含むか、あるいはＫ−Ｒａｓ、Ｈ−Ｒａｓ、Ｎ−Ｒａｓ、１２−Ｋ−Ｒａｓ、メソセリン、ＰＳＣＡ、ＮＹ−ＥＳＯ−１、ＷＴ−１、スルビビン、ｇｐ１００、ＰＡＰ、プロテイナーゼ３、ＳＰＡＳ−１、ＳＰ−１７、ＰＡＧＥ−４、ＴＡＲＰ、およびＣＥＡからなる群より選択される抗原に由来するポリペプチドを含む、請求項４６に記載の組換えＬｉｓｔｅｒｉａ細菌。
【請求項４８】
前記第二のポリヌクレオチドによってコードされるポリペプチドが、メソセリン、またはその抗原性フラグメントもしくは抗原性改変体を含む、請求項４７に記載の組換えＬｉｓｔｅｒｉａ細菌。
【請求項４９】
前記第二のポリヌクレオチドによってコードされるポリペプチドが、そのシグナルペプチドおよびＧＰＩアンカーを欠失したヒトメソセリンを含む、請求項４８に記載の組換えＬｉｓｔｅｒｉａ細菌。
【請求項５０】
細胞間拡大、非食細胞への進入、または増殖に対して減弱化されている、請求項３６に記載の組換えＬｉｓｔｅｒｉａ細菌。
【請求項５１】
ＡｃｔＡ、インターナリンＢ、またはＡｃｔＡおよびインターナリンＢ双方が欠損している、請求項３６に記載の組換えＬｉｓｔｅｒｉａ細菌。
【請求項５２】
前記組換え細菌の核酸が、核酸標的化合物との反応によって修飾されている、請求項３６に記載の組換えＬｉｓｔｅｒｉａ細菌。
【請求項５３】
請求項３６に記載の組換えＬｉｓｔｅｒｉａ細菌を含む、免疫原性組成物またはワクチン。
【請求項５４】
抗原に対する宿主における免疫応答を誘導する方法であって、該方法は、
該宿主に有効量の請求項３６に記載の組換えＬｉｓｔｅｒｉａ細菌を含む組成物を投与する工程
を包含し、ここに、前記第二のポリヌクレオチドによってコードされるポリペプチドが、該抗原を含む、方法。
【請求項５５】
宿主において疾患を予防または処置する方法であって、該方法は、
該宿主に有効量の請求項３６に記載の組換えＬｉｓｔｅｒｉａ細菌を含む組成物を投与する工程
を包含する、方法。
【請求項５６】
組換え核酸分子を含む組換えＬｉｓｔｅｒｉａ細菌であって、ここに、該組換え核酸分子は、
（ａ）非Ｌｉｓｔｅｒｉａシグナルペプチドをコードする第一のポリヌクレオチド；および
（ｂ）該第一のポリヌクレオチドと同一の翻訳リーディングフレームにあるポリペプチドをコードする第二のポリヌクレオチド
を含み、
ここに、該組換え核酸分子は、該非Ｌｉｓｔｅｒｉａシグナルペプチドおよび該ポリペプチド双方を含む融合タンパク質をコードする、組換えＬｉｓｔｅｒｉａ細菌。
【請求項５７】
前記組換え核酸分子を含む発現カセットを含み、ここに、該発現カセットは、該組換え核酸分子の第一のポリヌクレオチドおよび第二のポリヌクレオチド双方に作動可能に連結されたプロモーターをさらに含む、請求項５６に記載の組換えＬｉｓｔｅｒｉａ細菌。
【請求項５８】
前記第一のポリヌクレオチド、前記第二のポリヌクレオチド、または該第一のポリヌクレオチドおよび第二のポリヌクレオチド双方が、Ｌｉｓｔｅｒｉａ細菌における発現に対してコドン最適化されている、請求項５６に記載の組換えＬｉｓｔｅｒｉａ細菌。
【請求項５９】
前記細菌が、Ｌｉｓｔｅｒｉａ ｍｏｎｏｃｙｔｏｇｅｎｅｓである、請求項５６に記載の組換えＬｉｓｔｅｒｉａ細菌。
【請求項６０】
前記シグナルペプチドが細菌性である、請求項５６に記載の組換えＬｉｓｔｅｒｉａ細菌。
【請求項６１】
前記シグナルペプチドがグラム陽性菌に由来する、請求項６０に記載の組換えＬｉｓｔｅｒｉａ細菌。
【請求項６２】
前記シグナルペプチドが、Ｂａｃｉｌｌｕｓ属、Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ属、またはＬａｃｔｏｃｏｃｃｕｓ属に属する細菌に由来する、請求項６１に記載の組換えＬｉｓｔｅｒｉａ細菌。
【請求項６３】
前記シグナルペプチドが、Ｌａｃｔｏｃｏｃｃｕｓ ｌａｃｔｉｓに由来するＵｓｐ４５シグナルペプチド、Ｂａｃｉｌｌｕｓ ａｎｔｈｒａｃｉｓに由来する保護抗原シグナルペプチド、およびＢａｃｉｌｌｕｓ ｓｕｂｔｉｌｉｓからのＰｈｏＤシグナルペプチドからなる群より選択されるシグナルペプチドである、請求項６２に記載の組換えＬｉｓｔｅｒｉａ細菌。
【請求項６４】
前記第二のポリヌクレオチドによってコードされるポリペプチドが、腫瘍関連抗原、腫瘍関連抗原に由来するポリペプチド、感染症抗原、および感染症抗原に由来するポリペプチドからなる群より選択される抗原を含む、請求項５６に記載の組換えＬｉｓｔｅｒｉａ細菌。
【請求項６５】
前記第二のポリヌクレオチドによってコードされるポリペプチドが、Ｋ−Ｒａｓ、Ｈ−Ｒａｓ、Ｎ−Ｒａｓ、１２−Ｋ−Ｒａｓ、メソセリン、ＰＳＣＡ、ＮＹ−ＥＳＯ−１、ＷＴ−１、スルビビン、ｇｐ１００、ＰＡＰ、プロテイナーゼ３、ＳＰＡＳ−１、ＳＰ−１７、ＰＡＧＥ−４、ＴＡＲＰ、およびＣＥＡからなる群より選択される抗原を含むか、またはＫ−Ｒａｓ、Ｈ−Ｒａｓ、Ｎ−Ｒａｓ、１２−Ｋ−Ｒａｓ、メソセリン、ＰＳＣＡ、ＮＹ−ＥＳＯ−１、ＷＴ−１、スルビビン、ｇｐ１００、ＰＡＰ、プロテイナーゼ３、ＳＰＡＳ−１、ＳＰ−１７、ＰＡＧＥ−４、ＴＡＲＰ、およびＣＥＡからなる群より選択される抗原に由来するポリペプチドを含む、請求項６４に記載の組換えＬｉｓｔｅｒｉａ細菌。
【請求項６６】
前記第二のポリヌクレオチドによってコードされるポリペプチドが、メソセリン、またはその抗原性フラグメントまたは抗原性改変体を含む、請求項６５に記載の組換えＬｉｓｔｅｒｉａ細菌。
【請求項６７】
前記第二のポリヌクレオチドによってコードされるポリペプチドが、そのシグナルペプチドおよびＧＰＩアンカーを欠失したヒトメソセリンを含む、請求項６６に記載の組換えＬｉｓｔｅｒｉａ細菌。
【請求項６８】
細胞間拡大、非食細胞への進入、または増殖に対して減弱化されている、請求項５６に記載の組換えＬｉｓｔｅｒｉａ細菌。
【請求項６９】
ＡｃｔＡ、インターナリンＢ、またはＡｃｔＡおよびインターナリンＢ双方が欠損している、請求項５６に記載の組換えＬｉｓｔｅｒｉａ細菌。
【請求項７０】
前記組換え細菌の核酸が、核酸標的化合物との反応によって修飾されている、請求項５６に記載の組換えＬｉｓｔｅｒｉａ細菌。
【請求項７１】
請求項５６に記載の組換えＬｉｓｔｅｒｉａ細菌を含む、免疫原性組成物またはワクチン。
【請求項７２】
抗原に対する宿主における免疫応答を誘導する方法であって、該方法は、
該宿主に有効量の請求項５６に記載の組換えＬｉｓｔｅｒｉａ細菌を含む組成物を投与する工程
を包含し、ここに、前記第二のポリヌクレオチドによってコードされるポリペプチドが、該抗原を含む、方法。
【請求項７３】
宿主において疾患を予防または処置する方法であって、該方法は、
該宿主に有効量の請求項５６に記載の組換えＬｉｓｔｅｒｉａ細菌を含む組成物を投与する工程
を包含する、方法。
【請求項７４】
組換え核酸分子であって、該組換え核酸分子は、
（ａ）細菌自己溶解素、またはその触媒的に活性なフラグメントもしくは触媒的に活性な改変体をコードする第一のポリヌクレオチド；および
（ｂ）該細菌自己溶解素に対して異種であるポリペプチドをコードする第二のポリヌクレオチドであって、ここに、該第二のポリヌクレオチドは、該第一のポリヌクレオチドと同一の翻訳リーディングフレームにある、第二のポリヌクレオチド
を含み、
ここに、該組換え核酸分子は、該第二のポリヌクレオチドによってコードされるポリペプチド、および該自己溶解素、またはその触媒的に活性なフラグメントもしくは触媒的に活性な改変体を含むタンパク質キメラをコードし、ここに、該タンパク質キメラにおいて、該ポリペプチドは、該自己溶解素、またはその触媒的に活性なフラグメントもしくは触媒的に活性な改変体に融合しているか、あるいは該自己溶解素、またはその触媒的に活性なフラグメントもしくは触媒的に活性な改変体内に位置している、組換え核酸分子。
【請求項７５】
請求項７４に記載の組換え核酸分子を含む、組換え細菌。
【請求項７６】
抗原に対する宿主における免疫応答を誘導する方法であって、該方法は、
該宿主に有効量の請求項７５に記載の組換え細菌を含む組成物を投与する工程
を包含し、ここに、該第二のポリヌクレオチドによってコードされるポリペプチドが、該抗原を含む、方法。
【請求項７７】
ポリシストロニック発現カセットを含む組換えＬｉｓｔｅｒｉａ細菌であって、ここに、該ポリシストロニック発現カセットは、少なくとも２つの別個の非Ｌｉｓｔｅｒｉａポリペプチドをコードする、組換えＬｉｓｔｅｒｉａ細菌。
【請求項７８】
抗原に対する宿主における免疫応答を誘導する方法であって、該方法は、
該宿主に有効量の請求項７７に記載の組換えＬｉｓｔｅｒｉａ細菌を含む組成物を投与する工程
を包含し、ここに、前記ポリシストロニック発現カセットによってコードされる非Ｌｉｓｔｅｒｉａポリペプチドの少なくとも１つが、該抗原を含む、方法。
【請求項７９】
組換え核酸分子を含む組換えＬｉｓｔｅｒｉａ細菌であって、ここに、該組換え核酸分子は、該Ｌｉｓｔｅｒｉａ細菌に対して外来性であるポリペプチドをコードするポリヌクレオチドを含み、ここに、該ポリヌクレオチドはＬｉｓｔｅｒｉａにおける発現に対してコドン最適化されている、組換えＬｉｓｔｅｒｉａ細菌。
【請求項８０】
抗原に対する宿主における免疫応答を誘導する方法であって、該方法は、
該宿主に有効量の請求項７９に記載の組換えＬｉｓｔｅｒｉａ細菌を含む組成物を投与する工程
を包含し、ここに、前記外来性ポリペプチドが、該抗原を含む、方法。
【請求項８１】
組換え核酸分子であって、該組換え核酸分子は、
（ａ）シグナルペプチドをコードする第一のポリヌクレオチド；
（ｂ）分泌されたタンパク質、またはそのフラグメントをコードする第二のポリヌクレオチドであって、ここに、該第二のポリヌクレオチドは、該第一のポリヌクレオチドと同一の翻訳リーディングフレームにある、第二のポリヌクレオチド；および
（ｃ）該分泌されたタンパク質、またはそのフラグメントに対して異種であるポリペプチドをコードする第三のポリヌクレオチドであって、ここに、該第三のポリヌクレオチドは、該第一のポリヌクレオチドおよび第二のポリヌクレオチドと同一の翻訳リーディングフレームにある、第三のポリヌクレオチド
を含み、
ここに、該組換え核酸分子は、該シグナルペプチド、該第三のポリヌクレオチドによってコードされるポリペプチド、および該分泌されたタンパク質、またはそのフラグメントを含むタンパク質キメラをコードし、そして、該タンパク質キメラにおいて、該第三のポリヌクレオチドによってコードされるポリペプチドは、該分泌されたタンパク質、またはそのフラグメントに融合しているか、あるいは該分泌されたタンパク質、またはそのフラグメント内に位置する、組換え核酸分子。
【請求項８２】
請求項８１に記載の組換え核酸分子を含む、組換え細菌。
【請求項８３】
抗原に対する宿主における免疫応答を誘導する方法であって、該方法は、
該宿主に有効量の請求項８２に記載の組換え細菌を含む組成物を投与する工程
を包含し、ここに、前記第三のポリヌクレオチドによってコードされるポリペプチドが、該抗原を含む、方法。
【請求項８４】
抗原に対する宿主における免疫応答を誘導するための医薬を製造する際の請求項７、９、３３、３６、５６または７５に記載の組換え細菌の使用であって、ここに、該第二のポリヌクレオチドによってコードされるポリペプチドは、該抗原を含む、使用。
【請求項８５】
抗原に対する宿主における免疫応答を誘導するための医薬を製造する際の請求項７７に記載の組換えＬｉｓｔｅｒｉａ細菌の使用であって、ここに、前記ポリシストロニック発現カセットによってコードされる非Ｌｉｓｔｅｒｉａポリペプチドの少なくとも１つは、該抗原を含む、使用。
【請求項８６】
抗原に対する宿主における免疫応答を誘導するための医薬を製造する際の請求項７９に記載の組換えＬｉｓｔｅｒｉａ細菌の使用であって、ここに、前記外来性ポリペプチドは、該抗原を含む、使用。
【請求項８７】
抗原に対する宿主における免疫応答を誘導するための医薬を製造する際の請求項８２に記載の組換え細菌の使用であって、ここに、前記第三のポリヌクレオチドによってコードされるポリペプチドは、該抗原を含む、使用。
【請求項８８】
宿主において疾患を予防または処置するための医薬を製造する際の請求項７、９、３３、３６、５６、７５、７７、７９または８２に記載の組換え細菌の使用。
【図１】
【図２】
【図３】
【図４】
【図５】
【図６】
【図７】
【図８】
【図９】
【図１０】
【図１１】
【図１２】
【図１３】
【図１４】
【図１５】
【図１６】
【図１７】
【図１８】
【図１９】
【図２０】
【図２１】
【図２２】
【図２３】
【図２４】
【図２５】
【図２６】
【図２７】
【図２８】
【図２９】
【図３０】
【図３１】
【図３２Ａ】
【図３２Ｂ】
【図３２Ｃ】
【図３３】
【図３４】
【図３５】
【図３６】
【図３７】
【図３８】
【図３９】
【図４０】
【図４１】
【図４２】
【図４３】
【図４４】
【図４５】
【図４６】
【図４７】
【図４８Ａ】
【図４８Ｂ】
【図４８Ｃ】
【図４９】
【図５０】
【図５１】
【図５２】
【図５３】
【図５４】
【図５５】
【図５６】
【図５７Ａ】
【図５７Ｂ】
【図５７Ｃ】
【図５８】
【図５９】
【図６０】
【図６１】
【図６２】
【図６３】
【図６４】
【図６５】
【図２】
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【図１５】
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【図１９】
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【図２１】
【図２２】
【図２３】
【図２４】
【図２５】
【図２６】
【図２７】
【図２８】
【図２９】
【図３０】
【図３１】
【図３２Ａ】
【図３２Ｂ】
【図３２Ｃ】
【図３３】
【図３４】
【図３５】
【図３６】
【図３７】
【図３８】
【図３９】
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【図４１】
【図４２】
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【図４４】
【図４５】
【図４６】
【図４７】
【図４８Ａ】
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【図４８Ｃ】
【図４９】
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【図５４】
【図５５】
【図５６】
【図５７Ａ】
【図５７Ｂ】
【図５７Ｃ】
【図５８】
【図５９】
【図６０】
【図６１】
【図６２】
【図６３】
【図６４】
【図６５】
【公表番号】特表２００７−５１８４０５（Ｐ２００７−５１８４０５Ａ）
【公表日】平成１９年７月１２日（２００７．７．１２）
【国際特許分類】
【出願番号】特願２００６−５４７６０２（Ｐ２００６−５４７６０２）
【出願日】平成１６年１２月２３日（２００４．１２．２３）
【国際出願番号】ＰＣＴ／ＵＳ２００４／０４４０８０
【国際公開番号】ＷＯ２００５／０７１０８８
【国際公開日】平成１７年８月４日（２００５．８．４）
【出願人】（５０５２９７０２４）シーラス コーポレイション (10)
【Ｆターム（参考）】
【公表日】平成１９年７月１２日（２００７．７．１２）
【国際特許分類】
【出願日】平成１６年１２月２３日（２００４．１２．２３）
【国際出願番号】ＰＣＴ／ＵＳ２００４／０４４０８０
【国際公開番号】ＷＯ２００５／０７１０８８
【国際公開日】平成１７年８月４日（２００５．８．４）
【出願人】（５０５２９７０２４）シーラス コーポレイション (10)
【Ｆターム（参考）】
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