接着阻害性を有する多フコシル化されたジカルボン酸
【課題】 接着阻害性を有する新規な多フコシル化されたジカルボン酸誘導体、それらの製造法、それらの使用及びそれらの誘導体から製造される医薬及び診断薬の提供。
【解決手段】 この多フコシル化されたジカルボン酸誘導体は下記式Ｉ
で示される。これらの多フコシル化されたジカルボン酸誘導体は、疾病により影響される組織で過剰なセレクチン受容体に媒介された細胞接着に関連した疾病に対する医薬及び診断薬を調製するのに適している。
【解決手段】 この多フコシル化されたジカルボン酸誘導体は下記式Ｉ
で示される。これらの多フコシル化されたジカルボン酸誘導体は、疾病により影響される組織で過剰なセレクチン受容体に媒介された細胞接着に関連した疾病に対する医薬及び診断薬を調製するのに適している。
【発明の詳細な説明】
【０００１】本発明は、接着阻害性を有する多フコシル化されたジカルボン酸、それらの製造法、それらの使用及びそれらから調製される医薬及び診断薬に関する。分子レベルで、白血球、好中球、顆粒球及び単球のような血球の循環は、大変複雑な多段階の過程であり、そのうち、ある段階だけが知られているにすぎない（Review: T.A. Springer, Cell 76, 301-304, 1994）。
【０００２】最近の研究結果によれば、免疫監視に重要なリンパ球の再循環と炎症部位における好中球及び単球の局在化は、大変類似した分子機構で応答することが明らかにされた。このように、急性及び慢性の炎症過程では、白血球は内皮細胞に接着し、炎症部位及び二次リンパ系器官に移動する。
【０００３】多くの特異的なシグナル分子、例えばインターロイキン、ロイコトリエン及び腫瘍壊死因子（ＴＮＦ）、それらのＧタンパク結合受容体、並びに免疫細胞及び内皮細胞の正確に制御された認識を保証する、特に組織−特異的な細胞接着分子が、この過程に関与している。このような状況で関与する最も重要な接着分子（接着分子は、以下の記述では受容体と称する）は、セレクチン（Ｅ、Ｐ及びＬセレクチン）、インテグリン及び免疫グロブリン・スーパーファミリーのメンバーである。
【０００４】３種のセレクチン受容体は白血球接着の初期段階を決定する。Ｅセレクチンは、例えばインターロイキン１（ＩＬ−１β）又は腫瘍壊死因子（ＴＮＦ−ａ）による刺激後、数時間で内皮細胞に発現し、一方、Ｐセレクチンは血小板及び内皮細胞に蓄積され、トロンビン、過酸化物ラジカル又は、特にサブスタンスＰによる刺激後、細胞表面上に発現する。Ｌセレクチンは絶えず白血球上に発現されていると同時に、それは炎症を受けている間その白血球により再度迅速に接着される。
【０００５】炎症過程の初期段階にセレクチン受容体により媒介される、内皮細胞への白血球の接着は、様々な炎症刺激及び血管組織への傷害に対し、自然でかつ必要な免疫応答である。
【０００６】しかしながら、ある急性及び慢性疾患の過程は、関連した組織への白血球の過剰な接着とそれらの浸潤により、及び自己免疫反応の形成で健康な組織への損傷により悪影響を受ける。これらの疾患には、例えばリウマチ、心筋虚血／梗塞（ＭＩ）のような再潅流傷害、外科手術の介在、外傷性ショック及び発作後の急性肺炎、乾癬、皮膚炎、ＡＲＤＳ（成人呼吸困難症候群）並びに外科手術の介在（例えば、血管形成とバイパス手術）後に起こる再発狭窄症がある。
【０００７】SLeX構造を有する天然リガンドは、Ｐセクレチン依存性肺障害（M.S. Mulligan et al., Nature 1993, 364, 149）及び心筋再潅流傷害（M. Buerke et al., J. Clin. Invest. 1994, 93, 1140）と関連して、動物実験ですでに使用され成功している。初期の臨床試験において、その化合物が急性肺炎に対して患者一日あたり１〜２ｇの投与量で使用されていることが報告されている（1994年5月16〜18日、the 2nd Glycotechnology Meeting/CHI in La Jolla/USAでの Cytel Corp.,/La Jolla(CA.)からの情報）。
【０００８】活性化合物のこの高投与量は、弱くなることが知られているセレクチン受容体に対する天然のSLex／Ａリガンドの親和性と一致する。このように、全ての既知のインビトロ試験系で、SLexだけが約１mMのIC50の範囲内にある比較的高濃度でセレクチン受容体への細胞接着を阻害する（Jacob et al., Biochemistry 1995,34, 1210)。一方、一部の刊行物及び特許出願には、リガンドの構造の改変によって、さらに強く結合するアンタゴニストを得る試みが報告されている。これらの研究の目的は、より活性があり、及びインビボで低投与量で使用される可能性のある有効なアンタゴニストを製することである。
【０００９】しかしながら、フコース及びノイラミン酸構成成分の改変は、現在まで構造活性相関に対して重要と考えられていたが（B.K. Brandley et al., Glycobiology1993, 3, 633、及びM. Yoshida et al., Glycoconjugate J. 1993, 10, 3)、著しく改善された阻害値を示さなかった。グルコサミン構成成分を改変することによってのみ（GlcNAcのグルコースによる置換、並びにGlcNAcの２位にアジド基及びアミノ基の置換）、Ｅセレクチン受容体に対して親和性を著しく増加させることができるようになった。一方、Ｐセレクチンへの結合は改善されなかった。
【００１０】ＨＬ−６０及びＵ−９３７細胞の接着阻害に対し、これらのオリゴサッカライドに対するIC50値は、Ｅセレクチンの場合０.１２mMの範囲内にある（SLeXに対する１.２〜２.０mMと比較して）。一方、欠点としては、５mM以上でのＬ及びＰセレクチンへの結合が著しく損なわれることである（Dasgupta et al., Glycomed Inc. poster presentation at the La Jolla meeting in 5/94）。
【００１１】一般的に、SLex誘導体及びSLeA誘導体の結合親和性を改善するのに成功したのは、現在までＥセレクチン受容体だけに限定されている。これは、Ｐセレクチン受容体の場合には、約１mMの阻害剤濃度で弱い阻害作用しか見出されていないためである（R.M. Nelson et al., J. Clin. Invest. 1993, 91, 1157）。
【００１２】セレクチンに対する修飾されたSLex／Ａ構造の結合親和性に関する先行技術は、Pharmacochem. Libr. 1993, 20（Trends in Drug Research）, pp. 33〜40に言及されている。本発明の目的は、天然のリガンドに比べ受容体に著しく強い結合を示す新規なセレクチンリガンドを製造すること、及び天然のリガンドよりも容易に合成することにある。
【００１３】この目的は次の式Ｉの化合物によって達成される。
１. 式Ｉ
【化６】
（式中、Ｒ5及びＲ6は、互いに独立に、Ｈ、ＯＨ、ＣＯＯＨ、ＮＨ2、ＮＨＡｃ、−Ｏ(ＣＨ2)cＸ1、(ＣＨ2)cＸ1、ＣＨ2Ｏ(ＣＨ2)cＸ1又はＺであり、Ａ、Ｂ、Ｄ、Ｅ及びＧは、互いに独立に、Ｏ、Ｓ、−ＮＨ、−ＨＮ−Ｃ(Ｏ)−、−(Ｏ)Ｃ−ＮＨ−、−Ｏ−Ｃ(Ｏ)−、−(Ｏ)Ｃ−Ｏ−、ＮＨ−Ｃ(Ｏ)−Ｏ、Ｏ−Ｃ(Ｏ)−ＮＨ、ＮＨ−Ｃ(Ｏ)−ＮＨ、Ｓ−Ｃ(Ｏ)−、(Ｓ)Ｃ−Ｏ、Ｏ−Ｃ(Ｓ)−Ｓ、Ｓ−Ｃ(Ｓ)−Ｏ、ＮＨ−Ｃ(Ｓ)−Ｓ、Ｓ−Ｃ(Ｓ)−ＮＨ、−ＣＨ2−、−Ｏ−ＣＨ2−、ＣＨ2−Ｏ−、ＣＨ2−ＮＨ−又はＮＨ−ＣＨ2であり、Ｖ1及びＶ2は、互いに独立に、炭素原子又は窒素原子であり、窒素原子の場合にはＲ5及びＲ6はなく、Ｑ及びＹは、互いに独立に、−(ＣＸ2,Ｘ3)b−、−(ＣＸ2,Ｒ7)b−、−(ＣＲ7,Ｒ8)b−、−ＣＨ2−(ＣＸ2,Ｘ3)b−又は飽和若しくは不飽和の、５員若しくは６員の炭素環若しくは複素環、あるいは−(ＣＸ2,Ｘ3)b−、−(ＣＸ2,Ｒ7)b−、若しくは−(ＣＲ7,Ｒ8)b−及び炭素環若しくは複素環との組合せであり、このとき、Ｒ7及びＲ8は、互いに独立に、Ｈ、ＯＨ、ＣＯＯＨ、ＮＨ2、ＮＨ−Ｃ(Ｏ)−ＣＨ3、−Ｏ(ＣＨ2)dＸ1又はＣＨ2Ｏ(ＣＨ2)dＸ1であり、そしてＸ1、Ｘ2及びＸ3は、互いに独立に、Ｈ、ＮＨ2、ＣＯＯＨ、ＯＨ、ＣＨ2ＯＨ、ＣＨ2ＮＨ2、Ｃ1〜Ｃ20−アルキル又はＣ6〜Ｃ10−アリールであり、Ｋ及びＬは、互いに独立に、Ｈ−Ｃ−ＧＺ又はＣＨ2であり、Ｒ1、Ｒ2、Ｒ3及びＲ4は、互いに独立に、Ｈ、ＯＨ又はＧ−Ｚであり、Ｚは、ピラノシド、Ｃ6位で連結されるピラノシル残基、Ｃ6位で連結されるアルキルピラノシド、フラノシド、 Ｃ5位で連結されるアルキルフラノシド又はポリアルコール、そしてそれらに一又はそれ以上のヒドロキシル基が、互いに独立に、任意の位置でＧに連結されるＲ7又はＲ8によって置換されていてもよく、及びその指数である、ａ、ｂ、ｃ、ｄ、ｌ、ｍ、ｎ、ｐ、ｑ、ｔ、ｖ、ｗ、ｘ及びｙは、互いに独立に、０から２０までの整数であり、そして又ｒ及びｚは、互いに独立に、０又は１であり、そしてｒが０であるとき、ｑ及びｔは０であり、Ｒ2及びＲ3はない）で表される化合物。
【００１４】２．式Ｉの化合物で、好ましくは、式中Ｒ5はＨであり、Ｖ1はＣであり、Ａ及びＹはＣＨ2であり、ＢはＯ−ＣＨ2であり、ＤはＣＨ2−Ｏであり、ｒ、ｐ及びｗは０であり、そしてＲ1及びＲ4はＧ−Ｚである。
【００１５】３．好ましくは、式中Ｚは１であり、Ｑ及びＥはＣＨ2であり、Ｖ2はＣであり、そしてＲ6はＨである。
４．特に好ましくは、式中ｌ、ｍ、ｙ及びｘは０であり、ＧはＯであり、そしてＺはピラノシドである。
【００１６】５．ピラノシドＺは好ましくはＬ−フコシドであり、例えば
【化７】
である。
【００１７】６．好ましくは、式Ｉの化合物は２.で述べた特徴、及びまたは以下の特徴を有する。Ｚは０であり、そしてＲ6はＺである。
７．好ましくは、式中ｌ及びｍは０であり、ＧはＯであり、そしてＺはピラノシドである。
【００１８】８．ピラノシドＺは特に好ましくはＬ−フコシドであり、例えば
【化８】
である。
【００１９】９．本発明の更に好ましい態様としては、式Ｉの化合物でＲ1、Ｒ4及びＲ5はＨであり、Ｖ1はＣであり、Ａ及びＹはＣＨ2であり、Ｂ及びＤはＯであり、ｐ及びｗは０であり、ｒは１であり、ＫはＣＨ2であり、そしてＲ2及びＲ3はＧＺである。
【００２０】１０．好ましくは、式中ｚは１であり、Ｑ及びＥはＣＨ2であり、Ｖ2はＣであり、そしてＲ6はＨである。
【００２１】１１．特に好ましくは、式中ｌ、ｍ、ｘ及びｙは０であり、ｑ及びｔは１であり、ＧはＯであり、そしてＺはピラノシドであり、そのピラノシドＺは好ましくはＬ−フコシドであり、例えば
【化９】
である。
【００２２】１３．本発明の更なる態様としては、式Iの化合物でＲ5はＨであり、Ｖ1はＣであり、Ａ及びＹはＣＨ2であり、Ｂ及びＤはＯであり、そしてｒは０である。
１４．好ましくは、式中ｚは１であり、Ｒ6はＨであり、Ｑ及びＥはＣＨ2であり、そしてＶ2はＣである。
【００２３】１５．特に好ましくは、式中ｌ、ｍ、ｙ及びｘは０であり、ｐ及びｗは２であり、ＬはＨ−Ｃ−ＧＺであり、Ｒ1及びＲ4はＨであり、ＧはＯであり、そしてＺはピラノシドである。
【００２４】１６. そしてその式中、ピラノシドＺは特に好ましくはＬ−フコシドであり、例えば
【化１０】
である。
【００２５】１７．本発明の更なる態様としては、式Ｉの化合物でａ、ｐ、ｒ、ｗ及びｚは０であり、Ｒ5及びＲ6はＨであり、Ｖ1はＣであり、Ａ及びＹはＣＨ2であり、ＢはＯ−ＣＨ2であり、そしてＲ1及びＲ4はＧ−Ｚである。
１８．好ましくは、式中ｌ及びｍは０であり、ＧはＯであり、そしてＺはピラノシドである。
【００２６】１９．そしてこのピラノシドは好ましくはＬ−フコシドであり、例えば、
【化１１】
である。
【００２７】２０．最初に述べた目的は、更に式Ｉの化合物を製造する方法によっても達成され、 この方法は、式II
【化１２】
の受容体の一つの官能基Ｌ1又は二つの官能基Ｌ1及びＬ2（この式IIの受容体の残りの官能基及び官能基Ｌn（それぞれ、ｎ＝２〜６又は３〜６）は、必要ならば保護されている）を、供与体IIIＬ8−Ａ−(Ｙ)n−Ｂ−Ｌ7 III（この式IIIの供与体は活性化された官能基Ｌ7を有する）によって、そしてＬ2がまた保護されていないならば供与体IVＬ7−(Ｄ)a−(Ｑ)r−Ｅ−Ｌ8 IV（この式IVの供与体は活性化された官能基Ｌ7を有し、残りの官能基及び官能基Ｌ8は、必要ならば保護基を有する）によって、同時ににまたは連続して、アルキル化、アシル化またはグリコシル化して、最初に中間体Ｖ
【化１３】
を製造し、ここで上記の供与体III及びIVは、異なっていても又は同一でもよいものとし、その後で、中間体Ｖの原子Ｋ及びＬ上の官能基、並びに適当である場合には、官能基Ｌ3乃至Ｌ6及びＬ8の保護基を選択的に脱離し、この選択的に脱保護された中間体Ｖを、一又はそれ以上のグリコシル又はポリオ−ル供与体VIＬ9−Ｚ VI（式中、Ｌ9は活性化された官能基であり、この供与体VIの残りの官能基は必要ならば保護されているものとする）と反応させ、そして官能基Ｌ8の選択的脱保護の後に、アルキル供与体VII
【化１４】
および適当である場合に、アルキル供与体VIII
【化１５】
（式中、Ｌ10はカルボキシル保護基であり、そしてＬ11は、適当である場合には、Ｖ1又はＶ2と組み合わせて、アルキル化基であるものとする）でアルキル化し、そして全ての保護基を脱離することにより、請求項１乃至１６のいずれかに記載された式Ｉの化合物に最終的に変換することからなる。但し、ここで定義されていない全ての変数は１.に記載された意味を有するものとする。
【００２８】２１．所望ならば、受容体IIを、まず第一に、一またはそれ以上のグリコシル供与体又はポリオ−ル供与体VIと反応させ、次いで中間体Ｖを製造するために供与体IVと反応させることができる。
【００２９】ａ) ５.及び８.に記載された化合物は、本発明による方法を用い、好ましくは、受容体IIとして(−)−２,３−Ｏ−イソプロピリデン−Ｌ−トレイトール、供与体III及びIVとして５−アリルオキシ−１−ｐ−トルエンスルホニルオキシペンタン、及びグリコシル供与体VIとしてＯ−（２,３,４−トリ−Ｏ−ベンジル−α／β−Ｌ−フコピラノシル）トリクロロアセトイミダートを用いて製造され得る。二つのアリル基を脱離し、生じるヒドロキシル基をトシル化又はブロム化した後、アルキル供与体VIIとしてマロン酸ジメチルを用いてアルキル化を行い、その後脱保護が行われる。
【００３０】ｂ) １１.に記載された化合物は、本発明による方法を用い、好ましくは、受容体IIとしてイソプロピリデン−ペンタエリトリトールを用い、次いでａ)に記載したように反応させて製造され得る。
【００３１】ｃ) １６.に記載された化合物は、本発明による方法を用い、好ましくは、受容体IIとして１,２：５,６−ジ−Ｏ−イソプロピリデン−Ｄ−マンニトールを用い、次いでａ）に記載したように反応させて製造され得る。
【００３２】ｄ) １９.に記載された化合物は、本発明による方法を用い、受容体IIとしてＤ−α／β−イソプロピリデン−グリセロールを用い、次いでａ）に記載したように反応させて有利に製造され得る。
【００３３】シアリルルイスＸより低分子量であるにもかかわらず、本発明による式Ｉの化合物は天然の受容体、例えばＥセレクチン及びＰセレクチンに対し、シアリルルイスＸよりも高親和性を持つことができる。このことは以下に述べる細胞接着分析を用いて示すことができる。
【００３４】組換体、可溶性セレクチン融合タンパク質への細胞接着に対する本発明による化合物の効果を検討するための一次アッセイＥ及びＰセレクチン（古い命名法では、それぞれＥＬＡＭ−１及びＧＭＰ−１４０）とそれらのリガンド間の相互作用に対する本発明の化合物の効果を試験するために、それぞれの場合にこれらの相互作用の一方にのみ特異的であるアッセイが用いられる。これらのリガンドは、前骨髄細胞ＨＬ６０細胞上の表面構造として天然型で表される。ＨＬ６０細胞は極めて広い種類の特異性のあるリガンドと接着分子を示すので、アッセイの所望の特異性は結合相手によってのみ発生する。Ｅセレクチン又はＰセレクチンのいずれかの細胞質外ドメイン及びＩｇＧ１サブクラスのヒト免疫グロブリンの定常領域から形成された、遺伝子組換えで調製された可溶性融合タンパク質が結合相手として用いられた。
【００３５】Ｌセレクチン−ＩｇＧ１の調製１９９０年にWalzらにより公表された遺伝子構築体「ＥＬＡＭ−Ｒｇ」が、可溶性Ｌ−セレクチン−ＩｇＧ１融合タンパク質を調製するために用いられた。発現させるために、プラスミドＤＮＡがＤＥＡＥデキストランを用いるＣＯＳ−７細胞（ＡＴＣＣ）にトランスフェクトされた（分子生物学的方法：参照Ausubel, F. M., Brent, R., Kingston, R. E., Moore, D. D., Seidman, J. G., Struhl, K. and Smith, J. A. 1990. Current Protocols in Molecular Biology,John Wiley, New York）。トランスフェクション後７日目に、培養上清を分離し、遠心分離により細胞と細胞断片を除去し、２５mM Hepes、pH７.０、０.３mMＰＭＳＦ、０.０２％アジ化ナトリウムに移し、＋４℃で保存した（Walz, G., Aruffo, A., Kolanus, W., Bevilacqua, M. and Seed, B. 1990. Recognition byELAM-1 of the sialyl-Lex determinant on myeloid and tumor cells. Science 250, 1132-1135）。
【００３６】Ｐセレクチン−ＩｇＧ１の調製１９９１年にAruffoらにより公表された遺伝子構築体「ＣＤ６２Ｒｇ」が、可溶性Ｐセレクチン−ＩｇＧ１融合タンパク質を調製するために用いられる。その後の方法はＡ１に記載されたＬセレクチン−ＩｇＧ１の調製と同様である。Aruffo, A., Kolanus, W., Walz, G., Fredman, P. and Seed, B. 1991. CD62/P-selectin recognition of myeloid and tumor cell sulfatides. Cell 67, 35-44。
【００３７】ＣＤ４−ＩｇＧ１の調製１９９０年にZettelmeisslらにより公表された遺伝子構築体「ＣＤ４：ＩｇＧ１ヒンジ」が、可溶性ＣＤ４−ＩｇＧ１融合タンパク質を調製するために用いられる。その後の方法はＡ１に記載されたＬセレクチン−ＩｇＧ１の調製と同様である（Zettelmeissl, G., Gregersen, J.-P., Duport, J. M., Mehdi, S., Reiner, G. and Seed, B. 1990. Expression and characterization of human CD4:Immunoglobulin Fusion Proteins. DNA and Cell Biology 9, 347-353.）。
【００３８】組換体、可溶性接着分子に対するＨＬ６０細胞接着アッセイの実施１．９６−ウェルマイクロタイターテストプレート（Nunc Maxisorb）を、５０mM Tris、pH９.５中で（１＋１００）に希釈した、１００μｌのヤギ抗−ヒトＩｇＧ抗体（Sigma）とともに、室温で２時間インキュベートした。抗体溶液を除去した後、プレートをＰＢＳで一度洗浄した。
２．ウェル中に１５０μｌのブロッキングバファーを加え室温で一時間放置した。ブロッキングバファーの組成は、０.１％ゼラチン、１％ＢＳＡ、５％ウシ血清、０.２mM ＰＭＳＦ、０.０２％アジ化ナトリウムである。ブロッキングバッファーを除去した後、プレートをＰＢＳで一度洗浄した。
【００３９】３．それぞれの場合、適当にトランスフェクトされ、発現しているＣＯＳ細胞からの１００μｌの細胞培養上清をウェル中にピペットで加えた。次いで、プレートを室温で２時間インキュベートした。細胞培養上清を除去した後、プレ−トをＰＢＳで一度洗浄した。
４．２０μｌの結合バッファーをウェルに加えた。結合バッファーは、５０mM Hepes、pH７.５；１００mM ＮａＣｌ；１mg／ml ＢＳＡ；２mM ＭｇＣｌ2；１mMＣａＣｌ2；３mM ＭｎＣｌ2；０.０２％アジ化ナトリウム：０.２mM ＰＭＳＦの組成である。これに５μｌの試験物質をピペットで加えた。プレートを回転して混合し、室温で１０分間インキュベートした。
【００４０】５．２００,０００細胞／mlを含有するＨＬ６０細胞の培養液５０mlを３５０ｇで４分間遠心分離した。ペレットを１０mlのＲＰＭＩ １６４０に再懸濁し、細胞を再度遠心分離した。細胞を標識するために、５０μｇのＢＣＥＣＦ−ＡＭ（Molecular Probes）を５μｌの無水ＤＭＳＯに溶解し、ついで、１.５mlのＲＰＭＩ １６４０をＢＣＥＣＦ−ＡＭ／ＤＭＳＯ溶液に加えた。細胞をこの溶液に再懸濁し、その懸濁液を３７℃で３０分間インキュベートした。３５０ｇで２分間遠心分離した後、標識された細胞ペレットを１１mlの結合バッファーに再懸濁し、再懸濁した細胞をマイクロタイタープレートウェルに１００μｌずつ分配した。プレートを室温で１０分間放置し、細胞をテストプレートの底に沈殿させた。これにより細胞はコーティングされたプラスチックに接着する機会を得る。
【００４１】６．テストを停止するために、マイクロタイタープレートを停止バッファー（２５mM Tris、pH７.５；１２５mM ＮａＣｌ；０.１％ＢＳＡ；２mM ＭｇＣｌ2；１mM ＣａＣｌ2；３mM ＭｎＣｌ2；０.０２％アジ化ナトリウム）中に４５℃の角度で完全に浸漬した。停止バッファーを逆さにしてウェルから除去し、この操作をさらに２回繰返した。
【００４２】７．ウェル中に接着しているＢＣＥＣＦ−ＡＭ標識細胞量を、設定感度４、励起波長４８５／２２nm、発光波長５３０／２５nmに設定した細胞蛍光測定装置（Millipore）で測定した。
【００４３】白血球接着−本発明の化合物のインビボにおける効能試験（ラットにおける生体内顕微鏡検査）
白血球遊走により引起こされる組織破壊又は微小循環を遮断することは、炎症過程及びサイトカインを活性化する他の条件下で重要な役割を果たす。その後の疾患過程に対し重要である初期段階は、循環内、特に毛細血管領域の前後で白血球を活性化することである。この段階では、まず第一に白血球が軸上の血液循環を離れた後、内部血管壁、すなわち血管内皮に白血球が接着する。その後の全ての白血球の作用、すなわち血管壁を通しての能動的移動及びその後の組織内での一定方向の移動が必然的な反応である（Harlan, J.M., Leukocyte-endothelialinteraction, Blood 65, 513-525, 1985）。
【００４４】この受容体に媒介される白血球と内皮細胞の相互作用は、炎症過程の初期の兆候とみなされる。既に生理学的に発現している接着分子に加えて、炎症メディエーター（ロイコトリエン及びＰＡＦ）及びサイトカイン（ＴＮＦ−α及びインターロイキン）の影響を受けて、接着分子の次第に変化した大量発現が細胞上に起こる。現在、これらの分子は３つのグループ、すなわち、１.免疫グロブリン遺伝子スーパーファミリー、２.インテグリン及び３.セレクチンに分けられている。Ｉｇ遺伝子スーパーファミリーの分子とタンパク質−タンパク質結合間に接着が起こっている間に、セレクチン間の協同によりレクチン−炭水化物結合が顕著になる（Springer, T.A., Adhesion receptors of the immune system. Nature346, 425-434, 1990; Huges, G., Cell adhesion molecules - the key to a universal panacea, Scrips Magazine 6, 30-33, 1993; Springer, T.A., Trafficsignals for lymphocyte recirculation and leukocyte emigration; The multistep paradigm. Cell 76, 301-314, 1994）。
【００４５】方法白血球の誘導された接着は、生体内顕微鏡検査技術を用いてラット腸間膜で定量される（Atherton A. and Born G.V.R., Quantitative investigations of the adhesiveness of circulating polymorphonuclear leukocytes to blood vessel walls. J. Physiol. 222, 447-474, 1972）。持続麻酔は、エーテルによる吸入麻酔下、ウレタン（１.２５mg／kg体重）を筋肉内注射して開始する。血管（物質の注射には大腿部の静脈、及び血圧の測定には頚動脈）を切開により露出し、次いでカテーテルを血管内に縛りつける。その後、相当する透明な組織（腸間膜）を露出し、顕微鏡の台上に広げ、そして３７℃でパラフィンオイルでおおう（Menger, M.D. and Lehr, H., A. Scope and perspectives of intravital microscopy-bridge over from in vitro to in vivo, Immunology Today 14, 519-522, 1993）。試験物質を動物に静脈内投与する（１０mg／kg）。サイトカインの活性化によって、試験物質の投与15分後にリポ多糖（ＬＰＳ、１５mg／kg）を全身投与し、血球接着の実験的増加を起こす（Foster S.J., McCormick L.M., Ntolosi B.A. and Campbell D., Production of TNF-alpha by LPS-stimulated murine, rat and human blood and its pharmacological modulation, Agents andActions 38, C77-C79, 1993, 18.01. 1995）。その結果生じる内皮への白血球の接着の増大は、生体内顕微鏡によって直接に、又は蛍光染色を用いて定量される。全ての測定操作をビデオカメラでとり、ビデオレコーダーに保存する。回転する白血球の数（すなわち、明らかに回転し、赤血球の流れよりも遅い全ての白血球）及び内皮に接着している白血球の数（５秒間以上滞留している）を６０分間にわたって１０分毎に記録する。実験終了後、麻酔した動物を、苦痛なく、かつ全身にＴ６１を注射し刺激を与えることなく殺す。評価するためには、それぞれ８匹の処理した動物からの結果を、それぞれ８匹の未処理動物（対照群）の結果と比較する（その結果は百分率値として与えられる）。
【００４６】結果化合物６ａ：投与量１０mg／kg；投与i.v.；種ＳＰＲＤ(ｍ)；重量：２９８±１７.７２ｇ；血管数１４；血管直径２６±２μｍ；白血球：(６.０±１.０９)・１０3／mm3；フィブリノーゲン１３０±６.９５mg／１００ml；阻害３９％切開したウサギの心臓上で行った虚血／再潅流過程の好中球の接着の影響を調べるための再潅流モデル。心臓を栄養液と、並びに白血球及び／又は活性化合物の存在下又は非存在下に、定常圧でLangendorff技術を用いて潅流する。その後、左冠状動脈を結紮することにより（３０分）、虚血を引起こす。再潅流後（３０分）、白血球の蓄積を組織学的に評価する。実験中、電位と不整脈を２５６電極で測定する（総実験時間、約９０分）。白血球を潅流した未処置の心臓の７例中６例で、白血球の浸潤により、著しい不整脈が起こったが、活性化合物（ＲＧＤＳペプチド又はコンドロイチン硫酸）で処置した心臓では、白血球の蓄積及び不整脈はほとんど見られなかった。本発明による化合物及び生理学的に許容される塩は、有効な薬学上の性質により、哺乳動物、特にヒトの医薬としての使用に対し極めて適している。従って、本発明は、更に式Ｉの化合物を少なくとも一つ、又はその薬学的に許容される塩からなる医薬、及びリューマチのような自己免疫疾患、又は再潅流傷害、虚血若しくは心筋梗塞のような心臓血管の疾病等により影響を受ける組織でのセレクチン受容体で媒介された過剰な細胞接着に関連した疾病の治療又は予防に対する医薬を調製するための使用に関する。
【００４７】ＮａＯＨ、ＫＯＨ、Ｍｇ(ＯＨ)2、Ｃａ(ＯＨ)2、ジエタノールアミン若しくはエチレンジアミン等の無機及び有機塩基との塩、又はアルギニン、ロイシン若しくはグルタミン酸等のアミノ酸との塩は、式Ｉの化合物の薬学的に許容される塩としての使用に対し特に適する。これらは標準のプロトコールにより製造される。これらの医薬は、細胞循環、例えばリンパ球、単球及び好中性の顆粒球の妨害により、病態生理学的に特徴づけられ得る急性及び慢性の炎症を治療するのに特に適する。これらの炎症は、急性多発動脈炎、関節リューマチ及びインスリン依存性糖尿病（糖尿病、ＩＤＤＭ）のような自己免疫疾患、急性及び慢性移植拒絶、ショック肺（ＡＲＤＳ、成人呼吸困難症候群）、乾癬及び接触湿疹のような炎症性及びアレルギー性皮膚疾患、心筋梗塞、血栓溶解後の再潅流傷害、血管形成若しくはバイパス手術、敗血症ショック及び全身ショックのような心臓血管の疾病を含む。腫瘍細胞は、エピトープ認識として、シアリルルイスＸ及びシアリルルイスＡ構造を共に有する抗原表面を持つので、さらに可能性のある用法は転移している腫瘍の処置である。更に、胃の酸性媒体で安定であるこれらの医薬は、ヘリコバクターピロリ及び関連した微生物の接着阻害治療に対しても使用され、そしてこれらは抗生物質と組合せても適している。その上、これらの医薬を用いて、マラリアの脳の状態に対する治療に発展させることも可能である。
【００４８】本発明による医薬は、一般に静脈内、経口若しくは非経口的に、又は移植剤として投与されるが、原則的には直腸にも用いることができる。適した固体又は液体製剤形態の例としては、顆粒剤、粉末剤、錠剤、コーティング錠、(マイクロ)カプセル、坐薬、シロップ剤、乳化剤、懸濁剤、エーロゾル剤、アンプル形態の滴剤若しくは注射用溶液、活性化合物の放出を延長させた製剤等があり、それらの製造には、賦形剤並びに添加剤、及び／又は補助剤、例えば崩壊剤、結合剤、コーティング剤、膨潤剤、グライダント、滑沢剤、香味剤、甘味剤又は安定剤が慣用的に使用される。頻繁に用いられる賦形剤又は補助剤は、炭酸マグネシウム、二酸化チタン、乳糖、マンニトール及び他の糖、タルク、ラクトアルブミン、ゼラチン、澱粉、ビタミン、セルロースおよびその誘導体、動物性及び植物性油、ポリエチレングリコール並びに溶媒、例えば滅菌水、アルコール、グリセロール及び多価アルコールである。医薬製剤は好適に調製され、投薬単位で投与される。錠剤、カプセル及び坐薬は、固体投薬単位である。
【００４９】患者の治療に際しては、化合物の活性、投与の形式、疾患の性質及び重症度、及び患者の年齢と体重に応じて、一日の投与量を変える必要がある。しかしながら、高投与量又は低投与量の一日量が共に適当な場合もある。一日に投与される用量は、一用量単位又は数個の小用量単位の形態で一回投与により、及び一定の間隔で小分けした用量の繰返し投与のいずれでもよい。一日の投与される用量は疾患の過程で発現する受容体の数にも依存する。疾患の初期段階では、細胞表面にわずかな受容体しか発現しなく、結果として、投与されることになる一日の用量は重症な患者の場合に比べ低用量でよいと考えられる。本発明による医薬は、通常の賦形剤、並びに適当な場合には、添加剤及び／又は補助剤を用いて、本発明の化合物を適当な投与形態になるように製造される。更に、疾患により影響を受ける組織での過剰なセレクチン受容体に媒介された細胞接着に関連した疾患の診断用の組成物を調製するために式Ｉの化合物を用いることを考えることもできる。
【００５０】本発明の化合物の製造例実施例１ａ） １,４−ビス（５−アリルオキシ−１−ペンチルオキシ）−Ｄ−トレイトール（１ａ）及び１−（５−アリルオキシ−１−ペンチルオキシ）−Ｄ−トレイトール（１ｂ）の合成ジメチルホルムアミド（１００ml）中の２,３−Ｏ−イソプロピリデン−Ｄ−トレイトール（１.３８g、８.５１mmol）と水素化ナトリウム（５７２mg、２３.８３mmol）の混合物を室温で３０分間攪拌した。次いで、５−アリルオキシ−１−ペンチルオキシトルエンスルホナート（６.６ｇ、２２.１９mmol）を０℃で滴下した。その後、この混合物を室温で二日間攪拌しておいた。水（２０ml）とジエチルエーテル（４００ml）を作業性を上げるために加えた。有機層を水（３×１４０ml）で洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥し、濾過し、そして濃縮した。残留物を６０℃で、４５分間、５０％トリフルオロ酢酸（２５０ml）で処理した。濃縮後、残留物をクロマトグラフィー（トルエン／酢酸５：１→４：１→３：１→２：１→１：１）で精製し、１ａ（２.１ｇ、６７％）及び１ｂ（２８４mg、１３％）を得た。１ｂの収率は、２.８当量の５−アリルオキシ−１−ペンチルオキシトルエンスルホナートの代わりに０.８当量だけ使用することにより、６０％以上に高めることができる。
1a：1H-NMR(300 MHz, CDCl3)：δ＝1.42(m, 4H, 2 CH2), 1.60(m, 8H, 4 CH2), 2.86(bd, 2H, 2 OH), 3.42(m, 12H, 6 CH2), 3.82(m, 2H, 2-Hthreit, 3-Hthreit), 3.96(m, 4H, 2 CH2-CH=CH2), 5.22(m, 4H, 2 CH2-CH=CH2), 5.92(m, 2H,2 CH2-CH=CH2)1b：1H-NMR(300 MHz, CDCl3)：δ＝1.42(m, 2H, CH2), 1.60(m, 4H, 2 CH2),3.42-3.84(m, 13H, 4 CH2, 2-Hthreit, 3-Hthreit, 3 OH), 3.96(m, 2H, CH2-CH=CH2), 5.22(m, 2H, CH2-CH=CH2), 5.92(m, 1H, CH2-CH=CH2)
【００５１】ｂ） １,４−ビス（５−アリルオキシ−１−ペンチルオキシ）−２,３−ビス（２,３,４−トリ−Ｏ−ベンジル−α−Ｌ−フコピラノシル）−Ｄ−トレイトール（２ａ）の合成０.１Ｍのトリメチルシリルトリフルオロメタンスルホナート（０.９ml）溶液を、ジエチルエーテル（３０ml）中の１ａ（１.１５ｇ、３.０９mmol）溶液に加えた。その後すぐに、ジエチルエーテル（１０ml）中のＯ−（２,３,４−トリ−Ｏ−ベンジル−α／β−Ｌ−フコピラノシル）−トリクロロアセトイミダート（５.０ｇ、８.６mmol）溶液を、５分間以内に滴下して加えた。３０分後、炭酸水素ナトリウム（０.２５ｇ）を加え、その混合物を濾過し、濃縮した。次いで、残留物をクロマトグラフィー（ヘキサン／酢酸エチル４：１→３：１）に付し、２ａ（３.２１ｇ、８６％）を得た。
1H-NMR(300 MHz, CDCl3)：δ＝1.10(d, 3H, CH3fuc), 5.18(m, 4H, 2 CH2-CH=CH2), 5.88(m, 2H, 2 CH2-CH=CH2)ｃ） １,４−ビス（５−ヒドロキシ−１−ペンチルオキシ）−２,３−ビス（２,３,４−トリ−Ｏ−ベンジル−α−Ｌ−フコピラノシル）−Ｄ−トレイトール（３ａ）の合成エタノール／水（９：１、１００ml）中の２ａ（３.２１ｇ、２.６６mmol）とロジウムトリス（トリフェニルホスフィン）クロライド（０.２４７mmol、０.２６７mmol）の混合物を、還流下、２時間沸騰した。濃縮後、残留物をクロマトグラフィー（トルエン／アセトン／メタノール５：１：０.１）で精製し、３ａ（１.５３ｇ、５１％）を得た。
【００５２】ｄ） １,４−ビス（５−ブロモ−１−ペンチルオキシ）−２,３−ビス（２,３,４−トリ−Ｏ−ベンジル−α−Ｌ−フコピラノシル）−Ｄ−トレイトール（４ａ）の合成トリエチルアミン（３.８ml、２７.４４mmol）と１,２−ジブロモテトラクロロエタン（４.４７g、１３.７２mmol）を、０℃で、ジクロロメタン（２５０ml）中の３ａ（７.７ｇ、６.８６mmol）とトリフェニルホスフィン（３.６ｇ、１３.７２mmol）の溶液に加えた。９０分後、その混合物を濃縮し、残留物をクロマトグラフィー（ヘキサン／酢酸エチル３：１）で精製した。４ａの収率：５.８ｇ（６８％）。ｅ） １,４−ビス（５−マロニル−１−ペンチルオキシ）−２,３−ビス（２,３,４−トリ−Ｏ−ベンジル−α−Ｌ−フコピラノシル）−Ｄ−トレイトール（５ａ）の合成４ａ（５.８ｇ、４.６４mmol）、ジメチルマロネート（２４３ml）、炭酸カリウム（１２.４９ｇ）及びジベンゾ−１８−クラウン−６（３.３５ｇ）の混合物を、１００℃で３時間攪拌した。冷却した後、更なる処理のために、その混合物をジクロロメタン（２.５リットル）で希釈し、吸引しながらケイソウ土を通し濾過した。次いで、水層のpHが中性になるまで、有機層を水（１１０ml）とドライアイスで交互に処理した。硫酸ナトリウムで乾燥し、続いて濾過及び濃縮し、次いで残留物をクロマトグラフィー（ヘキサン／酢酸エチル４：１→３：１→２：１）に付し、５ａ（５.６ｇ、９４％）を得た。
1H-NMR(300 MHz, CDCl3)：δ＝1.10(d，6H, 2 CH3fuc), 1.26(m, 12H, 6 CH2), 1.47(m, 4H), 1.83(m, 4H), 3.70(2 s, 12H, 4 COOCH3), 5.29(d, 2H, 2 1-Hfuc)
【００５３】ｆ） １,４−ビス（５−マロニル−１−ペンチルオキシ）−２,３−ビス（α−Ｌ−フコピラノシル）−Ｄ−トレイトール（６ａ）の合成メタノール／ジオキサン（１０：１、３３０ml）中の５ａ（２.８ｇ、２.１９mmol）とパラジウムカーボン（１０％、２.８ｇ）の混合物を、標準圧下で２４時間、水素雰囲気中、水素添加した。パラジウムカーボンを濾取し、残っている混合物を濃縮し、１Ｍ水酸化ナトリウム溶液（１００ml）で処理した。２時間後、その混合物をアンバーライトＩＲ−１２０で中和し、水／メタノール（９：１→１：９）を用いたＲＰシリカゲル（Ｃ１８ Bakerbond ６０オングストローム）を通して精製した。６ａ（１.１１ｇ、６７％）を得た。
1H-NMR(300 MHz, CDCl3)：δ＝1.17(d, 6H, 2 CH3fuc), 1.26(m, 4H, 2 CH2),1.52(m, 4H, 2 CH2), 1.66(m, 4H, 2 CH2), 4.20(q, 2H, 2 5-Hfuc), 5.07(d,2H, 2 1-Hfuc)
【００５４】実施例２ａ） １−（５−マロニル−１−ペンチルオキシ）−２,３,４−トリス（α−Ｌ−フコピラノシル）−Ｄ−トレイトール（２ｂ）の合成化合物２ｂは、１ａの代わりに１ｂを用いること以外は、６ａと同様な方法により合成した。
1H-NMR(300 MHz, D2O)：δ＝1.18(3 d, 9H, 3 CH3fuc), 1.26(m, 2H, CH2), 1.53(m, 2H, CH2), 1.67(m, 2H, CH2), 4.84, 5.06, 5.16(3 d, 3H, 3 1-Hfuc)
【００５５】実施例３ａ） ビス（４−マロニル−１−ブチルオキシ）−ビス（α／β−Ｌ−フコピラノシル）−ペンタエリトリトール（１ｃ）の合成化合物１ｃは、２,３−Ｏ−イソプロピリデン−Ｄ−トレイトールの代わりにＯ−イソプロピリデン−ペンタエリトリトールを用いること以外は、６ａと同様な方法により合成した。
1H-NMR(300 MHz, D2O)：δ＝1.10, 1.12(2 d, 6H, 2 CH3fuc), 4.17, 4.19, 4.70(3 d, 2H, 2 1-Hfuc)
【００５６】実施例４ａ） １,２−ビス（α−Ｌ−フコピラノシル）−３−（５−マロニル−１−ペンチルオキシ）−Ｄ−グリセロール（１ｄ）の合成化合物１ｄは、２,３−Ｏ−イソプロピリデン−Ｄ−トレイトールの代わりにＤ−α／β−イソプロピリデン−グリセロールを用いること以外は、６ａと同様な方法により合成した。
1H-NMR(300 MHz, D2O)：δ＝1.10(2 d, 6H, 2 CH3fuc), 4.75, 4.96(2 d, 2H,2 1-Hfuc)
【００５７】実施例５ａ） １,２,５,６−テトラキス（α−Ｌ−フコピラノシル）−３,４−ビス（５−マロニル−１−ペンチルオキシ）−Ｄ−マンニトール（１ｅ）の合成化合物１ｅは、２,３−Ｏ−イソプロピリデン−Ｄ−トレイトールの代わりに１,２：５,６−ジ−Ｏ−イソプロピリデン−Ｄ−マンニトールを用いること以外は、６ａと同様な方法により合成した。
1H-NMR(300 MHz, D2O)：δ＝1.10(d, 12H, 4 CH3fuc), 4.26, 4.79, 5.07(3 d, 2H, 2 1-Hfuc)
【０００１】本発明は、接着阻害性を有する多フコシル化されたジカルボン酸、それらの製造法、それらの使用及びそれらから調製される医薬及び診断薬に関する。分子レベルで、白血球、好中球、顆粒球及び単球のような血球の循環は、大変複雑な多段階の過程であり、そのうち、ある段階だけが知られているにすぎない（Review: T.A. Springer, Cell 76, 301-304, 1994）。
【０００２】最近の研究結果によれば、免疫監視に重要なリンパ球の再循環と炎症部位における好中球及び単球の局在化は、大変類似した分子機構で応答することが明らかにされた。このように、急性及び慢性の炎症過程では、白血球は内皮細胞に接着し、炎症部位及び二次リンパ系器官に移動する。
【０００３】多くの特異的なシグナル分子、例えばインターロイキン、ロイコトリエン及び腫瘍壊死因子（ＴＮＦ）、それらのＧタンパク結合受容体、並びに免疫細胞及び内皮細胞の正確に制御された認識を保証する、特に組織−特異的な細胞接着分子が、この過程に関与している。このような状況で関与する最も重要な接着分子（接着分子は、以下の記述では受容体と称する）は、セレクチン（Ｅ、Ｐ及びＬセレクチン）、インテグリン及び免疫グロブリン・スーパーファミリーのメンバーである。
【０００４】３種のセレクチン受容体は白血球接着の初期段階を決定する。Ｅセレクチンは、例えばインターロイキン１（ＩＬ−１β）又は腫瘍壊死因子（ＴＮＦ−ａ）による刺激後、数時間で内皮細胞に発現し、一方、Ｐセレクチンは血小板及び内皮細胞に蓄積され、トロンビン、過酸化物ラジカル又は、特にサブスタンスＰによる刺激後、細胞表面上に発現する。Ｌセレクチンは絶えず白血球上に発現されていると同時に、それは炎症を受けている間その白血球により再度迅速に接着される。
【０００５】炎症過程の初期段階にセレクチン受容体により媒介される、内皮細胞への白血球の接着は、様々な炎症刺激及び血管組織への傷害に対し、自然でかつ必要な免疫応答である。
【０００６】しかしながら、ある急性及び慢性疾患の過程は、関連した組織への白血球の過剰な接着とそれらの浸潤により、及び自己免疫反応の形成で健康な組織への損傷により悪影響を受ける。これらの疾患には、例えばリウマチ、心筋虚血／梗塞（ＭＩ）のような再潅流傷害、外科手術の介在、外傷性ショック及び発作後の急性肺炎、乾癬、皮膚炎、ＡＲＤＳ（成人呼吸困難症候群）並びに外科手術の介在（例えば、血管形成とバイパス手術）後に起こる再発狭窄症がある。
【０００７】SLeX構造を有する天然リガンドは、Ｐセクレチン依存性肺障害（M.S. Mulligan et al., Nature 1993, 364, 149）及び心筋再潅流傷害（M. Buerke et al., J. Clin. Invest. 1994, 93, 1140）と関連して、動物実験ですでに使用され成功している。初期の臨床試験において、その化合物が急性肺炎に対して患者一日あたり１〜２ｇの投与量で使用されていることが報告されている（1994年5月16〜18日、the 2nd Glycotechnology Meeting/CHI in La Jolla/USAでの Cytel Corp.,/La Jolla(CA.)からの情報）。
【０００８】活性化合物のこの高投与量は、弱くなることが知られているセレクチン受容体に対する天然のSLex／Ａリガンドの親和性と一致する。このように、全ての既知のインビトロ試験系で、SLexだけが約１mMのIC50の範囲内にある比較的高濃度でセレクチン受容体への細胞接着を阻害する（Jacob et al., Biochemistry 1995,34, 1210)。一方、一部の刊行物及び特許出願には、リガンドの構造の改変によって、さらに強く結合するアンタゴニストを得る試みが報告されている。これらの研究の目的は、より活性があり、及びインビボで低投与量で使用される可能性のある有効なアンタゴニストを製することである。
【０００９】しかしながら、フコース及びノイラミン酸構成成分の改変は、現在まで構造活性相関に対して重要と考えられていたが（B.K. Brandley et al., Glycobiology1993, 3, 633、及びM. Yoshida et al., Glycoconjugate J. 1993, 10, 3)、著しく改善された阻害値を示さなかった。グルコサミン構成成分を改変することによってのみ（GlcNAcのグルコースによる置換、並びにGlcNAcの２位にアジド基及びアミノ基の置換）、Ｅセレクチン受容体に対して親和性を著しく増加させることができるようになった。一方、Ｐセレクチンへの結合は改善されなかった。
【００１０】ＨＬ−６０及びＵ−９３７細胞の接着阻害に対し、これらのオリゴサッカライドに対するIC50値は、Ｅセレクチンの場合０.１２mMの範囲内にある（SLeXに対する１.２〜２.０mMと比較して）。一方、欠点としては、５mM以上でのＬ及びＰセレクチンへの結合が著しく損なわれることである（Dasgupta et al., Glycomed Inc. poster presentation at the La Jolla meeting in 5/94）。
【００１１】一般的に、SLex誘導体及びSLeA誘導体の結合親和性を改善するのに成功したのは、現在までＥセレクチン受容体だけに限定されている。これは、Ｐセレクチン受容体の場合には、約１mMの阻害剤濃度で弱い阻害作用しか見出されていないためである（R.M. Nelson et al., J. Clin. Invest. 1993, 91, 1157）。
【００１２】セレクチンに対する修飾されたSLex／Ａ構造の結合親和性に関する先行技術は、Pharmacochem. Libr. 1993, 20（Trends in Drug Research）, pp. 33〜40に言及されている。本発明の目的は、天然のリガンドに比べ受容体に著しく強い結合を示す新規なセレクチンリガンドを製造すること、及び天然のリガンドよりも容易に合成することにある。
【００１３】この目的は次の式Ｉの化合物によって達成される。
１. 式Ｉ
【化６】
（式中、Ｒ5及びＲ6は、互いに独立に、Ｈ、ＯＨ、ＣＯＯＨ、ＮＨ2、ＮＨＡｃ、−Ｏ(ＣＨ2)cＸ1、(ＣＨ2)cＸ1、ＣＨ2Ｏ(ＣＨ2)cＸ1又はＺであり、Ａ、Ｂ、Ｄ、Ｅ及びＧは、互いに独立に、Ｏ、Ｓ、−ＮＨ、−ＨＮ−Ｃ(Ｏ)−、−(Ｏ)Ｃ−ＮＨ−、−Ｏ−Ｃ(Ｏ)−、−(Ｏ)Ｃ−Ｏ−、ＮＨ−Ｃ(Ｏ)−Ｏ、Ｏ−Ｃ(Ｏ)−ＮＨ、ＮＨ−Ｃ(Ｏ)−ＮＨ、Ｓ−Ｃ(Ｏ)−、(Ｓ)Ｃ−Ｏ、Ｏ−Ｃ(Ｓ)−Ｓ、Ｓ−Ｃ(Ｓ)−Ｏ、ＮＨ−Ｃ(Ｓ)−Ｓ、Ｓ−Ｃ(Ｓ)−ＮＨ、−ＣＨ2−、−Ｏ−ＣＨ2−、ＣＨ2−Ｏ−、ＣＨ2−ＮＨ−又はＮＨ−ＣＨ2であり、Ｖ1及びＶ2は、互いに独立に、炭素原子又は窒素原子であり、窒素原子の場合にはＲ5及びＲ6はなく、Ｑ及びＹは、互いに独立に、−(ＣＸ2,Ｘ3)b−、−(ＣＸ2,Ｒ7)b−、−(ＣＲ7,Ｒ8)b−、−ＣＨ2−(ＣＸ2,Ｘ3)b−又は飽和若しくは不飽和の、５員若しくは６員の炭素環若しくは複素環、あるいは−(ＣＸ2,Ｘ3)b−、−(ＣＸ2,Ｒ7)b−、若しくは−(ＣＲ7,Ｒ8)b−及び炭素環若しくは複素環との組合せであり、このとき、Ｒ7及びＲ8は、互いに独立に、Ｈ、ＯＨ、ＣＯＯＨ、ＮＨ2、ＮＨ−Ｃ(Ｏ)−ＣＨ3、−Ｏ(ＣＨ2)dＸ1又はＣＨ2Ｏ(ＣＨ2)dＸ1であり、そしてＸ1、Ｘ2及びＸ3は、互いに独立に、Ｈ、ＮＨ2、ＣＯＯＨ、ＯＨ、ＣＨ2ＯＨ、ＣＨ2ＮＨ2、Ｃ1〜Ｃ20−アルキル又はＣ6〜Ｃ10−アリールであり、Ｋ及びＬは、互いに独立に、Ｈ−Ｃ−ＧＺ又はＣＨ2であり、Ｒ1、Ｒ2、Ｒ3及びＲ4は、互いに独立に、Ｈ、ＯＨ又はＧ−Ｚであり、Ｚは、ピラノシド、Ｃ6位で連結されるピラノシル残基、Ｃ6位で連結されるアルキルピラノシド、フラノシド、 Ｃ5位で連結されるアルキルフラノシド又はポリアルコール、そしてそれらに一又はそれ以上のヒドロキシル基が、互いに独立に、任意の位置でＧに連結されるＲ7又はＲ8によって置換されていてもよく、及びその指数である、ａ、ｂ、ｃ、ｄ、ｌ、ｍ、ｎ、ｐ、ｑ、ｔ、ｖ、ｗ、ｘ及びｙは、互いに独立に、０から２０までの整数であり、そして又ｒ及びｚは、互いに独立に、０又は１であり、そしてｒが０であるとき、ｑ及びｔは０であり、Ｒ2及びＲ3はない）で表される化合物。
【００１４】２．式Ｉの化合物で、好ましくは、式中Ｒ5はＨであり、Ｖ1はＣであり、Ａ及びＹはＣＨ2であり、ＢはＯ−ＣＨ2であり、ＤはＣＨ2−Ｏであり、ｒ、ｐ及びｗは０であり、そしてＲ1及びＲ4はＧ−Ｚである。
【００１５】３．好ましくは、式中Ｚは１であり、Ｑ及びＥはＣＨ2であり、Ｖ2はＣであり、そしてＲ6はＨである。
４．特に好ましくは、式中ｌ、ｍ、ｙ及びｘは０であり、ＧはＯであり、そしてＺはピラノシドである。
【００１６】５．ピラノシドＺは好ましくはＬ−フコシドであり、例えば
【化７】
である。
【００１７】６．好ましくは、式Ｉの化合物は２.で述べた特徴、及びまたは以下の特徴を有する。Ｚは０であり、そしてＲ6はＺである。
７．好ましくは、式中ｌ及びｍは０であり、ＧはＯであり、そしてＺはピラノシドである。
【００１８】８．ピラノシドＺは特に好ましくはＬ−フコシドであり、例えば
【化８】
である。
【００１９】９．本発明の更に好ましい態様としては、式Ｉの化合物でＲ1、Ｒ4及びＲ5はＨであり、Ｖ1はＣであり、Ａ及びＹはＣＨ2であり、Ｂ及びＤはＯであり、ｐ及びｗは０であり、ｒは１であり、ＫはＣＨ2であり、そしてＲ2及びＲ3はＧＺである。
【００２０】１０．好ましくは、式中ｚは１であり、Ｑ及びＥはＣＨ2であり、Ｖ2はＣであり、そしてＲ6はＨである。
【００２１】１１．特に好ましくは、式中ｌ、ｍ、ｘ及びｙは０であり、ｑ及びｔは１であり、ＧはＯであり、そしてＺはピラノシドであり、そのピラノシドＺは好ましくはＬ−フコシドであり、例えば
【化９】
である。
【００２２】１３．本発明の更なる態様としては、式Iの化合物でＲ5はＨであり、Ｖ1はＣであり、Ａ及びＹはＣＨ2であり、Ｂ及びＤはＯであり、そしてｒは０である。
１４．好ましくは、式中ｚは１であり、Ｒ6はＨであり、Ｑ及びＥはＣＨ2であり、そしてＶ2はＣである。
【００２３】１５．特に好ましくは、式中ｌ、ｍ、ｙ及びｘは０であり、ｐ及びｗは２であり、ＬはＨ−Ｃ−ＧＺであり、Ｒ1及びＲ4はＨであり、ＧはＯであり、そしてＺはピラノシドである。
【００２４】１６. そしてその式中、ピラノシドＺは特に好ましくはＬ−フコシドであり、例えば
【化１０】
である。
【００２５】１７．本発明の更なる態様としては、式Ｉの化合物でａ、ｐ、ｒ、ｗ及びｚは０であり、Ｒ5及びＲ6はＨであり、Ｖ1はＣであり、Ａ及びＹはＣＨ2であり、ＢはＯ−ＣＨ2であり、そしてＲ1及びＲ4はＧ−Ｚである。
１８．好ましくは、式中ｌ及びｍは０であり、ＧはＯであり、そしてＺはピラノシドである。
【００２６】１９．そしてこのピラノシドは好ましくはＬ−フコシドであり、例えば、
【化１１】
である。
【００２７】２０．最初に述べた目的は、更に式Ｉの化合物を製造する方法によっても達成され、 この方法は、式II
【化１２】
の受容体の一つの官能基Ｌ1又は二つの官能基Ｌ1及びＬ2（この式IIの受容体の残りの官能基及び官能基Ｌn（それぞれ、ｎ＝２〜６又は３〜６）は、必要ならば保護されている）を、供与体IIIＬ8−Ａ−(Ｙ)n−Ｂ−Ｌ7 III（この式IIIの供与体は活性化された官能基Ｌ7を有する）によって、そしてＬ2がまた保護されていないならば供与体IVＬ7−(Ｄ)a−(Ｑ)r−Ｅ−Ｌ8 IV（この式IVの供与体は活性化された官能基Ｌ7を有し、残りの官能基及び官能基Ｌ8は、必要ならば保護基を有する）によって、同時ににまたは連続して、アルキル化、アシル化またはグリコシル化して、最初に中間体Ｖ
【化１３】
を製造し、ここで上記の供与体III及びIVは、異なっていても又は同一でもよいものとし、その後で、中間体Ｖの原子Ｋ及びＬ上の官能基、並びに適当である場合には、官能基Ｌ3乃至Ｌ6及びＬ8の保護基を選択的に脱離し、この選択的に脱保護された中間体Ｖを、一又はそれ以上のグリコシル又はポリオ−ル供与体VIＬ9−Ｚ VI（式中、Ｌ9は活性化された官能基であり、この供与体VIの残りの官能基は必要ならば保護されているものとする）と反応させ、そして官能基Ｌ8の選択的脱保護の後に、アルキル供与体VII
【化１４】
および適当である場合に、アルキル供与体VIII
【化１５】
（式中、Ｌ10はカルボキシル保護基であり、そしてＬ11は、適当である場合には、Ｖ1又はＶ2と組み合わせて、アルキル化基であるものとする）でアルキル化し、そして全ての保護基を脱離することにより、請求項１乃至１６のいずれかに記載された式Ｉの化合物に最終的に変換することからなる。但し、ここで定義されていない全ての変数は１.に記載された意味を有するものとする。
【００２８】２１．所望ならば、受容体IIを、まず第一に、一またはそれ以上のグリコシル供与体又はポリオ−ル供与体VIと反応させ、次いで中間体Ｖを製造するために供与体IVと反応させることができる。
【００２９】ａ) ５.及び８.に記載された化合物は、本発明による方法を用い、好ましくは、受容体IIとして(−)−２,３−Ｏ−イソプロピリデン−Ｌ−トレイトール、供与体III及びIVとして５−アリルオキシ−１−ｐ−トルエンスルホニルオキシペンタン、及びグリコシル供与体VIとしてＯ−（２,３,４−トリ−Ｏ−ベンジル−α／β−Ｌ−フコピラノシル）トリクロロアセトイミダートを用いて製造され得る。二つのアリル基を脱離し、生じるヒドロキシル基をトシル化又はブロム化した後、アルキル供与体VIIとしてマロン酸ジメチルを用いてアルキル化を行い、その後脱保護が行われる。
【００３０】ｂ) １１.に記載された化合物は、本発明による方法を用い、好ましくは、受容体IIとしてイソプロピリデン−ペンタエリトリトールを用い、次いでａ)に記載したように反応させて製造され得る。
【００３１】ｃ) １６.に記載された化合物は、本発明による方法を用い、好ましくは、受容体IIとして１,２：５,６−ジ−Ｏ−イソプロピリデン−Ｄ−マンニトールを用い、次いでａ）に記載したように反応させて製造され得る。
【００３２】ｄ) １９.に記載された化合物は、本発明による方法を用い、受容体IIとしてＤ−α／β−イソプロピリデン−グリセロールを用い、次いでａ）に記載したように反応させて有利に製造され得る。
【００３３】シアリルルイスＸより低分子量であるにもかかわらず、本発明による式Ｉの化合物は天然の受容体、例えばＥセレクチン及びＰセレクチンに対し、シアリルルイスＸよりも高親和性を持つことができる。このことは以下に述べる細胞接着分析を用いて示すことができる。
【００３４】組換体、可溶性セレクチン融合タンパク質への細胞接着に対する本発明による化合物の効果を検討するための一次アッセイＥ及びＰセレクチン（古い命名法では、それぞれＥＬＡＭ−１及びＧＭＰ−１４０）とそれらのリガンド間の相互作用に対する本発明の化合物の効果を試験するために、それぞれの場合にこれらの相互作用の一方にのみ特異的であるアッセイが用いられる。これらのリガンドは、前骨髄細胞ＨＬ６０細胞上の表面構造として天然型で表される。ＨＬ６０細胞は極めて広い種類の特異性のあるリガンドと接着分子を示すので、アッセイの所望の特異性は結合相手によってのみ発生する。Ｅセレクチン又はＰセレクチンのいずれかの細胞質外ドメイン及びＩｇＧ１サブクラスのヒト免疫グロブリンの定常領域から形成された、遺伝子組換えで調製された可溶性融合タンパク質が結合相手として用いられた。
【００３５】Ｌセレクチン−ＩｇＧ１の調製１９９０年にWalzらにより公表された遺伝子構築体「ＥＬＡＭ−Ｒｇ」が、可溶性Ｌ−セレクチン−ＩｇＧ１融合タンパク質を調製するために用いられた。発現させるために、プラスミドＤＮＡがＤＥＡＥデキストランを用いるＣＯＳ−７細胞（ＡＴＣＣ）にトランスフェクトされた（分子生物学的方法：参照Ausubel, F. M., Brent, R., Kingston, R. E., Moore, D. D., Seidman, J. G., Struhl, K. and Smith, J. A. 1990. Current Protocols in Molecular Biology,John Wiley, New York）。トランスフェクション後７日目に、培養上清を分離し、遠心分離により細胞と細胞断片を除去し、２５mM Hepes、pH７.０、０.３mMＰＭＳＦ、０.０２％アジ化ナトリウムに移し、＋４℃で保存した（Walz, G., Aruffo, A., Kolanus, W., Bevilacqua, M. and Seed, B. 1990. Recognition byELAM-1 of the sialyl-Lex determinant on myeloid and tumor cells. Science 250, 1132-1135）。
【００３６】Ｐセレクチン−ＩｇＧ１の調製１９９１年にAruffoらにより公表された遺伝子構築体「ＣＤ６２Ｒｇ」が、可溶性Ｐセレクチン−ＩｇＧ１融合タンパク質を調製するために用いられる。その後の方法はＡ１に記載されたＬセレクチン−ＩｇＧ１の調製と同様である。Aruffo, A., Kolanus, W., Walz, G., Fredman, P. and Seed, B. 1991. CD62/P-selectin recognition of myeloid and tumor cell sulfatides. Cell 67, 35-44。
【００３７】ＣＤ４−ＩｇＧ１の調製１９９０年にZettelmeisslらにより公表された遺伝子構築体「ＣＤ４：ＩｇＧ１ヒンジ」が、可溶性ＣＤ４−ＩｇＧ１融合タンパク質を調製するために用いられる。その後の方法はＡ１に記載されたＬセレクチン−ＩｇＧ１の調製と同様である（Zettelmeissl, G., Gregersen, J.-P., Duport, J. M., Mehdi, S., Reiner, G. and Seed, B. 1990. Expression and characterization of human CD4:Immunoglobulin Fusion Proteins. DNA and Cell Biology 9, 347-353.）。
【００３８】組換体、可溶性接着分子に対するＨＬ６０細胞接着アッセイの実施１．９６−ウェルマイクロタイターテストプレート（Nunc Maxisorb）を、５０mM Tris、pH９.５中で（１＋１００）に希釈した、１００μｌのヤギ抗−ヒトＩｇＧ抗体（Sigma）とともに、室温で２時間インキュベートした。抗体溶液を除去した後、プレートをＰＢＳで一度洗浄した。
２．ウェル中に１５０μｌのブロッキングバファーを加え室温で一時間放置した。ブロッキングバファーの組成は、０.１％ゼラチン、１％ＢＳＡ、５％ウシ血清、０.２mM ＰＭＳＦ、０.０２％アジ化ナトリウムである。ブロッキングバッファーを除去した後、プレートをＰＢＳで一度洗浄した。
【００３９】３．それぞれの場合、適当にトランスフェクトされ、発現しているＣＯＳ細胞からの１００μｌの細胞培養上清をウェル中にピペットで加えた。次いで、プレートを室温で２時間インキュベートした。細胞培養上清を除去した後、プレ−トをＰＢＳで一度洗浄した。
４．２０μｌの結合バッファーをウェルに加えた。結合バッファーは、５０mM Hepes、pH７.５；１００mM ＮａＣｌ；１mg／ml ＢＳＡ；２mM ＭｇＣｌ2；１mMＣａＣｌ2；３mM ＭｎＣｌ2；０.０２％アジ化ナトリウム：０.２mM ＰＭＳＦの組成である。これに５μｌの試験物質をピペットで加えた。プレートを回転して混合し、室温で１０分間インキュベートした。
【００４０】５．２００,０００細胞／mlを含有するＨＬ６０細胞の培養液５０mlを３５０ｇで４分間遠心分離した。ペレットを１０mlのＲＰＭＩ １６４０に再懸濁し、細胞を再度遠心分離した。細胞を標識するために、５０μｇのＢＣＥＣＦ−ＡＭ（Molecular Probes）を５μｌの無水ＤＭＳＯに溶解し、ついで、１.５mlのＲＰＭＩ １６４０をＢＣＥＣＦ−ＡＭ／ＤＭＳＯ溶液に加えた。細胞をこの溶液に再懸濁し、その懸濁液を３７℃で３０分間インキュベートした。３５０ｇで２分間遠心分離した後、標識された細胞ペレットを１１mlの結合バッファーに再懸濁し、再懸濁した細胞をマイクロタイタープレートウェルに１００μｌずつ分配した。プレートを室温で１０分間放置し、細胞をテストプレートの底に沈殿させた。これにより細胞はコーティングされたプラスチックに接着する機会を得る。
【００４１】６．テストを停止するために、マイクロタイタープレートを停止バッファー（２５mM Tris、pH７.５；１２５mM ＮａＣｌ；０.１％ＢＳＡ；２mM ＭｇＣｌ2；１mM ＣａＣｌ2；３mM ＭｎＣｌ2；０.０２％アジ化ナトリウム）中に４５℃の角度で完全に浸漬した。停止バッファーを逆さにしてウェルから除去し、この操作をさらに２回繰返した。
【００４２】７．ウェル中に接着しているＢＣＥＣＦ−ＡＭ標識細胞量を、設定感度４、励起波長４８５／２２nm、発光波長５３０／２５nmに設定した細胞蛍光測定装置（Millipore）で測定した。
【００４３】白血球接着−本発明の化合物のインビボにおける効能試験（ラットにおける生体内顕微鏡検査）
白血球遊走により引起こされる組織破壊又は微小循環を遮断することは、炎症過程及びサイトカインを活性化する他の条件下で重要な役割を果たす。その後の疾患過程に対し重要である初期段階は、循環内、特に毛細血管領域の前後で白血球を活性化することである。この段階では、まず第一に白血球が軸上の血液循環を離れた後、内部血管壁、すなわち血管内皮に白血球が接着する。その後の全ての白血球の作用、すなわち血管壁を通しての能動的移動及びその後の組織内での一定方向の移動が必然的な反応である（Harlan, J.M., Leukocyte-endothelialinteraction, Blood 65, 513-525, 1985）。
【００４４】この受容体に媒介される白血球と内皮細胞の相互作用は、炎症過程の初期の兆候とみなされる。既に生理学的に発現している接着分子に加えて、炎症メディエーター（ロイコトリエン及びＰＡＦ）及びサイトカイン（ＴＮＦ−α及びインターロイキン）の影響を受けて、接着分子の次第に変化した大量発現が細胞上に起こる。現在、これらの分子は３つのグループ、すなわち、１.免疫グロブリン遺伝子スーパーファミリー、２.インテグリン及び３.セレクチンに分けられている。Ｉｇ遺伝子スーパーファミリーの分子とタンパク質−タンパク質結合間に接着が起こっている間に、セレクチン間の協同によりレクチン−炭水化物結合が顕著になる（Springer, T.A., Adhesion receptors of the immune system. Nature346, 425-434, 1990; Huges, G., Cell adhesion molecules - the key to a universal panacea, Scrips Magazine 6, 30-33, 1993; Springer, T.A., Trafficsignals for lymphocyte recirculation and leukocyte emigration; The multistep paradigm. Cell 76, 301-314, 1994）。
【００４５】方法白血球の誘導された接着は、生体内顕微鏡検査技術を用いてラット腸間膜で定量される（Atherton A. and Born G.V.R., Quantitative investigations of the adhesiveness of circulating polymorphonuclear leukocytes to blood vessel walls. J. Physiol. 222, 447-474, 1972）。持続麻酔は、エーテルによる吸入麻酔下、ウレタン（１.２５mg／kg体重）を筋肉内注射して開始する。血管（物質の注射には大腿部の静脈、及び血圧の測定には頚動脈）を切開により露出し、次いでカテーテルを血管内に縛りつける。その後、相当する透明な組織（腸間膜）を露出し、顕微鏡の台上に広げ、そして３７℃でパラフィンオイルでおおう（Menger, M.D. and Lehr, H., A. Scope and perspectives of intravital microscopy-bridge over from in vitro to in vivo, Immunology Today 14, 519-522, 1993）。試験物質を動物に静脈内投与する（１０mg／kg）。サイトカインの活性化によって、試験物質の投与15分後にリポ多糖（ＬＰＳ、１５mg／kg）を全身投与し、血球接着の実験的増加を起こす（Foster S.J., McCormick L.M., Ntolosi B.A. and Campbell D., Production of TNF-alpha by LPS-stimulated murine, rat and human blood and its pharmacological modulation, Agents andActions 38, C77-C79, 1993, 18.01. 1995）。その結果生じる内皮への白血球の接着の増大は、生体内顕微鏡によって直接に、又は蛍光染色を用いて定量される。全ての測定操作をビデオカメラでとり、ビデオレコーダーに保存する。回転する白血球の数（すなわち、明らかに回転し、赤血球の流れよりも遅い全ての白血球）及び内皮に接着している白血球の数（５秒間以上滞留している）を６０分間にわたって１０分毎に記録する。実験終了後、麻酔した動物を、苦痛なく、かつ全身にＴ６１を注射し刺激を与えることなく殺す。評価するためには、それぞれ８匹の処理した動物からの結果を、それぞれ８匹の未処理動物（対照群）の結果と比較する（その結果は百分率値として与えられる）。
【００４６】結果化合物６ａ：投与量１０mg／kg；投与i.v.；種ＳＰＲＤ(ｍ)；重量：２９８±１７.７２ｇ；血管数１４；血管直径２６±２μｍ；白血球：(６.０±１.０９)・１０3／mm3；フィブリノーゲン１３０±６.９５mg／１００ml；阻害３９％切開したウサギの心臓上で行った虚血／再潅流過程の好中球の接着の影響を調べるための再潅流モデル。心臓を栄養液と、並びに白血球及び／又は活性化合物の存在下又は非存在下に、定常圧でLangendorff技術を用いて潅流する。その後、左冠状動脈を結紮することにより（３０分）、虚血を引起こす。再潅流後（３０分）、白血球の蓄積を組織学的に評価する。実験中、電位と不整脈を２５６電極で測定する（総実験時間、約９０分）。白血球を潅流した未処置の心臓の７例中６例で、白血球の浸潤により、著しい不整脈が起こったが、活性化合物（ＲＧＤＳペプチド又はコンドロイチン硫酸）で処置した心臓では、白血球の蓄積及び不整脈はほとんど見られなかった。本発明による化合物及び生理学的に許容される塩は、有効な薬学上の性質により、哺乳動物、特にヒトの医薬としての使用に対し極めて適している。従って、本発明は、更に式Ｉの化合物を少なくとも一つ、又はその薬学的に許容される塩からなる医薬、及びリューマチのような自己免疫疾患、又は再潅流傷害、虚血若しくは心筋梗塞のような心臓血管の疾病等により影響を受ける組織でのセレクチン受容体で媒介された過剰な細胞接着に関連した疾病の治療又は予防に対する医薬を調製するための使用に関する。
【００４７】ＮａＯＨ、ＫＯＨ、Ｍｇ(ＯＨ)2、Ｃａ(ＯＨ)2、ジエタノールアミン若しくはエチレンジアミン等の無機及び有機塩基との塩、又はアルギニン、ロイシン若しくはグルタミン酸等のアミノ酸との塩は、式Ｉの化合物の薬学的に許容される塩としての使用に対し特に適する。これらは標準のプロトコールにより製造される。これらの医薬は、細胞循環、例えばリンパ球、単球及び好中性の顆粒球の妨害により、病態生理学的に特徴づけられ得る急性及び慢性の炎症を治療するのに特に適する。これらの炎症は、急性多発動脈炎、関節リューマチ及びインスリン依存性糖尿病（糖尿病、ＩＤＤＭ）のような自己免疫疾患、急性及び慢性移植拒絶、ショック肺（ＡＲＤＳ、成人呼吸困難症候群）、乾癬及び接触湿疹のような炎症性及びアレルギー性皮膚疾患、心筋梗塞、血栓溶解後の再潅流傷害、血管形成若しくはバイパス手術、敗血症ショック及び全身ショックのような心臓血管の疾病を含む。腫瘍細胞は、エピトープ認識として、シアリルルイスＸ及びシアリルルイスＡ構造を共に有する抗原表面を持つので、さらに可能性のある用法は転移している腫瘍の処置である。更に、胃の酸性媒体で安定であるこれらの医薬は、ヘリコバクターピロリ及び関連した微生物の接着阻害治療に対しても使用され、そしてこれらは抗生物質と組合せても適している。その上、これらの医薬を用いて、マラリアの脳の状態に対する治療に発展させることも可能である。
【００４８】本発明による医薬は、一般に静脈内、経口若しくは非経口的に、又は移植剤として投与されるが、原則的には直腸にも用いることができる。適した固体又は液体製剤形態の例としては、顆粒剤、粉末剤、錠剤、コーティング錠、(マイクロ)カプセル、坐薬、シロップ剤、乳化剤、懸濁剤、エーロゾル剤、アンプル形態の滴剤若しくは注射用溶液、活性化合物の放出を延長させた製剤等があり、それらの製造には、賦形剤並びに添加剤、及び／又は補助剤、例えば崩壊剤、結合剤、コーティング剤、膨潤剤、グライダント、滑沢剤、香味剤、甘味剤又は安定剤が慣用的に使用される。頻繁に用いられる賦形剤又は補助剤は、炭酸マグネシウム、二酸化チタン、乳糖、マンニトール及び他の糖、タルク、ラクトアルブミン、ゼラチン、澱粉、ビタミン、セルロースおよびその誘導体、動物性及び植物性油、ポリエチレングリコール並びに溶媒、例えば滅菌水、アルコール、グリセロール及び多価アルコールである。医薬製剤は好適に調製され、投薬単位で投与される。錠剤、カプセル及び坐薬は、固体投薬単位である。
【００４９】患者の治療に際しては、化合物の活性、投与の形式、疾患の性質及び重症度、及び患者の年齢と体重に応じて、一日の投与量を変える必要がある。しかしながら、高投与量又は低投与量の一日量が共に適当な場合もある。一日に投与される用量は、一用量単位又は数個の小用量単位の形態で一回投与により、及び一定の間隔で小分けした用量の繰返し投与のいずれでもよい。一日の投与される用量は疾患の過程で発現する受容体の数にも依存する。疾患の初期段階では、細胞表面にわずかな受容体しか発現しなく、結果として、投与されることになる一日の用量は重症な患者の場合に比べ低用量でよいと考えられる。本発明による医薬は、通常の賦形剤、並びに適当な場合には、添加剤及び／又は補助剤を用いて、本発明の化合物を適当な投与形態になるように製造される。更に、疾患により影響を受ける組織での過剰なセレクチン受容体に媒介された細胞接着に関連した疾患の診断用の組成物を調製するために式Ｉの化合物を用いることを考えることもできる。
【００５０】本発明の化合物の製造例実施例１ａ） １,４−ビス（５−アリルオキシ−１−ペンチルオキシ）−Ｄ−トレイトール（１ａ）及び１−（５−アリルオキシ−１−ペンチルオキシ）−Ｄ−トレイトール（１ｂ）の合成ジメチルホルムアミド（１００ml）中の２,３−Ｏ−イソプロピリデン−Ｄ−トレイトール（１.３８g、８.５１mmol）と水素化ナトリウム（５７２mg、２３.８３mmol）の混合物を室温で３０分間攪拌した。次いで、５−アリルオキシ−１−ペンチルオキシトルエンスルホナート（６.６ｇ、２２.１９mmol）を０℃で滴下した。その後、この混合物を室温で二日間攪拌しておいた。水（２０ml）とジエチルエーテル（４００ml）を作業性を上げるために加えた。有機層を水（３×１４０ml）で洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥し、濾過し、そして濃縮した。残留物を６０℃で、４５分間、５０％トリフルオロ酢酸（２５０ml）で処理した。濃縮後、残留物をクロマトグラフィー（トルエン／酢酸５：１→４：１→３：１→２：１→１：１）で精製し、１ａ（２.１ｇ、６７％）及び１ｂ（２８４mg、１３％）を得た。１ｂの収率は、２.８当量の５−アリルオキシ−１−ペンチルオキシトルエンスルホナートの代わりに０.８当量だけ使用することにより、６０％以上に高めることができる。
1a：1H-NMR(300 MHz, CDCl3)：δ＝1.42(m, 4H, 2 CH2), 1.60(m, 8H, 4 CH2), 2.86(bd, 2H, 2 OH), 3.42(m, 12H, 6 CH2), 3.82(m, 2H, 2-Hthreit, 3-Hthreit), 3.96(m, 4H, 2 CH2-CH=CH2), 5.22(m, 4H, 2 CH2-CH=CH2), 5.92(m, 2H,2 CH2-CH=CH2)1b：1H-NMR(300 MHz, CDCl3)：δ＝1.42(m, 2H, CH2), 1.60(m, 4H, 2 CH2),3.42-3.84(m, 13H, 4 CH2, 2-Hthreit, 3-Hthreit, 3 OH), 3.96(m, 2H, CH2-CH=CH2), 5.22(m, 2H, CH2-CH=CH2), 5.92(m, 1H, CH2-CH=CH2)
【００５１】ｂ） １,４−ビス（５−アリルオキシ−１−ペンチルオキシ）−２,３−ビス（２,３,４−トリ−Ｏ−ベンジル−α−Ｌ−フコピラノシル）−Ｄ−トレイトール（２ａ）の合成０.１Ｍのトリメチルシリルトリフルオロメタンスルホナート（０.９ml）溶液を、ジエチルエーテル（３０ml）中の１ａ（１.１５ｇ、３.０９mmol）溶液に加えた。その後すぐに、ジエチルエーテル（１０ml）中のＯ−（２,３,４−トリ−Ｏ−ベンジル−α／β−Ｌ−フコピラノシル）−トリクロロアセトイミダート（５.０ｇ、８.６mmol）溶液を、５分間以内に滴下して加えた。３０分後、炭酸水素ナトリウム（０.２５ｇ）を加え、その混合物を濾過し、濃縮した。次いで、残留物をクロマトグラフィー（ヘキサン／酢酸エチル４：１→３：１）に付し、２ａ（３.２１ｇ、８６％）を得た。
1H-NMR(300 MHz, CDCl3)：δ＝1.10(d, 3H, CH3fuc), 5.18(m, 4H, 2 CH2-CH=CH2), 5.88(m, 2H, 2 CH2-CH=CH2)ｃ） １,４−ビス（５−ヒドロキシ−１−ペンチルオキシ）−２,３−ビス（２,３,４−トリ−Ｏ−ベンジル−α−Ｌ−フコピラノシル）−Ｄ−トレイトール（３ａ）の合成エタノール／水（９：１、１００ml）中の２ａ（３.２１ｇ、２.６６mmol）とロジウムトリス（トリフェニルホスフィン）クロライド（０.２４７mmol、０.２６７mmol）の混合物を、還流下、２時間沸騰した。濃縮後、残留物をクロマトグラフィー（トルエン／アセトン／メタノール５：１：０.１）で精製し、３ａ（１.５３ｇ、５１％）を得た。
【００５２】ｄ） １,４−ビス（５−ブロモ−１−ペンチルオキシ）−２,３−ビス（２,３,４−トリ−Ｏ−ベンジル−α−Ｌ−フコピラノシル）−Ｄ−トレイトール（４ａ）の合成トリエチルアミン（３.８ml、２７.４４mmol）と１,２−ジブロモテトラクロロエタン（４.４７g、１３.７２mmol）を、０℃で、ジクロロメタン（２５０ml）中の３ａ（７.７ｇ、６.８６mmol）とトリフェニルホスフィン（３.６ｇ、１３.７２mmol）の溶液に加えた。９０分後、その混合物を濃縮し、残留物をクロマトグラフィー（ヘキサン／酢酸エチル３：１）で精製した。４ａの収率：５.８ｇ（６８％）。ｅ） １,４−ビス（５−マロニル−１−ペンチルオキシ）−２,３−ビス（２,３,４−トリ−Ｏ−ベンジル−α−Ｌ−フコピラノシル）−Ｄ−トレイトール（５ａ）の合成４ａ（５.８ｇ、４.６４mmol）、ジメチルマロネート（２４３ml）、炭酸カリウム（１２.４９ｇ）及びジベンゾ−１８−クラウン−６（３.３５ｇ）の混合物を、１００℃で３時間攪拌した。冷却した後、更なる処理のために、その混合物をジクロロメタン（２.５リットル）で希釈し、吸引しながらケイソウ土を通し濾過した。次いで、水層のpHが中性になるまで、有機層を水（１１０ml）とドライアイスで交互に処理した。硫酸ナトリウムで乾燥し、続いて濾過及び濃縮し、次いで残留物をクロマトグラフィー（ヘキサン／酢酸エチル４：１→３：１→２：１）に付し、５ａ（５.６ｇ、９４％）を得た。
1H-NMR(300 MHz, CDCl3)：δ＝1.10(d，6H, 2 CH3fuc), 1.26(m, 12H, 6 CH2), 1.47(m, 4H), 1.83(m, 4H), 3.70(2 s, 12H, 4 COOCH3), 5.29(d, 2H, 2 1-Hfuc)
【００５３】ｆ） １,４−ビス（５−マロニル−１−ペンチルオキシ）−２,３−ビス（α−Ｌ−フコピラノシル）−Ｄ−トレイトール（６ａ）の合成メタノール／ジオキサン（１０：１、３３０ml）中の５ａ（２.８ｇ、２.１９mmol）とパラジウムカーボン（１０％、２.８ｇ）の混合物を、標準圧下で２４時間、水素雰囲気中、水素添加した。パラジウムカーボンを濾取し、残っている混合物を濃縮し、１Ｍ水酸化ナトリウム溶液（１００ml）で処理した。２時間後、その混合物をアンバーライトＩＲ−１２０で中和し、水／メタノール（９：１→１：９）を用いたＲＰシリカゲル（Ｃ１８ Bakerbond ６０オングストローム）を通して精製した。６ａ（１.１１ｇ、６７％）を得た。
1H-NMR(300 MHz, CDCl3)：δ＝1.17(d, 6H, 2 CH3fuc), 1.26(m, 4H, 2 CH2),1.52(m, 4H, 2 CH2), 1.66(m, 4H, 2 CH2), 4.20(q, 2H, 2 5-Hfuc), 5.07(d,2H, 2 1-Hfuc)
【００５４】実施例２ａ） １−（５−マロニル−１−ペンチルオキシ）−２,３,４−トリス（α−Ｌ−フコピラノシル）−Ｄ−トレイトール（２ｂ）の合成化合物２ｂは、１ａの代わりに１ｂを用いること以外は、６ａと同様な方法により合成した。
1H-NMR(300 MHz, D2O)：δ＝1.18(3 d, 9H, 3 CH3fuc), 1.26(m, 2H, CH2), 1.53(m, 2H, CH2), 1.67(m, 2H, CH2), 4.84, 5.06, 5.16(3 d, 3H, 3 1-Hfuc)
【００５５】実施例３ａ） ビス（４−マロニル−１−ブチルオキシ）−ビス（α／β−Ｌ−フコピラノシル）−ペンタエリトリトール（１ｃ）の合成化合物１ｃは、２,３−Ｏ−イソプロピリデン−Ｄ−トレイトールの代わりにＯ−イソプロピリデン−ペンタエリトリトールを用いること以外は、６ａと同様な方法により合成した。
1H-NMR(300 MHz, D2O)：δ＝1.10, 1.12(2 d, 6H, 2 CH3fuc), 4.17, 4.19, 4.70(3 d, 2H, 2 1-Hfuc)
【００５６】実施例４ａ） １,２−ビス（α−Ｌ−フコピラノシル）−３−（５−マロニル−１−ペンチルオキシ）−Ｄ−グリセロール（１ｄ）の合成化合物１ｄは、２,３−Ｏ−イソプロピリデン−Ｄ−トレイトールの代わりにＤ−α／β−イソプロピリデン−グリセロールを用いること以外は、６ａと同様な方法により合成した。
1H-NMR(300 MHz, D2O)：δ＝1.10(2 d, 6H, 2 CH3fuc), 4.75, 4.96(2 d, 2H,2 1-Hfuc)
【００５７】実施例５ａ） １,２,５,６−テトラキス（α−Ｌ−フコピラノシル）−３,４−ビス（５−マロニル−１−ペンチルオキシ）−Ｄ−マンニトール（１ｅ）の合成化合物１ｅは、２,３−Ｏ−イソプロピリデン−Ｄ−トレイトールの代わりに１,２：５,６−ジ−Ｏ−イソプロピリデン−Ｄ−マンニトールを用いること以外は、６ａと同様な方法により合成した。
1H-NMR(300 MHz, D2O)：δ＝1.10(d, 12H, 4 CH3fuc), 4.26, 4.79, 5.07(3 d, 2H, 2 1-Hfuc)
【特許請求の範囲】
【請求項１】 式Ｉ
【化１】
（式中、Ｒ5及びＲ6は、互いに独立に、Ｈ、ＯＨ、ＣＯＯＨ、ＮＨ2、ＮＨＡｃ、Ｏ(ＣＨ2)cＸ1、(ＣＨ2)cＸ1、ＣＨ2Ｏ(ＣＨ2)cＸ1又はＺであり、Ａ、Ｂ、Ｄ、Ｅ及びＧは、互いに独立に、Ｏ、Ｓ、−ＮＨ、−ＨＮ−Ｃ(Ｏ)−、−(Ｏ)Ｃ−ＮＨ−、−Ｏ−Ｃ(Ｏ)−、−(Ｏ)Ｃ−Ｏ−、ＮＨ−Ｃ(Ｏ)−Ｏ、Ｏ−Ｃ(Ｏ)−ＮＨ、ＮＨ−Ｃ(Ｏ)−ＮＨ、Ｓ−Ｃ(Ｏ)−、(Ｓ)Ｃ−Ｏ、Ｏ−Ｃ(Ｓ)−Ｓ、Ｓ−Ｃ(Ｓ)−Ｏ、ＮＨ−Ｃ(Ｓ)−Ｓ、Ｓ−Ｃ(Ｓ)−ＮＨ、−ＣＨ2−、−Ｏ−ＣＨ2−、ＣＨ2−Ｏ−、ＣＨ2−ＮＨ−又はＮＨ−ＣＨ2であり、Ｖ1及びＶ2は、互いに独立に、炭素原子又は窒素原子であり、窒素原子の場合にはＲ5及びＲ6はなく、Ｑ及びＹは、互いに独立に、−(ＣＸ2,Ｘ3)b−、−(ＣＸ2,Ｒ7)b−、−(ＣＲ7,Ｒ8)b−、−ＣＨ2−(ＣＸ2,Ｘ3)b−又は飽和若しくは不飽和の、５員若しくは６員の炭素環若しくは複素環、又は−(ＣＸ2,Ｘ3)b−、−(ＣＸ2,Ｒ7)b−、若しくは−(ＣＲ7,Ｒ8)b−及び炭素環若しくは複素環との組合せであり、このときＲ7及びＲ8は、互いに独立に、Ｈ、ＯＨ、ＣＯＯＨ、ＮＨ2、ＮＨ−Ｃ(Ｏ)−ＣＨ3、−Ｏ(ＣＨ2)dＸ1又はＣＨ2Ｏ(ＣＨ2)dＸ1であり、そしてＸ1、Ｘ2及びＸ3は、互いに独立に、Ｈ、ＮＨ2、ＣＯＯＨ、ＯＨ、ＣＨ2ＯＨ、ＣＨ2ＮＨ2、Ｃ1〜Ｃ20−アルキル又はC6〜Ｃ10−アリールであり、Ｋ及びＬは、互いに独立に、Ｈ−Ｃ−ＧＺ又はＣＨ2であり、Ｒ1、Ｒ2、Ｒ3及びＲ4は、互いに独立に、Ｈ、ＯＨ又はＧ−Ｚであり、Ｚは、ピラノシド、Ｃ6位で連結されるピラノシル残基、Ｃ6位で連結されるアルキルピラノシド、フラノシド、Ｃ5位で連結されるアルキルフラノシド又はポリアルコールで、それらの一又はそれ以上のヒドロキシル基は、互いに独立に、任意の位置でＧに連結されるＲ7又はＲ8によって置換されていてもよくそしてａ、ｂ、ｃ、ｄ、ｌ、ｍ、ｎ、ｐ、ｑ、ｔ、ｖ、ｗ、ｘ及びｙの指数は、互いに独立に、０から２０までの整数であり、そして又ｒ及びｚは、互いに独立に、０又は１であり、そしてｒが０であるときｑ及びｔは０であり、Ｒ2及びＲ3はない）の化合物。
【請求項２】 ａが１であり、Ｒ5がＨであり、Ｖ1がＣであり、Ａ及びＹがＣＨ2であり、ＢがＯ−ＣＨ2であり、ＤがＣＨ2−Ｏであり、ｒ、ｐ及びｗが０であり、そしてＲ1及びＲ4がＧ−Ｚである請求項１に記載の化合物。
【請求項３】 Ｚが１であり、Ｑ及びＥがＣＨ2であり、Ｖ2がＣであり、そしてＲ6がＨである請求項１又は２に記載の化合物。
【請求項４】 ｌ、ｍ、ｙ及びｘが０であり、ＧがＯであり、そしてＺがピラノシドである請求項１から３のいずれかに記載の化合物。
【請求項５】 ＺがＬ−フコシドである請求項１から４のいずれかに記載の化合物。
【請求項６】 Ｚが０であり、そしてＲ6がＺである請求項１又は２に記載の化合物。
【請求項７】 ｌ及びｍが０であり、ＧがＯであり、そしてＺがピラノシドである請求項１、２又は６のいずれかに記載の化合物。
【請求項８】 ＺがＬ−フコシドである請求項１、２、６又は７のいずれかに記載の化合物。
【請求項９】 ａがｌであり、Ｒ1、Ｒ4及びＲ5がＨであり、Ｖ1がＣであり、Ａ及びＹがＣＨ2であり、Ｂ及びＤがＯであり、ｐ及びｗが０であり、ｒが１であり、ＫがＣＨ2であり、そしてＲ2及びＲ3がＧＺである請求項１に記載の化合物。
【請求項１０】 ｚが１であり、Ｑ及びＥがＣＨ2であり、Ｖ2がＣであり、及びＲ6がＨである請求項１又は９に記載の化合物。
【請求項１１】 ｌ、ｍ、ｘ及びｙが０であり、ｑ及びｔが１であり、ＧがＯであり、及びＺがピラノシドである請求項１、９又は１０のいずれかに記載の化合物。
【請求項１２】 ＺがＬ−フコシドである請求項１又は９乃至１１のいずれかに記載の化合物。
【請求項１３】 ａが１であり、Ｒ5がＨであり、Ｖ1がＣであり、Ａ及びＹがＣＨ2であり、Ｂ及びＤがＯであり、そしてｒが０である請求項１に記載の化合物。
【請求項１４】 ｚが１であり、Ｒ6がＨであり、Ｑ及びＥがＣＨ2であり、そしてＶ2がＣである請求項１又は１３に記載の化合物。
【請求項１５】 ｌ、ｍ、ｙ及びｘが０であり、ｐ及びｗが２であり、ＬがＨ−Ｃ−ＧＺであり、Ｒ1及びＲ4がＨであり、ＧがＯであり、そしてＺがピラノシドである請求項１、１３又は１４のいずれかに記載の化合物。
【請求項１６】 ＺがＬ−フコシドである請求項１３乃至１５のいずれかに記載の化合物。
【請求項１７】 ａ、ｐ、ｒ、ｗ及びｚが０であり、Ｒ5及びＲ6がＨであり、Ｖ1がＣであり、Ａ及びＹがＣＨ2であり、ＢがＯ−ＣＨ2であり、そしてＲ1及びＲ4がＧ−Ｚである請求項１に記載の化合物。
【請求項１８】 ｌ及びｍが０であり、ＧがＯであり、そしてＺがピラノシドである請求項１又は１７に記載の化合物。
【請求項１９】 ピラノシドがＬ−フコシドである請求項１、１７又は１８のいずれかに記載の化合物。
【請求項２０】 式II
【化２】
の受容体の一つの官能基Ｌ1又は二つの官能基Ｌ1及びＬ2（この式IIの受容体の残りの官能基及び官能基Ｌn（それぞれ、ｎ＝２〜６又は３〜６）は、必要ならば保護されている）を、供与体IIIＬ8−Ａ−(Ｙ)n−Ｂ−Ｌ7 III（この式IIIの供与体は活性化された官能基Ｌ7を有する）によって、そしてＬ2がまた保護されていないならば供与体IVＬ7−(Ｄ)a−(Ｑ)r−Ｅ−Ｌ8 IV（この式IVの供与体は活性化された官能基Ｌ7を有し、残りの官能基及び官能基Ｌ8は、必要ならば保護基を有する）によって、同時ににまたは連続して、アルキル化、アシル化またはグリコシル化して、最初に中間体Ｖ
【化３】
を製造し、ここで上記の供与体III及びIVは、異なっていても又は同一でもよいものとし、その後で、中間体Ｖの原子Ｋ及びＬ上の官能基、並びに適当である場合には、官能基Ｌ3乃至Ｌ6及びＬ8の保護基を選択的に脱離し、この選択的に脱保護された中間体Ｖを、一又はそれ以上のグリコシル又はポリオール供与体VIＬ9−Ｚ VI（式中、Ｌ9は活性化された官能基であり、この供与体VIの残りの官能基は必要ならば保護されているものとする）と反応させ、そして官能基Ｌ8の選択的脱保護の後に、アルキル供与体VII
【化４】
および適当である場合に、アルキル供与体VIII
【化５】
（式中、Ｌ10はカルボキシル保護基であり、そしてＬ11は、適当である場合には、Ｖ1又はＶ2と組み合わせて、アルキル化基であるものとする）でアルキル化し、そして全ての保護基を脱離することにより、請求項１乃至１６のいずれかに記載された式Ｉの化合物に最終的に変換することからなる、請求項１乃至１９のいずれかに記載された式Ｉの化合物を製造する方法。但し、定義されていない全ての変数は請求項１に記載された意味を有するものとする。
【請求項２１】 受容体IIを、まず第一に、式IVの一又はそれ以上のグリコシル又はポリオール供与体と反応させ、次いで供与体IIIと、適当である場合には供与体IVと反応させることことからなる請求項２０に記載された方法。
【請求項２２】 請求項１乃至１９のいずれかに記載された式Ｉの化合物を少なくとも一つ、又はその薬学的に許容される塩からなる医薬。
【請求項２３】 疾病により影響される組織で過剰なセレクチン受容体に媒介された細胞接着に関連した疾病の治療又は予防のための医薬を製造するための請求項１乃至１９のいずれかに記載された式Ｉの化合物の使用。
【請求項２４】 疾病が自己免疫疾患である請求項２３に記載された使用。
【請求項２５】 疾病が心臓血管の疾患である請求項２３に記載された使用。
【請求項２６】 疾病により影響される組織で過剰なセレクチン受容体に媒介された細胞接着に関連した疾病の診断のための組成物を製造するための請求項１乃至１９のいずれかに記載された式Ｉの化合物の使用。
【請求項１】 式Ｉ
【化１】
（式中、Ｒ5及びＲ6は、互いに独立に、Ｈ、ＯＨ、ＣＯＯＨ、ＮＨ2、ＮＨＡｃ、Ｏ(ＣＨ2)cＸ1、(ＣＨ2)cＸ1、ＣＨ2Ｏ(ＣＨ2)cＸ1又はＺであり、Ａ、Ｂ、Ｄ、Ｅ及びＧは、互いに独立に、Ｏ、Ｓ、−ＮＨ、−ＨＮ−Ｃ(Ｏ)−、−(Ｏ)Ｃ−ＮＨ−、−Ｏ−Ｃ(Ｏ)−、−(Ｏ)Ｃ−Ｏ−、ＮＨ−Ｃ(Ｏ)−Ｏ、Ｏ−Ｃ(Ｏ)−ＮＨ、ＮＨ−Ｃ(Ｏ)−ＮＨ、Ｓ−Ｃ(Ｏ)−、(Ｓ)Ｃ−Ｏ、Ｏ−Ｃ(Ｓ)−Ｓ、Ｓ−Ｃ(Ｓ)−Ｏ、ＮＨ−Ｃ(Ｓ)−Ｓ、Ｓ−Ｃ(Ｓ)−ＮＨ、−ＣＨ2−、−Ｏ−ＣＨ2−、ＣＨ2−Ｏ−、ＣＨ2−ＮＨ−又はＮＨ−ＣＨ2であり、Ｖ1及びＶ2は、互いに独立に、炭素原子又は窒素原子であり、窒素原子の場合にはＲ5及びＲ6はなく、Ｑ及びＹは、互いに独立に、−(ＣＸ2,Ｘ3)b−、−(ＣＸ2,Ｒ7)b−、−(ＣＲ7,Ｒ8)b−、−ＣＨ2−(ＣＸ2,Ｘ3)b−又は飽和若しくは不飽和の、５員若しくは６員の炭素環若しくは複素環、又は−(ＣＸ2,Ｘ3)b−、−(ＣＸ2,Ｒ7)b−、若しくは−(ＣＲ7,Ｒ8)b−及び炭素環若しくは複素環との組合せであり、このときＲ7及びＲ8は、互いに独立に、Ｈ、ＯＨ、ＣＯＯＨ、ＮＨ2、ＮＨ−Ｃ(Ｏ)−ＣＨ3、−Ｏ(ＣＨ2)dＸ1又はＣＨ2Ｏ(ＣＨ2)dＸ1であり、そしてＸ1、Ｘ2及びＸ3は、互いに独立に、Ｈ、ＮＨ2、ＣＯＯＨ、ＯＨ、ＣＨ2ＯＨ、ＣＨ2ＮＨ2、Ｃ1〜Ｃ20−アルキル又はC6〜Ｃ10−アリールであり、Ｋ及びＬは、互いに独立に、Ｈ−Ｃ−ＧＺ又はＣＨ2であり、Ｒ1、Ｒ2、Ｒ3及びＲ4は、互いに独立に、Ｈ、ＯＨ又はＧ−Ｚであり、Ｚは、ピラノシド、Ｃ6位で連結されるピラノシル残基、Ｃ6位で連結されるアルキルピラノシド、フラノシド、Ｃ5位で連結されるアルキルフラノシド又はポリアルコールで、それらの一又はそれ以上のヒドロキシル基は、互いに独立に、任意の位置でＧに連結されるＲ7又はＲ8によって置換されていてもよくそしてａ、ｂ、ｃ、ｄ、ｌ、ｍ、ｎ、ｐ、ｑ、ｔ、ｖ、ｗ、ｘ及びｙの指数は、互いに独立に、０から２０までの整数であり、そして又ｒ及びｚは、互いに独立に、０又は１であり、そしてｒが０であるときｑ及びｔは０であり、Ｒ2及びＲ3はない）の化合物。
【請求項２】 ａが１であり、Ｒ5がＨであり、Ｖ1がＣであり、Ａ及びＹがＣＨ2であり、ＢがＯ−ＣＨ2であり、ＤがＣＨ2−Ｏであり、ｒ、ｐ及びｗが０であり、そしてＲ1及びＲ4がＧ−Ｚである請求項１に記載の化合物。
【請求項３】 Ｚが１であり、Ｑ及びＥがＣＨ2であり、Ｖ2がＣであり、そしてＲ6がＨである請求項１又は２に記載の化合物。
【請求項４】 ｌ、ｍ、ｙ及びｘが０であり、ＧがＯであり、そしてＺがピラノシドである請求項１から３のいずれかに記載の化合物。
【請求項５】 ＺがＬ−フコシドである請求項１から４のいずれかに記載の化合物。
【請求項６】 Ｚが０であり、そしてＲ6がＺである請求項１又は２に記載の化合物。
【請求項７】 ｌ及びｍが０であり、ＧがＯであり、そしてＺがピラノシドである請求項１、２又は６のいずれかに記載の化合物。
【請求項８】 ＺがＬ−フコシドである請求項１、２、６又は７のいずれかに記載の化合物。
【請求項９】 ａがｌであり、Ｒ1、Ｒ4及びＲ5がＨであり、Ｖ1がＣであり、Ａ及びＹがＣＨ2であり、Ｂ及びＤがＯであり、ｐ及びｗが０であり、ｒが１であり、ＫがＣＨ2であり、そしてＲ2及びＲ3がＧＺである請求項１に記載の化合物。
【請求項１０】 ｚが１であり、Ｑ及びＥがＣＨ2であり、Ｖ2がＣであり、及びＲ6がＨである請求項１又は９に記載の化合物。
【請求項１１】 ｌ、ｍ、ｘ及びｙが０であり、ｑ及びｔが１であり、ＧがＯであり、及びＺがピラノシドである請求項１、９又は１０のいずれかに記載の化合物。
【請求項１２】 ＺがＬ−フコシドである請求項１又は９乃至１１のいずれかに記載の化合物。
【請求項１３】 ａが１であり、Ｒ5がＨであり、Ｖ1がＣであり、Ａ及びＹがＣＨ2であり、Ｂ及びＤがＯであり、そしてｒが０である請求項１に記載の化合物。
【請求項１４】 ｚが１であり、Ｒ6がＨであり、Ｑ及びＥがＣＨ2であり、そしてＶ2がＣである請求項１又は１３に記載の化合物。
【請求項１５】 ｌ、ｍ、ｙ及びｘが０であり、ｐ及びｗが２であり、ＬがＨ−Ｃ−ＧＺであり、Ｒ1及びＲ4がＨであり、ＧがＯであり、そしてＺがピラノシドである請求項１、１３又は１４のいずれかに記載の化合物。
【請求項１６】 ＺがＬ−フコシドである請求項１３乃至１５のいずれかに記載の化合物。
【請求項１７】 ａ、ｐ、ｒ、ｗ及びｚが０であり、Ｒ5及びＲ6がＨであり、Ｖ1がＣであり、Ａ及びＹがＣＨ2であり、ＢがＯ−ＣＨ2であり、そしてＲ1及びＲ4がＧ−Ｚである請求項１に記載の化合物。
【請求項１８】 ｌ及びｍが０であり、ＧがＯであり、そしてＺがピラノシドである請求項１又は１７に記載の化合物。
【請求項１９】 ピラノシドがＬ−フコシドである請求項１、１７又は１８のいずれかに記載の化合物。
【請求項２０】 式II
【化２】
の受容体の一つの官能基Ｌ1又は二つの官能基Ｌ1及びＬ2（この式IIの受容体の残りの官能基及び官能基Ｌn（それぞれ、ｎ＝２〜６又は３〜６）は、必要ならば保護されている）を、供与体IIIＬ8−Ａ−(Ｙ)n−Ｂ−Ｌ7 III（この式IIIの供与体は活性化された官能基Ｌ7を有する）によって、そしてＬ2がまた保護されていないならば供与体IVＬ7−(Ｄ)a−(Ｑ)r−Ｅ−Ｌ8 IV（この式IVの供与体は活性化された官能基Ｌ7を有し、残りの官能基及び官能基Ｌ8は、必要ならば保護基を有する）によって、同時ににまたは連続して、アルキル化、アシル化またはグリコシル化して、最初に中間体Ｖ
【化３】
を製造し、ここで上記の供与体III及びIVは、異なっていても又は同一でもよいものとし、その後で、中間体Ｖの原子Ｋ及びＬ上の官能基、並びに適当である場合には、官能基Ｌ3乃至Ｌ6及びＬ8の保護基を選択的に脱離し、この選択的に脱保護された中間体Ｖを、一又はそれ以上のグリコシル又はポリオール供与体VIＬ9−Ｚ VI（式中、Ｌ9は活性化された官能基であり、この供与体VIの残りの官能基は必要ならば保護されているものとする）と反応させ、そして官能基Ｌ8の選択的脱保護の後に、アルキル供与体VII
【化４】
および適当である場合に、アルキル供与体VIII
【化５】
（式中、Ｌ10はカルボキシル保護基であり、そしてＬ11は、適当である場合には、Ｖ1又はＶ2と組み合わせて、アルキル化基であるものとする）でアルキル化し、そして全ての保護基を脱離することにより、請求項１乃至１６のいずれかに記載された式Ｉの化合物に最終的に変換することからなる、請求項１乃至１９のいずれかに記載された式Ｉの化合物を製造する方法。但し、定義されていない全ての変数は請求項１に記載された意味を有するものとする。
【請求項２１】 受容体IIを、まず第一に、式IVの一又はそれ以上のグリコシル又はポリオール供与体と反応させ、次いで供与体IIIと、適当である場合には供与体IVと反応させることことからなる請求項２０に記載された方法。
【請求項２２】 請求項１乃至１９のいずれかに記載された式Ｉの化合物を少なくとも一つ、又はその薬学的に許容される塩からなる医薬。
【請求項２３】 疾病により影響される組織で過剰なセレクチン受容体に媒介された細胞接着に関連した疾病の治療又は予防のための医薬を製造するための請求項１乃至１９のいずれかに記載された式Ｉの化合物の使用。
【請求項２４】 疾病が自己免疫疾患である請求項２３に記載された使用。
【請求項２５】 疾病が心臓血管の疾患である請求項２３に記載された使用。
【請求項２６】 疾病により影響される組織で過剰なセレクチン受容体に媒介された細胞接着に関連した疾病の診断のための組成物を製造するための請求項１乃至１９のいずれかに記載された式Ｉの化合物の使用。
【公開番号】特開平９−２４９６８５
【公開日】平成９年（１９９７）９月２２日
【国際特許分類】
【出願番号】特願平９−９９９８
【出願日】平成９年（１９９７）１月２３日
【出願人】（５９００００１４５）ヘキスト・アクチェンゲゼルシャフト (15)
【公開日】平成９年（１９９７）９月２２日
【国際特許分類】
【出願日】平成９年（１９９７）１月２３日
【出願人】（５９００００１４５）ヘキスト・アクチェンゲゼルシャフト (15)
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