放射性標識薬剤
【課題】標的に効率的に集積し、かつ、生体内での高い安定性を有する放射性標識薬剤、および該放射性標識薬剤を使用する診断および治療の提供。
【解決手段】標的分子と結合する化合物と結合させた配位子であって金属（例えばテクネチウムやレニウム）と多配位の錯体を形成する配位子と該金属の放射性核種とから形成される錯体を含み、標的部位への集積性が増加した放射性標識薬剤；診断用または治療用の該放射性標識薬剤；前記放射性標識薬剤の調製用配位子；前記配位子を含む薬剤と金属放射性核種を含む薬剤とを、別々の包装単位として含んでなるキット；および、前記放射性標識薬剤を使用することを特徴とする、放射性標識薬剤の標的部位への集積を増加させる方法。
【解決手段】標的分子と結合する化合物と結合させた配位子であって金属（例えばテクネチウムやレニウム）と多配位の錯体を形成する配位子と該金属の放射性核種とから形成される錯体を含み、標的部位への集積性が増加した放射性標識薬剤；診断用または治療用の該放射性標識薬剤；前記放射性標識薬剤の調製用配位子；前記配位子を含む薬剤と金属放射性核種を含む薬剤とを、別々の包装単位として含んでなるキット；および、前記放射性標識薬剤を使用することを特徴とする、放射性標識薬剤の標的部位への集積を増加させる方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、標的部位への集積性が高い放射性標識薬剤に関する。詳しくは、標的分子と結合する化合物と結合させた配位子であって金属と多配位の錯体を形成する配位子と該金属の放射性核種とから形成される錯体を含み、標的部位への集積性が増加した放射性標識薬剤に関する。より詳しくは、標的分子と結合する化合物と結合させた配位子であってテクネチウム（Ｔｃ）またはレニウム（Ｒｅ）と多配位の錯体を形成する配位子と、９９ｍテクネチウム、１８６レニウム、および１８８レニウムからなる群から選ばれるいずれか１の金属放射性核種とから形成される錯体を含む診断用または治療用放射性標識薬剤に関する。また本発明は、前記放射性標識薬剤の調製用配位子に関する。さらに本発明は、前記配位子を含む薬剤と金属放射性核種を含む薬剤とを、別々の包装単位として含んでなるキットに関する。また本発明は、前記放射性標識薬剤を使用することを特徴とする、放射性標識薬剤の標的部位への集積を増加させる方法に関する。
【背景技術】
【０００２】
放射性標識薬剤は、放射性同位元素の核種により標識された化合物を含む薬剤であり、疾患の診断や治療、例えば腫瘍の診断や治療などに広く利用されている。放射性標識薬剤を特定の組織や細胞に集積させることにより、感度の高い診断や有効な治療を行うことができ、また、正常の組織や細胞への副作用を低減することができる。例えば、腫瘍細胞が臓器や組織に転移し、散在しているような場合でも、正常の組織や細胞に影響を与えることなく、有効な診断や治療が行える。放射性標識薬剤を用いた診断や治療においては、有用な核種の選択や、該薬剤を特定の組織や細胞に集積させるための薬剤設計が行われてきた。
【０００３】
テクネチウム−９９ｍ （９９ｍＴｃ）は画像診断に適した半減期（６時間）を有し、放射線の体外計測に適したエネルギー（１４０ＫｅＶ）のγ線のみを放射する。また、モリブデン−９９（９９Ｍｏ）との放射平衡を利用したジェネレータシステム（９９Ｍｏ／９９ｍＴｃジェネレータ）で容易に入手できることから、現在、核医学画像診断に最も汎用されている放射性核種（ＲＩ）である。
【０００４】
９９ｍＴｃ製剤は、主として抗腫瘍抗体や低分子ペプチドなどの標的分子認識素子に９９ｍＴｃと安定な錯体を形成する配位子を結合した化合物（配位子誘導体と称する）と９９ｍＴｃとの錯形成反応により合成される。このような９９ｍＴｃ製剤として、例えば、４座配位子のＮ２Ｓ２と５価のＴｃとが１：１のモル比で錯体を形成したものが知られている。
【０００５】
９９ｍＴｃ製剤は、短時間のうちに極微量の９９ｍＴｃ製剤を高い放射化学的収率で作製するため、反応溶液中には、９９ｍＴｃに比べ大過剰の配位子誘導体が存在する。その結果、９９ｍＴｃ標識溶液中には、標的分子認識素子を有する極微量の９９ｍＴｃ標識薬剤の他に大過剰の配位子誘導体が存在し、標的分子との結合を９９ｍＴｃ標識薬剤と競合するため、９９ｍＴｃ標識薬剤の標的への集積を大きく損なう。
【０００６】
しかし、錯体未形成の配位子誘導体の除去を投与前に無菌的に行うのは容易ではなく、簡便な操作が可能な９９ｍＴｃの特性を損うこととなる。低濃度においても高い収率で９９ｍＴｃ錯体を与える配位子の検討も進められているが、９９ｍＴｃが極低濃度であることからその達成は困難とされている。
【０００７】
テクネチウムは適切な単座、２座あるいは３座配位子と生体内で安定な６配位、３配位、２配位の錯体を形成する（非特許文献１および２）。実際に、テクネチウムと１：２、１：３および１：６のモル比で錯体を形成する配位子も報告されている（非特許文献１、２および４）。しかし、認識素子を導入した場合でもこれらの配位子がＴｃと生体内で安定な錯体を生成するかは明らかでない。
【０００８】
レニウムは、テクネチウムと同じ第７族の遷移元素であり、テクネチウムと類似した化学的性質を有する。レニウムには、放射性同位体である１８６レニウム（１８６Ｒｅ）および１８８レニウム（１８８Ｒｅ）の存在が知られている。１８６Ｒｅおよび１８８Ｒｅはいずれも高エネルギーのβ線を放射し、その半減期はそれぞれ９０．６時間および１６．９時間である。高エネルギーのβ線は細胞殺傷性を示すため、１８６Ｒｅ標識薬剤はがん疾患の治療薬として研究されてきた。例えば、１８６Ｒｅ標識ヒドロキシエチリデン ジホスホン酸（１８６Ｒｅ−ＨＥＤＰ）の転移性骨腫瘍疼痛緩和作用が報告されている。しかし、１８６Ｒｅ−ＨＥＤＰは生体内での安定性が低いため、血液クリアランスの遅延と胃への高い集積という問題を有する。
【０００９】
このように、疾患の診断や治療の分野において、特定の組織や細胞への高い集積性を有し、かつ、生体内での高い安定性を有する放射性標識薬剤の開発が求められている。
【００１０】
【非特許文献１】Wust F, Carlson KE, Katzenellenbogen JA, Spies H, and Johannsen B. Synthesis and binding affinities of new 17 alpha-substituted estradiol-rhenium "n + 1" mixed-ligand and thioether-carbonyl complexes. Steroids 1998: 63: 665-71
【非特許文献２】Jurisson SS, and Lydon JD. Potential technetium small molecule radiopharmaceuticals. Chem Rev 1999: 99: 2205-18
【非特許文献３】Mulder A, Huskens J, and Reinhoudt DN. Multivalency in supramolecular chemistry and nanofabrication. Org Biomol Chem 2004: 2: 3409-24
【非特許文献４】Arano Y. Recent advances in 99mTc radiopharmaceuticals. J Nucl Radiochem Sci 2005: 6: 177-181
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【００１１】
本発明は、上記した従来技術の問題点を解消することを解決すべき課題とした。すなわち、本発明は、標的に効率的に集積し、かつ、生体内での高い安定性を有する放射性標識薬剤を提供し、さらに該放射性標識薬剤を使用する診断および治療の提供を目的とする。
【課題を解決するための手段】
【００１２】
本発明者は、標的分子への結合部位を１箇所有する認識素子（１価の認識素子）を持つ配位子であって金属と多配位の錯体を形成する配位子と該金属とにより形成される錯体は、配位子と同数の認識素子を有する多価錯体であるため、標的分子と強い結合力を獲得し、その結果、錯形成反応後、錯体未形成の配位子を含んだまま投与しても、末梢の標的分子への高い集積が達成されると考えた。そして、上記目的を達成すべく、鋭意研究を行った。配位子として、５価のテクネチウム（Ｔｃ）と配位子とが１：２の錯体（２配位の錯体）を形成するＤ−ペニシラミン（Ｄ−Ｐｅｎと略称することがある）、およびＤ−Ｐｅｎと配位基の配置が異なる１−アミノ−２−メチルプロパン−２−チオール−Ｎ−アセテート（以下、ＡＭＰＴと略称することがある）を用い、また、標的分子認識素子としてがんの新生血管に高発現が認められるインテグリンに親和性を有する環状ペンタペプチドｃ（ＲＧＤｆＫ）を用いて、ｃ（ＲＧＤｆＫ）が結合した配位子を合成し、該配位子と９９ｍＴｃとを反応させて標的分子認識素子を２箇所有する９９ｍＴｃ錯体（２価錯体）を調製した。そして、この９９ｍＴｃ錯体が、体内動態の検討結果から、生体内でも十分に安定であることを見出した。本９９ｍＴｃ錯体は、標的分子認識素子を２箇所有することから、標的分子認識素子を１箇所有する９９ｍＴｃ錯体と比較して、標的分子との結合力が強く、末梢の標的分子への集積量が高い。さらに本発明においては、上記９９ｍＴｃの代わりにレニウム（Ｒｅ）を使用しても、上記同様の錯体を形成し得ることを見出した。本発明はこれらの知見に基づいて達成したものである。
【００１３】
即ち、本発明は以下に関する。
（１）標的分子と結合する化合物と結合させた配位子であって金属と多配位の錯体を形成する配位子と該金属の放射性核種とから形成される錯体を含み、標的部位への集積性が増加した放射性標識薬剤。
（２）診断用または治療用放射性標識薬剤である前記放射性標識薬剤。
（３）標的分子と結合する化合物と結合させた配位子であって５価のテクネチウム（Ｔｃ）と２配位または３配位の錯体を形成するＤ−ペニシラミンまたは１−アミノ−２−メチルプロパン−２−チオール−Ｎ−アセテートと９９ｍＴｃとから形成される錯体を含み、標的部位への集積性が増加した診断用９９ｍＴｃ標識薬剤。
（４）標的分子と結合する化合物と結合させた配位子が環状ペンタペプチドｃ（ＲＧＤｆＫ）と結合させた配位子である前記診断用９９ｍＴｃ標識薬剤。
（５）標的分子と結合する化合物と結合させた配位子であって５価のレニウム（Ｒｅ）と２配位または３配位の錯体を形成するＤ−ペニシラミンまたは１−アミノ−２−メチルプロパン−２−チオール−Ｎ−アセテートと１８６Ｒｅまたは１８８Ｒｅとから形成される錯体を含み、標的部位への集積性が増加した治療用１８６Ｒｅまたは１８８Ｒｅ標識薬剤。
（６）標的分子と結合する化合物と結合させた配位子が環状ペンタペプチドｃ（ＲＧＤｆＫ）と結合させた配位子である前記治療用１８６Ｒｅまたは１８８Ｒｅ標識薬剤。
（７）標的分子と結合する化合物と結合させた配位子であって金属と多配位の錯体を形成する配位子であることを特徴とする、標的部位への集積性が増加した診断用または治療用放射性標識薬剤の調製用配位子。
（８）金属放射性核種が、９９ｍテクネチウム、１８６レニウム、および１８８レニウムからなる群から選ばれるいずれか１の金属放射性核種である前記の放射性標識薬剤の調製用配位子。
（９）金属と多配位の錯体を形成する配位子が、５価のテクネチウムまたはレニウムと２配位あるいは３配位の錯体を形成するＤ−ペニシラミンまたは１−アミノ−２−メチルプロパン−２−チオール−Ｎ−アセテートである前記の放射性標識薬剤の調製用配位子。
（１０）標的分子と結合する化合物と結合させた配位子が環状ペンタペプチドｃ（ＲＧＤｆＫ）と結合させた配位子である前記の放射性標識薬剤の調製用配位子。
（１１）前記いずれかの放射性標識薬剤の調製用配位子を含む薬剤と、該配位子と多配位の錯体を形成する金属放射性核種とを含む薬剤とを、別々の包装単位として含んでなるキット。
（１２）下式（Ｉ）：
【化１】
で示される化合物の製造方法であって、下式（ＩＩ）：
【化２】
で示される化合物を使用することを特徴とする製造方法。
（１３）標的分子と結合する化合物と結合させた配位子であって金属と多配位の錯体を形成する配位子と該金属の放射性核種とから形成される錯体を含む放射性標識薬剤を使用することを特徴とする、放射性標識薬剤の標的部位への集積を増加させる方法。
（１４）金属放射性核種が、９９ｍテクネチウム、１８６レニウム、および１８８レニウムからなる群から選ばれるいずれか１の金属放射性核種である前記方法。
（１５）金属と多配位の錯体を形成する配位子が、５価のテクネチウムまたはレニウムと２配位あるいは３配位の錯体を形成するＤ−ペニシラミンまたは１−アミノ−２−メチルプロパン−２−チオール−Ｎ−アセテートである前記方法。
（１６）標的分子と結合する化合物と結合させた配位子が環状ペンタペプチドｃ（ＲＧＤｆＫ）と結合させた配位子である前記方法。
【発明の効果】
【００１４】
本発明によれば、標的部位に効率的に集積し、かつ、生体内において十分に安定な放射性標識薬剤を提供できる。本発明に係る放射性標識薬剤は、標的分子への結合部位を１箇所有する標的分子認識素子（１価の標的分子認識素子）を持つ配位子であって金属と多配位の錯体を形成する配位子と該金属の放射性核種とにより形成される錯体を含み、この錯体は錯体を形成する配位子と同数の標的分子認識素子を有する多価錯体であるため、従来使用されていた１価の錯体と比較して、標的に高い集積性を示す。そのため、本発明に係る放射性標識薬剤を使用することにより、標的部位への放射性標識薬剤の集積を従来のものと比較して増加させることができ、その結果、錯体未形成の配位子を含んでいても、放射性標識薬剤を用いた画像診断や、がん疾患などの内部放射線治療において高い感度および効果を提供できる。具体的には例えば、標的部位に効率的に集積し、かつ、生体内において十分に安定な、９９ｍＴｃ標識薬剤、１８６Ｒｅ標識薬剤および１８８Ｒｅ標識薬剤を提供できる。本発明に係る９９ｍＴｃ標識薬剤は、放射性標識薬剤を用いた画像診断用の診断剤として有用であり、また、１８６Ｒｅ標識薬剤および１８８Ｒｅ標識薬剤はがんの内部放射線治療に有用である。
【発明を実施するための最良の形態】
【００１５】
本発明は、標的分子認識素子と結合させた配位子であって金属と多配位の錯体を形成する配位子と該金属の放射性核種とから形成される錯体を含み、標的部位への集積性が増加した放射性標識薬剤に関する。
【００１６】
用語「錯体」とは、金属および金属類似元素の原子またはイオンを中心にして、配位子が配位した物質を意味する。配位とは、配位子が中心の金属と配位結合を形成して中心金属の周囲に配列することをいう。錯体は、配位子と金属との配位結合により形成される。配位結合とは、１本の結合にあずかる２個の原子価電子が、一方の原子のみから提供されている結合をいう。多配位とは、複数の配位子が中心の金属と配位結合を形成して中心金属の周囲に配列することをいう。ｎ配位とは、ｎ分子の配位子が中心の金属と配位結合を形成して中心金属の周囲に配列することをいう（金属が遷移金属である場合、ｎは一般的に２から９である）。錯体において、中心金属の周囲に集まって配位結合をつくる配位子の数を配位数という。
【００１７】
用語「配位子」とは、錯体中で中心金属に配位結合している他の原子（配位原子）を含む化合物を意味する。配位子には多数の種類があり、２つ以上の可能な配位原子を含む化合物を多座配位子、１つである場合を単座配位子、２つである場合を２座配位子、３つである場合を３座配位子のように称する。
【００１８】
用語「標的分子認識素子」とは、標的分子に結合する化合物、好ましくは特異的に結合する化合物を意味する。標的分子に特異的に結合するとは、標的分子には結合するが、標的分子以外の分子には結合しないか、弱く結合することをいう。標的分子認識素子として、例えば、タンパク質、ペプチド、抗体、および抗体断片などを挙げることができる。標的分子認識素子を配位子と結合させて金属と錯体を形成させることにより、該錯体を標的分子、すなわち標的部位に結合させることができる。したがって、標的分子認識素子を選択して用いることにより、所望の標的部位に錯体を集積させることができる。
【００１９】
本発明において、錯体を形成する金属は、遷移金属に属する金属であり、配位子と２配位以上の配位結合を形成する金属が使用される。金属原子の電荷は特に限定されず、例えば、１価、３価、または５価の電荷をもつ金属原子を挙げることができる。金属として、好ましくは金属放射性核種が使用される。金属放射性核種として具体的には、９９ｍＴｃ、１８６Ｒｅ、および１８８Ｒｅを好ましく例示できる。金属放射性核種はこれら具体例に限定されず、放射標識薬剤を用いた診断や、がん疾患などの内部放射線治療などの目的に適当な放射線、放射線量、半減期を有する限りにおいていずれも使用することができる。診断および治療において正常の組織や細胞への影響を少なくするという観点から、短半減期金属放射性核種が好ましく使用される。
【００２０】
本発明において、錯体を形成する配位子は、遷移金属に属する金属と配位結合により多配位の錯体を形成し得る化合物が使用される。例えば、９９ｍＴｃと配位結合により多配位の錯体を形成し得る化合物として、５価のＴｃと１：２の錯体を形成するＤ−ペニシラミン（Ｄ−Ｐｅｎと略称することがある）、１−アミノ−２−メチルプロパン−２−チオール−Ｎ−アセテート（以下、ＡＭＰＴと略称することがある）、ヒドロキサムアミド（これらは２価錯体を形成する）、３価のＴｃと１：３の錯体を形成するチウオウレア、ジメチルフォスフィノエタン、Ｏ−フェニレンビス（ジメチルアルシン）（これらは３価錯体を形成する配位子）、１価のＴｃと１：６の錯体を形成するイソニトリル（６価錯体を形成する）を挙げることができる。一方、レニウムがテクネチウムと同じ第７族の遷移元素であり、テクネチウムと類似した化学的性質を有することから、テクネチウムと錯体を形成する配位子は、レニウムと同様の錯体を形成する。したがって、上記例示した配位子はいずれも、１８６Ｒｅおよび１８８Ｒｅと錯体を形成する配位子として使用できる。配位子はこれら具体例に限定されず、金属と多配位の錯体を形成する化合物である限りにおいていずれも使用することができる。
【００２１】
本発明において、標的分子認識素子として、タンパク質、ペプチド、抗体、および抗体断片を例示できる。具体的には、炎症や腫瘍細胞浸潤などに伴う組織構築において高い発現が認められるタンパク質や腫瘍細胞に特異的に発現するタンパク質に結合するリガンド、抗体および抗体のＦａｂ断片などを例示できる。より具体的には、がんの新生血管に高発現が認められるインテグリンに親和性を有する環状ペンタペプチドｃ（ＲＧＤｆＫ）を例示できる。そのほか、造骨性のがん（骨転移）に多く存在するヒドロキシアパタイトへの親和性を有するビスフォスフォン酸やオリゴアスパラギン酸、オリゴグルタミン酸、マクロファージの表面に存在する走査因子の受容体と親和性があるペプチド（ｆＭｅｔ−Ｌｅｕ−Ｐｈｅ）、がん細胞に発現が認められる葉酸受容体と結合する葉酸とその誘導体などが例示できる。標的分子認識素子は、例示された化合物に限定されず、標的分子に結合する化合物であればいずれを使用することもできる。
【００２２】
本発明に係る放射性標識薬剤は、標的分子認識素子と結合させた配位子であって金属と多配位の錯体を形成する配位子と該金属の放射性核種とから形成される錯体を有効成分とするものである。このような錯体は、標的分子認識素子と結合させた配位子であって金属と多配位の錯体を形成する配位子を含むため、配位子と同数の標的分子認識素子を有する（図１参照）。すなわち、このような錯体は複数の標的分子結合部位を有する。このように、標的分子認識素子と結合させた配位子であって金属と多配位の錯体を形成する配位子含み、その結果錯体中に配位子と同数の標的分子認識素子を有する錯体を多価錯体と称し、そして多価の錯体を有効成分として含む放射性標識薬剤を多価放射性標識薬剤と称する。例えば、標的分子認識素子と結合させた配位子であって５価金属と２配位の錯体を形成する配位子を含む錯体は、錯体中に２箇所の標的分子結合部位を有し、２価錯体と称する。また、標的分子認識素子と結合させた配位子であって３価金属と３配位の錯体を形成する配位子を含む錯体は、錯体中に３箇所の標的分子結合部位を有し、３価錯体と称する。標的分子認識素子と結合させた配位子であって１価金属と６配位の錯体を形成する配位子を含む錯体は、錯体中に６箇所の標的分子結合部位を有し、６価錯体と称する。
【００２３】
標的分子への結合部位を２箇所有する化合物（２価の化合物）は標的分子への結合部位を１箇所有する化合物（１価の化合物）に比べて標的分子との高い親和性や集積を示すことが知られている（非特許文献３）。標的分子へ結合する化合物として抗体を例にとると、２価のＩｇＧ抗体は、１価のＦａｂ断片よりも少なくとも５０〜１００倍、多価抗体のＩｇＭはＩｇＧの１０４倍の抗原との結合力（ａｖｉｄｉｔｙ）を有する。
【００２４】
このことから、多価錯体は１価の錯体と比較して、標的分子との高い親和性や集積を示す。したがって、多価錯体を含む放射性標識薬剤は、標的部位に高い集積性を示す。
【００２５】
本発明に係る放射性標識薬剤は、放射性標識薬剤を用いた画像診断や、内部放射線治療に使用することができる。本発明に係る放射性標識薬剤は、がん疾患の診断や治療に好ましく使用されるが、適用疾患は本疾患に限定されず、画像診断や内部放射線治療が適用される疾患であればいずれにも適用できる。診断や治療の対象となる標的の特性にしたがって、放射性標識薬剤の有効成分である錯体に結合させる標的分子認識素子を選択することにより、該標的の診断や治療が可能であり、本放射性標識薬剤は診断および治療の分野で広く使用できる。
【００２６】
本発明に係る放射性標識薬剤の投与経路として、静脈内投与あるいは動脈内投与を好ましく挙げることができる。投与経路はこれら経路に限定されず、本放射性標識薬剤の投与後、その作用が有効に発現し得る経路であればいずれも利用できる。
【００２７】
本発明に係る放射性標識薬剤の放射活性強度は、本標識薬剤を投与したことにより目的を達成し得る強度であり、かつ、被験者の放射線被爆が可能な限り低い臨床投与量である限りにおいて任意である。放射性強度は、放射性標識薬剤を使用する一般的な診断方法や治療方法で使用されている放射活性強度を参考にして決定できる。
【００２８】
本発明に係る放射性標識薬剤は、上記錯体を有効成分として含むほか、必要に応じて、１種類または２種類以上の医薬的に許容される担体（医薬用担体）を含むことができる。医薬用担体として、ｐＨを調整するための酸、塩基、緩衝液、安定化剤、等張化剤、保存剤を例示できる。
【００２９】
本発明に係る放射性標識薬剤は、好ましくは、標的分子認識素子と結合させた配位子であって金属と多配位の錯体を形成する配位子を含む薬剤と、該金属の放射性核種を含む薬剤とを、別々の包装単位として含んでなるキットとして提供される。
【００３０】
本発明に係る放射性標識薬剤の一態様として、９９ｍＴｃ標識薬剤を挙げることができる。本発明に係る９９ｍＴｃ標識薬剤は、標的分子認識素子と結合させた配位子であってテクネチウムと多配位の錯体を形成する配位子と９９ｍＴｃとから形成される９９ｍＴｃ錯体を含むことを特徴とする。本発明に係る９９ｍＴｃ標識薬剤は、９９ｍＴｃが放射線の体外計測に適したエネルギーのγ線のみを放射することから、放射性標識薬剤を用いた画像診断用の診断剤として好ましく使用できる。
【００３１】
本発明に係る９９ｍＴｃ標識薬剤の有効成分である９９ｍＴｃ錯体を形成する配位子は、標的分子認識素子と結合させた配位子であってテクネチウムと多配位の錯体を形成する配位子であることを特徴とし、本発明に係る９９ｍＴｃ標識薬剤の調製に使用される。本発明において用いられる配位子は、９９ｍＴｃと配位結合により多配位の錯体を形成し得る化合物であればいずれを使用することもできる。９９ｍＴｃの配位子として、５価のＴｃと１：２の錯体を形成するＤ−ペニシラミン（Ｄ−Ｐｅｎと略称することがある）、１−アミノ−２−メチルプロパン−２−チオール−Ｎ−アセテート（以下、ＡＭＰＴと略称することがある）、ヒドロキサムアミド（これらは２価錯体を形成する）、３価のＴｃと１：３の錯体を形成するチウオウレア，ジメチルフォスフィノエタン、Ｏ−フェニレンビス（ジメチルアルシン）（これらは３価錯体を形成する配位子）、１価のＴｃと１：６の錯体を形成するイソニトリル（６価錯体を形成する）を例示できる。
【００３２】
本発明に係る９９ｍＴｃ標識薬剤の有効成分である９９ｍＴｃ錯体は、標的分子認識素子と結合させた配位子であってＴｃと多配位の錯体を形成する配位子と９９ｍＴｃとの錯体であることを特徴とする。多配位の錯体を形成する配位子とは、２配位以上の配位数で錯体を形成する配位子を意味する。一般に遷移金属の場合、配位数が２〜９配位の錯体が知られており、テクネチウムが遷移金属であることから、配位数は２〜９配位が好ましい。また、電子的および立体的な安定性の観点から、配位数は２〜６配位であることがより好ましい。さらに、テクネチウムが単座、２座あるいは３座配位子と生体内で安定な６配位、３配位、２配位の錯体を形成する（非特許文献１および２）ことが知られていることから、配位数は２配位、３配位、および６配位であることがさらにより好ましい。例えば、テクネチウムは、Ｄ−ＰｅｎまたはＡＭＰＴと２配位と３配位からなる１：２の混合配位子錯体を形成し、そしてイソニトリルと６配位の錯体を形成する。
【００３３】
本発明に係る９９ｍＴｃ標識薬剤の有効成分である９９ｍＴｃ錯体は、標的分子認識素子と結合させた配位子であってＴｃと多配位の錯体を形成する配位子を含むため、配位子と同数の標的分子認識素子を有する（図１）。すなわち、本９９ｍＴｃ錯体は複数の標的分子結合部位を有する。このように、標的分子認識素子と結合させた配位子であってＴｃと多配位の錯体を形成する配位子含み、その結果錯体中に配位子と同数の標的分子認識素子を有する錯体を多価Ｔｃ錯体と称し、そして多価の錯体を有効成分として含む９９ｍＴｃ標識薬剤を多価Ｔｃ標識薬剤と称する。例えば、標的分子認識素子と結合させた配位子であって５価のＴｃと２配位の錯体を形成する配位子を含む９９ｍＴｃ錯体は、錯体中に２箇所の標的分子結合部位を有し、２価Ｔｃ錯体と称する。また、標的分子認識素子と結合させた配位子であって３価のＴｃと３配位の錯体を形成する配位子を含む９９ｍＴｃ錯体は、錯体中に３箇所の標的分子結合部位を有し、３価Ｔｃ錯体と称する。標的分子認識素子と結合させた配位子であって１価のＴｃと６配位の錯体を形成する配位子を含む９９ｍＴｃ錯体は、錯体中に６箇所の標的分子結合部位を有し、６価Ｔｃ錯体と称する。
【００３４】
本発明に係る９９ｍＴｃ標識薬剤の有効成分である錯体は多価錯体であり、１価の錯体と比較して、標的分子との高い親和性や集積を示す。
【００３５】
したがって、本発明に係る多価９９ｍＴｃ標識薬剤は、従来使用されていた１価９９ｍＴｃ標識薬剤と比較して、標的部位に高い集積性を示し、そのため放射性標識薬剤を用いた画像診断において高い感度を提供できる。また、本発明に係る多価Ｔｃ標識薬剤は、生体内において十分な安定性を示す。
【００３６】
このように、本発明に係る多価９９ｍＴｃ標識薬剤の使用により、標的部位への放射性錯体の集積を増加させることができ、その結果、放射性標識薬剤を用いた画像診断において高い感度を提供できる。
【００３７】
例えば、がんの新生血管に高発現が認められるインテグリンに親和性を有するｃ（ＲＧＤｆＫ）ペプチドを結合させたＤ−Ｐｅｎと９９ｍＴｃとから形成された２配位の９９ｍＴｃ錯体は、標的分子であるインテグリンへの結合部位を２箇所有する２価錯体であり、１価９９ｍＴｃ錯体と比較して、標的部位であるがん新生血管への集積が増加する。また、この２価９９ｍＴｃ錯体は生体内において十分な安定性を示した。したがって、このような錯体を含む９９ｍＴｃ標識薬剤は、がんの診断において高い感度を提供できる。
【００３８】
本発明に係る９９ｍＴｃ標識薬剤は、例えば、標的分子認識素子と結合させた配位子を、９９ｍＴｃを含む過テクネチウム酸またはその塩および過テクネチウム酸還元剤と混合することにより調製できる。過テクネチウム酸還元剤は、過テクネチウム酸塩を強固なキレート化合物の形成に有利な低原子価状態に還元するために使用される。過テクネチウム酸還元剤としては医薬上許容され得る種々のものが使用できるが、好ましいものとして第一スズ塩、亜ニチオン酸ナトリウムを例示できる。第一スズ塩は２価のスズが形成する塩であって、例えば塩化物イオン、フッ化物イオンなどのハロゲン化イオン、硫酸イオン、硝酸イオンなどの無機酸残基イオン、酒石酸イオン、酢酸イオン、クエン酸イオンなどの有機酸残基イオンとの間で形成される塩をいう。
【００３９】
具体的には、本発明に係る９９ｍＴｃ標識薬剤は、まず凍結乾燥ＧＨ−キットに９９ｍＴｃ溶液を加えて反応させることにより９９ｍＴｃ−ＧＨを調製し、次いで９９ｍＴｃ−ＧＨを、標的分子認識素子と結合させた配位子と混合することにより調製できる。本キットは、１バイアル中にα−Ｄ−グルコヘプトン酸 ４ｍｇと塩化第一スズ １．２μｇとを含み、過テクネチウム酸（９９ｍＴｃＯ４−）を加えたときのｐＨが８になるよう調整したものである。標的分子認識素子と結合させた配位子として、下式（Ｉ）で示されるｃ（ＲＧＤｆＫ）ペプチド結合Ｄ−Ｐｅｎを例示できる。
【００４０】
【化３】
【００４１】
上記式（Ｉ）で示されるｃ（ＲＧＤｆＫ）ペプチド結合Ｄ−Ｐｅｎは、下式（ＩＩ）で示される化合物を使用して製造できる。
【００４２】
【化４】
【００４３】
本発明に係る放射性標識薬剤の一態様として、１８６Ｒｅまたは１８８Ｒｅ標識薬剤を挙げることができる。本発明に係る１８６Ｒｅまたは１８８Ｒｅ標識薬剤は、標的分子認識素子と結合させた配位子であってレニウムと多配位の錯体を形成する配位子と１８６Ｒｅまたは１８８Ｒｅとから形成される錯体を含むことを特徴とする。本発明に係る１８６Ｒｅまたは１８８Ｒｅ標識薬剤は、１８６Ｒｅおよび１８８Ｒｅがいずれも細胞殺傷性を示す高エネルギーのβ線を放射することから、内部放射線治療剤として好ましく使用できる。
【００４４】
レニウムは、テクネチウムと同じ第７族の遷移元素であり、テクネチウムと類似した化学的性質を有することから、テクネチウムと錯体を形成する配位子は、レニウムと同様の錯体を形成する。
【００４５】
したがって、１８６Ｒｅまたは１８８Ｒｅ標識薬剤の有効成分である１８６Ｒｅ錯体または１８８Ｒｅ錯体を形成する配位子として、テクネチウムと多配の錯体を形成する上記配位子を使用できる。実際、レニウムの安定性同位体である非放射性の１８５／１８７Ｒｅは、Ｄ−Ｐｅｎと２配位の錯体を形成した。また、１８５／１８７Ｒｅは、ｃ（ＲＧＤｆＫ）ペプチドを結合させたＤ−Ｐｅｎと２配位の錯体を形成した。配位子は上記例示した配位子に限定されず、１８６Ｒｅまたは１８８Ｒｅと多配位の錯体を形成する化合物である限りにおいていずれも使用することができる。
【００４６】
本発明に係る１８６Ｒｅまたは１８８Ｒｅ標識薬剤の有効成分である錯体は多価錯体であり、１価の錯体と比較して、標的分子との高い親和性や集積を示す。
【００４７】
したがって、本発明に係る多価１８６Ｒｅまたは１８８Ｒｅ標識薬剤は、標的部位に高い集積性を示し、そのため内部放射線治療において高い効果を示すことができる。また、本発明に係る多価標識薬剤は、生体内において十分な安定性を示す。
【００４８】
例えば、がんの新生血管に高発現が認められるインテグリンに親和性を有するｃ（ＲＧＤｆＫ）ペプチドを結合させたＤ−Ｐｅｎと、１８６Ｒｅまたは１８８Ｒｅとから形成された２配位の錯体は、標的分子であるインテグリンへの結合部位を２箇所有する２価錯体であり、１価錯体と比較して、標的部位であるがん新生血管への集積が増加する。また、この２価１８６Ｒｅまたは１８８Ｒｅ錯体は、上記２価９９ｍＴｃ錯体と同様に生体内において十分に安定である。したがって、この２価１８６Ｒｅまたは１８８Ｒｅ錯体を有効成分として含む放射性標識薬剤は、がん疾患の治療剤として有用性が高い。
【００４９】
本発明に係る１８６Ｒｅまたは１８８Ｒｅ標識薬剤は、例えば、標的分子認識素子と結合させた配位子を、１８６Ｒｅまたは１８８Ｒｅを含む過レニウム酸またはその塩および過レニウム酸還元剤と混合することにより調製できる。過レニウム酸還元剤としては、過テクネチウム酸還元剤として上記例示した化合物を使用することができる。
【００５０】
以下、実施例を示して本発明をより具体的に説明するが、本発明は以下に示す実施例によって何ら限定されるものではない。
【実施例１】
【００５１】
標的分子認識素子としてがんの新生血管に高発現が認められるインテグリンに親和性を有する環状ペンタペプチドｃ（ＲＧＤｆＫ）を用い、該ペプチドを結合させた配位子を製造した。そして、該配位子を用いて２配位の９９ｍＴｃ錯体を製造した。また、製造した９９ｍＴｃ錯体の安定性および体内動態の評価を行った。さらに、該配位子と９９ｍＴｃとの錯形成で生成する錯体の化学構造を非放射性のレニウムを用いて検討した。
【００５２】
（実験材料と方法）
１．一般的方法
過テクネチウム酸（９９ｍＴｃＯ４−）は、富士フイルムＲＩファーマ株式会社製の９９Ｍｏ／９９ｍＴｃジェネレータを用いた。薄層クロマトグラフィー（ＴＬＣ）には、シリカゲルプレート（Ｓｉｌｉｃａ ｇｅｌ ６０Ｆ２５４、メルク社製）を使用した。セルロースアセテート電気泳動（ＣＡＥ）はべロナールバッファー（ｐＨ８．６）を用い、１ｍＡで３０分間泳動した。逆相ＨＰＬＣ（ＲＰ−ＨＰＬＣ）カラムはＣｏｓｍｏｓｉｌ ５Ｃ１８−ＡＲ−３００ カラム（４．６ｍｍ×１５０ｍｍ、ナカライテスク株式会社）を使用し、移動相Ａ（０．０１Ｍ リン酸緩衝液（ｐＨ６．０））、移動相Ｂ（ＭｅＯＨ）を０−１８分 Ｂ＝０−６０％；１８−２１分 Ｂ＝６０−１００％で直線勾配で変化させる方法（方法１）、または０−１８分 Ｂ＝０−６０％、１８−２６分 Ｂ＝６０−１００％、２６−３１分 Ｂ＝１００％で直線勾配で変化させる方法（方法２）で行った。分取用ＲＰ−ＨＰＬＣカラムはＣｏｓｍｏｓｉｌ ５Ｃ１８−ＡＲ−３００ カラム（２０ｍｍ×１５０ｍｍ、ナカライテスク株式会社）を使用し、流速５ｍＬ／ｍｉｎで０−５分 Ｂ＝０％、５−４５分 Ｂ＝０−１００％で直線勾配で変化させる方法で行った。１Ｈ−ＮＭＲはＪＥＯＬ−ＡＬＰＨＡ ４００ スペクトロメーター（日本電子株式会社）を用いた。ＦＡＢ−ＭＳはＪＥＯＬ ＪＭＳ−ＨＸ−１１０ Ａ マススペクトロメーター（日本電子株式会社）を用いて測定した。ＭＡＬＤＩ−ＴＯ−ＭＳはＫｒａｔｏｓ Ａｘｉｍａ ＣＦＲ ａｐｐａｒａｔｕ（島津製作所）を用いて測定した。Ｃｙｃｌｏ（Ａｒｇ（Ｐｂｆ）−Ｇｌｙ−Ａｓｐ（ＯｔＢｕ）−Ｄ−Ｐｈｅ−Ｌｙｓ）の合成は以前報告された方法（Haubner R, Wester HJ, Reuning U, Senekowitsch-Schmidtke R, Diefenbach B, Kessler H, Stocklin G, and Schwaiger M. Radiolabeled alpha(v)beta3 integrin antagonists: a new class of tracers for tumor targeting. J Nucl Med 1999: 40: 1061-71）に従って合成した。その他の試薬はすべて特級のものをそのまま使用した。
【００５３】
２．Ｓ−Ｔｒｉｔｙｌ−ＡＭＰＴ−Ｎ−ａｃｅｔａｔｅの合成
配位子として用いるＳ−トリチル−ＡＭＰＴ−Ｎ−アセテート（Ｓ−Ｔｒｔ−ＡＭＰＴ−Ｎ−Ａｃｅ）を合成した。以下に説明する。
【００５４】
【化５】
【００５５】
（実験１）
２，２，５，５−ｔｅｔｒａｍｅｔｙｌ−３，４−ｄｉｔｈｉａｈｅｘａｍｅ−１，６−ｄｉａｌ（１）の合成：
乾燥ＣＣｌ４（１４０ｍＬ）に溶解したイソブチルアルデヒド（１８３ｍＬ，２．０ｍｏｌ）溶液にＳ２Ｃｌ２（８０ｍＬ，１．０ｍｏｌ）を５０−５５℃を維持したまま滴下した。反応時に発生したＨＣｌガスはＮ２ガスにより除去した。反応液を２時間攪拌後、１０Ｎ ＮａＯＨ（１１０ｍＬ）をゆっくりと滴下し、ｐＨを１０に調節した。ジエチルエーテル（１００ｍＬ）を加え、有機層をブライン（ｂｒｉｎｅ）（１００ｍＬ）により洗浄した後、ＭｇＳＯ４により乾燥させた。溶媒を留去後、残査を減圧蒸留（ｂｐ １１３−１１４℃／６ｍｍＨｇ）により精製し、無色の油状物質を得た。その後冷却することにより結晶として化合物１を得た（１０５．７ｇ，５１．２％）。１Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）：δ １．３０（ｓ，１２Ｈ，ＣＨ３）、９．００（ｓ，２Ｈ，ＣＨＯ）；ＦＡＢＭＳ：ｍ／ｚ ２０７［（Ｍ＋Ｈ）＋］。
【００５６】
（実験２）
２，２，５，５−ｔｅｔｒａｍｅｔｈｙｌ−３，４−ｄｉｔｈｉａｈｅｘａｎｅ−１，６−ｄｉａｌ ｂｉｓｏｘｉｍｅ（２）の合成：
化合物１（４．１２ｇ，２０ｍｍｏｌ）とヒドロキシルアミン ヒドロクロライド（４．１７ｇ，６０ｍｍｏｌ）を乾燥エタノール（２０ｍＬ）に溶解した。次いで、その溶液に１５Ｎ ＮａＯＨ（３．８ｍＬ，５７ｍｍｏｌ）を滴下した。３時間還流した後、水（１００ｍＬ）を加えた。ジエチルエーテル（４×２０ｍＬ）により抽出し、無水Ｎａ２ＳＯ４により乾燥させた。溶媒を留去した後、粗生成物を油状物質として得た。酢酸エチル−ｎ−ヘキサンにより再結晶を行い、化合物２を無色の結晶として得た（２．４８ｇ，５２．５％）。１Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）：δ １．３０（ｓ，１２Ｈ，ＣＨ３），７．３０（ｓ，２Ｈ，ＣＨ＝ＮＯＨ）；ＦＡＢＭＳ：ｍ／ｚ ２３７［（Ｍ＋Ｈ）＋］。
【００５７】
（実験３）
１−ａｍｉｎｏ−２−ｍｅｔｈｙｌ−２−（Ｓ−ｔｒｉｔｙｌ）−ｐｒｏｐａｎｅｔｈｉｏｌ（Ｓ−Ｔｒｉｔｙｌ−ＡＭＰＴ，３）の合成：
テトラヒドロフラン（ＴＨＦ，１２ｍＬ）に溶解したＬｉＡｌＨ４（４８２ｍｇ，１２ｍｍｏｌ）を、ＴＨＦ（８ｍＬ）に溶解した化合物２（９４５ｍｇ，４ｍｍｏｌ）にゆっくりと滴下した。窒素気流下１５時間激しく攪拌しながら還流し、次いで氷上で反応液を０℃に冷却した。酢酸エチル（３．２ｍＬ）を加えた後、６Ｎ ＨＣｌを加えｐＨ１．０に調整した。溶媒を留去した後、残査をトリフルオロ酢酸（ＴＦＡ，１１．４ｍＬ）に溶解し、次いでトリフェニルメタノール（２．１ｇ，８ｍｍｏｌ）を加えた。窒素気流下２６時間攪拌後、ＴＦＡを窒素気流により留去した。残査をジクロロメタン（ＤＣＭ，１４ｍＬ）に溶解した後、３Ｎ ＮａＯＨにより溶液のｐＨを１０−１１に調整した。有機層を分取し、水（３×７ｍＬ）、次いで飽和ＮａＨＣＯ３（２×３ｍＬ）、ブライン（２×３ｍＬ）により洗浄した。有機層を無水Ｎａ２ＳＯ４で乾燥後、溶媒を留去した。残査を溶出溶媒ＤＣＭ−ＭｅＯＨ（１０：１）とするシリカゲルクロマトグラフィにより精製し、化合物３を薄い茶色の油状物質として得た（２３４ｍｇ，８．４％）。１Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）：δ １．００（ｓ，６Ｈ，ＣＨ３），１．５３（ｓ，２Ｈ，ＮＨ２），１．７６（ｓ，ＣＨ２），７．２６−７．１６（ｍ，９Ｈ，ａｒｙｌ），７．６０−７．６３（ｄ，６Ｈ，ａｒｙｌ）；ＦＡＢＭＳ：ｍ／ｚ ３４８［（Ｍ＋Ｈ）＋］。
【００５８】
（実験４）
Ｓ−Ｔｒｉｔｙｌ−ＡＭＰＴ−Ｎ−ａｃｅｔａｔｅ（Ｓ−Ｔｒｔ−ＡＭＰＴ−Ｎ−Ａｃｅ）の合成：
化合物３（１８８ｍｇ，０．５１ｍｍｏｌ）を乾燥ＤＣＭ（２ｍＬ）に溶解し、５Ｎ ＮａＯＨ（０．１ｍＬ）を加えた。反応液を窒素気流下１．５時間攪拌後、溶媒を留去した。残査を水に溶解し、６Ｎ ＨＣｌによりｐＨを２．０に調整した。生じた沈殿をろ取し、０．０８Ｎ ＨＣｌにより洗浄し、Ｓ−Ｔｒｔ−ＡＭＰＴ−Ｎ−Ａｃｅを薄灰色結晶として得た（３６．２ｍｇ，７２％）。１Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤ３ＯＤ）：１．２０（ｓ，６Ｈ，ＣＨ３），１．８３（ｓ，１Ｈ，ＮＨ），３．０９（ｓ，２Ｈ，ＮＨＣＨ２ＣＯ），３．２５（ｓ，２Ｈ，ＳＣ（ＣＨ３）２ＣＨ２ＮＨ），７．１２−７．２６（ｍ，９Ｈ，ａｒｙｌ），７．５６−７．６０（ｄ，５Ｈ，ａｒｙｌ）；ＦＡＢＭＳ：ｍ／ｚ ４０６［（Ｍ＋Ｈ）＋］。
【００５９】
４．Ｄ−Ｐｅｎ（Ｔｒｔ）−ＯｔＢｕ−Ｎ−ｈｅｘａｎｏａｔｅ（９）の製造
配位子として用いるＤ−Ｐｅｎ（Ｔｒｔ）−ＯｔＢｕ−Ｎ−ｈｅｘａｎｏａｔｅ（９）を合成した。以下説明する。
【００６０】
【化６】
【００６１】
（実験５）
Ｎ，Ｎ´−ｄｉｉｓｏｐｒｏｐｙｌ−Ｏ−ｔｅｒｔ−ｂｕｔｙｌｉｓｏｕｒｅａ（５）の合成：
乾燥したナス型フラスコにターシャリー−ブタノール（２．７８ｇ，３７．５ｍｍｏｌ）を入れ、窒素気流下３０℃でジイソプロピルカルボジイミド（ＤＩＣ，４．０８ｇ，３２．３ｍｍｏｌ）およびＣｕＣｌを少量加えた。反応溶液を窒素気流下３０℃で４日間攪拌した。ポリ（４−ビニルピリジン）（カチオン交換レジン，０．６５ｇ）とＤＣＭ（１６．５ｍＬ）を加え、スラリー状になった溶液をさらに１５分間攪拌した。固形物をろ去し、溶出液を留去後、粗結晶を無色透明のオイルとして得た（５．９９ｇ，最高９２．６％）。この化合物は未精製のまま次の反応に用いた。ＦＡＢＭＳ：ｍ／ｚ ２０１［（Ｍ＋Ｈ）＋］。
【００６２】
（実験６）
Ｆｍｏｃ−Ｄ−ｐｅｎｉｃｉｌｌａｍｉｎｅ（Ｔｒｔ）−ＯｔＢｕ（６）の合成：
Ｆｍｏｃ−Ｄ−ペニシラミン（ターシャリー）−ＯＨ（５００ｍｇ，０．８１５ｍｍｏｌ）をＤＣＭ（１５ｍＬ）に溶解し、化合物５（１．１４２ｇ，５．７０３ｍｍｏｌ）をゆっくりと加えた。窒素気流下、１５時間攪拌後、沈殿物をろ去した。ろ液の溶媒を留去後、残査を溶出溶媒ｎ−ヘキサン−ジエチルエーテル（２：１）とするシリカゲルクロマトグラフィにより精製し、化合物６を白色固体として得た（５２０．９ｍｇ，９５．４％）。１Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）：δ １．００（ｓ，３Ｈ，ＣＨ３）、１．１１（ｓ，３Ｈ，ＣＨ３）、１．４６（ｓ，９Ｈ，ｔＢｕ），１．５４（ｂｒｓ，１Ｈ，ＮＨ）、３．６２−３．６９（ｄ，１Ｈ，ＣＯＣＨＮＨ）、４．２１−４．４３（ｍ，３Ｈ，ＣＨ２ＣＨ−ｆｌｕｏｒｅｎｙｌ），７．１３−７．４５（ｍ，１９Ｈ，ａｒｙｌ），７．５３−７．７０（ｄ，２Ｈ，ａｒｙｌ）、７．７２−７．８３（ｄ，２Ｈ，ａｒｙｌ）；ＦＡＢＭＳ：ｍ／ｚ ６９２［（Ｍ＋Ｎａ）＋］。
【００６３】
（実験７）
Ｄ−Ｐｅｎｉｃｉｌｌａｍｉｎｅ（Ｔｒｔ）−ＯｔＢｕ（７）の合成：
Ｆｍｏｃ−Ｄ−ペニシラミン（ターシャリー）−ＯｔＢｕ（５００ｍｇ，０．７４６ｍｍｏｌ）を乾燥ＤＣＭ（４０ｍＬ）に溶解し、次いで１，８−ジアザビシクロ［５．４．０］−７−ウンデセン（ＤＢＵ）（１．１４ｍＬ，７．４６ ｍｍｏｌ）を加えた。室温で２５時間攪拌した後、溶媒を留去した。残査を溶出溶媒ｎ−ヘキサン−酢酸エチル（３：１→２：１）とするシリカゲルクロマトグラフィにより精製し、化合物７を無色の油状物質として得た（２８０．９ｍｇ，８４．１％）。１Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）：δ １．０８（ｓ，３Ｈ，ＣＨ３），１．１４（ｓ，３Ｈ，ＣＨ３），１．２８（ｓ，９Ｈ，ｔＢｕ），７．１０−７．２６（ｍ，９Ｈ，ａｒｙｌ），７．５５−７．６１（ｄ，２Ｈ，ａｒｙｌ）；ＦＡＢＭＳ：ｍ／ｚ ４４８［（Ｍ＋Ｈ）＋］，８９５［（２Ｍ＋Ｈ）＋］。
【００６４】
（実験８）
Ｍｅｔｈｙｌ ６−ｂｒｏｍｏｈｅｘａｎｏａｔｅ（４）の合成：
メタノール（２５ｍＬ）を−１０℃に冷却し、撹拌しながらＳＯＣｌ２（２．６ｍＬ，３４ｍｍｏｌ）をゆっくりと滴下した。滴下後１０分間撹拌した後、６−ブロモヘキサン酸（４．８９ｇ，２５ｍｍｏｌ）を加え、室温で一晩撹拌した。溶媒を減圧留去した。残渣を酢酸エチルに溶解した後、ブライン（３×３０ｍＬ）で洗浄した。有機層を無水ＣａＳＯ４で乾燥させた後、溶媒を留去し、化合物４を無色の油状物質として得た（５．１３ｇ，９８％）。１Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤ３ＯＤ）：δ ３．６４（ｓ，３Ｈ，ＯＣＨ３），（ｔ，２Ｈ，ＣＨ２ε），２．３３（ｔ，２Ｈ，ＣＨ２α），（ｍ，２Ｈ，ＣＨ２δ），（ｍ，２Ｈ，ＣＨ２β），（ｍ，２Ｈ，ＣＨ２γ）；ＦＡＢＭＳ：ｍ／ｚ ２０９［（Ｍ＋Ｈ）＋］。
【００６５】
（実験９）
Ｄ−Ｐｅｎ（Ｔｒｔ）−ＯｔＢｕ−Ｎ−ｈｅｘａｎｏａｔｅ ｍｅｔｈｙｌ ｅｓｔｅｒ（８）の合成：
活性した４Å モレキュラーシーブ（６０４．５ｍｇ）を乾燥ＤＭＦ（６ｍＬ）に加え、次いで、ＬｉＯＨ・Ｈ２Ｏ（９６．０３ｍｇ，２．２８９ｍｍｏｌ）を加えた。この懸濁液を１０分間激しく撹拌した後、乾燥ＤＭＦに溶解した化合物７（４７６．５ｍｇ，１．０６ｍｍｏｌ）を加え、さらに３０分間撹拌した。この懸濁液に化合物４（１９２．４μＬ，１．２９ｍｍｏｌ）を加え、室温で２４時間撹拌した。無機物をろ去した後、残渣を少量のＤＣＭにより３回洗浄した。ろ液を水で洗浄し、無水Ｎａ２ＳＯ４により乾燥させた。溶媒を減圧留去した後残渣をｎ−ヘキサン−酢酸エチル（５：１から３：１まで）を展開溶媒とする中圧シリカゲルカラムクロマトグラフィにより精製し化合物８を無色透明の油状物質として得た（１５２．４ｍｇ，２４．８％）。１Ｈ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）：δ ７．０８−７．５７（ｍ，１５Ｈ，Ｔｒｔ），３．５８（ｓ，３Ｈ，ＯＭｅ），２．５７（ｓ，１Ｈ，ＣＯＣＨＮＨ），２．３６−２．４３（ｍ，１Ｈ，−ＮＨ−），２．２２−２．２６（ｔ，２Ｈ，ＭｅＯＣＯＣＨ２），１．３３１（ｓ，９Ｈ，ｔＢｕ），１．２４８−１．６６７（ｍ，６Ｈ，ＣＨ２×３），０．９４（ｓ，３Ｈ，Ｍｅ），０．８９２（ｓ，３Ｈ，Ｍｅ）；ＦＡＢＭＳ：ｍ／ｚ ５７６［（Ｍ＋Ｈ）＋］。
【００６６】
（実験１０）
Ｄ−Ｐｅｎ（Ｔｒｔ）−ＯｔＢｕ−Ｎ−ｈｅｘａｎｏａｔｅ（９）の合成：
化合物８（３２６．７ｍｇ，０．５６７ｍｍｏｌ）を乾燥エタノール（４０ｍＬ）と２．５Ｎ ＮａＯＨ（０．９１ｍＬ，２．２７ｍｍｏｌ）の混液に溶解した。窒素気流下４０℃で３時間反応させた後、ＤＣＭ（１５ｍＬ）を加えブライン（１５×２ｍＬ）で洗浄した。有機層を抽出し、溶媒を減圧留去した。残渣をｎ−ヘキサン−酢酸エチル（１：１）を溶出溶媒とするシリカゲルカラムクロマトグラフィにより粗精製し、粗精製物９を無色透明の油状物質として得た（２８２ｍｇ，８８％）。１Ｈ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）：δ ７．６０−７．６２（ｍ，１５Ｈ，Ｔｒｔ），２．５２（ｓ，１Ｈ，ＣＯＣＨＮＨ）、２．２８−２．３１（ｍ，３Ｈ，ＭｅＯＣＯＣＨ２ ａｎｄ ＮＨ），１．３８（ｓ，９Ｈ，ｔＢｕ），１．２９−１．６６（ｍ，６Ｈ，ＣＨ２），１．１６（ｓ，３Ｈ，Ｍｅ），１．０２（ｓ，３Ｈ，Ｍｅ）；ＦＡＢＭＳ：ｍ／ｚ ５６２［（Ｍ＋Ｈ）＋］，５８４［
（Ｍ＋Ｎａ）＋］。
【００６７】
４．Ｄ−Ｐｅｎ−Ｎ−ｈｅｘａｎｏａｔｅ−ｃＲＧＤｆＫ（１１）の製造
ｃＲＧＤｆＫペプチドと結合させた配位子であるＤ−Ｐｅｎ（Ｔｒｔ）−ＯｔＢｕ−Ｎ−ｈｅｘａｎｏａｔｅ−ｃＲＧＤｆＫを、Ｄ−Ｐｅｎ（Ｔｒｔ）−ＯｔＢｕ−Ｎ−ｈｅｘａｎｏａｔｅ（化合物９）を用いて製造した。以下に説明する。
【００６８】
【化７】
【００６９】
（実験１１）
Ｄ−Ｐｅｎ（Ｔｒｔ）−ＯｔＢｕ−Ｎ−ｈｅｘａｎｏａｔｅ−ｃＲＧＤｆＫ ｐｅｐｔｉｄｅ ｃｏｎｊｕｇａｔｅの合成：
乾燥ＤＭＦ（２０ｍＬ）に溶解した化合物９（２３７．６ｍｇ，０．４２３ｍｍｏｌ）、化合物１０（３８５．５ｍｇ，０．４２３ｍｍｏｌ）およびヒドロキシベンゾリアゾール（ＨＯＢｔ，７１．２３ｍｇ，０．４６５ｍｍｏｌ）に乾燥ＤＭＦ（１５ｍＬ）に溶解したＷＳＣ・ＨＣｌ（８９．１９ｍｇ，０．４６５ｍｍｏｌ）を氷上ゆっくりと加えた。室温で４４時間撹拌した後、溶媒を留去した。残渣をＤＣＭ（６０ｍＬ）に溶解した後５％クエン酸（２０ｍＬ）、水（２０ｍＬ）、５％ ＮａＨＣＯ３（２０ｍＬ）、水（２０ｍＬ）で順次洗浄し、最後に５％ クエン酸（２０ｍＬ）で洗浄した。有機層を減圧流留去した後、残渣を氷零下（ＣＨ３Ｃｌ−Ｅｔ２Ｏ）により再結晶を行い薄灰色の結晶として保護アミノ酸結合配位子を得た（５４５．４ｍｇ，８８．６％）。ＦＡＢＭＳ：ｍ／ｚ １４５９［（Ｍ＋５Ｈ）５＋］。
【００７０】
（実験１２）
Ｄ−Ｐｅｎ−Ｎ−ｈｅｘａｎｏａｔｅ−ｃＲＧＤｆＫ（１１）の合成：
保護アミノ酸結合配位子（３５３．１ｍｇ，０．２５２ｍｍｏｌ）にＴＦＡ、水およびトリエチルシランの混液（９０：４．７５：４．７５，ｖ／ｖ／ｖ，８１ｍＬ）を加え、室温で３時間攪拌した。窒素ガスで溶媒を濃縮後、残渣を最少量の水に溶解し、次いで酢酸エチルを加えることで沈殿を生成させた。沈殿をろ取後、沈殿を水、酢酸エチルにより洗浄した。沈殿を分取用ＲＰ−ＨＰＬＣにより精製することにより白色固体として化合物１１（３５ｍｇ，３０％）を得た．ＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ ＭＳ：ｍ／ｚ ８４９［Ｍ］，８５０［（Ｍ＋Ｈ）＋］。
【００７１】
５．［１８５／１８７Ｒｅ］−（Ｄ−Ｐｅｎ−Ｎ−ａｃｅｔａｔｅ−ｃ（ＲＧＤｆＫ））２（１２）の製造
ｃＲＧＤｆＫペプチドと結合させた配位子であるＤ−Ｐｅｎ−Ｎ−ａｃｅｔａｔｅ−ｃ（ＲＧＤｆＫ）と１８５／１８７レニウムとからなる２配位１８５／１８７レニウム錯体を製造した。以下に説明する。
【００７２】
【化８】
【００７３】
（実験１３）
過レニウム酸アンモニウム（３．３８ｍｇ，１２．６μｍｏｌ）、化合物１１（１ｍｇ，１．２６μｍｏｌ）および１２．５ｍＭ ＮａＨＣＯ３（０．２ｍＬ，２．５２μｍｏｌ）を加え、密閉した。反応容器に窒素ガスを１５分間通した後、０．２５Ｍ 亜ジオン酸ナトリウム（０．１ｍＬ，１２．６μｍｏｌ）溶液を加え、４時間攪拌した。次いで、分析用ＲＰ−ＨＰＬＣ（方法２）により分析した。ＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ ＭＳ：ｍ／ｚ １７８４［（Ｍ＋２Ｈ）＋］。
【００７４】
６．［１８５／１８７Ｒｅ］−（Ｄ−Ｐｅｎ）２（１４）の製造
Ｄ−ペニシラミンおよび１８５／１８７レニウムとからなる２配位１８５／１８７レニウム錯体を製造した。以下に説明する。
【００７５】
【化９】
【００７６】
（実験１４）
Ｔｅｔｒａｂｕｔｙｌ ａｍｍｏｎｉｕｍ［１８５／１８７ＲｅＯＣｌ４］（１３）の製造：
Ｔｅｔｒａｂｕｔｙｌ ａｍｍｏｎｉｕｍ［ＲｅＯ４］（１．１ｇ，２．２ｍｍｏｌ）をエタノール（２０ｍＬ）に溶解し、氷冷下、反応溶液を塩化水素ガスで飽和した。室温で２時間撹拌した後、窒素気流により反応溶液の体積が半量になるまで濃縮した。続いて冷凍庫中で放置し、淡黄色の結晶を得た（０．５ｇ，３８％）。ＦＡＢＭＳ：ｍ／ｚ ２４２［Ｍ（ＴＢＡ）］，２４３［（Ｍ（ＴＢＡ）＋Ｈ）＋］，ＩＲ（ＫＢｒ）：２９６２，２８７４，１４７０，１３８０，１１６９，７３７ｃｍ−１。
【００７７】
（実験１５）
［１８５／１８７Ｒｅ］−（Ｄ−Ｐｅｎ）２（１４）の製造：
エタノール（６ｍＬ）にＴＢＡ［ＲｅＯＣｌ４］（５０ｍｇ，０．０８５ｍｍｏｌ）を溶解し、撹拌下、エチレングリコール（０．４３ｍＬ）を加えた。そこへ酢酸ナトリウムを反応溶液が濃紫色を呈するまで加えた。続いてＤ−Ｐｅｎのエタノール溶液（２５．４ｍｇ（０．１７１ｍｍｏｌ）／１．２ｍＬ）を１．２ｍＬ加え、室温で２時間撹拌した。１Ｎ ＮａＯＨで反応溶液のｐＨを９に調節し、溶媒を減圧留去した。少量のメタノールに溶解し、ＲＰ−ＨＰＬＣで分析（方法１）および精製を行った。生成物量が微量であったため、収率は計算できなかった。１Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤ３ＯＤ）：δ １．２１２（ｓ，３Ｈ，Ｍｅ β），１．５９１（ｓ，３Ｈ，Ｍｅ β），１．７３８（ｓ，３Ｈ，Ｍｅ β），１．９９７（ｓ，３Ｈ，Ｍｅ β），３．０４１（ｓ，１Ｈ，ＣＨ α），３．９３４（ｓ，１Ｈ，ＣＨ α）。
【００７８】
７．９９ｍＴｃ−ｇｌｕｃｏｈｅｐｔｏｎａｔｅ（９９ｍＴｃ−ＧＨ）の製造：
α−Ｄ−グルコヘプトン酸（４．０ｍｇ，１７．７μｍｏｌ）およびＳｎＣｌ２ ２Ｈ２Ｏ １．２μｇからなる凍結乾燥ＧＨ−キットに９９ｍＴｃ溶液１．０ｍＬ（３７０ＭＢｑ，２０ｐｍｏｌ）を加え、室温で２０分間反応させることにより、９９ｍＴｃ−ＧＨを得た。９９ｍＴｃ−ＧＨの生成確認はＴＬＣ（アセトン，Ｒｆ値＝０，生理食塩水，Ｒｆ値 １．０）により行った。
【００７９】
８．９９ｍＴｃ−（Ｄ−ｐｅｎｉｃｉｌｌａｍｉｎｅ）２の製造
Ｄ−ペニシラミン（Ｄ−Ｐｅｎ，１．１９ｍｇ，８μｍｏｌ）を窒素置換した０．１Ｍ トリス塩酸バッファー（ｐＨ９．０）４００μＬに溶解した。続いて、この溶液を０．１Ｍ トリス塩酸バッファー（ｐＨ９．０）により順次希釈し、２ｍＭ、０．２ｍＭ、０．０２ｍＭ、０．０１ｍＭ、０．００２ｍＭの配位子溶液を調製した。各配位子濃度の溶液１００μＬに９９ｍＴｃ−ＧＨ溶液１００μＬを加え混和した後、室温で１時間反応させた。９９ｍＴｃ−（Ｄ−Ｐｅｎ）２の確認は、ＲＰ−ＨＰＬＣ（方法１）およびＣＡＥにより行った。
【００８０】
９．９９ｍＴｃ−（ＡＭＰＴ−Ｎ−ａｃｅｔａｔｅ）２の製造
Ｓ−Ｔｒｔ−ＡＭＰＴ−Ｎ−Ａｃｅ（３．２４ｍｇ，８μｍｏｌ）にＴＦＡ ２００μＬ（２．６ｍｍｏｌ）を加え１分間攪拌した。この溶液にＴＥＳ １０μＬ（７４μｍｏｌ）を加え、反応溶液が黄色から無色に変化した事を確認した後、窒素により溶媒を留去した。そこへ窒素置換した０．１Ｍ トリス塩酸バッファー（ｐＨ９．０）４００μＬを加えた。続いて、この溶液を０．１Ｍ トリス塩酸バッファー（ｐＨ９．０）により順次希釈し、２ｍＭ、０．２ｍＭ、０．０２ｍＭ、０．０１ｍＭ、０．００２ｍＭの配位子溶液を調製した。各配位子濃度の溶液１００μＬに９９ｍＴｃ−ＧＨ（［ＧＨ］＝４．０ｍｇ／ｍＬ）１００μＬを加え十分混和した後、室温で１時間反応させた。生成物の確認はＲＰ−ＨＰＬＣ（方法１）およびＣＡＥにより行った。
【００８１】
１０．９９ｍＴｃ−（Ｄ−Ｐｅｎ−Ｎ−Ｈｘ−ｃＲＧＤｆＫ）２の製造
Ｄ−Ｐｅｎ−Ｎ−ｈｅｘａｎｏａｔｅ−ｃＲＧＤｆＫ（化合物１１，０．８ｍｇ，１μｍｏｌ）を窒素置換した０．１Ｍ トリス塩酸バッファー（ｐＨ９．０）５０．５μＬに溶解した。続いて、この溶液を０．１ Ｍ トリス塩酸バッファー（ｐＨ９．０）により希釈し２ｍＭの配位子溶液を調製した。配位子溶液１００μＬに９９ｍＴｃ−ＧＨ溶液１００μＬを加え十分混和した後、室温で１時間反応させた。化合物の生成の確認はＲＰ−ＨＰＬＣ（方法２）により行った。
【００８２】
１１．安定性の検討
各９９ｍＴｃ標識化合物をＲＰ−ＨＰＬＣ（方法１または方法２）により精製した後、溶媒を減圧留去した。残渣を０．０１Ｍ リン酸緩衝液（ｐＨ６．０）４００μＬに再溶解させ、この溶液を室温で保存し、１、３、６、２４時間後にその放射化学的純度をＣＡＥまたはＲＰ−ＨＰＬＣで分析した。
【００８３】
１２．動物実験
未精製状態の９９ｍＴｃ−（Ｄ−Ｐｅｎ−Ｎ−ｈｅｘａｎｏａｔｅ−ｃＲＧＤｆＫ）２（濃度）またはＲＰ−ＨＰＬＣにより精製した９９ｍＴｃ−（Ｄ−Ｐｅｎ−Ｎ−ｈｅｘａｎｏａｔｅ−ｃＲＧＤｆＫ）２をそれぞれ１００μＬ（約１μＣｉ）ずつ６週齢ｄｄＹ系雄性マウスに尾静脈投与し、１群３匹とし、投与後１０分、１時間、３時間、６時間に屠殺し、採血、解剖し、各臓器の重量と放射活性を測定した。また、投与後６時間までに排泄された尿および糞の放射活性も測定した。
【００８４】
（結果）
１．テクネチウム錯体生成における配位子濃度の影響
９９ｍＴｃ−（Ｄ−Ｐｅｎ）２は、Ｄ−Ｐｅｎの濃度が０．０１ｍＭまで放射化学的収率９５％以上で得られたが、それ以下では、放射化学的収率の低下が認められた（図２）。一方，９９ｍＴｃ−（ＡＭＰＴ−Ｎ−ａｃｅｔａｔｅ）２の場合では、ＡＭＰＴ−Ｎ−ａｃｅｔａｔｅ濃度が０．０１ｍＭまでは放射化学的収率９０％以上で得られ、それ以下で急激な放射化学的収率の低下が認められた（図２）。
【００８５】
２．９９ｍＴｃ錯体の緩衝液中の安定性
９９ｍＴｃ−（Ｄ−Ｐｅｎ）２および９９ｍＴｃ−（ＡＭＰＴ−Ｎ−ａｃｅｔａｔｅ）２の緩衝液中の安定性を検討したところ、９９ｍＴｃ−（Ｄ−Ｐｅｎ）２の方がより高い安定性を示した（図３）。
【００８６】
そこで配位子にＤ−Ｐｅｎを選択し、ｃ（ＲＧＤｆＫ）を導入した配位子誘導体を作製し、９９ｍＴｃ標識を行った。得られた９９ｍＴｃ−（Ｄ−Ｐｅｎ−Ｈｘ−ｃＲＤＧｆＫ）２の緩衝液中の安定性を検討したところ、６時間後においても未変化体として存在した（図４）。すなわち、９９ｍＴｃ−（Ｄ−Ｐｅｎ−Ｈｘ−ｃＲＤＧｆＫ）２が緩衝液中で安定であることが判明した。
【００８７】
また、９９ｍＴｃ−（Ｄ−Ｐｅｎ−Ｈｘ−ｃＲＤＧｆＫ）２の構造を確認するために、非放射性のレニウム（Ｒｅ）を用いてＲｅ−（Ｄ−Ｐｅｎ−Ｈｘ−ｃＲＤＧｆＫ）２を作製した。質量分析により、Ｒｅと配位子誘導体とが１：２の錯体を形成していることを認めた。９９ｍＴｃ−（Ｄ−Ｐｅｎ−Ｈｘ−ｃＲＤＧｆＫ）２とＲｅ−（Ｄ−Ｐｅｎ−Ｈｘ−ｃＲＤＧｆＫ）２とはＲＰ−ＨＰＬＣの保持時間は一致した。（表１）。
【００８８】
【表１】
【００８９】
このことから、９９ｍＴｃ−（Ｄ−Ｐｅｎ−Ｈｘ−ｃＲＤＧｆＫ）２は、９９ｍＴｃと配位子誘導体とが１：２の錯体を形成していると考えられる。このように、本薬剤設計が標的への親和性が増強された新たな９９ｍＴｃ放射性医薬品の開発に有用であることを認めた。
【００９０】
３．９９ｍＴｃ−（Ｄ−Ｐｅｎ−Ｈｘ−ｃＲＤＧｆＫ）２の体内動態
９９ｍＴｃ−（Ｄ−Ｐｅｎ−Ｈｘ−ｃＲＤＧｆＫ）２をマウスに投与したところ、精製したものおよび未精製のもののいずれも胃への集積は観察されなかった（図５−ＡおよびＢ、並びに図６−ＡおよびＢ）。生体内で９９ｍＴｃが錯体から解離した場合、胃に集積することから、本錯体は生体内においても安定に存在したことを示す。以上の結果は、Ｄ−Ｐｅｎを配位子とし、これに標的分子認識素子を結合することにより、生体内で安定な２価の９９ｍＴｃ錯体が得られることを示す。これらの結果はまた、適切な配位子を選択することにより、生体内において十分に安定な多価９９ｍＴｃ標識薬剤が得られることを強く示唆する。
【図面の簡単な説明】
【００９１】
【図１】多価９９ｍＴｃ標識薬剤の構造を示す模式図である。
【図２】テクネチウム錯体生成における配位子濃度の影響を示す図である。図中、黒四角およびは黒ひし形はそれぞれ、配位子としてＤ−ＰｅｎおよびＡＭＰＴ−Ｎ−ａｃｅｔａｔｅ（ＡＭＰＴ−Ｎ−Ａｃｅと記す）を使用した場合を示す。
【図３】９９ｍＴｃ−（Ｄ−Ｐｅｎ）２および９９ｍＴｃ−（ＡＭＰＴ−Ｎ−ａｃｅｔａｔｅ）２の、緩衝液中の安定性を示す図である。図中、黒四角およびは黒ひし形はそれぞれ、９９ｍＴｃ−（Ｄ−Ｐｅｎ）２（Ｔｃ−９９ｍ−（Ｄ−Ｐｅｎ）２と示す）および９９ｍＴｃ−（ＡＭＰＴ−Ｎ−ａｃｅｔａｔｅ）２（Ｔｃ−９９ｍ−（ＡＭＰＴ−Ｎ−Ａｃｅ）２と記す）を示す。
【図４】９９ｍＴｃ−（Ｄ−Ｐｅｎ−Ｈｘ−ｃＲＤＧｆＫ）２の緩衝液中の安定性を示す図面である。
【図５−Ａ】マウスに投与した精製９９ｍＴｃ−（Ｄ−Ｐｅｎ−Ｈｘ−ｃＲＤＧｆＫ）２の体内動態を、各臓器や各試料における集積率で示した図である。集積率は各臓器の放射能の投与放射能に対する％を各臓器の重さで除した値で示した。
【図５−Ｂ】マウスに投与した精製９９ｍＴｃ−（Ｄ−Ｐｅｎ−Ｈｘ−ｃＲＤＧｆＫ）２の体内動態を、各臓器や各試料における集積率で示した図である。集積率は各臓器や各試料の放射能の投与放射能に対する％を各臓器の重さで除した値で示した。
【図６−Ａ】マウスに投与した未精製９９ｍＴｃ−（Ｄ−Ｐｅｎ−Ｈｘ−ｃＲＤＧｆＫ）２の体内動態を、各臓器や各試料における集積率で示した図である。集積率は各臓器の放射能の投与放射能に対する％を各臓器の重さで除した値で示した。
【図６−Ｂ】マウスに投与した未精製９９ｍＴｃ−（Ｄ−Ｐｅｎ−Ｈｘ−ｃＲＤＧｆＫ）２の体内動態を、各臓器や各試料における集積率で示した図である。集積率は各臓器や各試料の放射能の投与放射能に対する％を各臓器の重さで除した値で示した。
【技術分野】
【０００１】
本発明は、標的部位への集積性が高い放射性標識薬剤に関する。詳しくは、標的分子と結合する化合物と結合させた配位子であって金属と多配位の錯体を形成する配位子と該金属の放射性核種とから形成される錯体を含み、標的部位への集積性が増加した放射性標識薬剤に関する。より詳しくは、標的分子と結合する化合物と結合させた配位子であってテクネチウム（Ｔｃ）またはレニウム（Ｒｅ）と多配位の錯体を形成する配位子と、９９ｍテクネチウム、１８６レニウム、および１８８レニウムからなる群から選ばれるいずれか１の金属放射性核種とから形成される錯体を含む診断用または治療用放射性標識薬剤に関する。また本発明は、前記放射性標識薬剤の調製用配位子に関する。さらに本発明は、前記配位子を含む薬剤と金属放射性核種を含む薬剤とを、別々の包装単位として含んでなるキットに関する。また本発明は、前記放射性標識薬剤を使用することを特徴とする、放射性標識薬剤の標的部位への集積を増加させる方法に関する。
【背景技術】
【０００２】
放射性標識薬剤は、放射性同位元素の核種により標識された化合物を含む薬剤であり、疾患の診断や治療、例えば腫瘍の診断や治療などに広く利用されている。放射性標識薬剤を特定の組織や細胞に集積させることにより、感度の高い診断や有効な治療を行うことができ、また、正常の組織や細胞への副作用を低減することができる。例えば、腫瘍細胞が臓器や組織に転移し、散在しているような場合でも、正常の組織や細胞に影響を与えることなく、有効な診断や治療が行える。放射性標識薬剤を用いた診断や治療においては、有用な核種の選択や、該薬剤を特定の組織や細胞に集積させるための薬剤設計が行われてきた。
【０００３】
テクネチウム−９９ｍ （９９ｍＴｃ）は画像診断に適した半減期（６時間）を有し、放射線の体外計測に適したエネルギー（１４０ＫｅＶ）のγ線のみを放射する。また、モリブデン−９９（９９Ｍｏ）との放射平衡を利用したジェネレータシステム（９９Ｍｏ／９９ｍＴｃジェネレータ）で容易に入手できることから、現在、核医学画像診断に最も汎用されている放射性核種（ＲＩ）である。
【０００４】
９９ｍＴｃ製剤は、主として抗腫瘍抗体や低分子ペプチドなどの標的分子認識素子に９９ｍＴｃと安定な錯体を形成する配位子を結合した化合物（配位子誘導体と称する）と９９ｍＴｃとの錯形成反応により合成される。このような９９ｍＴｃ製剤として、例えば、４座配位子のＮ２Ｓ２と５価のＴｃとが１：１のモル比で錯体を形成したものが知られている。
【０００５】
９９ｍＴｃ製剤は、短時間のうちに極微量の９９ｍＴｃ製剤を高い放射化学的収率で作製するため、反応溶液中には、９９ｍＴｃに比べ大過剰の配位子誘導体が存在する。その結果、９９ｍＴｃ標識溶液中には、標的分子認識素子を有する極微量の９９ｍＴｃ標識薬剤の他に大過剰の配位子誘導体が存在し、標的分子との結合を９９ｍＴｃ標識薬剤と競合するため、９９ｍＴｃ標識薬剤の標的への集積を大きく損なう。
【０００６】
しかし、錯体未形成の配位子誘導体の除去を投与前に無菌的に行うのは容易ではなく、簡便な操作が可能な９９ｍＴｃの特性を損うこととなる。低濃度においても高い収率で９９ｍＴｃ錯体を与える配位子の検討も進められているが、９９ｍＴｃが極低濃度であることからその達成は困難とされている。
【０００７】
テクネチウムは適切な単座、２座あるいは３座配位子と生体内で安定な６配位、３配位、２配位の錯体を形成する（非特許文献１および２）。実際に、テクネチウムと１：２、１：３および１：６のモル比で錯体を形成する配位子も報告されている（非特許文献１、２および４）。しかし、認識素子を導入した場合でもこれらの配位子がＴｃと生体内で安定な錯体を生成するかは明らかでない。
【０００８】
レニウムは、テクネチウムと同じ第７族の遷移元素であり、テクネチウムと類似した化学的性質を有する。レニウムには、放射性同位体である１８６レニウム（１８６Ｒｅ）および１８８レニウム（１８８Ｒｅ）の存在が知られている。１８６Ｒｅおよび１８８Ｒｅはいずれも高エネルギーのβ線を放射し、その半減期はそれぞれ９０．６時間および１６．９時間である。高エネルギーのβ線は細胞殺傷性を示すため、１８６Ｒｅ標識薬剤はがん疾患の治療薬として研究されてきた。例えば、１８６Ｒｅ標識ヒドロキシエチリデン ジホスホン酸（１８６Ｒｅ−ＨＥＤＰ）の転移性骨腫瘍疼痛緩和作用が報告されている。しかし、１８６Ｒｅ−ＨＥＤＰは生体内での安定性が低いため、血液クリアランスの遅延と胃への高い集積という問題を有する。
【０００９】
このように、疾患の診断や治療の分野において、特定の組織や細胞への高い集積性を有し、かつ、生体内での高い安定性を有する放射性標識薬剤の開発が求められている。
【００１０】
【非特許文献１】Wust F, Carlson KE, Katzenellenbogen JA, Spies H, and Johannsen B. Synthesis and binding affinities of new 17 alpha-substituted estradiol-rhenium "n + 1" mixed-ligand and thioether-carbonyl complexes. Steroids 1998: 63: 665-71
【非特許文献２】Jurisson SS, and Lydon JD. Potential technetium small molecule radiopharmaceuticals. Chem Rev 1999: 99: 2205-18
【非特許文献３】Mulder A, Huskens J, and Reinhoudt DN. Multivalency in supramolecular chemistry and nanofabrication. Org Biomol Chem 2004: 2: 3409-24
【非特許文献４】Arano Y. Recent advances in 99mTc radiopharmaceuticals. J Nucl Radiochem Sci 2005: 6: 177-181
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【００１１】
本発明は、上記した従来技術の問題点を解消することを解決すべき課題とした。すなわち、本発明は、標的に効率的に集積し、かつ、生体内での高い安定性を有する放射性標識薬剤を提供し、さらに該放射性標識薬剤を使用する診断および治療の提供を目的とする。
【課題を解決するための手段】
【００１２】
本発明者は、標的分子への結合部位を１箇所有する認識素子（１価の認識素子）を持つ配位子であって金属と多配位の錯体を形成する配位子と該金属とにより形成される錯体は、配位子と同数の認識素子を有する多価錯体であるため、標的分子と強い結合力を獲得し、その結果、錯形成反応後、錯体未形成の配位子を含んだまま投与しても、末梢の標的分子への高い集積が達成されると考えた。そして、上記目的を達成すべく、鋭意研究を行った。配位子として、５価のテクネチウム（Ｔｃ）と配位子とが１：２の錯体（２配位の錯体）を形成するＤ−ペニシラミン（Ｄ−Ｐｅｎと略称することがある）、およびＤ−Ｐｅｎと配位基の配置が異なる１−アミノ−２−メチルプロパン−２−チオール−Ｎ−アセテート（以下、ＡＭＰＴと略称することがある）を用い、また、標的分子認識素子としてがんの新生血管に高発現が認められるインテグリンに親和性を有する環状ペンタペプチドｃ（ＲＧＤｆＫ）を用いて、ｃ（ＲＧＤｆＫ）が結合した配位子を合成し、該配位子と９９ｍＴｃとを反応させて標的分子認識素子を２箇所有する９９ｍＴｃ錯体（２価錯体）を調製した。そして、この９９ｍＴｃ錯体が、体内動態の検討結果から、生体内でも十分に安定であることを見出した。本９９ｍＴｃ錯体は、標的分子認識素子を２箇所有することから、標的分子認識素子を１箇所有する９９ｍＴｃ錯体と比較して、標的分子との結合力が強く、末梢の標的分子への集積量が高い。さらに本発明においては、上記９９ｍＴｃの代わりにレニウム（Ｒｅ）を使用しても、上記同様の錯体を形成し得ることを見出した。本発明はこれらの知見に基づいて達成したものである。
【００１３】
即ち、本発明は以下に関する。
（１）標的分子と結合する化合物と結合させた配位子であって金属と多配位の錯体を形成する配位子と該金属の放射性核種とから形成される錯体を含み、標的部位への集積性が増加した放射性標識薬剤。
（２）診断用または治療用放射性標識薬剤である前記放射性標識薬剤。
（３）標的分子と結合する化合物と結合させた配位子であって５価のテクネチウム（Ｔｃ）と２配位または３配位の錯体を形成するＤ−ペニシラミンまたは１−アミノ−２−メチルプロパン−２−チオール−Ｎ−アセテートと９９ｍＴｃとから形成される錯体を含み、標的部位への集積性が増加した診断用９９ｍＴｃ標識薬剤。
（４）標的分子と結合する化合物と結合させた配位子が環状ペンタペプチドｃ（ＲＧＤｆＫ）と結合させた配位子である前記診断用９９ｍＴｃ標識薬剤。
（５）標的分子と結合する化合物と結合させた配位子であって５価のレニウム（Ｒｅ）と２配位または３配位の錯体を形成するＤ−ペニシラミンまたは１−アミノ−２−メチルプロパン−２−チオール−Ｎ−アセテートと１８６Ｒｅまたは１８８Ｒｅとから形成される錯体を含み、標的部位への集積性が増加した治療用１８６Ｒｅまたは１８８Ｒｅ標識薬剤。
（６）標的分子と結合する化合物と結合させた配位子が環状ペンタペプチドｃ（ＲＧＤｆＫ）と結合させた配位子である前記治療用１８６Ｒｅまたは１８８Ｒｅ標識薬剤。
（７）標的分子と結合する化合物と結合させた配位子であって金属と多配位の錯体を形成する配位子であることを特徴とする、標的部位への集積性が増加した診断用または治療用放射性標識薬剤の調製用配位子。
（８）金属放射性核種が、９９ｍテクネチウム、１８６レニウム、および１８８レニウムからなる群から選ばれるいずれか１の金属放射性核種である前記の放射性標識薬剤の調製用配位子。
（９）金属と多配位の錯体を形成する配位子が、５価のテクネチウムまたはレニウムと２配位あるいは３配位の錯体を形成するＤ−ペニシラミンまたは１−アミノ−２−メチルプロパン−２−チオール−Ｎ−アセテートである前記の放射性標識薬剤の調製用配位子。
（１０）標的分子と結合する化合物と結合させた配位子が環状ペンタペプチドｃ（ＲＧＤｆＫ）と結合させた配位子である前記の放射性標識薬剤の調製用配位子。
（１１）前記いずれかの放射性標識薬剤の調製用配位子を含む薬剤と、該配位子と多配位の錯体を形成する金属放射性核種とを含む薬剤とを、別々の包装単位として含んでなるキット。
（１２）下式（Ｉ）：
【化１】
で示される化合物の製造方法であって、下式（ＩＩ）：
【化２】
で示される化合物を使用することを特徴とする製造方法。
（１３）標的分子と結合する化合物と結合させた配位子であって金属と多配位の錯体を形成する配位子と該金属の放射性核種とから形成される錯体を含む放射性標識薬剤を使用することを特徴とする、放射性標識薬剤の標的部位への集積を増加させる方法。
（１４）金属放射性核種が、９９ｍテクネチウム、１８６レニウム、および１８８レニウムからなる群から選ばれるいずれか１の金属放射性核種である前記方法。
（１５）金属と多配位の錯体を形成する配位子が、５価のテクネチウムまたはレニウムと２配位あるいは３配位の錯体を形成するＤ−ペニシラミンまたは１−アミノ−２−メチルプロパン−２−チオール−Ｎ−アセテートである前記方法。
（１６）標的分子と結合する化合物と結合させた配位子が環状ペンタペプチドｃ（ＲＧＤｆＫ）と結合させた配位子である前記方法。
【発明の効果】
【００１４】
本発明によれば、標的部位に効率的に集積し、かつ、生体内において十分に安定な放射性標識薬剤を提供できる。本発明に係る放射性標識薬剤は、標的分子への結合部位を１箇所有する標的分子認識素子（１価の標的分子認識素子）を持つ配位子であって金属と多配位の錯体を形成する配位子と該金属の放射性核種とにより形成される錯体を含み、この錯体は錯体を形成する配位子と同数の標的分子認識素子を有する多価錯体であるため、従来使用されていた１価の錯体と比較して、標的に高い集積性を示す。そのため、本発明に係る放射性標識薬剤を使用することにより、標的部位への放射性標識薬剤の集積を従来のものと比較して増加させることができ、その結果、錯体未形成の配位子を含んでいても、放射性標識薬剤を用いた画像診断や、がん疾患などの内部放射線治療において高い感度および効果を提供できる。具体的には例えば、標的部位に効率的に集積し、かつ、生体内において十分に安定な、９９ｍＴｃ標識薬剤、１８６Ｒｅ標識薬剤および１８８Ｒｅ標識薬剤を提供できる。本発明に係る９９ｍＴｃ標識薬剤は、放射性標識薬剤を用いた画像診断用の診断剤として有用であり、また、１８６Ｒｅ標識薬剤および１８８Ｒｅ標識薬剤はがんの内部放射線治療に有用である。
【発明を実施するための最良の形態】
【００１５】
本発明は、標的分子認識素子と結合させた配位子であって金属と多配位の錯体を形成する配位子と該金属の放射性核種とから形成される錯体を含み、標的部位への集積性が増加した放射性標識薬剤に関する。
【００１６】
用語「錯体」とは、金属および金属類似元素の原子またはイオンを中心にして、配位子が配位した物質を意味する。配位とは、配位子が中心の金属と配位結合を形成して中心金属の周囲に配列することをいう。錯体は、配位子と金属との配位結合により形成される。配位結合とは、１本の結合にあずかる２個の原子価電子が、一方の原子のみから提供されている結合をいう。多配位とは、複数の配位子が中心の金属と配位結合を形成して中心金属の周囲に配列することをいう。ｎ配位とは、ｎ分子の配位子が中心の金属と配位結合を形成して中心金属の周囲に配列することをいう（金属が遷移金属である場合、ｎは一般的に２から９である）。錯体において、中心金属の周囲に集まって配位結合をつくる配位子の数を配位数という。
【００１７】
用語「配位子」とは、錯体中で中心金属に配位結合している他の原子（配位原子）を含む化合物を意味する。配位子には多数の種類があり、２つ以上の可能な配位原子を含む化合物を多座配位子、１つである場合を単座配位子、２つである場合を２座配位子、３つである場合を３座配位子のように称する。
【００１８】
用語「標的分子認識素子」とは、標的分子に結合する化合物、好ましくは特異的に結合する化合物を意味する。標的分子に特異的に結合するとは、標的分子には結合するが、標的分子以外の分子には結合しないか、弱く結合することをいう。標的分子認識素子として、例えば、タンパク質、ペプチド、抗体、および抗体断片などを挙げることができる。標的分子認識素子を配位子と結合させて金属と錯体を形成させることにより、該錯体を標的分子、すなわち標的部位に結合させることができる。したがって、標的分子認識素子を選択して用いることにより、所望の標的部位に錯体を集積させることができる。
【００１９】
本発明において、錯体を形成する金属は、遷移金属に属する金属であり、配位子と２配位以上の配位結合を形成する金属が使用される。金属原子の電荷は特に限定されず、例えば、１価、３価、または５価の電荷をもつ金属原子を挙げることができる。金属として、好ましくは金属放射性核種が使用される。金属放射性核種として具体的には、９９ｍＴｃ、１８６Ｒｅ、および１８８Ｒｅを好ましく例示できる。金属放射性核種はこれら具体例に限定されず、放射標識薬剤を用いた診断や、がん疾患などの内部放射線治療などの目的に適当な放射線、放射線量、半減期を有する限りにおいていずれも使用することができる。診断および治療において正常の組織や細胞への影響を少なくするという観点から、短半減期金属放射性核種が好ましく使用される。
【００２０】
本発明において、錯体を形成する配位子は、遷移金属に属する金属と配位結合により多配位の錯体を形成し得る化合物が使用される。例えば、９９ｍＴｃと配位結合により多配位の錯体を形成し得る化合物として、５価のＴｃと１：２の錯体を形成するＤ−ペニシラミン（Ｄ−Ｐｅｎと略称することがある）、１−アミノ−２−メチルプロパン−２−チオール−Ｎ−アセテート（以下、ＡＭＰＴと略称することがある）、ヒドロキサムアミド（これらは２価錯体を形成する）、３価のＴｃと１：３の錯体を形成するチウオウレア、ジメチルフォスフィノエタン、Ｏ−フェニレンビス（ジメチルアルシン）（これらは３価錯体を形成する配位子）、１価のＴｃと１：６の錯体を形成するイソニトリル（６価錯体を形成する）を挙げることができる。一方、レニウムがテクネチウムと同じ第７族の遷移元素であり、テクネチウムと類似した化学的性質を有することから、テクネチウムと錯体を形成する配位子は、レニウムと同様の錯体を形成する。したがって、上記例示した配位子はいずれも、１８６Ｒｅおよび１８８Ｒｅと錯体を形成する配位子として使用できる。配位子はこれら具体例に限定されず、金属と多配位の錯体を形成する化合物である限りにおいていずれも使用することができる。
【００２１】
本発明において、標的分子認識素子として、タンパク質、ペプチド、抗体、および抗体断片を例示できる。具体的には、炎症や腫瘍細胞浸潤などに伴う組織構築において高い発現が認められるタンパク質や腫瘍細胞に特異的に発現するタンパク質に結合するリガンド、抗体および抗体のＦａｂ断片などを例示できる。より具体的には、がんの新生血管に高発現が認められるインテグリンに親和性を有する環状ペンタペプチドｃ（ＲＧＤｆＫ）を例示できる。そのほか、造骨性のがん（骨転移）に多く存在するヒドロキシアパタイトへの親和性を有するビスフォスフォン酸やオリゴアスパラギン酸、オリゴグルタミン酸、マクロファージの表面に存在する走査因子の受容体と親和性があるペプチド（ｆＭｅｔ−Ｌｅｕ−Ｐｈｅ）、がん細胞に発現が認められる葉酸受容体と結合する葉酸とその誘導体などが例示できる。標的分子認識素子は、例示された化合物に限定されず、標的分子に結合する化合物であればいずれを使用することもできる。
【００２２】
本発明に係る放射性標識薬剤は、標的分子認識素子と結合させた配位子であって金属と多配位の錯体を形成する配位子と該金属の放射性核種とから形成される錯体を有効成分とするものである。このような錯体は、標的分子認識素子と結合させた配位子であって金属と多配位の錯体を形成する配位子を含むため、配位子と同数の標的分子認識素子を有する（図１参照）。すなわち、このような錯体は複数の標的分子結合部位を有する。このように、標的分子認識素子と結合させた配位子であって金属と多配位の錯体を形成する配位子含み、その結果錯体中に配位子と同数の標的分子認識素子を有する錯体を多価錯体と称し、そして多価の錯体を有効成分として含む放射性標識薬剤を多価放射性標識薬剤と称する。例えば、標的分子認識素子と結合させた配位子であって５価金属と２配位の錯体を形成する配位子を含む錯体は、錯体中に２箇所の標的分子結合部位を有し、２価錯体と称する。また、標的分子認識素子と結合させた配位子であって３価金属と３配位の錯体を形成する配位子を含む錯体は、錯体中に３箇所の標的分子結合部位を有し、３価錯体と称する。標的分子認識素子と結合させた配位子であって１価金属と６配位の錯体を形成する配位子を含む錯体は、錯体中に６箇所の標的分子結合部位を有し、６価錯体と称する。
【００２３】
標的分子への結合部位を２箇所有する化合物（２価の化合物）は標的分子への結合部位を１箇所有する化合物（１価の化合物）に比べて標的分子との高い親和性や集積を示すことが知られている（非特許文献３）。標的分子へ結合する化合物として抗体を例にとると、２価のＩｇＧ抗体は、１価のＦａｂ断片よりも少なくとも５０〜１００倍、多価抗体のＩｇＭはＩｇＧの１０４倍の抗原との結合力（ａｖｉｄｉｔｙ）を有する。
【００２４】
このことから、多価錯体は１価の錯体と比較して、標的分子との高い親和性や集積を示す。したがって、多価錯体を含む放射性標識薬剤は、標的部位に高い集積性を示す。
【００２５】
本発明に係る放射性標識薬剤は、放射性標識薬剤を用いた画像診断や、内部放射線治療に使用することができる。本発明に係る放射性標識薬剤は、がん疾患の診断や治療に好ましく使用されるが、適用疾患は本疾患に限定されず、画像診断や内部放射線治療が適用される疾患であればいずれにも適用できる。診断や治療の対象となる標的の特性にしたがって、放射性標識薬剤の有効成分である錯体に結合させる標的分子認識素子を選択することにより、該標的の診断や治療が可能であり、本放射性標識薬剤は診断および治療の分野で広く使用できる。
【００２６】
本発明に係る放射性標識薬剤の投与経路として、静脈内投与あるいは動脈内投与を好ましく挙げることができる。投与経路はこれら経路に限定されず、本放射性標識薬剤の投与後、その作用が有効に発現し得る経路であればいずれも利用できる。
【００２７】
本発明に係る放射性標識薬剤の放射活性強度は、本標識薬剤を投与したことにより目的を達成し得る強度であり、かつ、被験者の放射線被爆が可能な限り低い臨床投与量である限りにおいて任意である。放射性強度は、放射性標識薬剤を使用する一般的な診断方法や治療方法で使用されている放射活性強度を参考にして決定できる。
【００２８】
本発明に係る放射性標識薬剤は、上記錯体を有効成分として含むほか、必要に応じて、１種類または２種類以上の医薬的に許容される担体（医薬用担体）を含むことができる。医薬用担体として、ｐＨを調整するための酸、塩基、緩衝液、安定化剤、等張化剤、保存剤を例示できる。
【００２９】
本発明に係る放射性標識薬剤は、好ましくは、標的分子認識素子と結合させた配位子であって金属と多配位の錯体を形成する配位子を含む薬剤と、該金属の放射性核種を含む薬剤とを、別々の包装単位として含んでなるキットとして提供される。
【００３０】
本発明に係る放射性標識薬剤の一態様として、９９ｍＴｃ標識薬剤を挙げることができる。本発明に係る９９ｍＴｃ標識薬剤は、標的分子認識素子と結合させた配位子であってテクネチウムと多配位の錯体を形成する配位子と９９ｍＴｃとから形成される９９ｍＴｃ錯体を含むことを特徴とする。本発明に係る９９ｍＴｃ標識薬剤は、９９ｍＴｃが放射線の体外計測に適したエネルギーのγ線のみを放射することから、放射性標識薬剤を用いた画像診断用の診断剤として好ましく使用できる。
【００３１】
本発明に係る９９ｍＴｃ標識薬剤の有効成分である９９ｍＴｃ錯体を形成する配位子は、標的分子認識素子と結合させた配位子であってテクネチウムと多配位の錯体を形成する配位子であることを特徴とし、本発明に係る９９ｍＴｃ標識薬剤の調製に使用される。本発明において用いられる配位子は、９９ｍＴｃと配位結合により多配位の錯体を形成し得る化合物であればいずれを使用することもできる。９９ｍＴｃの配位子として、５価のＴｃと１：２の錯体を形成するＤ−ペニシラミン（Ｄ−Ｐｅｎと略称することがある）、１−アミノ−２−メチルプロパン−２−チオール−Ｎ−アセテート（以下、ＡＭＰＴと略称することがある）、ヒドロキサムアミド（これらは２価錯体を形成する）、３価のＴｃと１：３の錯体を形成するチウオウレア，ジメチルフォスフィノエタン、Ｏ−フェニレンビス（ジメチルアルシン）（これらは３価錯体を形成する配位子）、１価のＴｃと１：６の錯体を形成するイソニトリル（６価錯体を形成する）を例示できる。
【００３２】
本発明に係る９９ｍＴｃ標識薬剤の有効成分である９９ｍＴｃ錯体は、標的分子認識素子と結合させた配位子であってＴｃと多配位の錯体を形成する配位子と９９ｍＴｃとの錯体であることを特徴とする。多配位の錯体を形成する配位子とは、２配位以上の配位数で錯体を形成する配位子を意味する。一般に遷移金属の場合、配位数が２〜９配位の錯体が知られており、テクネチウムが遷移金属であることから、配位数は２〜９配位が好ましい。また、電子的および立体的な安定性の観点から、配位数は２〜６配位であることがより好ましい。さらに、テクネチウムが単座、２座あるいは３座配位子と生体内で安定な６配位、３配位、２配位の錯体を形成する（非特許文献１および２）ことが知られていることから、配位数は２配位、３配位、および６配位であることがさらにより好ましい。例えば、テクネチウムは、Ｄ−ＰｅｎまたはＡＭＰＴと２配位と３配位からなる１：２の混合配位子錯体を形成し、そしてイソニトリルと６配位の錯体を形成する。
【００３３】
本発明に係る９９ｍＴｃ標識薬剤の有効成分である９９ｍＴｃ錯体は、標的分子認識素子と結合させた配位子であってＴｃと多配位の錯体を形成する配位子を含むため、配位子と同数の標的分子認識素子を有する（図１）。すなわち、本９９ｍＴｃ錯体は複数の標的分子結合部位を有する。このように、標的分子認識素子と結合させた配位子であってＴｃと多配位の錯体を形成する配位子含み、その結果錯体中に配位子と同数の標的分子認識素子を有する錯体を多価Ｔｃ錯体と称し、そして多価の錯体を有効成分として含む９９ｍＴｃ標識薬剤を多価Ｔｃ標識薬剤と称する。例えば、標的分子認識素子と結合させた配位子であって５価のＴｃと２配位の錯体を形成する配位子を含む９９ｍＴｃ錯体は、錯体中に２箇所の標的分子結合部位を有し、２価Ｔｃ錯体と称する。また、標的分子認識素子と結合させた配位子であって３価のＴｃと３配位の錯体を形成する配位子を含む９９ｍＴｃ錯体は、錯体中に３箇所の標的分子結合部位を有し、３価Ｔｃ錯体と称する。標的分子認識素子と結合させた配位子であって１価のＴｃと６配位の錯体を形成する配位子を含む９９ｍＴｃ錯体は、錯体中に６箇所の標的分子結合部位を有し、６価Ｔｃ錯体と称する。
【００３４】
本発明に係る９９ｍＴｃ標識薬剤の有効成分である錯体は多価錯体であり、１価の錯体と比較して、標的分子との高い親和性や集積を示す。
【００３５】
したがって、本発明に係る多価９９ｍＴｃ標識薬剤は、従来使用されていた１価９９ｍＴｃ標識薬剤と比較して、標的部位に高い集積性を示し、そのため放射性標識薬剤を用いた画像診断において高い感度を提供できる。また、本発明に係る多価Ｔｃ標識薬剤は、生体内において十分な安定性を示す。
【００３６】
このように、本発明に係る多価９９ｍＴｃ標識薬剤の使用により、標的部位への放射性錯体の集積を増加させることができ、その結果、放射性標識薬剤を用いた画像診断において高い感度を提供できる。
【００３７】
例えば、がんの新生血管に高発現が認められるインテグリンに親和性を有するｃ（ＲＧＤｆＫ）ペプチドを結合させたＤ−Ｐｅｎと９９ｍＴｃとから形成された２配位の９９ｍＴｃ錯体は、標的分子であるインテグリンへの結合部位を２箇所有する２価錯体であり、１価９９ｍＴｃ錯体と比較して、標的部位であるがん新生血管への集積が増加する。また、この２価９９ｍＴｃ錯体は生体内において十分な安定性を示した。したがって、このような錯体を含む９９ｍＴｃ標識薬剤は、がんの診断において高い感度を提供できる。
【００３８】
本発明に係る９９ｍＴｃ標識薬剤は、例えば、標的分子認識素子と結合させた配位子を、９９ｍＴｃを含む過テクネチウム酸またはその塩および過テクネチウム酸還元剤と混合することにより調製できる。過テクネチウム酸還元剤は、過テクネチウム酸塩を強固なキレート化合物の形成に有利な低原子価状態に還元するために使用される。過テクネチウム酸還元剤としては医薬上許容され得る種々のものが使用できるが、好ましいものとして第一スズ塩、亜ニチオン酸ナトリウムを例示できる。第一スズ塩は２価のスズが形成する塩であって、例えば塩化物イオン、フッ化物イオンなどのハロゲン化イオン、硫酸イオン、硝酸イオンなどの無機酸残基イオン、酒石酸イオン、酢酸イオン、クエン酸イオンなどの有機酸残基イオンとの間で形成される塩をいう。
【００３９】
具体的には、本発明に係る９９ｍＴｃ標識薬剤は、まず凍結乾燥ＧＨ−キットに９９ｍＴｃ溶液を加えて反応させることにより９９ｍＴｃ−ＧＨを調製し、次いで９９ｍＴｃ−ＧＨを、標的分子認識素子と結合させた配位子と混合することにより調製できる。本キットは、１バイアル中にα−Ｄ−グルコヘプトン酸 ４ｍｇと塩化第一スズ １．２μｇとを含み、過テクネチウム酸（９９ｍＴｃＯ４−）を加えたときのｐＨが８になるよう調整したものである。標的分子認識素子と結合させた配位子として、下式（Ｉ）で示されるｃ（ＲＧＤｆＫ）ペプチド結合Ｄ−Ｐｅｎを例示できる。
【００４０】
【化３】
【００４１】
上記式（Ｉ）で示されるｃ（ＲＧＤｆＫ）ペプチド結合Ｄ−Ｐｅｎは、下式（ＩＩ）で示される化合物を使用して製造できる。
【００４２】
【化４】
【００４３】
本発明に係る放射性標識薬剤の一態様として、１８６Ｒｅまたは１８８Ｒｅ標識薬剤を挙げることができる。本発明に係る１８６Ｒｅまたは１８８Ｒｅ標識薬剤は、標的分子認識素子と結合させた配位子であってレニウムと多配位の錯体を形成する配位子と１８６Ｒｅまたは１８８Ｒｅとから形成される錯体を含むことを特徴とする。本発明に係る１８６Ｒｅまたは１８８Ｒｅ標識薬剤は、１８６Ｒｅおよび１８８Ｒｅがいずれも細胞殺傷性を示す高エネルギーのβ線を放射することから、内部放射線治療剤として好ましく使用できる。
【００４４】
レニウムは、テクネチウムと同じ第７族の遷移元素であり、テクネチウムと類似した化学的性質を有することから、テクネチウムと錯体を形成する配位子は、レニウムと同様の錯体を形成する。
【００４５】
したがって、１８６Ｒｅまたは１８８Ｒｅ標識薬剤の有効成分である１８６Ｒｅ錯体または１８８Ｒｅ錯体を形成する配位子として、テクネチウムと多配の錯体を形成する上記配位子を使用できる。実際、レニウムの安定性同位体である非放射性の１８５／１８７Ｒｅは、Ｄ−Ｐｅｎと２配位の錯体を形成した。また、１８５／１８７Ｒｅは、ｃ（ＲＧＤｆＫ）ペプチドを結合させたＤ−Ｐｅｎと２配位の錯体を形成した。配位子は上記例示した配位子に限定されず、１８６Ｒｅまたは１８８Ｒｅと多配位の錯体を形成する化合物である限りにおいていずれも使用することができる。
【００４６】
本発明に係る１８６Ｒｅまたは１８８Ｒｅ標識薬剤の有効成分である錯体は多価錯体であり、１価の錯体と比較して、標的分子との高い親和性や集積を示す。
【００４７】
したがって、本発明に係る多価１８６Ｒｅまたは１８８Ｒｅ標識薬剤は、標的部位に高い集積性を示し、そのため内部放射線治療において高い効果を示すことができる。また、本発明に係る多価標識薬剤は、生体内において十分な安定性を示す。
【００４８】
例えば、がんの新生血管に高発現が認められるインテグリンに親和性を有するｃ（ＲＧＤｆＫ）ペプチドを結合させたＤ−Ｐｅｎと、１８６Ｒｅまたは１８８Ｒｅとから形成された２配位の錯体は、標的分子であるインテグリンへの結合部位を２箇所有する２価錯体であり、１価錯体と比較して、標的部位であるがん新生血管への集積が増加する。また、この２価１８６Ｒｅまたは１８８Ｒｅ錯体は、上記２価９９ｍＴｃ錯体と同様に生体内において十分に安定である。したがって、この２価１８６Ｒｅまたは１８８Ｒｅ錯体を有効成分として含む放射性標識薬剤は、がん疾患の治療剤として有用性が高い。
【００４９】
本発明に係る１８６Ｒｅまたは１８８Ｒｅ標識薬剤は、例えば、標的分子認識素子と結合させた配位子を、１８６Ｒｅまたは１８８Ｒｅを含む過レニウム酸またはその塩および過レニウム酸還元剤と混合することにより調製できる。過レニウム酸還元剤としては、過テクネチウム酸還元剤として上記例示した化合物を使用することができる。
【００５０】
以下、実施例を示して本発明をより具体的に説明するが、本発明は以下に示す実施例によって何ら限定されるものではない。
【実施例１】
【００５１】
標的分子認識素子としてがんの新生血管に高発現が認められるインテグリンに親和性を有する環状ペンタペプチドｃ（ＲＧＤｆＫ）を用い、該ペプチドを結合させた配位子を製造した。そして、該配位子を用いて２配位の９９ｍＴｃ錯体を製造した。また、製造した９９ｍＴｃ錯体の安定性および体内動態の評価を行った。さらに、該配位子と９９ｍＴｃとの錯形成で生成する錯体の化学構造を非放射性のレニウムを用いて検討した。
【００５２】
（実験材料と方法）
１．一般的方法
過テクネチウム酸（９９ｍＴｃＯ４−）は、富士フイルムＲＩファーマ株式会社製の９９Ｍｏ／９９ｍＴｃジェネレータを用いた。薄層クロマトグラフィー（ＴＬＣ）には、シリカゲルプレート（Ｓｉｌｉｃａ ｇｅｌ ６０Ｆ２５４、メルク社製）を使用した。セルロースアセテート電気泳動（ＣＡＥ）はべロナールバッファー（ｐＨ８．６）を用い、１ｍＡで３０分間泳動した。逆相ＨＰＬＣ（ＲＰ−ＨＰＬＣ）カラムはＣｏｓｍｏｓｉｌ ５Ｃ１８−ＡＲ−３００ カラム（４．６ｍｍ×１５０ｍｍ、ナカライテスク株式会社）を使用し、移動相Ａ（０．０１Ｍ リン酸緩衝液（ｐＨ６．０））、移動相Ｂ（ＭｅＯＨ）を０−１８分 Ｂ＝０−６０％；１８−２１分 Ｂ＝６０−１００％で直線勾配で変化させる方法（方法１）、または０−１８分 Ｂ＝０−６０％、１８−２６分 Ｂ＝６０−１００％、２６−３１分 Ｂ＝１００％で直線勾配で変化させる方法（方法２）で行った。分取用ＲＰ−ＨＰＬＣカラムはＣｏｓｍｏｓｉｌ ５Ｃ１８−ＡＲ−３００ カラム（２０ｍｍ×１５０ｍｍ、ナカライテスク株式会社）を使用し、流速５ｍＬ／ｍｉｎで０−５分 Ｂ＝０％、５−４５分 Ｂ＝０−１００％で直線勾配で変化させる方法で行った。１Ｈ−ＮＭＲはＪＥＯＬ−ＡＬＰＨＡ ４００ スペクトロメーター（日本電子株式会社）を用いた。ＦＡＢ−ＭＳはＪＥＯＬ ＪＭＳ−ＨＸ−１１０ Ａ マススペクトロメーター（日本電子株式会社）を用いて測定した。ＭＡＬＤＩ−ＴＯ−ＭＳはＫｒａｔｏｓ Ａｘｉｍａ ＣＦＲ ａｐｐａｒａｔｕ（島津製作所）を用いて測定した。Ｃｙｃｌｏ（Ａｒｇ（Ｐｂｆ）−Ｇｌｙ−Ａｓｐ（ＯｔＢｕ）−Ｄ−Ｐｈｅ−Ｌｙｓ）の合成は以前報告された方法（Haubner R, Wester HJ, Reuning U, Senekowitsch-Schmidtke R, Diefenbach B, Kessler H, Stocklin G, and Schwaiger M. Radiolabeled alpha(v)beta3 integrin antagonists: a new class of tracers for tumor targeting. J Nucl Med 1999: 40: 1061-71）に従って合成した。その他の試薬はすべて特級のものをそのまま使用した。
【００５３】
２．Ｓ−Ｔｒｉｔｙｌ−ＡＭＰＴ−Ｎ−ａｃｅｔａｔｅの合成
配位子として用いるＳ−トリチル−ＡＭＰＴ−Ｎ−アセテート（Ｓ−Ｔｒｔ−ＡＭＰＴ−Ｎ−Ａｃｅ）を合成した。以下に説明する。
【００５４】
【化５】
【００５５】
（実験１）
２，２，５，５−ｔｅｔｒａｍｅｔｙｌ−３，４−ｄｉｔｈｉａｈｅｘａｍｅ−１，６−ｄｉａｌ（１）の合成：
乾燥ＣＣｌ４（１４０ｍＬ）に溶解したイソブチルアルデヒド（１８３ｍＬ，２．０ｍｏｌ）溶液にＳ２Ｃｌ２（８０ｍＬ，１．０ｍｏｌ）を５０−５５℃を維持したまま滴下した。反応時に発生したＨＣｌガスはＮ２ガスにより除去した。反応液を２時間攪拌後、１０Ｎ ＮａＯＨ（１１０ｍＬ）をゆっくりと滴下し、ｐＨを１０に調節した。ジエチルエーテル（１００ｍＬ）を加え、有機層をブライン（ｂｒｉｎｅ）（１００ｍＬ）により洗浄した後、ＭｇＳＯ４により乾燥させた。溶媒を留去後、残査を減圧蒸留（ｂｐ １１３−１１４℃／６ｍｍＨｇ）により精製し、無色の油状物質を得た。その後冷却することにより結晶として化合物１を得た（１０５．７ｇ，５１．２％）。１Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）：δ １．３０（ｓ，１２Ｈ，ＣＨ３）、９．００（ｓ，２Ｈ，ＣＨＯ）；ＦＡＢＭＳ：ｍ／ｚ ２０７［（Ｍ＋Ｈ）＋］。
【００５６】
（実験２）
２，２，５，５−ｔｅｔｒａｍｅｔｈｙｌ−３，４−ｄｉｔｈｉａｈｅｘａｎｅ−１，６−ｄｉａｌ ｂｉｓｏｘｉｍｅ（２）の合成：
化合物１（４．１２ｇ，２０ｍｍｏｌ）とヒドロキシルアミン ヒドロクロライド（４．１７ｇ，６０ｍｍｏｌ）を乾燥エタノール（２０ｍＬ）に溶解した。次いで、その溶液に１５Ｎ ＮａＯＨ（３．８ｍＬ，５７ｍｍｏｌ）を滴下した。３時間還流した後、水（１００ｍＬ）を加えた。ジエチルエーテル（４×２０ｍＬ）により抽出し、無水Ｎａ２ＳＯ４により乾燥させた。溶媒を留去した後、粗生成物を油状物質として得た。酢酸エチル−ｎ−ヘキサンにより再結晶を行い、化合物２を無色の結晶として得た（２．４８ｇ，５２．５％）。１Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）：δ １．３０（ｓ，１２Ｈ，ＣＨ３），７．３０（ｓ，２Ｈ，ＣＨ＝ＮＯＨ）；ＦＡＢＭＳ：ｍ／ｚ ２３７［（Ｍ＋Ｈ）＋］。
【００５７】
（実験３）
１−ａｍｉｎｏ−２−ｍｅｔｈｙｌ−２−（Ｓ−ｔｒｉｔｙｌ）−ｐｒｏｐａｎｅｔｈｉｏｌ（Ｓ−Ｔｒｉｔｙｌ−ＡＭＰＴ，３）の合成：
テトラヒドロフラン（ＴＨＦ，１２ｍＬ）に溶解したＬｉＡｌＨ４（４８２ｍｇ，１２ｍｍｏｌ）を、ＴＨＦ（８ｍＬ）に溶解した化合物２（９４５ｍｇ，４ｍｍｏｌ）にゆっくりと滴下した。窒素気流下１５時間激しく攪拌しながら還流し、次いで氷上で反応液を０℃に冷却した。酢酸エチル（３．２ｍＬ）を加えた後、６Ｎ ＨＣｌを加えｐＨ１．０に調整した。溶媒を留去した後、残査をトリフルオロ酢酸（ＴＦＡ，１１．４ｍＬ）に溶解し、次いでトリフェニルメタノール（２．１ｇ，８ｍｍｏｌ）を加えた。窒素気流下２６時間攪拌後、ＴＦＡを窒素気流により留去した。残査をジクロロメタン（ＤＣＭ，１４ｍＬ）に溶解した後、３Ｎ ＮａＯＨにより溶液のｐＨを１０−１１に調整した。有機層を分取し、水（３×７ｍＬ）、次いで飽和ＮａＨＣＯ３（２×３ｍＬ）、ブライン（２×３ｍＬ）により洗浄した。有機層を無水Ｎａ２ＳＯ４で乾燥後、溶媒を留去した。残査を溶出溶媒ＤＣＭ−ＭｅＯＨ（１０：１）とするシリカゲルクロマトグラフィにより精製し、化合物３を薄い茶色の油状物質として得た（２３４ｍｇ，８．４％）。１Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）：δ １．００（ｓ，６Ｈ，ＣＨ３），１．５３（ｓ，２Ｈ，ＮＨ２），１．７６（ｓ，ＣＨ２），７．２６−７．１６（ｍ，９Ｈ，ａｒｙｌ），７．６０−７．６３（ｄ，６Ｈ，ａｒｙｌ）；ＦＡＢＭＳ：ｍ／ｚ ３４８［（Ｍ＋Ｈ）＋］。
【００５８】
（実験４）
Ｓ−Ｔｒｉｔｙｌ−ＡＭＰＴ−Ｎ−ａｃｅｔａｔｅ（Ｓ−Ｔｒｔ−ＡＭＰＴ−Ｎ−Ａｃｅ）の合成：
化合物３（１８８ｍｇ，０．５１ｍｍｏｌ）を乾燥ＤＣＭ（２ｍＬ）に溶解し、５Ｎ ＮａＯＨ（０．１ｍＬ）を加えた。反応液を窒素気流下１．５時間攪拌後、溶媒を留去した。残査を水に溶解し、６Ｎ ＨＣｌによりｐＨを２．０に調整した。生じた沈殿をろ取し、０．０８Ｎ ＨＣｌにより洗浄し、Ｓ−Ｔｒｔ−ＡＭＰＴ−Ｎ−Ａｃｅを薄灰色結晶として得た（３６．２ｍｇ，７２％）。１Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤ３ＯＤ）：１．２０（ｓ，６Ｈ，ＣＨ３），１．８３（ｓ，１Ｈ，ＮＨ），３．０９（ｓ，２Ｈ，ＮＨＣＨ２ＣＯ），３．２５（ｓ，２Ｈ，ＳＣ（ＣＨ３）２ＣＨ２ＮＨ），７．１２−７．２６（ｍ，９Ｈ，ａｒｙｌ），７．５６−７．６０（ｄ，５Ｈ，ａｒｙｌ）；ＦＡＢＭＳ：ｍ／ｚ ４０６［（Ｍ＋Ｈ）＋］。
【００５９】
４．Ｄ−Ｐｅｎ（Ｔｒｔ）−ＯｔＢｕ−Ｎ−ｈｅｘａｎｏａｔｅ（９）の製造
配位子として用いるＤ−Ｐｅｎ（Ｔｒｔ）−ＯｔＢｕ−Ｎ−ｈｅｘａｎｏａｔｅ（９）を合成した。以下説明する。
【００６０】
【化６】
【００６１】
（実験５）
Ｎ，Ｎ´−ｄｉｉｓｏｐｒｏｐｙｌ−Ｏ−ｔｅｒｔ−ｂｕｔｙｌｉｓｏｕｒｅａ（５）の合成：
乾燥したナス型フラスコにターシャリー−ブタノール（２．７８ｇ，３７．５ｍｍｏｌ）を入れ、窒素気流下３０℃でジイソプロピルカルボジイミド（ＤＩＣ，４．０８ｇ，３２．３ｍｍｏｌ）およびＣｕＣｌを少量加えた。反応溶液を窒素気流下３０℃で４日間攪拌した。ポリ（４−ビニルピリジン）（カチオン交換レジン，０．６５ｇ）とＤＣＭ（１６．５ｍＬ）を加え、スラリー状になった溶液をさらに１５分間攪拌した。固形物をろ去し、溶出液を留去後、粗結晶を無色透明のオイルとして得た（５．９９ｇ，最高９２．６％）。この化合物は未精製のまま次の反応に用いた。ＦＡＢＭＳ：ｍ／ｚ ２０１［（Ｍ＋Ｈ）＋］。
【００６２】
（実験６）
Ｆｍｏｃ−Ｄ−ｐｅｎｉｃｉｌｌａｍｉｎｅ（Ｔｒｔ）−ＯｔＢｕ（６）の合成：
Ｆｍｏｃ−Ｄ−ペニシラミン（ターシャリー）−ＯＨ（５００ｍｇ，０．８１５ｍｍｏｌ）をＤＣＭ（１５ｍＬ）に溶解し、化合物５（１．１４２ｇ，５．７０３ｍｍｏｌ）をゆっくりと加えた。窒素気流下、１５時間攪拌後、沈殿物をろ去した。ろ液の溶媒を留去後、残査を溶出溶媒ｎ−ヘキサン−ジエチルエーテル（２：１）とするシリカゲルクロマトグラフィにより精製し、化合物６を白色固体として得た（５２０．９ｍｇ，９５．４％）。１Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）：δ １．００（ｓ，３Ｈ，ＣＨ３）、１．１１（ｓ，３Ｈ，ＣＨ３）、１．４６（ｓ，９Ｈ，ｔＢｕ），１．５４（ｂｒｓ，１Ｈ，ＮＨ）、３．６２−３．６９（ｄ，１Ｈ，ＣＯＣＨＮＨ）、４．２１−４．４３（ｍ，３Ｈ，ＣＨ２ＣＨ−ｆｌｕｏｒｅｎｙｌ），７．１３−７．４５（ｍ，１９Ｈ，ａｒｙｌ），７．５３−７．７０（ｄ，２Ｈ，ａｒｙｌ）、７．７２−７．８３（ｄ，２Ｈ，ａｒｙｌ）；ＦＡＢＭＳ：ｍ／ｚ ６９２［（Ｍ＋Ｎａ）＋］。
【００６３】
（実験７）
Ｄ−Ｐｅｎｉｃｉｌｌａｍｉｎｅ（Ｔｒｔ）−ＯｔＢｕ（７）の合成：
Ｆｍｏｃ−Ｄ−ペニシラミン（ターシャリー）−ＯｔＢｕ（５００ｍｇ，０．７４６ｍｍｏｌ）を乾燥ＤＣＭ（４０ｍＬ）に溶解し、次いで１，８−ジアザビシクロ［５．４．０］−７−ウンデセン（ＤＢＵ）（１．１４ｍＬ，７．４６ ｍｍｏｌ）を加えた。室温で２５時間攪拌した後、溶媒を留去した。残査を溶出溶媒ｎ−ヘキサン−酢酸エチル（３：１→２：１）とするシリカゲルクロマトグラフィにより精製し、化合物７を無色の油状物質として得た（２８０．９ｍｇ，８４．１％）。１Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）：δ １．０８（ｓ，３Ｈ，ＣＨ３），１．１４（ｓ，３Ｈ，ＣＨ３），１．２８（ｓ，９Ｈ，ｔＢｕ），７．１０−７．２６（ｍ，９Ｈ，ａｒｙｌ），７．５５−７．６１（ｄ，２Ｈ，ａｒｙｌ）；ＦＡＢＭＳ：ｍ／ｚ ４４８［（Ｍ＋Ｈ）＋］，８９５［（２Ｍ＋Ｈ）＋］。
【００６４】
（実験８）
Ｍｅｔｈｙｌ ６−ｂｒｏｍｏｈｅｘａｎｏａｔｅ（４）の合成：
メタノール（２５ｍＬ）を−１０℃に冷却し、撹拌しながらＳＯＣｌ２（２．６ｍＬ，３４ｍｍｏｌ）をゆっくりと滴下した。滴下後１０分間撹拌した後、６−ブロモヘキサン酸（４．８９ｇ，２５ｍｍｏｌ）を加え、室温で一晩撹拌した。溶媒を減圧留去した。残渣を酢酸エチルに溶解した後、ブライン（３×３０ｍＬ）で洗浄した。有機層を無水ＣａＳＯ４で乾燥させた後、溶媒を留去し、化合物４を無色の油状物質として得た（５．１３ｇ，９８％）。１Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤ３ＯＤ）：δ ３．６４（ｓ，３Ｈ，ＯＣＨ３），（ｔ，２Ｈ，ＣＨ２ε），２．３３（ｔ，２Ｈ，ＣＨ２α），（ｍ，２Ｈ，ＣＨ２δ），（ｍ，２Ｈ，ＣＨ２β），（ｍ，２Ｈ，ＣＨ２γ）；ＦＡＢＭＳ：ｍ／ｚ ２０９［（Ｍ＋Ｈ）＋］。
【００６５】
（実験９）
Ｄ−Ｐｅｎ（Ｔｒｔ）−ＯｔＢｕ−Ｎ−ｈｅｘａｎｏａｔｅ ｍｅｔｈｙｌ ｅｓｔｅｒ（８）の合成：
活性した４Å モレキュラーシーブ（６０４．５ｍｇ）を乾燥ＤＭＦ（６ｍＬ）に加え、次いで、ＬｉＯＨ・Ｈ２Ｏ（９６．０３ｍｇ，２．２８９ｍｍｏｌ）を加えた。この懸濁液を１０分間激しく撹拌した後、乾燥ＤＭＦに溶解した化合物７（４７６．５ｍｇ，１．０６ｍｍｏｌ）を加え、さらに３０分間撹拌した。この懸濁液に化合物４（１９２．４μＬ，１．２９ｍｍｏｌ）を加え、室温で２４時間撹拌した。無機物をろ去した後、残渣を少量のＤＣＭにより３回洗浄した。ろ液を水で洗浄し、無水Ｎａ２ＳＯ４により乾燥させた。溶媒を減圧留去した後残渣をｎ−ヘキサン−酢酸エチル（５：１から３：１まで）を展開溶媒とする中圧シリカゲルカラムクロマトグラフィにより精製し化合物８を無色透明の油状物質として得た（１５２．４ｍｇ，２４．８％）。１Ｈ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）：δ ７．０８−７．５７（ｍ，１５Ｈ，Ｔｒｔ），３．５８（ｓ，３Ｈ，ＯＭｅ），２．５７（ｓ，１Ｈ，ＣＯＣＨＮＨ），２．３６−２．４３（ｍ，１Ｈ，−ＮＨ−），２．２２−２．２６（ｔ，２Ｈ，ＭｅＯＣＯＣＨ２），１．３３１（ｓ，９Ｈ，ｔＢｕ），１．２４８−１．６６７（ｍ，６Ｈ，ＣＨ２×３），０．９４（ｓ，３Ｈ，Ｍｅ），０．８９２（ｓ，３Ｈ，Ｍｅ）；ＦＡＢＭＳ：ｍ／ｚ ５７６［（Ｍ＋Ｈ）＋］。
【００６６】
（実験１０）
Ｄ−Ｐｅｎ（Ｔｒｔ）−ＯｔＢｕ−Ｎ−ｈｅｘａｎｏａｔｅ（９）の合成：
化合物８（３２６．７ｍｇ，０．５６７ｍｍｏｌ）を乾燥エタノール（４０ｍＬ）と２．５Ｎ ＮａＯＨ（０．９１ｍＬ，２．２７ｍｍｏｌ）の混液に溶解した。窒素気流下４０℃で３時間反応させた後、ＤＣＭ（１５ｍＬ）を加えブライン（１５×２ｍＬ）で洗浄した。有機層を抽出し、溶媒を減圧留去した。残渣をｎ−ヘキサン−酢酸エチル（１：１）を溶出溶媒とするシリカゲルカラムクロマトグラフィにより粗精製し、粗精製物９を無色透明の油状物質として得た（２８２ｍｇ，８８％）。１Ｈ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）：δ ７．６０−７．６２（ｍ，１５Ｈ，Ｔｒｔ），２．５２（ｓ，１Ｈ，ＣＯＣＨＮＨ）、２．２８−２．３１（ｍ，３Ｈ，ＭｅＯＣＯＣＨ２ ａｎｄ ＮＨ），１．３８（ｓ，９Ｈ，ｔＢｕ），１．２９−１．６６（ｍ，６Ｈ，ＣＨ２），１．１６（ｓ，３Ｈ，Ｍｅ），１．０２（ｓ，３Ｈ，Ｍｅ）；ＦＡＢＭＳ：ｍ／ｚ ５６２［（Ｍ＋Ｈ）＋］，５８４［
（Ｍ＋Ｎａ）＋］。
【００６７】
４．Ｄ−Ｐｅｎ−Ｎ−ｈｅｘａｎｏａｔｅ−ｃＲＧＤｆＫ（１１）の製造
ｃＲＧＤｆＫペプチドと結合させた配位子であるＤ−Ｐｅｎ（Ｔｒｔ）−ＯｔＢｕ−Ｎ−ｈｅｘａｎｏａｔｅ−ｃＲＧＤｆＫを、Ｄ−Ｐｅｎ（Ｔｒｔ）−ＯｔＢｕ−Ｎ−ｈｅｘａｎｏａｔｅ（化合物９）を用いて製造した。以下に説明する。
【００６８】
【化７】
【００６９】
（実験１１）
Ｄ−Ｐｅｎ（Ｔｒｔ）−ＯｔＢｕ−Ｎ−ｈｅｘａｎｏａｔｅ−ｃＲＧＤｆＫ ｐｅｐｔｉｄｅ ｃｏｎｊｕｇａｔｅの合成：
乾燥ＤＭＦ（２０ｍＬ）に溶解した化合物９（２３７．６ｍｇ，０．４２３ｍｍｏｌ）、化合物１０（３８５．５ｍｇ，０．４２３ｍｍｏｌ）およびヒドロキシベンゾリアゾール（ＨＯＢｔ，７１．２３ｍｇ，０．４６５ｍｍｏｌ）に乾燥ＤＭＦ（１５ｍＬ）に溶解したＷＳＣ・ＨＣｌ（８９．１９ｍｇ，０．４６５ｍｍｏｌ）を氷上ゆっくりと加えた。室温で４４時間撹拌した後、溶媒を留去した。残渣をＤＣＭ（６０ｍＬ）に溶解した後５％クエン酸（２０ｍＬ）、水（２０ｍＬ）、５％ ＮａＨＣＯ３（２０ｍＬ）、水（２０ｍＬ）で順次洗浄し、最後に５％ クエン酸（２０ｍＬ）で洗浄した。有機層を減圧流留去した後、残渣を氷零下（ＣＨ３Ｃｌ−Ｅｔ２Ｏ）により再結晶を行い薄灰色の結晶として保護アミノ酸結合配位子を得た（５４５．４ｍｇ，８８．６％）。ＦＡＢＭＳ：ｍ／ｚ １４５９［（Ｍ＋５Ｈ）５＋］。
【００７０】
（実験１２）
Ｄ−Ｐｅｎ−Ｎ−ｈｅｘａｎｏａｔｅ−ｃＲＧＤｆＫ（１１）の合成：
保護アミノ酸結合配位子（３５３．１ｍｇ，０．２５２ｍｍｏｌ）にＴＦＡ、水およびトリエチルシランの混液（９０：４．７５：４．７５，ｖ／ｖ／ｖ，８１ｍＬ）を加え、室温で３時間攪拌した。窒素ガスで溶媒を濃縮後、残渣を最少量の水に溶解し、次いで酢酸エチルを加えることで沈殿を生成させた。沈殿をろ取後、沈殿を水、酢酸エチルにより洗浄した。沈殿を分取用ＲＰ−ＨＰＬＣにより精製することにより白色固体として化合物１１（３５ｍｇ，３０％）を得た．ＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ ＭＳ：ｍ／ｚ ８４９［Ｍ］，８５０［（Ｍ＋Ｈ）＋］。
【００７１】
５．［１８５／１８７Ｒｅ］−（Ｄ−Ｐｅｎ−Ｎ−ａｃｅｔａｔｅ−ｃ（ＲＧＤｆＫ））２（１２）の製造
ｃＲＧＤｆＫペプチドと結合させた配位子であるＤ−Ｐｅｎ−Ｎ−ａｃｅｔａｔｅ−ｃ（ＲＧＤｆＫ）と１８５／１８７レニウムとからなる２配位１８５／１８７レニウム錯体を製造した。以下に説明する。
【００７２】
【化８】
【００７３】
（実験１３）
過レニウム酸アンモニウム（３．３８ｍｇ，１２．６μｍｏｌ）、化合物１１（１ｍｇ，１．２６μｍｏｌ）および１２．５ｍＭ ＮａＨＣＯ３（０．２ｍＬ，２．５２μｍｏｌ）を加え、密閉した。反応容器に窒素ガスを１５分間通した後、０．２５Ｍ 亜ジオン酸ナトリウム（０．１ｍＬ，１２．６μｍｏｌ）溶液を加え、４時間攪拌した。次いで、分析用ＲＰ−ＨＰＬＣ（方法２）により分析した。ＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ ＭＳ：ｍ／ｚ １７８４［（Ｍ＋２Ｈ）＋］。
【００７４】
６．［１８５／１８７Ｒｅ］−（Ｄ−Ｐｅｎ）２（１４）の製造
Ｄ−ペニシラミンおよび１８５／１８７レニウムとからなる２配位１８５／１８７レニウム錯体を製造した。以下に説明する。
【００７５】
【化９】
【００７６】
（実験１４）
Ｔｅｔｒａｂｕｔｙｌ ａｍｍｏｎｉｕｍ［１８５／１８７ＲｅＯＣｌ４］（１３）の製造：
Ｔｅｔｒａｂｕｔｙｌ ａｍｍｏｎｉｕｍ［ＲｅＯ４］（１．１ｇ，２．２ｍｍｏｌ）をエタノール（２０ｍＬ）に溶解し、氷冷下、反応溶液を塩化水素ガスで飽和した。室温で２時間撹拌した後、窒素気流により反応溶液の体積が半量になるまで濃縮した。続いて冷凍庫中で放置し、淡黄色の結晶を得た（０．５ｇ，３８％）。ＦＡＢＭＳ：ｍ／ｚ ２４２［Ｍ（ＴＢＡ）］，２４３［（Ｍ（ＴＢＡ）＋Ｈ）＋］，ＩＲ（ＫＢｒ）：２９６２，２８７４，１４７０，１３８０，１１６９，７３７ｃｍ−１。
【００７７】
（実験１５）
［１８５／１８７Ｒｅ］−（Ｄ−Ｐｅｎ）２（１４）の製造：
エタノール（６ｍＬ）にＴＢＡ［ＲｅＯＣｌ４］（５０ｍｇ，０．０８５ｍｍｏｌ）を溶解し、撹拌下、エチレングリコール（０．４３ｍＬ）を加えた。そこへ酢酸ナトリウムを反応溶液が濃紫色を呈するまで加えた。続いてＤ−Ｐｅｎのエタノール溶液（２５．４ｍｇ（０．１７１ｍｍｏｌ）／１．２ｍＬ）を１．２ｍＬ加え、室温で２時間撹拌した。１Ｎ ＮａＯＨで反応溶液のｐＨを９に調節し、溶媒を減圧留去した。少量のメタノールに溶解し、ＲＰ−ＨＰＬＣで分析（方法１）および精製を行った。生成物量が微量であったため、収率は計算できなかった。１Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤ３ＯＤ）：δ １．２１２（ｓ，３Ｈ，Ｍｅ β），１．５９１（ｓ，３Ｈ，Ｍｅ β），１．７３８（ｓ，３Ｈ，Ｍｅ β），１．９９７（ｓ，３Ｈ，Ｍｅ β），３．０４１（ｓ，１Ｈ，ＣＨ α），３．９３４（ｓ，１Ｈ，ＣＨ α）。
【００７８】
７．９９ｍＴｃ−ｇｌｕｃｏｈｅｐｔｏｎａｔｅ（９９ｍＴｃ−ＧＨ）の製造：
α−Ｄ−グルコヘプトン酸（４．０ｍｇ，１７．７μｍｏｌ）およびＳｎＣｌ２ ２Ｈ２Ｏ １．２μｇからなる凍結乾燥ＧＨ−キットに９９ｍＴｃ溶液１．０ｍＬ（３７０ＭＢｑ，２０ｐｍｏｌ）を加え、室温で２０分間反応させることにより、９９ｍＴｃ−ＧＨを得た。９９ｍＴｃ−ＧＨの生成確認はＴＬＣ（アセトン，Ｒｆ値＝０，生理食塩水，Ｒｆ値 １．０）により行った。
【００７９】
８．９９ｍＴｃ−（Ｄ−ｐｅｎｉｃｉｌｌａｍｉｎｅ）２の製造
Ｄ−ペニシラミン（Ｄ−Ｐｅｎ，１．１９ｍｇ，８μｍｏｌ）を窒素置換した０．１Ｍ トリス塩酸バッファー（ｐＨ９．０）４００μＬに溶解した。続いて、この溶液を０．１Ｍ トリス塩酸バッファー（ｐＨ９．０）により順次希釈し、２ｍＭ、０．２ｍＭ、０．０２ｍＭ、０．０１ｍＭ、０．００２ｍＭの配位子溶液を調製した。各配位子濃度の溶液１００μＬに９９ｍＴｃ−ＧＨ溶液１００μＬを加え混和した後、室温で１時間反応させた。９９ｍＴｃ−（Ｄ−Ｐｅｎ）２の確認は、ＲＰ−ＨＰＬＣ（方法１）およびＣＡＥにより行った。
【００８０】
９．９９ｍＴｃ−（ＡＭＰＴ−Ｎ−ａｃｅｔａｔｅ）２の製造
Ｓ−Ｔｒｔ−ＡＭＰＴ−Ｎ−Ａｃｅ（３．２４ｍｇ，８μｍｏｌ）にＴＦＡ ２００μＬ（２．６ｍｍｏｌ）を加え１分間攪拌した。この溶液にＴＥＳ １０μＬ（７４μｍｏｌ）を加え、反応溶液が黄色から無色に変化した事を確認した後、窒素により溶媒を留去した。そこへ窒素置換した０．１Ｍ トリス塩酸バッファー（ｐＨ９．０）４００μＬを加えた。続いて、この溶液を０．１Ｍ トリス塩酸バッファー（ｐＨ９．０）により順次希釈し、２ｍＭ、０．２ｍＭ、０．０２ｍＭ、０．０１ｍＭ、０．００２ｍＭの配位子溶液を調製した。各配位子濃度の溶液１００μＬに９９ｍＴｃ−ＧＨ（［ＧＨ］＝４．０ｍｇ／ｍＬ）１００μＬを加え十分混和した後、室温で１時間反応させた。生成物の確認はＲＰ−ＨＰＬＣ（方法１）およびＣＡＥにより行った。
【００８１】
１０．９９ｍＴｃ−（Ｄ−Ｐｅｎ−Ｎ−Ｈｘ−ｃＲＧＤｆＫ）２の製造
Ｄ−Ｐｅｎ−Ｎ−ｈｅｘａｎｏａｔｅ−ｃＲＧＤｆＫ（化合物１１，０．８ｍｇ，１μｍｏｌ）を窒素置換した０．１Ｍ トリス塩酸バッファー（ｐＨ９．０）５０．５μＬに溶解した。続いて、この溶液を０．１ Ｍ トリス塩酸バッファー（ｐＨ９．０）により希釈し２ｍＭの配位子溶液を調製した。配位子溶液１００μＬに９９ｍＴｃ−ＧＨ溶液１００μＬを加え十分混和した後、室温で１時間反応させた。化合物の生成の確認はＲＰ−ＨＰＬＣ（方法２）により行った。
【００８２】
１１．安定性の検討
各９９ｍＴｃ標識化合物をＲＰ−ＨＰＬＣ（方法１または方法２）により精製した後、溶媒を減圧留去した。残渣を０．０１Ｍ リン酸緩衝液（ｐＨ６．０）４００μＬに再溶解させ、この溶液を室温で保存し、１、３、６、２４時間後にその放射化学的純度をＣＡＥまたはＲＰ−ＨＰＬＣで分析した。
【００８３】
１２．動物実験
未精製状態の９９ｍＴｃ−（Ｄ−Ｐｅｎ−Ｎ−ｈｅｘａｎｏａｔｅ−ｃＲＧＤｆＫ）２（濃度）またはＲＰ−ＨＰＬＣにより精製した９９ｍＴｃ−（Ｄ−Ｐｅｎ−Ｎ−ｈｅｘａｎｏａｔｅ−ｃＲＧＤｆＫ）２をそれぞれ１００μＬ（約１μＣｉ）ずつ６週齢ｄｄＹ系雄性マウスに尾静脈投与し、１群３匹とし、投与後１０分、１時間、３時間、６時間に屠殺し、採血、解剖し、各臓器の重量と放射活性を測定した。また、投与後６時間までに排泄された尿および糞の放射活性も測定した。
【００８４】
（結果）
１．テクネチウム錯体生成における配位子濃度の影響
９９ｍＴｃ−（Ｄ−Ｐｅｎ）２は、Ｄ−Ｐｅｎの濃度が０．０１ｍＭまで放射化学的収率９５％以上で得られたが、それ以下では、放射化学的収率の低下が認められた（図２）。一方，９９ｍＴｃ−（ＡＭＰＴ−Ｎ−ａｃｅｔａｔｅ）２の場合では、ＡＭＰＴ−Ｎ−ａｃｅｔａｔｅ濃度が０．０１ｍＭまでは放射化学的収率９０％以上で得られ、それ以下で急激な放射化学的収率の低下が認められた（図２）。
【００８５】
２．９９ｍＴｃ錯体の緩衝液中の安定性
９９ｍＴｃ−（Ｄ−Ｐｅｎ）２および９９ｍＴｃ−（ＡＭＰＴ−Ｎ−ａｃｅｔａｔｅ）２の緩衝液中の安定性を検討したところ、９９ｍＴｃ−（Ｄ−Ｐｅｎ）２の方がより高い安定性を示した（図３）。
【００８６】
そこで配位子にＤ−Ｐｅｎを選択し、ｃ（ＲＧＤｆＫ）を導入した配位子誘導体を作製し、９９ｍＴｃ標識を行った。得られた９９ｍＴｃ−（Ｄ−Ｐｅｎ−Ｈｘ−ｃＲＤＧｆＫ）２の緩衝液中の安定性を検討したところ、６時間後においても未変化体として存在した（図４）。すなわち、９９ｍＴｃ−（Ｄ−Ｐｅｎ−Ｈｘ−ｃＲＤＧｆＫ）２が緩衝液中で安定であることが判明した。
【００８７】
また、９９ｍＴｃ−（Ｄ−Ｐｅｎ−Ｈｘ−ｃＲＤＧｆＫ）２の構造を確認するために、非放射性のレニウム（Ｒｅ）を用いてＲｅ−（Ｄ−Ｐｅｎ−Ｈｘ−ｃＲＤＧｆＫ）２を作製した。質量分析により、Ｒｅと配位子誘導体とが１：２の錯体を形成していることを認めた。９９ｍＴｃ−（Ｄ−Ｐｅｎ−Ｈｘ−ｃＲＤＧｆＫ）２とＲｅ−（Ｄ−Ｐｅｎ−Ｈｘ−ｃＲＤＧｆＫ）２とはＲＰ−ＨＰＬＣの保持時間は一致した。（表１）。
【００８８】
【表１】
【００８９】
このことから、９９ｍＴｃ−（Ｄ−Ｐｅｎ−Ｈｘ−ｃＲＤＧｆＫ）２は、９９ｍＴｃと配位子誘導体とが１：２の錯体を形成していると考えられる。このように、本薬剤設計が標的への親和性が増強された新たな９９ｍＴｃ放射性医薬品の開発に有用であることを認めた。
【００９０】
３．９９ｍＴｃ−（Ｄ−Ｐｅｎ−Ｈｘ−ｃＲＤＧｆＫ）２の体内動態
９９ｍＴｃ−（Ｄ−Ｐｅｎ−Ｈｘ−ｃＲＤＧｆＫ）２をマウスに投与したところ、精製したものおよび未精製のもののいずれも胃への集積は観察されなかった（図５−ＡおよびＢ、並びに図６−ＡおよびＢ）。生体内で９９ｍＴｃが錯体から解離した場合、胃に集積することから、本錯体は生体内においても安定に存在したことを示す。以上の結果は、Ｄ−Ｐｅｎを配位子とし、これに標的分子認識素子を結合することにより、生体内で安定な２価の９９ｍＴｃ錯体が得られることを示す。これらの結果はまた、適切な配位子を選択することにより、生体内において十分に安定な多価９９ｍＴｃ標識薬剤が得られることを強く示唆する。
【図面の簡単な説明】
【００９１】
【図１】多価９９ｍＴｃ標識薬剤の構造を示す模式図である。
【図２】テクネチウム錯体生成における配位子濃度の影響を示す図である。図中、黒四角およびは黒ひし形はそれぞれ、配位子としてＤ−ＰｅｎおよびＡＭＰＴ−Ｎ−ａｃｅｔａｔｅ（ＡＭＰＴ−Ｎ−Ａｃｅと記す）を使用した場合を示す。
【図３】９９ｍＴｃ−（Ｄ−Ｐｅｎ）２および９９ｍＴｃ−（ＡＭＰＴ−Ｎ−ａｃｅｔａｔｅ）２の、緩衝液中の安定性を示す図である。図中、黒四角およびは黒ひし形はそれぞれ、９９ｍＴｃ−（Ｄ−Ｐｅｎ）２（Ｔｃ−９９ｍ−（Ｄ−Ｐｅｎ）２と示す）および９９ｍＴｃ−（ＡＭＰＴ−Ｎ−ａｃｅｔａｔｅ）２（Ｔｃ−９９ｍ−（ＡＭＰＴ−Ｎ−Ａｃｅ）２と記す）を示す。
【図４】９９ｍＴｃ−（Ｄ−Ｐｅｎ−Ｈｘ−ｃＲＤＧｆＫ）２の緩衝液中の安定性を示す図面である。
【図５−Ａ】マウスに投与した精製９９ｍＴｃ−（Ｄ−Ｐｅｎ−Ｈｘ−ｃＲＤＧｆＫ）２の体内動態を、各臓器や各試料における集積率で示した図である。集積率は各臓器の放射能の投与放射能に対する％を各臓器の重さで除した値で示した。
【図５−Ｂ】マウスに投与した精製９９ｍＴｃ−（Ｄ−Ｐｅｎ−Ｈｘ−ｃＲＤＧｆＫ）２の体内動態を、各臓器や各試料における集積率で示した図である。集積率は各臓器や各試料の放射能の投与放射能に対する％を各臓器の重さで除した値で示した。
【図６−Ａ】マウスに投与した未精製９９ｍＴｃ−（Ｄ−Ｐｅｎ−Ｈｘ−ｃＲＤＧｆＫ）２の体内動態を、各臓器や各試料における集積率で示した図である。集積率は各臓器の放射能の投与放射能に対する％を各臓器の重さで除した値で示した。
【図６−Ｂ】マウスに投与した未精製９９ｍＴｃ−（Ｄ−Ｐｅｎ−Ｈｘ−ｃＲＤＧｆＫ）２の体内動態を、各臓器や各試料における集積率で示した図である。集積率は各臓器や各試料の放射能の投与放射能に対する％を各臓器の重さで除した値で示した。
【特許請求の範囲】
【請求項１】
標的分子と結合する化合物と結合させた配位子であって金属と多配位の錯体を形成する配位子と該金属の放射性核種とから形成される錯体を含み、標的部位への集積性が増加した放射性標識薬剤。
【請求項２】
診断用または治療用放射性標識薬剤である請求項１に記載の放射性標識薬剤。
【請求項３】
標的分子と結合する化合物と結合させた配位子であって５価のテクネチウム（Ｔｃ）と２配位または３配位の錯体を形成するＤ−ペニシラミンまたは１−アミノ−２−メチルプロパン−２−チオール−Ｎ−アセテートと９９ｍＴｃとから形成される錯体を含み、標的部位への集積性が増加した診断用９９ｍＴｃ標識薬剤。
【請求項４】
標的分子と結合する化合物と結合させた配位子が環状ペンタペプチドｃ（ＲＧＤｆＫ）と結合させた配位子である請求項３に記載の診断用９９ｍＴｃ標識薬剤。
【請求項５】
標的分子と結合する化合物と結合させた配位子であって５価のレニウム（Ｒｅ）と２配位または３配位の錯体を形成するＤ−ペニシラミンまたは１−アミノ−２−メチルプロパン−２−チオール−Ｎ−アセテートと１８６Ｒｅまたは１８８Ｒｅとから形成される錯体を含み、標的部位への集積性が増加した治療用１８６Ｒｅまたは１８８Ｒｅ標識薬剤。
【請求項６】
標的分子と結合する化合物と結合させた配位子が環状ペンタペプチドｃ（ＲＧＤｆＫ）と結合させた配位子である請求項５に記載の治療用１８６Ｒｅまたは１８８Ｒｅ標識薬剤。
【請求項７】
標的分子と結合する化合物と結合させた配位子であって金属と多配位の錯体を形成する配位子であることを特徴とする、標的部位への集積性が増加した診断用または治療用放射性標識薬剤の調製用配位子。
【請求項８】
金属放射性核種が、９９ｍテクネチウム、１８６レニウム、および１８８レニウムからなる群から選ばれるいずれか１の金属放射性核種である請求項７に記載の放射性標識薬剤の調製用配位子。
【請求項９】
金属と多配位の錯体を形成する配位子が、５価のテクネチウムまたはレニウムと２配位あるいは３配位の錯体を形成するＤ−ペニシラミンまたは１−アミノ−２−メチルプロパン−２−チオール−Ｎ−アセテートである請求項８に記載の放射性標識薬剤の調製用配位子。
【請求項１０】
標的分子と結合する化合物と結合させた配位子が環状ペンタペプチドｃ（ＲＧＤｆＫ）と結合させた配位子である請求項８または９に記載の放射性標識薬剤の調製用配位子。
【請求項１１】
請求項７から１１のいずれか１項に記載の放射性標識薬剤の調製用配位子を含む薬剤と、該配位子と多配位の錯体を形成する金属放射性核種とを含む薬剤とを、別々の包装単位として含んでなるキット。
【請求項１２】
下式（Ｉ）：
【化１】
で示される化合物の製造方法であって、下式（ＩＩ）：
【化２】
で示される化合物を使用することを特徴とする製造方法。
【請求項１３】
標的分子と結合する化合物と結合させた配位子であって金属と多配位の錯体を形成する配位子と該金属の放射性核種とから形成される錯体を含む放射性標識薬剤を使用することを特徴とする、放射性標識薬剤の標的部位への集積を増加させる方法。
【請求項１４】
金属放射性核種が、９９ｍテクネチウム、１８６レニウム、および１８８レニウムからなる群から選ばれるいずれか１の金属放射性核種である請求項１３に記載の方法。
【請求項１５】
金属と多配位の錯体を形成する配位子が、５価のテクネチウムまたはレニウムと２配位あるいは３配位の錯体を形成するＤ−ペニシラミンまたは１−アミノ−２−メチルプロパン−２−チオール−Ｎ−アセテートである請求項１４に記載の方法。
【請求項１６】
標的分子と結合する化合物と結合させた配位子が環状ペンタペプチドｃ（ＲＧＤｆＫ）と結合させた配位子である請求項１４または１５に記載の方法。
【請求項１】
標的分子と結合する化合物と結合させた配位子であって金属と多配位の錯体を形成する配位子と該金属の放射性核種とから形成される錯体を含み、標的部位への集積性が増加した放射性標識薬剤。
【請求項２】
診断用または治療用放射性標識薬剤である請求項１に記載の放射性標識薬剤。
【請求項３】
標的分子と結合する化合物と結合させた配位子であって５価のテクネチウム（Ｔｃ）と２配位または３配位の錯体を形成するＤ−ペニシラミンまたは１−アミノ−２−メチルプロパン−２−チオール−Ｎ−アセテートと９９ｍＴｃとから形成される錯体を含み、標的部位への集積性が増加した診断用９９ｍＴｃ標識薬剤。
【請求項４】
標的分子と結合する化合物と結合させた配位子が環状ペンタペプチドｃ（ＲＧＤｆＫ）と結合させた配位子である請求項３に記載の診断用９９ｍＴｃ標識薬剤。
【請求項５】
標的分子と結合する化合物と結合させた配位子であって５価のレニウム（Ｒｅ）と２配位または３配位の錯体を形成するＤ−ペニシラミンまたは１−アミノ−２−メチルプロパン−２−チオール−Ｎ−アセテートと１８６Ｒｅまたは１８８Ｒｅとから形成される錯体を含み、標的部位への集積性が増加した治療用１８６Ｒｅまたは１８８Ｒｅ標識薬剤。
【請求項６】
標的分子と結合する化合物と結合させた配位子が環状ペンタペプチドｃ（ＲＧＤｆＫ）と結合させた配位子である請求項５に記載の治療用１８６Ｒｅまたは１８８Ｒｅ標識薬剤。
【請求項７】
標的分子と結合する化合物と結合させた配位子であって金属と多配位の錯体を形成する配位子であることを特徴とする、標的部位への集積性が増加した診断用または治療用放射性標識薬剤の調製用配位子。
【請求項８】
金属放射性核種が、９９ｍテクネチウム、１８６レニウム、および１８８レニウムからなる群から選ばれるいずれか１の金属放射性核種である請求項７に記載の放射性標識薬剤の調製用配位子。
【請求項９】
金属と多配位の錯体を形成する配位子が、５価のテクネチウムまたはレニウムと２配位あるいは３配位の錯体を形成するＤ−ペニシラミンまたは１−アミノ−２−メチルプロパン−２−チオール−Ｎ−アセテートである請求項８に記載の放射性標識薬剤の調製用配位子。
【請求項１０】
標的分子と結合する化合物と結合させた配位子が環状ペンタペプチドｃ（ＲＧＤｆＫ）と結合させた配位子である請求項８または９に記載の放射性標識薬剤の調製用配位子。
【請求項１１】
請求項７から１１のいずれか１項に記載の放射性標識薬剤の調製用配位子を含む薬剤と、該配位子と多配位の錯体を形成する金属放射性核種とを含む薬剤とを、別々の包装単位として含んでなるキット。
【請求項１２】
下式（Ｉ）：
【化１】
で示される化合物の製造方法であって、下式（ＩＩ）：
【化２】
で示される化合物を使用することを特徴とする製造方法。
【請求項１３】
標的分子と結合する化合物と結合させた配位子であって金属と多配位の錯体を形成する配位子と該金属の放射性核種とから形成される錯体を含む放射性標識薬剤を使用することを特徴とする、放射性標識薬剤の標的部位への集積を増加させる方法。
【請求項１４】
金属放射性核種が、９９ｍテクネチウム、１８６レニウム、および１８８レニウムからなる群から選ばれるいずれか１の金属放射性核種である請求項１３に記載の方法。
【請求項１５】
金属と多配位の錯体を形成する配位子が、５価のテクネチウムまたはレニウムと２配位あるいは３配位の錯体を形成するＤ−ペニシラミンまたは１−アミノ−２−メチルプロパン−２−チオール−Ｎ−アセテートである請求項１４に記載の方法。
【請求項１６】
標的分子と結合する化合物と結合させた配位子が環状ペンタペプチドｃ（ＲＧＤｆＫ）と結合させた配位子である請求項１４または１５に記載の方法。
【図１】
【図２】
【図３】
【図４】
【図５−Ａ】
【図５−Ｂ】
【図６−Ａ】
【図６−Ｂ】
【図２】
【図３】
【図４】
【図５−Ａ】
【図５−Ｂ】
【図６−Ａ】
【図６−Ｂ】
【公開番号】特開２００９−１３２６９１（Ｐ２００９−１３２６９１Ａ）
【公開日】平成２１年６月１８日（２００９．６．１８）
【国際特許分類】
【出願番号】特願２００８−２７８５６３（Ｐ２００８−２７８５６３）
【出願日】平成２０年１０月２９日（２００８．１０．２９）
【出願人】（３０４０２１８３１）国立大学法人 千葉大学 (601)
【Ｆターム（参考）】
【公開日】平成２１年６月１８日（２００９．６．１８）
【国際特許分類】
【出願日】平成２０年１０月２９日（２００８．１０．２９）
【出願人】（３０４０２１８３１）国立大学法人 千葉大学 (601)
【Ｆターム（参考）】
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