検量線作成方法及び微生物数測定方法並びにプログラム
【課題】検量線を作成するために必要な検体数を減少させ、検量線の作成を簡易化することが目的とされる。
【解決手段】工程１１では、培地と微生物との複数の組み合わせについて、検量線１０１，１０２，・・・，１０ｍ，・・・が作成される。工程１２では、工程１１で作成された複数の検量線１０１，１０２，・・・，１０ｍ，・・・に基づいて、その全てを満足すると近似される初期値Ｍの近似値及び検出時間ｔの近似値を、近似初期値Ｍ０及び近似検出時間ｔ０として求める。工程２１では、所定の微生物の微生物数の初期値Ｍ１からの増殖開始後、増殖に基づいて変動する可側定量が閾値に達するまでの時間を、検出時間ｔ１として測定する。工程２２では、工程１２で得られた近似初期値Ｍ０及び近似検出時間ｔ０と、工程２１で得られた微生物数の初期値Ｍ１及び検出時間ｔ１とに基づいて、所定の培地における所定の微生物についての検量線１を求める。
【解決手段】工程１１では、培地と微生物との複数の組み合わせについて、検量線１０１，１０２，・・・，１０ｍ，・・・が作成される。工程１２では、工程１１で作成された複数の検量線１０１，１０２，・・・，１０ｍ，・・・に基づいて、その全てを満足すると近似される初期値Ｍの近似値及び検出時間ｔの近似値を、近似初期値Ｍ０及び近似検出時間ｔ０として求める。工程２１では、所定の微生物の微生物数の初期値Ｍ１からの増殖開始後、増殖に基づいて変動する可側定量が閾値に達するまでの時間を、検出時間ｔ１として測定する。工程２２では、工程１２で得られた近似初期値Ｍ０及び近似検出時間ｔ０と、工程２１で得られた微生物数の初期値Ｍ１及び検出時間ｔ１とに基づいて、所定の培地における所定の微生物についての検量線１を求める。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は微生物の個体数を測定する技術に関する。
【背景技術】
【０００２】
微生物の個体数（以下「微生物数」という）を検出するために、従来から種々の測定技術が提案されている。例えば、標準寒天培地を用いる方法がある。具体的には、寒天培地中で微生物を培養することで、微生物によって生成されたコロニーの数を測定する。このとき、一つの微生物からは一つのコロニーが生成されるとみなし、コロニーの総数を培養前の微生物数（以下「初期値」という）とする。
【０００３】
その他に、例えば検量線に基づいて微生物数を求める方法がある。具体的に例えば、微生物の増殖開始後、その増殖に基づいて変動する可側定量が閾値に至るまでの検出時間を測定することで、微生物数の初期値の対数と検出時間との関係を示す検量線に基づいて、微生物数の初期値を求める。この方法を用いて微生物数を求める場合には、予め検量線を作成しておく必要がある。検量線を作成する方法は、例えば特許文献１に開示されている。
【０００４】
【特許文献１】特開２００３−２３５５９９号公報
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００５】
しかしながら、標準寒天培地を用いて微生物数を求める技術では、コロニーの観察等の煩雑な作業を行う必要がある。
【０００６】
また、検量線に基づいて微生物数を求める技術において予め検量線を作成する際には、少なくとも２検体について、検出時間と微生物数の初期値とを求める必要があった。この場合にも、微生物数の初期値を検出する際には、上記標準寒天培地を用いた測定技術が採用されるため、煩雑な作業が必要とされる。
【０００７】
本発明は、上述の事情に鑑みてなされたものであり、検量線を作成するために必要な検体数を減少させ、検量線の作成を簡易化することが目的とされる。
【課題を解決するための手段】
【０００８】
この発明の請求項１にかかる検量線作成方法は、（ａ）第１培地中で培養される第１微生物について、その個体数である第１微生物数の初期値（Ｍ１）からの増殖開始後、増殖に基づいて変動する可測定量が閾値に達する迄の時間である第１検出時間（ｔ１）を測定する工程と、（ｂ）近似初期値（Ｍ０）及び近似検出時間（ｔ０）と、前記工程（ａ）で得られた前記第１微生物数の前記初期値及び前記第１検出時間とに基づいて、前記第１培地における前記第１微生物についての第１検量線（１，１１）を求める工程とを備え、前記第１微生物数の前記初期値は既知であって、前記近似初期値及び前記近似検出時間は、第２培地中で培養される第２微生物の個体数である第２微生物数の初期値（Ｍ）と、前記第２微生物数の前記初期値からの増殖開始後、増殖に基づいて変動する可測定量が前記閾値に達する迄の時間である第２検出時間（ｔ）との関係を示す第２検量線（１０１，１０２，・・・，１０ｍ，・・・）の複数を満足すると近似される、前記第２微生物数の前記初期値の近似値及び前記第２検出時間の近似値である。
【０００９】
この発明の請求項２にかかる検量線作成方法は、請求項１記載の検量線作成方法であって、（ｃ）前記第１微生物数の前記初期値（Ｍ１）を求める工程を前記工程（ａ）の前に実行する。
【００１０】
この発明の請求項３にかかる検量線作成方法は、請求項１または請求項２記載の検量線作成方法であって、（ｄ）前記第２培地と前記第２微生物との複数の組み合わせの各々について前記第２検量線（１０１，１０２，・・・，１０ｍ，・・・）を求める工程と、（ｅ）複数の前記第２検量線に基づいて、その全てを満足すると近似される前記近似初期値（Ｍ０）と前記近似検出時間（ｔ０）とを求める工程とを前記工程（ａ）の前に実行する。
【００１１】
この発明の請求項４にかかる検量線作成方法は、請求項３記載の検量線作成方法であって、前記工程（ｄ）では、（ｄ−１）前記第２微生物数の前記初期値（Ｍ）の一つである第１値（Ｍ２）について前記第２検出時間（ｔ２）を測定する工程と、（ｄ−２）前記第２微生物数の前記初期値の一つであって前記第１値とは異なる第２値（Ｍ３）について前記第２検出時間（ｔ３）を測定する工程と、（ｄ−３）前記第１値と、前記第２値と、前記工程（ｄ−１）及び前記工程（ｄ−２）の各々で測定された前記第２検出時間（ｔ２，ｔ３）とに基づいて、一の前記第２検量線（１０１，１０２，・・・，１０ｍ，・・・）を求める工程とを実行する。
【００１２】
この発明の請求項５にかかる検量線作成方法は、請求項１乃至請求項４のいずれか一つに記載の検量線作成方法であって、前記可測定量は、前記第１培地あるいは前記第２培地中を、それらに含まれる酸素量に応じて流れる電流である。
【００１３】
この発明の請求項６にかかる検量線作成方法は、請求項１乃至請求項５のいずれか一つに記載の検量線作成方法であって、前記第１検量線（１）は、前記第１微生物数の初期値（Ｍ）の対数と、当該初期値からの増殖開始後、増殖に基づいて変動する可測定量が前記閾値に達するまでの時間である検出時間（ｔ）との関係を線形で近似したものであり、前記第２検量線（１０１，１０２，・・・，１０ｍ，・・・）は、前記第２微生物数の前記初期値（Ｍ）の対数と、前記第２検出時間との関係を線形で近似したものであって、前記近似初期値（Ｍ０）の対数は８〜１０．５（ｌｏｇ（ＣＦＵ／ｇ））であり、前記近似検出時間（ｔ０）は−３０（分）である。
【００１４】
この発明の請求項７にかかる検量線作成方法は、請求項６記載の検量線作成方法であって、前記近似初期値（Ｍ０）の対数は９〜９．５（ｌｏｇ（ＣＦＵ／ｇ））である。
【００１５】
この発明の請求項８にかかる微生物数測定方法は、（ｘ）前記第１培地中で培養される前記第１微生物について、その増殖開始後、増殖に基づいて変動する前記可測定量が前記閾値に達する迄の時間である第３検出時間（ｔ）を測定する工程と、（ｙ）請求項１乃至請求項７のいずれか一つに記載の検量線作成方法で得られた前記第１検量線（１）と、前記第３検出時間とに基づいて、前記第１微生物数の初期値（Ｍ）を求める工程とを備え、前記工程（ｘ）での前記第１微生物の増殖は、前記工程（ｙ）で求められる前記第１微生物数の前記初期値から開始する。
【００１６】
この発明の請求項９にかかるプログラムは、（ａ）第１培地中で培養される第１微生物について、その個体数である第１微生物数の初期値（Ｍ１）からの増殖開始後、増殖に基づいて変動する可測定量が閾値に達する迄の時間である第１検出時間（ｔ１）を測定する工程と、（ｂ）近似初期値（Ｍ０）及び近似検出時間（ｔ０）と、前記工程（ａ）で得られた前記第１微生物数の前記初期値及び前記第１検出時間とに基づいて、前記第１培地における前記第１微生物についての第１検量線（１，１１）を求める工程とをコンピュータに実行させるためのプログラムであって、前記第１微生物数の前記初期値は既知であり、前記近似初期値及び前記近似検出時間は、第２培地中で培養される第２微生物の個体数である第２微生物数の初期値（Ｍ）と、前記第２微生物数の前記初期値からの増殖開始後、増殖に基づいて変動する可測定量が前記閾値に達する迄の時間である第２検出時間（ｔ）との関係を示す第２検量線（１０１，１０２，・・・，１０ｍ，・・・）の複数を満足すると近似される、前記第２微生物数の前記初期値の近似値及び前記第２検出時間の近似値である。
【００１７】
この発明の請求項１０にかかるプログラムは、請求項９記載のプログラムであって、（ｃ）前記第１微生物数の前記初期値（Ｍ１）を求める工程を前記工程（ａ）の前に前記コンピュータに実行させる。
【００１８】
この発明の請求項１１にかかるプログラムは、請求項９または請求項１０記載のプログラムであって、（ｄ）前記第２培地と前記第２微生物との複数の組み合わせの各々について前記第２検量線（１０１，１０２，・・・，１０ｍ，・・・）を求める工程と、（ｅ）複数の前記第２検量線に基づいて、その全てを満足すると近似される前記近似初期値（Ｍ０）と前記近似検出時間（ｔ０）とを求める工程とを前記工程（ａ）の前に前記コンピュータに実行させる。
【００１９】
この発明の請求項１２にかかるプログラムは、請求項１１記載のプログラムであって、前記工程（ｄ）では、（ｄ−１）前記第２微生物数の前記初期値（Ｍ）の一つである第１値（Ｍ２）について前記第２検出時間（ｔ２）を測定する工程と、（ｄ−２）前記第２微生物数の前記初期値の一つであって前記第１値とは異なる第２値（Ｍ３）について前記第２検出時間（ｔ３）を測定する工程と、（ｄ−３）前記第１値と、前記第２値と、前記工程（ｄ−１）及び前記工程（ｄ−２）の各々で測定された前記第２検出時間（ｔ２，ｔ３）とに基づいて、一の前記第２検量線（１０１，１０２，・・・，１０ｍ，・・・）を求める工程とを前記コンピュータに実行させる。
【００２０】
この発明の請求項１３にかかるプログラムは、請求項９乃至請求項１２のいずれか一つに記載のプログラムであって、前記可測定量は、前記第１培地あるいは前記第２培地中を、それらに含まれる酸素量に応じて流れる電流である。
【００２１】
この発明の請求項１４にかかるプログラムは、請求項９乃至請求項１３のいずれか一つに記載のプログラムであって、前記第１検量線（１）は、前記第１微生物数の初期値（Ｍ）の対数と、当該初期値からの増殖開始後、増殖に基づいて変動する可測定量が前記閾値に達するまでの時間である検出時間（ｔ）との関係を線形で近似したものであり、前記第２検量線（１０１，１０２，・・・，１０ｍ，・・・）は、前記第２微生物数の前記初期値（Ｍ）の対数と、前記第２検出時間との関係を線形で近似したものであって、前記近似初期値（Ｍ０）の対数は８〜１０．５（ｌｏｇ（ＣＦＵ／ｇ））であり、前記近似検出時間（ｔ０）は−３０（分）である。
【００２２】
この発明の請求項１５にかかるプログラムは、請求項１４記載のプログラムであって、前記近似初期値（Ｍ０）の対数は９〜９．５（ｌｏｇ（ＣＦＵ／ｇ））である。
【００２３】
この発明の請求項１６にかかるプログラムは、（ｘ）前記第１培地中で培養される前記第１微生物について、その増殖開始後、増殖に基づいて変動する前記可測定量が前記閾値に達する迄の時間である第３検出時間（ｔ）を測定する工程と、（ｙ）請求項９乃至請求項１５のいずれか一つに記載のプログラムが実行する工程を前記コンピュータに実行させることで得られた第１検量線（１）と、前記第３検出時間とに基づいて、前記第１微生物数の初期値（Ｍ）を求める工程とを前記コンピュータにさらに実行させるためのプログラムであって、前記工程（ｘ）での前記第１微生物の増殖は、前記工程（ｙ）で求められる前記第１微生物数の前記初期値から開始する。
【発明の効果】
【００２４】
この発明の請求項１にかかる検量線作成方法もしくは請求項９にかかるプログラムによれば、第１培地と第１微生物との組み合わせの一つについて、工程（ａ）において第１検出時間を測定するだけで、関数で近似される第１検量線が作成できる。しかも、第１検出時間の測定回数が減少されて、第１検量線の作成が簡単化される。
【００２５】
この発明の請求項２にかかる検量線作成方法もしくは請求項１０にかかるプログラムによれば、第１微生物数の初期値が求められるので、請求項１にかかる検量線作成方法もしくは請求項９にかかるプログラムに適用できる。
【００２６】
この発明の請求項３にかかる検量線作成方法もしくは請求項１１にかかるプログラムによれば、第１検量線の作成に必要な近似初期値及び近似検出時間が求められる。
【００２７】
この発明の請求項４にかかる検量線作成方法もしくは請求項１２にかかるプログラムによれば、第２培地と第２微生物との組み合わせの各々について、少なくとも１次関数としての第２検量線が作成できる。特に第２検量線が１次関数である場合には、工程（ｅ）の近似初期値及び近似検出時間を簡易に求めることができる。
【００２８】
この発明の請求項５にかかる検量線作成方法もしくは請求項１３にかかるプログラムによれば、培地中に含まれる酸素量は微生物の代謝に伴って変動するので、請求項１乃至請求項４のいずれか一つにかかる検量線作成方法あるいは請求項９乃至請求項１２のいずれか一つにかかるプログラムに適用できる。
【００２９】
この発明の請求項６または請求項７にかかる検量線作成方法もしくは請求項１４または請求項１５にかかるプログラムによれば、かかる近似初期値及び近似検出時間において第２検量線の複数を満足すると近似できる。
【００３０】
この発明の請求項８にかかる微生物数測定方法もしくは請求項１６にかかるプログラムによれば、請求項１乃至請求項７のいずれか一つに記載の検量線作成方法もしくは請求項９乃至請求項１５のいずれか一つに記載のプログラムが実行する工程をコンピュータに実行させることで得られた第１検量線を用いることで、寒天培地等を用いたコロニーの観察等の煩雑な作業を行うことなく、微生物数の初期値を検出時間から容易に見積もることができる。
【発明を実施するための最良の形態】
【００３１】
図１は、本発明にかかる検量線作成方法をフローチャートで示す。フローチャートは、工程１１，１２及び工程２１，２２で構成される。
【００３２】
工程１１では、培地と微生物との複数の組み合わせについて、検量線が作成される。具体的には、工程（ｘ１，ｙ１，ｚ１）、工程（ｘ２，ｙ２，ｚ２）、・・・、工程（ｘｍ，ｙｍ，ｚｍ）、・・・の各々が独立に、例えば並行して実行される。工程（ｘ１，ｙ１，ｚ１）、工程（ｘ２，ｙ２，ｚ２）、・・・、工程（ｘｍ，ｙｍ，ｚｍ）、・・・の各々では、培地と微生物との組み合わせの一について検量線が作成される。但し、工程（ｘｉ，ｙｉ，ｚｉ）と工程（ｘｊ，ｙｊ，ｚｊ）（ｉ，ｊ＝１〜ｍ，ｉ≠ｊ）との間では培地や微生物が異なる。
【００３３】
本発明において培地には、食物などの天然物質で構成された天然培地や、既知の化合物で合成された合成培地が採用される。天然培地は、例えば食物から抽出された栄養素を含む液であり、合成培地は例えば生理食塩水である。
【００３４】
図２は、工程（ｘ１，ｙ１，ｚ１）によって作成される検量線１０１を概念的に示す。以下では、図２を用いて工程（ｘ１，ｙ１，ｚ１）について説明する。
【００３５】
工程ｘ１では、培地中で培養される微生物について、微生物数の初期値Ｍ２から増殖開始後、増殖に基づいて変動する可測定量が閾値に達するまでの時間を、検出時間ｔ２として測定する。このとき、微生物数の初期値Ｍ２は既知であり、例えば本工程ｘ１を実行する前に予め求めておく。
【００３６】
可側定量には、培地中に含まれる酸素量に応じて培地中を流れる電流が採用でき、以下において同様である。このような電流の測定は、例えば特許文献１により公知である。
【００３７】
工程ｙ１では、工程ｘ１での測定対象と同じ培地及び同じ微生物について、微生物数の初期値Ｍ２とは異なる初期値Ｍ３からの増殖開始後、増殖に基づいて変動する可測定量が閾値に達するまでの時間を、検出時間ｔ３として測定する。このとき、微生物数の初期値Ｍ３は既知であり、例えば工程ｙ１を実行する前に予め求めておく。また、本工程で採用される可側定量及び閾値は、工程ｘ１で採用される可側定量及び閾値と同じである。
【００３８】
工程ｚ１では、初期値Ｍ２，Ｍ３の各々の対数と、工程ｘ１，ｙ１の各々で測定された検出時間ｔ２，ｔ３とに基づいて、検量線１０１を作成する。具体的には例えば、微生物数の初期値Ｍの対数と検出時間ｔとの関係を１次関数で近似し、座標（ｌｏｇ（Ｍ２），ｔ２）と座標（ｌｏｇ（Ｍ３），ｔ３）とを通る１次関数を検量線１０１とする（図２）。
【００３９】
工程（ｘ２，ｙ２，ｚ２）、・・・、工程（ｘｍ，ｙｍ，ｚｍ）、・・・の各々についても、工程（ｘ１，ｙ１，ｚ１）と同様にして、１次関数に近似された検量線１０２，・・・，１０ｍ，・・・を作成する。図３ではこれらの検量線１０２，・・・，１０ｍ，・・・が検量線１０１と共に示されている。
【００４０】
工程（ｘ１，ｙ１，ｚ１）、工程（ｘ２，ｙ２，ｚ２）、・・・、工程（ｘｍ，ｙｍ，ｚｍ）、・・・は、必ずしも全てが並行して実行される必要はなく、例えばある一部の工程の各々がまず並行して実行され、その後、残りの工程の各々が並行して実行されてもよい。
【００４１】
また、工程ｘ１と工程ｙ１とを並行して実行してもよい。工程ｘ２，ｙ２、・・・、工程ｘｍ，ｙｍ、・・・についても同様である。
【００４２】
工程１２では、工程１１で作成された複数の検量線１０１，１０２，・・・，１０ｍ，・・・に基づいて、その全てを満足すると近似される初期値Ｍの近似値及び検出時間ｔの近似値を、近似初期値Ｍ０及び近似検出時間ｔ０として求める。以下では、近似初期値Ｍ０の対数及び近似検出時間ｔ０を収束点（ｌｏｇ（Ｍ０），ｔ０）という。
【００４３】
具体的には例えば、座標（ｌｏｇ（Ｍ），ｔ）から検量線１０１，１０２，・・・，１０ｍ，・・・の各々までの距離の和が最小になるような座標（ｌｏｇ（Ｍ），ｔ）を、収束点（ｌｏｇ（Ｍ０），ｔ０）として求める。この場合、図３で示される複数の検量線１０１，１０２，・・・，１０ｍ，・・・からは、近似初期値Ｍ０の対数ｌｏｇ（Ｍ０）＝８．７５、近似検出時間ｔ０＝−３０（分）として具体的に求まる。
【００４４】
次のようにして収束点（ｌｏｇ（Ｍ０），ｔ０）を求めても良い。ここで、近似検出時間ｔ０には−３０が採用される。まず、ｌｏｇ（Ｍ）が２である検量線１０１上の一点と収束点（ｌｏｇ（Ｍ０），ｔ０）とに基づいて検量線を作成する。そして、当該検量線と検量線１０１とを比較し、検出時間が２００，３００，４００，５００，６００（分）の５点の各々でｌｏｇ（Ｍ）の差の絶対値を求め、この差が１以内であるものが５点のうち３点以上ある場合を、収束点（ｌｏｇ（Ｍ０），ｔ０）が検量線１０１に対して合格であるとし、その他を不合格と判定する。
【００４５】
そして、検量線１０１に対して行ったと同様にして、収束点（ｌｏｇ（Ｍ０），ｔ０）が工程１１で得られた検量線１０２，・・・，１０ｍ，・・・について合格か否かをそれぞれ判定する。
【００４６】
さらに、ｌｏｇ（Ｍ）が３及び５である検量線１０１，１０２，・・・，１０ｍ，・・・上の各々の一点と収束点（ｌｏｇ（Ｍ０），ｔ０）とに基づいて作成される検量線のそれぞれについて、上述と同様の判定を行う。
【００４７】
その結果、合格か否かの判定数に対する合格率は、近似初期値Ｍ０の対数ｌｏｇ（Ｍ０）が８〜１０．５の範囲で８０％以上となり、９〜９．５の範囲で８８％以上となる。
【００４８】
従って、近似検出時間が−３０（分）であって近似初期値Ｍ０の対数ｌｏｇ（Ｍ０）が８〜１０．５である収束点（ｌｏｇ（Ｍ０），ｔ０）において、検量線１０１，１０２，・・・，１０ｍ，・・・の複数を満足すると近似できる。そして、近似初期値Ｍ０の対数ｌｏｇ（Ｍ０）が９〜９．５である場合が、より多くの検量線を満足する点で特に望ましい。
【００４９】
図４は、収束点（ｌｏｇ（Ｍ０），ｔ０）を用いて作成された検量線１を概念的に示す。収束点（ｌｏｇ（Ｍ０），ｔ０）を得た後は、以下で説明する工程２１，２２を実行することで、所定の培地中で培養される所定の微生物について新たに検量線１を作成することができる。
【００５０】
工程２１では、１検体について検出時間ｔを測定する。ここで検体とは、検出時間ｔの測定対象であり、培地と微生物との組み合わせ及び微生物数の初期値で特徴付けられる。以下において同様である。
【００５１】
具体的には、所定の微生物の微生物数の初期値Ｍ１からの増殖開始後、増殖に基づいて変動する可側定量が閾値に達するまでの時間を、検出時間ｔ１として測定する。このとき、微生物数の初期値Ｍ１は、既知であってもよし、本工程２１を実行する前に予め求めておいてもよい。また、本工程で採用される可側定量及び閾値は、工程ｘ１，ｙ１などで採用される可側定量及び閾値と同じである。
【００５２】
工程２２では、工程１２で得られた近似初期値Ｍ０及び近似検出時間ｔ０と、工程２１で得られた微生物数の初期値Ｍ１及び検出時間ｔ１とに基づいて、所定の培地における所定の微生物についての検量線１を求める。具体的には、微生物数の初期値Ｍの対数と検出時間ｔとの関係を１次関数で近似し、座標（ｌｏｇ（Ｍ０），ｔ０）と座標（ｌｏｇ（Ｍ１），ｔ１）とを通る１次関数を検量線１として見積もる。
【００５３】
所定の培地と所定の微生物について、微生物数の初期値Ｍの対数と検出時間ｔとの関係を上記したように１次関数で近似して表す場合、１検体について検出時間ｔ１を測定するだけで検量線１が作成できる。よって、検出時間ｔ１の測定回数が減少されて、所定の培地と所定の微生物についての検量線１の作成が簡単化される。
【００５４】
さらに言うと、微生物数の初期値Ｍの対数と検出時間ｔとの関係をｎ次関数で近似して表す場合、ｎ検体について検出時間ｔを測定するだけで検量線１が作成できる。具体的に以下では、微生物数の初期値Ｍの対数と検出時間ｔとの関係を２次関数で近似した場合について説明する。
【００５５】
図５は、２次関数で近似された検量線の作成方法をフローチャートで示す。フローチャートは、工程１１，１２及び工程２１，２１１，２２で構成される。
【００５６】
工程１１では、培地と微生物との複数の組み合わせについて、検量線が作成される。具体的には、工程（ｘ１，ｙ１，ｗ１，ｚ１）、工程（ｘ２，ｙ２，ｗ２，ｚ２）、・・・、工程（ｘｍ，ｙｍ，ｗｍ，ｚｍ）、・・・の各々が独立に、例えば並行して実行される。工程（ｘ１，ｙ１，ｗ１，ｚ１）、工程（ｘ２，ｙ２，ｗ２，ｚ２）、・・・、工程（ｘｍ，ｙｍ，ｗｍ，ｚｍ）、・・・の各々では、培地と微生物との組み合わせの一について検量線が作成される。但し、工程（ｘｉ，ｙｉ，ｗｉ，ｚｉ）と工程（ｘｊ，ｙｊ，ｗｊ，ｚｊ）（ｉ，ｊ＝１〜ｍ，ｉ≠ｊ）との間では培地や微生物が異なる。
【００５７】
工程ｘ１，ｙ１では、図１で示される工程ｘ１，ｙ１と同様にして、培地と微生物との組み合わせの一において、微生物数の初期値Ｍ２，Ｍ３についての検出時間ｔ２，ｔ３を測定する。
【００５８】
工程ｗ１では、さらにもう１検体について検出時間ｔ３１を測定する。本工程で用いられる検体は、工程ｘ１，ｙ１での測定対象と同じ培地及び同じ微生物であって、微生物数の初期値Ｍ２，Ｍ３とは異なる初期値Ｍ３１を有する。
【００５９】
工程ｚ１では、微生物数の初期値Ｍの対数と検出時間ｔとの関係を２次関数で近似し、工程ｘ１，ｙ１，ｗ１で測定された３検体についての座標（ｌｏｇ（Ｍ），ｔ）を通る２次関数を検量線として求める。例えば、上記測定された３検体についての座標（ｌｏｇ（Ｍ），ｔ）から最小二乗法で２次関数を求めてもよい。
【００６０】
工程（ｘ２，ｙ２，ｗ２，ｚ２）、・・・、工程（ｘｍ，ｙｍ，ｗｍ，ｚｍ）、・・・の各々についても、工程（ｘ１，ｙ１，ｗ１，ｚ１）と同様にして、２次関数に近似された検量線を作成する。
【００６１】
工程１２では、工程１１で作成された複数の検量線に基づいて、その全てを満足すると近似される初期値Ｍの近似値及び検出時間の近似値を、近似初期値Ｍ０及び近似検出時間ｔ０として求める。具体的には例えば、図１で示される工程１２で説明したと同様にして求めることができる。
【００６２】
図６は、収束点（ｌｏｇ（Ｍ０），ｔ０）を用いて作成された検量線１１を概念的に示す。収束点（ｌｏｇ（Ｍ０），ｔ０）を得た後は、以下で説明する工程２１，２１１，２２を実行することで、所定の培地中で培養される所定の微生物について新たに検量線１を作成することができる。
【００６３】
工程２１では、図１で示される工程２１と同様にして、所定の培地及び所定の微生物において、微生物数の初期値Ｍ１についての検出時間ｔ１を測定する。
【００６４】
工程２１１では、さらに微生物数の初期値Ｍが初期値Ｍ１１である１検体について検出時間ｔ１１を測定する。本工程で用いられる検体は、工程２１での測定対象と同じ培地及び同じ微生物である。また、検出時間ｔ１１の測定は、検出時間ｔ１の測定と同様にして行う。
【００６５】
工程２２では、工程１２で得られた近似初期値Ｍ０及び近似検出時間ｔ０と、工程２１で得られた微生物数の初期値Ｍ１，Ｍ１１及び検出時間ｔ１，ｔ１１とに基づいて、所定の培地における所定の微生物について検量線１１を求める。具体的には、微生物数の初期値Ｍの対数と検出時間ｔとの関係を２次関数で近似し、座標（ｌｏｇ（Ｍ０），ｔ０）、座標（ｌｏｇ（Ｍ１），ｔ１）及び座標（ｌｏｇ（Ｍ１１），ｔ１１）を通る２次関数を検量線１１として見積もる。例えば、座標（ｌｏｇ（Ｍ０），ｔ０）、座標（ｌｏｇ（Ｍ１），ｔ１）及び座標（ｌｏｇ（Ｍ１１），ｔ１１）から最小二乗法で２次関数を求めてもよい。
【００６６】
上述した各々の工程を、図１で示されるフローチャートに従ってコンピュータに実行させるためのプログラムを構成してもよい。
【００６７】
上述した内容において、一旦収束点（ｌｏｇ（Ｍ０），ｔ０）が求められれば、その後培地と微生物との複数の組み合わせについて検量線１，１１を求める際には、組み合わせの各々について改めて収束点（ｌｏｇ（Ｍ０），ｔ０）を求めることなく、一旦求められた収束点（ｌｏｇ（Ｍ０），ｔ０）を用いてもよい。
【００６８】
また、上述した工程２１及び工程２１１での検出時間ｔ１，ｔ１１の測定において、所定の微生物について初期値Ｍ１，Ｍ１１が既知であるものを用いることで、微生物の初期値Ｍ１，Ｍ１１を予め求めることが必要とされない。よって、検出時間ｔ１，ｔ１１を測定するだけで、関数で近似される検量線１，１１が作成できる。
【００６９】
本発明によって作成された所定の培地及び所定の微生物についての検量線１，１１を用いることで、以下のようにして微生物数の初期値を容易に得ることができる。すなわち、所定の培地中で培養される所定の微生物の増殖開始後、その増殖に基づいて変動する可測定量が閾値に達するまでの時間を検出時間ｔとして測定する。そして、検量線１，１１を用いて、測定された検出時間ｔに対応する微生物数の初期値Ｍを求める。求められた初期値Ｍは、所定の微生物の増殖開始時すなわち検出時間ｔの測定開始時の微生物数である。
【００７０】
本発明では、特に微生物数の初期値Ｍの対数と検出時間ｔとの関係として検量線を求めたが、微生物数Ｍの初期値と検出時間ｔとの関係として検量線を求める場合にも上述した方法が適用できる。
【００７１】
また、工程１１で検量線１０１，１０２，・・・，１０ｍ，・・・を求める際に用いられる近似された関数と、工程２２で検量線１，１１を作成する際に用いられる近似された関数とは異なっていても良い。例えば、工程１１では、微生物数の初期値Ｍと検出時間との関係を１次関数で近似して検量線１０１，１０２，・・・，１０ｍ，・・・を求め、工程２２では、当該関係を２次関数で近似して検量線１，１１を求める。
【図面の簡単な説明】
【００７２】
【図１】本発明にかかる検量線作成方法を示すフローチャート図である。
【図２】工程（ｘ１，ｙ１，ｚ１）によって作成される検量線１０１を概念的に示す図である。
【図３】工程１１で作成される複数の検量線を概念的に示す図である。
【図４】収束点（ｌｏｇ（Ｍ０），ｔ０）を用いて作成された検量線１を概念的に示す図である。
【図５】２次関数で近似された検量線の作成方法を示すフローチャート図である。
【図６】収束点（ｌｏｇ（Ｍ０），ｔ０）を用いて作成された検量線１１を概念的に示す図である。
【符号の説明】
【００７３】
１，１１ 検量線（第１検量線）
１０１，１０２，・・・，１０ｍ，・・・ 検量線（第２検量線）
Ｍ，Ｍ１，Ｍ２，Ｍ３ （微生物数の）初期値
ｔ，ｔ１，ｔ２，ｔ３ 検出時間
Ｍ０ 近似初期値
ｔ０ 近似検出時間
【技術分野】
【０００１】
本発明は微生物の個体数を測定する技術に関する。
【背景技術】
【０００２】
微生物の個体数（以下「微生物数」という）を検出するために、従来から種々の測定技術が提案されている。例えば、標準寒天培地を用いる方法がある。具体的には、寒天培地中で微生物を培養することで、微生物によって生成されたコロニーの数を測定する。このとき、一つの微生物からは一つのコロニーが生成されるとみなし、コロニーの総数を培養前の微生物数（以下「初期値」という）とする。
【０００３】
その他に、例えば検量線に基づいて微生物数を求める方法がある。具体的に例えば、微生物の増殖開始後、その増殖に基づいて変動する可側定量が閾値に至るまでの検出時間を測定することで、微生物数の初期値の対数と検出時間との関係を示す検量線に基づいて、微生物数の初期値を求める。この方法を用いて微生物数を求める場合には、予め検量線を作成しておく必要がある。検量線を作成する方法は、例えば特許文献１に開示されている。
【０００４】
【特許文献１】特開２００３−２３５５９９号公報
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００５】
しかしながら、標準寒天培地を用いて微生物数を求める技術では、コロニーの観察等の煩雑な作業を行う必要がある。
【０００６】
また、検量線に基づいて微生物数を求める技術において予め検量線を作成する際には、少なくとも２検体について、検出時間と微生物数の初期値とを求める必要があった。この場合にも、微生物数の初期値を検出する際には、上記標準寒天培地を用いた測定技術が採用されるため、煩雑な作業が必要とされる。
【０００７】
本発明は、上述の事情に鑑みてなされたものであり、検量線を作成するために必要な検体数を減少させ、検量線の作成を簡易化することが目的とされる。
【課題を解決するための手段】
【０００８】
この発明の請求項１にかかる検量線作成方法は、（ａ）第１培地中で培養される第１微生物について、その個体数である第１微生物数の初期値（Ｍ１）からの増殖開始後、増殖に基づいて変動する可測定量が閾値に達する迄の時間である第１検出時間（ｔ１）を測定する工程と、（ｂ）近似初期値（Ｍ０）及び近似検出時間（ｔ０）と、前記工程（ａ）で得られた前記第１微生物数の前記初期値及び前記第１検出時間とに基づいて、前記第１培地における前記第１微生物についての第１検量線（１，１１）を求める工程とを備え、前記第１微生物数の前記初期値は既知であって、前記近似初期値及び前記近似検出時間は、第２培地中で培養される第２微生物の個体数である第２微生物数の初期値（Ｍ）と、前記第２微生物数の前記初期値からの増殖開始後、増殖に基づいて変動する可測定量が前記閾値に達する迄の時間である第２検出時間（ｔ）との関係を示す第２検量線（１０１，１０２，・・・，１０ｍ，・・・）の複数を満足すると近似される、前記第２微生物数の前記初期値の近似値及び前記第２検出時間の近似値である。
【０００９】
この発明の請求項２にかかる検量線作成方法は、請求項１記載の検量線作成方法であって、（ｃ）前記第１微生物数の前記初期値（Ｍ１）を求める工程を前記工程（ａ）の前に実行する。
【００１０】
この発明の請求項３にかかる検量線作成方法は、請求項１または請求項２記載の検量線作成方法であって、（ｄ）前記第２培地と前記第２微生物との複数の組み合わせの各々について前記第２検量線（１０１，１０２，・・・，１０ｍ，・・・）を求める工程と、（ｅ）複数の前記第２検量線に基づいて、その全てを満足すると近似される前記近似初期値（Ｍ０）と前記近似検出時間（ｔ０）とを求める工程とを前記工程（ａ）の前に実行する。
【００１１】
この発明の請求項４にかかる検量線作成方法は、請求項３記載の検量線作成方法であって、前記工程（ｄ）では、（ｄ−１）前記第２微生物数の前記初期値（Ｍ）の一つである第１値（Ｍ２）について前記第２検出時間（ｔ２）を測定する工程と、（ｄ−２）前記第２微生物数の前記初期値の一つであって前記第１値とは異なる第２値（Ｍ３）について前記第２検出時間（ｔ３）を測定する工程と、（ｄ−３）前記第１値と、前記第２値と、前記工程（ｄ−１）及び前記工程（ｄ−２）の各々で測定された前記第２検出時間（ｔ２，ｔ３）とに基づいて、一の前記第２検量線（１０１，１０２，・・・，１０ｍ，・・・）を求める工程とを実行する。
【００１２】
この発明の請求項５にかかる検量線作成方法は、請求項１乃至請求項４のいずれか一つに記載の検量線作成方法であって、前記可測定量は、前記第１培地あるいは前記第２培地中を、それらに含まれる酸素量に応じて流れる電流である。
【００１３】
この発明の請求項６にかかる検量線作成方法は、請求項１乃至請求項５のいずれか一つに記載の検量線作成方法であって、前記第１検量線（１）は、前記第１微生物数の初期値（Ｍ）の対数と、当該初期値からの増殖開始後、増殖に基づいて変動する可測定量が前記閾値に達するまでの時間である検出時間（ｔ）との関係を線形で近似したものであり、前記第２検量線（１０１，１０２，・・・，１０ｍ，・・・）は、前記第２微生物数の前記初期値（Ｍ）の対数と、前記第２検出時間との関係を線形で近似したものであって、前記近似初期値（Ｍ０）の対数は８〜１０．５（ｌｏｇ（ＣＦＵ／ｇ））であり、前記近似検出時間（ｔ０）は−３０（分）である。
【００１４】
この発明の請求項７にかかる検量線作成方法は、請求項６記載の検量線作成方法であって、前記近似初期値（Ｍ０）の対数は９〜９．５（ｌｏｇ（ＣＦＵ／ｇ））である。
【００１５】
この発明の請求項８にかかる微生物数測定方法は、（ｘ）前記第１培地中で培養される前記第１微生物について、その増殖開始後、増殖に基づいて変動する前記可測定量が前記閾値に達する迄の時間である第３検出時間（ｔ）を測定する工程と、（ｙ）請求項１乃至請求項７のいずれか一つに記載の検量線作成方法で得られた前記第１検量線（１）と、前記第３検出時間とに基づいて、前記第１微生物数の初期値（Ｍ）を求める工程とを備え、前記工程（ｘ）での前記第１微生物の増殖は、前記工程（ｙ）で求められる前記第１微生物数の前記初期値から開始する。
【００１６】
この発明の請求項９にかかるプログラムは、（ａ）第１培地中で培養される第１微生物について、その個体数である第１微生物数の初期値（Ｍ１）からの増殖開始後、増殖に基づいて変動する可測定量が閾値に達する迄の時間である第１検出時間（ｔ１）を測定する工程と、（ｂ）近似初期値（Ｍ０）及び近似検出時間（ｔ０）と、前記工程（ａ）で得られた前記第１微生物数の前記初期値及び前記第１検出時間とに基づいて、前記第１培地における前記第１微生物についての第１検量線（１，１１）を求める工程とをコンピュータに実行させるためのプログラムであって、前記第１微生物数の前記初期値は既知であり、前記近似初期値及び前記近似検出時間は、第２培地中で培養される第２微生物の個体数である第２微生物数の初期値（Ｍ）と、前記第２微生物数の前記初期値からの増殖開始後、増殖に基づいて変動する可測定量が前記閾値に達する迄の時間である第２検出時間（ｔ）との関係を示す第２検量線（１０１，１０２，・・・，１０ｍ，・・・）の複数を満足すると近似される、前記第２微生物数の前記初期値の近似値及び前記第２検出時間の近似値である。
【００１７】
この発明の請求項１０にかかるプログラムは、請求項９記載のプログラムであって、（ｃ）前記第１微生物数の前記初期値（Ｍ１）を求める工程を前記工程（ａ）の前に前記コンピュータに実行させる。
【００１８】
この発明の請求項１１にかかるプログラムは、請求項９または請求項１０記載のプログラムであって、（ｄ）前記第２培地と前記第２微生物との複数の組み合わせの各々について前記第２検量線（１０１，１０２，・・・，１０ｍ，・・・）を求める工程と、（ｅ）複数の前記第２検量線に基づいて、その全てを満足すると近似される前記近似初期値（Ｍ０）と前記近似検出時間（ｔ０）とを求める工程とを前記工程（ａ）の前に前記コンピュータに実行させる。
【００１９】
この発明の請求項１２にかかるプログラムは、請求項１１記載のプログラムであって、前記工程（ｄ）では、（ｄ−１）前記第２微生物数の前記初期値（Ｍ）の一つである第１値（Ｍ２）について前記第２検出時間（ｔ２）を測定する工程と、（ｄ−２）前記第２微生物数の前記初期値の一つであって前記第１値とは異なる第２値（Ｍ３）について前記第２検出時間（ｔ３）を測定する工程と、（ｄ−３）前記第１値と、前記第２値と、前記工程（ｄ−１）及び前記工程（ｄ−２）の各々で測定された前記第２検出時間（ｔ２，ｔ３）とに基づいて、一の前記第２検量線（１０１，１０２，・・・，１０ｍ，・・・）を求める工程とを前記コンピュータに実行させる。
【００２０】
この発明の請求項１３にかかるプログラムは、請求項９乃至請求項１２のいずれか一つに記載のプログラムであって、前記可測定量は、前記第１培地あるいは前記第２培地中を、それらに含まれる酸素量に応じて流れる電流である。
【００２１】
この発明の請求項１４にかかるプログラムは、請求項９乃至請求項１３のいずれか一つに記載のプログラムであって、前記第１検量線（１）は、前記第１微生物数の初期値（Ｍ）の対数と、当該初期値からの増殖開始後、増殖に基づいて変動する可測定量が前記閾値に達するまでの時間である検出時間（ｔ）との関係を線形で近似したものであり、前記第２検量線（１０１，１０２，・・・，１０ｍ，・・・）は、前記第２微生物数の前記初期値（Ｍ）の対数と、前記第２検出時間との関係を線形で近似したものであって、前記近似初期値（Ｍ０）の対数は８〜１０．５（ｌｏｇ（ＣＦＵ／ｇ））であり、前記近似検出時間（ｔ０）は−３０（分）である。
【００２２】
この発明の請求項１５にかかるプログラムは、請求項１４記載のプログラムであって、前記近似初期値（Ｍ０）の対数は９〜９．５（ｌｏｇ（ＣＦＵ／ｇ））である。
【００２３】
この発明の請求項１６にかかるプログラムは、（ｘ）前記第１培地中で培養される前記第１微生物について、その増殖開始後、増殖に基づいて変動する前記可測定量が前記閾値に達する迄の時間である第３検出時間（ｔ）を測定する工程と、（ｙ）請求項９乃至請求項１５のいずれか一つに記載のプログラムが実行する工程を前記コンピュータに実行させることで得られた第１検量線（１）と、前記第３検出時間とに基づいて、前記第１微生物数の初期値（Ｍ）を求める工程とを前記コンピュータにさらに実行させるためのプログラムであって、前記工程（ｘ）での前記第１微生物の増殖は、前記工程（ｙ）で求められる前記第１微生物数の前記初期値から開始する。
【発明の効果】
【００２４】
この発明の請求項１にかかる検量線作成方法もしくは請求項９にかかるプログラムによれば、第１培地と第１微生物との組み合わせの一つについて、工程（ａ）において第１検出時間を測定するだけで、関数で近似される第１検量線が作成できる。しかも、第１検出時間の測定回数が減少されて、第１検量線の作成が簡単化される。
【００２５】
この発明の請求項２にかかる検量線作成方法もしくは請求項１０にかかるプログラムによれば、第１微生物数の初期値が求められるので、請求項１にかかる検量線作成方法もしくは請求項９にかかるプログラムに適用できる。
【００２６】
この発明の請求項３にかかる検量線作成方法もしくは請求項１１にかかるプログラムによれば、第１検量線の作成に必要な近似初期値及び近似検出時間が求められる。
【００２７】
この発明の請求項４にかかる検量線作成方法もしくは請求項１２にかかるプログラムによれば、第２培地と第２微生物との組み合わせの各々について、少なくとも１次関数としての第２検量線が作成できる。特に第２検量線が１次関数である場合には、工程（ｅ）の近似初期値及び近似検出時間を簡易に求めることができる。
【００２８】
この発明の請求項５にかかる検量線作成方法もしくは請求項１３にかかるプログラムによれば、培地中に含まれる酸素量は微生物の代謝に伴って変動するので、請求項１乃至請求項４のいずれか一つにかかる検量線作成方法あるいは請求項９乃至請求項１２のいずれか一つにかかるプログラムに適用できる。
【００２９】
この発明の請求項６または請求項７にかかる検量線作成方法もしくは請求項１４または請求項１５にかかるプログラムによれば、かかる近似初期値及び近似検出時間において第２検量線の複数を満足すると近似できる。
【００３０】
この発明の請求項８にかかる微生物数測定方法もしくは請求項１６にかかるプログラムによれば、請求項１乃至請求項７のいずれか一つに記載の検量線作成方法もしくは請求項９乃至請求項１５のいずれか一つに記載のプログラムが実行する工程をコンピュータに実行させることで得られた第１検量線を用いることで、寒天培地等を用いたコロニーの観察等の煩雑な作業を行うことなく、微生物数の初期値を検出時間から容易に見積もることができる。
【発明を実施するための最良の形態】
【００３１】
図１は、本発明にかかる検量線作成方法をフローチャートで示す。フローチャートは、工程１１，１２及び工程２１，２２で構成される。
【００３２】
工程１１では、培地と微生物との複数の組み合わせについて、検量線が作成される。具体的には、工程（ｘ１，ｙ１，ｚ１）、工程（ｘ２，ｙ２，ｚ２）、・・・、工程（ｘｍ，ｙｍ，ｚｍ）、・・・の各々が独立に、例えば並行して実行される。工程（ｘ１，ｙ１，ｚ１）、工程（ｘ２，ｙ２，ｚ２）、・・・、工程（ｘｍ，ｙｍ，ｚｍ）、・・・の各々では、培地と微生物との組み合わせの一について検量線が作成される。但し、工程（ｘｉ，ｙｉ，ｚｉ）と工程（ｘｊ，ｙｊ，ｚｊ）（ｉ，ｊ＝１〜ｍ，ｉ≠ｊ）との間では培地や微生物が異なる。
【００３３】
本発明において培地には、食物などの天然物質で構成された天然培地や、既知の化合物で合成された合成培地が採用される。天然培地は、例えば食物から抽出された栄養素を含む液であり、合成培地は例えば生理食塩水である。
【００３４】
図２は、工程（ｘ１，ｙ１，ｚ１）によって作成される検量線１０１を概念的に示す。以下では、図２を用いて工程（ｘ１，ｙ１，ｚ１）について説明する。
【００３５】
工程ｘ１では、培地中で培養される微生物について、微生物数の初期値Ｍ２から増殖開始後、増殖に基づいて変動する可測定量が閾値に達するまでの時間を、検出時間ｔ２として測定する。このとき、微生物数の初期値Ｍ２は既知であり、例えば本工程ｘ１を実行する前に予め求めておく。
【００３６】
可側定量には、培地中に含まれる酸素量に応じて培地中を流れる電流が採用でき、以下において同様である。このような電流の測定は、例えば特許文献１により公知である。
【００３７】
工程ｙ１では、工程ｘ１での測定対象と同じ培地及び同じ微生物について、微生物数の初期値Ｍ２とは異なる初期値Ｍ３からの増殖開始後、増殖に基づいて変動する可測定量が閾値に達するまでの時間を、検出時間ｔ３として測定する。このとき、微生物数の初期値Ｍ３は既知であり、例えば工程ｙ１を実行する前に予め求めておく。また、本工程で採用される可側定量及び閾値は、工程ｘ１で採用される可側定量及び閾値と同じである。
【００３８】
工程ｚ１では、初期値Ｍ２，Ｍ３の各々の対数と、工程ｘ１，ｙ１の各々で測定された検出時間ｔ２，ｔ３とに基づいて、検量線１０１を作成する。具体的には例えば、微生物数の初期値Ｍの対数と検出時間ｔとの関係を１次関数で近似し、座標（ｌｏｇ（Ｍ２），ｔ２）と座標（ｌｏｇ（Ｍ３），ｔ３）とを通る１次関数を検量線１０１とする（図２）。
【００３９】
工程（ｘ２，ｙ２，ｚ２）、・・・、工程（ｘｍ，ｙｍ，ｚｍ）、・・・の各々についても、工程（ｘ１，ｙ１，ｚ１）と同様にして、１次関数に近似された検量線１０２，・・・，１０ｍ，・・・を作成する。図３ではこれらの検量線１０２，・・・，１０ｍ，・・・が検量線１０１と共に示されている。
【００４０】
工程（ｘ１，ｙ１，ｚ１）、工程（ｘ２，ｙ２，ｚ２）、・・・、工程（ｘｍ，ｙｍ，ｚｍ）、・・・は、必ずしも全てが並行して実行される必要はなく、例えばある一部の工程の各々がまず並行して実行され、その後、残りの工程の各々が並行して実行されてもよい。
【００４１】
また、工程ｘ１と工程ｙ１とを並行して実行してもよい。工程ｘ２，ｙ２、・・・、工程ｘｍ，ｙｍ、・・・についても同様である。
【００４２】
工程１２では、工程１１で作成された複数の検量線１０１，１０２，・・・，１０ｍ，・・・に基づいて、その全てを満足すると近似される初期値Ｍの近似値及び検出時間ｔの近似値を、近似初期値Ｍ０及び近似検出時間ｔ０として求める。以下では、近似初期値Ｍ０の対数及び近似検出時間ｔ０を収束点（ｌｏｇ（Ｍ０），ｔ０）という。
【００４３】
具体的には例えば、座標（ｌｏｇ（Ｍ），ｔ）から検量線１０１，１０２，・・・，１０ｍ，・・・の各々までの距離の和が最小になるような座標（ｌｏｇ（Ｍ），ｔ）を、収束点（ｌｏｇ（Ｍ０），ｔ０）として求める。この場合、図３で示される複数の検量線１０１，１０２，・・・，１０ｍ，・・・からは、近似初期値Ｍ０の対数ｌｏｇ（Ｍ０）＝８．７５、近似検出時間ｔ０＝−３０（分）として具体的に求まる。
【００４４】
次のようにして収束点（ｌｏｇ（Ｍ０），ｔ０）を求めても良い。ここで、近似検出時間ｔ０には−３０が採用される。まず、ｌｏｇ（Ｍ）が２である検量線１０１上の一点と収束点（ｌｏｇ（Ｍ０），ｔ０）とに基づいて検量線を作成する。そして、当該検量線と検量線１０１とを比較し、検出時間が２００，３００，４００，５００，６００（分）の５点の各々でｌｏｇ（Ｍ）の差の絶対値を求め、この差が１以内であるものが５点のうち３点以上ある場合を、収束点（ｌｏｇ（Ｍ０），ｔ０）が検量線１０１に対して合格であるとし、その他を不合格と判定する。
【００４５】
そして、検量線１０１に対して行ったと同様にして、収束点（ｌｏｇ（Ｍ０），ｔ０）が工程１１で得られた検量線１０２，・・・，１０ｍ，・・・について合格か否かをそれぞれ判定する。
【００４６】
さらに、ｌｏｇ（Ｍ）が３及び５である検量線１０１，１０２，・・・，１０ｍ，・・・上の各々の一点と収束点（ｌｏｇ（Ｍ０），ｔ０）とに基づいて作成される検量線のそれぞれについて、上述と同様の判定を行う。
【００４７】
その結果、合格か否かの判定数に対する合格率は、近似初期値Ｍ０の対数ｌｏｇ（Ｍ０）が８〜１０．５の範囲で８０％以上となり、９〜９．５の範囲で８８％以上となる。
【００４８】
従って、近似検出時間が−３０（分）であって近似初期値Ｍ０の対数ｌｏｇ（Ｍ０）が８〜１０．５である収束点（ｌｏｇ（Ｍ０），ｔ０）において、検量線１０１，１０２，・・・，１０ｍ，・・・の複数を満足すると近似できる。そして、近似初期値Ｍ０の対数ｌｏｇ（Ｍ０）が９〜９．５である場合が、より多くの検量線を満足する点で特に望ましい。
【００４９】
図４は、収束点（ｌｏｇ（Ｍ０），ｔ０）を用いて作成された検量線１を概念的に示す。収束点（ｌｏｇ（Ｍ０），ｔ０）を得た後は、以下で説明する工程２１，２２を実行することで、所定の培地中で培養される所定の微生物について新たに検量線１を作成することができる。
【００５０】
工程２１では、１検体について検出時間ｔを測定する。ここで検体とは、検出時間ｔの測定対象であり、培地と微生物との組み合わせ及び微生物数の初期値で特徴付けられる。以下において同様である。
【００５１】
具体的には、所定の微生物の微生物数の初期値Ｍ１からの増殖開始後、増殖に基づいて変動する可側定量が閾値に達するまでの時間を、検出時間ｔ１として測定する。このとき、微生物数の初期値Ｍ１は、既知であってもよし、本工程２１を実行する前に予め求めておいてもよい。また、本工程で採用される可側定量及び閾値は、工程ｘ１，ｙ１などで採用される可側定量及び閾値と同じである。
【００５２】
工程２２では、工程１２で得られた近似初期値Ｍ０及び近似検出時間ｔ０と、工程２１で得られた微生物数の初期値Ｍ１及び検出時間ｔ１とに基づいて、所定の培地における所定の微生物についての検量線１を求める。具体的には、微生物数の初期値Ｍの対数と検出時間ｔとの関係を１次関数で近似し、座標（ｌｏｇ（Ｍ０），ｔ０）と座標（ｌｏｇ（Ｍ１），ｔ１）とを通る１次関数を検量線１として見積もる。
【００５３】
所定の培地と所定の微生物について、微生物数の初期値Ｍの対数と検出時間ｔとの関係を上記したように１次関数で近似して表す場合、１検体について検出時間ｔ１を測定するだけで検量線１が作成できる。よって、検出時間ｔ１の測定回数が減少されて、所定の培地と所定の微生物についての検量線１の作成が簡単化される。
【００５４】
さらに言うと、微生物数の初期値Ｍの対数と検出時間ｔとの関係をｎ次関数で近似して表す場合、ｎ検体について検出時間ｔを測定するだけで検量線１が作成できる。具体的に以下では、微生物数の初期値Ｍの対数と検出時間ｔとの関係を２次関数で近似した場合について説明する。
【００５５】
図５は、２次関数で近似された検量線の作成方法をフローチャートで示す。フローチャートは、工程１１，１２及び工程２１，２１１，２２で構成される。
【００５６】
工程１１では、培地と微生物との複数の組み合わせについて、検量線が作成される。具体的には、工程（ｘ１，ｙ１，ｗ１，ｚ１）、工程（ｘ２，ｙ２，ｗ２，ｚ２）、・・・、工程（ｘｍ，ｙｍ，ｗｍ，ｚｍ）、・・・の各々が独立に、例えば並行して実行される。工程（ｘ１，ｙ１，ｗ１，ｚ１）、工程（ｘ２，ｙ２，ｗ２，ｚ２）、・・・、工程（ｘｍ，ｙｍ，ｗｍ，ｚｍ）、・・・の各々では、培地と微生物との組み合わせの一について検量線が作成される。但し、工程（ｘｉ，ｙｉ，ｗｉ，ｚｉ）と工程（ｘｊ，ｙｊ，ｗｊ，ｚｊ）（ｉ，ｊ＝１〜ｍ，ｉ≠ｊ）との間では培地や微生物が異なる。
【００５７】
工程ｘ１，ｙ１では、図１で示される工程ｘ１，ｙ１と同様にして、培地と微生物との組み合わせの一において、微生物数の初期値Ｍ２，Ｍ３についての検出時間ｔ２，ｔ３を測定する。
【００５８】
工程ｗ１では、さらにもう１検体について検出時間ｔ３１を測定する。本工程で用いられる検体は、工程ｘ１，ｙ１での測定対象と同じ培地及び同じ微生物であって、微生物数の初期値Ｍ２，Ｍ３とは異なる初期値Ｍ３１を有する。
【００５９】
工程ｚ１では、微生物数の初期値Ｍの対数と検出時間ｔとの関係を２次関数で近似し、工程ｘ１，ｙ１，ｗ１で測定された３検体についての座標（ｌｏｇ（Ｍ），ｔ）を通る２次関数を検量線として求める。例えば、上記測定された３検体についての座標（ｌｏｇ（Ｍ），ｔ）から最小二乗法で２次関数を求めてもよい。
【００６０】
工程（ｘ２，ｙ２，ｗ２，ｚ２）、・・・、工程（ｘｍ，ｙｍ，ｗｍ，ｚｍ）、・・・の各々についても、工程（ｘ１，ｙ１，ｗ１，ｚ１）と同様にして、２次関数に近似された検量線を作成する。
【００６１】
工程１２では、工程１１で作成された複数の検量線に基づいて、その全てを満足すると近似される初期値Ｍの近似値及び検出時間の近似値を、近似初期値Ｍ０及び近似検出時間ｔ０として求める。具体的には例えば、図１で示される工程１２で説明したと同様にして求めることができる。
【００６２】
図６は、収束点（ｌｏｇ（Ｍ０），ｔ０）を用いて作成された検量線１１を概念的に示す。収束点（ｌｏｇ（Ｍ０），ｔ０）を得た後は、以下で説明する工程２１，２１１，２２を実行することで、所定の培地中で培養される所定の微生物について新たに検量線１を作成することができる。
【００６３】
工程２１では、図１で示される工程２１と同様にして、所定の培地及び所定の微生物において、微生物数の初期値Ｍ１についての検出時間ｔ１を測定する。
【００６４】
工程２１１では、さらに微生物数の初期値Ｍが初期値Ｍ１１である１検体について検出時間ｔ１１を測定する。本工程で用いられる検体は、工程２１での測定対象と同じ培地及び同じ微生物である。また、検出時間ｔ１１の測定は、検出時間ｔ１の測定と同様にして行う。
【００６５】
工程２２では、工程１２で得られた近似初期値Ｍ０及び近似検出時間ｔ０と、工程２１で得られた微生物数の初期値Ｍ１，Ｍ１１及び検出時間ｔ１，ｔ１１とに基づいて、所定の培地における所定の微生物について検量線１１を求める。具体的には、微生物数の初期値Ｍの対数と検出時間ｔとの関係を２次関数で近似し、座標（ｌｏｇ（Ｍ０），ｔ０）、座標（ｌｏｇ（Ｍ１），ｔ１）及び座標（ｌｏｇ（Ｍ１１），ｔ１１）を通る２次関数を検量線１１として見積もる。例えば、座標（ｌｏｇ（Ｍ０），ｔ０）、座標（ｌｏｇ（Ｍ１），ｔ１）及び座標（ｌｏｇ（Ｍ１１），ｔ１１）から最小二乗法で２次関数を求めてもよい。
【００６６】
上述した各々の工程を、図１で示されるフローチャートに従ってコンピュータに実行させるためのプログラムを構成してもよい。
【００６７】
上述した内容において、一旦収束点（ｌｏｇ（Ｍ０），ｔ０）が求められれば、その後培地と微生物との複数の組み合わせについて検量線１，１１を求める際には、組み合わせの各々について改めて収束点（ｌｏｇ（Ｍ０），ｔ０）を求めることなく、一旦求められた収束点（ｌｏｇ（Ｍ０），ｔ０）を用いてもよい。
【００６８】
また、上述した工程２１及び工程２１１での検出時間ｔ１，ｔ１１の測定において、所定の微生物について初期値Ｍ１，Ｍ１１が既知であるものを用いることで、微生物の初期値Ｍ１，Ｍ１１を予め求めることが必要とされない。よって、検出時間ｔ１，ｔ１１を測定するだけで、関数で近似される検量線１，１１が作成できる。
【００６９】
本発明によって作成された所定の培地及び所定の微生物についての検量線１，１１を用いることで、以下のようにして微生物数の初期値を容易に得ることができる。すなわち、所定の培地中で培養される所定の微生物の増殖開始後、その増殖に基づいて変動する可測定量が閾値に達するまでの時間を検出時間ｔとして測定する。そして、検量線１，１１を用いて、測定された検出時間ｔに対応する微生物数の初期値Ｍを求める。求められた初期値Ｍは、所定の微生物の増殖開始時すなわち検出時間ｔの測定開始時の微生物数である。
【００７０】
本発明では、特に微生物数の初期値Ｍの対数と検出時間ｔとの関係として検量線を求めたが、微生物数Ｍの初期値と検出時間ｔとの関係として検量線を求める場合にも上述した方法が適用できる。
【００７１】
また、工程１１で検量線１０１，１０２，・・・，１０ｍ，・・・を求める際に用いられる近似された関数と、工程２２で検量線１，１１を作成する際に用いられる近似された関数とは異なっていても良い。例えば、工程１１では、微生物数の初期値Ｍと検出時間との関係を１次関数で近似して検量線１０１，１０２，・・・，１０ｍ，・・・を求め、工程２２では、当該関係を２次関数で近似して検量線１，１１を求める。
【図面の簡単な説明】
【００７２】
【図１】本発明にかかる検量線作成方法を示すフローチャート図である。
【図２】工程（ｘ１，ｙ１，ｚ１）によって作成される検量線１０１を概念的に示す図である。
【図３】工程１１で作成される複数の検量線を概念的に示す図である。
【図４】収束点（ｌｏｇ（Ｍ０），ｔ０）を用いて作成された検量線１を概念的に示す図である。
【図５】２次関数で近似された検量線の作成方法を示すフローチャート図である。
【図６】収束点（ｌｏｇ（Ｍ０），ｔ０）を用いて作成された検量線１１を概念的に示す図である。
【符号の説明】
【００７３】
１，１１ 検量線（第１検量線）
１０１，１０２，・・・，１０ｍ，・・・ 検量線（第２検量線）
Ｍ，Ｍ１，Ｍ２，Ｍ３ （微生物数の）初期値
ｔ，ｔ１，ｔ２，ｔ３ 検出時間
Ｍ０ 近似初期値
ｔ０ 近似検出時間
【特許請求の範囲】
【請求項１】
（ａ）第１培地中で培養される第１微生物について、その個体数である第１微生物数の初期値（Ｍ１）からの増殖開始後、増殖に基づいて変動する可測定量が閾値に達する迄の時間である第１検出時間（ｔ１）を測定する工程と、
（ｂ）近似初期値（Ｍ０）及び近似検出時間（ｔ０）と、前記工程（ａ）で得られた前記第１微生物数の前記初期値及び前記第１検出時間とに基づいて、前記第１培地における前記第１微生物についての第１検量線（１，１１）を求める工程と
を備え、
前記第１微生物数の前記初期値は既知であって、
前記近似初期値及び前記近似検出時間は、第２培地中で培養される第２微生物の個体数である第２微生物数の初期値（Ｍ）と、前記第２微生物数の前記初期値からの増殖開始後、増殖に基づいて変動する可測定量が前記閾値に達する迄の時間である第２検出時間（ｔ）との関係を示す第２検量線（１０１，１０２，・・・，１０ｍ，・・・）の複数を満足すると近似される、前記第２微生物数の前記初期値の近似値及び前記第２検出時間の近似値である、検量線作成方法。
【請求項２】
（ｃ）前記第１微生物数の前記初期値（Ｍ１）を求める工程
を前記工程（ａ）の前に実行する、請求項１記載の検量線作成方法。
【請求項３】
（ｄ）前記第２培地と前記第２微生物との複数の組み合わせの各々について前記第２検量線（１０１，１０２，・・・，１０ｍ，・・・）を求める工程と、
（ｅ）複数の前記第２検量線に基づいて、その全てを満足すると近似される前記近似初期値（Ｍ０）と前記近似検出時間（ｔ０）とを求める工程と
を前記工程（ａ）の前に実行する、請求項１または請求項２記載の検量線作成方法。
【請求項４】
前記工程（ｄ）では、
（ｄ−１）前記第２微生物数の前記初期値（Ｍ）の一つである第１値（Ｍ２）について前記第２検出時間（ｔ２）を測定する工程と、
（ｄ−２）前記第２微生物数の前記初期値の一つであって前記第１値とは異なる第２値（Ｍ３）について前記第２検出時間（ｔ３）を測定する工程と、
（ｄ−３）前記第１値と、前記第２値と、前記工程（ｄ−１）及び前記工程（ｄ−２）の各々で測定された前記第２検出時間（ｔ２，ｔ３）とに基づいて、一の前記第２検量線（１０１，１０２，・・・，１０ｍ，・・・）を求める工程と
を実行する、請求項３記載の検量線作成方法。
【請求項５】
前記可測定量は、前記第１培地あるいは前記第２培地中を、それらに含まれる酸素量に応じて流れる電流である、請求項１乃至請求項４のいずれか一つに記載の検量線作成方法。
【請求項６】
前記第１検量線（１）は、前記第１微生物数の初期値（Ｍ）の対数と、当該初期値からの増殖開始後、増殖に基づいて変動する可測定量が前記閾値に達するまでの時間である検出時間（ｔ）との関係を線形で近似したものであり、
前記第２検量線（１０１，１０２，・・・，１０ｍ，・・・）は、前記第２微生物数の前記初期値（Ｍ）の対数と、前記第２検出時間との関係を線形で近似したものであって、
前記近似初期値（Ｍ０）の対数は８〜１０．５（ｌｏｇ（ＣＦＵ／ｇ））であり、
前記近似検出時間（ｔ０）は−３０（分）である、請求項１乃至請求項５のいずれか一つに記載の検量線作成方法。
【請求項７】
前記近似初期値（Ｍ０）の対数は９〜９．５（ｌｏｇ（ＣＦＵ／ｇ））である、請求項６記載の検量線作成方法。
【請求項８】
（ｘ）前記第１培地中で培養される前記第１微生物について、その増殖開始後、増殖に基づいて変動する前記可測定量が前記閾値に達する迄の時間である第３検出時間（ｔ）を測定する工程と、
（ｙ）請求項１乃至請求項７のいずれか一つに記載の検量線作成方法で得られた前記第１検量線（１）と、前記第３検出時間とに基づいて、前記第１微生物数の初期値（Ｍ）を求める工程と
を備え、
前記工程（ｘ）での前記第１微生物の増殖は、前記工程（ｙ）で求められる前記第１微生物数の前記初期値から開始する、微生物数測定方法。
【請求項９】
（ａ）第１培地中で培養される第１微生物について、その個体数である第１微生物数の初期値（Ｍ１）からの増殖開始後、増殖に基づいて変動する可測定量が閾値に達する迄の時間である第１検出時間（ｔ１）を測定する工程と、
（ｂ）近似初期値（Ｍ０）及び近似検出時間（ｔ０）と、前記工程（ａ）で得られた前記第１微生物数の前記初期値及び前記第１検出時間とに基づいて、前記第１培地における前記第１微生物についての第１検量線（１，１１）を求める工程と
をコンピュータに実行させるためのプログラムであって、
前記第１微生物数の前記初期値は既知であり、
前記近似初期値及び前記近似検出時間は、第２培地中で培養される第２微生物の個体数である第２微生物数の初期値（Ｍ）と、前記第２微生物数の前記初期値からの増殖開始後、増殖に基づいて変動する可測定量が前記閾値に達する迄の時間である第２検出時間（ｔ）との関係を示す第２検量線（１０１，１０２，・・・，１０ｍ，・・・）の複数を満足すると近似される、前記第２微生物数の前記初期値の近似値及び前記第２検出時間の近似値である、プログラム。
【請求項１０】
（ｃ）前記第１微生物数の前記初期値（Ｍ１）を求める工程
を前記工程（ａ）の前に前記コンピュータに実行させる、請求項９記載のプログラム。
【請求項１１】
（ｄ）前記第２培地と前記第２微生物との複数の組み合わせの各々について前記第２検量線（１０１，１０２，・・・，１０ｍ，・・・）を求める工程と、
（ｅ）複数の前記第２検量線に基づいて、その全てを満足すると近似される前記近似初期値（Ｍ０）と前記近似検出時間（ｔ０）とを求める工程と
を前記工程（ａ）の前に前記コンピュータに実行させる、請求項９または請求項１０記載のプログラム。
【請求項１２】
前記工程（ｄ）では、
（ｄ−１）前記第２微生物数の前記初期値（Ｍ）の一つである第１値（Ｍ２）について前記第２検出時間（ｔ２）を測定する工程と、
（ｄ−２）前記第２微生物数の前記初期値の一つであって前記第１値とは異なる第２値（Ｍ３）について前記第２検出時間（ｔ３）を測定する工程と、
（ｄ−３）前記第１値と、前記第２値と、前記工程（ｄ−１）及び前記工程（ｄ−２）の各々で測定された前記第２検出時間（ｔ２，ｔ３）とに基づいて、一の前記第２検量線（１０１，１０２，・・・，１０ｍ，・・・）を求める工程と
を前記コンピュータに実行させる、請求項１１記載のプログラム。
【請求項１３】
前記可測定量は、前記第１培地あるいは前記第２培地中を、それらに含まれる酸素量に応じて流れる電流である、請求項９乃至請求項１２のいずれか一つに記載のプログラム。
【請求項１４】
前記第１検量線（１）は、前記第１微生物数の初期値（Ｍ）の対数と、当該初期値からの増殖開始後、増殖に基づいて変動する可測定量が前記閾値に達するまでの時間である検出時間（ｔ）との関係を線形で近似したものであり、
前記第２検量線（１０１，１０２，・・・，１０ｍ，・・・）は、前記第２微生物数の前記初期値（Ｍ）の対数と、前記第２検出時間との関係を線形で近似したものであって、
前記近似初期値（Ｍ０）の対数は８〜１０．５（ｌｏｇ（ＣＦＵ／ｇ））であり、
前記近似検出時間（ｔ０）は−３０（分）である、請求項９乃至請求項１３のいずれか一つに記載のプログラム。
【請求項１５】
前記近似初期値（Ｍ０）の対数は９〜９．５（ｌｏｇ（ＣＦＵ／ｇ））である、請求項１４記載のプログラム。
【請求項１６】
（ｘ）前記第１培地中で培養される前記第１微生物について、その増殖開始後、増殖に基づいて変動する前記可測定量が前記閾値に達する迄の時間である第３検出時間（ｔ）を測定する工程と、
（ｙ）請求項９乃至請求項１５のいずれか一つに記載のプログラムが実行する工程を前記コンピュータに実行させることで得られた第１検量線（１）と、前記第３検出時間とに基づいて、前記第１微生物数の初期値（Ｍ）を求める工程と
を前記コンピュータにさらに実行させるためのプログラムであって、
前記工程（ｘ）での前記第１微生物の増殖は、前記工程（ｙ）で求められる前記第１微生物数の前記初期値から開始する、プログラム。
【請求項１】
（ａ）第１培地中で培養される第１微生物について、その個体数である第１微生物数の初期値（Ｍ１）からの増殖開始後、増殖に基づいて変動する可測定量が閾値に達する迄の時間である第１検出時間（ｔ１）を測定する工程と、
（ｂ）近似初期値（Ｍ０）及び近似検出時間（ｔ０）と、前記工程（ａ）で得られた前記第１微生物数の前記初期値及び前記第１検出時間とに基づいて、前記第１培地における前記第１微生物についての第１検量線（１，１１）を求める工程と
を備え、
前記第１微生物数の前記初期値は既知であって、
前記近似初期値及び前記近似検出時間は、第２培地中で培養される第２微生物の個体数である第２微生物数の初期値（Ｍ）と、前記第２微生物数の前記初期値からの増殖開始後、増殖に基づいて変動する可測定量が前記閾値に達する迄の時間である第２検出時間（ｔ）との関係を示す第２検量線（１０１，１０２，・・・，１０ｍ，・・・）の複数を満足すると近似される、前記第２微生物数の前記初期値の近似値及び前記第２検出時間の近似値である、検量線作成方法。
【請求項２】
（ｃ）前記第１微生物数の前記初期値（Ｍ１）を求める工程
を前記工程（ａ）の前に実行する、請求項１記載の検量線作成方法。
【請求項３】
（ｄ）前記第２培地と前記第２微生物との複数の組み合わせの各々について前記第２検量線（１０１，１０２，・・・，１０ｍ，・・・）を求める工程と、
（ｅ）複数の前記第２検量線に基づいて、その全てを満足すると近似される前記近似初期値（Ｍ０）と前記近似検出時間（ｔ０）とを求める工程と
を前記工程（ａ）の前に実行する、請求項１または請求項２記載の検量線作成方法。
【請求項４】
前記工程（ｄ）では、
（ｄ−１）前記第２微生物数の前記初期値（Ｍ）の一つである第１値（Ｍ２）について前記第２検出時間（ｔ２）を測定する工程と、
（ｄ−２）前記第２微生物数の前記初期値の一つであって前記第１値とは異なる第２値（Ｍ３）について前記第２検出時間（ｔ３）を測定する工程と、
（ｄ−３）前記第１値と、前記第２値と、前記工程（ｄ−１）及び前記工程（ｄ−２）の各々で測定された前記第２検出時間（ｔ２，ｔ３）とに基づいて、一の前記第２検量線（１０１，１０２，・・・，１０ｍ，・・・）を求める工程と
を実行する、請求項３記載の検量線作成方法。
【請求項５】
前記可測定量は、前記第１培地あるいは前記第２培地中を、それらに含まれる酸素量に応じて流れる電流である、請求項１乃至請求項４のいずれか一つに記載の検量線作成方法。
【請求項６】
前記第１検量線（１）は、前記第１微生物数の初期値（Ｍ）の対数と、当該初期値からの増殖開始後、増殖に基づいて変動する可測定量が前記閾値に達するまでの時間である検出時間（ｔ）との関係を線形で近似したものであり、
前記第２検量線（１０１，１０２，・・・，１０ｍ，・・・）は、前記第２微生物数の前記初期値（Ｍ）の対数と、前記第２検出時間との関係を線形で近似したものであって、
前記近似初期値（Ｍ０）の対数は８〜１０．５（ｌｏｇ（ＣＦＵ／ｇ））であり、
前記近似検出時間（ｔ０）は−３０（分）である、請求項１乃至請求項５のいずれか一つに記載の検量線作成方法。
【請求項７】
前記近似初期値（Ｍ０）の対数は９〜９．５（ｌｏｇ（ＣＦＵ／ｇ））である、請求項６記載の検量線作成方法。
【請求項８】
（ｘ）前記第１培地中で培養される前記第１微生物について、その増殖開始後、増殖に基づいて変動する前記可測定量が前記閾値に達する迄の時間である第３検出時間（ｔ）を測定する工程と、
（ｙ）請求項１乃至請求項７のいずれか一つに記載の検量線作成方法で得られた前記第１検量線（１）と、前記第３検出時間とに基づいて、前記第１微生物数の初期値（Ｍ）を求める工程と
を備え、
前記工程（ｘ）での前記第１微生物の増殖は、前記工程（ｙ）で求められる前記第１微生物数の前記初期値から開始する、微生物数測定方法。
【請求項９】
（ａ）第１培地中で培養される第１微生物について、その個体数である第１微生物数の初期値（Ｍ１）からの増殖開始後、増殖に基づいて変動する可測定量が閾値に達する迄の時間である第１検出時間（ｔ１）を測定する工程と、
（ｂ）近似初期値（Ｍ０）及び近似検出時間（ｔ０）と、前記工程（ａ）で得られた前記第１微生物数の前記初期値及び前記第１検出時間とに基づいて、前記第１培地における前記第１微生物についての第１検量線（１，１１）を求める工程と
をコンピュータに実行させるためのプログラムであって、
前記第１微生物数の前記初期値は既知であり、
前記近似初期値及び前記近似検出時間は、第２培地中で培養される第２微生物の個体数である第２微生物数の初期値（Ｍ）と、前記第２微生物数の前記初期値からの増殖開始後、増殖に基づいて変動する可測定量が前記閾値に達する迄の時間である第２検出時間（ｔ）との関係を示す第２検量線（１０１，１０２，・・・，１０ｍ，・・・）の複数を満足すると近似される、前記第２微生物数の前記初期値の近似値及び前記第２検出時間の近似値である、プログラム。
【請求項１０】
（ｃ）前記第１微生物数の前記初期値（Ｍ１）を求める工程
を前記工程（ａ）の前に前記コンピュータに実行させる、請求項９記載のプログラム。
【請求項１１】
（ｄ）前記第２培地と前記第２微生物との複数の組み合わせの各々について前記第２検量線（１０１，１０２，・・・，１０ｍ，・・・）を求める工程と、
（ｅ）複数の前記第２検量線に基づいて、その全てを満足すると近似される前記近似初期値（Ｍ０）と前記近似検出時間（ｔ０）とを求める工程と
を前記工程（ａ）の前に前記コンピュータに実行させる、請求項９または請求項１０記載のプログラム。
【請求項１２】
前記工程（ｄ）では、
（ｄ−１）前記第２微生物数の前記初期値（Ｍ）の一つである第１値（Ｍ２）について前記第２検出時間（ｔ２）を測定する工程と、
（ｄ−２）前記第２微生物数の前記初期値の一つであって前記第１値とは異なる第２値（Ｍ３）について前記第２検出時間（ｔ３）を測定する工程と、
（ｄ−３）前記第１値と、前記第２値と、前記工程（ｄ−１）及び前記工程（ｄ−２）の各々で測定された前記第２検出時間（ｔ２，ｔ３）とに基づいて、一の前記第２検量線（１０１，１０２，・・・，１０ｍ，・・・）を求める工程と
を前記コンピュータに実行させる、請求項１１記載のプログラム。
【請求項１３】
前記可測定量は、前記第１培地あるいは前記第２培地中を、それらに含まれる酸素量に応じて流れる電流である、請求項９乃至請求項１２のいずれか一つに記載のプログラム。
【請求項１４】
前記第１検量線（１）は、前記第１微生物数の初期値（Ｍ）の対数と、当該初期値からの増殖開始後、増殖に基づいて変動する可測定量が前記閾値に達するまでの時間である検出時間（ｔ）との関係を線形で近似したものであり、
前記第２検量線（１０１，１０２，・・・，１０ｍ，・・・）は、前記第２微生物数の前記初期値（Ｍ）の対数と、前記第２検出時間との関係を線形で近似したものであって、
前記近似初期値（Ｍ０）の対数は８〜１０．５（ｌｏｇ（ＣＦＵ／ｇ））であり、
前記近似検出時間（ｔ０）は−３０（分）である、請求項９乃至請求項１３のいずれか一つに記載のプログラム。
【請求項１５】
前記近似初期値（Ｍ０）の対数は９〜９．５（ｌｏｇ（ＣＦＵ／ｇ））である、請求項１４記載のプログラム。
【請求項１６】
（ｘ）前記第１培地中で培養される前記第１微生物について、その増殖開始後、増殖に基づいて変動する前記可測定量が前記閾値に達する迄の時間である第３検出時間（ｔ）を測定する工程と、
（ｙ）請求項９乃至請求項１５のいずれか一つに記載のプログラムが実行する工程を前記コンピュータに実行させることで得られた第１検量線（１）と、前記第３検出時間とに基づいて、前記第１微生物数の初期値（Ｍ）を求める工程と
を前記コンピュータにさらに実行させるためのプログラムであって、
前記工程（ｘ）での前記第１微生物の増殖は、前記工程（ｙ）で求められる前記第１微生物数の前記初期値から開始する、プログラム。
【図１】
【図２】
【図３】
【図４】
【図５】
【図６】
【図２】
【図３】
【図４】
【図５】
【図６】
【公開番号】特開２００６−１２１９１２（Ｐ２００６−１２１９１２Ａ）
【公開日】平成１８年５月１８日（２００６．５．１８）
【国際特許分類】
【出願番号】特願２００４−３１０７９４（Ｐ２００４−３１０７９４）
【出願日】平成１６年１０月２６日（２００４．１０．２６）
【出願人】（０００００２８５３）ダイキン工業株式会社 (7,604)
【Ｆターム（参考）】
【公開日】平成１８年５月１８日（２００６．５．１８）
【国際特許分類】
【出願日】平成１６年１０月２６日（２００４．１０．２６）
【出願人】（０００００２８５３）ダイキン工業株式会社 (7,604)
【Ｆターム（参考）】
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