本発明は、歯髄類似細胞（ＤＰＭＳＣ）の単離された集団、ならびに、これらの細胞を単離する方法および用いる方法を提供する。ＤＰＭＳＣ集団は、ＣＤ１０、ＣＤ２９、ＣＤ１３、ＣＤ４４、ＣＤ４９ａ、ＣＤ４９ｄ、ＣＤ５９、ＣＤ７３、ＣＤｗ９０、ＣＤ１０５、Ｏｃｔ−４のアイソフォームＡおよびＢ、Ｎａｎｏｇ、Ｓｏｘ−２、ＳＳＥＡ−４に関して非常に均質である。上記集団は、約２８〜３０時間の平均倍加速度を有する。上記ＤＰＭＳＣは、外胚葉系統、内胚葉系統または中胚葉系統の細胞型のうち、１つ以上に分化する可能性を有する。

【特許請求の範囲】
【請求項１】
歯髄類似細胞（ＤＰＭＳＣ）の単離された集団であって、前記集団中の前記細胞の少なくとも９０％が、以下のマーカー、ＣＤ１０、ＣＤ１３、ＣＤ２９、ＣＤ４４、ＣＤ４９ａ、ＣＤ４９ｄ、ＣＤ５９、ＣＤ７３、ＣＤ９０、ＣＤ１０５、Ｏｃｔ−４のアイソフォームＡおよびＢ、Ｎａｎｏｇ、Ｓｏｘ−２、ＳＳＥＡ−４のそれぞれを共発現する、集団。
【請求項２】
前記集団中の前記細胞の少なくとも９５％が、以下のマーカー、ＣＤ１０、ＣＤ１３、ＣＤ２９、ＣＤ４４、ＣＤ４９ａ、ＣＤ４９ｄ、ＣＤ５９、ＣＤ７３、ＣＤ９０、ＣＤ１０５、Ｏｃｔ−４のアイソフォームＡおよびＢ、Ｎａｎｏｇ、Ｓｏｘ−２、ＳＳＥＡ−４のそれぞれを共発現する、請求項１に記載の集団。
【請求項３】
前記細胞集団の約９０〜９９％が、以下のマーカー、ＣＤ１０、ＣＤ１３、ＣＤ２９、ＣＤ４４、ＣＤ４９ａ、ＣＤ４９ｄ、ＣＤ５９、ＣＤ７３、ＣＤ９０、ＣＤ１０５、Ｏｃｔ−４のアイソフォームＡおよびＢ、Ｎａｎｏｇ、Ｓｏｘ−２、ＳＳＥＡ−４のそれぞれを発現する、請求項１に記載の細胞集団。
【請求項４】
前記集団中の前記細胞の０．２５〜１％が、ＣＤ３４およびＣＤ４５を共発現する、請求項１〜３のいずれか１項に記載の集団。
【請求項５】
前記集団の前記細胞が、以下のもの、Ｏｃｔ−４のアイソフォームＡおよびＢ、Ｎａｎｏｇ、Ｓｏｘ−２、ＳＳＥＡ−４、ｃ−Ｍｙｃ、Ｋｌｆ−４、Ｒｅｘ−１のそれぞれのｍＲＮＡを共発現する、請求項１〜３のいずれか１項に記載の集団。
【請求項６】
前記集団が、約２８〜３０時間の平均倍加速度を有する、請求項１〜３のいずれか１項に記載の集団。
【請求項７】
前記ＤＰＭＳＣが、外胚葉系統、内胚葉系統または中胚葉系統の細胞型のうち、１つ以上に分化する可能性を有する、請求項１〜３のいずれか１項に記載の集団。
【請求項８】
前記ＤＰＭＳＣが、外胚葉系統、内胚葉系統または中胚葉系統の細胞型のうち、少なくとも２つに分化する可能性を有する、請求項１〜３のいずれか１項に記載の集団。
【請求項９】
前記ＤＰＭＳＣが、外胚葉系統、内胚葉系統または中胚葉系統の細胞型のうち、３種類すべてに分化する可能性を有する、請求項１〜３のいずれか１項に記載の集団。
【請求項１０】
前記ＤＰＭＳＣがヒトＤＰＭＳＣである、請求項１〜３のいずれか１項に記載の集団。
【請求項１１】
ヒト歯髄に由来する細胞の単離された集団であって、前記集団中の前記細胞の少なくとも９０％が、以下のマーカー、ＣＤ１０、ＣＤ２９、ＣＤ１３、ＣＤ４４、ＣＤ４９ａ、ＣＤ４９ｄ、ＣＤ５９、ＣＤ７３、ＣＤｗ９０、ＣＤ１０５、Ｏｃｔ−４、Ｎａｎｏｇ、Ｓｏｘ−２、ＳＳＥＡ−４のそれぞれを共発現し、前記集団中の前記細胞の０．２５〜１％が、ＣＤ３４およびＣＤ４５を共発現し、前記細胞が、正常な核型を有し、前記集団の前記細胞が、外胚葉系統、内胚葉系統または中胚葉系統のうち、少なくとも２つの細胞型に分化する可能性を有する、集団。
【請求項１２】
前記細胞が、以下のもの、骨芽細胞、骨格筋細胞、平滑筋細胞、心筋細胞、グリア細胞、神経細胞のうち、任意の１つ以上に分化する可能性を有する、請求項１〜３または１１のいずれか１項に記載の集団。
【請求項１３】
前記ＤＰＭＳＣが、歯器官に由来する、請求項１〜３または１１のいずれか１項に記載の集団。
【請求項１４】
前記歯器官が、子供由来である、請求項１２に記載の細胞集団。
【請求項１５】
前記歯器官が、成人由来である、請求項１２に記載の細胞集団。
【請求項１６】
分化を誘導するように培養された細胞の単離された集団であって、開始時の集団が請求項１に記載のＤＰＭＳＣであり、上記分化によって、上記ＤＰＭＳＣが、骨細胞、骨格筋細胞、平滑筋細胞、心筋細胞、グリア細胞、神経細胞、皮膚上皮細胞、肝臓上皮細胞、膵臓上皮細胞、膵臓内分泌細胞、膵島細胞、膵臓外分泌細胞、腸上皮細胞、腎上皮細胞、表皮に関連する構造、毛包、歯の周囲にある軟組織、象牙質（歯）、エナメル質（歯）、セメント質（歯）からなる群より選択される分化した細胞になる、細胞の単離された集団。
【請求項１７】
前記集団中の前記細胞のゲノムが、あらかじめ選択しておいたＤＮＡ単離物の挿入によって、または、あらかじめ選択しておいたＤＮＡ単離物による前記細胞ゲノムのあるセグメントの置換によって、または、前記細胞ゲノムの少なくとも一部分の欠失もしくは不活性化によって改変されていない、請求項１〜３または１１のいずれか１項に記載の集団。
【請求項１８】
請求項１に記載のＤＰＭＳＣ集団を得る方法であって、血小板由来増殖因子、インスリン、セレン、上皮増殖因子（ＥＧＦ）、インスリン様成長因子（ＩＧＦ）、デキサメタゾン、リノール酸、アスコルビン酸からなる群より選択される成長因子を加えた培地で、歯髄源を培養し、請求項１に記載のＤＰＭＳＣ集団を得る工程を含む、方法。
【請求項１９】
前記ＤＰＭＳＣがヒトＤＰＭＳＣであり、前記歯髄源がヒト由来である、請求項１８に記載の方法。
【請求項２０】
粘着細胞および非粘着細胞が、免疫除去、物理的な除去または化学的な除去によって選別されることなく一緒に培養される、請求項１８に記載の方法。
【請求項２１】
前記方法が、ＣＤ３、ＣＤ１４、ＣＤ１９、ＣＤ３８、ＣＤ６６ｂおよびＣＤ４５^＋のグリコホリンＡを共発現する細胞出発源または単核細胞の細胞培養物を除去しない、請求項２０に記載の方法。
【請求項２２】
細胞培養器に前記細胞を入れる工程をさらに含み、ここで、前記細胞培養器は、細胞外マトリックス（ＥＣＭ）基質を含まない、請求項２０に記載の方法。
【請求項２３】
血清を約０．５〜２．２５％の割合で含む、請求項２０に記載の方法。
【請求項２４】
インスリンが、約１０〜約５０μｇ／ｍｌの濃度で、トランスフェリンが、０より多いが約１０μｇ／ｍｌ未満の濃度で、セレンが、約０．１〜約５μｇ／ｍｌの濃度で、リノール酸が、約０〜約１μｇ／ｍの濃度で、デキサメタゾンが、約０．００５〜約０．１５μＭの濃度で、Ｌ−アスコルビン酸が、約１０〜５０ｍｇＦ／Ｌの濃度で、血小板由来増殖因子が、約５〜約１５ｎｇ／ｍｌの濃度で、上皮増殖因子１が、約１５ｎｇ／ｍｌの濃度で、インスリン様成長因子が、１〜約１５ｎｇ／ｍｌの濃度で、線維芽細胞増殖因子−ｂ１が、約１５ｎｇ／ｍｌの濃度で存在する、請求項１８に記載の方法。
【請求項２５】
治療援助が必要な個体に治療援助を提供する方法であって、治療を支援するのに有効な量のＤＰＭＳＣを前記個体に投与する工程を含む、方法。
【請求項２６】
請求項１８〜２４のいずれか１項に記載の培養方法によって作り出される、ＤＰＭＳＣ集団。

【公表番号】特表２０１１−５２５７９８（Ｐ２０１１−５２５７９８Ａ）
【公表日】平成２３年９月２９日（２０１１．９．２９）
【国際特許分類】
【出願番号】特願２０１１−５１５３９６（Ｐ２０１１−５１５３９６）
【出願日】平成２１年６月２６日（２００９．６．２６）
【国際出願番号】ＰＣＴ／ＥＰ２００９／０５８０１５
【国際公開番号】ＷＯ２００９／１５６４９５
【国際公開日】平成２１年１２月３０日（２００９．１２．３０）
【出願人】（５１０３４１２４８）ウニベルシタ　デグリ　ストゥディ　ディ　ウディネ (1)
【Ｆターム（参考）】