病理組織標本及びその製造方法
【課題】安全且つ簡易な方法で量産が可能な病理組織標本及びその製造方法を提供する。
【解決手段】病原性微生物又は病原性微生物を感染させた宿主細胞を混和させた哺乳類の血液から得られる凝血塊を用いて作製した陽性コントロール標本に利用可能な病理組織標本である。また、前記病原性微生物として、感染症の発症原因微生物そのものを用いる他、発症原因微生物と微生物学的性質が近似し、且つ感染力が弱い他の微生物を用いても良い。
【解決手段】病原性微生物又は病原性微生物を感染させた宿主細胞を混和させた哺乳類の血液から得られる凝血塊を用いて作製した陽性コントロール標本に利用可能な病理組織標本である。また、前記病原性微生物として、感染症の発症原因微生物そのものを用いる他、発症原因微生物と微生物学的性質が近似し、且つ感染力が弱い他の微生物を用いても良い。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、病理組織標本及びその製造方法に関する。
【背景技術】
【０００２】
感染症は、病原性微生物が宿主の体内に侵入し、特定の組織内や粘膜表面に付着して増殖し、組織や臓器に障害を与えることにより発症する疾病である。感染症の診断においては、発症原因の病原性微生物を分離、同定等する必要があり、その検査方法は病原性微生物によって異なる。
【０００３】
例えば、原因微生物が細菌である場合、被検者の生体や解剖個体から採取した組織を、「陽性コントロール標本」と共に、チールネルゼン染色（Ｚｉｅｈｌ−Ｎｅｅｌｓｅｎ ｓｔａｉｎ）やワルチンスタリー染色（Ｗａｒｔｈｉｎ−Ｓｔａｒｒｙ ｓｔａｉｎ）等の方法で染色し、両者を比較して光学顕微鏡等で比較観察し、染色結果の判定を行う。
【０００４】
ここで「陽性コントロール標本」とは、病原性細菌に感染した病変組織を用いて作製された病理組織標本であり、必ず陽性を示すものである。よって、「陽性コントロール標本」と、被検者の組織標本の染色結果とが一致していれば、医師はその被検者に対し、各種検査結果と併せて感染症の診断を下すことができる。
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００５】
しかしながら、例えば結核症のように、重篤の罹患者数が減少傾向にある感染症では、結核症判定に必要な結核菌数を含んだ病変組織を採取する機会が減少し、その絶対数に限りがあるため、結核症判定用の陽性コントロール標本を作製することが困難になりつつある。
【０００６】
さらに、感染力の強い病原性微生物の病理組織標本を作製する際には、二次感染の恐れがあるので、バイオハザード対策を施した施設でしか行うことができず、その対策費用等の経済的負担が大きいという問題がある。
【０００７】
そこで本発明は、斯かる実情に鑑み、安全且つ簡易な方法で量産が可能な病理組織標本及びその製造方法を提供しようとするものである。
【課題を解決するための手段】
【０００８】
（１）病原性微生物又は病原性微生物を感染させた宿主細胞を混和させた哺乳類の血液から得られる凝血塊を用いて作製されることを特徴とする病理組織標本である。
【０００９】
（２）前記哺乳類は、ヒト、ラット、羊又はウサギであることを特徴とする（１）に記載の病理組織標本である。
【００１０】
（３）前記病原性微生物は、細菌、真菌、原虫又はウィルスであることを特徴とする（１）又は（２）に記載の病理組織標本である。
【００１１】
（４）前記細菌は、グラム陽性球菌、グラム陰性好気性桿菌、グラム陰性好気性球菌、グラム陰性通性嫌気性桿菌、グラム陰性嫌気性桿菌、グラム陰性嫌気性球菌、グラム陽性桿菌、らせん菌、放線菌類、コリネバクテリウム属、マイコバクテリウム属、マイコプラズマ、リケッチア又はクラミジアからなる群より選択される少なくとも一つであることを特徴とする（３）に記載の病理組織標本である。
【００１２】
（５）前記マイコバクテリウム属は、結核菌群、らい菌又は非結核性抗酸菌からなる群より選択される少なくとも一つであることを特徴とする（４）に記載の病理組織標本である。
【００１３】
（６）前記非結核性抗酸菌は、マイコバクテリウム アビウム（Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ａｖｉｕｍ）、マイコバクテリウム イントラセルラレ（Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｉｎｔｒａｃｅｌｌｕｌａｒｅ）、マイコバクテリウム カンサシイ（Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｋａｎｓａｓｉｉ）、マイコバクテリウム アブセシュス（Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ａｂｓｃｅｓｓｕｓ）、マイコバクテリウム フォツイタム（Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｆｏｒｔｕｉｔｕｍ）、マイコバクテリウム シェロナエ（Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｃｈｅｌｏｎａｅ）、マイコバクテリウム シュルガイ（Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｓｚｕｌｇａｉ）、マイコバクテリウム キセノピ（Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｘｅｎｏｐｉ）、マイコバクテリウム ノンクロモジェニクム（Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｎｏｎｃｈｒｏｍｏｇｅｎｉｃｕｍ）、マイコバクテリウム テラエ（Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｔｅｒｒａｅ）、マイコバクテリウム スクロフラセウム（Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｓｃｒｏｆｕｌａｃｅｕｍ）、マイコバクテリウム ゴドナエ（Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｇｏｒｄｏｎａｅ）、マイコバクテリウム シミアエ（Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｓｉｍｉａｅ）、マイコバクテリウム シモイデイ（Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｓｈｉｍｏｉｄｅｉ）、マイコバクテリウム サーモレジスタブル（Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｔｈｅｒｍｏｒｅｓｉｓｔｉｂｌｅ）、マイコバクテリウム ウルセランス（Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｕｌｃｅｒａｎｓ）、マイコバクテリウム マリナム（Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｍａｒｉｎｕｍ）、マイコバクテリウム バッカエ（Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｖａｃｃａｅ）、マイコバクテリウム フラベセンス（Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｆｌａｖｅｓｃｅｎｓ）、マイコバクテリウム アシアティカム（Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ａｓｉａｔｉｃｕｍ）、マイコバクテリウム ポルシナム（Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｐｏｒｃｉｎｕｍ）、マイコバクテリウム アカプルセンシス（Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ａｃａｐｕｌｃｅｎｓｉｓ）又はマイコバクテリウム ディエンホフェリ（Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｄｉｅｒｎｈｏｆｅｒｉ）からなる群より選択される少なくとも一つであることを特徴とする（５）に記載の病理組織標本である。
【００１４】
（７）前記真菌は、皮膚糸状菌、カンジダ属、マラセチア属、スポロトリックス属、黒色真菌、アブシジア属、ムーコル属、リゾムーコル属、リゾプス属、トリコスポロン属、ニューモシスチス属、アスペルギルス属、クリプトコックス属、コクシジオイデス属、ヒトプラスマ属、ブラストミセス属、パラコクシジオイデス属又はペニシリウム属からなる群より選択される少なくとも一つであること特徴とする（３）に記載の病理組織標本である。
【００１５】
（８）前記原虫は、赤痢アメーバ原虫、ランブル鞭毛虫、クリプトスポリジウムパルブム原虫、大腸バランチジウム原虫、膣トリコモナス原虫、トキソプラズマゴンディ、トリパノソーマ原虫属、リーシュマニア原虫類、アカントアメーバカルバートソニ原虫、プラスモジウム原虫又はマラリア原虫からなる群より選択される少なくとも一つであることを特徴とする（３）に記載の病理組織標本である。
【００１６】
（９）前記ウィルスは、痘瘡ウィルス、天然痘ウィルス、サル痘ウィルス、伝染性軟属種ウィルス、単純ヘルペスウィルス１型、単純ヘルペスウィルス２型、水痘帯状疱疹ウィルス、サイトメガロウィルス、ＥＢウィルス（Ｅｐｓｔｅｉｎ−Ｂａｒｒ ｖｉｒｕｓ）、ヒトヘルペスウィルス６型、ヒトヘルペスウィルス８型、アデノウィルス科、ポリオーマウィルス科、パピローマウィルス科、パルボウィルス科、ポリオウィルス、コクサッキーウィルス、エコーウィルス、エンテロウィルス、ライノウィルス、ヘパトウィルス属、ロタウィルス、ノロウィルス、サポウィルス、アルファウィルス、風疹ウィルス、デングウィルス、横熱ウィルス、日本脳炎ウィルス、ウエストナイルウィルス、ダニ媒介性脳炎ウィルス、インフルエンザウィルス、パラインフルエンザウィルス、ムンプスウィルス、麻疹ウィルス、ＲＥウィルス（Ｒｅｓｐｉｒａｔｏｒｙ ｓｙｎｃｙｔｉａｌ ｖｉｒｕｓ）、ヒトメタニューモウィルス、狂犬病ウィルス、ヒト呼吸器コロナウィルス、ＳＡＲＳコロナウィルス（Ｓｅｖｅｒｅ Ａｃｕｔｅ Ｒｅｓｐｉｒａｔｏｒｙ Ｓｙｎｄｒｏｍｅ ｃｏｒｏｎａｖｉｒｕｓ）、エボラウィルス、マールブルグウィルス、ハンタウィルス属、ナイロウィルス属、ラッサウィルス、ヒトＴリンパ球向性ウィルス１型（Ｈｕｍａｎ Ｔ−ｌｙｍｐｈｏｔｒｏｐｉｃ ｖｉｒｕｓ ｔｙｐｅ １）、ヒト免疫不完全ウィルス、Ａ型肝炎ウィルス（Ｈｅｐａｔｉｔｉｓ Ａ ｖｉｒｕｓ）、Ｂ型肝炎ウィルス（Ｈｅｐａｔｉｔｉｓ Ｂ ｖｉｒｕｓ）、Ｃ型肝炎ウィルス（Ｈｅｐａｔｉｔｉｓ Ｃ ｖｉｒｕｓ）、Ｄ型肝炎ウィルス（Ｈｅｐａｔｉｔｉｓ Ｄ ｖｉｒｕｓ）、Ｅ型肝炎ウィルス（Ｈｅｐａｔｉｔｉｓ Ｅ ｖｉｒｕｓ）、Ｇ型肝炎ウィルス（Ｈｅｐａｔｉｔｉｓ Ｇ ｖｉｒｕｓ）又はＴＴウィルス（Ｔ Ｔ ｖｉｒｕｓ）からなる群より選択される少なくとも一つであることを特徴とする（３）に記載の病理組織標本である。
【００１７】
（１０）前記病原性微生物として、感染症の発症原因微生物と微生物学的性質が近似し、且つ感染力が弱い他の微生物を用いることを特徴とする（１）乃至（９）に記載の病理組織標本である。
【００１８】
（１１）前記病原性微生物の感染症の診断方法に用いられることを特徴とする（１）乃至（１０）に記載の病理組織標本である。
【００１９】
（１２）前記診断方法は、チールネルゼン染色（Ｚｉｅｈｌ−Ｎｅｅｌｓｅｎ ｓｔａｉｎ）、蛍光染色（Ａｕｒａｍｉｎｅ ｓｔａｉｎ）、グロコット染色（Ｍｅｔｈｅｎａｍｉｎｅ ｓｉｌｖｅｒ−ｎｉｔｒａｔｅ ｓｔａｉｎ （Ｇｏｍｏｒｉ）−Ｇｒｏｃｏｔｔ'ｓ ｖａｒｉａｔｉｏｎ）、グラム染色（Ｇｒａｍ ｓｔａｉｎ）、オルセイン染色（Ｏｒｃｅｉｎ ｓｔａｉｎ）、ビクトリア青酸性フクシン染色（Ｖｉｃｔｏｒｉａ ｂｌｕｅ・Ａｃｉｄｉｃ Ｆｕｃｈｓｉｎ ｓｔａｉｎ）、クラミディア染色（Ｍａｃｃｈｉａｖｅｌｌｏ ｓｔａｉｎ）、グリドリー変法、ワルチンスタリー染色（Ｗａｒｔｈｉｎ−Ｓｔａｒｒｙ ｓｔａｉｎ）又は免疫染色（Ｉｍｍｕｎｏｓｔａｉｎｉｎｇ）からなる群より選択される少なくとも一つであることを特徴とする（１１）に記載の病理組織標本である。
【００２０】
（１３）陽性コントロール標本である（１１）又は（１２）に記載の病理組織標本である。
【００２１】
（１４）病原性微生物又は病原性微生物を感染させた宿主細胞を哺乳類の血液に混和させる工程と、前記病原性微生物又は前記病原性微生物を感染させた宿主細胞を混和させた前記哺乳類の血液から凝血塊を採取する工程と、前記凝血塊を用いて病理組織標本を作製する工程とを含むことを特徴とする病理組織標本の製造方法である。
【００２２】
上記手段によれば、以下のような作用が得られる。
【発明の効果】
【００２３】
本発明の病理組織標本は、病原性微生物又は病原性微生物を感染させた宿主細胞を混和させた哺乳類の血液から得られる凝血塊を用いて作製されるので、従来のように、その標本作製のために病変組織を採取する必要がない。これにより、罹患者数が減少傾向にある感染症であっても、その原因微生物さえ入手できれば、増殖させた原因微生物を用いて病理組織標本を作製することができる。その結果、必要なときに必要な量の病理組織標本を得ることができるという優れた効果を奏し得る。
【００２４】
さらに、本発明の病理組織標本は、例えば健常者やラットといった入手しやすい血液を用いて病理組織標本を作製することができるので、簡易にその標本の作製が可能になるという優れた効果を奏し得る。
【００２５】
また、本発明の病理組織標本は、上記の病原性微生物として、感染症の発症原因微生物と微生物学的性質が近似し、且つ感染力が弱い他の微生物を用いて作製されるので、従来のように、その標本の作製のために感染力の強い病原性微生物を用いる必要がなく、通常の施設でもその陽性コントロール標本を安全に作製することができる。
【００２６】
例えば、結核菌の陽性コントロール標本を作製したい場合には、結核菌の代わりとして、非結核性抗酸菌のように結核菌と細菌学的性質が近似しており、且つ感染力が弱い細菌を用いて病理組織標本を作製することができる。その結果、新たにバイオハザード対策を施す必要が無くなるので、経済的負担を負うことなく安全にその標本を作製し得るという優れた効果を奏し得る。
【００２７】
また、本発明の病理組織標本の製造方法によれば、病原性微生物又は病原性微生物を感染させた宿主細胞を混和させた哺乳類の血液から得られる凝血塊を用いて病理組織標本を作製するので、簡易且つ低コストでその標本を量産できるという優れた効果を奏し得る。
【発明を実施するための最良の形態】
【００２８】
以下、本発明の実施の形態を説明する。
【００２９】
本発明の病理組織標本は、病原性微生物又は病原性微生物を感染させた宿主細胞を混和させた哺乳類の血液から得られる凝血塊を用いて作製される。ここで、病原性微生物とは、感染症の原因となる微生物であり、本発明で利用される病原性微生物としては、細菌、真菌、原虫又はウィルスが挙げられる。
【００３０】
ここで、細菌とは、原核細胞を持つ単細胞の微生物であり、原形質に明瞭な核をもたない生物の一群である。本発明で利用される細菌としては、グラム陽性球菌、グラム陰性好気性桿菌、グラム陰性好気性球菌、グラム陰性通性嫌気性桿菌、グラム陰性嫌気性桿菌、グラム陰性嫌気性球菌、グラム陽性桿菌、らせん菌、放線菌、コリネバクテリウム属、マイコバクテリウム属（抗酸菌(ａｃｉｄ−ｆａｓｔ ｂａｃｔｅｒｉａ)とも呼ばれる。）、マイコプラズマ、リケッチア又はクラミジアが挙げられ、マイコバクテリウム属としては、結核菌群、らい菌又は非結核性抗酸菌が挙げられ、非結核性抗酸菌としては、マイコバクテリウム アビウム（Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ａｖｉｕｍ）、マイコバクテリウム イントラセルラレ（Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｉｎｔｒａｃｅｌｌｕｌａｒｅ）、マイコバクテリウム カンサシイ（Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｋａｎｓａｓｉｉ）、マイコバクテリウム アブセシュス（Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ａｂｓｃｅｓｓｕｓ）、マイコバクテリウム フォツイタム（Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｆｏｒｔｕｉｔｕｍ）、マイコバクテリウム シェロナエ（Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｃｈｅｌｏｎａｅ）、マイコバクテリウム シュルガイ（Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｓｚｕｌｇａｉ）、マイコバクテリウム キセノピ（Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｘｅｎｏｐｉ）、マイコバクテリウム ノンクロモジェニクム（Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｎｏｎｃｈｒｏｍｏｇｅｎｉｃｕｍ）、マイコバクテリウム テラエ（Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｔｅｒｒａｅ）、マイコバクテリウム スクロフラセウム（Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｓｃｒｏｆｕｌａｃｅｕｍ）、マイコバクテリウム ゴドナエ（Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｇｏｒｄｏｎａｅ）、マイコバクテリウム シミアエ（Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｓｉｍｉａｅ）、マイコバクテリウム シモイデイ（Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｓｈｉｍｏｉｄｅｉ）、マイコバクテリウム サーモレジスタブル（Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｔｈｅｒｍｏｒｅｓｉｓｔｉｂｌｅ）、マイコバクテリウム ウルセランス（Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｕｌｃｅｒａｎｓ）、マイコバクテリウム マリナム（Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｍａｒｉｎｕｍ）、マイコバクテリウム バッカエ（Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｖａｃｃａｅ）、マイコバクテリウム フラベセンス（Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｆｌａｖｅｓｃｅｎｓ）、マイコバクテリウム アシアティカム（Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ａｓｉａｔｉｃｕｍ）、マイコバクテリウム ポルシナム（Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｐｏｒｃｉｎｕｍ）、マイコバクテリウム アカプルセンシス（Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ａｃａｐｕｌｃｅｎｓｉｓ）又はマイコバクテリウム ディエンホフェリ（Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｄｉｅｒｎｈｏｆｅｒｉ）が挙げられる。尚、これらの細菌は、複数組み合わせて利用されても良い。これらの中では、マイコバクテリウム アビウムと、マイコバクテリウム イントラセルラレとを含んだマイコバクテリウム アビウム コンプレックス（Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ａｖｉｕｍ ｃｏｍｐｌｅｘ（以下、「ＭＡＣ」という。））が好適に利用される。
【００３１】
また、真菌とは、菌類のうち細菌、変形菌を除くものの総称であり、カビ、キノコとよばれるものが含まれる。本発明で利用される真菌としては、皮膚糸状菌、カンジダ属、マラセチア属、スポロトリックス属、黒色真菌、アブシジア属、ムーコル属、リゾムーコル属、リゾプス属、トリコスポロン属、ニューモシスチス属、アスペルギルス属、クリプトコックス属、コクシジオイデス属、ヒトプラスマ属、ブラストミセス属、パラコクシジオイデス属又はペニシリウム属が挙げられる。尚、これらの真菌は、複数組み合わせて利用されても良い。
【００３２】
更に、原虫とは、単細胞の真核生物であり、偽足や鞭毛等の運動器官を持つものが多く、原生動物ともよばれている。本発明で利用される原虫としては、赤痢アメーバ原虫、ランブル鞭毛虫、クリプトスポリジウムパルブム原虫、大腸バランチジウム原虫、膣トリコモナス原虫、トキソプラズマゴンディ、トリパノソーマ原虫属、リーシュマニア原虫類、アカントアメーバカルバートソニ原虫、プラスモジウム原虫又はマラリア原虫が挙げられる。尚、これらの原虫は、複数組み合わせて利用されても良い。
【００３３】
加えて、ウィルスとは、２０〜３００ｎｍの大きさであるので光学顕微鏡では観察することができず、細菌濾過器を通過してしまう微生物である。また、外殻はたんぱく質からなり、内部に遺伝子のＤＮＡまたはＲＮＡを含んでいる。一般的には、単独では生命活動を営めず、生きた細胞に寄生して生活又は増殖するので、生物と無生物の中間形とされている。本発明で利用されるウィルスとしては、痘瘡ウィルス、天然痘ウィルス、サル痘ウィルス、伝染性軟属種ウィルス、単純ヘルペスウィルス１型、単純ヘルペスウィルス２型、水痘帯状疱疹ウィルス、サイトメガロウィルス、ＥＢウィルス（Ｅｐｓｔｅｉｎ−Ｂａｒｒ ｖｉｒｕｓ）、ヒトヘルペスウィルス６型、ヒトヘルペスウィルス８型、アデノウィルス科、ポリオーマウィルス科、パピローマウィルス科、パルボウィルス科、ポリオウィルス、コクサッキーウィルス、エコーウィルス、エンテロウィルス、ライノウィルス、ヘパトウィルス属、ロタウィルス、ノロウィルス、サポウィルス、アルファウィルス、風疹ウィルス、デングウィルス、横熱ウィルス、日本脳炎ウィルス、ウエストナイルウィルス、ダニ媒介性脳炎ウィルス、インフルエンザウィルス、パラインフルエンザウィルス、ムンプスウィルス、麻疹ウィルス、ＲＥウィルス（Ｒｅｓｐｉｒａｔｏｒｙ ｓｙｎｃｙｔｉａｌ ｖｉｒｕｓ）、ヒトメタニューモウィルス、狂犬病ウィルス、ヒト呼吸器コロナウィルス、ＳＡＲＳコロナウィルス（Ｓｅｖｅｒｅ Ａｃｕｔｅ Ｒｅｓｐｉｒａｔｏｒｙ Ｓｙｎｄｒｏｍｅ ｃｏｒｏｎａｖｉｒｕｓ）、エボラウィルス、マールブルグウィルス、ハンタウィルス属、ナイロウィルス属、ラッサウィルス、ヒトＴリンパ球向性ウィルス１型（Ｈｕｍａｎ Ｔ−ｌｙｍｐｈｏｔｒｏｐｉｃ ｖｉｒｕｓ ｔｙｐｅ １）、ヒト免疫不完全ウィルス、Ａ型肝炎ウィルス（Ｈｅｐａｔｉｔｉｓ Ａ ｖｉｒｕｓ）、Ｂ型肝炎ウィルス（Ｈｅｐａｔｉｔｉｓ Ｂ ｖｉｒｕｓ）、Ｃ型肝炎ウィルス（Ｈｅｐａｔｉｔｉｓ Ｃ ｖｉｒｕｓ）、Ｄ型肝炎ウィルス（Ｈｅｐａｔｉｔｉｓ Ｄ ｖｉｒｕｓ）、Ｅ型肝炎ウィルス（Ｈｅｐａｔｉｔｉｓ Ｅ ｖｉｒｕｓ）、Ｇ型肝炎ウィルス（Ｈｅｐａｔｉｔｉｓ Ｇ ｖｉｒｕｓ）又はＴＴウィルス（Ｔ Ｔ ｖｉｒｕｓ）が挙げられる。尚、これらのウィルスは、複数組み合わせて利用されても良い。
【００３４】
また、上述の病原性微生物の代わりとして、感染症の発症原因微生物と微生物学的性質が近似し、且つ感染力が弱い他の微生物を用いることができる。ここで、微生物学的性質とは、形態的性質、培養的性質、生理学的性質等が挙げられ、その微生物を特定するための目安となるものである。形態的性質とは、育成した微生物の細胞の形及び大きさ、細胞の多様性の有無等である。また、培養的性質とは、微生物の生育の様相、色、光沢等である。また、生理学的性質とは、その微生物のグラム染色性、ｐＨや温度といった生育の範囲等である。即ち、微生物学的性質が同質であれば、染色結果が同等であると期待される一方で、感染力が弱いので安全性を確保することができるものである。本発明で利用される他の微生物としては、上述の非結核性抗酸菌が挙げられる。
【００３５】
また、本発明の病理組織標本は、上述したように、病原性微生物又は病原性微生物を感染させた宿主細胞を混和させた哺乳類の血液から得られる凝血塊を用いて作製される。ここで、哺乳類とは、哺乳綱の脊椎動物の総称であり、現生種は有袋目、食虫目、翼手目、霊長目、食肉目、クジラ目、偶蹄目、奇蹄目、長鼻目、齧歯目、ウシ目、ウサギ目等の１９目約４３００種に分類される。本発明で利用される哺乳類としては、霊長目、齧歯目、ウシ目又はウサギ目が挙げられ、これらの中では、ヒト、ラット、羊又はウサギが好ましく、特にヒトの血液が好適に利用される。
【００３６】
また、混和とは、病原性微生物又は病原性微生物を感染させた宿主細胞と、哺乳類の血液とが均一に混合した状態をいう。即ち、本発明の病理標本では、細菌、真菌、原虫等の病原性微生物の場合は、病原性微生物そのものを哺乳類の血液に混和させ、ウィルス等の病原性微生物の場合は、病原性微生物を感染させた宿主細胞を哺乳類の血液に混和させて得られる凝血塊を用いて作製することができる。また、凝血塊とは、病原性微生物又は病原性微生物を感染させた宿主細胞を混和させた哺乳類の血液を、血液凝固反応により凝固させて得られる固形物である。
【００３７】
次に、本発明の病理組織標本の製造方法について説明する。
【００３８】
本発明の病理組織標本は、病原性微生物又は病原性微生物を感染させた宿主細胞を哺乳類の血液に混和させる工程と、前記病原性微生物又は前記病原性微生物を感染させた宿主細胞を混和させた前記哺乳類の血液から凝血塊を採取する工程と、前述の凝血塊を用いて病理組織標本を作製する工程により作製される。
【００３９】
まず、病原性微生物を培養し、各種微生物に対応した培地から各種微生物のコロニーを採取する。そして、凝血しないように採血管内に採取した適当量の哺乳類の血液に、病原性微生物又は病原性微生物を感染させた宿主細胞を加えて混和させる。次に、病原性微生物又は病原性微生物を感染させた宿主細胞を加えて混和させた血液を凝固させ、凝血塊を採取する。この際、感染力の強い病原性微生物を扱う場合はバイオハザード対策を行う必要があるので、各種微生物の感染力に適合したバイオハザード対策施設、例えばバイオハザード対策用のキャビネットを用いる。
【００４０】
ここで、病理組織標本とは、光学顕微用のパラフィン包埋標本、電子顕微鏡用の樹脂包埋標本等として、観察可能に加工された被験者の生体や解剖個体から採取した組織標本である。また、病理組織標本を作製する工程は、一般的には光学顕微鏡観察用の標本と電子顕微鏡観察用の標本とで異なる。光学顕微鏡観察用の標本は、固定、脱水、脱脂、置換、浸透、包埋、薄切等の各工程を経て作製され、電子顕微鏡用の樹脂包埋標本は、固定、脱水、脱脂、置換、浸透、包埋、面出し等の各工程を経て作製される。
【００４１】
ここで固定とは、採取された組織が、放置によって組織内の細胞が死滅してしまい、光学顕微鏡での観察ができなくなってしまうことを防ぐために行う処理である。この処理を行うことで、組織や細胞のタンパク質に脱水や変性を起こさせて凝固させ、細胞が死滅することでその構造が安定化、不溶化され、そのタンパク質は色素と結合しやすくなり、光学顕微鏡での観察が可能となる。一般的には、固定処理には、ホルマリンが用いられる。尚、上記の固定処理に、組織固定用振盪器を用いて行っても良い。
【００４２】
また、脱水、脱脂、置換、浸透処理とは、固定後の組織内の水分等を除去し、組織内にパラフィンや樹脂を浸透させるための各段階である。一般的には、脱水、脱脂処理には数種類の濃度が異なるアルコールが、置換処理にはキシレン（クロロホルム）が、浸透処理にはパラフィンや樹脂が用いられる。尚、脱水から浸透処理に、真空自動固定包埋装置、密閉固定包埋装置、自動固定包埋装置等を用いて行っても良い。
【００４３】
また、包埋とは、硬さが不均一で、薄い切片にできない固定処理後の組織に包埋剤を浸透させて固め、硬さを均一にする処理である。この処理では、一般的に光学顕微鏡用の包埋剤としてパラフィンが、電子顕微鏡用としてエポキシ樹脂又はアクリル樹脂が用いられる。尚、浸透から包埋までの処理に、パラフィン溶融器を用いて行っても良い。
【００４４】
また、薄切とは、光学顕微鏡での観察を可能にするために、包埋処理後の組織を光が透過する厚さに切断する処理である。尚、この薄切処理に、ミクロトーム、プテラトーム等の裁断装置を用いて行っても良い。
【００４５】
また、面出しとは、ダイヤモンドナイフやウルトラミクロトーム等の裁断装置で、包埋処理後の組織が視覚可能になるように、標本の切片を顕微鏡で確認しながら最良面を出す作業である。尚、余分な樹脂は面出し後にトリミングする。
【００４６】
最後に、本発明の病理組織標本の用途について説明する。
【００４７】
本発明の病理組織標本は、病原性微生物の感染症の診断方法における陽性コントロール標本として用いられる。被検者の生体や解剖個体から採取した組織標本を、陽性コントロール標本と共に適切な染色方法で着色し、両者を比較して光学顕微鏡等で比較観察し、染色結果の判定を行い、被検者の組織標本の染色結果とが一致していれば、医師はその被検者に対し、各種検査結果と併せて感染症の診断を下すことができる。
【００４８】
上記の陽性コントロール標本を染色する際の染色方法としては、チールネルゼン染色（Ｚｉｅｈｌ−Ｎｅｅｌｓｅｎ ｓｔａｉｎ）、蛍光染色（Ａｕｒａｍｉｎｅ ｓｔａｉｎ）、グロコット染色（Ｍｅｔｈｅｎａｍｉｎｅ ｓｉｌｖｅｒ−ｎｉｔｒａｔｅ ｓｔａｉｎ （Ｇｏｍｏｒｉ）−Ｇｒｏｃｏｔｔ'ｓ ｖａｒｉａｔｉｏｎ）、グラム染色（Ｇｒａｍ ｓｔａｉｎ）、オルセイン染色（Ｏｒｃｅｉｎ ｓｔａｉｎ）、ビクトリア青酸性フクシン染色（Ｖｉｃｔｏｒｉａ ｂｌｕｅ・Ａｃｉｄｉｃ Ｆｕｃｈｓｉｎ ｓｔａｉｎ）、クラミディア染色（Ｍａｃｃｈｉａｖｅｌｌｏ ｓｔａｉｎ）、グリドリー変法、ワルチンスタリー染色（Ｗａｒｔｈｉｎ−Ｓｔａｒｒｙ ｓｔａｉｎ）又は免疫染色（Ｉｍｍｕｎｏｓｔａｉｎｉｎｇ）が挙げられ、これらの中では、チールネルゼン染色（Ｚｉｅｈｌ−Ｎｅｅｌｓｅｎ ｓｔａｉｎ）又は蛍光染色（Ａｕｒａｍｉｎｅ ｓｔａｉｎ）が好適に利用される。ここで、チールネルゼン染色とは、組織内の結核菌等の抗酸菌又はセロイド（ｃｅｒｏｉｄ）等の抗酸性物質を染色するために用いられる方法の一つであり、蛍光染色とは、蛍光色素であるオーラミン・ロダミンを用いて組織内の抗酸菌等の観察を行うものである。
【００４９】
また、上記の陽性コントロール標本の別の用途として、電子顕微鏡で比較観察して判定する際に用いることが挙げられる。電子顕微鏡用の陽性コントロール標本として用いる場合には、酢酸ウラン等で電子染色処理を行っても良いし、染色をせずにそのまま観察を行っても良い。
【実施例】
【００５０】
次に、本発明の具体的な実施例及び比較例を示すが、これは本発明の実施態様を例示したものであり、本発明はこれらの実施例に限定されるものではない。よって、本発明の要旨を逸脱しない範囲内において種々変更を加え得ることは勿論である。
【００５１】
［実施例１］ＭＡＣ菌を用いた本発明の病理組織標本の作製
【００５２】
以下の手順により、病理組織標本を作製した。
【００５３】
はじめに、ＭＡＣ菌の保存株を４℃で保管し、そのＭＡＣ菌を、３５℃に加温したフラン器内で小川培地（極東社製）を用いて培養し、培地上にコロニーを形成させた。形成させたコロニー群から直径５ｍｍ程度のコロニーを選択し、それを滅菌水１００μｌに加えて健常者の血液４ｍｌと混和させた。この際、血液中の菌数が１０８〜１０１０個／ｍｌになるように調製した。
【００５４】
次に、バイオハザード用キャビネット（サンヨー社製）内で、血液が凝固しないように注意しながら、得られたＭＡＣ菌を、採取した血液が入った採血管の中に注入し、混和させてＭＡＣ菌入り血液を凝固させて凝血塊を得た。また、同様にバイオハザード用キャビネット内で、採血管内に、注射器を用いて２０％ホルマリン５ｍｌを注入して固定処理を行った。更に、採血管内の凝血塊をサンプルパック（栄研器材社製、７×４．５ｃｍ）に入れ、それを２０％中性緩衝ホルマリン２００ｍｌが入った容器に浸して再度固定処理を行った。
【００５５】
更に、サンプルパックに入れた固定処理済凝血塊を、自動包埋装置（サクラファインテック社製）を用いて包埋処理し、パラフィンブロック（３×４ｃｍ）を作製した。そして、得られたパラフィンブロックを冷却させた後、ミトクローム（ヤマト社製）を用いて３μｍの薄さの切片になるよう薄切処理した。更に、得られた切片を、１０００ｍｌの蒸留水中に浮かせて形を整えた。この切片を、空気泡が入らないようにスライドガラスに載せ、水分を除去してから伸展器（サクラファインテックジャパン社製）によって３７℃で加温し、切片の縮みを伸ばしながらスライドガラス表面に貼り付け、病理組織標本を得た。
【００５６】
［実施例２］結核菌を用いた本発明の病理組織標本の作製
【００５７】
以下の手順により、病理組織標本を作製した。
【００５８】
はじめに、結核症患者から得られた結核菌を、１０％ＣＯ２雰囲気下で３５℃に保たれた環境内で２週間培養した。
【００５９】
次に、得られた結核菌を用いて、実施例１と同様の操作で作製し、病理標本を得た。
【００６０】
［比較例１］従来方法による病理組織標本の作製
【００６１】
以下の手順により、病理組織標本を作製した。
【００６２】
はじめに、結核症患者から採取した肺の病変組織を、３×４ｃｍの大きさに切り出し、ホルマリンを用いて室温で固定処理を行った。最後に、得られた固定処理済病変組織を、実施例１と同様の操作で作製し、病理組織標本を得た。
【００６３】
［実施例３］チールネルゼン染色法による比較試験
【００６４】
以下の手順により、実施例１及び実施例２の標本並びに比較例１の病理標本を染色し三者を比較した。
【００６５】
はじめに、ライトグリーン０．５ｇと酢酸１ｍｌとを蒸留水１００ｍｌに加えて混合して溶解させ、ライトグリーン液を得た。また、７０％のアルコール１００ｍｌに、濃塩酸１ｍｌを加えて混合し、１％塩酸アルコール液を得た。
【００６６】
次に、実施例１で得られた本発明の病理組織標本（以下、「病理組織標本Ａ」とする。）に、脱パラフィン処理、脱イオン水による水洗処理を施した後、カルボールフクシン液（ムトウ化学社製）５０ｍｌが入った容器内に浸し、室温で３０分間静置した。その後、病理組織標本Ａを流水洗浄した後、得られた１％塩酸アルコール５０ｍｌが入った容器内に浸してふたを閉め、脱色されるまで容器をゆっくり上下に振った。その後、５分間流水洗浄した後、得られたライトグリーン液５０ｍｌが入った容器内に浸して３分間静置し、染色された病理組織標本Ａを５分間流水洗浄した。そして、病理組織標本Ａをアルコール５０ｍｌが入った容器内に1分間浸す脱水処理を３回繰り返した後に、キシレン５０ｍｌが入った容器内に１分間浸す透徹処理を施した。その後、病理組織標本Ａ上にカバーグラスを載せ封入してＭＡＣ菌の陽性コントロール標本（以下、「陽性コントロール標本Ａ」とする。）を得た。また、実施例２で得られた結核菌を用いた病理組織標本を、陽性コントロール標本Ａと同様に染色してカバーガラスで封入し、結核菌の陽性コントロール標本（以下、「陽性コントロール標本Ｂ」とする。）を得た。更に、比較例１で得られた結核症の病理組織標本を、陽性コントロール標本Ａと同様に染色してカバーガラスで封入し、結核症の陽性コントロール標本（以下、「陽性コントロール標本Ｃ」とする。）を得た。
【００６７】
得られた陽性コントロール標本Ａと、陽性コントロール標本Ｃとの染色状態を目視で比較したところ、両者の染色状態に差異は無く、チールネルゼン染色法において、結核菌含有凝血塊を用いて作製した陽性コントロール標本による代用が可能であることがわかった。
【００６８】
また、図１及び図２に、陽性コントロール標本Ａの光学顕微鏡（ニコン社製、１０００倍）写真及び陽性コントロール標本Ｂの光学顕微鏡（ニコン社製、１０００倍）写真をそれぞれ示した。両者を比較すると染色状態に差異は無く、チールネルゼン染色法において、ＭＡＣ菌含有凝血塊を用いて作製した陽性コントロール標本による代用が可能であることがわかった。
【００６９】
［実施例４］蛍光染色法による比較試験
【００７０】
以下の手順により、実施例１及び実施例２の標本並びに比較例１の病理標本を染色し三者を比較した。
【００７１】
はじめに、ロダミン０．１ｇを蒸留水１００ｍｌ溶解させ、ロダミンＢ液を得た。次に、９５％のエタノール１０ｍｌに、オーラミン・Ｏ粉末０．１ｇを加えてオーラミン溶液を得た。また、蒸留水８７ｍｌに、の石炭酸３ｍｌを加えて混合し、石炭酸水溶液を得た。更に、得られたオーラミン液と石炭酸水溶液とを静かに混和して石炭酸オーラミンＯ液を得た。また、９５％のエタノール９７ｍｌに、濃塩酸３ｍｌを静かに加えて３％塩酸アルコールを得た。また、メチレンブルー５ｇをエタノール１００ｍｌに加えて完全に溶解させ、メチレンブルー原液を得た。得られたメチレンブルー原液３０ｍｌと、０．０１％水酸化カリウム水溶液１００ｍｌとを混和させレフレルメチレンブルー液を得た。
【００７２】
次に、病理組織標本Ａに、得られたロダミンＢ液１０ｍｌを滴下して１分間放置した後に、得られた石炭酸オーラミンＯ液１０ｍｌを滴下し室温で１０分間静置した。その後、病理組織標本Ａを流水洗浄し、得られた３％塩酸アルコール１０ｍｌを滴下して脱色されるまでまんべんなく病理組織標本Ａ上に流動させた。その後、病理組織標本Ａを３０秒間流水洗浄し、得られたレフレルメチレンブルー液を蒸留水で１０倍に薄め、それを１０ｍｌ滴下して３０秒間静置した。その後、水洗して濾紙を用いずに室温で乾燥させ、病理組織標本Ａを上にカバーグラスを載せ封入してＭＡＣ菌の陽性コントロール標本（以下、「陽性コントロール標本Ｄ」とする。）を得た。また、実施例２で得られた結核菌を用いた病理組織標本を、陽性コントロール標本Ａと同様に染色してカバーガラスで封入し、結核菌の陽性コントロール標本（以下、「陽性コントロール標本Ｅ」とする。）を得た。更に、比較例１で得られた結核症の病理組織標本を、陽性コントロール標本Ａと同様に染色してカバーガラスで封入し、結核症の陽性コントロール標本（以下、「陽性コントロール標本Ｆ」とする。）を得た。
【００７３】
得られた陽性コントロール標本Ｅと、陽性コントロール標本Ｆとの染色状態を目視で比較したところ、両者の染色状態に差異は無く、蛍光染色法において、結核菌含有凝血塊を用いて作製した陽性コントロール標本による代用が可能であることがわかった。
【００７４】
また、図３及び図４に、陽性コントロール標本Ｄの光学顕微鏡（ニコン社製、１０００倍）写真及び陽性コントロール標本Ｅの光学顕微鏡（ニコン社製、１０００倍）写真をそれぞれ示した。両者を比較すると染色状態に差異は無く、蛍光染色法において、ＭＡＣ菌含有凝血塊を用いて作製した陽性コントロール標本による代用が可能であることがわかった。
【産業上の利用可能性】
【００７５】
本発明の病理組織標本は、病原性微生物又は病原性微生物を感染させた宿主細胞を混和させた哺乳類の血液から得られる凝血塊を用いて作製され、その病原性微生物として、感染症の発症原因微生物と微生物学的性質が近似し、且つ感染力が弱い他の微生物を用いることができるので、安全性を確保しつつ、更に施設保有者に経済的負担を負わせることが無い。また、本発明の病理組織標本は、必要なときに必要な量の病理組織標本を得ることができ、例えば健常者やラット等の血液を用いて病理組織標本を作製することができるので、簡易に作製が可能である。更に、本発明の病理組織標本の製造方法は、病原性微生物又は病原性微生物を感染させた宿主細胞を混和させた哺乳類の血液から得られる凝血塊を用いて病理組織標本を作製する方法であるので、簡易且つ低コストで量産が可能である。
【００７６】
よって、本発明の病理組織標本は、病原性微生物が引き起こす感染症の診断に用いる病理組織標本、特に染色法による感染症の診断用陽性コントロール標本として用いた場合に極めて有用である。
【図面の簡単な説明】
【００７７】
【図１】チールネルゼン染色で染色処理を施したＭＡＣ菌の陽性コントロール標本の光学顕微鏡写真である。
【図２】チールネルゼン染色で染色処理を施した結核菌の陽性コントロール標本の光学顕微鏡写真である。
【図３】蛍光染色で染色処理を施したＭＡＣ菌の陽性コントロール標本の光学顕微鏡写真である。
【図４】蛍光染色で染色処理を施した結核菌の陽性コントロール標本の光学顕微鏡写真である。
【技術分野】
【０００１】
本発明は、病理組織標本及びその製造方法に関する。
【背景技術】
【０００２】
感染症は、病原性微生物が宿主の体内に侵入し、特定の組織内や粘膜表面に付着して増殖し、組織や臓器に障害を与えることにより発症する疾病である。感染症の診断においては、発症原因の病原性微生物を分離、同定等する必要があり、その検査方法は病原性微生物によって異なる。
【０００３】
例えば、原因微生物が細菌である場合、被検者の生体や解剖個体から採取した組織を、「陽性コントロール標本」と共に、チールネルゼン染色（Ｚｉｅｈｌ−Ｎｅｅｌｓｅｎ ｓｔａｉｎ）やワルチンスタリー染色（Ｗａｒｔｈｉｎ−Ｓｔａｒｒｙ ｓｔａｉｎ）等の方法で染色し、両者を比較して光学顕微鏡等で比較観察し、染色結果の判定を行う。
【０００４】
ここで「陽性コントロール標本」とは、病原性細菌に感染した病変組織を用いて作製された病理組織標本であり、必ず陽性を示すものである。よって、「陽性コントロール標本」と、被検者の組織標本の染色結果とが一致していれば、医師はその被検者に対し、各種検査結果と併せて感染症の診断を下すことができる。
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００５】
しかしながら、例えば結核症のように、重篤の罹患者数が減少傾向にある感染症では、結核症判定に必要な結核菌数を含んだ病変組織を採取する機会が減少し、その絶対数に限りがあるため、結核症判定用の陽性コントロール標本を作製することが困難になりつつある。
【０００６】
さらに、感染力の強い病原性微生物の病理組織標本を作製する際には、二次感染の恐れがあるので、バイオハザード対策を施した施設でしか行うことができず、その対策費用等の経済的負担が大きいという問題がある。
【０００７】
そこで本発明は、斯かる実情に鑑み、安全且つ簡易な方法で量産が可能な病理組織標本及びその製造方法を提供しようとするものである。
【課題を解決するための手段】
【０００８】
（１）病原性微生物又は病原性微生物を感染させた宿主細胞を混和させた哺乳類の血液から得られる凝血塊を用いて作製されることを特徴とする病理組織標本である。
【０００９】
（２）前記哺乳類は、ヒト、ラット、羊又はウサギであることを特徴とする（１）に記載の病理組織標本である。
【００１０】
（３）前記病原性微生物は、細菌、真菌、原虫又はウィルスであることを特徴とする（１）又は（２）に記載の病理組織標本である。
【００１１】
（４）前記細菌は、グラム陽性球菌、グラム陰性好気性桿菌、グラム陰性好気性球菌、グラム陰性通性嫌気性桿菌、グラム陰性嫌気性桿菌、グラム陰性嫌気性球菌、グラム陽性桿菌、らせん菌、放線菌類、コリネバクテリウム属、マイコバクテリウム属、マイコプラズマ、リケッチア又はクラミジアからなる群より選択される少なくとも一つであることを特徴とする（３）に記載の病理組織標本である。
【００１２】
（５）前記マイコバクテリウム属は、結核菌群、らい菌又は非結核性抗酸菌からなる群より選択される少なくとも一つであることを特徴とする（４）に記載の病理組織標本である。
【００１３】
（６）前記非結核性抗酸菌は、マイコバクテリウム アビウム（Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ａｖｉｕｍ）、マイコバクテリウム イントラセルラレ（Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｉｎｔｒａｃｅｌｌｕｌａｒｅ）、マイコバクテリウム カンサシイ（Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｋａｎｓａｓｉｉ）、マイコバクテリウム アブセシュス（Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ａｂｓｃｅｓｓｕｓ）、マイコバクテリウム フォツイタム（Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｆｏｒｔｕｉｔｕｍ）、マイコバクテリウム シェロナエ（Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｃｈｅｌｏｎａｅ）、マイコバクテリウム シュルガイ（Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｓｚｕｌｇａｉ）、マイコバクテリウム キセノピ（Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｘｅｎｏｐｉ）、マイコバクテリウム ノンクロモジェニクム（Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｎｏｎｃｈｒｏｍｏｇｅｎｉｃｕｍ）、マイコバクテリウム テラエ（Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｔｅｒｒａｅ）、マイコバクテリウム スクロフラセウム（Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｓｃｒｏｆｕｌａｃｅｕｍ）、マイコバクテリウム ゴドナエ（Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｇｏｒｄｏｎａｅ）、マイコバクテリウム シミアエ（Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｓｉｍｉａｅ）、マイコバクテリウム シモイデイ（Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｓｈｉｍｏｉｄｅｉ）、マイコバクテリウム サーモレジスタブル（Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｔｈｅｒｍｏｒｅｓｉｓｔｉｂｌｅ）、マイコバクテリウム ウルセランス（Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｕｌｃｅｒａｎｓ）、マイコバクテリウム マリナム（Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｍａｒｉｎｕｍ）、マイコバクテリウム バッカエ（Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｖａｃｃａｅ）、マイコバクテリウム フラベセンス（Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｆｌａｖｅｓｃｅｎｓ）、マイコバクテリウム アシアティカム（Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ａｓｉａｔｉｃｕｍ）、マイコバクテリウム ポルシナム（Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｐｏｒｃｉｎｕｍ）、マイコバクテリウム アカプルセンシス（Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ａｃａｐｕｌｃｅｎｓｉｓ）又はマイコバクテリウム ディエンホフェリ（Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｄｉｅｒｎｈｏｆｅｒｉ）からなる群より選択される少なくとも一つであることを特徴とする（５）に記載の病理組織標本である。
【００１４】
（７）前記真菌は、皮膚糸状菌、カンジダ属、マラセチア属、スポロトリックス属、黒色真菌、アブシジア属、ムーコル属、リゾムーコル属、リゾプス属、トリコスポロン属、ニューモシスチス属、アスペルギルス属、クリプトコックス属、コクシジオイデス属、ヒトプラスマ属、ブラストミセス属、パラコクシジオイデス属又はペニシリウム属からなる群より選択される少なくとも一つであること特徴とする（３）に記載の病理組織標本である。
【００１５】
（８）前記原虫は、赤痢アメーバ原虫、ランブル鞭毛虫、クリプトスポリジウムパルブム原虫、大腸バランチジウム原虫、膣トリコモナス原虫、トキソプラズマゴンディ、トリパノソーマ原虫属、リーシュマニア原虫類、アカントアメーバカルバートソニ原虫、プラスモジウム原虫又はマラリア原虫からなる群より選択される少なくとも一つであることを特徴とする（３）に記載の病理組織標本である。
【００１６】
（９）前記ウィルスは、痘瘡ウィルス、天然痘ウィルス、サル痘ウィルス、伝染性軟属種ウィルス、単純ヘルペスウィルス１型、単純ヘルペスウィルス２型、水痘帯状疱疹ウィルス、サイトメガロウィルス、ＥＢウィルス（Ｅｐｓｔｅｉｎ−Ｂａｒｒ ｖｉｒｕｓ）、ヒトヘルペスウィルス６型、ヒトヘルペスウィルス８型、アデノウィルス科、ポリオーマウィルス科、パピローマウィルス科、パルボウィルス科、ポリオウィルス、コクサッキーウィルス、エコーウィルス、エンテロウィルス、ライノウィルス、ヘパトウィルス属、ロタウィルス、ノロウィルス、サポウィルス、アルファウィルス、風疹ウィルス、デングウィルス、横熱ウィルス、日本脳炎ウィルス、ウエストナイルウィルス、ダニ媒介性脳炎ウィルス、インフルエンザウィルス、パラインフルエンザウィルス、ムンプスウィルス、麻疹ウィルス、ＲＥウィルス（Ｒｅｓｐｉｒａｔｏｒｙ ｓｙｎｃｙｔｉａｌ ｖｉｒｕｓ）、ヒトメタニューモウィルス、狂犬病ウィルス、ヒト呼吸器コロナウィルス、ＳＡＲＳコロナウィルス（Ｓｅｖｅｒｅ Ａｃｕｔｅ Ｒｅｓｐｉｒａｔｏｒｙ Ｓｙｎｄｒｏｍｅ ｃｏｒｏｎａｖｉｒｕｓ）、エボラウィルス、マールブルグウィルス、ハンタウィルス属、ナイロウィルス属、ラッサウィルス、ヒトＴリンパ球向性ウィルス１型（Ｈｕｍａｎ Ｔ−ｌｙｍｐｈｏｔｒｏｐｉｃ ｖｉｒｕｓ ｔｙｐｅ １）、ヒト免疫不完全ウィルス、Ａ型肝炎ウィルス（Ｈｅｐａｔｉｔｉｓ Ａ ｖｉｒｕｓ）、Ｂ型肝炎ウィルス（Ｈｅｐａｔｉｔｉｓ Ｂ ｖｉｒｕｓ）、Ｃ型肝炎ウィルス（Ｈｅｐａｔｉｔｉｓ Ｃ ｖｉｒｕｓ）、Ｄ型肝炎ウィルス（Ｈｅｐａｔｉｔｉｓ Ｄ ｖｉｒｕｓ）、Ｅ型肝炎ウィルス（Ｈｅｐａｔｉｔｉｓ Ｅ ｖｉｒｕｓ）、Ｇ型肝炎ウィルス（Ｈｅｐａｔｉｔｉｓ Ｇ ｖｉｒｕｓ）又はＴＴウィルス（Ｔ Ｔ ｖｉｒｕｓ）からなる群より選択される少なくとも一つであることを特徴とする（３）に記載の病理組織標本である。
【００１７】
（１０）前記病原性微生物として、感染症の発症原因微生物と微生物学的性質が近似し、且つ感染力が弱い他の微生物を用いることを特徴とする（１）乃至（９）に記載の病理組織標本である。
【００１８】
（１１）前記病原性微生物の感染症の診断方法に用いられることを特徴とする（１）乃至（１０）に記載の病理組織標本である。
【００１９】
（１２）前記診断方法は、チールネルゼン染色（Ｚｉｅｈｌ−Ｎｅｅｌｓｅｎ ｓｔａｉｎ）、蛍光染色（Ａｕｒａｍｉｎｅ ｓｔａｉｎ）、グロコット染色（Ｍｅｔｈｅｎａｍｉｎｅ ｓｉｌｖｅｒ−ｎｉｔｒａｔｅ ｓｔａｉｎ （Ｇｏｍｏｒｉ）−Ｇｒｏｃｏｔｔ'ｓ ｖａｒｉａｔｉｏｎ）、グラム染色（Ｇｒａｍ ｓｔａｉｎ）、オルセイン染色（Ｏｒｃｅｉｎ ｓｔａｉｎ）、ビクトリア青酸性フクシン染色（Ｖｉｃｔｏｒｉａ ｂｌｕｅ・Ａｃｉｄｉｃ Ｆｕｃｈｓｉｎ ｓｔａｉｎ）、クラミディア染色（Ｍａｃｃｈｉａｖｅｌｌｏ ｓｔａｉｎ）、グリドリー変法、ワルチンスタリー染色（Ｗａｒｔｈｉｎ−Ｓｔａｒｒｙ ｓｔａｉｎ）又は免疫染色（Ｉｍｍｕｎｏｓｔａｉｎｉｎｇ）からなる群より選択される少なくとも一つであることを特徴とする（１１）に記載の病理組織標本である。
【００２０】
（１３）陽性コントロール標本である（１１）又は（１２）に記載の病理組織標本である。
【００２１】
（１４）病原性微生物又は病原性微生物を感染させた宿主細胞を哺乳類の血液に混和させる工程と、前記病原性微生物又は前記病原性微生物を感染させた宿主細胞を混和させた前記哺乳類の血液から凝血塊を採取する工程と、前記凝血塊を用いて病理組織標本を作製する工程とを含むことを特徴とする病理組織標本の製造方法である。
【００２２】
上記手段によれば、以下のような作用が得られる。
【発明の効果】
【００２３】
本発明の病理組織標本は、病原性微生物又は病原性微生物を感染させた宿主細胞を混和させた哺乳類の血液から得られる凝血塊を用いて作製されるので、従来のように、その標本作製のために病変組織を採取する必要がない。これにより、罹患者数が減少傾向にある感染症であっても、その原因微生物さえ入手できれば、増殖させた原因微生物を用いて病理組織標本を作製することができる。その結果、必要なときに必要な量の病理組織標本を得ることができるという優れた効果を奏し得る。
【００２４】
さらに、本発明の病理組織標本は、例えば健常者やラットといった入手しやすい血液を用いて病理組織標本を作製することができるので、簡易にその標本の作製が可能になるという優れた効果を奏し得る。
【００２５】
また、本発明の病理組織標本は、上記の病原性微生物として、感染症の発症原因微生物と微生物学的性質が近似し、且つ感染力が弱い他の微生物を用いて作製されるので、従来のように、その標本の作製のために感染力の強い病原性微生物を用いる必要がなく、通常の施設でもその陽性コントロール標本を安全に作製することができる。
【００２６】
例えば、結核菌の陽性コントロール標本を作製したい場合には、結核菌の代わりとして、非結核性抗酸菌のように結核菌と細菌学的性質が近似しており、且つ感染力が弱い細菌を用いて病理組織標本を作製することができる。その結果、新たにバイオハザード対策を施す必要が無くなるので、経済的負担を負うことなく安全にその標本を作製し得るという優れた効果を奏し得る。
【００２７】
また、本発明の病理組織標本の製造方法によれば、病原性微生物又は病原性微生物を感染させた宿主細胞を混和させた哺乳類の血液から得られる凝血塊を用いて病理組織標本を作製するので、簡易且つ低コストでその標本を量産できるという優れた効果を奏し得る。
【発明を実施するための最良の形態】
【００２８】
以下、本発明の実施の形態を説明する。
【００２９】
本発明の病理組織標本は、病原性微生物又は病原性微生物を感染させた宿主細胞を混和させた哺乳類の血液から得られる凝血塊を用いて作製される。ここで、病原性微生物とは、感染症の原因となる微生物であり、本発明で利用される病原性微生物としては、細菌、真菌、原虫又はウィルスが挙げられる。
【００３０】
ここで、細菌とは、原核細胞を持つ単細胞の微生物であり、原形質に明瞭な核をもたない生物の一群である。本発明で利用される細菌としては、グラム陽性球菌、グラム陰性好気性桿菌、グラム陰性好気性球菌、グラム陰性通性嫌気性桿菌、グラム陰性嫌気性桿菌、グラム陰性嫌気性球菌、グラム陽性桿菌、らせん菌、放線菌、コリネバクテリウム属、マイコバクテリウム属（抗酸菌(ａｃｉｄ−ｆａｓｔ ｂａｃｔｅｒｉａ)とも呼ばれる。）、マイコプラズマ、リケッチア又はクラミジアが挙げられ、マイコバクテリウム属としては、結核菌群、らい菌又は非結核性抗酸菌が挙げられ、非結核性抗酸菌としては、マイコバクテリウム アビウム（Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ａｖｉｕｍ）、マイコバクテリウム イントラセルラレ（Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｉｎｔｒａｃｅｌｌｕｌａｒｅ）、マイコバクテリウム カンサシイ（Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｋａｎｓａｓｉｉ）、マイコバクテリウム アブセシュス（Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ａｂｓｃｅｓｓｕｓ）、マイコバクテリウム フォツイタム（Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｆｏｒｔｕｉｔｕｍ）、マイコバクテリウム シェロナエ（Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｃｈｅｌｏｎａｅ）、マイコバクテリウム シュルガイ（Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｓｚｕｌｇａｉ）、マイコバクテリウム キセノピ（Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｘｅｎｏｐｉ）、マイコバクテリウム ノンクロモジェニクム（Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｎｏｎｃｈｒｏｍｏｇｅｎｉｃｕｍ）、マイコバクテリウム テラエ（Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｔｅｒｒａｅ）、マイコバクテリウム スクロフラセウム（Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｓｃｒｏｆｕｌａｃｅｕｍ）、マイコバクテリウム ゴドナエ（Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｇｏｒｄｏｎａｅ）、マイコバクテリウム シミアエ（Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｓｉｍｉａｅ）、マイコバクテリウム シモイデイ（Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｓｈｉｍｏｉｄｅｉ）、マイコバクテリウム サーモレジスタブル（Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｔｈｅｒｍｏｒｅｓｉｓｔｉｂｌｅ）、マイコバクテリウム ウルセランス（Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｕｌｃｅｒａｎｓ）、マイコバクテリウム マリナム（Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｍａｒｉｎｕｍ）、マイコバクテリウム バッカエ（Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｖａｃｃａｅ）、マイコバクテリウム フラベセンス（Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｆｌａｖｅｓｃｅｎｓ）、マイコバクテリウム アシアティカム（Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ａｓｉａｔｉｃｕｍ）、マイコバクテリウム ポルシナム（Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｐｏｒｃｉｎｕｍ）、マイコバクテリウム アカプルセンシス（Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ａｃａｐｕｌｃｅｎｓｉｓ）又はマイコバクテリウム ディエンホフェリ（Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｄｉｅｒｎｈｏｆｅｒｉ）が挙げられる。尚、これらの細菌は、複数組み合わせて利用されても良い。これらの中では、マイコバクテリウム アビウムと、マイコバクテリウム イントラセルラレとを含んだマイコバクテリウム アビウム コンプレックス（Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ａｖｉｕｍ ｃｏｍｐｌｅｘ（以下、「ＭＡＣ」という。））が好適に利用される。
【００３１】
また、真菌とは、菌類のうち細菌、変形菌を除くものの総称であり、カビ、キノコとよばれるものが含まれる。本発明で利用される真菌としては、皮膚糸状菌、カンジダ属、マラセチア属、スポロトリックス属、黒色真菌、アブシジア属、ムーコル属、リゾムーコル属、リゾプス属、トリコスポロン属、ニューモシスチス属、アスペルギルス属、クリプトコックス属、コクシジオイデス属、ヒトプラスマ属、ブラストミセス属、パラコクシジオイデス属又はペニシリウム属が挙げられる。尚、これらの真菌は、複数組み合わせて利用されても良い。
【００３２】
更に、原虫とは、単細胞の真核生物であり、偽足や鞭毛等の運動器官を持つものが多く、原生動物ともよばれている。本発明で利用される原虫としては、赤痢アメーバ原虫、ランブル鞭毛虫、クリプトスポリジウムパルブム原虫、大腸バランチジウム原虫、膣トリコモナス原虫、トキソプラズマゴンディ、トリパノソーマ原虫属、リーシュマニア原虫類、アカントアメーバカルバートソニ原虫、プラスモジウム原虫又はマラリア原虫が挙げられる。尚、これらの原虫は、複数組み合わせて利用されても良い。
【００３３】
加えて、ウィルスとは、２０〜３００ｎｍの大きさであるので光学顕微鏡では観察することができず、細菌濾過器を通過してしまう微生物である。また、外殻はたんぱく質からなり、内部に遺伝子のＤＮＡまたはＲＮＡを含んでいる。一般的には、単独では生命活動を営めず、生きた細胞に寄生して生活又は増殖するので、生物と無生物の中間形とされている。本発明で利用されるウィルスとしては、痘瘡ウィルス、天然痘ウィルス、サル痘ウィルス、伝染性軟属種ウィルス、単純ヘルペスウィルス１型、単純ヘルペスウィルス２型、水痘帯状疱疹ウィルス、サイトメガロウィルス、ＥＢウィルス（Ｅｐｓｔｅｉｎ−Ｂａｒｒ ｖｉｒｕｓ）、ヒトヘルペスウィルス６型、ヒトヘルペスウィルス８型、アデノウィルス科、ポリオーマウィルス科、パピローマウィルス科、パルボウィルス科、ポリオウィルス、コクサッキーウィルス、エコーウィルス、エンテロウィルス、ライノウィルス、ヘパトウィルス属、ロタウィルス、ノロウィルス、サポウィルス、アルファウィルス、風疹ウィルス、デングウィルス、横熱ウィルス、日本脳炎ウィルス、ウエストナイルウィルス、ダニ媒介性脳炎ウィルス、インフルエンザウィルス、パラインフルエンザウィルス、ムンプスウィルス、麻疹ウィルス、ＲＥウィルス（Ｒｅｓｐｉｒａｔｏｒｙ ｓｙｎｃｙｔｉａｌ ｖｉｒｕｓ）、ヒトメタニューモウィルス、狂犬病ウィルス、ヒト呼吸器コロナウィルス、ＳＡＲＳコロナウィルス（Ｓｅｖｅｒｅ Ａｃｕｔｅ Ｒｅｓｐｉｒａｔｏｒｙ Ｓｙｎｄｒｏｍｅ ｃｏｒｏｎａｖｉｒｕｓ）、エボラウィルス、マールブルグウィルス、ハンタウィルス属、ナイロウィルス属、ラッサウィルス、ヒトＴリンパ球向性ウィルス１型（Ｈｕｍａｎ Ｔ−ｌｙｍｐｈｏｔｒｏｐｉｃ ｖｉｒｕｓ ｔｙｐｅ １）、ヒト免疫不完全ウィルス、Ａ型肝炎ウィルス（Ｈｅｐａｔｉｔｉｓ Ａ ｖｉｒｕｓ）、Ｂ型肝炎ウィルス（Ｈｅｐａｔｉｔｉｓ Ｂ ｖｉｒｕｓ）、Ｃ型肝炎ウィルス（Ｈｅｐａｔｉｔｉｓ Ｃ ｖｉｒｕｓ）、Ｄ型肝炎ウィルス（Ｈｅｐａｔｉｔｉｓ Ｄ ｖｉｒｕｓ）、Ｅ型肝炎ウィルス（Ｈｅｐａｔｉｔｉｓ Ｅ ｖｉｒｕｓ）、Ｇ型肝炎ウィルス（Ｈｅｐａｔｉｔｉｓ Ｇ ｖｉｒｕｓ）又はＴＴウィルス（Ｔ Ｔ ｖｉｒｕｓ）が挙げられる。尚、これらのウィルスは、複数組み合わせて利用されても良い。
【００３４】
また、上述の病原性微生物の代わりとして、感染症の発症原因微生物と微生物学的性質が近似し、且つ感染力が弱い他の微生物を用いることができる。ここで、微生物学的性質とは、形態的性質、培養的性質、生理学的性質等が挙げられ、その微生物を特定するための目安となるものである。形態的性質とは、育成した微生物の細胞の形及び大きさ、細胞の多様性の有無等である。また、培養的性質とは、微生物の生育の様相、色、光沢等である。また、生理学的性質とは、その微生物のグラム染色性、ｐＨや温度といった生育の範囲等である。即ち、微生物学的性質が同質であれば、染色結果が同等であると期待される一方で、感染力が弱いので安全性を確保することができるものである。本発明で利用される他の微生物としては、上述の非結核性抗酸菌が挙げられる。
【００３５】
また、本発明の病理組織標本は、上述したように、病原性微生物又は病原性微生物を感染させた宿主細胞を混和させた哺乳類の血液から得られる凝血塊を用いて作製される。ここで、哺乳類とは、哺乳綱の脊椎動物の総称であり、現生種は有袋目、食虫目、翼手目、霊長目、食肉目、クジラ目、偶蹄目、奇蹄目、長鼻目、齧歯目、ウシ目、ウサギ目等の１９目約４３００種に分類される。本発明で利用される哺乳類としては、霊長目、齧歯目、ウシ目又はウサギ目が挙げられ、これらの中では、ヒト、ラット、羊又はウサギが好ましく、特にヒトの血液が好適に利用される。
【００３６】
また、混和とは、病原性微生物又は病原性微生物を感染させた宿主細胞と、哺乳類の血液とが均一に混合した状態をいう。即ち、本発明の病理標本では、細菌、真菌、原虫等の病原性微生物の場合は、病原性微生物そのものを哺乳類の血液に混和させ、ウィルス等の病原性微生物の場合は、病原性微生物を感染させた宿主細胞を哺乳類の血液に混和させて得られる凝血塊を用いて作製することができる。また、凝血塊とは、病原性微生物又は病原性微生物を感染させた宿主細胞を混和させた哺乳類の血液を、血液凝固反応により凝固させて得られる固形物である。
【００３７】
次に、本発明の病理組織標本の製造方法について説明する。
【００３８】
本発明の病理組織標本は、病原性微生物又は病原性微生物を感染させた宿主細胞を哺乳類の血液に混和させる工程と、前記病原性微生物又は前記病原性微生物を感染させた宿主細胞を混和させた前記哺乳類の血液から凝血塊を採取する工程と、前述の凝血塊を用いて病理組織標本を作製する工程により作製される。
【００３９】
まず、病原性微生物を培養し、各種微生物に対応した培地から各種微生物のコロニーを採取する。そして、凝血しないように採血管内に採取した適当量の哺乳類の血液に、病原性微生物又は病原性微生物を感染させた宿主細胞を加えて混和させる。次に、病原性微生物又は病原性微生物を感染させた宿主細胞を加えて混和させた血液を凝固させ、凝血塊を採取する。この際、感染力の強い病原性微生物を扱う場合はバイオハザード対策を行う必要があるので、各種微生物の感染力に適合したバイオハザード対策施設、例えばバイオハザード対策用のキャビネットを用いる。
【００４０】
ここで、病理組織標本とは、光学顕微用のパラフィン包埋標本、電子顕微鏡用の樹脂包埋標本等として、観察可能に加工された被験者の生体や解剖個体から採取した組織標本である。また、病理組織標本を作製する工程は、一般的には光学顕微鏡観察用の標本と電子顕微鏡観察用の標本とで異なる。光学顕微鏡観察用の標本は、固定、脱水、脱脂、置換、浸透、包埋、薄切等の各工程を経て作製され、電子顕微鏡用の樹脂包埋標本は、固定、脱水、脱脂、置換、浸透、包埋、面出し等の各工程を経て作製される。
【００４１】
ここで固定とは、採取された組織が、放置によって組織内の細胞が死滅してしまい、光学顕微鏡での観察ができなくなってしまうことを防ぐために行う処理である。この処理を行うことで、組織や細胞のタンパク質に脱水や変性を起こさせて凝固させ、細胞が死滅することでその構造が安定化、不溶化され、そのタンパク質は色素と結合しやすくなり、光学顕微鏡での観察が可能となる。一般的には、固定処理には、ホルマリンが用いられる。尚、上記の固定処理に、組織固定用振盪器を用いて行っても良い。
【００４２】
また、脱水、脱脂、置換、浸透処理とは、固定後の組織内の水分等を除去し、組織内にパラフィンや樹脂を浸透させるための各段階である。一般的には、脱水、脱脂処理には数種類の濃度が異なるアルコールが、置換処理にはキシレン（クロロホルム）が、浸透処理にはパラフィンや樹脂が用いられる。尚、脱水から浸透処理に、真空自動固定包埋装置、密閉固定包埋装置、自動固定包埋装置等を用いて行っても良い。
【００４３】
また、包埋とは、硬さが不均一で、薄い切片にできない固定処理後の組織に包埋剤を浸透させて固め、硬さを均一にする処理である。この処理では、一般的に光学顕微鏡用の包埋剤としてパラフィンが、電子顕微鏡用としてエポキシ樹脂又はアクリル樹脂が用いられる。尚、浸透から包埋までの処理に、パラフィン溶融器を用いて行っても良い。
【００４４】
また、薄切とは、光学顕微鏡での観察を可能にするために、包埋処理後の組織を光が透過する厚さに切断する処理である。尚、この薄切処理に、ミクロトーム、プテラトーム等の裁断装置を用いて行っても良い。
【００４５】
また、面出しとは、ダイヤモンドナイフやウルトラミクロトーム等の裁断装置で、包埋処理後の組織が視覚可能になるように、標本の切片を顕微鏡で確認しながら最良面を出す作業である。尚、余分な樹脂は面出し後にトリミングする。
【００４６】
最後に、本発明の病理組織標本の用途について説明する。
【００４７】
本発明の病理組織標本は、病原性微生物の感染症の診断方法における陽性コントロール標本として用いられる。被検者の生体や解剖個体から採取した組織標本を、陽性コントロール標本と共に適切な染色方法で着色し、両者を比較して光学顕微鏡等で比較観察し、染色結果の判定を行い、被検者の組織標本の染色結果とが一致していれば、医師はその被検者に対し、各種検査結果と併せて感染症の診断を下すことができる。
【００４８】
上記の陽性コントロール標本を染色する際の染色方法としては、チールネルゼン染色（Ｚｉｅｈｌ−Ｎｅｅｌｓｅｎ ｓｔａｉｎ）、蛍光染色（Ａｕｒａｍｉｎｅ ｓｔａｉｎ）、グロコット染色（Ｍｅｔｈｅｎａｍｉｎｅ ｓｉｌｖｅｒ−ｎｉｔｒａｔｅ ｓｔａｉｎ （Ｇｏｍｏｒｉ）−Ｇｒｏｃｏｔｔ'ｓ ｖａｒｉａｔｉｏｎ）、グラム染色（Ｇｒａｍ ｓｔａｉｎ）、オルセイン染色（Ｏｒｃｅｉｎ ｓｔａｉｎ）、ビクトリア青酸性フクシン染色（Ｖｉｃｔｏｒｉａ ｂｌｕｅ・Ａｃｉｄｉｃ Ｆｕｃｈｓｉｎ ｓｔａｉｎ）、クラミディア染色（Ｍａｃｃｈｉａｖｅｌｌｏ ｓｔａｉｎ）、グリドリー変法、ワルチンスタリー染色（Ｗａｒｔｈｉｎ−Ｓｔａｒｒｙ ｓｔａｉｎ）又は免疫染色（Ｉｍｍｕｎｏｓｔａｉｎｉｎｇ）が挙げられ、これらの中では、チールネルゼン染色（Ｚｉｅｈｌ−Ｎｅｅｌｓｅｎ ｓｔａｉｎ）又は蛍光染色（Ａｕｒａｍｉｎｅ ｓｔａｉｎ）が好適に利用される。ここで、チールネルゼン染色とは、組織内の結核菌等の抗酸菌又はセロイド（ｃｅｒｏｉｄ）等の抗酸性物質を染色するために用いられる方法の一つであり、蛍光染色とは、蛍光色素であるオーラミン・ロダミンを用いて組織内の抗酸菌等の観察を行うものである。
【００４９】
また、上記の陽性コントロール標本の別の用途として、電子顕微鏡で比較観察して判定する際に用いることが挙げられる。電子顕微鏡用の陽性コントロール標本として用いる場合には、酢酸ウラン等で電子染色処理を行っても良いし、染色をせずにそのまま観察を行っても良い。
【実施例】
【００５０】
次に、本発明の具体的な実施例及び比較例を示すが、これは本発明の実施態様を例示したものであり、本発明はこれらの実施例に限定されるものではない。よって、本発明の要旨を逸脱しない範囲内において種々変更を加え得ることは勿論である。
【００５１】
［実施例１］ＭＡＣ菌を用いた本発明の病理組織標本の作製
【００５２】
以下の手順により、病理組織標本を作製した。
【００５３】
はじめに、ＭＡＣ菌の保存株を４℃で保管し、そのＭＡＣ菌を、３５℃に加温したフラン器内で小川培地（極東社製）を用いて培養し、培地上にコロニーを形成させた。形成させたコロニー群から直径５ｍｍ程度のコロニーを選択し、それを滅菌水１００μｌに加えて健常者の血液４ｍｌと混和させた。この際、血液中の菌数が１０８〜１０１０個／ｍｌになるように調製した。
【００５４】
次に、バイオハザード用キャビネット（サンヨー社製）内で、血液が凝固しないように注意しながら、得られたＭＡＣ菌を、採取した血液が入った採血管の中に注入し、混和させてＭＡＣ菌入り血液を凝固させて凝血塊を得た。また、同様にバイオハザード用キャビネット内で、採血管内に、注射器を用いて２０％ホルマリン５ｍｌを注入して固定処理を行った。更に、採血管内の凝血塊をサンプルパック（栄研器材社製、７×４．５ｃｍ）に入れ、それを２０％中性緩衝ホルマリン２００ｍｌが入った容器に浸して再度固定処理を行った。
【００５５】
更に、サンプルパックに入れた固定処理済凝血塊を、自動包埋装置（サクラファインテック社製）を用いて包埋処理し、パラフィンブロック（３×４ｃｍ）を作製した。そして、得られたパラフィンブロックを冷却させた後、ミトクローム（ヤマト社製）を用いて３μｍの薄さの切片になるよう薄切処理した。更に、得られた切片を、１０００ｍｌの蒸留水中に浮かせて形を整えた。この切片を、空気泡が入らないようにスライドガラスに載せ、水分を除去してから伸展器（サクラファインテックジャパン社製）によって３７℃で加温し、切片の縮みを伸ばしながらスライドガラス表面に貼り付け、病理組織標本を得た。
【００５６】
［実施例２］結核菌を用いた本発明の病理組織標本の作製
【００５７】
以下の手順により、病理組織標本を作製した。
【００５８】
はじめに、結核症患者から得られた結核菌を、１０％ＣＯ２雰囲気下で３５℃に保たれた環境内で２週間培養した。
【００５９】
次に、得られた結核菌を用いて、実施例１と同様の操作で作製し、病理標本を得た。
【００６０】
［比較例１］従来方法による病理組織標本の作製
【００６１】
以下の手順により、病理組織標本を作製した。
【００６２】
はじめに、結核症患者から採取した肺の病変組織を、３×４ｃｍの大きさに切り出し、ホルマリンを用いて室温で固定処理を行った。最後に、得られた固定処理済病変組織を、実施例１と同様の操作で作製し、病理組織標本を得た。
【００６３】
［実施例３］チールネルゼン染色法による比較試験
【００６４】
以下の手順により、実施例１及び実施例２の標本並びに比較例１の病理標本を染色し三者を比較した。
【００６５】
はじめに、ライトグリーン０．５ｇと酢酸１ｍｌとを蒸留水１００ｍｌに加えて混合して溶解させ、ライトグリーン液を得た。また、７０％のアルコール１００ｍｌに、濃塩酸１ｍｌを加えて混合し、１％塩酸アルコール液を得た。
【００６６】
次に、実施例１で得られた本発明の病理組織標本（以下、「病理組織標本Ａ」とする。）に、脱パラフィン処理、脱イオン水による水洗処理を施した後、カルボールフクシン液（ムトウ化学社製）５０ｍｌが入った容器内に浸し、室温で３０分間静置した。その後、病理組織標本Ａを流水洗浄した後、得られた１％塩酸アルコール５０ｍｌが入った容器内に浸してふたを閉め、脱色されるまで容器をゆっくり上下に振った。その後、５分間流水洗浄した後、得られたライトグリーン液５０ｍｌが入った容器内に浸して３分間静置し、染色された病理組織標本Ａを５分間流水洗浄した。そして、病理組織標本Ａをアルコール５０ｍｌが入った容器内に1分間浸す脱水処理を３回繰り返した後に、キシレン５０ｍｌが入った容器内に１分間浸す透徹処理を施した。その後、病理組織標本Ａ上にカバーグラスを載せ封入してＭＡＣ菌の陽性コントロール標本（以下、「陽性コントロール標本Ａ」とする。）を得た。また、実施例２で得られた結核菌を用いた病理組織標本を、陽性コントロール標本Ａと同様に染色してカバーガラスで封入し、結核菌の陽性コントロール標本（以下、「陽性コントロール標本Ｂ」とする。）を得た。更に、比較例１で得られた結核症の病理組織標本を、陽性コントロール標本Ａと同様に染色してカバーガラスで封入し、結核症の陽性コントロール標本（以下、「陽性コントロール標本Ｃ」とする。）を得た。
【００６７】
得られた陽性コントロール標本Ａと、陽性コントロール標本Ｃとの染色状態を目視で比較したところ、両者の染色状態に差異は無く、チールネルゼン染色法において、結核菌含有凝血塊を用いて作製した陽性コントロール標本による代用が可能であることがわかった。
【００６８】
また、図１及び図２に、陽性コントロール標本Ａの光学顕微鏡（ニコン社製、１０００倍）写真及び陽性コントロール標本Ｂの光学顕微鏡（ニコン社製、１０００倍）写真をそれぞれ示した。両者を比較すると染色状態に差異は無く、チールネルゼン染色法において、ＭＡＣ菌含有凝血塊を用いて作製した陽性コントロール標本による代用が可能であることがわかった。
【００６９】
［実施例４］蛍光染色法による比較試験
【００７０】
以下の手順により、実施例１及び実施例２の標本並びに比較例１の病理標本を染色し三者を比較した。
【００７１】
はじめに、ロダミン０．１ｇを蒸留水１００ｍｌ溶解させ、ロダミンＢ液を得た。次に、９５％のエタノール１０ｍｌに、オーラミン・Ｏ粉末０．１ｇを加えてオーラミン溶液を得た。また、蒸留水８７ｍｌに、の石炭酸３ｍｌを加えて混合し、石炭酸水溶液を得た。更に、得られたオーラミン液と石炭酸水溶液とを静かに混和して石炭酸オーラミンＯ液を得た。また、９５％のエタノール９７ｍｌに、濃塩酸３ｍｌを静かに加えて３％塩酸アルコールを得た。また、メチレンブルー５ｇをエタノール１００ｍｌに加えて完全に溶解させ、メチレンブルー原液を得た。得られたメチレンブルー原液３０ｍｌと、０．０１％水酸化カリウム水溶液１００ｍｌとを混和させレフレルメチレンブルー液を得た。
【００７２】
次に、病理組織標本Ａに、得られたロダミンＢ液１０ｍｌを滴下して１分間放置した後に、得られた石炭酸オーラミンＯ液１０ｍｌを滴下し室温で１０分間静置した。その後、病理組織標本Ａを流水洗浄し、得られた３％塩酸アルコール１０ｍｌを滴下して脱色されるまでまんべんなく病理組織標本Ａ上に流動させた。その後、病理組織標本Ａを３０秒間流水洗浄し、得られたレフレルメチレンブルー液を蒸留水で１０倍に薄め、それを１０ｍｌ滴下して３０秒間静置した。その後、水洗して濾紙を用いずに室温で乾燥させ、病理組織標本Ａを上にカバーグラスを載せ封入してＭＡＣ菌の陽性コントロール標本（以下、「陽性コントロール標本Ｄ」とする。）を得た。また、実施例２で得られた結核菌を用いた病理組織標本を、陽性コントロール標本Ａと同様に染色してカバーガラスで封入し、結核菌の陽性コントロール標本（以下、「陽性コントロール標本Ｅ」とする。）を得た。更に、比較例１で得られた結核症の病理組織標本を、陽性コントロール標本Ａと同様に染色してカバーガラスで封入し、結核症の陽性コントロール標本（以下、「陽性コントロール標本Ｆ」とする。）を得た。
【００７３】
得られた陽性コントロール標本Ｅと、陽性コントロール標本Ｆとの染色状態を目視で比較したところ、両者の染色状態に差異は無く、蛍光染色法において、結核菌含有凝血塊を用いて作製した陽性コントロール標本による代用が可能であることがわかった。
【００７４】
また、図３及び図４に、陽性コントロール標本Ｄの光学顕微鏡（ニコン社製、１０００倍）写真及び陽性コントロール標本Ｅの光学顕微鏡（ニコン社製、１０００倍）写真をそれぞれ示した。両者を比較すると染色状態に差異は無く、蛍光染色法において、ＭＡＣ菌含有凝血塊を用いて作製した陽性コントロール標本による代用が可能であることがわかった。
【産業上の利用可能性】
【００７５】
本発明の病理組織標本は、病原性微生物又は病原性微生物を感染させた宿主細胞を混和させた哺乳類の血液から得られる凝血塊を用いて作製され、その病原性微生物として、感染症の発症原因微生物と微生物学的性質が近似し、且つ感染力が弱い他の微生物を用いることができるので、安全性を確保しつつ、更に施設保有者に経済的負担を負わせることが無い。また、本発明の病理組織標本は、必要なときに必要な量の病理組織標本を得ることができ、例えば健常者やラット等の血液を用いて病理組織標本を作製することができるので、簡易に作製が可能である。更に、本発明の病理組織標本の製造方法は、病原性微生物又は病原性微生物を感染させた宿主細胞を混和させた哺乳類の血液から得られる凝血塊を用いて病理組織標本を作製する方法であるので、簡易且つ低コストで量産が可能である。
【００７６】
よって、本発明の病理組織標本は、病原性微生物が引き起こす感染症の診断に用いる病理組織標本、特に染色法による感染症の診断用陽性コントロール標本として用いた場合に極めて有用である。
【図面の簡単な説明】
【００７７】
【図１】チールネルゼン染色で染色処理を施したＭＡＣ菌の陽性コントロール標本の光学顕微鏡写真である。
【図２】チールネルゼン染色で染色処理を施した結核菌の陽性コントロール標本の光学顕微鏡写真である。
【図３】蛍光染色で染色処理を施したＭＡＣ菌の陽性コントロール標本の光学顕微鏡写真である。
【図４】蛍光染色で染色処理を施した結核菌の陽性コントロール標本の光学顕微鏡写真である。
【特許請求の範囲】
【請求項１】
病原性微生物又は病原性微生物を感染させた宿主細胞を混和させた哺乳類の血液から得られる凝血塊を用いて作製されることを特徴とする病理組織標本。
【請求項２】
前記哺乳類は、ヒト、ラット、羊又はウサギであることを特徴とする請求項１に記載の病理組織標本。
【請求項３】
前記病原性微生物は、細菌、真菌、原虫又はウィルスであることを特徴とする請求項１又は２に記載の病理組織標本。
【請求項４】
前記細菌は、グラム陽性球菌、グラム陰性好気性桿菌、グラム陰性好気性球菌、グラム陰性通性嫌気性桿菌、グラム陰性嫌気性桿菌、グラム陰性嫌気性球菌、グラム陽性桿菌、らせん菌、放線菌類、コリネバクテリウム属、マイコバクテリウム属、マイコプラズマ、リケッチア又はクラミジアからなる群より選択される少なくとも一つであることを特徴とする請求項３に記載の病理組織標本。
【請求項５】
前記マイコバクテリウム属は、結核菌群、らい菌又は非結核性抗酸菌からなる群より選択される少なくとも一つであることを特徴とする請求項４に記載の病理組織標本。
【請求項６】
前記非結核性抗酸菌は、マイコバクテリウム アビウム（Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ａｖｉｕｍ）、マイコバクテリウム イントラセルラレ（Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｉｎｔｒａｃｅｌｌｕｌａｒｅ）、マイコバクテリウム カンサシイ（Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｋａｎｓａｓｉｉ）、マイコバクテリウム アブセシュス（Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ａｂｓｃｅｓｓｕｓ）、マイコバクテリウム フォツイタム（Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｆｏｒｔｕｉｔｕｍ）、マイコバクテリウム シェロナエ（Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｃｈｅｌｏｎａｅ）、マイコバクテリウム シュルガイ（Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｓｚｕｌｇａｉ）、マイコバクテリウム キセノピ（Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｘｅｎｏｐｉ）、マイコバクテリウム ノンクロモジェニクム（Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｎｏｎｃｈｒｏｍｏｇｅｎｉｃｕｍ）、マイコバクテリウム テラエ（Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｔｅｒｒａｅ）、マイコバクテリウム スクロフラセウム（Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｓｃｒｏｆｕｌａｃｅｕｍ）、マイコバクテリウム ゴドナエ（Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｇｏｒｄｏｎａｅ）、マイコバクテリウム シミアエ（Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｓｉｍｉａｅ）、マイコバクテリウム シモイデイ（Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｓｈｉｍｏｉｄｅｉ）、マイコバクテリウム サーモレジスタブル（Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｔｈｅｒｍｏｒｅｓｉｓｔｉｂｌｅ）、マイコバクテリウム ウルセランス（Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｕｌｃｅｒａｎｓ）、マイコバクテリウム マリナム（Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｍａｒｉｎｕｍ）、マイコバクテリウム バッカエ（Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｖａｃｃａｅ）、マイコバクテリウム フラベセンス（Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｆｌａｖｅｓｃｅｎｓ）、マイコバクテリウム アシアティカム（Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ａｓｉａｔｉｃｕｍ）、マイコバクテリウム ポルシナム（Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｐｏｒｃｉｎｕｍ）、マイコバクテリウム アカプルセンシス（Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ａｃａｐｕｌｃｅｎｓｉｓ）又はマイコバクテリウム ディエンホフェリ（Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｄｉｅｒｎｈｏｆｅｒｉ）からなる群より選択される少なくとも一つであることを特徴とする請求項５に記載の病理組織標本。
【請求項７】
前記真菌は、皮膚糸状菌、カンジダ属、マラセチア属、スポロトリックス属、黒色真菌、アブシジア属、ムーコル属、リゾムーコル属、リゾプス属、トリコスポロン属、ニューモシスチス属、アスペルギルス属、クリプトコックス属、コクシジオイデス属、ヒトプラスマ属、ブラストミセス属、パラコクシジオイデス属又はペニシリウム属からなる群より選択される少なくとも一つであること特徴とする請求項３に記載の病理組織標本。
【請求項８】
前記原虫は、赤痢アメーバ原虫、ランブル鞭毛虫、クリプトスポリジウムパルブム原虫、大腸バランチジウム原虫、膣トリコモナス原虫、トキソプラズマゴンディ、トリパノソーマ原虫属、リーシュマニア原虫類、アカントアメーバカルバートソニ原虫、プラスモジウム原虫又はマラリア原虫からなる群より選択される少なくとも一つであることを特徴とする請求項３に記載の病理組織標本。
【請求項９】
前記ウィルスは、痘瘡ウィルス、天然痘ウィルス、サル痘ウィルス、伝染性軟属種ウィルス、単純ヘルペスウィルス１型、単純ヘルペスウィルス２型、水痘帯状疱疹ウィルス、サイトメガロウィルス、ＥＢウィルス（Ｅｐｓｔｅｉｎ−Ｂａｒｒ ｖｉｒｕｓ）、ヒトヘルペスウィルス６型、ヒトヘルペスウィルス８型、アデノウィルス科、ポリオーマウィルス科、パピローマウィルス科、パルボウィルス科、ポリオウィルス、コクサッキーウィルス、エコーウィルス、エンテロウィルス、ライノウィルス、ヘパトウィルス属、ロタウィルス、ノロウィルス、サポウィルス、アルファウィルス、風疹ウィルス、デングウィルス、横熱ウィルス、日本脳炎ウィルス、ウエストナイルウィルス、ダニ媒介性脳炎ウィルス、インフルエンザウィルス、パラインフルエンザウィルス、ムンプスウィルス、麻疹ウィルス、ＲＥウィルス（Ｒｅｓｐｉｒａｔｏｒｙ ｓｙｎｃｙｔｉａｌ ｖｉｒｕｓ）、ヒトメタニューモウィルス、狂犬病ウィルス、ヒト呼吸器コロナウィルス、ＳＡＲＳコロナウィルス（Ｓｅｖｅｒｅ Ａｃｕｔｅ Ｒｅｓｐｉｒａｔｏｒｙ Ｓｙｎｄｒｏｍｅ ｃｏｒｏｎａｖｉｒｕｓ）、エボラウィルス、マールブルグウィルス、ハンタウィルス属、ナイロウィルス属、ラッサウィルス、ヒトＴリンパ球向性ウィルス１型（Ｈｕｍａｎ Ｔ−ｌｙｍｐｈｏｔｒｏｐｉｃ ｖｉｒｕｓ ｔｙｐｅ １）、ヒト免疫不完全ウィルス、Ａ型肝炎ウィルス（Ｈｅｐａｔｉｔｉｓ Ａ ｖｉｒｕｓ）、Ｂ型肝炎ウィルス（Ｈｅｐａｔｉｔｉｓ Ｂ ｖｉｒｕｓ）、Ｃ型肝炎ウィルス（Ｈｅｐａｔｉｔｉｓ Ｃ ｖｉｒｕｓ）、Ｄ型肝炎ウィルス（Ｈｅｐａｔｉｔｉｓ Ｄ ｖｉｒｕｓ）、Ｅ型肝炎ウィルス（Ｈｅｐａｔｉｔｉｓ Ｅ ｖｉｒｕｓ）、Ｇ型肝炎ウィルス（Ｈｅｐａｔｉｔｉｓ Ｇ ｖｉｒｕｓ）又はＴＴウィルス（Ｔ Ｔ ｖｉｒｕｓ）からなる群より選択される少なくとも一つであることを特徴とする請求項３に記載の病理組織標本。
【請求項１０】
前記病原性微生物として、感染症の発症原因微生物と微生物学的性質が近似し、且つ感染力が弱い他の微生物を用いることを特徴とする請求項１乃至９に記載の病理組織標本。
【請求項１１】
前記病原性微生物の感染症の診断方法に用いられることを特徴とする請求項１乃至１０に記載の病理組織標本。
【請求項１２】
前記診断方法は、チールネルゼン染色（Ｚｉｅｈｌ−Ｎｅｅｌｓｅｎ ｓｔａｉｎ）、蛍光染色（Ａｕｒａｍｉｎｅ ｓｔａｉｎ）、グロコット染色（Ｍｅｔｈｅｎａｍｉｎｅ ｓｉｌｖｅｒ−ｎｉｔｒａｔｅ ｓｔａｉｎ （Ｇｏｍｏｒｉ）−Ｇｒｏｃｏｔｔ'ｓ ｖａｒｉａｔｉｏｎ）、グラム染色（Ｇｒａｍ ｓｔａｉｎ）、オルセイン染色（Ｏｒｃｅｉｎ ｓｔａｉｎ）、ビクトリア青酸性フクシン染色（Ｖｉｃｔｏｒｉａ ｂｌｕｅ・Ａｃｉｄｉｃ Ｆｕｃｈｓｉｎ ｓｔａｉｎ）、クラミディア染色（Ｍａｃｃｈｉａｖｅｌｌｏ ｓｔａｉｎ）、グリドリー変法、ワルチンスタリー染色（Ｗａｒｔｈｉｎ−Ｓｔａｒｒｙ ｓｔａｉｎ）又は免疫染色（Ｉｍｍｕｎｏｓｔａｉｎｉｎｇ）からなる群より選択される少なくとも一つであることを特徴とする請求項１１に記載の病理組織標本。
【請求項１３】
陽性コントロール標本である請求項１１又は１２に記載の病理組織標本。
【請求項１４】
病原性微生物又は病原性微生物を感染させた宿主細胞を哺乳類の血液に混和させる工程と、
前記病原性微生物又は前記病原性微生物を感染させた宿主細胞を混和させた前記哺乳類の血液から凝血塊を採取する工程と、
前記凝血塊を用いて病理組織標本を作製する工程とを含むことを特徴とする病理組織標本の製造方法。
【請求項１】
病原性微生物又は病原性微生物を感染させた宿主細胞を混和させた哺乳類の血液から得られる凝血塊を用いて作製されることを特徴とする病理組織標本。
【請求項２】
前記哺乳類は、ヒト、ラット、羊又はウサギであることを特徴とする請求項１に記載の病理組織標本。
【請求項３】
前記病原性微生物は、細菌、真菌、原虫又はウィルスであることを特徴とする請求項１又は２に記載の病理組織標本。
【請求項４】
前記細菌は、グラム陽性球菌、グラム陰性好気性桿菌、グラム陰性好気性球菌、グラム陰性通性嫌気性桿菌、グラム陰性嫌気性桿菌、グラム陰性嫌気性球菌、グラム陽性桿菌、らせん菌、放線菌類、コリネバクテリウム属、マイコバクテリウム属、マイコプラズマ、リケッチア又はクラミジアからなる群より選択される少なくとも一つであることを特徴とする請求項３に記載の病理組織標本。
【請求項５】
前記マイコバクテリウム属は、結核菌群、らい菌又は非結核性抗酸菌からなる群より選択される少なくとも一つであることを特徴とする請求項４に記載の病理組織標本。
【請求項６】
前記非結核性抗酸菌は、マイコバクテリウム アビウム（Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ａｖｉｕｍ）、マイコバクテリウム イントラセルラレ（Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｉｎｔｒａｃｅｌｌｕｌａｒｅ）、マイコバクテリウム カンサシイ（Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｋａｎｓａｓｉｉ）、マイコバクテリウム アブセシュス（Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ａｂｓｃｅｓｓｕｓ）、マイコバクテリウム フォツイタム（Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｆｏｒｔｕｉｔｕｍ）、マイコバクテリウム シェロナエ（Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｃｈｅｌｏｎａｅ）、マイコバクテリウム シュルガイ（Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｓｚｕｌｇａｉ）、マイコバクテリウム キセノピ（Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｘｅｎｏｐｉ）、マイコバクテリウム ノンクロモジェニクム（Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｎｏｎｃｈｒｏｍｏｇｅｎｉｃｕｍ）、マイコバクテリウム テラエ（Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｔｅｒｒａｅ）、マイコバクテリウム スクロフラセウム（Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｓｃｒｏｆｕｌａｃｅｕｍ）、マイコバクテリウム ゴドナエ（Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｇｏｒｄｏｎａｅ）、マイコバクテリウム シミアエ（Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｓｉｍｉａｅ）、マイコバクテリウム シモイデイ（Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｓｈｉｍｏｉｄｅｉ）、マイコバクテリウム サーモレジスタブル（Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｔｈｅｒｍｏｒｅｓｉｓｔｉｂｌｅ）、マイコバクテリウム ウルセランス（Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｕｌｃｅｒａｎｓ）、マイコバクテリウム マリナム（Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｍａｒｉｎｕｍ）、マイコバクテリウム バッカエ（Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｖａｃｃａｅ）、マイコバクテリウム フラベセンス（Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｆｌａｖｅｓｃｅｎｓ）、マイコバクテリウム アシアティカム（Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ａｓｉａｔｉｃｕｍ）、マイコバクテリウム ポルシナム（Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｐｏｒｃｉｎｕｍ）、マイコバクテリウム アカプルセンシス（Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ａｃａｐｕｌｃｅｎｓｉｓ）又はマイコバクテリウム ディエンホフェリ（Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｄｉｅｒｎｈｏｆｅｒｉ）からなる群より選択される少なくとも一つであることを特徴とする請求項５に記載の病理組織標本。
【請求項７】
前記真菌は、皮膚糸状菌、カンジダ属、マラセチア属、スポロトリックス属、黒色真菌、アブシジア属、ムーコル属、リゾムーコル属、リゾプス属、トリコスポロン属、ニューモシスチス属、アスペルギルス属、クリプトコックス属、コクシジオイデス属、ヒトプラスマ属、ブラストミセス属、パラコクシジオイデス属又はペニシリウム属からなる群より選択される少なくとも一つであること特徴とする請求項３に記載の病理組織標本。
【請求項８】
前記原虫は、赤痢アメーバ原虫、ランブル鞭毛虫、クリプトスポリジウムパルブム原虫、大腸バランチジウム原虫、膣トリコモナス原虫、トキソプラズマゴンディ、トリパノソーマ原虫属、リーシュマニア原虫類、アカントアメーバカルバートソニ原虫、プラスモジウム原虫又はマラリア原虫からなる群より選択される少なくとも一つであることを特徴とする請求項３に記載の病理組織標本。
【請求項９】
前記ウィルスは、痘瘡ウィルス、天然痘ウィルス、サル痘ウィルス、伝染性軟属種ウィルス、単純ヘルペスウィルス１型、単純ヘルペスウィルス２型、水痘帯状疱疹ウィルス、サイトメガロウィルス、ＥＢウィルス（Ｅｐｓｔｅｉｎ−Ｂａｒｒ ｖｉｒｕｓ）、ヒトヘルペスウィルス６型、ヒトヘルペスウィルス８型、アデノウィルス科、ポリオーマウィルス科、パピローマウィルス科、パルボウィルス科、ポリオウィルス、コクサッキーウィルス、エコーウィルス、エンテロウィルス、ライノウィルス、ヘパトウィルス属、ロタウィルス、ノロウィルス、サポウィルス、アルファウィルス、風疹ウィルス、デングウィルス、横熱ウィルス、日本脳炎ウィルス、ウエストナイルウィルス、ダニ媒介性脳炎ウィルス、インフルエンザウィルス、パラインフルエンザウィルス、ムンプスウィルス、麻疹ウィルス、ＲＥウィルス（Ｒｅｓｐｉｒａｔｏｒｙ ｓｙｎｃｙｔｉａｌ ｖｉｒｕｓ）、ヒトメタニューモウィルス、狂犬病ウィルス、ヒト呼吸器コロナウィルス、ＳＡＲＳコロナウィルス（Ｓｅｖｅｒｅ Ａｃｕｔｅ Ｒｅｓｐｉｒａｔｏｒｙ Ｓｙｎｄｒｏｍｅ ｃｏｒｏｎａｖｉｒｕｓ）、エボラウィルス、マールブルグウィルス、ハンタウィルス属、ナイロウィルス属、ラッサウィルス、ヒトＴリンパ球向性ウィルス１型（Ｈｕｍａｎ Ｔ−ｌｙｍｐｈｏｔｒｏｐｉｃ ｖｉｒｕｓ ｔｙｐｅ １）、ヒト免疫不完全ウィルス、Ａ型肝炎ウィルス（Ｈｅｐａｔｉｔｉｓ Ａ ｖｉｒｕｓ）、Ｂ型肝炎ウィルス（Ｈｅｐａｔｉｔｉｓ Ｂ ｖｉｒｕｓ）、Ｃ型肝炎ウィルス（Ｈｅｐａｔｉｔｉｓ Ｃ ｖｉｒｕｓ）、Ｄ型肝炎ウィルス（Ｈｅｐａｔｉｔｉｓ Ｄ ｖｉｒｕｓ）、Ｅ型肝炎ウィルス（Ｈｅｐａｔｉｔｉｓ Ｅ ｖｉｒｕｓ）、Ｇ型肝炎ウィルス（Ｈｅｐａｔｉｔｉｓ Ｇ ｖｉｒｕｓ）又はＴＴウィルス（Ｔ Ｔ ｖｉｒｕｓ）からなる群より選択される少なくとも一つであることを特徴とする請求項３に記載の病理組織標本。
【請求項１０】
前記病原性微生物として、感染症の発症原因微生物と微生物学的性質が近似し、且つ感染力が弱い他の微生物を用いることを特徴とする請求項１乃至９に記載の病理組織標本。
【請求項１１】
前記病原性微生物の感染症の診断方法に用いられることを特徴とする請求項１乃至１０に記載の病理組織標本。
【請求項１２】
前記診断方法は、チールネルゼン染色（Ｚｉｅｈｌ−Ｎｅｅｌｓｅｎ ｓｔａｉｎ）、蛍光染色（Ａｕｒａｍｉｎｅ ｓｔａｉｎ）、グロコット染色（Ｍｅｔｈｅｎａｍｉｎｅ ｓｉｌｖｅｒ−ｎｉｔｒａｔｅ ｓｔａｉｎ （Ｇｏｍｏｒｉ）−Ｇｒｏｃｏｔｔ'ｓ ｖａｒｉａｔｉｏｎ）、グラム染色（Ｇｒａｍ ｓｔａｉｎ）、オルセイン染色（Ｏｒｃｅｉｎ ｓｔａｉｎ）、ビクトリア青酸性フクシン染色（Ｖｉｃｔｏｒｉａ ｂｌｕｅ・Ａｃｉｄｉｃ Ｆｕｃｈｓｉｎ ｓｔａｉｎ）、クラミディア染色（Ｍａｃｃｈｉａｖｅｌｌｏ ｓｔａｉｎ）、グリドリー変法、ワルチンスタリー染色（Ｗａｒｔｈｉｎ−Ｓｔａｒｒｙ ｓｔａｉｎ）又は免疫染色（Ｉｍｍｕｎｏｓｔａｉｎｉｎｇ）からなる群より選択される少なくとも一つであることを特徴とする請求項１１に記載の病理組織標本。
【請求項１３】
陽性コントロール標本である請求項１１又は１２に記載の病理組織標本。
【請求項１４】
病原性微生物又は病原性微生物を感染させた宿主細胞を哺乳類の血液に混和させる工程と、
前記病原性微生物又は前記病原性微生物を感染させた宿主細胞を混和させた前記哺乳類の血液から凝血塊を採取する工程と、
前記凝血塊を用いて病理組織標本を作製する工程とを含むことを特徴とする病理組織標本の製造方法。
【図１】
【図２】
【図３】
【図４】
【図２】
【図３】
【図４】
【公開番号】特開２００８−１５１５９７（Ｐ２００８−１５１５９７Ａ）
【公開日】平成２０年７月３日（２００８．７．３）
【国際特許分類】
【出願番号】特願２００６−３３８７７０（Ｐ２００６−３３８７７０）
【出願日】平成１８年１２月１５日（２００６．１２．１５）
【出願人】（８０３００００５６）財団法人ヒューマンサイエンス振興財団 (341)
【Ｆターム（参考）】
【公開日】平成２０年７月３日（２００８．７．３）
【国際特許分類】
【出願日】平成１８年１２月１５日（２００６．１２．１５）
【出願人】（８０３００００５６）財団法人ヒューマンサイエンス振興財団 (341)
【Ｆターム（参考）】
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