癌の免疫療法
【課題】 従来よりも高い治療効果を奏する癌治療法を提供すること。
【解決手段】 本発明は、ＴＮＦ関連細胞死誘導因子とリンパ球活性化因子とを組み合わせてなる癌治療剤を提供する。
【解決手段】 本発明は、ＴＮＦ関連細胞死誘導因子とリンパ球活性化因子とを組み合わせてなる癌治療剤を提供する。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、細胞死誘導療法とリンパ球活性化療法との併用療法による癌の免疫療法に関する。
【背景技術】
【０００２】
現在、癌に対する治療は、外科的療法、抗癌剤による化学療法、放射線療法の３つを柱として実施されているが、近年第４の選択肢として免疫療法が確立されつつある。
【０００３】
癌に対する免疫学的アプローチとして、ＬＡＫ（ｌｙｍｐｈｏｋｉｎｅ−ａｃｔｉｖａｔｅｄ ｋｉｌｌｅｒ）やＴＩＬ（ｔｕｍｏｒ−ｉｎｆｉｌｔｒａｔｉｎｇ ｌｙｍｐｈｏｃｙｔｅｓ）を移入する養子免疫療法などが古くから行われてきたが、元来自己由来の細胞である癌細胞を選択的に殺傷することは難しく明らかな臨床成績・有効性は得られなかった。
【０００４】
しかしながら、分子生物学的な技術の進歩に伴い、腫瘍抗原が同定され、これを用いた、あるいはこれを提示させた樹状細胞を用いた癌抗原特異的な細胞障害性Ｔ細胞（ＣＴＬ）誘導による腫瘍特異的治療が行われるようになってきた。
【０００５】
一方、腫瘍特異的な抗体である抗ＨＥＲ２／ｎｅｕ抗体や抗ＣＤ２０抗体が作製され、それらの抗体による腫瘍に対する直接的な細胞死誘導と、それによる細胞障害性Ｔ細胞（ＣＴＬ）の誘導で良好な臨床成績が得られ、癌細胞に対する直接的な細胞死誘導の重要性が示されるとともに、癌に対する免疫療法が再び注目されるようになった（ｚｕｍ Ｂｕｓｃｈｈｅｎｆｅｌｄｅ ＣＭ，ｅｔ ａｌ． Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ ６２（２），２２４４−２２４７，２００２：非特許文献１；Ｓｅｌｅｎｋｏ Ｎ，ｅｔ ａｌ．，Ｌｅｕｋｅｍｉａ １５（１０），１６１９−１６２６，２００１：非特許文献２）。
【０００６】
また、抗原特異的免疫反応を惹起するために必要な抗原提示細胞としての樹状細胞に関する研究、補助刺激分子などＴ細胞−抗原提示細胞間相互作用に関与する機能分子の研究、更には腫瘍拒絶抗原ペプチドの同定研究が精力的になされ、腫瘍抗原特異的な細胞障害性Ｔ細胞（ＣＴＬ）を臨床治療に応用するための必要条件が、多方面からの基礎研究の成果によって明らかにされてきている。
【０００７】
しかしながら、（ｉ）腫瘍細胞の遺伝子的不安定さに由来する癌抗原の発現変異や、抗ＨＥＲ２／ｎｅｕ抗体や抗ＣＤ２０抗体による細胞死誘導への耐性の獲得による、細胞障害性Ｔ細胞（ＣＴＬ）および抗体療法からエスケープした腫瘍の増殖や転移、ならびに（ｉｉ）細胞障害性Ｔ細胞（ＣＴＬ）の誘導に必要な膨大な施設、機器、技術、人材等の問題があり、免疫療法を広く臨床に応用するには、多くの障害がある。
【０００８】
また、Ｔａｋｅｄａら（Ｔａｋｅｄａ Ｋ． ｅｔ ａｌ．，Ｊ Ｅｘｐ Ｍｅｄ １９９（４）４３７−４４８，２００４：非特許文献３）には、ＴＲＡＩＬ（Ｔｕｍｏｒ ｎｅｃｒｏｓｉｓ ｆａｃｔｏｒ−ｒｅｌａｔｅｄ ａｐｏｐｔｏｓｉｓ−ｉｎｄｕｃｉｎｇ ｌｉｇａｎｄ）の細胞死（以下、アポトーシスともいう）を誘導するレセプターであるＤＲ５に対するアゴニスティック抗体（ＭＤ５−１）を作製し、その投与により腫瘍拒絶を誘導しうることが報告されている。
【非特許文献１】ｚｕｍ Ｂｕｓｃｈｈｅｎｆｅｌｄｅ ＣＭ，ｅｔ ａｌ．，Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ ６２（２），２２４４−２２４７，２００２
【非特許文献２】Ｓｅｌｅｎｋｏ Ｎ，ｅｔ ａｌ．，Ｌｅｕｋｅｍｉａ １５（１０），１６１９−１６２６，２００１
【非特許文献３】Ｔａｋｅｄａ Ｋ， ｅｔ ａｌ．，Ｊ Ｅｘｐ Ｍｅｄ １９９（４） ４３７−４４８，２００４
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００９】
上記のように、癌の治療法については種々の研究がなされているが、未だ十分な治療効果を奏する治療法は、確立されていない。したがって、より高い治療効果を奏する治療法の確立が望まれている。
【課題を解決するための手段】
【００１０】
本発明は、上記のような課題を解決するためになされたもので、以下のような癌治療剤および癌治療用キットを提供する。
【００１１】
（１）ＴＮＦ関連細胞死誘導因子とリンパ球活性化因子とを組み合わせてなる、癌治療剤。
（２）上記ＴＮＦ関連細胞死誘導因子が、ＴＲＡＩＬレセプターに対するアゴニスティック抗体である、（１）に記載の癌治療剤。
（３）上記ＴＲＡＩＬレセプターに対するアゴニスティック抗体が抗ＤＲ５抗体である、（２）に記載の癌治療剤。
（４）上記リンパ球活性化因子が、補助刺激分子に対するアゴニスティック抗体である、（１）に記載の癌治療剤。
）に記載の癌治療剤。
（５）上記補助刺激分子に対するアゴニスティック抗体が、ＣＤ２８ファミリーメンバーに対するアゴニスティック抗体、またはデスレセプターを有さないＴＮＦＲファミリーメンバーに対するアゴニスティック抗体である、（４）に記載の癌治療剤。
（６）上記ＣＤ２８ファミリーメンバーに対するアゴニスティック抗体が、抗ＣＤ２８抗体、抗ＩＣＯＳ抗体、またはこれらの組み合わせである、（５）に記載の癌治療剤。
（７）上記デスレセプターを有さないＴＮＦＲファミリーメンバーに対するアゴニスティック抗体が、抗ＣＤ４０抗体、抗４−１ＢＢ抗体、またはこれらの組み合わせである、（５）に記載の癌治療剤。
（８）上記ＴＮＦ関連細胞死誘導因子が抗ＤＲ５抗体であり、上記リンパ球活性化因子が抗ＣＤ４０抗体および抗４−１ＢＢ抗体である、（１）に記載の癌治療剤。
（９）さらに、抑制性シグナルを伝えるレセプターに対するアンタゴニスティック抗体を含有する、（１）〜（８）のいずれかに記載の癌治療剤。
（１０）上記抑制性シグナルを伝えるレセプターに対するアンタゴニスティック抗体が、抗ＣＴＬＡ−４抗体である、（９）に記載の癌治療剤。
【００１２】
（１１）ＴＮＦ関連細胞死誘導因子を含有する、リンパ球活性化剤と併用するための癌治療剤。
（１２）上記ＴＮＦ関連細胞死誘導因子が、ＴＲＡＩＬレセプターに対するアゴニスティック抗体である、（１１）に記載の癌治療剤。
（１３）上記ＴＲＡＩＬレセプターに対するアゴニスティック抗体が、抗ＤＲ５抗体である、（１２）に記載の癌治療剤。
（１４）上記リンパ球活性化剤が、補助刺激分子に対するアゴニスティック抗体を含有する、（１１）に記載の癌治療剤。
（１５）上記補助刺激分子に対するアゴニスティック抗体が、ＣＤ２８ファミリーメンバーに対するアゴニスティック抗体、またはデスレセプターを有さないＴＮＦＲファミリーメンバーに対するアゴニスティック抗体である、（１４）に記載の癌治療剤。
（１６）上記ＣＤ２８ファミリーメンバーに対するアゴニスティック抗体が、抗ＣＤ２８抗体、抗ＩＣＯＳ抗体、またはこれらの組み合わせである、（１５）に記載の癌治療剤。
（１７）上記デスレセプターを有さないＴＮＦＲファミリーメンバーに対するアゴニスティック抗体が、抗ＣＤ４０抗体、抗４−１ＢＢ抗体、またはこれらの組み合わせである、（１５）に記載の癌治療剤。
（１８）さらに、抑制性シグナルを伝えるレセプターに対するアンタゴニスティック抗体を含有する、（１１）〜（１７）のいずれかに記載の癌治療剤。
（１９）上記抑制性シグナルを伝えるレセプターに対するアンタゴニスティック抗体が、抗ＣＴＬＡ−４抗体である、（１８）に記載の癌治療剤。
【００１３】
（２０）リンパ球活性化因子を含有する、細胞死誘導剤と併用するための癌治療剤。
（２１）上記リンパ球活性化因子が、補助刺激分子に対するアゴニスティック抗体である、（２０）に記載の癌治療剤。
（２２）上記補助刺激分子に対するアゴニスティック抗体が、ＣＤ２８ファミリーメンバーに対するアゴニスティック抗体、またはデスレセプターを有さないＴＮＦＲファミリーメンバーに対するアゴニスティック抗体である、（２１）に記載の癌治療剤。
（２３）上記ＣＤ２８ファミリーメンバーに対するアゴニスティック抗体が、抗ＣＤ２８抗体、抗ＩＣＯＳ抗体、またはこれらの組み合わせである、（２２）に記載の癌治療剤。
（２４）上記デスレセプターを有さないＴＮＦＲファミリーメンバーに対するアゴニスティック抗体が、抗ＣＤ４０抗体、抗４−１ＢＢ抗体、またはこれらの組み合わせである、（２２）に記載の癌治療剤。
（２５）上記細胞死誘導剤が、ＴＮＦ関連細胞死誘導因子を含有する、（２０）に記載の癌治療剤。
（２６）上記ＴＮＦ関連細胞死誘導因子が、ＴＲＡＩＬレセプターに対するアゴニスティック抗体である、（２５）に記載の癌治療剤。
（２７）上記ＴＲＡＩＬレセプターに対するアゴニスティック抗体が、抗ＤＲ５抗体である、（２６）に記載の癌治療剤。
（２８）さらに、抑制性シグナルを伝えるレセプターに対するアンタゴニスティック抗体を含有する、（２０）〜（２７）のいずれかに記載の癌治療剤。
（２９）上記抑制性シグナルを伝えるレセプターに対するアンタゴニスティック抗体が、抗ＣＴＬＡ−４抗体である、（２８）に記載の癌治療剤。
【００１４】
（３０）化学療法剤と併用する、（１）〜（２９）のいずれかに記載の癌治療剤。
（３１）放射線療法と併用する、（１）〜（２９）のいずれかに記載の癌治療剤。
【００１５】
（３２）細胞死誘導療法とリンパ球活性化療法との併用療法による癌治療用キットであって、
ＴＮＦ関連細胞死誘導因子を含有する薬剤と、
リンパ球活性化因子を含有する薬剤とを含む、癌治療用キット。
（３３）上記ＴＮＦ関連細胞死誘導因子が、ＴＲＡＩＬレセプターに対するアゴニスティック抗体であり、上記リンパ球活性化因子が、補助刺激分子に対するアゴニスティック抗体である、（３２）に記載の癌治療用キット。
（３４）ＴＲＡＩＬレセプターに対するアゴニスティック抗体が抗ＤＲ５抗体であり、上記補助刺激分子に対するアゴニスティック抗体が抗ＣＤ４０抗体および抗４−１ＢＢ抗体である、（３３）に記載の癌治療用キット。
（３５）さらに、抑制性シグナルを伝えるレセプターに対するアンタゴニスティック抗体を含有する、（３２）〜（３４）のいずれかに記載の癌治療用キット。
（３６）上記抑制性シグナルを伝えるレセプターに対するアンタゴニスティック抗体が、抗ＣＴＬＡ−４抗体である、（３５）に記載の癌治療用キット。
【発明の効果】
【００１６】
本発明によれば、より高い治療効果を奏する癌の治療方法が提供される。本発明によれば、腫瘍増殖が進行した段階であっても腫瘍拒絶を誘導し得る。本発明は、高率で癌を根絶し得る新たな癌治療法を提供する。
【発明を実施するための最良の形態】
【００１７】
本発明者らは、抗ＤＲ５抗体のようなＴＮＦ関連細胞死誘導因子と、補助刺激分子に対するアゴニスティック抗体である抗ＣＤ４０抗体および抗４−１ＢＢ抗体のようなリンパ球活性化因子とを被験体に併用投与すると、癌抗原特異的な細胞障害性Ｔ細胞（ＣＴＬ）の誘導をより効率化することができ、予想外に高い治療効果が得られることを見出して、本発明を完成した。すなわち、本発明の癌治療法は、ＴＮＦ関連細胞死誘導因子による細胞死誘導療法と、リンパ球活性化因子によるリンパ球活性化療法とを併用することを特徴とする。
【００１８】
（ＴＮＦ関連細胞死誘導因子）
本明細書中、「ＴＮＦ関連細胞死誘導因子」は、腫瘍壊死因子（ＴＮＦ（ｔｕｍｏｒ ｎｅｃｒｏｓｉｓ ｆａｃｔｏｒ））ファミリーに属する細胞死誘導サイトカインのレセプターに特異的に結合して、腫瘍細胞の細胞死（またはアポトーシス）を誘導し得る分子のことをいうものとする。
【００１９】
ＴＮＦ−α、リンフォトキシン（ｌｙｍｐｈｏｔｏｘｉｎ）−α（またはＴＮＦ−β）、Ｆａｓリガンド（以下、ＦａｓＬと略す）、ＴＲＡＩＬ（またはＡｐｏ−２リガンド）、Ａｐｏ−３リガンド（以下、Ａｐｏ３Ｌと略す）などのＴＮＦファミリーに属する細胞死誘導サイトカイン（デス因子）のレセプターとして、それぞれ、ＴＮＦレセプターＩ型（以下、ＴＮＦＲ−Ｉと略す）、Ｆａｓ、ＤＲ（ｄｅａｔｈ ｒｅｃｅｐｔｏｒ）３、ＤＲ４、ＤＲ５などが知られている。
【００２０】
これらデス因子のレセプターは、ＴＮＦレセプターファミリーに属し、互いに構造的に類似しており、細胞外領域にシステイン残基に富むドメインの繰り返し構造と、細胞内領域にデスドメインとよばれるアポトーシスの誘導に必須の構造とを有する。また、ＤＲ６とよばれるデス因子も最近クローニングされ（Ｐａｎ ＧＨ ｅｔ ａｌ．，ＦＥＢＳ Ｌｅｔｔｅｒｓ ４３１（３）：３５１−３５６（１９９８）、アポトーシスの誘導、免疫系におけるアレルギーの発症に関与するＴｈバランスの制御、免疫疾患に関与するＢ細胞の活性化、および増殖の制御に重要であることがわかっている（Ｚｈａｏ Ｈ ｅｔ ａｌ．， Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ １９４（１０）： １４４１−８ （２００１）；大矢和彦 他３名、ＭＢＬ研究用試薬雑誌 第２巻 第１号 １−９頁 平成１４年８月）。ＤＲ６の配列に関連する情報は、例えば、ＧｅｎＢａｎｋ Ａｃｃｅｓｓｉｏｎ Ｎｏ．ＡＦ０６８８６８、ＡＦ３２２０６９等で公のデータベースに登録された配列情報として得られる。
【００２１】
ＴＮＦＲ−１（Ｇｏｏｄｗｉｎ ｅｔ ａｌ．， Ｍｏｌ． Ｃｅｌｌ． Ｂｉｏｌ． １１ （６）， ３０２０−３０２６ （１９９１））には、ＴＮＦ−αやｌｙｍｐｈｏｔｏｘｉｎ−αが結合する。ＴＮＦＲ−１の配列に関連する情報は、例えば、ＧｅｎＢａｎｋ Ａｃｃｅｓｓｉｏｎ Ｎｏ．Ｍ５９３７８等で公のデータベースに登録された配列情報として得られる。
【００２２】
Ｆａｓ（ＣＤ９５またはＡｐｏ−Ｉとも呼ばれる）は、ＴＮＦレセプタースーパーファミリーに属するレセプターであり、Ｆａｓリガンド（以下、ＦａｓＬと略す）が結合する。Ｆａｓは、ＦａｓＬを介するアポトーシス誘導に関与している（例えば、Ｂｅｈｒｍａｎｎ ｅｔ ａｌ．，Ｅｕｒｏｐｅａｎ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ ２４（１２）：３０５７−６２（１９９４））。
【００２３】
ＤＲ４およびＤＲ５には、ＴＲＡＩＬ（Ａｐｏ２Ｌとしても知られる）が結合する。ＴＲＡＩＬは、形質転換した細胞において迅速なカスパーゼ依存性のアポトーシスを誘導し得るが、正常な細胞においてはほとんど誘導し得ない。ＤＲ４とＤＲ５は、ＴＲＡＩＬのアポトーシス誘導シグナルを下流に伝える。これらのリガンドやレセプターは、さまざまな組織に広く分布しており、また特定の癌細胞や培養細胞株もＴＲＡＩＬに感受性を示す（例えば、Ｂｕｒｎｓ ａｎｄ Ｅｌ−Ｄｅｉｒｙ， Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ ２７６（４１）：３７８７９−８６（２００１）；Ｗｉｌｅｙ ｅｔ ａｌ．， Ｉｍｍｕｎｉｔｙ ３（６）：６７３−６８２（１９９５）； Ｐｉｔｔｉ ｅｔ ａｌ， Ｊ． Ｂｉｏｌ． Ｃｈｅｍ． ２７１（２２） １２６８７−１２６９０ （１９９６））。ＤＲ４およびＤＲ５の配列に関連する情報は、例えば、ＧｅｎＢａｎｋ Ａｃｃｅｓｓｉｏｎ Ｎｏ．ＢＤ０５６８１０等、およびＧｅｎＢａｎｋ Ａｃｃｅｓｓｉｏｎ Ｎｏ．ＡＢ０５４００４、ＡＦ０１２５３５、ＡＦ０１６２６８等で公のデータベースに登録された配列情報として得られる。
【００２４】
ＤＲ３には、Ａｐｏ３Ｌが結合する。Ａｐｏ３Ｌのデスレセプターとして発見されたＤＲ３は、構造的にも機能的にもＴＮＦＲ−Ｉと似ており、ＴＮＦＲ−Ｉと同様に核内転写因子κＢ（ｎｕｃｌｅａｒ ｆａｃｔｏｒκＢ）（以下、ＮＦκＢと略す）の活性化とアポトーシス誘導の両方のシグナルを伝達できる。ＴＮＦＲ−Ｉがさまざまな組織や細胞で発現しているのに対し、ＤＲ３は脾臓、胸腺、末梢血細胞と活性化したＴ細胞にその発現が限定されている。逆にＤＲ３のリガンドであるＡｐｏ３Ｌは、多くの組織、細胞でその発現が認められている。ＤＲ３については、以下の文献が参照される。Ｃｈｉｎｎａｉｙａｎ ｅｔ ａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅ ２７４（５２８９）： ９９０−９９２ （１９９６）； Ｗａｎｇ ｅｔ ａｌ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｅｌｌｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ ２１（１０）： ３４５１−６１ （２００１）。ＤＲ３の配列に関連する情報は、例えば、ＧｅｎＢａｎｋ Ａｃｃｅｓｓｉｏｎ Ｎｏ．ＡＢ０５１８５０、ＡＢ０５１８５１、ＡＦ０２６０７０、ＡＦ０２６０７１、Ｕ７２７６３等で公のデータベースに登録された配列情報として得られる。
【００２５】
本発明において使用する「ＴＮＦ関連細胞死誘導因子」は、上記のようなＴＮＦファミリーに属する細胞死誘導サイトカインのレセプターに特異的に結合して、腫瘍細胞のアポトーシスを誘導し得る分子であり、好適には、ＴＮＦレセプターＩ型（ＴＮＦＲ−Ｉ）、Ｆａｓ、ＤＲ３、ＤＲ４、ＤＲ５、ＤＲ６等に対するアゴニスティック抗体（それぞれ、本明細書中で抗ＴＮＦＲ−Ｉ抗体、抗Ｆａｓ抗体、抗ＤＲ３抗体、抗ＤＲ４抗体、抗ＤＲ５抗体、抗ＤＲ６抗体等と呼ぶ）が使用され得る。とりわけ、ＴＲＡＩＬレセプターであるＤＲ４およびＤＲ５に対するアゴニスティック抗体（抗ＤＲ４抗体および抗ＤＲ５抗体）がより好適に使用され得、そして抗ＤＲ５抗体が最も好適に使用される。
【００２６】
また、ヒトデスレセプターに対する抗体が好ましいが、これに限定されず、他の哺乳動物、例えば、マウス、ラット、霊長類、ウマ、ブタ、ウサギ、家禽などを含む種々の種に由来するデスレセプターに対する抗体も本発明において使用し得る。
【００２７】
抗ＤＲ５抗体は、自然免疫系に属する細胞上のＦｃレセプターに結合し、腫瘍細胞にアポトーシスを誘導すると同時に、活性化Ｆｃレセプターを介して抗体の結合した抗原提示細胞を活性化して腫瘍抗原のＴ細胞への提示を促進し、それにより誘導されたＴＲＡＩＬ以外の細胞障害性機構を有する腫瘍特異的なＣＴＬにより、ＴＲＡＩＬ耐性の変異株に対しても抗腫瘍効果を発揮する。
【００２８】
本発明においては、さらにリンパ球活性化剤を投与して、免疫機構を活性化し、最終的にはＴＲＡＩＬ耐性の変異株を含めて腫瘍を根絶する。本発明の治療法は、自然免疫と獲得免疫とを同時に活性化する新たな抗腫瘍抗体療法として非常に有望である。
【００２９】
上記抗体の各々は、モノクローナル抗体であることが好ましく、それらは当業者に周知の供給業者（例えば、ＢＤ． Ｐｈａｒｍｉｎｇｅｎ、ｅＢｉｏｓｃｉｅｎｃｅ等）から市販されているか、またはハイブリドーマ法などの周知技術を用いて作製し得る。
【００３０】
本明細書中、「細胞死誘導療法」とは、上記ＴＮＦ関連細胞死誘導因子を被験体に投与することを通じて癌を治療する方法のことをいうものとする。また、「治療」または「療法」とは、治療的療法、予防的療法、および防御的療法をいうものとする。
【００３１】
本明細書中、「細胞死誘導剤」とは、癌細胞のアポトーシスを誘導する薬剤をいい、典型的には、ＴＮＦ関連細胞死誘導因子を含有する薬剤である。
【００３２】
本明細書中、「被験体」は、脊椎動物、好ましくは哺乳動物、さらに好ましくはヒトである。哺乳動物には、ネズミ科の動物、類人猿、ヒト、飼育動物、スポーツ用動物およびペット類を含むが、これらに限定されない。また、本明細書中、「患者」は、ヒトであるものとする。
【００３３】
（リンパ球活性化因子）
本明細書中、「リンパ球活性化因子」とは、補助刺激分子に特異的に結合して、癌抗原特異的な細胞障害性Ｔ細胞を活性化または増強し得る分子をいうものとする。
【００３４】
本明細書中、「補助刺激分子」という場合、Ｔ細胞表面のＴ細胞受容体（Ｔ ｃｅｌｌ ｒｅｃｅｐｔｏｒ：ＴＣＲ）により結合したペプチド／ＭＨＣ複合体と一緒に作用した場合、ペプチドを結合しているＴ細胞の活性化を達成する補助刺激作用を誘導するいかなる単一のシグナル分子（補助シグナル分子）または複数の補助シグナル分子の組み合わせをも包含するものとする。したがって、この用語は、抗原提示細胞（ａｎｔｉｇｅｎ ｐｒｅｓｅｎｔｉｎｇ ｃｅｌｌ；ＡＰＣ）などの抗原提示マトリックス上の他の補助刺激分子（１以上）、そのフラグメント（単独もしくは他の分子（１以上）と複合体形成したもの、または融合タンパク質の一部として）など、Ｔ細胞表面にあるＴＣＲがペプチドを特異的に結合したときにペプチド／ＭＨＣ複合体と一緒に同族リガンドに結合してＴ細胞を活性化するものを包含する。
【００３５】
一般に、Ｔ細胞の十分な活性化のためには、２つの独立したシグナルが必要であることが知られている。１つはＴＣＲが抗原提示細胞上の主要組織適合抗原複合体（ｍａｊｏｒ ｈｉｓｔｏｃｏｍｐａｔｉｂｉｌｉｔｙ ｃｏｍｐｌｅｘ；ＭＨＣ）に結合したペプチドを認識し伝達されるシグナルである。もう一つは、補助刺激分子によって伝達される補助シグナルであり、この補助シグナルはＴ細胞の十分な活性化、細胞増殖の維持、細胞死の回避、エフェクターＴ細胞、メモリーＴ細胞の分化の誘導に重要である。
【００３６】
現在までに、この補助シグナルを誘導する多くの分子が見つかっており、例えば、Ｔ細胞上のＣＤ２８分子は、ＡＰＣ上のＢ７分子群（Ｂ７−１，Ｂ７−２）との相互作用により、Ｔ細胞に活性化シグナルを伝達し、多くのサイトカインの産生を誘導するなど、Ｔ細胞の増殖に決定的な役割を果している。ＣＤ２８ファミリーに属する他の補助シグナル分子としては、例えば、ＩＣＯＳが知られている。また、ＣＤ２８と同様にＢ７分子群と結合し、ＣＤ２８とは対照的に、Ｔ細胞の活性を抑制するレセプターとしてＣＴＬＡ−４が知られており、また同様に抑制性シグナルを伝えるＣＤ２８ファミリーに属するレセプターとしてＰＤ−１も知られている。
【００３７】
また、ＣＤ２８ファミリー以外にもＴＮＦレセプター（以下、ＴＮＦＲと略す）ファミリーに属するＯＸ４０、４−１ＢＢ、ＣＤ２７、ＣＤ４０、ＣＤ３０、ＨＶＥＭなどが補助シグナルを伝達する分子として知られている（例えば、Ｃｒｏｆｔ Ｍ，Ｎａｔ Ｒｅｖ Ｉｍｍｕｎｏｌ． ３：６０９−６２０，２００３、Ｓｍｉｔｈ ｅｔ ａｌ， Ｃｅｌｌ ７６ （６）：９５９−９６２ （１９９４）を参照）。これらの分子は、細胞内領域にデスドメインを有さないＴＮＦＲファミリーのメンバーであり、ＴＲＡＦ（ＴＮＦ ｒｅｃｅｐｔｏｒ−ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ ｆａｃｔｏｒ）にＴＲＡＦ結合モチーフを介して結合する。ＴＲＡＦは、ＴＮＦＲにリガンドが結合した場合、そのシグナルを細胞内に伝えるためのアダプター分子であり、ｃ−Ｊｕｎ ＮＨ2 ｔｅｒｍｉｎａｌ ｐｒｏｔｅｉｎ ｋｉｎａｓｅ（以下、ＪＮＫと略す）やＮＦκＢの活性化に関与している。
【００３８】
ＣＤ２８は、免疫グロブリンスーパーファミリーに属する。ＣＤ２８は、Ｔ細胞上に恒常的に発現している分子であり、ＴＣＲによって抗原を認識したナイーブＴ細胞に、ＣＤ２８から刺激を受けると、ＣＤ２８はＴ細胞に強力な補助シグナルを伝達する。その結果、ＩＬ−２の産生とＩＬ−２レセプターの発現が誘導され、細胞周期の回転が始まる。また、ＣＤ２８シグナルはＢｃｌ−ＸＬの発現を誘導することでＴ細胞のアポトーシスを抑制する（Ｂｏｕｓｓｉｏｔｉｓ ｅｔ ａｌ．，Ｉｍｍｕｎｏｌ Ｒｅｖ １５３，５，１９９６；Ｌｅｎｓｃｈｏｗ ｅｔ ａｌ．，Ａｎｎｕ Ｒｅｖ ｉｍｍｕｎｏｌ １４，２３３，１９９６）。ＣＤ２８の配列に関連する情報は、例えば、ＧｅｎＢａｎｋ Ａｃｃｅｓｓｉｏｎ Ｎｏ．ＡＦ４１１０５７、ＢＣ０６４０５８等で公のデータベースに登録された配列情報として得られる。
【００３９】
ＣＴＬＡ−４は、ＣＤ２８と類似の分子でより強い結合力を有し、ＣＤ２８と拮抗してＢ７ファミリーからの活性化シグナルを抑制するレセプターとして報告されており、このＣＴＬＡ−４へのＢ７ファミリー分子の結合の抑制が、ＣＤ２８を介したＴ細胞の活性化をより効率良くすることが知られている（Ｃｈｅｎ， Ｎａｔ． Ｒｅｖ． Ｉｍｍｕｎｏｌ． ４（５）３３６−３４７（２００４）， Ｅｇｅｎ ｅｔ ａｌ．， Ｎａｔ． Ｉｍｍｕｎｏｌ ３（７） ６１１−６１８（２００２））。ＣＴＬＡ−４の配列に関連する情報は、たとえば、ＧｅｎＢａｎｋ Ａｃｃｅｓｓｉｏｎ Ｎｏ．ＮＭ００５２１４、Ｌ１５００６、Ｘ０５７１９等の公のデータベースに登録された配列情報として得られる。
【００４０】
ＰＤ−１は、ＣＤ２８ファミリーに属し、ＰＤＬ−１およびＢ７−ＤＣからの抑制性シグナルを媒介するレセプターとして知られており、この配列に関連する情報は、たとえば、ＧｅｎＢａｎｋ Ａｃｃｅｓｓｉｏｎ Ｎｏ．Ｌ２７４４０、Ｅ０６０６７等の公のデータベースに登録された配列情報として得られる（Ｏｋａｚａｋｉ ｅｔ ａｌ．， Ｃｕｒｒ． Ｏｐｉｎ． Ｉｍｍｕｎｏｌ． １４ （６）７７９−７８２（２００２）。
【００４１】
ＩＣＯＳは、ＣＤ２８とは異なり、ナイーブＴ細胞ではほとんど発現が認められず、活性化に伴って発現が上昇する。ＩＣＯＳは、Ｂ７−１、Ｂ７−２とは結合せず、Ｂ７ｈと結合すると考えられている。ＩＣＯＳは、ＣＤ２８と同様にＴ細胞に補助シグナルを伝達することが示されている。抗ＣＤ３抗体の存在下で抗ＩＣＯＳ抗体またはＢ７ｈ−ＩｇによってＩＣＯＳを架橋すると、抗ＣＤ３抗体単独に比べ増殖反応の増強が誘導される。ＩＣＯＳはＩＬ−２の産生をほとんど誘導せず、ＩＬ−４、ＩＬ−５、ＩＬ−１０、ＩＦＮ−ＩＦＮ−γ、ＴＮＦ−αの産生は増強することから、ＩＣＯＳはＴ細胞の機能分化やエフェクター機能の発現に主に働いていると考えられている（Ｓｈａｒｐｅ ｅｔ ａｌ．， Ｒｅｖ Ｉｍｍｕｎｏｌ ２，１１６，２００２）。ＩＣＯＳの配列に関連する情報は、例えば、ＧｅｎＢａｎｋ Ａｃｃｅｓｓｉｏｎ Ｎｏ．ＡＪ２７７８３２、ＡＦ４１１０５８、ＡＦ４１１０５９、ＡＬ６４５７４４等で公のデータベースに登録された配列情報として得られる。
【００４２】
ＯＸ４０（ＣＤ１３４とも呼ばれる）は、ナイーブＴ細胞では発現しておらず、活性化したＴ細胞で発現が認められる。ＴＣＲ刺激でその発現が誘導され、ＣＤ２８刺激によってさらに増強される。ＯＸ４０Ｌの発現も休止期の血球系細胞には認められず、活性化Ｂ細胞や活性化樹状細胞、血管内皮細胞に発現がみられる（Ｗａｔｔｓ ａｎｄ ＤｅＢｅｎｅｄｅｔｔｅ，Ｃｕｒｒ Ｏｐｉｎ Ｉｍｍｕｎｏｌ １１，２８６，１９９９）。ＯＸ４０は、細胞内領域にＴＲＡＦファミリー分子を結合することで下流へとシグナルを伝達する。ＯＸ４０は、ＴＲＡＦ２、ＴＲＡＦ３、ＴＲＡＦ５と結合し、ＪＮＫとＮＦκＢの活性化を誘導する（Ａｒｃｈ ａｎｄ Ｔｈｏｍｐｓｏｎ，Ｍｏｌ Ｃｅｌｌ Ｂｉｏｌ １８，５５８，１９９８；Ｋａｗａｍａｔａ ｅｔ ａｌ．，Ｊ Ｂｉｏｌ Ｃｈｅｍ ２ ７３，５８０８，１９９８）。ヒトＯＸ４０のｃＤＮＡの構造は、Ｌａｔｚａ Ｕ ｅｔ ａｌ．，Ｅｕｒｏｐｅａｎ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ ２４：６７７−６８３，１９９４に記載されている。ＯＸ４０の配列に関連する情報は、例えば、ＧｅｎＢａｎｋ Ａｃｃｅｓｓｉｏｎ Ｎｏ．ＡＪ２７７１５１、Ｘ８５２１４等で公のデータベースに登録された配列情報として得られる。
【００４３】
４−１ＢＢ（ＣＤ１３７とも呼ばれる）は、活性化したＴ細胞やＮＫ細胞に発現が見られ、Ｔ細胞（特にＣＤ８+Ｔ細胞）の活性化ならびにそのサバイバルを延長させるとされ、またＮＫ細胞やＤＣなどの活性化にも関与していると報告されている（Ｌｉｎｄａ Ｄ， ｅｔ ａｌ．，Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ １６８：３７５５−３７６２，２００２； Ｍｅｌｅｒｏ Ｉ， ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔ Ｍｅｄ． ３：６８２−６８５，１９９７）。また、リガンドである４−１ＢＢＬは、活性化Ｂ細胞、成熟樹状細胞、活性化マクロファージなどで発現する（Ｗａｔｔｓ ａｎｄ ＤｅＢｅｎｅｄｅｔｔｅ、前出）。４−１ＢＢは、ＣＤ２８と同様にＩＬ−２の産生を増強する数少ない補助シグナル分子である。４−１ＢＢは、細胞内領域にＴＲＡＦ１、ＴＲＡＦ２、ＴＲＡＦ３が結合し、ＪＮＫとＮＦκＢの活性化を誘導する（Ａｒｃｈ ａｎｄ Ｔｈｏｍｐｓｏｎ，前出；Ｓａｕｌｌｉ ｅｔ ａｌ．，Ｊ Ｅｘｐ Ｍｅｄ １８７，１８４９，１９９８）。４−１ＢＢの配列に関連する情報は、例えば、ＧｅｎＢａｎｋ Ａｃｃｅｓｓｉｏｎ Ｎｏ．ＢＤ２５０４１７、Ｕ０３３９７、Ｕ０２５６７、Ｊ０４４９２等で公のデータベースに登録された配列情報として得られる。
【００４４】
ＣＤ２７は、ナイーブＴ細胞に恒常的に発現し、活性化によってその発現量は大きく上昇する。また、活性化Ｂ細胞にも発現が認められる。リガンドであるＣＤ７０は活性化したＴ細胞とＢ細胞に一時的に発現する。また、ＣＤ２７を介する補助シグナルは細胞障害性Ｔ細胞の活性化を誘導する（Ｌｅｎｓ ｅｔ ａｌ．，Ｓｅｍｉｎ Ｉｍｍｕｎｏｌ １０，４９１，１９９８）。細胞内領域にはＴＲＡＦ２とＴＲＡＦ３、ＴＲＡＦ５が結合し、その結果、ＪＮＫとＮＦκＢの活性化が誘導される（Ａｋｉｂａ ｅｔ ａｌ．，Ｊ Ｂｉｏｌ Ｃｈｅｍ ２７３，１３３ ５３，１９９８；Ｙａｍａｍｏｔｏ ｅｔ ａｌ．，Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ １６１，４７５３，１９９８）。ＣＤ２７の配列に関連する情報は、例えば、ＧｅｎＢａｎｋ Ａｃｃｅｓｓｉｏｎ Ｎｏ．Ｍ６３９２８、Ｌ２４４９３、Ｌ２４４９４等で公のデータベースに登録された情報として得られる。
【００４５】
ＣＤ４０は、Ｂ細胞、樹状細胞、マクロファージなどの抗原提示細胞に主に発現し、ＣＤ４０を介したシグナルでＩＬ−１２の産生が誘導され、引き続くＩＦＮ−γ産生増強やＩＬ−１０の産生抑制により、Ｔｈ１優位の細胞免疫応答を惹起し、その結果、癌抗原特異的な細胞障害性Ｔ細胞（ＣＴＬ）の誘導を補助し、腫瘍拒絶に導く作用があるとされている（Ｆｒｅｎｃｈ ＲＲ， ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔ Ｍｅｄ． ５：５４８−５５３，１９９９）。ＣＤ４０の下流へのシグナル伝達因子としては、ＴＲＡＦ５およびＴＲＡＦ６が知られている（例えば、井上純一郎、「ＴＲＡＦ６によるサイトカインシグナルの伝達メカニズム」Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ Ｖｏｌ．３９ 免疫２００３ （２００２）などを参照）。ＣＤ４０の配列に関連する情報は、例えば、ＧｅｎＢａｎｋ Ａｃｃｅｓｓｉｏｎ Ｎｏ．ＡＨ００１８７７，Ｍ８３３１２等で公のデータベースに登録された配列情報として得られる。
【００４６】
ＣＤ３０（ＣＤ１５３とも呼ばれる）は、ホジキンリンパ腫のマーカー蛋白質として知られ、主に、活性化Ｔ細胞、Ｂ細胞、およびＲｅｅｄ Ｓｔｅｒｎｂｅｒｇ細胞において発現し、ＣＤ１５３（ＣＤ３０リガンド）と結合する。Ｉｎ ｖｉｔｒｏの研究では、ＣＤ３０はさまざまな活性化、分化ないしはアポトーシスを仲介していることがわかっている。ＣＤ３０は、ＴＲＡＦ２および、ＴＲＡＦ５と結合し、ＮＦ−κＢおよびＪＮＫ／ｐ３８ ＭＡＰＫを活性化することが示されている（Ａｉｚａｗａ ｅｔ ａｌ．，Ｊ Ｂｉｏｌ Ｃｈｅｍ． ２７２（４）：２０４２−５；１９９７）。ＣＤ３０の配列に関連する情報は、例えば、ＧｅｎＢａｎｋ Ａｃｃｅｓｓｉｏｎ Ｎｏ．ＡＪ２７２０２９、ＡＪ２８９１５９、ＡＪ３０８５２１、ＡＪ３０８５２２、ＡＪ４０９０１１、ＡＪ４０９０１２等で公のデータベースに登録された配列情報として得られる。
【００４７】
ＨＶＥＭは、２つの細胞リガンドである分泌されたＬＴ−α（ＴＮＦ−β）およびＬＩＧＨＴに結合することが示されている（Ｍａｕｒｉ ｅｔ ａｌ．，Ｉｍｍｕｎｉｔｙ ８（１）：２１−３０；１９９８）。また、ＨＶＥＭの細胞内領域は、ＴＲＡＦ−１、ＴＲＡＦ−２、ＴＲＡＦ−３、およびＴＲＡＦ−５と結合しており、ＨＶＥＭが免疫反応を活性化するシグナル伝達経路とリンクしていることが示されている（Ｍａｒｓｔｅｒｓ ｅｔ ａｌ．，Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ ２７２（２２）：１４０２９−１４０２３２；１９９７）。この相互作用は、ＮＦκＢおよびＡＰ−１を活性化する。ＨＶＥＭの配列に関連する情報は、例えば、ＧｅｎＢａｎｋ Ａｃｃｅｓｓｉｏｎ Ｎｏ．ＡＹ４６６１１１、ＢＤ０９１６９６等で公のデータベースに登録された配列情報として得られる。
【００４８】
本発明において使用する「リンパ球活性化因子」は、代表的には、上記のような補助刺激分子に特異的に結合して癌抗原特異的な細胞障害性Ｔ細胞を活性化する単一の分子または複数の分子の組み合わせである。好適には、本発明において使用する「リンパ球活性化因子」は、ＣＤ２８ファミリーまたはＴＮＦＲファミリーに属する補助シグナル分子に対するアゴニスティック抗体（例えば、抗ＣＤ２８抗体、抗ＩＣＯＳ抗体、抗ＯＸ４０抗体、抗４−１ＢＢ抗体、抗ＣＤ２７抗体、抗ＣＤ４０抗体、抗ＣＤ３０抗体、抗ＨＶＥＭ抗体など）または補助シグナルを抑制するＣＤ２８ファミリーに属する分子に対するアンタゴニスティック抗体（例えば抗ＣＴＬＡ−４抗体、抗ＰＤ−１抗体など）であり、とりわけ、補助シグナル分子に対するアゴニスティック抗体としては抗４−１ＢＢ抗体または抗体ＣＤ４０抗体が、そして補助シグナルを抑制するＣＤ２８ファミリーに属する分子に対するアンタゴニスティック抗体としては抗ＣＴＬＡ−４抗体が好ましく、抗４−１ＢＢ抗体と抗ＣＤ４０抗体との組み合わせまたは抗４−１ＢＢ抗体と抗ＣＤ４０抗体と抗ＣＴＬＡ−４抗体との組み合わせが最も好ましい。
【００４９】
また、ヒトの補助刺激分子に対する抗体が好ましいが、これに限定されず、他の哺乳動物、例えば、マウス、ラット、霊長類、ウマ、ブタ、ウサギ、家禽などを含む種々の種に由来する補助刺激因子に対する抗体も本発明において使用し得る。
【００５０】
上記の各抗体はモノクローナル抗体であることが好ましく、それらは当業者に周知の供給業者（例えば、ＢＤ Ｐｈｒａｍｉｎｇｅｎ、ｅＢｉｏｓｃｉｅｎｃｅ等）から市販されているか、または当業者に周知の方法（例えば、ハイブリドーマ法）によって作製され得る。
【００５１】
本明細書中、「リンパ球活性化療法」とは、上記リンパ球活性化因子を被験体に投与することによって癌を治療する方法をいうものとする。また、「リンパ球活性化剤」とは、リンパ球活性化因子を含有する薬剤をいう。
【００５２】
本明細書中、「癌」、「癌性」または「悪性」という用語は、典型的には調節されない細胞成長を特徴とする、哺乳動物における生理学的状態をいうために用いる。癌の例には、腺癌を含む癌腫、リンパ腫、芽細胞腫、メラノーマ、肉腫、および白血病が含まれるが、これらに限定されない。このような癌のより特定の例には、扁平上皮細胞癌、小細胞肺癌、非小細胞肺癌、胃腸癌、ホドキンおよび非ホドキンリンパ腫、リンパ腫、膵臓癌、神経膠芽腫、子宮頚癌、卵巣癌、肝癌および肝細胞種などの肝臓癌、膀胱癌、乳癌、大腸癌、膠芽細胞腫、子宮内膜癌、唾液腺癌、腎細胞癌およびウィルム腫瘍などの腎臓癌、基底細胞癌種、メラノーマ、前立腺癌、産卵口癌、甲状腺癌、精巣癌、食道癌および様々な種類の頭部および頸部の癌が含まれる。
【００５３】
本明細書中、「化学治療剤」という用語は、当該分野で通常使用される意味で使用され、癌の治療に有用な化合物であって、細胞機能を阻害もしくは抑制、および／または細胞の崩壊を引き起こすものを指す。化学治療剤の例には、アドリアマイシン、ドキソルビシン、エピルビシン、５−フルオロウラシル、シトシンアラビノシド（「Ａｒａ−Ｃ」）、シクロホスファミド、チオテパ、ブスルファン、シトキシン、タキソイド類、例えばパクリタキセル（タキソール， Ｂｒｉｓｔｏｌ−Ｍｙｅｒｓ Ｓｑｕｉｂｂ Ｏｎｃｏｌｏｇｙ， Ｐｒｉｎｃｅｔｏｎ， ＮＪ社製）およびドキセタキセル（タキソテール， Ｒｈｏｎｅ−Ｐｏｕｌｅｎｃ Ｒｏｒｅｒ， Ａｎｔｏｎｙ， Ｒｒａｎｃｅ社製）、トキソテール、メトトレキセート、シスプラチン、メルファラン、ＣＰＴ−１１、ビンブラスチン、ブレオマイシン、エトポシド、イホスファミド、マイトマイシンＣ、ミトキサントロン、ビンクリスチン、ビノレルビン、カルボプラチン、テニポシド、ダウノマイシン、カルミノマイシン、アミノプテリン、ダクチノマイシン、マイトマイシン、エスペラミシン（米国特許第４６７５１８７号参照）、メルファラン、および他の関連したナイトロジェンマスタードが含まれる。またこの定義には、腫瘍に対するホルモン作用を調節または阻害するように働くホルモン剤、例えばタモキシフェンおよびオナプリストーン（ｏｎａｐｒｉｓｔｏｎｅ）も含まれる。
【００５４】
本明細書中、「放射線療法」という用語は、当該分野で通常使用される意味で使用され、放射性アイソトープ（例えば、Ｉ131、Ｉ125、Ｙ90、およびＲｅ186）を使用して、細胞機能を阻害もしくは抑制するか、および／または細胞の崩壊を引き起こすことによって癌を治療する療法をいうものとする。
【００５５】
（抗体）
本発明に使用され得る抗体は、ポリクローナル抗体、モノクローナル抗体、多重特異的抗体、ヒト抗体、ヒト化抗体またはキメラ抗体、単鎖抗体、Ｆａｂフラグメント、Ｆ（ａｂ’）フラグメント、Ｆａｂ発現ライブラリーによって産生されるフラグメント、抗イディオタイプ（抗Ｉｄ）抗体、および上記のいずれかのエピトープ結合フラグメントを含むが、これらに限定されない。好ましくは、モノクローナル抗体が本発明において使用される。
【００５６】
本明細書中、ある分子に対する「アゴニスティック抗体」という場合、その分子に特異的に結合し、その所定の生物学的活性を誘導する能力を活性化または増大させる抗体のことを意味する。例えば、ＤＲ５に対するアゴニスティック抗体は、ＤＲ５に結合した場合に、カスパーゼ依存性のアポトーシスを誘導する能力を活性化または増大させるＤＲ５に対する抗体である。ここで、カスパーゼ依存性のアポトーシスを誘導する能力は、ＴＲＡＩＬ−ＤＲ５というレセプター−リガンド対が形成された際に発揮されるＤＲ５の本来の生物学的活性に対応する。これに対してその分子の所定の生物学的活性を誘導する能力を減少させる抗体を「アンタゴニスティック抗体」とよぶ。本発明に使用する特定の分子に対するアゴニスティック抗体またはアンタゴニスティック抗体は、モノクローナル抗体であることが好ましく、それらは当業者に周知の供給業者（例えば、ＢＤ Ｐｈｒａｍｉｎｇｅｎ、ｅＢｉｏｓｃｉｅｎｃｅ等）から市販により入手し得るか、または当該分野で周知の技術により作製し、同定することができる。
【００５７】
本明細書中、「抗体」とは、免疫グロブリン分子および免疫グロリン分子の免疫学的に活性な部分、すなわち、免疫特異的に抗原に結合する抗原結合部位を含む分子をいうものとする。本発明の免疫グロブリン分子は、免疫グロブリン分子の任意の型（例えば、ＩｇＧ、ＩｇＥ、ＩｇＭ、ＩｇＤ、ＩｇＡ、およびＩｇＹ）、任意のクラス（例えば、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＡ１およびＩｇＡ２）または免疫グロブリン分子のサブクラスであり得る。
【００５８】
最も好ましくは、抗体は、ヒト抗原結合抗体フラグメントであり、これには、Ｆａｂ、Ｆａｂ’およびＦ（ａｂ’）2、Ｆｄ、単鎖Ｆｖｓ（ｓｃＦｖ）、単鎖抗体、ジスルフィド結合Ｆｖｓ（ｓｄＦｖ）ならびにＶLまたはＶHドメインのいずれかを含むフラグメントが挙げられるがこれらに限定されない。単鎖抗体を含む抗原結合抗体フラグメントは、可変領域を単独で、または以下に列挙するものの全体もしくは部分と組み合わせて含み得る：ヒンジ領域、ＣＨ１ドメイン、ＣＨ２ドメインおよびＣＨ３ドメイン。また、可変領域とヒンジ領域、ＣＨ１ドメイン、ＣＨ２ドメインおよびＣＨ３ドメインとの任意の組み合わせもまた含む抗原結合フラグメントもまた本発明において使用され得る。本発明に使用する抗体は、鳥類および哺乳動物を含む任意の動物起源由来であり得る。好ましくは、この抗体は、ヒト、ネズミ、ロバ、シップウサギ（ｓｈｉｐ ｒａｂｂｉｔ）、ヤギ、モルモット、ラクダ、ウマ、またはニワトリ由来である。
【００５９】
本発明に使用する抗体は、一重特異的、二重特異的、三重特異的またはより多くの多重特異性の抗体であり得る。多重特異的な抗体は、目的のポリペプチドの異なるエピトープに対して特異的であり得るか、または目的のポリペプチドおよび異種のエピトープ（例えば、異種ポリペプチドもしくは固体支持体物質）の両方に特異的であり得る。例えば、ＰＣＴ公開ＷＯ ９３／１７７１５；同ＷＯ ９２／０８８０２；同ＷＯ ９１／００３６０；同ＷＯ ９２／０５７９３；Ｔｕｔｔら、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１４７：６０−６９（１９９１）；米国特許第４，４７４，８９３号、同第４，７１４，６８１号、同第４，９２５，６４８号、同第５，５７３，９２０号、同第５，６０１，８１９号；Ｋｏｓｔｅｌｎｙら、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１４８：１５４７−１５５３（１９９２）を参照のこと。
【００６０】
本発明に使用する抗体は、当業者に周知の供給業者から市販されているものを使用し得るが、当該分野で公知の任意の適切な方法によっても産生され得る。例えば、目的の抗原に対するポリクローナル抗体は、当該分野で周知の種々の手順によって産生され得る。例えば、目的のポリペプチドは、種々の宿主動物（ウサギ、マウス、ラットなどを含むがこれらに限定されない）に投与されて、抗原に対して特異的なポリクローナル抗体を含む血清の産生を誘導し得る。種々のアジュバントが、宿主種に依存して、免疫学的応答を増加させるために使用され得、そしてこれにはフロイント（完全および不完全）、水酸化アルミニウムのようなミネラルゲル、リゾレシチンのような界面活性物質、プルロニックポリオール、ポリアニオン、ペプチド、油エマルジョン、キーホールリンペットヘモシアニン、ジニトロフェノール、ならびにＢＣＧ（カルメット−ゲラン杆菌）およびｃｏｒｙｎｅｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｐａｒｖｕｍのような潜在的に有用なヒトアジュバントを含むが、これらに限定されない。このようなアジュバントはまた、当該分野で周知である。
【００６１】
モノクローナル抗体は、ハイブリドーマ、組換え、およびファージディスプレイ技術、またはそれらの組み合わせの使用を含む当該分野で公知の広範な種々の技術を用いて調製され得る。例えば、モノクローナル抗体は、当該分野で公知のハイブリドーマ技術を使用して産生され得、その方法の例としては、Ｈａｒｌｏｗら、Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ，（Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｐｒｅｓｓ，第２版、１９８８）；Ｈａｍｍｅｒｌｉｎｇら、Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ ａｎｄ Ｔ−Ｃｅｌｌ Ｈｙｂｒｉｄｏｍａｓ ５６３−６８１（Ｅｌｓｅｖｉｅｒ，Ｎ．Ｙ．１９８１）に記載の方法が参照される。本明細書中、用語「モノクローナル抗体」とは、ハイブリドーマ技術を通して生成された抗体に限定されない。用語「モノクローナル抗体」とは、任意の真核生物、原核生物、またはファージクローンを含む単一のクローンに由来する抗体をいい、そしてそれが生成される方法に由来する抗体ではない。従って、用語「モノクローナル抗体」は、ハイブリドーマ技術を通じて産生される抗体に限定されない。モノクローナル抗体は、ハイブリドーマおよび組換えならびにファージディスプレイ技術の使用を含む、当該分野で公知の広範な種々の技術を使用して調製され得る。
【００６２】
ハイブリドーマ技術を用いて特異的抗体を産生およびスクリーニングする方法は、当該分野で慣用的かつ周知である。手短に言えば、マウスが、目的のポリペプチドまたはそのようなペプチドを発現する細胞を用いて免疫され得る。一旦免疫応答が検出される（例えば、抗原に特異的な抗体がマウスの血清中に検出される）と、マウスの脾臓を収集しそして脾細胞を単離する。次に、その脾細胞を周知の技術によって任意の適切な骨髄腫細胞（例えば、ＡＴＣＣから入手可能な細胞株ＳＰ２０由来の細胞）に融合させる。ハイブリドーマを限界希釈によって選択およびクローン化する。次に、ハイブリドーマクローンを、目的のポリペプチドを結合し得る抗体を分泌する細胞について、当該分野で公知の方法によってアッセイする。一般的に高いレベルの抗体を含む腹水が、陽性ハイブリドーマクローンを用いてマウスを免疫させることによって、産生され得る。
【００６３】
従って、本発明に使用される抗体は、モノクローナル抗体ならびに本発明に使用する抗体を分泌するハイブリドーマ細胞を培養する工程を包含する方法によって産生され得る。ここで、好ましくは、このハイブリドーマは、骨髄腫細胞と本発明の抗原で免疫したマウスから単離された脾細胞とを融合させ、次いで目的のポリペプチドを結合し得る抗体を分泌するハイブリドーマクローンについて、融合物から生じるハイブリドーマをスクリーニングすることによって生成される。
【００６４】
特定のエピトープを認識する抗体フラグメントは、公知の技術によって生成され得る。例えば、本発明のＦａｂおよびＦ（ａｂ’）2フラグメントは、（Ｆａｂフラグメントを生成するために）パパインまたは（Ｆ（ａｂ’）2フラグメントを産生するために）ペプシンのような酵素を使用して、免疫グロブリン分子のタンパク質分解切断によって産生され得る。Ｆ（ａｂ’）2フラグメントは、可変領域、軽鎖定常領域および重鎖のＣＨ１ドメインを含む。
【００６５】
完全なヒト抗体は、ヒト患者の治療的処置に対して特に所望される。ヒト抗体は、ヒト免疫グロブリン配列に由来する抗体ライブラリーを用いた上記のファージディスプレイ法を含む当該分野で公知の種々の方法により作製され得る（米国特許第４，４４４，８８７号および同第４，７１６，１１１号；ならびにＰＣＴ公開ＷＯ ９８／４６６４５、ＷＯ ９８／５０４３３、ＷＯ ９８／２４８９３、ＷＯ ９８／１６６５４、ＷＯ ９６／３４０９６、ＷＯ ９６／３３７３５、およびＷＯ ９１／１０７４１もまた参照）。
【００６６】
（製剤）
本発明において使用されるＴＮＦ関連細胞死誘導因子およびリンパ球活性化因子は、好ましくは担体中で用いられる。適切な担体とそれらの製剤は、Ｏｓｌｏらにより編集された、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ， １６ｔｈ ｅｄ．， １９８０， Ｍａｃｋ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ Ｃｏ．に記載されている。典型的には、適量の製薬的に許容可能な塩が、製剤を等浸透圧にするために製剤において使用される。担体の例には、生理食塩水、リンガー液およびデキストロース液が含まれる。溶液のｐＨは、好ましくは約５から８、さらに好ましくは約７．４から７．８である。さらに担体には、抗体を含む固体疎水性ポリマーの半透性マトリックス等の徐放性製剤が含まれ、このマトリックスは、例えばフィルム状、リポソーム状またはマイクロ粒子状等の成形物の形態をしている。例えば投与される抗体の投与経路および濃度によっては、ある種の担体がより好ましくなることは、当業者には明らかである。担体は凍結乾燥または水溶液の形態であってもよい。
【００６７】
許容できる担体、賦形剤または安定剤は、用いる投与量および濃度ではレシピエントに対して無毒性であり、リン酸、クエン酸および他の有機酸等の緩衝液；アスコルビン酸およびメチオニンを含む抗酸化剤；防腐剤（オクタデシルジメチルベンジルアンモニウムクロリド；塩化ヘキサメトニウム；塩化ベンズアルコニウム；塩化ベンゼトニウム；フェノール、ブチルまたはベンジルアルコール；アルキルパラベン類、例えばメチルまたはプロピルパラベン；カテコール；レゾルシノール；シクロヘキサノール；３−ペンタノール；およびｍ−クレゾール）；低分子量（残基数１０個未満）ポリペプチド；血清アルブミン、ゼラチンまたは免疫グロブリン等のタンパク質；ポリビニルピロリドン等の親水性重合体；グリシン、グルタミン、アスパラギン、アルギニン、ヒスチジンまたはリシン等のアミノ酸；グルコース、マンノースまたはデキストリン等の単糖類、二糖類または他の炭水化物、ＥＤＴＡ等のキレート剤、スクロース、マンニトール、トレハロースまたはソルビトール等の糖類、ナトリウム等の塩形成対イオン；金属錯体（例えば、Ｚｎ−タンパク質錯体）；および／またはＴＷＥＥＮ（登録商標）、ＰＬＵＲＯＮＩＣＳＴＭまたはポリエチレングリコール（ＰＥＧ）等の非イオン性界面活性剤を含む。
【００６８】
また、製剤は、治療される特定の効能に必要な一以上の活性化合物、好ましくは互いに悪影響を及ぼさない相補的活性を有するものを含有し得る。また、本発明において使用されるＴＮＦ関連細胞死誘導因子またはリンパ球活性化因子は、例えばコアセルベーション法または界面重合により調製されたマイクロカプセル、例えばそれぞれヒドロキシメチルセルロースまたはゼラチン−マイクロカプセルおよびポリ−（メチルメタクリレート）マイクロカプセルに、コロイド状薬物送達系（例えば、リポソーム、アルブミンミクロスフィア、マイクロエマルション、ナノ粒子およびナノカプセル）またはマクロエマルションに捕捉することができる。このような技術はＲｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ， １６ｔｈ ｅｄｉｔｉｏｎ， Ｏｓｏｌ，Ａ．編；１９８０に開示されている。
【００６９】
インビボ投与に使用される製剤は滅菌されていなくてはならない。これは、滅菌フィルター膜を通す濾過により容易に達成される。徐放性調製物を調製してもよい。徐放性調製物の適切な例には、抗体を含む固体疎水性重合体の半透性マトリックスが含まれ、このマトリックスはフィルムまたはマイクロカプセル等の成形品の形態である。徐放性マトリックスの例には、ポリエステル、ヒドロゲル（例えばポリ（２−ヒドロキシエチル−メタクリレート）、またはポリ（ビニルアルコール）、ポリラクチド（米国特許第３７７３９１９号）、Ｌ−グルタミン酸とγ−エチル−Ｌ−グルタマートのコポリマー、非分解性エチレン−酢酸ビニル、分解性の乳酸−グリコール酸コポリマー、例えばＬＵＰＲＯＮ ＤＥＰＯＴTM（乳酸−グリコール酸コポリマーおよび酢酸ロイプロリドからなる注入可能なミクロスフィア）、およびポリ−３−ヒドロキシ酪酸が含まれる。エチレン−酢酸ビニルや乳酸−グリコール酸等のポリマーは１００日以上分子を放出できるが、特定のヒドロゲルはより短い時間タンパク質を放出する。
【００７０】
（治療の形態）
本発明の癌治療剤は、周知の方法に従い、ボーラスとしての静脈内投与、または一定期間にわたる連続的な注入、筋肉内、腹腔内、脳脊髄内、皮下、関節内、骨液内、くも膜腔内、経口、局所的、病巣内または吸入（エアゾル化された鼻腔内、肺内への）の経路により、および持続性または徐放性の方法により、哺乳類動物、好ましくはヒトへ投与される。場合によっては、投与は、様々な市販の装置を使用するミニポンプ流入によって実施することもできる。
【００７１】
本発明の癌治療剤の投与の有効な用量とスケジュールは、経験的に決定することができ、そのような決定を行うことは当業者の技量の範囲にある。単独に使用される薬剤の効果的な用量または量は、各有効成分それぞれ一日当り約１μｇ／ｋｇから約１００ｍｇ／ｋｇ体重あるいはそれ以上までの範囲であると現在は考えられる。用量の種間スケーリングは、例えば、Ｍｏｒｄｅｎｔｉら， Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔ． Ｒｅｓ． ８：１３５１；１９９１に開示されているような当該分野で知られている方法で実施することができる。
【００７２】
本発明の細胞死誘導療法とリンパ球活性化療法との併用療法においては、本発明において使用するＴＮＦ関連細胞死誘導因子とリンパ球活性化因子とは、同時または時間間隔をあけて被験体に投与され得る。例えば、ＴＮＦ関連細胞死誘導因子をはじめに被験体に投与し、続いてリンパ球活性化因子を投与する。また、別の好ましい態様では、ＴＮＦ関連細胞死誘導因子とリンパ球活性化因子とを最初に併用投与し、その後の投与スケジュールにおいて、経時的にＴＮＦ関連細胞死誘導因子のみ投与量を減少させるか、またはＴＮＦ関連細胞死誘導因子のみ投与を中止してもよい。
【００７３】
本発明の癌治療剤のインビボ投与が用いられる場合、正常な投与量は、投与経路に応じて、哺乳動物の体重当たり各有効成分それぞれ１日に約１０ｎｇ／ｋｇから１００ｍｇ／ｋｇまで、好ましくは約１μｇ／ｋｇ／日から１０ｍｇ／ｋｇ／日である。特定の用量および輸送方法の指針は文献に与えられている；例えば、米国特許第４，６５７，７６０号、第５，２０６，３４４号、または第５，２２５，２１２号参照。異なる製剤が異なる治療用化合物および異なる疾患に有効であること、例えば一つの器官または組織を標的とする投与には、他の器官または組織とは異なる方式で輸送することが必要であることが予想される。当業者であれば、投与されなければならない薬剤の用量が、例えば、薬剤を受入れる哺乳動物、投与経路、および哺乳動物に投与されている他の薬剤または治療物に依存して変わりうることは理解できるであろう。
【００７４】
細胞の型および／または病気の重症度に応じて、例えば一または複数の別個の投与または連続注入の何れであれ、各有効成分それぞれ約１μｇ／ｋｇないし１５ｍｇ／ｋｇ（例えば０．１−２０ｍｇ／ｋｇ）の抗体が患者への最初の候補用量である。上述した要因に応じて、典型的な一日の投与量は約１μｇ／ｋｇから１００ｍｇ／ｋｇあるいはそれ以上の範囲である。数日間またはそれ以上の繰り返し投与の場合、状態によっては、病気の徴候の望ましい抑制が生じるまで処置を維持する。
【００７５】
場合によっては、本発明の癌治療剤の投与に先立ち、哺乳動物または患者を本発明において使用するＴＮＦ関連細胞死誘導因子および／またはリンパ球活性化因子のレベルまたは活性を決定するためにテストすることができる。そのようなテストは、血清サンプルまたは末梢血の白血球のエライザまたはＦＡＣＳによって実施してもよい。
【００７６】
さらなる治療法を本方法において使用することも考えられる。一または複数の他の治療法には、これらに限定されるものではないが、当該技術分野において公知であり、放射線療法、サイトカイン、成長阻害剤、化学治療剤、細胞障害剤、チロシンキナーゼ阻害因子、ラスファルネシルトランスフェラーゼ阻害因子、血管形成阻害因子、およびサイクリン依存性キナーゼ阻害因子の投与が含まれる。さらに、治療法は、Ｒｉｔｕｘａｎ（登録商標）またはＨｅｒｃｅｐｔｉｎ（登録商標）などの腫瘍抗原を標的とする治療的抗体並びに抗ＶＥＧＦなどの抗血管形成抗体に基づく。
【００７７】
化学治療剤に対する調製法および用量スケジュールは、製造者の指示に従って使用されるか、熟練した実務家により経験的に決定される。そのような化学療法に対する調製法および用量スケジュールはまたＣｈｅｍｏｔｈｅｒａｐｙ Ｓｅｒｖｉｃｅ， Ｍ．Ｃ．Ｐｅｒｒｙ編， Ｗｉｌｌｉａｍｓ ＆； Ｗｉｌｋｉｎｓ， Ｂａｌｔｉｍｏｒｅ， ＭＤ；１９９２にも記載されている。また、化学療法剤は、例えばアンタゴニストの投与に先行し、またはその後に行い、またはそれらと共に与えられてもよい。また、アンタゴニストは、タモキシフェンなどの抗エストロジェン化合物、またはオナプリストン（ｏｎａｐｒｉｓｔｏｎｅ）（欧州特許６１６８１２号を参照）などの抗プロゲステロンと、このような分子に対して既知の用量で組み合わせてもよい。
【００７８】
（キット）
本発明の他の実施態様では、前述した疾患の治療に有用な物質を含有するキットが提供される。キットは、代表的には、容器およびラベルを含んでなる。適切な容器には、例えば、ボトル、バイアル、シリンジ、試験管等が含まれるが、これらに限定されない。容器はガラスまたはプラスチックのような様々な材料で形成することができる。容器は病状の治療に有効な組成物を収容しており、滅菌した出入口を有している（例えば、容器は皮下注射針により貫通可能なストッパーを具備する静脈溶液用のバックまたはバイアルであってよい）。組成物中の活性剤は、ＴＮＦ関連細胞死誘導因子およびリンパ球活性化因子である。容器上のまたは容器に伴うラベルには、組成物が、選択された病状の治療に使用されることが示されている。製造品は、製薬的に許容可能なバッファー、例えばリン酸緩衝生理食塩水、リンガル液およびブドウ糖液を収容する第２の容器を更に具備する。更に、他のバッファー、希釈剤、フィルター、針、シリンジ、および使用指示書を含むパッケージ挿入物を含む、市販および使用者の観点から望ましい他の材料を更に含んでいてもよい。
【００７９】
以下、実施例を用いて本発明をより具体的に説明するが、本発明の範囲はこれらの実施例によって限定されない。
【実施例】
【００８０】
（実施例１）
材料および方法
１．実験動物
６−８週齢ＢＡＬＢ／ｃマウス、ＣＢ１７−ｓｃｉｄ（ＳＣＩＤ）マウスを日本チャールズ・リバー（株）より購入した。全てのマウスはＳＰＦ（ｓｐｅｃｉｆｉｃ ｐａｔｈｏｇｅｎ−ｆｒｅｅ）施設で飼育し、順天堂大学医学部の動物実験に関する指針に従い実験を行った。
【００８１】
２．実験腫瘍
ＢＡＬＢ／ｃマウス由来ＴＲＡＩＬ感受性乳癌４Ｔ１（Ｐｕｌａｓｋｉ ＢＡ， ｅｔ ａｌ： Ｒｅｄｕｃｔｉｏｎ ｏｆ ｅｓｔａｂｌｉｓｈｅｄ ｓｐｏｎｔａｎｅｏｕｓ ｍａｍｍａｒｙ ｃａｒｃｉｎｏｍａ ｍｅｔａｓｔａｓｅｓ ｆｏｌｌｏｗｉｎｇ ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒａｐｙ ｗｉｔｈ ｍａｊｏｒ ｈｉｓｔｏｃｏｍｐａｔｉｂｉｌｉｔｙ ｃｏｍｐｌｅｘ ｃｌａｓｓII ａｎｄ Ｂ７．１
ｃｅｌｌ−ｂａｓｅｄ ｔｕｍｏｒ ｖａｃｃｉｎｅｓ． Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ ５８（７）： １４８６−１４９３（１９９８））、ＴＲＡＩＬ感受性腎癌Ｒ３３１−ｍｏｃｋおよびカスパーゼ依存性アポトーシス耐性となるＦＬＩＰ遺伝子を導入したＲ３３１−ＦＬＩＰ（ＴＲＡＩＬ耐性）（Ｓｅｋｉ Ｎ．， ｅｔ ａｌ． Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ． ６３： ２０７−２１３ （２００３））を用いた。腫瘍細胞は３７℃、５％ＣＯ2存在下で１０％ＦＢＳ含有ＲＰＭＩ１６４０倍地にて培養・継代し、実験に用いた。
【００８２】
３．抗体
アゴニスティック抗マウスＤＲ５モノクローナル抗体（ＭＤ５−１）（Ｔａｋｅｄａ Ｋ， ｅｔ ａｌ．， Ｊ Ｅｘｐ Ｍｅｄ １９９（４） ４３７−４４８（２００４））、アゴニスティック抗マウスＣＤ４０モノクローナル抗体（ＦＧＫ４５）（Ｒｏｌｉｎｋ Ａ．， ｅｔ ａｌ． Ｉｍｍｕｎｉｔｙ ５： ３１９−３３０ （１９９６））、アゴニスティック抗マウス４−１ＢＢモノクローナル抗体（３Ｈ３）（Ｓｈｕｆｏｒｄ Ｗ．Ｗ．， ｅｔ ａｌ． Ｊ． Ｅｘｐ． Ｍｅｄ． １８６： ４７−５５ （１９９７））、アンタゴニスティク抗マウスＣＴＬＡ−４モノクローナル抗体（ＵＣ１０−４Ｆ１０）（Ｗａｌｕｎａｓ Ｔ．Ｌ．， ｅｔ ａｌ， Ｉｍｍｕｎｉｔｙ １：４０５−４１３ （１９９４））を用いた。またコントロール抗体として抗ハムスターコントロールＩｇ（ＵＣ８−１Ｂ９）ならびに抗ラットＩｇＧ2a（Ｒ３５−９５； ＢＤ Ｐｈａｒｍｉｎｇｅｎ）を用いた。ＭＤ５−１、ＦＧＫ４５、３Ｈ３、ＵＣ８−１Ｂ９は本発明者らの研究室においてハイブリドーマ法で作製し（例えば、Ｈａｒｌｏｗら、Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ，（Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｐｒｅｓｓ，第２版、１９８８）；Ｈａｍｍｅｒｌｉｎｇら、Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ ａｎｄ Ｔ−Ｃｅｌｌ Ｈｙｂｒｉｄｏｍａｓ ５６３−６８１（Ｅｌｓｅｖｉｅｒ，Ｎ．Ｙ．１９８１）を参照）、実験に用いた。
【００８３】
４．マウス皮下腫瘍モデル
ＢＡＬＢ／ｃマウスの背部皮下に４Ｔ１腫瘍細胞を接種した。腫瘍塊の大きさが３×３ｍｍ2−８×８ｍｍ2に到達した時点から各抗体をそれぞれ１００μｇずつ投与開始し、３日おきに計４回腹腔内投与した。腫瘍塊の大きさは１−２日おきにキャリパーで計測、長径×短径（ｍｍ2）で算出し、各群５−１０匹の平均±ＳＤ（ｍｍ2）で表記した。
【００８４】
５．腫瘍特異的拒絶反応の評価
ナイーブＢＡＬＢ／ｃマウスおよび治療により腫瘍拒絶したマウスに４Ｔ１腫瘍を再度背部皮下に接種し、その増殖を比較検討した。また、ナイーブＢＡＬＢ／ｃマウスおよび治療により４Ｔ１腫瘍を拒絶したマウスから採取した脾臓Ｔ細胞５×１０7個を、４Ｔ１腫瘍細胞を２×１０5個皮下接種した後２日目のナイーブＳＣＩＤマウスに移入し腫瘍増殖を比較検討した。
【００８５】
更にＲ３３１−ｍｏｃｋあるいはＲ３３１−ＦＬＩＰをＢＡＬＢ／ｃマウスに接種し、その後腫瘍塊の大きさが３×３ｍｍ2に到達した時点で上記した抗体を投与し、腫瘍の増殖を比較検討した。またＲ３３１−ｍｏｃｋおよびＲ３３１−ＦＬＩＰをそれぞれ右側、左側背部皮下に同時に接種し、３×３ｍｍ2に到達した時点で上記した抗体を投与し、腫瘍の増殖を比較検討した。
【００８６】
（実施例２）
Ｍｉｘ Ｔｈｅｒａｐｙの治療効果
腫瘍塊の大きさが３×３ｍｍ2に到達したところで、単独投与群、２抗体併用投与群、３抗体併用投与（Ｍｉｘ ｔｈｅｒａｐｙ）群、コントロール抗体投与群にわけ、個々のマウスにおける腫瘍塊の大きさの推移を比較した。図１は、その結果を示す。なお、図中の下向き矢印は、抗体が投与された時点を示す（以下で説明する他の図においても同様）。抗４−１ＢＢ抗体を含む群で、ある程度の腫瘍拒絶が誘導されたが（単独または抗ＣＤ４０抗体との併用で１０例中２例、抗ＤＲ５抗体との併用で１０例中４例）、３抗体併用投与（Ｍｉｘ ｔｈｅｒａｐｙ）により相乗的な効果がみられ、腫瘍拒絶率８０％（１０例中８例）と有意に高い腫瘍拒絶の誘導がみられた（図１および表１）。
【表１】
【００８７】
（実施例３）
Ｍｉｘ Ｔｈｅｒａｐｙにおける腫瘍塊の大きさの違いによる治療効果
次に、より進行した状態での治療効果を検討した。腫瘍塊の大きさがそれぞれ３×３ｍｍ2、５×５ｍｍ2、８×８ｍｍ2に達したところで治療を開始した。３×３ｍｍ2と同様に５×５ｍｍ2においても拒絶率８０％と高い治療効果が得られた。また８×８ｍｍ2でも腫瘍拒絶を誘導することはできなかったものの、コントロール抗体投与群と比較して有意な腫瘍縮小効果ならびに増殖抑制効果がみられた（図２および表１）。この結果は、臨床でヒトの癌を治療する際には、ある程度進行した状態で発見されることが多いことから、Ｍｉｘ ｔｈｅｒａｐｙは臨床応用において非常に有用であることを示す。
【００８８】
（実施例４）
抗ＤＲ５抗体単回投与での治療効果
また抗ＤＲ５抗体のみ投与回数を初回の１回のみにし、他の薬剤（抗ＣＤ４０抗体および抗４−１ＢＢ抗体）を４回投与して、その抗腫瘍効果を検討した（（図３中「Ｍｉｘ（１−４−４）」として示す））。図３に示されるように、抗ＤＲ５抗体の投与回数を初回の１回のみにしても、抗ＤＲ５抗体を他の薬剤と同様に４回投与した実施例３の場合と同様の結果（拒絶率８０％）が得られた。このことから腫瘍に対するアポトーシス誘導は重要であるものの、アポトーシス誘導のための腫瘍抗原の提供は、治療初期（１回の投与による誘導）で十分であることが示された。なお、いまだ不明な点も多いが、リコンビナントＴＲＡＩＬの毒性についての報告が散見される（Ｊｏ Ｍ ｅｔ ａｌ．， Ｎａｔ． Ｍｅｄ．６：５６４−５６７（２０００）；Ｑｉｎ Ｊ ｅｔ ａｌ．， Ｎａｔ Ｍｅｄ． ７：３８５−３８６（２００１））。しかし、今回の実験では明らかな毒性は観察されず、また投与回数が減量できることで、ＴＲＡＩＬの毒性を減少させることも可能であると考えられた。
【００８９】
腫瘍特異的細胞障害性Ｔ細胞の誘導
更に初回接種腫瘍を拒絶してから６０日後のマウスに同じ腫瘍を再接種したところ、完全な拒絶が誘導された（図４Ａ）。また初回腫瘍拒絶マウスから採取した脾臓Ｔ細胞５×１０7細胞を４Ｔ１腫瘍接種２日後のＳＣＩＤマウスに導入したところ、有意に腫瘍増殖抑制効果がみられた（図４Ｂ）。また、ｉｎ ｖｉｔｒｏの実験でＣＴＬの存在を確認している。これらの結果から、以前報告した様に抗ＤＲ５抗体単独投与で起きうるＣＴＬの誘導が、補助刺激分子に対するアゴニスティック抗体の併用により効率的に増強され、腫瘍拒絶に導いていることが示唆された。
【００９０】
（実施例５）
ＴＲＡＩＬ感受性株ならびに非感受性株に対する腫瘍特異的細胞障害性Ｔ細胞の誘導による効果
ＴＲＡＩＬ感受性腎癌であるＲ３３１にカスパーゼ依存性のアポトーシスに耐性のＦＬＩＰを導入しＴＲＡＩＬ耐性となった腫瘍（Ｒ３３１−ＦＬＩＰ）と、ＴＲＡＩＬ感受性を維持しているｍｏｃｋ腫瘍（Ｒ３３１−ｍｏｃｋ）でＭｉｘ ｔｈｅｒａｐｙの効果を検討した。Ｒ３３１−ＦＬＩＰでも補助刺激分子に対する抗体投与の効果であると思われる、ある程度の腫瘍増殖抑制効果がみられたが、拒絶はまったく誘導されなかったのに対し、Ｒ３３１−ｍｏｃｋでは８０％の拒絶が誘導された（図５Ａ。次にＲ３３１−ｍｏｃｋ、ＦＬＩＰをそれぞれ右側、左側背部皮下に同時に接種し、Ｍｉｘ ｔｈｅｒａｐｙの効果を検討した。Ｒ３３１−ｍｏｃｋだけでなくＲ３３１−ＦＬＩＰにも、ほぼ同時に拒絶（８０％の拒絶）が誘導されたことから、ＣＴＬによるＴＲＡＩＬ以外のＦａｓＬやｐｅｒｆｏｒｉｎを介した経路での変異株に対する腫瘍拒絶は、極めて速やかに行われていることが示唆された（図５Ｂ）。ＴＲＡＩＬレセプターをターゲットとした治療戦略においてＴＲＡＩＬ非感受性腫瘍の出現とそのエスケープによる腫瘍腫大が問題となるが（Ｑｉｎ Ｊ ｅｔ ． Ｎａｔ Ｍｅｄ． ７：３８５−３８６（２００１））、今回得られた結果から、Ｍｉｘ ｔｈｅｒａｐｙは一部の感受性腫瘍を足がかりとして、腫瘍細胞全体を免疫学的に特異的に捕捉することで腫瘍全体を根絶することが可能であることが示された。
【００９１】
（実施例６）
Ｍｉｘ Ｔｈｅｒａｐｙに対する抗ＣＴＬＡ−４モノクローナル抗体投与併用の治療効果
４Ｔ１腫瘍２×１０5細胞をマウスに皮下接種し、腫瘍サイズが５×５ｍｍ2に到達した時点で、Ｍｉｘ ｔｈｅｒａｐｙ群、Ｍｉｘ ｔｈｅｒａｐｙ ＋ 抗ＣＴＬＡ−４抗体投与群、およびコントロール抗体投与群に分け、個々のマウスの腫瘍増殖を比較した（ｎ＝１０）。
【００９２】
図６に示すように、コントロール群（図６Ａを参照）では、腫瘍の治療効果は全く見られなかったが、Ｍｉｘ ｔｈｅｒａｐｙ群では、顕著な腫瘍増殖抑制効果（１３例中９例で拒絶）が観察された（図６Ｂを参照）。そしてさらに特筆すべきことは、Ｍｉｘ ｔｈｅｒａｐｙと抗ＣＴＬＡ−４抗体投与とを併用した場合には、Ｍｉｘ ｔｈｅｒａｐｙのみの場合と比較して、さらに良好な腫瘍増殖抑制効果が見られ、全ての場合において（１３例中１３例）腫瘍拒絶が観察された（図６Ｃを参照）。このように、Ｔ細胞の活性を抑制するというＣＴＬＡ−４の作用効果を抑制する因子（抗ＣＴＬＡ−４アンタゴニスティック抗体（ブロッキング抗体））を併用することによって、Ｍｉｘ ｔｈｅｒａｐｙの治療効果がさらに高められることが示された。
【００９３】
（考察）
上記実施例により具体的に示したように、本発明の癌治療法によれば、腫瘍特異抗原を同定しなくてもＴＲＡＩＬ感受性細胞への細胞死誘導を足がかりに、腫瘍細胞全体を免疫学的に捕捉し、網羅的な癌抗原に特異的な多くの種類のＣＴＬを誘導することが可能であり、これによりＴＲＡＩＬ感受性の喪失および癌抗原の変異による、癌細胞の免疫学的治療からのエスケープを起こす可能性を低くすることができる。ヒトにおける癌においてはＴＲＡＩＬレセプターの発現が比較的高頻度にみられるという報告も散見されることから、本発明に従う癌治療法は、より多くの患者に第一の選択肢の治療法として実施され得る。また転移などを考慮した場合にも、抗癌剤による治療では薬剤のデリバリーの問題などにより細部に効果をもたらすことが難しいことや一過性の効果による再発が問題となるが、本発明に従う癌治療法によれば、２次的なＣＴＬの誘導による効果が長期的にかつより細部にまで効果が行き届き、生体内から癌を駆逐することができると考えられる。さらには、本発明に従う癌治療法においては、腫瘍細胞への細胞死の誘導が初期に１度行われれば良いことから、効率に腫瘍の細胞死を誘導しうるものの、免疫機能の抑制も起こす抗癌剤による化学療法や放射線療法との併用も可能であり得る。このように、実施例に具体的に示したような本発明に従う治療法は、簡便でかつより汎用性の高い癌治療法であり、さらに効率的な経済効果も提供する。
【産業上の利用可能性】
【００９４】
本発明は、腫瘍特異的なＣＴＬをより効率的にかつ強力に誘導し得、腫瘍増殖が進行した段階であっても腫瘍拒絶を誘導し得るという高い治療効果を奏し得るため、高率で癌を根絶し得る新たな癌治療法として有用である。
【図面の簡単な説明】
【００９５】
【図１】実施例２におけるＭｉｘ Ｔｈｅｒａｐｙの効果を示すグラフである。４Ｔ１腫瘍２×１０5細胞を皮下接種し、腫瘍塊の大きさが３×３ｍｍ2に到達した時点で、抗ＤＲ５抗体、抗ＣＤ４０抗体、抗４−１ＢＢ抗体を単独投与群、２抗体投与群、３抗体投与（Ｍｉｘ ｔｈｅｒａｐｙ）群ならびにコントロール抗体投与群に分け、個々のマウスの腫瘍増殖を比較した（ｎ＝１０）。
【図２】実施例３におけるＭｉｘ ｔｈｅｒａｐｙにおける腫瘍塊の大きさの違いによる効果を示すグラフである。ＢＡＬＢ／ｃマウスに４Ｔ１腫瘍 ２×１０5細胞を皮下接種し、腫瘍塊の大きさがそれぞれ３×３（■）、５×５（●）、８×８（▲）ｍｍ2に到達した時点で３日おきに計４回Ｍｉｘ ｔｈｅｒａｐｙを行った。各群５−１０匹の平均±ＳＤ（ｍｍ2）で表記した。
【図３】実施例４における抗ＤＲ５抗体単回投与での治療効果を示すグラフである。腫瘍塊の大きさが３×３ｍｍ2に到達した時点で抗ＤＲ５抗体を初回投与のみとし、抗ＣＤ４０抗体、抗４−１ＢＢ抗体を３日おきに計４回腹腔内投与した（■）。またコントロールとしてナイーブＢＡＬＢ／ｃマウスにも同時に４Ｔ１腫瘍を接種した（□）。各群５−１０匹の平均±ＳＤ（ｍｍ2）で表記した。
【図４】実施例４における腫瘍特異的細胞障害性Ｔ細胞の誘導を示すグラフである。（Ａ）Ｍｉｘ ｔｈｅｒａｐｙにより４Ｔ１を拒絶したＢＡＬＢ／ｃマウスに４Ｔ１腫瘍 ２×１０5個を再接種し、増殖を観察した（■）。またコントロールとしてナイーブＢＡＬＢ／ｃマウスにも同時に４Ｔ１腫瘍を接種した（□）。各群５−１０匹の平均±ＳＤ（ｍｍ2）で表記した。（Ｂ）ナイーブＳＣＩＤマウスに４Ｔ１腫瘍２×１０5個を皮下接種。腫瘍接種２日後にナイーブＢＡＬＢ／ｃマウス（○）および４Ｔ１を拒絶したＢＡＬＢ／ｃマウス（●）から単離した脾臓Ｔ細胞５×１０7細胞を尾静脈より移入し、腫瘍の増殖を観察した。またコントロール（□）としてナイーブＳＣＩＤマウスにも同時に４Ｔ１腫瘍を接種した。各群５−１０匹の平均±ＳＤ（ｍｍ2）で表記した。
【図５】実施例５におけるＴＲＡＩＬ感受性株ならびに非感受性株に対する腫瘍特異的細胞障害性Ｔ細胞の誘導による効果を示すグラフである。（Ａ）Ｒ３３１−ｍｏｃｋ（○：コントロール群、●：Ｍｉｘ ｔｈｅｒａｐｙ群）またはＲ３３１−ＦＬＩＰ（□：コントロール群、■：Ｍｉｘ ｔｈｅｒａｐｙ群）をＢＡＬＢ／ｃマウスに接種し、その後腫瘍塊の大きさが３×３ｍｍ2に到達した時点でＭｉｘ ｔｈｅｒａｐｙまたはコントロール抗体を投与し、腫瘍の増殖を観察した。各群５−１０匹の平均±ＳＤ（ｍｍ2）で表記した。（Ｂ）Ｒ３３１−ｍｏｃｋ（円）およびＲ３３１−ＦＬＩＰ（四角）をそれぞれ右側、左側背部皮下に同時に接種し、３×３ｍｍ2に到達した時点でＭｉｘ ｔｈｅｒａｐｙ（黒塗りつぶし）またはコントロール抗体（白抜き）を投与し、腫瘍の増殖を観察した。各群５−１０匹の平均±ＳＤ（ｍｍ2）で表記した。
【図６】実施例６におけるＭｉｘ ｔｈｅｒａｐｙに対する抗ＣＴＬＡアンタゴニスティック抗体投与の効果を示すグラフである。左からそれぞれ、（Ａ）コントロール抗体投与群、（Ｂ）Ｍｉｘ ｔｈｅｒａｐｙ群、および（Ｃ）Ｍｉｘ ｔｈｅｒａｐｙ ＋ 抗ＣＴＬＡ−４抗体投与群についての結果を示す。４Ｔ１腫瘍２×１０5細胞を皮下接種し、腫瘍塊の大きさが５×５ｍｍ2に到達した時点で治療を開始し、個々のマウスの腫瘍増殖を比較した。
【技術分野】
【０００１】
本発明は、細胞死誘導療法とリンパ球活性化療法との併用療法による癌の免疫療法に関する。
【背景技術】
【０００２】
現在、癌に対する治療は、外科的療法、抗癌剤による化学療法、放射線療法の３つを柱として実施されているが、近年第４の選択肢として免疫療法が確立されつつある。
【０００３】
癌に対する免疫学的アプローチとして、ＬＡＫ（ｌｙｍｐｈｏｋｉｎｅ−ａｃｔｉｖａｔｅｄ ｋｉｌｌｅｒ）やＴＩＬ（ｔｕｍｏｒ−ｉｎｆｉｌｔｒａｔｉｎｇ ｌｙｍｐｈｏｃｙｔｅｓ）を移入する養子免疫療法などが古くから行われてきたが、元来自己由来の細胞である癌細胞を選択的に殺傷することは難しく明らかな臨床成績・有効性は得られなかった。
【０００４】
しかしながら、分子生物学的な技術の進歩に伴い、腫瘍抗原が同定され、これを用いた、あるいはこれを提示させた樹状細胞を用いた癌抗原特異的な細胞障害性Ｔ細胞（ＣＴＬ）誘導による腫瘍特異的治療が行われるようになってきた。
【０００５】
一方、腫瘍特異的な抗体である抗ＨＥＲ２／ｎｅｕ抗体や抗ＣＤ２０抗体が作製され、それらの抗体による腫瘍に対する直接的な細胞死誘導と、それによる細胞障害性Ｔ細胞（ＣＴＬ）の誘導で良好な臨床成績が得られ、癌細胞に対する直接的な細胞死誘導の重要性が示されるとともに、癌に対する免疫療法が再び注目されるようになった（ｚｕｍ Ｂｕｓｃｈｈｅｎｆｅｌｄｅ ＣＭ，ｅｔ ａｌ． Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ ６２（２），２２４４−２２４７，２００２：非特許文献１；Ｓｅｌｅｎｋｏ Ｎ，ｅｔ ａｌ．，Ｌｅｕｋｅｍｉａ １５（１０），１６１９−１６２６，２００１：非特許文献２）。
【０００６】
また、抗原特異的免疫反応を惹起するために必要な抗原提示細胞としての樹状細胞に関する研究、補助刺激分子などＴ細胞−抗原提示細胞間相互作用に関与する機能分子の研究、更には腫瘍拒絶抗原ペプチドの同定研究が精力的になされ、腫瘍抗原特異的な細胞障害性Ｔ細胞（ＣＴＬ）を臨床治療に応用するための必要条件が、多方面からの基礎研究の成果によって明らかにされてきている。
【０００７】
しかしながら、（ｉ）腫瘍細胞の遺伝子的不安定さに由来する癌抗原の発現変異や、抗ＨＥＲ２／ｎｅｕ抗体や抗ＣＤ２０抗体による細胞死誘導への耐性の獲得による、細胞障害性Ｔ細胞（ＣＴＬ）および抗体療法からエスケープした腫瘍の増殖や転移、ならびに（ｉｉ）細胞障害性Ｔ細胞（ＣＴＬ）の誘導に必要な膨大な施設、機器、技術、人材等の問題があり、免疫療法を広く臨床に応用するには、多くの障害がある。
【０００８】
また、Ｔａｋｅｄａら（Ｔａｋｅｄａ Ｋ． ｅｔ ａｌ．，Ｊ Ｅｘｐ Ｍｅｄ １９９（４）４３７−４４８，２００４：非特許文献３）には、ＴＲＡＩＬ（Ｔｕｍｏｒ ｎｅｃｒｏｓｉｓ ｆａｃｔｏｒ−ｒｅｌａｔｅｄ ａｐｏｐｔｏｓｉｓ−ｉｎｄｕｃｉｎｇ ｌｉｇａｎｄ）の細胞死（以下、アポトーシスともいう）を誘導するレセプターであるＤＲ５に対するアゴニスティック抗体（ＭＤ５−１）を作製し、その投与により腫瘍拒絶を誘導しうることが報告されている。
【非特許文献１】ｚｕｍ Ｂｕｓｃｈｈｅｎｆｅｌｄｅ ＣＭ，ｅｔ ａｌ．，Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ ６２（２），２２４４−２２４７，２００２
【非特許文献２】Ｓｅｌｅｎｋｏ Ｎ，ｅｔ ａｌ．，Ｌｅｕｋｅｍｉａ １５（１０），１６１９−１６２６，２００１
【非特許文献３】Ｔａｋｅｄａ Ｋ， ｅｔ ａｌ．，Ｊ Ｅｘｐ Ｍｅｄ １９９（４） ４３７−４４８，２００４
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００９】
上記のように、癌の治療法については種々の研究がなされているが、未だ十分な治療効果を奏する治療法は、確立されていない。したがって、より高い治療効果を奏する治療法の確立が望まれている。
【課題を解決するための手段】
【００１０】
本発明は、上記のような課題を解決するためになされたもので、以下のような癌治療剤および癌治療用キットを提供する。
【００１１】
（１）ＴＮＦ関連細胞死誘導因子とリンパ球活性化因子とを組み合わせてなる、癌治療剤。
（２）上記ＴＮＦ関連細胞死誘導因子が、ＴＲＡＩＬレセプターに対するアゴニスティック抗体である、（１）に記載の癌治療剤。
（３）上記ＴＲＡＩＬレセプターに対するアゴニスティック抗体が抗ＤＲ５抗体である、（２）に記載の癌治療剤。
（４）上記リンパ球活性化因子が、補助刺激分子に対するアゴニスティック抗体である、（１）に記載の癌治療剤。
）に記載の癌治療剤。
（５）上記補助刺激分子に対するアゴニスティック抗体が、ＣＤ２８ファミリーメンバーに対するアゴニスティック抗体、またはデスレセプターを有さないＴＮＦＲファミリーメンバーに対するアゴニスティック抗体である、（４）に記載の癌治療剤。
（６）上記ＣＤ２８ファミリーメンバーに対するアゴニスティック抗体が、抗ＣＤ２８抗体、抗ＩＣＯＳ抗体、またはこれらの組み合わせである、（５）に記載の癌治療剤。
（７）上記デスレセプターを有さないＴＮＦＲファミリーメンバーに対するアゴニスティック抗体が、抗ＣＤ４０抗体、抗４−１ＢＢ抗体、またはこれらの組み合わせである、（５）に記載の癌治療剤。
（８）上記ＴＮＦ関連細胞死誘導因子が抗ＤＲ５抗体であり、上記リンパ球活性化因子が抗ＣＤ４０抗体および抗４−１ＢＢ抗体である、（１）に記載の癌治療剤。
（９）さらに、抑制性シグナルを伝えるレセプターに対するアンタゴニスティック抗体を含有する、（１）〜（８）のいずれかに記載の癌治療剤。
（１０）上記抑制性シグナルを伝えるレセプターに対するアンタゴニスティック抗体が、抗ＣＴＬＡ−４抗体である、（９）に記載の癌治療剤。
【００１２】
（１１）ＴＮＦ関連細胞死誘導因子を含有する、リンパ球活性化剤と併用するための癌治療剤。
（１２）上記ＴＮＦ関連細胞死誘導因子が、ＴＲＡＩＬレセプターに対するアゴニスティック抗体である、（１１）に記載の癌治療剤。
（１３）上記ＴＲＡＩＬレセプターに対するアゴニスティック抗体が、抗ＤＲ５抗体である、（１２）に記載の癌治療剤。
（１４）上記リンパ球活性化剤が、補助刺激分子に対するアゴニスティック抗体を含有する、（１１）に記載の癌治療剤。
（１５）上記補助刺激分子に対するアゴニスティック抗体が、ＣＤ２８ファミリーメンバーに対するアゴニスティック抗体、またはデスレセプターを有さないＴＮＦＲファミリーメンバーに対するアゴニスティック抗体である、（１４）に記載の癌治療剤。
（１６）上記ＣＤ２８ファミリーメンバーに対するアゴニスティック抗体が、抗ＣＤ２８抗体、抗ＩＣＯＳ抗体、またはこれらの組み合わせである、（１５）に記載の癌治療剤。
（１７）上記デスレセプターを有さないＴＮＦＲファミリーメンバーに対するアゴニスティック抗体が、抗ＣＤ４０抗体、抗４−１ＢＢ抗体、またはこれらの組み合わせである、（１５）に記載の癌治療剤。
（１８）さらに、抑制性シグナルを伝えるレセプターに対するアンタゴニスティック抗体を含有する、（１１）〜（１７）のいずれかに記載の癌治療剤。
（１９）上記抑制性シグナルを伝えるレセプターに対するアンタゴニスティック抗体が、抗ＣＴＬＡ−４抗体である、（１８）に記載の癌治療剤。
【００１３】
（２０）リンパ球活性化因子を含有する、細胞死誘導剤と併用するための癌治療剤。
（２１）上記リンパ球活性化因子が、補助刺激分子に対するアゴニスティック抗体である、（２０）に記載の癌治療剤。
（２２）上記補助刺激分子に対するアゴニスティック抗体が、ＣＤ２８ファミリーメンバーに対するアゴニスティック抗体、またはデスレセプターを有さないＴＮＦＲファミリーメンバーに対するアゴニスティック抗体である、（２１）に記載の癌治療剤。
（２３）上記ＣＤ２８ファミリーメンバーに対するアゴニスティック抗体が、抗ＣＤ２８抗体、抗ＩＣＯＳ抗体、またはこれらの組み合わせである、（２２）に記載の癌治療剤。
（２４）上記デスレセプターを有さないＴＮＦＲファミリーメンバーに対するアゴニスティック抗体が、抗ＣＤ４０抗体、抗４−１ＢＢ抗体、またはこれらの組み合わせである、（２２）に記載の癌治療剤。
（２５）上記細胞死誘導剤が、ＴＮＦ関連細胞死誘導因子を含有する、（２０）に記載の癌治療剤。
（２６）上記ＴＮＦ関連細胞死誘導因子が、ＴＲＡＩＬレセプターに対するアゴニスティック抗体である、（２５）に記載の癌治療剤。
（２７）上記ＴＲＡＩＬレセプターに対するアゴニスティック抗体が、抗ＤＲ５抗体である、（２６）に記載の癌治療剤。
（２８）さらに、抑制性シグナルを伝えるレセプターに対するアンタゴニスティック抗体を含有する、（２０）〜（２７）のいずれかに記載の癌治療剤。
（２９）上記抑制性シグナルを伝えるレセプターに対するアンタゴニスティック抗体が、抗ＣＴＬＡ−４抗体である、（２８）に記載の癌治療剤。
【００１４】
（３０）化学療法剤と併用する、（１）〜（２９）のいずれかに記載の癌治療剤。
（３１）放射線療法と併用する、（１）〜（２９）のいずれかに記載の癌治療剤。
【００１５】
（３２）細胞死誘導療法とリンパ球活性化療法との併用療法による癌治療用キットであって、
ＴＮＦ関連細胞死誘導因子を含有する薬剤と、
リンパ球活性化因子を含有する薬剤とを含む、癌治療用キット。
（３３）上記ＴＮＦ関連細胞死誘導因子が、ＴＲＡＩＬレセプターに対するアゴニスティック抗体であり、上記リンパ球活性化因子が、補助刺激分子に対するアゴニスティック抗体である、（３２）に記載の癌治療用キット。
（３４）ＴＲＡＩＬレセプターに対するアゴニスティック抗体が抗ＤＲ５抗体であり、上記補助刺激分子に対するアゴニスティック抗体が抗ＣＤ４０抗体および抗４−１ＢＢ抗体である、（３３）に記載の癌治療用キット。
（３５）さらに、抑制性シグナルを伝えるレセプターに対するアンタゴニスティック抗体を含有する、（３２）〜（３４）のいずれかに記載の癌治療用キット。
（３６）上記抑制性シグナルを伝えるレセプターに対するアンタゴニスティック抗体が、抗ＣＴＬＡ−４抗体である、（３５）に記載の癌治療用キット。
【発明の効果】
【００１６】
本発明によれば、より高い治療効果を奏する癌の治療方法が提供される。本発明によれば、腫瘍増殖が進行した段階であっても腫瘍拒絶を誘導し得る。本発明は、高率で癌を根絶し得る新たな癌治療法を提供する。
【発明を実施するための最良の形態】
【００１７】
本発明者らは、抗ＤＲ５抗体のようなＴＮＦ関連細胞死誘導因子と、補助刺激分子に対するアゴニスティック抗体である抗ＣＤ４０抗体および抗４−１ＢＢ抗体のようなリンパ球活性化因子とを被験体に併用投与すると、癌抗原特異的な細胞障害性Ｔ細胞（ＣＴＬ）の誘導をより効率化することができ、予想外に高い治療効果が得られることを見出して、本発明を完成した。すなわち、本発明の癌治療法は、ＴＮＦ関連細胞死誘導因子による細胞死誘導療法と、リンパ球活性化因子によるリンパ球活性化療法とを併用することを特徴とする。
【００１８】
（ＴＮＦ関連細胞死誘導因子）
本明細書中、「ＴＮＦ関連細胞死誘導因子」は、腫瘍壊死因子（ＴＮＦ（ｔｕｍｏｒ ｎｅｃｒｏｓｉｓ ｆａｃｔｏｒ））ファミリーに属する細胞死誘導サイトカインのレセプターに特異的に結合して、腫瘍細胞の細胞死（またはアポトーシス）を誘導し得る分子のことをいうものとする。
【００１９】
ＴＮＦ−α、リンフォトキシン（ｌｙｍｐｈｏｔｏｘｉｎ）−α（またはＴＮＦ−β）、Ｆａｓリガンド（以下、ＦａｓＬと略す）、ＴＲＡＩＬ（またはＡｐｏ−２リガンド）、Ａｐｏ−３リガンド（以下、Ａｐｏ３Ｌと略す）などのＴＮＦファミリーに属する細胞死誘導サイトカイン（デス因子）のレセプターとして、それぞれ、ＴＮＦレセプターＩ型（以下、ＴＮＦＲ−Ｉと略す）、Ｆａｓ、ＤＲ（ｄｅａｔｈ ｒｅｃｅｐｔｏｒ）３、ＤＲ４、ＤＲ５などが知られている。
【００２０】
これらデス因子のレセプターは、ＴＮＦレセプターファミリーに属し、互いに構造的に類似しており、細胞外領域にシステイン残基に富むドメインの繰り返し構造と、細胞内領域にデスドメインとよばれるアポトーシスの誘導に必須の構造とを有する。また、ＤＲ６とよばれるデス因子も最近クローニングされ（Ｐａｎ ＧＨ ｅｔ ａｌ．，ＦＥＢＳ Ｌｅｔｔｅｒｓ ４３１（３）：３５１−３５６（１９９８）、アポトーシスの誘導、免疫系におけるアレルギーの発症に関与するＴｈバランスの制御、免疫疾患に関与するＢ細胞の活性化、および増殖の制御に重要であることがわかっている（Ｚｈａｏ Ｈ ｅｔ ａｌ．， Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ １９４（１０）： １４４１−８ （２００１）；大矢和彦 他３名、ＭＢＬ研究用試薬雑誌 第２巻 第１号 １−９頁 平成１４年８月）。ＤＲ６の配列に関連する情報は、例えば、ＧｅｎＢａｎｋ Ａｃｃｅｓｓｉｏｎ Ｎｏ．ＡＦ０６８８６８、ＡＦ３２２０６９等で公のデータベースに登録された配列情報として得られる。
【００２１】
ＴＮＦＲ−１（Ｇｏｏｄｗｉｎ ｅｔ ａｌ．， Ｍｏｌ． Ｃｅｌｌ． Ｂｉｏｌ． １１ （６）， ３０２０−３０２６ （１９９１））には、ＴＮＦ−αやｌｙｍｐｈｏｔｏｘｉｎ−αが結合する。ＴＮＦＲ−１の配列に関連する情報は、例えば、ＧｅｎＢａｎｋ Ａｃｃｅｓｓｉｏｎ Ｎｏ．Ｍ５９３７８等で公のデータベースに登録された配列情報として得られる。
【００２２】
Ｆａｓ（ＣＤ９５またはＡｐｏ−Ｉとも呼ばれる）は、ＴＮＦレセプタースーパーファミリーに属するレセプターであり、Ｆａｓリガンド（以下、ＦａｓＬと略す）が結合する。Ｆａｓは、ＦａｓＬを介するアポトーシス誘導に関与している（例えば、Ｂｅｈｒｍａｎｎ ｅｔ ａｌ．，Ｅｕｒｏｐｅａｎ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ ２４（１２）：３０５７−６２（１９９４））。
【００２３】
ＤＲ４およびＤＲ５には、ＴＲＡＩＬ（Ａｐｏ２Ｌとしても知られる）が結合する。ＴＲＡＩＬは、形質転換した細胞において迅速なカスパーゼ依存性のアポトーシスを誘導し得るが、正常な細胞においてはほとんど誘導し得ない。ＤＲ４とＤＲ５は、ＴＲＡＩＬのアポトーシス誘導シグナルを下流に伝える。これらのリガンドやレセプターは、さまざまな組織に広く分布しており、また特定の癌細胞や培養細胞株もＴＲＡＩＬに感受性を示す（例えば、Ｂｕｒｎｓ ａｎｄ Ｅｌ−Ｄｅｉｒｙ， Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ ２７６（４１）：３７８７９−８６（２００１）；Ｗｉｌｅｙ ｅｔ ａｌ．， Ｉｍｍｕｎｉｔｙ ３（６）：６７３−６８２（１９９５）； Ｐｉｔｔｉ ｅｔ ａｌ， Ｊ． Ｂｉｏｌ． Ｃｈｅｍ． ２７１（２２） １２６８７−１２６９０ （１９９６））。ＤＲ４およびＤＲ５の配列に関連する情報は、例えば、ＧｅｎＢａｎｋ Ａｃｃｅｓｓｉｏｎ Ｎｏ．ＢＤ０５６８１０等、およびＧｅｎＢａｎｋ Ａｃｃｅｓｓｉｏｎ Ｎｏ．ＡＢ０５４００４、ＡＦ０１２５３５、ＡＦ０１６２６８等で公のデータベースに登録された配列情報として得られる。
【００２４】
ＤＲ３には、Ａｐｏ３Ｌが結合する。Ａｐｏ３Ｌのデスレセプターとして発見されたＤＲ３は、構造的にも機能的にもＴＮＦＲ−Ｉと似ており、ＴＮＦＲ−Ｉと同様に核内転写因子κＢ（ｎｕｃｌｅａｒ ｆａｃｔｏｒκＢ）（以下、ＮＦκＢと略す）の活性化とアポトーシス誘導の両方のシグナルを伝達できる。ＴＮＦＲ−Ｉがさまざまな組織や細胞で発現しているのに対し、ＤＲ３は脾臓、胸腺、末梢血細胞と活性化したＴ細胞にその発現が限定されている。逆にＤＲ３のリガンドであるＡｐｏ３Ｌは、多くの組織、細胞でその発現が認められている。ＤＲ３については、以下の文献が参照される。Ｃｈｉｎｎａｉｙａｎ ｅｔ ａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅ ２７４（５２８９）： ９９０−９９２ （１９９６）； Ｗａｎｇ ｅｔ ａｌ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｅｌｌｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ ２１（１０）： ３４５１−６１ （２００１）。ＤＲ３の配列に関連する情報は、例えば、ＧｅｎＢａｎｋ Ａｃｃｅｓｓｉｏｎ Ｎｏ．ＡＢ０５１８５０、ＡＢ０５１８５１、ＡＦ０２６０７０、ＡＦ０２６０７１、Ｕ７２７６３等で公のデータベースに登録された配列情報として得られる。
【００２５】
本発明において使用する「ＴＮＦ関連細胞死誘導因子」は、上記のようなＴＮＦファミリーに属する細胞死誘導サイトカインのレセプターに特異的に結合して、腫瘍細胞のアポトーシスを誘導し得る分子であり、好適には、ＴＮＦレセプターＩ型（ＴＮＦＲ−Ｉ）、Ｆａｓ、ＤＲ３、ＤＲ４、ＤＲ５、ＤＲ６等に対するアゴニスティック抗体（それぞれ、本明細書中で抗ＴＮＦＲ−Ｉ抗体、抗Ｆａｓ抗体、抗ＤＲ３抗体、抗ＤＲ４抗体、抗ＤＲ５抗体、抗ＤＲ６抗体等と呼ぶ）が使用され得る。とりわけ、ＴＲＡＩＬレセプターであるＤＲ４およびＤＲ５に対するアゴニスティック抗体（抗ＤＲ４抗体および抗ＤＲ５抗体）がより好適に使用され得、そして抗ＤＲ５抗体が最も好適に使用される。
【００２６】
また、ヒトデスレセプターに対する抗体が好ましいが、これに限定されず、他の哺乳動物、例えば、マウス、ラット、霊長類、ウマ、ブタ、ウサギ、家禽などを含む種々の種に由来するデスレセプターに対する抗体も本発明において使用し得る。
【００２７】
抗ＤＲ５抗体は、自然免疫系に属する細胞上のＦｃレセプターに結合し、腫瘍細胞にアポトーシスを誘導すると同時に、活性化Ｆｃレセプターを介して抗体の結合した抗原提示細胞を活性化して腫瘍抗原のＴ細胞への提示を促進し、それにより誘導されたＴＲＡＩＬ以外の細胞障害性機構を有する腫瘍特異的なＣＴＬにより、ＴＲＡＩＬ耐性の変異株に対しても抗腫瘍効果を発揮する。
【００２８】
本発明においては、さらにリンパ球活性化剤を投与して、免疫機構を活性化し、最終的にはＴＲＡＩＬ耐性の変異株を含めて腫瘍を根絶する。本発明の治療法は、自然免疫と獲得免疫とを同時に活性化する新たな抗腫瘍抗体療法として非常に有望である。
【００２９】
上記抗体の各々は、モノクローナル抗体であることが好ましく、それらは当業者に周知の供給業者（例えば、ＢＤ． Ｐｈａｒｍｉｎｇｅｎ、ｅＢｉｏｓｃｉｅｎｃｅ等）から市販されているか、またはハイブリドーマ法などの周知技術を用いて作製し得る。
【００３０】
本明細書中、「細胞死誘導療法」とは、上記ＴＮＦ関連細胞死誘導因子を被験体に投与することを通じて癌を治療する方法のことをいうものとする。また、「治療」または「療法」とは、治療的療法、予防的療法、および防御的療法をいうものとする。
【００３１】
本明細書中、「細胞死誘導剤」とは、癌細胞のアポトーシスを誘導する薬剤をいい、典型的には、ＴＮＦ関連細胞死誘導因子を含有する薬剤である。
【００３２】
本明細書中、「被験体」は、脊椎動物、好ましくは哺乳動物、さらに好ましくはヒトである。哺乳動物には、ネズミ科の動物、類人猿、ヒト、飼育動物、スポーツ用動物およびペット類を含むが、これらに限定されない。また、本明細書中、「患者」は、ヒトであるものとする。
【００３３】
（リンパ球活性化因子）
本明細書中、「リンパ球活性化因子」とは、補助刺激分子に特異的に結合して、癌抗原特異的な細胞障害性Ｔ細胞を活性化または増強し得る分子をいうものとする。
【００３４】
本明細書中、「補助刺激分子」という場合、Ｔ細胞表面のＴ細胞受容体（Ｔ ｃｅｌｌ ｒｅｃｅｐｔｏｒ：ＴＣＲ）により結合したペプチド／ＭＨＣ複合体と一緒に作用した場合、ペプチドを結合しているＴ細胞の活性化を達成する補助刺激作用を誘導するいかなる単一のシグナル分子（補助シグナル分子）または複数の補助シグナル分子の組み合わせをも包含するものとする。したがって、この用語は、抗原提示細胞（ａｎｔｉｇｅｎ ｐｒｅｓｅｎｔｉｎｇ ｃｅｌｌ；ＡＰＣ）などの抗原提示マトリックス上の他の補助刺激分子（１以上）、そのフラグメント（単独もしくは他の分子（１以上）と複合体形成したもの、または融合タンパク質の一部として）など、Ｔ細胞表面にあるＴＣＲがペプチドを特異的に結合したときにペプチド／ＭＨＣ複合体と一緒に同族リガンドに結合してＴ細胞を活性化するものを包含する。
【００３５】
一般に、Ｔ細胞の十分な活性化のためには、２つの独立したシグナルが必要であることが知られている。１つはＴＣＲが抗原提示細胞上の主要組織適合抗原複合体（ｍａｊｏｒ ｈｉｓｔｏｃｏｍｐａｔｉｂｉｌｉｔｙ ｃｏｍｐｌｅｘ；ＭＨＣ）に結合したペプチドを認識し伝達されるシグナルである。もう一つは、補助刺激分子によって伝達される補助シグナルであり、この補助シグナルはＴ細胞の十分な活性化、細胞増殖の維持、細胞死の回避、エフェクターＴ細胞、メモリーＴ細胞の分化の誘導に重要である。
【００３６】
現在までに、この補助シグナルを誘導する多くの分子が見つかっており、例えば、Ｔ細胞上のＣＤ２８分子は、ＡＰＣ上のＢ７分子群（Ｂ７−１，Ｂ７−２）との相互作用により、Ｔ細胞に活性化シグナルを伝達し、多くのサイトカインの産生を誘導するなど、Ｔ細胞の増殖に決定的な役割を果している。ＣＤ２８ファミリーに属する他の補助シグナル分子としては、例えば、ＩＣＯＳが知られている。また、ＣＤ２８と同様にＢ７分子群と結合し、ＣＤ２８とは対照的に、Ｔ細胞の活性を抑制するレセプターとしてＣＴＬＡ−４が知られており、また同様に抑制性シグナルを伝えるＣＤ２８ファミリーに属するレセプターとしてＰＤ−１も知られている。
【００３７】
また、ＣＤ２８ファミリー以外にもＴＮＦレセプター（以下、ＴＮＦＲと略す）ファミリーに属するＯＸ４０、４−１ＢＢ、ＣＤ２７、ＣＤ４０、ＣＤ３０、ＨＶＥＭなどが補助シグナルを伝達する分子として知られている（例えば、Ｃｒｏｆｔ Ｍ，Ｎａｔ Ｒｅｖ Ｉｍｍｕｎｏｌ． ３：６０９−６２０，２００３、Ｓｍｉｔｈ ｅｔ ａｌ， Ｃｅｌｌ ７６ （６）：９５９−９６２ （１９９４）を参照）。これらの分子は、細胞内領域にデスドメインを有さないＴＮＦＲファミリーのメンバーであり、ＴＲＡＦ（ＴＮＦ ｒｅｃｅｐｔｏｒ−ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ ｆａｃｔｏｒ）にＴＲＡＦ結合モチーフを介して結合する。ＴＲＡＦは、ＴＮＦＲにリガンドが結合した場合、そのシグナルを細胞内に伝えるためのアダプター分子であり、ｃ−Ｊｕｎ ＮＨ2 ｔｅｒｍｉｎａｌ ｐｒｏｔｅｉｎ ｋｉｎａｓｅ（以下、ＪＮＫと略す）やＮＦκＢの活性化に関与している。
【００３８】
ＣＤ２８は、免疫グロブリンスーパーファミリーに属する。ＣＤ２８は、Ｔ細胞上に恒常的に発現している分子であり、ＴＣＲによって抗原を認識したナイーブＴ細胞に、ＣＤ２８から刺激を受けると、ＣＤ２８はＴ細胞に強力な補助シグナルを伝達する。その結果、ＩＬ−２の産生とＩＬ−２レセプターの発現が誘導され、細胞周期の回転が始まる。また、ＣＤ２８シグナルはＢｃｌ−ＸＬの発現を誘導することでＴ細胞のアポトーシスを抑制する（Ｂｏｕｓｓｉｏｔｉｓ ｅｔ ａｌ．，Ｉｍｍｕｎｏｌ Ｒｅｖ １５３，５，１９９６；Ｌｅｎｓｃｈｏｗ ｅｔ ａｌ．，Ａｎｎｕ Ｒｅｖ ｉｍｍｕｎｏｌ １４，２３３，１９９６）。ＣＤ２８の配列に関連する情報は、例えば、ＧｅｎＢａｎｋ Ａｃｃｅｓｓｉｏｎ Ｎｏ．ＡＦ４１１０５７、ＢＣ０６４０５８等で公のデータベースに登録された配列情報として得られる。
【００３９】
ＣＴＬＡ−４は、ＣＤ２８と類似の分子でより強い結合力を有し、ＣＤ２８と拮抗してＢ７ファミリーからの活性化シグナルを抑制するレセプターとして報告されており、このＣＴＬＡ−４へのＢ７ファミリー分子の結合の抑制が、ＣＤ２８を介したＴ細胞の活性化をより効率良くすることが知られている（Ｃｈｅｎ， Ｎａｔ． Ｒｅｖ． Ｉｍｍｕｎｏｌ． ４（５）３３６−３４７（２００４）， Ｅｇｅｎ ｅｔ ａｌ．， Ｎａｔ． Ｉｍｍｕｎｏｌ ３（７） ６１１−６１８（２００２））。ＣＴＬＡ−４の配列に関連する情報は、たとえば、ＧｅｎＢａｎｋ Ａｃｃｅｓｓｉｏｎ Ｎｏ．ＮＭ００５２１４、Ｌ１５００６、Ｘ０５７１９等の公のデータベースに登録された配列情報として得られる。
【００４０】
ＰＤ−１は、ＣＤ２８ファミリーに属し、ＰＤＬ−１およびＢ７−ＤＣからの抑制性シグナルを媒介するレセプターとして知られており、この配列に関連する情報は、たとえば、ＧｅｎＢａｎｋ Ａｃｃｅｓｓｉｏｎ Ｎｏ．Ｌ２７４４０、Ｅ０６０６７等の公のデータベースに登録された配列情報として得られる（Ｏｋａｚａｋｉ ｅｔ ａｌ．， Ｃｕｒｒ． Ｏｐｉｎ． Ｉｍｍｕｎｏｌ． １４ （６）７７９−７８２（２００２）。
【００４１】
ＩＣＯＳは、ＣＤ２８とは異なり、ナイーブＴ細胞ではほとんど発現が認められず、活性化に伴って発現が上昇する。ＩＣＯＳは、Ｂ７−１、Ｂ７−２とは結合せず、Ｂ７ｈと結合すると考えられている。ＩＣＯＳは、ＣＤ２８と同様にＴ細胞に補助シグナルを伝達することが示されている。抗ＣＤ３抗体の存在下で抗ＩＣＯＳ抗体またはＢ７ｈ−ＩｇによってＩＣＯＳを架橋すると、抗ＣＤ３抗体単独に比べ増殖反応の増強が誘導される。ＩＣＯＳはＩＬ−２の産生をほとんど誘導せず、ＩＬ−４、ＩＬ−５、ＩＬ−１０、ＩＦＮ−ＩＦＮ−γ、ＴＮＦ−αの産生は増強することから、ＩＣＯＳはＴ細胞の機能分化やエフェクター機能の発現に主に働いていると考えられている（Ｓｈａｒｐｅ ｅｔ ａｌ．， Ｒｅｖ Ｉｍｍｕｎｏｌ ２，１１６，２００２）。ＩＣＯＳの配列に関連する情報は、例えば、ＧｅｎＢａｎｋ Ａｃｃｅｓｓｉｏｎ Ｎｏ．ＡＪ２７７８３２、ＡＦ４１１０５８、ＡＦ４１１０５９、ＡＬ６４５７４４等で公のデータベースに登録された配列情報として得られる。
【００４２】
ＯＸ４０（ＣＤ１３４とも呼ばれる）は、ナイーブＴ細胞では発現しておらず、活性化したＴ細胞で発現が認められる。ＴＣＲ刺激でその発現が誘導され、ＣＤ２８刺激によってさらに増強される。ＯＸ４０Ｌの発現も休止期の血球系細胞には認められず、活性化Ｂ細胞や活性化樹状細胞、血管内皮細胞に発現がみられる（Ｗａｔｔｓ ａｎｄ ＤｅＢｅｎｅｄｅｔｔｅ，Ｃｕｒｒ Ｏｐｉｎ Ｉｍｍｕｎｏｌ １１，２８６，１９９９）。ＯＸ４０は、細胞内領域にＴＲＡＦファミリー分子を結合することで下流へとシグナルを伝達する。ＯＸ４０は、ＴＲＡＦ２、ＴＲＡＦ３、ＴＲＡＦ５と結合し、ＪＮＫとＮＦκＢの活性化を誘導する（Ａｒｃｈ ａｎｄ Ｔｈｏｍｐｓｏｎ，Ｍｏｌ Ｃｅｌｌ Ｂｉｏｌ １８，５５８，１９９８；Ｋａｗａｍａｔａ ｅｔ ａｌ．，Ｊ Ｂｉｏｌ Ｃｈｅｍ ２ ７３，５８０８，１９９８）。ヒトＯＸ４０のｃＤＮＡの構造は、Ｌａｔｚａ Ｕ ｅｔ ａｌ．，Ｅｕｒｏｐｅａｎ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ ２４：６７７−６８３，１９９４に記載されている。ＯＸ４０の配列に関連する情報は、例えば、ＧｅｎＢａｎｋ Ａｃｃｅｓｓｉｏｎ Ｎｏ．ＡＪ２７７１５１、Ｘ８５２１４等で公のデータベースに登録された配列情報として得られる。
【００４３】
４−１ＢＢ（ＣＤ１３７とも呼ばれる）は、活性化したＴ細胞やＮＫ細胞に発現が見られ、Ｔ細胞（特にＣＤ８+Ｔ細胞）の活性化ならびにそのサバイバルを延長させるとされ、またＮＫ細胞やＤＣなどの活性化にも関与していると報告されている（Ｌｉｎｄａ Ｄ， ｅｔ ａｌ．，Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ １６８：３７５５−３７６２，２００２； Ｍｅｌｅｒｏ Ｉ， ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔ Ｍｅｄ． ３：６８２−６８５，１９９７）。また、リガンドである４−１ＢＢＬは、活性化Ｂ細胞、成熟樹状細胞、活性化マクロファージなどで発現する（Ｗａｔｔｓ ａｎｄ ＤｅＢｅｎｅｄｅｔｔｅ、前出）。４−１ＢＢは、ＣＤ２８と同様にＩＬ−２の産生を増強する数少ない補助シグナル分子である。４−１ＢＢは、細胞内領域にＴＲＡＦ１、ＴＲＡＦ２、ＴＲＡＦ３が結合し、ＪＮＫとＮＦκＢの活性化を誘導する（Ａｒｃｈ ａｎｄ Ｔｈｏｍｐｓｏｎ，前出；Ｓａｕｌｌｉ ｅｔ ａｌ．，Ｊ Ｅｘｐ Ｍｅｄ １８７，１８４９，１９９８）。４−１ＢＢの配列に関連する情報は、例えば、ＧｅｎＢａｎｋ Ａｃｃｅｓｓｉｏｎ Ｎｏ．ＢＤ２５０４１７、Ｕ０３３９７、Ｕ０２５６７、Ｊ０４４９２等で公のデータベースに登録された配列情報として得られる。
【００４４】
ＣＤ２７は、ナイーブＴ細胞に恒常的に発現し、活性化によってその発現量は大きく上昇する。また、活性化Ｂ細胞にも発現が認められる。リガンドであるＣＤ７０は活性化したＴ細胞とＢ細胞に一時的に発現する。また、ＣＤ２７を介する補助シグナルは細胞障害性Ｔ細胞の活性化を誘導する（Ｌｅｎｓ ｅｔ ａｌ．，Ｓｅｍｉｎ Ｉｍｍｕｎｏｌ １０，４９１，１９９８）。細胞内領域にはＴＲＡＦ２とＴＲＡＦ３、ＴＲＡＦ５が結合し、その結果、ＪＮＫとＮＦκＢの活性化が誘導される（Ａｋｉｂａ ｅｔ ａｌ．，Ｊ Ｂｉｏｌ Ｃｈｅｍ ２７３，１３３ ５３，１９９８；Ｙａｍａｍｏｔｏ ｅｔ ａｌ．，Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ １６１，４７５３，１９９８）。ＣＤ２７の配列に関連する情報は、例えば、ＧｅｎＢａｎｋ Ａｃｃｅｓｓｉｏｎ Ｎｏ．Ｍ６３９２８、Ｌ２４４９３、Ｌ２４４９４等で公のデータベースに登録された情報として得られる。
【００４５】
ＣＤ４０は、Ｂ細胞、樹状細胞、マクロファージなどの抗原提示細胞に主に発現し、ＣＤ４０を介したシグナルでＩＬ−１２の産生が誘導され、引き続くＩＦＮ−γ産生増強やＩＬ−１０の産生抑制により、Ｔｈ１優位の細胞免疫応答を惹起し、その結果、癌抗原特異的な細胞障害性Ｔ細胞（ＣＴＬ）の誘導を補助し、腫瘍拒絶に導く作用があるとされている（Ｆｒｅｎｃｈ ＲＲ， ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔ Ｍｅｄ． ５：５４８−５５３，１９９９）。ＣＤ４０の下流へのシグナル伝達因子としては、ＴＲＡＦ５およびＴＲＡＦ６が知られている（例えば、井上純一郎、「ＴＲＡＦ６によるサイトカインシグナルの伝達メカニズム」Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ Ｖｏｌ．３９ 免疫２００３ （２００２）などを参照）。ＣＤ４０の配列に関連する情報は、例えば、ＧｅｎＢａｎｋ Ａｃｃｅｓｓｉｏｎ Ｎｏ．ＡＨ００１８７７，Ｍ８３３１２等で公のデータベースに登録された配列情報として得られる。
【００４６】
ＣＤ３０（ＣＤ１５３とも呼ばれる）は、ホジキンリンパ腫のマーカー蛋白質として知られ、主に、活性化Ｔ細胞、Ｂ細胞、およびＲｅｅｄ Ｓｔｅｒｎｂｅｒｇ細胞において発現し、ＣＤ１５３（ＣＤ３０リガンド）と結合する。Ｉｎ ｖｉｔｒｏの研究では、ＣＤ３０はさまざまな活性化、分化ないしはアポトーシスを仲介していることがわかっている。ＣＤ３０は、ＴＲＡＦ２および、ＴＲＡＦ５と結合し、ＮＦ−κＢおよびＪＮＫ／ｐ３８ ＭＡＰＫを活性化することが示されている（Ａｉｚａｗａ ｅｔ ａｌ．，Ｊ Ｂｉｏｌ Ｃｈｅｍ． ２７２（４）：２０４２−５；１９９７）。ＣＤ３０の配列に関連する情報は、例えば、ＧｅｎＢａｎｋ Ａｃｃｅｓｓｉｏｎ Ｎｏ．ＡＪ２７２０２９、ＡＪ２８９１５９、ＡＪ３０８５２１、ＡＪ３０８５２２、ＡＪ４０９０１１、ＡＪ４０９０１２等で公のデータベースに登録された配列情報として得られる。
【００４７】
ＨＶＥＭは、２つの細胞リガンドである分泌されたＬＴ−α（ＴＮＦ−β）およびＬＩＧＨＴに結合することが示されている（Ｍａｕｒｉ ｅｔ ａｌ．，Ｉｍｍｕｎｉｔｙ ８（１）：２１−３０；１９９８）。また、ＨＶＥＭの細胞内領域は、ＴＲＡＦ−１、ＴＲＡＦ−２、ＴＲＡＦ−３、およびＴＲＡＦ−５と結合しており、ＨＶＥＭが免疫反応を活性化するシグナル伝達経路とリンクしていることが示されている（Ｍａｒｓｔｅｒｓ ｅｔ ａｌ．，Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ ２７２（２２）：１４０２９−１４０２３２；１９９７）。この相互作用は、ＮＦκＢおよびＡＰ−１を活性化する。ＨＶＥＭの配列に関連する情報は、例えば、ＧｅｎＢａｎｋ Ａｃｃｅｓｓｉｏｎ Ｎｏ．ＡＹ４６６１１１、ＢＤ０９１６９６等で公のデータベースに登録された配列情報として得られる。
【００４８】
本発明において使用する「リンパ球活性化因子」は、代表的には、上記のような補助刺激分子に特異的に結合して癌抗原特異的な細胞障害性Ｔ細胞を活性化する単一の分子または複数の分子の組み合わせである。好適には、本発明において使用する「リンパ球活性化因子」は、ＣＤ２８ファミリーまたはＴＮＦＲファミリーに属する補助シグナル分子に対するアゴニスティック抗体（例えば、抗ＣＤ２８抗体、抗ＩＣＯＳ抗体、抗ＯＸ４０抗体、抗４−１ＢＢ抗体、抗ＣＤ２７抗体、抗ＣＤ４０抗体、抗ＣＤ３０抗体、抗ＨＶＥＭ抗体など）または補助シグナルを抑制するＣＤ２８ファミリーに属する分子に対するアンタゴニスティック抗体（例えば抗ＣＴＬＡ−４抗体、抗ＰＤ−１抗体など）であり、とりわけ、補助シグナル分子に対するアゴニスティック抗体としては抗４−１ＢＢ抗体または抗体ＣＤ４０抗体が、そして補助シグナルを抑制するＣＤ２８ファミリーに属する分子に対するアンタゴニスティック抗体としては抗ＣＴＬＡ−４抗体が好ましく、抗４−１ＢＢ抗体と抗ＣＤ４０抗体との組み合わせまたは抗４−１ＢＢ抗体と抗ＣＤ４０抗体と抗ＣＴＬＡ−４抗体との組み合わせが最も好ましい。
【００４９】
また、ヒトの補助刺激分子に対する抗体が好ましいが、これに限定されず、他の哺乳動物、例えば、マウス、ラット、霊長類、ウマ、ブタ、ウサギ、家禽などを含む種々の種に由来する補助刺激因子に対する抗体も本発明において使用し得る。
【００５０】
上記の各抗体はモノクローナル抗体であることが好ましく、それらは当業者に周知の供給業者（例えば、ＢＤ Ｐｈｒａｍｉｎｇｅｎ、ｅＢｉｏｓｃｉｅｎｃｅ等）から市販されているか、または当業者に周知の方法（例えば、ハイブリドーマ法）によって作製され得る。
【００５１】
本明細書中、「リンパ球活性化療法」とは、上記リンパ球活性化因子を被験体に投与することによって癌を治療する方法をいうものとする。また、「リンパ球活性化剤」とは、リンパ球活性化因子を含有する薬剤をいう。
【００５２】
本明細書中、「癌」、「癌性」または「悪性」という用語は、典型的には調節されない細胞成長を特徴とする、哺乳動物における生理学的状態をいうために用いる。癌の例には、腺癌を含む癌腫、リンパ腫、芽細胞腫、メラノーマ、肉腫、および白血病が含まれるが、これらに限定されない。このような癌のより特定の例には、扁平上皮細胞癌、小細胞肺癌、非小細胞肺癌、胃腸癌、ホドキンおよび非ホドキンリンパ腫、リンパ腫、膵臓癌、神経膠芽腫、子宮頚癌、卵巣癌、肝癌および肝細胞種などの肝臓癌、膀胱癌、乳癌、大腸癌、膠芽細胞腫、子宮内膜癌、唾液腺癌、腎細胞癌およびウィルム腫瘍などの腎臓癌、基底細胞癌種、メラノーマ、前立腺癌、産卵口癌、甲状腺癌、精巣癌、食道癌および様々な種類の頭部および頸部の癌が含まれる。
【００５３】
本明細書中、「化学治療剤」という用語は、当該分野で通常使用される意味で使用され、癌の治療に有用な化合物であって、細胞機能を阻害もしくは抑制、および／または細胞の崩壊を引き起こすものを指す。化学治療剤の例には、アドリアマイシン、ドキソルビシン、エピルビシン、５−フルオロウラシル、シトシンアラビノシド（「Ａｒａ−Ｃ」）、シクロホスファミド、チオテパ、ブスルファン、シトキシン、タキソイド類、例えばパクリタキセル（タキソール， Ｂｒｉｓｔｏｌ−Ｍｙｅｒｓ Ｓｑｕｉｂｂ Ｏｎｃｏｌｏｇｙ， Ｐｒｉｎｃｅｔｏｎ， ＮＪ社製）およびドキセタキセル（タキソテール， Ｒｈｏｎｅ−Ｐｏｕｌｅｎｃ Ｒｏｒｅｒ， Ａｎｔｏｎｙ， Ｒｒａｎｃｅ社製）、トキソテール、メトトレキセート、シスプラチン、メルファラン、ＣＰＴ−１１、ビンブラスチン、ブレオマイシン、エトポシド、イホスファミド、マイトマイシンＣ、ミトキサントロン、ビンクリスチン、ビノレルビン、カルボプラチン、テニポシド、ダウノマイシン、カルミノマイシン、アミノプテリン、ダクチノマイシン、マイトマイシン、エスペラミシン（米国特許第４６７５１８７号参照）、メルファラン、および他の関連したナイトロジェンマスタードが含まれる。またこの定義には、腫瘍に対するホルモン作用を調節または阻害するように働くホルモン剤、例えばタモキシフェンおよびオナプリストーン（ｏｎａｐｒｉｓｔｏｎｅ）も含まれる。
【００５４】
本明細書中、「放射線療法」という用語は、当該分野で通常使用される意味で使用され、放射性アイソトープ（例えば、Ｉ131、Ｉ125、Ｙ90、およびＲｅ186）を使用して、細胞機能を阻害もしくは抑制するか、および／または細胞の崩壊を引き起こすことによって癌を治療する療法をいうものとする。
【００５５】
（抗体）
本発明に使用され得る抗体は、ポリクローナル抗体、モノクローナル抗体、多重特異的抗体、ヒト抗体、ヒト化抗体またはキメラ抗体、単鎖抗体、Ｆａｂフラグメント、Ｆ（ａｂ’）フラグメント、Ｆａｂ発現ライブラリーによって産生されるフラグメント、抗イディオタイプ（抗Ｉｄ）抗体、および上記のいずれかのエピトープ結合フラグメントを含むが、これらに限定されない。好ましくは、モノクローナル抗体が本発明において使用される。
【００５６】
本明細書中、ある分子に対する「アゴニスティック抗体」という場合、その分子に特異的に結合し、その所定の生物学的活性を誘導する能力を活性化または増大させる抗体のことを意味する。例えば、ＤＲ５に対するアゴニスティック抗体は、ＤＲ５に結合した場合に、カスパーゼ依存性のアポトーシスを誘導する能力を活性化または増大させるＤＲ５に対する抗体である。ここで、カスパーゼ依存性のアポトーシスを誘導する能力は、ＴＲＡＩＬ−ＤＲ５というレセプター−リガンド対が形成された際に発揮されるＤＲ５の本来の生物学的活性に対応する。これに対してその分子の所定の生物学的活性を誘導する能力を減少させる抗体を「アンタゴニスティック抗体」とよぶ。本発明に使用する特定の分子に対するアゴニスティック抗体またはアンタゴニスティック抗体は、モノクローナル抗体であることが好ましく、それらは当業者に周知の供給業者（例えば、ＢＤ Ｐｈｒａｍｉｎｇｅｎ、ｅＢｉｏｓｃｉｅｎｃｅ等）から市販により入手し得るか、または当該分野で周知の技術により作製し、同定することができる。
【００５７】
本明細書中、「抗体」とは、免疫グロブリン分子および免疫グロリン分子の免疫学的に活性な部分、すなわち、免疫特異的に抗原に結合する抗原結合部位を含む分子をいうものとする。本発明の免疫グロブリン分子は、免疫グロブリン分子の任意の型（例えば、ＩｇＧ、ＩｇＥ、ＩｇＭ、ＩｇＤ、ＩｇＡ、およびＩｇＹ）、任意のクラス（例えば、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＡ１およびＩｇＡ２）または免疫グロブリン分子のサブクラスであり得る。
【００５８】
最も好ましくは、抗体は、ヒト抗原結合抗体フラグメントであり、これには、Ｆａｂ、Ｆａｂ’およびＦ（ａｂ’）2、Ｆｄ、単鎖Ｆｖｓ（ｓｃＦｖ）、単鎖抗体、ジスルフィド結合Ｆｖｓ（ｓｄＦｖ）ならびにＶLまたはＶHドメインのいずれかを含むフラグメントが挙げられるがこれらに限定されない。単鎖抗体を含む抗原結合抗体フラグメントは、可変領域を単独で、または以下に列挙するものの全体もしくは部分と組み合わせて含み得る：ヒンジ領域、ＣＨ１ドメイン、ＣＨ２ドメインおよびＣＨ３ドメイン。また、可変領域とヒンジ領域、ＣＨ１ドメイン、ＣＨ２ドメインおよびＣＨ３ドメインとの任意の組み合わせもまた含む抗原結合フラグメントもまた本発明において使用され得る。本発明に使用する抗体は、鳥類および哺乳動物を含む任意の動物起源由来であり得る。好ましくは、この抗体は、ヒト、ネズミ、ロバ、シップウサギ（ｓｈｉｐ ｒａｂｂｉｔ）、ヤギ、モルモット、ラクダ、ウマ、またはニワトリ由来である。
【００５９】
本発明に使用する抗体は、一重特異的、二重特異的、三重特異的またはより多くの多重特異性の抗体であり得る。多重特異的な抗体は、目的のポリペプチドの異なるエピトープに対して特異的であり得るか、または目的のポリペプチドおよび異種のエピトープ（例えば、異種ポリペプチドもしくは固体支持体物質）の両方に特異的であり得る。例えば、ＰＣＴ公開ＷＯ ９３／１７７１５；同ＷＯ ９２／０８８０２；同ＷＯ ９１／００３６０；同ＷＯ ９２／０５７９３；Ｔｕｔｔら、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１４７：６０−６９（１９９１）；米国特許第４，４７４，８９３号、同第４，７１４，６８１号、同第４，９２５，６４８号、同第５，５７３，９２０号、同第５，６０１，８１９号；Ｋｏｓｔｅｌｎｙら、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１４８：１５４７−１５５３（１９９２）を参照のこと。
【００６０】
本発明に使用する抗体は、当業者に周知の供給業者から市販されているものを使用し得るが、当該分野で公知の任意の適切な方法によっても産生され得る。例えば、目的の抗原に対するポリクローナル抗体は、当該分野で周知の種々の手順によって産生され得る。例えば、目的のポリペプチドは、種々の宿主動物（ウサギ、マウス、ラットなどを含むがこれらに限定されない）に投与されて、抗原に対して特異的なポリクローナル抗体を含む血清の産生を誘導し得る。種々のアジュバントが、宿主種に依存して、免疫学的応答を増加させるために使用され得、そしてこれにはフロイント（完全および不完全）、水酸化アルミニウムのようなミネラルゲル、リゾレシチンのような界面活性物質、プルロニックポリオール、ポリアニオン、ペプチド、油エマルジョン、キーホールリンペットヘモシアニン、ジニトロフェノール、ならびにＢＣＧ（カルメット−ゲラン杆菌）およびｃｏｒｙｎｅｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｐａｒｖｕｍのような潜在的に有用なヒトアジュバントを含むが、これらに限定されない。このようなアジュバントはまた、当該分野で周知である。
【００６１】
モノクローナル抗体は、ハイブリドーマ、組換え、およびファージディスプレイ技術、またはそれらの組み合わせの使用を含む当該分野で公知の広範な種々の技術を用いて調製され得る。例えば、モノクローナル抗体は、当該分野で公知のハイブリドーマ技術を使用して産生され得、その方法の例としては、Ｈａｒｌｏｗら、Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ，（Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｐｒｅｓｓ，第２版、１９８８）；Ｈａｍｍｅｒｌｉｎｇら、Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ ａｎｄ Ｔ−Ｃｅｌｌ Ｈｙｂｒｉｄｏｍａｓ ５６３−６８１（Ｅｌｓｅｖｉｅｒ，Ｎ．Ｙ．１９８１）に記載の方法が参照される。本明細書中、用語「モノクローナル抗体」とは、ハイブリドーマ技術を通して生成された抗体に限定されない。用語「モノクローナル抗体」とは、任意の真核生物、原核生物、またはファージクローンを含む単一のクローンに由来する抗体をいい、そしてそれが生成される方法に由来する抗体ではない。従って、用語「モノクローナル抗体」は、ハイブリドーマ技術を通じて産生される抗体に限定されない。モノクローナル抗体は、ハイブリドーマおよび組換えならびにファージディスプレイ技術の使用を含む、当該分野で公知の広範な種々の技術を使用して調製され得る。
【００６２】
ハイブリドーマ技術を用いて特異的抗体を産生およびスクリーニングする方法は、当該分野で慣用的かつ周知である。手短に言えば、マウスが、目的のポリペプチドまたはそのようなペプチドを発現する細胞を用いて免疫され得る。一旦免疫応答が検出される（例えば、抗原に特異的な抗体がマウスの血清中に検出される）と、マウスの脾臓を収集しそして脾細胞を単離する。次に、その脾細胞を周知の技術によって任意の適切な骨髄腫細胞（例えば、ＡＴＣＣから入手可能な細胞株ＳＰ２０由来の細胞）に融合させる。ハイブリドーマを限界希釈によって選択およびクローン化する。次に、ハイブリドーマクローンを、目的のポリペプチドを結合し得る抗体を分泌する細胞について、当該分野で公知の方法によってアッセイする。一般的に高いレベルの抗体を含む腹水が、陽性ハイブリドーマクローンを用いてマウスを免疫させることによって、産生され得る。
【００６３】
従って、本発明に使用される抗体は、モノクローナル抗体ならびに本発明に使用する抗体を分泌するハイブリドーマ細胞を培養する工程を包含する方法によって産生され得る。ここで、好ましくは、このハイブリドーマは、骨髄腫細胞と本発明の抗原で免疫したマウスから単離された脾細胞とを融合させ、次いで目的のポリペプチドを結合し得る抗体を分泌するハイブリドーマクローンについて、融合物から生じるハイブリドーマをスクリーニングすることによって生成される。
【００６４】
特定のエピトープを認識する抗体フラグメントは、公知の技術によって生成され得る。例えば、本発明のＦａｂおよびＦ（ａｂ’）2フラグメントは、（Ｆａｂフラグメントを生成するために）パパインまたは（Ｆ（ａｂ’）2フラグメントを産生するために）ペプシンのような酵素を使用して、免疫グロブリン分子のタンパク質分解切断によって産生され得る。Ｆ（ａｂ’）2フラグメントは、可変領域、軽鎖定常領域および重鎖のＣＨ１ドメインを含む。
【００６５】
完全なヒト抗体は、ヒト患者の治療的処置に対して特に所望される。ヒト抗体は、ヒト免疫グロブリン配列に由来する抗体ライブラリーを用いた上記のファージディスプレイ法を含む当該分野で公知の種々の方法により作製され得る（米国特許第４，４４４，８８７号および同第４，７１６，１１１号；ならびにＰＣＴ公開ＷＯ ９８／４６６４５、ＷＯ ９８／５０４３３、ＷＯ ９８／２４８９３、ＷＯ ９８／１６６５４、ＷＯ ９６／３４０９６、ＷＯ ９６／３３７３５、およびＷＯ ９１／１０７４１もまた参照）。
【００６６】
（製剤）
本発明において使用されるＴＮＦ関連細胞死誘導因子およびリンパ球活性化因子は、好ましくは担体中で用いられる。適切な担体とそれらの製剤は、Ｏｓｌｏらにより編集された、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ， １６ｔｈ ｅｄ．， １９８０， Ｍａｃｋ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ Ｃｏ．に記載されている。典型的には、適量の製薬的に許容可能な塩が、製剤を等浸透圧にするために製剤において使用される。担体の例には、生理食塩水、リンガー液およびデキストロース液が含まれる。溶液のｐＨは、好ましくは約５から８、さらに好ましくは約７．４から７．８である。さらに担体には、抗体を含む固体疎水性ポリマーの半透性マトリックス等の徐放性製剤が含まれ、このマトリックスは、例えばフィルム状、リポソーム状またはマイクロ粒子状等の成形物の形態をしている。例えば投与される抗体の投与経路および濃度によっては、ある種の担体がより好ましくなることは、当業者には明らかである。担体は凍結乾燥または水溶液の形態であってもよい。
【００６７】
許容できる担体、賦形剤または安定剤は、用いる投与量および濃度ではレシピエントに対して無毒性であり、リン酸、クエン酸および他の有機酸等の緩衝液；アスコルビン酸およびメチオニンを含む抗酸化剤；防腐剤（オクタデシルジメチルベンジルアンモニウムクロリド；塩化ヘキサメトニウム；塩化ベンズアルコニウム；塩化ベンゼトニウム；フェノール、ブチルまたはベンジルアルコール；アルキルパラベン類、例えばメチルまたはプロピルパラベン；カテコール；レゾルシノール；シクロヘキサノール；３−ペンタノール；およびｍ−クレゾール）；低分子量（残基数１０個未満）ポリペプチド；血清アルブミン、ゼラチンまたは免疫グロブリン等のタンパク質；ポリビニルピロリドン等の親水性重合体；グリシン、グルタミン、アスパラギン、アルギニン、ヒスチジンまたはリシン等のアミノ酸；グルコース、マンノースまたはデキストリン等の単糖類、二糖類または他の炭水化物、ＥＤＴＡ等のキレート剤、スクロース、マンニトール、トレハロースまたはソルビトール等の糖類、ナトリウム等の塩形成対イオン；金属錯体（例えば、Ｚｎ−タンパク質錯体）；および／またはＴＷＥＥＮ（登録商標）、ＰＬＵＲＯＮＩＣＳＴＭまたはポリエチレングリコール（ＰＥＧ）等の非イオン性界面活性剤を含む。
【００６８】
また、製剤は、治療される特定の効能に必要な一以上の活性化合物、好ましくは互いに悪影響を及ぼさない相補的活性を有するものを含有し得る。また、本発明において使用されるＴＮＦ関連細胞死誘導因子またはリンパ球活性化因子は、例えばコアセルベーション法または界面重合により調製されたマイクロカプセル、例えばそれぞれヒドロキシメチルセルロースまたはゼラチン−マイクロカプセルおよびポリ−（メチルメタクリレート）マイクロカプセルに、コロイド状薬物送達系（例えば、リポソーム、アルブミンミクロスフィア、マイクロエマルション、ナノ粒子およびナノカプセル）またはマクロエマルションに捕捉することができる。このような技術はＲｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ， １６ｔｈ ｅｄｉｔｉｏｎ， Ｏｓｏｌ，Ａ．編；１９８０に開示されている。
【００６９】
インビボ投与に使用される製剤は滅菌されていなくてはならない。これは、滅菌フィルター膜を通す濾過により容易に達成される。徐放性調製物を調製してもよい。徐放性調製物の適切な例には、抗体を含む固体疎水性重合体の半透性マトリックスが含まれ、このマトリックスはフィルムまたはマイクロカプセル等の成形品の形態である。徐放性マトリックスの例には、ポリエステル、ヒドロゲル（例えばポリ（２−ヒドロキシエチル−メタクリレート）、またはポリ（ビニルアルコール）、ポリラクチド（米国特許第３７７３９１９号）、Ｌ−グルタミン酸とγ−エチル−Ｌ−グルタマートのコポリマー、非分解性エチレン−酢酸ビニル、分解性の乳酸−グリコール酸コポリマー、例えばＬＵＰＲＯＮ ＤＥＰＯＴTM（乳酸−グリコール酸コポリマーおよび酢酸ロイプロリドからなる注入可能なミクロスフィア）、およびポリ−３−ヒドロキシ酪酸が含まれる。エチレン−酢酸ビニルや乳酸−グリコール酸等のポリマーは１００日以上分子を放出できるが、特定のヒドロゲルはより短い時間タンパク質を放出する。
【００７０】
（治療の形態）
本発明の癌治療剤は、周知の方法に従い、ボーラスとしての静脈内投与、または一定期間にわたる連続的な注入、筋肉内、腹腔内、脳脊髄内、皮下、関節内、骨液内、くも膜腔内、経口、局所的、病巣内または吸入（エアゾル化された鼻腔内、肺内への）の経路により、および持続性または徐放性の方法により、哺乳類動物、好ましくはヒトへ投与される。場合によっては、投与は、様々な市販の装置を使用するミニポンプ流入によって実施することもできる。
【００７１】
本発明の癌治療剤の投与の有効な用量とスケジュールは、経験的に決定することができ、そのような決定を行うことは当業者の技量の範囲にある。単独に使用される薬剤の効果的な用量または量は、各有効成分それぞれ一日当り約１μｇ／ｋｇから約１００ｍｇ／ｋｇ体重あるいはそれ以上までの範囲であると現在は考えられる。用量の種間スケーリングは、例えば、Ｍｏｒｄｅｎｔｉら， Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔ． Ｒｅｓ． ８：１３５１；１９９１に開示されているような当該分野で知られている方法で実施することができる。
【００７２】
本発明の細胞死誘導療法とリンパ球活性化療法との併用療法においては、本発明において使用するＴＮＦ関連細胞死誘導因子とリンパ球活性化因子とは、同時または時間間隔をあけて被験体に投与され得る。例えば、ＴＮＦ関連細胞死誘導因子をはじめに被験体に投与し、続いてリンパ球活性化因子を投与する。また、別の好ましい態様では、ＴＮＦ関連細胞死誘導因子とリンパ球活性化因子とを最初に併用投与し、その後の投与スケジュールにおいて、経時的にＴＮＦ関連細胞死誘導因子のみ投与量を減少させるか、またはＴＮＦ関連細胞死誘導因子のみ投与を中止してもよい。
【００７３】
本発明の癌治療剤のインビボ投与が用いられる場合、正常な投与量は、投与経路に応じて、哺乳動物の体重当たり各有効成分それぞれ１日に約１０ｎｇ／ｋｇから１００ｍｇ／ｋｇまで、好ましくは約１μｇ／ｋｇ／日から１０ｍｇ／ｋｇ／日である。特定の用量および輸送方法の指針は文献に与えられている；例えば、米国特許第４，６５７，７６０号、第５，２０６，３４４号、または第５，２２５，２１２号参照。異なる製剤が異なる治療用化合物および異なる疾患に有効であること、例えば一つの器官または組織を標的とする投与には、他の器官または組織とは異なる方式で輸送することが必要であることが予想される。当業者であれば、投与されなければならない薬剤の用量が、例えば、薬剤を受入れる哺乳動物、投与経路、および哺乳動物に投与されている他の薬剤または治療物に依存して変わりうることは理解できるであろう。
【００７４】
細胞の型および／または病気の重症度に応じて、例えば一または複数の別個の投与または連続注入の何れであれ、各有効成分それぞれ約１μｇ／ｋｇないし１５ｍｇ／ｋｇ（例えば０．１−２０ｍｇ／ｋｇ）の抗体が患者への最初の候補用量である。上述した要因に応じて、典型的な一日の投与量は約１μｇ／ｋｇから１００ｍｇ／ｋｇあるいはそれ以上の範囲である。数日間またはそれ以上の繰り返し投与の場合、状態によっては、病気の徴候の望ましい抑制が生じるまで処置を維持する。
【００７５】
場合によっては、本発明の癌治療剤の投与に先立ち、哺乳動物または患者を本発明において使用するＴＮＦ関連細胞死誘導因子および／またはリンパ球活性化因子のレベルまたは活性を決定するためにテストすることができる。そのようなテストは、血清サンプルまたは末梢血の白血球のエライザまたはＦＡＣＳによって実施してもよい。
【００７６】
さらなる治療法を本方法において使用することも考えられる。一または複数の他の治療法には、これらに限定されるものではないが、当該技術分野において公知であり、放射線療法、サイトカイン、成長阻害剤、化学治療剤、細胞障害剤、チロシンキナーゼ阻害因子、ラスファルネシルトランスフェラーゼ阻害因子、血管形成阻害因子、およびサイクリン依存性キナーゼ阻害因子の投与が含まれる。さらに、治療法は、Ｒｉｔｕｘａｎ（登録商標）またはＨｅｒｃｅｐｔｉｎ（登録商標）などの腫瘍抗原を標的とする治療的抗体並びに抗ＶＥＧＦなどの抗血管形成抗体に基づく。
【００７７】
化学治療剤に対する調製法および用量スケジュールは、製造者の指示に従って使用されるか、熟練した実務家により経験的に決定される。そのような化学療法に対する調製法および用量スケジュールはまたＣｈｅｍｏｔｈｅｒａｐｙ Ｓｅｒｖｉｃｅ， Ｍ．Ｃ．Ｐｅｒｒｙ編， Ｗｉｌｌｉａｍｓ ＆； Ｗｉｌｋｉｎｓ， Ｂａｌｔｉｍｏｒｅ， ＭＤ；１９９２にも記載されている。また、化学療法剤は、例えばアンタゴニストの投与に先行し、またはその後に行い、またはそれらと共に与えられてもよい。また、アンタゴニストは、タモキシフェンなどの抗エストロジェン化合物、またはオナプリストン（ｏｎａｐｒｉｓｔｏｎｅ）（欧州特許６１６８１２号を参照）などの抗プロゲステロンと、このような分子に対して既知の用量で組み合わせてもよい。
【００７８】
（キット）
本発明の他の実施態様では、前述した疾患の治療に有用な物質を含有するキットが提供される。キットは、代表的には、容器およびラベルを含んでなる。適切な容器には、例えば、ボトル、バイアル、シリンジ、試験管等が含まれるが、これらに限定されない。容器はガラスまたはプラスチックのような様々な材料で形成することができる。容器は病状の治療に有効な組成物を収容しており、滅菌した出入口を有している（例えば、容器は皮下注射針により貫通可能なストッパーを具備する静脈溶液用のバックまたはバイアルであってよい）。組成物中の活性剤は、ＴＮＦ関連細胞死誘導因子およびリンパ球活性化因子である。容器上のまたは容器に伴うラベルには、組成物が、選択された病状の治療に使用されることが示されている。製造品は、製薬的に許容可能なバッファー、例えばリン酸緩衝生理食塩水、リンガル液およびブドウ糖液を収容する第２の容器を更に具備する。更に、他のバッファー、希釈剤、フィルター、針、シリンジ、および使用指示書を含むパッケージ挿入物を含む、市販および使用者の観点から望ましい他の材料を更に含んでいてもよい。
【００７９】
以下、実施例を用いて本発明をより具体的に説明するが、本発明の範囲はこれらの実施例によって限定されない。
【実施例】
【００８０】
（実施例１）
材料および方法
１．実験動物
６−８週齢ＢＡＬＢ／ｃマウス、ＣＢ１７−ｓｃｉｄ（ＳＣＩＤ）マウスを日本チャールズ・リバー（株）より購入した。全てのマウスはＳＰＦ（ｓｐｅｃｉｆｉｃ ｐａｔｈｏｇｅｎ−ｆｒｅｅ）施設で飼育し、順天堂大学医学部の動物実験に関する指針に従い実験を行った。
【００８１】
２．実験腫瘍
ＢＡＬＢ／ｃマウス由来ＴＲＡＩＬ感受性乳癌４Ｔ１（Ｐｕｌａｓｋｉ ＢＡ， ｅｔ ａｌ： Ｒｅｄｕｃｔｉｏｎ ｏｆ ｅｓｔａｂｌｉｓｈｅｄ ｓｐｏｎｔａｎｅｏｕｓ ｍａｍｍａｒｙ ｃａｒｃｉｎｏｍａ ｍｅｔａｓｔａｓｅｓ ｆｏｌｌｏｗｉｎｇ ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒａｐｙ ｗｉｔｈ ｍａｊｏｒ ｈｉｓｔｏｃｏｍｐａｔｉｂｉｌｉｔｙ ｃｏｍｐｌｅｘ ｃｌａｓｓII ａｎｄ Ｂ７．１
ｃｅｌｌ−ｂａｓｅｄ ｔｕｍｏｒ ｖａｃｃｉｎｅｓ． Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ ５８（７）： １４８６−１４９３（１９９８））、ＴＲＡＩＬ感受性腎癌Ｒ３３１−ｍｏｃｋおよびカスパーゼ依存性アポトーシス耐性となるＦＬＩＰ遺伝子を導入したＲ３３１−ＦＬＩＰ（ＴＲＡＩＬ耐性）（Ｓｅｋｉ Ｎ．， ｅｔ ａｌ． Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ． ６３： ２０７−２１３ （２００３））を用いた。腫瘍細胞は３７℃、５％ＣＯ2存在下で１０％ＦＢＳ含有ＲＰＭＩ１６４０倍地にて培養・継代し、実験に用いた。
【００８２】
３．抗体
アゴニスティック抗マウスＤＲ５モノクローナル抗体（ＭＤ５−１）（Ｔａｋｅｄａ Ｋ， ｅｔ ａｌ．， Ｊ Ｅｘｐ Ｍｅｄ １９９（４） ４３７−４４８（２００４））、アゴニスティック抗マウスＣＤ４０モノクローナル抗体（ＦＧＫ４５）（Ｒｏｌｉｎｋ Ａ．， ｅｔ ａｌ． Ｉｍｍｕｎｉｔｙ ５： ３１９−３３０ （１９９６））、アゴニスティック抗マウス４−１ＢＢモノクローナル抗体（３Ｈ３）（Ｓｈｕｆｏｒｄ Ｗ．Ｗ．， ｅｔ ａｌ． Ｊ． Ｅｘｐ． Ｍｅｄ． １８６： ４７−５５ （１９９７））、アンタゴニスティク抗マウスＣＴＬＡ−４モノクローナル抗体（ＵＣ１０−４Ｆ１０）（Ｗａｌｕｎａｓ Ｔ．Ｌ．， ｅｔ ａｌ， Ｉｍｍｕｎｉｔｙ １：４０５−４１３ （１９９４））を用いた。またコントロール抗体として抗ハムスターコントロールＩｇ（ＵＣ８−１Ｂ９）ならびに抗ラットＩｇＧ2a（Ｒ３５−９５； ＢＤ Ｐｈａｒｍｉｎｇｅｎ）を用いた。ＭＤ５−１、ＦＧＫ４５、３Ｈ３、ＵＣ８−１Ｂ９は本発明者らの研究室においてハイブリドーマ法で作製し（例えば、Ｈａｒｌｏｗら、Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ，（Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｐｒｅｓｓ，第２版、１９８８）；Ｈａｍｍｅｒｌｉｎｇら、Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ ａｎｄ Ｔ−Ｃｅｌｌ Ｈｙｂｒｉｄｏｍａｓ ５６３−６８１（Ｅｌｓｅｖｉｅｒ，Ｎ．Ｙ．１９８１）を参照）、実験に用いた。
【００８３】
４．マウス皮下腫瘍モデル
ＢＡＬＢ／ｃマウスの背部皮下に４Ｔ１腫瘍細胞を接種した。腫瘍塊の大きさが３×３ｍｍ2−８×８ｍｍ2に到達した時点から各抗体をそれぞれ１００μｇずつ投与開始し、３日おきに計４回腹腔内投与した。腫瘍塊の大きさは１−２日おきにキャリパーで計測、長径×短径（ｍｍ2）で算出し、各群５−１０匹の平均±ＳＤ（ｍｍ2）で表記した。
【００８４】
５．腫瘍特異的拒絶反応の評価
ナイーブＢＡＬＢ／ｃマウスおよび治療により腫瘍拒絶したマウスに４Ｔ１腫瘍を再度背部皮下に接種し、その増殖を比較検討した。また、ナイーブＢＡＬＢ／ｃマウスおよび治療により４Ｔ１腫瘍を拒絶したマウスから採取した脾臓Ｔ細胞５×１０7個を、４Ｔ１腫瘍細胞を２×１０5個皮下接種した後２日目のナイーブＳＣＩＤマウスに移入し腫瘍増殖を比較検討した。
【００８５】
更にＲ３３１−ｍｏｃｋあるいはＲ３３１−ＦＬＩＰをＢＡＬＢ／ｃマウスに接種し、その後腫瘍塊の大きさが３×３ｍｍ2に到達した時点で上記した抗体を投与し、腫瘍の増殖を比較検討した。またＲ３３１−ｍｏｃｋおよびＲ３３１−ＦＬＩＰをそれぞれ右側、左側背部皮下に同時に接種し、３×３ｍｍ2に到達した時点で上記した抗体を投与し、腫瘍の増殖を比較検討した。
【００８６】
（実施例２）
Ｍｉｘ Ｔｈｅｒａｐｙの治療効果
腫瘍塊の大きさが３×３ｍｍ2に到達したところで、単独投与群、２抗体併用投与群、３抗体併用投与（Ｍｉｘ ｔｈｅｒａｐｙ）群、コントロール抗体投与群にわけ、個々のマウスにおける腫瘍塊の大きさの推移を比較した。図１は、その結果を示す。なお、図中の下向き矢印は、抗体が投与された時点を示す（以下で説明する他の図においても同様）。抗４−１ＢＢ抗体を含む群で、ある程度の腫瘍拒絶が誘導されたが（単独または抗ＣＤ４０抗体との併用で１０例中２例、抗ＤＲ５抗体との併用で１０例中４例）、３抗体併用投与（Ｍｉｘ ｔｈｅｒａｐｙ）により相乗的な効果がみられ、腫瘍拒絶率８０％（１０例中８例）と有意に高い腫瘍拒絶の誘導がみられた（図１および表１）。
【表１】
【００８７】
（実施例３）
Ｍｉｘ Ｔｈｅｒａｐｙにおける腫瘍塊の大きさの違いによる治療効果
次に、より進行した状態での治療効果を検討した。腫瘍塊の大きさがそれぞれ３×３ｍｍ2、５×５ｍｍ2、８×８ｍｍ2に達したところで治療を開始した。３×３ｍｍ2と同様に５×５ｍｍ2においても拒絶率８０％と高い治療効果が得られた。また８×８ｍｍ2でも腫瘍拒絶を誘導することはできなかったものの、コントロール抗体投与群と比較して有意な腫瘍縮小効果ならびに増殖抑制効果がみられた（図２および表１）。この結果は、臨床でヒトの癌を治療する際には、ある程度進行した状態で発見されることが多いことから、Ｍｉｘ ｔｈｅｒａｐｙは臨床応用において非常に有用であることを示す。
【００８８】
（実施例４）
抗ＤＲ５抗体単回投与での治療効果
また抗ＤＲ５抗体のみ投与回数を初回の１回のみにし、他の薬剤（抗ＣＤ４０抗体および抗４−１ＢＢ抗体）を４回投与して、その抗腫瘍効果を検討した（（図３中「Ｍｉｘ（１−４−４）」として示す））。図３に示されるように、抗ＤＲ５抗体の投与回数を初回の１回のみにしても、抗ＤＲ５抗体を他の薬剤と同様に４回投与した実施例３の場合と同様の結果（拒絶率８０％）が得られた。このことから腫瘍に対するアポトーシス誘導は重要であるものの、アポトーシス誘導のための腫瘍抗原の提供は、治療初期（１回の投与による誘導）で十分であることが示された。なお、いまだ不明な点も多いが、リコンビナントＴＲＡＩＬの毒性についての報告が散見される（Ｊｏ Ｍ ｅｔ ａｌ．， Ｎａｔ． Ｍｅｄ．６：５６４−５６７（２０００）；Ｑｉｎ Ｊ ｅｔ ａｌ．， Ｎａｔ Ｍｅｄ． ７：３８５−３８６（２００１））。しかし、今回の実験では明らかな毒性は観察されず、また投与回数が減量できることで、ＴＲＡＩＬの毒性を減少させることも可能であると考えられた。
【００８９】
腫瘍特異的細胞障害性Ｔ細胞の誘導
更に初回接種腫瘍を拒絶してから６０日後のマウスに同じ腫瘍を再接種したところ、完全な拒絶が誘導された（図４Ａ）。また初回腫瘍拒絶マウスから採取した脾臓Ｔ細胞５×１０7細胞を４Ｔ１腫瘍接種２日後のＳＣＩＤマウスに導入したところ、有意に腫瘍増殖抑制効果がみられた（図４Ｂ）。また、ｉｎ ｖｉｔｒｏの実験でＣＴＬの存在を確認している。これらの結果から、以前報告した様に抗ＤＲ５抗体単独投与で起きうるＣＴＬの誘導が、補助刺激分子に対するアゴニスティック抗体の併用により効率的に増強され、腫瘍拒絶に導いていることが示唆された。
【００９０】
（実施例５）
ＴＲＡＩＬ感受性株ならびに非感受性株に対する腫瘍特異的細胞障害性Ｔ細胞の誘導による効果
ＴＲＡＩＬ感受性腎癌であるＲ３３１にカスパーゼ依存性のアポトーシスに耐性のＦＬＩＰを導入しＴＲＡＩＬ耐性となった腫瘍（Ｒ３３１−ＦＬＩＰ）と、ＴＲＡＩＬ感受性を維持しているｍｏｃｋ腫瘍（Ｒ３３１−ｍｏｃｋ）でＭｉｘ ｔｈｅｒａｐｙの効果を検討した。Ｒ３３１−ＦＬＩＰでも補助刺激分子に対する抗体投与の効果であると思われる、ある程度の腫瘍増殖抑制効果がみられたが、拒絶はまったく誘導されなかったのに対し、Ｒ３３１−ｍｏｃｋでは８０％の拒絶が誘導された（図５Ａ。次にＲ３３１−ｍｏｃｋ、ＦＬＩＰをそれぞれ右側、左側背部皮下に同時に接種し、Ｍｉｘ ｔｈｅｒａｐｙの効果を検討した。Ｒ３３１−ｍｏｃｋだけでなくＲ３３１−ＦＬＩＰにも、ほぼ同時に拒絶（８０％の拒絶）が誘導されたことから、ＣＴＬによるＴＲＡＩＬ以外のＦａｓＬやｐｅｒｆｏｒｉｎを介した経路での変異株に対する腫瘍拒絶は、極めて速やかに行われていることが示唆された（図５Ｂ）。ＴＲＡＩＬレセプターをターゲットとした治療戦略においてＴＲＡＩＬ非感受性腫瘍の出現とそのエスケープによる腫瘍腫大が問題となるが（Ｑｉｎ Ｊ ｅｔ ． Ｎａｔ Ｍｅｄ． ７：３８５−３８６（２００１））、今回得られた結果から、Ｍｉｘ ｔｈｅｒａｐｙは一部の感受性腫瘍を足がかりとして、腫瘍細胞全体を免疫学的に特異的に捕捉することで腫瘍全体を根絶することが可能であることが示された。
【００９１】
（実施例６）
Ｍｉｘ Ｔｈｅｒａｐｙに対する抗ＣＴＬＡ−４モノクローナル抗体投与併用の治療効果
４Ｔ１腫瘍２×１０5細胞をマウスに皮下接種し、腫瘍サイズが５×５ｍｍ2に到達した時点で、Ｍｉｘ ｔｈｅｒａｐｙ群、Ｍｉｘ ｔｈｅｒａｐｙ ＋ 抗ＣＴＬＡ−４抗体投与群、およびコントロール抗体投与群に分け、個々のマウスの腫瘍増殖を比較した（ｎ＝１０）。
【００９２】
図６に示すように、コントロール群（図６Ａを参照）では、腫瘍の治療効果は全く見られなかったが、Ｍｉｘ ｔｈｅｒａｐｙ群では、顕著な腫瘍増殖抑制効果（１３例中９例で拒絶）が観察された（図６Ｂを参照）。そしてさらに特筆すべきことは、Ｍｉｘ ｔｈｅｒａｐｙと抗ＣＴＬＡ−４抗体投与とを併用した場合には、Ｍｉｘ ｔｈｅｒａｐｙのみの場合と比較して、さらに良好な腫瘍増殖抑制効果が見られ、全ての場合において（１３例中１３例）腫瘍拒絶が観察された（図６Ｃを参照）。このように、Ｔ細胞の活性を抑制するというＣＴＬＡ−４の作用効果を抑制する因子（抗ＣＴＬＡ−４アンタゴニスティック抗体（ブロッキング抗体））を併用することによって、Ｍｉｘ ｔｈｅｒａｐｙの治療効果がさらに高められることが示された。
【００９３】
（考察）
上記実施例により具体的に示したように、本発明の癌治療法によれば、腫瘍特異抗原を同定しなくてもＴＲＡＩＬ感受性細胞への細胞死誘導を足がかりに、腫瘍細胞全体を免疫学的に捕捉し、網羅的な癌抗原に特異的な多くの種類のＣＴＬを誘導することが可能であり、これによりＴＲＡＩＬ感受性の喪失および癌抗原の変異による、癌細胞の免疫学的治療からのエスケープを起こす可能性を低くすることができる。ヒトにおける癌においてはＴＲＡＩＬレセプターの発現が比較的高頻度にみられるという報告も散見されることから、本発明に従う癌治療法は、より多くの患者に第一の選択肢の治療法として実施され得る。また転移などを考慮した場合にも、抗癌剤による治療では薬剤のデリバリーの問題などにより細部に効果をもたらすことが難しいことや一過性の効果による再発が問題となるが、本発明に従う癌治療法によれば、２次的なＣＴＬの誘導による効果が長期的にかつより細部にまで効果が行き届き、生体内から癌を駆逐することができると考えられる。さらには、本発明に従う癌治療法においては、腫瘍細胞への細胞死の誘導が初期に１度行われれば良いことから、効率に腫瘍の細胞死を誘導しうるものの、免疫機能の抑制も起こす抗癌剤による化学療法や放射線療法との併用も可能であり得る。このように、実施例に具体的に示したような本発明に従う治療法は、簡便でかつより汎用性の高い癌治療法であり、さらに効率的な経済効果も提供する。
【産業上の利用可能性】
【００９４】
本発明は、腫瘍特異的なＣＴＬをより効率的にかつ強力に誘導し得、腫瘍増殖が進行した段階であっても腫瘍拒絶を誘導し得るという高い治療効果を奏し得るため、高率で癌を根絶し得る新たな癌治療法として有用である。
【図面の簡単な説明】
【００９５】
【図１】実施例２におけるＭｉｘ Ｔｈｅｒａｐｙの効果を示すグラフである。４Ｔ１腫瘍２×１０5細胞を皮下接種し、腫瘍塊の大きさが３×３ｍｍ2に到達した時点で、抗ＤＲ５抗体、抗ＣＤ４０抗体、抗４−１ＢＢ抗体を単独投与群、２抗体投与群、３抗体投与（Ｍｉｘ ｔｈｅｒａｐｙ）群ならびにコントロール抗体投与群に分け、個々のマウスの腫瘍増殖を比較した（ｎ＝１０）。
【図２】実施例３におけるＭｉｘ ｔｈｅｒａｐｙにおける腫瘍塊の大きさの違いによる効果を示すグラフである。ＢＡＬＢ／ｃマウスに４Ｔ１腫瘍 ２×１０5細胞を皮下接種し、腫瘍塊の大きさがそれぞれ３×３（■）、５×５（●）、８×８（▲）ｍｍ2に到達した時点で３日おきに計４回Ｍｉｘ ｔｈｅｒａｐｙを行った。各群５−１０匹の平均±ＳＤ（ｍｍ2）で表記した。
【図３】実施例４における抗ＤＲ５抗体単回投与での治療効果を示すグラフである。腫瘍塊の大きさが３×３ｍｍ2に到達した時点で抗ＤＲ５抗体を初回投与のみとし、抗ＣＤ４０抗体、抗４−１ＢＢ抗体を３日おきに計４回腹腔内投与した（■）。またコントロールとしてナイーブＢＡＬＢ／ｃマウスにも同時に４Ｔ１腫瘍を接種した（□）。各群５−１０匹の平均±ＳＤ（ｍｍ2）で表記した。
【図４】実施例４における腫瘍特異的細胞障害性Ｔ細胞の誘導を示すグラフである。（Ａ）Ｍｉｘ ｔｈｅｒａｐｙにより４Ｔ１を拒絶したＢＡＬＢ／ｃマウスに４Ｔ１腫瘍 ２×１０5個を再接種し、増殖を観察した（■）。またコントロールとしてナイーブＢＡＬＢ／ｃマウスにも同時に４Ｔ１腫瘍を接種した（□）。各群５−１０匹の平均±ＳＤ（ｍｍ2）で表記した。（Ｂ）ナイーブＳＣＩＤマウスに４Ｔ１腫瘍２×１０5個を皮下接種。腫瘍接種２日後にナイーブＢＡＬＢ／ｃマウス（○）および４Ｔ１を拒絶したＢＡＬＢ／ｃマウス（●）から単離した脾臓Ｔ細胞５×１０7細胞を尾静脈より移入し、腫瘍の増殖を観察した。またコントロール（□）としてナイーブＳＣＩＤマウスにも同時に４Ｔ１腫瘍を接種した。各群５−１０匹の平均±ＳＤ（ｍｍ2）で表記した。
【図５】実施例５におけるＴＲＡＩＬ感受性株ならびに非感受性株に対する腫瘍特異的細胞障害性Ｔ細胞の誘導による効果を示すグラフである。（Ａ）Ｒ３３１−ｍｏｃｋ（○：コントロール群、●：Ｍｉｘ ｔｈｅｒａｐｙ群）またはＲ３３１−ＦＬＩＰ（□：コントロール群、■：Ｍｉｘ ｔｈｅｒａｐｙ群）をＢＡＬＢ／ｃマウスに接種し、その後腫瘍塊の大きさが３×３ｍｍ2に到達した時点でＭｉｘ ｔｈｅｒａｐｙまたはコントロール抗体を投与し、腫瘍の増殖を観察した。各群５−１０匹の平均±ＳＤ（ｍｍ2）で表記した。（Ｂ）Ｒ３３１−ｍｏｃｋ（円）およびＲ３３１−ＦＬＩＰ（四角）をそれぞれ右側、左側背部皮下に同時に接種し、３×３ｍｍ2に到達した時点でＭｉｘ ｔｈｅｒａｐｙ（黒塗りつぶし）またはコントロール抗体（白抜き）を投与し、腫瘍の増殖を観察した。各群５−１０匹の平均±ＳＤ（ｍｍ2）で表記した。
【図６】実施例６におけるＭｉｘ ｔｈｅｒａｐｙに対する抗ＣＴＬＡアンタゴニスティック抗体投与の効果を示すグラフである。左からそれぞれ、（Ａ）コントロール抗体投与群、（Ｂ）Ｍｉｘ ｔｈｅｒａｐｙ群、および（Ｃ）Ｍｉｘ ｔｈｅｒａｐｙ ＋ 抗ＣＴＬＡ−４抗体投与群についての結果を示す。４Ｔ１腫瘍２×１０5細胞を皮下接種し、腫瘍塊の大きさが５×５ｍｍ2に到達した時点で治療を開始し、個々のマウスの腫瘍増殖を比較した。
【特許請求の範囲】
【請求項１】
ＴＮＦ関連細胞死誘導因子とリンパ球活性化因子とを組み合わせてなる、癌治療剤。
【請求項２】
前記ＴＮＦ関連細胞死誘導因子が、ＴＲＡＩＬレセプターに対するアゴニスティック抗体である、請求項１に記載の癌治療剤。
【請求項３】
前記ＴＲＡＩＬレセプターに対するアゴニスティック抗体が抗ＤＲ５抗体である、請求項２に記載の癌治療剤。
【請求項４】
前記リンパ球活性化因子が、補助刺激分子に対するアゴニスティック抗体である、請求項１に記載の癌治療剤。
【請求項５】
前記補助刺激分子に対するアゴニスティック抗体が、ＣＤ２８ファミリーメンバーに対するアゴニスティック抗体、またはデスレセプターを有さないＴＮＦＲファミリーメンバーに対するアゴニスティック抗体である、請求項４に記載の癌治療剤。
【請求項６】
前記ＣＤ２８ファミリーメンバーに対するアゴニスティック抗体が、抗ＣＤ２８抗体、抗ＩＣＯＳ抗体、またはこれらの組み合わせである、請求項５に記載の癌治療剤。
【請求項７】
前記デスレセプターを有さないＴＮＦＲファミリーメンバーに対するアゴニスティック抗体が、抗ＣＤ４０抗体、抗４−１ＢＢ抗体、またはこれらの組み合わせである、請求項５に記載の癌治療剤。
【請求項８】
前記ＴＮＦ関連細胞死誘導因子が抗ＤＲ５抗体であり、前記リンパ球活性化因子が抗ＣＤ４０抗体および抗４−１ＢＢ抗体である、請求項１に記載の癌治療剤。
【請求項９】
さらに、抑制性シグナルを伝えるレセプターに対するアンタゴニスティック抗体を含有する、請求項１〜８のいずれかに記載の癌治療剤。
【請求項１０】
前記抑制性シグナルを伝えるレセプターに対するアンタゴニスティック抗体が、抗ＣＴＬＡ−４抗体である、請求項９に記載の癌治療剤。
【請求項１１】
ＴＮＦ関連細胞死誘導因子を含有する、リンパ球活性化剤と併用するための癌治療剤。
【請求項１２】
前記ＴＮＦ関連細胞死誘導因子が、ＴＲＡＩＬレセプターに対するアゴニスティック抗体である、請求項１１に記載の癌治療剤。
【請求項１３】
前記ＴＲＡＩＬレセプターに対するアゴニスティック抗体が、抗ＤＲ５抗体である、請求項１２に記載の癌治療剤。
【請求項１４】
前記リンパ球活性化剤が、補助刺激分子に対するアゴニスティック抗体を含有する、請求項１１に記載の癌治療剤。
【請求項１５】
前記補助刺激分子に対するアゴニスティック抗体が、ＣＤ２８ファミリーメンバーに対するアゴニスティック抗体、またはデスレセプターを有さないＴＮＦＲファミリーメンバーに対するアゴニスティック抗体である、請求項１４に記載の癌治療剤。
【請求項１６】
前記ＣＤ２８ファミリーメンバーに対するアゴニスティック抗体が、抗ＣＤ２８抗体、抗ＩＣＯＳ抗体、またはこれらの組み合わせである、請求項１５に記載の癌治療剤。
【請求項１７】
前記デスレセプターを有さないＴＮＦＲファミリーメンバーに対するアゴニスティック抗体が、抗ＣＤ４０抗体、抗４−１ＢＢ抗体、またはこれらの組み合わせである、請求項１５に記載の癌治療剤。
【請求項１８】
さらに、抑制性シグナルを伝えるレセプターに対するアンタゴニスティック抗体を含有する、請求項１１〜１７のいずれかに記載の癌治療剤。
【請求項１９】
前記抑制性シグナルを伝えるレセプターに対するアンタゴニスティック抗体が、抗ＣＴＬＡ−４抗体である、請求項１８に記載の癌治療剤。
【請求項２０】
リンパ球活性化因子を含有する、細胞死誘導剤と併用するための癌治療剤。
【請求項２１】
前記リンパ球活性化因子が、補助刺激分子に対するアゴニスティック抗体である、請求項２０に記載の癌治療剤。
【請求項２２】
前記補助刺激分子に対するアゴニスティック抗体が、ＣＤ２８ファミリーメンバーに対するアゴニスティック抗体、またはデスレセプターを有さないＴＮＦＲファミリーメンバーに対するアゴニスティック抗体である、請求項２１に記載の癌治療剤。
【請求項２３】
前記ＣＤ２８ファミリーメンバーに対するアゴニスティック抗体が、抗ＣＤ２８抗体、抗ＩＣＯＳ抗体、またはこれらの組み合わせである、請求項２２に記載の癌治療剤。
【請求項２４】
前記デスレセプターを有さないＴＮＦＲファミリーメンバーに対するアゴニスティック抗体が、抗ＣＤ４０抗体、抗４−１ＢＢ抗体、またはこれらの組み合わせである、請求項２２に記載の癌治療剤。
【請求項２５】
前記細胞死誘導剤が、ＴＮＦ関連細胞死誘導因子を含有する、請求項２０に記載の癌治療剤。
【請求項２６】
前記ＴＮＦ関連細胞死誘導因子が、ＴＲＡＩＬレセプターに対するアゴニスティック抗体である、請求項２５に記載の癌治療剤。
【請求項２７】
前記ＴＲＡＩＬレセプターに対するアゴニスティック抗体が、抗ＤＲ５抗体である、請求項２６に記載の癌治療剤。
【請求項２８】
さらに、抑制性シグナルを伝えるレセプターに対するアンタゴニスティック抗体を含有する、請求項２０〜２７のいずれかに記載の癌治療剤。
【請求項２９】
前記抑制性シグナルを伝えるレセプターに対するアンタゴニスティック抗体が、抗ＣＴＬＡ−４抗体である、請求項２８に記載の癌治療剤。
【請求項３０】
化学療法剤と併用する、請求項１〜２９のいずれかに記載の癌治療剤。
【請求項３１】
放射線療法と併用する、請求項１〜２９のいずれかに記載の癌治療剤。
【請求項３２】
細胞死誘導療法とリンパ球活性化療法との併用療法による癌治療用キットであって、
ＴＮＦ関連細胞死誘導因子を含有する薬剤と、
リンパ球活性化因子を含有する薬剤とを含む、癌治療用キット。
【請求項３３】
前記ＴＮＦ関連細胞死誘導因子が、ＴＲＡＩＬレセプターに対するアゴニスティック抗体であり、前記リンパ球活性化因子が、補助刺激分子に対するアゴニスティック抗体である、請求項３２に記載の癌治療用キット。
【請求項３４】
ＴＲＡＩＬレセプターに対するアゴニスティック抗体が抗ＤＲ５抗体であり、前記補助刺激分子に対するアゴニスティック抗体が抗ＣＤ４０抗体および抗４−１ＢＢ抗体である、請求項３３に記載の癌治療用キット。
【請求項３５】
さらに、抑制性シグナルを伝えるレセプターに対するアンタゴニスティック抗体を含有する、請求項３２〜３４のいずれかに記載の癌治療用キット。
【請求項３６】
前記抑制性シグナルを伝えるレセプターに対するアンタゴニスティック抗体が、抗ＣＴＬＡ−４抗体である、請求項３５に記載の癌治療用キット。
【請求項１】
ＴＮＦ関連細胞死誘導因子とリンパ球活性化因子とを組み合わせてなる、癌治療剤。
【請求項２】
前記ＴＮＦ関連細胞死誘導因子が、ＴＲＡＩＬレセプターに対するアゴニスティック抗体である、請求項１に記載の癌治療剤。
【請求項３】
前記ＴＲＡＩＬレセプターに対するアゴニスティック抗体が抗ＤＲ５抗体である、請求項２に記載の癌治療剤。
【請求項４】
前記リンパ球活性化因子が、補助刺激分子に対するアゴニスティック抗体である、請求項１に記載の癌治療剤。
【請求項５】
前記補助刺激分子に対するアゴニスティック抗体が、ＣＤ２８ファミリーメンバーに対するアゴニスティック抗体、またはデスレセプターを有さないＴＮＦＲファミリーメンバーに対するアゴニスティック抗体である、請求項４に記載の癌治療剤。
【請求項６】
前記ＣＤ２８ファミリーメンバーに対するアゴニスティック抗体が、抗ＣＤ２８抗体、抗ＩＣＯＳ抗体、またはこれらの組み合わせである、請求項５に記載の癌治療剤。
【請求項７】
前記デスレセプターを有さないＴＮＦＲファミリーメンバーに対するアゴニスティック抗体が、抗ＣＤ４０抗体、抗４−１ＢＢ抗体、またはこれらの組み合わせである、請求項５に記載の癌治療剤。
【請求項８】
前記ＴＮＦ関連細胞死誘導因子が抗ＤＲ５抗体であり、前記リンパ球活性化因子が抗ＣＤ４０抗体および抗４−１ＢＢ抗体である、請求項１に記載の癌治療剤。
【請求項９】
さらに、抑制性シグナルを伝えるレセプターに対するアンタゴニスティック抗体を含有する、請求項１〜８のいずれかに記載の癌治療剤。
【請求項１０】
前記抑制性シグナルを伝えるレセプターに対するアンタゴニスティック抗体が、抗ＣＴＬＡ−４抗体である、請求項９に記載の癌治療剤。
【請求項１１】
ＴＮＦ関連細胞死誘導因子を含有する、リンパ球活性化剤と併用するための癌治療剤。
【請求項１２】
前記ＴＮＦ関連細胞死誘導因子が、ＴＲＡＩＬレセプターに対するアゴニスティック抗体である、請求項１１に記載の癌治療剤。
【請求項１３】
前記ＴＲＡＩＬレセプターに対するアゴニスティック抗体が、抗ＤＲ５抗体である、請求項１２に記載の癌治療剤。
【請求項１４】
前記リンパ球活性化剤が、補助刺激分子に対するアゴニスティック抗体を含有する、請求項１１に記載の癌治療剤。
【請求項１５】
前記補助刺激分子に対するアゴニスティック抗体が、ＣＤ２８ファミリーメンバーに対するアゴニスティック抗体、またはデスレセプターを有さないＴＮＦＲファミリーメンバーに対するアゴニスティック抗体である、請求項１４に記載の癌治療剤。
【請求項１６】
前記ＣＤ２８ファミリーメンバーに対するアゴニスティック抗体が、抗ＣＤ２８抗体、抗ＩＣＯＳ抗体、またはこれらの組み合わせである、請求項１５に記載の癌治療剤。
【請求項１７】
前記デスレセプターを有さないＴＮＦＲファミリーメンバーに対するアゴニスティック抗体が、抗ＣＤ４０抗体、抗４−１ＢＢ抗体、またはこれらの組み合わせである、請求項１５に記載の癌治療剤。
【請求項１８】
さらに、抑制性シグナルを伝えるレセプターに対するアンタゴニスティック抗体を含有する、請求項１１〜１７のいずれかに記載の癌治療剤。
【請求項１９】
前記抑制性シグナルを伝えるレセプターに対するアンタゴニスティック抗体が、抗ＣＴＬＡ−４抗体である、請求項１８に記載の癌治療剤。
【請求項２０】
リンパ球活性化因子を含有する、細胞死誘導剤と併用するための癌治療剤。
【請求項２１】
前記リンパ球活性化因子が、補助刺激分子に対するアゴニスティック抗体である、請求項２０に記載の癌治療剤。
【請求項２２】
前記補助刺激分子に対するアゴニスティック抗体が、ＣＤ２８ファミリーメンバーに対するアゴニスティック抗体、またはデスレセプターを有さないＴＮＦＲファミリーメンバーに対するアゴニスティック抗体である、請求項２１に記載の癌治療剤。
【請求項２３】
前記ＣＤ２８ファミリーメンバーに対するアゴニスティック抗体が、抗ＣＤ２８抗体、抗ＩＣＯＳ抗体、またはこれらの組み合わせである、請求項２２に記載の癌治療剤。
【請求項２４】
前記デスレセプターを有さないＴＮＦＲファミリーメンバーに対するアゴニスティック抗体が、抗ＣＤ４０抗体、抗４−１ＢＢ抗体、またはこれらの組み合わせである、請求項２２に記載の癌治療剤。
【請求項２５】
前記細胞死誘導剤が、ＴＮＦ関連細胞死誘導因子を含有する、請求項２０に記載の癌治療剤。
【請求項２６】
前記ＴＮＦ関連細胞死誘導因子が、ＴＲＡＩＬレセプターに対するアゴニスティック抗体である、請求項２５に記載の癌治療剤。
【請求項２７】
前記ＴＲＡＩＬレセプターに対するアゴニスティック抗体が、抗ＤＲ５抗体である、請求項２６に記載の癌治療剤。
【請求項２８】
さらに、抑制性シグナルを伝えるレセプターに対するアンタゴニスティック抗体を含有する、請求項２０〜２７のいずれかに記載の癌治療剤。
【請求項２９】
前記抑制性シグナルを伝えるレセプターに対するアンタゴニスティック抗体が、抗ＣＴＬＡ−４抗体である、請求項２８に記載の癌治療剤。
【請求項３０】
化学療法剤と併用する、請求項１〜２９のいずれかに記載の癌治療剤。
【請求項３１】
放射線療法と併用する、請求項１〜２９のいずれかに記載の癌治療剤。
【請求項３２】
細胞死誘導療法とリンパ球活性化療法との併用療法による癌治療用キットであって、
ＴＮＦ関連細胞死誘導因子を含有する薬剤と、
リンパ球活性化因子を含有する薬剤とを含む、癌治療用キット。
【請求項３３】
前記ＴＮＦ関連細胞死誘導因子が、ＴＲＡＩＬレセプターに対するアゴニスティック抗体であり、前記リンパ球活性化因子が、補助刺激分子に対するアゴニスティック抗体である、請求項３２に記載の癌治療用キット。
【請求項３４】
ＴＲＡＩＬレセプターに対するアゴニスティック抗体が抗ＤＲ５抗体であり、前記補助刺激分子に対するアゴニスティック抗体が抗ＣＤ４０抗体および抗４−１ＢＢ抗体である、請求項３３に記載の癌治療用キット。
【請求項３５】
さらに、抑制性シグナルを伝えるレセプターに対するアンタゴニスティック抗体を含有する、請求項３２〜３４のいずれかに記載の癌治療用キット。
【請求項３６】
前記抑制性シグナルを伝えるレセプターに対するアンタゴニスティック抗体が、抗ＣＴＬＡ−４抗体である、請求項３５に記載の癌治療用キット。
【図１】
【図２】
【図３】
【図４】
【図５】
【図６】
【図２】
【図３】
【図４】
【図５】
【図６】
【公開番号】特開２００６−２６５１５５（Ｐ２００６−２６５１５５Ａ）
【公開日】平成１８年１０月５日（２００６．１０．５）
【国際特許分類】
【出願番号】特願２００５−８４６９５（Ｐ２００５−８４６９５）
【出願日】平成１７年３月２３日（２００５．３．２３）
【出願人】（５０２０１９９３３）リンク・ジェノミクス株式会社 (11)
【Ｆターム（参考）】
【公開日】平成１８年１０月５日（２００６．１０．５）
【国際特許分類】
【出願日】平成１７年３月２３日（２００５．３．２３）
【出願人】（５０２０１９９３３）リンク・ジェノミクス株式会社 (11)
【Ｆターム（参考）】
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