神経変性疾患を治療する方法
本発明で特徴とされる態様は、例えば、神経変性障害の治療のなどのためにα−シヌクレイン（ＳＮＣＡ）遺伝子の発現を阻害するための組成物および方法に関する。ＳＮＣＡ遺伝子を標的とする本発明で特徴とされる抗ＳＮＣＡ剤は、神経細胞に優先的に分布するように修飾されていてもよい。
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【特許請求の範囲】
【請求項１】
α−シヌクレイン（ＳＮＣＡ）ＲＮＡのヌクレオチド配列に対して相補的なアンチセンス鎖、および該アンチセンス鎖に対してハイブリダイズするために十分に相補的なセンス鎖からなる、ｉＲＮＡ剤。
【請求項２】
生物学的試料中におけるｉＲＮＡ剤の安定性の増大を引き起こす修飾を含んでなる請求項１に記載のｉＲＮＡ剤。
【請求項３】
ホスホロチオエートまたは２’−ＯＭｅ’修飾を含んでなる請求項１に記載のｉＲＮＡ剤。
【請求項４】
ウリジンが２’−修飾ヌクレオチドである少なくとも１つの５’−ウリジン−アデニン−３’（５’−ＵＡ−３’）ジヌクレオチド、または５’−ウリジンが２’−修飾ヌクレオチドである少なくとも１つの５’−ウリジン−グアニン−３’（５’−ＵＧ−３’）ジヌクレオチド、または５’−シチジンが２’−修飾ヌクレオチドである少なくとも１つの５’−シチジン−アデニン−３’（５’−ＣＡ−３’）ジヌクレオチド、または５’−ウリジンが２’−修飾ヌクレオチドである少なくとも１つの５’−ウリジン−ウリジン−３’（５’−ＵＵ−３’）ジヌクレオチド、または５’−シチジンが２’−修飾ヌクレオチドである少なくとも１つの５’−シチジン−シチジン−３’（５’−ＣＣ−３’）ジヌクレオチドを含んでなる、請求項１に記載のｉＲＮＡ剤。
【請求項５】
前記アンチセンス鎖が、配列番号６、配列番号１６、配列番号１８、配列番号２０、配列番号２２、および配列番号２４からなる群から選択される配列を含んでなる、請求項１に記載のｉＲＮＡ剤。
【請求項６】
前記ｉＲＮＡ剤のセンス鎖が、配列番号５、配列番号１５、配列番号１７、配列番号１９、配列番号２１、および配列番号２３から群から選択される配列を含んでなる、請求項１に記載のｉＲＮＡ剤。
【請求項７】
前記アンチセンス鎖がＳＮＣＡ ＲＮＡの多型に対して相補的である配列を含んでなる、請求項１に記載のｉＲＮＡ剤。
【請求項８】
前記アンチセンス鎖が、ＳＮＣＡ ＲＮＡの５’非翻訳領域（ＵＴＲ）または３’ＵＴＲのヌクレオチド配列に対して相補的な配列を含んでなる、請求項１に記載のｉＲＮＡ剤。
【請求項９】
前記ｉＲＮＡ剤が少なくとも２１ヌクレオチド長であり、かつ該ｉＲＮＡの二本鎖領域が約１８〜２５ヌクレオチド長である、請求項１に記載のｉＲＮＡ剤。
【請求項１０】
ｄｓＲＮＡのアンチセンスＲＮＡ鎖が２５ヌクレオチド長以下である、請求項１に記載のｉＲＮＡ剤。
【請求項１１】
１〜４個の非対合ヌクレオチドを有するヌクレオチド突出部を含んでなる、請求項１に記載のｉＲＮＡ剤。
【請求項１２】
前記ヌクレオチド突出部がｉＲＮＡ剤のアンチセンス鎖の３’末端にある、請求項１１に記載のｉＲＮＡ剤。
【請求項１３】
ヒトを治療する方法であって、
神経変性障害を有するか、または神経変性障害を発症するリスクがあると診断されたヒトを同定する工程、ならびに
α−シヌクレイン（ＳＮＣＡ）ＲＮＡのヌクレオチド配列に対して相補的なアンチセンス鎖、および該アンチセンス鎖にハイブリダイズするために十分に相補的なセンス鎖からなるｉＲＮＡ剤を投与する工程
からなる方法。
【請求項１４】
前記ｉＲＮＡ剤が、生物学的試料中における該ｉＲＮＡ剤の安定性の増大を引き起こす修飾を含んでなる、請求項１３に記載の方法。
【請求項１５】
前記ｉＲＮＡ剤がホスホロチオエートまたは２’−ＯＭｅ修飾を含んでなる請求項１３に記載の方法。
【請求項１６】
前記ｉＲＮＡ剤が、ウリジンが２’−修飾ヌクレオチドである少なくとも１つの５’−ウリジン−アデニン−３’（５’−ＵＡ−３’）ジヌクレオチド、または、５’−ウリジンが２’−修飾ヌクレオチドである少なくとも１つの５’−ウリジン−グアニン−３’（５’−ＵＧ−３’）ジヌクレオチド、または５’−シチジンが２’−修飾ヌクレオチドである少なくとも１つの５’−シチジン−アデニン−３’（５’−ＣＡ−３’）ジヌクレオチド、または５’−ウリジンが２’−修飾ヌクレオチドである少なくとも１つの５’−ウリジン−ウリジン−３’（５’−ＵＵ−３’）ジヌクレオチド、または５’−シチジンが２’−修飾ヌクレオチドである少なくとも１つの５’−シチジン−シチジン−３’（５’−ＣＣ−３’）ジヌクレオチドを含んでなる、請求項１３に記載の方法。
【請求項１７】
前記アンチセンス鎖が、配列番号６、配列番号１６、配列番号１８、配列番号２０、配列番号２２、および配列番号２４からなる群から選択される配列を含んでなる、請求項１３に記載の方法。
【請求項１８】
前記ｉＲＮＡ剤のセンス鎖が、配列番号５、配列番号１５、配列番号１７、配列番号１９、配列番号２１、および配列番号２３からなる群から選択される配列を含んでなる、請求項１３に記載の方法。
【請求項１９】
前記ｉＲＮＡ剤のアンチセンス鎖がＳＮＣＡ ＲＮＡの多型に対して相補的な配列を含んでなる、請求項１３に記載の方法。
【請求項２０】
前記ｉＲＮＡ剤のアンチセンス鎖がＳＮＣＡ ＲＮＡの５’ＵＴＲまたは３’ＵＴＲのヌクレオチド配列に対して相補的な配列を含んでなる、請求項１３に記載の方法。
【請求項２１】
前記ヒトがＰａｒｋｉｎ遺伝子またはユビキチンカルボキシ末端ヒドロラーゼＬ１（ＵＣＨＬ１）遺伝子中に遺伝子変異を有する、請求項１３に記載の方法。
【請求項２２】
前記ヒトがＳＮＣＡの遺伝子の多重化を有する、請求項１３に記載の方法。
【請求項２３】
ヒトがＳＮＣＡの遺伝子の二重化を有する、請求項２２に記載の方法。
【請求項２４】
ヒトがＳＮＣＡの遺伝子の三重化を有する、請求項２２に記載の方法。
【請求項２５】
前記神経変性障害がシヌクレイン症である、請求項１３に記載の方法。
【請求項２６】
前記神経変性障害がパーキンソン病である、請求項１３に記載の方法。
【請求項２７】
前記神経変性障害がアルツハイマー病、多系統萎縮症、またはレーヴィ小体痴呆である、請求項１３に記載の方法。
【請求項２８】
前記ｉＲＮＡ剤が少なくとも２１ヌクレオチド長であり、かつ該ｉＲＮＡ剤の二本鎖領域が約１８〜２５ヌクレオチド長である、請求項１３に記載の方法。
【請求項２９】
前記ｉＲＮＡ剤のアンチセンスＲＮＡ鎖が２５ヌクレオチド長以下である、請求項１３に記載の方法。
【請求項３０】
前記ｉＲＮＡ剤が１〜４個の非対合ヌクレオチドを有するヌクレオチド突出部を含んでなる、請求項１３に記載の方法。
【請求項３１】
前記ヌクレオチド突出部が前記ｉＲＮＡ剤のアンチセンス鎖の３’末端にある、請求項３０に記載の方法。
【請求項３２】
α−シヌクレイン遺伝子を標的とするｉＲＮＡ剤、および
薬学的に許容可能な担体
からなる薬学的組成物であって、
前記ｉＲＮＡ剤は、α−シヌクレイン（ＳＮＣＡ）ＲＮＡのヌクレオチド配列に対して相補的なアンチセンス鎖、および該アンチセンス鎖に対してハイブリダイズするために十分に相補的なセンス鎖からなることを特徴とする、薬学的組成物。
【請求項３３】
前記ｉＲＮＡ剤が、生物学的試料中における該ｉＲＮＡ剤の安定性の増大を引き起こす修飾をさらに含んでなる、請求項３２に記載の薬学的組成物。
【請求項３４】
前記ｉＲＮＡ剤がホスホロチオエートまたは２’−ＯＭｅ修飾をさらに含んでなる、請求項３２に記載の薬学的組成物。
【請求項３５】
前記ｉＲＮＡ剤が、ウリジンが２’−修飾ヌクレオチドである少なくとも１つの５’−ウリジン−アデニン−３’（５’−ＵＡ−３’）ジヌクレオチド、または５’−ウリジンが２’−修飾ヌクレオチドである少なくとも１つの５’−ウリジン−グアニン−３’（５’−ＵＧ−３’）ジヌクレオチド、または５’−シチジンが２’−修飾ヌクレオチドである少なくとも１つの５’−シチジン−アデニン−３’（５’−ＣＡ−３’）ジヌクレオチド、または５’−ウリジンが２’−修飾ヌクレオチドである少なくとも１つの５’−ウリジン−ウリジン−３’（５’−ＵＵ−３’）ジヌクレオチド、または５’−シチジンが２’−修飾ヌクレオチドである少なくとも１つの５’−シチジン−シチジン−３’（５’−ＣＣ−３’）ジヌクレオチドを含んでなる、請求項３２に記載の薬学的組成物。
【請求項３６】
前記ｉＲＮＡのアンチセンス鎖が、配列番号６、配列番号１６、配列番号１８、配列番号２０、配列番号２２、および配列番号２４からなる群から選択される配列を含んでなる、請求項３２に記載の薬学的組成物。
【請求項３７】
前記ｉＲＮＡ剤のセンス鎖が、配列番号５、配列番号１５、配列番号１７、配列番号１９、配列番号２１、および配列番号２３からなる群から選択される配列を含んでなる、請求項３２に記載の薬学的組成物。
【請求項３８】
前記ｉＲＮＡ剤がホスホロチオエートまたは２’−ＯＭｅ修飾を含んでなる、請求項３２に記載の薬学的組成物。
【請求項３９】
前記ｉＲＮＡ剤が少なくとも２１ヌクレオチド長であり、かつ該ｉＲＮＡ剤の二本鎖領
域が約１８〜２５ヌクレオチド長である、請求項３２に記載の薬学的組成物。
【請求項４０】
前記ｉＲＮＡ剤のアンチセンスＲＮＡ鎖が２５ヌクレオチド長以下である、請求項３２に記載の薬学的組成物。
【請求項４１】
前記ｉＲＮＡ剤が１〜４個の非対合ヌクレオチドを有するヌクレオチド突出部を含んでなる、請求項３２に記載の薬学的組成物。
【請求項４２】
前記ヌクレオチド突出部が前記ｉＲＮＡ剤のアンチセンス鎖の３’末端にある、請求項４１に記載の薬学的組成物。
【請求項４３】
対象の細胞中のＳＮＣＡ ＲＮＡの量を低減する方法であって、
α−シヌクレイン（ＳＮＣＡ）ＲＮＡのヌクレオチド配列に対して相補的なアンチセンス鎖、および該アンチセンス鎖に対してハイブリダイズするために十分に相補的なセンス鎖からなるｉＲＮＡ剤と細胞を接触させる工程を包含する方法。
【請求項４４】
前記ｉＲＮＡ剤が、生物学的試料中における該ｉＲＮＡ剤の安定性の増大を引き起こす修飾をさらに含む、請求項４３に記載の方法。
【請求項４５】
前記ｉＲＮＡ剤がホスホロチオエートまたは２’−ＯＭｅ修飾をさらに含む、請求項４３に記載の方法。
【請求項４６】
前記ｉＲＮＡ剤は、ウリジンが２’−修飾ヌクレオチドである少なくとも１つの５’−ウリジン−アデニン−３’（５’−ＵＡ−３’）ジヌクレオチド、または５’−ウリジンが２’−修飾ヌクレオチドである少なくとも１つの５’−ウリジン−グアニン−３’（５’−ＵＧ−３’）ジヌクレオチド、または５’−シチジンが２’−修飾ヌクレオチドである少なくとも１つの５’−シチジン−アデニン−３’（５’−ＣＡ−３’）ジヌクレオチド、または５’−ウリジンが２’−修飾ヌクレオチドである少なくとも１つの５’−ウリジン−ウリジン−３’（５’−ＵＵ−３’）ジヌクレオチド、または５’−シチジンが２’−修飾ヌクレオチドである少なくとも１つの５’−シチジン−シチジン−３’（５’−ＣＣ−３’）ジヌクレオチドをさらに含んでなる、請求項４３に記載の方法。
【請求項４７】
前記ｉＲＮＡ剤が、配列番号６、配列番号１６、配列番号１８、配列番号２０、配列番号２２、および配列番号２４からなる群から選択される配列を含んでなるアンチセンス鎖を含む、請求項４３に記載の方法。
【請求項４８】
前記ｉＲＮＡ剤が、配列番号５、配列番号１５、配列番号１７、配列番号１９、配列番号２１、および配列番号２３からなる群から選択される配列を含んでなるセンス鎖を含む、請求項４３に記載の方法。
【請求項４９】
前記ｉＲＮＡ剤がＳＮＣＡ ＲＮＡの多型に対して相補的な配列を含んでなるアンチセンス鎖を含む、請求項４３に記載の方法。
【請求項５０】
前記ｉＲＮＡ剤が少なくとも２１ヌクレオチド長であり、かつ該ｉＲＮＡ剤の二本鎖領域が約１８〜２５ヌクレオチド長である、請求項４３に記載の方法。
【請求項５１】
前記ｉＲＮＡ剤のアンチセンスＲＮＡ鎖が２５ヌクレオチド長以下である、請求項４３に記載の方法。
【請求項５２】
前記ｉＲＮＡ剤が１〜４個の非対合ヌクレオチドを有するヌクレオチド突出部を含んで
なる、請求項４３に記載の方法。
【請求項５３】
前記ヌクレオチド突出部が前記ｉＲＮＡ剤のアンチセンス鎖の３’末端にある、請求項５２に記載の方法。
【請求項５４】
ｉＲＮＡ剤を作製する方法であって、
ＳＮＣＡ ｍＲＮＡのヌクレオチド配列から１８〜２５ヌクレオチド長のヌクレオチド配列を選択する工程、および
ｉＲＮＡ剤のセンス鎖が選択されたヌクレオチド配列からなり、かつアンチセンス鎖が該センス鎖にハイブリダイズするために十分に相補的であることを特徴とするｉＲＮＡ剤を合成する工程
を含む方法。
【請求項５５】
前記ｉＲＮＡ剤を対象に投与する工程をさらに含む、請求項５４に記載の方法。
【請求項５６】
前記対象がシヌクレイン症を有すると診断される、請求項５５に記載の方法。
【請求項５７】
前記対象がパーキンソン病、アルツハイマー病、多系統萎縮症、またはレーヴィ小体痴呆を有すると診断される、請求項５５に記載の方法。
【請求項５８】
前記対象がヒトである、請求項５５に記載の方法。
【請求項５９】
ＳＮＣＡ核酸を標的とするｉＲＮＡ剤を評価する方法であって、
アンチセンス配列がＳＮＣＡ ｍＲＮＡのヌクレオチド配列に対して相補的であり、かつセンス鎖が該アンチセンス鎖にハイブリダイズするために十分に相補的であるｉＲＮＡ剤を供給する工程；
ＳＮＣＡ遺伝子を含む細胞に該ｉＲＮＡ剤を接触させる工程；
細胞に該ｉＲＮＡ剤を接触させる前と細胞に該ｉＲＮＡ剤を接触させた後のＳＮＣＡ遺伝子の発現を比較する工程；ならびに
該ｉＲＮＡ剤がＳＮＣＡ遺伝子の発現を阻害するために有用であるか否かを決定する工程であって、細胞中に存在するＳＮＣＡのＲＮＡまたはタンパク質の量が、細胞にｉＲＮＡ剤を接触させる前の量よりも少ない場合に該ｉＲＮＡが有用であることを特徴とする工程、
を含む方法。
【請求項６０】
前記比較工程が、ノーザンブロット、ウェスタンブロット、ＲＴ−ＰＣＲ、およびＲＮＡｓｅ保護アッセイからなる群から選択される方法を実行することからなる、請求項５９に記載の方法。
【請求項６１】
ＳＮＣＡの発現を阻害する能力について薬剤を評価する方法であって、候補薬剤を供給する工程、および該薬剤が動物におけるＳＮＣＡの発現を減少させるか否かを決定する工程を含む方法。
【請求項６２】
第１の試験系で薬剤を評価する前工程、および所定のレベルの変化が見られる場合には、前記動物中で該候補薬剤を評価する工程を含む、請求項６１に記載の方法。
【請求項６３】
２つの試験系を使用し、第１の試験系が、第２の動物の系よりも少なくとも１００倍多い化合物をスクリーニングするために使用される高スループット系である、請求項６２に記載の方法。
【請求項６４】
第１の試験系が、
ＳＮＣＡ標的、ＳＮＣＡ ＲＮＡ標的、またはＤＮＡ標的と候補薬剤を接触させ、標的との相互作用が存在するか否かを決定することを含む試験系；
細胞と候補薬物とを接触させ、ＳＮＣＡ発現の変化を評価することを含む試験系；
候補薬剤をｉｎ ｖｉｔｒｏで組織試料と接触させ、ＳＮＣＡまたはＳＮＣＡ ＲＮＡのレベルを評価することを含む試験系
から選択される、請求項６２に記載の方法。
【請求項６５】
前記第１の系が、ＳＮＣＡまたはＳＮＣＡ ＲＮＡを（内在性遺伝子または外来構築物から）発現可能な細胞と前記候補薬剤を接触させる工程、およびＳＮＣＡまたはＳＮＣＡ
ＲＮＡのレベルを評価する工程を含む、請求項６４に記載の方法。
【請求項６６】
前記第１の系が、ＳＮＣＡ制御領域からＲＮＡまたはタンパク質を発現可能な細胞と前記候補薬剤を接触させる工程、およびＲＮＡまたはタンパク質のレベルに対する効果を決定する工程を含む、請求項６４に記載の方法。
【請求項６７】
前記第１の系が、異種マーカータンパク質に結合したＳＮＣＡ制御領域からＲＮＡまたはタンパク質を発現可能な細胞と前記候補薬剤を接触させる工程を含む、請求項６４に記載の方法。
【請求項６８】
前記動物を薬剤の効果についてモニターする、請求項６１に記載の方法。
【請求項６９】
脳組織または眼組織をＳＮＣＡ発現に対する薬剤の効果について試験する、請求項６８に記載の方法。
【請求項７０】
前記決定する工程が、ノーザンブロット、ウェスタンブロット、ＲＴ−ＰＣＲ、およびＲＮＡｓｅ保護アッセイからなる群より選択される方法を実行することを含む、請求項６１に記載の方法。
【請求項７１】
前記薬剤が、低分子、アンチセンスオリゴヌクレオチド、リボザイム、またはタンパク質、ポリペプチド、もしくはペプチドである、請求項６１に記載の方法。
【請求項１】
α−シヌクレイン（ＳＮＣＡ）ＲＮＡのヌクレオチド配列に対して相補的なアンチセンス鎖、および該アンチセンス鎖に対してハイブリダイズするために十分に相補的なセンス鎖からなる、ｉＲＮＡ剤。
【請求項２】
生物学的試料中におけるｉＲＮＡ剤の安定性の増大を引き起こす修飾を含んでなる請求項１に記載のｉＲＮＡ剤。
【請求項３】
ホスホロチオエートまたは２’−ＯＭｅ’修飾を含んでなる請求項１に記載のｉＲＮＡ剤。
【請求項４】
ウリジンが２’−修飾ヌクレオチドである少なくとも１つの５’−ウリジン−アデニン−３’（５’−ＵＡ−３’）ジヌクレオチド、または５’−ウリジンが２’−修飾ヌクレオチドである少なくとも１つの５’−ウリジン−グアニン−３’（５’−ＵＧ−３’）ジヌクレオチド、または５’−シチジンが２’−修飾ヌクレオチドである少なくとも１つの５’−シチジン−アデニン−３’（５’−ＣＡ−３’）ジヌクレオチド、または５’−ウリジンが２’−修飾ヌクレオチドである少なくとも１つの５’−ウリジン−ウリジン−３’（５’−ＵＵ−３’）ジヌクレオチド、または５’−シチジンが２’−修飾ヌクレオチドである少なくとも１つの５’−シチジン−シチジン−３’（５’−ＣＣ−３’）ジヌクレオチドを含んでなる、請求項１に記載のｉＲＮＡ剤。
【請求項５】
前記アンチセンス鎖が、配列番号６、配列番号１６、配列番号１８、配列番号２０、配列番号２２、および配列番号２４からなる群から選択される配列を含んでなる、請求項１に記載のｉＲＮＡ剤。
【請求項６】
前記ｉＲＮＡ剤のセンス鎖が、配列番号５、配列番号１５、配列番号１７、配列番号１９、配列番号２１、および配列番号２３から群から選択される配列を含んでなる、請求項１に記載のｉＲＮＡ剤。
【請求項７】
前記アンチセンス鎖がＳＮＣＡ ＲＮＡの多型に対して相補的である配列を含んでなる、請求項１に記載のｉＲＮＡ剤。
【請求項８】
前記アンチセンス鎖が、ＳＮＣＡ ＲＮＡの５’非翻訳領域（ＵＴＲ）または３’ＵＴＲのヌクレオチド配列に対して相補的な配列を含んでなる、請求項１に記載のｉＲＮＡ剤。
【請求項９】
前記ｉＲＮＡ剤が少なくとも２１ヌクレオチド長であり、かつ該ｉＲＮＡの二本鎖領域が約１８〜２５ヌクレオチド長である、請求項１に記載のｉＲＮＡ剤。
【請求項１０】
ｄｓＲＮＡのアンチセンスＲＮＡ鎖が２５ヌクレオチド長以下である、請求項１に記載のｉＲＮＡ剤。
【請求項１１】
１〜４個の非対合ヌクレオチドを有するヌクレオチド突出部を含んでなる、請求項１に記載のｉＲＮＡ剤。
【請求項１２】
前記ヌクレオチド突出部がｉＲＮＡ剤のアンチセンス鎖の３’末端にある、請求項１１に記載のｉＲＮＡ剤。
【請求項１３】
ヒトを治療する方法であって、
神経変性障害を有するか、または神経変性障害を発症するリスクがあると診断されたヒトを同定する工程、ならびに
α−シヌクレイン（ＳＮＣＡ）ＲＮＡのヌクレオチド配列に対して相補的なアンチセンス鎖、および該アンチセンス鎖にハイブリダイズするために十分に相補的なセンス鎖からなるｉＲＮＡ剤を投与する工程
からなる方法。
【請求項１４】
前記ｉＲＮＡ剤が、生物学的試料中における該ｉＲＮＡ剤の安定性の増大を引き起こす修飾を含んでなる、請求項１３に記載の方法。
【請求項１５】
前記ｉＲＮＡ剤がホスホロチオエートまたは２’−ＯＭｅ修飾を含んでなる請求項１３に記載の方法。
【請求項１６】
前記ｉＲＮＡ剤が、ウリジンが２’−修飾ヌクレオチドである少なくとも１つの５’−ウリジン−アデニン−３’（５’−ＵＡ−３’）ジヌクレオチド、または、５’−ウリジンが２’−修飾ヌクレオチドである少なくとも１つの５’−ウリジン−グアニン−３’（５’−ＵＧ−３’）ジヌクレオチド、または５’−シチジンが２’−修飾ヌクレオチドである少なくとも１つの５’−シチジン−アデニン−３’（５’−ＣＡ−３’）ジヌクレオチド、または５’−ウリジンが２’−修飾ヌクレオチドである少なくとも１つの５’−ウリジン−ウリジン−３’（５’−ＵＵ−３’）ジヌクレオチド、または５’−シチジンが２’−修飾ヌクレオチドである少なくとも１つの５’−シチジン−シチジン−３’（５’−ＣＣ−３’）ジヌクレオチドを含んでなる、請求項１３に記載の方法。
【請求項１７】
前記アンチセンス鎖が、配列番号６、配列番号１６、配列番号１８、配列番号２０、配列番号２２、および配列番号２４からなる群から選択される配列を含んでなる、請求項１３に記載の方法。
【請求項１８】
前記ｉＲＮＡ剤のセンス鎖が、配列番号５、配列番号１５、配列番号１７、配列番号１９、配列番号２１、および配列番号２３からなる群から選択される配列を含んでなる、請求項１３に記載の方法。
【請求項１９】
前記ｉＲＮＡ剤のアンチセンス鎖がＳＮＣＡ ＲＮＡの多型に対して相補的な配列を含んでなる、請求項１３に記載の方法。
【請求項２０】
前記ｉＲＮＡ剤のアンチセンス鎖がＳＮＣＡ ＲＮＡの５’ＵＴＲまたは３’ＵＴＲのヌクレオチド配列に対して相補的な配列を含んでなる、請求項１３に記載の方法。
【請求項２１】
前記ヒトがＰａｒｋｉｎ遺伝子またはユビキチンカルボキシ末端ヒドロラーゼＬ１（ＵＣＨＬ１）遺伝子中に遺伝子変異を有する、請求項１３に記載の方法。
【請求項２２】
前記ヒトがＳＮＣＡの遺伝子の多重化を有する、請求項１３に記載の方法。
【請求項２３】
ヒトがＳＮＣＡの遺伝子の二重化を有する、請求項２２に記載の方法。
【請求項２４】
ヒトがＳＮＣＡの遺伝子の三重化を有する、請求項２２に記載の方法。
【請求項２５】
前記神経変性障害がシヌクレイン症である、請求項１３に記載の方法。
【請求項２６】
前記神経変性障害がパーキンソン病である、請求項１３に記載の方法。
【請求項２７】
前記神経変性障害がアルツハイマー病、多系統萎縮症、またはレーヴィ小体痴呆である、請求項１３に記載の方法。
【請求項２８】
前記ｉＲＮＡ剤が少なくとも２１ヌクレオチド長であり、かつ該ｉＲＮＡ剤の二本鎖領域が約１８〜２５ヌクレオチド長である、請求項１３に記載の方法。
【請求項２９】
前記ｉＲＮＡ剤のアンチセンスＲＮＡ鎖が２５ヌクレオチド長以下である、請求項１３に記載の方法。
【請求項３０】
前記ｉＲＮＡ剤が１〜４個の非対合ヌクレオチドを有するヌクレオチド突出部を含んでなる、請求項１３に記載の方法。
【請求項３１】
前記ヌクレオチド突出部が前記ｉＲＮＡ剤のアンチセンス鎖の３’末端にある、請求項３０に記載の方法。
【請求項３２】
α−シヌクレイン遺伝子を標的とするｉＲＮＡ剤、および
薬学的に許容可能な担体
からなる薬学的組成物であって、
前記ｉＲＮＡ剤は、α−シヌクレイン（ＳＮＣＡ）ＲＮＡのヌクレオチド配列に対して相補的なアンチセンス鎖、および該アンチセンス鎖に対してハイブリダイズするために十分に相補的なセンス鎖からなることを特徴とする、薬学的組成物。
【請求項３３】
前記ｉＲＮＡ剤が、生物学的試料中における該ｉＲＮＡ剤の安定性の増大を引き起こす修飾をさらに含んでなる、請求項３２に記載の薬学的組成物。
【請求項３４】
前記ｉＲＮＡ剤がホスホロチオエートまたは２’−ＯＭｅ修飾をさらに含んでなる、請求項３２に記載の薬学的組成物。
【請求項３５】
前記ｉＲＮＡ剤が、ウリジンが２’−修飾ヌクレオチドである少なくとも１つの５’−ウリジン−アデニン−３’（５’−ＵＡ−３’）ジヌクレオチド、または５’−ウリジンが２’−修飾ヌクレオチドである少なくとも１つの５’−ウリジン−グアニン−３’（５’−ＵＧ−３’）ジヌクレオチド、または５’−シチジンが２’−修飾ヌクレオチドである少なくとも１つの５’−シチジン−アデニン−３’（５’−ＣＡ−３’）ジヌクレオチド、または５’−ウリジンが２’−修飾ヌクレオチドである少なくとも１つの５’−ウリジン−ウリジン−３’（５’−ＵＵ−３’）ジヌクレオチド、または５’−シチジンが２’−修飾ヌクレオチドである少なくとも１つの５’−シチジン−シチジン−３’（５’−ＣＣ−３’）ジヌクレオチドを含んでなる、請求項３２に記載の薬学的組成物。
【請求項３６】
前記ｉＲＮＡのアンチセンス鎖が、配列番号６、配列番号１６、配列番号１８、配列番号２０、配列番号２２、および配列番号２４からなる群から選択される配列を含んでなる、請求項３２に記載の薬学的組成物。
【請求項３７】
前記ｉＲＮＡ剤のセンス鎖が、配列番号５、配列番号１５、配列番号１７、配列番号１９、配列番号２１、および配列番号２３からなる群から選択される配列を含んでなる、請求項３２に記載の薬学的組成物。
【請求項３８】
前記ｉＲＮＡ剤がホスホロチオエートまたは２’−ＯＭｅ修飾を含んでなる、請求項３２に記載の薬学的組成物。
【請求項３９】
前記ｉＲＮＡ剤が少なくとも２１ヌクレオチド長であり、かつ該ｉＲＮＡ剤の二本鎖領
域が約１８〜２５ヌクレオチド長である、請求項３２に記載の薬学的組成物。
【請求項４０】
前記ｉＲＮＡ剤のアンチセンスＲＮＡ鎖が２５ヌクレオチド長以下である、請求項３２に記載の薬学的組成物。
【請求項４１】
前記ｉＲＮＡ剤が１〜４個の非対合ヌクレオチドを有するヌクレオチド突出部を含んでなる、請求項３２に記載の薬学的組成物。
【請求項４２】
前記ヌクレオチド突出部が前記ｉＲＮＡ剤のアンチセンス鎖の３’末端にある、請求項４１に記載の薬学的組成物。
【請求項４３】
対象の細胞中のＳＮＣＡ ＲＮＡの量を低減する方法であって、
α−シヌクレイン（ＳＮＣＡ）ＲＮＡのヌクレオチド配列に対して相補的なアンチセンス鎖、および該アンチセンス鎖に対してハイブリダイズするために十分に相補的なセンス鎖からなるｉＲＮＡ剤と細胞を接触させる工程を包含する方法。
【請求項４４】
前記ｉＲＮＡ剤が、生物学的試料中における該ｉＲＮＡ剤の安定性の増大を引き起こす修飾をさらに含む、請求項４３に記載の方法。
【請求項４５】
前記ｉＲＮＡ剤がホスホロチオエートまたは２’−ＯＭｅ修飾をさらに含む、請求項４３に記載の方法。
【請求項４６】
前記ｉＲＮＡ剤は、ウリジンが２’−修飾ヌクレオチドである少なくとも１つの５’−ウリジン−アデニン−３’（５’−ＵＡ−３’）ジヌクレオチド、または５’−ウリジンが２’−修飾ヌクレオチドである少なくとも１つの５’−ウリジン−グアニン−３’（５’−ＵＧ−３’）ジヌクレオチド、または５’−シチジンが２’−修飾ヌクレオチドである少なくとも１つの５’−シチジン−アデニン−３’（５’−ＣＡ−３’）ジヌクレオチド、または５’−ウリジンが２’−修飾ヌクレオチドである少なくとも１つの５’−ウリジン−ウリジン−３’（５’−ＵＵ−３’）ジヌクレオチド、または５’−シチジンが２’−修飾ヌクレオチドである少なくとも１つの５’−シチジン−シチジン−３’（５’−ＣＣ−３’）ジヌクレオチドをさらに含んでなる、請求項４３に記載の方法。
【請求項４７】
前記ｉＲＮＡ剤が、配列番号６、配列番号１６、配列番号１８、配列番号２０、配列番号２２、および配列番号２４からなる群から選択される配列を含んでなるアンチセンス鎖を含む、請求項４３に記載の方法。
【請求項４８】
前記ｉＲＮＡ剤が、配列番号５、配列番号１５、配列番号１７、配列番号１９、配列番号２１、および配列番号２３からなる群から選択される配列を含んでなるセンス鎖を含む、請求項４３に記載の方法。
【請求項４９】
前記ｉＲＮＡ剤がＳＮＣＡ ＲＮＡの多型に対して相補的な配列を含んでなるアンチセンス鎖を含む、請求項４３に記載の方法。
【請求項５０】
前記ｉＲＮＡ剤が少なくとも２１ヌクレオチド長であり、かつ該ｉＲＮＡ剤の二本鎖領域が約１８〜２５ヌクレオチド長である、請求項４３に記載の方法。
【請求項５１】
前記ｉＲＮＡ剤のアンチセンスＲＮＡ鎖が２５ヌクレオチド長以下である、請求項４３に記載の方法。
【請求項５２】
前記ｉＲＮＡ剤が１〜４個の非対合ヌクレオチドを有するヌクレオチド突出部を含んで
なる、請求項４３に記載の方法。
【請求項５３】
前記ヌクレオチド突出部が前記ｉＲＮＡ剤のアンチセンス鎖の３’末端にある、請求項５２に記載の方法。
【請求項５４】
ｉＲＮＡ剤を作製する方法であって、
ＳＮＣＡ ｍＲＮＡのヌクレオチド配列から１８〜２５ヌクレオチド長のヌクレオチド配列を選択する工程、および
ｉＲＮＡ剤のセンス鎖が選択されたヌクレオチド配列からなり、かつアンチセンス鎖が該センス鎖にハイブリダイズするために十分に相補的であることを特徴とするｉＲＮＡ剤を合成する工程
を含む方法。
【請求項５５】
前記ｉＲＮＡ剤を対象に投与する工程をさらに含む、請求項５４に記載の方法。
【請求項５６】
前記対象がシヌクレイン症を有すると診断される、請求項５５に記載の方法。
【請求項５７】
前記対象がパーキンソン病、アルツハイマー病、多系統萎縮症、またはレーヴィ小体痴呆を有すると診断される、請求項５５に記載の方法。
【請求項５８】
前記対象がヒトである、請求項５５に記載の方法。
【請求項５９】
ＳＮＣＡ核酸を標的とするｉＲＮＡ剤を評価する方法であって、
アンチセンス配列がＳＮＣＡ ｍＲＮＡのヌクレオチド配列に対して相補的であり、かつセンス鎖が該アンチセンス鎖にハイブリダイズするために十分に相補的であるｉＲＮＡ剤を供給する工程；
ＳＮＣＡ遺伝子を含む細胞に該ｉＲＮＡ剤を接触させる工程；
細胞に該ｉＲＮＡ剤を接触させる前と細胞に該ｉＲＮＡ剤を接触させた後のＳＮＣＡ遺伝子の発現を比較する工程；ならびに
該ｉＲＮＡ剤がＳＮＣＡ遺伝子の発現を阻害するために有用であるか否かを決定する工程であって、細胞中に存在するＳＮＣＡのＲＮＡまたはタンパク質の量が、細胞にｉＲＮＡ剤を接触させる前の量よりも少ない場合に該ｉＲＮＡが有用であることを特徴とする工程、
を含む方法。
【請求項６０】
前記比較工程が、ノーザンブロット、ウェスタンブロット、ＲＴ−ＰＣＲ、およびＲＮＡｓｅ保護アッセイからなる群から選択される方法を実行することからなる、請求項５９に記載の方法。
【請求項６１】
ＳＮＣＡの発現を阻害する能力について薬剤を評価する方法であって、候補薬剤を供給する工程、および該薬剤が動物におけるＳＮＣＡの発現を減少させるか否かを決定する工程を含む方法。
【請求項６２】
第１の試験系で薬剤を評価する前工程、および所定のレベルの変化が見られる場合には、前記動物中で該候補薬剤を評価する工程を含む、請求項６１に記載の方法。
【請求項６３】
２つの試験系を使用し、第１の試験系が、第２の動物の系よりも少なくとも１００倍多い化合物をスクリーニングするために使用される高スループット系である、請求項６２に記載の方法。
【請求項６４】
第１の試験系が、
ＳＮＣＡ標的、ＳＮＣＡ ＲＮＡ標的、またはＤＮＡ標的と候補薬剤を接触させ、標的との相互作用が存在するか否かを決定することを含む試験系；
細胞と候補薬物とを接触させ、ＳＮＣＡ発現の変化を評価することを含む試験系；
候補薬剤をｉｎ ｖｉｔｒｏで組織試料と接触させ、ＳＮＣＡまたはＳＮＣＡ ＲＮＡのレベルを評価することを含む試験系
から選択される、請求項６２に記載の方法。
【請求項６５】
前記第１の系が、ＳＮＣＡまたはＳＮＣＡ ＲＮＡを（内在性遺伝子または外来構築物から）発現可能な細胞と前記候補薬剤を接触させる工程、およびＳＮＣＡまたはＳＮＣＡ
ＲＮＡのレベルを評価する工程を含む、請求項６４に記載の方法。
【請求項６６】
前記第１の系が、ＳＮＣＡ制御領域からＲＮＡまたはタンパク質を発現可能な細胞と前記候補薬剤を接触させる工程、およびＲＮＡまたはタンパク質のレベルに対する効果を決定する工程を含む、請求項６４に記載の方法。
【請求項６７】
前記第１の系が、異種マーカータンパク質に結合したＳＮＣＡ制御領域からＲＮＡまたはタンパク質を発現可能な細胞と前記候補薬剤を接触させる工程を含む、請求項６４に記載の方法。
【請求項６８】
前記動物を薬剤の効果についてモニターする、請求項６１に記載の方法。
【請求項６９】
脳組織または眼組織をＳＮＣＡ発現に対する薬剤の効果について試験する、請求項６８に記載の方法。
【請求項７０】
前記決定する工程が、ノーザンブロット、ウェスタンブロット、ＲＴ−ＰＣＲ、およびＲＮＡｓｅ保護アッセイからなる群より選択される方法を実行することを含む、請求項６１に記載の方法。
【請求項７１】
前記薬剤が、低分子、アンチセンスオリゴヌクレオチド、リボザイム、またはタンパク質、ポリペプチド、もしくはペプチドである、請求項６１に記載の方法。
【図１Ａ】
【図１Ｂ】
【図２】
【図３】
【図４】
【図５】
【図６】
【図７】
【図８Ａ】
【図８Ｂ】
【図９Ａ】
【図９Ｂ】
【図１０Ａ】
【図１０Ｂ】
【図１０Ｃ】
【図１１】
【図１Ｂ】
【図２】
【図３】
【図４】
【図５】
【図６】
【図７】
【図８Ａ】
【図８Ｂ】
【図９Ａ】
【図９Ｂ】
【図１０Ａ】
【図１０Ｂ】
【図１０Ｃ】
【図１１】
【公表番号】特表２００７−５２８３６７（Ｐ２００７−５２８３６７Ａ）
【公表日】平成１９年１０月１１日（２００７．１０．１１）
【国際特許分類】
【出願番号】特願２００６−５３３６３６（Ｐ２００６−５３３６３６）
【出願日】平成１６年６月９日（２００４．６．９）
【国際出願番号】ＰＣＴ／ＵＳ２００４／０１８２７１
【国際公開番号】ＷＯ２００５／００４７９４
【国際公開日】平成１７年１月２０日（２００５．１．２０）
【出願人】（５０５３６９１５８）アルナイラム ファーマシューティカルズ インコーポレイテッド (51)
【氏名又は名称原語表記】ＡＬＮＹＬＡＭ ＰＨＡＲＭＡＣＥＵＴＩＣＡＬＳ， ＩＮＣ．
【出願人】（５９８０９１９６３）マヨ ファウンデーション フォー メディカル エデュケーション アンド リサーチ (17)
【Ｆターム（参考）】
【公表日】平成１９年１０月１１日（２００７．１０．１１）
【国際特許分類】
【出願日】平成１６年６月９日（２００４．６．９）
【国際出願番号】ＰＣＴ／ＵＳ２００４／０１８２７１
【国際公開番号】ＷＯ２００５／００４７９４
【国際公開日】平成１７年１月２０日（２００５．１．２０）
【出願人】（５０５３６９１５８）アルナイラム ファーマシューティカルズ インコーポレイテッド (51)
【氏名又は名称原語表記】ＡＬＮＹＬＡＭ ＰＨＡＲＭＡＣＥＵＴＩＣＡＬＳ， ＩＮＣ．
【出願人】（５９８０９１９６３）マヨ ファウンデーション フォー メディカル エデュケーション アンド リサーチ (17)
【Ｆターム（参考）】
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