糖・タンパク複合体の製造方法
【課題】天然資源からの糖・タンパク複合体の回収を、効率的かつ安価に行う方法を提供する。
【解決手段】糖・タンパク複合体を含有する生物学的試料を０．１１Ｎ〜０．１５Ｎのアルカリ溶液に浸漬する工程、並びに浸漬後の溶液を回収する工程を含む、糖・タンパク複合体の製造方法。本発明は、従来の抽出方法に比べ、糖・タンパク複合体を未変成、未分解の状態で簡便かつ短時間で回収することができ、糖・タンパク複合体の製造コストを大きく減ずることができる。また、本来廃棄処分とされてきた魚類、鳥類及び哺乳類などの非可食部位から産業上有用性の高い糖・タンパク複合体を回収することができ、産業廃棄物の有効利用並びに産業廃棄物自体の減量化にも貢献することができる。
【解決手段】糖・タンパク複合体を含有する生物学的試料を０．１１Ｎ〜０．１５Ｎのアルカリ溶液に浸漬する工程、並びに浸漬後の溶液を回収する工程を含む、糖・タンパク複合体の製造方法。本発明は、従来の抽出方法に比べ、糖・タンパク複合体を未変成、未分解の状態で簡便かつ短時間で回収することができ、糖・タンパク複合体の製造コストを大きく減ずることができる。また、本来廃棄処分とされてきた魚類、鳥類及び哺乳類などの非可食部位から産業上有用性の高い糖・タンパク複合体を回収することができ、産業廃棄物の有効利用並びに産業廃棄物自体の減量化にも貢献することができる。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、医薬品原料、医療用品材料、化粧品原料、食品材料、工業用材料等として有用な糖・タンパク複合体を、糖・タンパク複合体を含有する生物学的試料、例えば魚類、軟体動物、鳥類又は哺乳類の軟骨組織から抽出し、製造する方法に関する。
【背景技術】
【０００２】
糖・タンパク複合体は、１本のコアタンパク質に数本から数十本の直鎖状の糖鎖が共有結合してなる、非常に複雑かつ多種の構造を有し、軟骨組織に存在する糖・タンパク複合体の糖鎖の代表的なものがコンドロイチン硫酸である。
【０００３】
コンドロイチン硫酸は、保湿性、生体適合性あるいは潤滑性に優れる等の高い有用性から産業上注目されている成分であり、天然資源からの効果的な回収、製造法が種々開発されている。
【０００４】
軟骨組織においては、コンドロイチン硫酸はそれ自体単独では存在せず、タンパク質との複合体すなわち糖・タンパク複合体の形で存在している。しかし、糖・タンパク複合体をそのまま抽出することは糖タンパク質複合体という複雑な構造故に困難な場合が多く、そのため糖・タンパク複合体のコアタンパク質部分を徹底的に分解してコンドロイチン硫酸だけを抽出しようという方法が主に採用されてきた。この方法の製造物はコンドロイチン硫酸等のムコ多糖類である。
【０００５】
一方、コンドロイチン硫酸としてではなく、糖・タンパク複合体そのままを回収、製造し利用する試みもなされている。特に、魚類、哺乳類の軟骨組織には、コンドロイチン硫酸を主要糖鎖とする糖・タンパク複合体が含まれている一方、これらの軟骨組織は通常廃棄処分となっていたことから、廃棄物の有効利用を兼ねた軟骨組織からの糖・タンパク複合体の製造法が幾つか提唱されている。
【０００６】
例えば、サケ鼻軟骨からアルカリ溶液を用いて糖・タンパク質複合体を抽出する方法（特許文献１）が報告されている。この方法は、これまでの抽出、精製コスト低減可能な技術であることが本発明者の追試試験でも確認が取れているが、残念ながら未だ実用化の課題がある。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００７】
【特許文献１】特許第４２１９９７４号
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００８】
本発明は、魚類、軟体動物、鳥類又は哺乳類、特にそれらの非可食部位から低コストで経口摂取可能な糖・タンパク複合体の製造を工業化する方法の確立を課題とするものである。
【課題を解決するための手段】
【０００９】
本発明者らは、本来タンパク質及びタンパク質複合体の回収、製造には不適であったアルカリ溶液を一定の条件下で使用することにより、糖・タンパク複合体を効率よく軟骨組織その他の糖・タンパク複合体を含有する生物学的試料から回収することができること、さらに軟骨組織から糖タンパク質複合体を回収した回収残さから非変性ＩＩ型コラーゲンを回収することができることを見出し、下記の各発明を完成した。
【００１０】
（１）糖・タンパク複合体を含有する生物学的試料を０．１１Ｎ〜０．１５Ｎのアルカリ金属塩又はアルカリ土類金属塩の溶液に１１〜１５℃で０．１〜０．５時間、浸漬し、酸で中和する工程、並びに浸漬後の溶液を回収する工程を含む、糖・タンパク複合体の製造方法。
【００１１】
（２）回収した溶液から糖・タンパク複合体を分離する工程をさらに含む、請求の範囲第１項に記載の製造方法。
【００１２】
（３）溶液がアルカリ金属塩の溶液である、（１）又は（２）に記載の製造方法。
【００１３】
（４）糖・タンパク複合体を含有する生物学的試料が、魚類、軟体動物、鳥類若しくは哺乳類の軟骨組織、筋肉繊維又は皮である、（１）〜（３）の何れかに記載の製造方法。
【００１４】
（５）糖・タンパク複合体を含有する生物学的試料が、魚類、鳥類又は哺乳類の軟骨組織である、（１）〜（３）のいづれかに記載の製造方法であって、糖タンパク質複合体を回収した残さから非変性ＩＩ型コラーゲンを回収する工程を含む糖・タンパク質複合体の製造方法。
【発明の効果】
【００１５】
本発明は、従来の抽出方法に比べ、糖・タンパク複合体を非変成、未分解の状態で簡便かつ短時間で回収することができ、糖・タンパク複合体の製造コストを大きく減ずることができる。
【００１６】
また、本発明の方法は、本来廃棄処分とされてきた魚類及び哺乳類などの非可食部位から産業上有用性の高い糖・タンパク複合体を回収することができ、産業廃棄物の有効利用並びに産業廃棄物自体の減量化にも貢献することができる。
【００１７】
また、本発明では、組織内に内包しているタンパク質分解酵素を失活させるためのタンパク質分解酵素阻害剤（インヒビター）の添加を必ずしも必要としない。かかるインヒビターの効果は全てのタンパク質分解酵素に有効ではない上に、インヒビター自身が人体に有害なものが多く、食品材料としての糖・タンパク複合体を製造するに当たり、インヒビターを使用することは好ましくないが、本発明はインヒビターを必要とはせず、従って上記の問題を回避することが可能である。
【図面の簡単な説明】
【００１８】
【図１】 苛性ソーダを用いたときの糖・タンパク複合体の回収量を示す図である。
【発明を実施するための形態】
【００１９】
本発明は、一般に熱やアルカリに不安定なタンパク質を含む糖・タンパク複合体を、本来禁忌とされてきたアルカリ溶液を用いるという発想の下に抽出、製造する方法である。
【００２０】
糖・タンパク複合体は糖質とタンパク質の複合体であるが、コアタンパク質とそのタンパク質に結合している糖鎖の結合力が弱く、簡単に分離してしまう性質を有している。そのため、その抽出や精製は一般に極めて困難であり、タンパク質だけからなるコラーゲンや糖質だけからなるコンドロイチン硫酸などの抽出とは異なる注意が必要である。このため、従来技術は、工程が複雑になる、あるいは手作業を伴う部分が多いなど、大量生産に向かないものであった。
【００２１】
また、一般にタンパク質は熱や酸、特にアルカリに対して不安定であり、容易に変成、分解してしまうという性質を有している。この性質を利用し、タンパク質を積極的にアルカリを用いて分解する方法は知られているが、糖タンパク質複合体としてタンパク質部分の分解を防ぎながらアルカリで抽出することは知られていない。
【００２２】
本発明は、糖・タンパク複合体を含む生物学的試料、例えば魚類、軟体動物若しくは哺乳類の軟骨組織、筋肉繊維又は皮に対して適用することができるが、軟骨組織への適用が好ましい。
【００２３】
本発明において使用される軟骨組織は、魚類及び哺乳類、特にそれらの非可食部位のいずれも利用することができる。本発明において軟骨組織とは、軟骨単独あるいは軟骨の周辺部位、例えば骨、筋肉繊維、皮等を含む組織のいずれも意味する。
【００２４】
本発明においては、特に一般に氷頭とよばれている、サケの頭部にその平均重量で約６％含まれている鼻軟骨組織の利用が好ましい。北海道沿岸部で漁獲されたサケ（大半はシロサケである。）が、様々な加工品として処理される際、その頭部は不要とされることが多く、そのため切断された頭部は、一部魚粉に加工され利用されてはいるものの、その大半は産業廃棄物として廃棄処理されている。氷頭はその様な廃棄物から簡便、安価かつ安定的に入手することができる。
【００２５】
また本発明では、氷頭の他、エイの軟骨組織、サメの軟骨組織等の魚類由来の軟骨組織、ニワトリの軟骨組織等の鳥類の軟骨組織、さらにはウシの喉軟骨や気管支軟骨、クジラの軟骨等の哺乳動物由来の軟骨組織も利用することができる。さらに、軟体動物であるイカやタコの表皮にも糖・タンパク複合体が存在することが知られており、これら軟体動物の表皮等も本発明で利用することができる。
【００２６】
特に、スルメイカの表皮には硫酸を殆ど含まないコンドロイチン・タンパク質複合体が存在しており、またコンドロイチンはスルメイカ表皮中のムコ多糖の７０％以上を占めることが報告されている（須山ら他共著、「イカの利用」、１９８０年１１月発行、第９３頁、恒星社）ことから、スルメイカの表皮は本発明における糖・タンパク複合体を含む生物学的試料の一例として有用である。
【００２７】
上記の糖・タンパク複合体を含む生物学的試料の多くも産業廃棄物であり、その入手は容易である。これらの原料は、次に説明するアルカリ溶液への浸漬に先だって、表面積を増加させて糖・タンパク複合体の抽出量を上げるため、５００μｍ以下に破砕することが好ましい。
【００２８】
本発明で使用するアルカリ溶液は、アルカリ金属またはその塩の水溶液、アルカリ土類金属又はその塩の水溶液などを適宜使用することができるが、糖・タンパク複合体の抽出効率、後処理の簡便さ等から、アルカリ金属の水溶液、苛性ソーダ（ＮａＯＨ）、重曹、炭酸カルシウム、苛性カリの使用が好ましく、特に苛性ソーダの使用が好ましい。
【００２９】
アルカリ溶液の濃度は、０．１１Ｎ〜０．１２Ｎが好ましく、このアルカリ溶液を用いる場合の浸漬時間は０．１〜０．５時間程度とすることが好ましい。抽出時間を０．１〜０．５時間程度とすることで、糖・タンパク複合体のコアタンパク質の分解を抑制することも可能である。これらの条件により、より高分子の糖・タンパク複合体を回収、製造することができる。
【００３０】
アルカリ溶液への軟骨組織の浸漬は、１１℃〜１５℃とすることにより、糖・タンパク複合体は殆ど分解されず、高分子の糖タンパク質複合体として抽出することができる。
【００３１】
浸漬は、軟骨１重量部に対してアルカリ溶液５〜１２重量部を用いて行えばよい。好ましくは、ミキサーあるいはスターラーなどを用いて攪拌しながら浸漬する。
【００３２】
軟骨組織からの糖・タンパク複合体の抽出は、例えばガランボス法（Ｊｏｈｎら、ＡＮＡＬＹＴＩＣＡＬ ＢＩＯＣＨＥＭＩＳＴＲＹ、１９６７年、第１９巻、第１１９−１３２頁）によってウロン酸量を検出ないし定量することでモニターすることができるが、その他公知の方法によってウロン酸を検出し、モニターしてもよい。
【００３３】
浸漬が終了したアルカリ溶液は、糖・タンパク複合体を抽出した後の残渣を多く含むので、これらを濾過、遠心分離その他の方法で取り除くことが好ましい。糖・タンパク複合体を含む抽出液はそのまま製品として利用してもよいが、糖・タンパク複合体の各種用途に対して求められる純度にまで適当な方法で糖・タンパク複合体を分離ないし精製することが好ましい。
【００３４】
本発明において、糖・タンパク複合体の精製方法としては格別の方法を要するものではないが、好ましい方法として遠心分離法を挙げることができる。遠心分離操作によって、細かい固形物を沈殿残渣として、原料由来の油脂分を上面浮遊物として、それぞれ簡便に除去することができる。
【００３５】
また、遠心分離法によって回収される糖・タンパク複合体を含む液相を、さらにフィルターペーパーあるいは適当な分画分子量を有する限外濾過膜分離装置などを用いて濾過してもよい。排除分子量としては概ね５万〜１００万の範囲であればよい。この操作において、分画分子量５０万以上のものを使用すれば、液相からコラーゲンも除去することができ、糖・タンパク複合体の純度を上げることが可能である。また、糖・タンパク複合体を含む液相に水を加えて液相の粘度を下げることで、膜の通過を容易にするとともに、これを繰り返すことで、わずかに生じる魚臭を除去することも可能である。
【００３６】
さらに、得られた濃縮液を食塩飽和エタノールに加えることで、ゲル状の糖・タンパク複合体を回収することもできる。このゲル状糖・タンパク複合体は真空凍結乾燥機を用いて固形物にしてもよい。あるいは、スプレードライヤーで乾燥させ、粉末状固形物とすることもできる。
【００３７】
以下に実施例を挙げて本発明をさらに詳細に説明するが、本発明はこれらの実施例に限定されるものではない。
【実施例】
【実施例１】
【００３８】
−４０℃で冷凍保管したシロサケの頭部から摘出した鼻軟骨を電動のミートチョッパーで細かく破砕しミンチ状にしたものを２００．００ｇ用意し、出発原料とした。５リットルの抽出用容器にあらかじめ１２℃に冷却しておいた蒸留水２３８９．４０ｇを入れ、さらに固形のカセイソーダ１０．５６ｇを投入し、総量２４００．００ｇ（０．１１Ｎ）のカセイソーダ水溶液を準備した。この抽出用容器に出発原料２００．００ｇを投入し、スターラーを用いて攪拌しながら、０．３時間浸漬し、酢酸で中和処理した。
【００３９】
中和処理終了後、内容物を１ｍｍ角のステンレススチール製こし器をセットした別の容器に移し、糖・タンパク複合体を含む抽出液を回収した。
抽出液をＩＷＡＫＩ ＣＦＳ−４００型の遠心分離機を用いて３５００ｒｐｍ、２０分の遠心分離を行い、固形分ならびに油脂分を除去して、糖・タンパク複合体を含む液相を回収した。
【００４０】
さらに、この液相をフィルターペーパー（アドバンテック社製）を用いて濾過し、濾液の６倍量の蒸留水を加えた後、日本ミリポア製 ＰＲＥＰ／ＳＣＡＬＥ ＴＦＦ膜（分画分子量１０万）を用いて分画と濃縮を同時に行った。
【００４１】
得られた濃縮液の一部を採取し、液中の固形分重量を測定した。測定は、乾燥炉（ＹＡＭＡＴＯ ＤＸ４０１）により、１０５℃、１６時間乾燥させ、完全に水分を蒸発させた後、残った固形分をデジタル計量器（Ａ＆Ｄ社 ＧＦ−４００）で精密に測定した。その結果、２００．００ｇの出発原料から、換算値でその４．１％に相当する８．２ｇの乾燥固形分を得ることができた。
【００４２】
また、濃縮液をアミノ酸自動分析装置（日立製作所社製、Ｌ−８５００ Ａｍｉｎｏ Ａｃｉｄ Ａｎａｌｙｚｅｒ）を用いてアミノ酸量を測定することで濃縮液中のコラーゲン量を定量するとともに、ガランボス法によりウロン酸量を定量して糖・タンパク複合体量を計算した。さらに高速液体クロマトグラフィ装置（島津製作所、カラムＴＳＫ−ＧＥＬ Ｇ４０００ＰＷＸＬ）を用いて、糖・タンパク複合体の分子量を測定した。
【００４３】
これらの分析の結果、固形分中にタンパク質２５．０％、灰分２１．５％、炭水化物５２．９％、脂質０．６％が存在することが判った。特許文献１によれば、糖・タンパク複合体のコアタンパク質の重量比は約７．０％と記載されており、従って本発明における糖・タンパク複合体は、炭水化物が約５２．９％であることから計算して、純度は約５７％と推定される。また糖・タンパク複合体の分子量は約１３０万であった。
【００４４】
上記の実施例に示す操作において、カセイソーダ溶液の濃度を０．０２５Ｎ、０．１２Ｎで１２時間浸漬、抽出を行ったときの糖・タンパク複合体の回収量（ウロン酸量）の経時変化を調べた結果を図１に示す。
【実施例２】
【００４５】
−４０℃で冷凍保管したシロサケの頭部から摘出した鼻軟骨を電動のミートチョッパーで細かく破砕しミンチ状にしたものをアセトンに浸漬し、鼻軟骨から脱脂及び脱水を行った。処理後の鼻軟骨を通風又は減圧乾燥したもの２４．００ｇを出発原料とした。
【００４６】
５リットルの抽出用容器にあらかじめ１３℃に冷却しておいた蒸留水２９８７．７ｇを入れ、さらに固形のカセイソーダ１２．３ｇを投入し、総量３０００．００ｇ（０．１１Ｎ）のカセイソーダ水溶液を準備した。この抽出容器に出発原料２４．００ｇを投入し、スターラーを用いて攪拌しながら、０．４時間浸漬し、酢酸で中和処理した。
【００４７】
中和処理終了後、内容物を１ｍｍ角のステンレススチール製こし器をセットした別の容器に移し、鼻軟骨を除去して、糖・タンパク複合体を含む抽出液を回収した。抽出液を日立ｈｉｍａｃＣＦ７Ｄ２型の遠心分離機を用いて３０００ｒｐｍ、２０分の遠心分離を行い、固形分ならびに油脂分を除去して、糖・タンパク複合体を含む液相を回収した。
【００４８】
さらに、この液相をフィルターペーパー（アドバンテック社製）を用いて濾過し、濾液の６倍量の蒸留水を加えた後、日本ミリポア製 ＢＩＯＭＡＸ １００Ｋ ＰＯＬＹＥＴＨＥＲＳＵＬＦＯＮＥ（分画分子量１０万）を用いて分画と濃縮を同時に行った。
【００４９】
得られた濃縮液の一部を採取し、液中の固形分重量を測定した。測定は、乾燥炉（ＹＡＭＡＴＯ ＤＸ４０１）により、１０５℃、１６時間乾燥させ、完全に水分を蒸発させた後、残った固形分をデジタル計量器（Ａ＆Ｄ社 ＧＦ−４００）で精密に測定した。その結果、２４．００ｇの出発原料から、換算値でその３６％に相当する８．６４ｇの乾燥固形分を得ることができた。
【００５０】
また、濃縮液をアミノ酸自動分析装置（日立製作所社製、Ｌ−８５００ Ａｍｉｎｏ Ａｃｉｄ Ａｎａｌｙｚｅｒ）を用いてアミノ酸量を測定することで濃縮液中のコラーゲン量を定量するとともに、ガランボス法によりウロン酸量を定量して糖・タンパク複合体量を計算した。さらに高速液体クロマトグラフィ装置（島津製作所、カラムＴＳＫ−ＧＥＬ Ｇ４０００ＰＷＸＬ）を用いて、糖・タンパク複合体の分子量を測定した。
【００５１】
これらの分析の結果、固形分中にタンパク質１１．８％、灰分１８．４％、炭水化物６７．８％、脂質０．０％が存在することが判った。特許文献１によれば、糖・タンパク複合体のコアタンパク質の重量比は約７．０％と記載されており、従って本発明における糖・タンパク複合体の推定純度は（炭水化物×０．０７＋脂質）／（炭水化物＋タンパク質＋脂質）×１００＝９１．１％と算出された。また、糖・タンパク複合体の分子量は約１３０万であった。
【実施例３】
【００５２】
−４０℃で冷凍保管したシロサケの頭部から摘出した鼻軟骨を電動のミートチョッパーで細かく破砕しミンチ状にしたものをアセトンに浸漬し、鼻軟骨から脱脂及び脱水を行った。処理後の鼻軟骨を通風又は減圧乾燥したもの１７．９０ｇを出発原料とした。
【００５３】
５リットルの抽出用容器にあらかじめ１３℃に冷却しておいた蒸留水２３１１．０５ｇを入れ、さらに固形の苛性カリ１３．９５ｇを投入し、総量２３２５ｇ（０．１５Ｎ）の苛性カリ水溶液を準備した。この抽出容器に出発原料１７．９０ｇを投入し、スターラーを用いて攪拌しながら、０．４時間浸漬し、酢酸で中和処理した。
【００５４】
中和処理終了後、内容物を１ｍｍ角のステンレススチール製こし器をセットした別の容器に移し、鼻軟骨を除去して、糖・タンパク複合体を含む抽出液を回収した。抽出液を日立ｈｉｍａｃＣＦ７Ｄ２型の遠心分離機を用いて３０００ｒｐｍ、２０分の遠心分離を行い、固形分ならびに油脂分を除去して、糖・タンパク複合体を含む液相を回収した。
【００５５】
さらに、この液相をフィルターペーパー（アドバンテック社製）を用いて濾過し、濾液の６倍量の蒸留水を加えた後、日本ミリポア製 ＢＩＯＭＡＸ １００Ｋ ＰＯＬＹＥＴＨＥＲＳＵＬＦＯＮＥ（分画分子量１０万）を用いて分画と濃縮を同時に行った。
【００５６】
得られた濃縮液の一部を採取し、液中の固形分重量を測定した。測定は、乾燥炉（ＹＡＭＡＴＯ ＤＸ４０１）により、１０５℃、１６時間乾燥させ、完全に水分を蒸発させた後、残った固形分をデジタル計量器（Ａ＆Ｄ社 ＧＦ−４００）で精密に測定した。その結果、１７．９０ｇの出発原料から換算値でその３７％に相当する６．６２ｇの乾燥固形分を得ることができた。
【００５７】
また、濃縮液をアミノ酸自動分析装置（日立製作所社製、Ｌ−８５００ Ａｍｉｎｏ Ａｃｉｄ Ａｎａｌｙｚｅｒ）を用いてアミノ酸量を測定することで濃縮液中のコラーゲン量を定量するとともに、ガランボス法によりウロン酸量を定量して糖・タンパク複合体量を計算した。さらに高速液体クロマトグラフィ装置（島津製作所、カラムＴＳＫ−ＧＥＬ Ｇ４０００ＰＷＸＬ）を用いて、糖・タンパク複合体の分子量を測定した。
【００５８】
これらの分析の結果、固形分中にタンパク質１４．０％、灰分２２．４％、炭水化物６３．６％、脂質０．０％が存在することが判った。特許文献１によれば、糖・タンパク複合体のコアタンパク質の重量比は約７．０％と記載されており、従って本発明における糖・タンパク複合体の推定純度は（炭水化物×０．０７＋脂質）／（炭水化物＋タンパク質＋脂質）×１００＝８７．７％と算出された。また、糖・タンパク複合体の分子量は約１２９万であった。
【実施例４】
【００５９】
国内産鶏ヤゲン軟骨から手作業で肉片を除去した後、電動のミートチョッパーで細かく破砕しミンチ状にしたものをアセトンに浸漬し、鶏ヤゲン軟骨から脱脂及び脱水を行った。処理後の軟骨を通風又は減圧乾燥したもの４４．４０ｇを出発原料とした。
【００６０】
５リットルの抽出用容器にあらかじめ１３℃に冷却しておいた蒸留水２９９７．７５ｇを入れ、さらに固形の苛性ソーダ１５．６ｇを投入し、総量３０００．００ｇ（０．１３Ｎ）の苛性ソーダ水溶液を準備した。この抽出容器に出発原料４４．４０ｇを投入し、スターラーを用いて攪拌しながら、０．２時間浸漬し、酢酸で中和処理した。
【００６１】
中和処理終了後、内容物を１ｍｍ角のステンレススチール製こし器をセットした別の容器に移し、軟骨を除去して、糖・タンパク複合体を含む抽出液を回収した。抽出液を日立ｈｉｍａｃＣＦ７Ｄ２型の遠心分離機を用いて３０００ｒｐｍ、２０分の遠心分離を行い、固形分ならびに油脂分を除去して、糖・タンパク複合体を含む液相を回収した。
【００６２】
さらに、この液相をフィルターペーパー（アドバンテック社製）を用いて濾過し、濾液の６倍量の蒸留水を加えた後、日本ミリポア製 ＢＩＯＭＡＸ １００Ｋ ＰＯＬＹＥＴＨＥＲＳＵＬＦＯＮＥ（分画分子量１０万）を用いて分画と濃縮を同時に行った。
【００６３】
得られた濃縮液の一部を採取し、液中の固形分重量を測定した。測定は、乾燥炉（ＹＡＭＡＴＯ ＤＸ４０１）により、１０５℃、１６時間乾燥させ、完全に水分を蒸発させた後、残った固形分をデジタル計量器（Ａ＆Ｄ社 ＧＦ−４００）で精密に測定した。その結果、４４．４０ｇの出発原料から換算値でその２５．１％に相当する１１．１４ｇの乾燥固形分を得ることができた。
【００６４】
また、濃縮液をアミノ酸自動分析装置（日立製作所社製、Ｌ−８５００ Ａｍｉｎｏ Ａｃｉｄ Ａｎａｌｙｚｅｒ）を用いてアミノ酸量を測定することで濃縮液中のコラーゲン量を定量するとともに、ガランボス法によりウロン酸量を定量して糖・タンパク複合体量を計算した。さらに高速液体クロマトグラフィ装置（島津製作所、カラムＴＳＫ−ＧＥＬ Ｇ４０００ＰＷＸＬ）を用いて、糖・タンパク複合体の分子量を測定した。
【００６５】
これらの分析の結果、固形分中にタンパク質３１．３％、灰分１６．９％、炭水化物５１．８％、脂質０．０％が存在することが判った。特許文献１によれば、糖・タンパク複合体のコアタンパク質の重量比は約７．０％と記載されており、従って本発明における糖・タンパク複合体の推定純度は（炭水化物×０．０７＋脂質）／（炭水化物＋タンパク質＋脂質）×１００＝６６．７％と算出された。また、糖・タンパク複合体の分子量は約９２万（１６％）及び約４６万（８４％）であった。
【実施例５】
【００６６】
カンギエイ（カスベ）から手作業で摘出した軟骨を電動のミートチョッパーで細かく破砕しミンチ状にしたものをアセトンに浸漬し、脱脂及び脱水を行った。処理後の軟骨を通風又は減圧乾燥したもの１２．００ｇを出発原料とした。
【００６７】
５リットルの抽出用容器にあらかじめ５℃に冷却しておいた蒸留水１６７０．５９ｇを入れ、さらに固形の苛性ソーダ９．４１ｇを投入し、総量１６８０．００ｇ（０．１４Ｎ）の苛性ソーダ水溶液を準備した。この抽出容器に出発原料１２．００ｇを投入し、スターラーを用いて攪拌しながら、０．２５時間浸漬し、酢酸で中和処理した。
中和処理終了後、内容物を１ｍｍ角のステンレススチール製こし器をセットした別の容器に移し、軟骨を除去して、糖・タンパク複合体を含む抽出液を回収した。抽出液を日立ｈｉｍａｃＣＦ７Ｄ２型の遠心分離機を用いて３０００ｒｐｍ、２０分の遠心分離を行い、固形分ならびに油脂分を除去して、糖・タンパク複合体を含む液相を回収した。
【００６８】
さらに、この液相をフィルターペーパー（アドバンテック社製）を用いて濾過し、濾液の６倍量の蒸留水を加えた後、日本ミリポア製 ＢＩＯＭＡＸ １００Ｋ ＰＯＬＹＥＴＨＥＲＳＵＬＦＯＮＥ（分画分子量１０万）を用いて分画と濃縮を同時に行った。
【００６９】
得られた濃縮液の一部を採取し、液中の固形分重量を測定した。測定は、乾燥炉（ＹＡＭＡＴＯ ＤＸ４０１）により、１０５℃、１６時間乾燥させ、完全に水分を蒸発させた後、残った固形分をデジタル計量器（Ａ＆Ｄ社 ＧＦ−４００）で精密に測定した。その結果、１２．００ｇの出発原料から換算値でその２２．１％に相当する２．６５ｇの乾燥固形分を得ることができた。
【００７０】
また、濃縮液をアミノ酸自動分析装置（日立製作所社製、Ｌ−８５００Ａｍｉｎｏ Ａｃｉｄ Ａｎａｌｙｚｅｒ）を用いてアミノ酸量を測定することで濃縮液中のコラーゲン量を定量するとともに、ガランボス法によりウロン酸量を定量して糖・タンパク複合体量を計算した。さらに高速液体クロマトグラフィ装置（島津製作所、カラムＴＳＫ−ＧＥＬ Ｇ４０００ＰＷＸＬ）を用いて、糖・タンパク複合体の分子量を測定した。
【００７１】
これらの分析の結果、固形分中にタンパク質４３．５％、灰分１９．５％、炭水化物３７．０％、脂質０．０％が存在することが判った。特許文献１によれば、糖・タンパク複合体のコアタンパク質の重量比は約７．０％と記載されており、従って本発明における糖・タンパク複合体の推定純度は（炭水化物×０．０７＋脂質）／（炭水化物＋タンパク質＋脂質）×１００＝４９．２％と算出された。また、糖・タンパク複合体の分子量は約１７０万であった。
【実施例６】
【００７２】
サメから手作業で摘出した軟骨を電動のミートチョッパーで細かく破砕しミンチ状にしたものをアセトンに浸漬し、脱脂及び脱水を行った。処理後の軟骨を通風又は減圧乾燥したもの１２．００ｇを出発原料とした。
【００７３】
５リットルの抽出用容器にあらかじめ１３℃に冷却しておいた蒸留水１６７８．７４ｇを入れ、さらに固形の苛性ソーダ８．０６ｇを投入し、総量１６８０．００ｇ（０．１２Ｎ）の苛性ソーダ水溶液を準備した。この抽出容器に出発原料１２．００ｇを投入し、スターラーを用いて攪拌しながら、０．３時間浸漬し、酢酸で中和処理した。
【００７４】
中和処理終了後、内容物を１ｍｍ角のステンレススチール製こし器をセットした別の容器に移し、軟骨を除去して、糖・タンパク複合体を含む抽出液を回収した。抽出液を日立ｈｉｍａｃＣＦ７Ｄ２型の遠心分離機を用いて３０００ｒｐｍ、２０分の遠心分離を行い、固形分ならびに油脂分を除去して、糖・タンパク複合体を含む液相を回収した。
【００７５】
さらに、この液相をフィルターペーパー（アドバンテック社製）を用いて濾過し、濾液の６倍量の蒸留水を加えた後、日本ミリポア製 ＢＩＯＭＡＸ １００Ｋ ＰＯＬＹＥＴＨＥＲＳＵＬＦＯＮＥ（分画分子量１０万）を用いて分画と濃縮を同時に行った。
【００７６】
得られた濃縮液の一部を採取し、液中の固形分重量を測定した。測定は、乾燥炉（ＹＡＭＡＴＯ ＤＸ４０１）により、１０５℃、１６時間乾燥させ、完全に水分を蒸発させた後、残った固形分をデジタル計量器（Ａ＆Ｄ社 ＧＦ−４００）で精密に測定した。その結果、１２．００ｇの出発原料から換算値でその１６．１％に相当する１．９３ｇの乾燥固形分を得ることができた。
【００７７】
また、濃縮液をアミノ酸自動分析装置（日立製作所社製、Ｌ−８５００ Ａｍｉｎｏ Ａｃｉｄ Ａｎａｌｙｚｅｒ）を用いてアミノ酸量を測定することで濃縮液中のコラーゲン量を定量するとともに、ガランボス法によりウロン酸量を定量して糖・タンパク複合体量を計算した。さらに高速液体クロマトグラフィ装置（島津製作所、カラムＴＳＫ−ＧＥＬ Ｇ４０００ＰＷＸＬ）を用いて、糖・タンパク複合体の分子量を測定した。
【００７８】
これらの分析の結果、固形分中にタンパク質３７．８％、灰分２７．４％、炭水化物３７．８％、脂質０．０％が存在することが判った。特許文献１によれば、糖・タンパク複合体のコアタンパク質の重量比は約７．０％と記載されており、従って本発明における糖・タンパク複合体の推定純度は（炭水化物×０．０７＋脂質）／（炭水化物＋タンパク質＋脂質）×１００＝５５．７％と算出された。また、糖・タンパク複合体の分子量は約１５０万であった。
【実施例７】
【００７９】
スルメイカ（真イカ）の表皮を手作業で剥離した後、アセトンに浸漬し、脱脂及び脱水を行った。処理後の表皮を通風又は減圧乾燥した後、はさみで細かく切断し、すり鉢で粉状に粉砕して乾燥表皮を調製した。
【００８０】
１０リットルの抽出用容器にあらかじめ５℃に冷却しておいた蒸留水５０３６．２０ｇを入れ、さらに固形の苛性ソーダ２２．１８ｇを投入し、総量５０４０ｇ（０．１１Ｎ）の苛性ソーダ水溶液を準備した。この抽出容器に乾燥表皮３３．７０ｇを投入し、スターラーを用いて攪拌しながら、０．３時間浸漬し、酢酸で中和処理した。
【００８１】
中和処理終了後、内容物を１ｍｍ角のステンレススチール製こし器をセットした別の容器に移し、表皮を除去して、糖・タンパク複合体を含む抽出液を回収した。抽出液を日立ｈｉｍａｃＣＦ７Ｄ２型の遠心分離機を用いて３０００ｒｐｍ、２０分の遠心分離を行い、固形分ならびに油脂分を除去して、糖・タンパク複合体を含む液相を回収した。
【００８２】
さらに、この液相をフィルターペーパー（アドバンテック社製）を用いて濾過し、濾液の６倍量の蒸留水を加えた後、日本ミリポア製 ＢＩＯＭＡＸ １００Ｋ ＰＯＬＹＥＴＨＥＲＳＵＬＦＯＮＥ（分画分子量１０万）を用いて分画と濃縮を同時に行った。
【００８３】
得られた濃縮液の一部を採取し、液中の固形分重量を測定した。測定は、乾燥炉（ＹＡＭＡＴＯ ＤＸ４０１）により、１０５℃、１６時間乾燥させ、完全に水分を蒸発させた後、残った固形分をデジタル計量器（Ａ＆Ｄ社 ＧＦ−４００）で精密に測定した。その結果、３３．７０ｇの乾燥表皮から、その５５．０％に相当する１８．５４ｇの乾燥固形分を得ることができた。
【００８４】
また、濃縮液をアミノ酸自動分析装置（日立製作所社製、Ｌ−８５００ Ａｍｉｎｏ Ａｃｉｄ Ａｎａｌｙｚｅｒ）を用いてアミノ酸量を測定することで濃縮液中のコラーゲン量を定量するとともに、ガランボス法によりウロン酸量を定量して糖・タンパク複合体量を計算した。さらに高速液体クロマトグラフィ装置（島津製作所、カラムＴＳＫ−ＧＥＬ Ｇ４０００ＰＷＸＬ）を用いて、糖・タンパク複合体の分子量を測定した。
【００８５】
これらの分析の結果、固形分中にタンパク質９１．７％、灰分１．９％、炭水化物６．４％、脂質０．０％が存在することが判った。特許文献１によれば、糖・タンパク複合体のコアタンパク質の重量比は約７．０％と記載されており、従って本発明における糖・タンパク複合体の推定純度は（炭水化物×０．０７＋脂質）／（炭水化物＋タンパク質＋脂質）×１００＝７．０％と算出された。また、糖・タンパク複合体の分子量は約１７０万であった。
【実施例８】
【００８６】
スルメイカ（真イカ）の軟骨（トンビ）を手作業で剥離した後、アセトンに浸漬し、脱脂及び脱水を行った。処理後のトンビを通風又は減圧乾燥した後、はさみで細かく切断し、すり鉢で粉状に粉砕して乾燥トンビを調製した。
【００８７】
３リットルの抽出用容器にあらかじめ１１℃に冷却しておいた蒸留水１６７２．６ｇを入れ、さらに固形の苛性ソーダ７．３９ｇを投入し、総量１６８０ｇ（０．１１Ｎ）の苛性ソーダ水溶液を準備した。この抽出容器に乾燥トンビ１２．０ｇを投入し、スターラーを用いて攪拌しながら、０．３時間浸漬し、酢酸で中和処理した。
【００８８】
中和処理終了後、内容物を１ｍｍ角のステンレススチール製こし器をセットした別の容器に移し、トンビを除去して、糖・タンパク複合体を含む抽出液を回収した。抽出液を日立ｈｉｍａｃＣＦ７Ｄ２型の遠心分離機を用いて７０００ｒｐｍ、２０分の遠心分離を行い、固形分ならびに油脂分を除去して、糖・タンパク複合体を含む液相を回収した。
【００８９】
さらに、この液相をフィルターペーパー（アドバンテック社製）を用いて濾過し、濾液の６倍量の蒸留水を加えた後、日本ミリポア製 ＢＩＯＭＡＸ １００Ｋ ＰＯＬＹＥＴＨＥＲＳＵＬＦＯＮＥ（分画分子量１０万）を用いて分画と濃縮を同時に行った。
【００９０】
得られた濃縮液の一部を採取し、液中の固形分重量を測定した。測定は、乾燥炉（ＹＡＭＡＴＯ ＤＸ４０１）により、１０５℃、１６時間乾燥させ、完全に水分を蒸発させた後、残った固形分をデジタル計量器（Ａ＆Ｄ社 ＧＦ−４００）で精密に測定した。その結果、１２．０ｇの乾燥軟骨（トンビ）から、その６８．６％に相当する８．２３ｇの乾燥固形分を得ることができた。
【００９１】
また、濃縮液をアミノ酸自動分析装置（日立製作所社製、Ｌ−８５００Ａｍｉｎｏ Ａｃｉｄ Ａｎａｌｙｚｅｒ）を用いてアミノ酸量を測定することで濃縮液中のコラーゲン量を定量するとともに、ガランボス法によりウロン酸量を定量して糖・タンパク複合体量を計算した。さらに高速液体クロマトグラフィ装置（島津製作所、カラムＴＳＫ−ＧＥＬ Ｇ４０００ＰＷＸＬ）を用いて、糖・タンパク複合体の分子量を測定した。
【００９２】
これらの分析の結果、固形分中にタンパク質４１．８％、灰分１８．２％、炭水化物４０％、脂質０．０％が存在することが判った。特許文献１によれば、糖・タンパク複合体のコアタンパク質の重量比は約７．０％と記載されており、従って本発明における糖・タンパク複合体の推定純度は（炭水化物×１．０７＋脂質）／（炭水化物＋タンパク質＋脂質）×１００＝７３．５％と算出された。また、糖・タンパク複合体の分子量は約３０万であった。
【実施例９】
【００９３】
スルメイカ（真イカ）の肝臓外皮を手作業で剥離した後、アセトンに浸漬し、脱脂及び脱水を行った。処理後の肝臓外皮を通風又は減圧乾燥した後、はさみで細かく切断し、すり鉢で粉状に粉砕して乾燥肝臓外皮を調製した。
【００９４】
３リットルの抽出用容器にあらかじめ１１℃に冷却しておいた蒸留水１６７１．９ｇを入れ、さらに固形の苛性ソーダ８．０６ｇを投入し、総量１６８０ｇ（０．１２Ｎ）の苛性ソーダ水溶液を準備した。この抽出容器に乾燥肝臓外皮１２．０ｇを投入し、スターラーを用いて攪拌しながら、０．３時間浸漬し、酢酸で中和処理した。
【００９５】
中和処理終了後、内容物を１ｍｍ角のステンレススチール製こし器をセットした別の容器に移し、肝臓外皮を除去して、糖・タンパク複合体を含む抽出液を回収した。抽出液を日立ｈｉｍａｃＣＦ７Ｄ２型の遠心分離機を用いて７０００ｒｐｍ、２０分の遠心分離を行い、固形分ならびに油脂分を除去して、糖・タンパク複合体を含む液相を回収した。
【００９６】
さらに、この液相をフィルターペーパー（アドバンテック社製）を用いて濾過し、濾液の６倍量の蒸留水を加えた後、日本ミリポア製 ＢＩＯＭＡＸ １００Ｋ ＰＯＬＹＥＴＨＥＲＳＵＬＦＯＮＥ（分画分子量１０万）を用いて分画と濃縮を同時に行った。
【００９７】
得られた濃縮液の一部を採取し、液中の固形分重量を測定した。測定は、乾燥炉（ＹＡＭＡＴＯ ＤＸ４０１）により、１０５℃、１６時間乾燥させ、完全に水分を蒸発させた後、残った固形分をデジタル計量器（Ａ＆Ｄ社 ＧＦ−４００）で精密に測定した。その結果、１２．０ｇの乾燥肝臓外皮から、その２９．２％に相当する３．５０ｇの乾燥固形分を得ることができた。
【００９８】
また、濃縮液をアミノ酸自動分析装置（日立製作所社製、Ｌ−８５００ Ａｍｉｎｏ Ａｃｉｄ Ａｎａｌｙｚｅｒ）を用いてアミノ酸量を測定することで濃縮液中のコラーゲン量を定量するとともに、ガランボス法によりウロン酸量を定量して糖・タンパク複合体量を計算した。さらに高速液体クロマトグラフィ装置（島津製作所、カラムＴＳＫ−ＧＥＬ Ｇ４０００ＰＷＸＬ）を用いて、糖・タンパク複合体の分子量を測定した。
【００９９】
これらの分析の結果、固形分中にタンパク質８７．３７％、灰分２．４３％、炭水化物１０％、脂質０．２％が存在することが判った。特許文献１によれば、糖・タンパク複合体のコアタンパク質の重量比は約７．０％と記載されており、従って本発明における糖・タンパク複合体の推定純度は（炭水化物×１．０７＋脂質）／（炭水化物＋タンパク質＋脂質）×１００＝１１．１７％と算出された。また、糖・タンパク複合体の分子量は約１４５万であった。
【技術分野】
【０００１】
本発明は、医薬品原料、医療用品材料、化粧品原料、食品材料、工業用材料等として有用な糖・タンパク複合体を、糖・タンパク複合体を含有する生物学的試料、例えば魚類、軟体動物、鳥類又は哺乳類の軟骨組織から抽出し、製造する方法に関する。
【背景技術】
【０００２】
糖・タンパク複合体は、１本のコアタンパク質に数本から数十本の直鎖状の糖鎖が共有結合してなる、非常に複雑かつ多種の構造を有し、軟骨組織に存在する糖・タンパク複合体の糖鎖の代表的なものがコンドロイチン硫酸である。
【０００３】
コンドロイチン硫酸は、保湿性、生体適合性あるいは潤滑性に優れる等の高い有用性から産業上注目されている成分であり、天然資源からの効果的な回収、製造法が種々開発されている。
【０００４】
軟骨組織においては、コンドロイチン硫酸はそれ自体単独では存在せず、タンパク質との複合体すなわち糖・タンパク複合体の形で存在している。しかし、糖・タンパク複合体をそのまま抽出することは糖タンパク質複合体という複雑な構造故に困難な場合が多く、そのため糖・タンパク複合体のコアタンパク質部分を徹底的に分解してコンドロイチン硫酸だけを抽出しようという方法が主に採用されてきた。この方法の製造物はコンドロイチン硫酸等のムコ多糖類である。
【０００５】
一方、コンドロイチン硫酸としてではなく、糖・タンパク複合体そのままを回収、製造し利用する試みもなされている。特に、魚類、哺乳類の軟骨組織には、コンドロイチン硫酸を主要糖鎖とする糖・タンパク複合体が含まれている一方、これらの軟骨組織は通常廃棄処分となっていたことから、廃棄物の有効利用を兼ねた軟骨組織からの糖・タンパク複合体の製造法が幾つか提唱されている。
【０００６】
例えば、サケ鼻軟骨からアルカリ溶液を用いて糖・タンパク質複合体を抽出する方法（特許文献１）が報告されている。この方法は、これまでの抽出、精製コスト低減可能な技術であることが本発明者の追試試験でも確認が取れているが、残念ながら未だ実用化の課題がある。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００７】
【特許文献１】特許第４２１９９７４号
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００８】
本発明は、魚類、軟体動物、鳥類又は哺乳類、特にそれらの非可食部位から低コストで経口摂取可能な糖・タンパク複合体の製造を工業化する方法の確立を課題とするものである。
【課題を解決するための手段】
【０００９】
本発明者らは、本来タンパク質及びタンパク質複合体の回収、製造には不適であったアルカリ溶液を一定の条件下で使用することにより、糖・タンパク複合体を効率よく軟骨組織その他の糖・タンパク複合体を含有する生物学的試料から回収することができること、さらに軟骨組織から糖タンパク質複合体を回収した回収残さから非変性ＩＩ型コラーゲンを回収することができることを見出し、下記の各発明を完成した。
【００１０】
（１）糖・タンパク複合体を含有する生物学的試料を０．１１Ｎ〜０．１５Ｎのアルカリ金属塩又はアルカリ土類金属塩の溶液に１１〜１５℃で０．１〜０．５時間、浸漬し、酸で中和する工程、並びに浸漬後の溶液を回収する工程を含む、糖・タンパク複合体の製造方法。
【００１１】
（２）回収した溶液から糖・タンパク複合体を分離する工程をさらに含む、請求の範囲第１項に記載の製造方法。
【００１２】
（３）溶液がアルカリ金属塩の溶液である、（１）又は（２）に記載の製造方法。
【００１３】
（４）糖・タンパク複合体を含有する生物学的試料が、魚類、軟体動物、鳥類若しくは哺乳類の軟骨組織、筋肉繊維又は皮である、（１）〜（３）の何れかに記載の製造方法。
【００１４】
（５）糖・タンパク複合体を含有する生物学的試料が、魚類、鳥類又は哺乳類の軟骨組織である、（１）〜（３）のいづれかに記載の製造方法であって、糖タンパク質複合体を回収した残さから非変性ＩＩ型コラーゲンを回収する工程を含む糖・タンパク質複合体の製造方法。
【発明の効果】
【００１５】
本発明は、従来の抽出方法に比べ、糖・タンパク複合体を非変成、未分解の状態で簡便かつ短時間で回収することができ、糖・タンパク複合体の製造コストを大きく減ずることができる。
【００１６】
また、本発明の方法は、本来廃棄処分とされてきた魚類及び哺乳類などの非可食部位から産業上有用性の高い糖・タンパク複合体を回収することができ、産業廃棄物の有効利用並びに産業廃棄物自体の減量化にも貢献することができる。
【００１７】
また、本発明では、組織内に内包しているタンパク質分解酵素を失活させるためのタンパク質分解酵素阻害剤（インヒビター）の添加を必ずしも必要としない。かかるインヒビターの効果は全てのタンパク質分解酵素に有効ではない上に、インヒビター自身が人体に有害なものが多く、食品材料としての糖・タンパク複合体を製造するに当たり、インヒビターを使用することは好ましくないが、本発明はインヒビターを必要とはせず、従って上記の問題を回避することが可能である。
【図面の簡単な説明】
【００１８】
【図１】 苛性ソーダを用いたときの糖・タンパク複合体の回収量を示す図である。
【発明を実施するための形態】
【００１９】
本発明は、一般に熱やアルカリに不安定なタンパク質を含む糖・タンパク複合体を、本来禁忌とされてきたアルカリ溶液を用いるという発想の下に抽出、製造する方法である。
【００２０】
糖・タンパク複合体は糖質とタンパク質の複合体であるが、コアタンパク質とそのタンパク質に結合している糖鎖の結合力が弱く、簡単に分離してしまう性質を有している。そのため、その抽出や精製は一般に極めて困難であり、タンパク質だけからなるコラーゲンや糖質だけからなるコンドロイチン硫酸などの抽出とは異なる注意が必要である。このため、従来技術は、工程が複雑になる、あるいは手作業を伴う部分が多いなど、大量生産に向かないものであった。
【００２１】
また、一般にタンパク質は熱や酸、特にアルカリに対して不安定であり、容易に変成、分解してしまうという性質を有している。この性質を利用し、タンパク質を積極的にアルカリを用いて分解する方法は知られているが、糖タンパク質複合体としてタンパク質部分の分解を防ぎながらアルカリで抽出することは知られていない。
【００２２】
本発明は、糖・タンパク複合体を含む生物学的試料、例えば魚類、軟体動物若しくは哺乳類の軟骨組織、筋肉繊維又は皮に対して適用することができるが、軟骨組織への適用が好ましい。
【００２３】
本発明において使用される軟骨組織は、魚類及び哺乳類、特にそれらの非可食部位のいずれも利用することができる。本発明において軟骨組織とは、軟骨単独あるいは軟骨の周辺部位、例えば骨、筋肉繊維、皮等を含む組織のいずれも意味する。
【００２４】
本発明においては、特に一般に氷頭とよばれている、サケの頭部にその平均重量で約６％含まれている鼻軟骨組織の利用が好ましい。北海道沿岸部で漁獲されたサケ（大半はシロサケである。）が、様々な加工品として処理される際、その頭部は不要とされることが多く、そのため切断された頭部は、一部魚粉に加工され利用されてはいるものの、その大半は産業廃棄物として廃棄処理されている。氷頭はその様な廃棄物から簡便、安価かつ安定的に入手することができる。
【００２５】
また本発明では、氷頭の他、エイの軟骨組織、サメの軟骨組織等の魚類由来の軟骨組織、ニワトリの軟骨組織等の鳥類の軟骨組織、さらにはウシの喉軟骨や気管支軟骨、クジラの軟骨等の哺乳動物由来の軟骨組織も利用することができる。さらに、軟体動物であるイカやタコの表皮にも糖・タンパク複合体が存在することが知られており、これら軟体動物の表皮等も本発明で利用することができる。
【００２６】
特に、スルメイカの表皮には硫酸を殆ど含まないコンドロイチン・タンパク質複合体が存在しており、またコンドロイチンはスルメイカ表皮中のムコ多糖の７０％以上を占めることが報告されている（須山ら他共著、「イカの利用」、１９８０年１１月発行、第９３頁、恒星社）ことから、スルメイカの表皮は本発明における糖・タンパク複合体を含む生物学的試料の一例として有用である。
【００２７】
上記の糖・タンパク複合体を含む生物学的試料の多くも産業廃棄物であり、その入手は容易である。これらの原料は、次に説明するアルカリ溶液への浸漬に先だって、表面積を増加させて糖・タンパク複合体の抽出量を上げるため、５００μｍ以下に破砕することが好ましい。
【００２８】
本発明で使用するアルカリ溶液は、アルカリ金属またはその塩の水溶液、アルカリ土類金属又はその塩の水溶液などを適宜使用することができるが、糖・タンパク複合体の抽出効率、後処理の簡便さ等から、アルカリ金属の水溶液、苛性ソーダ（ＮａＯＨ）、重曹、炭酸カルシウム、苛性カリの使用が好ましく、特に苛性ソーダの使用が好ましい。
【００２９】
アルカリ溶液の濃度は、０．１１Ｎ〜０．１２Ｎが好ましく、このアルカリ溶液を用いる場合の浸漬時間は０．１〜０．５時間程度とすることが好ましい。抽出時間を０．１〜０．５時間程度とすることで、糖・タンパク複合体のコアタンパク質の分解を抑制することも可能である。これらの条件により、より高分子の糖・タンパク複合体を回収、製造することができる。
【００３０】
アルカリ溶液への軟骨組織の浸漬は、１１℃〜１５℃とすることにより、糖・タンパク複合体は殆ど分解されず、高分子の糖タンパク質複合体として抽出することができる。
【００３１】
浸漬は、軟骨１重量部に対してアルカリ溶液５〜１２重量部を用いて行えばよい。好ましくは、ミキサーあるいはスターラーなどを用いて攪拌しながら浸漬する。
【００３２】
軟骨組織からの糖・タンパク複合体の抽出は、例えばガランボス法（Ｊｏｈｎら、ＡＮＡＬＹＴＩＣＡＬ ＢＩＯＣＨＥＭＩＳＴＲＹ、１９６７年、第１９巻、第１１９−１３２頁）によってウロン酸量を検出ないし定量することでモニターすることができるが、その他公知の方法によってウロン酸を検出し、モニターしてもよい。
【００３３】
浸漬が終了したアルカリ溶液は、糖・タンパク複合体を抽出した後の残渣を多く含むので、これらを濾過、遠心分離その他の方法で取り除くことが好ましい。糖・タンパク複合体を含む抽出液はそのまま製品として利用してもよいが、糖・タンパク複合体の各種用途に対して求められる純度にまで適当な方法で糖・タンパク複合体を分離ないし精製することが好ましい。
【００３４】
本発明において、糖・タンパク複合体の精製方法としては格別の方法を要するものではないが、好ましい方法として遠心分離法を挙げることができる。遠心分離操作によって、細かい固形物を沈殿残渣として、原料由来の油脂分を上面浮遊物として、それぞれ簡便に除去することができる。
【００３５】
また、遠心分離法によって回収される糖・タンパク複合体を含む液相を、さらにフィルターペーパーあるいは適当な分画分子量を有する限外濾過膜分離装置などを用いて濾過してもよい。排除分子量としては概ね５万〜１００万の範囲であればよい。この操作において、分画分子量５０万以上のものを使用すれば、液相からコラーゲンも除去することができ、糖・タンパク複合体の純度を上げることが可能である。また、糖・タンパク複合体を含む液相に水を加えて液相の粘度を下げることで、膜の通過を容易にするとともに、これを繰り返すことで、わずかに生じる魚臭を除去することも可能である。
【００３６】
さらに、得られた濃縮液を食塩飽和エタノールに加えることで、ゲル状の糖・タンパク複合体を回収することもできる。このゲル状糖・タンパク複合体は真空凍結乾燥機を用いて固形物にしてもよい。あるいは、スプレードライヤーで乾燥させ、粉末状固形物とすることもできる。
【００３７】
以下に実施例を挙げて本発明をさらに詳細に説明するが、本発明はこれらの実施例に限定されるものではない。
【実施例】
【実施例１】
【００３８】
−４０℃で冷凍保管したシロサケの頭部から摘出した鼻軟骨を電動のミートチョッパーで細かく破砕しミンチ状にしたものを２００．００ｇ用意し、出発原料とした。５リットルの抽出用容器にあらかじめ１２℃に冷却しておいた蒸留水２３８９．４０ｇを入れ、さらに固形のカセイソーダ１０．５６ｇを投入し、総量２４００．００ｇ（０．１１Ｎ）のカセイソーダ水溶液を準備した。この抽出用容器に出発原料２００．００ｇを投入し、スターラーを用いて攪拌しながら、０．３時間浸漬し、酢酸で中和処理した。
【００３９】
中和処理終了後、内容物を１ｍｍ角のステンレススチール製こし器をセットした別の容器に移し、糖・タンパク複合体を含む抽出液を回収した。
抽出液をＩＷＡＫＩ ＣＦＳ−４００型の遠心分離機を用いて３５００ｒｐｍ、２０分の遠心分離を行い、固形分ならびに油脂分を除去して、糖・タンパク複合体を含む液相を回収した。
【００４０】
さらに、この液相をフィルターペーパー（アドバンテック社製）を用いて濾過し、濾液の６倍量の蒸留水を加えた後、日本ミリポア製 ＰＲＥＰ／ＳＣＡＬＥ ＴＦＦ膜（分画分子量１０万）を用いて分画と濃縮を同時に行った。
【００４１】
得られた濃縮液の一部を採取し、液中の固形分重量を測定した。測定は、乾燥炉（ＹＡＭＡＴＯ ＤＸ４０１）により、１０５℃、１６時間乾燥させ、完全に水分を蒸発させた後、残った固形分をデジタル計量器（Ａ＆Ｄ社 ＧＦ−４００）で精密に測定した。その結果、２００．００ｇの出発原料から、換算値でその４．１％に相当する８．２ｇの乾燥固形分を得ることができた。
【００４２】
また、濃縮液をアミノ酸自動分析装置（日立製作所社製、Ｌ−８５００ Ａｍｉｎｏ Ａｃｉｄ Ａｎａｌｙｚｅｒ）を用いてアミノ酸量を測定することで濃縮液中のコラーゲン量を定量するとともに、ガランボス法によりウロン酸量を定量して糖・タンパク複合体量を計算した。さらに高速液体クロマトグラフィ装置（島津製作所、カラムＴＳＫ−ＧＥＬ Ｇ４０００ＰＷＸＬ）を用いて、糖・タンパク複合体の分子量を測定した。
【００４３】
これらの分析の結果、固形分中にタンパク質２５．０％、灰分２１．５％、炭水化物５２．９％、脂質０．６％が存在することが判った。特許文献１によれば、糖・タンパク複合体のコアタンパク質の重量比は約７．０％と記載されており、従って本発明における糖・タンパク複合体は、炭水化物が約５２．９％であることから計算して、純度は約５７％と推定される。また糖・タンパク複合体の分子量は約１３０万であった。
【００４４】
上記の実施例に示す操作において、カセイソーダ溶液の濃度を０．０２５Ｎ、０．１２Ｎで１２時間浸漬、抽出を行ったときの糖・タンパク複合体の回収量（ウロン酸量）の経時変化を調べた結果を図１に示す。
【実施例２】
【００４５】
−４０℃で冷凍保管したシロサケの頭部から摘出した鼻軟骨を電動のミートチョッパーで細かく破砕しミンチ状にしたものをアセトンに浸漬し、鼻軟骨から脱脂及び脱水を行った。処理後の鼻軟骨を通風又は減圧乾燥したもの２４．００ｇを出発原料とした。
【００４６】
５リットルの抽出用容器にあらかじめ１３℃に冷却しておいた蒸留水２９８７．７ｇを入れ、さらに固形のカセイソーダ１２．３ｇを投入し、総量３０００．００ｇ（０．１１Ｎ）のカセイソーダ水溶液を準備した。この抽出容器に出発原料２４．００ｇを投入し、スターラーを用いて攪拌しながら、０．４時間浸漬し、酢酸で中和処理した。
【００４７】
中和処理終了後、内容物を１ｍｍ角のステンレススチール製こし器をセットした別の容器に移し、鼻軟骨を除去して、糖・タンパク複合体を含む抽出液を回収した。抽出液を日立ｈｉｍａｃＣＦ７Ｄ２型の遠心分離機を用いて３０００ｒｐｍ、２０分の遠心分離を行い、固形分ならびに油脂分を除去して、糖・タンパク複合体を含む液相を回収した。
【００４８】
さらに、この液相をフィルターペーパー（アドバンテック社製）を用いて濾過し、濾液の６倍量の蒸留水を加えた後、日本ミリポア製 ＢＩＯＭＡＸ １００Ｋ ＰＯＬＹＥＴＨＥＲＳＵＬＦＯＮＥ（分画分子量１０万）を用いて分画と濃縮を同時に行った。
【００４９】
得られた濃縮液の一部を採取し、液中の固形分重量を測定した。測定は、乾燥炉（ＹＡＭＡＴＯ ＤＸ４０１）により、１０５℃、１６時間乾燥させ、完全に水分を蒸発させた後、残った固形分をデジタル計量器（Ａ＆Ｄ社 ＧＦ−４００）で精密に測定した。その結果、２４．００ｇの出発原料から、換算値でその３６％に相当する８．６４ｇの乾燥固形分を得ることができた。
【００５０】
また、濃縮液をアミノ酸自動分析装置（日立製作所社製、Ｌ−８５００ Ａｍｉｎｏ Ａｃｉｄ Ａｎａｌｙｚｅｒ）を用いてアミノ酸量を測定することで濃縮液中のコラーゲン量を定量するとともに、ガランボス法によりウロン酸量を定量して糖・タンパク複合体量を計算した。さらに高速液体クロマトグラフィ装置（島津製作所、カラムＴＳＫ−ＧＥＬ Ｇ４０００ＰＷＸＬ）を用いて、糖・タンパク複合体の分子量を測定した。
【００５１】
これらの分析の結果、固形分中にタンパク質１１．８％、灰分１８．４％、炭水化物６７．８％、脂質０．０％が存在することが判った。特許文献１によれば、糖・タンパク複合体のコアタンパク質の重量比は約７．０％と記載されており、従って本発明における糖・タンパク複合体の推定純度は（炭水化物×０．０７＋脂質）／（炭水化物＋タンパク質＋脂質）×１００＝９１．１％と算出された。また、糖・タンパク複合体の分子量は約１３０万であった。
【実施例３】
【００５２】
−４０℃で冷凍保管したシロサケの頭部から摘出した鼻軟骨を電動のミートチョッパーで細かく破砕しミンチ状にしたものをアセトンに浸漬し、鼻軟骨から脱脂及び脱水を行った。処理後の鼻軟骨を通風又は減圧乾燥したもの１７．９０ｇを出発原料とした。
【００５３】
５リットルの抽出用容器にあらかじめ１３℃に冷却しておいた蒸留水２３１１．０５ｇを入れ、さらに固形の苛性カリ１３．９５ｇを投入し、総量２３２５ｇ（０．１５Ｎ）の苛性カリ水溶液を準備した。この抽出容器に出発原料１７．９０ｇを投入し、スターラーを用いて攪拌しながら、０．４時間浸漬し、酢酸で中和処理した。
【００５４】
中和処理終了後、内容物を１ｍｍ角のステンレススチール製こし器をセットした別の容器に移し、鼻軟骨を除去して、糖・タンパク複合体を含む抽出液を回収した。抽出液を日立ｈｉｍａｃＣＦ７Ｄ２型の遠心分離機を用いて３０００ｒｐｍ、２０分の遠心分離を行い、固形分ならびに油脂分を除去して、糖・タンパク複合体を含む液相を回収した。
【００５５】
さらに、この液相をフィルターペーパー（アドバンテック社製）を用いて濾過し、濾液の６倍量の蒸留水を加えた後、日本ミリポア製 ＢＩＯＭＡＸ １００Ｋ ＰＯＬＹＥＴＨＥＲＳＵＬＦＯＮＥ（分画分子量１０万）を用いて分画と濃縮を同時に行った。
【００５６】
得られた濃縮液の一部を採取し、液中の固形分重量を測定した。測定は、乾燥炉（ＹＡＭＡＴＯ ＤＸ４０１）により、１０５℃、１６時間乾燥させ、完全に水分を蒸発させた後、残った固形分をデジタル計量器（Ａ＆Ｄ社 ＧＦ−４００）で精密に測定した。その結果、１７．９０ｇの出発原料から換算値でその３７％に相当する６．６２ｇの乾燥固形分を得ることができた。
【００５７】
また、濃縮液をアミノ酸自動分析装置（日立製作所社製、Ｌ−８５００ Ａｍｉｎｏ Ａｃｉｄ Ａｎａｌｙｚｅｒ）を用いてアミノ酸量を測定することで濃縮液中のコラーゲン量を定量するとともに、ガランボス法によりウロン酸量を定量して糖・タンパク複合体量を計算した。さらに高速液体クロマトグラフィ装置（島津製作所、カラムＴＳＫ−ＧＥＬ Ｇ４０００ＰＷＸＬ）を用いて、糖・タンパク複合体の分子量を測定した。
【００５８】
これらの分析の結果、固形分中にタンパク質１４．０％、灰分２２．４％、炭水化物６３．６％、脂質０．０％が存在することが判った。特許文献１によれば、糖・タンパク複合体のコアタンパク質の重量比は約７．０％と記載されており、従って本発明における糖・タンパク複合体の推定純度は（炭水化物×０．０７＋脂質）／（炭水化物＋タンパク質＋脂質）×１００＝８７．７％と算出された。また、糖・タンパク複合体の分子量は約１２９万であった。
【実施例４】
【００５９】
国内産鶏ヤゲン軟骨から手作業で肉片を除去した後、電動のミートチョッパーで細かく破砕しミンチ状にしたものをアセトンに浸漬し、鶏ヤゲン軟骨から脱脂及び脱水を行った。処理後の軟骨を通風又は減圧乾燥したもの４４．４０ｇを出発原料とした。
【００６０】
５リットルの抽出用容器にあらかじめ１３℃に冷却しておいた蒸留水２９９７．７５ｇを入れ、さらに固形の苛性ソーダ１５．６ｇを投入し、総量３０００．００ｇ（０．１３Ｎ）の苛性ソーダ水溶液を準備した。この抽出容器に出発原料４４．４０ｇを投入し、スターラーを用いて攪拌しながら、０．２時間浸漬し、酢酸で中和処理した。
【００６１】
中和処理終了後、内容物を１ｍｍ角のステンレススチール製こし器をセットした別の容器に移し、軟骨を除去して、糖・タンパク複合体を含む抽出液を回収した。抽出液を日立ｈｉｍａｃＣＦ７Ｄ２型の遠心分離機を用いて３０００ｒｐｍ、２０分の遠心分離を行い、固形分ならびに油脂分を除去して、糖・タンパク複合体を含む液相を回収した。
【００６２】
さらに、この液相をフィルターペーパー（アドバンテック社製）を用いて濾過し、濾液の６倍量の蒸留水を加えた後、日本ミリポア製 ＢＩＯＭＡＸ １００Ｋ ＰＯＬＹＥＴＨＥＲＳＵＬＦＯＮＥ（分画分子量１０万）を用いて分画と濃縮を同時に行った。
【００６３】
得られた濃縮液の一部を採取し、液中の固形分重量を測定した。測定は、乾燥炉（ＹＡＭＡＴＯ ＤＸ４０１）により、１０５℃、１６時間乾燥させ、完全に水分を蒸発させた後、残った固形分をデジタル計量器（Ａ＆Ｄ社 ＧＦ−４００）で精密に測定した。その結果、４４．４０ｇの出発原料から換算値でその２５．１％に相当する１１．１４ｇの乾燥固形分を得ることができた。
【００６４】
また、濃縮液をアミノ酸自動分析装置（日立製作所社製、Ｌ−８５００ Ａｍｉｎｏ Ａｃｉｄ Ａｎａｌｙｚｅｒ）を用いてアミノ酸量を測定することで濃縮液中のコラーゲン量を定量するとともに、ガランボス法によりウロン酸量を定量して糖・タンパク複合体量を計算した。さらに高速液体クロマトグラフィ装置（島津製作所、カラムＴＳＫ−ＧＥＬ Ｇ４０００ＰＷＸＬ）を用いて、糖・タンパク複合体の分子量を測定した。
【００６５】
これらの分析の結果、固形分中にタンパク質３１．３％、灰分１６．９％、炭水化物５１．８％、脂質０．０％が存在することが判った。特許文献１によれば、糖・タンパク複合体のコアタンパク質の重量比は約７．０％と記載されており、従って本発明における糖・タンパク複合体の推定純度は（炭水化物×０．０７＋脂質）／（炭水化物＋タンパク質＋脂質）×１００＝６６．７％と算出された。また、糖・タンパク複合体の分子量は約９２万（１６％）及び約４６万（８４％）であった。
【実施例５】
【００６６】
カンギエイ（カスベ）から手作業で摘出した軟骨を電動のミートチョッパーで細かく破砕しミンチ状にしたものをアセトンに浸漬し、脱脂及び脱水を行った。処理後の軟骨を通風又は減圧乾燥したもの１２．００ｇを出発原料とした。
【００６７】
５リットルの抽出用容器にあらかじめ５℃に冷却しておいた蒸留水１６７０．５９ｇを入れ、さらに固形の苛性ソーダ９．４１ｇを投入し、総量１６８０．００ｇ（０．１４Ｎ）の苛性ソーダ水溶液を準備した。この抽出容器に出発原料１２．００ｇを投入し、スターラーを用いて攪拌しながら、０．２５時間浸漬し、酢酸で中和処理した。
中和処理終了後、内容物を１ｍｍ角のステンレススチール製こし器をセットした別の容器に移し、軟骨を除去して、糖・タンパク複合体を含む抽出液を回収した。抽出液を日立ｈｉｍａｃＣＦ７Ｄ２型の遠心分離機を用いて３０００ｒｐｍ、２０分の遠心分離を行い、固形分ならびに油脂分を除去して、糖・タンパク複合体を含む液相を回収した。
【００６８】
さらに、この液相をフィルターペーパー（アドバンテック社製）を用いて濾過し、濾液の６倍量の蒸留水を加えた後、日本ミリポア製 ＢＩＯＭＡＸ １００Ｋ ＰＯＬＹＥＴＨＥＲＳＵＬＦＯＮＥ（分画分子量１０万）を用いて分画と濃縮を同時に行った。
【００６９】
得られた濃縮液の一部を採取し、液中の固形分重量を測定した。測定は、乾燥炉（ＹＡＭＡＴＯ ＤＸ４０１）により、１０５℃、１６時間乾燥させ、完全に水分を蒸発させた後、残った固形分をデジタル計量器（Ａ＆Ｄ社 ＧＦ−４００）で精密に測定した。その結果、１２．００ｇの出発原料から換算値でその２２．１％に相当する２．６５ｇの乾燥固形分を得ることができた。
【００７０】
また、濃縮液をアミノ酸自動分析装置（日立製作所社製、Ｌ−８５００Ａｍｉｎｏ Ａｃｉｄ Ａｎａｌｙｚｅｒ）を用いてアミノ酸量を測定することで濃縮液中のコラーゲン量を定量するとともに、ガランボス法によりウロン酸量を定量して糖・タンパク複合体量を計算した。さらに高速液体クロマトグラフィ装置（島津製作所、カラムＴＳＫ−ＧＥＬ Ｇ４０００ＰＷＸＬ）を用いて、糖・タンパク複合体の分子量を測定した。
【００７１】
これらの分析の結果、固形分中にタンパク質４３．５％、灰分１９．５％、炭水化物３７．０％、脂質０．０％が存在することが判った。特許文献１によれば、糖・タンパク複合体のコアタンパク質の重量比は約７．０％と記載されており、従って本発明における糖・タンパク複合体の推定純度は（炭水化物×０．０７＋脂質）／（炭水化物＋タンパク質＋脂質）×１００＝４９．２％と算出された。また、糖・タンパク複合体の分子量は約１７０万であった。
【実施例６】
【００７２】
サメから手作業で摘出した軟骨を電動のミートチョッパーで細かく破砕しミンチ状にしたものをアセトンに浸漬し、脱脂及び脱水を行った。処理後の軟骨を通風又は減圧乾燥したもの１２．００ｇを出発原料とした。
【００７３】
５リットルの抽出用容器にあらかじめ１３℃に冷却しておいた蒸留水１６７８．７４ｇを入れ、さらに固形の苛性ソーダ８．０６ｇを投入し、総量１６８０．００ｇ（０．１２Ｎ）の苛性ソーダ水溶液を準備した。この抽出容器に出発原料１２．００ｇを投入し、スターラーを用いて攪拌しながら、０．３時間浸漬し、酢酸で中和処理した。
【００７４】
中和処理終了後、内容物を１ｍｍ角のステンレススチール製こし器をセットした別の容器に移し、軟骨を除去して、糖・タンパク複合体を含む抽出液を回収した。抽出液を日立ｈｉｍａｃＣＦ７Ｄ２型の遠心分離機を用いて３０００ｒｐｍ、２０分の遠心分離を行い、固形分ならびに油脂分を除去して、糖・タンパク複合体を含む液相を回収した。
【００７５】
さらに、この液相をフィルターペーパー（アドバンテック社製）を用いて濾過し、濾液の６倍量の蒸留水を加えた後、日本ミリポア製 ＢＩＯＭＡＸ １００Ｋ ＰＯＬＹＥＴＨＥＲＳＵＬＦＯＮＥ（分画分子量１０万）を用いて分画と濃縮を同時に行った。
【００７６】
得られた濃縮液の一部を採取し、液中の固形分重量を測定した。測定は、乾燥炉（ＹＡＭＡＴＯ ＤＸ４０１）により、１０５℃、１６時間乾燥させ、完全に水分を蒸発させた後、残った固形分をデジタル計量器（Ａ＆Ｄ社 ＧＦ−４００）で精密に測定した。その結果、１２．００ｇの出発原料から換算値でその１６．１％に相当する１．９３ｇの乾燥固形分を得ることができた。
【００７７】
また、濃縮液をアミノ酸自動分析装置（日立製作所社製、Ｌ−８５００ Ａｍｉｎｏ Ａｃｉｄ Ａｎａｌｙｚｅｒ）を用いてアミノ酸量を測定することで濃縮液中のコラーゲン量を定量するとともに、ガランボス法によりウロン酸量を定量して糖・タンパク複合体量を計算した。さらに高速液体クロマトグラフィ装置（島津製作所、カラムＴＳＫ−ＧＥＬ Ｇ４０００ＰＷＸＬ）を用いて、糖・タンパク複合体の分子量を測定した。
【００７８】
これらの分析の結果、固形分中にタンパク質３７．８％、灰分２７．４％、炭水化物３７．８％、脂質０．０％が存在することが判った。特許文献１によれば、糖・タンパク複合体のコアタンパク質の重量比は約７．０％と記載されており、従って本発明における糖・タンパク複合体の推定純度は（炭水化物×０．０７＋脂質）／（炭水化物＋タンパク質＋脂質）×１００＝５５．７％と算出された。また、糖・タンパク複合体の分子量は約１５０万であった。
【実施例７】
【００７９】
スルメイカ（真イカ）の表皮を手作業で剥離した後、アセトンに浸漬し、脱脂及び脱水を行った。処理後の表皮を通風又は減圧乾燥した後、はさみで細かく切断し、すり鉢で粉状に粉砕して乾燥表皮を調製した。
【００８０】
１０リットルの抽出用容器にあらかじめ５℃に冷却しておいた蒸留水５０３６．２０ｇを入れ、さらに固形の苛性ソーダ２２．１８ｇを投入し、総量５０４０ｇ（０．１１Ｎ）の苛性ソーダ水溶液を準備した。この抽出容器に乾燥表皮３３．７０ｇを投入し、スターラーを用いて攪拌しながら、０．３時間浸漬し、酢酸で中和処理した。
【００８１】
中和処理終了後、内容物を１ｍｍ角のステンレススチール製こし器をセットした別の容器に移し、表皮を除去して、糖・タンパク複合体を含む抽出液を回収した。抽出液を日立ｈｉｍａｃＣＦ７Ｄ２型の遠心分離機を用いて３０００ｒｐｍ、２０分の遠心分離を行い、固形分ならびに油脂分を除去して、糖・タンパク複合体を含む液相を回収した。
【００８２】
さらに、この液相をフィルターペーパー（アドバンテック社製）を用いて濾過し、濾液の６倍量の蒸留水を加えた後、日本ミリポア製 ＢＩＯＭＡＸ １００Ｋ ＰＯＬＹＥＴＨＥＲＳＵＬＦＯＮＥ（分画分子量１０万）を用いて分画と濃縮を同時に行った。
【００８３】
得られた濃縮液の一部を採取し、液中の固形分重量を測定した。測定は、乾燥炉（ＹＡＭＡＴＯ ＤＸ４０１）により、１０５℃、１６時間乾燥させ、完全に水分を蒸発させた後、残った固形分をデジタル計量器（Ａ＆Ｄ社 ＧＦ−４００）で精密に測定した。その結果、３３．７０ｇの乾燥表皮から、その５５．０％に相当する１８．５４ｇの乾燥固形分を得ることができた。
【００８４】
また、濃縮液をアミノ酸自動分析装置（日立製作所社製、Ｌ−８５００ Ａｍｉｎｏ Ａｃｉｄ Ａｎａｌｙｚｅｒ）を用いてアミノ酸量を測定することで濃縮液中のコラーゲン量を定量するとともに、ガランボス法によりウロン酸量を定量して糖・タンパク複合体量を計算した。さらに高速液体クロマトグラフィ装置（島津製作所、カラムＴＳＫ−ＧＥＬ Ｇ４０００ＰＷＸＬ）を用いて、糖・タンパク複合体の分子量を測定した。
【００８５】
これらの分析の結果、固形分中にタンパク質９１．７％、灰分１．９％、炭水化物６．４％、脂質０．０％が存在することが判った。特許文献１によれば、糖・タンパク複合体のコアタンパク質の重量比は約７．０％と記載されており、従って本発明における糖・タンパク複合体の推定純度は（炭水化物×０．０７＋脂質）／（炭水化物＋タンパク質＋脂質）×１００＝７．０％と算出された。また、糖・タンパク複合体の分子量は約１７０万であった。
【実施例８】
【００８６】
スルメイカ（真イカ）の軟骨（トンビ）を手作業で剥離した後、アセトンに浸漬し、脱脂及び脱水を行った。処理後のトンビを通風又は減圧乾燥した後、はさみで細かく切断し、すり鉢で粉状に粉砕して乾燥トンビを調製した。
【００８７】
３リットルの抽出用容器にあらかじめ１１℃に冷却しておいた蒸留水１６７２．６ｇを入れ、さらに固形の苛性ソーダ７．３９ｇを投入し、総量１６８０ｇ（０．１１Ｎ）の苛性ソーダ水溶液を準備した。この抽出容器に乾燥トンビ１２．０ｇを投入し、スターラーを用いて攪拌しながら、０．３時間浸漬し、酢酸で中和処理した。
【００８８】
中和処理終了後、内容物を１ｍｍ角のステンレススチール製こし器をセットした別の容器に移し、トンビを除去して、糖・タンパク複合体を含む抽出液を回収した。抽出液を日立ｈｉｍａｃＣＦ７Ｄ２型の遠心分離機を用いて７０００ｒｐｍ、２０分の遠心分離を行い、固形分ならびに油脂分を除去して、糖・タンパク複合体を含む液相を回収した。
【００８９】
さらに、この液相をフィルターペーパー（アドバンテック社製）を用いて濾過し、濾液の６倍量の蒸留水を加えた後、日本ミリポア製 ＢＩＯＭＡＸ １００Ｋ ＰＯＬＹＥＴＨＥＲＳＵＬＦＯＮＥ（分画分子量１０万）を用いて分画と濃縮を同時に行った。
【００９０】
得られた濃縮液の一部を採取し、液中の固形分重量を測定した。測定は、乾燥炉（ＹＡＭＡＴＯ ＤＸ４０１）により、１０５℃、１６時間乾燥させ、完全に水分を蒸発させた後、残った固形分をデジタル計量器（Ａ＆Ｄ社 ＧＦ−４００）で精密に測定した。その結果、１２．０ｇの乾燥軟骨（トンビ）から、その６８．６％に相当する８．２３ｇの乾燥固形分を得ることができた。
【００９１】
また、濃縮液をアミノ酸自動分析装置（日立製作所社製、Ｌ−８５００Ａｍｉｎｏ Ａｃｉｄ Ａｎａｌｙｚｅｒ）を用いてアミノ酸量を測定することで濃縮液中のコラーゲン量を定量するとともに、ガランボス法によりウロン酸量を定量して糖・タンパク複合体量を計算した。さらに高速液体クロマトグラフィ装置（島津製作所、カラムＴＳＫ−ＧＥＬ Ｇ４０００ＰＷＸＬ）を用いて、糖・タンパク複合体の分子量を測定した。
【００９２】
これらの分析の結果、固形分中にタンパク質４１．８％、灰分１８．２％、炭水化物４０％、脂質０．０％が存在することが判った。特許文献１によれば、糖・タンパク複合体のコアタンパク質の重量比は約７．０％と記載されており、従って本発明における糖・タンパク複合体の推定純度は（炭水化物×１．０７＋脂質）／（炭水化物＋タンパク質＋脂質）×１００＝７３．５％と算出された。また、糖・タンパク複合体の分子量は約３０万であった。
【実施例９】
【００９３】
スルメイカ（真イカ）の肝臓外皮を手作業で剥離した後、アセトンに浸漬し、脱脂及び脱水を行った。処理後の肝臓外皮を通風又は減圧乾燥した後、はさみで細かく切断し、すり鉢で粉状に粉砕して乾燥肝臓外皮を調製した。
【００９４】
３リットルの抽出用容器にあらかじめ１１℃に冷却しておいた蒸留水１６７１．９ｇを入れ、さらに固形の苛性ソーダ８．０６ｇを投入し、総量１６８０ｇ（０．１２Ｎ）の苛性ソーダ水溶液を準備した。この抽出容器に乾燥肝臓外皮１２．０ｇを投入し、スターラーを用いて攪拌しながら、０．３時間浸漬し、酢酸で中和処理した。
【００９５】
中和処理終了後、内容物を１ｍｍ角のステンレススチール製こし器をセットした別の容器に移し、肝臓外皮を除去して、糖・タンパク複合体を含む抽出液を回収した。抽出液を日立ｈｉｍａｃＣＦ７Ｄ２型の遠心分離機を用いて７０００ｒｐｍ、２０分の遠心分離を行い、固形分ならびに油脂分を除去して、糖・タンパク複合体を含む液相を回収した。
【００９６】
さらに、この液相をフィルターペーパー（アドバンテック社製）を用いて濾過し、濾液の６倍量の蒸留水を加えた後、日本ミリポア製 ＢＩＯＭＡＸ １００Ｋ ＰＯＬＹＥＴＨＥＲＳＵＬＦＯＮＥ（分画分子量１０万）を用いて分画と濃縮を同時に行った。
【００９７】
得られた濃縮液の一部を採取し、液中の固形分重量を測定した。測定は、乾燥炉（ＹＡＭＡＴＯ ＤＸ４０１）により、１０５℃、１６時間乾燥させ、完全に水分を蒸発させた後、残った固形分をデジタル計量器（Ａ＆Ｄ社 ＧＦ−４００）で精密に測定した。その結果、１２．０ｇの乾燥肝臓外皮から、その２９．２％に相当する３．５０ｇの乾燥固形分を得ることができた。
【００９８】
また、濃縮液をアミノ酸自動分析装置（日立製作所社製、Ｌ−８５００ Ａｍｉｎｏ Ａｃｉｄ Ａｎａｌｙｚｅｒ）を用いてアミノ酸量を測定することで濃縮液中のコラーゲン量を定量するとともに、ガランボス法によりウロン酸量を定量して糖・タンパク複合体量を計算した。さらに高速液体クロマトグラフィ装置（島津製作所、カラムＴＳＫ−ＧＥＬ Ｇ４０００ＰＷＸＬ）を用いて、糖・タンパク複合体の分子量を測定した。
【００９９】
これらの分析の結果、固形分中にタンパク質８７．３７％、灰分２．４３％、炭水化物１０％、脂質０．２％が存在することが判った。特許文献１によれば、糖・タンパク複合体のコアタンパク質の重量比は約７．０％と記載されており、従って本発明における糖・タンパク複合体の推定純度は（炭水化物×１．０７＋脂質）／（炭水化物＋タンパク質＋脂質）×１００＝１１．１７％と算出された。また、糖・タンパク複合体の分子量は約１４５万であった。
【特許請求の範囲】
【請求項１】
糖・タンパク複合体を含有する生物学的試料を０．１１Ｎ〜０．１５Ｎのアルカリ金属塩又はアルカリ土類金属塩の溶液に１１〜１５℃で浸漬する工程、並びに浸漬後の溶液を回収する工程を含む、糖・タンパク複合体の製造方法。
【請求項２】
回収した溶液から糖・タンパク複合体を分離する工程をさらに含む、請求の範囲第１項に記載の製造方法。
【請求項３】
溶液がアルカリ金属塩の溶液である、請求の範囲第１項又は第２項に記載の製造方法。
【請求項４】
糖・タンパク複合体を含有する生物学的試料が、魚類、軟体動物、鳥類若しくは哺乳類の軟骨組織、筋肉繊維又は皮である、請求の範囲第１項〜第３項の何れかに記載の製造方法。
【請求項５】
糖・タンパク複合体を含有する生物学的試料が、魚類、鳥類又は哺乳類の軟骨組織である、請求の範囲第４項に記載の製造方法。この場合、糖タンパク質複合体を回収した残さから非変性ＩＩ型コラーゲンを回収することが可能である。
【請求項１】
糖・タンパク複合体を含有する生物学的試料を０．１１Ｎ〜０．１５Ｎのアルカリ金属塩又はアルカリ土類金属塩の溶液に１１〜１５℃で浸漬する工程、並びに浸漬後の溶液を回収する工程を含む、糖・タンパク複合体の製造方法。
【請求項２】
回収した溶液から糖・タンパク複合体を分離する工程をさらに含む、請求の範囲第１項に記載の製造方法。
【請求項３】
溶液がアルカリ金属塩の溶液である、請求の範囲第１項又は第２項に記載の製造方法。
【請求項４】
糖・タンパク複合体を含有する生物学的試料が、魚類、軟体動物、鳥類若しくは哺乳類の軟骨組織、筋肉繊維又は皮である、請求の範囲第１項〜第３項の何れかに記載の製造方法。
【請求項５】
糖・タンパク複合体を含有する生物学的試料が、魚類、鳥類又は哺乳類の軟骨組織である、請求の範囲第４項に記載の製造方法。この場合、糖タンパク質複合体を回収した残さから非変性ＩＩ型コラーゲンを回収することが可能である。
【図１】
【公開番号】特開２０１２−１７３１２（Ｐ２０１２−１７３１２Ａ）
【公開日】平成２４年１月２６日（２０１２．１．２６）
【国際特許分類】
【出願番号】特願２０１０−１６８６０６（Ｐ２０１０−１６８６０６）
【出願日】平成２２年７月９日（２０１０．７．９）
【出願人】（５９８０４００２０）
【Ｆターム（参考）】
【公開日】平成２４年１月２６日（２０１２．１．２６）
【国際特許分類】
【出願日】平成２２年７月９日（２０１０．７．９）
【出願人】（５９８０４００２０）
【Ｆターム（参考）】
[ Back to top ]