蛋白質添着フィルタ
【課題】本発明は、各種細菌、カビ、ウィルス、アレルゲン物質などを吸着し、効率よく不活性化することができる酵素、抗体物質等の蛋白質担持フィルタを提供する。
【解決手段】精製度の低い酵素、抗体物質をフィルタ上で有効に機能させるために、ポリエチレンオキサイドを共存させる。
【解決手段】精製度の低い酵素、抗体物質をフィルタ上で有効に機能させるために、ポリエチレンオキサイドを共存させる。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、各種細菌、カビ、ウィルス、アレルゲン物質などを吸着し、不活性化することができる抗体を添着したフィルターに関する。さらに詳しくは、有効蛋白質量／総蛋白質量により求められる精製度の値が０．９以下である低い精製度の蛋白質と、ポリエチレンオキサイドを同時に添着したフィルタに関する。
【背景技術】
【０００２】
各種細菌、カビ、ウィルス、アレルゲン物質などの有害物質を除去するフィルタ濾材については、これまで様々なものが提案されてきた。また、酵素、抗体等の蛋白質をフィルタに添着し、蛋白質の活性発現に必要な水分を供給する目的で保湿成分をフィルタ上に共存させるフィルタも公知である。しかし、有効蛋白質量／総蛋白質量により求められる精製度が０．９以下である精製度の低い蛋白質と、ポリエチレンオキサイドを同時に添着したフィルタの提案はこれまでなかった。
【０００３】
特許文献１には、シアル酸、シアル酸誘導体、これらを含む糖、糖蛋白質、糖脂質の少なくとも１種類をウィルス捕捉体としたウィルス除去フィルタが開示されている。また、特許文献２には、高い微細繊維化度を持つ繊維素材であって、少なくとも１本の繊維がウィルスを捕捉する目的で、ウィルスに対する天然の受容体またはその一部またはその類似体を付着させるため、臭化シアンで誘導体化されているものが開示されている。しかしながら、フィルタを用いた濾過や、吸着剤を用いた物理吸着により空気中の有害物質を除去する方法は、非特異的なものであって、精度が低かった。また、除去した有害物質が再浮遊したり、フィルタ上で有害物質が増殖して新たな汚染源となったりすることを避けるために、有害物質の殺菌・不活性化の技術を組み合わせなければならなかった。
【０００４】
また、特許文献３には茶の抽出成分を添着した不織布を耳に留める紐で構成された抗ウィルスマスクが、特許文献４にはフェノール性水酸基を有する非水溶性高分子抗アレルゲン剤と吸湿性材料を担持したフィルタが開示されている。茶の抽出成分やフェノール性水酸基を有する非水溶性高分子は、抗菌作用を有することが知られているが、酵素・抗体等の蛋白質のように特定の菌を不活性化できるような特異的な反応性は有していない。酵素、抗体等の蛋白質は、目的の有害物質に合わせたものを用意することができ、より確実な効果を得ることができて好ましい。また、茶の抽出成分やフェノール性水酸基を有する非水溶性高分子は水との親和性が低く、フィルタに添着する際によく混ざり合わず斑になるなど加工性が悪いという問題がある。一方、酵素、抗体等の蛋白質は、その種類によって差があるものの、一般に水によく溶解し、フィルターに添着する際の加工性に優れている。
【０００５】
フィルター上で有害物質を殺菌・不活性化するためには、有害物質に対する殺菌・不活性化能を有する酵素、抗体等の蛋白質をフィルターに担持することが有効である。しかし、特許文献５〜８で開示されている共有結合、イオン結合、架橋法、包括法等の方法で各種酵素を担体に担持させたフィルタは、担持方法が複雑でコストがかかるといった問題があり、簡便な方法で蛋白質を担持し、その活性を発現させることが望まれていた。
【０００６】
さらに、特許文献４には、フィルタ表面を添着した吸湿性材料が、抗アレルゲン剤の活性発現に必要な水分を周辺雰囲気から吸収する方法も開示されているが、周辺雰囲気より得られる水分量は、蛋白質の活性発現において必ずしも十分な量ではないという問題があった。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００７】
【特許文献１】特開平９−２３４３１７号公報
【特許文献２】特表２００１−５２７１６６号公報
【特許文献３】特開平８−３３３２７１号公報
【特許文献４】特開２００４−２９０９２２号公報
【特許文献５】国際公開第９８/０４３３４号パンフレット
【特許文献６】特開昭６０−４９７９５号公報
【特許文献７】特開平２−４１１６６号公報
【特許文献８】特開２００３−２１０９１９号公報
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００８】
本発明は、フィルター上にて、各種細菌、カビ、ウィルス、アレルゲン物質などを吸着し、効率よく不活性化することのできる、酵素、抗体等の蛋白質を担持したフィルターに関し、高い精製度が得られにくい蛋白質材料において、低い精製度の蛋白質材料を使用しても有効に作用させることを課題とするものである。
【課題を解決するための手段】
【０００９】
本発明者らは、蛋白質担持フィルタの性能を向上すべく鋭意検討した結果、ポリエチレンオキサイドを同時に添着することによって、精製度の低い蛋白質を特異的に安定化できることを見出し、ついに本願発明を完成するに到った。即ち本発明は、以下の通りである。
【００１０】
（１）有効蛋白質量／総蛋白質量により求められる精製度の値が０．９以下である蛋白質と、ポリエチレンオキサイドを添着したフィルタ。
【００１１】
（２）前記有効蛋白質がブロメラインである（１）に記載のフィルタ。
【００１２】
（３）前記有効蛋白質が卵黄由来抗体（ＩｇＹ）である（１）に記載のフィルタ。
【発明の効果】
【００１３】
本発明の蛋白質添着フィルタは、ポリエチレンオキサイドを同時に添着することにより、精製度の低い酵素、抗体物質等の蛋白質の活性発現を特異的に安定化することで、精製度の低い蛋白質を使用しても、各種細菌、カビ、ウィルス、アレルゲン物質などを吸着し、フィルタ上にて効率よく不活性化することができるフィルタを得ることができる。
【発明を実施するための最良の形態】
【００１４】
本発明で使用する蛋白質は、有効蛋白質量／総蛋白質量で求められる精製度の値が０．９以下である。ここで言う精製度は、有効蛋白質量と総蛋白質量より計算で求めることができる。
【００１５】
ここで言う有効蛋白質量は、各種細菌、カビ、ウィルス、アレルゲン物質などを不活性化するために添着される酵素、抗体等の蛋白質の質量である。
【００１６】
ここで言う総蛋白質量は、フィルタに添着されるすべての蛋白質の質量であり、有効蛋白質を含むものである。
【００１７】
フィルタに添着されている蛋白質の精製度は、ＳＤＳ−ＰＡＧＥ分析により、有効蛋白質および総蛋白質の質量を求めることにより計算で求めることができる。
【００１８】
本発明で蛋白質の精製度の値を０．９以下としたのは、蛋白質は一般に生体由来の材料を精製して得られるが、精製度が０．９を超える蛋白質を得ようとすると、精製に多くのコストが必要となるからである。また、精製度が０．９を超えるように精製された蛋白質は、一般に保存安定性が低い。これは、夾雑蛋白質が、目的の蛋白質の安定性に寄与しているからである。好ましい、精製度の値は０．５〜０．９である。
【００１９】
本発明で使用するポリエチレンオキサイドは、水分を保持し、蛋白質の活性発現に必要なに水分と反応場を提供することを目的として担持されるものである。
【００２０】
ポリエチレンオキサイドの担持量は、担体シートに対して０．０１質量％以上であることが十分な効果を得る上で好ましい。また、５．０質量％を超えて担持させた場合、それ以上担持量を増やしても、蛋白質活性発現の安定化向上の効果は期待できず、かえって繊維表面の接着性が増加し、担体シートに加工した際に、硬さ斑等が発生するため、好ましくない。より好ましい担持量は０．１〜３．０質量％である。
【００２１】
ポリエチレンオキサイドの繊維への付与は、酵素、抗体等の蛋白質添着の前後のどちらでも差し支えない。具体的には、担体シートを構成するシートを製造する際に処理ローラー等を使用して繊維に付与する方法、あるいは蛋白質溶液にポリエチレンオキサイドを混合し、蛋白質とポリエチレンオキサイドを同時に担持する方法等が挙げられる。
【００２２】
本発明の蛋白質担持フィルタの担体シートの素材は、ポリエステル繊維を含むことが好ましく、かかるポリエステル繊維が非晶性共重合ポリエステル成分を含むことがさらに好ましい。非晶性共重合ポリエステル成分を含むポリエステル繊維は、水の濡れ性がよく、酵素、抗体等の蛋白質を担持する際の加工性が良いからである。
【００２３】
また、非晶性共重合ポリエステル成分を含むポリエステルは適度な調湿性を有しており、このため非晶性共重合ポリエステル成分を含むポリエステル繊維および周辺雰囲気から、ポリエチレンオキサイドが水分を吸収し、保持することで、蛋白質に反応場を提供し、活性発現を安定化することで、蛋白質の活性発現を高度に安定化した蛋白質担持フィルタを提供できる。ここでいう適度な調湿性とは、繊維表面に担持された蛋白質の活性発現に必要な水分を提供できる性能である。蛋白質に提供される水分量が多すぎると蛋白質の早期劣化を招き、少なすぎると活性が発現されない。また、繊維表面に存在する蛋白質に提供される水分量は、繊維内部に存在する水分量を表す水分率とは直接の相関性がない。
【００２４】
非晶性共重合ポリエステル成分は、芳香族ジカルボン酸とグリコール成分の重縮合反応によるポリエステル生成の際に共重合成分を添加して得ることが好ましい。より好ましくは、テレフタル酸とエチレングリコールをベースとし、共重合成分としては例えばイソフタル酸、アジピン酸、セバシン酸、アゼライン酸、ドデカン酸、ジエチレングリコール、プロパンジオール、ブタンジオール、ペンタンジオール、ヘキサンジオール、ポリエチレングリコール、ネオペンチルグリコールなどが挙げられる。このような非晶性共重合ポリエステルは、ガラス転移点温度Ｔｇが５０〜１００℃の範囲となり、明確な結晶融点を示さない。
【００２５】
また本発明は、酵素、抗体物質等の蛋白質を担持し、その活性発現を安定化させる上で、前記非晶性共重合ポリエステル成分がテレフタル酸、イソフタル酸、エチレングリコール、ジエチレングリコールを含むことが好ましく、その共重合モル比が、（テレフタル酸／イソフタル酸）＝（４０／６０）〜（８０／２０）であり、（エチレングリコール／ジエチレングリコール）＝（７０／３０）〜（９７／３）であることがさらに好ましい。
【００２６】
非晶性共重合ポリエステル成分を含む繊維は、前述の非晶性共重合ポリエステル成分とポリアルキレンテレフタレート系ポリエステル成分との複合繊維であることが好ましい。ポリアルキレンテレフタレート系ポリエステルとは具体的にはポリエチレンテレフタレート、ポリブチレンテレフタレートである。また複合繊維としては、シース・コア型、偏心シース・コア型、サイド・バイ・サイド型などの形態が可能である。その中でも、非晶性共重合ポリエステルをシース成分とし、ポリエチレンテレフタレートをコア成分とするシース・コア型複合繊維が加工性の面で好ましいものとして挙げられる。また非晶性共重合ポリエステル成分の複合率は１０〜９０％であり、性能、加工性の両面から好ましくは３０〜７０％である。
【００２７】
本発明の蛋白質担持フィルタの担体シートの素材は、レーヨンを含むことが好ましい。レーヨンは水分率が高く、非晶性共重合ポリエステル成分を含むポリエステル同様、適度な調湿性を有する。
【００２８】
ここに挙げた以外に、本発明の蛋白質担持フィルタの担体シートの素材として、アクリル、ナイロン、ポリオレフィン系、セルロース、パルプ等が挙げられるが、特に限定はされない。
【００２９】
担体シートを構成する繊維の繊度は、１〜３０ｄｔｅｘの範囲で調整することが、シート化時の加工性、フィルタ特性の面から好ましい。
【００３０】
担体シートはスパンボンド不織布、スパンレース不織布、ニードルパンチ不織布、メルトブロー不織布、フラッシュ紡糸不織布、サーマルボンド不織布、ケミカルボンド不織布、ステッチボンド不織布、および湿式抄紙不織布などの不織布、織物、あるいは紙等シートの形態を成すものならば特に限定されない。また、その目付は特に限定されないが、好ましい範囲を例示すると１０〜２００ｇ／ｍ２である。１０ｇ／ｍ２未満だと各種細菌、カビ、ウィルス、アレルゲン物質などの不活性化対象物を十分捕捉できない可能性があり、２００ｇ／ｍ２超えるとフィルタの圧力損失が大きくなるため、あまり好ましくない。
【００３１】
酵素、抗体物質等の蛋白質の担体シートへの担持の方法としては、担体シートを適当な濃度の蛋白質水溶液に含浸し、適当な温度および時間で乾燥する方法が好ましい例として挙げられる。ここで用いる蛋白質水溶液は、各々の蛋白質の活性発現に適したｐＨに調節されることが好ましい。これは、蛋白質はその種類によって活性発現に適したｐＨが異なり、通常はそのｐＨ付近でないと十分な活性の発現は得られないためである。また、乾燥温度と時間は、担持する蛋白質が変性により失活しない温度にすることが重要である。蛋白質はその種類によって耐熱性が大きく異なる。通常は高温で乾燥させた方が短時間で処理が済み効率が良いが、蛋白質の耐熱性を考慮して乾燥条件を決めることが好ましい。
【００３２】
フィルタに添着する有効蛋白質として好ましいものを例示すると、ブロメライン、卵黄由来抗体（ＩｇＹ）等が挙げられる。
【００３３】
ブロメラインはパイナップル由来の蛋白質分解酵素であり、精製度の低いものであれば大量に安価に入手することが可能である。
【００３４】
卵黄由来抗体（ＩｇＹ）も精製度の低いものであれば大量に安価に入手することが可能である。
【００３５】
ここに挙げた以外に、本発明の蛋白質担持フィルタに適用可能な酵素、抗体等の蛋白質としては、溶菌酵素（リゾチーム）、蛋白質分解酵素（プロテアーゼ）、各種アレルゲンを酸化還元する酵素（オキシドレダクターゼ）、細菌、あるいは、カビ、ウィルス、環境アレルゲンなどを不活性化する抗体等が挙げられるが、特に限定されない。
【００３６】
また、ここでいう酵素とは「生細胞内で作られる蛋白性の生体触媒」であり、抗体とは「免疫反応において、抗原の刺激により生体内に作られた抗原と特異的に結合する蛋白質の総称」であり、蛋白質とは「動物・植物・微生物など、およそ生物とよばれるものの細胞の主要成分として含まれる一群の高分子含窒素有機化合物」である（岩波 生化学辞典 第３版 岩波書店）。
【００３７】
一般に、酵素、抗体等の蛋白質は絶乾状態ではその活性は発現されない。従って、酵素、抗体等の蛋白質を担体シートに担持して利用する際には、水分の供給が必要となる。そこで、フィルタ上に保湿性成分を共存させることで、保湿成分が周辺雰囲気の水分を保持し、蛋白質の反応場を提供する役割を果たすことで、活性の発現を安定化させる方法が知られている。
【００３８】
精製度の低い蛋白質においては、保湿成分としてポリエチレンオキサイドを用いることで特異的に蛋白質の活性発現が安定化される。この作用はブロメラインおよび卵黄由来抗体（ＩｇＹ）において特に顕著である。
【実施例】
【００３９】
以下、実施例により本発明を詳細に説明するが、これによって本発明はなんら限定されるものではない。
【００４０】
（担体シートの製造）
シース成分の非晶性共重合ポリエステルとして、酸成分がモル比でテレフタル酸が６０％、イソフタル酸が４０％、ジオール成分がモル比でエチレングリコールが９５％、ジエチレングリコールが５％の割合で共重合された、固有粘度が０．５６、Ｔｇが６４℃の非晶性共重合ポリエステル、コア成分として、固有粘度が０．６４、Ｔｇが６７℃、Ｔｍ（融点）が２５６℃のポリエチレンテレフタレートを用い、各々のペレットを減圧乾燥した後、シース・コア型複合紡糸機にて複合紡糸し、短繊維用延伸機にて延伸、カットの工程を通し、定法により質量比（シース／コア）＝（５０／５０）の複合比率で、単糸繊度が約２．２ｄｔｅｘのシース・コア型複合繊維を得た。次に、この繊維を５０ｍｍにカットし、カーディングによりウェブを作成後、ニードルパンチ加工することにより目付３０ｇ／ｍ２の担体シート１を得た。
【００４１】
（酵素活性試験：試験例１）
以下に記載の実施例１、２および比較例１〜５の蛋白質担持フィルタ上にルテウス菌（Micrococcus luteus）をフリーズドライした顆粒を振りかけ、逆さにして余分な顆粒を除いた後、湿度９０％に保持したデシケータ中で２４時間静置した。その後、低真空走査型電子顕微鏡で観察し、ルテウス菌の溶菌の程度を目視観察した。菌の球形状が崩れている場合を溶菌活性あり、球形状が残存している場合を溶菌活性なしと判定した。
【００４２】
（インフルエンザウィルス不活性化試験：試験例２）
以下に記載の実施例３、４および比較例６〜１０の蛋白質担持フィルタを３３ｍｍ四方に裁断したものを試験片として、密閉された容器に入れ、それぞれにインフルエンザウィルスを１ｍｌあたり０．５ｍｇ含む水溶液を０．５ｍｌ容器内に噴霧した後、室温で１５時間処理を行った。その後、不活性化したインフルエンザウィルスを１ｍｌあたり１ｍｇ含む水溶液を０．５ｍｌ容器内に噴霧して、抗体をブロッキングし、処理の終わった試験片をリン酸緩衝溶液９ｍｌで洗い出し、回収した液を１０日卵に接種、３７℃にて４８時間培養後、ＣＡＭ液を採取し、ＨＡテストを行い、Ｋａｒｂｅｒ法によりウィルス感染価ＥＩＤ５０（５０％ ｅｇｇ−ｉｎｆｅｃｔｉｖｅ ｄｏｓｅｓ）の計算を行った。ブランク試験には蛋白質担持加工を施していないフィルターを用いた。
【００４３】
（酵素活性試験：試験例３）
以下に記載の実施例１、２および比較例１〜５の蛋白質担持フィルタを温度５０℃、相対湿度５０％の恒温恒湿槽内で２４時間静置した後、試験例１に示す試験に供した。
【００４４】
（酵素活性試験：試験例４）
以下に記載の実施例３、４および比較例６〜１０の蛋白質担持フィルタを温度５０℃、相対湿度５０％の恒温恒湿槽内で２４時間静置し、試験例２に示す試験に供した。
【００４５】
（実施例１）
１００ｍＭ Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ緩衝液（ｐＨ８．０）に、精製度が０．９のブロメラインを総蛋白質量が１質量％になるように懸濁し、さらに０．３質量％ポリエチレンオキサイドを含有させた水溶液に、担体シート１を１時間浸漬処理した後、取り出して余分な付着水分を取り除いた担体を、６０℃の温度に保持した乾燥機中で１０分間乾燥し、蛋白質担持フィルタを調製した。
【００４６】
（実施例２）
１００ｍＭ Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ緩衝液（ｐＨ８．０）に、精製度が０．５のブロメラインを総蛋白質量が１質量％になるように懸濁し、さらに０．３質量％ポリエチレンオキサイドを含有させた水溶液に、担体シート１を１時間浸漬処理した後、取り出して余分な付着水分を取り除いた担体を、６０℃の温度に保持した乾燥機中で１０分間乾燥し、蛋白質担持フィルタを調製した。
【００４７】
（比較例１）
１００ｍＭ Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ緩衝液（ｐＨ８．０）に、精製度０．８のブロメラインを総蛋白質量が１質量％になるように懸濁し、さらに０．３質量％ポリエチレングリコールを含有させた水溶液に、担体シート１を１時間浸漬処理した後、取り出して余分な付着水分を取り除いた担体を、６０℃の温度に保持した乾燥機中で１０分間乾燥し、蛋白質担持フィルタを調製した。
【００４８】
（比較例２）
１００ｍＭ Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ緩衝液（ｐＨ８．０）に、精製度０．８のブロメラインを総蛋白質量が１質量％になるように懸濁し、さらに０．３質量％アルギン酸ナトリウムを含有させた水溶液に、担体シート１を１時間浸漬処理した後、取り出して余分な付着水分を取り除いた担体を、６０℃の温度に保持した乾燥機中で１０分間乾燥し、蛋白質担持フィルタを調製した。
【００４９】
（比較例３）
１００ｍＭ Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ緩衝液（ｐＨ８．０）に、精製度０．９９のブロメラインを総蛋白質量が１質量％になるように懸濁し、さらに０．３％質量ポリエチレンオキサイドを含有させた水溶液に、担体シート１を１時間浸漬処理した後、取り出して余分な付着水分を取り除いた担体を、６０℃の温度に保持した乾燥機中で１０分間乾燥し、蛋白質担持フィルタを調製した。
【００５０】
（比較例４）
１００ｍＭ Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ緩衝液（ｐＨ８．０）に、精製度０．９９のブロメラインを総蛋白質量が１質量％になるように懸濁し、さらに０．３質量％ポリエチレングリコールを含有させた水溶液に、担体シート１を１時間浸漬処理した後、取り出して余分な付着水分を取り除いた担体を、６０℃の温度に保持した乾燥機中で１０分間乾燥し、蛋白質担持フィルタを調製した。
【００５１】
（比較例５）
１００ｍＭ Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ緩衝液（ｐＨ８．０）に、精製度０．９９のブロメラインを総蛋白質量が１質量％になるように懸濁し、さらに０．３％質量アルギン酸ナトリウムを含有させた水溶液に、担体シート１を１時間浸漬処理した後、取り出して余分な付着水分を取り除いた担体を、６０℃の温度に保持した乾燥機中で１０分間乾燥し、蛋白質担持フィルタを調製した。
【００５２】
（実施例３）
１００ｍＭリン酸緩衝液（ｐＨ７．０）に、精製度０．９の抗インフルエンザ卵黄由来抗体（ＩｇＹ）を総蛋白質の濃度が５ｍｇ／ｍｌ、ポリエチレンオキサイドを０．３質量％含有させた水溶液を調製し、その水溶液に担体シート１を１時間浸漬処理した後、取り出して余分な付着水分を取り除いた担体を、６０℃の温度に保持した乾燥機中で１０分間乾燥し、蛋白質担持フィルタを調製した。
【００５３】
（実施例４）
１００ｍＭリン酸緩衝液（ｐＨ７．０）に、精製度０．５の抗インフルエンザ卵黄由来抗体（ＩｇＹ）を総蛋白質の濃度が５ｍｇ／ｍｌ、ポリエチレンオキサイドを０．３質量％含有させた水溶液を調製し、その水溶液に担体シート１を１時間浸漬処理した後、取り出して余分な付着水分を取り除いた担体を、６０℃の温度に保持した乾燥機中で１０分間乾燥し、蛋白質担持フィルタを調製した。
【００５４】
（比較例６）
１００ｍＭリン酸緩衝液（ｐＨ７．０）に、、精製度０．８の抗インフルエンザ卵黄由来抗体（ＩｇＹ）を総蛋白質の濃度が５ｍｇ／ｍｌ、ポリエチレングリコールを０．３質量％含有させた水溶液を調製し、その水溶液に担体シート１を１時間浸漬処理した後、取り出して余分な付着水分を取り除いた担体を、６０℃の温度に保持した乾燥機中で１０分間乾燥し、蛋白質担持フィルタを調製した。
【００５５】
（比較例７）
１００ｍＭリン酸緩衝液（ｐＨ７．０）に、精製度０．８の抗インフルエンザ卵黄由来抗体（ＩｇＹ）を総蛋白質の濃度が５ｍｇ／ｍｌ、アルギン酸ナトリウムを０．３質量％含有させた水溶液を調製し、その水溶液に担体シート１を１時間浸漬処理した後、取り出して余分な付着水分を取り除いた担体を、６０℃の温度に保持した乾燥機中で１０分間乾燥し、蛋白質担持フィルタを調製した。
【００５６】
（比較例８）
１００ｍＭリン酸緩衝液（ｐＨ７．０）に、精製度０．９９の抗インフルエンザ卵黄由来抗体（ＩｇＹ）を総蛋白質の濃度が５ｍｇ／ｍｌ、ポリエチレンオキサイドを０．３質量％含有させた水溶液を調製し、その水溶液に担体シート１を１時間浸漬処理した後、取り出して余分な付着水分を取り除いた担体を、６０℃の温度に保持した乾燥機中で１０分間乾燥し、蛋白質担持フィルタを調製した。
【００５７】
（比較例９）
１００ｍＭリン酸緩衝液（ｐＨ７．０）に、精製度０．９９の抗インフルエンザ卵黄由来抗体（ＩｇＹ）を総蛋白質の濃度が５ｍｇ／ｍｌ、ポリエチレングリコールを０．３質量％含有させた水溶液を調製し、その水溶液に担体シート１を１時間浸漬処理した後、取り出して余分な付着水分を取り除いた担体を、６０℃の温度に保持した乾燥機中で１０分間乾燥し、蛋白質担持フィルタを調製した。
【００５８】
（比較例１０）
１００ｍＭリン酸緩衝液（ｐＨ７．０）に、精製度０．９９の抗インフルエンザ卵黄由来抗体（ＩｇＹ）を総蛋白質の濃度が５ｍｇ／ｍｌ、アルギン酸ナトリウムを０．３質量％含有させた水溶液を調製し、その水溶液に担体シート１を１時間浸漬処理した後、取り出して余分な付着水分を取り除いた担体を、６０℃の温度に保持した乾燥機中で１０分間乾燥し、蛋白質担持フィルタを調製した。
【００５９】
実施例１〜２、比較例１〜５の蛋白質担持フィルタについて試験例１で示した酵素活性試験を実施した。その結果を表１に示す。実施例１〜２、比較例３ではリゾチームの溶菌作用によるルテウス菌の崩壊が確認された。比較例１、２、４，５ではルテウス菌の崩壊は確認されなかった。
【００６０】
実施例１〜２、比較例１〜５の蛋白質担持フィルタについて、試験例３で示した酵素活性試験を実施した。その結果を表１に示す。実施例１〜２ではリゾチームの溶菌作用によるルテウス菌の崩壊が確認された。一方、比較例１〜５ではルテウス菌の崩壊は確認されなかった。
【００６１】
実施例３〜４、比較例６〜１０の蛋白質担持フィルタについて試験例２で示したインフルエンザウィルス不活性化試験を実施した。その結果を表１に示す。ブランク試験の結果、ウィルス感染価はＥＩＤ５０＝０．５×１０８．５であった。実施例３、４および比較例８のウィルス感染価は、順にＥＩＤ５０＝０．５×１０３．９、０．５×１０４．１、０．５×１０４．４、であり、蛋白質担持フィルタによる活性化ウィルス量の４桁減少、すなわち９９．９９％の不活性化が確認された。一方、比較例６、７、９、１０のウィルス感染価は、順にＥＩＤ５０＝０．５×１０７．１、０．５×１０７．５、０．５×１０７．３、０．５×１０７．５であり、活性化ウィルス量の１桁減少、すなわち９０％不活性化にとどまった。
【００６２】
実施例３〜４、比較例６〜１０の蛋白質担持フィルタについて試験例４で示したインフルエンザウィルス不活性化試験を実施した。その結果を表１に示す。ブランク試験の結果、ウィルス感染価はＥＩＤ５０＝０．５×１０８．５であった。実施例３、４のウィルス感染価はＥＩＤ５０＝０．５×１０５．１、０．５×１０５．５であり、活性化ウィルス量の３桁減少、すなわち９９．９％の不活性化が確認された。一方、比較例８のウィルス感染価はＥＩＤ５０＝０．５×１０７．３であり、活性化ウィルス量の１桁減少、すなわち９０％不活性化にとどまった。また、比較例６、７、９、１０のウィルス感染価はＥＩＤ５０＝０．５×１０７．９、０．５×１０８．４、０．５×１０８．１、０．５×１０８．２、であり、ウィルス不活性化の効果は非常に低かった。
【００６３】
【表１】
【産業上の利用可能性】
【００６４】
本発明の蛋白質担持フィルタは、ポリエチレンオキサイドの同時添着により、精製度の低い酵素、抗体等の蛋白質の活性発現に寄与することで、高い性能を実現したものであり、また、簡便な方法で蛋白質の担持が可能であるので、容易に産業上利用できる。
【技術分野】
【０００１】
本発明は、各種細菌、カビ、ウィルス、アレルゲン物質などを吸着し、不活性化することができる抗体を添着したフィルターに関する。さらに詳しくは、有効蛋白質量／総蛋白質量により求められる精製度の値が０．９以下である低い精製度の蛋白質と、ポリエチレンオキサイドを同時に添着したフィルタに関する。
【背景技術】
【０００２】
各種細菌、カビ、ウィルス、アレルゲン物質などの有害物質を除去するフィルタ濾材については、これまで様々なものが提案されてきた。また、酵素、抗体等の蛋白質をフィルタに添着し、蛋白質の活性発現に必要な水分を供給する目的で保湿成分をフィルタ上に共存させるフィルタも公知である。しかし、有効蛋白質量／総蛋白質量により求められる精製度が０．９以下である精製度の低い蛋白質と、ポリエチレンオキサイドを同時に添着したフィルタの提案はこれまでなかった。
【０００３】
特許文献１には、シアル酸、シアル酸誘導体、これらを含む糖、糖蛋白質、糖脂質の少なくとも１種類をウィルス捕捉体としたウィルス除去フィルタが開示されている。また、特許文献２には、高い微細繊維化度を持つ繊維素材であって、少なくとも１本の繊維がウィルスを捕捉する目的で、ウィルスに対する天然の受容体またはその一部またはその類似体を付着させるため、臭化シアンで誘導体化されているものが開示されている。しかしながら、フィルタを用いた濾過や、吸着剤を用いた物理吸着により空気中の有害物質を除去する方法は、非特異的なものであって、精度が低かった。また、除去した有害物質が再浮遊したり、フィルタ上で有害物質が増殖して新たな汚染源となったりすることを避けるために、有害物質の殺菌・不活性化の技術を組み合わせなければならなかった。
【０００４】
また、特許文献３には茶の抽出成分を添着した不織布を耳に留める紐で構成された抗ウィルスマスクが、特許文献４にはフェノール性水酸基を有する非水溶性高分子抗アレルゲン剤と吸湿性材料を担持したフィルタが開示されている。茶の抽出成分やフェノール性水酸基を有する非水溶性高分子は、抗菌作用を有することが知られているが、酵素・抗体等の蛋白質のように特定の菌を不活性化できるような特異的な反応性は有していない。酵素、抗体等の蛋白質は、目的の有害物質に合わせたものを用意することができ、より確実な効果を得ることができて好ましい。また、茶の抽出成分やフェノール性水酸基を有する非水溶性高分子は水との親和性が低く、フィルタに添着する際によく混ざり合わず斑になるなど加工性が悪いという問題がある。一方、酵素、抗体等の蛋白質は、その種類によって差があるものの、一般に水によく溶解し、フィルターに添着する際の加工性に優れている。
【０００５】
フィルター上で有害物質を殺菌・不活性化するためには、有害物質に対する殺菌・不活性化能を有する酵素、抗体等の蛋白質をフィルターに担持することが有効である。しかし、特許文献５〜８で開示されている共有結合、イオン結合、架橋法、包括法等の方法で各種酵素を担体に担持させたフィルタは、担持方法が複雑でコストがかかるといった問題があり、簡便な方法で蛋白質を担持し、その活性を発現させることが望まれていた。
【０００６】
さらに、特許文献４には、フィルタ表面を添着した吸湿性材料が、抗アレルゲン剤の活性発現に必要な水分を周辺雰囲気から吸収する方法も開示されているが、周辺雰囲気より得られる水分量は、蛋白質の活性発現において必ずしも十分な量ではないという問題があった。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００７】
【特許文献１】特開平９−２３４３１７号公報
【特許文献２】特表２００１−５２７１６６号公報
【特許文献３】特開平８−３３３２７１号公報
【特許文献４】特開２００４−２９０９２２号公報
【特許文献５】国際公開第９８/０４３３４号パンフレット
【特許文献６】特開昭６０−４９７９５号公報
【特許文献７】特開平２−４１１６６号公報
【特許文献８】特開２００３−２１０９１９号公報
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００８】
本発明は、フィルター上にて、各種細菌、カビ、ウィルス、アレルゲン物質などを吸着し、効率よく不活性化することのできる、酵素、抗体等の蛋白質を担持したフィルターに関し、高い精製度が得られにくい蛋白質材料において、低い精製度の蛋白質材料を使用しても有効に作用させることを課題とするものである。
【課題を解決するための手段】
【０００９】
本発明者らは、蛋白質担持フィルタの性能を向上すべく鋭意検討した結果、ポリエチレンオキサイドを同時に添着することによって、精製度の低い蛋白質を特異的に安定化できることを見出し、ついに本願発明を完成するに到った。即ち本発明は、以下の通りである。
【００１０】
（１）有効蛋白質量／総蛋白質量により求められる精製度の値が０．９以下である蛋白質と、ポリエチレンオキサイドを添着したフィルタ。
【００１１】
（２）前記有効蛋白質がブロメラインである（１）に記載のフィルタ。
【００１２】
（３）前記有効蛋白質が卵黄由来抗体（ＩｇＹ）である（１）に記載のフィルタ。
【発明の効果】
【００１３】
本発明の蛋白質添着フィルタは、ポリエチレンオキサイドを同時に添着することにより、精製度の低い酵素、抗体物質等の蛋白質の活性発現を特異的に安定化することで、精製度の低い蛋白質を使用しても、各種細菌、カビ、ウィルス、アレルゲン物質などを吸着し、フィルタ上にて効率よく不活性化することができるフィルタを得ることができる。
【発明を実施するための最良の形態】
【００１４】
本発明で使用する蛋白質は、有効蛋白質量／総蛋白質量で求められる精製度の値が０．９以下である。ここで言う精製度は、有効蛋白質量と総蛋白質量より計算で求めることができる。
【００１５】
ここで言う有効蛋白質量は、各種細菌、カビ、ウィルス、アレルゲン物質などを不活性化するために添着される酵素、抗体等の蛋白質の質量である。
【００１６】
ここで言う総蛋白質量は、フィルタに添着されるすべての蛋白質の質量であり、有効蛋白質を含むものである。
【００１７】
フィルタに添着されている蛋白質の精製度は、ＳＤＳ−ＰＡＧＥ分析により、有効蛋白質および総蛋白質の質量を求めることにより計算で求めることができる。
【００１８】
本発明で蛋白質の精製度の値を０．９以下としたのは、蛋白質は一般に生体由来の材料を精製して得られるが、精製度が０．９を超える蛋白質を得ようとすると、精製に多くのコストが必要となるからである。また、精製度が０．９を超えるように精製された蛋白質は、一般に保存安定性が低い。これは、夾雑蛋白質が、目的の蛋白質の安定性に寄与しているからである。好ましい、精製度の値は０．５〜０．９である。
【００１９】
本発明で使用するポリエチレンオキサイドは、水分を保持し、蛋白質の活性発現に必要なに水分と反応場を提供することを目的として担持されるものである。
【００２０】
ポリエチレンオキサイドの担持量は、担体シートに対して０．０１質量％以上であることが十分な効果を得る上で好ましい。また、５．０質量％を超えて担持させた場合、それ以上担持量を増やしても、蛋白質活性発現の安定化向上の効果は期待できず、かえって繊維表面の接着性が増加し、担体シートに加工した際に、硬さ斑等が発生するため、好ましくない。より好ましい担持量は０．１〜３．０質量％である。
【００２１】
ポリエチレンオキサイドの繊維への付与は、酵素、抗体等の蛋白質添着の前後のどちらでも差し支えない。具体的には、担体シートを構成するシートを製造する際に処理ローラー等を使用して繊維に付与する方法、あるいは蛋白質溶液にポリエチレンオキサイドを混合し、蛋白質とポリエチレンオキサイドを同時に担持する方法等が挙げられる。
【００２２】
本発明の蛋白質担持フィルタの担体シートの素材は、ポリエステル繊維を含むことが好ましく、かかるポリエステル繊維が非晶性共重合ポリエステル成分を含むことがさらに好ましい。非晶性共重合ポリエステル成分を含むポリエステル繊維は、水の濡れ性がよく、酵素、抗体等の蛋白質を担持する際の加工性が良いからである。
【００２３】
また、非晶性共重合ポリエステル成分を含むポリエステルは適度な調湿性を有しており、このため非晶性共重合ポリエステル成分を含むポリエステル繊維および周辺雰囲気から、ポリエチレンオキサイドが水分を吸収し、保持することで、蛋白質に反応場を提供し、活性発現を安定化することで、蛋白質の活性発現を高度に安定化した蛋白質担持フィルタを提供できる。ここでいう適度な調湿性とは、繊維表面に担持された蛋白質の活性発現に必要な水分を提供できる性能である。蛋白質に提供される水分量が多すぎると蛋白質の早期劣化を招き、少なすぎると活性が発現されない。また、繊維表面に存在する蛋白質に提供される水分量は、繊維内部に存在する水分量を表す水分率とは直接の相関性がない。
【００２４】
非晶性共重合ポリエステル成分は、芳香族ジカルボン酸とグリコール成分の重縮合反応によるポリエステル生成の際に共重合成分を添加して得ることが好ましい。より好ましくは、テレフタル酸とエチレングリコールをベースとし、共重合成分としては例えばイソフタル酸、アジピン酸、セバシン酸、アゼライン酸、ドデカン酸、ジエチレングリコール、プロパンジオール、ブタンジオール、ペンタンジオール、ヘキサンジオール、ポリエチレングリコール、ネオペンチルグリコールなどが挙げられる。このような非晶性共重合ポリエステルは、ガラス転移点温度Ｔｇが５０〜１００℃の範囲となり、明確な結晶融点を示さない。
【００２５】
また本発明は、酵素、抗体物質等の蛋白質を担持し、その活性発現を安定化させる上で、前記非晶性共重合ポリエステル成分がテレフタル酸、イソフタル酸、エチレングリコール、ジエチレングリコールを含むことが好ましく、その共重合モル比が、（テレフタル酸／イソフタル酸）＝（４０／６０）〜（８０／２０）であり、（エチレングリコール／ジエチレングリコール）＝（７０／３０）〜（９７／３）であることがさらに好ましい。
【００２６】
非晶性共重合ポリエステル成分を含む繊維は、前述の非晶性共重合ポリエステル成分とポリアルキレンテレフタレート系ポリエステル成分との複合繊維であることが好ましい。ポリアルキレンテレフタレート系ポリエステルとは具体的にはポリエチレンテレフタレート、ポリブチレンテレフタレートである。また複合繊維としては、シース・コア型、偏心シース・コア型、サイド・バイ・サイド型などの形態が可能である。その中でも、非晶性共重合ポリエステルをシース成分とし、ポリエチレンテレフタレートをコア成分とするシース・コア型複合繊維が加工性の面で好ましいものとして挙げられる。また非晶性共重合ポリエステル成分の複合率は１０〜９０％であり、性能、加工性の両面から好ましくは３０〜７０％である。
【００２７】
本発明の蛋白質担持フィルタの担体シートの素材は、レーヨンを含むことが好ましい。レーヨンは水分率が高く、非晶性共重合ポリエステル成分を含むポリエステル同様、適度な調湿性を有する。
【００２８】
ここに挙げた以外に、本発明の蛋白質担持フィルタの担体シートの素材として、アクリル、ナイロン、ポリオレフィン系、セルロース、パルプ等が挙げられるが、特に限定はされない。
【００２９】
担体シートを構成する繊維の繊度は、１〜３０ｄｔｅｘの範囲で調整することが、シート化時の加工性、フィルタ特性の面から好ましい。
【００３０】
担体シートはスパンボンド不織布、スパンレース不織布、ニードルパンチ不織布、メルトブロー不織布、フラッシュ紡糸不織布、サーマルボンド不織布、ケミカルボンド不織布、ステッチボンド不織布、および湿式抄紙不織布などの不織布、織物、あるいは紙等シートの形態を成すものならば特に限定されない。また、その目付は特に限定されないが、好ましい範囲を例示すると１０〜２００ｇ／ｍ２である。１０ｇ／ｍ２未満だと各種細菌、カビ、ウィルス、アレルゲン物質などの不活性化対象物を十分捕捉できない可能性があり、２００ｇ／ｍ２超えるとフィルタの圧力損失が大きくなるため、あまり好ましくない。
【００３１】
酵素、抗体物質等の蛋白質の担体シートへの担持の方法としては、担体シートを適当な濃度の蛋白質水溶液に含浸し、適当な温度および時間で乾燥する方法が好ましい例として挙げられる。ここで用いる蛋白質水溶液は、各々の蛋白質の活性発現に適したｐＨに調節されることが好ましい。これは、蛋白質はその種類によって活性発現に適したｐＨが異なり、通常はそのｐＨ付近でないと十分な活性の発現は得られないためである。また、乾燥温度と時間は、担持する蛋白質が変性により失活しない温度にすることが重要である。蛋白質はその種類によって耐熱性が大きく異なる。通常は高温で乾燥させた方が短時間で処理が済み効率が良いが、蛋白質の耐熱性を考慮して乾燥条件を決めることが好ましい。
【００３２】
フィルタに添着する有効蛋白質として好ましいものを例示すると、ブロメライン、卵黄由来抗体（ＩｇＹ）等が挙げられる。
【００３３】
ブロメラインはパイナップル由来の蛋白質分解酵素であり、精製度の低いものであれば大量に安価に入手することが可能である。
【００３４】
卵黄由来抗体（ＩｇＹ）も精製度の低いものであれば大量に安価に入手することが可能である。
【００３５】
ここに挙げた以外に、本発明の蛋白質担持フィルタに適用可能な酵素、抗体等の蛋白質としては、溶菌酵素（リゾチーム）、蛋白質分解酵素（プロテアーゼ）、各種アレルゲンを酸化還元する酵素（オキシドレダクターゼ）、細菌、あるいは、カビ、ウィルス、環境アレルゲンなどを不活性化する抗体等が挙げられるが、特に限定されない。
【００３６】
また、ここでいう酵素とは「生細胞内で作られる蛋白性の生体触媒」であり、抗体とは「免疫反応において、抗原の刺激により生体内に作られた抗原と特異的に結合する蛋白質の総称」であり、蛋白質とは「動物・植物・微生物など、およそ生物とよばれるものの細胞の主要成分として含まれる一群の高分子含窒素有機化合物」である（岩波 生化学辞典 第３版 岩波書店）。
【００３７】
一般に、酵素、抗体等の蛋白質は絶乾状態ではその活性は発現されない。従って、酵素、抗体等の蛋白質を担体シートに担持して利用する際には、水分の供給が必要となる。そこで、フィルタ上に保湿性成分を共存させることで、保湿成分が周辺雰囲気の水分を保持し、蛋白質の反応場を提供する役割を果たすことで、活性の発現を安定化させる方法が知られている。
【００３８】
精製度の低い蛋白質においては、保湿成分としてポリエチレンオキサイドを用いることで特異的に蛋白質の活性発現が安定化される。この作用はブロメラインおよび卵黄由来抗体（ＩｇＹ）において特に顕著である。
【実施例】
【００３９】
以下、実施例により本発明を詳細に説明するが、これによって本発明はなんら限定されるものではない。
【００４０】
（担体シートの製造）
シース成分の非晶性共重合ポリエステルとして、酸成分がモル比でテレフタル酸が６０％、イソフタル酸が４０％、ジオール成分がモル比でエチレングリコールが９５％、ジエチレングリコールが５％の割合で共重合された、固有粘度が０．５６、Ｔｇが６４℃の非晶性共重合ポリエステル、コア成分として、固有粘度が０．６４、Ｔｇが６７℃、Ｔｍ（融点）が２５６℃のポリエチレンテレフタレートを用い、各々のペレットを減圧乾燥した後、シース・コア型複合紡糸機にて複合紡糸し、短繊維用延伸機にて延伸、カットの工程を通し、定法により質量比（シース／コア）＝（５０／５０）の複合比率で、単糸繊度が約２．２ｄｔｅｘのシース・コア型複合繊維を得た。次に、この繊維を５０ｍｍにカットし、カーディングによりウェブを作成後、ニードルパンチ加工することにより目付３０ｇ／ｍ２の担体シート１を得た。
【００４１】
（酵素活性試験：試験例１）
以下に記載の実施例１、２および比較例１〜５の蛋白質担持フィルタ上にルテウス菌（Micrococcus luteus）をフリーズドライした顆粒を振りかけ、逆さにして余分な顆粒を除いた後、湿度９０％に保持したデシケータ中で２４時間静置した。その後、低真空走査型電子顕微鏡で観察し、ルテウス菌の溶菌の程度を目視観察した。菌の球形状が崩れている場合を溶菌活性あり、球形状が残存している場合を溶菌活性なしと判定した。
【００４２】
（インフルエンザウィルス不活性化試験：試験例２）
以下に記載の実施例３、４および比較例６〜１０の蛋白質担持フィルタを３３ｍｍ四方に裁断したものを試験片として、密閉された容器に入れ、それぞれにインフルエンザウィルスを１ｍｌあたり０．５ｍｇ含む水溶液を０．５ｍｌ容器内に噴霧した後、室温で１５時間処理を行った。その後、不活性化したインフルエンザウィルスを１ｍｌあたり１ｍｇ含む水溶液を０．５ｍｌ容器内に噴霧して、抗体をブロッキングし、処理の終わった試験片をリン酸緩衝溶液９ｍｌで洗い出し、回収した液を１０日卵に接種、３７℃にて４８時間培養後、ＣＡＭ液を採取し、ＨＡテストを行い、Ｋａｒｂｅｒ法によりウィルス感染価ＥＩＤ５０（５０％ ｅｇｇ−ｉｎｆｅｃｔｉｖｅ ｄｏｓｅｓ）の計算を行った。ブランク試験には蛋白質担持加工を施していないフィルターを用いた。
【００４３】
（酵素活性試験：試験例３）
以下に記載の実施例１、２および比較例１〜５の蛋白質担持フィルタを温度５０℃、相対湿度５０％の恒温恒湿槽内で２４時間静置した後、試験例１に示す試験に供した。
【００４４】
（酵素活性試験：試験例４）
以下に記載の実施例３、４および比較例６〜１０の蛋白質担持フィルタを温度５０℃、相対湿度５０％の恒温恒湿槽内で２４時間静置し、試験例２に示す試験に供した。
【００４５】
（実施例１）
１００ｍＭ Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ緩衝液（ｐＨ８．０）に、精製度が０．９のブロメラインを総蛋白質量が１質量％になるように懸濁し、さらに０．３質量％ポリエチレンオキサイドを含有させた水溶液に、担体シート１を１時間浸漬処理した後、取り出して余分な付着水分を取り除いた担体を、６０℃の温度に保持した乾燥機中で１０分間乾燥し、蛋白質担持フィルタを調製した。
【００４６】
（実施例２）
１００ｍＭ Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ緩衝液（ｐＨ８．０）に、精製度が０．５のブロメラインを総蛋白質量が１質量％になるように懸濁し、さらに０．３質量％ポリエチレンオキサイドを含有させた水溶液に、担体シート１を１時間浸漬処理した後、取り出して余分な付着水分を取り除いた担体を、６０℃の温度に保持した乾燥機中で１０分間乾燥し、蛋白質担持フィルタを調製した。
【００４７】
（比較例１）
１００ｍＭ Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ緩衝液（ｐＨ８．０）に、精製度０．８のブロメラインを総蛋白質量が１質量％になるように懸濁し、さらに０．３質量％ポリエチレングリコールを含有させた水溶液に、担体シート１を１時間浸漬処理した後、取り出して余分な付着水分を取り除いた担体を、６０℃の温度に保持した乾燥機中で１０分間乾燥し、蛋白質担持フィルタを調製した。
【００４８】
（比較例２）
１００ｍＭ Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ緩衝液（ｐＨ８．０）に、精製度０．８のブロメラインを総蛋白質量が１質量％になるように懸濁し、さらに０．３質量％アルギン酸ナトリウムを含有させた水溶液に、担体シート１を１時間浸漬処理した後、取り出して余分な付着水分を取り除いた担体を、６０℃の温度に保持した乾燥機中で１０分間乾燥し、蛋白質担持フィルタを調製した。
【００４９】
（比較例３）
１００ｍＭ Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ緩衝液（ｐＨ８．０）に、精製度０．９９のブロメラインを総蛋白質量が１質量％になるように懸濁し、さらに０．３％質量ポリエチレンオキサイドを含有させた水溶液に、担体シート１を１時間浸漬処理した後、取り出して余分な付着水分を取り除いた担体を、６０℃の温度に保持した乾燥機中で１０分間乾燥し、蛋白質担持フィルタを調製した。
【００５０】
（比較例４）
１００ｍＭ Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ緩衝液（ｐＨ８．０）に、精製度０．９９のブロメラインを総蛋白質量が１質量％になるように懸濁し、さらに０．３質量％ポリエチレングリコールを含有させた水溶液に、担体シート１を１時間浸漬処理した後、取り出して余分な付着水分を取り除いた担体を、６０℃の温度に保持した乾燥機中で１０分間乾燥し、蛋白質担持フィルタを調製した。
【００５１】
（比較例５）
１００ｍＭ Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ緩衝液（ｐＨ８．０）に、精製度０．９９のブロメラインを総蛋白質量が１質量％になるように懸濁し、さらに０．３％質量アルギン酸ナトリウムを含有させた水溶液に、担体シート１を１時間浸漬処理した後、取り出して余分な付着水分を取り除いた担体を、６０℃の温度に保持した乾燥機中で１０分間乾燥し、蛋白質担持フィルタを調製した。
【００５２】
（実施例３）
１００ｍＭリン酸緩衝液（ｐＨ７．０）に、精製度０．９の抗インフルエンザ卵黄由来抗体（ＩｇＹ）を総蛋白質の濃度が５ｍｇ／ｍｌ、ポリエチレンオキサイドを０．３質量％含有させた水溶液を調製し、その水溶液に担体シート１を１時間浸漬処理した後、取り出して余分な付着水分を取り除いた担体を、６０℃の温度に保持した乾燥機中で１０分間乾燥し、蛋白質担持フィルタを調製した。
【００５３】
（実施例４）
１００ｍＭリン酸緩衝液（ｐＨ７．０）に、精製度０．５の抗インフルエンザ卵黄由来抗体（ＩｇＹ）を総蛋白質の濃度が５ｍｇ／ｍｌ、ポリエチレンオキサイドを０．３質量％含有させた水溶液を調製し、その水溶液に担体シート１を１時間浸漬処理した後、取り出して余分な付着水分を取り除いた担体を、６０℃の温度に保持した乾燥機中で１０分間乾燥し、蛋白質担持フィルタを調製した。
【００５４】
（比較例６）
１００ｍＭリン酸緩衝液（ｐＨ７．０）に、、精製度０．８の抗インフルエンザ卵黄由来抗体（ＩｇＹ）を総蛋白質の濃度が５ｍｇ／ｍｌ、ポリエチレングリコールを０．３質量％含有させた水溶液を調製し、その水溶液に担体シート１を１時間浸漬処理した後、取り出して余分な付着水分を取り除いた担体を、６０℃の温度に保持した乾燥機中で１０分間乾燥し、蛋白質担持フィルタを調製した。
【００５５】
（比較例７）
１００ｍＭリン酸緩衝液（ｐＨ７．０）に、精製度０．８の抗インフルエンザ卵黄由来抗体（ＩｇＹ）を総蛋白質の濃度が５ｍｇ／ｍｌ、アルギン酸ナトリウムを０．３質量％含有させた水溶液を調製し、その水溶液に担体シート１を１時間浸漬処理した後、取り出して余分な付着水分を取り除いた担体を、６０℃の温度に保持した乾燥機中で１０分間乾燥し、蛋白質担持フィルタを調製した。
【００５６】
（比較例８）
１００ｍＭリン酸緩衝液（ｐＨ７．０）に、精製度０．９９の抗インフルエンザ卵黄由来抗体（ＩｇＹ）を総蛋白質の濃度が５ｍｇ／ｍｌ、ポリエチレンオキサイドを０．３質量％含有させた水溶液を調製し、その水溶液に担体シート１を１時間浸漬処理した後、取り出して余分な付着水分を取り除いた担体を、６０℃の温度に保持した乾燥機中で１０分間乾燥し、蛋白質担持フィルタを調製した。
【００５７】
（比較例９）
１００ｍＭリン酸緩衝液（ｐＨ７．０）に、精製度０．９９の抗インフルエンザ卵黄由来抗体（ＩｇＹ）を総蛋白質の濃度が５ｍｇ／ｍｌ、ポリエチレングリコールを０．３質量％含有させた水溶液を調製し、その水溶液に担体シート１を１時間浸漬処理した後、取り出して余分な付着水分を取り除いた担体を、６０℃の温度に保持した乾燥機中で１０分間乾燥し、蛋白質担持フィルタを調製した。
【００５８】
（比較例１０）
１００ｍＭリン酸緩衝液（ｐＨ７．０）に、精製度０．９９の抗インフルエンザ卵黄由来抗体（ＩｇＹ）を総蛋白質の濃度が５ｍｇ／ｍｌ、アルギン酸ナトリウムを０．３質量％含有させた水溶液を調製し、その水溶液に担体シート１を１時間浸漬処理した後、取り出して余分な付着水分を取り除いた担体を、６０℃の温度に保持した乾燥機中で１０分間乾燥し、蛋白質担持フィルタを調製した。
【００５９】
実施例１〜２、比較例１〜５の蛋白質担持フィルタについて試験例１で示した酵素活性試験を実施した。その結果を表１に示す。実施例１〜２、比較例３ではリゾチームの溶菌作用によるルテウス菌の崩壊が確認された。比較例１、２、４，５ではルテウス菌の崩壊は確認されなかった。
【００６０】
実施例１〜２、比較例１〜５の蛋白質担持フィルタについて、試験例３で示した酵素活性試験を実施した。その結果を表１に示す。実施例１〜２ではリゾチームの溶菌作用によるルテウス菌の崩壊が確認された。一方、比較例１〜５ではルテウス菌の崩壊は確認されなかった。
【００６１】
実施例３〜４、比較例６〜１０の蛋白質担持フィルタについて試験例２で示したインフルエンザウィルス不活性化試験を実施した。その結果を表１に示す。ブランク試験の結果、ウィルス感染価はＥＩＤ５０＝０．５×１０８．５であった。実施例３、４および比較例８のウィルス感染価は、順にＥＩＤ５０＝０．５×１０３．９、０．５×１０４．１、０．５×１０４．４、であり、蛋白質担持フィルタによる活性化ウィルス量の４桁減少、すなわち９９．９９％の不活性化が確認された。一方、比較例６、７、９、１０のウィルス感染価は、順にＥＩＤ５０＝０．５×１０７．１、０．５×１０７．５、０．５×１０７．３、０．５×１０７．５であり、活性化ウィルス量の１桁減少、すなわち９０％不活性化にとどまった。
【００６２】
実施例３〜４、比較例６〜１０の蛋白質担持フィルタについて試験例４で示したインフルエンザウィルス不活性化試験を実施した。その結果を表１に示す。ブランク試験の結果、ウィルス感染価はＥＩＤ５０＝０．５×１０８．５であった。実施例３、４のウィルス感染価はＥＩＤ５０＝０．５×１０５．１、０．５×１０５．５であり、活性化ウィルス量の３桁減少、すなわち９９．９％の不活性化が確認された。一方、比較例８のウィルス感染価はＥＩＤ５０＝０．５×１０７．３であり、活性化ウィルス量の１桁減少、すなわち９０％不活性化にとどまった。また、比較例６、７、９、１０のウィルス感染価はＥＩＤ５０＝０．５×１０７．９、０．５×１０８．４、０．５×１０８．１、０．５×１０８．２、であり、ウィルス不活性化の効果は非常に低かった。
【００６３】
【表１】
【産業上の利用可能性】
【００６４】
本発明の蛋白質担持フィルタは、ポリエチレンオキサイドの同時添着により、精製度の低い酵素、抗体等の蛋白質の活性発現に寄与することで、高い性能を実現したものであり、また、簡便な方法で蛋白質の担持が可能であるので、容易に産業上利用できる。
【特許請求の範囲】
【請求項１】
有効蛋白質量／総蛋白質量により求められる精製度の値が０．９以下である蛋白質と、ポリエチレンオキサイドを添着したフィルタ。
【請求項２】
前記有効蛋白質がブロメラインである請求項１に記載のフィルタ。
【請求項３】
前記有効蛋白質が卵黄由来抗体（ＩｇＹ）である請求項１に記載のフィルタ。
【請求項１】
有効蛋白質量／総蛋白質量により求められる精製度の値が０．９以下である蛋白質と、ポリエチレンオキサイドを添着したフィルタ。
【請求項２】
前記有効蛋白質がブロメラインである請求項１に記載のフィルタ。
【請求項３】
前記有効蛋白質が卵黄由来抗体（ＩｇＹ）である請求項１に記載のフィルタ。
【公開番号】特開２０１１−９２８５１（Ｐ２０１１−９２８５１Ａ）
【公開日】平成２３年５月１２日（２０１１．５．１２）
【国際特許分類】
【出願番号】特願２００９−２４８５１１（Ｐ２００９−２４８５１１）
【出願日】平成２１年１０月２９日（２００９．１０．２９）
【出願人】（０００００３１６０）東洋紡績株式会社 (3,622)
【Ｆターム（参考）】
【公開日】平成２３年５月１２日（２０１１．５．１２）
【国際特許分類】
【出願日】平成２１年１０月２９日（２００９．１０．２９）
【出願人】（０００００３１６０）東洋紡績株式会社 (3,622)
【Ｆターム（参考）】
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