遺伝子改変された免疫系を有する有蹄動物
本発明は、機能的内因性免疫グロブリン遺伝子座の発現を欠く、有蹄動物、組織、および器官、ならびにこのような動物、組織、および器官由来の細胞および細胞株を提供する。本発明はまた、外因性（ヒトなど）免疫グロブリン遺伝子座を発現する、有蹄動物、組織、および器官、ならびにこのような動物、組織、および器官由来の細胞および細胞株を提供する。本発明は、さらに、有蹄動物（ブタなど）のブタの重鎖および軽鎖免疫グロブリンのゲノムＤＮＡ配列を提供する。このような動物、組織、器官、および細胞を、研究および医学療法で使用し得る。さらに、このような動物、器官、組織、および細胞の調製方法を提供する。
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【特許請求の範囲】
【請求項１】
機能的内因性免疫グロブリンのいかなる発現も欠く、トランスジェニック有蹄動物。
【請求項２】
前記有蹄動物が、内因性重鎖免疫グロブリンのいかなる発現も欠く、請求項１に記載のトランスジェニック有蹄動物。
【請求項３】
前記有蹄動物が、内因性軽鎖免疫グロブリンのいかなる発現も欠く、請求項１に記載のトランスジェニック有蹄動物。
【請求項４】
前記有蹄動物が、内因性κ鎖免疫グロブリンのいかなる発現も欠く、請求項３に記載のトランスジェニック有蹄動物。
【請求項５】
前記有蹄動物が、内因性λ鎖免疫グロブリンのいかなる発現も欠く、請求項３に記載のトランスジェニック有蹄動物。
【請求項６】
前記有蹄動物が、ブタ、ウシ、ヒツジ、およびヤギからなる群から選択される、請求項１に記載のトランスジェニック有蹄動物。
【請求項７】
前記有蹄動物がブタである、請求項６に記載のトランスジェニック有蹄動物。
【請求項８】
前記有蹄動物が、核移植によって生成される、請求項１に記載のトランスジェニック有蹄動物。
【請求項９】
前記有蹄動物が、外因性免疫グロブリン遺伝子座を発現する、請求項１に記載のトランスジェニック有蹄動物。
【請求項１０】
前記外因性免疫グロブリン遺伝子座が、重鎖免疫グロブリンまたはそのフラグメントである、請求項９に記載のトランスジェニック有蹄動物。
【請求項１１】
前記外因性免疫グロブリン遺伝子座が、軽鎖免疫グロブリンまたはそのフラグメントである、請求項９に記載のトランスジェニック有蹄動物。
【請求項１２】
前記軽鎖遺伝子座が、κ鎖遺伝子座またはそのフラグメントである、請求項１１に記載のトランスジェニック有蹄動物。
【請求項１３】
前記軽鎖遺伝子座が、λ鎖遺伝子座またはそのフラグメントである、請求項１１に記載のトランスジェニック有蹄動物。
【請求項１４】
前記外因性遺伝子座が、ヒト免疫グロブリン遺伝子座またはそのフラグメントである、請求項９に記載のトランスジェニック有蹄動物。
【請求項１５】
人工染色体が、前記外因性免疫グロブリンを含む、請求項９に記載のトランスジェニック有蹄動物。
【請求項１５】
前記人工染色体が、哺乳動物人工染色体を含む、請求項１５に記載のトランスジェニック有蹄動物。
【請求項１６】
前記哺乳動物人工染色体が、ヒト第１４染色体、ヒト第２染色体、およびヒト第２２染色体、またはそれらのフラグメントのうちの１つ以上を含む、請求項１５に記載のトランスジェニック有蹄動物。
【請求項１７】
内因性λ鎖免疫グロブリンのいかなる発現も欠く、トランスジェニック哺乳動物。
【請求項１８】
外因性免疫グロブリン遺伝子座またはそのフラグメントを発現するトランスジェニック有蹄動物であって、前記免疫グロブリンが、内因性有蹄動物染色体内に組み込まれた免疫グロブリン遺伝子座から発現される、トランスジェニック有蹄動物。
【請求項１９】
前記外因性免疫グロブリンが、ヒト免疫グロブリンまたはそのフラグメントである、請求項１８に記載のトランスジェニック有蹄動物。
【請求項２０】
前記外因性免疫グロブリン遺伝子座が、子孫に遺伝する、請求項１８に記載のトランスジェニック有蹄動物。
【請求項２１】
前記外因性免疫グロブリン遺伝子座が、雄生殖系列を介して子孫に遺伝する、請求項１８に記載のトランスジェニック有蹄動物。
【請求項２２】
前記有蹄動物が、ブタ、ヒツジ、ヤギ、またはウシである、請求項１８に記載のトランスジェニック有蹄動物。
【請求項２３】
前記有蹄動物がブタである、請求項２２に記載のトランスジェニック有蹄動物。
【請求項２４】
前記有蹄動物が、核移植を介して生成される、請求項１８に記載のトランスジェニック有蹄動物。
【請求項２５】
前記免疫グロブリン遺伝子座がＢ細胞において発現されて、１つ以上の抗原への曝露に応答して外因性免疫グロブリンを生成する、請求項１８に記載のトランスジェニック有蹄動物。
【請求項２６】
前記人工染色体が、外因性免疫グロブリンを含む、請求項１８に記載のトランスジェニック有蹄動物。
【請求項２７】
前記人工染色体が、哺乳動物人工染色体を含む、請求項１８に記載のトランスジェニック有蹄動物。
【請求項２８】
前記人工染色体が、酵母人工染色体を含む、請求項２７に記載のトランスジェニック有蹄動物。
【請求項２９】
前記人工染色体が、ヒト第１４染色体、ヒト第２染色体、およびヒト第２２染色体、またはそれらのフラグメントのうちの１つ以上を含む、請求項２６に記載のトランスジェニック有蹄動物。
【請求項３０】
請求項１に記載のトランスジェニック有蹄動物に由来する、トランスジェニック有蹄動物の細胞、組織、または器官。
【請求項３１】
請求項１８に記載のトランスジェニック有蹄動物に由来する、トランスジェニック有蹄動物の細胞、組織、または器官。
【請求項３２】
前記細胞が、体細胞、生殖細胞、または胚細胞である、請求項３０または請求項３１に記載の細胞。
【請求項３３】
前記細胞が、Ｂ細胞である、請求項３２に記載の細胞。
【請求項３４】
前記細胞が、線維芽細胞である、請求項３３に記載の細胞。
【請求項３５】
外因性免疫グロブリン遺伝子座を含む、ブタ動物。
【請求項３６】
人工染色体が、前記外因性遺伝子座を含む、請求項３５に記載のブタ。
【請求項３７】
前記人工染色体が、再配列する１つ以上の外因性免疫グロブリン遺伝子座を含み、かつ該人工染色体は、１つ以上の抗原への曝露に応答して外因性免疫グロブリンを生成し得る、請求項３６に記載のブタ。
【請求項３８】
請求項３５に記載の動物に由来する、ブタ細胞。
【請求項３９】
前記細胞が、体細胞、Ｂ細胞、または線維芽細胞である、請求項３６に記載のブタ細胞。
【請求項４０】
前記外因性免疫グロブリンが、ヒト免疫グロブリンである、請求項３５に記載のブタ。
【請求項４１】
前記１つ以上の人工染色体が、哺乳動物人工染色体を含む、請求項３６に記載のブタ。
【請求項４２】
前記哺乳動物人工染色体が、ヒト第１４染色体、ヒト第２染色体、およびヒト第２２染色体、またはそれらのフラグメントのうちの１つ以上を含む、請求項４１に記載のブタ。
【請求項４３】
外因性抗体を生成する方法であって、該方法は、
（ａ）１つ以上の目的の抗原を有蹄動物に投与する工程であって、有蹄動物の細胞は、１つ以上の人工染色体を含み、かつ機能的内因性免疫グロブリンのいかなる発現も欠き、それぞれの人工染色体は、再配列して該１つ以上の抗原に対する外因性抗体を生成する１つ以上の外因性免疫グロブリン遺伝子座を含む、工程；および
（ｂ）該有蹄動物から該外因性抗体を回収する工程；
を包含する、方法。
【請求項４４】
前記免疫グロブリン遺伝子座が、Ｂ細胞中で再配列する、請求項４３に記載の方法。
【請求項４５】
前記外因性免疫グロブリン遺伝子座が、重鎖免疫グロブリンまたはそのフラグメントである、請求項４３に記載の方法。
【請求項４６】
前記外因性免疫グロブリン遺伝子座が、軽鎖免疫グロブリンまたはそのフラグメントである、請求項４３に記載の方法。
【請求項４７】
前記外因性遺伝子座が、ヒト免疫グロブリン遺伝子座またはそのフラグメントである、請求項４３に記載の方法。
【請求項４８】
人工染色体が、前記外因性免疫グロブリンを含む、請求項４３に記載の方法。
【請求項４９】
前記人工染色体が、哺乳動物人工染色体を含む、請求項４８に記載の方法。
【請求項５０】
前記哺乳動物人工染色体が、ヒト第１４染色体、ヒト第２染色体、およびヒト第２２染色体、またはそれらのフラグメントのうちの１つ以上を含む、請求項４９に記載の方法。
【請求項５１】
ブタ重鎖免疫グロブリンまたはそのフラグメントを含む単離ヌクレオチド配列であって、該重鎖免疫グロブリンは、少なくとも１つの連結領域および少なくとも１つの免疫グロブリン定常領域を含む、単離ヌクレオチド配列。
【請求項５２】
前記重鎖免疫グロブリンが、少なくとも１つの可変領域、少なくとも２つの多様性領域、少なくとも４つの連結領域、および少なくとも１つの定常領域を含む、請求項５１に記載のヌクレオチド配列。
【請求項５３】
前記重鎖免疫グロブリンが、配列番号２９を含む、請求項５２に記載のヌクレオチド配列。
【請求項５４】
前記重鎖免疫グロブリンが、配列番号４を含む、請求項５１に記載のヌクレオチド配列。
【請求項５５】
前記配列が、配列番号４または配列番号２９と少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、９８％、または９９％相同である、請求項５３または請求項５４に記載のヌクレオチド配列。
【請求項５６】
前記配列が、配列番号４の少なくとも１７個、２０個、２５個、または３０個連続するヌクレオチドまたは配列番号２９の残基１〜９，０７０を含む、請求項５３または請求項５４に記載のヌクレオチド配列。
【請求項５７】
前記配列が、配列番号２９の残基９，０７０〜１１０３９を含む、請求項５３または請求項５４に記載のヌクレオチド配列。
【請求項５８】
配列番号４または配列番号２９とハイブリダイズする、単離ヌクレオチド配列。
【請求項５９】
ターゲッティングベクターであって、
（ａ）配列番号２９と相同な少なくとも１７個連続する核酸を含む、第１のヌクレオチド配列、
（ｂ）選択マーカー遺伝子；および
（ｃ）前記第１のヌクレオチド配列と重複しない、配列番号２９と相同な少なくとも１７個連続する核酸を含む、第２のヌクレオチド配列；
を含む、ターゲッティングベクター。
【請求項６０】
前記選択マーカーが、抗生物質耐性遺伝子を含む、請求項５９に記載のターゲッティングベクター。
【請求項６１】
前記第１のヌクレオチド配列が、５’組換えアームに相当する、請求項５９に記載のターゲッティングベクター。
【請求項６２】
前記第２のヌクレオチド配列が、３’組換えアームに相当する、請求項５９に記載のターゲッティングベクター。
【請求項６３】
請求項５９に記載のターゲッティングベクターでトランスフェクトされた、細胞。
【請求項６４】
ブタ重鎖免疫グロブリン遺伝子座の少なくとも１つの対立遺伝子が不活化されている、請求項６３に記載の細胞。
【請求項６５】
請求項６４に記載の細胞を含む、ブタ動物。
【請求項６６】
有蹄動物のκ軽鎖免疫グロブリン遺伝子座またはそのフラグメントを含む、単離ヌクレオチド配列。
【請求項６７】
前記有蹄動物がブタである、請求項６６に記載のヌクレオチド配列。
【請求項６８】
前記有蹄動物のκ軽鎖免疫グロブリン遺伝子座が、少なくとも１つの連結領域、１つの定常領域、および／または１つのエンハンサー領域を含む、請求項６６に記載のヌクレオチド配列。
【請求項６９】
前記ヌクレオチド配列が、少なくとも５つの連結領域、１つの定常領域、および１つのエンハンサー領域を含む、請求項６６に記載のヌクレオチド配列。
【請求項７０】
配列番号３０を含む、請求項６９に記載のヌクレオチド配列。
【請求項７１】
配列番号１２を含む、請求項６９に記載のヌクレオチド配列。
【請求項７２】
前記配列が、配列番号１２または配列番号３０の少なくとも１７個、２０個、２５個、または３０個連続するヌクレオチドを含む、請求項７０または請求項７１に記載のヌクレオチド配列。
【請求項７３】
配列番号１２または配列番号３０とハイブリダイズする、単離ヌクレオチド配列。
【請求項７４】
ターゲッティングベクターであって、
（ａ）配列番号３０と相同な少なくとも１７個連続する核酸を含む、第１のヌクレオチド配列；
（ｂ）選択マーカー遺伝子；および
（ｃ）前記第１のヌクレオチド配列と重複しない、配列番号３０と相同な少なくとも１７個連続する核酸を含む、第２のヌクレオチド配列；
を含む、ターゲッティングベクター。
【請求項７５】
前記選択マーカーが、抗生物質耐性遺伝子を含む、請求項７４に記載のターゲッティングベクター。
【請求項７６】
前記第１のヌクレオチド配列が、５’組換えアームに相当する、請求項７４に記載のターゲッティングベクター。
【請求項７７】
前記第２のヌクレオチド配列が、３’組換えアームに相当する、請求項７４に記載のターゲッティングベクター。
【請求項７８】
請求項７４に記載のターゲッティングベクターでトランスフェクトされた、細胞。
【請求項７９】
κ鎖免疫グロブリン遺伝子座の少なくとも１つの対立遺伝子が不活化されている、請求項７８に記載の細胞。
【請求項８０】
請求項７９に記載の細胞を含む、ブタ動物。
【請求項８１】
有蹄動物のλ軽鎖免疫グロブリン遺伝子座を含む、単離ヌクレオチド配列。
【請求項８２】
前記有蹄動物がブタである、請求項８１に記載のヌクレオチド配列。
【請求項８３】
前記有蹄動物がウシである、請求項８１に記載のヌクレオチド配列。
【請求項８４】
前記有蹄動物のλ軽鎖免疫グロブリン遺伝子座が、Ｊ単位〜Ｃ単位のコンカテマーを含む、請求項８１に記載のヌクレオチド配列。
【請求項８５】
前記有蹄動物のλ軽鎖免疫グロブリン遺伝子座が、例えば、配列番号３１に示す、少なくとも１つの連結領域−定常領域対および／または少なくとも１つの可変領域を含む、請求項８１に記載のヌクレオチド配列。
【請求項８６】
配列番号２８を含む、請求項８２に記載のヌクレオチド配列。
【請求項８７】
配列番号３１を含む、請求項８３に記載のヌクレオチド配列。
【請求項８８】
前記配列が、配列番号２８または配列番号３１の少なくとも１７個、２０個、２５個、または３０個連続するヌクレオチドを含む、請求項８６または請求項８７に記載のヌクレオチド配列。
【請求項８９】
配列番号２８または配列番号３１とハイブリダイズする、単離ヌクレオチド配列。
【請求項９０】
ターゲッティングベクターであって、
（ａ）配列番号２８または配列番号３１と相同な少なくとも１７個連続する核酸を含む、第１のヌクレオチド配列；
（ｂ）選択マーカー遺伝子；および
（ｃ）該第１のヌクレオチド配列と重複しない、配列番号２８または配列番号３１と相同な少なくとも１７個連続する核酸を含む、第２のヌクレオチド配列；
を含む、ターゲッティングベクター。
【請求項９１】
前記選択マーカーが、抗生物質耐性遺伝子を含む、請求項９０に記載のターゲッティングベクター。
【請求項９２】
前記第１のヌクレオチド配列が、５’組換えアームに相当する、請求項９０に記載のターゲッティングベクター。
【請求項９３】
前記第２のヌクレオチド配列が、３’組換えアームに相当する、請求項９０に記載のターゲッティングベクター。
【請求項９４】
請求項９０に記載のターゲッティングベクターでトランスフェクトされた、細胞。
【請求項９５】
λ鎖免疫グロブリン遺伝子座の少なくとも１つの対立遺伝子が不活化された、請求項９４に記載の細胞。
【請求項９６】
請求項９５に記載の細胞を含む、ブタ動物。
【請求項９７】
少なくとも１００ｋｂのＤＮＡを環状化する方法であって、
その後、該ＤＮＡを部位特異的リコンビナーゼによって宿主ゲノムに組み込み得る、
方法。
【請求項９８】
少なくとも１００ｋｂ、２００ｋｂ、３００ｋｂ、４００ｋｂ、５００ｋｂ、１０００ｋｂ、２０００ｋｂ、５０００ｋｂ、１０，０００ｋｂのＤＮＡを環状化し得る、請求項９７に記載の方法。
【請求項９９】
前記ＤＮＡの環状化が、前記ＤＮＡ配列の各末端にて部位特異的リコンビナーゼ標的部位を結合すること、およびその後、該ＤＮＡ配列への部位特異的リコンビナーゼを適用すること、によって行われ得る、請求項９７に記載の方法。
【請求項１００】
前記部位特異的リコンビナーゼ標的部位が、Ｌｏｘである、請求項９７に記載の方法。
【請求項１０１】
人工染色体が、前記ＤＮＡ配列を含む、請求項９７に記載の方法。
【請求項１０２】
前記人工染色体が、酵母人工染色体または哺乳動物人工染色体である、請求項１０１に記載の方法。
【請求項１０３】
前記人工染色体が、ヒト免疫グロブリン遺伝子座またはそのフラグメントをコードするＤＮＡ配列を含む、請求項１０１に記載の方法。
【請求項１０４】
前記ヒト免疫グロブリン遺伝子座またはそのフラグメントが、ヒト第１４染色体、ヒト第２染色体、および／またはヒト第２２染色体を含む、請求項１０３に記載の方法。
【請求項１０５】
内因性免疫グロブリンの少なくとも１つの対立遺伝子の発現を欠くトランスジェニック有蹄動物であって、該免疫グロブリンは、重鎖、κ軽鎖、およびλ軽鎖、またはそれらの任意の組み合わせからなる群から選択される、トランスジェニック有蹄動物。
【請求項１０６】
外因性免疫グロブリンが発現される、請求項１０５に記載のトランスジェニック有蹄動物。
【請求項１０７】
請求項１０６に記載のトランスジェニック有蹄動物を生成するための方法であって、
内因性免疫グロブリンの少なくとも１つの対立遺伝子の発現を欠くトランスジェニック有蹄動物が、外因性免疫グロブリンを発現する有蹄動物と交配させられ、該内因性免疫グロブリンは、重鎖、κ軽鎖、およびλ軽鎖、またはそれらの任意の組み合わせからなる群から選択される、方法。
【請求項１０８】
前記有蹄動物が、ブタである、請求項１０５〜請求項１０７のうちいずれか１項に記載のトランスジェニック有蹄動物。
【請求項１０９】
前記外因性免疫グロブリンが、ヒト免疫グロブリン遺伝子座またはそのフラグメントである、請求項１０６または請求項１０７に記載のトランスジェニック有蹄動物。
【請求項１１０】
人工染色体が、前記ヒト免疫グロブリン遺伝子座またはそのフラグメントを含む、請求項１０９に記載のトランスジェニック有蹄動物。
【請求項１１１】
請求項１０５に記載の有蹄動物に由来する、細胞。
【請求項１１２】
異種抗原の発現を消失させるためのさらなる遺伝子改変をさらに含む、請求項１、請求項１８、請求項１０５、または請求項１０６に記載のトランスジェニック有蹄動物。
【請求項１１３】
前記有蹄動物が、α−１，３−ガラクトシルトランスフェラーゼ遺伝子の少なくとも１つの対立遺伝子の発現を欠く、請求項１１２に記載のトランスジェニック有蹄動物。
【請求項１１４】
前記有蹄動物がブタである、請求項１１２に記載のトランスジェニック有蹄動物。
【請求項１】
機能的内因性免疫グロブリンのいかなる発現も欠く、トランスジェニック有蹄動物。
【請求項２】
前記有蹄動物が、内因性重鎖免疫グロブリンのいかなる発現も欠く、請求項１に記載のトランスジェニック有蹄動物。
【請求項３】
前記有蹄動物が、内因性軽鎖免疫グロブリンのいかなる発現も欠く、請求項１に記載のトランスジェニック有蹄動物。
【請求項４】
前記有蹄動物が、内因性κ鎖免疫グロブリンのいかなる発現も欠く、請求項３に記載のトランスジェニック有蹄動物。
【請求項５】
前記有蹄動物が、内因性λ鎖免疫グロブリンのいかなる発現も欠く、請求項３に記載のトランスジェニック有蹄動物。
【請求項６】
前記有蹄動物が、ブタ、ウシ、ヒツジ、およびヤギからなる群から選択される、請求項１に記載のトランスジェニック有蹄動物。
【請求項７】
前記有蹄動物がブタである、請求項６に記載のトランスジェニック有蹄動物。
【請求項８】
前記有蹄動物が、核移植によって生成される、請求項１に記載のトランスジェニック有蹄動物。
【請求項９】
前記有蹄動物が、外因性免疫グロブリン遺伝子座を発現する、請求項１に記載のトランスジェニック有蹄動物。
【請求項１０】
前記外因性免疫グロブリン遺伝子座が、重鎖免疫グロブリンまたはそのフラグメントである、請求項９に記載のトランスジェニック有蹄動物。
【請求項１１】
前記外因性免疫グロブリン遺伝子座が、軽鎖免疫グロブリンまたはそのフラグメントである、請求項９に記載のトランスジェニック有蹄動物。
【請求項１２】
前記軽鎖遺伝子座が、κ鎖遺伝子座またはそのフラグメントである、請求項１１に記載のトランスジェニック有蹄動物。
【請求項１３】
前記軽鎖遺伝子座が、λ鎖遺伝子座またはそのフラグメントである、請求項１１に記載のトランスジェニック有蹄動物。
【請求項１４】
前記外因性遺伝子座が、ヒト免疫グロブリン遺伝子座またはそのフラグメントである、請求項９に記載のトランスジェニック有蹄動物。
【請求項１５】
人工染色体が、前記外因性免疫グロブリンを含む、請求項９に記載のトランスジェニック有蹄動物。
【請求項１５】
前記人工染色体が、哺乳動物人工染色体を含む、請求項１５に記載のトランスジェニック有蹄動物。
【請求項１６】
前記哺乳動物人工染色体が、ヒト第１４染色体、ヒト第２染色体、およびヒト第２２染色体、またはそれらのフラグメントのうちの１つ以上を含む、請求項１５に記載のトランスジェニック有蹄動物。
【請求項１７】
内因性λ鎖免疫グロブリンのいかなる発現も欠く、トランスジェニック哺乳動物。
【請求項１８】
外因性免疫グロブリン遺伝子座またはそのフラグメントを発現するトランスジェニック有蹄動物であって、前記免疫グロブリンが、内因性有蹄動物染色体内に組み込まれた免疫グロブリン遺伝子座から発現される、トランスジェニック有蹄動物。
【請求項１９】
前記外因性免疫グロブリンが、ヒト免疫グロブリンまたはそのフラグメントである、請求項１８に記載のトランスジェニック有蹄動物。
【請求項２０】
前記外因性免疫グロブリン遺伝子座が、子孫に遺伝する、請求項１８に記載のトランスジェニック有蹄動物。
【請求項２１】
前記外因性免疫グロブリン遺伝子座が、雄生殖系列を介して子孫に遺伝する、請求項１８に記載のトランスジェニック有蹄動物。
【請求項２２】
前記有蹄動物が、ブタ、ヒツジ、ヤギ、またはウシである、請求項１８に記載のトランスジェニック有蹄動物。
【請求項２３】
前記有蹄動物がブタである、請求項２２に記載のトランスジェニック有蹄動物。
【請求項２４】
前記有蹄動物が、核移植を介して生成される、請求項１８に記載のトランスジェニック有蹄動物。
【請求項２５】
前記免疫グロブリン遺伝子座がＢ細胞において発現されて、１つ以上の抗原への曝露に応答して外因性免疫グロブリンを生成する、請求項１８に記載のトランスジェニック有蹄動物。
【請求項２６】
前記人工染色体が、外因性免疫グロブリンを含む、請求項１８に記載のトランスジェニック有蹄動物。
【請求項２７】
前記人工染色体が、哺乳動物人工染色体を含む、請求項１８に記載のトランスジェニック有蹄動物。
【請求項２８】
前記人工染色体が、酵母人工染色体を含む、請求項２７に記載のトランスジェニック有蹄動物。
【請求項２９】
前記人工染色体が、ヒト第１４染色体、ヒト第２染色体、およびヒト第２２染色体、またはそれらのフラグメントのうちの１つ以上を含む、請求項２６に記載のトランスジェニック有蹄動物。
【請求項３０】
請求項１に記載のトランスジェニック有蹄動物に由来する、トランスジェニック有蹄動物の細胞、組織、または器官。
【請求項３１】
請求項１８に記載のトランスジェニック有蹄動物に由来する、トランスジェニック有蹄動物の細胞、組織、または器官。
【請求項３２】
前記細胞が、体細胞、生殖細胞、または胚細胞である、請求項３０または請求項３１に記載の細胞。
【請求項３３】
前記細胞が、Ｂ細胞である、請求項３２に記載の細胞。
【請求項３４】
前記細胞が、線維芽細胞である、請求項３３に記載の細胞。
【請求項３５】
外因性免疫グロブリン遺伝子座を含む、ブタ動物。
【請求項３６】
人工染色体が、前記外因性遺伝子座を含む、請求項３５に記載のブタ。
【請求項３７】
前記人工染色体が、再配列する１つ以上の外因性免疫グロブリン遺伝子座を含み、かつ該人工染色体は、１つ以上の抗原への曝露に応答して外因性免疫グロブリンを生成し得る、請求項３６に記載のブタ。
【請求項３８】
請求項３５に記載の動物に由来する、ブタ細胞。
【請求項３９】
前記細胞が、体細胞、Ｂ細胞、または線維芽細胞である、請求項３６に記載のブタ細胞。
【請求項４０】
前記外因性免疫グロブリンが、ヒト免疫グロブリンである、請求項３５に記載のブタ。
【請求項４１】
前記１つ以上の人工染色体が、哺乳動物人工染色体を含む、請求項３６に記載のブタ。
【請求項４２】
前記哺乳動物人工染色体が、ヒト第１４染色体、ヒト第２染色体、およびヒト第２２染色体、またはそれらのフラグメントのうちの１つ以上を含む、請求項４１に記載のブタ。
【請求項４３】
外因性抗体を生成する方法であって、該方法は、
（ａ）１つ以上の目的の抗原を有蹄動物に投与する工程であって、有蹄動物の細胞は、１つ以上の人工染色体を含み、かつ機能的内因性免疫グロブリンのいかなる発現も欠き、それぞれの人工染色体は、再配列して該１つ以上の抗原に対する外因性抗体を生成する１つ以上の外因性免疫グロブリン遺伝子座を含む、工程；および
（ｂ）該有蹄動物から該外因性抗体を回収する工程；
を包含する、方法。
【請求項４４】
前記免疫グロブリン遺伝子座が、Ｂ細胞中で再配列する、請求項４３に記載の方法。
【請求項４５】
前記外因性免疫グロブリン遺伝子座が、重鎖免疫グロブリンまたはそのフラグメントである、請求項４３に記載の方法。
【請求項４６】
前記外因性免疫グロブリン遺伝子座が、軽鎖免疫グロブリンまたはそのフラグメントである、請求項４３に記載の方法。
【請求項４７】
前記外因性遺伝子座が、ヒト免疫グロブリン遺伝子座またはそのフラグメントである、請求項４３に記載の方法。
【請求項４８】
人工染色体が、前記外因性免疫グロブリンを含む、請求項４３に記載の方法。
【請求項４９】
前記人工染色体が、哺乳動物人工染色体を含む、請求項４８に記載の方法。
【請求項５０】
前記哺乳動物人工染色体が、ヒト第１４染色体、ヒト第２染色体、およびヒト第２２染色体、またはそれらのフラグメントのうちの１つ以上を含む、請求項４９に記載の方法。
【請求項５１】
ブタ重鎖免疫グロブリンまたはそのフラグメントを含む単離ヌクレオチド配列であって、該重鎖免疫グロブリンは、少なくとも１つの連結領域および少なくとも１つの免疫グロブリン定常領域を含む、単離ヌクレオチド配列。
【請求項５２】
前記重鎖免疫グロブリンが、少なくとも１つの可変領域、少なくとも２つの多様性領域、少なくとも４つの連結領域、および少なくとも１つの定常領域を含む、請求項５１に記載のヌクレオチド配列。
【請求項５３】
前記重鎖免疫グロブリンが、配列番号２９を含む、請求項５２に記載のヌクレオチド配列。
【請求項５４】
前記重鎖免疫グロブリンが、配列番号４を含む、請求項５１に記載のヌクレオチド配列。
【請求項５５】
前記配列が、配列番号４または配列番号２９と少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、９８％、または９９％相同である、請求項５３または請求項５４に記載のヌクレオチド配列。
【請求項５６】
前記配列が、配列番号４の少なくとも１７個、２０個、２５個、または３０個連続するヌクレオチドまたは配列番号２９の残基１〜９，０７０を含む、請求項５３または請求項５４に記載のヌクレオチド配列。
【請求項５７】
前記配列が、配列番号２９の残基９，０７０〜１１０３９を含む、請求項５３または請求項５４に記載のヌクレオチド配列。
【請求項５８】
配列番号４または配列番号２９とハイブリダイズする、単離ヌクレオチド配列。
【請求項５９】
ターゲッティングベクターであって、
（ａ）配列番号２９と相同な少なくとも１７個連続する核酸を含む、第１のヌクレオチド配列、
（ｂ）選択マーカー遺伝子；および
（ｃ）前記第１のヌクレオチド配列と重複しない、配列番号２９と相同な少なくとも１７個連続する核酸を含む、第２のヌクレオチド配列；
を含む、ターゲッティングベクター。
【請求項６０】
前記選択マーカーが、抗生物質耐性遺伝子を含む、請求項５９に記載のターゲッティングベクター。
【請求項６１】
前記第１のヌクレオチド配列が、５’組換えアームに相当する、請求項５９に記載のターゲッティングベクター。
【請求項６２】
前記第２のヌクレオチド配列が、３’組換えアームに相当する、請求項５９に記載のターゲッティングベクター。
【請求項６３】
請求項５９に記載のターゲッティングベクターでトランスフェクトされた、細胞。
【請求項６４】
ブタ重鎖免疫グロブリン遺伝子座の少なくとも１つの対立遺伝子が不活化されている、請求項６３に記載の細胞。
【請求項６５】
請求項６４に記載の細胞を含む、ブタ動物。
【請求項６６】
有蹄動物のκ軽鎖免疫グロブリン遺伝子座またはそのフラグメントを含む、単離ヌクレオチド配列。
【請求項６７】
前記有蹄動物がブタである、請求項６６に記載のヌクレオチド配列。
【請求項６８】
前記有蹄動物のκ軽鎖免疫グロブリン遺伝子座が、少なくとも１つの連結領域、１つの定常領域、および／または１つのエンハンサー領域を含む、請求項６６に記載のヌクレオチド配列。
【請求項６９】
前記ヌクレオチド配列が、少なくとも５つの連結領域、１つの定常領域、および１つのエンハンサー領域を含む、請求項６６に記載のヌクレオチド配列。
【請求項７０】
配列番号３０を含む、請求項６９に記載のヌクレオチド配列。
【請求項７１】
配列番号１２を含む、請求項６９に記載のヌクレオチド配列。
【請求項７２】
前記配列が、配列番号１２または配列番号３０の少なくとも１７個、２０個、２５個、または３０個連続するヌクレオチドを含む、請求項７０または請求項７１に記載のヌクレオチド配列。
【請求項７３】
配列番号１２または配列番号３０とハイブリダイズする、単離ヌクレオチド配列。
【請求項７４】
ターゲッティングベクターであって、
（ａ）配列番号３０と相同な少なくとも１７個連続する核酸を含む、第１のヌクレオチド配列；
（ｂ）選択マーカー遺伝子；および
（ｃ）前記第１のヌクレオチド配列と重複しない、配列番号３０と相同な少なくとも１７個連続する核酸を含む、第２のヌクレオチド配列；
を含む、ターゲッティングベクター。
【請求項７５】
前記選択マーカーが、抗生物質耐性遺伝子を含む、請求項７４に記載のターゲッティングベクター。
【請求項７６】
前記第１のヌクレオチド配列が、５’組換えアームに相当する、請求項７４に記載のターゲッティングベクター。
【請求項７７】
前記第２のヌクレオチド配列が、３’組換えアームに相当する、請求項７４に記載のターゲッティングベクター。
【請求項７８】
請求項７４に記載のターゲッティングベクターでトランスフェクトされた、細胞。
【請求項７９】
κ鎖免疫グロブリン遺伝子座の少なくとも１つの対立遺伝子が不活化されている、請求項７８に記載の細胞。
【請求項８０】
請求項７９に記載の細胞を含む、ブタ動物。
【請求項８１】
有蹄動物のλ軽鎖免疫グロブリン遺伝子座を含む、単離ヌクレオチド配列。
【請求項８２】
前記有蹄動物がブタである、請求項８１に記載のヌクレオチド配列。
【請求項８３】
前記有蹄動物がウシである、請求項８１に記載のヌクレオチド配列。
【請求項８４】
前記有蹄動物のλ軽鎖免疫グロブリン遺伝子座が、Ｊ単位〜Ｃ単位のコンカテマーを含む、請求項８１に記載のヌクレオチド配列。
【請求項８５】
前記有蹄動物のλ軽鎖免疫グロブリン遺伝子座が、例えば、配列番号３１に示す、少なくとも１つの連結領域−定常領域対および／または少なくとも１つの可変領域を含む、請求項８１に記載のヌクレオチド配列。
【請求項８６】
配列番号２８を含む、請求項８２に記載のヌクレオチド配列。
【請求項８７】
配列番号３１を含む、請求項８３に記載のヌクレオチド配列。
【請求項８８】
前記配列が、配列番号２８または配列番号３１の少なくとも１７個、２０個、２５個、または３０個連続するヌクレオチドを含む、請求項８６または請求項８７に記載のヌクレオチド配列。
【請求項８９】
配列番号２８または配列番号３１とハイブリダイズする、単離ヌクレオチド配列。
【請求項９０】
ターゲッティングベクターであって、
（ａ）配列番号２８または配列番号３１と相同な少なくとも１７個連続する核酸を含む、第１のヌクレオチド配列；
（ｂ）選択マーカー遺伝子；および
（ｃ）該第１のヌクレオチド配列と重複しない、配列番号２８または配列番号３１と相同な少なくとも１７個連続する核酸を含む、第２のヌクレオチド配列；
を含む、ターゲッティングベクター。
【請求項９１】
前記選択マーカーが、抗生物質耐性遺伝子を含む、請求項９０に記載のターゲッティングベクター。
【請求項９２】
前記第１のヌクレオチド配列が、５’組換えアームに相当する、請求項９０に記載のターゲッティングベクター。
【請求項９３】
前記第２のヌクレオチド配列が、３’組換えアームに相当する、請求項９０に記載のターゲッティングベクター。
【請求項９４】
請求項９０に記載のターゲッティングベクターでトランスフェクトされた、細胞。
【請求項９５】
λ鎖免疫グロブリン遺伝子座の少なくとも１つの対立遺伝子が不活化された、請求項９４に記載の細胞。
【請求項９６】
請求項９５に記載の細胞を含む、ブタ動物。
【請求項９７】
少なくとも１００ｋｂのＤＮＡを環状化する方法であって、
その後、該ＤＮＡを部位特異的リコンビナーゼによって宿主ゲノムに組み込み得る、
方法。
【請求項９８】
少なくとも１００ｋｂ、２００ｋｂ、３００ｋｂ、４００ｋｂ、５００ｋｂ、１０００ｋｂ、２０００ｋｂ、５０００ｋｂ、１０，０００ｋｂのＤＮＡを環状化し得る、請求項９７に記載の方法。
【請求項９９】
前記ＤＮＡの環状化が、前記ＤＮＡ配列の各末端にて部位特異的リコンビナーゼ標的部位を結合すること、およびその後、該ＤＮＡ配列への部位特異的リコンビナーゼを適用すること、によって行われ得る、請求項９７に記載の方法。
【請求項１００】
前記部位特異的リコンビナーゼ標的部位が、Ｌｏｘである、請求項９７に記載の方法。
【請求項１０１】
人工染色体が、前記ＤＮＡ配列を含む、請求項９７に記載の方法。
【請求項１０２】
前記人工染色体が、酵母人工染色体または哺乳動物人工染色体である、請求項１０１に記載の方法。
【請求項１０３】
前記人工染色体が、ヒト免疫グロブリン遺伝子座またはそのフラグメントをコードするＤＮＡ配列を含む、請求項１０１に記載の方法。
【請求項１０４】
前記ヒト免疫グロブリン遺伝子座またはそのフラグメントが、ヒト第１４染色体、ヒト第２染色体、および／またはヒト第２２染色体を含む、請求項１０３に記載の方法。
【請求項１０５】
内因性免疫グロブリンの少なくとも１つの対立遺伝子の発現を欠くトランスジェニック有蹄動物であって、該免疫グロブリンは、重鎖、κ軽鎖、およびλ軽鎖、またはそれらの任意の組み合わせからなる群から選択される、トランスジェニック有蹄動物。
【請求項１０６】
外因性免疫グロブリンが発現される、請求項１０５に記載のトランスジェニック有蹄動物。
【請求項１０７】
請求項１０６に記載のトランスジェニック有蹄動物を生成するための方法であって、
内因性免疫グロブリンの少なくとも１つの対立遺伝子の発現を欠くトランスジェニック有蹄動物が、外因性免疫グロブリンを発現する有蹄動物と交配させられ、該内因性免疫グロブリンは、重鎖、κ軽鎖、およびλ軽鎖、またはそれらの任意の組み合わせからなる群から選択される、方法。
【請求項１０８】
前記有蹄動物が、ブタである、請求項１０５〜請求項１０７のうちいずれか１項に記載のトランスジェニック有蹄動物。
【請求項１０９】
前記外因性免疫グロブリンが、ヒト免疫グロブリン遺伝子座またはそのフラグメントである、請求項１０６または請求項１０７に記載のトランスジェニック有蹄動物。
【請求項１１０】
人工染色体が、前記ヒト免疫グロブリン遺伝子座またはそのフラグメントを含む、請求項１０９に記載のトランスジェニック有蹄動物。
【請求項１１１】
請求項１０５に記載の有蹄動物に由来する、細胞。
【請求項１１２】
異種抗原の発現を消失させるためのさらなる遺伝子改変をさらに含む、請求項１、請求項１８、請求項１０５、または請求項１０６に記載のトランスジェニック有蹄動物。
【請求項１１３】
前記有蹄動物が、α−１，３−ガラクトシルトランスフェラーゼ遺伝子の少なくとも１つの対立遺伝子の発現を欠く、請求項１１２に記載のトランスジェニック有蹄動物。
【請求項１１４】
前記有蹄動物がブタである、請求項１１２に記載のトランスジェニック有蹄動物。
【図１】
【図２】
【図３】
【図４】
【図５】
【図６】
【図７】
【図２】
【図３】
【図４】
【図５】
【図６】
【図７】
【公表番号】特表２００８−５１７６０８（Ｐ２００８−５１７６０８Ａ）
【公表日】平成２０年５月２９日（２００８．５．２９）
【国際特許分類】
【出願番号】特願２００７−５３８１８７（Ｐ２００７−５３８１８７）
【出願日】平成１７年１０月２４日（２００５．１０．２４）
【国際出願番号】ＰＣＴ／ＵＳ２００５／０３８５８２
【国際公開番号】ＷＯ２００６／０４７６０３
【国際公開日】平成１８年５月４日（２００６．５．４）
【出願人】（５０４３６４３６７）レビビコア， インコーポレイテッド (6)
【Ｆターム（参考）】
【公表日】平成２０年５月２９日（２００８．５．２９）
【国際特許分類】
【出願日】平成１７年１０月２４日（２００５．１０．２４）
【国際出願番号】ＰＣＴ／ＵＳ２００５／０３８５８２
【国際公開番号】ＷＯ２００６／０４７６０３
【国際公開日】平成１８年５月４日（２００６．５．４）
【出願人】（５０４３６４３６７）レビビコア， インコーポレイテッド (6)
【Ｆターム（参考）】
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