関節リウマチに対するヒト型抗ＴＮＦα抗体薬の薬効予測方法、及び薬効予測装置
【課題】関節リウマチに対するヒト型抗ＴＮＦα抗体薬の有効性を、確実性が高く、かつ、簡便に予測すること、及び前記薬を投与した後における関節リウマチの活動性を予測することができ、また、前記薬がより確実に効く症例に薬を投与することで無駄な副作用を回避することができる関節リウマチに対するヒト型抗ＴＮＦα抗体薬の薬効予測方法、及び薬効予測装置の提供。
【解決手段】被検体由来の試料中のＡＤＡＭＴＳ４、及びＡＤＡＭＴＳ５の少なくともいずれかの含有量を測定する工程と、前記ＡＤＡＭＴＳ４、及びＡＤＡＭＴＳ５の少なくともいずれかの含有量を指標として、関節リウマチに対してヒト型抗ＴＮＦα抗体薬が有効か否かを評価する工程と、を含む関節リウマチに対するヒト型抗ＴＮＦα抗体薬の薬効予測方法である。
【解決手段】被検体由来の試料中のＡＤＡＭＴＳ４、及びＡＤＡＭＴＳ５の少なくともいずれかの含有量を測定する工程と、前記ＡＤＡＭＴＳ４、及びＡＤＡＭＴＳ５の少なくともいずれかの含有量を指標として、関節リウマチに対してヒト型抗ＴＮＦα抗体薬が有効か否かを評価する工程と、を含む関節リウマチに対するヒト型抗ＴＮＦα抗体薬の薬効予測方法である。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、被検体由来の試料中のＡＤＡＭＴＳ４、及びＡＤＡＭＴＳ５の少なくともいずれかの含有量を指標とした、関節リウマチに対するヒト型抗ＴＮＦα抗体薬の薬効予測方法、及び薬効予測装置に関する。
【背景技術】
【０００２】
近年、関節リウマチ寛解目的にＴＮＦα（ｔｕｍｏｒ ｎｅｃｒｏｓｉｓ ｆａｃｔｏｒ α）を標的にした生物学的製剤が使用されるようになり、その有効性が認められるようになってきた。アダリムマブ（ａｄａｌｉｍｕｍａｂ（ＡＤＡ））は、完全ヒト型抗ＴＮＦαモノクローナル抗体から成るＴＮＦαをターゲットとする生物学的製剤で、関節リウマチ（ＲＡ）の活動性を抑えることがＤＡＳ（Ｄｉｓｅａｓｅ ａｃｔｉｖｉｔｙ ｓｃｏｒｅ）２８と呼ばれる臨床的指標を用いて既に知られている。また、アダリムマブは、関節リウマチの活動性を抑えるのみならず、関節リウマチに伴う骨破壊も抑制することが報告されている。
【０００３】
しかし、このように顕著な有効性を持ち合わせているにもかかわらず、アダリムマブ無効の関節リウマチ症例も存在する。更に、アダリムマブにはニューモシスティス肺炎や、肺結核などの感染症を惹起しやすい副作用もあるため、投与前にアダリムマブの有効性を予測することで、より確実に効く症例にアダリムマブを投与することができ、無駄な副作用を回避することもできうる。
【０００４】
アダリムマブのような生物学的製剤の有効性予測因子を同定する試みはこれまでにも報告が認められる（非特許文献１参照）。前記報告では、アダリムマブを１２週間投与され、有効であった関節リウマチ患者と無効であった関節リウマチ患者の滑膜における遺伝子発現の相違をＤＮＡマイクロアレイとアルゴリズムとを用いて解析し、４３９遺伝子の組み合わせがアダリムマブ無効と関与することを報告している。
しかしながら、この方法はあくまでも後ろ向き試験であり、アダリムマブ有効性を定量化して表していない。したがって、前向き試験で確認し得た確実なアダリムマブ有効性予測因子は、まだ同定されていないのが現状である。
【０００５】
ＡＤＡＭＴＳ（ａ ｄｉｓｉｎｔｅｇｒｉｎ ａｎｄ ｍｅｔａｌｌｏｐｒｏｔｅｉｎａｓｅ ｗｉｔｈ ｔｈｒｏｍｂｏｓｐｏｎｄｉｎ ｍｏｔｉｆｓ）４、及びＡＤＡＭＴＳ５は、ＡＤＡＭＴＳファミリーに属する軟骨破壊に関与するアグリカナーゼであることが知られている。特に、変形性関節症モデルマウスにおいて、ＡＤＡＭＴＳ５の欠失が軟骨破壊を抑制することが報告されている。
しかしながら、ＡＤＡＭＴＳ４、及びＡＤＡＭＴＳ５の少なくともいずれかの含有量と、関節リウマチに対するヒト型抗ＴＮＦα抗体薬の有効性との相関は知られていない。
【先行技術文献】
【非特許文献】
【０００６】
【非特許文献１】Ｂａｄｏｔ Ｖ， ｅｔ ａｌ． Ａｒｔｈｒｉｔｉｓ Ｒｅｓｅａｒｃｈ Ｔｈｅｒａｐｙ １１： Ｒ５７， ２００９
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００７】
本発明は、前記従来における諸問題を解決し、以下の目的を達成することを課題とする。即ち、本発明は、関節リウマチに対するヒト型抗ＴＮＦα抗体薬の有効性を、確実性が高く、かつ、簡便に予測すること、及び前記薬を投与した後における関節リウマチの活動性を予測することができ、また、前記薬がより確実に効く症例に薬を投与することで無駄な副作用を回避することができる関節リウマチに対するヒト型抗ＴＮＦα抗体薬の薬効予測方法、及び薬効予測装置を提供することを目的とする。
【課題を解決するための手段】
【０００８】
前記課題を解決するため、本発明者らは鋭意検討した結果、以下のような知見を得た。即ち、アダリムマブ投与前の関節リウマチ患者の末梢血中のＡＤＡＭＴＳ４、及びＡＤＡＭＴＳ５の少なくともいずれかの含有量が多いほど、アダリムマブが有効であるという知見である。アダリムマブ投与前の血中のＡＤＡＭＴＳ４、及びＡＤＡＭＴＳ５の少なくともいずれかの含有量によって、アダリムマブの有効性を予測できないかを前向き試験により行った報告は従来には無く、前記知見は、本発明者らによる新たな知見である。
なお、後ろ向き試験とは、過去と現在のデータを扱う試験であり、前向き試験とは、これから生じる現象を観察する試験である。後ろ向き試験ではすでに判明している事項を扱うので研究者によるバイアスが入りやすいのに対して、前向き試験では結果がわかっていないために、バイアスがかかりにくく、より信頼のおける結果が得られる点で優れている。
【０００９】
本発明は、本発明者らの前記知見に基づくものであり、前記課題を解決するための手段としては、以下の通りである。即ち、
＜１＞ 被検体由来の試料中のＡＤＡＭＴＳ４、及びＡＤＡＭＴＳ５の少なくともいずれかの含有量を測定する工程と、
前記ＡＤＡＭＴＳ４、及びＡＤＡＭＴＳ５の少なくともいずれかの含有量を指標として、関節リウマチに対してヒト型抗ＴＮＦα抗体薬が有効か否かを評価する工程と、
を含むことを特徴とする関節リウマチに対するヒト型抗ＴＮＦα抗体薬の薬効予測方法である。
＜２＞ ヒト型抗ＴＮＦα抗体薬が、アダリムマブ（ａｄａｌｉｍｕｍａｂ（ＡＤＡ））である前記＜１＞に記載の関節リウマチに対するヒト型抗ＴＮＦα抗体薬の薬効予測方法である。
＜３＞ 被検体由来の試料中のＡＤＡＭＴＳ４、及びＡＤＡＭＴＳ５の少なくともいずれかの含有量が、ＡＤＡＭＴＳ４のｍＲＮＡ、及びＡＤＡＭＴＳ５のｍＲＮＡの少なくともいずれかの発現量である前記＜１＞から＜２＞のいずれかに記載の関節リウマチに対するヒト型抗ＴＮＦα抗体薬の薬効予測方法である。
＜４＞ ＡＤＡＭＴＳ４のｍＲＮＡ、及びＡＤＡＭＴＳ５のｍＲＮＡの少なくともいずれかの発現量をリアルタイムＰＣＲ法で測定する前記＜３＞に記載の関節リウマチに対するヒト型抗ＴＮＦα抗体薬の薬効予測方法である。
＜５＞ 被検体由来の試料中のＡＤＡＭＴＳ４、及びＡＤＡＭＴＳ５の少なくともいずれかの含有量を測定する手段と、
前記ＡＤＡＭＴＳ４、及びＡＤＡＭＴＳ５の少なくともいずれかの含有量を指標として、関節リウマチに対してヒト型抗ＴＮＦα抗体薬が有効か否かを評価する手段と、
を含むことを特徴とする関節リウマチに対するヒト型抗ＴＮＦα抗体薬の薬効予測装置である。
＜６＞ ヒト型抗ＴＮＦα抗体薬が、アダリムマブ（ａｄａｌｉｍｕｍａｂ（ＡＤＡ））である前記＜５＞に記載の関節リウマチに対するヒト型抗ＴＮＦα抗体薬の薬効予測装置である。
＜７＞ 被検体由来の試料中のＡＤＡＭＴＳ４、及びＡＤＡＭＴＳ５の少なくともいずれかの含有量が、ＡＤＡＭＴＳ４のｍＲＮＡ、及びＡＤＡＭＴＳ５のｍＲＮＡの少なくともいずれかの発現量である前記＜５＞から＜６＞のいずれかに記載の関節リウマチに対するヒト型抗ＴＮＦα抗体薬の薬効予測装置である。
＜８＞ ＡＤＡＭＴＳ４のｍＲＮＡ、及びＡＤＡＭＴＳ５のｍＲＮＡの少なくともいずれかの発現量をリアルタイムＰＣＲ法で測定する前記＜７＞に記載の関節リウマチに対するヒト型抗ＴＮＦα抗体薬の薬効予測装置である。
【発明の効果】
【００１０】
本発明によれば、前記従来における諸問題を解決し、前記目的を達成することができ、関節リウマチに対するヒト型抗ＴＮＦα抗体薬の有効性を、確実性が高く、かつ、簡便に予測すること、及び前記薬を投与した後における関節リウマチの活動性を予測することができ、また、前記薬がより確実に効く症例に薬を投与することで無駄な副作用を回避することができる関節リウマチに対するヒト型抗ＴＮＦα抗体薬の薬効予測方法、及び薬効予測装置を提供することができる。
【図面の簡単な説明】
【００１１】
【図１Ａ】図１Ａは、アダリムマブ投与前のＡＤＡＭＴＳ４のｍＲＮＡの発現量（ＡＤＡＭＴＳ４／β−アクチン）が、０．３×１０−４より小さい低値群、及び０．３×１０−４以上である高値群における、アダリムマブ投与１２週後のＤＡＳ２８（１２ｗ）の値を示すグラフである。
【図１Ｂ】図１Ｂは、アダリムマブ投与前のＡＤＡＭＴＳ５のｍＲＮＡの発現量（ＡＤＡＭＴＳ５／β−アクチン）が、４．０×１０−４より小さい低値群、及び４．０×１０−４以上である高値群における、アダリムマブ投与１２週後のＤＡＳ２８（１２ｗ）の値を示すグラフである。
【図２Ａ】図２Ａは、アダリムマブ投与前のＡＤＡＭＴＳ４のｍＲＮＡの発現量（ＡＤＡＭＴＳ４／β−アクチン）と、アダリムマブ投与１２週後のＤＡＳ２８（１２ｗ）との相関を示すグラフである。
【図２Ｂ】図２Ｂは、アダリムマブ投与前のＡＤＡＭＴＳ５のｍＲＮＡの発現量（ＡＤＡＭＴＳ５／β−アクチン）と、アダリムマブ投与１２週後のＤＡＳ２８（１２ｗ）との相関を示すグラフである。
【発明を実施するための形態】
【００１２】
（関節リウマチに対するヒト型抗ＴＮＦα抗体薬の薬効予測方法、及び薬効予測装置）
本発明の関節リウマチに対するヒト型抗ＴＮＦα抗体薬の薬効予測方法は、被検体由来の試料中のＡＤＡＭＴＳ４、及びＡＤＡＭＴＳ５の少なくともいずれかの含有量を測定する工程（測定工程）と、前記ＡＤＡＭＴＳ４、及びＡＤＡＭＴＳ５の少なくともいずれかの含有量を指標として、関節リウマチに対してヒト型抗ＴＮＦα抗体薬が有効か否かを評価する工程（評価工程）とを少なくとも含み、更に必要に応じて、その他の工程を含んでいる。
本発明の関節リウマチに対するヒト型抗ＴＮＦα抗体薬の薬効予測装置は、被検体由来の試料中のＡＤＡＭＴＳ４、及びＡＤＡＭＴＳ５の少なくともいずれかの含有量を測定する手段（測定手段）と、前記ＡＤＡＭＴＳ４、及びＡＤＡＭＴＳ５の少なくともいずれかの含有量を指標として、関節リウマチに対してヒト型抗ＴＮＦα抗体薬が有効か否かを評価する手段（評価手段）とを少なくとも含み、更に必要に応じて、その他の手段を含んでいる。
【００１３】
＜測定工程、及び測定手段＞
前記測定工程は、被検体由来の試料中のＡＤＡＭＴＳ４、及びＡＤＡＭＴＳ５の少なくともいずれかの含有量を測定する工程である。
前記測定手段は、被検体由来の試料中のＡＤＡＭＴＳ４、及びＡＤＡＭＴＳ５の少なくともいずれかの含有量を測定する手段である。
【００１４】
−被検体由来の試料−
前記被検体由来の試料としては、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができ、例えば、末梢血、関節滑膜、関節液などが挙げられる。これらの中でも、末梢血が、採取が簡便である点で、好ましい。
前記被検体としては、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができ、ヒトなどが挙げられる。
【００１５】
−ＡＤＡＭＴＳ４−
前記ＡＤＡＭＴＳ（ａ ｄｉｓｉｎｔｅｇｒｉｎ ａｎｄ ｍｅｔａｌｌｏｐｒｏｔｅｉｎａｓｅ ｗｉｔｈ ｔｈｒｏｍｂｏｓｐｏｎｄｉｎ ｍｏｔｉｆｓ）４は、ＡＤＡＭＴＳファミリーに属する軟骨破壊に関与するアグリカナーゼであることが知られている。
前記ＡＤＡＭＴＳ４遺伝子の塩基配列は、例えば、ヒトにおいて公知であり、その塩基配列はＧｅｎＢａｎｋ（ＮＣＢＩ）などの公共データベースを通じて容易に入手することができる。例えば、ヒトＡＤＡＭＴＳ４遺伝子の塩基配列は、ＮＣＢＩ ａｃｃｅｓｓｉｏｎ ｎｕｍｂｅｒ ＮＭ＿００５０９９で入手可能である。
【００１６】
−ＡＤＡＭＴＳ５−
前記ＡＤＡＭＴＳ（ａ ｄｉｓｉｎｔｅｇｒｉｎ ａｎｄ ｍｅｔａｌｌｏｐｒｏｔｅｉｎａｓｅ ｗｉｔｈ ｔｈｒｏｍｂｏｓｐｏｎｄｉｎ ｍｏｔｉｆｓ）５は、ＡＤＡＭＴＳファミリーに属する軟骨破壊に関与するアグリカナーゼであることが知られている。
前記ＡＤＡＭＴＳ５遺伝子の塩基配列は、例えば、ヒトにおいて公知であり、その塩基配列はＧｅｎＢａｎｋ（ＮＣＢＩ）などの公共データベースを通じて容易に入手することができる。例えば、ヒトＡＤＡＭＴＳ５遺伝子の塩基配列は、ＮＣＢＩ ａｃｃｅｓｓｉｏｎ ｎｕｍｂｅｒ ＮＭ＿００７０３８で入手可能ある。
【００１７】
−含有量の測定−
前記被検体由来の試料中のＡＤＡＭＴＳ４、及びＡＤＡＭＴＳ５の少なくともいずれかの含有量の測定方法としては、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができ、例えば、ｍＲＮＡの発現量を測定する方法、タンパク質の発現量を測定する方法などが挙げられる。
【００１８】
前記ｍＲＮＡの発現量を測定する方法としては、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができ、例えば、ＰＣＲ法、リアルタイムＰＣＲ法、ＤＮＡアレイ法、ノーザンブロット法などが挙げられる。
前記ｍＲＮＡの発現量を測定する装置としては、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができ、例えば、ＰＣＲ装置、リアルタイムＰＣＲ装置、ＤＮＡアレイ装置、ノーザンブロット装置などが挙げられる。前記装置は、前記測定手段として好適に使用することができる。
【００１９】
前記リアルタイムＰＣＲ法の方法としては、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができ、例えば、検量線を作成し、その検量線からサンプルの定量を行う方法（検量線法）が挙げられる。
前記検量線法に用いる鋳型ＤＮＡコントロールとしては、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができ、例えば、健常人から採取・精製した全ｃＤＮＡや、ＡＤＡＭＴＳ４ ｃＤＮＡを組み込んだプラスミド、ＡＤＡＭＴＳ５ ｃＤＮＡを組み込んだプラスミドなどが挙げられる。
前記リアルタイムＰＣＲ法に用いるプライマーとしては、ＡＤＡＭＴＳ４、及びＡＤＡＭＴＳ５の少なくともいずれかを増幅することができるものであれば、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができる。
前記リアルタイムＰＣＲ法における内在性コントロールとしては、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができ、例えば、β−アクチン、ＧＡＰＤＨ（ｇｌｙｃｅｒａｌｄｅｈｙｄｅ−３−ｐｈｏｓｐｈａｔｅ ｄｅｈｙｄｒｏｇｅｎａｓｅ）などが挙げられる。
【００２０】
＜評価工程、及び評価手段＞
前記評価工程は、前記ＡＤＡＭＴＳ４、及びＡＤＡＭＴＳ５の少なくともいずれかの含有量を指標として、関節リウマチに対してヒト型抗ＴＮＦα抗体薬が有効か否かを評価する工程である。
前記評価手段は、前記ＡＤＡＭＴＳ４、及びＡＤＡＭＴＳ５の少なくともいずれかの含有量を指標として、関節リウマチに対してヒト型抗ＴＮＦα抗体薬が有効か否かを評価する手段である。
【００２１】
−ヒト型抗ＴＮＦα抗体薬−
前記ヒト型抗ＴＮＦα（ｔｕｍｏｒ ｎｅｃｒｏｓｉｓ ｆａｃｔｏｒ α）抗体薬としては、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができるが、アダリムマブ（ａｄａｌｉｍｕｍａｂ（ＡＤＡ））が好適に挙げられる。
【００２２】
−指標−
前記指標としては、ＡＤＡＭＴＳ４、及びＡＤＡＭＴＳ５の少なくともいずれかの含有量を使用する。前記指標は、ＡＤＡＭＴＳ４の含有量、又はＡＤＡＭＴＳ５の含有量を単独で使用してもよいし、両者を併用してもよい。
【００２３】
−評価−
前記関節リウマチに対してヒト型抗ＴＮＦα抗体薬が有効か否かを評価する方法としては、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができ、例えば、ＡＤＡＭＴＳ４、及びＡＤＡＭＴＳ５の少なくともいずれかの含有量が、関節リウマチ患者の中で多い場合には、関節リウマチに対してヒト型抗ＴＮＦα抗体薬が有効であると評価することができる。
具体例としては、前記指標として、ＡＤＡＭＴＳ４を用いた場合（詳細は、後述する実施例１参照）、ＡＤＡＭＴＳ４のｍＲＮＡの発現量（ＡＤＡＭＴＳ４／β−アクチン）が、０．３×１０−４以上の場合に、関節リウマチに対してヒト型抗ＴＮＦα抗体薬が有効であると評価することができる。
また、前記指標として、ＡＤＡＭＴＳ５を用いた場合（詳細は、後述する実施例１参照）、ＡＤＡＭＴＳ５のｍＲＮＡの発現量（ＡＤＡＭＴＳ５／β−アクチン）が、４．０×１０−４以上の場合に、関節リウマチに対してヒト型抗ＴＮＦα抗体薬が有効であると評価することができる。
前記評価を行う装置としては、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができ、例えば、電子計算機（コンピュータ）などが挙げられる。前記装置は、前記評価手段として好適に使用することができる。
【００２４】
また、前記評価においては、ヒト型抗ＴＮＦα抗体薬投与後のＤＡＳ２８を予測することも可能である。
前記ＤＡＳ２８とは、Ｄｉｓｅａｓｅ Ａｃｔｉｖｉｔｙ Ｓｃｏｒｅの略で、関節リウマチの疾患活動性をスコア化しようということでヨーロッパリウマチ学会（ＥＵＬＡＲ）が定めたものであり、Ｆｒａｎｓｅｎ Ｊ， ｅｔ ａｌ．， Ｃｌｉｎ Ｅｘｐ Ｒｈｅｕｍａｔｏｌ ２００５； ２３（Ｓｕｐｐｌ．３９）： Ｓ９３−Ｓ９９に記載されている。
前記ヒト型抗ＴＮＦα抗体薬投与後のＤＡＳ２８を予測する方法としては、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができ、例えば、関節リウマチ患者の末梢血中のＡＤＡＭＴＳ４のｍＲＮＡ、及びＡＤＡＭＴＳ５のｍＲＮＡの少なくともいずれかの発現量（ＡＤＡＭＴＳ４／β−アクチン、ＡＤＡＭＴＳ５／β−アクチン）を、後述する実施例１で示すグラフ（図２Ａ、及び図２Ｂ参照）に当てはめることにより、ヒト型抗ＴＮＦα抗体薬投与後のＤＡＳ２８を予測することができる。
【００２５】
＜その他の工程、及びその他の手段＞
前記その他の工程としては、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができ、例えば、前記ＡＤＡＭＴＳ４、及びＡＤＡＭＴＳ５の少なくともいずれかと、他の遺伝子とを組み合わせて評価する工程などが挙げられる。
前記その他の手段としては、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができ、例えば、前記ＡＤＡＭＴＳ４、及びＡＤＡＭＴＳ５の少なくともいずれかと、他の遺伝子とを組み合わせて評価する手段などが挙げられる。
【００２６】
−他の遺伝子−
前記他の遺伝子としては、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができ、例えば、ＡＤＡＭＴＳ４、及びＡＤＡＭＴＳ５以外のアグリカナーゼをコードする遺伝子、関節リウマチに特異的に発現する遺伝子などが挙げられる。
【実施例】
【００２７】
以下に本発明の実施例について説明するが、本発明は、これらの実施例に何ら限定されるものではない。
【００２８】
（実施例１：ＡＤＡＭＴＳ４、又はＡＤＡＭＴＳ５の含有量を指標とした、関節リウマチに対するアダリムマブ（ａｄａｌｉｍｕｍａｂ（ＡＤＡ））の有効性予測）
平成２０年６月から平成２１年６月までに埼玉医科大学総合医療センター・リウマチ膠原病内科外来を受診した関節リウマチ患者のうち、アダリムマブを投与された患者３３例を対象とした。
【００２９】
＜測定工程＞
−末梢血中のＡＤＡＭＴＳ４のｍＲＮＡの発現量の測定−
アダリムマブ投与前の関節リウマチ患者の末梢血２．５ｍＬを採取し、ＰＡＸｇｅｎｅ ＲＮＡ採血管（登録商標、日本ベクトン・ディッキンソン社製）に刺入後、ＰＡＸｇｅｎｅ Ｂｌｏｏｄ ＲＮＡ Ｋｉｔ（登録商標、ＰｒｅＡｎａｌｙｔｉＸ社製）を用いて全ＲＮＡを抽出した。前記全ＲＮＡを、逆転写酵素を用いて全ｃＤＮＡに変換した。前記全ｃＤＮＡを鋳型ＤＮＡとして、Ｔａｑｍａｎ （登録商標） Ｇｅｎｅ Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ Ａｓｓａｙ （Ａｐｐｌｉｅｄ Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ社製）を用いて、ＡＤＡＭＴＳ４のｍＲＮＡの発現量をリアルタイムＰＣＲ法で測定した。なお、プライマー、及びプローブは、プライマー・プローブセット（ＴａｑＭａｎ Ｇｅｎｅ （登録商標） Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ Ａｓｓａｙ （Ｈｓ００１９２７０８＿ｍ１， Ａｐｐｌｉｅｄ Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ社製）を使用した。
上記により得られたＡＤＡＭＴＳ４のｍＲＮＡの含有量は、β−ａｃｔｉｎ（内在性コントロール）のｍＲＮＡとの相対量で定量化を行った。
なお、β−ａｃｔｉｎのプライマー、及びプローブは、プライマー・プローブセット（Ｐｒｅ−Ｄｅｖｅｌｏｐｅｄ ＴａｑＭａｎ （登録商標） Ａｓｓａｙ Ｒｅａｇｅｎｔｓ（Ｈｕｍａｎ ＡＣＴＢ， ＮＭ＿００１１０１， Ａｐｐｌｉｅｄ Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ社製）を使用した。
【００３０】
−末梢血中のＡＤＡＭＴＳ５のｍＲＮＡの発現量の測定−
アダリムマブ投与前の関節リウマチ患者の末梢血２．５ｍＬを採取し、ＰＡＸｇｅｎｅ ＲＮＡ採血管（登録商標、日本ベクトン・ディッキンソン社製）に刺入後、ＰＡＸｇｅｎｅ Ｂｌｏｏｄ ＲＮＡ Ｋｉｔ（登録商標、ＰｒｅＡｎａｌｙｔｉＸ社製）を用いて全ＲＮＡを抽出した。前記全ＲＮＡを逆転写酵素を用いて全ｃＤＮＡに変換した。前記全ｃＤＮＡを鋳型ＤＮＡとして、Ｔａｑｍａｎ（登録商標） Ｇｅｎｅ Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ Ａｓｓａｙ（Ａｐｐｌｉｅｄ Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ社製）を用いて、ＡＤＡＭＴＳ５のｍＲＮＡの発現量をリアルタイムＰＣＲ法で測定した。なお、プライマー、及びプローブは、プライマー・プローブセット（ＴａｑＭａｎ Ｇｅｎｅ （登録商標） Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ Ａｓｓａｙ （００１９９８４１＿ｍ１， Ａｐｐｌｉｅｄ Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ社製））を使用した。
上記により得られたＡＤＡＭＴＳ５のｍＲＮＡの含有量は、β−ａｃｔｉｎ（内在性コントロール）のｍＲＮＡとの相対量で定量化を行った。
なお、β−ａｃｔｉｎのプライマー、及びプローブは、プライマー・プローブセット（Ｐｒｅ−Ｄｅｖｅｌｏｐｅｄ ＴａｑＭａｎ（登録商標） Ａｓｓａｙ Ｒｅａｇｅｎｔｓ（Ｈｕｍａｎ ＡＣＴＢ， ＮＭ＿００１１０１ ，Ａｐｐｌｉｅｄ Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ社製））を使用した。
【００３１】
＜評価工程＞
関節リウマチ患者の関節リウマチ活動性は、アダリムマブ投与前、及び投与１２週後のＤＡＳ２８［ＤＡＳ２８（０ｗ）、ＤＡＳ２８（１２ｗ）］で評価した。
アダリムマブが有効か否かは、ＤＡＳ２８（１２ｗ）を用いたＥＵＬＡＲ改善基準によって、反応性良好（ｇｏｏｄ ｒｅｓｐｏｎｓｅ）、中等度反応（ｍｏｄｅｒａｔｅ ｒｅｓｐｏｎｓｅ）、反応なし（ｎｏ ｒｅｓｐｏｎｓｅ）とした。
なお、ＥＵＬＡＲ改善基準とは、ヨーロッパリウマチ学会（ＥＵＬＡＲ）が定めたものであり、Ｆｒａｎｓｅｎ Ｊ， ｅｔ ａｌ．， Ｃｌｉｎ Ｅｘｐ Ｒｈｅｕｍａｔｏｌ ２００５； ２３（Ｓｕｐｐｌ．３９）： Ｓ９３−Ｓ９９に記載されている。
【００３２】
投与１２週後におけるＥＵＬＡＲ改善基準に基づくアダリムマブの有効性は、反応性良好が１５例、中等度反応が１１例、反応なしが７例であった。また、寛解例（ＤＡＳ２８（１２ｗ）＜２．６）は、７例であった。
【００３３】
−低値群と高値群との比較１（ＡＤＡＭＴＳ４）−
上記アダリムマブ投与関節リウマチ患者３３例につき、健常人より抽出の全ｃＤＮＡを鋳型ＤＮＡコントロールとして用いた検量線法によるリアルタイムＰＣＲ法で、アダリムマブ投与前のＡＤＡＭＴＳ４のｍＲＮＡの発現量（ＡＤＡＭＴＳ４／β−アクチン）を定量した。前記ＡＤＡＭＴＳ４のｍＲＮＡの発現量（ＡＤＡＭＴＳ４／β−アクチン）が０．３×１０−４より小さい場合を低値群(Ｌｏｗ)、０．３×１０−４以上の場合を高値群(Ｈｉｇｈ)として群分けし、ＤＡＳ２８（１２ｗ）を比較した結果、高値群では、ＤＡＳ２８（１２ｗ）が有意に低かった（図１Ａ参照）。
【００３４】
−低値群と高値群との比較２（ＡＤＡＭＴＳ５）−
上記アダリムマブ投与関節リウマチ患者３３例につき、健常人より抽出の全ｃＤＮＡを鋳型ＤＮＡコントロールとして用いた検量線法によるリアルタイムＰＣＲ法で、アダリムマブ投与前のＡＤＡＭＴＳ５のｍＲＮＡの発現量（ＡＤＡＭＴＳ５／β−アクチン）を定量した。前記ＡＤＡＭＴＳ５のｍＲＮＡの発現量（ＡＤＡＭＴＳ５／β−アクチン）が４．０×１０−４より小さい場合を低値群(Ｌｏｗ)、４．０×１０−４以上の場合を高値群(Ｈｉｇｈ)として群分けし、ＤＡＳ２８（１２ｗ）を比較した結果、高値群では、ＤＡＳ２８（１２ｗ）が有意に低かった（図１Ｂ参照）。
【００３５】
−−ＧＲ群とＮＧＲ群との比較１（ＡＤＡＭＴＳ４）−−
ＡＤＡＭＴＳ４の含有量を指標とし、前記低値群(Ｌｏｗ)、及び前記高値群(Ｈｉｇｈ)について、更にＧＲ群（反応性良好）と、ＮＧＲ群（反応なし＋中等度反応）とした場合の分類を表１に示す。
【表１】
【００３６】
表１の分類をもとに、感度、特異度、陽性予測率、及び陰性予測率を以下の式で算出した。結果を表２に示す。
感度（Ｓｅｎｓｉｔｉｖｉｔｙ）（％）＝Ａ／（Ａ＋Ｃ）×１００
特異度（Ｓｐｅｃｉｆｉｃｉｔｙ）（％）＝Ｄ／（Ｄ＋Ｂ）×１００
陽性予測率（ＰＰＶ）（％）＝Ａ／（Ｂ＋Ａ）×１００
陰性予測率（ＮＰＶ）（％）＝Ｄ／（Ｄ＋Ｃ）×１００
なお、上記式中Ａ〜Ｄは、以下のとおりである。
Ａ：ＡＤＡＭＴＳ４のｍＲＮＡの発現量（ＡＤＡＭＴＳ４／β−アクチン）が高値群であり、ＧＲ群に分類された症例
Ｂ：ＡＤＡＭＴＳ４のｍＲＮＡの発現量（ＡＤＡＭＴＳ４／β−アクチン）が高値群であり、ＮＧＲ群に分類された症例
Ｃ：ＡＤＡＭＴＳ４のｍＲＮＡの発現量（ＡＤＡＭＴＳ４／β−アクチン）が低値群であり、ＧＲ群に分類された症例
Ｄ：ＡＤＡＭＴＳ４のｍＲＮＡの発現量（ＡＤＡＭＴＳ４／β−アクチン）が低値群であり、ＮＧＲ群に分類された症例
【００３７】
【表２】
【００３８】
−−ＧＲ群とＮＧＲ群との比較２（ＡＤＡＭＴＳ５）−−
ＡＤＡＭＴＳ５の含有量を指標とし、前記低値群(Ｌｏｗ)、及び前記高値群(Ｈｉｇｈ)について、更にＧＲ群（反応性良好）と、ＮＧＲ群（反応なし＋中等度反応）とした場合の分類を表３に示す。
【表３】
【００３９】
表３の分類をもとに、感度、特異度、陽性予測率、及び陰性予測率を以下の式で算出した。結果を表４に示す。
感度（Ｓｅｎｓｉｔｉｖｉｔｙ）（％）＝Ｅ／（Ｅ＋Ｇ）×１００
特異度（Ｓｐｅｃｉｆｉｃｉｔｙ）（％）＝Ｈ／（Ｈ＋Ｆ）×１００
陽性予測率（ＰＰＶ）（％）＝Ｅ／（Ｆ＋Ｅ）×１００
陰性予測率（ＮＰＶ）（％）＝Ｈ／（Ｈ＋Ｇ）×１００
なお、上記式中Ｅ〜Ｈは、以下のとおりである。
Ｅ：ＡＤＡＭＴＳ５のｍＲＮＡの発現量（ＡＤＡＭＴＳ５／β−アクチン）が高値群であり、ＧＲ群に分類された症例
Ｆ：ＡＤＡＭＴＳ５のｍＲＮＡの発現量（ＡＤＡＭＴＳ５／β−アクチン）が高値群であり、ＮＧＲ群に分類された症例
Ｇ：ＡＤＡＭＴＳ５のｍＲＮＡの発現量（ＡＤＡＭＴＳ５／β−アクチン）が低値群であり、ＧＲ群に分類された症例
Ｈ：ＡＤＡＭＴＳ５のｍＲＮＡの発現量（ＡＤＡＭＴＳ５／β−アクチン）が低値群であり、ＮＧＲ群に分類された症例
【００４０】
【表４】
【００４１】
表２、及び４の結果から、アダリムマブ投与前のＡＤＡＭＴＳ４のｍＲＮＡの発現量（ＡＤＡＭＴＳ４／β−アクチン）、又は、ＡＤＡＭＴＳ５のｍＲＮＡの発現量（ＡＤＡＭＴＳ５／β−アクチン）が高値群の場合に、ＧＲ群となることを予測する陽性予測率（ＰＰＶ）は、いずれも８５．７％と高く、アダリムマブ投与前のＡＤＡＭＴＳ４、又はＡＤＡＭＴＳ５の含有量を指標として、関節リウマチに対するアダリムマブの薬効を予測することができることが示された。
【００４２】
−−寛解（Ｒｅ）群と非寛解（Ｎｒｅ）群との比較１（ＡＤＡＭＴＳ４）−−
ＡＤＡＭＴＳ４の含有量を指標とし、前記低値群(Ｌｏｗ)、及び前記高値群(Ｈｉｇｈ)について、更にＲｅ（ｒｅｍｉｓｓｉｏｎ：寛解）群と、Ｎｒｅ（ｎｏｎ−ｒｅｍｉｓｓｉｏｎ：非寛解）群とした場合の分類を表５に示す。
【表５】
【００４３】
表５の分類をもとに、感度、特異度、陽性予測率、及び陰性予測率を以下の式で算出した。結果を表６に示す。
感度（Ｓｅｎｓｉｔｉｖｉｔｙ）（％）＝Ｉ／（Ｉ＋Ｋ）×１００
特異度（Ｓｐｅｃｉｆｉｃｉｔｙ）（％）＝Ｌ／（Ｌ＋Ｊ）×１００
陽性予測率（ＰＰＶ）（％）＝Ｉ／（Ｊ＋Ｉ）×１００
陰性予測率（ＮＰＶ）（％）＝Ｌ／（Ｌ＋Ｋ）×１００
なお、上記式中Ｉ〜Ｌは、以下のとおりである。
Ｉ：ＡＤＡＭＴＳ４のｍＲＮＡの発現量（ＡＤＡＭＴＳ４／β−アクチン）が高値群であり、寛解群に分類された症例
Ｊ：ＡＤＡＭＴＳ４のｍＲＮＡの発現量（ＡＤＡＭＴＳ４／β−アクチン）が高値群であり、非寛解群に分類された症例
Ｋ：ＡＤＡＭＴＳ４のｍＲＮＡの発現量（ＡＤＡＭＴＳ４／β−アクチン）が低値群であり、寛解群に分類された症例
Ｌ：ＡＤＡＭＴＳ４のｍＲＮＡの発現量（ＡＤＡＭＴＳ４／β−アクチン）が低値群であり、非寛解群に分類された症例
【００４４】
【表６】
【００４５】
−−寛解（Ｒｅ）群と非寛解（Ｎｒｅ）群との比較２（ＡＤＡＭＴＳ５）−−
ＡＤＡＭＴＳ５の含有量を指標とし、前記低値群(Ｌｏｗ)、及び前記高値群(Ｈｉｇｈ)について、更にＲｅ（ｒｅｍｉｓｓｉｏｎ：寛解）群と、Ｎｒｅ（ｎｏｎ−ｒｅｍｉｓｓｉｏｎ：非寛解）群とした場合の分類を表７に示す。
【表７】
【００４６】
表７の分類をもとに、感度、特異度、陽性予測率、及び陰性予測率を以下の式で算出した。結果を表８に示す。
感度（Ｓｅｎｓｉｔｉｖｉｔｙ）（％）＝Ｍ／（Ｍ＋Ｏ）×１００
特異度（Ｓｐｅｃｉｆｉｃｉｔｙ）（％）＝Ｐ／（Ｐ＋Ｎ）×１００
陽性予測率（ＰＰＶ）（％）＝Ｍ／（Ｎ＋Ｍ）×１００
陰性予測率（ＮＰＶ）（％）＝Ｐ／（Ｐ＋Ｏ）×１００
なお、上記式中Ｍ〜Ｐは、以下のとおりである。
Ｍ：ＡＤＡＭＴＳ５のｍＲＮＡの発現量（ＡＤＡＭＴＳ５／β−アクチン）が高値群であり、寛解群に分類された症例
Ｎ：ＡＤＡＭＴＳ５のｍＲＮＡの発現量（ＡＤＡＭＴＳ５／β−アクチン）が高値群であり、非寛解群に分類された症例
Ｏ：ＡＤＡＭＴＳ５のｍＲＮＡの発現量（ＡＤＡＭＴＳ５／β−アクチン）が低値群であり、寛解群に分類された症例
Ｐ：ＡＤＡＭＴＳ５のｍＲＮＡの発現量（ＡＤＡＭＴＳ５／β−アクチン）が低値群であり、非寛解群に分類された症例
【００４７】
【表８】
【００４８】
表６、及び８の結果から、アダリムマブ投与前のＡＤＡＭＴＳ４のｍＲＮＡの発現量（ＡＤＡＭＴＳ４／β−アクチン）、又は、ＡＤＡＭＴＳ５のｍＲＮＡの発現量（ＡＤＡＭＴＳ５／β−アクチン）が高値群の場合に、寛解を予測する陽性予測率（ＰＰＶ）は、それぞれ、５７．１％（ＡＤＡＭＴＳ４）、７１．４％（ＡＤＡＭＴＳ５）と高かった。
また、アダリムマブ投与前のＡＤＡＭＴＳ４のｍＲＮＡの発現量（ＡＤＡＭＴＳ４／β−アクチン）、又は、ＡＤＡＭＴＳ５のｍＲＮＡの発現量（ＡＤＡＭＴＳ５／β−アクチン）が低値群の場合に、寛解を否定する（非寛解となる）陰性予測率（ＮＰＶ）は、それぞれ、８８．５％（ＡＤＡＭＴＳ４）、９２．３％（ＡＤＡＭＴＳ５）と非常に高かった。
以上より、アダリムマブ投与前のＡＤＡＭＴＳ４、又はＡＤＡＭＴＳ５の含有量を指標として、寛解をも予測することができることが示された。
【００４９】
−アダリムマブ投与後のＤＡＳ２８の予測１（ＡＤＡＭＴＳ４）−
アダリムマブ投与前の末梢血中のＡＤＡＭＴＳ４のｍＲＮＡの発現量（ＡＤＡＭＴＳ４／β−アクチン）と、アダリムマブ投与１２週後のＤＡＳ２８（１２ｗ）との相関を検討した結果を図２Ａに示す。
図２Ａに示されるように、アダリムマブ投与前のＡＤＡＭＴＳ４のｍＲＮＡの発現量（ＡＤＡＭＴＳ４／β−アクチン）と、アダリムマブ投与１２週後のＤＡＳ２８（１２ｗ）との間に負の相関（ｒ＝−０．３７０）が認められた。
このことは即ち、被検体由来の試料中のアダリムマブ投与前のＡＤＡＭＴＳ４の含有量が多いほど、関節リウマチに対するヒト型抗ＴＮＦα抗体薬が有効であること、及び被検体由来の試料中のアダリムマブ投与前のＡＤＡＭＴＳ４の含有量によって、ヒト型抗ＴＮＦα抗体薬投与１２週後におけるアダリムマブ有効性を定量化して推測できることを示している。
【００５０】
−アダリムマブ投与後のＤＡＳ２８の予測２（ＡＤＡＭＴＳ５）−
アダリムマブ投与前の末梢血中のＡＤＡＭＴＳ５のｍＲＮＡの発現量（ＡＤＡＭＴＳ５／β−アクチン）と、アダリムマブ投与１２週後のＤＡＳ２８（１２ｗ）との相関を検討した結果を図２Ｂに示す。
図２Ｂに示されるように、アダリムマブ投与前のＡＤＡＭＴＳ５のｍＲＮＡの発現量（ＡＤＡＭＴＳ５／β−アクチン）と、アダリムマブ投与１２週後のＤＡＳ２８（１２ｗ）との間に負の相関（ｒ＝−０．４７６）が認められた。
このことは即ち、被検体由来の試料中のアダリムマブ投与前のＡＤＡＭＴＳ５の含有量が多いほど、関節リウマチに対するヒト型抗ＴＮＦα抗体薬が有効であること、及び被検体由来の試料中のアダリムマブ投与前のＡＤＡＭＴＳ５の含有量によって、ヒト型抗ＴＮＦα抗体薬投与１２週後におけるアダリムマブ有効性を定量化して推測できることを示している。
【産業上の利用可能性】
【００５１】
本発明の関節リウマチに対するヒト型抗ＴＮＦα抗体薬の薬効予測方法は、前記薬投与前のワンポイントにおけるＡＤＡＭＴＳ４、及びＡＤＡＭＴＳ５の少なくともいずれかの含有量によって、確実性が高く、かつ、簡便に予測すること、及び前記薬を投与した後における関節リウマチの活動性を予測することができ、また、前記薬がより確実に効く症例に薬を投与することで無駄な副作用を回避することができるので、医学的診断、及び治療の分野において、好適に利用できる。
本発明の関節リウマチに対するヒト型抗ＴＮＦα抗体薬の薬効予測装置は、前記薬投与前のワンポイントにおけるＡＤＡＭＴＳ４、及びＡＤＡＭＴＳ５の少なくともいずれかの含有量によって、確実性が高く、かつ、簡便に予測すること、及び前記薬を投与した後における関節リウマチの活動性を予測することができ、また、前記薬がより確実に効く症例に薬を投与することで無駄な副作用を回避することができるので、医学的診断、及び治療の分野において、好適に利用できる。
【技術分野】
【０００１】
本発明は、被検体由来の試料中のＡＤＡＭＴＳ４、及びＡＤＡＭＴＳ５の少なくともいずれかの含有量を指標とした、関節リウマチに対するヒト型抗ＴＮＦα抗体薬の薬効予測方法、及び薬効予測装置に関する。
【背景技術】
【０００２】
近年、関節リウマチ寛解目的にＴＮＦα（ｔｕｍｏｒ ｎｅｃｒｏｓｉｓ ｆａｃｔｏｒ α）を標的にした生物学的製剤が使用されるようになり、その有効性が認められるようになってきた。アダリムマブ（ａｄａｌｉｍｕｍａｂ（ＡＤＡ））は、完全ヒト型抗ＴＮＦαモノクローナル抗体から成るＴＮＦαをターゲットとする生物学的製剤で、関節リウマチ（ＲＡ）の活動性を抑えることがＤＡＳ（Ｄｉｓｅａｓｅ ａｃｔｉｖｉｔｙ ｓｃｏｒｅ）２８と呼ばれる臨床的指標を用いて既に知られている。また、アダリムマブは、関節リウマチの活動性を抑えるのみならず、関節リウマチに伴う骨破壊も抑制することが報告されている。
【０００３】
しかし、このように顕著な有効性を持ち合わせているにもかかわらず、アダリムマブ無効の関節リウマチ症例も存在する。更に、アダリムマブにはニューモシスティス肺炎や、肺結核などの感染症を惹起しやすい副作用もあるため、投与前にアダリムマブの有効性を予測することで、より確実に効く症例にアダリムマブを投与することができ、無駄な副作用を回避することもできうる。
【０００４】
アダリムマブのような生物学的製剤の有効性予測因子を同定する試みはこれまでにも報告が認められる（非特許文献１参照）。前記報告では、アダリムマブを１２週間投与され、有効であった関節リウマチ患者と無効であった関節リウマチ患者の滑膜における遺伝子発現の相違をＤＮＡマイクロアレイとアルゴリズムとを用いて解析し、４３９遺伝子の組み合わせがアダリムマブ無効と関与することを報告している。
しかしながら、この方法はあくまでも後ろ向き試験であり、アダリムマブ有効性を定量化して表していない。したがって、前向き試験で確認し得た確実なアダリムマブ有効性予測因子は、まだ同定されていないのが現状である。
【０００５】
ＡＤＡＭＴＳ（ａ ｄｉｓｉｎｔｅｇｒｉｎ ａｎｄ ｍｅｔａｌｌｏｐｒｏｔｅｉｎａｓｅ ｗｉｔｈ ｔｈｒｏｍｂｏｓｐｏｎｄｉｎ ｍｏｔｉｆｓ）４、及びＡＤＡＭＴＳ５は、ＡＤＡＭＴＳファミリーに属する軟骨破壊に関与するアグリカナーゼであることが知られている。特に、変形性関節症モデルマウスにおいて、ＡＤＡＭＴＳ５の欠失が軟骨破壊を抑制することが報告されている。
しかしながら、ＡＤＡＭＴＳ４、及びＡＤＡＭＴＳ５の少なくともいずれかの含有量と、関節リウマチに対するヒト型抗ＴＮＦα抗体薬の有効性との相関は知られていない。
【先行技術文献】
【非特許文献】
【０００６】
【非特許文献１】Ｂａｄｏｔ Ｖ， ｅｔ ａｌ． Ａｒｔｈｒｉｔｉｓ Ｒｅｓｅａｒｃｈ Ｔｈｅｒａｐｙ １１： Ｒ５７， ２００９
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００７】
本発明は、前記従来における諸問題を解決し、以下の目的を達成することを課題とする。即ち、本発明は、関節リウマチに対するヒト型抗ＴＮＦα抗体薬の有効性を、確実性が高く、かつ、簡便に予測すること、及び前記薬を投与した後における関節リウマチの活動性を予測することができ、また、前記薬がより確実に効く症例に薬を投与することで無駄な副作用を回避することができる関節リウマチに対するヒト型抗ＴＮＦα抗体薬の薬効予測方法、及び薬効予測装置を提供することを目的とする。
【課題を解決するための手段】
【０００８】
前記課題を解決するため、本発明者らは鋭意検討した結果、以下のような知見を得た。即ち、アダリムマブ投与前の関節リウマチ患者の末梢血中のＡＤＡＭＴＳ４、及びＡＤＡＭＴＳ５の少なくともいずれかの含有量が多いほど、アダリムマブが有効であるという知見である。アダリムマブ投与前の血中のＡＤＡＭＴＳ４、及びＡＤＡＭＴＳ５の少なくともいずれかの含有量によって、アダリムマブの有効性を予測できないかを前向き試験により行った報告は従来には無く、前記知見は、本発明者らによる新たな知見である。
なお、後ろ向き試験とは、過去と現在のデータを扱う試験であり、前向き試験とは、これから生じる現象を観察する試験である。後ろ向き試験ではすでに判明している事項を扱うので研究者によるバイアスが入りやすいのに対して、前向き試験では結果がわかっていないために、バイアスがかかりにくく、より信頼のおける結果が得られる点で優れている。
【０００９】
本発明は、本発明者らの前記知見に基づくものであり、前記課題を解決するための手段としては、以下の通りである。即ち、
＜１＞ 被検体由来の試料中のＡＤＡＭＴＳ４、及びＡＤＡＭＴＳ５の少なくともいずれかの含有量を測定する工程と、
前記ＡＤＡＭＴＳ４、及びＡＤＡＭＴＳ５の少なくともいずれかの含有量を指標として、関節リウマチに対してヒト型抗ＴＮＦα抗体薬が有効か否かを評価する工程と、
を含むことを特徴とする関節リウマチに対するヒト型抗ＴＮＦα抗体薬の薬効予測方法である。
＜２＞ ヒト型抗ＴＮＦα抗体薬が、アダリムマブ（ａｄａｌｉｍｕｍａｂ（ＡＤＡ））である前記＜１＞に記載の関節リウマチに対するヒト型抗ＴＮＦα抗体薬の薬効予測方法である。
＜３＞ 被検体由来の試料中のＡＤＡＭＴＳ４、及びＡＤＡＭＴＳ５の少なくともいずれかの含有量が、ＡＤＡＭＴＳ４のｍＲＮＡ、及びＡＤＡＭＴＳ５のｍＲＮＡの少なくともいずれかの発現量である前記＜１＞から＜２＞のいずれかに記載の関節リウマチに対するヒト型抗ＴＮＦα抗体薬の薬効予測方法である。
＜４＞ ＡＤＡＭＴＳ４のｍＲＮＡ、及びＡＤＡＭＴＳ５のｍＲＮＡの少なくともいずれかの発現量をリアルタイムＰＣＲ法で測定する前記＜３＞に記載の関節リウマチに対するヒト型抗ＴＮＦα抗体薬の薬効予測方法である。
＜５＞ 被検体由来の試料中のＡＤＡＭＴＳ４、及びＡＤＡＭＴＳ５の少なくともいずれかの含有量を測定する手段と、
前記ＡＤＡＭＴＳ４、及びＡＤＡＭＴＳ５の少なくともいずれかの含有量を指標として、関節リウマチに対してヒト型抗ＴＮＦα抗体薬が有効か否かを評価する手段と、
を含むことを特徴とする関節リウマチに対するヒト型抗ＴＮＦα抗体薬の薬効予測装置である。
＜６＞ ヒト型抗ＴＮＦα抗体薬が、アダリムマブ（ａｄａｌｉｍｕｍａｂ（ＡＤＡ））である前記＜５＞に記載の関節リウマチに対するヒト型抗ＴＮＦα抗体薬の薬効予測装置である。
＜７＞ 被検体由来の試料中のＡＤＡＭＴＳ４、及びＡＤＡＭＴＳ５の少なくともいずれかの含有量が、ＡＤＡＭＴＳ４のｍＲＮＡ、及びＡＤＡＭＴＳ５のｍＲＮＡの少なくともいずれかの発現量である前記＜５＞から＜６＞のいずれかに記載の関節リウマチに対するヒト型抗ＴＮＦα抗体薬の薬効予測装置である。
＜８＞ ＡＤＡＭＴＳ４のｍＲＮＡ、及びＡＤＡＭＴＳ５のｍＲＮＡの少なくともいずれかの発現量をリアルタイムＰＣＲ法で測定する前記＜７＞に記載の関節リウマチに対するヒト型抗ＴＮＦα抗体薬の薬効予測装置である。
【発明の効果】
【００１０】
本発明によれば、前記従来における諸問題を解決し、前記目的を達成することができ、関節リウマチに対するヒト型抗ＴＮＦα抗体薬の有効性を、確実性が高く、かつ、簡便に予測すること、及び前記薬を投与した後における関節リウマチの活動性を予測することができ、また、前記薬がより確実に効く症例に薬を投与することで無駄な副作用を回避することができる関節リウマチに対するヒト型抗ＴＮＦα抗体薬の薬効予測方法、及び薬効予測装置を提供することができる。
【図面の簡単な説明】
【００１１】
【図１Ａ】図１Ａは、アダリムマブ投与前のＡＤＡＭＴＳ４のｍＲＮＡの発現量（ＡＤＡＭＴＳ４／β−アクチン）が、０．３×１０−４より小さい低値群、及び０．３×１０−４以上である高値群における、アダリムマブ投与１２週後のＤＡＳ２８（１２ｗ）の値を示すグラフである。
【図１Ｂ】図１Ｂは、アダリムマブ投与前のＡＤＡＭＴＳ５のｍＲＮＡの発現量（ＡＤＡＭＴＳ５／β−アクチン）が、４．０×１０−４より小さい低値群、及び４．０×１０−４以上である高値群における、アダリムマブ投与１２週後のＤＡＳ２８（１２ｗ）の値を示すグラフである。
【図２Ａ】図２Ａは、アダリムマブ投与前のＡＤＡＭＴＳ４のｍＲＮＡの発現量（ＡＤＡＭＴＳ４／β−アクチン）と、アダリムマブ投与１２週後のＤＡＳ２８（１２ｗ）との相関を示すグラフである。
【図２Ｂ】図２Ｂは、アダリムマブ投与前のＡＤＡＭＴＳ５のｍＲＮＡの発現量（ＡＤＡＭＴＳ５／β−アクチン）と、アダリムマブ投与１２週後のＤＡＳ２８（１２ｗ）との相関を示すグラフである。
【発明を実施するための形態】
【００１２】
（関節リウマチに対するヒト型抗ＴＮＦα抗体薬の薬効予測方法、及び薬効予測装置）
本発明の関節リウマチに対するヒト型抗ＴＮＦα抗体薬の薬効予測方法は、被検体由来の試料中のＡＤＡＭＴＳ４、及びＡＤＡＭＴＳ５の少なくともいずれかの含有量を測定する工程（測定工程）と、前記ＡＤＡＭＴＳ４、及びＡＤＡＭＴＳ５の少なくともいずれかの含有量を指標として、関節リウマチに対してヒト型抗ＴＮＦα抗体薬が有効か否かを評価する工程（評価工程）とを少なくとも含み、更に必要に応じて、その他の工程を含んでいる。
本発明の関節リウマチに対するヒト型抗ＴＮＦα抗体薬の薬効予測装置は、被検体由来の試料中のＡＤＡＭＴＳ４、及びＡＤＡＭＴＳ５の少なくともいずれかの含有量を測定する手段（測定手段）と、前記ＡＤＡＭＴＳ４、及びＡＤＡＭＴＳ５の少なくともいずれかの含有量を指標として、関節リウマチに対してヒト型抗ＴＮＦα抗体薬が有効か否かを評価する手段（評価手段）とを少なくとも含み、更に必要に応じて、その他の手段を含んでいる。
【００１３】
＜測定工程、及び測定手段＞
前記測定工程は、被検体由来の試料中のＡＤＡＭＴＳ４、及びＡＤＡＭＴＳ５の少なくともいずれかの含有量を測定する工程である。
前記測定手段は、被検体由来の試料中のＡＤＡＭＴＳ４、及びＡＤＡＭＴＳ５の少なくともいずれかの含有量を測定する手段である。
【００１４】
−被検体由来の試料−
前記被検体由来の試料としては、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができ、例えば、末梢血、関節滑膜、関節液などが挙げられる。これらの中でも、末梢血が、採取が簡便である点で、好ましい。
前記被検体としては、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができ、ヒトなどが挙げられる。
【００１５】
−ＡＤＡＭＴＳ４−
前記ＡＤＡＭＴＳ（ａ ｄｉｓｉｎｔｅｇｒｉｎ ａｎｄ ｍｅｔａｌｌｏｐｒｏｔｅｉｎａｓｅ ｗｉｔｈ ｔｈｒｏｍｂｏｓｐｏｎｄｉｎ ｍｏｔｉｆｓ）４は、ＡＤＡＭＴＳファミリーに属する軟骨破壊に関与するアグリカナーゼであることが知られている。
前記ＡＤＡＭＴＳ４遺伝子の塩基配列は、例えば、ヒトにおいて公知であり、その塩基配列はＧｅｎＢａｎｋ（ＮＣＢＩ）などの公共データベースを通じて容易に入手することができる。例えば、ヒトＡＤＡＭＴＳ４遺伝子の塩基配列は、ＮＣＢＩ ａｃｃｅｓｓｉｏｎ ｎｕｍｂｅｒ ＮＭ＿００５０９９で入手可能である。
【００１６】
−ＡＤＡＭＴＳ５−
前記ＡＤＡＭＴＳ（ａ ｄｉｓｉｎｔｅｇｒｉｎ ａｎｄ ｍｅｔａｌｌｏｐｒｏｔｅｉｎａｓｅ ｗｉｔｈ ｔｈｒｏｍｂｏｓｐｏｎｄｉｎ ｍｏｔｉｆｓ）５は、ＡＤＡＭＴＳファミリーに属する軟骨破壊に関与するアグリカナーゼであることが知られている。
前記ＡＤＡＭＴＳ５遺伝子の塩基配列は、例えば、ヒトにおいて公知であり、その塩基配列はＧｅｎＢａｎｋ（ＮＣＢＩ）などの公共データベースを通じて容易に入手することができる。例えば、ヒトＡＤＡＭＴＳ５遺伝子の塩基配列は、ＮＣＢＩ ａｃｃｅｓｓｉｏｎ ｎｕｍｂｅｒ ＮＭ＿００７０３８で入手可能ある。
【００１７】
−含有量の測定−
前記被検体由来の試料中のＡＤＡＭＴＳ４、及びＡＤＡＭＴＳ５の少なくともいずれかの含有量の測定方法としては、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができ、例えば、ｍＲＮＡの発現量を測定する方法、タンパク質の発現量を測定する方法などが挙げられる。
【００１８】
前記ｍＲＮＡの発現量を測定する方法としては、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができ、例えば、ＰＣＲ法、リアルタイムＰＣＲ法、ＤＮＡアレイ法、ノーザンブロット法などが挙げられる。
前記ｍＲＮＡの発現量を測定する装置としては、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができ、例えば、ＰＣＲ装置、リアルタイムＰＣＲ装置、ＤＮＡアレイ装置、ノーザンブロット装置などが挙げられる。前記装置は、前記測定手段として好適に使用することができる。
【００１９】
前記リアルタイムＰＣＲ法の方法としては、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができ、例えば、検量線を作成し、その検量線からサンプルの定量を行う方法（検量線法）が挙げられる。
前記検量線法に用いる鋳型ＤＮＡコントロールとしては、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができ、例えば、健常人から採取・精製した全ｃＤＮＡや、ＡＤＡＭＴＳ４ ｃＤＮＡを組み込んだプラスミド、ＡＤＡＭＴＳ５ ｃＤＮＡを組み込んだプラスミドなどが挙げられる。
前記リアルタイムＰＣＲ法に用いるプライマーとしては、ＡＤＡＭＴＳ４、及びＡＤＡＭＴＳ５の少なくともいずれかを増幅することができるものであれば、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができる。
前記リアルタイムＰＣＲ法における内在性コントロールとしては、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができ、例えば、β−アクチン、ＧＡＰＤＨ（ｇｌｙｃｅｒａｌｄｅｈｙｄｅ−３−ｐｈｏｓｐｈａｔｅ ｄｅｈｙｄｒｏｇｅｎａｓｅ）などが挙げられる。
【００２０】
＜評価工程、及び評価手段＞
前記評価工程は、前記ＡＤＡＭＴＳ４、及びＡＤＡＭＴＳ５の少なくともいずれかの含有量を指標として、関節リウマチに対してヒト型抗ＴＮＦα抗体薬が有効か否かを評価する工程である。
前記評価手段は、前記ＡＤＡＭＴＳ４、及びＡＤＡＭＴＳ５の少なくともいずれかの含有量を指標として、関節リウマチに対してヒト型抗ＴＮＦα抗体薬が有効か否かを評価する手段である。
【００２１】
−ヒト型抗ＴＮＦα抗体薬−
前記ヒト型抗ＴＮＦα（ｔｕｍｏｒ ｎｅｃｒｏｓｉｓ ｆａｃｔｏｒ α）抗体薬としては、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができるが、アダリムマブ（ａｄａｌｉｍｕｍａｂ（ＡＤＡ））が好適に挙げられる。
【００２２】
−指標−
前記指標としては、ＡＤＡＭＴＳ４、及びＡＤＡＭＴＳ５の少なくともいずれかの含有量を使用する。前記指標は、ＡＤＡＭＴＳ４の含有量、又はＡＤＡＭＴＳ５の含有量を単独で使用してもよいし、両者を併用してもよい。
【００２３】
−評価−
前記関節リウマチに対してヒト型抗ＴＮＦα抗体薬が有効か否かを評価する方法としては、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができ、例えば、ＡＤＡＭＴＳ４、及びＡＤＡＭＴＳ５の少なくともいずれかの含有量が、関節リウマチ患者の中で多い場合には、関節リウマチに対してヒト型抗ＴＮＦα抗体薬が有効であると評価することができる。
具体例としては、前記指標として、ＡＤＡＭＴＳ４を用いた場合（詳細は、後述する実施例１参照）、ＡＤＡＭＴＳ４のｍＲＮＡの発現量（ＡＤＡＭＴＳ４／β−アクチン）が、０．３×１０−４以上の場合に、関節リウマチに対してヒト型抗ＴＮＦα抗体薬が有効であると評価することができる。
また、前記指標として、ＡＤＡＭＴＳ５を用いた場合（詳細は、後述する実施例１参照）、ＡＤＡＭＴＳ５のｍＲＮＡの発現量（ＡＤＡＭＴＳ５／β−アクチン）が、４．０×１０−４以上の場合に、関節リウマチに対してヒト型抗ＴＮＦα抗体薬が有効であると評価することができる。
前記評価を行う装置としては、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができ、例えば、電子計算機（コンピュータ）などが挙げられる。前記装置は、前記評価手段として好適に使用することができる。
【００２４】
また、前記評価においては、ヒト型抗ＴＮＦα抗体薬投与後のＤＡＳ２８を予測することも可能である。
前記ＤＡＳ２８とは、Ｄｉｓｅａｓｅ Ａｃｔｉｖｉｔｙ Ｓｃｏｒｅの略で、関節リウマチの疾患活動性をスコア化しようということでヨーロッパリウマチ学会（ＥＵＬＡＲ）が定めたものであり、Ｆｒａｎｓｅｎ Ｊ， ｅｔ ａｌ．， Ｃｌｉｎ Ｅｘｐ Ｒｈｅｕｍａｔｏｌ ２００５； ２３（Ｓｕｐｐｌ．３９）： Ｓ９３−Ｓ９９に記載されている。
前記ヒト型抗ＴＮＦα抗体薬投与後のＤＡＳ２８を予測する方法としては、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができ、例えば、関節リウマチ患者の末梢血中のＡＤＡＭＴＳ４のｍＲＮＡ、及びＡＤＡＭＴＳ５のｍＲＮＡの少なくともいずれかの発現量（ＡＤＡＭＴＳ４／β−アクチン、ＡＤＡＭＴＳ５／β−アクチン）を、後述する実施例１で示すグラフ（図２Ａ、及び図２Ｂ参照）に当てはめることにより、ヒト型抗ＴＮＦα抗体薬投与後のＤＡＳ２８を予測することができる。
【００２５】
＜その他の工程、及びその他の手段＞
前記その他の工程としては、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができ、例えば、前記ＡＤＡＭＴＳ４、及びＡＤＡＭＴＳ５の少なくともいずれかと、他の遺伝子とを組み合わせて評価する工程などが挙げられる。
前記その他の手段としては、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができ、例えば、前記ＡＤＡＭＴＳ４、及びＡＤＡＭＴＳ５の少なくともいずれかと、他の遺伝子とを組み合わせて評価する手段などが挙げられる。
【００２６】
−他の遺伝子−
前記他の遺伝子としては、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができ、例えば、ＡＤＡＭＴＳ４、及びＡＤＡＭＴＳ５以外のアグリカナーゼをコードする遺伝子、関節リウマチに特異的に発現する遺伝子などが挙げられる。
【実施例】
【００２７】
以下に本発明の実施例について説明するが、本発明は、これらの実施例に何ら限定されるものではない。
【００２８】
（実施例１：ＡＤＡＭＴＳ４、又はＡＤＡＭＴＳ５の含有量を指標とした、関節リウマチに対するアダリムマブ（ａｄａｌｉｍｕｍａｂ（ＡＤＡ））の有効性予測）
平成２０年６月から平成２１年６月までに埼玉医科大学総合医療センター・リウマチ膠原病内科外来を受診した関節リウマチ患者のうち、アダリムマブを投与された患者３３例を対象とした。
【００２９】
＜測定工程＞
−末梢血中のＡＤＡＭＴＳ４のｍＲＮＡの発現量の測定−
アダリムマブ投与前の関節リウマチ患者の末梢血２．５ｍＬを採取し、ＰＡＸｇｅｎｅ ＲＮＡ採血管（登録商標、日本ベクトン・ディッキンソン社製）に刺入後、ＰＡＸｇｅｎｅ Ｂｌｏｏｄ ＲＮＡ Ｋｉｔ（登録商標、ＰｒｅＡｎａｌｙｔｉＸ社製）を用いて全ＲＮＡを抽出した。前記全ＲＮＡを、逆転写酵素を用いて全ｃＤＮＡに変換した。前記全ｃＤＮＡを鋳型ＤＮＡとして、Ｔａｑｍａｎ （登録商標） Ｇｅｎｅ Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ Ａｓｓａｙ （Ａｐｐｌｉｅｄ Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ社製）を用いて、ＡＤＡＭＴＳ４のｍＲＮＡの発現量をリアルタイムＰＣＲ法で測定した。なお、プライマー、及びプローブは、プライマー・プローブセット（ＴａｑＭａｎ Ｇｅｎｅ （登録商標） Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ Ａｓｓａｙ （Ｈｓ００１９２７０８＿ｍ１， Ａｐｐｌｉｅｄ Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ社製）を使用した。
上記により得られたＡＤＡＭＴＳ４のｍＲＮＡの含有量は、β−ａｃｔｉｎ（内在性コントロール）のｍＲＮＡとの相対量で定量化を行った。
なお、β−ａｃｔｉｎのプライマー、及びプローブは、プライマー・プローブセット（Ｐｒｅ−Ｄｅｖｅｌｏｐｅｄ ＴａｑＭａｎ （登録商標） Ａｓｓａｙ Ｒｅａｇｅｎｔｓ（Ｈｕｍａｎ ＡＣＴＢ， ＮＭ＿００１１０１， Ａｐｐｌｉｅｄ Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ社製）を使用した。
【００３０】
−末梢血中のＡＤＡＭＴＳ５のｍＲＮＡの発現量の測定−
アダリムマブ投与前の関節リウマチ患者の末梢血２．５ｍＬを採取し、ＰＡＸｇｅｎｅ ＲＮＡ採血管（登録商標、日本ベクトン・ディッキンソン社製）に刺入後、ＰＡＸｇｅｎｅ Ｂｌｏｏｄ ＲＮＡ Ｋｉｔ（登録商標、ＰｒｅＡｎａｌｙｔｉＸ社製）を用いて全ＲＮＡを抽出した。前記全ＲＮＡを逆転写酵素を用いて全ｃＤＮＡに変換した。前記全ｃＤＮＡを鋳型ＤＮＡとして、Ｔａｑｍａｎ（登録商標） Ｇｅｎｅ Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ Ａｓｓａｙ（Ａｐｐｌｉｅｄ Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ社製）を用いて、ＡＤＡＭＴＳ５のｍＲＮＡの発現量をリアルタイムＰＣＲ法で測定した。なお、プライマー、及びプローブは、プライマー・プローブセット（ＴａｑＭａｎ Ｇｅｎｅ （登録商標） Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ Ａｓｓａｙ （００１９９８４１＿ｍ１， Ａｐｐｌｉｅｄ Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ社製））を使用した。
上記により得られたＡＤＡＭＴＳ５のｍＲＮＡの含有量は、β−ａｃｔｉｎ（内在性コントロール）のｍＲＮＡとの相対量で定量化を行った。
なお、β−ａｃｔｉｎのプライマー、及びプローブは、プライマー・プローブセット（Ｐｒｅ−Ｄｅｖｅｌｏｐｅｄ ＴａｑＭａｎ（登録商標） Ａｓｓａｙ Ｒｅａｇｅｎｔｓ（Ｈｕｍａｎ ＡＣＴＢ， ＮＭ＿００１１０１ ，Ａｐｐｌｉｅｄ Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ社製））を使用した。
【００３１】
＜評価工程＞
関節リウマチ患者の関節リウマチ活動性は、アダリムマブ投与前、及び投与１２週後のＤＡＳ２８［ＤＡＳ２８（０ｗ）、ＤＡＳ２８（１２ｗ）］で評価した。
アダリムマブが有効か否かは、ＤＡＳ２８（１２ｗ）を用いたＥＵＬＡＲ改善基準によって、反応性良好（ｇｏｏｄ ｒｅｓｐｏｎｓｅ）、中等度反応（ｍｏｄｅｒａｔｅ ｒｅｓｐｏｎｓｅ）、反応なし（ｎｏ ｒｅｓｐｏｎｓｅ）とした。
なお、ＥＵＬＡＲ改善基準とは、ヨーロッパリウマチ学会（ＥＵＬＡＲ）が定めたものであり、Ｆｒａｎｓｅｎ Ｊ， ｅｔ ａｌ．， Ｃｌｉｎ Ｅｘｐ Ｒｈｅｕｍａｔｏｌ ２００５； ２３（Ｓｕｐｐｌ．３９）： Ｓ９３−Ｓ９９に記載されている。
【００３２】
投与１２週後におけるＥＵＬＡＲ改善基準に基づくアダリムマブの有効性は、反応性良好が１５例、中等度反応が１１例、反応なしが７例であった。また、寛解例（ＤＡＳ２８（１２ｗ）＜２．６）は、７例であった。
【００３３】
−低値群と高値群との比較１（ＡＤＡＭＴＳ４）−
上記アダリムマブ投与関節リウマチ患者３３例につき、健常人より抽出の全ｃＤＮＡを鋳型ＤＮＡコントロールとして用いた検量線法によるリアルタイムＰＣＲ法で、アダリムマブ投与前のＡＤＡＭＴＳ４のｍＲＮＡの発現量（ＡＤＡＭＴＳ４／β−アクチン）を定量した。前記ＡＤＡＭＴＳ４のｍＲＮＡの発現量（ＡＤＡＭＴＳ４／β−アクチン）が０．３×１０−４より小さい場合を低値群(Ｌｏｗ)、０．３×１０−４以上の場合を高値群(Ｈｉｇｈ)として群分けし、ＤＡＳ２８（１２ｗ）を比較した結果、高値群では、ＤＡＳ２８（１２ｗ）が有意に低かった（図１Ａ参照）。
【００３４】
−低値群と高値群との比較２（ＡＤＡＭＴＳ５）−
上記アダリムマブ投与関節リウマチ患者３３例につき、健常人より抽出の全ｃＤＮＡを鋳型ＤＮＡコントロールとして用いた検量線法によるリアルタイムＰＣＲ法で、アダリムマブ投与前のＡＤＡＭＴＳ５のｍＲＮＡの発現量（ＡＤＡＭＴＳ５／β−アクチン）を定量した。前記ＡＤＡＭＴＳ５のｍＲＮＡの発現量（ＡＤＡＭＴＳ５／β−アクチン）が４．０×１０−４より小さい場合を低値群(Ｌｏｗ)、４．０×１０−４以上の場合を高値群(Ｈｉｇｈ)として群分けし、ＤＡＳ２８（１２ｗ）を比較した結果、高値群では、ＤＡＳ２８（１２ｗ）が有意に低かった（図１Ｂ参照）。
【００３５】
−−ＧＲ群とＮＧＲ群との比較１（ＡＤＡＭＴＳ４）−−
ＡＤＡＭＴＳ４の含有量を指標とし、前記低値群(Ｌｏｗ)、及び前記高値群(Ｈｉｇｈ)について、更にＧＲ群（反応性良好）と、ＮＧＲ群（反応なし＋中等度反応）とした場合の分類を表１に示す。
【表１】
【００３６】
表１の分類をもとに、感度、特異度、陽性予測率、及び陰性予測率を以下の式で算出した。結果を表２に示す。
感度（Ｓｅｎｓｉｔｉｖｉｔｙ）（％）＝Ａ／（Ａ＋Ｃ）×１００
特異度（Ｓｐｅｃｉｆｉｃｉｔｙ）（％）＝Ｄ／（Ｄ＋Ｂ）×１００
陽性予測率（ＰＰＶ）（％）＝Ａ／（Ｂ＋Ａ）×１００
陰性予測率（ＮＰＶ）（％）＝Ｄ／（Ｄ＋Ｃ）×１００
なお、上記式中Ａ〜Ｄは、以下のとおりである。
Ａ：ＡＤＡＭＴＳ４のｍＲＮＡの発現量（ＡＤＡＭＴＳ４／β−アクチン）が高値群であり、ＧＲ群に分類された症例
Ｂ：ＡＤＡＭＴＳ４のｍＲＮＡの発現量（ＡＤＡＭＴＳ４／β−アクチン）が高値群であり、ＮＧＲ群に分類された症例
Ｃ：ＡＤＡＭＴＳ４のｍＲＮＡの発現量（ＡＤＡＭＴＳ４／β−アクチン）が低値群であり、ＧＲ群に分類された症例
Ｄ：ＡＤＡＭＴＳ４のｍＲＮＡの発現量（ＡＤＡＭＴＳ４／β−アクチン）が低値群であり、ＮＧＲ群に分類された症例
【００３７】
【表２】
【００３８】
−−ＧＲ群とＮＧＲ群との比較２（ＡＤＡＭＴＳ５）−−
ＡＤＡＭＴＳ５の含有量を指標とし、前記低値群(Ｌｏｗ)、及び前記高値群(Ｈｉｇｈ)について、更にＧＲ群（反応性良好）と、ＮＧＲ群（反応なし＋中等度反応）とした場合の分類を表３に示す。
【表３】
【００３９】
表３の分類をもとに、感度、特異度、陽性予測率、及び陰性予測率を以下の式で算出した。結果を表４に示す。
感度（Ｓｅｎｓｉｔｉｖｉｔｙ）（％）＝Ｅ／（Ｅ＋Ｇ）×１００
特異度（Ｓｐｅｃｉｆｉｃｉｔｙ）（％）＝Ｈ／（Ｈ＋Ｆ）×１００
陽性予測率（ＰＰＶ）（％）＝Ｅ／（Ｆ＋Ｅ）×１００
陰性予測率（ＮＰＶ）（％）＝Ｈ／（Ｈ＋Ｇ）×１００
なお、上記式中Ｅ〜Ｈは、以下のとおりである。
Ｅ：ＡＤＡＭＴＳ５のｍＲＮＡの発現量（ＡＤＡＭＴＳ５／β−アクチン）が高値群であり、ＧＲ群に分類された症例
Ｆ：ＡＤＡＭＴＳ５のｍＲＮＡの発現量（ＡＤＡＭＴＳ５／β−アクチン）が高値群であり、ＮＧＲ群に分類された症例
Ｇ：ＡＤＡＭＴＳ５のｍＲＮＡの発現量（ＡＤＡＭＴＳ５／β−アクチン）が低値群であり、ＧＲ群に分類された症例
Ｈ：ＡＤＡＭＴＳ５のｍＲＮＡの発現量（ＡＤＡＭＴＳ５／β−アクチン）が低値群であり、ＮＧＲ群に分類された症例
【００４０】
【表４】
【００４１】
表２、及び４の結果から、アダリムマブ投与前のＡＤＡＭＴＳ４のｍＲＮＡの発現量（ＡＤＡＭＴＳ４／β−アクチン）、又は、ＡＤＡＭＴＳ５のｍＲＮＡの発現量（ＡＤＡＭＴＳ５／β−アクチン）が高値群の場合に、ＧＲ群となることを予測する陽性予測率（ＰＰＶ）は、いずれも８５．７％と高く、アダリムマブ投与前のＡＤＡＭＴＳ４、又はＡＤＡＭＴＳ５の含有量を指標として、関節リウマチに対するアダリムマブの薬効を予測することができることが示された。
【００４２】
−−寛解（Ｒｅ）群と非寛解（Ｎｒｅ）群との比較１（ＡＤＡＭＴＳ４）−−
ＡＤＡＭＴＳ４の含有量を指標とし、前記低値群(Ｌｏｗ)、及び前記高値群(Ｈｉｇｈ)について、更にＲｅ（ｒｅｍｉｓｓｉｏｎ：寛解）群と、Ｎｒｅ（ｎｏｎ−ｒｅｍｉｓｓｉｏｎ：非寛解）群とした場合の分類を表５に示す。
【表５】
【００４３】
表５の分類をもとに、感度、特異度、陽性予測率、及び陰性予測率を以下の式で算出した。結果を表６に示す。
感度（Ｓｅｎｓｉｔｉｖｉｔｙ）（％）＝Ｉ／（Ｉ＋Ｋ）×１００
特異度（Ｓｐｅｃｉｆｉｃｉｔｙ）（％）＝Ｌ／（Ｌ＋Ｊ）×１００
陽性予測率（ＰＰＶ）（％）＝Ｉ／（Ｊ＋Ｉ）×１００
陰性予測率（ＮＰＶ）（％）＝Ｌ／（Ｌ＋Ｋ）×１００
なお、上記式中Ｉ〜Ｌは、以下のとおりである。
Ｉ：ＡＤＡＭＴＳ４のｍＲＮＡの発現量（ＡＤＡＭＴＳ４／β−アクチン）が高値群であり、寛解群に分類された症例
Ｊ：ＡＤＡＭＴＳ４のｍＲＮＡの発現量（ＡＤＡＭＴＳ４／β−アクチン）が高値群であり、非寛解群に分類された症例
Ｋ：ＡＤＡＭＴＳ４のｍＲＮＡの発現量（ＡＤＡＭＴＳ４／β−アクチン）が低値群であり、寛解群に分類された症例
Ｌ：ＡＤＡＭＴＳ４のｍＲＮＡの発現量（ＡＤＡＭＴＳ４／β−アクチン）が低値群であり、非寛解群に分類された症例
【００４４】
【表６】
【００４５】
−−寛解（Ｒｅ）群と非寛解（Ｎｒｅ）群との比較２（ＡＤＡＭＴＳ５）−−
ＡＤＡＭＴＳ５の含有量を指標とし、前記低値群(Ｌｏｗ)、及び前記高値群(Ｈｉｇｈ)について、更にＲｅ（ｒｅｍｉｓｓｉｏｎ：寛解）群と、Ｎｒｅ（ｎｏｎ−ｒｅｍｉｓｓｉｏｎ：非寛解）群とした場合の分類を表７に示す。
【表７】
【００４６】
表７の分類をもとに、感度、特異度、陽性予測率、及び陰性予測率を以下の式で算出した。結果を表８に示す。
感度（Ｓｅｎｓｉｔｉｖｉｔｙ）（％）＝Ｍ／（Ｍ＋Ｏ）×１００
特異度（Ｓｐｅｃｉｆｉｃｉｔｙ）（％）＝Ｐ／（Ｐ＋Ｎ）×１００
陽性予測率（ＰＰＶ）（％）＝Ｍ／（Ｎ＋Ｍ）×１００
陰性予測率（ＮＰＶ）（％）＝Ｐ／（Ｐ＋Ｏ）×１００
なお、上記式中Ｍ〜Ｐは、以下のとおりである。
Ｍ：ＡＤＡＭＴＳ５のｍＲＮＡの発現量（ＡＤＡＭＴＳ５／β−アクチン）が高値群であり、寛解群に分類された症例
Ｎ：ＡＤＡＭＴＳ５のｍＲＮＡの発現量（ＡＤＡＭＴＳ５／β−アクチン）が高値群であり、非寛解群に分類された症例
Ｏ：ＡＤＡＭＴＳ５のｍＲＮＡの発現量（ＡＤＡＭＴＳ５／β−アクチン）が低値群であり、寛解群に分類された症例
Ｐ：ＡＤＡＭＴＳ５のｍＲＮＡの発現量（ＡＤＡＭＴＳ５／β−アクチン）が低値群であり、非寛解群に分類された症例
【００４７】
【表８】
【００４８】
表６、及び８の結果から、アダリムマブ投与前のＡＤＡＭＴＳ４のｍＲＮＡの発現量（ＡＤＡＭＴＳ４／β−アクチン）、又は、ＡＤＡＭＴＳ５のｍＲＮＡの発現量（ＡＤＡＭＴＳ５／β−アクチン）が高値群の場合に、寛解を予測する陽性予測率（ＰＰＶ）は、それぞれ、５７．１％（ＡＤＡＭＴＳ４）、７１．４％（ＡＤＡＭＴＳ５）と高かった。
また、アダリムマブ投与前のＡＤＡＭＴＳ４のｍＲＮＡの発現量（ＡＤＡＭＴＳ４／β−アクチン）、又は、ＡＤＡＭＴＳ５のｍＲＮＡの発現量（ＡＤＡＭＴＳ５／β−アクチン）が低値群の場合に、寛解を否定する（非寛解となる）陰性予測率（ＮＰＶ）は、それぞれ、８８．５％（ＡＤＡＭＴＳ４）、９２．３％（ＡＤＡＭＴＳ５）と非常に高かった。
以上より、アダリムマブ投与前のＡＤＡＭＴＳ４、又はＡＤＡＭＴＳ５の含有量を指標として、寛解をも予測することができることが示された。
【００４９】
−アダリムマブ投与後のＤＡＳ２８の予測１（ＡＤＡＭＴＳ４）−
アダリムマブ投与前の末梢血中のＡＤＡＭＴＳ４のｍＲＮＡの発現量（ＡＤＡＭＴＳ４／β−アクチン）と、アダリムマブ投与１２週後のＤＡＳ２８（１２ｗ）との相関を検討した結果を図２Ａに示す。
図２Ａに示されるように、アダリムマブ投与前のＡＤＡＭＴＳ４のｍＲＮＡの発現量（ＡＤＡＭＴＳ４／β−アクチン）と、アダリムマブ投与１２週後のＤＡＳ２８（１２ｗ）との間に負の相関（ｒ＝−０．３７０）が認められた。
このことは即ち、被検体由来の試料中のアダリムマブ投与前のＡＤＡＭＴＳ４の含有量が多いほど、関節リウマチに対するヒト型抗ＴＮＦα抗体薬が有効であること、及び被検体由来の試料中のアダリムマブ投与前のＡＤＡＭＴＳ４の含有量によって、ヒト型抗ＴＮＦα抗体薬投与１２週後におけるアダリムマブ有効性を定量化して推測できることを示している。
【００５０】
−アダリムマブ投与後のＤＡＳ２８の予測２（ＡＤＡＭＴＳ５）−
アダリムマブ投与前の末梢血中のＡＤＡＭＴＳ５のｍＲＮＡの発現量（ＡＤＡＭＴＳ５／β−アクチン）と、アダリムマブ投与１２週後のＤＡＳ２８（１２ｗ）との相関を検討した結果を図２Ｂに示す。
図２Ｂに示されるように、アダリムマブ投与前のＡＤＡＭＴＳ５のｍＲＮＡの発現量（ＡＤＡＭＴＳ５／β−アクチン）と、アダリムマブ投与１２週後のＤＡＳ２８（１２ｗ）との間に負の相関（ｒ＝−０．４７６）が認められた。
このことは即ち、被検体由来の試料中のアダリムマブ投与前のＡＤＡＭＴＳ５の含有量が多いほど、関節リウマチに対するヒト型抗ＴＮＦα抗体薬が有効であること、及び被検体由来の試料中のアダリムマブ投与前のＡＤＡＭＴＳ５の含有量によって、ヒト型抗ＴＮＦα抗体薬投与１２週後におけるアダリムマブ有効性を定量化して推測できることを示している。
【産業上の利用可能性】
【００５１】
本発明の関節リウマチに対するヒト型抗ＴＮＦα抗体薬の薬効予測方法は、前記薬投与前のワンポイントにおけるＡＤＡＭＴＳ４、及びＡＤＡＭＴＳ５の少なくともいずれかの含有量によって、確実性が高く、かつ、簡便に予測すること、及び前記薬を投与した後における関節リウマチの活動性を予測することができ、また、前記薬がより確実に効く症例に薬を投与することで無駄な副作用を回避することができるので、医学的診断、及び治療の分野において、好適に利用できる。
本発明の関節リウマチに対するヒト型抗ＴＮＦα抗体薬の薬効予測装置は、前記薬投与前のワンポイントにおけるＡＤＡＭＴＳ４、及びＡＤＡＭＴＳ５の少なくともいずれかの含有量によって、確実性が高く、かつ、簡便に予測すること、及び前記薬を投与した後における関節リウマチの活動性を予測することができ、また、前記薬がより確実に効く症例に薬を投与することで無駄な副作用を回避することができるので、医学的診断、及び治療の分野において、好適に利用できる。
【特許請求の範囲】
【請求項１】
被検体由来の試料中のＡＤＡＭＴＳ４、及びＡＤＡＭＴＳ５の少なくともいずれかの含有量を測定する工程と、
前記ＡＤＡＭＴＳ４、及びＡＤＡＭＴＳ５の少なくともいずれかの含有量を指標として、関節リウマチに対してヒト型抗ＴＮＦα抗体薬が有効か否かを評価する工程と、
を含むことを特徴とする関節リウマチに対するヒト型抗ＴＮＦα抗体薬の薬効予測方法。
【請求項２】
ヒト型抗ＴＮＦα抗体薬が、アダリムマブ（ａｄａｌｉｍｕｍａｂ（ＡＤＡ））である請求項１に記載の関節リウマチに対するヒト型抗ＴＮＦα抗体薬の薬効予測方法。
【請求項３】
被検体由来の試料中のＡＤＡＭＴＳ４、及びＡＤＡＭＴＳ５の少なくともいずれかの含有量が、ＡＤＡＭＴＳ４のｍＲＮＡ、及びＡＤＡＭＴＳ５のｍＲＮＡの少なくともいずれかの発現量である請求項１から２のいずれかに記載の関節リウマチに対するヒト型抗ＴＮＦα抗体薬の薬効予測方法。
【請求項４】
ＡＤＡＭＴＳ４のｍＲＮＡ、及びＡＤＡＭＴＳ５のｍＲＮＡの少なくともいずれかの発現量をリアルタイムＰＣＲ法で測定する請求項３に記載の関節リウマチに対するヒト型抗ＴＮＦα抗体薬の薬効予測方法。
【請求項５】
被検体由来の試料中のＡＤＡＭＴＳ４、及びＡＤＡＭＴＳ５の少なくともいずれかの含有量を測定する手段と、
前記ＡＤＡＭＴＳ４、及びＡＤＡＭＴＳ５の少なくともいずれかの含有量を指標として、関節リウマチに対してヒト型抗ＴＮＦα抗体薬が有効か否かを評価する手段と、
を含むことを特徴とする関節リウマチに対するヒト型抗ＴＮＦα抗体薬の薬効予測装置。
【請求項６】
ヒト型抗ＴＮＦα抗体薬が、アダリムマブ（ａｄａｌｉｍｕｍａｂ（ＡＤＡ））である請求項５に記載の関節リウマチに対するヒト型抗ＴＮＦα抗体薬の薬効予測装置。
【請求項７】
被検体由来の試料中のＡＤＡＭＴＳ４、及びＡＤＡＭＴＳ５の少なくともいずれかの含有量が、ＡＤＡＭＴＳ４のｍＲＮＡ、及びＡＤＡＭＴＳ５のｍＲＮＡの少なくともいずれかの発現量である請求項５から６のいずれかに記載の関節リウマチに対するヒト型抗ＴＮＦα抗体薬の薬効予測装置。
【請求項８】
ＡＤＡＭＴＳ４のｍＲＮＡ、及びＡＤＡＭＴＳ５のｍＲＮＡの少なくともいずれかの発現量をリアルタイムＰＣＲ法で測定する請求項７に記載の関節リウマチに対するヒト型抗ＴＮＦα抗体薬の薬効予測装置。
【請求項１】
被検体由来の試料中のＡＤＡＭＴＳ４、及びＡＤＡＭＴＳ５の少なくともいずれかの含有量を測定する工程と、
前記ＡＤＡＭＴＳ４、及びＡＤＡＭＴＳ５の少なくともいずれかの含有量を指標として、関節リウマチに対してヒト型抗ＴＮＦα抗体薬が有効か否かを評価する工程と、
を含むことを特徴とする関節リウマチに対するヒト型抗ＴＮＦα抗体薬の薬効予測方法。
【請求項２】
ヒト型抗ＴＮＦα抗体薬が、アダリムマブ（ａｄａｌｉｍｕｍａｂ（ＡＤＡ））である請求項１に記載の関節リウマチに対するヒト型抗ＴＮＦα抗体薬の薬効予測方法。
【請求項３】
被検体由来の試料中のＡＤＡＭＴＳ４、及びＡＤＡＭＴＳ５の少なくともいずれかの含有量が、ＡＤＡＭＴＳ４のｍＲＮＡ、及びＡＤＡＭＴＳ５のｍＲＮＡの少なくともいずれかの発現量である請求項１から２のいずれかに記載の関節リウマチに対するヒト型抗ＴＮＦα抗体薬の薬効予測方法。
【請求項４】
ＡＤＡＭＴＳ４のｍＲＮＡ、及びＡＤＡＭＴＳ５のｍＲＮＡの少なくともいずれかの発現量をリアルタイムＰＣＲ法で測定する請求項３に記載の関節リウマチに対するヒト型抗ＴＮＦα抗体薬の薬効予測方法。
【請求項５】
被検体由来の試料中のＡＤＡＭＴＳ４、及びＡＤＡＭＴＳ５の少なくともいずれかの含有量を測定する手段と、
前記ＡＤＡＭＴＳ４、及びＡＤＡＭＴＳ５の少なくともいずれかの含有量を指標として、関節リウマチに対してヒト型抗ＴＮＦα抗体薬が有効か否かを評価する手段と、
を含むことを特徴とする関節リウマチに対するヒト型抗ＴＮＦα抗体薬の薬効予測装置。
【請求項６】
ヒト型抗ＴＮＦα抗体薬が、アダリムマブ（ａｄａｌｉｍｕｍａｂ（ＡＤＡ））である請求項５に記載の関節リウマチに対するヒト型抗ＴＮＦα抗体薬の薬効予測装置。
【請求項７】
被検体由来の試料中のＡＤＡＭＴＳ４、及びＡＤＡＭＴＳ５の少なくともいずれかの含有量が、ＡＤＡＭＴＳ４のｍＲＮＡ、及びＡＤＡＭＴＳ５のｍＲＮＡの少なくともいずれかの発現量である請求項５から６のいずれかに記載の関節リウマチに対するヒト型抗ＴＮＦα抗体薬の薬効予測装置。
【請求項８】
ＡＤＡＭＴＳ４のｍＲＮＡ、及びＡＤＡＭＴＳ５のｍＲＮＡの少なくともいずれかの発現量をリアルタイムＰＣＲ法で測定する請求項７に記載の関節リウマチに対するヒト型抗ＴＮＦα抗体薬の薬効予測装置。
【図１Ａ】
【図１Ｂ】
【図２Ａ】
【図２Ｂ】
【図１Ｂ】
【図２Ａ】
【図２Ｂ】
【公開番号】特開２０１１−１０９９２９（Ｐ２０１１−１０９９２９Ａ）
【公開日】平成２３年６月９日（２０１１．６．９）
【国際特許分類】
【出願番号】特願２００９−２６６５３９（Ｐ２００９−２６６５３９）
【出願日】平成２１年１１月２４日（２００９．１１．２４）
【出願人】（５１０１８０９４６）株式会社ケイティーバイオ (2)
【Ｆターム（参考）】
【公開日】平成２３年６月９日（２０１１．６．９）
【国際特許分類】
【出願日】平成２１年１１月２４日（２００９．１１．２４）
【出願人】（５１０１８０９４６）株式会社ケイティーバイオ (2)
【Ｆターム（参考）】
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