骨止血組成物
【課題】本発明は、骨組織の再生を阻害せず、かつ即効性に優れた骨止血剤を提供することを目的とする。
【解決手段】本発明は、少なくとも１種以上のオキシアルキレンユニットを有するポリアルキレングリコール重合体から形成され、２０〜８０％の含水率を有する高分子ゲル成分を含む骨止血組成物である。この骨止血組成剤は、非架橋のゲル成分で構成されていることから、生体内で容易に分解することができるため、止血しながら骨誘導することができるようになる。
【解決手段】本発明は、少なくとも１種以上のオキシアルキレンユニットを有するポリアルキレングリコール重合体から形成され、２０〜８０％の含水率を有する高分子ゲル成分を含む骨止血組成物である。この骨止血組成剤は、非架橋のゲル成分で構成されていることから、生体内で容易に分解することができるため、止血しながら骨誘導することができるようになる。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、外科手術の止血剤の技術分野において、特に、骨からの出血を抑制または防止する骨止血組成物に関連する。
【背景技術】
【０００２】
骨折や手術などで切開された骨の断面や骨髄からの出血は大量であるため、現在、骨折または切断した骨からの出血を止める方法としては、（１）非吸収性の蜜蝋を主成分とした“ボーンワックス”や“ネストップ”を手動で適度な軟度に調整して出血表面に塗布する方法、（２）コラーゲン等のゼラチン質を出血表面に塗布する方法、（３）骨の切開の際に生じる自己の骨粉を非吸収性セメントと混合してそれを充填する方法、および（４）電気メスなど行われている。しかし、いずれも即効的な止血に乏しく、さらに健康な組織に代わって瘢痕組織が生じ欠損部を埋めて修復する皮膚、筋肉、内臓などの修復プロセスとは異なり、骨の修復は、骨に損傷が生じた場合には瘢痕組織ではなく、新しい骨の組織に置き換わる。そのため、上記非吸収性の材料を切断された骨断面などに留置すると、生体内で分解されないため骨形成を阻害する物理的バリアとして働き、骨形成を阻害・抑制する原因となる。
【０００３】
また、上記コラーゲン等のゼラチン質を含むゼラチン製剤は、４５倍量の血液を吸収し膨潤することで患部に圧迫効果を示し、かつ吸収された血液中の血小板が凝固を促進させるため、現在、骨止血に最適な薬剤として使用されているが、当該ゼラチン自体に止血作用を有しておらず、かつ即効性に乏しく、感染の機会を増やすという問題がある。
【０００４】
また、上記の“ボーンワックス”などの蜜蝋を主成分とした骨止血を使用する場合、蜜蝋自体は動物性由来であるため、蜜蝋を主成分とする骨止血剤を塗布した周囲の隣接組織に異物反応を起こし、マクロファージー、異物巨細胞、多形核白血球、リンパ球などが局部的に集積して、炎症や浮腫が起こる問題もある。さらに、その周囲を肉芽細胞ないし線維性結合組織を取り囲み、それが異物性肉芽腫となる場合もある。そこで、動物性由来でなく操作性や安全性の観点から動物性由来の物質を軽減した骨止血剤が注目されており、例えば特許文献１および非特許文献１にかかる問題を解決した骨止血剤が記載されている。
【０００５】
特許文献１では、塩化第２スズを触媒に用いて、分子量２０００〜６０００の範囲にあるポリエチレングリコール存在下、Ｄ，Ｌ−ラクチドを開環重合させ、Ｄ，Ｌ−乳酸ユニットとエチレンオキサイドユニットを有するブロック共重合体を合成し、この共重合体をウサギの左腸骨の骨髄面に塗布し、３０分間状態を観察した結果塗布面には血液の漏出は見られず完全に止血していることを確認している。
【０００６】
非特許文献１では、ポリエチレングリコールとコラーゲンとの複合材料を骨用止血材として、骨損失部に留置することが記載されている。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００７】
【特許文献１】特開平０７−１１８１５７号公報
【非特許文献１】Ｊ．Ｂｉｏｍｅｄ．Ｍａｔｅｒ．Ｒｅｓ．１９９８ Ｍａｒ ５， ３９（３） ３５８−６３
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００８】
しかし、特許文献１では、ポリエチレングリコールとポリ乳酸とのブロック共重合体を使用しており、比較例１および２ではポリ乳酸とポリエチレングリコールとユニット比が５２：４８〜３０：７０の範囲外のブロック共重合体で行っており、止血効果がないことが示されている。そのため特許文献１の実施例と比較例との差異を鑑みると、ポリエチレングリコールユニットとポリ乳酸ユニットとの比と、分子量が所定の範囲であることが重要であり、３０分間状態を観察した結果塗布面には血液の漏出は見られず完全に止血されていたと記載されている。しかしながら、当該所定のブロック共重合体をどの程度の量どのような形態で塗布しているのかは不明であり、また骨の断面積も不明であるため、特許文献１の発明の効果の優位性を見出せない。
【０００９】
また、非特許文献１では、ポリエチレングリコールとコラーゲンとの複合体を使用しているため、確かに骨の出血の吸収には優れているが、止血後１ヶ月ほどは、弱い炎症が続く問題があり、骨の再生速度に比べて分解吸収速度が遅いので、依然として骨組織の再生を阻害してしまう。
【００１０】
そこで、本発明は、骨組織の再生を阻害せず、かつ即効性に優れた骨止血剤を提供することを目的とする。
【課題を解決するための手段】
【００１１】
本発明は、少なくとも１種以上のオキシアルキレンユニットを有するポリアルキレングリコール重合体から形成され、２０〜８０％の含水率を有する高分子ゲル成分を含む骨止血組成物を提供する。
【発明の効果】
【００１２】
本発明に係る骨止血組成剤は、非架橋のゲル成分で構成されていることから、生体内で容易に分解することができるため、止血しながら骨誘導することができる。
【００１３】
本発明に係る骨止血組成物は、生体適合性および血液適合性が高いポリアルキレングリコール重合体から形成されているため血液凝固の即効性がよい。本発明は完全合成系からなるため殺菌・成型などの取り扱いがしやすい。
【図面の簡単な説明】
【００１４】
【図１】図１は、本発明の高分子ゲル成分の調製のための加熱時間とポリアルキレングリコール重合体の質量％との関係を示す図である。
【図２】図２は、本発明の高分子ゲル成分の調製のための加熱時間とポリアルキレングリコール重合体の質量％との関係を示す図である。
【図３】図３は、止血効果の測定方法を示す概略図である。
【図４】図４は、市販の骨止血剤と本発明の骨止血組成物との止血効果の比較実験のコントロールを示した実験結果である。
【図５】図５は、市販の骨止血剤と本発明の骨止血組成物との疑似血液を用いた止血効果の比較実験を示した実験結果である。
【図６】図６は、本発明の止血組成物の毒性評価を示す細胞の形態観察の光学顕微鏡像である。
【図７】図７は、本発明の止血組成物の止血効果を示す写真である。
【図８】本発明の実験結果をまとめた表である。
【図９】本発明の実験結果をまとめた表である。
【図１０】図１０は、ポリ（オキシエチレンユニット（ＥＯ）（７５ｍｏｌ％）−オキシプロピレンユニット（ＰＯ）（２５ｍｏｌ％））ランダム共重合体とエチレンオキサイドの複合ゲルの稠度に及ぼすＣａＰの影響を示す実験結果である。
【図１１】ポリ（オキシエチレンユニット（ＥＯ）（７５ｍｏｌ％）−オキシプロピレンユニット（ＰＯ）（２５ｍｏｌ％））ランダム共重合体とエチレンオキサイドとの複合ゲルの稠度に及ぼすＣａＰ−コラーゲン複合体添加の影響を示す実験結果である
【発明を実施するための形態】
【００１５】
本発明の第一は、少なくとも１種以上のオキシアルキレンユニットを有するポリアルキレングリコール重合体から形成され、２０〜８０％の含水率を有する高分子ゲル成分を含む骨止血組成物である。
【００１６】
本発明に係る骨止血組成剤は、非架橋のゲル成分で構成されていることから、生体内で容易に分解することができるため、止血しながら骨誘導することができる。より詳細には、本発明に係る骨止血組成物のマトリックスであるポリアルキレングリコールは、アルキレン基がエーテル結合されたオキシアルキレンユニットを繰り返し単位とする構造の高分子であり、例えば、ポリエチレングリコール、ポリプロピレングリコール、またはポリオキシエチレン‐オキシプロピレン重合体などの比較的アルキレン基鎖が短い重合体は、両親媒性であり、血液適合性、生体適合性に優れ、かつ無毒性であることが知られている。なかでも本発明に係る骨止血組成剤は、少なくとも１種以上のポリアルキレングリコール重合体と溶媒とが均一に混合されていることでポリアルキレングリコール重合体同士が絡み合い、凝集した非架橋の高分子ゲルとして、骨や骨髄からの血液を吸収することができる。さらに、本発明は、非架橋の高分子ゲルをマトリックスであることに起因して、骨組織の成長速度より当該高分子ゲルの分解速度が速いため骨組織の成長を阻害することなく骨誘導を促すことができる。
【００１７】
本発明に係るオキシアルキレンユニットは、以下の式１および式２からなる群から選択される少なくとも一つであることが好ましい。
【００１８】
（式１）
【化１】
【００１９】
上記式１中、ｈは１から１０までの整数であることが好ましく、より好ましくは、上記式１中、ｈは２から５までの整数であり、さらに好ましくは、上記式１中、ｈは２から３までの整数である。
【００２０】
（式２）
【化２】
【００２１】
上記式１中、ｈは１から１０までの整数であり、かつＲは水素、メチル基、エチル基、プロピル基、ブチル基、ペンチル基およびへキシル基からなる群から選択される少なくとも一つのアルキル基で示されることが好ましく、より好ましくは、上記式１中、ｈは２から５までの整数であり、かつＲは水素、メチル基、エチル基、およびプロピル基からなる群から選択される少なくとも一つのアルキル基で示され、さらに好ましくは、上記式１中、ｈは２から３までの整数であり、かつＲは水素、メチル基、およびエチル基からなる群から選択される少なくとも一つのアルキル基で示される。
【００２２】
また、本発明に係るオキシアルキレンユニットの具体的な名称は、オキシメチレンユニット、オキシエチレンユニット、オキシプロピレンユニット、オキシブチレンユニット、オキシペンチレンユニット、オキシへキシレンユニット、オキシヘプチレンユニット、オキシオクチレンユニット、オキシノニレンユニット、およびオキシデシレンユニットが挙げられ、オキシエチレンユニット、オキシプロピレンユニット、オキシブチレンユニット、オキシペンチレンユニットが好ましい。また、本発明に係るオキシアルキレンユニットを有するポリアルキレングリコール重合体は、これらオキシアルキレンユニットを１種類から構成されるホモポリマーでも、２種類以上組み合わせてなるコポリマーであってもよいが、２種類以上組み合わせてなるコポリマーであることがより好ましい。
【００２３】
また、本発明に係るポリアルキレングリコール重合体がコポリマーである場合、交互重合体、ランダム重合体が好ましい。
【００２４】
本発明に係る少なくとも１種以上のオキシアルキレンユニットを有するポリアルキレングリコール重合体は、以下の式３：
【００２５】
式３
【化３】
【００２６】
（上記式３中、ｍ、ｎ、ｐおよびｑはそれぞれ独立して、ｍは２以上５以下の整数であり、ｎは１０００以上４００００以下の整数であり、ｐは１以上５以下の整数であり、Ｑは６００以上２００００以下の整数であり、Ｒは、水素、メチル基、エチル基、およびプロピル基からなる群から選択される少なくとも一つのアルキル基である）
で示されるランダム共重合体であることが好ましく、より好ましくは、上記式２中のｍ、ｎ、ｐおよびｑはそれぞれ独立して、ｍは２以上４以下の整数であり、ｎは５０００以上２００００以下の整数であり、ｐは２以上４以下の整数であり、Ｑは９００以上１５０００以下の整数であり、特に好ましくは、上記式中のｍ、ｎ、ｐおよびｑはそれぞれ独立して、ｍは２であり、ｎは５５００以上９０００以下の整数であり、ｐは３であり、Ｑは１５００以上１００００以下の整数である。またもっとも好ましいのは以下の式４で示されるランダム共重合体であり、式４中の記号である重合度ｎ、Ｑおよび置換基Ｒは、上記と同様である。
【００２７】
式４
【化４】
【００２８】
また、本発明に係る少なくとも１種以上のオキシアルキレンユニットを有するポリアルキレングリコール重合体は、オキシエチレンユニットと、オキシプロピレンユニットとから構成された二元のランダム共重合体が特に好ましい。また、この場合のオキシエチレンユニットと、オキシプロピレンユニットとの比率（オキシエチレンユニット／オキシプロピレンユニット）は、１〜９が好ましく、１．５〜６がより好ましく、２〜４がさらに好ましい。
【００２９】
本発明に係るポリアルキレングリコール重合体は、重量平均分子量５００００〜２００００００であることが好ましく、重量平均分子量３０００００〜１８０００００であることがより好ましく、重量平均分子量５０００００〜１５０００００であることが特に好ましい。
【００３０】
ポリアルキレングリコール重合体の重量平均分子量５００００未満だと骨止血組成物として成型できず、操作性が悪い。また、ポリアルキレングリコール重合体の分子量が２００００００を超えると骨止血組成物が固くなり操作性が悪い。
【００３１】
本発明に係るポリアルキレングリコール重合体は、分子量分布１．５〜２０であることが好ましく、分子量分布が２．５〜１８であることがより好ましく、分子量分布が６〜１７であることが特に好ましい。
【００３２】
本発明に係る高分子ゲル成分は、前記ポリアルキレングリコール重合体と、エチレンオキサイド、プロピレンオキサイド、ブチレンオキサイド、ペンチレンオキサイド、へキシレンオキサイド、ヘプチレンオキサイド、オクチレンオキサイド、ノニレンオキサイド、およびデシレンオキサイドからなる群から選択される少なくとも一つのアルキレンオキサイドを含み、２０〜８０％の含水率を有する高分子ゲル成分を含むことが好ましい。
【００３３】
尚、本発明に係るポリアルキレングリコールの合成方法は、公知の合成方法を使用することができ、特に制限されることはなく、エチレンオキサイド、プロピレンオキサイド、ブチレンオキサイド、ペンチレンオキサイド、へキシレンオキサイド、ヘプチレンオキサイド、オクチレンオキサイド、ノニレンオキサイド、およびデシレンオキサイドからなる群から選択される少なくとも一つのアルキレンオキサイドを開環して、鉱酸等の酸触媒や水酸化ナトリウム（ＮａＯＨ）、水酸化カリウム（ＫＯＨ）等のアルカリ触媒などの存在下で重合することができ、なかでもエチレンオキサイド、プロピレンオキサイド、ブチレンオキサイド、ペンチレンオキサイドからなる群から選択される一つと、エチレンオキサイド、プロピレンオキサイド、ブチレンオキサイド、ペンチレンオキサイドからなる群から選択される一つと、を混合して重合することが好ましく、エチレンオキサイドと、プロピレンオキサイドとを混合して重合することが特に好ましい。
【００３４】
尚、重量平均分子量の測定方法は、ＧＰＣ、光散乱法、粘度測定法、質量分析法（ＴＯＦＭＡＳＳなど）が挙げられ、本発明に係るポリアルキレングリコール重合体の分子量は、ＧＰＣにより重量平均分子量を測定している。
【００３５】
本発明に係る高分子ゲル成分は、少なくとも１種以上のオキシアルキレンユニットを有するポリアルキレングリコール重合体と、溶媒とから構成されていることが好ましく、必要により塩を含んでいることが好ましい。
【００３６】
本発明に係る高分子ゲル成分は、含水率が２０〜８０％であり、３０〜７５％であることがより好ましく、４０〜７０％であることが特に好ましい。
【００３７】
含水率が２０〜８０％の範囲であると、他の成分との混和が容易であり、操作性に優れ複雑な骨断面形状への付着特性が高く、高い止血効果が期待できる。
【００３８】
なお、本発明に係る高分子ゲル成分の含水率は、−２０〜−５０℃、２４時間凍結乾燥したものを乾燥状態とし、また、製造直後から２５℃、１０分静置したものを湿潤状態として各質量を測定し、以下の数式１で定義している。
【００３９】
【数１】
【００４０】
また、上記塩は、生体に許容される塩であれば特に制限されることはなく、水酸化ナトリウム、水酸化カリウムだけではなく、公知の緩衝溶液に使用される塩であれば制限されない。
【００４１】
本発明に係る高分子ゲル成分は、さらに液体薬剤、サイトカイン（ＴＧＦβ、ＦＧＦ、ＢＭＰ）を含んでもよい。
【００４２】
本発明に係る骨止血組成剤は、高分子ゲル成分と、骨誘導成分と、を含むことが好ましい。
【００４３】
本発明に係る骨止血組成剤に、骨誘導成分や人工骨助剤成分が含有されていると、骨止血だけではなく、骨誘導をより促進することができる。
【００４４】
本発明に係る骨誘導成分は、リン酸系カルシウムが好ましく、リン酸４カルシウムＣａ４Ｏ（ＰＯ４）２、水酸アパタイトＣａ１０（ＰＯ４）６（ＯＨ）２、リン酸８カルシウムＣａ８Ｈ２（ＰＯ４）６・５Ｈ２Ｏ、リン酸２カルシウム２水和物ＣａＨＰＯ４・２Ｈ２Ｏ、リン酸２カルシウムＣａＨＰＯ４、ピロリン酸カルシウムＣａ２Ｐ２Ｏ７、ピロリン酸カルシウム２水和物Ｃａ２Ｐ２Ｏ８・２Ｈ２Ｏ、リン酸７カルシウムＣａ７（Ｐ５Ｏ１６）２、リン酸２水素カルシウムＣａ４Ｈ２Ｐ６Ｏ２０、リン酸１カルシウム・２水和物Ｃａ（Ｈ２ＰＯ４）２・Ｈ２Ｏ、およびメタリン酸カルシウムＣａ（ＰＯ３）２からなる群から選択される少なくとも一つを骨誘導成分として含むことがより好ましい。
【００４５】
本発明に係る骨誘導成分は、多孔質体が好ましく、この際の骨誘導成分のＢＥＴ比表面積は、生体内で骨成分が溶解しやすい範囲または後述する人工骨助剤成分と複合体を形成しやすい範囲であればよいが、好ましくは０．５〜９０ｍ２／ｇ、より好ましくは３０〜６０ｍ２／ｇとするのがよい。前記比表面積が、０．５〜９０ｍ２／ｇであると、体内でのタンパク質の吸着により高い細胞吸着を期待できる。
【００４６】
なお、本発明に係る骨誘導体成分（ＣａＰ）の比表面積は、吸着ガスに窒素を用いてＢＥＴ（Ｂｒｕｎａｕｅｒ−Ｅｍｍｅｔｔ−Ｔｅｌｌｅｒ）法により測定した。装置は日本ベル株式会社製のＢＥＬＳＯＲＰ−ｍｉｎを使用している。測定には、約０．４ｇの粉体状の骨誘導体成分を使用している。死体積（Ｄｅａｄ Ｖｏｌｕｍｅ）の測定はヘリウムガスを用いて行なっている。
【００４７】
また、前記骨誘導成分は、１００質量部の高分子ゲル成分に対して、１０〜８０質量部含んでいることが好ましく、４０〜７０質量部含んでいることがより好ましい。
【００４８】
また、本発明に係る骨誘導成分は、粒状（顆粒も含む）、フィラー状、髭状、多角形状、円柱状、円錐状、角錐状、多角柱状のいずれであってもよく、なかでも粒状、フィラー状、髭状、円柱状、多角柱状が好ましい。また、本発明に係る骨誘導成分の形状が、フィラー状、髭状、円柱状、多角柱状などの場合、長手方向の平均長さは特に制限されることはないが、例えば５〜１００μｍが好ましい。
【００４９】
前記長手方向の平均長さが５〜１００μｍであると、アスペクト比が増加して、骨止血組成物の強度が上昇し、骨の断面に対する固定力が上昇し、骨誘導成分を多く含有させることができ、特定のタンパク質との吸着特性が骨誘導しやすい。
【００５０】
本発明に係る骨誘導成分の形状が粒状である場合、当該骨誘導成分の１次粒子の平均粒子径は、１μｍ〜５ｍｍであることが好ましい。
【００５１】
前記１次粒子の平均粒子径が顆粒状である場合、すなわち基本的にｍｍ単位の大きさの場合は、顆粒同士の固定が可能になり安定した細胞保持担体として期待することができる。
【００５２】
また、本明細書において「１次粒子」とは、骨誘導成分、例えば上記の骨誘導成分などのリン酸カルシウムは、一般的に複数凝集しているが、その個々の粒子をいい、凝集体を構成する個々の粒子をいう。
【００５３】
なお、本明細書中において、「長さ」および「粒子径」とは、骨誘導成分の輪郭線上の任意の２点間の距離のうち、最大の距離Ｌを意味する。「平均長さ」および「平均粒子径」の値としては、走査型電子顕微鏡（ＳＥＭ）や透過型電子顕微鏡（ＴＥＭ）などの観察手段を用い、数〜数十視野中に観察される骨誘導成分の長さまたは粒子径の平均値として算出される値を採用するものとする。
【００５４】
なお、本発明に係る骨誘導体成分の形状（ＣａＰの形状）および長さは、走査型電子顕微鏡（Ｓｃａｎｎｉｎｇ Ｅｌｅｃｔｒｏｎ Ｍｉｃｒｏｓｃｏｐｅ：ＳＥＭ）によって観察した。装置は日立製作所製（Ｓ−４５００）を使用し、加速電圧は５〜２０ ｋＶで行なっている。また合成したＣａＰはカーボン製両面テープを用いて、アルミニウム製試料台に固定した。ＳＥＭ観察の前処理としてイオンスパッター（Ｅ−１０３０、日立製作所製）を用いてＰｔ−Ｐｄ蒸着を行なっている。
【００５５】
本発明に係る骨誘導成分であるリン酸系カルシウムは、市販のものでも合成してもよく特に制限されることはなく、リン酸カルシウムを合成する方法としては水熱合成，均一沈殿法，リフラックス法，寒天ゲル法，アルギン酸塩紡糸等の方法などの公知の方法を利用することができ、合成方法は制限されることはなく、所望の骨誘導成分の形状により合成法を選択することができる。尚、本発明ではウィスカー状の骨誘導成分は均一沈殿法により合成している。以下、ウィスカー状の骨誘導成分（リン酸系カルシウム）を一例にして、その合成方法の好ましい一例を記載するが、本発明の範囲はこれに限定されることはない。
【００５６】
本発明に係るウィスカー状の骨誘導成分（リン酸系カルシウム、以下ＨＡｐと称する）の化学組成（Ｃａ／Ｐ比）が、好ましくは１．６〜１．６７になるように、所定量硝酸カルシウム四水和物（Ｃａ（ＮＯ３）２・４Ｈ２Ｏ）、 所定量リン酸水素二アンモニウム（（ＮＨ４）２ＨＰＯ４）および所定量ｍｏｌ ｄｍ−３尿素（（ＮＨ２）２ＣＯ）を混合し、さらに濃ＨＮＯ３を加えて溶解して混合水溶液を調製した後、この混合水溶液に対して濃ＮＨ３を用いてｐＨを２〜５に調節したのち、前駆体溶液を得る。次いで、当該前駆体溶液を６０〜１２０℃で１６〜９６時間加熱して、ＨＡｐの前駆体を得たのち、６０〜１２０℃で４８〜９６時間加熱を行い、尿素の加水分解を利用したｐＨ制御によって、ウィスカー状のＨＡｐを生成させ、精製水で洗浄後、風乾して目的物のウィスカー状のＨＡｐを得ている。
【００５７】
本発明に係る骨止血組成物は、高分子ゲル成分と、人工骨助剤成分とを含むことが好ましく、高分子ゲル成分と、骨誘導成分と、人工骨助剤成分とを含むことがより好ましく、高分子ゲル成分と、骨誘導成分および人工骨助剤成分が複合体を形成して含まれていることが特に好ましい。
【００５８】
本発明に係る人工骨助剤成分としては、アルギン酸およびその塩（アルギン酸ナトリウム、アルギン酸カリウム、アルギン酸カルシウム、アルギン酸アンモニウム等）が好ましい。一般にアルギン酸は、β−Ｄ−マンヌロン酸とα−Ｌ−グルロン酸から成るポリウロン酸であり、本発明に使用できるアルギン酸は特に制限されることはないが、β−Ｄ−マンヌロン酸とα−Ｌ−グルロン酸とのユニット比（β−Ｄ−マンヌロン酸／α−Ｌ−グルロン酸）が、０．５〜２．５が好ましく、０．８〜１．５がより好ましい。
【００５９】
人工骨助剤成分としては、アルギン酸およびその塩を使用すると、アルギン酸およびその塩自体止血効果を備えているため血液凝固の即効性がよいと考えられる。
【００６０】
本発明に係る人工骨助剤成分は、骨誘導成分と複合体を形成していることが好ましい。より具体的には、人工骨助剤成分がＣａ架橋したゲル状の物質と骨誘導成分とが混合されたものが好ましい。すなわち、人工骨助剤成分としてアルギン酸およびその塩を使用した場合、アルギン酸はＣａ架橋したエッグボックス構造と呼ばれるゲル状を形成することができ、より多くの血液を吸収することができると考えられる。特に、骨誘導成分を多孔質体の構造である場合、人工骨助剤成分が当該多孔質体の内部に入り込み、細孔内もゲル状のアルギン酸で満たすことができるため、より多くの血液を吸収することができると考えられる。
【００６１】
また、本発明に係る人工骨助剤成分としてアルギン酸およびその塩を使用した場合、必要により二価の金属イオンを含む塩、特にＣａＣｌ２、ＣａＦ２などのハロゲン化カルシウムやＣａ（ＯＨ）２、Ｃａ（ＮＯ３）２、ＣａＳＯ４などのカルシウム含有塩を、当該アルギン酸およびその塩に対して、過剰に含有させることが好ましい。
【００６２】
これにより、アルギン酸はＣａ架橋したエッグボックス構造と呼ばれるゲル状を形成するため、より多くの血液を吸収できると考えられる。
【００６３】
本発明に係る人工骨助剤成分と骨誘導成分との複合体の合成方法は、特に制限されるものではなく公知の方法を利用することができ、本発明では好ましい一態様として骨誘導成分の多孔体を利用して、アルギン酸またはアルギン酸ナトリウムなどのアルギン酸塩１００質量部に対して、所望の形状の骨誘導成分（例えば、ウィスカー状のＣaＰや粒子状のＣaＰ）が３０〜７０質量％になるように水に添加してこれらを混合した後、ＣａＣｌ２、ＣａＦ２、などのハロゲン化カルシウムやＣａ（ＯＨ）２、Ｃａ（ＮＯ３）２、ＣａＳＯ４などのカルシウム含有塩が含まれた溶液を過剰量滴下させてゲル化させた後、当該ゲル化した物質を回収し、−１℃以下、好ましくは−２０℃以下で凍結させて凍結乾燥機を用いて減圧下、−１０〜−５０℃程度で６時間〜７２時間凍結乾燥させて目的物である人工骨助剤成分と骨誘導成分との複合体（ＨＡｐ−アルギン酸複合体）を調製している。
【００６４】
本発明に係る骨止血組成物は、高分子ゲル成分と、骨誘導成分と、人工骨助剤成分とを含むことが好ましく、前記骨止血組成物は、１００質量部の高分子ゲル成分に対して、１０〜８０質量部の骨誘導成分と、１０〜８０質量部の人工骨助剤成分とを含むことが好ましく、１００質量部の高分子ゲル成分に対して、５０〜７０質量部の骨誘導成分と、５０〜７０質量部の人工骨助剤成分とを含むことがより好ましい。
【００６５】
本発明に係る骨止血組成物の製造方法としては、上述したように公知の方法で合成したまたは市販の少なくとも１種以上のオキシアルキレンユニットを有するポリアルキレングリコール重合体１００質量部に対して、水を好ましくは１０〜６００質量部、より好ましくは２５〜４００質量部添加して、必要により所望の形状の骨誘導成分（例えば、リン酸系カルシウム）を好ましくは１０〜８０質量部、より好ましくは５０〜７０質量部と、必要により人工骨助剤成分（例えば、アルギン酸またはその塩）を好ましくは１０〜８０質量部、より好ましくは５０〜７０質量部と、さらに必要により前記所望の形状の骨誘導成分および／または人工骨助剤成分に代えて人工骨助剤成分と骨誘導成分との複合体（例えば、上記したＣａＰ−アルギン酸複合体）を好ましくは１０〜８０質量部、より好ましくは５０〜７０質量部と、を混合した後、当該混合物を２５℃〜１０５℃、好ましくは５０℃〜１００℃まで加熱しつつ、２０分〜７８０分、好ましくは８０分〜１８０分撹拌しながら混合して、水または溶媒を蒸発させ含水率が２０〜８０％になるように調整しポリアルキレングリコール重合体と水または溶媒とを構成成分とする高分子ゲル成分からなる骨止血組成物を調製することが好ましい。
【００６６】
また、本発明に係る骨止血組成物が高分子ゲルからなる場合（少なくとも１種以上のオキシアルキレンユニットを有するポリアルキレングリコール重合体と、水または溶媒とを構成成分）において、後述する実験例１にも示すように、高分子ゲルを調製するための加熱時間と質量パーセント濃度との関係を図１に示す。１４０℃で加熱・撹拌を行ったところ、ポリアルキレングリコール重合体の質量パーセント濃度は加熱時間の増加に伴って急激に増大し、７５分後に１００％を超え、さらに加熱を続けると、一部炭化している（図１（ａ））。そこで、加熱温度を１４０℃から１２０℃および１１０℃に下げたが、ポリアルキレングリコール重合体の質量パーセント濃度は１００％を超えて一部炭化している（図１（ｂ）および（ｃ））。さらに、加熱温度を１００℃まで下げたところ、ポリアルキレングリコール重合体の質量パーセント濃度は加熱の初期に急激に増加したのち、１００分経過後にはほぼ一定になったが、その時点で１００％を超えていた（図１ （ｄ））。加熱温度をさらに１００℃から８０℃に下げたところ、質量パーセント濃度は１００℃の場合と同様に１００％を超えた図１（ｅ））。さらに、加熱温度を８０℃から７０℃まで下げたところ、ポリアルキレングリコール重合体の質量パーセント濃度はほぼ１００％となった（図１（ｆ））。
【００６７】
この実験の結果から、高分子ゲルを調製するための温度は最終的にポリアルキレングリコール重合体の質量パーセント濃度がほぼ１００％となった１００℃前後、好ましくは８０℃、特に好ましいのが７０℃での加熱が最も適していることが確認されている。しかしながら、８０℃で加熱した場合と比較して高分子ゲル成分の合成に要する時間が長く、さらにポリアルキレングリコール重合体は粉体状であるため、当該ポリアルキレングリコール重合体と精製水とが均一に混合しにくい。そのため、高分子ゲル成分を比較的短時間に調製する場合には、７０℃よりも高い温度に設定する必要がある。
【００６８】
そこで、ポリアルキレングリコール重合体と水との混合物を最初に１００〜１２０℃まで加熱し、次いでポリアルキレングリコール重合体と精製水とが均一に混合されたと判断される５０％の質量パーセント濃度まで加熱・かく拌を続けたのち、６０〜８０℃まで温度を下げて高分子ゲルを調製する実験を行っている（実験例２）。最終的に確定した実験条件を時間の関数でプロットして図２に示す。まず、出発物質であるポリアルキレングリコール重合体を１００〜１２０℃で３０〜５０分加熱してポリアルキレングリコール重合体の質量パーセント濃度を４０％から５０％まで増加させた後、６０〜８０℃で５０〜７６０分加熱して、水分量を調整している。
【００６９】
したがって、本発明に係る骨止血組成物のより好ましい製造方法としては、上述したように公知の方法で合成したまたは市販の少なくとも１種以上のオキシアルキレンユニットを有するポリアルキレングリコール重合体１００質量部に対して、水を好ましくは１０〜６００質量部、より好ましくは２５〜４００質量部添加して、必要により所望の形状の骨誘導成分（例えば、リン酸系カルシウム）を好ましくは１０〜８０質量部、より好ましくは５０〜７０質量部と、必要により人工骨助剤成分（例えば、アルギン酸またはその塩）を好ましくは１０〜８０質量部、より好ましくは５０〜７０質量部と、さらに必要により前記所望の形状の骨誘導成分および／または人工骨助剤成分に代えて人工骨助剤成分と骨誘導成分との複合体（例えば、上記したＣａＰ−アルギン酸複合体）を好ましくは１０〜８０質量部、より好ましくは５０〜７０質量部と、を混合した後、１００〜１２０℃まで加熱しつつ、３０〜５０分撹拌しながら混合して前記ポリアルキレングリコール重合体の質量パーセント濃度を４０％から５０％まで増加させた後、次いで６０〜８０℃で５０〜７６０分加熱して水または溶媒を蒸発させて骨止血組成物を調製する方法が挙げられる。
【００７０】
尚、前記ポリアルキレングリコール重合体、水、骨誘導成分、人工骨助剤成分、および人工骨助剤成分と骨誘導成分との複合体を混合する順番は特に制限されず、前記ポリアルキレングリコール重合体と水とから高分子ゲル成分を調製した後、当該高分子ゲル成分にさらに骨誘導成分、人工骨助剤成分、および人工骨助剤成分と骨誘導成分との複合体を混合してもよく、同時に前記ポリアルキレングリコール重合体、水、骨誘導成分、人工骨助剤成分、および人工骨助剤成分と骨誘導成分との複合体を混合してもよい。
【００７１】
また、上記製造方法において粉体の状態で撹拌、混合または単なる撹拌、混合の方法としては、特に限定されず、例えば、ジェットミル、ライカイ機、ボールミル、ビーズミル、遊星ミル、ハイブリダイザー、メカノフュージョン、混練押出し機、高速回転ミルなどを使用することができ、好適にはライカイ機、ボールミル、遊星ミル、高速回転ミルが使用され、より好適には高速回転ミルが使用される。
【００７２】
本発明に係る骨止血組成物の稠度は、１５〜２０ｍｍが好ましく、１７．５〜１８．５ｍｍがより好ましい。
【００７３】
当該骨止血組成物の稠度が１５〜２０ｍｍの範囲であると、手術の際は手でこねて使用されることから、操作性に優れる。尚、本発明に係る骨止血組成物の稠度は、ＪＩＳ Ｔ ６６０２−１９９３の４・３の規定のおもりを質量１００ｇから質量５００ｇに変更した以外は同一の測定方法に準拠したものである。
【００７４】
本発明の第二は、上記の本発明の骨止血組成物を、５〜３０時間凍結乾燥して吸水量１００〜７００％に調整されたものであり、１０〜２４時間凍結乾燥して吸水量２００〜６００％に調整されたものがより好ましい。
【００７５】
凍結乾燥することにより長期保存性に優れ、かつ使用時ゲルとして使用する際に溶媒を選ばないため、水のみならず液体薬剤、サイトカインなど高濃度での薬物保持が可能となる。
【００７６】
また、ここでいう吸水量とは、当該骨止血組成物の質量に対して最大吸収できる血液の量の割合をいう。
【実施例】
【００７７】
以下、本発明を実施例および比較例を参照して具体的に説明する。尚、本発明は、上記の実施形態および下記の実施例に限定されるものではない。これらは、例示であり、本発明の特許請求の範囲に記載された技術的思想と実質的に同一な構成を有し、同様な作用効果を奏するものは、いかなるものであっても本発明の技術的範囲に包含される。
【００７８】
「止血組成物の調製」
（ゲル成分の合成）
図８に示すように、エチレンオキサイドとプロピレンオキサイドとのランダム共重合体（エチレンオキサイドユニット：プロピレンオキサイドユニットの重合比＝９：１〜７：３）に、精製水を添加し、当該精製水と当該ランダム共重合体の総質量が全体の２０％になるように混合した後に、熱電対を挿入して７０〜１００℃の範囲で薬さじで加熱、攪拌し、精製水を蒸発させることにより含水率が２０〜５０％のゲルをそれぞれ得た。
【００７９】
すなわち、図８に示す条件で調製した各ゲルをＳ１〜Ｓ９として、それぞれの分子量（重量平均分子量）、分子量分布、稠度、止血時間および毒性などを評価した。
【００８０】
尚、以下、Ｓ１〜Ｓ９は、図８の組成を示す各骨止血組成物であることを意味する。
【００８１】
また、図８において、ＰＯ／ＥＯの比は、エチレンオキサイドユニット／プロピレンオキサイドユニットを示すのである。
【００８２】
（ウィスカー状のＣａ１０（ＰＯ４）６（ＯＨ）２の合成）
ＨＡｐの化学組成（Ｃａ／Ｐ比：１．６）になるように、０．１６７ ｍｏｌ ｄｍ−３硝酸カルシウム四水和物（Ｃａ（ＮＯ３）２・４Ｈ２Ｏ）， ０．１００ ｍｏｌ ｄｍ−３リン酸水素二アンモニウム（（ＮＨ４）２ＨＰＯ４）および０．５００ ｍｏｌ ｄｍ−３尿素（（ＮＨ２）２ＣＯ）を混合し、さらに濃ＨＮＯ３を加えて溶解した。この混合水溶液に対して濃ＮＨ３を用いてｐＨを２．２〜４．５に調節したのち、前駆体溶液の全量を５００ｃｍ３とした。この前駆体溶液３００ｃｍ３を約８０℃で２４ｈ加熱して、ＨＡｐの前駆体を得たのち、９０℃で７２ ｈ加熱を行い、尿素の加水分解を利用したｐＨ制御によって、ウィスカー状のＣａ１０（ＰＯ４）６（ＯＨ）２を生成した。生成物は精製水で洗浄後、風乾した。また、粒状のＣａ１０（ＰＯ４）６（ＯＨ）２は、市販のもの（太平化学産業製ＨＡＰ−１００，ｎ−ＨＡｐ）を利用した。
【００８３】
（ＣａＰ−ＡＧの合成）
α−Ｄ−マンヌロン酸／β−Ｌ−グルロン酸の比（Ｍ／Ｇ比）が０．９のアルギン酸ナトリウム（ＡＧ）について、ＡＧの濃度が２．０質量％となるように精製水に溶解した。上記合成したウィスカー状のＣａ１０（ＰＯ４）６（ＯＨ）２および超微粉体Ｃａ１０（ＰＯ４）６（ＯＨ）２（太平化学産業製ＨＡＰ−１００， ｎ−ＨＡｐ）に対して２．０質量％のＡＧをＣａ１０（ＰＯ４）６（ＯＨ）２／ＡＧの質量比が１．０の割合になるように混合した。つぎに、これらをシリンジと霧吹きを用いて１ｍｏｌ ｄｍ−３ＣａＣｌ２溶液に一滴ずつ滴下してゲル化させた。得られた球状ゲルを回収し、続いて−８０℃のフリーザーまたは−２０℃の冷凍庫で凍結させたのち、凍結乾燥機（東京理化器械株式会社 ＥＹＥＬ４）を用いて１３Ｐａの減圧下で−５０℃で２４ｈ凍結乾燥させ、それぞれの形状のＣａ１０（ＰＯ４）６（ＯＨ）２−ＡＧ複合体（図９ではアルギン酸−ＣａＰ複合体と称している）を作製した。
【００８４】
（ＳＡ１〜ＳＡ４の調製）
上記で得られたＳ１〜Ｓ９と、それぞれの形状のＣａ１０（ＰＯ４）６（ＯＨ）２−ＡＧ複合体、粒状のＣａ１０（ＰＯ４）６（ＯＨ）２およびウィスカー状のＣａ１０（ＰＯ４）６（ＯＨ）２とを図９に示す組成で混合し、以下に示す止血効果の測定を行った。
【００８５】
また、図９に示す条件で調製した各ゲルをＳＡ１〜ＳＡ４として、それぞれの止血時間および毒性などを評価した。尚、以下、ＳＡ１〜ＳＡ４は、図９の組成を示す各骨止血組成物であることを意味する。
【００８６】
「評価方法」
（稠度）
稠度測定の方法をＪＩＳ Ｔ ６６０２−１９９３の４・３の規定に示すように、アクリル板にＳ１〜９をそれぞれ約１ｇ挟み、５００ｇの分銅（ｃ）をのせて、広がったゲルの最大長さを方眼用紙測定した。なお、おもりが１００ｇであると〜であるため、ＪＩＳ Ｔ ６６０２−１９９３の４・３の規定のおもりを質量１００ｇから５００ｇに変更した。
【００８７】
（止血時間）
作製した試料の止血効果を評価するために以下の実験をおこなった。止血測定法を図３に示す。市販のＣａＰ多孔体３（ボーンフィル 登録商標 ＨＯＹＡ製）（気孔率７０ ％、気孔径２００μｍ）の上に０．１ｇの上記で得られた各止血組成物（Ｓ１〜Ｓ９）２（； ９ ×９ ×１ ｍｍ３）（断面積は９×９）を接着させた。これらを精製水１または擬似血液１が入ったシャーレーの中に入れ精製水と擬似血液（Ｌａｅｒｄａｌ ＢＬＯＯＤ−ＣＯＬＯＲＥＤ ＣＯＮＣＥＮＴＲＡＴＩＯＮ）とをそれぞれ浸透させた。精製水の場合は、試料に塩化コバルト紙をのせ、青色から赤色に変化した際の時間を止血時間として測定した。擬似血液の場合は、試料の上にキムワイプ４を載せ、浸透して色の変化が見られた時間を止血時間と定義した。また、本発明の骨止血組成物は、なお、動物の血液は血液が凝固するため使用不可であった。
【００８８】
これら実験結果を図４および図５に示す。ここで図４は、シャーレーの中に精製水１をいれた場合のコントロール実験であり、図５は、シャーレーの中に擬似血液１をいれた場合を示すものである。図４において、（a）は市販の骨止血剤であるボーンワックス（ネオトップ 登録商標）（ｂ）は上記調製した本発明の骨止血組成物であるＳ４、（ｃ）は上記調製した本発明の骨止血組成物であるＳＡ１、（ｄ）は上記調製した本発明の骨止血組成物であるＳＡ２である。
【００８９】
また、図５において、（a）は市販の骨止血剤であるボーンワックス（ネオトップ 登録商標）（ｂ）は上記調製した本発明の骨止血組成物であるＳ４、（ｃ）は上記調製した本発明の骨止血組成物であるＳＡ１、（ｄ）は上記調製した本発明の骨止血組成物であるＳＡ２である。
【００９０】
図６に、本発明に係る骨止血組成物の止血効果のキムワイプの経時的変化を示す写真を示す。図６において（a）は上記調製した本発明の骨止血組成物であるＳＡ１を示し、（ｂ）は上記調製した本発明の骨止血組成物であるＳＡ２を示し、（ｃ）は上記調製した本発明の骨止血組成物であるＳ２を示す。
【００９１】
（毒性）
培養面積２５ ｃｍ３の組織培養フラスコ（ＩＷＡＫＩ製）を用いて、３７℃±０．０２℃、５ ％ＣＯ２雰囲気下のインキュベーター内においてＭＣ３Ｔ３−Ｅ１細胞の培養を行った。培地には抗生物質である５０μｇゲンタマイシンおよび２５０μｇカナマイシンを添加し、さらにウシ胎児血清（ＦＢＳ）を１０ ｖｏｌ％ 添加して作製したα−最小必須培地（α−ＭＥＭ（＋））を用いた。培地は３ｄおきに交換した。７ｄ後にフラスコ内でコンフルエントに達した細胞を、０．５ ％トリプシン−ＥＤＴＡを用いて剥がした。細胞の洗浄にはリン酸塩緩衝液（ＰＢＳ（−））を用いた。この細胞を１５ｃｍ３遠心チューブで遠心分離を行い、新たにα−ＭＥＭを加えて細胞懸濁液を調製した。この溶液の細胞濃度を血球計算版（トーマ）で測定した。
【００９２】
上記骨止血組成物１〜９（Ｓ１〜Ｓ９）のそれぞれを精製水に溶解させオートクレーブで滅菌し、当該組成物を１ｗｅｌｌに０．００１ ｇとなるように加えた１×１０４個のＭＣ３Ｔ３−Ｅ１細胞を細胞培養用２４ ｗｅｌｌポリスチレンプレートに播種して、細胞数を測定した。なお、トランズウェルを設置した日を０ｄとした。継代のときと同様、ＭＣ３Ｔ３−Ｅ１細胞は３７℃±０．０２℃、５ ％ ＣＯ２雰囲気下のインキュベーター内で培養した。種々の期間培養した細胞は、継代のときと同様の操作でフラスコからはがし浮遊させたのち、細胞数を計測した。また、計測する前には光学顕微鏡（島津理化製 倒立顕微鏡ＡＥ ３１）による細胞の形態観察を行なった。そのうち代表的なものとしてＳ２の結果を図６に示す。また、図６において、（ａ）はコントロール、（ｂ）はＳ２であり、１ｄは一日後、４ｄは４日後を示す。この結果をみると培養期間１ｄには球状の細胞が存在していたが、４ｄ経過後には増殖していた。コントロールおよび上記Ｓ１〜Ｓ９のいずれも同様の増殖傾向が見られた。上記の結果から、本発明に係る骨止血組成物は細胞の増殖に対して特に阻害効果はないことが確認された。
【００９３】
（実験例１）
エチレンオキサイドとプロピレンオキサイドとのランダム共重合体（エチレンオキサイドユニット：プロピレンオキサイドユニットの重合比＝８：２）に、精製水を添加し、当該精製水と当該ランダム共重合体との総質量が全体の２０％になるように混合した後に、熱電対を挿入して７０℃（ｆ）、８０℃（ｅ）、１００℃（ｄ）、１１０℃（ｃ）、１２０℃（ｂ）、および１４０℃（ａ）のそれぞれの温度条件において、薬さじで加熱、攪拌し、精製水を蒸発させることにより、時間と高分子ゲル成分における前記ランダム共重合体の質量％とを関係を調べる実験を行った（図１ 参照）。
【００９４】
（実験例２）
エチレンオキサイドとプロピレンオキサイドとのランダム共重合体（エチレンオキサイドユニット：プロピレンオキサイドユニットの重合比＝８：２）に、精製水を添加し、当該精製水と当該ランダム共重合体との総質量が全体の２０％になるように混合した後に、熱電対を挿入して１００℃で１８５分間加熱・攪拌（a）した後、次いで７０℃で９６０分間（ｂ）加熱・攪拌して、精製水を蒸発させることにより、時間と高分子ゲル成分における前記ランダム共重合体の質量％とを関係を調べる実験を行った（図２参照）。
【００９５】
（参考実験）
高分ゲル成分の調製：エチレンオキサイドとプロピレンオキサイドとのランダム共重合体（エチレンオキサイドユニット：プロピレンオキサイドユニットの重合比＝８：２）の濃度が２０ ｍａｓｓ％となるように水と混合したのち，１００℃で１８５ ｍｉｎ，ついで７０℃で９６０ ｍｉｎ加熱して調製した。
【００９６】
エチレンオキサイドとプロピレンオキサイドとのランダム共重合体（エチレンオキサイドユニット：プロピレンオキサイドユニットの重合比＝８：２）とエチレンオキサイド（ＥＯ）との複合ゲルの調製：ＥＯには分子量が１００万（ＥＯ（１００））および５００万（ＥＯ（５００））のものを使用し，これらのＥＯとエチレンオキサイドとプロピレンオキサイドとのランダム共重合体に対して水を添加し，上述と同じ条件で３種類のゲルを調製した。ＥＰＯ（エチレンオキサイドとプロピレンオキサイドとのランダム共重合体とも称する），ＥＯおよび水の混合比（質量）はＥＰＯ ／ ＥＯ（１００） ／ 水 ＝ ２５ ： １５ ： ６０ （２５ＥＰＯ−１５ＥＯ（１００））， ＥＰＯ ／ ＥＯ（５００） ／ 水 ＝ ２５ ： １５ ： ６０ （２５ＥＰＯ − １５ＥＯ（５００））およびＥＰ ／ ＥＯ（１００） ／ 水 ＝ １５ ： １５ ： ７０ （１５ＥＰＯ−１５ＥＯ（１００））であった。ＣａＰ−Ｃｏｌ（コラーゲン）複合体の調製：Ｃｏｌゲル由来のＣｏｌ繊維とリン酸緩衝液との懸濁液に対して，９ ｍｍｏｌ・ｄｍ−３ ＣａＣｌ２溶液を添加して３０℃で２４ｈ加熱して複合体を調製した。評価：稠度の測定では，０．１ｇの試料をアクリル板に挟み，５００ｇの荷重をかけて広がった長さを調べた。止血時間の測定では，１ｃｍ３の立方体状ＣａＰ（気孔径：２００μｍ）の上面に試料を設置し，下面を擬似血液に浸し，毛管現象で上昇してきた疑似血液の到達時間を調べた。また、ＳＢＦ溶液に試料を所定時間浸漬した後の質量を測定し，浸漬前の質量を基に溶解率を求めた。これらの結果を図１０と図１１に示す。
【産業上の利用可能性】
【００９７】
医療用途、特に骨からの出血を抑制する。
【符号の説明】
【００９８】
１ 精製水または擬似血液、
２ 止血組成物、
３ ＣａＰ多孔体、
４ キムワイプ。
【技術分野】
【０００１】
本発明は、外科手術の止血剤の技術分野において、特に、骨からの出血を抑制または防止する骨止血組成物に関連する。
【背景技術】
【０００２】
骨折や手術などで切開された骨の断面や骨髄からの出血は大量であるため、現在、骨折または切断した骨からの出血を止める方法としては、（１）非吸収性の蜜蝋を主成分とした“ボーンワックス”や“ネストップ”を手動で適度な軟度に調整して出血表面に塗布する方法、（２）コラーゲン等のゼラチン質を出血表面に塗布する方法、（３）骨の切開の際に生じる自己の骨粉を非吸収性セメントと混合してそれを充填する方法、および（４）電気メスなど行われている。しかし、いずれも即効的な止血に乏しく、さらに健康な組織に代わって瘢痕組織が生じ欠損部を埋めて修復する皮膚、筋肉、内臓などの修復プロセスとは異なり、骨の修復は、骨に損傷が生じた場合には瘢痕組織ではなく、新しい骨の組織に置き換わる。そのため、上記非吸収性の材料を切断された骨断面などに留置すると、生体内で分解されないため骨形成を阻害する物理的バリアとして働き、骨形成を阻害・抑制する原因となる。
【０００３】
また、上記コラーゲン等のゼラチン質を含むゼラチン製剤は、４５倍量の血液を吸収し膨潤することで患部に圧迫効果を示し、かつ吸収された血液中の血小板が凝固を促進させるため、現在、骨止血に最適な薬剤として使用されているが、当該ゼラチン自体に止血作用を有しておらず、かつ即効性に乏しく、感染の機会を増やすという問題がある。
【０００４】
また、上記の“ボーンワックス”などの蜜蝋を主成分とした骨止血を使用する場合、蜜蝋自体は動物性由来であるため、蜜蝋を主成分とする骨止血剤を塗布した周囲の隣接組織に異物反応を起こし、マクロファージー、異物巨細胞、多形核白血球、リンパ球などが局部的に集積して、炎症や浮腫が起こる問題もある。さらに、その周囲を肉芽細胞ないし線維性結合組織を取り囲み、それが異物性肉芽腫となる場合もある。そこで、動物性由来でなく操作性や安全性の観点から動物性由来の物質を軽減した骨止血剤が注目されており、例えば特許文献１および非特許文献１にかかる問題を解決した骨止血剤が記載されている。
【０００５】
特許文献１では、塩化第２スズを触媒に用いて、分子量２０００〜６０００の範囲にあるポリエチレングリコール存在下、Ｄ，Ｌ−ラクチドを開環重合させ、Ｄ，Ｌ−乳酸ユニットとエチレンオキサイドユニットを有するブロック共重合体を合成し、この共重合体をウサギの左腸骨の骨髄面に塗布し、３０分間状態を観察した結果塗布面には血液の漏出は見られず完全に止血していることを確認している。
【０００６】
非特許文献１では、ポリエチレングリコールとコラーゲンとの複合材料を骨用止血材として、骨損失部に留置することが記載されている。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００７】
【特許文献１】特開平０７−１１８１５７号公報
【非特許文献１】Ｊ．Ｂｉｏｍｅｄ．Ｍａｔｅｒ．Ｒｅｓ．１９９８ Ｍａｒ ５， ３９（３） ３５８−６３
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００８】
しかし、特許文献１では、ポリエチレングリコールとポリ乳酸とのブロック共重合体を使用しており、比較例１および２ではポリ乳酸とポリエチレングリコールとユニット比が５２：４８〜３０：７０の範囲外のブロック共重合体で行っており、止血効果がないことが示されている。そのため特許文献１の実施例と比較例との差異を鑑みると、ポリエチレングリコールユニットとポリ乳酸ユニットとの比と、分子量が所定の範囲であることが重要であり、３０分間状態を観察した結果塗布面には血液の漏出は見られず完全に止血されていたと記載されている。しかしながら、当該所定のブロック共重合体をどの程度の量どのような形態で塗布しているのかは不明であり、また骨の断面積も不明であるため、特許文献１の発明の効果の優位性を見出せない。
【０００９】
また、非特許文献１では、ポリエチレングリコールとコラーゲンとの複合体を使用しているため、確かに骨の出血の吸収には優れているが、止血後１ヶ月ほどは、弱い炎症が続く問題があり、骨の再生速度に比べて分解吸収速度が遅いので、依然として骨組織の再生を阻害してしまう。
【００１０】
そこで、本発明は、骨組織の再生を阻害せず、かつ即効性に優れた骨止血剤を提供することを目的とする。
【課題を解決するための手段】
【００１１】
本発明は、少なくとも１種以上のオキシアルキレンユニットを有するポリアルキレングリコール重合体から形成され、２０〜８０％の含水率を有する高分子ゲル成分を含む骨止血組成物を提供する。
【発明の効果】
【００１２】
本発明に係る骨止血組成剤は、非架橋のゲル成分で構成されていることから、生体内で容易に分解することができるため、止血しながら骨誘導することができる。
【００１３】
本発明に係る骨止血組成物は、生体適合性および血液適合性が高いポリアルキレングリコール重合体から形成されているため血液凝固の即効性がよい。本発明は完全合成系からなるため殺菌・成型などの取り扱いがしやすい。
【図面の簡単な説明】
【００１４】
【図１】図１は、本発明の高分子ゲル成分の調製のための加熱時間とポリアルキレングリコール重合体の質量％との関係を示す図である。
【図２】図２は、本発明の高分子ゲル成分の調製のための加熱時間とポリアルキレングリコール重合体の質量％との関係を示す図である。
【図３】図３は、止血効果の測定方法を示す概略図である。
【図４】図４は、市販の骨止血剤と本発明の骨止血組成物との止血効果の比較実験のコントロールを示した実験結果である。
【図５】図５は、市販の骨止血剤と本発明の骨止血組成物との疑似血液を用いた止血効果の比較実験を示した実験結果である。
【図６】図６は、本発明の止血組成物の毒性評価を示す細胞の形態観察の光学顕微鏡像である。
【図７】図７は、本発明の止血組成物の止血効果を示す写真である。
【図８】本発明の実験結果をまとめた表である。
【図９】本発明の実験結果をまとめた表である。
【図１０】図１０は、ポリ（オキシエチレンユニット（ＥＯ）（７５ｍｏｌ％）−オキシプロピレンユニット（ＰＯ）（２５ｍｏｌ％））ランダム共重合体とエチレンオキサイドの複合ゲルの稠度に及ぼすＣａＰの影響を示す実験結果である。
【図１１】ポリ（オキシエチレンユニット（ＥＯ）（７５ｍｏｌ％）−オキシプロピレンユニット（ＰＯ）（２５ｍｏｌ％））ランダム共重合体とエチレンオキサイドとの複合ゲルの稠度に及ぼすＣａＰ−コラーゲン複合体添加の影響を示す実験結果である
【発明を実施するための形態】
【００１５】
本発明の第一は、少なくとも１種以上のオキシアルキレンユニットを有するポリアルキレングリコール重合体から形成され、２０〜８０％の含水率を有する高分子ゲル成分を含む骨止血組成物である。
【００１６】
本発明に係る骨止血組成剤は、非架橋のゲル成分で構成されていることから、生体内で容易に分解することができるため、止血しながら骨誘導することができる。より詳細には、本発明に係る骨止血組成物のマトリックスであるポリアルキレングリコールは、アルキレン基がエーテル結合されたオキシアルキレンユニットを繰り返し単位とする構造の高分子であり、例えば、ポリエチレングリコール、ポリプロピレングリコール、またはポリオキシエチレン‐オキシプロピレン重合体などの比較的アルキレン基鎖が短い重合体は、両親媒性であり、血液適合性、生体適合性に優れ、かつ無毒性であることが知られている。なかでも本発明に係る骨止血組成剤は、少なくとも１種以上のポリアルキレングリコール重合体と溶媒とが均一に混合されていることでポリアルキレングリコール重合体同士が絡み合い、凝集した非架橋の高分子ゲルとして、骨や骨髄からの血液を吸収することができる。さらに、本発明は、非架橋の高分子ゲルをマトリックスであることに起因して、骨組織の成長速度より当該高分子ゲルの分解速度が速いため骨組織の成長を阻害することなく骨誘導を促すことができる。
【００１７】
本発明に係るオキシアルキレンユニットは、以下の式１および式２からなる群から選択される少なくとも一つであることが好ましい。
【００１８】
（式１）
【化１】
【００１９】
上記式１中、ｈは１から１０までの整数であることが好ましく、より好ましくは、上記式１中、ｈは２から５までの整数であり、さらに好ましくは、上記式１中、ｈは２から３までの整数である。
【００２０】
（式２）
【化２】
【００２１】
上記式１中、ｈは１から１０までの整数であり、かつＲは水素、メチル基、エチル基、プロピル基、ブチル基、ペンチル基およびへキシル基からなる群から選択される少なくとも一つのアルキル基で示されることが好ましく、より好ましくは、上記式１中、ｈは２から５までの整数であり、かつＲは水素、メチル基、エチル基、およびプロピル基からなる群から選択される少なくとも一つのアルキル基で示され、さらに好ましくは、上記式１中、ｈは２から３までの整数であり、かつＲは水素、メチル基、およびエチル基からなる群から選択される少なくとも一つのアルキル基で示される。
【００２２】
また、本発明に係るオキシアルキレンユニットの具体的な名称は、オキシメチレンユニット、オキシエチレンユニット、オキシプロピレンユニット、オキシブチレンユニット、オキシペンチレンユニット、オキシへキシレンユニット、オキシヘプチレンユニット、オキシオクチレンユニット、オキシノニレンユニット、およびオキシデシレンユニットが挙げられ、オキシエチレンユニット、オキシプロピレンユニット、オキシブチレンユニット、オキシペンチレンユニットが好ましい。また、本発明に係るオキシアルキレンユニットを有するポリアルキレングリコール重合体は、これらオキシアルキレンユニットを１種類から構成されるホモポリマーでも、２種類以上組み合わせてなるコポリマーであってもよいが、２種類以上組み合わせてなるコポリマーであることがより好ましい。
【００２３】
また、本発明に係るポリアルキレングリコール重合体がコポリマーである場合、交互重合体、ランダム重合体が好ましい。
【００２４】
本発明に係る少なくとも１種以上のオキシアルキレンユニットを有するポリアルキレングリコール重合体は、以下の式３：
【００２５】
式３
【化３】
【００２６】
（上記式３中、ｍ、ｎ、ｐおよびｑはそれぞれ独立して、ｍは２以上５以下の整数であり、ｎは１０００以上４００００以下の整数であり、ｐは１以上５以下の整数であり、Ｑは６００以上２００００以下の整数であり、Ｒは、水素、メチル基、エチル基、およびプロピル基からなる群から選択される少なくとも一つのアルキル基である）
で示されるランダム共重合体であることが好ましく、より好ましくは、上記式２中のｍ、ｎ、ｐおよびｑはそれぞれ独立して、ｍは２以上４以下の整数であり、ｎは５０００以上２００００以下の整数であり、ｐは２以上４以下の整数であり、Ｑは９００以上１５０００以下の整数であり、特に好ましくは、上記式中のｍ、ｎ、ｐおよびｑはそれぞれ独立して、ｍは２であり、ｎは５５００以上９０００以下の整数であり、ｐは３であり、Ｑは１５００以上１００００以下の整数である。またもっとも好ましいのは以下の式４で示されるランダム共重合体であり、式４中の記号である重合度ｎ、Ｑおよび置換基Ｒは、上記と同様である。
【００２７】
式４
【化４】
【００２８】
また、本発明に係る少なくとも１種以上のオキシアルキレンユニットを有するポリアルキレングリコール重合体は、オキシエチレンユニットと、オキシプロピレンユニットとから構成された二元のランダム共重合体が特に好ましい。また、この場合のオキシエチレンユニットと、オキシプロピレンユニットとの比率（オキシエチレンユニット／オキシプロピレンユニット）は、１〜９が好ましく、１．５〜６がより好ましく、２〜４がさらに好ましい。
【００２９】
本発明に係るポリアルキレングリコール重合体は、重量平均分子量５００００〜２００００００であることが好ましく、重量平均分子量３０００００〜１８０００００であることがより好ましく、重量平均分子量５０００００〜１５０００００であることが特に好ましい。
【００３０】
ポリアルキレングリコール重合体の重量平均分子量５００００未満だと骨止血組成物として成型できず、操作性が悪い。また、ポリアルキレングリコール重合体の分子量が２００００００を超えると骨止血組成物が固くなり操作性が悪い。
【００３１】
本発明に係るポリアルキレングリコール重合体は、分子量分布１．５〜２０であることが好ましく、分子量分布が２．５〜１８であることがより好ましく、分子量分布が６〜１７であることが特に好ましい。
【００３２】
本発明に係る高分子ゲル成分は、前記ポリアルキレングリコール重合体と、エチレンオキサイド、プロピレンオキサイド、ブチレンオキサイド、ペンチレンオキサイド、へキシレンオキサイド、ヘプチレンオキサイド、オクチレンオキサイド、ノニレンオキサイド、およびデシレンオキサイドからなる群から選択される少なくとも一つのアルキレンオキサイドを含み、２０〜８０％の含水率を有する高分子ゲル成分を含むことが好ましい。
【００３３】
尚、本発明に係るポリアルキレングリコールの合成方法は、公知の合成方法を使用することができ、特に制限されることはなく、エチレンオキサイド、プロピレンオキサイド、ブチレンオキサイド、ペンチレンオキサイド、へキシレンオキサイド、ヘプチレンオキサイド、オクチレンオキサイド、ノニレンオキサイド、およびデシレンオキサイドからなる群から選択される少なくとも一つのアルキレンオキサイドを開環して、鉱酸等の酸触媒や水酸化ナトリウム（ＮａＯＨ）、水酸化カリウム（ＫＯＨ）等のアルカリ触媒などの存在下で重合することができ、なかでもエチレンオキサイド、プロピレンオキサイド、ブチレンオキサイド、ペンチレンオキサイドからなる群から選択される一つと、エチレンオキサイド、プロピレンオキサイド、ブチレンオキサイド、ペンチレンオキサイドからなる群から選択される一つと、を混合して重合することが好ましく、エチレンオキサイドと、プロピレンオキサイドとを混合して重合することが特に好ましい。
【００３４】
尚、重量平均分子量の測定方法は、ＧＰＣ、光散乱法、粘度測定法、質量分析法（ＴＯＦＭＡＳＳなど）が挙げられ、本発明に係るポリアルキレングリコール重合体の分子量は、ＧＰＣにより重量平均分子量を測定している。
【００３５】
本発明に係る高分子ゲル成分は、少なくとも１種以上のオキシアルキレンユニットを有するポリアルキレングリコール重合体と、溶媒とから構成されていることが好ましく、必要により塩を含んでいることが好ましい。
【００３６】
本発明に係る高分子ゲル成分は、含水率が２０〜８０％であり、３０〜７５％であることがより好ましく、４０〜７０％であることが特に好ましい。
【００３７】
含水率が２０〜８０％の範囲であると、他の成分との混和が容易であり、操作性に優れ複雑な骨断面形状への付着特性が高く、高い止血効果が期待できる。
【００３８】
なお、本発明に係る高分子ゲル成分の含水率は、−２０〜−５０℃、２４時間凍結乾燥したものを乾燥状態とし、また、製造直後から２５℃、１０分静置したものを湿潤状態として各質量を測定し、以下の数式１で定義している。
【００３９】
【数１】
【００４０】
また、上記塩は、生体に許容される塩であれば特に制限されることはなく、水酸化ナトリウム、水酸化カリウムだけではなく、公知の緩衝溶液に使用される塩であれば制限されない。
【００４１】
本発明に係る高分子ゲル成分は、さらに液体薬剤、サイトカイン（ＴＧＦβ、ＦＧＦ、ＢＭＰ）を含んでもよい。
【００４２】
本発明に係る骨止血組成剤は、高分子ゲル成分と、骨誘導成分と、を含むことが好ましい。
【００４３】
本発明に係る骨止血組成剤に、骨誘導成分や人工骨助剤成分が含有されていると、骨止血だけではなく、骨誘導をより促進することができる。
【００４４】
本発明に係る骨誘導成分は、リン酸系カルシウムが好ましく、リン酸４カルシウムＣａ４Ｏ（ＰＯ４）２、水酸アパタイトＣａ１０（ＰＯ４）６（ＯＨ）２、リン酸８カルシウムＣａ８Ｈ２（ＰＯ４）６・５Ｈ２Ｏ、リン酸２カルシウム２水和物ＣａＨＰＯ４・２Ｈ２Ｏ、リン酸２カルシウムＣａＨＰＯ４、ピロリン酸カルシウムＣａ２Ｐ２Ｏ７、ピロリン酸カルシウム２水和物Ｃａ２Ｐ２Ｏ８・２Ｈ２Ｏ、リン酸７カルシウムＣａ７（Ｐ５Ｏ１６）２、リン酸２水素カルシウムＣａ４Ｈ２Ｐ６Ｏ２０、リン酸１カルシウム・２水和物Ｃａ（Ｈ２ＰＯ４）２・Ｈ２Ｏ、およびメタリン酸カルシウムＣａ（ＰＯ３）２からなる群から選択される少なくとも一つを骨誘導成分として含むことがより好ましい。
【００４５】
本発明に係る骨誘導成分は、多孔質体が好ましく、この際の骨誘導成分のＢＥＴ比表面積は、生体内で骨成分が溶解しやすい範囲または後述する人工骨助剤成分と複合体を形成しやすい範囲であればよいが、好ましくは０．５〜９０ｍ２／ｇ、より好ましくは３０〜６０ｍ２／ｇとするのがよい。前記比表面積が、０．５〜９０ｍ２／ｇであると、体内でのタンパク質の吸着により高い細胞吸着を期待できる。
【００４６】
なお、本発明に係る骨誘導体成分（ＣａＰ）の比表面積は、吸着ガスに窒素を用いてＢＥＴ（Ｂｒｕｎａｕｅｒ−Ｅｍｍｅｔｔ−Ｔｅｌｌｅｒ）法により測定した。装置は日本ベル株式会社製のＢＥＬＳＯＲＰ−ｍｉｎを使用している。測定には、約０．４ｇの粉体状の骨誘導体成分を使用している。死体積（Ｄｅａｄ Ｖｏｌｕｍｅ）の測定はヘリウムガスを用いて行なっている。
【００４７】
また、前記骨誘導成分は、１００質量部の高分子ゲル成分に対して、１０〜８０質量部含んでいることが好ましく、４０〜７０質量部含んでいることがより好ましい。
【００４８】
また、本発明に係る骨誘導成分は、粒状（顆粒も含む）、フィラー状、髭状、多角形状、円柱状、円錐状、角錐状、多角柱状のいずれであってもよく、なかでも粒状、フィラー状、髭状、円柱状、多角柱状が好ましい。また、本発明に係る骨誘導成分の形状が、フィラー状、髭状、円柱状、多角柱状などの場合、長手方向の平均長さは特に制限されることはないが、例えば５〜１００μｍが好ましい。
【００４９】
前記長手方向の平均長さが５〜１００μｍであると、アスペクト比が増加して、骨止血組成物の強度が上昇し、骨の断面に対する固定力が上昇し、骨誘導成分を多く含有させることができ、特定のタンパク質との吸着特性が骨誘導しやすい。
【００５０】
本発明に係る骨誘導成分の形状が粒状である場合、当該骨誘導成分の１次粒子の平均粒子径は、１μｍ〜５ｍｍであることが好ましい。
【００５１】
前記１次粒子の平均粒子径が顆粒状である場合、すなわち基本的にｍｍ単位の大きさの場合は、顆粒同士の固定が可能になり安定した細胞保持担体として期待することができる。
【００５２】
また、本明細書において「１次粒子」とは、骨誘導成分、例えば上記の骨誘導成分などのリン酸カルシウムは、一般的に複数凝集しているが、その個々の粒子をいい、凝集体を構成する個々の粒子をいう。
【００５３】
なお、本明細書中において、「長さ」および「粒子径」とは、骨誘導成分の輪郭線上の任意の２点間の距離のうち、最大の距離Ｌを意味する。「平均長さ」および「平均粒子径」の値としては、走査型電子顕微鏡（ＳＥＭ）や透過型電子顕微鏡（ＴＥＭ）などの観察手段を用い、数〜数十視野中に観察される骨誘導成分の長さまたは粒子径の平均値として算出される値を採用するものとする。
【００５４】
なお、本発明に係る骨誘導体成分の形状（ＣａＰの形状）および長さは、走査型電子顕微鏡（Ｓｃａｎｎｉｎｇ Ｅｌｅｃｔｒｏｎ Ｍｉｃｒｏｓｃｏｐｅ：ＳＥＭ）によって観察した。装置は日立製作所製（Ｓ−４５００）を使用し、加速電圧は５〜２０ ｋＶで行なっている。また合成したＣａＰはカーボン製両面テープを用いて、アルミニウム製試料台に固定した。ＳＥＭ観察の前処理としてイオンスパッター（Ｅ−１０３０、日立製作所製）を用いてＰｔ−Ｐｄ蒸着を行なっている。
【００５５】
本発明に係る骨誘導成分であるリン酸系カルシウムは、市販のものでも合成してもよく特に制限されることはなく、リン酸カルシウムを合成する方法としては水熱合成，均一沈殿法，リフラックス法，寒天ゲル法，アルギン酸塩紡糸等の方法などの公知の方法を利用することができ、合成方法は制限されることはなく、所望の骨誘導成分の形状により合成法を選択することができる。尚、本発明ではウィスカー状の骨誘導成分は均一沈殿法により合成している。以下、ウィスカー状の骨誘導成分（リン酸系カルシウム）を一例にして、その合成方法の好ましい一例を記載するが、本発明の範囲はこれに限定されることはない。
【００５６】
本発明に係るウィスカー状の骨誘導成分（リン酸系カルシウム、以下ＨＡｐと称する）の化学組成（Ｃａ／Ｐ比）が、好ましくは１．６〜１．６７になるように、所定量硝酸カルシウム四水和物（Ｃａ（ＮＯ３）２・４Ｈ２Ｏ）、 所定量リン酸水素二アンモニウム（（ＮＨ４）２ＨＰＯ４）および所定量ｍｏｌ ｄｍ−３尿素（（ＮＨ２）２ＣＯ）を混合し、さらに濃ＨＮＯ３を加えて溶解して混合水溶液を調製した後、この混合水溶液に対して濃ＮＨ３を用いてｐＨを２〜５に調節したのち、前駆体溶液を得る。次いで、当該前駆体溶液を６０〜１２０℃で１６〜９６時間加熱して、ＨＡｐの前駆体を得たのち、６０〜１２０℃で４８〜９６時間加熱を行い、尿素の加水分解を利用したｐＨ制御によって、ウィスカー状のＨＡｐを生成させ、精製水で洗浄後、風乾して目的物のウィスカー状のＨＡｐを得ている。
【００５７】
本発明に係る骨止血組成物は、高分子ゲル成分と、人工骨助剤成分とを含むことが好ましく、高分子ゲル成分と、骨誘導成分と、人工骨助剤成分とを含むことがより好ましく、高分子ゲル成分と、骨誘導成分および人工骨助剤成分が複合体を形成して含まれていることが特に好ましい。
【００５８】
本発明に係る人工骨助剤成分としては、アルギン酸およびその塩（アルギン酸ナトリウム、アルギン酸カリウム、アルギン酸カルシウム、アルギン酸アンモニウム等）が好ましい。一般にアルギン酸は、β−Ｄ−マンヌロン酸とα−Ｌ−グルロン酸から成るポリウロン酸であり、本発明に使用できるアルギン酸は特に制限されることはないが、β−Ｄ−マンヌロン酸とα−Ｌ−グルロン酸とのユニット比（β−Ｄ−マンヌロン酸／α−Ｌ−グルロン酸）が、０．５〜２．５が好ましく、０．８〜１．５がより好ましい。
【００５９】
人工骨助剤成分としては、アルギン酸およびその塩を使用すると、アルギン酸およびその塩自体止血効果を備えているため血液凝固の即効性がよいと考えられる。
【００６０】
本発明に係る人工骨助剤成分は、骨誘導成分と複合体を形成していることが好ましい。より具体的には、人工骨助剤成分がＣａ架橋したゲル状の物質と骨誘導成分とが混合されたものが好ましい。すなわち、人工骨助剤成分としてアルギン酸およびその塩を使用した場合、アルギン酸はＣａ架橋したエッグボックス構造と呼ばれるゲル状を形成することができ、より多くの血液を吸収することができると考えられる。特に、骨誘導成分を多孔質体の構造である場合、人工骨助剤成分が当該多孔質体の内部に入り込み、細孔内もゲル状のアルギン酸で満たすことができるため、より多くの血液を吸収することができると考えられる。
【００６１】
また、本発明に係る人工骨助剤成分としてアルギン酸およびその塩を使用した場合、必要により二価の金属イオンを含む塩、特にＣａＣｌ２、ＣａＦ２などのハロゲン化カルシウムやＣａ（ＯＨ）２、Ｃａ（ＮＯ３）２、ＣａＳＯ４などのカルシウム含有塩を、当該アルギン酸およびその塩に対して、過剰に含有させることが好ましい。
【００６２】
これにより、アルギン酸はＣａ架橋したエッグボックス構造と呼ばれるゲル状を形成するため、より多くの血液を吸収できると考えられる。
【００６３】
本発明に係る人工骨助剤成分と骨誘導成分との複合体の合成方法は、特に制限されるものではなく公知の方法を利用することができ、本発明では好ましい一態様として骨誘導成分の多孔体を利用して、アルギン酸またはアルギン酸ナトリウムなどのアルギン酸塩１００質量部に対して、所望の形状の骨誘導成分（例えば、ウィスカー状のＣaＰや粒子状のＣaＰ）が３０〜７０質量％になるように水に添加してこれらを混合した後、ＣａＣｌ２、ＣａＦ２、などのハロゲン化カルシウムやＣａ（ＯＨ）２、Ｃａ（ＮＯ３）２、ＣａＳＯ４などのカルシウム含有塩が含まれた溶液を過剰量滴下させてゲル化させた後、当該ゲル化した物質を回収し、−１℃以下、好ましくは−２０℃以下で凍結させて凍結乾燥機を用いて減圧下、−１０〜−５０℃程度で６時間〜７２時間凍結乾燥させて目的物である人工骨助剤成分と骨誘導成分との複合体（ＨＡｐ−アルギン酸複合体）を調製している。
【００６４】
本発明に係る骨止血組成物は、高分子ゲル成分と、骨誘導成分と、人工骨助剤成分とを含むことが好ましく、前記骨止血組成物は、１００質量部の高分子ゲル成分に対して、１０〜８０質量部の骨誘導成分と、１０〜８０質量部の人工骨助剤成分とを含むことが好ましく、１００質量部の高分子ゲル成分に対して、５０〜７０質量部の骨誘導成分と、５０〜７０質量部の人工骨助剤成分とを含むことがより好ましい。
【００６５】
本発明に係る骨止血組成物の製造方法としては、上述したように公知の方法で合成したまたは市販の少なくとも１種以上のオキシアルキレンユニットを有するポリアルキレングリコール重合体１００質量部に対して、水を好ましくは１０〜６００質量部、より好ましくは２５〜４００質量部添加して、必要により所望の形状の骨誘導成分（例えば、リン酸系カルシウム）を好ましくは１０〜８０質量部、より好ましくは５０〜７０質量部と、必要により人工骨助剤成分（例えば、アルギン酸またはその塩）を好ましくは１０〜８０質量部、より好ましくは５０〜７０質量部と、さらに必要により前記所望の形状の骨誘導成分および／または人工骨助剤成分に代えて人工骨助剤成分と骨誘導成分との複合体（例えば、上記したＣａＰ−アルギン酸複合体）を好ましくは１０〜８０質量部、より好ましくは５０〜７０質量部と、を混合した後、当該混合物を２５℃〜１０５℃、好ましくは５０℃〜１００℃まで加熱しつつ、２０分〜７８０分、好ましくは８０分〜１８０分撹拌しながら混合して、水または溶媒を蒸発させ含水率が２０〜８０％になるように調整しポリアルキレングリコール重合体と水または溶媒とを構成成分とする高分子ゲル成分からなる骨止血組成物を調製することが好ましい。
【００６６】
また、本発明に係る骨止血組成物が高分子ゲルからなる場合（少なくとも１種以上のオキシアルキレンユニットを有するポリアルキレングリコール重合体と、水または溶媒とを構成成分）において、後述する実験例１にも示すように、高分子ゲルを調製するための加熱時間と質量パーセント濃度との関係を図１に示す。１４０℃で加熱・撹拌を行ったところ、ポリアルキレングリコール重合体の質量パーセント濃度は加熱時間の増加に伴って急激に増大し、７５分後に１００％を超え、さらに加熱を続けると、一部炭化している（図１（ａ））。そこで、加熱温度を１４０℃から１２０℃および１１０℃に下げたが、ポリアルキレングリコール重合体の質量パーセント濃度は１００％を超えて一部炭化している（図１（ｂ）および（ｃ））。さらに、加熱温度を１００℃まで下げたところ、ポリアルキレングリコール重合体の質量パーセント濃度は加熱の初期に急激に増加したのち、１００分経過後にはほぼ一定になったが、その時点で１００％を超えていた（図１ （ｄ））。加熱温度をさらに１００℃から８０℃に下げたところ、質量パーセント濃度は１００℃の場合と同様に１００％を超えた図１（ｅ））。さらに、加熱温度を８０℃から７０℃まで下げたところ、ポリアルキレングリコール重合体の質量パーセント濃度はほぼ１００％となった（図１（ｆ））。
【００６７】
この実験の結果から、高分子ゲルを調製するための温度は最終的にポリアルキレングリコール重合体の質量パーセント濃度がほぼ１００％となった１００℃前後、好ましくは８０℃、特に好ましいのが７０℃での加熱が最も適していることが確認されている。しかしながら、８０℃で加熱した場合と比較して高分子ゲル成分の合成に要する時間が長く、さらにポリアルキレングリコール重合体は粉体状であるため、当該ポリアルキレングリコール重合体と精製水とが均一に混合しにくい。そのため、高分子ゲル成分を比較的短時間に調製する場合には、７０℃よりも高い温度に設定する必要がある。
【００６８】
そこで、ポリアルキレングリコール重合体と水との混合物を最初に１００〜１２０℃まで加熱し、次いでポリアルキレングリコール重合体と精製水とが均一に混合されたと判断される５０％の質量パーセント濃度まで加熱・かく拌を続けたのち、６０〜８０℃まで温度を下げて高分子ゲルを調製する実験を行っている（実験例２）。最終的に確定した実験条件を時間の関数でプロットして図２に示す。まず、出発物質であるポリアルキレングリコール重合体を１００〜１２０℃で３０〜５０分加熱してポリアルキレングリコール重合体の質量パーセント濃度を４０％から５０％まで増加させた後、６０〜８０℃で５０〜７６０分加熱して、水分量を調整している。
【００６９】
したがって、本発明に係る骨止血組成物のより好ましい製造方法としては、上述したように公知の方法で合成したまたは市販の少なくとも１種以上のオキシアルキレンユニットを有するポリアルキレングリコール重合体１００質量部に対して、水を好ましくは１０〜６００質量部、より好ましくは２５〜４００質量部添加して、必要により所望の形状の骨誘導成分（例えば、リン酸系カルシウム）を好ましくは１０〜８０質量部、より好ましくは５０〜７０質量部と、必要により人工骨助剤成分（例えば、アルギン酸またはその塩）を好ましくは１０〜８０質量部、より好ましくは５０〜７０質量部と、さらに必要により前記所望の形状の骨誘導成分および／または人工骨助剤成分に代えて人工骨助剤成分と骨誘導成分との複合体（例えば、上記したＣａＰ−アルギン酸複合体）を好ましくは１０〜８０質量部、より好ましくは５０〜７０質量部と、を混合した後、１００〜１２０℃まで加熱しつつ、３０〜５０分撹拌しながら混合して前記ポリアルキレングリコール重合体の質量パーセント濃度を４０％から５０％まで増加させた後、次いで６０〜８０℃で５０〜７６０分加熱して水または溶媒を蒸発させて骨止血組成物を調製する方法が挙げられる。
【００７０】
尚、前記ポリアルキレングリコール重合体、水、骨誘導成分、人工骨助剤成分、および人工骨助剤成分と骨誘導成分との複合体を混合する順番は特に制限されず、前記ポリアルキレングリコール重合体と水とから高分子ゲル成分を調製した後、当該高分子ゲル成分にさらに骨誘導成分、人工骨助剤成分、および人工骨助剤成分と骨誘導成分との複合体を混合してもよく、同時に前記ポリアルキレングリコール重合体、水、骨誘導成分、人工骨助剤成分、および人工骨助剤成分と骨誘導成分との複合体を混合してもよい。
【００７１】
また、上記製造方法において粉体の状態で撹拌、混合または単なる撹拌、混合の方法としては、特に限定されず、例えば、ジェットミル、ライカイ機、ボールミル、ビーズミル、遊星ミル、ハイブリダイザー、メカノフュージョン、混練押出し機、高速回転ミルなどを使用することができ、好適にはライカイ機、ボールミル、遊星ミル、高速回転ミルが使用され、より好適には高速回転ミルが使用される。
【００７２】
本発明に係る骨止血組成物の稠度は、１５〜２０ｍｍが好ましく、１７．５〜１８．５ｍｍがより好ましい。
【００７３】
当該骨止血組成物の稠度が１５〜２０ｍｍの範囲であると、手術の際は手でこねて使用されることから、操作性に優れる。尚、本発明に係る骨止血組成物の稠度は、ＪＩＳ Ｔ ６６０２−１９９３の４・３の規定のおもりを質量１００ｇから質量５００ｇに変更した以外は同一の測定方法に準拠したものである。
【００７４】
本発明の第二は、上記の本発明の骨止血組成物を、５〜３０時間凍結乾燥して吸水量１００〜７００％に調整されたものであり、１０〜２４時間凍結乾燥して吸水量２００〜６００％に調整されたものがより好ましい。
【００７５】
凍結乾燥することにより長期保存性に優れ、かつ使用時ゲルとして使用する際に溶媒を選ばないため、水のみならず液体薬剤、サイトカインなど高濃度での薬物保持が可能となる。
【００７６】
また、ここでいう吸水量とは、当該骨止血組成物の質量に対して最大吸収できる血液の量の割合をいう。
【実施例】
【００７７】
以下、本発明を実施例および比較例を参照して具体的に説明する。尚、本発明は、上記の実施形態および下記の実施例に限定されるものではない。これらは、例示であり、本発明の特許請求の範囲に記載された技術的思想と実質的に同一な構成を有し、同様な作用効果を奏するものは、いかなるものであっても本発明の技術的範囲に包含される。
【００７８】
「止血組成物の調製」
（ゲル成分の合成）
図８に示すように、エチレンオキサイドとプロピレンオキサイドとのランダム共重合体（エチレンオキサイドユニット：プロピレンオキサイドユニットの重合比＝９：１〜７：３）に、精製水を添加し、当該精製水と当該ランダム共重合体の総質量が全体の２０％になるように混合した後に、熱電対を挿入して７０〜１００℃の範囲で薬さじで加熱、攪拌し、精製水を蒸発させることにより含水率が２０〜５０％のゲルをそれぞれ得た。
【００７９】
すなわち、図８に示す条件で調製した各ゲルをＳ１〜Ｓ９として、それぞれの分子量（重量平均分子量）、分子量分布、稠度、止血時間および毒性などを評価した。
【００８０】
尚、以下、Ｓ１〜Ｓ９は、図８の組成を示す各骨止血組成物であることを意味する。
【００８１】
また、図８において、ＰＯ／ＥＯの比は、エチレンオキサイドユニット／プロピレンオキサイドユニットを示すのである。
【００８２】
（ウィスカー状のＣａ１０（ＰＯ４）６（ＯＨ）２の合成）
ＨＡｐの化学組成（Ｃａ／Ｐ比：１．６）になるように、０．１６７ ｍｏｌ ｄｍ−３硝酸カルシウム四水和物（Ｃａ（ＮＯ３）２・４Ｈ２Ｏ）， ０．１００ ｍｏｌ ｄｍ−３リン酸水素二アンモニウム（（ＮＨ４）２ＨＰＯ４）および０．５００ ｍｏｌ ｄｍ−３尿素（（ＮＨ２）２ＣＯ）を混合し、さらに濃ＨＮＯ３を加えて溶解した。この混合水溶液に対して濃ＮＨ３を用いてｐＨを２．２〜４．５に調節したのち、前駆体溶液の全量を５００ｃｍ３とした。この前駆体溶液３００ｃｍ３を約８０℃で２４ｈ加熱して、ＨＡｐの前駆体を得たのち、９０℃で７２ ｈ加熱を行い、尿素の加水分解を利用したｐＨ制御によって、ウィスカー状のＣａ１０（ＰＯ４）６（ＯＨ）２を生成した。生成物は精製水で洗浄後、風乾した。また、粒状のＣａ１０（ＰＯ４）６（ＯＨ）２は、市販のもの（太平化学産業製ＨＡＰ−１００，ｎ−ＨＡｐ）を利用した。
【００８３】
（ＣａＰ−ＡＧの合成）
α−Ｄ−マンヌロン酸／β−Ｌ−グルロン酸の比（Ｍ／Ｇ比）が０．９のアルギン酸ナトリウム（ＡＧ）について、ＡＧの濃度が２．０質量％となるように精製水に溶解した。上記合成したウィスカー状のＣａ１０（ＰＯ４）６（ＯＨ）２および超微粉体Ｃａ１０（ＰＯ４）６（ＯＨ）２（太平化学産業製ＨＡＰ−１００， ｎ−ＨＡｐ）に対して２．０質量％のＡＧをＣａ１０（ＰＯ４）６（ＯＨ）２／ＡＧの質量比が１．０の割合になるように混合した。つぎに、これらをシリンジと霧吹きを用いて１ｍｏｌ ｄｍ−３ＣａＣｌ２溶液に一滴ずつ滴下してゲル化させた。得られた球状ゲルを回収し、続いて−８０℃のフリーザーまたは−２０℃の冷凍庫で凍結させたのち、凍結乾燥機（東京理化器械株式会社 ＥＹＥＬ４）を用いて１３Ｐａの減圧下で−５０℃で２４ｈ凍結乾燥させ、それぞれの形状のＣａ１０（ＰＯ４）６（ＯＨ）２−ＡＧ複合体（図９ではアルギン酸−ＣａＰ複合体と称している）を作製した。
【００８４】
（ＳＡ１〜ＳＡ４の調製）
上記で得られたＳ１〜Ｓ９と、それぞれの形状のＣａ１０（ＰＯ４）６（ＯＨ）２−ＡＧ複合体、粒状のＣａ１０（ＰＯ４）６（ＯＨ）２およびウィスカー状のＣａ１０（ＰＯ４）６（ＯＨ）２とを図９に示す組成で混合し、以下に示す止血効果の測定を行った。
【００８５】
また、図９に示す条件で調製した各ゲルをＳＡ１〜ＳＡ４として、それぞれの止血時間および毒性などを評価した。尚、以下、ＳＡ１〜ＳＡ４は、図９の組成を示す各骨止血組成物であることを意味する。
【００８６】
「評価方法」
（稠度）
稠度測定の方法をＪＩＳ Ｔ ６６０２−１９９３の４・３の規定に示すように、アクリル板にＳ１〜９をそれぞれ約１ｇ挟み、５００ｇの分銅（ｃ）をのせて、広がったゲルの最大長さを方眼用紙測定した。なお、おもりが１００ｇであると〜であるため、ＪＩＳ Ｔ ６６０２−１９９３の４・３の規定のおもりを質量１００ｇから５００ｇに変更した。
【００８７】
（止血時間）
作製した試料の止血効果を評価するために以下の実験をおこなった。止血測定法を図３に示す。市販のＣａＰ多孔体３（ボーンフィル 登録商標 ＨＯＹＡ製）（気孔率７０ ％、気孔径２００μｍ）の上に０．１ｇの上記で得られた各止血組成物（Ｓ１〜Ｓ９）２（； ９ ×９ ×１ ｍｍ３）（断面積は９×９）を接着させた。これらを精製水１または擬似血液１が入ったシャーレーの中に入れ精製水と擬似血液（Ｌａｅｒｄａｌ ＢＬＯＯＤ−ＣＯＬＯＲＥＤ ＣＯＮＣＥＮＴＲＡＴＩＯＮ）とをそれぞれ浸透させた。精製水の場合は、試料に塩化コバルト紙をのせ、青色から赤色に変化した際の時間を止血時間として測定した。擬似血液の場合は、試料の上にキムワイプ４を載せ、浸透して色の変化が見られた時間を止血時間と定義した。また、本発明の骨止血組成物は、なお、動物の血液は血液が凝固するため使用不可であった。
【００８８】
これら実験結果を図４および図５に示す。ここで図４は、シャーレーの中に精製水１をいれた場合のコントロール実験であり、図５は、シャーレーの中に擬似血液１をいれた場合を示すものである。図４において、（a）は市販の骨止血剤であるボーンワックス（ネオトップ 登録商標）（ｂ）は上記調製した本発明の骨止血組成物であるＳ４、（ｃ）は上記調製した本発明の骨止血組成物であるＳＡ１、（ｄ）は上記調製した本発明の骨止血組成物であるＳＡ２である。
【００８９】
また、図５において、（a）は市販の骨止血剤であるボーンワックス（ネオトップ 登録商標）（ｂ）は上記調製した本発明の骨止血組成物であるＳ４、（ｃ）は上記調製した本発明の骨止血組成物であるＳＡ１、（ｄ）は上記調製した本発明の骨止血組成物であるＳＡ２である。
【００９０】
図６に、本発明に係る骨止血組成物の止血効果のキムワイプの経時的変化を示す写真を示す。図６において（a）は上記調製した本発明の骨止血組成物であるＳＡ１を示し、（ｂ）は上記調製した本発明の骨止血組成物であるＳＡ２を示し、（ｃ）は上記調製した本発明の骨止血組成物であるＳ２を示す。
【００９１】
（毒性）
培養面積２５ ｃｍ３の組織培養フラスコ（ＩＷＡＫＩ製）を用いて、３７℃±０．０２℃、５ ％ＣＯ２雰囲気下のインキュベーター内においてＭＣ３Ｔ３−Ｅ１細胞の培養を行った。培地には抗生物質である５０μｇゲンタマイシンおよび２５０μｇカナマイシンを添加し、さらにウシ胎児血清（ＦＢＳ）を１０ ｖｏｌ％ 添加して作製したα−最小必須培地（α−ＭＥＭ（＋））を用いた。培地は３ｄおきに交換した。７ｄ後にフラスコ内でコンフルエントに達した細胞を、０．５ ％トリプシン−ＥＤＴＡを用いて剥がした。細胞の洗浄にはリン酸塩緩衝液（ＰＢＳ（−））を用いた。この細胞を１５ｃｍ３遠心チューブで遠心分離を行い、新たにα−ＭＥＭを加えて細胞懸濁液を調製した。この溶液の細胞濃度を血球計算版（トーマ）で測定した。
【００９２】
上記骨止血組成物１〜９（Ｓ１〜Ｓ９）のそれぞれを精製水に溶解させオートクレーブで滅菌し、当該組成物を１ｗｅｌｌに０．００１ ｇとなるように加えた１×１０４個のＭＣ３Ｔ３−Ｅ１細胞を細胞培養用２４ ｗｅｌｌポリスチレンプレートに播種して、細胞数を測定した。なお、トランズウェルを設置した日を０ｄとした。継代のときと同様、ＭＣ３Ｔ３−Ｅ１細胞は３７℃±０．０２℃、５ ％ ＣＯ２雰囲気下のインキュベーター内で培養した。種々の期間培養した細胞は、継代のときと同様の操作でフラスコからはがし浮遊させたのち、細胞数を計測した。また、計測する前には光学顕微鏡（島津理化製 倒立顕微鏡ＡＥ ３１）による細胞の形態観察を行なった。そのうち代表的なものとしてＳ２の結果を図６に示す。また、図６において、（ａ）はコントロール、（ｂ）はＳ２であり、１ｄは一日後、４ｄは４日後を示す。この結果をみると培養期間１ｄには球状の細胞が存在していたが、４ｄ経過後には増殖していた。コントロールおよび上記Ｓ１〜Ｓ９のいずれも同様の増殖傾向が見られた。上記の結果から、本発明に係る骨止血組成物は細胞の増殖に対して特に阻害効果はないことが確認された。
【００９３】
（実験例１）
エチレンオキサイドとプロピレンオキサイドとのランダム共重合体（エチレンオキサイドユニット：プロピレンオキサイドユニットの重合比＝８：２）に、精製水を添加し、当該精製水と当該ランダム共重合体との総質量が全体の２０％になるように混合した後に、熱電対を挿入して７０℃（ｆ）、８０℃（ｅ）、１００℃（ｄ）、１１０℃（ｃ）、１２０℃（ｂ）、および１４０℃（ａ）のそれぞれの温度条件において、薬さじで加熱、攪拌し、精製水を蒸発させることにより、時間と高分子ゲル成分における前記ランダム共重合体の質量％とを関係を調べる実験を行った（図１ 参照）。
【００９４】
（実験例２）
エチレンオキサイドとプロピレンオキサイドとのランダム共重合体（エチレンオキサイドユニット：プロピレンオキサイドユニットの重合比＝８：２）に、精製水を添加し、当該精製水と当該ランダム共重合体との総質量が全体の２０％になるように混合した後に、熱電対を挿入して１００℃で１８５分間加熱・攪拌（a）した後、次いで７０℃で９６０分間（ｂ）加熱・攪拌して、精製水を蒸発させることにより、時間と高分子ゲル成分における前記ランダム共重合体の質量％とを関係を調べる実験を行った（図２参照）。
【００９５】
（参考実験）
高分ゲル成分の調製：エチレンオキサイドとプロピレンオキサイドとのランダム共重合体（エチレンオキサイドユニット：プロピレンオキサイドユニットの重合比＝８：２）の濃度が２０ ｍａｓｓ％となるように水と混合したのち，１００℃で１８５ ｍｉｎ，ついで７０℃で９６０ ｍｉｎ加熱して調製した。
【００９６】
エチレンオキサイドとプロピレンオキサイドとのランダム共重合体（エチレンオキサイドユニット：プロピレンオキサイドユニットの重合比＝８：２）とエチレンオキサイド（ＥＯ）との複合ゲルの調製：ＥＯには分子量が１００万（ＥＯ（１００））および５００万（ＥＯ（５００））のものを使用し，これらのＥＯとエチレンオキサイドとプロピレンオキサイドとのランダム共重合体に対して水を添加し，上述と同じ条件で３種類のゲルを調製した。ＥＰＯ（エチレンオキサイドとプロピレンオキサイドとのランダム共重合体とも称する），ＥＯおよび水の混合比（質量）はＥＰＯ ／ ＥＯ（１００） ／ 水 ＝ ２５ ： １５ ： ６０ （２５ＥＰＯ−１５ＥＯ（１００））， ＥＰＯ ／ ＥＯ（５００） ／ 水 ＝ ２５ ： １５ ： ６０ （２５ＥＰＯ − １５ＥＯ（５００））およびＥＰ ／ ＥＯ（１００） ／ 水 ＝ １５ ： １５ ： ７０ （１５ＥＰＯ−１５ＥＯ（１００））であった。ＣａＰ−Ｃｏｌ（コラーゲン）複合体の調製：Ｃｏｌゲル由来のＣｏｌ繊維とリン酸緩衝液との懸濁液に対して，９ ｍｍｏｌ・ｄｍ−３ ＣａＣｌ２溶液を添加して３０℃で２４ｈ加熱して複合体を調製した。評価：稠度の測定では，０．１ｇの試料をアクリル板に挟み，５００ｇの荷重をかけて広がった長さを調べた。止血時間の測定では，１ｃｍ３の立方体状ＣａＰ（気孔径：２００μｍ）の上面に試料を設置し，下面を擬似血液に浸し，毛管現象で上昇してきた疑似血液の到達時間を調べた。また、ＳＢＦ溶液に試料を所定時間浸漬した後の質量を測定し，浸漬前の質量を基に溶解率を求めた。これらの結果を図１０と図１１に示す。
【産業上の利用可能性】
【００９７】
医療用途、特に骨からの出血を抑制する。
【符号の説明】
【００９８】
１ 精製水または擬似血液、
２ 止血組成物、
３ ＣａＰ多孔体、
４ キムワイプ。
【特許請求の範囲】
【請求項１】
少なくとも１種以上のオキシアルキレンユニットを有するポリアルキレングリコール重合体から形成され、２０〜８０％の含水率を有する高分子ゲル成分を含む骨止血組成物。
【請求項２】
前記ポリアルキレングリコール重合体は、以下の式１：
【化１】
（上記式中、ｍ、ｎ、ｐおよびｑはそれぞれ独立して、ｍは２以上５以下の整数であり、ｎは１０００以上４００００以下の整数であり、ｐは１以上５以下の整数であり、Ｑは６００以上２００００以下の整数であり、Ｒは、水素、メチル基、エチル基、およびプロピル基からなる群から選択される少なくとも一つのアルキル基である）
で示されるランダム共重合体である、請求項１に記載の骨止血組成物。
【請求項３】
前記ポリアルキレングリコールランダム重合体は、重量平均分子量５００００〜２００００００である、請求項１または２に記載の骨止血組成物。
【請求項４】
さらに、リン酸４カルシウムＣａ４Ｏ（ＰＯ４）２、水酸アパタイトＣａ１０（ＰＯ４）６（ＯＨ）２、リン酸８カルシウムＣａ８Ｈ２（ＰＯ４）６・５Ｈ２Ｏ、リン酸２カルシウム２水和物ＣａＨＰＯ４・２Ｈ２Ｏ、リン酸２カルシウムＣａＨＰＯ４、ピロリン酸カルシウムＣａ２Ｐ２Ｏ７、ピロリン酸カルシウム２水和物Ｃａ２Ｐ２Ｏ８・２Ｈ２Ｏ、リン酸７カルシウムＣａ７（Ｐ５Ｏ１６）２、リン酸２水素カルシウムＣａ４Ｈ２Ｐ６Ｏ２０、リン酸１カルシウム・２水和物Ｃａ（Ｈ２ＰＯ４）２・Ｈ２Ｏ、およびメタリン酸カルシウムＣａ（ＰＯ３）２からなる群から選択される少なくとも一つを骨誘導成分として含む、請求項１〜３のいずれか１項に記載の骨止血組成物。
【請求項５】
さらに、アルギン酸を人工骨助剤成分として含む、請求項１〜４のいずれか１項に記載の骨止血組成物。
【請求項６】
請求項５に記載の骨止血組成物は、１００質量部の高分子ゲル成分に対して、１０〜８０質量部の骨誘導成分と、１０〜８０質量部の人工骨助剤成分とを含む、骨止血組成物。
【請求項７】
前記ポリアルキレングリコール重合体にさらにエチレンオキサイド、プロピレンオキサイド、ブチレンオキサイド、ペンチレンオキサイド、へキシレンオキサイド、ヘプチレンオキサイド、オクチレンオキサイド、ノニレンオキサイド、およびデシレンオキサイドからなる群から選択される少なくとも一つのアルキレンオキサイドを混合させ、かつ２０〜８０％の含水率を有する高分子ゲル成分を含む、請求項１〜６のいずれか１項に記載の骨止血組成物。
【請求項８】
請求項１〜７のいずれか１項に記載の骨止血組成物を、５〜３０時間凍結乾燥して吸水量１００〜７００％に調整された、骨止血前駆体組成物。
【請求項１】
少なくとも１種以上のオキシアルキレンユニットを有するポリアルキレングリコール重合体から形成され、２０〜８０％の含水率を有する高分子ゲル成分を含む骨止血組成物。
【請求項２】
前記ポリアルキレングリコール重合体は、以下の式１：
【化１】
（上記式中、ｍ、ｎ、ｐおよびｑはそれぞれ独立して、ｍは２以上５以下の整数であり、ｎは１０００以上４００００以下の整数であり、ｐは１以上５以下の整数であり、Ｑは６００以上２００００以下の整数であり、Ｒは、水素、メチル基、エチル基、およびプロピル基からなる群から選択される少なくとも一つのアルキル基である）
で示されるランダム共重合体である、請求項１に記載の骨止血組成物。
【請求項３】
前記ポリアルキレングリコールランダム重合体は、重量平均分子量５００００〜２００００００である、請求項１または２に記載の骨止血組成物。
【請求項４】
さらに、リン酸４カルシウムＣａ４Ｏ（ＰＯ４）２、水酸アパタイトＣａ１０（ＰＯ４）６（ＯＨ）２、リン酸８カルシウムＣａ８Ｈ２（ＰＯ４）６・５Ｈ２Ｏ、リン酸２カルシウム２水和物ＣａＨＰＯ４・２Ｈ２Ｏ、リン酸２カルシウムＣａＨＰＯ４、ピロリン酸カルシウムＣａ２Ｐ２Ｏ７、ピロリン酸カルシウム２水和物Ｃａ２Ｐ２Ｏ８・２Ｈ２Ｏ、リン酸７カルシウムＣａ７（Ｐ５Ｏ１６）２、リン酸２水素カルシウムＣａ４Ｈ２Ｐ６Ｏ２０、リン酸１カルシウム・２水和物Ｃａ（Ｈ２ＰＯ４）２・Ｈ２Ｏ、およびメタリン酸カルシウムＣａ（ＰＯ３）２からなる群から選択される少なくとも一つを骨誘導成分として含む、請求項１〜３のいずれか１項に記載の骨止血組成物。
【請求項５】
さらに、アルギン酸を人工骨助剤成分として含む、請求項１〜４のいずれか１項に記載の骨止血組成物。
【請求項６】
請求項５に記載の骨止血組成物は、１００質量部の高分子ゲル成分に対して、１０〜８０質量部の骨誘導成分と、１０〜８０質量部の人工骨助剤成分とを含む、骨止血組成物。
【請求項７】
前記ポリアルキレングリコール重合体にさらにエチレンオキサイド、プロピレンオキサイド、ブチレンオキサイド、ペンチレンオキサイド、へキシレンオキサイド、ヘプチレンオキサイド、オクチレンオキサイド、ノニレンオキサイド、およびデシレンオキサイドからなる群から選択される少なくとも一つのアルキレンオキサイドを混合させ、かつ２０〜８０％の含水率を有する高分子ゲル成分を含む、請求項１〜６のいずれか１項に記載の骨止血組成物。
【請求項８】
請求項１〜７のいずれか１項に記載の骨止血組成物を、５〜３０時間凍結乾燥して吸水量１００〜７００％に調整された、骨止血前駆体組成物。
【図１】
【図２】
【図３】
【図４】
【図５】
【図６】
【図７】
【図８】
【図９】
【図１０】
【図１１】
【図２】
【図３】
【図４】
【図５】
【図６】
【図７】
【図８】
【図９】
【図１０】
【図１１】
【公開番号】特開２０１１−２５１０５５（Ｐ２０１１−２５１０５５Ａ）
【公開日】平成２３年１２月１５日（２０１１．１２．１５）
【国際特許分類】
【出願番号】特願２０１０−１２８１９２（Ｐ２０１０−１２８１９２）
【出願日】平成２２年６月３日（２０１０．６．３）
【出願人】（５１０１５５２５４）
【出願人】（５０５３２０５４０）
【Ｆターム（参考）】
【公開日】平成２３年１２月１５日（２０１１．１２．１５）
【国際特許分類】
【出願日】平成２２年６月３日（２０１０．６．３）
【出願人】（５１０１５５２５４）
【出願人】（５０５３２０５４０）
【Ｆターム（参考）】
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