ＮＴ−プロＢＮＰと組み合わせてのＣＴ−プロＥＴ−１による急性冠症候群の診断および危険性の分類
本発明は、急性冠症候群（ＡＣＳ）、特に、急性心筋梗塞（ＡＭＩ）および狭心症（ＡＰ）ならびに／または心筋梗塞後のための診断および／または危険性の分類のための方法に関する。ここでＣ末端プロエンドセリン（ＣＴ−プロＥＴ−１）またはそのフラグメントおよび部分ペプチドの測定は、ＮＴ−プロＢＮＰと組み合わせて行われる。一実施形態において、本発明は、急性冠症候群、特に、心筋梗塞、狭心症、および／または心筋梗塞後の増大した危険性および／または好ましくない予後を有する患者を同定するための方法を提供する。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、急性冠症候群（ＡＣＳ）、特に、急性心筋梗塞（ＡＭＩ後）の診断および／または危険性の分類のための方法に関し、ここでＣ末端プロ−エンドセリン（ＣＰ−プロＥＴ−１）またはそのフラグメントおよび部分ペプチドの測定は、ＮＴ−プロＢＮＰと組み合わせて行われる。
【背景技術】
【０００２】
上記危険性の分類は、徴候を示す患者もしくは無徴候性の患者に拘わらず、心疾患の領域において増大しつつある重要性を有する。特に、急性冠症候群（ＡＣＳ）および急性心筋梗塞（ＡＭＩ）および狭心症（ＡＰ）、ならびに心筋梗塞後（ＡＭＩ後）の領域において、適切な危険性の分類についての需要が高い。
【０００３】
適切な治療は、救急救命室においてすぐ臨床的決定を行うための必要性に関連して、急性冠症候群の初期診断および鑑別を要する。急性冠症候群における特定されていない症状（胸痛）に起因して、他の病気の鑑別および範囲、ならびに急性冠症候群の認識の両方が必須である。これはまた、心筋梗塞後の場合において必要である。
【０００４】
生化学的マーカー、特に、心筋トロポニン、ミオグロビン、およびＣＫ−ＭＢ−ｍａｓｓのような伝統的なものは、心筋梗塞の予後のために、先行技術において行われてきた（非特許文献１）。ナトリウム利尿性タンパク質のＢタイプ（ＢＮＰ）は、プロ−ＢＮＰ、ＮＴ−プロＢＰ（特許文献１、特許文献２）とともに、親近の診断においてさらに有効な生化学的マーカーであることが分かった。
【０００５】
Ｃ末端プロ−エンドセリンフラグメント（ＣＴ−プロ−ＥＴ−１）は、プレプロ（ｐｅｐｒｏ）−エンドセリン（配列番号１）のアミノ酸配列９３〜２１２もしくは１６８〜２１２とともに、エンドセリン−１の間接的測定もしくは大きなエンドセリン−１含有量についての心血管疾患の診断に関して、特許文献３に記載されている。さらに、ＡＮＰ、ＢＮＰおよびプロＢＮＰのような心臓パラメーターが、マルチパラメーター診断のために、心臓診断において利用され得ることは、特許文献３から公知である。
【０００６】
しかし、現在公知のマーカーを利用する公知の診断法の１つの欠点は、危険性のある患者の時期尚早のおよび完全な決定が、十分に成功していないことである。従って、本発明に基づく１つの目的は、危険性のある患者の改善された決定を可能にする、急性冠症候群および心筋梗塞後の危険性の分類のための方法を開発することである。
【０００７】
別の欠点は、先行技術によれば、上記マーカーの十分な感度および／または特異性がしばしば得られないことである。
【０００８】
別の目的は、急性冠症候群および心筋梗塞後の危険性の分類のための方法を提供することであり、ここで少なくとも１つのマーカー、マーカー組み合わせは、インビトロ診断において十分な感度および特異性を有する。
【０００９】
従って、本発明の課題は、急性冠症候群および心筋梗塞後の診断および／または危険性の分類のための方法を提供することである。
【先行技術文献】
【特許文献】
【００１０】
【特許文献１】欧州特許第１３６３１２８号明細書
【特許文献２】欧州特許出願公開第１６６６８８１号明細書
【特許文献３】欧州特許第１５６４５５８号明細書
【非特許文献】
【００１１】
【非特許文献１】Ｋａｔｕｓ，Ｈ．Ａ．；Ｒｅｍｐｐｉｓ，Ａ．；Ｓｃｈｅｆｆｏｌｄ，Ｔ．；Ｄｉｅｄｅｒｉｃｈ，Ｋ．Ｗ． ａｎｄ Ｋｕｅｂｌｅｒ，Ｗ：Ｉｎｔｒａｃｅｌｌｕｌａｒ ｃｏｍｐａｒｔｍｅｎｔａｔｉｏｎ ｏｆ ｃａｒｄｉａｃ ｔｒｏｐｏｎｉｎ Ｔ ａｎｄ ｉｔｓ ｒｅｌｅａｓｅ ｋｉｎｅｔｉｃｓ ｉｎ ｐａｔｉｅｎｔｓ ｗｉｔｈ ｒｅｐｅｒｆｕｓｅｄ ａｎｄ ｎｏｎｒｅｐｅｒｆｕｓｅｄ ｍｙｏｃａｒｄｉａｌ ｉｎｆａｒｃｔｉｏｎ，Ａｍ Ｊ Ｃａｒｄｉｏ（１９９１）６７（１６）：１３６０−１３６７
【発明の概要】
【課題を解決するための手段】
【００１２】
上記課題は、急性冠症候群および心筋梗塞後の診断および危険性の分類のための方法によって解決される。ここで上記ＣＴ−プロＥＴ−１の測定は、ＮＴ−プロＢＮＰ（配列番号４）と組み合わせて、遊離フラグメント（配列番号２および／または配列番号３）（要するに：「ＣＴ−プロＥＴ−１」）、またはそのフラグメントおよび部分ペプチドに対して行われる（本明細書中以降、本発明に従う方法といわれる）。
【００１３】
驚くべきことに、ＣＴ−プロＥＴ−１またはそのフラグメントおよび部分ペプチドは、ＮＴ−プロＢＮＰと組み合わせて、急性冠症候群および心筋梗塞後の診断についての高い感度および特異性を有する（実施例および図面を参照のこと）。
【図面の簡単な説明】
【００１４】
【図１】プローブ（抗体）によるその検出での、ＣＴ−プロＥＴ（配列番号３）の診断的利用可能性の方式
【図２】ＮＴ−プロＢＮＰもしくはＣＴ−プロＥＴ−１による、または論理的回帰モデルから得られる両方のパラメーターの組み合わせから死亡／心機能不全の予後についてのＲＯＣ曲線。
【図３】示したＣＴ−プロＥＴ−１およびＮＴ−プロＢＮＰ（ともにｐｍｏｌ／ｌ単位）についてのカットオフ濃度に従う、上記心臓発作患者を亜群に分けることによる事象（死亡、心機能不全）の速度。上記カットオフ濃度は、ＲＯＣ分析からの濃度として各々決定した。ここで感度および特異性の積は、事象予後の最大にあった。
【図４】すべての心臓発作患者の測定値のそれぞれのメジアンに基づいて、ＣＴ−プロＥＴ−１およびＮＴ−プロＢＮＰについての測定値の位置に従う、上記心臓発作患者を亜群に分けることによる事象（死亡、心機能不全）の速度。上記メジアンは、ＣＴ−プロＥＴ−１については７７ｐｍｏｌ／ｌであり、ＮＴ−プロＢＮＰについては９１４ｐｍｏｌ／ｌであった。
【発明を実施するための形態】
【００１５】
用語「急性冠症候群」とは、生命の直接的な驚異である冠動脈心疾患の種々の相を含む。これは、救急救命医療、実際に、急性心筋梗塞および／または狭心症、ならびに突然心臓死に適用される。ＷＨＯ基準（ＷＨＯ（１９７９）： Ｎｏｍｅｎｃｌａｔｕｒｅ ａｎｄ ｃｒｉｔｅｒｉａ ｆｏｒ ｄｉａｇｎｏｓｉｓ ｏｆ ｉｓｃｈｅｍｉｃ ｈｅａｒｔ ｄｉｓｅａｓｅ． Ｒｅｐｏｒｔ ｏｆ ｔｈｅ Ｊｏｉｎｔ Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ Ｓｏｃｉｅｔｙ ａｎｄ Ｆｅｄｅｒａｔｉｏｎ ｏｆ Ｃａｒｄｉｏｌｏｇｙ／Ｗｏｒｌｄ Ｈｅａｌｔｈ Ｏｒｇａｎｉｚａｔｉｏｎ ｔａｓｋ ｆｏｒｃｅ ｏｎ ｓｔａｎｄａｒｄｉｚａｔｉｏｎ ｏｆ ｃｌｉｎｉｃａｌ ｎｏｍｅｎｃｌａｔｕｒｅ，Ｃｉｒｃｕｌａｔｉｏｎ ５９（３）：６０７−６０９））に従って定義される急性心筋梗塞に加えて、２０分間を超えて持続する急性胸痛事象は、ＳＴ部分の上昇および／または心筋酵素の増加と合わさっていたので、不安定性狭心症（ＡＰ）という用語は除去され、この用語は、本発明によれば、「急性冠症候群」の下で、文献中で見いだされる（Ｈａｍｍ ＣＷ：Ｇｕｉｄｅｌｉｎｅｓ：Ａｃｕｔｅ Ｃｏｒｏｎａｒｙ Ｓｙｎｄｒｏｍｅ（ＡＣＳ）-Ｐａｒｔ １：ＡＣＳ ｗｉｔｈｏｕｔ ｐｅｒｓｉｓｔｉｎｇ ｅｌｅｖａｔｉｏｎ ｏｆ ＳＴ ｓｅｇｍｅｎｔ．Ｚ Ｋａｒｄｉｏｌ（２００４）９３：７２−９０；Ｐｓｃｈｙｒｅｍｂｅｌ，Ｄｅ Ｇｒｕｙｔｅｒ，Ｂｅｒｌｉｎ ２００４もまた参照のこと）。
【００１６】
「心筋梗塞後患者における不利な（ネガティブな）事象」とは、特に、さらなる（その後の）心筋梗塞、冠動脈不全（Ｈｅｒｚｖｅｒｓａｇｅｎ）、もしくは死亡、または本発明の過程において患者の予後の他の悪化を意味する。
【００１７】
「心筋梗塞」（心臓発作、ＡＭＩ（急性心筋梗塞））とは、本発明の過程において、心臓の急性かつ生命を脅かす疾患を意味する。ここで心筋（Ｈｅｒｚｍｕｓｋｅｌ）（心筋（Ｍｙｏｋａｒｄ））の死滅もしくは一部の組織壊死は、通常、２０分間より長く持続する循環障害（虚血）に起因して生じる。心臓発作の主要な症状は、突然生じる、２０分間より長く持続する、胸部における大部分は強い疼痛（「胸痛」）である。この疼痛は、肩、腕、下顎、および上腹部へ拡がり得、そして発汗、悪心、およびおそらく嘔吐が付随し得る。冠動脈不全は、おそらく心筋梗塞に起因する。
【００１８】
用語「心筋梗塞後」とは、過去に、例えば、１時間にわたって、特に、２０時間にわたって、特に、１〜５日間にわたって、または３〜５日間にわたって、心筋梗塞に既に罹患しており、後（ｐｏｓｔ）の（「後の（Ｄａｎａｃｈ）」）相で現在生存している患者、および直接的死亡を経験しなかったが、さらなる不利な事象を経験した患者は、直接的または間接的に予期され得ることを意味する。
【００１９】
すべての示される適応症は、例えば、Ｐｓｃｈｙｒｅｍｂｅｌ，Ｄｅ Ｇｒｕｙｔｅｒ，Ｂｅｒｌｉｎ ２００４においてさらに記載されている。
【００２０】
用語「危険性の分類」は、できるだけ有利である過程を可能にするという目的とともに、急性冠症候群、特に、心筋梗塞、狭心症、および／または心筋梗塞後のより集中的な診断および治療／処置の目的で、患者、特に、救急救命室の患者および危険性のある患者におけるより悪い予後を含む。危険性の分類は、本発明によれば、経皮的冠状動脈介入およびより新たな医薬品を利用して、急性冠症候群で適切である、連続して有効な処置プロセスを可能にする。
【００２１】
従って、本発明はまた、特に、徴候のある患者および／または無徴候性の患者、特に、救急救命室の患者において、急性冠症候群、特に、心筋梗塞、狭心症、および／または心筋梗塞後の増大した危険性および／または不利な予後を有する患者を同定することに関する。
【００２２】
安全な分類は、本発明に従う方法によって、特に、救急救命医療および／または集中医療の場合において、特に有利に生じ得る。従って、本発明に従う方法は、迅速な治療の成功および死亡の回避をもたらす臨床的決定を可能にする。このような臨床的決定はまた、急性冠症候群、特に、心筋梗塞（ＡＭＩ）および／または狭心症（ＡＰ）および／または心筋梗塞後の処置もしくは治療のための医薬品による継続した処置を含む。
【００２３】
従って、本発明はまた、好ましくは、時間的に重要な集中医療もしくは救急救命医療において、患者の入院の決定を含む、臨床的決定（例えば、医薬品による継続した処置および治療）を行うための、急性冠症候群および／または心筋梗塞後を有する患者の診断および／または危険性の分類のための方法に関する。
【００２４】
従って、さらなる好ましい実施形態において、本発明に従う方法は、急性冠症候群、特に、心筋梗塞（ＡＭＩ）、および狭心症（ＡＰ）、ならびに心筋梗塞後の治療制御に関する。
【００２５】
本発明に従う方法のさらなる好ましい実施形態において、予後、鑑別診断的初期検出および認識、重篤度の程度の評価、ならびに過程の治療に付随する評価の診断および／または危険性の分類が行われる。
【００２６】
さらなる好ましい実施形態において、本発明は、急性冠症候群、もしくは心筋梗塞、もしくは狭心症、および／または心筋梗塞後の初期診断もしくは鑑別的診断または予後のための、インビトロ診断のための方法に関する。ここでマーカーＣＴ−プロＥＴ−１またはそのフラグメントおよび部分ペプチドの測定は、試験されるべき患者に対して、ＮＴ−プロＢＮＰと組み合わせて行われる。
【００２７】
本発明はさらに、急性冠症候群の診断および危険性の分類のための方法、あるいは上記の実施形態のうちの１つに従う、急性冠症候群、特に、心筋梗塞もしくは狭心症および／または心筋梗塞後の初期診断もしくは鑑別的診断または予後のための方法に関する。ここで上記の実施形態において、診断および／または危険性の分類のための感度および特異性の最大において、上記症状の発生の後に、ＣＴ−プロＥＴ−１またはそのフラグメントおよび部分ペプチドと、ＮＴ−プロＢＮＰとの組み合わせについてのカットオフ値（閾値）は、ＣＴ−プロＥＴ−１については８０〜１５０ｐｍｏｌ／ｌ、特に、９０〜１３０ｐｍｏｌ／ｌ、特に、１０９．５ｐｍｏｌ／ｌであり、ＮＴ−プロＢＮＰについては７５０〜１１００ｐｍｏｌ／ｌ、特に、８００〜９５０ｐｍｏｌ／ｌ、特に、８２７．２ｐｍｏｌ／ｌである（図３および４を参照のこと）。
【００２８】
上記に基づいて、本発明に従う方法は、有利には、感度が高くかつ特異的である。
【００２９】
本発明に従う方法の一実施形態において、体液、好ましくは血液が、試験されるべき患者から抜かれ（必要に応じて、全血もしくは血清、または利用可能な血漿）、そして上記診断は、インビトロ／エキソビボで（例えば、ヒトもしくは動物の身体の外で）行われる。ＮＴ−プロＢＮＰと組み合わせて、マーカーＣＴ−プロＥＴ−１またはそのフラグメントおよび部分ペプチドの測定に基づいて、急性冠症候群、心筋梗塞、および狭心症ならびに／または心筋梗塞後についての高感度および特異性が得られ、そして次いで、上記診断または危険性の分類は、少なくとも１種の患者サンプルに存在する量に基づいて行われ得る。
【００３０】
「ＣＴ−プロＥＴ−１」とは、本発明の過程におけるヒトタンパク質もしくはポリペプチドを意味する。これは、プレプロエンドセリンから得られ得、およびプレプロエンドセリン（配列番号１）の過程において、アミノ酸９３〜２１２を有する遊離フラグメント（１２９ＡＳ、配列番号２：ＡＬＥＮＬＬＰＴ ＫＡＴＤＲＥＮＲＣＱ ＣＡＳＱＫＤＫＫＣＷ ＮＦＣＱＡＧＫＥＬＲ ＡＥＤＩＭＥＫＤＷＮ ＮＨＫＫＧＫＤＣＳＫ ＬＧＫＫＣＩＹＱＱＬ ＶＲＧＲＫＩＲＲＳＳ ＥＥＨＬＲＱＴＲＳＥ ＴＭＲＮＳＶＫＳＳＦ ＨＤＰＫＬＫＧＫＰＳ ＲＥＲＹＶＴＨＮＲＡ ＨＷ）またはアミノ酸１６８〜２１２を有する遊離フラグメント（４４ＡＳ、配列番号３：ＲＳＳ ＥＥＨＬＲＱＴＲＳＥ ＴＭＲＮＳＶＫＳＳＦ ＨＤＰＫＬＫＧＫＰＳ ＲＥＲＹＶＴＨＮＲＡ ＨＷ、図もまた参照のこと）、ならびにこれから利用可能なフラグメントもしくは部分ペプチドもまた含む。本発明に従う上記ポリペプチドはまた、翻訳後修飾（例えば、グリコシル化、脂質化、または誘導体化）を有し得る。
【００３１】
本発明の過程における「ＮＴ−プロＢＮＰ」は、ナトリウム利尿性ペプチドのＢタイプのＮ末端プロ−ホルモン、配列番号４（７６ＡＳ：ＨＰＬＧ ＳＰＧＳＡＳＤＬＥＴ ＳＧＬＱＥＱＲＮＨＬ ＱＧＫＬＳＥＬＱＶＥ ＱＴＳＬＥＰＬＱＥＳ ＰＲＰＴＧＶＷＫＳＲ ＥＶＡＴＥＧＩＲＧＨ ＲＫＭＶＬＹＴＬＲＡ ＰＲ）に従うアミノ酸配列を有するヒトタンパク質、もしくはポリペプチドを意味する。
【００３２】
別の実施形態において、ＮＴ−プロＢＮＰと組み合わせて、ＣＴ−プロＥＴ−１またはそのフラグメントおよび部分ペプチドの測定は、さらなるマーカー、実際に、このようなマーカー（これは、急性冠症候群、特に、心筋梗塞、もしくは狭心症、ならびに心筋梗塞後を既に示す）を用いてさらに行われ得る。
【００３３】
従って、本発明は、本発明に従う方法のこのような実施形態に関する。ここで本発明に従う組み合わせに加えて、上記測定は、炎症マーカー、心血管マーカー、神経ホルモンマーカー、または虚血マーカーの群から選択される少なくとも１種のさらなるマーカーを用いて、試験されるべき患者に対して行われる。
【００３４】
本発明によれば、上記炎症マーカーは、Ｃ反応性タンパク質（ＣＲＰ）、ＴＮＦ−αのようなサイトカイン、ＩＬ−６のようなインターロイキン、プロカルシトニン（１−１１６、３−１１６）、およびＶＣＡＭもしくはＩＣＡＭのような接着分子の群の少なくとも１種のマーカーから選択され得、そして上記心血管マーカーは、心筋組織の壊死を特に示すマーカー、および血圧に対する影響を有するマーカーから、クレアチニンキナーゼ、ミオグロビン、ミエロペルオキシダーゼ、さらなるナトリウム利尿性タンパク質、特に、ＡＮＰ（もしくはＡＮＦ）、プロＡＮＰ、ＮＴ−プロＡＮＰ、ＢＮＰ、プロ−ＢＮＰ、またはこれらの部分配列、心筋トロポニン、ＣＲＰの群から選択される少なくとも１種のマーカーから選択されうる。さらに、これらはまた、循環調節（プロ）ホルモン、特に、プロ−ガストリン放出ペプチド（プロＧＲＰ）、プロ−レプチン、プロ−ニューロペプチド−Ｙ、プロ−ソマトスタチン、プロ−ニューロペプチド−ＹＹ、プロ−オピオメラノコルチン、もしくはプロ−アドレノメデュリン（プロＡＤＭ）またはこれらの部分配列を意味する。
【００３５】
上記虚血マーカーは、トロポニンＩおよびＴ、ＣＫ−ＭＢの群から選択される少なくとも１種のマーカーから選択されうる。さらに、上記神経ホルモンマーカーは、少なくとも１種のさらなるナトリウム利尿性タンパク質、特に、ＡＮＰ（もしくはＡＮＦ）、プロＡＮＰ、ＮＴ−プロＡＮＰ、ＢＮＰ、プロＢＮＰ、またはこれらの部分配列であり得る。
【００３６】
本発明のさらなる実施形態において、本発明に従う方法は、上記マーカーの並行した測定もしくは同時測定によって（すなわち、９６穴以上を有するマルチタイタープレート）、インビトロ診断の過程内で行われ得る。ここで上記測定は、少なくとも１種の患者サンプルに対して行われる。
【００３７】
さらに、本発明に従う方法およびその測定は、診断デバイスにおいて、自動分析デバイスによって、特に、Ｋｒｙｐｔｏｒ（ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｋｒｙｐｔｏｒ．ｎｅｔ／）によって行われうる。
【００３８】
さらなる実施形態において、本発明に従う方法およびその測定は、単一パラメーターもしくは複数パラメーターの測定に拘わらず、迅速な試験（すなわち、ラテラルフロー試験（ｌａｔｅｒａｌ−ｆｌｏｗ Ｔｅｓｔ）もしくはポイント・オブ・ケア（ｐｏｉｎｔ−ｏｆ ｃａｒｅ））によって、行われ得る。特に好ましい実施形態は、自己診断（Ｓｅｌｂｓｔｔｅｓｔ）または救急救命診断に適したデバイスである。
【００３９】
さらに、本発明は、急性冠症候群、心筋梗塞、もしくは狭心症および／または心筋梗塞後の危険性の分類のための、ならびに／あるいは急性冠症候群、心筋梗塞、もしくは狭心症および／または心筋梗塞後の初期診断もしくは鑑別診断もしくは予後のインビトロ診断のための、ＮＴ−プロＢＮＰと組み合わせた、ＣＴ−プロＥＴ−１またはそのフラグメントおよび部分ペプチドの使用に関する。
【００４０】
さらなる目的は、本発明に従う方法を行うための診断デバイス、またはその使用をそれぞれ提供することである。
【００４１】
本発明の過程において、このような診断デバイスは、アレイ、もしくはアッセイ（例えば、免疫アッセイ、ＥＬＩＳＡなど）、さらなる意味において本発明に従う方法を行うためのデバイスである。
【００４２】
本発明はまた、ＮＴ−プロＢＮＰ（配列番号４）および必要に応じて、上記のさらなるマーカーと組み合わせて、ＣＴ−プロＥＴ−１と、その遊離フラグメント（配列番号２および／または配列番号３）またはフラグメントおよび部分ペプチドを測定するための検出試薬を含む、急性冠症候群、心筋梗塞、および／もしくは狭心症、ならびに／または心筋梗塞後の診断および／または危険性の分類のためのキットに関する。このような検出試薬は、例えば、抗体などを含む。
【００４３】
以下の実施例および図面は、本発明を詳細に説明するために供されるが、本発明を上記実施例および図面に限定することはない。
【実施例】
【００４４】
（実施例および図面）
（実施例１）
血液サンプルを、胸痛の主症状と関連する心臓発作を有するとして病院の救急救命室に入った９８３名の患者から採取した。
【００４５】
上記患者を、３４２日間のメジアン期間にわたって観察したところ、上記患者のうちの１０．３％は死亡し、そして５．０％は、心機能不全に起因して、再入院した。
【００４６】
心臓発作を有する患者におけるＣＴ−プロＥＴ−１の血漿濃度は、正常範囲（メジアン値：４４．３ｐｍｏｌ／ｌ、範囲１０．５〜７７．４ｐｍｏｌ／ｌ）とは対照的に、４．６〜６７１ｐｍｏｌ／ｌの範囲の７１ｐｍｏｌ／ｌのメジアンにおいて増大した。いかなる後の事象もない患者と比較して、上記ＣＴ−プロＥＴ−１は、後に死亡した患者、または心機能不全により再入院した患者においてより高かった（メジアン［範囲］ｐｍｏｌ／ｌ、１２３．５；［１４〜６７１］ 対 ７４；［４．６〜５３０；ｐ＜０．０００１）。ＮＴ−プロＢＮＰはまた、いかなる後の事象もない患者とは対照的に、事象を有する患者において増大した（ｐ＜０．０００１）。さらなる詳細は、表１および表２に例示される。
【００４７】
死亡／心機能不全の推定のためのＣｏｘ比例ハザードモデルは、独立した予測変数としてＣＴ−プロＥＴ−１およびＮＴ−プロＢＮＰを同定した（ｌｏｇ ＣＴ−プロＥＴ−１（ＨＴ ６．８２）、ｌｏｇ ＮＴ−ＢＮＰ（ＨＲ ２．６６１）。ＣＴ−プロＥＴ−１の受容者操作者曲線は、０．７７の曲線下面積（ＡＵＣ）を生じた（９５％ ＣＩ：０．７１〜０．８３，ｐ＜０．００１）；ＮＴ−プロＢＮＰについては、ＡＵＣはまた、０．７７であった（９５％ ＣＩ：０．７１〜０．８３，ｐ＜０．００１）；論理モデルにおける両方のマーカーの組み合わせは、０．８２のＡＵＣを生じ（９５％ ＣＩ：０．７７〜０．８７，ｐ＜０．００１）、また、上記２つの個々のマーカーのものより大きなＡＵＣを生じた（図２）。
【００４８】
両方の個々のマーカーとは対照的に、両方のマーカーＣＴ−プロＥＴ−１およびＮＴ−プロＢＮＰの組み合わせから生じるさらなる利益はまた、図３および図４に示され、ここで６０日間後の事象速度を、基本として採取する。上記患者を、カットオフ値に従って分類し、このようにして得られる上記亜群において得た上記事象速度は、例示される。図３において、それらの濃度を、カットオフ値としてＲＯＣ分析から検出した。ここで感度と特異性との積は、事象予後の最大において存在した。図４において、患者集団全体のメジアンは、カットオフ値として機能する。
【００４９】
【表１−１】
【００５０】
【表１−２】
【００５１】
【表２】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、急性冠症候群（ＡＣＳ）、特に、急性心筋梗塞（ＡＭＩ後）の診断および／または危険性の分類のための方法に関し、ここでＣ末端プロ−エンドセリン（ＣＰ−プロＥＴ−１）またはそのフラグメントおよび部分ペプチドの測定は、ＮＴ−プロＢＮＰと組み合わせて行われる。
【背景技術】
【０００２】
上記危険性の分類は、徴候を示す患者もしくは無徴候性の患者に拘わらず、心疾患の領域において増大しつつある重要性を有する。特に、急性冠症候群（ＡＣＳ）および急性心筋梗塞（ＡＭＩ）および狭心症（ＡＰ）、ならびに心筋梗塞後（ＡＭＩ後）の領域において、適切な危険性の分類についての需要が高い。
【０００３】
適切な治療は、救急救命室においてすぐ臨床的決定を行うための必要性に関連して、急性冠症候群の初期診断および鑑別を要する。急性冠症候群における特定されていない症状（胸痛）に起因して、他の病気の鑑別および範囲、ならびに急性冠症候群の認識の両方が必須である。これはまた、心筋梗塞後の場合において必要である。
【０００４】
生化学的マーカー、特に、心筋トロポニン、ミオグロビン、およびＣＫ−ＭＢ−ｍａｓｓのような伝統的なものは、心筋梗塞の予後のために、先行技術において行われてきた（非特許文献１）。ナトリウム利尿性タンパク質のＢタイプ（ＢＮＰ）は、プロ−ＢＮＰ、ＮＴ−プロＢＰ（特許文献１、特許文献２）とともに、親近の診断においてさらに有効な生化学的マーカーであることが分かった。
【０００５】
Ｃ末端プロ−エンドセリンフラグメント（ＣＴ−プロ−ＥＴ−１）は、プレプロ（ｐｅｐｒｏ）−エンドセリン（配列番号１）のアミノ酸配列９３〜２１２もしくは１６８〜２１２とともに、エンドセリン−１の間接的測定もしくは大きなエンドセリン−１含有量についての心血管疾患の診断に関して、特許文献３に記載されている。さらに、ＡＮＰ、ＢＮＰおよびプロＢＮＰのような心臓パラメーターが、マルチパラメーター診断のために、心臓診断において利用され得ることは、特許文献３から公知である。
【０００６】
しかし、現在公知のマーカーを利用する公知の診断法の１つの欠点は、危険性のある患者の時期尚早のおよび完全な決定が、十分に成功していないことである。従って、本発明に基づく１つの目的は、危険性のある患者の改善された決定を可能にする、急性冠症候群および心筋梗塞後の危険性の分類のための方法を開発することである。
【０００７】
別の欠点は、先行技術によれば、上記マーカーの十分な感度および／または特異性がしばしば得られないことである。
【０００８】
別の目的は、急性冠症候群および心筋梗塞後の危険性の分類のための方法を提供することであり、ここで少なくとも１つのマーカー、マーカー組み合わせは、インビトロ診断において十分な感度および特異性を有する。
【０００９】
従って、本発明の課題は、急性冠症候群および心筋梗塞後の診断および／または危険性の分類のための方法を提供することである。
【先行技術文献】
【特許文献】
【００１０】
【特許文献１】欧州特許第１３６３１２８号明細書
【特許文献２】欧州特許出願公開第１６６６８８１号明細書
【特許文献３】欧州特許第１５６４５５８号明細書
【非特許文献】
【００１１】
【非特許文献１】Ｋａｔｕｓ，Ｈ．Ａ．；Ｒｅｍｐｐｉｓ，Ａ．；Ｓｃｈｅｆｆｏｌｄ，Ｔ．；Ｄｉｅｄｅｒｉｃｈ，Ｋ．Ｗ． ａｎｄ Ｋｕｅｂｌｅｒ，Ｗ：Ｉｎｔｒａｃｅｌｌｕｌａｒ ｃｏｍｐａｒｔｍｅｎｔａｔｉｏｎ ｏｆ ｃａｒｄｉａｃ ｔｒｏｐｏｎｉｎ Ｔ ａｎｄ ｉｔｓ ｒｅｌｅａｓｅ ｋｉｎｅｔｉｃｓ ｉｎ ｐａｔｉｅｎｔｓ ｗｉｔｈ ｒｅｐｅｒｆｕｓｅｄ ａｎｄ ｎｏｎｒｅｐｅｒｆｕｓｅｄ ｍｙｏｃａｒｄｉａｌ ｉｎｆａｒｃｔｉｏｎ，Ａｍ Ｊ Ｃａｒｄｉｏ（１９９１）６７（１６）：１３６０−１３６７
【発明の概要】
【課題を解決するための手段】
【００１２】
上記課題は、急性冠症候群および心筋梗塞後の診断および危険性の分類のための方法によって解決される。ここで上記ＣＴ−プロＥＴ−１の測定は、ＮＴ−プロＢＮＰ（配列番号４）と組み合わせて、遊離フラグメント（配列番号２および／または配列番号３）（要するに：「ＣＴ−プロＥＴ−１」）、またはそのフラグメントおよび部分ペプチドに対して行われる（本明細書中以降、本発明に従う方法といわれる）。
【００１３】
驚くべきことに、ＣＴ−プロＥＴ−１またはそのフラグメントおよび部分ペプチドは、ＮＴ−プロＢＮＰと組み合わせて、急性冠症候群および心筋梗塞後の診断についての高い感度および特異性を有する（実施例および図面を参照のこと）。
【図面の簡単な説明】
【００１４】
【図１】プローブ（抗体）によるその検出での、ＣＴ−プロＥＴ（配列番号３）の診断的利用可能性の方式
【図２】ＮＴ−プロＢＮＰもしくはＣＴ−プロＥＴ−１による、または論理的回帰モデルから得られる両方のパラメーターの組み合わせから死亡／心機能不全の予後についてのＲＯＣ曲線。
【図３】示したＣＴ−プロＥＴ−１およびＮＴ−プロＢＮＰ（ともにｐｍｏｌ／ｌ単位）についてのカットオフ濃度に従う、上記心臓発作患者を亜群に分けることによる事象（死亡、心機能不全）の速度。上記カットオフ濃度は、ＲＯＣ分析からの濃度として各々決定した。ここで感度および特異性の積は、事象予後の最大にあった。
【図４】すべての心臓発作患者の測定値のそれぞれのメジアンに基づいて、ＣＴ−プロＥＴ−１およびＮＴ−プロＢＮＰについての測定値の位置に従う、上記心臓発作患者を亜群に分けることによる事象（死亡、心機能不全）の速度。上記メジアンは、ＣＴ−プロＥＴ−１については７７ｐｍｏｌ／ｌであり、ＮＴ−プロＢＮＰについては９１４ｐｍｏｌ／ｌであった。
【発明を実施するための形態】
【００１５】
用語「急性冠症候群」とは、生命の直接的な驚異である冠動脈心疾患の種々の相を含む。これは、救急救命医療、実際に、急性心筋梗塞および／または狭心症、ならびに突然心臓死に適用される。ＷＨＯ基準（ＷＨＯ（１９７９）： Ｎｏｍｅｎｃｌａｔｕｒｅ ａｎｄ ｃｒｉｔｅｒｉａ ｆｏｒ ｄｉａｇｎｏｓｉｓ ｏｆ ｉｓｃｈｅｍｉｃ ｈｅａｒｔ ｄｉｓｅａｓｅ． Ｒｅｐｏｒｔ ｏｆ ｔｈｅ Ｊｏｉｎｔ Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ Ｓｏｃｉｅｔｙ ａｎｄ Ｆｅｄｅｒａｔｉｏｎ ｏｆ Ｃａｒｄｉｏｌｏｇｙ／Ｗｏｒｌｄ Ｈｅａｌｔｈ Ｏｒｇａｎｉｚａｔｉｏｎ ｔａｓｋ ｆｏｒｃｅ ｏｎ ｓｔａｎｄａｒｄｉｚａｔｉｏｎ ｏｆ ｃｌｉｎｉｃａｌ ｎｏｍｅｎｃｌａｔｕｒｅ，Ｃｉｒｃｕｌａｔｉｏｎ ５９（３）：６０７−６０９））に従って定義される急性心筋梗塞に加えて、２０分間を超えて持続する急性胸痛事象は、ＳＴ部分の上昇および／または心筋酵素の増加と合わさっていたので、不安定性狭心症（ＡＰ）という用語は除去され、この用語は、本発明によれば、「急性冠症候群」の下で、文献中で見いだされる（Ｈａｍｍ ＣＷ：Ｇｕｉｄｅｌｉｎｅｓ：Ａｃｕｔｅ Ｃｏｒｏｎａｒｙ Ｓｙｎｄｒｏｍｅ（ＡＣＳ）-Ｐａｒｔ １：ＡＣＳ ｗｉｔｈｏｕｔ ｐｅｒｓｉｓｔｉｎｇ ｅｌｅｖａｔｉｏｎ ｏｆ ＳＴ ｓｅｇｍｅｎｔ．Ｚ Ｋａｒｄｉｏｌ（２００４）９３：７２−９０；Ｐｓｃｈｙｒｅｍｂｅｌ，Ｄｅ Ｇｒｕｙｔｅｒ，Ｂｅｒｌｉｎ ２００４もまた参照のこと）。
【００１６】
「心筋梗塞後患者における不利な（ネガティブな）事象」とは、特に、さらなる（その後の）心筋梗塞、冠動脈不全（Ｈｅｒｚｖｅｒｓａｇｅｎ）、もしくは死亡、または本発明の過程において患者の予後の他の悪化を意味する。
【００１７】
「心筋梗塞」（心臓発作、ＡＭＩ（急性心筋梗塞））とは、本発明の過程において、心臓の急性かつ生命を脅かす疾患を意味する。ここで心筋（Ｈｅｒｚｍｕｓｋｅｌ）（心筋（Ｍｙｏｋａｒｄ））の死滅もしくは一部の組織壊死は、通常、２０分間より長く持続する循環障害（虚血）に起因して生じる。心臓発作の主要な症状は、突然生じる、２０分間より長く持続する、胸部における大部分は強い疼痛（「胸痛」）である。この疼痛は、肩、腕、下顎、および上腹部へ拡がり得、そして発汗、悪心、およびおそらく嘔吐が付随し得る。冠動脈不全は、おそらく心筋梗塞に起因する。
【００１８】
用語「心筋梗塞後」とは、過去に、例えば、１時間にわたって、特に、２０時間にわたって、特に、１〜５日間にわたって、または３〜５日間にわたって、心筋梗塞に既に罹患しており、後（ｐｏｓｔ）の（「後の（Ｄａｎａｃｈ）」）相で現在生存している患者、および直接的死亡を経験しなかったが、さらなる不利な事象を経験した患者は、直接的または間接的に予期され得ることを意味する。
【００１９】
すべての示される適応症は、例えば、Ｐｓｃｈｙｒｅｍｂｅｌ，Ｄｅ Ｇｒｕｙｔｅｒ，Ｂｅｒｌｉｎ ２００４においてさらに記載されている。
【００２０】
用語「危険性の分類」は、できるだけ有利である過程を可能にするという目的とともに、急性冠症候群、特に、心筋梗塞、狭心症、および／または心筋梗塞後のより集中的な診断および治療／処置の目的で、患者、特に、救急救命室の患者および危険性のある患者におけるより悪い予後を含む。危険性の分類は、本発明によれば、経皮的冠状動脈介入およびより新たな医薬品を利用して、急性冠症候群で適切である、連続して有効な処置プロセスを可能にする。
【００２１】
従って、本発明はまた、特に、徴候のある患者および／または無徴候性の患者、特に、救急救命室の患者において、急性冠症候群、特に、心筋梗塞、狭心症、および／または心筋梗塞後の増大した危険性および／または不利な予後を有する患者を同定することに関する。
【００２２】
安全な分類は、本発明に従う方法によって、特に、救急救命医療および／または集中医療の場合において、特に有利に生じ得る。従って、本発明に従う方法は、迅速な治療の成功および死亡の回避をもたらす臨床的決定を可能にする。このような臨床的決定はまた、急性冠症候群、特に、心筋梗塞（ＡＭＩ）および／または狭心症（ＡＰ）および／または心筋梗塞後の処置もしくは治療のための医薬品による継続した処置を含む。
【００２３】
従って、本発明はまた、好ましくは、時間的に重要な集中医療もしくは救急救命医療において、患者の入院の決定を含む、臨床的決定（例えば、医薬品による継続した処置および治療）を行うための、急性冠症候群および／または心筋梗塞後を有する患者の診断および／または危険性の分類のための方法に関する。
【００２４】
従って、さらなる好ましい実施形態において、本発明に従う方法は、急性冠症候群、特に、心筋梗塞（ＡＭＩ）、および狭心症（ＡＰ）、ならびに心筋梗塞後の治療制御に関する。
【００２５】
本発明に従う方法のさらなる好ましい実施形態において、予後、鑑別診断的初期検出および認識、重篤度の程度の評価、ならびに過程の治療に付随する評価の診断および／または危険性の分類が行われる。
【００２６】
さらなる好ましい実施形態において、本発明は、急性冠症候群、もしくは心筋梗塞、もしくは狭心症、および／または心筋梗塞後の初期診断もしくは鑑別的診断または予後のための、インビトロ診断のための方法に関する。ここでマーカーＣＴ−プロＥＴ−１またはそのフラグメントおよび部分ペプチドの測定は、試験されるべき患者に対して、ＮＴ−プロＢＮＰと組み合わせて行われる。
【００２７】
本発明はさらに、急性冠症候群の診断および危険性の分類のための方法、あるいは上記の実施形態のうちの１つに従う、急性冠症候群、特に、心筋梗塞もしくは狭心症および／または心筋梗塞後の初期診断もしくは鑑別的診断または予後のための方法に関する。ここで上記の実施形態において、診断および／または危険性の分類のための感度および特異性の最大において、上記症状の発生の後に、ＣＴ−プロＥＴ−１またはそのフラグメントおよび部分ペプチドと、ＮＴ−プロＢＮＰとの組み合わせについてのカットオフ値（閾値）は、ＣＴ−プロＥＴ−１については８０〜１５０ｐｍｏｌ／ｌ、特に、９０〜１３０ｐｍｏｌ／ｌ、特に、１０９．５ｐｍｏｌ／ｌであり、ＮＴ−プロＢＮＰについては７５０〜１１００ｐｍｏｌ／ｌ、特に、８００〜９５０ｐｍｏｌ／ｌ、特に、８２７．２ｐｍｏｌ／ｌである（図３および４を参照のこと）。
【００２８】
上記に基づいて、本発明に従う方法は、有利には、感度が高くかつ特異的である。
【００２９】
本発明に従う方法の一実施形態において、体液、好ましくは血液が、試験されるべき患者から抜かれ（必要に応じて、全血もしくは血清、または利用可能な血漿）、そして上記診断は、インビトロ／エキソビボで（例えば、ヒトもしくは動物の身体の外で）行われる。ＮＴ−プロＢＮＰと組み合わせて、マーカーＣＴ−プロＥＴ−１またはそのフラグメントおよび部分ペプチドの測定に基づいて、急性冠症候群、心筋梗塞、および狭心症ならびに／または心筋梗塞後についての高感度および特異性が得られ、そして次いで、上記診断または危険性の分類は、少なくとも１種の患者サンプルに存在する量に基づいて行われ得る。
【００３０】
「ＣＴ−プロＥＴ−１」とは、本発明の過程におけるヒトタンパク質もしくはポリペプチドを意味する。これは、プレプロエンドセリンから得られ得、およびプレプロエンドセリン（配列番号１）の過程において、アミノ酸９３〜２１２を有する遊離フラグメント（１２９ＡＳ、配列番号２：ＡＬＥＮＬＬＰＴ ＫＡＴＤＲＥＮＲＣＱ ＣＡＳＱＫＤＫＫＣＷ ＮＦＣＱＡＧＫＥＬＲ ＡＥＤＩＭＥＫＤＷＮ ＮＨＫＫＧＫＤＣＳＫ ＬＧＫＫＣＩＹＱＱＬ ＶＲＧＲＫＩＲＲＳＳ ＥＥＨＬＲＱＴＲＳＥ ＴＭＲＮＳＶＫＳＳＦ ＨＤＰＫＬＫＧＫＰＳ ＲＥＲＹＶＴＨＮＲＡ ＨＷ）またはアミノ酸１６８〜２１２を有する遊離フラグメント（４４ＡＳ、配列番号３：ＲＳＳ ＥＥＨＬＲＱＴＲＳＥ ＴＭＲＮＳＶＫＳＳＦ ＨＤＰＫＬＫＧＫＰＳ ＲＥＲＹＶＴＨＮＲＡ ＨＷ、図もまた参照のこと）、ならびにこれから利用可能なフラグメントもしくは部分ペプチドもまた含む。本発明に従う上記ポリペプチドはまた、翻訳後修飾（例えば、グリコシル化、脂質化、または誘導体化）を有し得る。
【００３１】
本発明の過程における「ＮＴ−プロＢＮＰ」は、ナトリウム利尿性ペプチドのＢタイプのＮ末端プロ−ホルモン、配列番号４（７６ＡＳ：ＨＰＬＧ ＳＰＧＳＡＳＤＬＥＴ ＳＧＬＱＥＱＲＮＨＬ ＱＧＫＬＳＥＬＱＶＥ ＱＴＳＬＥＰＬＱＥＳ ＰＲＰＴＧＶＷＫＳＲ ＥＶＡＴＥＧＩＲＧＨ ＲＫＭＶＬＹＴＬＲＡ ＰＲ）に従うアミノ酸配列を有するヒトタンパク質、もしくはポリペプチドを意味する。
【００３２】
別の実施形態において、ＮＴ−プロＢＮＰと組み合わせて、ＣＴ−プロＥＴ−１またはそのフラグメントおよび部分ペプチドの測定は、さらなるマーカー、実際に、このようなマーカー（これは、急性冠症候群、特に、心筋梗塞、もしくは狭心症、ならびに心筋梗塞後を既に示す）を用いてさらに行われ得る。
【００３３】
従って、本発明は、本発明に従う方法のこのような実施形態に関する。ここで本発明に従う組み合わせに加えて、上記測定は、炎症マーカー、心血管マーカー、神経ホルモンマーカー、または虚血マーカーの群から選択される少なくとも１種のさらなるマーカーを用いて、試験されるべき患者に対して行われる。
【００３４】
本発明によれば、上記炎症マーカーは、Ｃ反応性タンパク質（ＣＲＰ）、ＴＮＦ−αのようなサイトカイン、ＩＬ−６のようなインターロイキン、プロカルシトニン（１−１１６、３−１１６）、およびＶＣＡＭもしくはＩＣＡＭのような接着分子の群の少なくとも１種のマーカーから選択され得、そして上記心血管マーカーは、心筋組織の壊死を特に示すマーカー、および血圧に対する影響を有するマーカーから、クレアチニンキナーゼ、ミオグロビン、ミエロペルオキシダーゼ、さらなるナトリウム利尿性タンパク質、特に、ＡＮＰ（もしくはＡＮＦ）、プロＡＮＰ、ＮＴ−プロＡＮＰ、ＢＮＰ、プロ−ＢＮＰ、またはこれらの部分配列、心筋トロポニン、ＣＲＰの群から選択される少なくとも１種のマーカーから選択されうる。さらに、これらはまた、循環調節（プロ）ホルモン、特に、プロ−ガストリン放出ペプチド（プロＧＲＰ）、プロ−レプチン、プロ−ニューロペプチド−Ｙ、プロ−ソマトスタチン、プロ−ニューロペプチド−ＹＹ、プロ−オピオメラノコルチン、もしくはプロ−アドレノメデュリン（プロＡＤＭ）またはこれらの部分配列を意味する。
【００３５】
上記虚血マーカーは、トロポニンＩおよびＴ、ＣＫ−ＭＢの群から選択される少なくとも１種のマーカーから選択されうる。さらに、上記神経ホルモンマーカーは、少なくとも１種のさらなるナトリウム利尿性タンパク質、特に、ＡＮＰ（もしくはＡＮＦ）、プロＡＮＰ、ＮＴ−プロＡＮＰ、ＢＮＰ、プロＢＮＰ、またはこれらの部分配列であり得る。
【００３６】
本発明のさらなる実施形態において、本発明に従う方法は、上記マーカーの並行した測定もしくは同時測定によって（すなわち、９６穴以上を有するマルチタイタープレート）、インビトロ診断の過程内で行われ得る。ここで上記測定は、少なくとも１種の患者サンプルに対して行われる。
【００３７】
さらに、本発明に従う方法およびその測定は、診断デバイスにおいて、自動分析デバイスによって、特に、Ｋｒｙｐｔｏｒ（ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｋｒｙｐｔｏｒ．ｎｅｔ／）によって行われうる。
【００３８】
さらなる実施形態において、本発明に従う方法およびその測定は、単一パラメーターもしくは複数パラメーターの測定に拘わらず、迅速な試験（すなわち、ラテラルフロー試験（ｌａｔｅｒａｌ−ｆｌｏｗ Ｔｅｓｔ）もしくはポイント・オブ・ケア（ｐｏｉｎｔ−ｏｆ ｃａｒｅ））によって、行われ得る。特に好ましい実施形態は、自己診断（Ｓｅｌｂｓｔｔｅｓｔ）または救急救命診断に適したデバイスである。
【００３９】
さらに、本発明は、急性冠症候群、心筋梗塞、もしくは狭心症および／または心筋梗塞後の危険性の分類のための、ならびに／あるいは急性冠症候群、心筋梗塞、もしくは狭心症および／または心筋梗塞後の初期診断もしくは鑑別診断もしくは予後のインビトロ診断のための、ＮＴ−プロＢＮＰと組み合わせた、ＣＴ−プロＥＴ−１またはそのフラグメントおよび部分ペプチドの使用に関する。
【００４０】
さらなる目的は、本発明に従う方法を行うための診断デバイス、またはその使用をそれぞれ提供することである。
【００４１】
本発明の過程において、このような診断デバイスは、アレイ、もしくはアッセイ（例えば、免疫アッセイ、ＥＬＩＳＡなど）、さらなる意味において本発明に従う方法を行うためのデバイスである。
【００４２】
本発明はまた、ＮＴ−プロＢＮＰ（配列番号４）および必要に応じて、上記のさらなるマーカーと組み合わせて、ＣＴ−プロＥＴ−１と、その遊離フラグメント（配列番号２および／または配列番号３）またはフラグメントおよび部分ペプチドを測定するための検出試薬を含む、急性冠症候群、心筋梗塞、および／もしくは狭心症、ならびに／または心筋梗塞後の診断および／または危険性の分類のためのキットに関する。このような検出試薬は、例えば、抗体などを含む。
【００４３】
以下の実施例および図面は、本発明を詳細に説明するために供されるが、本発明を上記実施例および図面に限定することはない。
【実施例】
【００４４】
（実施例および図面）
（実施例１）
血液サンプルを、胸痛の主症状と関連する心臓発作を有するとして病院の救急救命室に入った９８３名の患者から採取した。
【００４５】
上記患者を、３４２日間のメジアン期間にわたって観察したところ、上記患者のうちの１０．３％は死亡し、そして５．０％は、心機能不全に起因して、再入院した。
【００４６】
心臓発作を有する患者におけるＣＴ−プロＥＴ−１の血漿濃度は、正常範囲（メジアン値：４４．３ｐｍｏｌ／ｌ、範囲１０．５〜７７．４ｐｍｏｌ／ｌ）とは対照的に、４．６〜６７１ｐｍｏｌ／ｌの範囲の７１ｐｍｏｌ／ｌのメジアンにおいて増大した。いかなる後の事象もない患者と比較して、上記ＣＴ−プロＥＴ−１は、後に死亡した患者、または心機能不全により再入院した患者においてより高かった（メジアン［範囲］ｐｍｏｌ／ｌ、１２３．５；［１４〜６７１］ 対 ７４；［４．６〜５３０；ｐ＜０．０００１）。ＮＴ−プロＢＮＰはまた、いかなる後の事象もない患者とは対照的に、事象を有する患者において増大した（ｐ＜０．０００１）。さらなる詳細は、表１および表２に例示される。
【００４７】
死亡／心機能不全の推定のためのＣｏｘ比例ハザードモデルは、独立した予測変数としてＣＴ−プロＥＴ−１およびＮＴ−プロＢＮＰを同定した（ｌｏｇ ＣＴ−プロＥＴ−１（ＨＴ ６．８２）、ｌｏｇ ＮＴ−ＢＮＰ（ＨＲ ２．６６１）。ＣＴ−プロＥＴ−１の受容者操作者曲線は、０．７７の曲線下面積（ＡＵＣ）を生じた（９５％ ＣＩ：０．７１〜０．８３，ｐ＜０．００１）；ＮＴ−プロＢＮＰについては、ＡＵＣはまた、０．７７であった（９５％ ＣＩ：０．７１〜０．８３，ｐ＜０．００１）；論理モデルにおける両方のマーカーの組み合わせは、０．８２のＡＵＣを生じ（９５％ ＣＩ：０．７７〜０．８７，ｐ＜０．００１）、また、上記２つの個々のマーカーのものより大きなＡＵＣを生じた（図２）。
【００４８】
両方の個々のマーカーとは対照的に、両方のマーカーＣＴ−プロＥＴ−１およびＮＴ−プロＢＮＰの組み合わせから生じるさらなる利益はまた、図３および図４に示され、ここで６０日間後の事象速度を、基本として採取する。上記患者を、カットオフ値に従って分類し、このようにして得られる上記亜群において得た上記事象速度は、例示される。図３において、それらの濃度を、カットオフ値としてＲＯＣ分析から検出した。ここで感度と特異性との積は、事象予後の最大において存在した。図４において、患者集団全体のメジアンは、カットオフ値として機能する。
【００４９】
【表１−１】
【００５０】
【表１−２】
【００５１】
【表２】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
急性冠症候群、および／または心筋梗塞後のインビトロ診断および／または危険性の分類のための方法であって、該方法は、ＣＴ−プロＥＴ−１と、その遊離フラグメント（配列番号２および／または配列番号３）もしくはフラグメントおよび部分ペプチドの測定は、試験されるべき患者においてＮＴ−プロＢＮＰ（配列番号４）と組み合わせて行われることで特徴づけられる、方法。
【請求項２】
前記方法は、急性冠症候群、特に、心筋梗塞、狭心症、および／または心筋梗塞後の増大した危険性および／または好ましくない予後を有する患者を同定するためのものである、請求項１に記載の、急性冠症候群、および／または心筋梗塞後の診断および／または危険性の分類のための方法。
【請求項３】
前記患者は、徴候を示すおよび／または無症候性の患者、特に、救急救命室の患者である、請求項１または２に記載の、急性冠症候群、および／または心筋梗塞後の診断および／または危険性の分類のための方法。
【請求項４】
前記方法は、急性冠症候群、特に、心筋梗塞（ＡＭＩ）および狭心症（ＡＰ）、ならびに／または心筋梗塞後の治療制御のための、特に、集中医療もしくは救急救命医療におけるものである、請求項１〜３のいずれか１項に記載の、急性冠症候群、および／または心筋梗塞後の診断および／または危険性の分類のための方法。
【請求項５】
前記方法は、前記患者を入院させるための決定を含む、臨床的決定、特に、医薬品による、特に、集中医療もしくは救急救命医療における継続的な処置および治療を行うためのものである、請求項１〜４のいずれか１項に記載の、急性冠症候群、および／または心筋梗塞後の診断および／または危険性の分類のための方法。
【請求項６】
前記方法は、予後のための、鑑別診断的初期検出および認識のための、重篤度の程度の評価のための、ならびに経過の治療に付随する評価のためのものである、請求項１〜４のいずれか１項に記載の、急性冠症候群、および／または心筋梗塞後の診断および／または危険性の分類のための方法。
【請求項７】
カットオフ値は、ＣＴ−プロＥＴ−１については８０〜１５０ｐｍｏｌ／ｌ、特に、９０〜１３０ｐｍｏｌ／ｌ、特に、１０９．５ｐｍｏｌ／ｌであり、そしてＮＴ−プロＢＮＰについては７５０〜１１００ｐｍｏｌ／ｌ、特に、８００〜９５０ｐｍｏｌ／ｌ、特に、８２７．２ｐｍｏｌ／ｌであることで特徴づけられる、請求項１〜６のいずれか１項に記載の方法。
【請求項８】
少なくとも１種のさらなるマーカーの決定がさらに行われ、該少なくとも１種のさらなるマーカーは、炎症マーカー、心血管マーカー、神経ホルモンマーカー、または虚血マーカーの群から選択されることで特徴づけられる、請求項１〜７のいずれか１項に記載の方法。
【請求項９】
前記炎症マーカーは、Ｃ反応性タンパク質（ＣＲＰ）、ＴＮＦ−αのようなサイトカイン、ＩＬ−６のようなインターロイキン、プロカルシトニン（１−１１６、３−１１６）、およびＶＣＡＭもしくはＩＣＡＭのような接着分子の群の少なくとも１種のマーカーから選択されることで特徴づけられる、請求項１〜８のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１０】
前記心血管マーカーは、クレアチニンキナーゼ、ミオグロビン、ミエロペルオキシダーゼ、ナトリウム利尿性タンパク質、特に、ＡＮＰ（もしくはＡＮＦ）、プロＡＮＰ、ＮＴ−プロＡＮＰ、ＢＮＰ、プロ−ＢＮＰ、またはこれらの部分配列、心筋トロポニン、ＣＲＰ、およびプロ−ガストリン放出ペプチド（プロＧＲＰ）、プロ−エンドセリン−１、プロ−レプチン、プロ−ニューロペプチド−Ｙ、プロ−ソマトスタチン、プロ−ニューロペプチド−ＹＹ、プロ−オピオメラノコルチン、もしくはプロ−アドレノメデュリン（プロＡＤＭ）のような循環調節（プロ）ホルモン、またはこれらの部分配列の群から選択されることで特徴づけられる、請求項１〜９のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１１】
前記虚血マーカーは、トロポニンＩおよびＴ、ＣＫ−ＭＢの群の少なくとも１種のマーカーから選択される、請求項１〜１０のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１２】
前記神経ホルモンマーカーは、少なくとも１種の、ナトリウム利尿性タンパク質、特に、ＡＮＰ（もしくはＡＮＦ）、プロＡＮＰ、ＮＴ−プロＡＮＰ、ＢＮＰ、プロＢＮＰ、またはこれらの部分配列であることで特徴づけられる、請求項１〜１１のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１３】
前記マーカーの並行した測定もしくは同時測定を行うことができることで特徴づけられる、請求項１〜１２のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１４】
前記測定は、少なくとも１つの患者サンプルに対して行われることで特徴づけられる、請求項１〜１３のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１５】
前記測定は、自動分析デバイスで、特に、Ｋｒｙｐｔｏｒによって行われることで特徴づけられる、請求項１〜１４のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１６】
前記測定は、迅速な試験、特に、単一パラメーターもしくは複数パラメーターの測定によって行われることで特徴づけられる、請求項１〜１５のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１７】
急性冠症候群、心筋梗塞、狭心症、および／または心筋梗塞後の診断および／または危険性の分類のための、ＮＴ−プロＢＮＯＰ（配列番号４）および必要に応じて、請求項８〜１２のいずれか１項に記載のさらなるマーカーと組み合わせた、遊離フラグメント（配列番号２および／または配列番号３）またはそのフラグメントおよび部分ペプチドとのＣＴ−プロＥＴ−１の使用。
【請求項１８】
ＮＴ−プロＢＮＰ（配列番号４）および必要に応じて、請求項８〜１２のいずれか１項に記載のさらなるマーカーと組み合わせて、ＣＴ−プロＥＴ−１と、その遊離フラグメント（配列番号２および／または配列番号３）またはフラグメントおよび部分ペプチドを測定するための検出試薬、ならびに補助的手段を含む、急性冠症候群、心筋梗塞、狭心症、および／または心筋梗塞後の危険性の分類のためのキット。
【請求項１９】
請求項１〜１６のいずれか１項に記載の方法を行うための診断デバイス。
【請求項２０】
ＮＴ−プロＢＮＰ（配列番号４）および必要に応じて、請求項８〜１２のいずれか１項に記載のさらなるマーカーと組み合わせて、ＣＴ−プロＥＴ−１と、その遊離フラグメント（配列番号２および／または配列番号３）またはフラグメントおよび部分ペプチドを測定するための検出試薬、ならびに補助的手段を含む、急性冠症候群、心筋梗塞、および／または狭心症の診断のためのキット。
【請求項１】
急性冠症候群、および／または心筋梗塞後のインビトロ診断および／または危険性の分類のための方法であって、該方法は、ＣＴ−プロＥＴ−１と、その遊離フラグメント（配列番号２および／または配列番号３）もしくはフラグメントおよび部分ペプチドの測定は、試験されるべき患者においてＮＴ−プロＢＮＰ（配列番号４）と組み合わせて行われることで特徴づけられる、方法。
【請求項２】
前記方法は、急性冠症候群、特に、心筋梗塞、狭心症、および／または心筋梗塞後の増大した危険性および／または好ましくない予後を有する患者を同定するためのものである、請求項１に記載の、急性冠症候群、および／または心筋梗塞後の診断および／または危険性の分類のための方法。
【請求項３】
前記患者は、徴候を示すおよび／または無症候性の患者、特に、救急救命室の患者である、請求項１または２に記載の、急性冠症候群、および／または心筋梗塞後の診断および／または危険性の分類のための方法。
【請求項４】
前記方法は、急性冠症候群、特に、心筋梗塞（ＡＭＩ）および狭心症（ＡＰ）、ならびに／または心筋梗塞後の治療制御のための、特に、集中医療もしくは救急救命医療におけるものである、請求項１〜３のいずれか１項に記載の、急性冠症候群、および／または心筋梗塞後の診断および／または危険性の分類のための方法。
【請求項５】
前記方法は、前記患者を入院させるための決定を含む、臨床的決定、特に、医薬品による、特に、集中医療もしくは救急救命医療における継続的な処置および治療を行うためのものである、請求項１〜４のいずれか１項に記載の、急性冠症候群、および／または心筋梗塞後の診断および／または危険性の分類のための方法。
【請求項６】
前記方法は、予後のための、鑑別診断的初期検出および認識のための、重篤度の程度の評価のための、ならびに経過の治療に付随する評価のためのものである、請求項１〜４のいずれか１項に記載の、急性冠症候群、および／または心筋梗塞後の診断および／または危険性の分類のための方法。
【請求項７】
カットオフ値は、ＣＴ−プロＥＴ−１については８０〜１５０ｐｍｏｌ／ｌ、特に、９０〜１３０ｐｍｏｌ／ｌ、特に、１０９．５ｐｍｏｌ／ｌであり、そしてＮＴ−プロＢＮＰについては７５０〜１１００ｐｍｏｌ／ｌ、特に、８００〜９５０ｐｍｏｌ／ｌ、特に、８２７．２ｐｍｏｌ／ｌであることで特徴づけられる、請求項１〜６のいずれか１項に記載の方法。
【請求項８】
少なくとも１種のさらなるマーカーの決定がさらに行われ、該少なくとも１種のさらなるマーカーは、炎症マーカー、心血管マーカー、神経ホルモンマーカー、または虚血マーカーの群から選択されることで特徴づけられる、請求項１〜７のいずれか１項に記載の方法。
【請求項９】
前記炎症マーカーは、Ｃ反応性タンパク質（ＣＲＰ）、ＴＮＦ−αのようなサイトカイン、ＩＬ−６のようなインターロイキン、プロカルシトニン（１−１１６、３−１１６）、およびＶＣＡＭもしくはＩＣＡＭのような接着分子の群の少なくとも１種のマーカーから選択されることで特徴づけられる、請求項１〜８のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１０】
前記心血管マーカーは、クレアチニンキナーゼ、ミオグロビン、ミエロペルオキシダーゼ、ナトリウム利尿性タンパク質、特に、ＡＮＰ（もしくはＡＮＦ）、プロＡＮＰ、ＮＴ−プロＡＮＰ、ＢＮＰ、プロ−ＢＮＰ、またはこれらの部分配列、心筋トロポニン、ＣＲＰ、およびプロ−ガストリン放出ペプチド（プロＧＲＰ）、プロ−エンドセリン−１、プロ−レプチン、プロ−ニューロペプチド−Ｙ、プロ−ソマトスタチン、プロ−ニューロペプチド−ＹＹ、プロ−オピオメラノコルチン、もしくはプロ−アドレノメデュリン（プロＡＤＭ）のような循環調節（プロ）ホルモン、またはこれらの部分配列の群から選択されることで特徴づけられる、請求項１〜９のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１１】
前記虚血マーカーは、トロポニンＩおよびＴ、ＣＫ−ＭＢの群の少なくとも１種のマーカーから選択される、請求項１〜１０のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１２】
前記神経ホルモンマーカーは、少なくとも１種の、ナトリウム利尿性タンパク質、特に、ＡＮＰ（もしくはＡＮＦ）、プロＡＮＰ、ＮＴ−プロＡＮＰ、ＢＮＰ、プロＢＮＰ、またはこれらの部分配列であることで特徴づけられる、請求項１〜１１のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１３】
前記マーカーの並行した測定もしくは同時測定を行うことができることで特徴づけられる、請求項１〜１２のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１４】
前記測定は、少なくとも１つの患者サンプルに対して行われることで特徴づけられる、請求項１〜１３のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１５】
前記測定は、自動分析デバイスで、特に、Ｋｒｙｐｔｏｒによって行われることで特徴づけられる、請求項１〜１４のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１６】
前記測定は、迅速な試験、特に、単一パラメーターもしくは複数パラメーターの測定によって行われることで特徴づけられる、請求項１〜１５のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１７】
急性冠症候群、心筋梗塞、狭心症、および／または心筋梗塞後の診断および／または危険性の分類のための、ＮＴ−プロＢＮＯＰ（配列番号４）および必要に応じて、請求項８〜１２のいずれか１項に記載のさらなるマーカーと組み合わせた、遊離フラグメント（配列番号２および／または配列番号３）またはそのフラグメントおよび部分ペプチドとのＣＴ−プロＥＴ−１の使用。
【請求項１８】
ＮＴ−プロＢＮＰ（配列番号４）および必要に応じて、請求項８〜１２のいずれか１項に記載のさらなるマーカーと組み合わせて、ＣＴ−プロＥＴ−１と、その遊離フラグメント（配列番号２および／または配列番号３）またはフラグメントおよび部分ペプチドを測定するための検出試薬、ならびに補助的手段を含む、急性冠症候群、心筋梗塞、狭心症、および／または心筋梗塞後の危険性の分類のためのキット。
【請求項１９】
請求項１〜１６のいずれか１項に記載の方法を行うための診断デバイス。
【請求項２０】
ＮＴ−プロＢＮＰ（配列番号４）および必要に応じて、請求項８〜１２のいずれか１項に記載のさらなるマーカーと組み合わせて、ＣＴ−プロＥＴ−１と、その遊離フラグメント（配列番号２および／または配列番号３）またはフラグメントおよび部分ペプチドを測定するための検出試薬、ならびに補助的手段を含む、急性冠症候群、心筋梗塞、および／または狭心症の診断のためのキット。
【図１】
【図３】
【図４】
【図２】
【図３】
【図４】
【図２】
【公表番号】特表２０１０−５１３８８０（Ｐ２０１０−５１３８８０Ａ）
【公表日】平成２２年４月３０日（２０１０．４．３０）
【国際特許分類】
【出願番号】特願２００９−５４１７６３（Ｐ２００９−５４１７６３）
【出願日】平成１９年１２月２２日（２００７．１２．２２）
【国際出願番号】ＰＣＴ／ＤＥ２００７／００２３１３
【国際公開番号】ＷＯ２００８／０７７３９６
【国際公開日】平成２０年７月３日（２００８．７．３）
【出願人】（５０９０９１３３２）ブラームズ アクチェンゲゼルシャフト (12)
【Ｆターム（参考）】
【公表日】平成２２年４月３０日（２０１０．４．３０）
【国際特許分類】
【出願日】平成１９年１２月２２日（２００７．１２．２２）
【国際出願番号】ＰＣＴ／ＤＥ２００７／００２３１３
【国際公開番号】ＷＯ２００８／０７７３９６
【国際公開日】平成２０年７月３日（２００８．７．３）
【出願人】（５０９０９１３３２）ブラームズ アクチェンゲゼルシャフト (12)
【Ｆターム（参考）】
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