本明細書においては、電位依存性ナトリウムイオンチャネル（ＮａＶ）を発現する細胞及び細胞株及びこの細胞及び細胞株の使用方法が開示される。ＮａＶを発現する細胞及び細胞株は細胞を使用したアッセイ、例えばハイスループットスクリーニングアッセイにおいて有用である。

【特許請求の範囲】
【請求項１】
アッセイにおいて少なくとも０．５のＺ’ファクターを生じる、ＮａＶを安定して発現するように改変された細胞又は細胞株。
【請求項２】
前記Ｚ’ファクターが少なくとも０．５５、０．６０、０．６５、０．７０、０．７５、０．８０、又は０．８５である、請求項１に記載の細胞又は細胞株。
【請求項３】
前記細胞又は細胞株が選択圧のない条件で生育する、請求項１に記載の細胞又は細胞株。
【請求項４】
前記細胞又は細胞株が選択圧のない条件で少なくとも１５日、３０日、４５日、６０日、７５日、１００日、１２０日、又は１５０日の間ＮａＶを発現する、請求項１に記載の細胞又は細胞株。
【請求項５】
前記細胞又は細胞株が選択圧のない条件で一定のレベルのＮａＶを、少なくとも１５日、３０日、４５日、６０日、７５日、１００日、１２０日、又は１５０日の間発現する、請求項１に記載の細胞又は細胞株。
【請求項６】
前記ＮａＶがアルファサブユニット及びベータサブユニットを含む、請求項１に記載の細胞又は細胞株。
【請求項７】
前記ＮａＶが異なるベータサブユニットをさらに含む、請求項６に記載の細胞又は細胞株。
【請求項８】
前記ＮａＶが、サブユニットをコードする導入された核酸から発現するサブユニットを含む、請求項１に記載の細胞又は細胞株。
【請求項９】
前記ＮａＶが、遺伝子活性化によって活性化された内生の遺伝子から発現するＮａＶサブユニットを含む、請求項１に記載の細胞又は細胞株。
【請求項１０】
前記細胞又は細胞株が、改変に先立って内生ＮａＶを発現しない、請求項１に記載の細胞又は細胞株。
【請求項１１】
前記ＮａＶがいずれのポリペプチドタグをも含まない、請求項１に記載の細胞又は細胞株。
【請求項１２】
前記細胞又は細胞株が哺乳類である、請求項１に記載の細胞又は細胞株。
【請求項１３】
前記ＮａＶが２つ、３つ、又は４つのサブユニットを含む、請求項１に記載の細胞又は細胞株。
【請求項１４】
前記ＮａＶがヒトＮａＶである、請求項１に記載の細胞又は細胞株。
【請求項１５】
前記アルファサブユニットがアルファ１、アルファ２、アルファ３、アルファ４、アルファ５、アルファ７、アルファ８、アルファ９、アルファ１０、又はアルファ１１サブユニットである、請求項６に記載の細胞又は細胞株。
【請求項１６】
前記ベータサブユニットがベータ１、ベータ２、ベータ３、又はベータ４サブユニットである、請求項６に記載の細胞又は細胞株。
【請求項１７】
前記アルファサブユニットがヒトＮａＶアルファ９サブユニットである、請求項６に記載の細胞又は細胞株。
【請求項１８】
前記ベータサブユニットがヒトベータ１サブユニットである、請求項６又は１６に記載の細胞又は細胞株。
【請求項１９】
前記ＮａＶがヒトベータ２サブユニットをさらに含む、請求項１８に記載の細胞又は細胞株。
【請求項２０】
前記細胞又は細胞株が異なる形状のＮａＶを発現するコレクション中に含まれる、請求項１に記載の細胞又は細胞株のコレクション。
【請求項２１】
前記細胞又は細胞株を、並行処理を可能にする同じ生理学的特性を有するように同調させた、請求項２０に記載のコレクション。
【請求項２２】
前記細胞又は細胞株が全て同じ細胞型である、請求項２０に記載のコレクション。
【請求項２３】
前記生理学的特性が成長速度である、請求項２０に記載のコレクション。
【請求項２４】
前記生理学的特性が組織培養表面への付着である、請求項２０に記載のコレクション。
【請求項２５】
前記生理学的特性がＺ’ファクターである、請求項２０に記載のコレクション。
【請求項２６】
前記生理学的特性がＮａＶの発現レベルである、請求項２０に記載のコレクション。
【請求項２７】
ＮａＶ調節因子を同定する方法であって、前記方法は、
請求項１〜１９のいずれかに記載の細胞又は細胞株、又は請求項２０〜２６のいずれか１項に記載のコレクションに試験化合物を接触させる工程；及び
試験化合物に接触していない細胞と比較して、細胞におけるＮａＶ機能の変化を検出する工程を含み、ここで前記機能の変化は該試験化合物がＮａＶ調節因子であることを示す。
【請求項２８】
前記試験化合物が小分子、ポリペプチド、ペプチド、又は抗体若しくはその抗原結合部位である、請求項２７に記載の方法。
【請求項２９】
前記試験化合物が化合物のライブラリーである、請求項２７に記載の方法。
【請求項３０】
前記ライブラリーが小分子ライブラリー、組み合わせライブラリー、ペプチドライブラリー又は抗体ライブラリーである、請求項２９に記載の方法。
【請求項３１】
前記検出工程が、膜電位アッセイ、電気生理学的アッセイ、及び結合アッセイから選択される、請求項２７に記載の方法。
【請求項３２】
前記工程がハイスループット法で実施される、請求項２７に記載の方法。
【請求項３３】
請求項２７に記載の方法によって同定された調節因子。
【請求項３４】
長期にわたってＮａＶを一定のレベルで安定して発現するように改変された細胞であり、
ａ）ＮａＶをコードするｍＲＮＡを発現する複数の細胞を準備する工程；
ｂ）前記細胞を個別の培養ベッセル中に個々に分散させ、それにより複数の別個の細胞培養を準備する工程；
ｃ）それぞれの別個の細胞培養における条件が実質的に同一であることを特徴とする自動化された細胞培養法を用いて、一連の所望の培養条件下で細胞を培養する工程（この培養期間においては別個の細胞培養当たりの細胞数は標準化され、及び別個の細胞培養は同じスケジュールで継代される）；
ｄ）ＮａＶの発現を測定するために、別個の細胞培養を少なくとも２回アッセイする工程；及び
ｅ）２回のアッセイの両方において一定のレベルでＮａＶを発現する別個の細胞培養を同定し、それにより前記細胞を得る工程、
を含む方法によって作出された細胞。

【図１】

【図２】

【図３Ａ】

【図３Ｂ】

【図３Ｃ】

【図４】

【図５】

【公表番号】特表２０１２−５２００５８（Ｐ２０１２−５２００５８Ａ）
【公表日】平成２４年９月６日（２０１２．９．６）
【国際特許分類】
【出願番号】特願２０１１−５４７９０３（Ｐ２０１１−５４７９０３）
【出願日】平成２１年２月２日（２００９．２．２）
【国際出願番号】ＰＣＴ／ＵＳ２００９／０３２９０２
【国際公開番号】ＷＯ２０１０／０８７８６４
【国際公開日】平成２２年８月５日（２０１０．８．５）
【出願人】（５１１１８１５４４）クロモセル　コーポレーション (6)
【Ｆターム（参考）】