α−１、４結合型Ｎ−アセチルグルコサミン含有Ｏ−グリカン型糖鎖の分泌促進剤並びにこれを含有するヘリコバクターピロリ菌を原因とする病態の治療予防剤及び飲食品
【課題】 ヘリコバクター ピロリ菌を原因とする病態の治療予防に有用な組成物を提供する。
【解決手段】 Ｏ−グリカン型糖鎖であって、その非還元末端部にはα−１、４型グリコシド結合によりＮ−アセチルグルコサミンを結合しているＯ−グリカン型糖鎖の細胞からの分泌を促進する成分として、一般式〔１〕：Ｒ−ＧｌｃＮ、又は、一般式〔２〕：Ｒ−ＧｌｃＮＡｃで表される、グルコサミン及び／又はグルコサミン誘導体から選ばれた少なくとも１種を有効成分として含有することを特徴とするα−１、４結合型Ｎ−アセチルグルコサミン含有Ｏ−グリカン型糖鎖の分泌促進剤。なお、前記式中、ＧｌｃＮはグルコサミン残基を表し、ＧｌｃＮＡｃはＮ−アセチルグルコサミン残基を表し、Ｒは水素原子もしくは重合度１−５の糖鎖を表す。
【解決手段】 Ｏ−グリカン型糖鎖であって、その非還元末端部にはα−１、４型グリコシド結合によりＮ−アセチルグルコサミンを結合しているＯ−グリカン型糖鎖の細胞からの分泌を促進する成分として、一般式〔１〕：Ｒ−ＧｌｃＮ、又は、一般式〔２〕：Ｒ−ＧｌｃＮＡｃで表される、グルコサミン及び／又はグルコサミン誘導体から選ばれた少なくとも１種を有効成分として含有することを特徴とするα−１、４結合型Ｎ−アセチルグルコサミン含有Ｏ−グリカン型糖鎖の分泌促進剤。なお、前記式中、ＧｌｃＮはグルコサミン残基を表し、ＧｌｃＮＡｃはＮ−アセチルグルコサミン残基を表し、Ｒは水素原子もしくは重合度１−５の糖鎖を表す。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、Ｏ−グリカン型糖鎖であって、その非還元末端部にはα−１、４型グリコシド結合によりＮ−アセチルグルコサミンを結合しているＯ−グリカン型糖鎖の細胞からの分泌を促進する成分として、グルコサミン及び／又はグルコサミン誘導体から選ばれた少なくとも１種を有効成分として含有するα−１、４結合型Ｎ−アセチルグルコサミン含有Ｏ−グリカン型糖鎖の分泌促進剤並びにこれを含有するヘリコバクター ピロリ菌の感染治療予防剤及び飲食品に関する。
【背景技術】
【０００２】
ヘリコバクター ピロリ菌（Helicobacter pylori、以下ピロリ菌という。）は、１９８３年にMarshall、Warrenにより報告された胃内に生息するグラム陰性のらせん状短桿細菌である。日本人のピロリ菌感染率は約５０％と推定され、特に中高年では７０％以上の人が保菌者である。ピロリ菌は、胃炎や胃潰瘍、十二指腸潰瘍などの発生や再発の主要因子であることが知られている。
【０００３】
ピロリ菌除菌には、抗生物質による除菌療法が保健診療として認可されている。この薬剤とは抗生剤、プロトンポンプインヒビター、ビスマス製剤等を組み合わせたものである。
【０００４】
また、食品成分にもピロリ菌の除菌効果を示す成分が見出されている。例えば、下記特許文献１では、海藻等に含有するグルクロン酸含有フコイダンがピロリ菌接着阻害剤として有用であることが記載され、下記特許文献２には、牛乳汁または鶏卵卵白由来のムチンを有効成分とするヘリコバクター・ピロリ定着阻害剤が記載されている。
【０００５】
更にまた、下記特許文献３には、ヘリコバクター ピロリに対するレセプター活性を有する多糖を含む組成物であって、更に所望により、ヘリコバクター ピロリに対するオリゴ糖レセプターあるいはその類似体または誘導体および／または胃上皮保護化合物も含む、ヘリコバクター ピロリの存在によって生じる病態の治療または予防に用いる組成物が記載され、多糖としてキトサンを用いることが記載されている。
【０００６】
ピロリ菌は感染者の胃粘膜に見出される。胃粘膜は粘液細胞及び粘液細胞から分泌するムチン等を主成分とする粘液からなる表層粘液ゲル層によって構成されており、その表層粘液ゲル層は、表層粘液細胞から分泌される粘液と中〜深層に存在する腺粘液細胞から分泌される粘液とが互いに混じりあうことなく交互に積み重ねられた層状構造をなしている。表層粘液細胞から分泌される粘液が構成する粘液層には、ピロリ菌に親和性を有することが知られているＬｅｂ（Ｌｅｗｉｓｂ 糖鎖抗原）やシアリルＬｅｘ（シアリルＬｅｗｉｓ ｘ 糖鎖抗原）を有する糖鎖が存在しており、ピロリ菌はその糖鎖を胃粘膜内への定着の足がかりにすると考えられている。一方、胃粘膜の中〜深層に存在する腺粘液細胞から分泌される粘液が構成する粘液層中にピロリ菌が定着する頻度は少ないが、この粘液層にはコア２分岐型のＯ−グリカン型糖鎖の非還元末端にＧｌｃＮＡｃα１→４Ｇａｌβ残基をもつユニークな糖鎖が存在している。このα結合型Ｎ−アセチルグルコサミン（αＧｌｃＮＡｃ）を非還元末端に有するＯ−グリカン構造は、糖鎖として非常に珍しい構造であり、その構造を有する糖鎖は胃粘膜の腺粘液細胞と十二指腸粘膜の Brunner 腺以外の正常組織ではほとんど発現していない。
【０００７】
最近、本発明者らは、胃粘膜の中〜深層に存在する腺粘液細胞から分泌する粘液中に存在するユニークな糖鎖であって、その非還元末端部にα−１、４型グリコシド結合によりＮ−アセチルグルコサミンを結合しているＯ−グリカン型糖鎖が、ピロリ菌に対し強い抗菌活性を持つことを新たに発見し（下記非特許文献１参照。）、胃粘膜においてこのユニークな糖鎖がピロリ菌感染に対する防御因子として働いていることを報告した。
【特許文献１】特開平１０−２８７５７１号公報
【特許文献２】特開２０００−２２９８６５号公報
【特許文献３】特表２００４−５３７５３８号公報
【非特許文献１】M. Kawakubo et al., Science, Vol. 305, (2004) p1003-1006
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００８】
抗生物質によってピロリ菌を除菌する従来の技術では、耐性菌出現による除菌効果の低下や、薬物投与による副作用の発現等が問題となっている。
【０００９】
また、食品素材中の成分を用いる上記特許文献１〜３記載の技術は、安心して服用できる点では優れているが、ピロリ菌を吸着して排出する作用を利用するものであるため、ピロリ菌に親和性を有する上記ＬｅｂやシアリルＬｅｘ等の受容体分子構造を介して胃粘膜に定着したピロリ菌を除菌する目的において十分な作用効果を奏するものではなかった。
【００１０】
一方、上記非特許文献１記載の、非還元末端部にα−１、４型グリコシド結合によりＮ−アセチルグルコサミンを結合しているＯ−グリカン型糖鎖を用いる技術は、胃粘膜に発現している生体分子を利用するものであり安心して服用できる点では優れているが、それを外来的に投与する方法では、生体に備わった本来的な粘膜防御機構を発揮させる目的において効率的なものではなかった。その上、非還元末端部にα−１、４型グリコシド結合によりＮ−アセチルグルコサミンを結合しているＯ−グリカン型糖鎖の量産技術や、非還元末端部にα−１、４型グリコシド結合によりＮ−アセチルグルコサミンを結合しているＯ−グリカン型糖鎖を豊富に含む食品はまだあまり知られていない。
【００１１】
従って、本発明の目的は、非還元末端部にα−１、４型グリコシド結合によりＮ−アセチルグルコサミンを結合しているＯ−グリカン型糖鎖のピロリ菌に対する抑制作用作用効果を粘膜組織で効率的に発揮させるため、その産生細胞からの分泌を促進する技術を提供し、人体にとってより安全、かつ高い効果を有するピロリ菌の感染治療予防剤を提供することにある。
【課題を解決するための手段】
【００１２】
本発明者らは、上記目的を達成するために鋭意研究した結果、グルコサミン又はグルコサミン誘導体に、Ｏ−グリカン型糖鎖であって、その非還元末端部にはα−１、４型グリコシド結合によりＮ−アセチルグルコサミンを結合しているＯ−グリカン型糖鎖の細胞からの分泌を促進する作用のあることを見出し、本発明を完成するに至った。
【００１３】
すなわち、本発明のα−１、４結合型Ｎ−アセチルグルコサミン含有Ｏ−グリカン型糖鎖の分泌促進剤は、Ｏ−グリカン型糖鎖であって、その非還元末端部にはα−１、４型グリコシド結合によりＮ−アセチルグルコサミンを結合しているＯ−グリカン型糖鎖の細胞からの分泌を促進する成分として、下記一般式〔１〕又は〔２〕で表される、グルコサミン及び／又はグルコサミン誘導体から選ばれた少なくとも１種を有効成分として含有することを特徴とする。
【００１４】
Ｒ−ＧｌｃＮ …〔１〕
Ｒ−ＧｌｃＮＡｃ …〔２〕
（なお、上記一般式〔１〕又は〔２〕中、ＧｌｃＮはグルコサミン残基を表し、ＧｌｃＮＡｃはＮ−アセチルグルコサミン残基を表し、Ｒは水素原子もしくは重合度１−５の糖鎖を表す。）
【００１５】
本発明のα−１、４結合型Ｎ−アセチルグルコサミン含有Ｏ−グリカン型糖鎖の分泌促進剤によれば、有効成分である上記グルコサミン及び／又はグルコサミン誘導体が、α−１、４結合型Ｎ−アセチルグルコサミン含有Ｏ−グリカン型糖鎖を分泌する細胞に作用して、その細胞からの分泌を促進することができる。
【００１６】
本発明においては、上記グルコサミン及び／又はグルコサミン誘導体が、グルコサミン、キトビオース、キトトリオース、キトテトラオース、キトペンタオース、キトヘキサオース、Ｎ−アセチルグルコサミン、Ｎ−アセチルキトビオース、Ｎ−アセチルキトトリオース、Ｎ−アセチルキトテトラオース、Ｎ−アセチルキトペンタオース、Ｎ−アセチルキトヘキサオース、ラクトサミン、Ｎ−アセチルラクトサミン、ガラクトシルラクトサミン、ガラクトシル−Ｎ−アセチルラクトサミンから選ばれた少なくとも１種であることが好ましい。
【００１７】
一方、本発明のヘリコバクター ピロリ菌を原因とする病態の治療予防剤は、上記α−１、４結合型Ｎ−アセチルグルコサミン含有Ｏ−グリカン型糖鎖の分泌促進剤を含有する。
【００１８】
本発明のヘリコバクター ピロリ菌を原因とする病態の治療予防剤によれば、有効成分である上記グルコサミン及び／又はグルコサミン誘導体の作用により分泌が促進される上記α−１、４結合型Ｎ−アセチルグルコサミン含有Ｏ−グリカン型糖鎖が、ヘリコバクター ピロリ菌に抗菌的に作用して、ヘリコバクタピロリ菌を原因とする病態、例えば、胃炎や胃潰瘍、十二指腸潰瘍、又は、それに関連する消化器系やその他の臓器に見られる疾患を治療し又は予防することができる。
【００１９】
更に、本発明のもう一つは、下記一般式〔１〕又は〔２〕で表される、グルコサミン及び／又はグルコサミン誘導体から選ばれた少なくとも１種を含有し、Ｏ−グリカン型糖鎖であって、その非還元末端部にはα−１、４型グリコシド結合によりＮ−アセチルグルコサミンを結合しているＯ−グリカン型糖鎖の細胞からの分泌を促進するため及び／又はヘリコバクター ピロリ菌を原因とする病態を治療し予防するために用いられるものである旨の表示を付した飲食品を提供する。
【００２０】
Ｒ−ＧｌｃＮ …〔１〕
Ｒ−ＧｌｃＮＡｃ …〔２〕
（なお、上記式中、ＧｌｃＮはグルコサミン残基を表し、ＧｌｃＮＡｃはＮ−アセチルグルコサミン残基を表し、Ｒは水素原子もしくは重合度１−５の糖鎖を表す。）
【発明の効果】
【００２１】
本発明によれば、Ｏ−グリカン型糖鎖であって、その非還元末端部にはα−１、４型グリコシド結合によりＮ−アセチルグルコサミンを結合しているＯ−グリカン型糖鎖の細胞からの分泌を促進して、ヒトに本来的に備わるピロリ菌に対する防御機構を効果的に賦活化することができる。
【００２２】
また、本発明に用いられるグルコサミン及び／又はグルコサミン誘導体は、医薬品・食品素材として大量に供給可能であり、化学的に安定で、かつ、安全性も高いことから、様々な医薬品、食品の剤形、配合に対応でき、様々な形態での抗ピロリ菌製剤の供給が可能である。
【発明を実施するための最良の形態】
【００２３】
本発明に用いられるグルコサミン及び／又はグルコサミン誘導体は、下記一般式〔１〕又は〔２〕で表されるものである。
【００２４】
Ｒ−ＧｌｃＮ …〔１〕
Ｒ−ＧｌｃＮＡｃ …〔２〕
ここで、上記式中、ＧｌｃＮはグルコサミン残基を表し、ＧｌｃＮＡｃはＮ−アセチルグルコサミン残基を表し、Ｒは水素原子もしくは重合度１−５の糖鎖を表す。そして、Ｒが糖鎖の場合は、グルコサミン残基あるいはＮ−アセチルグルコサミン残基の結合様式はグリコシド結合をなすものである。
【００２５】
本発明に用いられるグルコサミン及び／又はグルコサミン誘導体は、上記式中のＲが糖鎖の場合は、その還元末端にグルコサミン、もしくはＮ−アセチルグルコサミン構造を有していることが重要であり、一方、その非還元末端側には、他の官能基が結合していてもよく、上記重合度の範囲内で分岐糖鎖を形成していてもよい。
【００２６】
このようなグルコサミン及び／又はグルコサミン誘導体としては、特に限定されるものではないが、例えば、グルコサミン、キトビオース、キトトリオース、キトテトラオース、キトペンタオース、キトヘキサオース、Ｎ−アセチルグルコサミン、Ｎ−アセチルキトビオース、Ｎ−アセチルキトトリオース、Ｎ−アセチルキトテトラオース、Ｎ−アセチルキトペンタオース、Ｎ−アセチルキトヘキサオース、ラクトサミン、Ｎ−アセチルラクトサミン、ガラクトシルラクトサミン、ガラクトシル−Ｎ−アセチルラクトサミン等が挙げられる。なお、後述する実施例の結果によれば、Ｎ−アセチルグルコサミン、グルコサミン、Ｎ−アセチルキトビオース、Ｎ−アセチルラクトサミンを特に好ましく用いることができることが明らかである。
【００２７】
本発明に用いられるグルコサミン及び／又はグルコサミン誘導体は、公知の従来技術に準じて、化学的、酵素的、遺伝子工学的手法により調製すればよい。
【００２８】
例えば、上記キトサンオリゴ糖（キトビオース、キトトリオース、キトテトラオース、キトペンタオース、キトヘキサオース）及びキチンオリゴ糖（Ｎ−アセチルキトビオース、Ｎ−アセチルキトトリオース、Ｎ−アセチルキトテトラオース、Ｎ−アセチルキトペンタオース、Ｎ−アセチルキトヘキサオース）は、カニ、エビ等の甲殻類の殻等から常法によって調製されるキチンを、化学的又は生化学的に処理することによって得ることができる。その際、特許文献特開２００３−２１２８８９号公報又は特許文献特開平１０−２８７５７２６号公報に開示される方法によれば、より好適に製造することができる。
【００２９】
本発明においては、上記の方法によって得られるキトサンオリゴ糖及びキチンオリゴ糖を、種々の異なる鎖長のオリゴ糖が混在する組成物をそのまま用いることもできるが、必要に応じてカラムクロマトグラフィーや溶剤分画等の方法によって分画、精製することにより、所望の重合度のものを高濃度に含有する組成物を得て、それを本発明に用いることができる。
【００３０】
市販されるキトサンオリゴ糖としては、例えば、「ＣＯＳ−ＹＳ」（商品名、焼津水産化学工業株式会社製）は、上記の方法によって得られ、キトビオース、キトトリオース、キトテトラオース、キトペンタオース、キトヘキサオース等を含む組成物であり、本発明に好ましく用いることができる。
【００３１】
また、市販されるキチンオリゴ糖としては、例えば、「ＮＡ−ＣＯＳ−ＹＳ」（商品名、焼津水産化学工業株式会社製）は、上記の方法によって得られ、Ｎ−アセチルグルコサミンと、Ｎ−アセチルキトビオース、Ｎ−アセチルキトトリオース、Ｎ−アセチルキトテトラオース、Ｎ−アセチルキトペンタオース、Ｎ−アセチルキトヘキサオース等を含む組成物であり、本発明に好ましく用いることができる。
【００３２】
更に、Ｎ−アセチルラクトサミン、ガラクトシルＮ−アセチルラクトサミンは、例えば、特許第２８１９３１２号公報に記載されているように、ラクトースとＮ−アセチルグルコサミンを基質とし、β−ガラクトシダーゼを作用させて糖転移反応を行う方法により製造することができる。ラクトサミン、ガラクトシル-ラクトサミンは、ラクトースとグルコサミンを基質とし、β−ガラクトシダーゼを作用させて糖転移反応を行う方法により製造することができる。このとき、特許第２８１９３１３号公報に記載されているように塩析剤存在下で反応させてもよい。また、酵素反応液は加熱して酵素を失活させた後、そのままあるいは必要に応じて活性炭カラムクロマトグラフィーや逆浸透膜により分離、精製、濃縮してから本発明に用いることもできる。
【００３３】
本発明に用いられるグルコサミン及び／又はグルコサミン誘導体は、遊離体であってもよく、また、食品、医薬的に許容されるこれらの塩を形成したものであってもよい。塩の種類としては塩酸塩、酢酸塩、乳酸塩、クエン酸塩、硫酸塩、硝酸塩等が挙げられる。
【００３４】
本発明において、「Ｏ−グリカン型糖鎖であって、その非還元末端部にはα−１、４型グリコシド結合によりＮ−アセチルグルコサミンを結合しているＯ−グリカン型糖鎖（以下、α−１、４結合型Ｎ−アセチルグルコサミン含有Ｏ−グリカン型糖鎖とする。）」とは、例えば、上述したような、胃粘膜の腺粘液細胞から分泌される粘液に含有するコア２分岐型α−１、４結合型Ｎ−アセチルグルコサミン含有Ｏ−グリカン型糖鎖の非還元末端にα結合型でＮ−アセチルグルコサミンを有する糖鎖等を意味する。なお、「Ｏ−グリカン型糖鎖」とは、糖タンパク質のポリペプチド鎖のセリン/スレオニン残基に結合している糖鎖を意味する。
【００３５】
本発明のα−１、４結合型Ｎ−アセチルグルコサミン含有Ｏ−グリカン型糖鎖の分泌促進剤は、有効成分である上記グルコサミン及び／又はグルコサミン誘導体が、α−１、４結合型Ｎ−アセチルグルコサミン含有Ｏ−グリカン型糖鎖を分泌する細胞に作用して、その分泌を促進することができる。
【００３６】
また、上述のとおり、α−１、４結合型Ｎ−アセチルグルコサミン含有Ｏ−グリカン型糖鎖が、ピロリ菌に抗菌的に作用することが明らかにされている（上記非特許文献１参照。）。
【００３７】
したがって、本発明のヘリコバクター ピロリ菌を原因とする病態の治療予防剤は、それを経口的に摂取することにより、有効成分である上記グルコサミン及び／又はグルコサミン誘導体が、胃粘膜の粘液細胞又は十二指腸粘膜のBrunner腺に到達し、α−１、４結合型Ｎ−アセチルグルコサミン含有Ｏ−グリカン型糖鎖を分泌する細胞に作用して、その分泌を促進するので、ヘリコバクタピロリ菌を原因とする病態、例えば、胃炎や胃潰瘍、十二指腸潰瘍等を治療し又は予防する目的で好適に用いることができる。
【００３８】
本発明において、上記抗ピロリ菌作用効果を有効に得るためには、成人１日あたり上記グルコサミン及び／又はグルコサミン誘導体として０．０１〜１５ｇを、経口的に摂取することが好ましく、０．１〜５ｇを摂取することがより好ましい。
【００３９】
本発明のα−１、４結合型Ｎ−アセチルグルコサミン含有Ｏ−グリカン型糖鎖の分泌促進剤並びにヘリコバクター ピロリ菌を原因とする病態の治療予防剤においては、上記作用効果の有効成分として上記グルコサミンおよび／又はグルコサミン誘導体を含有するとともに、賦形剤、安定剤、防腐剤、保存剤、光沢剤、増粘剤、着色剤、ミネラル類、ビタミン類、糖類、香料、油脂、アミノ酸等の添加剤を適宜配合することができる。また、抗ピロリ菌効果を有することがすでに知られている、フコイダン、乳酸菌、カテキン、ココアポリフェノール、ホップポリフェノール、その他ポリフェノール類、ココア遊離脂肪酸、海藻エキス、梅肉エキス、シナモン、クランベリー、ガジュツ、ウコン等の抗ピロリ菌効果を有することがすでに知られている成分と併用することにより、抗ピロリ菌剤としての相乗効果が期待できる。
【００４０】
本発明のα−１、４結合型Ｎ−アセチルグルコサミン含有Ｏ−グリカン分泌促進剤並びにヘリコバクター ピロリ菌を原因とする病態の治療予防剤の製品形態は特に限定されないが、例えば経口投与に適したものとして、錠剤、粉末、顆粒、溶液、カプセル剤等が挙げられる。
【００４１】
一方、本発明の飲食品においては、上記グルコサミン及び／又はグルコサミン誘導体を有効成分として様々な飲食品に配合することができる。例えば、（１）清涼飲料、炭酸飲料、果実飲料、野菜ジュース、乳酸菌飲料、乳飲料、豆乳、ミネラルウォーター、茶系飲料、コーヒー飲料、スポーツ飲料、アルコール飲料、ゼリー飲料等の飲料類、（２）トマトピューレ、キノコ缶詰、乾燥野菜、漬物等の野菜加工品、（３）乾燥果実、ジャム、フルーツピューレ、果実缶詰等の果実加工品、（４）カレー粉、わさび、ショウガ、スパイスブレンド、シーズニング粉等の香辛料、（５）パスタ、うどん、そば、ラーメン、マカロニ等の麺類（生麺、乾燥麺含む）、（６）食パン、菓子パン、調理パン、ドーナツ等のパン類、（７）アルファー化米、オートミール、麩、バッター粉等、（８）焼菓子、ビスケット、米菓子、キャンデー、チョコレート、チューイングガム、スナック菓子、冷菓、砂糖漬け菓子、和生菓子、洋生菓子、半生菓子、プリン、アイスクリーム等の菓子類、（９）小豆、豆腐、納豆、きな粉、湯葉、煮豆、ピーナッツ等の豆類製品、（１０）蜂蜜、ローヤルゼリー加工食品、（１１）ハム、ソーセージ、ベーコン等の肉製品、（１２）ヨーグルト、プリン、練乳、チーズ、発酵乳、バター、アイスクリーム等の酪農製品、（１３）加工卵製品、（１４）干物、蒲鉾、ちくわ、魚肉ソーセージ等の加工魚や、乾燥わかめ、昆布、佃煮等の加工海藻や、タラコ、数の子、イクラ、からすみ等の加工魚卵、（１５）だしの素、醤油、酢、みりん、コンソメベース、中華ベース、濃縮出汁、ドレッシング、マヨネーズ、ケチャップ、味噌等の調味料や、サラダ油、ゴマ油、リノール油、ジアシルグリセロール、べにばな油等の食用油脂、（１６）スープ（粉末、液体含む）等の調理、半調理食品や、惣菜、レトルト食品、チルド食品、半調理食品（例えば、炊き込みご飯の素、カニ玉の素）等が挙げられる。
【００４２】
上記飲食品への配合量は、飲食品の種類及び上述した有効摂取量に基いて適宜設定すればよい。例えば、飲料類に配合する場合は、通常、上記グルコサミン及び／又はグルコサミン誘導体として０．０１〜３０質量％が好ましく、０．１〜１０質量％がより好ましい。上記グルコサミン及び／又はグルコサミン誘導体の配合量が少な過ぎると、生理活性が期待できる量の上記グルコサミン及び／又はグルコサミン誘導体を摂取するために１回当りの摂取量を大幅に増やす必要があるため、継続的に摂取することが困難となり、多すぎると製品中での結晶化による沈殿発生や過剰摂取による軟便等の症状がでる可能性がある。
【００４３】
また、本発明の飲食品において、「表示を付した」とは、製品の容器、袋、箱等の包装材料等に直接表示されたものだけでなく、製品の袋や箱等に同封された印刷物、製品パンフレット、代理店等に対する販促資料、更にはインターネットのホームページ等に記載された製品情報等に表示されたものを含む意味である。
【実施例】
【００４４】
以下実施例を挙げて本発明を具体的に説明するが、これらの実施例は本発明の範囲を限定するものではない。
【００４５】
<実施例１>
ヒトα−１、４結合型Ｎ−アセチルグルコサミン転移酵素(α４ＧｎＴ)のｃＤＮＡ（α４ＧｎＴ ｃＤＮＡ；ＮＣＢＩデータベース照会番号 NM_016161）を、常法に従ってヒト胃ガン由来培養細胞ＡＧＳに遺伝子導入し、ＣＭＶプロモーターによって、恒常的に発現している遺伝子導入細胞株であるＡＧＳ−α４ＧｎＴを作成した。
【００４６】
この遺伝子導入細胞株（ＡＧＳ−α４ＧｎＴ）は、Dulbecco’s Modified Eagle Medium (Invitrogen 以下DMEMと略す)、10% Fetal Bovine Serum(Equitec Bio)、1% Penicillin-Streptomycin,liquid(Invitrogen)、0.2mg/ml G418(Sigma) からなる細胞培養液中で培養・維持した。
【００４７】
また、糖質として、Ｎ−Ｄ−アセチルグルコサミン、Ｄ−グルコサミン塩酸塩、
Ｎ−アセチルキトビオース（ＧｌｃＮＡｃ（β１−４）ＧｌｃＮＡｃ）、Ｎ−アセチルラクトサミン（Ｇａｌ（β１−４）ＧｌｃＮＡｃ）(以上の糖質はすべて焼津水産化学工業株式会社製)を濃度４００ｍＭになるようにＤＭＥＭに溶解し、MILLEX-GV(0.22μm filter Unit)で濾過滅菌し、超純水で１０、１００、２００ｍＭの糖質溶液に調製した。
【００４８】
上記ＡＧＳ−α４ＧｎＴ細胞を、０．４５ｍｌの培養液中に２×１０４の細胞を含むように細胞濃度を合わせて４８ウェルプレート(Falcon 社製)の１ウェル内に播種した。その播種日を０日目として、播種後1日目に上記の各濃度の糖質溶液０．０５ｍｌをウェル内に添加し、最終０．５ｍｌ量の培養液中の糖質がそれぞれ終濃度１、１０、２０ｍＭとなるように添加した。また、糖質を含まない対照としてＤＥＭＥのみを添加した。
【００４９】
細胞播種後１〜５日目の培養液を３ウェルずつ別々のエッペンドルフチューブに回収して、１０００ｒｐｍ×３ｍｉｎ、４℃で細胞を遠心分離した後、上清を新しいエッペンドルフチューブに回収した。
【００５０】
この培養上清中の分泌ムチン濃度を、「胃腺粘液細胞ムチン測定用ELISAキット」(商品名、関東化学株式会社)及び「ELAST ELISA Amplification Kit」(株式会社パーキンエルマージャパン)を用いて測定した。なお、上記キットに用いられる抗体は、非還元末端部にα−１、４型グリコシド結合によりＮ−アセチルグルコサミンを結合している糖鎖を特異的に認識する抗体を用いて測定したものであり、また、α４ＧｎＴを導入しないＡＧＳ細胞から分泌するムチンをほとんど認識しないものであるため、α1,4-GlcNAc含有Α−１、４結合型Ｎ−アセチルグルコサミン含有O−グリカン型糖鎖の濃度であると考えられた。また、測定値は、３ウェルのうち２ウェルの培養液上清に含まれるの濃度の平均値として算出した。
【００５１】
図1に、Ｎ−Ｄ−アセチルグルコサミンがα−１、４結合型Ｎ−アセチルグルコサミン含有Ｏ−グリカン産生に与える影響についての結果を示す。
【００５２】
図1からわかるように、Ｎ−Ｄ−アセチルグルコサミンを1ｍＭ添加したときは、播種５日目に対照に比べて約３倍のΑ−１、４結合型Ｎ−アセチルグルコサミン含有O−グリカン分泌を促進した。一方、１０ｍＭ、２０ｍＭ添加群ではα−１、４結合型Ｎ−アセチルグルコサミン含有Ｏ−グリカン分泌は対照よりも低く、１ｍＭ程度の濃度がα−１、４結合型Ｎ−アセチルグルコサミン含有Ｏ−グリカン分泌に有効であることが示唆された。
【００５３】
図２にＤ−グルコサミンがα−１、４結合型Ｎ−アセチルグルコサミン含有Ｏ−グリカン産生に与える影響についての結果を示す。
【００５４】
図２からわかるようにＤ−グルコサミンを１ｍＭ、２０ｍＭ添加するとα−１、４結合型Ｎ−アセチルグルコサミン含有Ｏ−グリカン分泌が促進した。１ｍＭ添加のときα−１、４結合型Ｎ−アセチルグルコサミン含有Ｏ−グリカン濃度が最大であった。
【００５５】
図３にＮ−アセチルキトビオースがα−１、４結合型Ｎ−アセチルグルコサミン含有Ｏ−グリカン産生に与える影響についての結果を示す。
【００５６】
図３からわかるようにＮ−アセチルキトビオースを１ｍＭ、１０ｍＭ添加したときは、播種５日目に対照に比べて約４倍のα−１、４結合型Ｎ−アセチルグルコサミン含有Ｏ−グリカン分泌を促進した。２０ｍＭ添加群ではα−１、４結合型Ｎ−アセチルグルコサミン含有Ｏ−グリカン分泌は対照よりも低く、１〜１０ｍＭ程度の濃度がα−１、４結合型Ｎ−アセチルグルコサミン含有Ｏ−グリカン分泌に有効であることが示唆された。
【００５７】
図４にＮ−アセチルラクトサミンのα−１、４結合型Ｎ−アセチルグルコサミン含有Ｏ−グリカン産生に与える影響についての結果を示す。
【００５８】
図４からわかるようにＮ−アセチルラクトサミンを１、１０、２０ｍＭ添加したときは、播種５日目に対照に比べて約４〜５倍のα−１、４結合型Ｎ−アセチルグルコサミン含有Ｏ−グリカン分泌を促進した。すべての添加群でα−１、４結合型Ｎ−アセチルグルコサミン含有Ｏ−グリカン濃度が上昇し、よい促進剤であることが示唆された。
【００５９】
以上のとおり、Ｄ−グルコサミン塩酸塩、Ｎ−Ｄ−アセチルグルコサミン、Ｎ−アセチルキトビオース（ＧｌｃＮＡｃ（β１−４）ＧｌｃＮＡｃ）、Ｎ−アセチルラクトサミン（Ｇａｌ（β１−４）ＧｌｃＮＡｃ）によって、α−１、４結合型Ｎ−アセチルグルコサミン含有Ｏ−グリカン型糖鎖の細胞からの分泌が促進されることが明らかとなった。
【産業上の利用可能性】
【００６０】
本発明は、ヘリコバクター ピロリ菌を原因とする病態の治療予防に有用である。
【図面の簡単な説明】
【００６１】
【図１】Ｎ−Ｄ−アセチルグルコサミンがα−１、４結合型Ｎ−アセチルグルコサミン含有Ｏ−グリカン型糖鎖の細胞からの分泌量に与える影響について測定した結果を示す図である。
【図２】Ｄ−グルコサミン塩酸塩がα−１、４結合型Ｎ−アセチルグルコサミン含有Ｏ−グリカン型糖鎖の細胞からの分泌量に与える影響について測定した結果を示す図である。
【図３】Ｎ−アセチルキトビオースがα−１、４結合型Ｎ−アセチルグルコサミン含有Ｏ−グリカン型糖鎖の細胞からの分泌量に与える影響について測定した結果を示す図である。
【図４】Ｎ−アセチルラクトサミンがα−１、４結合型Ｎ−アセチルグルコサミン含有Ｏ−グリカン型糖鎖の細胞からの分泌量に与える影響について測定した結果を示す図である。
【技術分野】
【０００１】
本発明は、Ｏ−グリカン型糖鎖であって、その非還元末端部にはα−１、４型グリコシド結合によりＮ−アセチルグルコサミンを結合しているＯ−グリカン型糖鎖の細胞からの分泌を促進する成分として、グルコサミン及び／又はグルコサミン誘導体から選ばれた少なくとも１種を有効成分として含有するα−１、４結合型Ｎ−アセチルグルコサミン含有Ｏ−グリカン型糖鎖の分泌促進剤並びにこれを含有するヘリコバクター ピロリ菌の感染治療予防剤及び飲食品に関する。
【背景技術】
【０００２】
ヘリコバクター ピロリ菌（Helicobacter pylori、以下ピロリ菌という。）は、１９８３年にMarshall、Warrenにより報告された胃内に生息するグラム陰性のらせん状短桿細菌である。日本人のピロリ菌感染率は約５０％と推定され、特に中高年では７０％以上の人が保菌者である。ピロリ菌は、胃炎や胃潰瘍、十二指腸潰瘍などの発生や再発の主要因子であることが知られている。
【０００３】
ピロリ菌除菌には、抗生物質による除菌療法が保健診療として認可されている。この薬剤とは抗生剤、プロトンポンプインヒビター、ビスマス製剤等を組み合わせたものである。
【０００４】
また、食品成分にもピロリ菌の除菌効果を示す成分が見出されている。例えば、下記特許文献１では、海藻等に含有するグルクロン酸含有フコイダンがピロリ菌接着阻害剤として有用であることが記載され、下記特許文献２には、牛乳汁または鶏卵卵白由来のムチンを有効成分とするヘリコバクター・ピロリ定着阻害剤が記載されている。
【０００５】
更にまた、下記特許文献３には、ヘリコバクター ピロリに対するレセプター活性を有する多糖を含む組成物であって、更に所望により、ヘリコバクター ピロリに対するオリゴ糖レセプターあるいはその類似体または誘導体および／または胃上皮保護化合物も含む、ヘリコバクター ピロリの存在によって生じる病態の治療または予防に用いる組成物が記載され、多糖としてキトサンを用いることが記載されている。
【０００６】
ピロリ菌は感染者の胃粘膜に見出される。胃粘膜は粘液細胞及び粘液細胞から分泌するムチン等を主成分とする粘液からなる表層粘液ゲル層によって構成されており、その表層粘液ゲル層は、表層粘液細胞から分泌される粘液と中〜深層に存在する腺粘液細胞から分泌される粘液とが互いに混じりあうことなく交互に積み重ねられた層状構造をなしている。表層粘液細胞から分泌される粘液が構成する粘液層には、ピロリ菌に親和性を有することが知られているＬｅｂ（Ｌｅｗｉｓｂ 糖鎖抗原）やシアリルＬｅｘ（シアリルＬｅｗｉｓ ｘ 糖鎖抗原）を有する糖鎖が存在しており、ピロリ菌はその糖鎖を胃粘膜内への定着の足がかりにすると考えられている。一方、胃粘膜の中〜深層に存在する腺粘液細胞から分泌される粘液が構成する粘液層中にピロリ菌が定着する頻度は少ないが、この粘液層にはコア２分岐型のＯ−グリカン型糖鎖の非還元末端にＧｌｃＮＡｃα１→４Ｇａｌβ残基をもつユニークな糖鎖が存在している。このα結合型Ｎ−アセチルグルコサミン（αＧｌｃＮＡｃ）を非還元末端に有するＯ−グリカン構造は、糖鎖として非常に珍しい構造であり、その構造を有する糖鎖は胃粘膜の腺粘液細胞と十二指腸粘膜の Brunner 腺以外の正常組織ではほとんど発現していない。
【０００７】
最近、本発明者らは、胃粘膜の中〜深層に存在する腺粘液細胞から分泌する粘液中に存在するユニークな糖鎖であって、その非還元末端部にα−１、４型グリコシド結合によりＮ−アセチルグルコサミンを結合しているＯ−グリカン型糖鎖が、ピロリ菌に対し強い抗菌活性を持つことを新たに発見し（下記非特許文献１参照。）、胃粘膜においてこのユニークな糖鎖がピロリ菌感染に対する防御因子として働いていることを報告した。
【特許文献１】特開平１０−２８７５７１号公報
【特許文献２】特開２０００−２２９８６５号公報
【特許文献３】特表２００４−５３７５３８号公報
【非特許文献１】M. Kawakubo et al., Science, Vol. 305, (2004) p1003-1006
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００８】
抗生物質によってピロリ菌を除菌する従来の技術では、耐性菌出現による除菌効果の低下や、薬物投与による副作用の発現等が問題となっている。
【０００９】
また、食品素材中の成分を用いる上記特許文献１〜３記載の技術は、安心して服用できる点では優れているが、ピロリ菌を吸着して排出する作用を利用するものであるため、ピロリ菌に親和性を有する上記ＬｅｂやシアリルＬｅｘ等の受容体分子構造を介して胃粘膜に定着したピロリ菌を除菌する目的において十分な作用効果を奏するものではなかった。
【００１０】
一方、上記非特許文献１記載の、非還元末端部にα−１、４型グリコシド結合によりＮ−アセチルグルコサミンを結合しているＯ−グリカン型糖鎖を用いる技術は、胃粘膜に発現している生体分子を利用するものであり安心して服用できる点では優れているが、それを外来的に投与する方法では、生体に備わった本来的な粘膜防御機構を発揮させる目的において効率的なものではなかった。その上、非還元末端部にα−１、４型グリコシド結合によりＮ−アセチルグルコサミンを結合しているＯ−グリカン型糖鎖の量産技術や、非還元末端部にα−１、４型グリコシド結合によりＮ−アセチルグルコサミンを結合しているＯ−グリカン型糖鎖を豊富に含む食品はまだあまり知られていない。
【００１１】
従って、本発明の目的は、非還元末端部にα−１、４型グリコシド結合によりＮ−アセチルグルコサミンを結合しているＯ−グリカン型糖鎖のピロリ菌に対する抑制作用作用効果を粘膜組織で効率的に発揮させるため、その産生細胞からの分泌を促進する技術を提供し、人体にとってより安全、かつ高い効果を有するピロリ菌の感染治療予防剤を提供することにある。
【課題を解決するための手段】
【００１２】
本発明者らは、上記目的を達成するために鋭意研究した結果、グルコサミン又はグルコサミン誘導体に、Ｏ−グリカン型糖鎖であって、その非還元末端部にはα−１、４型グリコシド結合によりＮ−アセチルグルコサミンを結合しているＯ−グリカン型糖鎖の細胞からの分泌を促進する作用のあることを見出し、本発明を完成するに至った。
【００１３】
すなわち、本発明のα−１、４結合型Ｎ−アセチルグルコサミン含有Ｏ−グリカン型糖鎖の分泌促進剤は、Ｏ−グリカン型糖鎖であって、その非還元末端部にはα−１、４型グリコシド結合によりＮ−アセチルグルコサミンを結合しているＯ−グリカン型糖鎖の細胞からの分泌を促進する成分として、下記一般式〔１〕又は〔２〕で表される、グルコサミン及び／又はグルコサミン誘導体から選ばれた少なくとも１種を有効成分として含有することを特徴とする。
【００１４】
Ｒ−ＧｌｃＮ …〔１〕
Ｒ−ＧｌｃＮＡｃ …〔２〕
（なお、上記一般式〔１〕又は〔２〕中、ＧｌｃＮはグルコサミン残基を表し、ＧｌｃＮＡｃはＮ−アセチルグルコサミン残基を表し、Ｒは水素原子もしくは重合度１−５の糖鎖を表す。）
【００１５】
本発明のα−１、４結合型Ｎ−アセチルグルコサミン含有Ｏ−グリカン型糖鎖の分泌促進剤によれば、有効成分である上記グルコサミン及び／又はグルコサミン誘導体が、α−１、４結合型Ｎ−アセチルグルコサミン含有Ｏ−グリカン型糖鎖を分泌する細胞に作用して、その細胞からの分泌を促進することができる。
【００１６】
本発明においては、上記グルコサミン及び／又はグルコサミン誘導体が、グルコサミン、キトビオース、キトトリオース、キトテトラオース、キトペンタオース、キトヘキサオース、Ｎ−アセチルグルコサミン、Ｎ−アセチルキトビオース、Ｎ−アセチルキトトリオース、Ｎ−アセチルキトテトラオース、Ｎ−アセチルキトペンタオース、Ｎ−アセチルキトヘキサオース、ラクトサミン、Ｎ−アセチルラクトサミン、ガラクトシルラクトサミン、ガラクトシル−Ｎ−アセチルラクトサミンから選ばれた少なくとも１種であることが好ましい。
【００１７】
一方、本発明のヘリコバクター ピロリ菌を原因とする病態の治療予防剤は、上記α−１、４結合型Ｎ−アセチルグルコサミン含有Ｏ−グリカン型糖鎖の分泌促進剤を含有する。
【００１８】
本発明のヘリコバクター ピロリ菌を原因とする病態の治療予防剤によれば、有効成分である上記グルコサミン及び／又はグルコサミン誘導体の作用により分泌が促進される上記α−１、４結合型Ｎ−アセチルグルコサミン含有Ｏ−グリカン型糖鎖が、ヘリコバクター ピロリ菌に抗菌的に作用して、ヘリコバクタピロリ菌を原因とする病態、例えば、胃炎や胃潰瘍、十二指腸潰瘍、又は、それに関連する消化器系やその他の臓器に見られる疾患を治療し又は予防することができる。
【００１９】
更に、本発明のもう一つは、下記一般式〔１〕又は〔２〕で表される、グルコサミン及び／又はグルコサミン誘導体から選ばれた少なくとも１種を含有し、Ｏ−グリカン型糖鎖であって、その非還元末端部にはα−１、４型グリコシド結合によりＮ−アセチルグルコサミンを結合しているＯ−グリカン型糖鎖の細胞からの分泌を促進するため及び／又はヘリコバクター ピロリ菌を原因とする病態を治療し予防するために用いられるものである旨の表示を付した飲食品を提供する。
【００２０】
Ｒ−ＧｌｃＮ …〔１〕
Ｒ−ＧｌｃＮＡｃ …〔２〕
（なお、上記式中、ＧｌｃＮはグルコサミン残基を表し、ＧｌｃＮＡｃはＮ−アセチルグルコサミン残基を表し、Ｒは水素原子もしくは重合度１−５の糖鎖を表す。）
【発明の効果】
【００２１】
本発明によれば、Ｏ−グリカン型糖鎖であって、その非還元末端部にはα−１、４型グリコシド結合によりＮ−アセチルグルコサミンを結合しているＯ−グリカン型糖鎖の細胞からの分泌を促進して、ヒトに本来的に備わるピロリ菌に対する防御機構を効果的に賦活化することができる。
【００２２】
また、本発明に用いられるグルコサミン及び／又はグルコサミン誘導体は、医薬品・食品素材として大量に供給可能であり、化学的に安定で、かつ、安全性も高いことから、様々な医薬品、食品の剤形、配合に対応でき、様々な形態での抗ピロリ菌製剤の供給が可能である。
【発明を実施するための最良の形態】
【００２３】
本発明に用いられるグルコサミン及び／又はグルコサミン誘導体は、下記一般式〔１〕又は〔２〕で表されるものである。
【００２４】
Ｒ−ＧｌｃＮ …〔１〕
Ｒ−ＧｌｃＮＡｃ …〔２〕
ここで、上記式中、ＧｌｃＮはグルコサミン残基を表し、ＧｌｃＮＡｃはＮ−アセチルグルコサミン残基を表し、Ｒは水素原子もしくは重合度１−５の糖鎖を表す。そして、Ｒが糖鎖の場合は、グルコサミン残基あるいはＮ−アセチルグルコサミン残基の結合様式はグリコシド結合をなすものである。
【００２５】
本発明に用いられるグルコサミン及び／又はグルコサミン誘導体は、上記式中のＲが糖鎖の場合は、その還元末端にグルコサミン、もしくはＮ−アセチルグルコサミン構造を有していることが重要であり、一方、その非還元末端側には、他の官能基が結合していてもよく、上記重合度の範囲内で分岐糖鎖を形成していてもよい。
【００２６】
このようなグルコサミン及び／又はグルコサミン誘導体としては、特に限定されるものではないが、例えば、グルコサミン、キトビオース、キトトリオース、キトテトラオース、キトペンタオース、キトヘキサオース、Ｎ−アセチルグルコサミン、Ｎ−アセチルキトビオース、Ｎ−アセチルキトトリオース、Ｎ−アセチルキトテトラオース、Ｎ−アセチルキトペンタオース、Ｎ−アセチルキトヘキサオース、ラクトサミン、Ｎ−アセチルラクトサミン、ガラクトシルラクトサミン、ガラクトシル−Ｎ−アセチルラクトサミン等が挙げられる。なお、後述する実施例の結果によれば、Ｎ−アセチルグルコサミン、グルコサミン、Ｎ−アセチルキトビオース、Ｎ−アセチルラクトサミンを特に好ましく用いることができることが明らかである。
【００２７】
本発明に用いられるグルコサミン及び／又はグルコサミン誘導体は、公知の従来技術に準じて、化学的、酵素的、遺伝子工学的手法により調製すればよい。
【００２８】
例えば、上記キトサンオリゴ糖（キトビオース、キトトリオース、キトテトラオース、キトペンタオース、キトヘキサオース）及びキチンオリゴ糖（Ｎ−アセチルキトビオース、Ｎ−アセチルキトトリオース、Ｎ−アセチルキトテトラオース、Ｎ−アセチルキトペンタオース、Ｎ−アセチルキトヘキサオース）は、カニ、エビ等の甲殻類の殻等から常法によって調製されるキチンを、化学的又は生化学的に処理することによって得ることができる。その際、特許文献特開２００３−２１２８８９号公報又は特許文献特開平１０−２８７５７２６号公報に開示される方法によれば、より好適に製造することができる。
【００２９】
本発明においては、上記の方法によって得られるキトサンオリゴ糖及びキチンオリゴ糖を、種々の異なる鎖長のオリゴ糖が混在する組成物をそのまま用いることもできるが、必要に応じてカラムクロマトグラフィーや溶剤分画等の方法によって分画、精製することにより、所望の重合度のものを高濃度に含有する組成物を得て、それを本発明に用いることができる。
【００３０】
市販されるキトサンオリゴ糖としては、例えば、「ＣＯＳ−ＹＳ」（商品名、焼津水産化学工業株式会社製）は、上記の方法によって得られ、キトビオース、キトトリオース、キトテトラオース、キトペンタオース、キトヘキサオース等を含む組成物であり、本発明に好ましく用いることができる。
【００３１】
また、市販されるキチンオリゴ糖としては、例えば、「ＮＡ−ＣＯＳ−ＹＳ」（商品名、焼津水産化学工業株式会社製）は、上記の方法によって得られ、Ｎ−アセチルグルコサミンと、Ｎ−アセチルキトビオース、Ｎ−アセチルキトトリオース、Ｎ−アセチルキトテトラオース、Ｎ−アセチルキトペンタオース、Ｎ−アセチルキトヘキサオース等を含む組成物であり、本発明に好ましく用いることができる。
【００３２】
更に、Ｎ−アセチルラクトサミン、ガラクトシルＮ−アセチルラクトサミンは、例えば、特許第２８１９３１２号公報に記載されているように、ラクトースとＮ−アセチルグルコサミンを基質とし、β−ガラクトシダーゼを作用させて糖転移反応を行う方法により製造することができる。ラクトサミン、ガラクトシル-ラクトサミンは、ラクトースとグルコサミンを基質とし、β−ガラクトシダーゼを作用させて糖転移反応を行う方法により製造することができる。このとき、特許第２８１９３１３号公報に記載されているように塩析剤存在下で反応させてもよい。また、酵素反応液は加熱して酵素を失活させた後、そのままあるいは必要に応じて活性炭カラムクロマトグラフィーや逆浸透膜により分離、精製、濃縮してから本発明に用いることもできる。
【００３３】
本発明に用いられるグルコサミン及び／又はグルコサミン誘導体は、遊離体であってもよく、また、食品、医薬的に許容されるこれらの塩を形成したものであってもよい。塩の種類としては塩酸塩、酢酸塩、乳酸塩、クエン酸塩、硫酸塩、硝酸塩等が挙げられる。
【００３４】
本発明において、「Ｏ−グリカン型糖鎖であって、その非還元末端部にはα−１、４型グリコシド結合によりＮ−アセチルグルコサミンを結合しているＯ−グリカン型糖鎖（以下、α−１、４結合型Ｎ−アセチルグルコサミン含有Ｏ−グリカン型糖鎖とする。）」とは、例えば、上述したような、胃粘膜の腺粘液細胞から分泌される粘液に含有するコア２分岐型α−１、４結合型Ｎ−アセチルグルコサミン含有Ｏ−グリカン型糖鎖の非還元末端にα結合型でＮ−アセチルグルコサミンを有する糖鎖等を意味する。なお、「Ｏ−グリカン型糖鎖」とは、糖タンパク質のポリペプチド鎖のセリン/スレオニン残基に結合している糖鎖を意味する。
【００３５】
本発明のα−１、４結合型Ｎ−アセチルグルコサミン含有Ｏ−グリカン型糖鎖の分泌促進剤は、有効成分である上記グルコサミン及び／又はグルコサミン誘導体が、α−１、４結合型Ｎ−アセチルグルコサミン含有Ｏ−グリカン型糖鎖を分泌する細胞に作用して、その分泌を促進することができる。
【００３６】
また、上述のとおり、α−１、４結合型Ｎ−アセチルグルコサミン含有Ｏ−グリカン型糖鎖が、ピロリ菌に抗菌的に作用することが明らかにされている（上記非特許文献１参照。）。
【００３７】
したがって、本発明のヘリコバクター ピロリ菌を原因とする病態の治療予防剤は、それを経口的に摂取することにより、有効成分である上記グルコサミン及び／又はグルコサミン誘導体が、胃粘膜の粘液細胞又は十二指腸粘膜のBrunner腺に到達し、α−１、４結合型Ｎ−アセチルグルコサミン含有Ｏ−グリカン型糖鎖を分泌する細胞に作用して、その分泌を促進するので、ヘリコバクタピロリ菌を原因とする病態、例えば、胃炎や胃潰瘍、十二指腸潰瘍等を治療し又は予防する目的で好適に用いることができる。
【００３８】
本発明において、上記抗ピロリ菌作用効果を有効に得るためには、成人１日あたり上記グルコサミン及び／又はグルコサミン誘導体として０．０１〜１５ｇを、経口的に摂取することが好ましく、０．１〜５ｇを摂取することがより好ましい。
【００３９】
本発明のα−１、４結合型Ｎ−アセチルグルコサミン含有Ｏ−グリカン型糖鎖の分泌促進剤並びにヘリコバクター ピロリ菌を原因とする病態の治療予防剤においては、上記作用効果の有効成分として上記グルコサミンおよび／又はグルコサミン誘導体を含有するとともに、賦形剤、安定剤、防腐剤、保存剤、光沢剤、増粘剤、着色剤、ミネラル類、ビタミン類、糖類、香料、油脂、アミノ酸等の添加剤を適宜配合することができる。また、抗ピロリ菌効果を有することがすでに知られている、フコイダン、乳酸菌、カテキン、ココアポリフェノール、ホップポリフェノール、その他ポリフェノール類、ココア遊離脂肪酸、海藻エキス、梅肉エキス、シナモン、クランベリー、ガジュツ、ウコン等の抗ピロリ菌効果を有することがすでに知られている成分と併用することにより、抗ピロリ菌剤としての相乗効果が期待できる。
【００４０】
本発明のα−１、４結合型Ｎ−アセチルグルコサミン含有Ｏ−グリカン分泌促進剤並びにヘリコバクター ピロリ菌を原因とする病態の治療予防剤の製品形態は特に限定されないが、例えば経口投与に適したものとして、錠剤、粉末、顆粒、溶液、カプセル剤等が挙げられる。
【００４１】
一方、本発明の飲食品においては、上記グルコサミン及び／又はグルコサミン誘導体を有効成分として様々な飲食品に配合することができる。例えば、（１）清涼飲料、炭酸飲料、果実飲料、野菜ジュース、乳酸菌飲料、乳飲料、豆乳、ミネラルウォーター、茶系飲料、コーヒー飲料、スポーツ飲料、アルコール飲料、ゼリー飲料等の飲料類、（２）トマトピューレ、キノコ缶詰、乾燥野菜、漬物等の野菜加工品、（３）乾燥果実、ジャム、フルーツピューレ、果実缶詰等の果実加工品、（４）カレー粉、わさび、ショウガ、スパイスブレンド、シーズニング粉等の香辛料、（５）パスタ、うどん、そば、ラーメン、マカロニ等の麺類（生麺、乾燥麺含む）、（６）食パン、菓子パン、調理パン、ドーナツ等のパン類、（７）アルファー化米、オートミール、麩、バッター粉等、（８）焼菓子、ビスケット、米菓子、キャンデー、チョコレート、チューイングガム、スナック菓子、冷菓、砂糖漬け菓子、和生菓子、洋生菓子、半生菓子、プリン、アイスクリーム等の菓子類、（９）小豆、豆腐、納豆、きな粉、湯葉、煮豆、ピーナッツ等の豆類製品、（１０）蜂蜜、ローヤルゼリー加工食品、（１１）ハム、ソーセージ、ベーコン等の肉製品、（１２）ヨーグルト、プリン、練乳、チーズ、発酵乳、バター、アイスクリーム等の酪農製品、（１３）加工卵製品、（１４）干物、蒲鉾、ちくわ、魚肉ソーセージ等の加工魚や、乾燥わかめ、昆布、佃煮等の加工海藻や、タラコ、数の子、イクラ、からすみ等の加工魚卵、（１５）だしの素、醤油、酢、みりん、コンソメベース、中華ベース、濃縮出汁、ドレッシング、マヨネーズ、ケチャップ、味噌等の調味料や、サラダ油、ゴマ油、リノール油、ジアシルグリセロール、べにばな油等の食用油脂、（１６）スープ（粉末、液体含む）等の調理、半調理食品や、惣菜、レトルト食品、チルド食品、半調理食品（例えば、炊き込みご飯の素、カニ玉の素）等が挙げられる。
【００４２】
上記飲食品への配合量は、飲食品の種類及び上述した有効摂取量に基いて適宜設定すればよい。例えば、飲料類に配合する場合は、通常、上記グルコサミン及び／又はグルコサミン誘導体として０．０１〜３０質量％が好ましく、０．１〜１０質量％がより好ましい。上記グルコサミン及び／又はグルコサミン誘導体の配合量が少な過ぎると、生理活性が期待できる量の上記グルコサミン及び／又はグルコサミン誘導体を摂取するために１回当りの摂取量を大幅に増やす必要があるため、継続的に摂取することが困難となり、多すぎると製品中での結晶化による沈殿発生や過剰摂取による軟便等の症状がでる可能性がある。
【００４３】
また、本発明の飲食品において、「表示を付した」とは、製品の容器、袋、箱等の包装材料等に直接表示されたものだけでなく、製品の袋や箱等に同封された印刷物、製品パンフレット、代理店等に対する販促資料、更にはインターネットのホームページ等に記載された製品情報等に表示されたものを含む意味である。
【実施例】
【００４４】
以下実施例を挙げて本発明を具体的に説明するが、これらの実施例は本発明の範囲を限定するものではない。
【００４５】
<実施例１>
ヒトα−１、４結合型Ｎ−アセチルグルコサミン転移酵素(α４ＧｎＴ)のｃＤＮＡ（α４ＧｎＴ ｃＤＮＡ；ＮＣＢＩデータベース照会番号 NM_016161）を、常法に従ってヒト胃ガン由来培養細胞ＡＧＳに遺伝子導入し、ＣＭＶプロモーターによって、恒常的に発現している遺伝子導入細胞株であるＡＧＳ−α４ＧｎＴを作成した。
【００４６】
この遺伝子導入細胞株（ＡＧＳ−α４ＧｎＴ）は、Dulbecco’s Modified Eagle Medium (Invitrogen 以下DMEMと略す)、10% Fetal Bovine Serum(Equitec Bio)、1% Penicillin-Streptomycin,liquid(Invitrogen)、0.2mg/ml G418(Sigma) からなる細胞培養液中で培養・維持した。
【００４７】
また、糖質として、Ｎ−Ｄ−アセチルグルコサミン、Ｄ−グルコサミン塩酸塩、
Ｎ−アセチルキトビオース（ＧｌｃＮＡｃ（β１−４）ＧｌｃＮＡｃ）、Ｎ−アセチルラクトサミン（Ｇａｌ（β１−４）ＧｌｃＮＡｃ）(以上の糖質はすべて焼津水産化学工業株式会社製)を濃度４００ｍＭになるようにＤＭＥＭに溶解し、MILLEX-GV(0.22μm filter Unit)で濾過滅菌し、超純水で１０、１００、２００ｍＭの糖質溶液に調製した。
【００４８】
上記ＡＧＳ−α４ＧｎＴ細胞を、０．４５ｍｌの培養液中に２×１０４の細胞を含むように細胞濃度を合わせて４８ウェルプレート(Falcon 社製)の１ウェル内に播種した。その播種日を０日目として、播種後1日目に上記の各濃度の糖質溶液０．０５ｍｌをウェル内に添加し、最終０．５ｍｌ量の培養液中の糖質がそれぞれ終濃度１、１０、２０ｍＭとなるように添加した。また、糖質を含まない対照としてＤＥＭＥのみを添加した。
【００４９】
細胞播種後１〜５日目の培養液を３ウェルずつ別々のエッペンドルフチューブに回収して、１０００ｒｐｍ×３ｍｉｎ、４℃で細胞を遠心分離した後、上清を新しいエッペンドルフチューブに回収した。
【００５０】
この培養上清中の分泌ムチン濃度を、「胃腺粘液細胞ムチン測定用ELISAキット」(商品名、関東化学株式会社)及び「ELAST ELISA Amplification Kit」(株式会社パーキンエルマージャパン)を用いて測定した。なお、上記キットに用いられる抗体は、非還元末端部にα−１、４型グリコシド結合によりＮ−アセチルグルコサミンを結合している糖鎖を特異的に認識する抗体を用いて測定したものであり、また、α４ＧｎＴを導入しないＡＧＳ細胞から分泌するムチンをほとんど認識しないものであるため、α1,4-GlcNAc含有Α−１、４結合型Ｎ−アセチルグルコサミン含有O−グリカン型糖鎖の濃度であると考えられた。また、測定値は、３ウェルのうち２ウェルの培養液上清に含まれるの濃度の平均値として算出した。
【００５１】
図1に、Ｎ−Ｄ−アセチルグルコサミンがα−１、４結合型Ｎ−アセチルグルコサミン含有Ｏ−グリカン産生に与える影響についての結果を示す。
【００５２】
図1からわかるように、Ｎ−Ｄ−アセチルグルコサミンを1ｍＭ添加したときは、播種５日目に対照に比べて約３倍のΑ−１、４結合型Ｎ−アセチルグルコサミン含有O−グリカン分泌を促進した。一方、１０ｍＭ、２０ｍＭ添加群ではα−１、４結合型Ｎ−アセチルグルコサミン含有Ｏ−グリカン分泌は対照よりも低く、１ｍＭ程度の濃度がα−１、４結合型Ｎ−アセチルグルコサミン含有Ｏ−グリカン分泌に有効であることが示唆された。
【００５３】
図２にＤ−グルコサミンがα−１、４結合型Ｎ−アセチルグルコサミン含有Ｏ−グリカン産生に与える影響についての結果を示す。
【００５４】
図２からわかるようにＤ−グルコサミンを１ｍＭ、２０ｍＭ添加するとα−１、４結合型Ｎ−アセチルグルコサミン含有Ｏ−グリカン分泌が促進した。１ｍＭ添加のときα−１、４結合型Ｎ−アセチルグルコサミン含有Ｏ−グリカン濃度が最大であった。
【００５５】
図３にＮ−アセチルキトビオースがα−１、４結合型Ｎ−アセチルグルコサミン含有Ｏ−グリカン産生に与える影響についての結果を示す。
【００５６】
図３からわかるようにＮ−アセチルキトビオースを１ｍＭ、１０ｍＭ添加したときは、播種５日目に対照に比べて約４倍のα−１、４結合型Ｎ−アセチルグルコサミン含有Ｏ−グリカン分泌を促進した。２０ｍＭ添加群ではα−１、４結合型Ｎ−アセチルグルコサミン含有Ｏ−グリカン分泌は対照よりも低く、１〜１０ｍＭ程度の濃度がα−１、４結合型Ｎ−アセチルグルコサミン含有Ｏ−グリカン分泌に有効であることが示唆された。
【００５７】
図４にＮ−アセチルラクトサミンのα−１、４結合型Ｎ−アセチルグルコサミン含有Ｏ−グリカン産生に与える影響についての結果を示す。
【００５８】
図４からわかるようにＮ−アセチルラクトサミンを１、１０、２０ｍＭ添加したときは、播種５日目に対照に比べて約４〜５倍のα−１、４結合型Ｎ−アセチルグルコサミン含有Ｏ−グリカン分泌を促進した。すべての添加群でα−１、４結合型Ｎ−アセチルグルコサミン含有Ｏ−グリカン濃度が上昇し、よい促進剤であることが示唆された。
【００５９】
以上のとおり、Ｄ−グルコサミン塩酸塩、Ｎ−Ｄ−アセチルグルコサミン、Ｎ−アセチルキトビオース（ＧｌｃＮＡｃ（β１−４）ＧｌｃＮＡｃ）、Ｎ−アセチルラクトサミン（Ｇａｌ（β１−４）ＧｌｃＮＡｃ）によって、α−１、４結合型Ｎ−アセチルグルコサミン含有Ｏ−グリカン型糖鎖の細胞からの分泌が促進されることが明らかとなった。
【産業上の利用可能性】
【００６０】
本発明は、ヘリコバクター ピロリ菌を原因とする病態の治療予防に有用である。
【図面の簡単な説明】
【００６１】
【図１】Ｎ−Ｄ−アセチルグルコサミンがα−１、４結合型Ｎ−アセチルグルコサミン含有Ｏ−グリカン型糖鎖の細胞からの分泌量に与える影響について測定した結果を示す図である。
【図２】Ｄ−グルコサミン塩酸塩がα−１、４結合型Ｎ−アセチルグルコサミン含有Ｏ−グリカン型糖鎖の細胞からの分泌量に与える影響について測定した結果を示す図である。
【図３】Ｎ−アセチルキトビオースがα−１、４結合型Ｎ−アセチルグルコサミン含有Ｏ−グリカン型糖鎖の細胞からの分泌量に与える影響について測定した結果を示す図である。
【図４】Ｎ−アセチルラクトサミンがα−１、４結合型Ｎ−アセチルグルコサミン含有Ｏ−グリカン型糖鎖の細胞からの分泌量に与える影響について測定した結果を示す図である。
【特許請求の範囲】
【請求項１】
Ｏ−グリカン型糖鎖であって、その非還元末端部にはα−１、４型グリコシド結合によりＮ−アセチルグルコサミンを結合しているＯ−グリカン型糖鎖の細胞からの分泌を促進する成分として、下記一般式〔１〕又は〔２〕で表される、グルコサミン及び／又はグルコサミン誘導体から選ばれた少なくとも１種を有効成分として含有することを特徴とするα−１、４結合型Ｎ−アセチルグルコサミン含有Ｏ−グリカン型糖鎖の分泌促進剤。
Ｒ−ＧｌｃＮ …〔１〕
Ｒ−ＧｌｃＮＡｃ …〔２〕
（上記一般式〔１〕又は〔２〕中、ＧｌｃＮはグルコサミン残基を表し、ＧｌｃＮＡｃはＮ−アセチルグルコサミン残基を表し、Ｒは水素原子もしくは重合度１−５の糖鎖を表す。）
【請求項２】
前記グルコサミン及び／又はグルコサミン誘導体が、グルコサミン、キトビオース、キトトリオース、キトテトラオース、キトペンタオース、キトヘキサオース、Ｎ−アセチルグルコサミン、Ｎ−アセチルキトビオース、Ｎ−アセチルキトトリオース、Ｎ−アセチルキトテトラオース、Ｎ−アセチルキトペンタオース、Ｎ−アセチルキトヘキサオース、ラクトサミン、Ｎ−アセチルラクトサミン、ガラクトシルラクトサミン、ガラクトシル−Ｎ−アセチルラクトサミンから選ばれた少なくとも１種である請求項１記載のα−１、４結合型Ｎ−アセチルグルコサミン含有Ｏ−グリカン型糖鎖の分泌促進剤。
【請求項３】
前記請求項１又は２記載のα−１、４結合型Ｎ−アセチルグルコサミン含有Ｏ−グリカン型糖鎖の分泌促進剤を含有する、ヘリコバクター ピロリ菌を原因とする病態の治療予防剤。
【請求項４】
下記一般式〔１〕又は〔２〕で表される、グルコサミン及び／又はグルコサミン誘導体から選ばれた少なくとも１種を含有し、Ｏ−グリカン型糖鎖であって、その非還元末端部にはα−１、４型グリコシド結合によりＮ−アセチルグルコサミンを結合しているＯ−グリカン型糖鎖の細胞からの分泌を促進するため及び／又はヘリコバクター ピロリ菌を原因とする病態を治療し予防するために用いられるものである旨の表示を付した飲食品。
Ｒ−ＧｌｃＮ …〔１〕
Ｒ−ＧｌｃＮＡｃ …〔２〕
（上記一般式〔１〕又は〔２〕中、ＧｌｃＮはグルコサミン残基を表し、ＧｌｃＮＡｃはＮ−アセチルグルコサミン残基を表し、Ｒは水素原子もしくは重合度１−５の糖鎖を表す。）
【請求項１】
Ｏ−グリカン型糖鎖であって、その非還元末端部にはα−１、４型グリコシド結合によりＮ−アセチルグルコサミンを結合しているＯ−グリカン型糖鎖の細胞からの分泌を促進する成分として、下記一般式〔１〕又は〔２〕で表される、グルコサミン及び／又はグルコサミン誘導体から選ばれた少なくとも１種を有効成分として含有することを特徴とするα−１、４結合型Ｎ−アセチルグルコサミン含有Ｏ−グリカン型糖鎖の分泌促進剤。
Ｒ−ＧｌｃＮ …〔１〕
Ｒ−ＧｌｃＮＡｃ …〔２〕
（上記一般式〔１〕又は〔２〕中、ＧｌｃＮはグルコサミン残基を表し、ＧｌｃＮＡｃはＮ−アセチルグルコサミン残基を表し、Ｒは水素原子もしくは重合度１−５の糖鎖を表す。）
【請求項２】
前記グルコサミン及び／又はグルコサミン誘導体が、グルコサミン、キトビオース、キトトリオース、キトテトラオース、キトペンタオース、キトヘキサオース、Ｎ−アセチルグルコサミン、Ｎ−アセチルキトビオース、Ｎ−アセチルキトトリオース、Ｎ−アセチルキトテトラオース、Ｎ−アセチルキトペンタオース、Ｎ−アセチルキトヘキサオース、ラクトサミン、Ｎ−アセチルラクトサミン、ガラクトシルラクトサミン、ガラクトシル−Ｎ−アセチルラクトサミンから選ばれた少なくとも１種である請求項１記載のα−１、４結合型Ｎ−アセチルグルコサミン含有Ｏ−グリカン型糖鎖の分泌促進剤。
【請求項３】
前記請求項１又は２記載のα−１、４結合型Ｎ−アセチルグルコサミン含有Ｏ−グリカン型糖鎖の分泌促進剤を含有する、ヘリコバクター ピロリ菌を原因とする病態の治療予防剤。
【請求項４】
下記一般式〔１〕又は〔２〕で表される、グルコサミン及び／又はグルコサミン誘導体から選ばれた少なくとも１種を含有し、Ｏ−グリカン型糖鎖であって、その非還元末端部にはα−１、４型グリコシド結合によりＮ−アセチルグルコサミンを結合しているＯ−グリカン型糖鎖の細胞からの分泌を促進するため及び／又はヘリコバクター ピロリ菌を原因とする病態を治療し予防するために用いられるものである旨の表示を付した飲食品。
Ｒ−ＧｌｃＮ …〔１〕
Ｒ−ＧｌｃＮＡｃ …〔２〕
（上記一般式〔１〕又は〔２〕中、ＧｌｃＮはグルコサミン残基を表し、ＧｌｃＮＡｃはＮ−アセチルグルコサミン残基を表し、Ｒは水素原子もしくは重合度１−５の糖鎖を表す。）
【図１】
【図２】
【図３】
【図４】
【図２】
【図３】
【図４】
【公開番号】特開２００７−９９６６８（Ｐ２００７−９９６６８Ａ）
【公開日】平成１９年４月１９日（２００７．４．１９）
【国際特許分類】
【出願番号】特願２００５−２９０７２０（Ｐ２００５−２９０７２０）
【出願日】平成１７年１０月４日（２００５．１０．４）
【出願人】（３９００３３１４５）焼津水産化学工業株式会社 (80)
【Ｆターム（参考）】
【公開日】平成１９年４月１９日（２００７．４．１９）
【国際特許分類】
【出願日】平成１７年１０月４日（２００５．１０．４）
【出願人】（３９００３３１４５）焼津水産化学工業株式会社 (80)
【Ｆターム（参考）】
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