アルテミアシストを処理する方法
シスト、特にアルテミアシストを、該シストの一部が孵化し自由遊泳生餌有機体を放出するように孵化媒体内で孵化する。その後、自由遊泳生餌有機体を未孵化のシストから分離する。シストを孵化する前に、磁性粒子をシストに付与して、該シストを特に液体孵化媒体内で磁気的に引き漬け得るようにする。これは、磁性粒子で被覆した未孵化のシストおよび空のシスト殻を、外表面に付与した磁性粒子を有しない自由遊泳生餌有機体から有効に分離することを可能にする。本発明はまた、被覆シストにも関する。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、シスト、特に液体孵化媒体中で孵化して生餌有機体、特にアルテミアノープリウスを生産することを目的としたアルテミアシストを処理する方法に関するものである。
【背景技術】
【０００２】
魚および甲殻類幼生用の生餌としてのアルテミアノープリウスの生産は、海洋孵化場における基本的な操業であると考えられる。アルテミアノープリウスの生産工程は、普通孵化、分離、濃縮、洗浄および収集を含む一方、篩または濃縮器／洗浄器が通常アルテミアノープリウスを収集および洗浄するのに必要である。濃縮器は、実際にはフィルタであり、これを用いて廃水をノープリウスから分離し、孵化後のノープリウスからの余分な水を分配または貯蔵に適した最終堆積まで除去し、また濃縮後にノープリウス上の油性コーティングを洗浄する。
【０００３】
孵化後、アルテミアノープリウスを未孵化のシストおよび空のシスト殻から分離する必要がある。その理由は、これらシストおよび殻が幼生のタンクに大きな問題を生じ得るからである。実際、これらを捕食者が摂取する時、これらを消化することができず、消化管を傷害し得るため、幼魚または他の捕食者が死ぬ可能性がある。多くの孵化場において、散気管を孵化タンクから除去することにより分離を達成し、孵化タンク中の異なる対象物（アルテミアノープリウス、充実シストおよび空のシスト殻）を分離することを可能にする。アルテミアノープリウスは、孵化タンク内を自由に泳ぎ、孵化円錐体の先端において光（アルテミアノープリウスは光源に引き寄せられる）を用いて底に集めることができる。一方、空のシスト殻は浮遊する傾向があり、また充実した未孵化のアルテミアシストは沈下する傾向がある。これら後者の対象物は、孵化したノープリウスを収集した後アルテミアノープリウスの品質に干渉し得る。多数のシスト（充実または空）が孵化したアルテミアノープリウスから見つかった場合、これらシストをアルテミアノープリウスから除去するために追加の分離工程を必要とする。一般に、篩を用いて篩上にシストを集めることで、アルテミアノープリウスからシストを除去する。篩は、ノープリウスが篩を通過することができ、またシストのような対象物が篩上に集まるよう選択される。全体的には、篩のメッシュサイズが約２１２μｍである。その後、ノープリウスそれ自身をさらに微細な篩上に集める。一般に、二重の篩別法を用い、第１篩が未孵化のシストを保持し、第２篩がノープリウスを保持する。この二重の篩別法に基づく分離処理は、繊細で時間のかかる処理である。
【０００４】
孵化タンクの先端における濃縮したアルテミア中のシスト／アルテミアノープリウスの比率に応じて、このフィルタリング工程を効率的または非効率的に実施することができる。シストがより多く存在すると、フィルタリングスクリーンがより速く目詰まりする。かかる目詰まりは、流速を低下するだけでなく、ノープリウスの損傷リスクを増大するため、孵化／分離処理の主な問題とされてきた。目詰まりを防ぐため、濾過中にフィルタリングスクリーン上の粒子を効果的に除去しなくてはならない。実際、ウォータージェットを用いて、ノープリウスに吹き付けてフィルタを通す。孵化タンクの通気を通常停止して空のシスト殻が孵化タンクにおいて上昇し且つノープリウスが底部に濃縮し得るようにするため、実際には、フィルタリング工程をかなり急速に実施すべきである。酸素欠乏による死滅を防ぐため、ノープリウスを円錐形の容器の先端に長時間沈殿させることはできない。
【０００５】
未孵化のシストをノープリウスから分離しなければならない問題を解決するために孵化場に用いる解決策の１つは、アルテミアシストを皮膜剥離することである。シストの皮膜剥離（シスト殻外層のアルテミア胚種からの除去）は、７０年代に発達した周知の化学処理である。古典的な皮膜剥離方法は、限られた期間、ＮａＯＨ（高いｐＨを維持するため）を添加してシスト殻（卵膜）をＮａＯＣｌ（次亜塩素酸ナトリウム）で所定期間溶解することからなる。シスト外層が酸化反応により溶解する。発熱反応が終了すると同時に、脱殻シストをＮａ２Ｓ２Ｏ３で直ちに中和して胚種を酸化反応から保護する必要がある。皮膜剥離処理を適切に実行した場合、胚種の生存力が影響を受けることは無く、ノープリウスに孵化または貯蔵のため脱水することができる。シストの皮膜剥離は、空のシスト殻および未孵化のシストの分離の必要性を排除する。しかし、未孵化の皮膜剥離したシストは、魚またはシュリンプの幼生タンク内において速やかに沈殿し、培養液を分解および劣化させ、細菌感染および疾病を生じ得る。
【０００６】
多くの孵化場がこの処理を適用するが、かかる皮膜剥離処理の主な欠点は、廃水が非常に高水準の毒性産物を含み、浄化が非常に困難なことである。例えば、廃水は高水準のＣＯＤ、ＣｌおよびＡＯＸを含み得る。今日では、このような化学物質の処理で生ずる環境問題によりこの処理を大規模に行うことはできない。他の欠点は、皮膜剥離処理が非常に大きな労力を要求し、さらに正確に実施する必要があることで、その理由はシストの生存力が影響を受ける場合があるからである。発熱反応のため、皮膜剥離媒体を冷却しなければならず、皮膜剥離処理を良い時に正確に停止して胚種自体の酸化反応を防止すべきである（非特許文献１（SRAC Publication No. 702 of Oct. 2000 “Artemia Production for Marine Larval Fish Culture” by Granvil D. Treece）参照）。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００７】
【特許文献１】米国特許第３６７６３３７号明細書
【特許文献２】国際公開第０４／０５７９５２号明細書
【特許文献３】米国特許第４３２９２４１号明細書
【特許文献４】米国特許第４９０６３８２号明細書
【特許文献５】米国特許第５２４０６２６号明細書
【特許文献６】米国特許第６１２０８５６号明細書
【特許文献７】米国特許第６２７７２９８号明細書
【特許文献８】米国特許第６０６８７８５号明細書
【特許文献９】国際公開第９１／０２０８３号明細書
【非特許文献】
【０００８】
【非特許文献１】SRAC Publication No. 702 of Oct. 2000 “Artemia Production for Marine Larval Fish Culture” by Granvil D. Treece
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００９】
本発明の目的は、未孵化のシストと、任意には空のシスト殻とを自由遊泳生餌有機体、特にアルテミアノープリウスから、該自由遊泳生餌有機体の損傷または死滅のリスクを抑えた状態で有効に分離し得る新たな方法を提供することにある。
【課題を解決するための手段】
【００１０】
この目的を達成するため、本発明による方法は、特に前記液体孵化媒体中で磁性粒子をシストに付与して該シストを磁気的に引き付ける工程を備えることを特徴とする。
【００１１】
磁性粒子がシスト上に存在するが、シストから孵化し自由遊泳生餌有機体上に存在しないことにより、前記シストを磁気的に引き付けることができ、その結果生餌有機体を損傷することなく該有機体から有効に分離することができる。例えば、孵化媒体に磁石を適用することで未孵化のシストおよび空のシスト殻を引き付け、これらを孵化媒体から除去することができ、この場合孵化タンクからシストおよびシスト殻が付着した磁石を除去するか、または磁石をタンク内で保持しながら孵化タンクから自由遊泳生餌有機体を有する孵化媒体を除去することによるいずれかである。後者の場合、磁石をタンクの壁の中または壁に付与することができるので、未孵化のシストおよび空のシスト殻がタンクの壁に付着する。代わりにまたはさらに、未孵化のシストおよびあらゆる空のシスト殻を引き留める磁石を含む分離装置、特に流入装置を介して孵化媒体を孵化工程後に誘導することもできる。
【００１２】
磁性粒子という用語は、磁石により引き付け得る粒子のことを意味する。従って、該粒子を強磁性、フェリ磁性または（強力な）常磁性材料から作成することができる。強磁性またはフェリ磁性からなる粒子を磁化する、つまり小さな磁石に変換することができる。この場合、磁石を用いてシストまたはシスト殻を引き寄せるのが好ましいが、磁石を非磁化の磁性材料により置換することができる。
【００１３】
本発明による方法の好適な実施形態において、磁性粒子を懸濁液の形態、特に水性懸濁液の形態でシスト上に、好適にはシストの表面が乾燥している際に付与するので、これらは自由に流動する。他の実施形態において、磁性粒子を粉末の形態でシスト上に付与する。本明細書における用語「自由流動」は、シストが一緒に小さな凝集塊にならず、紙片から容易に注入することができる個々の物として存在することを意味する。
【００１４】
磁性粒子に対するいかなる接着剤または接着剤コーティングなしで、磁性粒子がシストに十分被着し、被着したまま孵化媒体中に留まるので、シストおよび空のシスト殻を孵化後自由遊泳生餌有機体から磁力により分離することができることを見出した。接着剤を用いないことの利点は、シストが互いに凝集するのを防止することが一層容易になることである。しかし、このことは、本発明による方法において接着剤を用いる可能性を除外するものではない。例えば、シストを孵化媒体に導入した際に溶解するＣＭＣ（カルボキシメチルセルロース）のような接着剤を用いることができる。
【００１５】
本発明による方法のさらに好適な実施形態において、シスト上に付与する前の磁性粒子の少なくとも９０重量％が１０μｍ未満、好ましくは５μｍ未満、さらに好ましくは１μｍ未満、最も好適には０．５μｍ未満のサイズを有する。
【００１６】
この実施形態の利点は、かかる小さな粒子が大きな粒子よりもシストにより被着することである。一度シストを被覆すると、磁性粒子がシスト上により大きな沈積物（結晶）を形成することができ、これは特に部分的に磁性粒子間の磁気吸引力によるものである。
【００１７】
本発明はまた、本発明による方法で得ることができるシスト、特にアルテミアシストに関する。これらシストは、その外表面に付与した磁性粒子を有することを特徴とする。
【００１８】
最後に、本発明はまた、本発明に係るシストから出発して自由遊泳生餌有機体を製造する方法に関し、ここでシストの一部が孵化し自由遊泳性の生餌有機体を放出するように前記シストを孵化媒体中で孵化し、また自由遊泳生餌有機体を未孵化のシストおよび空のシスト殻から分離する。本発明によれば、外表面に付与した磁性粒子を有する未孵化のシストを、孵化工程後外表面に付与した磁性粒子を有さない自由遊泳生餌有機体から磁力により分離する。
本発明の他の詳細および利点は、以下の、本発明による方法およびシストにおける特定の実施形態の説明から明白となるであろう。この説明に用いる参照番号は、添付の図面に関する。
【図面の簡単な説明】
【００１９】
【図１】磁石を有するシスト除去装置を配してシストの孵化後未孵化のシストを生成したノープリウスから分離する孵化タンクの概略図である。
【図２】孵化工程後に孵化媒体を導入することにより未孵化のシストをノープリウスから磁気的に分離し得る流入装置の実施形態における大縮尺図である。
【発明を実施するための形態】
【００２０】
本発明は、未孵化のシストと、また任意には空のシスト殻とをシストから孵化した自由遊泳生餌有機体から分離する新しく有利な方法を提供することを意図とする。シストは、特にアルテミアシストであるが、本発明を他種のシストにも適用することができる。シストという用語は、比較的速やか（１日または数日内）に孵化し得る外殻に封入された胚種を包含するだけではなく、胚種が孵化し得る前になお成長すべき卵も包含する。したがって、本発明は、例えばワムシ、淡水アルテミア等のような他の水生生物のシスト（卵）にも適用することができる。しかし、本発明の主な適用はアルテミアシストであるため、さらなる説明は、このようなアルテミアシストおよびアルテミアシストから孵化した自由遊泳ノープリウスに関してのみ行う。
【００２１】
アルテミアシストは、五大陸に広く点在する過塩性の湖の汀線、沿岸礁湖および太陽熱を利用する製塩所において大量に入手可能である。収集の後、シストを洗浄し、ブライン液に数ヶ月間保存する。その後、処理（淡水で洗浄／すすぎ）した後、１５重量％以下の含水量まで乾燥する。海水中で孵化すると、これらシストは、栄養価の高い生餌資源として直接供給し得る自由遊泳性ノープリウスを多くの海洋生物の幼生並びに水産養殖用に入手可能な、最も便利で最小の労働集約性の生餌である淡水生物に放出する。
【００２２】
アルテミアシストを孵化するのに使用し得る容器１の例を図１に示す。実際、最良の孵化効果が、円錐体底部３を形成する壁２を有し、且つ底部から通気する容器１において達成される。円筒形または四角い底部のタンクは、アルテミアシストおよびノープリウスが集積し且つ酸素欠乏に苦しむデッドスポットを有する。透明または半透明の容器は、特に収集の時、孵化懸濁液の検査を容易にする。さらに、容器１は、円錐体の底部に位置して収集に先立ちノープリウスを底部に引き寄せる少なくとも１つの光源４を備えることができる。
【００２３】
容器１におけるシストの孵化後、通気を停止するので、未孵化のシストのほとんどが底部３上に沈殿し、空のシスト殻のほとんどが孵化媒体の表面上に浮遊する。容器１の底部に出口５を備えるので、自由遊泳ノープリウスを含む孵化媒体を篩上に取り出すことができる。未孵化のシストが孵化媒体から篩い分けられるのを回避するため、または孵化媒体から篩別されるべき未孵化のシストの量を減少するため、現在は磁性分離方法を用いる。
【００２４】
本発明によれば、孵化媒体に導入したシストは、その外表面に磁性粒子を備える。このように、未孵化のシストおよび空のシスト殻を、磁力によりシストから孵化し、磁性粒子を含まない自由遊泳ノープリウスから分離することができる。この分離を異なる方法で実行することができる。
【００２５】
孵化工程後、１つ以上の磁石７を備えるシスト除去装置６を孵化媒体内に入れることができるので、未孵化のシストおよび空のシスト殻をこの装置６により引き寄せ、磁石７に貼着する。容器の底部に位置する未孵化のシストも除去し得るようにするため、孵化媒体を容器の底部から頂部に循環することができる。これにより、未孵化のシストがシスト篩上に到達するのが少ないので、磁気分離が十分に効率的である場合、もはや孵化媒体からあらゆる未孵化のシストを篩い分ける必要はない。
【００２６】
シスト除去装置６を孵化媒体内に入れる代わりに、又はそれに加えて、孵化容器１の壁、特にその円錐体の底部３に１つ以上の磁石８を設けることも可能である。このようにして、出口５を介して容器１を空にする際、未孵化のシストおよび空のシスト殻か磁石８の位置で容器１の壁に貼着する。
【００２７】
孵化媒体内でのシストの孵化の間、好適にはシストを孵化媒体中でそこに吹き込む空気でより均一に分布するように磁石８を除去する必要がある。磁石８が永久磁石ではなく電磁石８である場合、磁石の除去の代わりに電流を中断することができる。孵化媒体内に入れるシスト除去装置６の磁石７も電磁石とし得るが、電気的障害を低減するためには永久磁石であるのが好ましい。
【００２８】
未孵化のシストを孵化容器それ自体において磁気的に分離する代わりに、またはこれに加えて、未孵化のシストおよび空のシスト殻を流入装置においてノープリウスから分離することができ、ここで孵化媒体を少なくとも１つの磁石に沿って誘導するので、未孵化のシストおよび空のシスト殻が磁石に貼着する一方、ノープリウスが磁石に引き寄せられずに通過する。かかる流入装置の一例を図２に概略的に示す。これは、入口１０および出口１１を有する細長いチャンバ９を備える。細長いチャンバ９に磁性グレードステンレス鋼の鋼綿１２（または他の耐腐食性強磁性綿）を満たし、且つ電気コイル１３を周設するので、磁界を細長いチャンバ９内に発生することができる。従って、鋼綿１２が磁性粒子を有する未孵化のシストまたは空のシスト殻を引き寄せる磁石を形成するようにこれを磁化することができる。綿綿１２の広い表面積により、未孵化のシストまたは空のシスト殻を保持する広い表面を得ることができるため、流入装置を全くコンパクトにすることができる。このような磁性分離装置についてのさらなる詳細を特許文献１（米国特許第３６７６３３７号）において見出すことができ、ここに参照して援用する。
【００２９】
上述したように、本発明の重要な特徴は、シストの外表面に磁性粒子を付与することにある。本発明は、シスト上に磁性粒子を付与することにより、未孵化のシストおよび空のシスト殻を生成したノープリウスから効率的に分離することができるだけでなく、重要なことには、シストを必要量の磁性粒子で費用が効果的な方法により被覆することもできることにある。
【００３０】
磁性粒子を粉末の形態でシスト上に塗布することができる。この場合、シストは、好適には粉末を塗布する際に湿潤面（自由流動ではない）を有するので、磁性粒子がシストにより良好に被着する。特にシストをブライン液外に除去した後で、これらを乾燥する前に、粉末をシストに塗布することができるので、これらは依然湿潤面を有する。このようにして、シストを一度だけ、特に２５重量％未満の含水量、好適には２０重量％未満の含水量、さらに好適には１５重量％未満の含水量まで乾燥する必要がある。
【００３１】
液状懸濁液を一層容易に塗布することができるため、磁性粒子を液状懸濁液の形態でシストに塗布するのが好ましい。磁性粒子を有機溶媒中で、例えば植物油またはエタノールに懸濁することができるが、水性媒体に懸濁して水性懸濁液とするのが好ましい。この懸濁液を湿潤シストに上述した含水量まで乾燥する前に塗布する、特に上述したように噴霧することができるか、または乾燥した自由流動シスト上に噴霧することができる。水性懸濁液を用いる場合、乾燥したシストの表面は湿潤するが、水は乾燥したシストにより速やかに吸収されるため、シストを攪拌すると、これらが再度速やかに自由流動する。シストが十分乾燥しており、十分に少量の水性懸濁液を用いた場合、処理したシストの含水量（内部）は、２５重量％以下、好適には２０重量％以下、または１５重量％以下に留めることができる。しかし、水性懸濁液を塗布した後、シストを再び乾燥してこのような低含水量を達成することができる。このような低含水量の利点は、磁性粒子を塗布した後で通常通りシストを使用前まで包装し、数ヶ月間保管することにある。シストを再乾燥するさらなる利点は、孵化媒体に導入する前にシストをまず乾燥する際に磁性分離がより効果的になるので、磁性粒子が明らかにシストにより強固に被着することにある。
【００３２】
予め形成した磁性粒子をシストに塗布する代わりに、磁性粒子を現場でシスト上に、例えばコーティングの形態で形成することができる。磁性材料のコーティングはまた、本明細書および特許請求の範囲において、シスト上に塗布した磁性粒子とすることもでき、コーティングが連続的である場合でも非常に脆く、容易に磁性粒子に破砕し得るため、シストの孵化が可能になる。特許文献２（国際公開第０４／０５７９５２号）に開示されているように、シストの殻が過マンガン酸塩（特に過マンガン酸カリウム）と反応して二酸化マンガン層をシスト上に形成することができる。特許文献２において、この二酸化マンガン層をその後除去して皮膜剥離したシストを生成するが、本発明によれば、二酸化マンガン層を除去する必要は無く、シストおよびシスト殻を生成したノープリウスから磁気的に分離するのに用いることができる。
【００３３】
磁性粒子を、強磁性、フェリ磁性または常磁性の材料から作ることができる。しかし、シストおよびシスト殻をノープリウスから分離するのに必要な磁力を得るためにより小さな磁場を必要とするため、強磁性材料およびフェリ磁性材料が好適である。磁性粒子は、１つ以上の遷移金属の酸化物からなるのが好ましく、特にＣｒＯ２（酸化クロム（ＩＶ））、ＣｏＦｅ２Ｏ４（コバルトフェライト）、ＣｕＦｅ２Ｏ４（銅フェライト）、Ｄｙ３Ｆｅ５Ｏ１２（ジスプロシウムフェロガーネット）、ＤｙＦｅＯ３（ジスプロシウムオルトフェライト）、ＥｒＦｅＯ３（エルビウムオルトフェライト）、Ｆｅ５Ｇｄ３Ｏ１２（ガドリニウムフェロガーネット）、Ｆｅ５Ｈｏ３Ｏ１２（ホルミウム鉄ガーネット）、ＦｅＭｎＮｉＯ４（鉄ニッケルマンガン酸化物）、Ｆｅ２Ｏ３（マグヘマイト）、Ｆｅ３Ｏ４（マグネタイト）、Ｆｅ２Ｏ３（ヘマタイト）、ＦｅＬａＯ３（ランタンフェライト）、ＭｇＦｅ２Ｏ４（マグネシウムフェライト）、Ｆｅ２ＭｎＯ４（マンガンフェライト）、ＭｎＯ２（二酸化マンガン）、Ｎｄ２Ｏ７Ｔｉ２（ネオジムジチタン酸）Ａｌ０．２Ｆｅ１．８ＮｉＯ４（アルミニウムニッケルフェライト）、Ｆｅ２Ｎｉ０．５Ｏ４Ｚｎ０．５（ニッケル亜鉛フェライト）、Ｆｅ２Ｎｉ０．４Ｏ４Ｚｎ０．６（ニッケル亜鉛フェライト）、Ｆｅ２Ｎｉ０．８Ｏ４Ｚｎ０．２（ニッケル亜鉛フェライト）、ＮｉＯ（酸化ニッケル（ＩＩ））、Ｆｅ２ＮｉＯ４（ニッケルフェライト）、Ｆｅ５Ｏ１２Ｓｍ３（サーナリウムフェロガーネット）、Ａｇ０．５Ｆｅ１２Ｌａ０．５Ｏ１９（銀ランタンフェライト）、Ｆｅ５Ｏ１２Ｙ３（イットリウム鉄ガーネット）、およびＦｅＯ３Ｙ（イットリウムオルトフェライト）からなる群から選択した１つ以上の酸化物からなる。好ましくは、磁性粒子はＦｅ２Ｏ３（ヘマタイトまたはマグネマイト）、ＭｎＯ２（二酸化マンガン）またはフェライト、特にＦｅ３Ｏ４（マグネタイト）からなる。マグネタイトは、その強力な磁気特性の観点から最適である。
【００３４】
シスト上に塗布する前、シストを被覆するのに用いる磁性粒子は、その少なくとも９０重量％が１０μｍ未満、好適には５μｍ未満、さらに好適には１μｍ未満、最適には０．５μｍ未満のサイズを有するように小さいことが好ましい。粒子が小さくなるほど、接着剤を用いることなくシストによく被着する。さらに、特に懸濁液を調製するのに安定化剤（界面活性剤）を用いない場合に、小さな粒子ほど安定な懸濁液となる。磁性粒子をシスト上に塗布した後、これらがより大きなサイズを有する場合がある。被覆したシストの顕微鏡的視点によれば、実際に磁性粒子がシストの表面上で互いに凝集して大きな凝集塊／結晶を形成した様子を見ることができる。このことは、大きな結晶を形成するように水を懸濁液から抜いたことによるばかりか、特に磁性粒子が互いに磁気的に引き寄せあい大きな凝集塊／結晶を形成し得ることからも説明することができる。
【００３５】
磁性材料の粉末は、該磁性材料を粉砕することにより作成することができる。次いで、この粉末を水と混合して水性懸濁液とすることができる。このような粉砕方法の欠点は、微細粉とするまでに非常に長時間かかることと、粒径が極めて均一でないことである。さらに、非常に小さな粒径を得ることは困難である。
【００３６】
実際、強磁性またはフェリ磁性粒子の安定なコロイド懸濁液として規定することができる所謂磁気流体が存在する。特許文献３（米国特許第４３２９２４１号）に記載されるように、このような磁気流体は、例えば、粒子がブラウン運動により懸濁液の安定化を許容するに十分小さくなる（大きさがほぼ１０ｎｍ）までフェライトを灯油またはオレイン酸の存在下で数週間粉砕することにより製造することができる。しかし、このような処理は全く高価である。より安価な方法は、第一鉄および第二鉄の塩の溶液を水酸化ナトリウムまたはアンモニア溶液のようなアルカリ性物質と反応させることによりコロイド性マグネタイトを沈殿させることからなる。粒径は、攪拌することにより調節することができる。攪拌を十分に激しく行う場合、粒径を１０ｎｍより小さくすることができる。安定した磁気流体を得るため、懸濁化剤の被覆を磁性粒子に塗布することができる。このような磁性流体を製造する方法は、例えば特許文献３、特許文献４（米国特許第４９０６３８２号）、特許文献５（米国特許第５２４０６２６号）、特許文献６（米国特許第６１２０８５６号）、特許文献７（米国特許第６２７７２９８号）、特許文献８（米国特許第６０６８７８５号）、および特許文献９（国際公開第９１／０２０８３号）に開示されている。
【００３７】
本発明による方法においては、このような安定な磁気流体を用いて磁性粒子をシスト上に塗布することができる。しかし、より安価な懸濁液、すなわち、あらゆる分散剤の使用なしに作成し、数分以内で安定しないが沈殿する懸濁液を用いることもできることを見出した。上述したように、第一鉄および第二鉄の塩をアルカリ性条件下水性媒体中で反応させてマグネタイト粒子を形成し、そのサイズを水性媒体の攪拌により調節し得ることによりマグネタイト粒子の懸濁液を容易に製造することができる。この懸濁液を、シスト、特に乾燥シストに噴霧することができる。磁性粒子が界面活性剤、または特許文献９に記載されているような特定の結合物質で被覆されていないにも関わらず、これらはシストに十分に被着することがわかった。従って、本発明による方法は、安価な材料を用いてかつ比較的簡単な方法で実施することができるため、特に低品質（以下に記載の一派名的な分離方法が、磁石の使用なしで測定した高い分離パーセンテージ）のシストを有用な製品に変えることができる。本発明による処理は、実際に、未孵化のシストを生餌有機体として用いるノープリウスから容易に除去することができる。
【００３８】
磁性粒子をシスト上にシスト乾燥物ｇ当たり少なくとも０．７５、好適には少なくとも１．０、さらに好適には少なくとも１．５、最適には少なくとも２．０ｍｇの量で塗布するのが好ましい。このような分量を用いると、未孵化のシストを磁石によりノープリウスから有効に引き寄せ、その結果分離することができることが試験により示された。シストに塗布する磁性粒子の量は、シスト乾燥物ｇ当たり好適には２００未満、さらに好適には１００未満、最適には５０ｍｇ未満である。特に、磁性粒子の量がシスト乾燥物ｇ当たり２０未満、特に１５ｍｇ未満である場合、シストを効果的に引き寄せることができた。
【００３９】
塩化第一鉄（ＦｅＣｌ２・４Ｈ２Ｏ）および塩化第二鉄（ＦｅＣｌ３・６Ｈ２Ｏ）を互いに水酸化ナトリウム（ＮａＯＨ）の存在下で反応させることにより調製したマグネタイト粒子の水性懸濁液は、飽和溶液を用いた場合、約１００ｇ／Ｌの磁性粒子を含有する懸濁液をもたらすことができる。かかる懸濁液を乾燥シスト上に噴霧および／または混合した場合、直ちにシストに吸収される。従って、シストの含水量が上昇するが、例えば１０％から２０％の限られた範囲内であるため、シストは依然休止しており保管することができる。長期保管のため、シストを再度乾燥するのが好ましい。磁性粒子を沈殿させ、上澄み液の一部分を除去することにより生成した懸濁液を容易に濃縮することができる。しかし、磁性粒子の濃度を好適には２００ｇ／Ｌ以下、さらに好適には１５０ｇ／Ｌ以下に維持して、懸濁液をシスト上に容易に噴霧することができる。シストに塗布した懸濁液における磁性粒子の濃度を、好適には５ｇ／Ｌ以上、さらに好適には１０ｇ／Ｌ以上、最適には２０ｇ／Ｌ以上とすることで、処理したシストの含水量の上昇を制限する。
【実施例】
【００４０】
実験に用いるすべての試薬および化学薬品は、分析用であり、Sigma Aldrich社（ベルギー）から入手した。攪拌しながら塩化第一鉄四水和物（ＦｅＣｌ２・４Ｈ２Ｏ）、塩化第二鉄六水和物（ＦｅＣｌ３・６Ｈ２Ｏ）、水酸化ナトリウム（ＮａＯＨ）および水を１：２：２：１０の割合で混合することによりマグネタイト懸濁液（ＭＳ）を調製した。この混合物は、懸濁したＦｅ３Ｏ４ナノ粒子の形成をもたらす。この調製物はおよそ０．１ｇＦｅ３Ｏ４／ｍＬを包含する。
【００４１】
シスト上に塗布する前に、マグネタイト粉末（酸化鉄（ＩＩ、ＩＩＩ）、Sigma Aldrich社、粒子＜５μｍ）（ＭＰ）を水中で懸濁した。
【００４２】
本発明の方法によりマグネタイト粒子を被覆するために、種々の濃度の様々な塗料（ＭＳおよびＭＰ）の５ｍＬアリコートを、５０ｇの異なるタイプのシスト（シストの含水率が±１０％）と混合する。肯定的な被覆結果は、シストの目視検査から明白である。
【００４３】
１リットルの円錐体を用い、ここでアルテミアシスト２ｇを人口海水（２５ｇ／Ｌ）内で好適には（しかし限定しない）２４時間孵化する。円錐体内の水温を３０℃付近で一定に維持し、水を常に通気し、光を当てた。シストが十分被覆されたかを判断するのに用いる判定基準は、シスト、シスト殻、傘および孵化したノープリウスの全量に対するシストおよびシスト殻の量を画定することである。さらにここでは、この数を「分離パーセンテージ」として示す。
【００４４】
分離パーセンテージを決定するため、磁石を１Ｌの円錐体内の孵化媒体に円錐体の底部からおよそ５ｃｍ（＝２０〜３０ｍＬ標線）の距離で懸濁した。通気を停止し、通気管を除去する。３０秒後、アルテミアノープリウス、傘、未孵化のシストおよび空のシスト殻を含有する孵化媒体３０ｍＬを収集し、孵化円錐体の底部に設けたサイホンを用いて再度孵化円錐体に移送する。磁性粒子を磁石に収集して２分後、サイホンを用いてさらに２００ｍＬの孵化媒体を除去し、新たな容器に移送する。その後、８００ｍＬの人口海水を新たな円錐体に加えて容積を１リットルまで増加する。試料を採取して分離パーセンテージを測定する。
【００４５】
分離パーセンテージに対するＭＳおよびＭＰの投与量効果を表１および２に示す。異なる投与量のマグネタイトを、ＭＳまたはＭＰ溶液として本発明の方法に従ってバッチ１（表１）およびバッチ２（表２）のシストに被覆する。各処理を三回評価し、処理結果を三回の平均とする。この例において、表１から明らかなように、シスト乾燥重量ｇ当たり４．５ｍｇＦｅ３Ｏ４のＭＳでのバッチ１のシストの被覆は、４％の最低分離パーセンテージを示し、未処理のシストの分離パーセンテージは２２％であった。
【００４６】
さらに重要なことには、１．５ｍｇＦｅ３Ｏ４／ｇシストの濃度で、分離パーセンテージが既に１４％相当まで低下する。３ｍｇＦｅ３Ｏ４／ｇシストの濃度では、分離パーセンテージが７％未満であること明白で、大量のＭＳを導入した場合に７％を維持する。さらに重要なことには、ＭＳを用いてシストを被覆するための４．５ｍｇＦｅ３Ｏ４／ｇシスト乾燥重量を超える濃度では、分離パーセンテージがもはや低下しなかった。
【００４７】
ＭＰの場合、２２％から始まり最低８％と分離パーセンテージに明白な改善が見られた。バッチ１に対し、シストを７．８ｍｇＦｅ３Ｏ４／ｇシスト乾燥重量で被覆した場合、８％の最低分離パーセンテージに達した。さらに重要なことには、４．４ｍｇＦｅ３Ｏ４／ｇシストの濃度では、分離パーセンテージが既に１５％相当まで低下する。バッチ２に対し、開始分離パーセンテージは８％〜１０％であった。この分離パーセンテージを、ＭＳおよびＭＰの添加で最低１％〜０％まで改善する。しかし、ＭＰの添加では、多くのマグネタイト粒子がシストに完全に被着されず、孵化の間に孵化媒体に流出した。
【００４８】
表３は、ＭＳで被覆したシストの分離パーセンテージに対する被覆シストの乾燥効果を示す。本発明の方法により被覆したバッチ１のシストを当初の含水量１０％まで乾燥した。両試料、すなわち乾燥前（含水量２０％）および乾燥後（含水量１０％）の分離パーセンテージを測定した。明らかに、シストを乾燥することによりＦｅ３Ｏ４で被覆したシストの分離パーセンテージを改善することができた。Ｆｅ３Ｏ４で被覆しその後乾燥したシストが、未乾燥の被覆シストと比較して孵化媒体に懸濁した磁石により急速に引き寄せられることが注目される。
【００４９】
【表１】
【００５０】
【表２】
【００５１】
【表３】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、シスト、特に液体孵化媒体中で孵化して生餌有機体、特にアルテミアノープリウスを生産することを目的としたアルテミアシストを処理する方法に関するものである。
【背景技術】
【０００２】
魚および甲殻類幼生用の生餌としてのアルテミアノープリウスの生産は、海洋孵化場における基本的な操業であると考えられる。アルテミアノープリウスの生産工程は、普通孵化、分離、濃縮、洗浄および収集を含む一方、篩または濃縮器／洗浄器が通常アルテミアノープリウスを収集および洗浄するのに必要である。濃縮器は、実際にはフィルタであり、これを用いて廃水をノープリウスから分離し、孵化後のノープリウスからの余分な水を分配または貯蔵に適した最終堆積まで除去し、また濃縮後にノープリウス上の油性コーティングを洗浄する。
【０００３】
孵化後、アルテミアノープリウスを未孵化のシストおよび空のシスト殻から分離する必要がある。その理由は、これらシストおよび殻が幼生のタンクに大きな問題を生じ得るからである。実際、これらを捕食者が摂取する時、これらを消化することができず、消化管を傷害し得るため、幼魚または他の捕食者が死ぬ可能性がある。多くの孵化場において、散気管を孵化タンクから除去することにより分離を達成し、孵化タンク中の異なる対象物（アルテミアノープリウス、充実シストおよび空のシスト殻）を分離することを可能にする。アルテミアノープリウスは、孵化タンク内を自由に泳ぎ、孵化円錐体の先端において光（アルテミアノープリウスは光源に引き寄せられる）を用いて底に集めることができる。一方、空のシスト殻は浮遊する傾向があり、また充実した未孵化のアルテミアシストは沈下する傾向がある。これら後者の対象物は、孵化したノープリウスを収集した後アルテミアノープリウスの品質に干渉し得る。多数のシスト（充実または空）が孵化したアルテミアノープリウスから見つかった場合、これらシストをアルテミアノープリウスから除去するために追加の分離工程を必要とする。一般に、篩を用いて篩上にシストを集めることで、アルテミアノープリウスからシストを除去する。篩は、ノープリウスが篩を通過することができ、またシストのような対象物が篩上に集まるよう選択される。全体的には、篩のメッシュサイズが約２１２μｍである。その後、ノープリウスそれ自身をさらに微細な篩上に集める。一般に、二重の篩別法を用い、第１篩が未孵化のシストを保持し、第２篩がノープリウスを保持する。この二重の篩別法に基づく分離処理は、繊細で時間のかかる処理である。
【０００４】
孵化タンクの先端における濃縮したアルテミア中のシスト／アルテミアノープリウスの比率に応じて、このフィルタリング工程を効率的または非効率的に実施することができる。シストがより多く存在すると、フィルタリングスクリーンがより速く目詰まりする。かかる目詰まりは、流速を低下するだけでなく、ノープリウスの損傷リスクを増大するため、孵化／分離処理の主な問題とされてきた。目詰まりを防ぐため、濾過中にフィルタリングスクリーン上の粒子を効果的に除去しなくてはならない。実際、ウォータージェットを用いて、ノープリウスに吹き付けてフィルタを通す。孵化タンクの通気を通常停止して空のシスト殻が孵化タンクにおいて上昇し且つノープリウスが底部に濃縮し得るようにするため、実際には、フィルタリング工程をかなり急速に実施すべきである。酸素欠乏による死滅を防ぐため、ノープリウスを円錐形の容器の先端に長時間沈殿させることはできない。
【０００５】
未孵化のシストをノープリウスから分離しなければならない問題を解決するために孵化場に用いる解決策の１つは、アルテミアシストを皮膜剥離することである。シストの皮膜剥離（シスト殻外層のアルテミア胚種からの除去）は、７０年代に発達した周知の化学処理である。古典的な皮膜剥離方法は、限られた期間、ＮａＯＨ（高いｐＨを維持するため）を添加してシスト殻（卵膜）をＮａＯＣｌ（次亜塩素酸ナトリウム）で所定期間溶解することからなる。シスト外層が酸化反応により溶解する。発熱反応が終了すると同時に、脱殻シストをＮａ２Ｓ２Ｏ３で直ちに中和して胚種を酸化反応から保護する必要がある。皮膜剥離処理を適切に実行した場合、胚種の生存力が影響を受けることは無く、ノープリウスに孵化または貯蔵のため脱水することができる。シストの皮膜剥離は、空のシスト殻および未孵化のシストの分離の必要性を排除する。しかし、未孵化の皮膜剥離したシストは、魚またはシュリンプの幼生タンク内において速やかに沈殿し、培養液を分解および劣化させ、細菌感染および疾病を生じ得る。
【０００６】
多くの孵化場がこの処理を適用するが、かかる皮膜剥離処理の主な欠点は、廃水が非常に高水準の毒性産物を含み、浄化が非常に困難なことである。例えば、廃水は高水準のＣＯＤ、ＣｌおよびＡＯＸを含み得る。今日では、このような化学物質の処理で生ずる環境問題によりこの処理を大規模に行うことはできない。他の欠点は、皮膜剥離処理が非常に大きな労力を要求し、さらに正確に実施する必要があることで、その理由はシストの生存力が影響を受ける場合があるからである。発熱反応のため、皮膜剥離媒体を冷却しなければならず、皮膜剥離処理を良い時に正確に停止して胚種自体の酸化反応を防止すべきである（非特許文献１（SRAC Publication No. 702 of Oct. 2000 “Artemia Production for Marine Larval Fish Culture” by Granvil D. Treece）参照）。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００７】
【特許文献１】米国特許第３６７６３３７号明細書
【特許文献２】国際公開第０４／０５７９５２号明細書
【特許文献３】米国特許第４３２９２４１号明細書
【特許文献４】米国特許第４９０６３８２号明細書
【特許文献５】米国特許第５２４０６２６号明細書
【特許文献６】米国特許第６１２０８５６号明細書
【特許文献７】米国特許第６２７７２９８号明細書
【特許文献８】米国特許第６０６８７８５号明細書
【特許文献９】国際公開第９１／０２０８３号明細書
【非特許文献】
【０００８】
【非特許文献１】SRAC Publication No. 702 of Oct. 2000 “Artemia Production for Marine Larval Fish Culture” by Granvil D. Treece
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００９】
本発明の目的は、未孵化のシストと、任意には空のシスト殻とを自由遊泳生餌有機体、特にアルテミアノープリウスから、該自由遊泳生餌有機体の損傷または死滅のリスクを抑えた状態で有効に分離し得る新たな方法を提供することにある。
【課題を解決するための手段】
【００１０】
この目的を達成するため、本発明による方法は、特に前記液体孵化媒体中で磁性粒子をシストに付与して該シストを磁気的に引き付ける工程を備えることを特徴とする。
【００１１】
磁性粒子がシスト上に存在するが、シストから孵化し自由遊泳生餌有機体上に存在しないことにより、前記シストを磁気的に引き付けることができ、その結果生餌有機体を損傷することなく該有機体から有効に分離することができる。例えば、孵化媒体に磁石を適用することで未孵化のシストおよび空のシスト殻を引き付け、これらを孵化媒体から除去することができ、この場合孵化タンクからシストおよびシスト殻が付着した磁石を除去するか、または磁石をタンク内で保持しながら孵化タンクから自由遊泳生餌有機体を有する孵化媒体を除去することによるいずれかである。後者の場合、磁石をタンクの壁の中または壁に付与することができるので、未孵化のシストおよび空のシスト殻がタンクの壁に付着する。代わりにまたはさらに、未孵化のシストおよびあらゆる空のシスト殻を引き留める磁石を含む分離装置、特に流入装置を介して孵化媒体を孵化工程後に誘導することもできる。
【００１２】
磁性粒子という用語は、磁石により引き付け得る粒子のことを意味する。従って、該粒子を強磁性、フェリ磁性または（強力な）常磁性材料から作成することができる。強磁性またはフェリ磁性からなる粒子を磁化する、つまり小さな磁石に変換することができる。この場合、磁石を用いてシストまたはシスト殻を引き寄せるのが好ましいが、磁石を非磁化の磁性材料により置換することができる。
【００１３】
本発明による方法の好適な実施形態において、磁性粒子を懸濁液の形態、特に水性懸濁液の形態でシスト上に、好適にはシストの表面が乾燥している際に付与するので、これらは自由に流動する。他の実施形態において、磁性粒子を粉末の形態でシスト上に付与する。本明細書における用語「自由流動」は、シストが一緒に小さな凝集塊にならず、紙片から容易に注入することができる個々の物として存在することを意味する。
【００１４】
磁性粒子に対するいかなる接着剤または接着剤コーティングなしで、磁性粒子がシストに十分被着し、被着したまま孵化媒体中に留まるので、シストおよび空のシスト殻を孵化後自由遊泳生餌有機体から磁力により分離することができることを見出した。接着剤を用いないことの利点は、シストが互いに凝集するのを防止することが一層容易になることである。しかし、このことは、本発明による方法において接着剤を用いる可能性を除外するものではない。例えば、シストを孵化媒体に導入した際に溶解するＣＭＣ（カルボキシメチルセルロース）のような接着剤を用いることができる。
【００１５】
本発明による方法のさらに好適な実施形態において、シスト上に付与する前の磁性粒子の少なくとも９０重量％が１０μｍ未満、好ましくは５μｍ未満、さらに好ましくは１μｍ未満、最も好適には０．５μｍ未満のサイズを有する。
【００１６】
この実施形態の利点は、かかる小さな粒子が大きな粒子よりもシストにより被着することである。一度シストを被覆すると、磁性粒子がシスト上により大きな沈積物（結晶）を形成することができ、これは特に部分的に磁性粒子間の磁気吸引力によるものである。
【００１７】
本発明はまた、本発明による方法で得ることができるシスト、特にアルテミアシストに関する。これらシストは、その外表面に付与した磁性粒子を有することを特徴とする。
【００１８】
最後に、本発明はまた、本発明に係るシストから出発して自由遊泳生餌有機体を製造する方法に関し、ここでシストの一部が孵化し自由遊泳性の生餌有機体を放出するように前記シストを孵化媒体中で孵化し、また自由遊泳生餌有機体を未孵化のシストおよび空のシスト殻から分離する。本発明によれば、外表面に付与した磁性粒子を有する未孵化のシストを、孵化工程後外表面に付与した磁性粒子を有さない自由遊泳生餌有機体から磁力により分離する。
本発明の他の詳細および利点は、以下の、本発明による方法およびシストにおける特定の実施形態の説明から明白となるであろう。この説明に用いる参照番号は、添付の図面に関する。
【図面の簡単な説明】
【００１９】
【図１】磁石を有するシスト除去装置を配してシストの孵化後未孵化のシストを生成したノープリウスから分離する孵化タンクの概略図である。
【図２】孵化工程後に孵化媒体を導入することにより未孵化のシストをノープリウスから磁気的に分離し得る流入装置の実施形態における大縮尺図である。
【発明を実施するための形態】
【００２０】
本発明は、未孵化のシストと、また任意には空のシスト殻とをシストから孵化した自由遊泳生餌有機体から分離する新しく有利な方法を提供することを意図とする。シストは、特にアルテミアシストであるが、本発明を他種のシストにも適用することができる。シストという用語は、比較的速やか（１日または数日内）に孵化し得る外殻に封入された胚種を包含するだけではなく、胚種が孵化し得る前になお成長すべき卵も包含する。したがって、本発明は、例えばワムシ、淡水アルテミア等のような他の水生生物のシスト（卵）にも適用することができる。しかし、本発明の主な適用はアルテミアシストであるため、さらなる説明は、このようなアルテミアシストおよびアルテミアシストから孵化した自由遊泳ノープリウスに関してのみ行う。
【００２１】
アルテミアシストは、五大陸に広く点在する過塩性の湖の汀線、沿岸礁湖および太陽熱を利用する製塩所において大量に入手可能である。収集の後、シストを洗浄し、ブライン液に数ヶ月間保存する。その後、処理（淡水で洗浄／すすぎ）した後、１５重量％以下の含水量まで乾燥する。海水中で孵化すると、これらシストは、栄養価の高い生餌資源として直接供給し得る自由遊泳性ノープリウスを多くの海洋生物の幼生並びに水産養殖用に入手可能な、最も便利で最小の労働集約性の生餌である淡水生物に放出する。
【００２２】
アルテミアシストを孵化するのに使用し得る容器１の例を図１に示す。実際、最良の孵化効果が、円錐体底部３を形成する壁２を有し、且つ底部から通気する容器１において達成される。円筒形または四角い底部のタンクは、アルテミアシストおよびノープリウスが集積し且つ酸素欠乏に苦しむデッドスポットを有する。透明または半透明の容器は、特に収集の時、孵化懸濁液の検査を容易にする。さらに、容器１は、円錐体の底部に位置して収集に先立ちノープリウスを底部に引き寄せる少なくとも１つの光源４を備えることができる。
【００２３】
容器１におけるシストの孵化後、通気を停止するので、未孵化のシストのほとんどが底部３上に沈殿し、空のシスト殻のほとんどが孵化媒体の表面上に浮遊する。容器１の底部に出口５を備えるので、自由遊泳ノープリウスを含む孵化媒体を篩上に取り出すことができる。未孵化のシストが孵化媒体から篩い分けられるのを回避するため、または孵化媒体から篩別されるべき未孵化のシストの量を減少するため、現在は磁性分離方法を用いる。
【００２４】
本発明によれば、孵化媒体に導入したシストは、その外表面に磁性粒子を備える。このように、未孵化のシストおよび空のシスト殻を、磁力によりシストから孵化し、磁性粒子を含まない自由遊泳ノープリウスから分離することができる。この分離を異なる方法で実行することができる。
【００２５】
孵化工程後、１つ以上の磁石７を備えるシスト除去装置６を孵化媒体内に入れることができるので、未孵化のシストおよび空のシスト殻をこの装置６により引き寄せ、磁石７に貼着する。容器の底部に位置する未孵化のシストも除去し得るようにするため、孵化媒体を容器の底部から頂部に循環することができる。これにより、未孵化のシストがシスト篩上に到達するのが少ないので、磁気分離が十分に効率的である場合、もはや孵化媒体からあらゆる未孵化のシストを篩い分ける必要はない。
【００２６】
シスト除去装置６を孵化媒体内に入れる代わりに、又はそれに加えて、孵化容器１の壁、特にその円錐体の底部３に１つ以上の磁石８を設けることも可能である。このようにして、出口５を介して容器１を空にする際、未孵化のシストおよび空のシスト殻か磁石８の位置で容器１の壁に貼着する。
【００２７】
孵化媒体内でのシストの孵化の間、好適にはシストを孵化媒体中でそこに吹き込む空気でより均一に分布するように磁石８を除去する必要がある。磁石８が永久磁石ではなく電磁石８である場合、磁石の除去の代わりに電流を中断することができる。孵化媒体内に入れるシスト除去装置６の磁石７も電磁石とし得るが、電気的障害を低減するためには永久磁石であるのが好ましい。
【００２８】
未孵化のシストを孵化容器それ自体において磁気的に分離する代わりに、またはこれに加えて、未孵化のシストおよび空のシスト殻を流入装置においてノープリウスから分離することができ、ここで孵化媒体を少なくとも１つの磁石に沿って誘導するので、未孵化のシストおよび空のシスト殻が磁石に貼着する一方、ノープリウスが磁石に引き寄せられずに通過する。かかる流入装置の一例を図２に概略的に示す。これは、入口１０および出口１１を有する細長いチャンバ９を備える。細長いチャンバ９に磁性グレードステンレス鋼の鋼綿１２（または他の耐腐食性強磁性綿）を満たし、且つ電気コイル１３を周設するので、磁界を細長いチャンバ９内に発生することができる。従って、鋼綿１２が磁性粒子を有する未孵化のシストまたは空のシスト殻を引き寄せる磁石を形成するようにこれを磁化することができる。綿綿１２の広い表面積により、未孵化のシストまたは空のシスト殻を保持する広い表面を得ることができるため、流入装置を全くコンパクトにすることができる。このような磁性分離装置についてのさらなる詳細を特許文献１（米国特許第３６７６３３７号）において見出すことができ、ここに参照して援用する。
【００２９】
上述したように、本発明の重要な特徴は、シストの外表面に磁性粒子を付与することにある。本発明は、シスト上に磁性粒子を付与することにより、未孵化のシストおよび空のシスト殻を生成したノープリウスから効率的に分離することができるだけでなく、重要なことには、シストを必要量の磁性粒子で費用が効果的な方法により被覆することもできることにある。
【００３０】
磁性粒子を粉末の形態でシスト上に塗布することができる。この場合、シストは、好適には粉末を塗布する際に湿潤面（自由流動ではない）を有するので、磁性粒子がシストにより良好に被着する。特にシストをブライン液外に除去した後で、これらを乾燥する前に、粉末をシストに塗布することができるので、これらは依然湿潤面を有する。このようにして、シストを一度だけ、特に２５重量％未満の含水量、好適には２０重量％未満の含水量、さらに好適には１５重量％未満の含水量まで乾燥する必要がある。
【００３１】
液状懸濁液を一層容易に塗布することができるため、磁性粒子を液状懸濁液の形態でシストに塗布するのが好ましい。磁性粒子を有機溶媒中で、例えば植物油またはエタノールに懸濁することができるが、水性媒体に懸濁して水性懸濁液とするのが好ましい。この懸濁液を湿潤シストに上述した含水量まで乾燥する前に塗布する、特に上述したように噴霧することができるか、または乾燥した自由流動シスト上に噴霧することができる。水性懸濁液を用いる場合、乾燥したシストの表面は湿潤するが、水は乾燥したシストにより速やかに吸収されるため、シストを攪拌すると、これらが再度速やかに自由流動する。シストが十分乾燥しており、十分に少量の水性懸濁液を用いた場合、処理したシストの含水量（内部）は、２５重量％以下、好適には２０重量％以下、または１５重量％以下に留めることができる。しかし、水性懸濁液を塗布した後、シストを再び乾燥してこのような低含水量を達成することができる。このような低含水量の利点は、磁性粒子を塗布した後で通常通りシストを使用前まで包装し、数ヶ月間保管することにある。シストを再乾燥するさらなる利点は、孵化媒体に導入する前にシストをまず乾燥する際に磁性分離がより効果的になるので、磁性粒子が明らかにシストにより強固に被着することにある。
【００３２】
予め形成した磁性粒子をシストに塗布する代わりに、磁性粒子を現場でシスト上に、例えばコーティングの形態で形成することができる。磁性材料のコーティングはまた、本明細書および特許請求の範囲において、シスト上に塗布した磁性粒子とすることもでき、コーティングが連続的である場合でも非常に脆く、容易に磁性粒子に破砕し得るため、シストの孵化が可能になる。特許文献２（国際公開第０４／０５７９５２号）に開示されているように、シストの殻が過マンガン酸塩（特に過マンガン酸カリウム）と反応して二酸化マンガン層をシスト上に形成することができる。特許文献２において、この二酸化マンガン層をその後除去して皮膜剥離したシストを生成するが、本発明によれば、二酸化マンガン層を除去する必要は無く、シストおよびシスト殻を生成したノープリウスから磁気的に分離するのに用いることができる。
【００３３】
磁性粒子を、強磁性、フェリ磁性または常磁性の材料から作ることができる。しかし、シストおよびシスト殻をノープリウスから分離するのに必要な磁力を得るためにより小さな磁場を必要とするため、強磁性材料およびフェリ磁性材料が好適である。磁性粒子は、１つ以上の遷移金属の酸化物からなるのが好ましく、特にＣｒＯ２（酸化クロム（ＩＶ））、ＣｏＦｅ２Ｏ４（コバルトフェライト）、ＣｕＦｅ２Ｏ４（銅フェライト）、Ｄｙ３Ｆｅ５Ｏ１２（ジスプロシウムフェロガーネット）、ＤｙＦｅＯ３（ジスプロシウムオルトフェライト）、ＥｒＦｅＯ３（エルビウムオルトフェライト）、Ｆｅ５Ｇｄ３Ｏ１２（ガドリニウムフェロガーネット）、Ｆｅ５Ｈｏ３Ｏ１２（ホルミウム鉄ガーネット）、ＦｅＭｎＮｉＯ４（鉄ニッケルマンガン酸化物）、Ｆｅ２Ｏ３（マグヘマイト）、Ｆｅ３Ｏ４（マグネタイト）、Ｆｅ２Ｏ３（ヘマタイト）、ＦｅＬａＯ３（ランタンフェライト）、ＭｇＦｅ２Ｏ４（マグネシウムフェライト）、Ｆｅ２ＭｎＯ４（マンガンフェライト）、ＭｎＯ２（二酸化マンガン）、Ｎｄ２Ｏ７Ｔｉ２（ネオジムジチタン酸）Ａｌ０．２Ｆｅ１．８ＮｉＯ４（アルミニウムニッケルフェライト）、Ｆｅ２Ｎｉ０．５Ｏ４Ｚｎ０．５（ニッケル亜鉛フェライト）、Ｆｅ２Ｎｉ０．４Ｏ４Ｚｎ０．６（ニッケル亜鉛フェライト）、Ｆｅ２Ｎｉ０．８Ｏ４Ｚｎ０．２（ニッケル亜鉛フェライト）、ＮｉＯ（酸化ニッケル（ＩＩ））、Ｆｅ２ＮｉＯ４（ニッケルフェライト）、Ｆｅ５Ｏ１２Ｓｍ３（サーナリウムフェロガーネット）、Ａｇ０．５Ｆｅ１２Ｌａ０．５Ｏ１９（銀ランタンフェライト）、Ｆｅ５Ｏ１２Ｙ３（イットリウム鉄ガーネット）、およびＦｅＯ３Ｙ（イットリウムオルトフェライト）からなる群から選択した１つ以上の酸化物からなる。好ましくは、磁性粒子はＦｅ２Ｏ３（ヘマタイトまたはマグネマイト）、ＭｎＯ２（二酸化マンガン）またはフェライト、特にＦｅ３Ｏ４（マグネタイト）からなる。マグネタイトは、その強力な磁気特性の観点から最適である。
【００３４】
シスト上に塗布する前、シストを被覆するのに用いる磁性粒子は、その少なくとも９０重量％が１０μｍ未満、好適には５μｍ未満、さらに好適には１μｍ未満、最適には０．５μｍ未満のサイズを有するように小さいことが好ましい。粒子が小さくなるほど、接着剤を用いることなくシストによく被着する。さらに、特に懸濁液を調製するのに安定化剤（界面活性剤）を用いない場合に、小さな粒子ほど安定な懸濁液となる。磁性粒子をシスト上に塗布した後、これらがより大きなサイズを有する場合がある。被覆したシストの顕微鏡的視点によれば、実際に磁性粒子がシストの表面上で互いに凝集して大きな凝集塊／結晶を形成した様子を見ることができる。このことは、大きな結晶を形成するように水を懸濁液から抜いたことによるばかりか、特に磁性粒子が互いに磁気的に引き寄せあい大きな凝集塊／結晶を形成し得ることからも説明することができる。
【００３５】
磁性材料の粉末は、該磁性材料を粉砕することにより作成することができる。次いで、この粉末を水と混合して水性懸濁液とすることができる。このような粉砕方法の欠点は、微細粉とするまでに非常に長時間かかることと、粒径が極めて均一でないことである。さらに、非常に小さな粒径を得ることは困難である。
【００３６】
実際、強磁性またはフェリ磁性粒子の安定なコロイド懸濁液として規定することができる所謂磁気流体が存在する。特許文献３（米国特許第４３２９２４１号）に記載されるように、このような磁気流体は、例えば、粒子がブラウン運動により懸濁液の安定化を許容するに十分小さくなる（大きさがほぼ１０ｎｍ）までフェライトを灯油またはオレイン酸の存在下で数週間粉砕することにより製造することができる。しかし、このような処理は全く高価である。より安価な方法は、第一鉄および第二鉄の塩の溶液を水酸化ナトリウムまたはアンモニア溶液のようなアルカリ性物質と反応させることによりコロイド性マグネタイトを沈殿させることからなる。粒径は、攪拌することにより調節することができる。攪拌を十分に激しく行う場合、粒径を１０ｎｍより小さくすることができる。安定した磁気流体を得るため、懸濁化剤の被覆を磁性粒子に塗布することができる。このような磁性流体を製造する方法は、例えば特許文献３、特許文献４（米国特許第４９０６３８２号）、特許文献５（米国特許第５２４０６２６号）、特許文献６（米国特許第６１２０８５６号）、特許文献７（米国特許第６２７７２９８号）、特許文献８（米国特許第６０６８７８５号）、および特許文献９（国際公開第９１／０２０８３号）に開示されている。
【００３７】
本発明による方法においては、このような安定な磁気流体を用いて磁性粒子をシスト上に塗布することができる。しかし、より安価な懸濁液、すなわち、あらゆる分散剤の使用なしに作成し、数分以内で安定しないが沈殿する懸濁液を用いることもできることを見出した。上述したように、第一鉄および第二鉄の塩をアルカリ性条件下水性媒体中で反応させてマグネタイト粒子を形成し、そのサイズを水性媒体の攪拌により調節し得ることによりマグネタイト粒子の懸濁液を容易に製造することができる。この懸濁液を、シスト、特に乾燥シストに噴霧することができる。磁性粒子が界面活性剤、または特許文献９に記載されているような特定の結合物質で被覆されていないにも関わらず、これらはシストに十分に被着することがわかった。従って、本発明による方法は、安価な材料を用いてかつ比較的簡単な方法で実施することができるため、特に低品質（以下に記載の一派名的な分離方法が、磁石の使用なしで測定した高い分離パーセンテージ）のシストを有用な製品に変えることができる。本発明による処理は、実際に、未孵化のシストを生餌有機体として用いるノープリウスから容易に除去することができる。
【００３８】
磁性粒子をシスト上にシスト乾燥物ｇ当たり少なくとも０．７５、好適には少なくとも１．０、さらに好適には少なくとも１．５、最適には少なくとも２．０ｍｇの量で塗布するのが好ましい。このような分量を用いると、未孵化のシストを磁石によりノープリウスから有効に引き寄せ、その結果分離することができることが試験により示された。シストに塗布する磁性粒子の量は、シスト乾燥物ｇ当たり好適には２００未満、さらに好適には１００未満、最適には５０ｍｇ未満である。特に、磁性粒子の量がシスト乾燥物ｇ当たり２０未満、特に１５ｍｇ未満である場合、シストを効果的に引き寄せることができた。
【００３９】
塩化第一鉄（ＦｅＣｌ２・４Ｈ２Ｏ）および塩化第二鉄（ＦｅＣｌ３・６Ｈ２Ｏ）を互いに水酸化ナトリウム（ＮａＯＨ）の存在下で反応させることにより調製したマグネタイト粒子の水性懸濁液は、飽和溶液を用いた場合、約１００ｇ／Ｌの磁性粒子を含有する懸濁液をもたらすことができる。かかる懸濁液を乾燥シスト上に噴霧および／または混合した場合、直ちにシストに吸収される。従って、シストの含水量が上昇するが、例えば１０％から２０％の限られた範囲内であるため、シストは依然休止しており保管することができる。長期保管のため、シストを再度乾燥するのが好ましい。磁性粒子を沈殿させ、上澄み液の一部分を除去することにより生成した懸濁液を容易に濃縮することができる。しかし、磁性粒子の濃度を好適には２００ｇ／Ｌ以下、さらに好適には１５０ｇ／Ｌ以下に維持して、懸濁液をシスト上に容易に噴霧することができる。シストに塗布した懸濁液における磁性粒子の濃度を、好適には５ｇ／Ｌ以上、さらに好適には１０ｇ／Ｌ以上、最適には２０ｇ／Ｌ以上とすることで、処理したシストの含水量の上昇を制限する。
【実施例】
【００４０】
実験に用いるすべての試薬および化学薬品は、分析用であり、Sigma Aldrich社（ベルギー）から入手した。攪拌しながら塩化第一鉄四水和物（ＦｅＣｌ２・４Ｈ２Ｏ）、塩化第二鉄六水和物（ＦｅＣｌ３・６Ｈ２Ｏ）、水酸化ナトリウム（ＮａＯＨ）および水を１：２：２：１０の割合で混合することによりマグネタイト懸濁液（ＭＳ）を調製した。この混合物は、懸濁したＦｅ３Ｏ４ナノ粒子の形成をもたらす。この調製物はおよそ０．１ｇＦｅ３Ｏ４／ｍＬを包含する。
【００４１】
シスト上に塗布する前に、マグネタイト粉末（酸化鉄（ＩＩ、ＩＩＩ）、Sigma Aldrich社、粒子＜５μｍ）（ＭＰ）を水中で懸濁した。
【００４２】
本発明の方法によりマグネタイト粒子を被覆するために、種々の濃度の様々な塗料（ＭＳおよびＭＰ）の５ｍＬアリコートを、５０ｇの異なるタイプのシスト（シストの含水率が±１０％）と混合する。肯定的な被覆結果は、シストの目視検査から明白である。
【００４３】
１リットルの円錐体を用い、ここでアルテミアシスト２ｇを人口海水（２５ｇ／Ｌ）内で好適には（しかし限定しない）２４時間孵化する。円錐体内の水温を３０℃付近で一定に維持し、水を常に通気し、光を当てた。シストが十分被覆されたかを判断するのに用いる判定基準は、シスト、シスト殻、傘および孵化したノープリウスの全量に対するシストおよびシスト殻の量を画定することである。さらにここでは、この数を「分離パーセンテージ」として示す。
【００４４】
分離パーセンテージを決定するため、磁石を１Ｌの円錐体内の孵化媒体に円錐体の底部からおよそ５ｃｍ（＝２０〜３０ｍＬ標線）の距離で懸濁した。通気を停止し、通気管を除去する。３０秒後、アルテミアノープリウス、傘、未孵化のシストおよび空のシスト殻を含有する孵化媒体３０ｍＬを収集し、孵化円錐体の底部に設けたサイホンを用いて再度孵化円錐体に移送する。磁性粒子を磁石に収集して２分後、サイホンを用いてさらに２００ｍＬの孵化媒体を除去し、新たな容器に移送する。その後、８００ｍＬの人口海水を新たな円錐体に加えて容積を１リットルまで増加する。試料を採取して分離パーセンテージを測定する。
【００４５】
分離パーセンテージに対するＭＳおよびＭＰの投与量効果を表１および２に示す。異なる投与量のマグネタイトを、ＭＳまたはＭＰ溶液として本発明の方法に従ってバッチ１（表１）およびバッチ２（表２）のシストに被覆する。各処理を三回評価し、処理結果を三回の平均とする。この例において、表１から明らかなように、シスト乾燥重量ｇ当たり４．５ｍｇＦｅ３Ｏ４のＭＳでのバッチ１のシストの被覆は、４％の最低分離パーセンテージを示し、未処理のシストの分離パーセンテージは２２％であった。
【００４６】
さらに重要なことには、１．５ｍｇＦｅ３Ｏ４／ｇシストの濃度で、分離パーセンテージが既に１４％相当まで低下する。３ｍｇＦｅ３Ｏ４／ｇシストの濃度では、分離パーセンテージが７％未満であること明白で、大量のＭＳを導入した場合に７％を維持する。さらに重要なことには、ＭＳを用いてシストを被覆するための４．５ｍｇＦｅ３Ｏ４／ｇシスト乾燥重量を超える濃度では、分離パーセンテージがもはや低下しなかった。
【００４７】
ＭＰの場合、２２％から始まり最低８％と分離パーセンテージに明白な改善が見られた。バッチ１に対し、シストを７．８ｍｇＦｅ３Ｏ４／ｇシスト乾燥重量で被覆した場合、８％の最低分離パーセンテージに達した。さらに重要なことには、４．４ｍｇＦｅ３Ｏ４／ｇシストの濃度では、分離パーセンテージが既に１５％相当まで低下する。バッチ２に対し、開始分離パーセンテージは８％〜１０％であった。この分離パーセンテージを、ＭＳおよびＭＰの添加で最低１％〜０％まで改善する。しかし、ＭＰの添加では、多くのマグネタイト粒子がシストに完全に被着されず、孵化の間に孵化媒体に流出した。
【００４８】
表３は、ＭＳで被覆したシストの分離パーセンテージに対する被覆シストの乾燥効果を示す。本発明の方法により被覆したバッチ１のシストを当初の含水量１０％まで乾燥した。両試料、すなわち乾燥前（含水量２０％）および乾燥後（含水量１０％）の分離パーセンテージを測定した。明らかに、シストを乾燥することによりＦｅ３Ｏ４で被覆したシストの分離パーセンテージを改善することができた。Ｆｅ３Ｏ４で被覆しその後乾燥したシストが、未乾燥の被覆シストと比較して孵化媒体に懸濁した磁石により急速に引き寄せられることが注目される。
【００４９】
【表１】
【００５０】
【表２】
【００５１】
【表３】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
シスト、特にアルテミアシストを液体孵化媒体中で孵化して生餌有機体を産出するように処理するに当たり、前記シストに磁性粒子を付与して、特に前記液体孵化媒体中で前記シストを磁気的に引き付ける工程を供えることを特徴とする方法。
【請求項２】
前記磁性粒子を液体懸濁液の形態、特に水生懸濁液の形態で、好適には前記シストが自由に流動するような乾燥表面を有する際に前記シストに付与することを特徴とする請求項１に記載の方法。
【請求項３】
前記磁性粒子を粉末の形態で前記シストに付与することを特徴とする請求項１に記載の方法。
【請求項４】
前記磁性粒子を前記シストに付与した後、該シストが２５重量％未満、好適には２０重量％未満の含水量を有するか、または２５重量％未満、好適には２０重量％未満、さらに好適には１５重量％未満の含水量まで乾燥することを特徴とする請求項１〜３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項５】
前記シストに塗布する前に、前記磁性粒子の少なくとも９０重量％が１０μｍ未満、好適には５μｍ未満、さらに好適には１μｍ未満、最適には０．５μｍ未満のサイズを有することを特徴とする請求項１〜４のいずれか一項に記載の方法。
【請求項６】
前記磁性粒子が強磁性、フェリ磁性または常磁性材料を含み、該磁性粒子が好ましくは１つ以上の遷移金属の酸化物、特にＦｅ２Ｏ３（ヘマタイトまたはマグネマイト）、ＭｎＯ２（二酸化マンガン）またはフェライト、特にＦｅ３Ｏ４（マグネタイト）からなることを特徴とする請求項１〜５のいずれか一項に記載の方法。
【請求項７】
前記請求項のいずれか一項に記載の方法により得ることができるシスト、特にアルテミアシストであって、外表面に付与した磁性粒子を有することを特徴とするシスト。
【請求項８】
前記シストが、前記磁性粒子をシスト乾燥物ｇ当たり少なくとも０．７５、好適には少なくとも１．０、さらに好適には少なくとも１．５、最適には少なくとも２．０ｍｇの量で備えることを特徴とする請求項７に記載のシスト。
【請求項９】
前記磁性粒子が強磁性、フェリ磁性または常磁性材料を含み、該磁性粒子が好ましくは１つ以上の遷移金属の酸化物、特にＦｅ２Ｏ３（ヘマタイトまたはマグネマイト）、ＭｎＯ２（二酸化マンガン）またはフェライト、特にＦｅ３Ｏ４（マグネタイト）からなることを特徴とする請求項７に記載のシスト。
【請求項１０】
請求項７〜９のいずれか一項に記載のシストから出発して自由遊泳生餌有機体を製造するに当たり、前記シストの一部が孵化し且つ自由遊泳生餌有機体を放出するように前記シストを孵化媒体内で孵化する工程と、前記自由遊泳生餌有機体を孵化しなかったシストから分離する工程とを備え、
前記孵化工程後、外表面に付与した磁性粒子を有する前記未孵化のシストを、外表面に付与した磁性粒子を有していない前記自由遊泳生餌有機体から磁力により分離することを特徴とする方法。
【請求項１１】
前記シストを孵化容器内で孵化し、ここで少なくとも１つの磁石を配置して前記未孵化のシストを前記自由遊泳生餌有機体から分離することを特徴とする請求項１０に記載の方法。
【請求項１２】
前記シストを、少なくとも１つの磁石を備えた壁を有する孵化容器内で孵化して、前記未孵化のシストを前記容器の壁に磁気的に引き付けることを特徴とする請求項１０または１１に記載の方法。
【請求項１３】
前記孵化工程後、自由遊泳有機体および未孵化のシストを含む前記孵化媒体の少なくとも一部を前記孵化容器から除去し、少なくとも１つの磁石に誘導して、前記自由遊泳生餌有機体が前記磁石を通過する一方、前記未孵化のシストを前記磁石に貼着することを特徴とする請求項１０〜１２のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１】
シスト、特にアルテミアシストを液体孵化媒体中で孵化して生餌有機体を産出するように処理するに当たり、前記シストに磁性粒子を付与して、特に前記液体孵化媒体中で前記シストを磁気的に引き付ける工程を供えることを特徴とする方法。
【請求項２】
前記磁性粒子を液体懸濁液の形態、特に水生懸濁液の形態で、好適には前記シストが自由に流動するような乾燥表面を有する際に前記シストに付与することを特徴とする請求項１に記載の方法。
【請求項３】
前記磁性粒子を粉末の形態で前記シストに付与することを特徴とする請求項１に記載の方法。
【請求項４】
前記磁性粒子を前記シストに付与した後、該シストが２５重量％未満、好適には２０重量％未満の含水量を有するか、または２５重量％未満、好適には２０重量％未満、さらに好適には１５重量％未満の含水量まで乾燥することを特徴とする請求項１〜３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項５】
前記シストに塗布する前に、前記磁性粒子の少なくとも９０重量％が１０μｍ未満、好適には５μｍ未満、さらに好適には１μｍ未満、最適には０．５μｍ未満のサイズを有することを特徴とする請求項１〜４のいずれか一項に記載の方法。
【請求項６】
前記磁性粒子が強磁性、フェリ磁性または常磁性材料を含み、該磁性粒子が好ましくは１つ以上の遷移金属の酸化物、特にＦｅ２Ｏ３（ヘマタイトまたはマグネマイト）、ＭｎＯ２（二酸化マンガン）またはフェライト、特にＦｅ３Ｏ４（マグネタイト）からなることを特徴とする請求項１〜５のいずれか一項に記載の方法。
【請求項７】
前記請求項のいずれか一項に記載の方法により得ることができるシスト、特にアルテミアシストであって、外表面に付与した磁性粒子を有することを特徴とするシスト。
【請求項８】
前記シストが、前記磁性粒子をシスト乾燥物ｇ当たり少なくとも０．７５、好適には少なくとも１．０、さらに好適には少なくとも１．５、最適には少なくとも２．０ｍｇの量で備えることを特徴とする請求項７に記載のシスト。
【請求項９】
前記磁性粒子が強磁性、フェリ磁性または常磁性材料を含み、該磁性粒子が好ましくは１つ以上の遷移金属の酸化物、特にＦｅ２Ｏ３（ヘマタイトまたはマグネマイト）、ＭｎＯ２（二酸化マンガン）またはフェライト、特にＦｅ３Ｏ４（マグネタイト）からなることを特徴とする請求項７に記載のシスト。
【請求項１０】
請求項７〜９のいずれか一項に記載のシストから出発して自由遊泳生餌有機体を製造するに当たり、前記シストの一部が孵化し且つ自由遊泳生餌有機体を放出するように前記シストを孵化媒体内で孵化する工程と、前記自由遊泳生餌有機体を孵化しなかったシストから分離する工程とを備え、
前記孵化工程後、外表面に付与した磁性粒子を有する前記未孵化のシストを、外表面に付与した磁性粒子を有していない前記自由遊泳生餌有機体から磁力により分離することを特徴とする方法。
【請求項１１】
前記シストを孵化容器内で孵化し、ここで少なくとも１つの磁石を配置して前記未孵化のシストを前記自由遊泳生餌有機体から分離することを特徴とする請求項１０に記載の方法。
【請求項１２】
前記シストを、少なくとも１つの磁石を備えた壁を有する孵化容器内で孵化して、前記未孵化のシストを前記容器の壁に磁気的に引き付けることを特徴とする請求項１０または１１に記載の方法。
【請求項１３】
前記孵化工程後、自由遊泳有機体および未孵化のシストを含む前記孵化媒体の少なくとも一部を前記孵化容器から除去し、少なくとも１つの磁石に誘導して、前記自由遊泳生餌有機体が前記磁石を通過する一方、前記未孵化のシストを前記磁石に貼着することを特徴とする請求項１０〜１２のいずれか一項に記載の方法。
【図１】
【図２】
【図２】
【公表番号】特表２０１１−５１１６４２（Ｐ２０１１−５１１６４２Ａ）
【公表日】平成２３年４月１４日（２０１１．４．１４）
【国際特許分類】
【出願番号】特願２０１０−５４６３１６（Ｐ２０１０−５４６３１６）
【出願日】平成２１年２月１１日（２００９．２．１１）
【国際出願番号】ＰＣＴ／ＥＰ２００９／０５１５４５
【国際公開番号】ＷＯ２００９／１０１０９５
【国際公開日】平成２１年８月２０日（２００９．８．２０）
【出願人】（５０８０９０１０３）インヴェ テクノロジーズ エヌヴィ (2)
【Ｆターム（参考）】
【公表日】平成２３年４月１４日（２０１１．４．１４）
【国際特許分類】
【出願日】平成２１年２月１１日（２００９．２．１１）
【国際出願番号】ＰＣＴ／ＥＰ２００９／０５１５４５
【国際公開番号】ＷＯ２００９／１０１０９５
【国際公開日】平成２１年８月２０日（２００９．８．２０）
【出願人】（５０８０９０１０３）インヴェ テクノロジーズ エヌヴィ (2)
【Ｆターム（参考）】
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