【課題】有用且つ安全なウイルスベクターの提供。
【解決手段】ｒｅｖの不在下でパッケージングに利用可能なゲノムＲＮＡ又はその機能的等価物のレベルが増大するように、内部調節エレメントの上流に第１のヌクレオチド配列を含むマルチシストロン性レトロウイルスベクターゲノム。ウイルスＬＴＲに機能しうる形で連結されたヌクレオチド配列を含有し、前記ヌクレオチド配列が内部調節エレメントの上流であるベクターゲノム。前記ヌクレオチド配列が内部プロモーター又はＩＲＥＳの上流であり、ｒｅｖの不在下、パッケージングに利用可能なゲノムＲＮＡのレベルを増大する。

【特許請求の範囲】
【請求項１】
ウイルスＬＴＲの下流で、かつプロモーターの上流に異種オープン・リーディング・フレーム（ＯＲＦ）又はその一部を含み、前記プロモーターが少なくとも１つの下流ＮＯＩの発現を制御するマルチシストロン性レンチウイルスベクターゲノム。
【請求項２】
異種ＯＲＦが、ＬＴＲに機能しうる形で連結している、請求項１に記載のベクター。
【請求項３】
補助遺伝子ｒｅｖ又はその機能的等価物をコードする核酸配列が、前記補助遺伝子が機能的補助タンパク質をコードできないように破壊されているか、又はベクターゲノムから除外されており、かつトランスで供給されていない、請求項１又は２に記載のベクター。
【請求項４】
異種ＯＲＦが、レポーター部分又は選択可能マーカーである請求項１〜３のいずれかに記載のベクター。
【請求項５】
異種ＯＲＦが、モジュレーター遺伝子をコードする、請求項１〜３のいずれかに記載のベクター。
【請求項６】
モジュレーター遺伝子が、ＴｅｔＲ等のテトラサイクリン抑制因子、及びｔＴＡ又はｒｔＴＡ等のテトラサイクリン調節トランス活性化因子から選択される請求項５に記載のベクター。
【請求項７】
テトラサイクリン抑制因子が、哺乳動物細胞における発現にコドン最適化されている請求項６に記載のレンチウイルスベクター。
【請求項８】
ベクターが、非霊長類レンチウイルスベクターである、請求項１〜７のいずれかに記載のレンチウイルスベクター。
【請求項９】
ベクターが、ＨＩＶ−１、ＨＩＶ−２、ＳＩＶ、ＦＩＶ、ＢＩＶ、ＥＩＡＶ、ＣＥＶ、ＣＡＥＶ、ＭＶＶ、又はビスナレンチウイルスからなるグループから選択される、請求項１〜７のいずれかに記載のレンチウイルスベクター。
【請求項１０】
ベクターが、中央ポリプリントラクト（ｃＰＰＴ）配列を含む、請求項１〜９のいずれかに記載のレンチウイルスベクター。
【請求項１１】
ベクターが、転写後調節エレメント、又は翻訳エレメントを含む請求項１〜１０のいずれかに記載のレンチウイルスベクター。
【請求項１２】
ベクターが、ＡＴＧモチーフを有するｇａｇパッケージングシグナルを含み、かつ前記ＡＴＧモチーフがＡＴＴＧモチーフである、請求項１〜１１のいずれかに記載のレンチウイルスベクター。
【請求項１３】
ベクターが、ウイルスプロモーター又は真核生物プロモーターの配列を有する３’Ｕ３領域を含む、請求項１〜１２のいずれかに記載のレンチウイルスベクター。
【請求項１４】
ウイルスプロモーター又は真核生物プロモーターが野生型プロモーターである、請求項１３に記載のレンチウイルスベクター。
【請求項１５】
ウイルスプロモーターが、ＥＩＡＶ又はＭＬＶ Ｕ３領域である、請求項１４に記載のレンチウイルスベクター。
【請求項１６】
レンチウイルスベクターが、自己不活型レンチウイルスベクターである、請求項１〜１５のいずれかに記載のレンチウイルスベクター。
【請求項１７】
ベクターゲノムが、２、３又は４シストロン性である、請求項１〜１６のいずれかに記載のベクター。
【請求項１８】
システムが、請求項１〜１７のいずれかに記載のベクターゲノム、Ｇａｇ及びＰｏｌタンパク質、並びにｅｎｖタンパク質又はそれらの機能的代替物を含むベクターの成分をコードする核酸配列のセットを含む、レンチウイルス由来ベクター粒子を生産するためのレンチウイルスベクター生産システム。
【請求項１９】
核酸配列のセットが、（ｉ）ベクターゲノム、(ii)Ｇａｇ及びＰｏｌ、及び（iii）Ｅｎｖをコードする３つのＤＮＡ構築物を含む、請求項１８に記載の生産システム。
【請求項２０】
補助遺伝子ｒｅｖ又は機能的代替物をコードする核酸配列が、前記補助遺伝子が機能補助タンパク質をコードできないように破壊されているか、又はベクターゲノムから除去されており、トランスで供給されていない請求項１８又は１９に記載の生産システム。
【請求項２１】
粒子が由来するレトロウイルスの補助遺伝子ｖｐｒ、ｖｉｆ、ｔａｔ、及びｎｅｆ、又は類似補助遺伝子の少なくとも１つをコードする核酸配列も、前記補助遺伝子が機能的補助タンパク質をコードできないように破壊されているか、又はシステムから除去されている請求項１８〜２０のいずれかに記載の生産システム。
【請求項２２】
Ｇａｇ及びＰｏｌをコードする核酸配列がコドン最適化されている、請求項１８〜２１のいずれかに記載の生産システム。
【請求項２３】
請求項１８〜２２のいずれかに記載のシステムにおいて使用するＤＮＡ構築物であって、請求項１〜１７のいずれかに記載のパッケージ可能なＲＮＡベクターゲノムをコードするＤＮＡ構築物。
【請求項２４】
請求項２３に記載のＤＮＡ構築物、及び請求項１９〜２２のいずれかに記載のＧａｇ及びＰｏｌをコードするＤＮＡ構築物を含むＤＮＡ構築物のセット。
【請求項２５】
Ｅｎｖ又はその機能的代替物をコードするＤＮＡ構築物をさらに含む請求項２０に記載のＤＮＡ構築物のセット。
【請求項２６】
請求項２３〜２５のいずれかに記載の核酸配列のセット又はＤＮＡ構築物のセットを宿主細胞に導入するステップと、レトロウイルスベクター粒子を得るステップとを含むレトロウイルスベクター粒子の調製方法。
【請求項２７】
請求項１８〜２６のいずれかに記載のシステム又は方法により生産されるレトロウイルスベクター粒子。
【請求項２８】
請求項１〜１７のいずれかに記載のＲＮＡベクター、Ｇａｇ及びＰｏｌタンパク質、並びにＥｎｖタンパク質、又はその機能的代替物を含むレトロウイルス由来ベクター粒子。
【請求項２９】
請求項２７又は２８に記載のレトロウイルスベクター粒子、又は請求項２３〜２５のいずれかに記載のＤＮＡ構築物で形質導入された細胞。
【請求項３０】
医療に用いる、請求項２７又は２８に記載のレトロウイルスベクター粒子、又は請求項２３〜２５のいずれかに記載のＤＮＡ構築物、又は請求項２９に記載の細胞。
【請求項３１】
薬学的に許容される担体又は希釈剤と共に、請求項１〜１７のいずれかに記載のベクター、請求項１８〜２２のいずれかに記載のシステム、請求項２７又は２８に記載の粒子、又は請求項２９に記載の細胞を含む医薬組成物。
【請求項３２】
必要としている標的部位にＮＯＩを送達する薬剤の調製のための、請求項２７又は２８に記載のレトロウイルスベクター粒子、又は請求項２３〜２５いずれかに記載のＤＮＡ構築物、又は請求項２９に記載の細胞の使用。
【請求項３３】
医療に用いる、請求項２７又は２８に記載のレトロウイルスベクター粒子、又は請求項２３〜２５のいずれかに記載のＤＮＡ構築物、又は請求項２９に記載の細胞の形態である送達システム。

【図１】

【図２】

【図３】

【図４】

【図５ａ】

【図５ｂ】

【図６】

【図７】

【図８ａ】

【図８ｂ】

【図９ａ】

【図９ｂ】

【図９ｃ】

【図１０ａ】

【図１０ｂ】

【図１０ｃ】

【図１１】

【図１２】

【図１３ａ】

【図１３ｂ】

【図１３ｃ】

【図１４】

【図１５】

【図１６】

【図１７ａ】

【図１７ｂ】

【図１７ｃ】

【図１８ａ】

【図１８ｂ】

【図１８ｃ】

【図１９】

【図２０】

【図２１】

【図２２ａ】

【図２２ｂ】

【図２２ｃ】

【図２３】

【図２４】

【図２５】

【図２６】

【図２７】

【図２８】

【公開番号】特開２０１０−２６３９０４（Ｐ２０１０−２６３９０４Ａ）
【公開日】平成２２年１１月２５日（２０１０．１１．２５）
【国際特許分類】
【出願番号】特願２０１０−１４４６２５（Ｐ２０１０−１４４６２５）
【出願日】平成２２年６月２５日（２０１０．６．２５）
【分割の表示】特願２００３−５６４２５６（Ｐ２００３−５６４２５６）の分割
【原出願日】平成１５年２月３日（２００３．２．３）
【出願人】（５０４２３７９３５）オックスフォード　バイオメディカ　（ユーケー）　リミテッド (4)
【Ｆターム（参考）】