スクリーニング
ＧＰＣＲの立体構造特異的結合パートナーを生産する方法であって、
ａ）親ＧＰＣＲと比較して特定の立体構造で増大した安定性を有する、該親ＧＰＣＲのＧＰＣＲ変異体を提供する工程、
ｂ）試験化合物を提供する工程、
ｃ）前記試験化合物が、特定の立体構造を備える場合の前記ＧＰＣＲ変異体に結合するか否かを測定する工程、及び
ｄ）前記特定の立体構造を備える場合の前記ＧＰＣＲ変異体に結合する試験化合物を単離する工程
を含む方法。親ＧＰＣＲと比較して増大した安定性を有するＧＰＣＲを生産する方法も開示される。
ａ）親ＧＰＣＲと比較して特定の立体構造で増大した安定性を有する、該親ＧＰＣＲのＧＰＣＲ変異体を提供する工程、
ｂ）試験化合物を提供する工程、
ｃ）前記試験化合物が、特定の立体構造を備える場合の前記ＧＰＣＲ変異体に結合するか否かを測定する工程、及び
ｄ）前記特定の立体構造を備える場合の前記ＧＰＣＲ変異体に結合する試験化合物を単離する工程
を含む方法。親ＧＰＣＲと比較して増大した安定性を有するＧＰＣＲを生産する方法も開示される。
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【特許請求の範囲】
【請求項１】
ＧＰＣＲの結合パートナーを生産する方法であって、
ａ）親ＧＰＣＲと比較して特定の立体構造で増大した安定性を有する、該親ＧＰＣＲのＧＰＣＲ変異体を提供する工程、
ｂ）１つ又は複数の試験化合物を提供する工程、
ｃ）前記試験化合物又はその各々が、特定の立体構造を備える場合の前記ＧＰＣＲ変異体に結合するか否かを測定する工程、及び
ｄ）前記特定の立体構造を備える場合の前記ＧＰＣＲ変異体に結合する１つ又は複数の試験化合物を単離する工程
を含む方法。
【請求項２】
ｅ）前記試験化合物又はその各々が、前記特定の立体構造を備える場合の前記親ＧＰＣＲに結合するか否かを測定する工程、及び
ｆ）前記特定の立体構造にある場合の前記親ＧＰＣＲにも結合する前記試験化合物又はその各々を単離する工程
をさらに含む、請求項２に記載の方法。
【請求項３】
前記ＧＰＣＲ変異体が固体支持体に固定化されている、請求項１又は２に記載の方法。
【請求項４】
前記支持体がビーズ、カラム、スライドガラス、チップ又はプレートのいずれかである、請求項３に記載の方法。
【請求項５】
前記ＧＰＣＲ変異体が共有結合相互作用を介して支持体に固定化されている、請求項３又は４に記載の方法。
【請求項６】
前記支持体がポリマー支持体で被覆されている、請求項５に記載の方法。
【請求項７】
前記ポリマー支持体がカルボキシル化デキストランである、請求項６に記載の方法。
【請求項８】
前記ＧＰＣＲ変異体が非共有結合相互作用を介して支持体に固定化されている、請求項３又は４に記載の方法。
【請求項９】
前記支持体が、アビジン、ストレプトアビジン、金属イオン、親ＧＰＣＲに対する抗体、又は前記ＧＰＣＲ変異体に結合した分子タグに対する抗体のいずれかで被覆されている、請求項８に記載の方法。
【請求項１０】
前記ＧＰＣＲ変異体が、Ｃ末端又は細胞外ドメインが外側を向くように細胞内ドメインを介して固定化されている、請求項３から９のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１１】
前記ＧＰＣＲ変異体が、Ｎ末端又は細胞内ドメインが外側を向くように細胞外ドメインを介して固定化されている、請求項３から９のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１２】
前記ＧＰＣＲ変異体がＣ末端又はＮ末端に分子タグを含む、請求項１から１１のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１３】
前記タグが、ＦＬＡＧタグ、Ｈｉｓタグ、ｃ−Ｍｙｃタグ、ＤＤＤＤＫタグ、ＨＳＶタグ、Ｈａｌｏタグ、又はビオチンタグのいずれかである、請求項１０に記載の方法。
【請求項１４】
前記ＧＰＣＲ変異体が、全細胞製剤中又は細胞膜断片中に存在するか、界面活性剤に可溶化されているか、脂質単層中、脂質二重層中、ビーズ結合脂質粒子中、固体支持脂質層中、又はプロテオリポソーム中に存在する、請求項１から１３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１５】
前記試験化合物が固体支持体に固定化されている、請求項１、２、１２から１４のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１６】
前記固体支持体がビーズ、カラム、スライドガラス、チップ又はプレートのいずれかである、請求項１５に記載の方法。
【請求項１７】
前記ＧＰＣＲ変異体及び前記試験化合物が固体支持体に固定化されていない、請求項１、２、１２から１４のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１８】
前記試験化合物が、ポリペプチド；アンチカリン；ペプチド；抗体；キメラ抗体；一本鎖抗体；アプタマー；ダルピン；Ｆａｂ、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆｖ、ｓｃＦｖ若しくはｄＡｂ抗体断片；低分子；天然生成物；アフィボディ；ペプチドミメティック；核酸；ペプチド核酸分子；脂質；炭水化物；アンキリンリピートタンパク質、アルマジロリピートタンパク質、ロイシンリッチタンパク質、テトラトリオペプチドリピートタンパク質若しくは設計アンキリンリピートタンパク質（ＤＡＲＰｉｎ）を含むモジュールフレームワークに基づくタンパク質；又はリポカリン若しくはフィブロネクチンドメイン又はヒトγクリスタリン若しくはヒトユビキチンのいずれかに基づくアフィリンスカフォールドに基づくタンパク質のいずれかである、請求項１から１７のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１９】
前記試験化合物が生物学的試料として提供される、請求項１から１８のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２０】
前記試料が血液、血清、血漿、脊髄液、組織抽出物又は細胞抽出物のいずれかである、請求項１９に記載の方法。
【請求項２１】
前記試験化合物が、試験化合物のライブラリーである、請求項１から１８のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２２】
前記ライブラリーが、ペプチドライブラリー、タンパク質ライブラリー、抗体ライブラリー、組換えコンビナトリアル抗体ライブラリー、又はｓｃＦｖ若しくはＦａｂファージディスプレイライブラリーのいずれかである、請求項２０に記載の方法。
【請求項２３】
前記試験化合物が、ペプチドタグ、核酸タグ、化学物質タグ、蛍光タグ又はＲＦタグのいずれかで標識されている、請求項１から２２のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２４】
前記抗体が、親ＧＰＣＲのＧＰＣＲ変異体に対する抗体であり、前記ＧＰＣＲ変異体が前記親ＧＰＣＲと比較して特定の立体構造で増大した安定性を有する、請求項１８に記載の方法。
【請求項２５】
前記抗体が、リンパ球を前記ＧＰＣＲ変異体の免疫原で免疫することによって作製される、請求項２４に記載の方法。
【請求項２６】
前記リンパ球がインビボで免疫される、請求項２５に記載の方法。
【請求項２７】
前記リンパ球がインビトロで免疫される、請求項２５に記載の方法。
【請求項２８】
前記ＧＰＣＲ変異体の免疫原が、前記ＧＰＣＲ変異体の全部、その断片又はその融合タンパク質である、請求項２５から２７のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２９】
ＧＰＣＲ変異体の免疫原が、全細胞製剤中若しくは細胞膜断片中で提供されるか、界面活性剤に可溶化されているか、脂質単層中、脂質二重層中、ビーズ結合脂質粒子中、固体支持脂質層中、又はプロテオリポソーム中で提供される、請求項２４から２８のいずれか一項に記載の方法。
【請求項３０】
前記免疫原がアジュバントと共に提供される、請求項２４から２９のいずれか一項に記載の方法。
【請求項３１】
前記アジュバントがＴｉｔｒｅｍａｘ又はＲｉｂｉアジュバント乳剤である、請求項３０に記載の方法。
【請求項３２】
特定の立体構造を備える場合のＧＰＣＲ変異体に結合する前記単離試験化合物を修飾する工程、及び前記修飾した試験化合物が特定の立体構造を備える場合の前記ＧＰＣＲ変異体に結合するか否かを測定する工程をさらに含む、請求項１から３１のいずれか一項に記載の方法。
【請求項３３】
前記修飾試験化合物が、前記特定の立体構造を備える場合の前記親ＧＰＣＲに結合するか否かを測定する工程をさらに含む、請求項３２に記載の方法。
【請求項３４】
複数のＧＰＣＲ変異体が工程（ａ）で提供され、前記試験化合物が特定の立体構造を備える場合の各々のＧＰＣＲ変異体に結合するか否かを測定し、前記特定の立体構造を備える場合の各々のＧＰＣＲ変異体に結合する試験化合物を単離する、請求項１から３３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項３５】
第一の親ＧＰＣＲのＧＰＣＲ変異体及び第二の親ＧＰＣＲのＧＰＣＲ変異体が工程（ａ）で提供され、前記試験化合物が特定の立体構造を備える場合の各々のＧＰＣＲ変異体に結合するか否かを測定し、前記特定の立体構造を備える場合の各々のＧＰＣＲ変異体に結合する試験化合物を単離する、請求項３４に記載の方法。
【請求項３６】
複数のＧＰＣＲ変異体が工程（ａ）で提供され、第一のＧＰＣＲ変異体に結合するが、少なくとも１つの他のＧＰＣＲ変異体には結合しない又は前記第一のＧＰＣＲ変異体に対するよりも弱く結合する試験化合物を選択する、請求項１から３３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項３７】
請求項１から３６のいずれか一項に記載の方法であって、
（ｉ）前記単離試験化合物が、それが結合する前記ＧＰＣＲの機能に影響を及ぼすか否かを測定する工程、及び（ｉｉ）それが結合する前記ＧＰＣＲの機能に影響を及ぼす試験化合物を単離する工程、をさらに含む方法。
【請求項３８】
工程（ｉ）において、前記単離試験化合物が、その天然リガンド又はその類似体への前記ＧＰＣＲの結合に影響を及ぼすか否かを測定する、請求項３７に記載の方法。
【請求項３９】
工程（ｉｉ）において、前記ＧＰＣＲとその天然リガンド又はその類似体の間の結合を低下させる試験化合物を単離する、請求項３８に記載の方法。
【請求項４０】
工程（ｉｉ）において、前記ＧＰＣＲとその天然リガンド又はその類似体の間の結合を上昇させる試験化合物を単離する、請求項３８に記載の方法。
【請求項４１】
工程（ｉ）において、前記単離試験化合物が、それが結合する前記ＧＰＣＲの活性化を調節するか否かを測定する、請求項３７から４０のいずれか一項に記載の方法。
【請求項４２】
工程（ｉｉ）において、カルシウム可動化、ｃＡＭＰレベル、キナーゼ経路の活性、試験化合物が結合するＧＰＣＲの制御下でのレポーター遺伝子からの遺伝子転写、β−アレスチンのリクルートメント、Ｇタンパク質の活性化、ＧＴＰアーゼ活性又は［３５Ｓ］ＧＴＰγＳ結合のいずれかを調節する試験化合物を選択する、請求項４１に記載の方法。
【請求項４３】
工程（ｉｉ）において、それが結合する前記ＧＰＣＲの活性化を上昇させるアゴニスト試験化合物を単離する、請求項４１又は４２に記載の方法。
【請求項４４】
工程（ｉｉ）において、それが結合する前記ＧＰＣＲの活性化を低下させるアンタゴニスト試験化合物を単離する、請求項４１又は４２に記載の方法。
【請求項４５】
請求項１から４４のいずれか一項に記載の方法であって、ＧＰＣＲ変異体が、
（ａ）親ＧＰＣＲの１つ又は複数の変異体を提供する工程、
（ｂ）前記ＧＰＣＲが特定の立体構造を備える場合に前記親ＧＰＣＲに結合するリガンドを選択する工程、
（ｃ）前記ＧＰＣＲ変異体又はその各々が、前記選択したリガンドへの結合に関して、そのリガンドへの結合に関する前記親ＧＰＣＲの安定性と比較して増大した安定性を有するか否かを測定する工程、及び
（ｄ）前記選択したリガンドへの結合に関して前記親ＧＰＣＲと比較して増大した安定性を有する変異体を選択する工程
によって提供される方法。
【請求項４６】
工程（ｃ）の前に、前記１つ又は複数の変異体を前記選択したリガンドと接触させる、請求項４５に記載の方法。
【請求項４７】
前記１つ又は複数の変異体が可溶化形態で提供される、請求項４５又は４６に記載の方法。
【請求項４８】
請求項４５から４７のいずれか一項に記載の方法であって、工程（ｃ）において前記ＧＰＣＲが備える前記特定の立体構造が、工程（ｂ）で選択したリガンドのクラスに対応する方法。
【請求項４９】
前記選択したリガンドがアゴニストクラスのリガンドに由来するものであり、且つ前記特定の立体構造がアゴニスト立体構造であるか、又は前記選択したリガンドがアンタゴニストクラスのリガンドに由来するものであり、且つ前記特定の立体構造がアンタゴニスト立体構造である、請求項４８に記載の方法。
【請求項５０】
前記選択したリガンドがアゴニストクラスのリガンドに由来するものであり、且つ、工程（ｃ）において前記ＧＰＣＲが備える前記特定の立体構造がアゴニスト立体構造である、請求項４９に記載の方法。
【請求項５１】
前記選択したリガンドに対する前記変異体の結合親和性が、前記選択したリガンドに対する前記親の結合親和性と実質的に同一であるか又はそれよりも大きい、請求項４５から５０のいずれか一項に記載の方法。
【請求項５２】
前記方法が１回又は複数回反復され、工程（ａ）において増大した安定性を有する前記選択した変異体が前記方法のその後の回における前記親ＧＰＣＲとなる、請求項４５から５１のいずれか一項に記載の方法。
【請求項５３】
熱、界面活性剤、カオトロピック剤、及び極端なｐＨのいずれか１つ又は複数に対して増大した安定性を有するＧＰＣＲ変異体を選択する、請求項４５から５２のいずれか一項に記載の方法。
【請求項５４】
増大した熱安定性を有するＧＰＣＲ変異体を選択する、請求項５３に記載の方法。
【請求項５５】
前記リガンドが、完全アゴニスト、部分的アゴニスト、逆アゴニスト、アンタゴニストのいずれか１つである、請求項４５から５４のいずれか一項に記載の方法。
【請求項５６】
前記リガンドが前記ＧＰＣＲに結合するポリペプチドである、請求項４５から５５のいずれか一項に記載の方法。
【請求項５７】
前記ポリペプチドが、抗体、アンキリン、Ｇタンパク質、ＲＧＳタンパク質、アレスチン、ＧＰＣＲキナーゼ、受容体チロシンキナーゼ、ＲＡＭＰ、ＮＳＦ、ＧＰＣＲ、ＮＭＤＡ受容体サブユニットＮＲ１若しくはＮＲ２ａ、又はカルシオン、フィブロネクチンドメインフレームワーク、又は前記ＧＰＣＲに結合するその断片若しくは誘導体のいずれかである、請求項５６に記載の方法。
【請求項５８】
工程（ｂ）において２又はそれ以上のリガンドが選択され、各々の存在が前記ＧＰＣＲに同じ特定の立体構造を備えさせる、請求項４５から５７のいずれか一項に記載の方法。
【請求項５９】
親と比較して、工程（ｂ）で選択した前記リガンドとは異なるクラスのリガンドに結合する低下した能力を有するＧＰＣＲ変異体を選択する、請求項４５から５８のいずれか一項に記載の方法。
【請求項６０】
前記ＧＰＣＲが、β−アドレナリン受容体、アデノシン受容体及びニューロテンシン受容体のいずれか１つである、請求項４５から５９のいずれか一項に記載の方法。
【請求項６１】
請求項１から４４のいずれか一項に記載の方法であって、前記ＧＰＣＲ変異体が、
（ａ）請求項４５から６０のいずれか一項に記載の方法を実施する工程、
（ｂ）増大した安定性に関して選択した前記１つ又は複数のＧＰＣＲ変異体における１つ又は複数の変異したアミノ酸残基の位置を同定する工程、及び
（ｃ）前記同定した位置の１つ又は複数におけるアミノ酸の置き換えを含むＧＰＣＲ変異体を合成する工程
によって提供される方法。
【請求項６２】
前記ＧＰＣＲ変異体が親ＧＰＣＲと比較して複数の変異を含む、請求項６１に記載の方法。
【請求項６３】
請求項１から４４のいずれか一項に記載の方法であって、前記ＧＰＣＲ変異体が、
（ｉ）第一の親ＧＰＣＲと比較して増大した安定性を有する第一の親ＧＰＣＲの１つ又は複数の変異体のアミノ酸配列において、１つ又は複数の変異体が前記第一の親ＧＰＣＲと比較して少なくとも１つの異なるアミノ酸残基を有する１つ又は複数の位置を同定する工程、及び
（ｉｉ）対応する１つ又は複数の位置で、第二のＧＰＣＲを規定するアミノ酸配列内に１つ又は複数の変異を作製して、第二の親ＧＰＣＲと比較して増大した安定性を有する第二の親ＧＰＣＲの１つ又は複数の変異体を提供する工程
によって提供される方法。
【請求項６４】
第一の親ＧＰＣＲの１つ又は複数の変異体が、請求項４５から６２のいずれか一項に記載の方法にしたがって提供される、請求項６３に記載の方法。
【請求項６５】
前記第二のＧＰＣＲが、前記第一の親ＧＰＣＲと同じＧＰＣＲクラス又はファミリーのものである、請求項６３又は６４に記載の方法。
【請求項６６】
前記第二のＧＰＣＲが、前記第一の親ＧＰＣＲと少なくとも２０％の配列同一性を有するＧＰＣＲである、請求項６３から６５のいずれか一項に記載の方法。
【請求項６７】
親ＧＰＣＲと比較して増大した安定性を有するＧＰＣＲ変異体を生産する、請求項１から４４のいずれか一項に記載の方法であって、
（ｉ）第一の親ＧＰＣＲと比較して増大した安定性を有する第一の親ＧＰＣＲの１つ又は複数の変異体を提供する工程、
（ｉｉ）膜タンパク質構造モデルにおいて、１つ又は複数の変異体が前記第一の親ＧＰＣＲと比較して少なくとも１つの異なるアミノ酸残基を有する１つ又は複数の構造モチーフを同定する工程、及び
（ｉｉｉ）第二の親ＧＰＣＲにおいて対応する１つ又は複数の構造モチーフを規定するアミノ酸配列内に１つ又は複数の変異を作製して、前記第二の親ＧＰＣＲと比較して増大した安定性を有する第二の親ＧＰＣＲの１つ又は複数の変異体を提供する工程
を含む方法。
【請求項６８】
前記膜タンパク質構造モデルが内在性膜タンパク質のモデルである、請求項６７に記載の方法。
【請求項６９】
前記内在性膜タンパク質が、工程（ｉ）の前記第一の親ＧＰＣＲの変異体が前記第一の親ＧＰＣＲと比較して少なくとも１つの異なる前記変異体中のアミノ酸を有するタンパク質ドメインにわたって、前記第一の親ＧＰＣＲの変異体と少なくとも２０％の配列同一性を有する、請求項６７又は６８に記載の方法。
【請求項７０】
前記内在性膜タンパク質がＧＰＣＲである、請求項６８又は６９に記載の方法。
【請求項７１】
前記ＧＰＣＲが、前記第一の親ＧＰＣＲと同じＧＰＣＲクラス又はファミリーのものである、請求項７０に記載の方法。
【請求項７２】
前記膜タンパク質構造モデルが、ヒトβ２アドレナリン受容体又はウシロドプシンのモデルである、請求項６７から７１のいずれか一項に記載の方法。
【請求項７３】
前記構造モチーフが、へリックス界面、へリックスの折れ曲がり（キンク）、へリックスの折れ曲がり（キンク）の反対側のへリックス、脂質二重層に向いたへリックス表面、疎水性−親水性境界層の脂質二重層に向いたへリックス表面、ループ領域、又はタンパク質結合ポケットのいずれかである、請求項６７から７２のいずれか一項に記載の方法。
【請求項７４】
前記第二の親ＧＰＣＲが前記第一の親ＧＰＣＲである、請求項６７から７３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項７５】
前記第二の親ＧＰＣＲが前記第一の親ＧＰＣＲではない、請求項６７から７３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項７６】
前記第二の親ＧＰＣＲが、前記第一の親ＧＰＣＲと少なくとも２０％の配列同一性を有するＧＰＣＲである、請求項７４又は７５に記載の方法。
【請求項７７】
前記第二のＧＰＣＲが、前記第一の親ＧＰＣＲと同じＧＰＣＲクラス又はファミリーのものである、請求項７４から７６のいずれか一項に記載の方法。
【請求項７８】
請求項６３から７７のいずれか一項に記載の方法であって、
（Ｉ）前記第二の親ＧＰＣＲが特定の立体構造を備える場合に前記第二の親ＧＰＣＲに結合するリガンドを選択する工程、
（ＩＩ）特定の立体構造を備える場合の前記第二の親ＧＰＣＲの前記変異体又はその各々が、前記選択したリガンドへの結合に関して同じ特定の立体構造を備える場合の前記第二の親ＧＰＣＲの安定性と比較して、そのリガンドへの結合に関して増大した安定性を有するか否かを測定する工程、及び
（ＩＩＩ）前記選択したリガンドへの結合に関して、前記第二の親ＧＰＣＲと比較して増大した安定性を有する変異体を選択する工程
をさらに含む方法。
【請求項７９】
工程（ＩＩ）において前記ＧＰＣＲが備える前記特定の立体構造が、工程（Ｉ）で選択したリガンドのクラスに対応する、請求項７８に記載の方法。
【請求項８０】
前記選択したリガンドがアゴニストクラスのリガンドに由来するものであり、且つ前記特定の立体構造がアゴニスト立体構造であるか、又は前記選択したリガンドがアンタゴニストクラスのリガンドに由来するものであり、且つ前記特定の立体構造がアンタゴニスト立体構造である、請求項７９に記載の方法。
【請求項８１】
前記リガンドが請求項５５から５７のいずれか一項で規定されるものである、請求項７８から８０のいずれか一項に記載の方法。
【請求項８２】
前記第二のＧＰＣＲの１つ又は複数の変異体の結合親和性が、前記選択したリガンドについての前記第二の親ＧＰＣＲの結合親和性と実質的に同一であるか又はそれ以上である、請求項７８から８１のいずれか一項に記載の方法。
【請求項８３】
工程（ａ）で提供されるＧＰＣＲ変異体が、β−アドレナリン受容体、アデノシン受容体、ニューロテンシン受容体又はムスカリン受容体のいずれか１つである、請求項１から８２のいずれか一項に記載の方法。
【請求項８４】
工程（ａ）で提供される前記ＧＰＣＲ変異体が、その親受容体と比較して、以下の位置：（ｉ）図９に記載のシチメンチョウβ−アドレナリン受容体の番号付けによる：Ｉｌｅ ５５，Ｇｌｙ ６７，Ａｒｇ ６８，Ｖａｌ ８９，Ｍｅｔ ９０，Ｇｌｙ ９８，Ｉｌｅ １２９，Ｓｅｒ １５１，Ｖａｌ １６０，Ｇｌｎ １９４，Ｇｌｙ １９７，Ｌｅｕ ２２１，Ｔｙｒ ２２７，Ａｒｇ ２２９，Ｖａｌ ２３０，Ａｌａ ２３４，Ａｌａ ２８２，Ａｓｐ ３２２，Ｐｈｅ ３２７，Ａｌａ ３３４，Ｐｈｅ ３３８、（ｉｉ）図１０に記載のヒトアデノシンＡ２ａ受容体の番号付けによる：Ｇｌｙ １１４，Ｇｌｙ １１８，Ｌｅｕ １６７，Ａｌａ １８４，Ａｒｇ １９９，Ａｌａ ２０３，Ｌｅｕ ２０８，Ｇｌｎ ２１０，Ｓｅｒ ２１３，Ｇｌｕ ２１９，Ａｒｇ ２２０，Ｓｅｒ ２２３，Ｔｈｒ ２２４，Ｇｌｎ ２２６，Ｌｙｓ ２２７，Ｈｉｓ ２３０，Ｌｅｕ ２４１，Ｐｒｏ ２６０，Ｓｅｒ ２６３，Ｌｅｕ ２６７，Ｌｅｕ ２７２，Ｔｈｒ ２７９，Ａｓｎ ２８４，Ｇｌｎ ３１１，Ｐｒｏ ３１３，Ｌｙｓ ３１５、（ｉｉｉ）図１１に記載のラットニューロテンシン受容体の番号付けによる：Ａｌａ ６９，Ｌｅｕ ７２，Ａｌａ ７３，Ａｌａ ８６，Ａｌａ ９０，Ｓｅｒ １００，Ｈｉｓ １０３，Ｓｅｒ １０８，Ｌｅｕ １０９，Ｌｅｕ １１１，Ａｓｐ １１３，Ｉｌｅ １１６，Ａｌａ １２０，Ａｓｐ １３９，Ｐｈｅ １４７，Ａｌａ １５５，Ｖａｌ １６５，Ｇｌｕ １６６，Ｌｙｓ １７６，Ａｌａ １７７，Ｔｈｒ １７９，Ｍｅｔ １８１，Ｓｅｒ １８２，Ａｒｇ １８３，Ｐｈｅ １８９，Ｌｅｕ ２０５，Ｔｈｒ ２０７，Ｇｌｙ ２０９，Ｇｌｙ ２１５，Ｖａｌ ２２９，Ｍｅｔ ２５０，Ｉｌｅ ２５３，Ｌｅｕ ２５６，Ｉｌｅ ２６０，Ａｓｎ ２６２，Ｖａｌ ２６８，Ａｓｎ ２７０，Ｔｈｒ ２７９，Ｍｅｔ ２９３，Ｔｈｒ ２９４，Ｇｌｙ ３０６，Ｌｅｕ ３０８，Ｖａｌ ３０９，Ｌｅｕ ３１０，Ｖａｌ ３１３，Ｐｈｅ ３４２，Ａｓｐ ３４５，Ｔｙｒ ３４９，Ｔｙｒ ３５１，Ａｌａ ３５６，Ｐｈｅ ３５８，Ｖａｌ ３６０，Ｓｅｒ ３６２，Ａｓｎ ３７０，Ｓｅｒ ３７３，Ｐｈｅ ３８０，Ａｌａ ３８５，Ｃｙｓ ３８６，Ｐｒｏ ３８９，Ｇｌｙ ３９０，Ｔｒｐ ３９１，Ａｒｇ ３９２，Ｈｉｓ ３９３，Ａｒｇ ３９５，Ｌｙｓ ３９７，Ｐｒｏ ３９９、及び（ｉｖ）図１７に記載のムスカリン受容体の番号付けによる：Ｌｅｕ ６５、Ｍｅｔ １４５、Ｌｅｕ ３９９、Ｉｌｅ ３８３及びＭｅｔ ３８４の任意の１つ又は複数に対応する位置に少なくとも１つの異なるアミノ酸を有する、請求項１から８２のいずれか一項に記載の方法。
【請求項８５】
工程（ａ）で提供されるＧＰＣＲ変異体が、その対応する親受容体と比較した場合、図９に記載のシチメンチョウβ−アドレナリン受容体の番号付けによる以下の位置：Ｉｌｅ ５５，Ｇｌｙ ６７，Ａｒｇ ６８，Ｖａｌ ８９，Ｍｅｔ ９０，Ｇｌｙ ９８，Ｉｌｅ １２９，Ｓｅｒ １５１，Ｖａｌ １６０，Ｇｌｎ １９４，Ｇｌｙ １９７，Ｌｅｕ ２２１，Ｔｙｒ ２２７，Ａｒｇ ２２９，Ｖａｌ ２３０，Ａｌａ ２３４，Ａｌａ ２８２，Ａｓｐ ３２２，Ｐｈｅ ３２７，Ａｌａ ３３４，Ｐｈｅ ３３８．の任意の１つ又は複数に対応する位置に異なるアミノ酸を有するβ−アドレナリン受容体変異体である、請求項１から８２のいずれか一項に記載の方法。
【請求項８６】
前記β−アドレナリン受容体変異体が、図９に記載のシチメンチョウβ−アドレナリン受容体の配列と少なくとも２０％同一であるアミノ酸配列を有する、請求項８６に記載の方法。
【請求項８７】
工程（ａ）で提供される前記ＧＰＣＲ変異体がβ−アドレナリン受容体変異体であって、前記受容体変異体が、その親受容体と比較して、図９に記載のシチメンチョウβ−アドレナリン受容体の番号付けによる以下の位置：Ｉｌｅ ５５，Ｇｌｙ ６７，Ａｒｇ ６８，Ｖａｌ ８９，Ｍｅｔ ９０，Ｇｌｙ ９８，Ｉｌｅ １２９，Ｓｅｒ １５１，Ｖａｌ １６０，Ｇｌｎ １９４，Ｇｌｙ １９７，Ｌｅｕ ２２１，Ｔｙｒ ２２７，Ａｒｇ ２２９，Ｖａｌ ２３０，Ａｌａ ２３４，Ａｌａ ２８２，Ａｓｐ ３２２，Ｐｈｅ ３２７，Ａｌａ ３３４，Ｐｈｅ ３３８．のいずれかに対応する位置に異なるアミノ酸を有する構造モチーフ内に少なくとも１つの異なるアミノ酸残基を有する、請求項１から８２のいずれか一項に記載の方法。
【請求項８８】
工程（ａ）で提供される前記ＧＰＣＲ変異体が、その対応する親受容体と比較した場合、図１０に記載のヒトアデノシンＡ２ａ受容体の番号付けによる以下の位置：Ｇｌｙ １１４，Ｇｌｙ １１８，Ｌｅｕ １６７，Ａｌａ １８４，Ａｒｇ １９９，Ａｌａ ２０３，Ｌｅｕ ２０８，Ｇｌｎ ２１０，Ｓｅｒ ２１３，Ｇｌｕ ２１９，Ａｒｇ ２２０，Ｓｅｒ ２２３，Ｔｈｒ ２２４，Ｇｌｎ ２２６，Ｌｙｓ ２２７，Ｈｉｓ ２３０，Ｌｅｕ ２４１，Ｐｒｏ ２６０，Ｓｅｒ ２６３，Ｌｅｕ ２６７，Ｌｅｕ ２７２，Ｔｈｒ ２７９，Ａｓｎ ２８４，Ｇｌｎ ３１１，Ｐｒｏ ３１３，Ｌｙｓ ３１５．の任意の１つ又は複数に対応する位置に異なるアミノ酸を有するアデノシン受容体変異体である、請求項１から８２のいずれか一項に記載の方法。
【請求項８９】
前記アデノシン受容体変異体が、図１０に記載のヒトアデノシンＡ２ａ受容体の配列と少なくとも２０％同一であるアミノ酸配列を有する、請求項８８に記載の方法。
【請求項９０】
工程（ａ）で提供される前記ＧＰＣＲ変異体がアデノシン受容体変異体であって、前記受容体変異体が、その親受容体と比較して、図１０に記載のヒトアデノシンＡ２ａ受容体の番号付けによる以下の位置：Ｇｌｙ １１４，Ｇｌｙ １１８，Ｌｅｕ １６７，Ａｌａ １８４，Ａｒｇ １９９，Ａｌａ ２０３，Ｌｅｕ ２０８，Ｇｌｎ ２１０，Ｓｅｒ ２１３，Ｇｌｕ ２１９，Ａｒｇ ２２０，Ｓｅｒ ２２３，Ｔｈｒ ２２４，Ｇｌｎ ２２６，Ｌｙｓ ２２７，Ｈｉｓ ２３０，Ｌｅｕ ２４１，Ｐｒｏ ２６０，Ｓｅｒ ２６３，Ｌｅｕ ２６７，Ｌｅｕ ２７２，Ｔｈｒ ２７９，Ａｓｎ ２８４，Ｇｌｎ ３１１，Ｐｒｏ ３１３，Ｌｙｓ ３１５．のいずれかに対応する位置に異なるアミノ酸を有する構造モチーフ内に少なくとも１つの異なるアミノ酸残基を有する、請求項１から８２のいずれか一項に記載の方法。
【請求項９１】
工程（ａ）で提供される前記ＧＰＣＲ変異体が、その対応する親受容体と比較した場合、図１１に記載のラットニューロテンシン受容体の番号付けによる以下の位置：Ａｌａ ６９，Ｌｅｕ ７２，Ａｌａ ７３，Ａｌａ ８６，Ａｌａ ９０，Ｓｅｒ １００，Ｈｉｓ １０３，Ｓｅｒ １０８，Ｌｅｕ １０９，Ｌｅｕ １１１，Ａｓｐ １１３，Ｉｌｅ １１６，Ａｌａ １２０，Ａｓｐ １３９，Ｐｈｅ １４７，Ａｌａ １５５，Ｖａｌ １６５，Ｇｌｕ １６６，Ｌｙｓ １７６，Ａｌａ １７７，Ｔｈｒ １７９，Ｍｅｔ １８１，Ｓｅｒ １８２，Ａｒｇ １８３，Ｐｈｅ １８９，Ｌｅｕ ２０５，Ｔｈｒ ２０７，Ｇｌｙ ２０９，Ｇｌｙ ２１５，Ｖａｌ ２２９，Ｍｅｔ ２５０，Ｉｌｅ ２５３，Ｌｅｕ ２５６，Ｉｌｅ ２６０，Ａｓｎ ２６２，Ｖａｌ ２６８，Ａｓｎ ２７０，Ｔｈｒ ２７９，Ｍｅｔ ２９３，Ｔｈｒ ２９４，Ｇｌｙ ３０６，Ｌｅｕ ３０８，Ｖａｌ ３０９，Ｌｅｕ ３１０，Ｖａｌ ３１３，Ｐｈｅ ３４２，Ａｓｐ ３４５，Ｔｙｒ ３４９，Ｔｙｒ ３５１，Ａｌａ ３５６，Ｐｈｅ ３５８，Ｖａｌ ３６０，Ｓｅｒ ３６２，Ａｓｎ ３７０，Ｓｅｒ ３７３，Ｐｈｅ ３８０，Ａｌａ ３８５，Ｃｙｓ ３８６，Ｐｒｏ ３８９，Ｇｌｙ ３９０，Ｔｒｐ ３９１，Ａｒｇ ３９２，Ｈｉｓ ３９３，Ａｒｇ ３９５，Ｌｙｓ ３９７，Ｐｒｏ ３９９．の任意の１つ又は複数に対応する位置に異なるアミノ酸を有するニューロテンシン受容体変異体である、請求項１から８２のいずれか一項に記載の方法。
【請求項９２】
前記ニューロテンシン受容体変異体が、図１１に記載のラットニューロテンシン受容体の配列と少なくとも２０％同一であるアミノ酸配列を有する、請求項９１に記載の方法。
【請求項９３】
工程（ａ）で提供される前記ＧＰＣＲ変異体がニューロテンシン受容体変異体であって、前記受容体変異体が、その親受容体と比較して、図１１に記載のラットニューロテンシン受容体の番号付けによる以下の位置：Ａｌａ ６９，Ｌｅｕ ７２，Ａｌａ ７３，Ａｌａ ８６，Ａｌａ ９０，Ｓｅｒ １００，Ｈｉｓ １０３，Ｓｅｒ １０８，Ｌｅｕ １０９，Ｌｅｕ １１１，Ａｓｐ １１３，Ｉｌｅ １１６，Ａｌａ １２０，Ａｓｐ １３９，Ｐｈｅ １４７，Ａｌａ １５５，Ｖａｌ １６５，Ｇｌｕ １６６，Ｌｙｓ １７６，Ａｌａ １７７，Ｔｈｒ １７９，Ｍｅｔ １８１，Ｓｅｒ １８２，Ａｒｇ １８３，Ｐｈｅ １８９，Ｌｅｕ ２０５，Ｔｈｒ ２０７，Ｇｌｙ ２０９，Ｇｌｙ ２１５，Ｖａｌ ２２９，Ｍｅｔ ２５０，Ｉｌｅ ２５３，Ｌｅｕ ２５６，Ｉｌｅ ２６０，Ａｓｎ ２６２，Ｖａｌ ２６８，Ａｓｎ ２７０，Ｔｈｒ ２７９，Ｍｅｔ ２９３，Ｔｈｒ ２９４，Ｇｌｙ ３０６，Ｌｅｕ ３０８，Ｖａｌ ３０９，Ｌｅｕ ３１０，Ｖａｌ ３１３，Ｐｈｅ ３４２，Ａｓｐ ３４５，Ｔｙｒ ３４９，Ｔｙｒ ３５１，Ａｌａ ３５６，Ｐｈｅ ３５８，Ｖａｌ ３６０，Ｓｅｒ ３６２，Ａｓｎ ３７０，Ｓｅｒ ３７３，Ｐｈｅ ３８０，Ａｌａ ３８５，Ｃｙｓ ３８６，Ｐｒｏ ３８９，Ｇｌｙ ３９０，Ｔｒｐ ３９１，Ａｒｇ ３９２，Ｈｉｓ ３９３，Ａｒｇ ３９５，Ｌｙｓ ３９７，Ｐｒｏ ３９９．のいずれかに対応する位置に異なるアミノ酸を有する構造モチーフ内に少なくとも１つの異なるアミノ酸残基を有する、請求項１から８２のいずれか一項に記載のＧＰＣＲ変異体。
【請求項９４】
工程（ａ）で提供される前記ＧＰＣＲ変異体が、対応する野生型ムスカリン受容体と比較した場合、図１７に記載のヒトムスカリン受容体の番号付けによる以下の位置：Ｌｅｕ ６５，Ｍｅｔ １４５，Ｌｅｕ ３９９，Ｉｌｅ ３８３及びＭｅｔ ３８４の任意の１つ又は複数に対応する位置に異なるアミノ酸を有するムスカリン受容体変異体である、請求項１から８２のいずれか一項に記載の方法。
【請求項９５】
前記ムスカリン受容体変異体が、図１７に記載のラットニューロテンシン受容体の配列と少なくとも２０％同一であるアミノ酸配列を有する、請求項９４に記載の方法。
【請求項９６】
工程（ａ）で提供される前記ＧＰＣＲ変異体がムスカリン受容体変異体であって、前記受容体変異体が、その親受容体と比較して、図１７に記載のヒトムスカリン受容体の番号付けによる以下の位置：Ｌｅｕ ６５，Ｍｅｔ １４５，Ｌｅｕ ３９９，Ｉｌｅ ３８３及びＭｅｔ ３８４のいずれかに対応する位置に異なるアミノ酸を有する構造モチーフ内に少なくとも１つの異なるアミノ酸残基を有する、請求項１から８２のいずれか一項に記載の方法。
【請求項９７】
ＧＰＣＲの結合パートナーを生産する方法であって、請求項１から９６のいずれか一項に記載の方法を実施することによって同定可能な結合パートナーを合成する工程を含む方法。
【請求項９８】
請求項１から９７に記載の方法のいずれかによって得られる結合パートナー。
【請求項９９】
前記結合パートナーが立体構造特異的である、請求項９８に記載の結合パートナー。
【請求項１００】
前記結合パートナーが、ポリペプチド；アンチカリン；ペプチド；抗体；キメラ抗体；一本鎖抗体；アプタマー；ダルピン；Ｆａｂ、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆｖ、ｓｃＦｖ若しくはｄＡｂ抗体断片；低分子；天然生成物；アフィボディ；ペプチドミメティック；核酸；ペプチド核酸分子；脂質；炭水化物；アンキリンリピートタンパク質、アルマジロリピートタンパク質、ロイシンリッチタンパク質、テトラリオペプチドリピートタンパク質若しくは設計アンキリンリピートタンパク質（ＤＡＲＰｉｎ）を含むモジュールフレームワークに基づくタンパク質；又はリポカリン若しくはフィブロネクチンドメイン又はヒトγクリスタリン若しくはヒトユビキチンのいずれかに基づくアフィリンスカフォールドに基づくタンパク質のいずれかである、請求項９８又は９９に記載の結合パートナー。
【請求項１０１】
前記結合パートナーが抗体である、請求項１００に記載の結合パートナー。
【請求項１０２】
前記結合パートナーに対する前記ＧＰＣＲ変異体の結合親和性が、前記結合パートナーに対する前記親ＧＰＣＲの結合親和性と実質的に同一であるか又はそれよりも大きい、請求項９８から１０１のいずれか一項に記載の結合パートナー。
【請求項１０３】
親ＧＰＣＲのＧＰＣＲ変異体を含むバイオセンサーであって、前記ＧＰＣＲ変異体が親ＧＰＣＲと比較して特定の立体構造で増大した安定性を有し、且つ、標的物質が前記ＧＰＣＲ変異体に結合した際に検出可能なシグナルが生成される、バイオセンサー。
【請求項１０４】
前記ＧＰＣＲ変異体が、請求項４５から８２のいずれか一項で規定されるように提供される、請求項１０３に記載のバイオセンサー。
【請求項１０５】
前記ＧＰＣＲ変異体が、請求項８３から９６のいずれか一項で規定されるものである、請求項１０３又は１０４に記載のバイオセンサー。
【請求項１０６】
前記検出可能なシグナルが、色の変化；蛍光；エバネッセンス；表面プラズモン共鳴；電気伝導度若しくは電荷分離；紫外、可視若しくは赤外吸収；発光；化学発光；電気化学発光；蛍光異方性；蛍光強度；蛍光寿命；蛍光偏光；蛍光エネルギー移動；分子量；電子スピン共鳴；核磁気共鳴；流体力学的容積若しくは半径；比重；シンチレーション；電界効果抵抗；電気インピーダンス；音響インピーダンス；量子消失；共鳴散乱；蛍光クエンチング；蛍光相関分光法；音響負荷；音響せん断波速度；結合力；又は界面応力のいずれかである、請求項１０３から１０５のいずれか一項に記載のバイオセンサー。
【請求項１０７】
前記バイオセンサーが、水晶膜厚計バイオセンサー、エバネッセント波バイオセンサー、プレーナー導波路バイオセンサー、表面ラマンセンサー、又は表面プラズモン共鳴バイオセンサーなどのフローベースのバイオセンサーである、請求項１０３から１０６のいずれか一項に記載のバイオセンサー。
【請求項１０８】
前記標的物質が、分子、生体分子、ペプチド、タンパク質、炭水化物、脂質、ＧＰＣＲリガンド、合成分子、薬剤、薬剤代謝産物又は疾患バイオマーカーのいずれかである、請求項１０３から１０７のいずれか一項に記載のバイオセンサー。
【請求項１】
ＧＰＣＲの結合パートナーを生産する方法であって、
ａ）親ＧＰＣＲと比較して特定の立体構造で増大した安定性を有する、該親ＧＰＣＲのＧＰＣＲ変異体を提供する工程、
ｂ）１つ又は複数の試験化合物を提供する工程、
ｃ）前記試験化合物又はその各々が、特定の立体構造を備える場合の前記ＧＰＣＲ変異体に結合するか否かを測定する工程、及び
ｄ）前記特定の立体構造を備える場合の前記ＧＰＣＲ変異体に結合する１つ又は複数の試験化合物を単離する工程
を含む方法。
【請求項２】
ｅ）前記試験化合物又はその各々が、前記特定の立体構造を備える場合の前記親ＧＰＣＲに結合するか否かを測定する工程、及び
ｆ）前記特定の立体構造にある場合の前記親ＧＰＣＲにも結合する前記試験化合物又はその各々を単離する工程
をさらに含む、請求項２に記載の方法。
【請求項３】
前記ＧＰＣＲ変異体が固体支持体に固定化されている、請求項１又は２に記載の方法。
【請求項４】
前記支持体がビーズ、カラム、スライドガラス、チップ又はプレートのいずれかである、請求項３に記載の方法。
【請求項５】
前記ＧＰＣＲ変異体が共有結合相互作用を介して支持体に固定化されている、請求項３又は４に記載の方法。
【請求項６】
前記支持体がポリマー支持体で被覆されている、請求項５に記載の方法。
【請求項７】
前記ポリマー支持体がカルボキシル化デキストランである、請求項６に記載の方法。
【請求項８】
前記ＧＰＣＲ変異体が非共有結合相互作用を介して支持体に固定化されている、請求項３又は４に記載の方法。
【請求項９】
前記支持体が、アビジン、ストレプトアビジン、金属イオン、親ＧＰＣＲに対する抗体、又は前記ＧＰＣＲ変異体に結合した分子タグに対する抗体のいずれかで被覆されている、請求項８に記載の方法。
【請求項１０】
前記ＧＰＣＲ変異体が、Ｃ末端又は細胞外ドメインが外側を向くように細胞内ドメインを介して固定化されている、請求項３から９のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１１】
前記ＧＰＣＲ変異体が、Ｎ末端又は細胞内ドメインが外側を向くように細胞外ドメインを介して固定化されている、請求項３から９のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１２】
前記ＧＰＣＲ変異体がＣ末端又はＮ末端に分子タグを含む、請求項１から１１のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１３】
前記タグが、ＦＬＡＧタグ、Ｈｉｓタグ、ｃ−Ｍｙｃタグ、ＤＤＤＤＫタグ、ＨＳＶタグ、Ｈａｌｏタグ、又はビオチンタグのいずれかである、請求項１０に記載の方法。
【請求項１４】
前記ＧＰＣＲ変異体が、全細胞製剤中又は細胞膜断片中に存在するか、界面活性剤に可溶化されているか、脂質単層中、脂質二重層中、ビーズ結合脂質粒子中、固体支持脂質層中、又はプロテオリポソーム中に存在する、請求項１から１３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１５】
前記試験化合物が固体支持体に固定化されている、請求項１、２、１２から１４のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１６】
前記固体支持体がビーズ、カラム、スライドガラス、チップ又はプレートのいずれかである、請求項１５に記載の方法。
【請求項１７】
前記ＧＰＣＲ変異体及び前記試験化合物が固体支持体に固定化されていない、請求項１、２、１２から１４のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１８】
前記試験化合物が、ポリペプチド；アンチカリン；ペプチド；抗体；キメラ抗体；一本鎖抗体；アプタマー；ダルピン；Ｆａｂ、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆｖ、ｓｃＦｖ若しくはｄＡｂ抗体断片；低分子；天然生成物；アフィボディ；ペプチドミメティック；核酸；ペプチド核酸分子；脂質；炭水化物；アンキリンリピートタンパク質、アルマジロリピートタンパク質、ロイシンリッチタンパク質、テトラトリオペプチドリピートタンパク質若しくは設計アンキリンリピートタンパク質（ＤＡＲＰｉｎ）を含むモジュールフレームワークに基づくタンパク質；又はリポカリン若しくはフィブロネクチンドメイン又はヒトγクリスタリン若しくはヒトユビキチンのいずれかに基づくアフィリンスカフォールドに基づくタンパク質のいずれかである、請求項１から１７のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１９】
前記試験化合物が生物学的試料として提供される、請求項１から１８のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２０】
前記試料が血液、血清、血漿、脊髄液、組織抽出物又は細胞抽出物のいずれかである、請求項１９に記載の方法。
【請求項２１】
前記試験化合物が、試験化合物のライブラリーである、請求項１から１８のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２２】
前記ライブラリーが、ペプチドライブラリー、タンパク質ライブラリー、抗体ライブラリー、組換えコンビナトリアル抗体ライブラリー、又はｓｃＦｖ若しくはＦａｂファージディスプレイライブラリーのいずれかである、請求項２０に記載の方法。
【請求項２３】
前記試験化合物が、ペプチドタグ、核酸タグ、化学物質タグ、蛍光タグ又はＲＦタグのいずれかで標識されている、請求項１から２２のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２４】
前記抗体が、親ＧＰＣＲのＧＰＣＲ変異体に対する抗体であり、前記ＧＰＣＲ変異体が前記親ＧＰＣＲと比較して特定の立体構造で増大した安定性を有する、請求項１８に記載の方法。
【請求項２５】
前記抗体が、リンパ球を前記ＧＰＣＲ変異体の免疫原で免疫することによって作製される、請求項２４に記載の方法。
【請求項２６】
前記リンパ球がインビボで免疫される、請求項２５に記載の方法。
【請求項２７】
前記リンパ球がインビトロで免疫される、請求項２５に記載の方法。
【請求項２８】
前記ＧＰＣＲ変異体の免疫原が、前記ＧＰＣＲ変異体の全部、その断片又はその融合タンパク質である、請求項２５から２７のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２９】
ＧＰＣＲ変異体の免疫原が、全細胞製剤中若しくは細胞膜断片中で提供されるか、界面活性剤に可溶化されているか、脂質単層中、脂質二重層中、ビーズ結合脂質粒子中、固体支持脂質層中、又はプロテオリポソーム中で提供される、請求項２４から２８のいずれか一項に記載の方法。
【請求項３０】
前記免疫原がアジュバントと共に提供される、請求項２４から２９のいずれか一項に記載の方法。
【請求項３１】
前記アジュバントがＴｉｔｒｅｍａｘ又はＲｉｂｉアジュバント乳剤である、請求項３０に記載の方法。
【請求項３２】
特定の立体構造を備える場合のＧＰＣＲ変異体に結合する前記単離試験化合物を修飾する工程、及び前記修飾した試験化合物が特定の立体構造を備える場合の前記ＧＰＣＲ変異体に結合するか否かを測定する工程をさらに含む、請求項１から３１のいずれか一項に記載の方法。
【請求項３３】
前記修飾試験化合物が、前記特定の立体構造を備える場合の前記親ＧＰＣＲに結合するか否かを測定する工程をさらに含む、請求項３２に記載の方法。
【請求項３４】
複数のＧＰＣＲ変異体が工程（ａ）で提供され、前記試験化合物が特定の立体構造を備える場合の各々のＧＰＣＲ変異体に結合するか否かを測定し、前記特定の立体構造を備える場合の各々のＧＰＣＲ変異体に結合する試験化合物を単離する、請求項１から３３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項３５】
第一の親ＧＰＣＲのＧＰＣＲ変異体及び第二の親ＧＰＣＲのＧＰＣＲ変異体が工程（ａ）で提供され、前記試験化合物が特定の立体構造を備える場合の各々のＧＰＣＲ変異体に結合するか否かを測定し、前記特定の立体構造を備える場合の各々のＧＰＣＲ変異体に結合する試験化合物を単離する、請求項３４に記載の方法。
【請求項３６】
複数のＧＰＣＲ変異体が工程（ａ）で提供され、第一のＧＰＣＲ変異体に結合するが、少なくとも１つの他のＧＰＣＲ変異体には結合しない又は前記第一のＧＰＣＲ変異体に対するよりも弱く結合する試験化合物を選択する、請求項１から３３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項３７】
請求項１から３６のいずれか一項に記載の方法であって、
（ｉ）前記単離試験化合物が、それが結合する前記ＧＰＣＲの機能に影響を及ぼすか否かを測定する工程、及び（ｉｉ）それが結合する前記ＧＰＣＲの機能に影響を及ぼす試験化合物を単離する工程、をさらに含む方法。
【請求項３８】
工程（ｉ）において、前記単離試験化合物が、その天然リガンド又はその類似体への前記ＧＰＣＲの結合に影響を及ぼすか否かを測定する、請求項３７に記載の方法。
【請求項３９】
工程（ｉｉ）において、前記ＧＰＣＲとその天然リガンド又はその類似体の間の結合を低下させる試験化合物を単離する、請求項３８に記載の方法。
【請求項４０】
工程（ｉｉ）において、前記ＧＰＣＲとその天然リガンド又はその類似体の間の結合を上昇させる試験化合物を単離する、請求項３８に記載の方法。
【請求項４１】
工程（ｉ）において、前記単離試験化合物が、それが結合する前記ＧＰＣＲの活性化を調節するか否かを測定する、請求項３７から４０のいずれか一項に記載の方法。
【請求項４２】
工程（ｉｉ）において、カルシウム可動化、ｃＡＭＰレベル、キナーゼ経路の活性、試験化合物が結合するＧＰＣＲの制御下でのレポーター遺伝子からの遺伝子転写、β−アレスチンのリクルートメント、Ｇタンパク質の活性化、ＧＴＰアーゼ活性又は［３５Ｓ］ＧＴＰγＳ結合のいずれかを調節する試験化合物を選択する、請求項４１に記載の方法。
【請求項４３】
工程（ｉｉ）において、それが結合する前記ＧＰＣＲの活性化を上昇させるアゴニスト試験化合物を単離する、請求項４１又は４２に記載の方法。
【請求項４４】
工程（ｉｉ）において、それが結合する前記ＧＰＣＲの活性化を低下させるアンタゴニスト試験化合物を単離する、請求項４１又は４２に記載の方法。
【請求項４５】
請求項１から４４のいずれか一項に記載の方法であって、ＧＰＣＲ変異体が、
（ａ）親ＧＰＣＲの１つ又は複数の変異体を提供する工程、
（ｂ）前記ＧＰＣＲが特定の立体構造を備える場合に前記親ＧＰＣＲに結合するリガンドを選択する工程、
（ｃ）前記ＧＰＣＲ変異体又はその各々が、前記選択したリガンドへの結合に関して、そのリガンドへの結合に関する前記親ＧＰＣＲの安定性と比較して増大した安定性を有するか否かを測定する工程、及び
（ｄ）前記選択したリガンドへの結合に関して前記親ＧＰＣＲと比較して増大した安定性を有する変異体を選択する工程
によって提供される方法。
【請求項４６】
工程（ｃ）の前に、前記１つ又は複数の変異体を前記選択したリガンドと接触させる、請求項４５に記載の方法。
【請求項４７】
前記１つ又は複数の変異体が可溶化形態で提供される、請求項４５又は４６に記載の方法。
【請求項４８】
請求項４５から４７のいずれか一項に記載の方法であって、工程（ｃ）において前記ＧＰＣＲが備える前記特定の立体構造が、工程（ｂ）で選択したリガンドのクラスに対応する方法。
【請求項４９】
前記選択したリガンドがアゴニストクラスのリガンドに由来するものであり、且つ前記特定の立体構造がアゴニスト立体構造であるか、又は前記選択したリガンドがアンタゴニストクラスのリガンドに由来するものであり、且つ前記特定の立体構造がアンタゴニスト立体構造である、請求項４８に記載の方法。
【請求項５０】
前記選択したリガンドがアゴニストクラスのリガンドに由来するものであり、且つ、工程（ｃ）において前記ＧＰＣＲが備える前記特定の立体構造がアゴニスト立体構造である、請求項４９に記載の方法。
【請求項５１】
前記選択したリガンドに対する前記変異体の結合親和性が、前記選択したリガンドに対する前記親の結合親和性と実質的に同一であるか又はそれよりも大きい、請求項４５から５０のいずれか一項に記載の方法。
【請求項５２】
前記方法が１回又は複数回反復され、工程（ａ）において増大した安定性を有する前記選択した変異体が前記方法のその後の回における前記親ＧＰＣＲとなる、請求項４５から５１のいずれか一項に記載の方法。
【請求項５３】
熱、界面活性剤、カオトロピック剤、及び極端なｐＨのいずれか１つ又は複数に対して増大した安定性を有するＧＰＣＲ変異体を選択する、請求項４５から５２のいずれか一項に記載の方法。
【請求項５４】
増大した熱安定性を有するＧＰＣＲ変異体を選択する、請求項５３に記載の方法。
【請求項５５】
前記リガンドが、完全アゴニスト、部分的アゴニスト、逆アゴニスト、アンタゴニストのいずれか１つである、請求項４５から５４のいずれか一項に記載の方法。
【請求項５６】
前記リガンドが前記ＧＰＣＲに結合するポリペプチドである、請求項４５から５５のいずれか一項に記載の方法。
【請求項５７】
前記ポリペプチドが、抗体、アンキリン、Ｇタンパク質、ＲＧＳタンパク質、アレスチン、ＧＰＣＲキナーゼ、受容体チロシンキナーゼ、ＲＡＭＰ、ＮＳＦ、ＧＰＣＲ、ＮＭＤＡ受容体サブユニットＮＲ１若しくはＮＲ２ａ、又はカルシオン、フィブロネクチンドメインフレームワーク、又は前記ＧＰＣＲに結合するその断片若しくは誘導体のいずれかである、請求項５６に記載の方法。
【請求項５８】
工程（ｂ）において２又はそれ以上のリガンドが選択され、各々の存在が前記ＧＰＣＲに同じ特定の立体構造を備えさせる、請求項４５から５７のいずれか一項に記載の方法。
【請求項５９】
親と比較して、工程（ｂ）で選択した前記リガンドとは異なるクラスのリガンドに結合する低下した能力を有するＧＰＣＲ変異体を選択する、請求項４５から５８のいずれか一項に記載の方法。
【請求項６０】
前記ＧＰＣＲが、β−アドレナリン受容体、アデノシン受容体及びニューロテンシン受容体のいずれか１つである、請求項４５から５９のいずれか一項に記載の方法。
【請求項６１】
請求項１から４４のいずれか一項に記載の方法であって、前記ＧＰＣＲ変異体が、
（ａ）請求項４５から６０のいずれか一項に記載の方法を実施する工程、
（ｂ）増大した安定性に関して選択した前記１つ又は複数のＧＰＣＲ変異体における１つ又は複数の変異したアミノ酸残基の位置を同定する工程、及び
（ｃ）前記同定した位置の１つ又は複数におけるアミノ酸の置き換えを含むＧＰＣＲ変異体を合成する工程
によって提供される方法。
【請求項６２】
前記ＧＰＣＲ変異体が親ＧＰＣＲと比較して複数の変異を含む、請求項６１に記載の方法。
【請求項６３】
請求項１から４４のいずれか一項に記載の方法であって、前記ＧＰＣＲ変異体が、
（ｉ）第一の親ＧＰＣＲと比較して増大した安定性を有する第一の親ＧＰＣＲの１つ又は複数の変異体のアミノ酸配列において、１つ又は複数の変異体が前記第一の親ＧＰＣＲと比較して少なくとも１つの異なるアミノ酸残基を有する１つ又は複数の位置を同定する工程、及び
（ｉｉ）対応する１つ又は複数の位置で、第二のＧＰＣＲを規定するアミノ酸配列内に１つ又は複数の変異を作製して、第二の親ＧＰＣＲと比較して増大した安定性を有する第二の親ＧＰＣＲの１つ又は複数の変異体を提供する工程
によって提供される方法。
【請求項６４】
第一の親ＧＰＣＲの１つ又は複数の変異体が、請求項４５から６２のいずれか一項に記載の方法にしたがって提供される、請求項６３に記載の方法。
【請求項６５】
前記第二のＧＰＣＲが、前記第一の親ＧＰＣＲと同じＧＰＣＲクラス又はファミリーのものである、請求項６３又は６４に記載の方法。
【請求項６６】
前記第二のＧＰＣＲが、前記第一の親ＧＰＣＲと少なくとも２０％の配列同一性を有するＧＰＣＲである、請求項６３から６５のいずれか一項に記載の方法。
【請求項６７】
親ＧＰＣＲと比較して増大した安定性を有するＧＰＣＲ変異体を生産する、請求項１から４４のいずれか一項に記載の方法であって、
（ｉ）第一の親ＧＰＣＲと比較して増大した安定性を有する第一の親ＧＰＣＲの１つ又は複数の変異体を提供する工程、
（ｉｉ）膜タンパク質構造モデルにおいて、１つ又は複数の変異体が前記第一の親ＧＰＣＲと比較して少なくとも１つの異なるアミノ酸残基を有する１つ又は複数の構造モチーフを同定する工程、及び
（ｉｉｉ）第二の親ＧＰＣＲにおいて対応する１つ又は複数の構造モチーフを規定するアミノ酸配列内に１つ又は複数の変異を作製して、前記第二の親ＧＰＣＲと比較して増大した安定性を有する第二の親ＧＰＣＲの１つ又は複数の変異体を提供する工程
を含む方法。
【請求項６８】
前記膜タンパク質構造モデルが内在性膜タンパク質のモデルである、請求項６７に記載の方法。
【請求項６９】
前記内在性膜タンパク質が、工程（ｉ）の前記第一の親ＧＰＣＲの変異体が前記第一の親ＧＰＣＲと比較して少なくとも１つの異なる前記変異体中のアミノ酸を有するタンパク質ドメインにわたって、前記第一の親ＧＰＣＲの変異体と少なくとも２０％の配列同一性を有する、請求項６７又は６８に記載の方法。
【請求項７０】
前記内在性膜タンパク質がＧＰＣＲである、請求項６８又は６９に記載の方法。
【請求項７１】
前記ＧＰＣＲが、前記第一の親ＧＰＣＲと同じＧＰＣＲクラス又はファミリーのものである、請求項７０に記載の方法。
【請求項７２】
前記膜タンパク質構造モデルが、ヒトβ２アドレナリン受容体又はウシロドプシンのモデルである、請求項６７から７１のいずれか一項に記載の方法。
【請求項７３】
前記構造モチーフが、へリックス界面、へリックスの折れ曲がり（キンク）、へリックスの折れ曲がり（キンク）の反対側のへリックス、脂質二重層に向いたへリックス表面、疎水性−親水性境界層の脂質二重層に向いたへリックス表面、ループ領域、又はタンパク質結合ポケットのいずれかである、請求項６７から７２のいずれか一項に記載の方法。
【請求項７４】
前記第二の親ＧＰＣＲが前記第一の親ＧＰＣＲである、請求項６７から７３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項７５】
前記第二の親ＧＰＣＲが前記第一の親ＧＰＣＲではない、請求項６７から７３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項７６】
前記第二の親ＧＰＣＲが、前記第一の親ＧＰＣＲと少なくとも２０％の配列同一性を有するＧＰＣＲである、請求項７４又は７５に記載の方法。
【請求項７７】
前記第二のＧＰＣＲが、前記第一の親ＧＰＣＲと同じＧＰＣＲクラス又はファミリーのものである、請求項７４から７６のいずれか一項に記載の方法。
【請求項７８】
請求項６３から７７のいずれか一項に記載の方法であって、
（Ｉ）前記第二の親ＧＰＣＲが特定の立体構造を備える場合に前記第二の親ＧＰＣＲに結合するリガンドを選択する工程、
（ＩＩ）特定の立体構造を備える場合の前記第二の親ＧＰＣＲの前記変異体又はその各々が、前記選択したリガンドへの結合に関して同じ特定の立体構造を備える場合の前記第二の親ＧＰＣＲの安定性と比較して、そのリガンドへの結合に関して増大した安定性を有するか否かを測定する工程、及び
（ＩＩＩ）前記選択したリガンドへの結合に関して、前記第二の親ＧＰＣＲと比較して増大した安定性を有する変異体を選択する工程
をさらに含む方法。
【請求項７９】
工程（ＩＩ）において前記ＧＰＣＲが備える前記特定の立体構造が、工程（Ｉ）で選択したリガンドのクラスに対応する、請求項７８に記載の方法。
【請求項８０】
前記選択したリガンドがアゴニストクラスのリガンドに由来するものであり、且つ前記特定の立体構造がアゴニスト立体構造であるか、又は前記選択したリガンドがアンタゴニストクラスのリガンドに由来するものであり、且つ前記特定の立体構造がアンタゴニスト立体構造である、請求項７９に記載の方法。
【請求項８１】
前記リガンドが請求項５５から５７のいずれか一項で規定されるものである、請求項７８から８０のいずれか一項に記載の方法。
【請求項８２】
前記第二のＧＰＣＲの１つ又は複数の変異体の結合親和性が、前記選択したリガンドについての前記第二の親ＧＰＣＲの結合親和性と実質的に同一であるか又はそれ以上である、請求項７８から８１のいずれか一項に記載の方法。
【請求項８３】
工程（ａ）で提供されるＧＰＣＲ変異体が、β−アドレナリン受容体、アデノシン受容体、ニューロテンシン受容体又はムスカリン受容体のいずれか１つである、請求項１から８２のいずれか一項に記載の方法。
【請求項８４】
工程（ａ）で提供される前記ＧＰＣＲ変異体が、その親受容体と比較して、以下の位置：（ｉ）図９に記載のシチメンチョウβ−アドレナリン受容体の番号付けによる：Ｉｌｅ ５５，Ｇｌｙ ６７，Ａｒｇ ６８，Ｖａｌ ８９，Ｍｅｔ ９０，Ｇｌｙ ９８，Ｉｌｅ １２９，Ｓｅｒ １５１，Ｖａｌ １６０，Ｇｌｎ １９４，Ｇｌｙ １９７，Ｌｅｕ ２２１，Ｔｙｒ ２２７，Ａｒｇ ２２９，Ｖａｌ ２３０，Ａｌａ ２３４，Ａｌａ ２８２，Ａｓｐ ３２２，Ｐｈｅ ３２７，Ａｌａ ３３４，Ｐｈｅ ３３８、（ｉｉ）図１０に記載のヒトアデノシンＡ２ａ受容体の番号付けによる：Ｇｌｙ １１４，Ｇｌｙ １１８，Ｌｅｕ １６７，Ａｌａ １８４，Ａｒｇ １９９，Ａｌａ ２０３，Ｌｅｕ ２０８，Ｇｌｎ ２１０，Ｓｅｒ ２１３，Ｇｌｕ ２１９，Ａｒｇ ２２０，Ｓｅｒ ２２３，Ｔｈｒ ２２４，Ｇｌｎ ２２６，Ｌｙｓ ２２７，Ｈｉｓ ２３０，Ｌｅｕ ２４１，Ｐｒｏ ２６０，Ｓｅｒ ２６３，Ｌｅｕ ２６７，Ｌｅｕ ２７２，Ｔｈｒ ２７９，Ａｓｎ ２８４，Ｇｌｎ ３１１，Ｐｒｏ ３１３，Ｌｙｓ ３１５、（ｉｉｉ）図１１に記載のラットニューロテンシン受容体の番号付けによる：Ａｌａ ６９，Ｌｅｕ ７２，Ａｌａ ７３，Ａｌａ ８６，Ａｌａ ９０，Ｓｅｒ １００，Ｈｉｓ １０３，Ｓｅｒ １０８，Ｌｅｕ １０９，Ｌｅｕ １１１，Ａｓｐ １１３，Ｉｌｅ １１６，Ａｌａ １２０，Ａｓｐ １３９，Ｐｈｅ １４７，Ａｌａ １５５，Ｖａｌ １６５，Ｇｌｕ １６６，Ｌｙｓ １７６，Ａｌａ １７７，Ｔｈｒ １７９，Ｍｅｔ １８１，Ｓｅｒ １８２，Ａｒｇ １８３，Ｐｈｅ １８９，Ｌｅｕ ２０５，Ｔｈｒ ２０７，Ｇｌｙ ２０９，Ｇｌｙ ２１５，Ｖａｌ ２２９，Ｍｅｔ ２５０，Ｉｌｅ ２５３，Ｌｅｕ ２５６，Ｉｌｅ ２６０，Ａｓｎ ２６２，Ｖａｌ ２６８，Ａｓｎ ２７０，Ｔｈｒ ２７９，Ｍｅｔ ２９３，Ｔｈｒ ２９４，Ｇｌｙ ３０６，Ｌｅｕ ３０８，Ｖａｌ ３０９，Ｌｅｕ ３１０，Ｖａｌ ３１３，Ｐｈｅ ３４２，Ａｓｐ ３４５，Ｔｙｒ ３４９，Ｔｙｒ ３５１，Ａｌａ ３５６，Ｐｈｅ ３５８，Ｖａｌ ３６０，Ｓｅｒ ３６２，Ａｓｎ ３７０，Ｓｅｒ ３７３，Ｐｈｅ ３８０，Ａｌａ ３８５，Ｃｙｓ ３８６，Ｐｒｏ ３８９，Ｇｌｙ ３９０，Ｔｒｐ ３９１，Ａｒｇ ３９２，Ｈｉｓ ３９３，Ａｒｇ ３９５，Ｌｙｓ ３９７，Ｐｒｏ ３９９、及び（ｉｖ）図１７に記載のムスカリン受容体の番号付けによる：Ｌｅｕ ６５、Ｍｅｔ １４５、Ｌｅｕ ３９９、Ｉｌｅ ３８３及びＭｅｔ ３８４の任意の１つ又は複数に対応する位置に少なくとも１つの異なるアミノ酸を有する、請求項１から８２のいずれか一項に記載の方法。
【請求項８５】
工程（ａ）で提供されるＧＰＣＲ変異体が、その対応する親受容体と比較した場合、図９に記載のシチメンチョウβ−アドレナリン受容体の番号付けによる以下の位置：Ｉｌｅ ５５，Ｇｌｙ ６７，Ａｒｇ ６８，Ｖａｌ ８９，Ｍｅｔ ９０，Ｇｌｙ ９８，Ｉｌｅ １２９，Ｓｅｒ １５１，Ｖａｌ １６０，Ｇｌｎ １９４，Ｇｌｙ １９７，Ｌｅｕ ２２１，Ｔｙｒ ２２７，Ａｒｇ ２２９，Ｖａｌ ２３０，Ａｌａ ２３４，Ａｌａ ２８２，Ａｓｐ ３２２，Ｐｈｅ ３２７，Ａｌａ ３３４，Ｐｈｅ ３３８．の任意の１つ又は複数に対応する位置に異なるアミノ酸を有するβ−アドレナリン受容体変異体である、請求項１から８２のいずれか一項に記載の方法。
【請求項８６】
前記β−アドレナリン受容体変異体が、図９に記載のシチメンチョウβ−アドレナリン受容体の配列と少なくとも２０％同一であるアミノ酸配列を有する、請求項８６に記載の方法。
【請求項８７】
工程（ａ）で提供される前記ＧＰＣＲ変異体がβ−アドレナリン受容体変異体であって、前記受容体変異体が、その親受容体と比較して、図９に記載のシチメンチョウβ−アドレナリン受容体の番号付けによる以下の位置：Ｉｌｅ ５５，Ｇｌｙ ６７，Ａｒｇ ６８，Ｖａｌ ８９，Ｍｅｔ ９０，Ｇｌｙ ９８，Ｉｌｅ １２９，Ｓｅｒ １５１，Ｖａｌ １６０，Ｇｌｎ １９４，Ｇｌｙ １９７，Ｌｅｕ ２２１，Ｔｙｒ ２２７，Ａｒｇ ２２９，Ｖａｌ ２３０，Ａｌａ ２３４，Ａｌａ ２８２，Ａｓｐ ３２２，Ｐｈｅ ３２７，Ａｌａ ３３４，Ｐｈｅ ３３８．のいずれかに対応する位置に異なるアミノ酸を有する構造モチーフ内に少なくとも１つの異なるアミノ酸残基を有する、請求項１から８２のいずれか一項に記載の方法。
【請求項８８】
工程（ａ）で提供される前記ＧＰＣＲ変異体が、その対応する親受容体と比較した場合、図１０に記載のヒトアデノシンＡ２ａ受容体の番号付けによる以下の位置：Ｇｌｙ １１４，Ｇｌｙ １１８，Ｌｅｕ １６７，Ａｌａ １８４，Ａｒｇ １９９，Ａｌａ ２０３，Ｌｅｕ ２０８，Ｇｌｎ ２１０，Ｓｅｒ ２１３，Ｇｌｕ ２１９，Ａｒｇ ２２０，Ｓｅｒ ２２３，Ｔｈｒ ２２４，Ｇｌｎ ２２６，Ｌｙｓ ２２７，Ｈｉｓ ２３０，Ｌｅｕ ２４１，Ｐｒｏ ２６０，Ｓｅｒ ２６３，Ｌｅｕ ２６７，Ｌｅｕ ２７２，Ｔｈｒ ２７９，Ａｓｎ ２８４，Ｇｌｎ ３１１，Ｐｒｏ ３１３，Ｌｙｓ ３１５．の任意の１つ又は複数に対応する位置に異なるアミノ酸を有するアデノシン受容体変異体である、請求項１から８２のいずれか一項に記載の方法。
【請求項８９】
前記アデノシン受容体変異体が、図１０に記載のヒトアデノシンＡ２ａ受容体の配列と少なくとも２０％同一であるアミノ酸配列を有する、請求項８８に記載の方法。
【請求項９０】
工程（ａ）で提供される前記ＧＰＣＲ変異体がアデノシン受容体変異体であって、前記受容体変異体が、その親受容体と比較して、図１０に記載のヒトアデノシンＡ２ａ受容体の番号付けによる以下の位置：Ｇｌｙ １１４，Ｇｌｙ １１８，Ｌｅｕ １６７，Ａｌａ １８４，Ａｒｇ １９９，Ａｌａ ２０３，Ｌｅｕ ２０８，Ｇｌｎ ２１０，Ｓｅｒ ２１３，Ｇｌｕ ２１９，Ａｒｇ ２２０，Ｓｅｒ ２２３，Ｔｈｒ ２２４，Ｇｌｎ ２２６，Ｌｙｓ ２２７，Ｈｉｓ ２３０，Ｌｅｕ ２４１，Ｐｒｏ ２６０，Ｓｅｒ ２６３，Ｌｅｕ ２６７，Ｌｅｕ ２７２，Ｔｈｒ ２７９，Ａｓｎ ２８４，Ｇｌｎ ３１１，Ｐｒｏ ３１３，Ｌｙｓ ３１５．のいずれかに対応する位置に異なるアミノ酸を有する構造モチーフ内に少なくとも１つの異なるアミノ酸残基を有する、請求項１から８２のいずれか一項に記載の方法。
【請求項９１】
工程（ａ）で提供される前記ＧＰＣＲ変異体が、その対応する親受容体と比較した場合、図１１に記載のラットニューロテンシン受容体の番号付けによる以下の位置：Ａｌａ ６９，Ｌｅｕ ７２，Ａｌａ ７３，Ａｌａ ８６，Ａｌａ ９０，Ｓｅｒ １００，Ｈｉｓ １０３，Ｓｅｒ １０８，Ｌｅｕ １０９，Ｌｅｕ １１１，Ａｓｐ １１３，Ｉｌｅ １１６，Ａｌａ １２０，Ａｓｐ １３９，Ｐｈｅ １４７，Ａｌａ １５５，Ｖａｌ １６５，Ｇｌｕ １６６，Ｌｙｓ １７６，Ａｌａ １７７，Ｔｈｒ １７９，Ｍｅｔ １８１，Ｓｅｒ １８２，Ａｒｇ １８３，Ｐｈｅ １８９，Ｌｅｕ ２０５，Ｔｈｒ ２０７，Ｇｌｙ ２０９，Ｇｌｙ ２１５，Ｖａｌ ２２９，Ｍｅｔ ２５０，Ｉｌｅ ２５３，Ｌｅｕ ２５６，Ｉｌｅ ２６０，Ａｓｎ ２６２，Ｖａｌ ２６８，Ａｓｎ ２７０，Ｔｈｒ ２７９，Ｍｅｔ ２９３，Ｔｈｒ ２９４，Ｇｌｙ ３０６，Ｌｅｕ ３０８，Ｖａｌ ３０９，Ｌｅｕ ３１０，Ｖａｌ ３１３，Ｐｈｅ ３４２，Ａｓｐ ３４５，Ｔｙｒ ３４９，Ｔｙｒ ３５１，Ａｌａ ３５６，Ｐｈｅ ３５８，Ｖａｌ ３６０，Ｓｅｒ ３６２，Ａｓｎ ３７０，Ｓｅｒ ３７３，Ｐｈｅ ３８０，Ａｌａ ３８５，Ｃｙｓ ３８６，Ｐｒｏ ３８９，Ｇｌｙ ３９０，Ｔｒｐ ３９１，Ａｒｇ ３９２，Ｈｉｓ ３９３，Ａｒｇ ３９５，Ｌｙｓ ３９７，Ｐｒｏ ３９９．の任意の１つ又は複数に対応する位置に異なるアミノ酸を有するニューロテンシン受容体変異体である、請求項１から８２のいずれか一項に記載の方法。
【請求項９２】
前記ニューロテンシン受容体変異体が、図１１に記載のラットニューロテンシン受容体の配列と少なくとも２０％同一であるアミノ酸配列を有する、請求項９１に記載の方法。
【請求項９３】
工程（ａ）で提供される前記ＧＰＣＲ変異体がニューロテンシン受容体変異体であって、前記受容体変異体が、その親受容体と比較して、図１１に記載のラットニューロテンシン受容体の番号付けによる以下の位置：Ａｌａ ６９，Ｌｅｕ ７２，Ａｌａ ７３，Ａｌａ ８６，Ａｌａ ９０，Ｓｅｒ １００，Ｈｉｓ １０３，Ｓｅｒ １０８，Ｌｅｕ １０９，Ｌｅｕ １１１，Ａｓｐ １１３，Ｉｌｅ １１６，Ａｌａ １２０，Ａｓｐ １３９，Ｐｈｅ １４７，Ａｌａ １５５，Ｖａｌ １６５，Ｇｌｕ １６６，Ｌｙｓ １７６，Ａｌａ １７７，Ｔｈｒ １７９，Ｍｅｔ １８１，Ｓｅｒ １８２，Ａｒｇ １８３，Ｐｈｅ １８９，Ｌｅｕ ２０５，Ｔｈｒ ２０７，Ｇｌｙ ２０９，Ｇｌｙ ２１５，Ｖａｌ ２２９，Ｍｅｔ ２５０，Ｉｌｅ ２５３，Ｌｅｕ ２５６，Ｉｌｅ ２６０，Ａｓｎ ２６２，Ｖａｌ ２６８，Ａｓｎ ２７０，Ｔｈｒ ２７９，Ｍｅｔ ２９３，Ｔｈｒ ２９４，Ｇｌｙ ３０６，Ｌｅｕ ３０８，Ｖａｌ ３０９，Ｌｅｕ ３１０，Ｖａｌ ３１３，Ｐｈｅ ３４２，Ａｓｐ ３４５，Ｔｙｒ ３４９，Ｔｙｒ ３５１，Ａｌａ ３５６，Ｐｈｅ ３５８，Ｖａｌ ３６０，Ｓｅｒ ３６２，Ａｓｎ ３７０，Ｓｅｒ ３７３，Ｐｈｅ ３８０，Ａｌａ ３８５，Ｃｙｓ ３８６，Ｐｒｏ ３８９，Ｇｌｙ ３９０，Ｔｒｐ ３９１，Ａｒｇ ３９２，Ｈｉｓ ３９３，Ａｒｇ ３９５，Ｌｙｓ ３９７，Ｐｒｏ ３９９．のいずれかに対応する位置に異なるアミノ酸を有する構造モチーフ内に少なくとも１つの異なるアミノ酸残基を有する、請求項１から８２のいずれか一項に記載のＧＰＣＲ変異体。
【請求項９４】
工程（ａ）で提供される前記ＧＰＣＲ変異体が、対応する野生型ムスカリン受容体と比較した場合、図１７に記載のヒトムスカリン受容体の番号付けによる以下の位置：Ｌｅｕ ６５，Ｍｅｔ １４５，Ｌｅｕ ３９９，Ｉｌｅ ３８３及びＭｅｔ ３８４の任意の１つ又は複数に対応する位置に異なるアミノ酸を有するムスカリン受容体変異体である、請求項１から８２のいずれか一項に記載の方法。
【請求項９５】
前記ムスカリン受容体変異体が、図１７に記載のラットニューロテンシン受容体の配列と少なくとも２０％同一であるアミノ酸配列を有する、請求項９４に記載の方法。
【請求項９６】
工程（ａ）で提供される前記ＧＰＣＲ変異体がムスカリン受容体変異体であって、前記受容体変異体が、その親受容体と比較して、図１７に記載のヒトムスカリン受容体の番号付けによる以下の位置：Ｌｅｕ ６５，Ｍｅｔ １４５，Ｌｅｕ ３９９，Ｉｌｅ ３８３及びＭｅｔ ３８４のいずれかに対応する位置に異なるアミノ酸を有する構造モチーフ内に少なくとも１つの異なるアミノ酸残基を有する、請求項１から８２のいずれか一項に記載の方法。
【請求項９７】
ＧＰＣＲの結合パートナーを生産する方法であって、請求項１から９６のいずれか一項に記載の方法を実施することによって同定可能な結合パートナーを合成する工程を含む方法。
【請求項９８】
請求項１から９７に記載の方法のいずれかによって得られる結合パートナー。
【請求項９９】
前記結合パートナーが立体構造特異的である、請求項９８に記載の結合パートナー。
【請求項１００】
前記結合パートナーが、ポリペプチド；アンチカリン；ペプチド；抗体；キメラ抗体；一本鎖抗体；アプタマー；ダルピン；Ｆａｂ、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆｖ、ｓｃＦｖ若しくはｄＡｂ抗体断片；低分子；天然生成物；アフィボディ；ペプチドミメティック；核酸；ペプチド核酸分子；脂質；炭水化物；アンキリンリピートタンパク質、アルマジロリピートタンパク質、ロイシンリッチタンパク質、テトラリオペプチドリピートタンパク質若しくは設計アンキリンリピートタンパク質（ＤＡＲＰｉｎ）を含むモジュールフレームワークに基づくタンパク質；又はリポカリン若しくはフィブロネクチンドメイン又はヒトγクリスタリン若しくはヒトユビキチンのいずれかに基づくアフィリンスカフォールドに基づくタンパク質のいずれかである、請求項９８又は９９に記載の結合パートナー。
【請求項１０１】
前記結合パートナーが抗体である、請求項１００に記載の結合パートナー。
【請求項１０２】
前記結合パートナーに対する前記ＧＰＣＲ変異体の結合親和性が、前記結合パートナーに対する前記親ＧＰＣＲの結合親和性と実質的に同一であるか又はそれよりも大きい、請求項９８から１０１のいずれか一項に記載の結合パートナー。
【請求項１０３】
親ＧＰＣＲのＧＰＣＲ変異体を含むバイオセンサーであって、前記ＧＰＣＲ変異体が親ＧＰＣＲと比較して特定の立体構造で増大した安定性を有し、且つ、標的物質が前記ＧＰＣＲ変異体に結合した際に検出可能なシグナルが生成される、バイオセンサー。
【請求項１０４】
前記ＧＰＣＲ変異体が、請求項４５から８２のいずれか一項で規定されるように提供される、請求項１０３に記載のバイオセンサー。
【請求項１０５】
前記ＧＰＣＲ変異体が、請求項８３から９６のいずれか一項で規定されるものである、請求項１０３又は１０４に記載のバイオセンサー。
【請求項１０６】
前記検出可能なシグナルが、色の変化；蛍光；エバネッセンス；表面プラズモン共鳴；電気伝導度若しくは電荷分離；紫外、可視若しくは赤外吸収；発光；化学発光；電気化学発光；蛍光異方性；蛍光強度；蛍光寿命；蛍光偏光；蛍光エネルギー移動；分子量；電子スピン共鳴；核磁気共鳴；流体力学的容積若しくは半径；比重；シンチレーション；電界効果抵抗；電気インピーダンス；音響インピーダンス；量子消失；共鳴散乱；蛍光クエンチング；蛍光相関分光法；音響負荷；音響せん断波速度；結合力；又は界面応力のいずれかである、請求項１０３から１０５のいずれか一項に記載のバイオセンサー。
【請求項１０７】
前記バイオセンサーが、水晶膜厚計バイオセンサー、エバネッセント波バイオセンサー、プレーナー導波路バイオセンサー、表面ラマンセンサー、又は表面プラズモン共鳴バイオセンサーなどのフローベースのバイオセンサーである、請求項１０３から１０６のいずれか一項に記載のバイオセンサー。
【請求項１０８】
前記標的物質が、分子、生体分子、ペプチド、タンパク質、炭水化物、脂質、ＧＰＣＲリガンド、合成分子、薬剤、薬剤代謝産物又は疾患バイオマーカーのいずれかである、請求項１０３から１０７のいずれか一項に記載のバイオセンサー。
【図１】
【図２】
【図３】
【図４】
【図５】
【図６】
【図７】
【図８】
【図９Ａ】
【図９Ｂ】
【図１０Ａ】
【図１０Ｂ】
【図１１Ａ】
【図１１Ｂ】
【図１２】
【図１３Ａ】
【図１３Ｂ】
【図１４】
【図１５】
【図１６】
【図１７Ａ】
【図１７Ｂ】
【図１７Ｃ】
【図１８】
【図１９】
【図２０】
【図２１】
【図２２】
【図２３】
【図２４】
【図２５】
【図２６】
【図２７】
【図２８Ａ】
【図２８Ｂ】
【図２９】
【図３０Ａ】
【図３０Ｂ】
【図３１Ａ】
【図３１Ｂ】
【図３２】
【図３３】
【図３４】
【図３５】
【図３６】
【図３７】
【図３８】
【図３９】
【図４０】
【図４１】
【図４２】
【図４３】
【図４４】
【図４５】
【図２】
【図３】
【図４】
【図５】
【図６】
【図７】
【図８】
【図９Ａ】
【図９Ｂ】
【図１０Ａ】
【図１０Ｂ】
【図１１Ａ】
【図１１Ｂ】
【図１２】
【図１３Ａ】
【図１３Ｂ】
【図１４】
【図１５】
【図１６】
【図１７Ａ】
【図１７Ｂ】
【図１７Ｃ】
【図１８】
【図１９】
【図２０】
【図２１】
【図２２】
【図２３】
【図２４】
【図２５】
【図２６】
【図２７】
【図２８Ａ】
【図２８Ｂ】
【図２９】
【図３０Ａ】
【図３０Ｂ】
【図３１Ａ】
【図３１Ｂ】
【図３２】
【図３３】
【図３４】
【図３５】
【図３６】
【図３７】
【図３８】
【図３９】
【図４０】
【図４１】
【図４２】
【図４３】
【図４４】
【図４５】
【公表番号】特表２０１１−５０８８７５（Ｐ２０１１−５０８８７５Ａ）
【公表日】平成２３年３月１７日（２０１１．３．１７）
【国際特許分類】
【出願番号】特願２０１０−５３８９０２（Ｐ２０１０−５３８９０２）
【出願日】平成２０年１２月１９日（２００８．１２．１９）
【国際出願番号】ＰＣＴ／ＧＢ２００８／００４２２３
【国際公開番号】ＷＯ２００９／０８１１３６
【国際公開日】平成２１年７月２日（２００９．７．２）
【出願人】（５１０１７２８７１）ヘプテアズ セラピューティクス リミテッド (1)
【氏名又は名称原語表記】ＨＥＰＴＡＲＥＳ ＴＨＥＲＡＰＥＵＴＩＣＳ ＬＩＭＩＴＥＤ
【住所又は居所原語表記】ＢｉｏＰａｒｋ， Ｂｒｏａｄｗａｔｅｒ Ｒｏａｄ， Ｗｅｌｗｙｎ Ｇａｒｄｅｎ Ｃｉｔｙ， Ｈｅｒｔｆｏｒｄｓｈｉｒｅ ＡＬ７ ３ＡＸ Ｕｎｉｔｅｄ Ｋｉｎｇｄｏｎ
【Ｆターム（参考）】
【公表日】平成２３年３月１７日（２０１１．３．１７）
【国際特許分類】
【出願日】平成２０年１２月１９日（２００８．１２．１９）
【国際出願番号】ＰＣＴ／ＧＢ２００８／００４２２３
【国際公開番号】ＷＯ２００９／０８１１３６
【国際公開日】平成２１年７月２日（２００９．７．２）
【出願人】（５１０１７２８７１）ヘプテアズ セラピューティクス リミテッド (1)
【氏名又は名称原語表記】ＨＥＰＴＡＲＥＳ ＴＨＥＲＡＰＥＵＴＩＣＳ ＬＩＭＩＴＥＤ
【住所又は居所原語表記】ＢｉｏＰａｒｋ， Ｂｒｏａｄｗａｔｅｒ Ｒｏａｄ， Ｗｅｌｗｙｎ Ｇａｒｄｅｎ Ｃｉｔｙ， Ｈｅｒｔｆｏｒｄｓｈｉｒｅ ＡＬ７ ３ＡＸ Ｕｎｉｔｅｄ Ｋｉｎｇｄｏｎ
【Ｆターム（参考）】
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