バクテリオファージ製剤およびその用途
汚染、浸潤、感染および感染性疾患などの細菌によって引き起こされるコロニー形成を治療するためのバクテリオファージ製剤であって、製剤は、アルカリ緩衝溶液中で少なくとも１つの界面活性剤と相まって、少なくとも１つの細菌株に対して特異的な有効性を有する少なくとも１つのバクテリオファージを有する。バクテリオファージは、ブドウ球菌種、シュードモナス菌種、連鎖球菌種、腸球菌種、エンテロバクター属の種、クレブシエラ菌種、プロテウス属の種、リステリア菌種およびサルモネラ菌種からなる群から選択された少なくとも１つの細菌に対する溶菌活性を有してよい。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、請求項１のプリアンブル（ｐｒｅａｍｂｌｅ）に準じたバクテリオファージ製剤（ｂａｃｔｅｒｉｏｐｈａｇｅ ｐｒｅｐａｒａｔｉｏｎ）およびにそれらの様々な用途に関する。
【背景技術】
【０００２】
欧州特許第０４１４３０４号明細書は、少なくとも１００粒子／ｍｌ（ｐａｒｔｉｃｌｅｓ／ｍＬ）の１以上の種類の細菌を溶菌することができるバクテリオファージ、非イオン界面活性剤および中性塩からなる水溶性組成物に由来するバクテリオファージ製剤を開示する。バクテリオファージは、ある種の抗生物質耐性菌（ａｎｔｉｂｉｏｔｉｃ−ｒｅｓｉｓｔａｎｔ ｂａｃｔｅｒｉａ）を溶解する周知の作用を有する。界面活性物質（ｓｕｒｆａｃｅ−ａｃｔｉｖｅ ｓｕｂｓｔａｎｃｅ）としての界面活性剤（ｓｕｒｆａｃｔａｎｔ）は、処理されるべき表面のぬれ性を改善し、また、可溶化（ｓｏｌｕｂｉｌｉｚｅ）およびよごれを除去する目的で使用される。中性塩は、保存性（ｓｔｏｒａｇｅ ｓｔａｂｉｌｉｔｙ）を改善すると言われている。中性塩は、主として０．０１から２．０重量％の塩化ナトリウムが用いられる。上記の組成物は、練り歯磨き、口内洗浄液、家庭にいる細菌（例えば、便器の内部に棲息する細菌）に対する家庭用洗浄剤、および、病原性皮膚細菌（ｐａｔｈｏｇｅｎｉｃ ｓｋｉｎ ｂａｃｔｅｒｉａ）に対するスキンケア製品として使用されている。ファージと相性のよい（ｐｈａｇｅ−ｃｏｍｐａｔｉｂｌｅ）香料、香味料、溶剤、染料、保存料、殺菌剤、吸着剤、充填剤およびその他の特定の用途に通常用いられる添加剤は、利用可能な添加剤（ｐｏｓｓｉｂｌｅ ａｄｄｉｔｉｏｎａｌ ａｄｄｉｔｉｖｅｓ）として用いられる。
【０００３】
さらに、欧州特許第０７００２４９号明細書および独国特許出願公開第１００１２０２６号明細書は、陽イオン界面活性剤としてのポリヘキサメチルビグアニド（ｐｏｌｙｈｅｘａｍｅｔｈｙｌ ｂｉｇｕａｎｉｄｅ）（ポリヘキサニド（ｐｏｌｙｈｅｘａｎｉｄｅ））が、高い殺菌活性（ａｎｔｉｓｅｐｔｉｃａｌｌｙ ｕｓａｂｌｅ ａｃｔｉｖｉｔｙ）と低い毒性とを同時に有することを開示する。これに基づき、この活性物質の複数の応用が開発され、市場に出ている。しかし、欧州特許第０７００２４９号明細書は、さらに、ポリヘキサニドのある種の細菌（特に、緑膿菌（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ））に対する活性が、例えば、黄色ブドウ球菌（Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ ａｕｒｅｕｓ）と比較して、ほぼ１０倍（ｂｙ ａ ｆａｃｔｏｒ ｏｆ ｎｅａｒｌｙ １０）低いことを指摘している。
【０００４】
欧州特許第０７００２４９号明細書の詳細な使用例において、外傷にポリヘキサニドを使用している間、相当量の活性が喪失し得ること、および、当該活性の喪失は外傷に存在するアルブミンによって引き起こされることが、さらに開示されている。発明者らが行ったアルブミンの影響に関する微生物学的試験（ｍｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ ｔｅｓｔｓ）においても、約１０倍の（ｂｙ ｔｈｅ ｆａｃｔｏｒ ｏｆ ａｂｏｕｔ １０）活性の喪失を確認している。ポリヘキサニドとは対象的に、最新の研究（Ｖａｕｔｚ Ｄ．ｅｔ ａｌ．： Ｌｙｔｉｃ ｅｆｆｅｃｔｉｖｅｎｅｓｓ ｏｆ ＭＲＳＡ−ｓｐｅｃｉｆｉｃ ｐｈａｇｅｓ ａｇａｉｎｓｔ ｔｈｅ ４１ ｄｅｆｉｎｅｄ ｎａｔｉｏｎａｌ ｒｅｆｅｒｅｎｃｅ ｓｔｒａｉｎｓ ａｎｄ １４３ ｃｌｉｎｉｃａｌ ＭＲＳＡ ｉｓｏｌａｔｅｓ． ＺｆＷ （２００７） ５：２８０−２８７を参照。）は、バクテリオファージについて言えば、アルブミン（ウシ血清アルブミン、ＢＳＡ）の溶菌活性が、同程度のＥ／Ｔ比および初期細菌濃度において、１から３より大きい対数値（ｂｙ ＞１ ｔｏ ＞３ ｌｏｇ ｓｔｅｐｓ）も増加したことを示している。
【０００５】
グラム陰性シュードモナス種（ｇｒａｍ−ｎｅｇａｔｉｖｅ Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ ｓｐｅｃｉｅｓ）、特に緑膿菌は、ヒトおよび動物への感染の原因である。グラム陽性菌であるブドウ球菌（Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｉ）は、ヒトの皮膚の状態に応じて、健康な皮膚の場合で２０％まで、例えば、アトピー性皮膚炎または特に外傷がある場合のように、前損傷のある皮膚（ｐｒｅｄａｍａｇｅｄ ｓｋｉｎ）の場合で１００％の確率で、ヒトにコロニーを形成する。さらに、ブドウ球菌は、もっとも頻繁に院内感染の原因となる原因物質の１つである。
【０００６】
院内感染（ｈｏｓｐｉｔａｌ−ａｃｑｕｉｒｅｄ ｉｎｆｅｃｔｉｏｎｓ）（ｎｏｓｏｃｏｍｉａｌ ｉｎｆｅｃｔｉｏｎｓ）は、院内で引き起こされる全ての合併症の大部分を占めており、それゆえ、患者に対する医療および介護の質に重要な影響を与える。集中治療室においてもっとも頻繁に発生する院内感染の種類は、人工呼吸器関連肺炎（ｖｅｎｔｉｌａｔｏｒ−ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ ｐｎｅｕｍｏｎｉａ）、外傷または外科的な治療介入による腹腔内感染（ｉｎｔｒａ−ａｂｄｏｍｉｎａｌ ｉｎｆｅｃｔｉｏｎｓ）および血管内の異物（ｉｎｔｒａｖａｓｃｕｌａｒ ｆｏｒｅｉｇｎ ｂｏｄｉｅｓ）によって引き起こされる菌血症（ｂａｃｔｅｒｅｍｉａｓ）である。
【０００７】
それゆえ、一般的に使用される抗生物質に対する耐性菌（ｓｔｒａｉｎｓ ｗｉｔｈ ｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ）の発生は、肺炎、敗血症、インプラント感染および外傷感染に関連して特に深刻な影響を与える。
【０００８】
メチシリン耐性黄色ブドウ球菌（ＭＲＳＡ）は、院内感染のもっとも重要な原因物質である。１９６３年に初めて発生してから、その出現率は世界的規模で増加してきた。その株（ｓｔｒａｉｎｓ）は欧州で蔓延しており、いくつかの株は世界中に蔓延している。ドイツでは、１９９５年から２００１年までに、黄色ブドウ球菌の全ての分離株のうちＭＲＳＡが占める割合が〜８％から〜２０％に増加した。この点について、ドイツにおけるＭＲＳＡの出現率は、調査結果（ＥＡＲＳＳ； ＰＥＧ； ＧＥＮＡＲＳ； ＳＡＲＩ； ＫＩＳＳ）によって左右され、特に、異なる病院におけるまたは一つの病院内におけるリスクエリアよって左右され、その出現率は０から３５％まで様々である。個々のケースにおいては、６０％にまで達したものもある。この点について、集中治療／外科病棟は、もっとも突出しており、ＭＲＳＡ感染による死亡率が高いことが立証されている［Ｍｅｌｚｅｒ Ｍ ｅｔ ａｌ．， Ｃｌｉｎ Ｉｎｆｅｃｔ Ｄｉｓ ２００３； ３７：１４５３−１４６０］。さらに、病院の外部においても、いわゆる地域感染型ＭＲＳＡ（ｃＭＲＳＡ）が発生している。ｃＭＲＳＡは、壊死性の皮膚／軟部組織感染症（ｎｅｃｒｏｔｉｚｉｎｇ ｓｋｉｎ／ｓｏｆｔ ｔｉｓｓｕｅ ｉｎｆｅｃｔｉｏｎｓ）および壊死性肺炎のような病原性特性（ｐａｔｈｏｇｅｎｉｃｉｔｙ ｐｒｏｐｅｒｔｉｅｓ）に関連し、伝染性の院内のＭＲＳＡ（ｅｐｉｄｅｍｉｃ ｎｏｓｏｃｏｍｉａｌ ＭＲＳＡ）とは、基本的に遺伝子型が異なる。マクロライド系抗生物質（ｍａｃｒｏｌｉｄｅｓ）、リンコサマイジン系抗生物質（ｌｉｎｃｏｓａｍｉｄｉｎｅｓ）、ゲンタマイシン（ｇｅｎｔａｍｉｃｉｎ）およびオキシテトラサイクリン（ｏｘｙｔｅｔｒａｃｙｃｌｉｎｅ）の一部に耐性のあるクローナルなＭＲＳＡライン（ｃｌｏｎａｌ ＭＲＳＡ ｌｉｎｅｓ）は、１９８０年代から次々と出現している。今日、病院の院内に広まっているＭＲＳＡの９０％以上はフルオロキノロン系抗生物質に対して耐性なので、フルオロキノロン系抗生物質の治療上の使用は、非耐性の黄色ブドウ球菌を除去し、それゆえ、ＭＲＳＡの広範囲に及ぶコロニー形成（ｅｘｔｅｎｓｉｖｅ ｃｏｌｏｎｉｚａｔｉｏｎ）の危険因子となる。試験をした分離株のうち０．０５％の分離株が、キヌプリスチン／ダルホプリスチンに耐性を示した。ＮＲＺ［Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｒｅｆｅｒｅｎｃｅ Ｃｅｎｔｅｒ ｆｏｒ ｔｈｅ Ｓｕｒｖｅｉｌｌａｎｃｅ ｏｆ Ｎｏｓｏｃｏｍｉａｌ Ｉｎｆｅｃｔｉｏｎｓ］によって実施されたドイツにおけるブドウ球菌の試験では、全てのＭＲＳＡは、リネゾリドに対して感性（ｓｕｓｃｅｐｔｉｂｌｅ）であった。その一方で、この活性物質に対しても、同様に、耐性の発達が考えられる。ＭＲＳＡは、グリコペプチド系抗生物質（ｇｌｙｃｏｐｅｐｔｉｄｅｓ）の可能なコンビネーション・パートナー（リファンピシン 約２％、フシジン酸ナトリウム 約２．５％）に対して耐性があるけれども、グリコペプチド系抗生物質（ＧＩＳＡ）に対して感性が減少したＭＲＳＡは、ドイツではまだ稀である。しかしながら、グリコペプチド系抗生物質による淘汰圧が続く状況下では、グリコペプチド系抗生物質に耐性を有するＭＲＳＡ（ＧＩＳＡ表現型（ｐｈｅｎｏｔｙｐｅ））も同様に、次第に蔓延していくであろう。
【０００９】
院内感染にかかわる他の多剤耐性菌種は、バンコマイシン低度耐性黄色ブドウ球菌（ＶＩＳＡ）種、バンコマイシン耐性黄色ブドウ球菌（ＶＲＳＡ）種、バンコマイシン／グリコペプチド耐性腸球菌（ＶＲＥ、ＧＲＥ）、ペニシリン耐性肺炎球菌、多剤耐性グラム陰性菌である。
【００１０】
抗生物質によるそのような細菌による感染との闘いはさておき、この１０年の間で、感染予防のためには、感染症を予防する目的で殺菌製剤（ａｎｔｉｓｅｐｔｉｃ ｐｒｅｐａｒａｔｉｏｎｓ）を用いて、望ましくない細菌叢（ｂａｃｔｅｒｉａｌ ｆｌｏｒａ）を除去することが、可能かつ実用的であることが明らかになった。健康保菌者に対するそのような消毒は、除染（ｄｅｃｏｎｔａｍｉｎａｔｉｏｎ）または除菌（ｄｅｃｏｌｏｎｉｚａｔｉｏｎ）という用語に反映されている。実際には、この目的のために、ビグアニド系（ｂｉｇｕａｎｉｄｅｓ）、ビスピリジン系（ｂｉｓｐｙｒｉｄｉｎｅｓ）、クロルヘキシジン（ｃｈｌｏｒｈｅｘｉｄｉｎｅ）、ベンザルコニウム（ｂｅｎｚａｌｋｏｎｉｕｍ ｃｈｌｏｒｉｄｅ）または第４級アンモニウム化合物（ｑｕａｔｅｒｎａｒｙ ａｍｍｏｎｉｕｍ ｃｏｍｐｏｕｎｄｓ）のような、様々な殺菌活性を有する物質（ａｎｔｉｓｅｐｔｉｃ ａｃｔｉｖｅ ｓｕｂｓｔａｎｃｅ）が用いられる。
【００１１】
バクテリオファージは、ＭＲＳＡの抗生物質療法およびＭＲＳＡ保菌の殺菌除染（ａｎｔｉｓｅｐｔｉｃ ｄｅｃｏｎｔａｍｉｎａｔｉｏｎ）の両方にとって、可能性のある代替手段として知られている。溶菌現象は、１９１５年にＴｗｏｒｔによって、また、１９１７年にｄ'Ｈｅｒｅｌｌｅによって、それぞれ独立に報告された。バクテリオファージは、分子遺伝学の進歩によってウイルスであると確認されている。バクテリオファージは、いずれの場合にも、自身のＤＮＡを細菌の細胞に注入することで、特定のただ一つの細菌種に感染する。次に、バクテリオファージは、細菌の代謝を、細胞内での２００もの新しいファージのデノボ合成へとすっかりシフトさせる。そして、細菌細胞が分裂する間に、この次の世代をリリースする。約１０００個に１個の細菌細胞において、ファージのＤＮＡが細菌ゲノムの中にただ融合され、細菌分裂の間にファージのＤＮＡが伝えられる。そして、特定の環境化においてのみ、ファージのＤＮＡが再び発症（ｖｉｒｕｌｅｎｔ）する。
【００１２】
ファージ療法は、１９２１年、黄色ブドウ球菌に対して初めて用いられた［Ｂｒｕｙｎｏｇｈｅ Ｒ ＆ Ｍａｉｓｉｎ Ｊ， Ｌａ Ｐｒｅｓｓｅ Ｍeｄｉｃａｌｅ １９２１， １１９５−１１９３］。それによって、感染した手術創部（ｉｎｆｅｃｔｅｄ ｓｕｒｇｉｃａｌ ｗｏｕｎｄｓ）が４８時間以内に治癒した。その後の世界大戦において、抗生物質の不足またはスルホンアミド耐性のために、バクテリオファージが術後創感染の治療に用いられた。ファージ療法中に自然に発生する菌耐性は、１９４３年に初めて報告された（Ｌｕｒｉａ ＳＥ ＆ Ｄｅｌｂｒuｃｋ Ｍ， Ｇｅｎｅｔｉｃｓ １９４３， ２８， ４９１−５１１）。ファージ療法については、特に東欧で出版された約３０の出版物しかない。それらの出版物によれば、１９６６年と１９９６年の間の抗生物質療法の最盛期から、緊急的な耐性状況ならびに術後創感染の治療および予防において、ファージが用いられた。黄色ブドウ球菌に感染したマウスにおけるより最近の研究は、動物実験におけるファージ療法の有効性を繰り返し確認した（Ｍａｔｓｕｚａｋｉ ｅｔ ａｌ．， Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｉｎｆｅｃｔｉｏｕｓ Ｄｉｓｅａｓｅｓ ２００３， １８７， ６１３−６２４）。
【００１３】
バクテリオファージはマクロファージによって異物として短時間の間に除去されるので、ファージ療法を使用している間の問題点は、抗生物質と同様、主として、体内でのバクテリオファージの安定性の小ささに起因した。
【００１４】
現在のところ、ファージ療法に対して、２つの異なるアプローチが進められている。一方においては、遺伝子組み換えによってより効果的な、できれば、最強に（ｏｍｎｉｐｏｔｅｎｔｌｙ）効果的な種類のファージを作り出す努力がなされている（Ｍｅｒｒｉｌ ＣＲ ｅｔ ａｌ．， Ｎａｔｕｒｅ Ｒｅｖｉｅｗｓ Ｄｒｕｇ Ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ ２００３， ２， ４８９−４９７； Ｋｒｙｌｏｖ ＶＮ， Ｒｕｓｓｉａｎ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｇｅｎｅｔｉｃｓ ２００１， ３７， ７１５−７３０； Ｂｒｏｘｍｅｙｅｒ Ｌ ｅｔ ａｌ．， Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｉｎｆｅｃｔｉｏｕｓ Ｄｉｓｅａｓｅｓ ２００２， １８６， １１５５−１１６０）。これとは対照的なアプローチが、いわゆるクラシカルトリートメントアプローチである。クラシカルトリートメントアプローチは、環境中から分離された、自然に発生するファージを用いる。自然に発生するファージは混合物なので、種々の細菌分離株または異なる細菌種に対して有効である（Ｂａｒｒｏｗ ＰＡ ＆ Ｓｏｏｔｈｉｌｌ ＪＳ， Ｔｒｅｎｄｓ ｉｎ Ｍｉｒｃｏｂｉｏｌｏｇｙ １９９７， ５， ２６８−２７１； Ｓｏｏｔｈｉｌｌ ＪＳ， Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｍｅｄｉｃａｌ Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇｙ １９９２， ３７， ２５８−２６１）。
【００１５】
米国特許出願公開第２００２／０００１５９０号明細書において、ミオウイルス科（ｆａｍｉｌｙ Ｍｙｏｖｉｒｉｄａｅ）、具体的にはＴｗｏｒｔの菌種から選択されたバクテリオファージが、ＭＲＳＡ菌株を効果的に抑制または殺菌することが記載されている。ファージは、水溶液もしくは緩衝液中またはポリマーマトリックス中で用いられる。
【００１６】
他の研究［Ｖａｕｔｚ Ｄ． ｅｔ ａｌ． ： Ｌｙｔｉｃ ｅｆｆｅｃｔｉｖｅｎｅｓｓ ｏｆ ＭＲＳＡ ｓｐｅｃｉｆｉｃ ｐｈａｇｅｓ ａｇａｉｎｓｔ ｔｈｅ ４１ ｄｅｆｉｎｅｄ ｎａｔｉｏｎａｌ ｒｅｆｅｒｅｎｃｅ ｓｔｒａｉｎｓ ａｎｄ １４３ ｃｌｉｎｉｃａｌ ＭＲＳＡ ｉｓｏｌａｔｅｓ． ＺｆＷ （２００７） ５：２８０−２８７］は、ヴェルニゲローデのロベルトコッホ研究所のドイツ国立資料センターにある４１のＭＲＳＡの全てのグループに対してはっきりと活性を示すファージがあるのかという、質的な限界に関する疑問に基づく。ファージは、天然の、すなわち、遺伝子を変更されていないウイルスの単独の混合物（ｅｘｃｌｕｓｉｖｅｌｙ ｍｉｘｔｕｒｅｓ）であった。この点について、ファージ溶液（ｐｈａｇｅ ｓｏｌｕｔｉｏｎｓ）は、４１のＭＲＳＡ菌株に対して、はっきりと活性を示した。
【００１７】
院内感染の問題は、病院職員にも同様に関連する。病院職員は、彼ら自身が病気でなくても、保菌者であり、それゆえ、細菌を撒き散らす。さらに、この問題は、医療機器、家具および備品にも関連する。これらには、多剤耐性菌を含むバクテリアが定着している可能性がある。このことは、病院の建物全体に影響する可能性もある。
【発明の概要】
【００１８】
それゆえ、本発明の第１の目的は、少なくとも１つの菌株、好ましくは既知の多剤耐性菌株の全てに対して高い効果を有し、貯蔵寿命（ｓｈｅｌｆ ｌｉｆｅ）に優れ、手が届きにくい（ｐｏｏｒｌｙ ａｃｃｅｓｓｉｂｌｅ）場所を含めて治療されるべき表面によく分散させることができるバクテリオファージ製剤を提供することにある。
【００１９】
この目的は請求項１に関するバクテリオファージ製剤によって達成することができる。上記のバクテリオファージ製剤の有利な実施形態および改良は、従属項に記載される。
【００２０】
本発明の他の目的は、鼻喉エリア、皮膚および粘膜エリア、泌尿生殖器エリアならびに目エリアにおいて、治療または予防の抗菌性用途のための薬物であって、特に、外傷および外傷エリアにおいて使用することができる薬物を創出するバクテリオファージ製剤を提供することにある。
【００２１】
本発明の他の目的は、抗菌性用途、例えば、内科医および病院職員の手の殺菌だけでなく、殺菌の対象となる物の殺菌に適した、殺菌剤（ｄｉｓｉｎｆｅｃｔａｎｔ）を提供することにある。
【００２２】
これらの目的は、請求項１２から請求項２０に示された特徴によって達成することができる。
【発明を実施するための形態】
【００２３】
一方、界面活性物質の機能は、皮膚の上、外傷もしくは同様に手が届きにくい（ｉｎａｃｃｅｓｓｉｂｌｅ）他の場所および体の空洞（ｃａｖｉｔｉｅｓ）（例えば、鼻喉または泌尿生殖器エリア）の中、ならびに、例えば荒れた表面もしくは狭い割れ目のような手が届きにくい表面上の細菌への、バクテリオファージの拡散もしくは浸透を可能または容易にすることである。これにより、先行技術と比較して、より効果的に、細菌を徹底的に減少させることができる。
【００２４】
ポリヘキサミドのような陽イオン界面活性剤は、特に優れた界面活性剤であることがわかった。
【００２５】
優れた貯蔵寿命および有効性の増加は、請求項１に示されたアルカリ性の緩衝溶液によって達成することができる。バクテリオファージは、中性または酸性のｐＨと比較してアルカリ性の環境においてより良好に貯蔵することができるだけでなく（即ち、活性の損失がより少ないだけでなく）、ｐＨが７．５以上のアルカリ性の範囲において、例えばポリヘキサミドとの組合せにおいて、溶菌すべき細菌に対してより大きな有効性を示す。
【００２６】
非常に低濃度のポリヘキサミドは、細菌に対して抑止的な効果しかなく、それらを殺菌することはない。一方、これらのポリヘキサミド濃度では、バクテリオファージの品質は低下せず、活性も低下しない。その結果、ポリヘキサミドによって抑制された細菌は、ポリヘキサミドによって阻害されないバクテリオファージによって、引き続き溶菌されうる。
【００２７】
それゆえ、実用的な用途において、細菌は局地的に高濃度のポリヘキサミドによって素早く殺菌されるか、または、非常に低濃度のポリヘキサミドによって抑制された後、バクテリオファージによって溶菌される。
【００２８】
バクテリオファージが良好な細菌学的な効果を得ることができるか否かは、細菌の表面に適切なレセプタ（ｒｅｃｅｐｔｏｒ）を見付けることができるか否かに依存する。これに関連して、界面活性剤、酵素、アルコール、アルギン酸塩（ａｌｇｉｎａｔｅｓ）のような洗浄物質（ｃｌｅａｎｓｉｎｇ ｓｕｂｓｔａｎｃｅｓ）および低周波の超音波と、バクテリオファージとの組合せに効果がある（ｐｏｓｉｔｉｖｅ）ことがわかった。これらのコンビネーション・パートナー（ｃｏｍｂｉｎａｔｉｏｎ ｐａｒｔｎｅｒｓ）は、抗菌性の抑制剤（ａｎｔｉｓｅｐｔｉｃ ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｓ）およびバクテリオファージの細菌への浸透しやすさ、または、低周波の超音波の場合には、機械的（ｍｅｃｈａｎｉｃａｌ）／機械‐音響（ｍｅｃｈａｎｏ−ａｃｏｕｓｔｉｃ）作用によって、細菌の特定のレセプタへの到達しやすさを改善する。
【００２９】
極めて低濃度の抗菌性物質（ａｎｔｉｍｉｃｒｏｂｉａｌ ｓｕｂｓｔａｎｃｅｓ）は、細菌を破壊的するのではなく、抑制するので、バクテリオファージは、抑制された細菌細胞を複製（ｒｅｐｌｉｃａｔｉｏｎ）に利用して、最後には、細菌細胞を溶菌することができる。
【００３０】
さらに、バクテリオファージと、先行技術と比較してはるかに小さな濃度範囲（抑制効果を有する範囲）の抗菌作用を有する化学物質（ａｎｔｉｍｉｃｒｏｂｉａｌｌｙ ａｃｔｉｎｇ ｃｈｅｍｉｃａｌ ｓｕｂｓｔａｎｃｅｓ）とを組み合わせることで、バクテリオファージが、抗菌性化学物質（ａｎｔｉｍｉｃｒｏｂｉａｌ ｃｈｅｍｉｃａｌ ｓｕｂｓｔａｎｃｅｓ）の有効性における既知のギャップを縮めることができる。
【００３１】
さらに、バクテリオファージ製剤が低周波の超音波と共に用いられた場合には、殺菌中にバクテリオファージの作用が実質的に改善される可能性がある。低周波の超音波は、１２０ｋＨｚより低い周波数レンジ内にあり、０．０５〜１．５Ｗ／ｃｍ２の範囲に出力パワーを有することが好ましい。これにより、バクテリオファージ製剤が、殺菌されるべき表面上により分散し、汚れの粒子（ｄｉｒｔ ｐａｒｔｉｃｌｅｓ）がばらばらになる。その結果、バクテリオファージが、戦うべき細菌に到達しやすくなる。
【００３２】
バクテリオファージ製剤を、使用前または使用中に、より高い温度に加熱することで、より一層効果を改善することができる。上記の温度範囲は、２０度から４５度の間であることが好ましい。
【００３３】
それゆえ、本発明により、細菌の定着または感染、特に、例えばメチシリン耐性黄色ブドウ球菌（ＭＲＳＡ）のような抗生物質耐性菌耐性菌による、皮膚、粘膜、体の開口および空洞、外傷またはその他同様に手が届きにくい身体の部位へのコロニー形成を、強烈に減少させることができる。
【００３４】
界面活性物質として、陽イオン界面活性剤を用いることが好ましい。殺菌効果（ａｎｔｉｓｅｐｔｉｃ ｅｆｆｅｃｔ）のある他の物質、アルコール、および／または、酵素もまた用いられてよい。
【００３５】
この点について、好ましくは、少なくとも１つの多価の（ｐｏｌｙｖａｌｅｎｔ）バクテリオファージ株とともに、少なくとも１つの種特異的（ｓｐｅｃｉｅｓ−ｓｐｅｃｉｆｉｃ）バクテリオファージの個体群（ｐｏｐｕｌａｔｉｏｎ）を有する「バクテリオファージ・プール」が用いられてよい。バクテリオファージ・プールは、コロニーを形成している細菌（ｃｏｌｏｎｉｚｉｎｇ ｂａｃｔｅｒｉａ）に対して特異的に（ｓｐｅｃｉｆｉｃａｌｌｙ）作用する。
【００３６】
特定の場合において異なる細菌種に有効なバクテリオファージの混合物が、異なる細菌株によるコロニー形成（ｃｏｌｏｎｉｚａｔｉｏｎ）に対するバクテリオファージ・プールとして用いられてよい。
【００３７】
バクテリオファージの個体群は、遺伝子が変更されていないバクテリオファージ（ｇｅｎｅｔｉｃａｌｌｙ ｕｎｍｏｄｉｆｉｅｄ ｂａｃｔｅｒｉｏｐｈａｇｅｓ）からなることが好ましい。自然に発生するバクテリオファージであることが特に好ましい。一方、遺伝子が組み換えられたバクテリオファージ（ｇｅｎｅｔｉｃａｌｌｙ ｍｏｄｉｆｉｅｄ ｂａｃｔｅｒｉｏｐｈａｇｅｓ）も当然用いられてよい。
【００３８】
バクテリオファージ・プールの中で、異なる細菌種に対して活性を有するバクテリオファージの個体群が組み合わせられてよい。
【００３９】
バクテリオファージ・プールに適したバクテリオファージとして、溶菌的に活性な（ｌｙｔｉｃａｌｌｙ ａｃｔｉｖｅ）バクテリオファージ、後に溶菌化サイクル（ｌｙｔｉｃ ｃｙｃｌｅ）に入る溶原性の（ｌｙｓｏｇｅｎｉｃ）バクテリオファージおよび細菌に対して有害な物質を生成する非細胞溶解性（ｎｏｎ−ｌｙｔｉｃ）のバクテリオファージを例示することができる。溶菌的に活性な（ｌｙｔｉｃａｌｌｙ ａｃｔｉｖｅ）バクテリオファージが特に好ましい。
【００４０】
バクテリオファージは、当業者にとって既知の方法で、病院排水から回収され、滴下試験（ｄｒｏｐ ｔｅｓｔ）または有効性のためのプラーク形成単位［ＰＦＵ］試験を用いて、少なくとも１つの標準菌株（ｂａｃｔｅｒｉａｌ ｒｅｆｅｒｅｎｃｅ ｓｔｒａｉｎ）、好ましくは、５から２０の標準菌株のそれぞれに対する活性が検査される。
【００４１】
１つの菌種の異なる分離株に対して有効な多価のバクテリオファージであることが好ましい。
【００４２】
溶菌的に活性なバクテリオファージは、適切な細菌中で培養された培養菌であることが好ましい。上記の細菌は、ブドウ球菌種およびシュードモナス菌種であることが好ましい。得られた溶解物（ｌｙｓａｔｅｓ）は、既知の方法でさらに処理され、そこからバクテリオファージ・プールが生産される。上記のプールは、もはや、生きた組織（ｌｉｖｉｎｇ ｏｒｇａｎｉｓｍｓ）、毒素（ｔｏｘｉｎｓ）または細菌細胞壁の破片を含まないはずである。例えば、溶解物は、これらの条件に合うように、限外ろ過法および／または超遠心分離法のような既知の方法によって、精製することができる。
【００４３】
バクテリオファージまたはその他の本発明の投薬形態は、アンプルまたはその他の容器に詰められてよい。容器中のバクテリオファージの適切なタイター（ｔｉｔｅｒｓ）は、試験株の一定の細菌数を溶菌するのに適した事前希釈（ｐｒｅｄｉｌｕｔｉｏｎ）を決定することで、決定してよい。本発明の一実施形態において、バクテリオファージ・プールは、特異的に活性なバクテリオファージを少なくとも１０３ＰＦＵ、好ましくは１０６から１０１０ＰＦＵ、さらに好ましくは１０７から１０９ＰＦＵ含むように調整される。
【００４４】
バクテリオファージ・プールの種特異性を決定する目的で、様々な菌種の適切な標準菌株を用いて、バクテリオファージの溶菌試験が実施される。
【００４５】
バクテリオファージ・プールは、アルカリ性のｐＨ範囲における緩衝塩との組み合わせにより、安定化される。ｐＨの値は、７．５と９．５の間であればよく、好ましくは８から９．５であり、さらに好ましくは８．２から９である。
【００４６】
バクテリオファージ・プールは、少なくとも１つの界面活性物質と併用して用いられる。適切な界面活性物質には、とりわけ、界面活性剤、アルコール、殺菌および消毒作用のある物質、洗浄作用のある物質、酵素、防腐剤（ｐｒｅｓｅｒｖａｔｉｖｅｓ）、低周波の超音波の利用、およびこれらの組み合わせが含まれる。
【００４７】
適切な界面活性剤は、好ましくは、ベタイン（ｂｅｔａｉｎｅｓ）またはサルタイン（ｓｕｌｔａｉｎｅｓ）のような両性界面活性剤（ａｍｐｈｏｔｅｒｉｃ ｓｕｒｆａｃｔａｎｔｓ）である。この点について、炭素数が５から２１、好ましくは１０から１５、さらに好ましくは１１から１３であるアルキル鎖を有するベタインを用いることが好ましい。ウンデシレン酸アミドプロピルベタイン（ｕｎｄｅｃｙｌｅｎｉｃ ａｃｉｄ ａｍｉｄｏｐｒｏｐｙｌ ｂｅｔａｉｎｅ）およびココアミドプロピルベタイン（ｃｏｃａｍｉｄｏｐｒｏｐｙｌ ｂｅｔａｉｎｅ）が特に好ましい。この点について、界面活性剤は、０．００１から１０．０重量％、好ましくは０．００３から５．０重量％、さらに好ましくは０．００５から２．０重量％、さらに好ましくは０．００５から０．１重量％の濃度で、バクテリオファージと組み合わせて用いられる。
【００４８】
適切なアルコールは、水溶性のアルコールであり、Ｃ１からＣ４のアルコールが好ましい。エタノール、イソプロパノールおよびｎ−プロパノールが特に好ましい。この点について、バクテリオファージと組み合わせるために、アルコールは、０．１から２５．０重量％、特に好ましくは１．０から１０重量％の濃度で添加される。
【００４９】
適切な殺菌・消毒用試薬（ａｎｔｉｓｅｐｔｉｃ， ｄｉｓｉｎｆｅｃｔｉｏｎ ａｇｅｎｔｓ）および防腐剤は、組織適合性物質（ｔｉｓｓｕｅ−ｃｏｍｐａｔｉｂｌｅ ｓｕｂｓｔａｎｃｅｓ）が特に好ましく、特に、ビグアニド（ｂｉｇｕａｎｉｄｅｓ）、ビスピリジン（ｂｉｓｐｙｒｉｄｉｎｅｓ）、フェノキシエタノール（ｐｈｅｎｏｘｙｅｔｈａｎｏｌ）、第４級アンモニウム化合物（ｑｕａｔｅｒｎａｒｙ ａｍｍｏｎｉｕｍ ｃｏｍｐｏｕｎｄｓ）、トシルクロルアミドナトリウム（ｔｏｓｙｌｃｈｌｏｒａｍｉｄｅ ｓｏｄｉｕｍ）およびこれらの組み合わせが好ましい。特に好ましいビグアニドは、ポリヘキサメチルビグアニド（ｐｏｌｙｈｅｘａｍｅｔｈｙｌ ｂｉｇｕａｎｉｄｅ）（ポリヘキサニド（ｐｏｌｙｈｅｘａｎｉｄｅ））およびクロルヘキシジン（ｃｈｌｏｒｈｅｘｉｄｉｎｅ）である。特に好ましいビスピリジンは、オクタニジン二塩酸塩（ｏｃｔｅｎｉｄｉｎｅ ｄｉｈｙｄｒｏｃｈｌｏｒｉｄｅ）である。特に好ましい第４級アンモニウム化合物は、塩化ベンザルコニウム（ｂｅｎｚａｌｋｏｎｉｕｍ ｃｈｌｏｒｉｄｅ）である。
【００５０】
抗菌・殺菌剤（ａｎｔｉｓｅｐｔｉｃ ｄｉｓｉｎｆｅｃｔａｎｔｓ）および防腐剤は、ファージの調合中に、０．０００００１から１．０重量％の濃度で添加される。この点について、ビグアニドが、好ましくは０．０００００１から１．０重量％、より好ましくは０．０００００１から０．３重量％の濃度で用いられる。ビスピリジンは、好ましくは０．０１から５．０重量％、さらに好ましくは０．５から２．０重量％の濃度で用いられる。フェノキシエタノールは、好ましくは０．０５から５．０重量％、さらに好ましくは０．５から２．０重量％の濃度で用いられる。第４級アンモニウム化合物は、好ましくは０．０１から１０重量％、さらに好ましくは０．０５から１．０重量％の濃度で用いられる。トシルクロルアミドナトリウム（ヨーロッパ薬局方 ４版、クロラミンＴ（Ｃｈｌｏｒａｍｉｎｅ Ｔ））は、０．００１から１重量％、好ましくは０．０１から０．５重量％の濃度で、特に好ましく用いられる。
【００５１】
酵素およびアルギン酸塩は、特に外傷の治療において、単独でまたはバクテリオファージ・プールと一緒に、洗浄剤として用いられる。
【００５２】
好ましい酵素は、ストレプトキナーゼ（ｓｔｒｅｐｔａｓｅ）、ウロキナーゼ（ｕｒｏｋｉｎａｓｅ）およびリポオキシゲナーゼ（ｌｉｐｏｘｉｄａｓｅ）のほかに、トリプシン（ｔｒｙｐｓｉｎ）、コラゲナーゼＮＢ１およびＮＢ４（ｃｏｌｌａｇｅｎａｓｅｓ ＮＢ１ ａｎｄ ＮＢ４）ならびにパンクレアチン（ｐａｎｃｒｅａｔｉｎ）である。酵素は、以下の濃度でバクテリオファージ・プールに添加される。−リポオキシゲナーゼは、０・０１から１．０ｍｇ／ｍｌ、好ましくは１．０ｍｇ／ｍｌである。−トリプシンは、０．２から４ｍｇ／ｍｌ、好ましくは２ｍｇ／ｍｌである。−ストレプトキナーゼは、５，０００から１００，０００ＩＵ／ｍｌ、好ましくは１０，０００ＩＵ／ｍｌである。−ウロキナーゼは、５，０００ＩＵ／ｍｌである。−ＮＢ１コラゲナーゼは、１から１０ＰＺ−Ｕ／ｍｌ、好ましくは６ＰＺ−Ｕ／ｍｌである。−ＮＢ４コラゲナーゼは、１から１０ＰＺ−Ｕ／ｍｌ、好ましくは６ＰＺ−Ｕ／ｍｌである。−パンクレアチンは、０．５から５ｍｇ／ｍｌ、好ましくは２．５ｍｇ／ｍｌである。
【００５３】
次のアルギン酸塩が、バクテリオファージ・プールに添加されてよい。−アルギン酸ナトリウム（ｓｏｄｉｕｍ ａｌｇｉｎａｔｅｓ）。−アルギン酸カルシウムナトリウム（ｓｏｄｉｕｍ−ｃａｌｃｉｕｍ ａｌｇｉｎａｔｅｓ）。−アルギン酸カルシウム（ｃａｌｃｉｕｍ ａｌｇｉｎａｔｅｓ）。
【００５４】
上述の製剤（ｆｏｒｍｕｌａｔｉｏｎｓ）は、既知の製剤調整方法によって調剤され、医薬品として、表面、特に皮膚および外傷に用いられてよい。
【００５５】
１２０ｋＨｚより小さく、好ましくは３０から１００ｋＨｚの周波数レンジ内にあり、０．０５〜１．５Ｗ／ｃｍ２の出力パワーを有する低周波の超音波は、皮膚、粘膜および外傷に使用している間の、バクテリオファージおよび／またはポリヘキサミドとの組み合わせにおいて、相加作用およびある程度の相乗効果を示した。
【００５６】
サブアクアルユース（ｓｕｂａｑｕａｌ ｕｓｅ）における０．８から３ＭＨｚの超音波治療を適用して、外傷治癒を促進することは、何度も文献に掲載されている［Ｒａｄａｎｄｔ， Ｒ． Ｒ．： Ｌｏｗ−ｆｒｅｑｕｅｎｃｙ ｕｌｔｒａｓｏｕｎｄ ｉｎ ｗｏｕｎｄ ｈｅａｌｉｎｇ． Ｐｈｙｓ Ｍｅｄ Ｒｅｈａｂ Ｋｕｒｏｒ． Ｔｈｉｅｍｅ Ｖｅｒｌａｇ Ｓｔｕｔｔｇａｒｔ ／ Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ， ＩＳＳＮ ０９４０−６６８９ （２００１） １１：４１−５０］。このことからわかるように、超音波は例えば、３段階の外傷治癒プロセス、すなわち、組織表面への機械的な作用、そこに定着している微生物への機械−音響的な作用、および、組織層の深部における温熱効果もしくは非温熱効果（ｎｏｎ−ｔｈｅｒｍａｌ ｅｆｆｅｃｔｓ）に影響を与える。
【００５７】
特に、７０ｋＨｚから１０ＭＨｚの間の超音波と、抗生物質（ゲンタマイシン）との組み合わせによる生物膜（ｂｉｏｆｉｌｍｓ）中の緑膿菌（Ｐ． ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ）の殺菌効果が、インビトロ（ｉｎ ｖｉｔｒｏ）で研究されている［Ｑｉａｎ Ｚ， Ｓａｇｅｒｓ ＲＤ， Ｐｉｔｔ ＷＧ． Ｔｈｅ ｅｆｆｅｃｔ ｏｆ ｕｌｔｒａｓｏｎｉｃ ｆｒｅｑｕｅｎｃｙ ｕｐｏｎ ｅｎｈａｎｃｅｄ ｋｉｌｌｉｎｇ ｏｆ Ｐ． ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ ｂｉｏｆｉｌｍｓ． Ａｎｎ Ｂｉｏｍｅｄ Ｅｎｇ １９９７； ２５，１：６９−７６］。この点に関して、結果として、超音波治療単独では、微生物の著しい減少を引き起こさなかった。しかしながら、超音波および抗生物質の組み合わせを用いたところ、全ての周波数において、対照群（抗生物質単独）と比較して活性が著しく増加することが明らかになった。超音波の周波数に対する明瞭な相関関係があり、７０ｋＨｚより低い領域で、２５０％を超える効果の増加が見られた（生体音響学的効果（ｂｉｏａｃｏｕｓｔｉｃ ｅｆｆｅｃｔ））。
【００５８】
以下に示す低周波の超音波が、バクテリオファージ・プールと組み合わせて用いられてよい。−出力周波数レンジが１２０ｋＨｚより小さく、出力が０．０５から１．５Ｗ／ｃｍ２の超音波。−出力周波数レンジが１００ｋＨｚより小さく、出力が０．０５から１．５Ｗ／ｃｍ２の超音波。−出力周波数レンジが７０ｋＨｚより小さく、出力が０．０５から１．０Ｗ／ｃｍ２の超音波。
【００５９】
この点に関して、界面活性物質または低周波の超音波と併用されるバクテリオファージ・プールの適切な適用形態（ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎ ｆｏｒｍｓ）は、ゲルの他に、溶液（ｓｏｌｕｔｉｏｎｓ）、洗浄液（ｉｒｒｉｇａｔｉｏｎ ｓｏｌｕｔｉｏｎｓ）、織物材料もしくは合成繊維でできた（創傷）被覆材（ｄｒｅｓｓｉｎｇｓ）、または、これらの組み合わせである。無菌の適用形態（ｓｔｅｒｉｌｅ ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎ ｆｏｒｍｓ）が好ましい。この場合、当業者にとって既知である従来型の方法によって、滅菌（ｓｔｅｒｉｌｉｚａｔｉｏｎ）してよい。
【００６０】
適切な溶液は、好ましくは水溶液であり、他の有効成分（ａｃｔｉｖｅ ｓｕｂｓｔａｎｃｅｓ）、特に、洗浄活性物質（ｗａｓｈ−ａｃｔｉｖｅ）および殺菌物質（ａｎｔｉｓｅｐｔｉｃ ｓｕｂｓｔａｎｃｅｓ）を含んでよい。これらの溶液は、特に、（例えば病院の手術室または集中治療室内の）表面の殺菌・消毒に予防的に用いられてよい。
【００６１】
適切な洗浄液は、好ましくは水溶液であり、好ましくは殺菌に適して、皮膚への忍容性に優れる（ｗｅｌｌ ｔｏｌｅｒａｔｅｄ ｂｙ ｔｈｅ ｓｋｉｎ）付加的な有効成分を含んでよい。さらに、洗浄液は、適切なｐＨおよび生理食塩（ｐｈｙｓｉｏｌｏｇｉｃａｌ ｓａｌｔ ｃｏｎｔｅｎｔ）を含む緩衝化した等浸透圧溶液（ｉｓｏ−ｏｓｍｏｔｉｃ ｓｏｌｕｔｉｏｎｓ）を含んでよい。
【００６２】
適切な（創傷）被覆材は、例えば、従来型のコットンガーゼ、合成繊維材料または他の充填剤（ｂｕｌｋ ａｇｅｎｔｓ）のような織物材料で構成されてよい。
【００６３】
適切なゲルは、好ましくは、グリセロール、ポリマーまたはこれらの組み合わせを含む。ポリマーは、好ましくは酢酸セルロース誘導体であり、さらに好ましくは、アクリル酸のポリマーの他に、ヒドロキシアルキルセルロースアセテート（ｈｙｄｒｏｘｙａｌｋｙｌｃｅｌｌｕｌｏｓｅ ａｃｅｔａｔｅ）、特に、ヒドロキシエチルセルロースアセテート（ｈｙｄｒｏｘｙｅｔｈｙｌｃｅｌｌｕｌｏｓｅ ａｃｅｔａｔｅ）およびヒドロキシプロピルセルロースアセテート（ｈｙｄｒｏｘｙｐｒｏｐｙｌｃｅｌｌｕｌｏｓｅ ａｃｅｔａｔ）である。さらに好ましくは、ポリマーは、アクリル酸のホモポリマー（ｈｏｍｏｐｏｌｙｍｅｒｓ）であってよく、上記ポリマーは、ペンタエリスリトールアリルエーテル（ｐｅｎｔａｅｒｙｔｈｒｉｔｏｌ ａｌｌｙｌ ｅｔｈｅｒ）、スクロースアリルエーテル（ｓｕｃｒｏｓｅ ａｌｌｙｌ ｅｔｈｅｒ）、プロピレンアリルエーテル（ｐｒｏｐｙｌｅｎｅ ａｌｌｙｌ ｅｔｈｅｒ）（カルボマー（ｃａｒｂｏｍｅｒ））で架橋されてよい。
【００６４】
適切なゲルは、１．０から１０．０重量％、好ましくは５．０から８．０重量％の濃度でグリセロールを含み、および／または、０．１から１０．０重量％、好ましくは２．０から６．０重量％の濃度でポリマーを含む。
【００６５】
本発明のバクテリオファージ製剤は、界面活性物質との併用で、皮膚および粘膜、好ましくは鼻喉エリアおよび泌尿生殖器エリア、外傷エリアおよび目エリアにおける、治療または予防の抗菌性用途のための医薬の創出に用いられる。
【００６６】
本発明の製剤（ｆｏｒｍｕｌａｔｉｏｎｓ）および用途は、例えば、ブドウ球菌（Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ）、連鎖球菌（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ）、腸球菌（Ｅｎｔｅｒｏｃｏｃｃｕｓ）、シュードモナス菌（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ）、エンテロバクター属（Ｅｎｔｅｒｏｂａｃｔｅｒ）、大腸菌群（ｃｏｌｉｆｏｒｍ ｂａｃｔｅｒｉａ）、クレブシエラ菌（Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ）、プロテウス属（Ｐｒｏｔｅｕｓ）、リステリア菌（Ｌｉｓｔｅｒｉａ）またはサルモネラ菌（Ｓａｌｍｏｎｅｌｌａ）の菌株のような細菌を除去するのに適している。 製剤および方法は、抗生物質耐性細菌の菌株、好ましくはブドウ球菌およびシュードモナス菌、特に好ましくは黄色ブドウ球菌および緑膿菌を除去するのに適している。 製剤および方法は、特にメチシリン耐性黄色ブドウ球菌（ＭＲＳＡ）の除去に極めて適している。 本発明の好ましい実施形態において、製剤および方法は、皮膚、好ましくは鼻喉エリアや外傷の中のような手が届きにくい場所のＭＲＳＡのコロニー形成を取り除くのに用いられる。
【００６７】
以上に記載された本発明の実施形態は、次の実施例においてより詳細に記載される。しかしながら、本発明は、そのような実施例に限定されない。
【００６８】
バクテリオファージ（ここでは、黄色ブドウ球菌に対して有効）および界面活性物質（ここでは、１つ）からなる製剤の生産に関する実施例。
【００６９】
１．バクテリオファージの分離（ｉｓｏｌａｔｉｏｎ）および複製（ｒｅｐｌｉｃａｔｉｏｎ）。
収集株（ｓｔｒａｉｎ ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ）の中から、必要な標準バクテリオファージ（ｒｅｆｅｒｅｎｃｅ ｂａｃｔｅｒｉｏｐｈａｇｅｓ）および標準菌株（ｒｅｆｅｒｅｎｃｅ ｂａｃｔｅｒｉａｌ ｓｔｒａｉｎｓ）が調達される。
【００７０】
病院廃水からの液体試料を塩化カルシウムおよび塩化マグネシウムと組み合わせ、ろ過した後、細菌ろ過（ｓｔｅｒｉｌｅ−ｆｉｌｔｅｒｅｄ）することで、新たなバクテリオファージを回収してよい。液体試料のＰＦＵ試験が実施され、バクテリオファージが、黄色ブドウ球菌に対して特異的な溶菌活性を有するか否かが検査される。このために、いずれの場合にも、栄養素を含む液体培地（ｌｉｑｕｉｄ ｎｕｔｒｉｅｎｔ ｍｅｄｉｕｍ）で希釈され、対数増殖期まで培養されたメチシリン耐性黄色ブドウ球菌（ｌｏｇ−ｐｈａｓｅ ｃｕｌｔｕｒｅ ｏｆ ｍｅｔｈｉｃｉｌｌｉｎ−ｒｅｓｉｓｔａｎｔ Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ ａｕｒｅｕｓ）に、細菌ろ過された試料が添加される。
【００７１】
黄色ブドウ球菌に特異的なファージを複製（ｒｅｐｌｉｃａｔｉｏｎ）するために、振盪されているエルレンマイヤーフラスコの中のバクテリオファージに、対数増殖期にある特定の標準菌株の新鮮な細菌培養物（ｆｒｅｓｈ ｂａｃｔｅｒｉａｌ ｃｕｌｔｕｒｅ）が添加される。次に、耐性が形成されることを防止する目的で、浄化された懸濁液（ｃｌａｒｉｆｉｅｄ ｓｕｓｐｅｎｓｉｏｎ）が遠心分離され、上澄みが細菌ろ過される。ＰＦＵ試験における濃度が１０１０ファージ／ｍｌになるまで、複製段階が繰り返される。
【００７２】
全ての関連のあるバクテリオファージ（バクテリオファージ・プール）が、混合物中に、ＰＦＵ試験において１０１０／ｍｌの濃度で検出できるようになるまで、全ての黄色ブドウ球菌株およびそれらの特異的なファージについて、この手順が繰り返される。
【００７３】
２．作用の特異性（ａｃｔｉｏｎ ｓｐｅｃｉｆｉｃｉｔｙ）の決定。
種特異性を決定する目的で、得られたファージ懸濁液（ｐｈａｇｅ ｓｕｓｐｅｎｓｉｏｎｓ）が、Ｅ． ｃｏｌｉ ＡＴＣＣ １１２２９およびＰ． ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ ＡＴＣＣ １５４４２の細菌株に対するＰＦＵ試験に用いられる。この点に関して、試験に用いられたファージ懸濁液の対照菌株（ｃｏｎｔｒｏｌ ｓｔｒａｉｎｓ）に対する溶菌活性は、検出されなくてよい。
【００７４】
３．製剤（ファージ製剤）の生産。
バクテリオファージ・プールおよび界面活性物質からファージ製剤を生産する目的で、プールされた（ｐｏｏｌｅｄ）ファージ懸濁液からの、限界濃度（ｅｎｄ ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ）１０７バクテリオファージ／ｍｌであり、０．１重量％のウンデシレン酸アミドプロピルベタインを含む溶液が、アルカリ緩衝液を用いて安定化され、培養され、細菌ろ過される。
【００７５】
４．バクテリオファージの製剤中での濃縮。
ファージ製剤は、ＰＦＵ試験において、関連する全ての黄色ブドウ球菌の標準菌株に対する活性を検査される。この点に関して、プールされたファージ懸濁液の関連する全ての標準菌株に対する十分な有効性が確認されうる。
【００７６】
５．副作用試験（ａｄｖｅｒｓｅ ｒｅａｃｔｉｏｎ ｔｅｓｔｓ）。
生産されたバッチ（ｂａｔｃｈ）には、エンテロトキシン（ｅｎｔｅｒｏｔｏｘｉｎｓ）（ａ型−ｇ型、ｈ型およびｉ型）、ａ型およびｂ型のエクスフォリエイティブトキシン（ｅｘｆｏｌｉａｔｉｖｅ ｔｏｘｉｎｓ）、毒素性ショック症候群に関する毒素（ｔｏｘｉｎ）ならびにエンドトキシン（ｅｎｄｏｔｏｘｉｎｓ）に対する試験のほかに、毒性（ｔｏｘｉｃ）および刺激効果（ｉｒｒｉｔａｎｔ ｅｆｆｅｃｔｓ）に対する試験が実施される。
【技術分野】
【０００１】
本発明は、請求項１のプリアンブル（ｐｒｅａｍｂｌｅ）に準じたバクテリオファージ製剤（ｂａｃｔｅｒｉｏｐｈａｇｅ ｐｒｅｐａｒａｔｉｏｎ）およびにそれらの様々な用途に関する。
【背景技術】
【０００２】
欧州特許第０４１４３０４号明細書は、少なくとも１００粒子／ｍｌ（ｐａｒｔｉｃｌｅｓ／ｍＬ）の１以上の種類の細菌を溶菌することができるバクテリオファージ、非イオン界面活性剤および中性塩からなる水溶性組成物に由来するバクテリオファージ製剤を開示する。バクテリオファージは、ある種の抗生物質耐性菌（ａｎｔｉｂｉｏｔｉｃ−ｒｅｓｉｓｔａｎｔ ｂａｃｔｅｒｉａ）を溶解する周知の作用を有する。界面活性物質（ｓｕｒｆａｃｅ−ａｃｔｉｖｅ ｓｕｂｓｔａｎｃｅ）としての界面活性剤（ｓｕｒｆａｃｔａｎｔ）は、処理されるべき表面のぬれ性を改善し、また、可溶化（ｓｏｌｕｂｉｌｉｚｅ）およびよごれを除去する目的で使用される。中性塩は、保存性（ｓｔｏｒａｇｅ ｓｔａｂｉｌｉｔｙ）を改善すると言われている。中性塩は、主として０．０１から２．０重量％の塩化ナトリウムが用いられる。上記の組成物は、練り歯磨き、口内洗浄液、家庭にいる細菌（例えば、便器の内部に棲息する細菌）に対する家庭用洗浄剤、および、病原性皮膚細菌（ｐａｔｈｏｇｅｎｉｃ ｓｋｉｎ ｂａｃｔｅｒｉａ）に対するスキンケア製品として使用されている。ファージと相性のよい（ｐｈａｇｅ−ｃｏｍｐａｔｉｂｌｅ）香料、香味料、溶剤、染料、保存料、殺菌剤、吸着剤、充填剤およびその他の特定の用途に通常用いられる添加剤は、利用可能な添加剤（ｐｏｓｓｉｂｌｅ ａｄｄｉｔｉｏｎａｌ ａｄｄｉｔｉｖｅｓ）として用いられる。
【０００３】
さらに、欧州特許第０７００２４９号明細書および独国特許出願公開第１００１２０２６号明細書は、陽イオン界面活性剤としてのポリヘキサメチルビグアニド（ｐｏｌｙｈｅｘａｍｅｔｈｙｌ ｂｉｇｕａｎｉｄｅ）（ポリヘキサニド（ｐｏｌｙｈｅｘａｎｉｄｅ））が、高い殺菌活性（ａｎｔｉｓｅｐｔｉｃａｌｌｙ ｕｓａｂｌｅ ａｃｔｉｖｉｔｙ）と低い毒性とを同時に有することを開示する。これに基づき、この活性物質の複数の応用が開発され、市場に出ている。しかし、欧州特許第０７００２４９号明細書は、さらに、ポリヘキサニドのある種の細菌（特に、緑膿菌（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ））に対する活性が、例えば、黄色ブドウ球菌（Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ ａｕｒｅｕｓ）と比較して、ほぼ１０倍（ｂｙ ａ ｆａｃｔｏｒ ｏｆ ｎｅａｒｌｙ １０）低いことを指摘している。
【０００４】
欧州特許第０７００２４９号明細書の詳細な使用例において、外傷にポリヘキサニドを使用している間、相当量の活性が喪失し得ること、および、当該活性の喪失は外傷に存在するアルブミンによって引き起こされることが、さらに開示されている。発明者らが行ったアルブミンの影響に関する微生物学的試験（ｍｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ ｔｅｓｔｓ）においても、約１０倍の（ｂｙ ｔｈｅ ｆａｃｔｏｒ ｏｆ ａｂｏｕｔ １０）活性の喪失を確認している。ポリヘキサニドとは対象的に、最新の研究（Ｖａｕｔｚ Ｄ．ｅｔ ａｌ．： Ｌｙｔｉｃ ｅｆｆｅｃｔｉｖｅｎｅｓｓ ｏｆ ＭＲＳＡ−ｓｐｅｃｉｆｉｃ ｐｈａｇｅｓ ａｇａｉｎｓｔ ｔｈｅ ４１ ｄｅｆｉｎｅｄ ｎａｔｉｏｎａｌ ｒｅｆｅｒｅｎｃｅ ｓｔｒａｉｎｓ ａｎｄ １４３ ｃｌｉｎｉｃａｌ ＭＲＳＡ ｉｓｏｌａｔｅｓ． ＺｆＷ （２００７） ５：２８０−２８７を参照。）は、バクテリオファージについて言えば、アルブミン（ウシ血清アルブミン、ＢＳＡ）の溶菌活性が、同程度のＥ／Ｔ比および初期細菌濃度において、１から３より大きい対数値（ｂｙ ＞１ ｔｏ ＞３ ｌｏｇ ｓｔｅｐｓ）も増加したことを示している。
【０００５】
グラム陰性シュードモナス種（ｇｒａｍ−ｎｅｇａｔｉｖｅ Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ ｓｐｅｃｉｅｓ）、特に緑膿菌は、ヒトおよび動物への感染の原因である。グラム陽性菌であるブドウ球菌（Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｉ）は、ヒトの皮膚の状態に応じて、健康な皮膚の場合で２０％まで、例えば、アトピー性皮膚炎または特に外傷がある場合のように、前損傷のある皮膚（ｐｒｅｄａｍａｇｅｄ ｓｋｉｎ）の場合で１００％の確率で、ヒトにコロニーを形成する。さらに、ブドウ球菌は、もっとも頻繁に院内感染の原因となる原因物質の１つである。
【０００６】
院内感染（ｈｏｓｐｉｔａｌ−ａｃｑｕｉｒｅｄ ｉｎｆｅｃｔｉｏｎｓ）（ｎｏｓｏｃｏｍｉａｌ ｉｎｆｅｃｔｉｏｎｓ）は、院内で引き起こされる全ての合併症の大部分を占めており、それゆえ、患者に対する医療および介護の質に重要な影響を与える。集中治療室においてもっとも頻繁に発生する院内感染の種類は、人工呼吸器関連肺炎（ｖｅｎｔｉｌａｔｏｒ−ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ ｐｎｅｕｍｏｎｉａ）、外傷または外科的な治療介入による腹腔内感染（ｉｎｔｒａ−ａｂｄｏｍｉｎａｌ ｉｎｆｅｃｔｉｏｎｓ）および血管内の異物（ｉｎｔｒａｖａｓｃｕｌａｒ ｆｏｒｅｉｇｎ ｂｏｄｉｅｓ）によって引き起こされる菌血症（ｂａｃｔｅｒｅｍｉａｓ）である。
【０００７】
それゆえ、一般的に使用される抗生物質に対する耐性菌（ｓｔｒａｉｎｓ ｗｉｔｈ ｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ）の発生は、肺炎、敗血症、インプラント感染および外傷感染に関連して特に深刻な影響を与える。
【０００８】
メチシリン耐性黄色ブドウ球菌（ＭＲＳＡ）は、院内感染のもっとも重要な原因物質である。１９６３年に初めて発生してから、その出現率は世界的規模で増加してきた。その株（ｓｔｒａｉｎｓ）は欧州で蔓延しており、いくつかの株は世界中に蔓延している。ドイツでは、１９９５年から２００１年までに、黄色ブドウ球菌の全ての分離株のうちＭＲＳＡが占める割合が〜８％から〜２０％に増加した。この点について、ドイツにおけるＭＲＳＡの出現率は、調査結果（ＥＡＲＳＳ； ＰＥＧ； ＧＥＮＡＲＳ； ＳＡＲＩ； ＫＩＳＳ）によって左右され、特に、異なる病院におけるまたは一つの病院内におけるリスクエリアよって左右され、その出現率は０から３５％まで様々である。個々のケースにおいては、６０％にまで達したものもある。この点について、集中治療／外科病棟は、もっとも突出しており、ＭＲＳＡ感染による死亡率が高いことが立証されている［Ｍｅｌｚｅｒ Ｍ ｅｔ ａｌ．， Ｃｌｉｎ Ｉｎｆｅｃｔ Ｄｉｓ ２００３； ３７：１４５３−１４６０］。さらに、病院の外部においても、いわゆる地域感染型ＭＲＳＡ（ｃＭＲＳＡ）が発生している。ｃＭＲＳＡは、壊死性の皮膚／軟部組織感染症（ｎｅｃｒｏｔｉｚｉｎｇ ｓｋｉｎ／ｓｏｆｔ ｔｉｓｓｕｅ ｉｎｆｅｃｔｉｏｎｓ）および壊死性肺炎のような病原性特性（ｐａｔｈｏｇｅｎｉｃｉｔｙ ｐｒｏｐｅｒｔｉｅｓ）に関連し、伝染性の院内のＭＲＳＡ（ｅｐｉｄｅｍｉｃ ｎｏｓｏｃｏｍｉａｌ ＭＲＳＡ）とは、基本的に遺伝子型が異なる。マクロライド系抗生物質（ｍａｃｒｏｌｉｄｅｓ）、リンコサマイジン系抗生物質（ｌｉｎｃｏｓａｍｉｄｉｎｅｓ）、ゲンタマイシン（ｇｅｎｔａｍｉｃｉｎ）およびオキシテトラサイクリン（ｏｘｙｔｅｔｒａｃｙｃｌｉｎｅ）の一部に耐性のあるクローナルなＭＲＳＡライン（ｃｌｏｎａｌ ＭＲＳＡ ｌｉｎｅｓ）は、１９８０年代から次々と出現している。今日、病院の院内に広まっているＭＲＳＡの９０％以上はフルオロキノロン系抗生物質に対して耐性なので、フルオロキノロン系抗生物質の治療上の使用は、非耐性の黄色ブドウ球菌を除去し、それゆえ、ＭＲＳＡの広範囲に及ぶコロニー形成（ｅｘｔｅｎｓｉｖｅ ｃｏｌｏｎｉｚａｔｉｏｎ）の危険因子となる。試験をした分離株のうち０．０５％の分離株が、キヌプリスチン／ダルホプリスチンに耐性を示した。ＮＲＺ［Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｒｅｆｅｒｅｎｃｅ Ｃｅｎｔｅｒ ｆｏｒ ｔｈｅ Ｓｕｒｖｅｉｌｌａｎｃｅ ｏｆ Ｎｏｓｏｃｏｍｉａｌ Ｉｎｆｅｃｔｉｏｎｓ］によって実施されたドイツにおけるブドウ球菌の試験では、全てのＭＲＳＡは、リネゾリドに対して感性（ｓｕｓｃｅｐｔｉｂｌｅ）であった。その一方で、この活性物質に対しても、同様に、耐性の発達が考えられる。ＭＲＳＡは、グリコペプチド系抗生物質（ｇｌｙｃｏｐｅｐｔｉｄｅｓ）の可能なコンビネーション・パートナー（リファンピシン 約２％、フシジン酸ナトリウム 約２．５％）に対して耐性があるけれども、グリコペプチド系抗生物質（ＧＩＳＡ）に対して感性が減少したＭＲＳＡは、ドイツではまだ稀である。しかしながら、グリコペプチド系抗生物質による淘汰圧が続く状況下では、グリコペプチド系抗生物質に耐性を有するＭＲＳＡ（ＧＩＳＡ表現型（ｐｈｅｎｏｔｙｐｅ））も同様に、次第に蔓延していくであろう。
【０００９】
院内感染にかかわる他の多剤耐性菌種は、バンコマイシン低度耐性黄色ブドウ球菌（ＶＩＳＡ）種、バンコマイシン耐性黄色ブドウ球菌（ＶＲＳＡ）種、バンコマイシン／グリコペプチド耐性腸球菌（ＶＲＥ、ＧＲＥ）、ペニシリン耐性肺炎球菌、多剤耐性グラム陰性菌である。
【００１０】
抗生物質によるそのような細菌による感染との闘いはさておき、この１０年の間で、感染予防のためには、感染症を予防する目的で殺菌製剤（ａｎｔｉｓｅｐｔｉｃ ｐｒｅｐａｒａｔｉｏｎｓ）を用いて、望ましくない細菌叢（ｂａｃｔｅｒｉａｌ ｆｌｏｒａ）を除去することが、可能かつ実用的であることが明らかになった。健康保菌者に対するそのような消毒は、除染（ｄｅｃｏｎｔａｍｉｎａｔｉｏｎ）または除菌（ｄｅｃｏｌｏｎｉｚａｔｉｏｎ）という用語に反映されている。実際には、この目的のために、ビグアニド系（ｂｉｇｕａｎｉｄｅｓ）、ビスピリジン系（ｂｉｓｐｙｒｉｄｉｎｅｓ）、クロルヘキシジン（ｃｈｌｏｒｈｅｘｉｄｉｎｅ）、ベンザルコニウム（ｂｅｎｚａｌｋｏｎｉｕｍ ｃｈｌｏｒｉｄｅ）または第４級アンモニウム化合物（ｑｕａｔｅｒｎａｒｙ ａｍｍｏｎｉｕｍ ｃｏｍｐｏｕｎｄｓ）のような、様々な殺菌活性を有する物質（ａｎｔｉｓｅｐｔｉｃ ａｃｔｉｖｅ ｓｕｂｓｔａｎｃｅ）が用いられる。
【００１１】
バクテリオファージは、ＭＲＳＡの抗生物質療法およびＭＲＳＡ保菌の殺菌除染（ａｎｔｉｓｅｐｔｉｃ ｄｅｃｏｎｔａｍｉｎａｔｉｏｎ）の両方にとって、可能性のある代替手段として知られている。溶菌現象は、１９１５年にＴｗｏｒｔによって、また、１９１７年にｄ'Ｈｅｒｅｌｌｅによって、それぞれ独立に報告された。バクテリオファージは、分子遺伝学の進歩によってウイルスであると確認されている。バクテリオファージは、いずれの場合にも、自身のＤＮＡを細菌の細胞に注入することで、特定のただ一つの細菌種に感染する。次に、バクテリオファージは、細菌の代謝を、細胞内での２００もの新しいファージのデノボ合成へとすっかりシフトさせる。そして、細菌細胞が分裂する間に、この次の世代をリリースする。約１０００個に１個の細菌細胞において、ファージのＤＮＡが細菌ゲノムの中にただ融合され、細菌分裂の間にファージのＤＮＡが伝えられる。そして、特定の環境化においてのみ、ファージのＤＮＡが再び発症（ｖｉｒｕｌｅｎｔ）する。
【００１２】
ファージ療法は、１９２１年、黄色ブドウ球菌に対して初めて用いられた［Ｂｒｕｙｎｏｇｈｅ Ｒ ＆ Ｍａｉｓｉｎ Ｊ， Ｌａ Ｐｒｅｓｓｅ Ｍeｄｉｃａｌｅ １９２１， １１９５−１１９３］。それによって、感染した手術創部（ｉｎｆｅｃｔｅｄ ｓｕｒｇｉｃａｌ ｗｏｕｎｄｓ）が４８時間以内に治癒した。その後の世界大戦において、抗生物質の不足またはスルホンアミド耐性のために、バクテリオファージが術後創感染の治療に用いられた。ファージ療法中に自然に発生する菌耐性は、１９４３年に初めて報告された（Ｌｕｒｉａ ＳＥ ＆ Ｄｅｌｂｒuｃｋ Ｍ， Ｇｅｎｅｔｉｃｓ １９４３， ２８， ４９１−５１１）。ファージ療法については、特に東欧で出版された約３０の出版物しかない。それらの出版物によれば、１９６６年と１９９６年の間の抗生物質療法の最盛期から、緊急的な耐性状況ならびに術後創感染の治療および予防において、ファージが用いられた。黄色ブドウ球菌に感染したマウスにおけるより最近の研究は、動物実験におけるファージ療法の有効性を繰り返し確認した（Ｍａｔｓｕｚａｋｉ ｅｔ ａｌ．， Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｉｎｆｅｃｔｉｏｕｓ Ｄｉｓｅａｓｅｓ ２００３， １８７， ６１３−６２４）。
【００１３】
バクテリオファージはマクロファージによって異物として短時間の間に除去されるので、ファージ療法を使用している間の問題点は、抗生物質と同様、主として、体内でのバクテリオファージの安定性の小ささに起因した。
【００１４】
現在のところ、ファージ療法に対して、２つの異なるアプローチが進められている。一方においては、遺伝子組み換えによってより効果的な、できれば、最強に（ｏｍｎｉｐｏｔｅｎｔｌｙ）効果的な種類のファージを作り出す努力がなされている（Ｍｅｒｒｉｌ ＣＲ ｅｔ ａｌ．， Ｎａｔｕｒｅ Ｒｅｖｉｅｗｓ Ｄｒｕｇ Ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ ２００３， ２， ４８９−４９７； Ｋｒｙｌｏｖ ＶＮ， Ｒｕｓｓｉａｎ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｇｅｎｅｔｉｃｓ ２００１， ３７， ７１５−７３０； Ｂｒｏｘｍｅｙｅｒ Ｌ ｅｔ ａｌ．， Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｉｎｆｅｃｔｉｏｕｓ Ｄｉｓｅａｓｅｓ ２００２， １８６， １１５５−１１６０）。これとは対照的なアプローチが、いわゆるクラシカルトリートメントアプローチである。クラシカルトリートメントアプローチは、環境中から分離された、自然に発生するファージを用いる。自然に発生するファージは混合物なので、種々の細菌分離株または異なる細菌種に対して有効である（Ｂａｒｒｏｗ ＰＡ ＆ Ｓｏｏｔｈｉｌｌ ＪＳ， Ｔｒｅｎｄｓ ｉｎ Ｍｉｒｃｏｂｉｏｌｏｇｙ １９９７， ５， ２６８−２７１； Ｓｏｏｔｈｉｌｌ ＪＳ， Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｍｅｄｉｃａｌ Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇｙ １９９２， ３７， ２５８−２６１）。
【００１５】
米国特許出願公開第２００２／０００１５９０号明細書において、ミオウイルス科（ｆａｍｉｌｙ Ｍｙｏｖｉｒｉｄａｅ）、具体的にはＴｗｏｒｔの菌種から選択されたバクテリオファージが、ＭＲＳＡ菌株を効果的に抑制または殺菌することが記載されている。ファージは、水溶液もしくは緩衝液中またはポリマーマトリックス中で用いられる。
【００１６】
他の研究［Ｖａｕｔｚ Ｄ． ｅｔ ａｌ． ： Ｌｙｔｉｃ ｅｆｆｅｃｔｉｖｅｎｅｓｓ ｏｆ ＭＲＳＡ ｓｐｅｃｉｆｉｃ ｐｈａｇｅｓ ａｇａｉｎｓｔ ｔｈｅ ４１ ｄｅｆｉｎｅｄ ｎａｔｉｏｎａｌ ｒｅｆｅｒｅｎｃｅ ｓｔｒａｉｎｓ ａｎｄ １４３ ｃｌｉｎｉｃａｌ ＭＲＳＡ ｉｓｏｌａｔｅｓ． ＺｆＷ （２００７） ５：２８０−２８７］は、ヴェルニゲローデのロベルトコッホ研究所のドイツ国立資料センターにある４１のＭＲＳＡの全てのグループに対してはっきりと活性を示すファージがあるのかという、質的な限界に関する疑問に基づく。ファージは、天然の、すなわち、遺伝子を変更されていないウイルスの単独の混合物（ｅｘｃｌｕｓｉｖｅｌｙ ｍｉｘｔｕｒｅｓ）であった。この点について、ファージ溶液（ｐｈａｇｅ ｓｏｌｕｔｉｏｎｓ）は、４１のＭＲＳＡ菌株に対して、はっきりと活性を示した。
【００１７】
院内感染の問題は、病院職員にも同様に関連する。病院職員は、彼ら自身が病気でなくても、保菌者であり、それゆえ、細菌を撒き散らす。さらに、この問題は、医療機器、家具および備品にも関連する。これらには、多剤耐性菌を含むバクテリアが定着している可能性がある。このことは、病院の建物全体に影響する可能性もある。
【発明の概要】
【００１８】
それゆえ、本発明の第１の目的は、少なくとも１つの菌株、好ましくは既知の多剤耐性菌株の全てに対して高い効果を有し、貯蔵寿命（ｓｈｅｌｆ ｌｉｆｅ）に優れ、手が届きにくい（ｐｏｏｒｌｙ ａｃｃｅｓｓｉｂｌｅ）場所を含めて治療されるべき表面によく分散させることができるバクテリオファージ製剤を提供することにある。
【００１９】
この目的は請求項１に関するバクテリオファージ製剤によって達成することができる。上記のバクテリオファージ製剤の有利な実施形態および改良は、従属項に記載される。
【００２０】
本発明の他の目的は、鼻喉エリア、皮膚および粘膜エリア、泌尿生殖器エリアならびに目エリアにおいて、治療または予防の抗菌性用途のための薬物であって、特に、外傷および外傷エリアにおいて使用することができる薬物を創出するバクテリオファージ製剤を提供することにある。
【００２１】
本発明の他の目的は、抗菌性用途、例えば、内科医および病院職員の手の殺菌だけでなく、殺菌の対象となる物の殺菌に適した、殺菌剤（ｄｉｓｉｎｆｅｃｔａｎｔ）を提供することにある。
【００２２】
これらの目的は、請求項１２から請求項２０に示された特徴によって達成することができる。
【発明を実施するための形態】
【００２３】
一方、界面活性物質の機能は、皮膚の上、外傷もしくは同様に手が届きにくい（ｉｎａｃｃｅｓｓｉｂｌｅ）他の場所および体の空洞（ｃａｖｉｔｉｅｓ）（例えば、鼻喉または泌尿生殖器エリア）の中、ならびに、例えば荒れた表面もしくは狭い割れ目のような手が届きにくい表面上の細菌への、バクテリオファージの拡散もしくは浸透を可能または容易にすることである。これにより、先行技術と比較して、より効果的に、細菌を徹底的に減少させることができる。
【００２４】
ポリヘキサミドのような陽イオン界面活性剤は、特に優れた界面活性剤であることがわかった。
【００２５】
優れた貯蔵寿命および有効性の増加は、請求項１に示されたアルカリ性の緩衝溶液によって達成することができる。バクテリオファージは、中性または酸性のｐＨと比較してアルカリ性の環境においてより良好に貯蔵することができるだけでなく（即ち、活性の損失がより少ないだけでなく）、ｐＨが７．５以上のアルカリ性の範囲において、例えばポリヘキサミドとの組合せにおいて、溶菌すべき細菌に対してより大きな有効性を示す。
【００２６】
非常に低濃度のポリヘキサミドは、細菌に対して抑止的な効果しかなく、それらを殺菌することはない。一方、これらのポリヘキサミド濃度では、バクテリオファージの品質は低下せず、活性も低下しない。その結果、ポリヘキサミドによって抑制された細菌は、ポリヘキサミドによって阻害されないバクテリオファージによって、引き続き溶菌されうる。
【００２７】
それゆえ、実用的な用途において、細菌は局地的に高濃度のポリヘキサミドによって素早く殺菌されるか、または、非常に低濃度のポリヘキサミドによって抑制された後、バクテリオファージによって溶菌される。
【００２８】
バクテリオファージが良好な細菌学的な効果を得ることができるか否かは、細菌の表面に適切なレセプタ（ｒｅｃｅｐｔｏｒ）を見付けることができるか否かに依存する。これに関連して、界面活性剤、酵素、アルコール、アルギン酸塩（ａｌｇｉｎａｔｅｓ）のような洗浄物質（ｃｌｅａｎｓｉｎｇ ｓｕｂｓｔａｎｃｅｓ）および低周波の超音波と、バクテリオファージとの組合せに効果がある（ｐｏｓｉｔｉｖｅ）ことがわかった。これらのコンビネーション・パートナー（ｃｏｍｂｉｎａｔｉｏｎ ｐａｒｔｎｅｒｓ）は、抗菌性の抑制剤（ａｎｔｉｓｅｐｔｉｃ ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｓ）およびバクテリオファージの細菌への浸透しやすさ、または、低周波の超音波の場合には、機械的（ｍｅｃｈａｎｉｃａｌ）／機械‐音響（ｍｅｃｈａｎｏ−ａｃｏｕｓｔｉｃ）作用によって、細菌の特定のレセプタへの到達しやすさを改善する。
【００２９】
極めて低濃度の抗菌性物質（ａｎｔｉｍｉｃｒｏｂｉａｌ ｓｕｂｓｔａｎｃｅｓ）は、細菌を破壊的するのではなく、抑制するので、バクテリオファージは、抑制された細菌細胞を複製（ｒｅｐｌｉｃａｔｉｏｎ）に利用して、最後には、細菌細胞を溶菌することができる。
【００３０】
さらに、バクテリオファージと、先行技術と比較してはるかに小さな濃度範囲（抑制効果を有する範囲）の抗菌作用を有する化学物質（ａｎｔｉｍｉｃｒｏｂｉａｌｌｙ ａｃｔｉｎｇ ｃｈｅｍｉｃａｌ ｓｕｂｓｔａｎｃｅｓ）とを組み合わせることで、バクテリオファージが、抗菌性化学物質（ａｎｔｉｍｉｃｒｏｂｉａｌ ｃｈｅｍｉｃａｌ ｓｕｂｓｔａｎｃｅｓ）の有効性における既知のギャップを縮めることができる。
【００３１】
さらに、バクテリオファージ製剤が低周波の超音波と共に用いられた場合には、殺菌中にバクテリオファージの作用が実質的に改善される可能性がある。低周波の超音波は、１２０ｋＨｚより低い周波数レンジ内にあり、０．０５〜１．５Ｗ／ｃｍ２の範囲に出力パワーを有することが好ましい。これにより、バクテリオファージ製剤が、殺菌されるべき表面上により分散し、汚れの粒子（ｄｉｒｔ ｐａｒｔｉｃｌｅｓ）がばらばらになる。その結果、バクテリオファージが、戦うべき細菌に到達しやすくなる。
【００３２】
バクテリオファージ製剤を、使用前または使用中に、より高い温度に加熱することで、より一層効果を改善することができる。上記の温度範囲は、２０度から４５度の間であることが好ましい。
【００３３】
それゆえ、本発明により、細菌の定着または感染、特に、例えばメチシリン耐性黄色ブドウ球菌（ＭＲＳＡ）のような抗生物質耐性菌耐性菌による、皮膚、粘膜、体の開口および空洞、外傷またはその他同様に手が届きにくい身体の部位へのコロニー形成を、強烈に減少させることができる。
【００３４】
界面活性物質として、陽イオン界面活性剤を用いることが好ましい。殺菌効果（ａｎｔｉｓｅｐｔｉｃ ｅｆｆｅｃｔ）のある他の物質、アルコール、および／または、酵素もまた用いられてよい。
【００３５】
この点について、好ましくは、少なくとも１つの多価の（ｐｏｌｙｖａｌｅｎｔ）バクテリオファージ株とともに、少なくとも１つの種特異的（ｓｐｅｃｉｅｓ−ｓｐｅｃｉｆｉｃ）バクテリオファージの個体群（ｐｏｐｕｌａｔｉｏｎ）を有する「バクテリオファージ・プール」が用いられてよい。バクテリオファージ・プールは、コロニーを形成している細菌（ｃｏｌｏｎｉｚｉｎｇ ｂａｃｔｅｒｉａ）に対して特異的に（ｓｐｅｃｉｆｉｃａｌｌｙ）作用する。
【００３６】
特定の場合において異なる細菌種に有効なバクテリオファージの混合物が、異なる細菌株によるコロニー形成（ｃｏｌｏｎｉｚａｔｉｏｎ）に対するバクテリオファージ・プールとして用いられてよい。
【００３７】
バクテリオファージの個体群は、遺伝子が変更されていないバクテリオファージ（ｇｅｎｅｔｉｃａｌｌｙ ｕｎｍｏｄｉｆｉｅｄ ｂａｃｔｅｒｉｏｐｈａｇｅｓ）からなることが好ましい。自然に発生するバクテリオファージであることが特に好ましい。一方、遺伝子が組み換えられたバクテリオファージ（ｇｅｎｅｔｉｃａｌｌｙ ｍｏｄｉｆｉｅｄ ｂａｃｔｅｒｉｏｐｈａｇｅｓ）も当然用いられてよい。
【００３８】
バクテリオファージ・プールの中で、異なる細菌種に対して活性を有するバクテリオファージの個体群が組み合わせられてよい。
【００３９】
バクテリオファージ・プールに適したバクテリオファージとして、溶菌的に活性な（ｌｙｔｉｃａｌｌｙ ａｃｔｉｖｅ）バクテリオファージ、後に溶菌化サイクル（ｌｙｔｉｃ ｃｙｃｌｅ）に入る溶原性の（ｌｙｓｏｇｅｎｉｃ）バクテリオファージおよび細菌に対して有害な物質を生成する非細胞溶解性（ｎｏｎ−ｌｙｔｉｃ）のバクテリオファージを例示することができる。溶菌的に活性な（ｌｙｔｉｃａｌｌｙ ａｃｔｉｖｅ）バクテリオファージが特に好ましい。
【００４０】
バクテリオファージは、当業者にとって既知の方法で、病院排水から回収され、滴下試験（ｄｒｏｐ ｔｅｓｔ）または有効性のためのプラーク形成単位［ＰＦＵ］試験を用いて、少なくとも１つの標準菌株（ｂａｃｔｅｒｉａｌ ｒｅｆｅｒｅｎｃｅ ｓｔｒａｉｎ）、好ましくは、５から２０の標準菌株のそれぞれに対する活性が検査される。
【００４１】
１つの菌種の異なる分離株に対して有効な多価のバクテリオファージであることが好ましい。
【００４２】
溶菌的に活性なバクテリオファージは、適切な細菌中で培養された培養菌であることが好ましい。上記の細菌は、ブドウ球菌種およびシュードモナス菌種であることが好ましい。得られた溶解物（ｌｙｓａｔｅｓ）は、既知の方法でさらに処理され、そこからバクテリオファージ・プールが生産される。上記のプールは、もはや、生きた組織（ｌｉｖｉｎｇ ｏｒｇａｎｉｓｍｓ）、毒素（ｔｏｘｉｎｓ）または細菌細胞壁の破片を含まないはずである。例えば、溶解物は、これらの条件に合うように、限外ろ過法および／または超遠心分離法のような既知の方法によって、精製することができる。
【００４３】
バクテリオファージまたはその他の本発明の投薬形態は、アンプルまたはその他の容器に詰められてよい。容器中のバクテリオファージの適切なタイター（ｔｉｔｅｒｓ）は、試験株の一定の細菌数を溶菌するのに適した事前希釈（ｐｒｅｄｉｌｕｔｉｏｎ）を決定することで、決定してよい。本発明の一実施形態において、バクテリオファージ・プールは、特異的に活性なバクテリオファージを少なくとも１０３ＰＦＵ、好ましくは１０６から１０１０ＰＦＵ、さらに好ましくは１０７から１０９ＰＦＵ含むように調整される。
【００４４】
バクテリオファージ・プールの種特異性を決定する目的で、様々な菌種の適切な標準菌株を用いて、バクテリオファージの溶菌試験が実施される。
【００４５】
バクテリオファージ・プールは、アルカリ性のｐＨ範囲における緩衝塩との組み合わせにより、安定化される。ｐＨの値は、７．５と９．５の間であればよく、好ましくは８から９．５であり、さらに好ましくは８．２から９である。
【００４６】
バクテリオファージ・プールは、少なくとも１つの界面活性物質と併用して用いられる。適切な界面活性物質には、とりわけ、界面活性剤、アルコール、殺菌および消毒作用のある物質、洗浄作用のある物質、酵素、防腐剤（ｐｒｅｓｅｒｖａｔｉｖｅｓ）、低周波の超音波の利用、およびこれらの組み合わせが含まれる。
【００４７】
適切な界面活性剤は、好ましくは、ベタイン（ｂｅｔａｉｎｅｓ）またはサルタイン（ｓｕｌｔａｉｎｅｓ）のような両性界面活性剤（ａｍｐｈｏｔｅｒｉｃ ｓｕｒｆａｃｔａｎｔｓ）である。この点について、炭素数が５から２１、好ましくは１０から１５、さらに好ましくは１１から１３であるアルキル鎖を有するベタインを用いることが好ましい。ウンデシレン酸アミドプロピルベタイン（ｕｎｄｅｃｙｌｅｎｉｃ ａｃｉｄ ａｍｉｄｏｐｒｏｐｙｌ ｂｅｔａｉｎｅ）およびココアミドプロピルベタイン（ｃｏｃａｍｉｄｏｐｒｏｐｙｌ ｂｅｔａｉｎｅ）が特に好ましい。この点について、界面活性剤は、０．００１から１０．０重量％、好ましくは０．００３から５．０重量％、さらに好ましくは０．００５から２．０重量％、さらに好ましくは０．００５から０．１重量％の濃度で、バクテリオファージと組み合わせて用いられる。
【００４８】
適切なアルコールは、水溶性のアルコールであり、Ｃ１からＣ４のアルコールが好ましい。エタノール、イソプロパノールおよびｎ−プロパノールが特に好ましい。この点について、バクテリオファージと組み合わせるために、アルコールは、０．１から２５．０重量％、特に好ましくは１．０から１０重量％の濃度で添加される。
【００４９】
適切な殺菌・消毒用試薬（ａｎｔｉｓｅｐｔｉｃ， ｄｉｓｉｎｆｅｃｔｉｏｎ ａｇｅｎｔｓ）および防腐剤は、組織適合性物質（ｔｉｓｓｕｅ−ｃｏｍｐａｔｉｂｌｅ ｓｕｂｓｔａｎｃｅｓ）が特に好ましく、特に、ビグアニド（ｂｉｇｕａｎｉｄｅｓ）、ビスピリジン（ｂｉｓｐｙｒｉｄｉｎｅｓ）、フェノキシエタノール（ｐｈｅｎｏｘｙｅｔｈａｎｏｌ）、第４級アンモニウム化合物（ｑｕａｔｅｒｎａｒｙ ａｍｍｏｎｉｕｍ ｃｏｍｐｏｕｎｄｓ）、トシルクロルアミドナトリウム（ｔｏｓｙｌｃｈｌｏｒａｍｉｄｅ ｓｏｄｉｕｍ）およびこれらの組み合わせが好ましい。特に好ましいビグアニドは、ポリヘキサメチルビグアニド（ｐｏｌｙｈｅｘａｍｅｔｈｙｌ ｂｉｇｕａｎｉｄｅ）（ポリヘキサニド（ｐｏｌｙｈｅｘａｎｉｄｅ））およびクロルヘキシジン（ｃｈｌｏｒｈｅｘｉｄｉｎｅ）である。特に好ましいビスピリジンは、オクタニジン二塩酸塩（ｏｃｔｅｎｉｄｉｎｅ ｄｉｈｙｄｒｏｃｈｌｏｒｉｄｅ）である。特に好ましい第４級アンモニウム化合物は、塩化ベンザルコニウム（ｂｅｎｚａｌｋｏｎｉｕｍ ｃｈｌｏｒｉｄｅ）である。
【００５０】
抗菌・殺菌剤（ａｎｔｉｓｅｐｔｉｃ ｄｉｓｉｎｆｅｃｔａｎｔｓ）および防腐剤は、ファージの調合中に、０．０００００１から１．０重量％の濃度で添加される。この点について、ビグアニドが、好ましくは０．０００００１から１．０重量％、より好ましくは０．０００００１から０．３重量％の濃度で用いられる。ビスピリジンは、好ましくは０．０１から５．０重量％、さらに好ましくは０．５から２．０重量％の濃度で用いられる。フェノキシエタノールは、好ましくは０．０５から５．０重量％、さらに好ましくは０．５から２．０重量％の濃度で用いられる。第４級アンモニウム化合物は、好ましくは０．０１から１０重量％、さらに好ましくは０．０５から１．０重量％の濃度で用いられる。トシルクロルアミドナトリウム（ヨーロッパ薬局方 ４版、クロラミンＴ（Ｃｈｌｏｒａｍｉｎｅ Ｔ））は、０．００１から１重量％、好ましくは０．０１から０．５重量％の濃度で、特に好ましく用いられる。
【００５１】
酵素およびアルギン酸塩は、特に外傷の治療において、単独でまたはバクテリオファージ・プールと一緒に、洗浄剤として用いられる。
【００５２】
好ましい酵素は、ストレプトキナーゼ（ｓｔｒｅｐｔａｓｅ）、ウロキナーゼ（ｕｒｏｋｉｎａｓｅ）およびリポオキシゲナーゼ（ｌｉｐｏｘｉｄａｓｅ）のほかに、トリプシン（ｔｒｙｐｓｉｎ）、コラゲナーゼＮＢ１およびＮＢ４（ｃｏｌｌａｇｅｎａｓｅｓ ＮＢ１ ａｎｄ ＮＢ４）ならびにパンクレアチン（ｐａｎｃｒｅａｔｉｎ）である。酵素は、以下の濃度でバクテリオファージ・プールに添加される。−リポオキシゲナーゼは、０・０１から１．０ｍｇ／ｍｌ、好ましくは１．０ｍｇ／ｍｌである。−トリプシンは、０．２から４ｍｇ／ｍｌ、好ましくは２ｍｇ／ｍｌである。−ストレプトキナーゼは、５，０００から１００，０００ＩＵ／ｍｌ、好ましくは１０，０００ＩＵ／ｍｌである。−ウロキナーゼは、５，０００ＩＵ／ｍｌである。−ＮＢ１コラゲナーゼは、１から１０ＰＺ−Ｕ／ｍｌ、好ましくは６ＰＺ−Ｕ／ｍｌである。−ＮＢ４コラゲナーゼは、１から１０ＰＺ−Ｕ／ｍｌ、好ましくは６ＰＺ−Ｕ／ｍｌである。−パンクレアチンは、０．５から５ｍｇ／ｍｌ、好ましくは２．５ｍｇ／ｍｌである。
【００５３】
次のアルギン酸塩が、バクテリオファージ・プールに添加されてよい。−アルギン酸ナトリウム（ｓｏｄｉｕｍ ａｌｇｉｎａｔｅｓ）。−アルギン酸カルシウムナトリウム（ｓｏｄｉｕｍ−ｃａｌｃｉｕｍ ａｌｇｉｎａｔｅｓ）。−アルギン酸カルシウム（ｃａｌｃｉｕｍ ａｌｇｉｎａｔｅｓ）。
【００５４】
上述の製剤（ｆｏｒｍｕｌａｔｉｏｎｓ）は、既知の製剤調整方法によって調剤され、医薬品として、表面、特に皮膚および外傷に用いられてよい。
【００５５】
１２０ｋＨｚより小さく、好ましくは３０から１００ｋＨｚの周波数レンジ内にあり、０．０５〜１．５Ｗ／ｃｍ２の出力パワーを有する低周波の超音波は、皮膚、粘膜および外傷に使用している間の、バクテリオファージおよび／またはポリヘキサミドとの組み合わせにおいて、相加作用およびある程度の相乗効果を示した。
【００５６】
サブアクアルユース（ｓｕｂａｑｕａｌ ｕｓｅ）における０．８から３ＭＨｚの超音波治療を適用して、外傷治癒を促進することは、何度も文献に掲載されている［Ｒａｄａｎｄｔ， Ｒ． Ｒ．： Ｌｏｗ−ｆｒｅｑｕｅｎｃｙ ｕｌｔｒａｓｏｕｎｄ ｉｎ ｗｏｕｎｄ ｈｅａｌｉｎｇ． Ｐｈｙｓ Ｍｅｄ Ｒｅｈａｂ Ｋｕｒｏｒ． Ｔｈｉｅｍｅ Ｖｅｒｌａｇ Ｓｔｕｔｔｇａｒｔ ／ Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ， ＩＳＳＮ ０９４０−６６８９ （２００１） １１：４１−５０］。このことからわかるように、超音波は例えば、３段階の外傷治癒プロセス、すなわち、組織表面への機械的な作用、そこに定着している微生物への機械−音響的な作用、および、組織層の深部における温熱効果もしくは非温熱効果（ｎｏｎ−ｔｈｅｒｍａｌ ｅｆｆｅｃｔｓ）に影響を与える。
【００５７】
特に、７０ｋＨｚから１０ＭＨｚの間の超音波と、抗生物質（ゲンタマイシン）との組み合わせによる生物膜（ｂｉｏｆｉｌｍｓ）中の緑膿菌（Ｐ． ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ）の殺菌効果が、インビトロ（ｉｎ ｖｉｔｒｏ）で研究されている［Ｑｉａｎ Ｚ， Ｓａｇｅｒｓ ＲＤ， Ｐｉｔｔ ＷＧ． Ｔｈｅ ｅｆｆｅｃｔ ｏｆ ｕｌｔｒａｓｏｎｉｃ ｆｒｅｑｕｅｎｃｙ ｕｐｏｎ ｅｎｈａｎｃｅｄ ｋｉｌｌｉｎｇ ｏｆ Ｐ． ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ ｂｉｏｆｉｌｍｓ． Ａｎｎ Ｂｉｏｍｅｄ Ｅｎｇ １９９７； ２５，１：６９−７６］。この点に関して、結果として、超音波治療単独では、微生物の著しい減少を引き起こさなかった。しかしながら、超音波および抗生物質の組み合わせを用いたところ、全ての周波数において、対照群（抗生物質単独）と比較して活性が著しく増加することが明らかになった。超音波の周波数に対する明瞭な相関関係があり、７０ｋＨｚより低い領域で、２５０％を超える効果の増加が見られた（生体音響学的効果（ｂｉｏａｃｏｕｓｔｉｃ ｅｆｆｅｃｔ））。
【００５８】
以下に示す低周波の超音波が、バクテリオファージ・プールと組み合わせて用いられてよい。−出力周波数レンジが１２０ｋＨｚより小さく、出力が０．０５から１．５Ｗ／ｃｍ２の超音波。−出力周波数レンジが１００ｋＨｚより小さく、出力が０．０５から１．５Ｗ／ｃｍ２の超音波。−出力周波数レンジが７０ｋＨｚより小さく、出力が０．０５から１．０Ｗ／ｃｍ２の超音波。
【００５９】
この点に関して、界面活性物質または低周波の超音波と併用されるバクテリオファージ・プールの適切な適用形態（ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎ ｆｏｒｍｓ）は、ゲルの他に、溶液（ｓｏｌｕｔｉｏｎｓ）、洗浄液（ｉｒｒｉｇａｔｉｏｎ ｓｏｌｕｔｉｏｎｓ）、織物材料もしくは合成繊維でできた（創傷）被覆材（ｄｒｅｓｓｉｎｇｓ）、または、これらの組み合わせである。無菌の適用形態（ｓｔｅｒｉｌｅ ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎ ｆｏｒｍｓ）が好ましい。この場合、当業者にとって既知である従来型の方法によって、滅菌（ｓｔｅｒｉｌｉｚａｔｉｏｎ）してよい。
【００６０】
適切な溶液は、好ましくは水溶液であり、他の有効成分（ａｃｔｉｖｅ ｓｕｂｓｔａｎｃｅｓ）、特に、洗浄活性物質（ｗａｓｈ−ａｃｔｉｖｅ）および殺菌物質（ａｎｔｉｓｅｐｔｉｃ ｓｕｂｓｔａｎｃｅｓ）を含んでよい。これらの溶液は、特に、（例えば病院の手術室または集中治療室内の）表面の殺菌・消毒に予防的に用いられてよい。
【００６１】
適切な洗浄液は、好ましくは水溶液であり、好ましくは殺菌に適して、皮膚への忍容性に優れる（ｗｅｌｌ ｔｏｌｅｒａｔｅｄ ｂｙ ｔｈｅ ｓｋｉｎ）付加的な有効成分を含んでよい。さらに、洗浄液は、適切なｐＨおよび生理食塩（ｐｈｙｓｉｏｌｏｇｉｃａｌ ｓａｌｔ ｃｏｎｔｅｎｔ）を含む緩衝化した等浸透圧溶液（ｉｓｏ−ｏｓｍｏｔｉｃ ｓｏｌｕｔｉｏｎｓ）を含んでよい。
【００６２】
適切な（創傷）被覆材は、例えば、従来型のコットンガーゼ、合成繊維材料または他の充填剤（ｂｕｌｋ ａｇｅｎｔｓ）のような織物材料で構成されてよい。
【００６３】
適切なゲルは、好ましくは、グリセロール、ポリマーまたはこれらの組み合わせを含む。ポリマーは、好ましくは酢酸セルロース誘導体であり、さらに好ましくは、アクリル酸のポリマーの他に、ヒドロキシアルキルセルロースアセテート（ｈｙｄｒｏｘｙａｌｋｙｌｃｅｌｌｕｌｏｓｅ ａｃｅｔａｔｅ）、特に、ヒドロキシエチルセルロースアセテート（ｈｙｄｒｏｘｙｅｔｈｙｌｃｅｌｌｕｌｏｓｅ ａｃｅｔａｔｅ）およびヒドロキシプロピルセルロースアセテート（ｈｙｄｒｏｘｙｐｒｏｐｙｌｃｅｌｌｕｌｏｓｅ ａｃｅｔａｔ）である。さらに好ましくは、ポリマーは、アクリル酸のホモポリマー（ｈｏｍｏｐｏｌｙｍｅｒｓ）であってよく、上記ポリマーは、ペンタエリスリトールアリルエーテル（ｐｅｎｔａｅｒｙｔｈｒｉｔｏｌ ａｌｌｙｌ ｅｔｈｅｒ）、スクロースアリルエーテル（ｓｕｃｒｏｓｅ ａｌｌｙｌ ｅｔｈｅｒ）、プロピレンアリルエーテル（ｐｒｏｐｙｌｅｎｅ ａｌｌｙｌ ｅｔｈｅｒ）（カルボマー（ｃａｒｂｏｍｅｒ））で架橋されてよい。
【００６４】
適切なゲルは、１．０から１０．０重量％、好ましくは５．０から８．０重量％の濃度でグリセロールを含み、および／または、０．１から１０．０重量％、好ましくは２．０から６．０重量％の濃度でポリマーを含む。
【００６５】
本発明のバクテリオファージ製剤は、界面活性物質との併用で、皮膚および粘膜、好ましくは鼻喉エリアおよび泌尿生殖器エリア、外傷エリアおよび目エリアにおける、治療または予防の抗菌性用途のための医薬の創出に用いられる。
【００６６】
本発明の製剤（ｆｏｒｍｕｌａｔｉｏｎｓ）および用途は、例えば、ブドウ球菌（Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ）、連鎖球菌（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ）、腸球菌（Ｅｎｔｅｒｏｃｏｃｃｕｓ）、シュードモナス菌（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ）、エンテロバクター属（Ｅｎｔｅｒｏｂａｃｔｅｒ）、大腸菌群（ｃｏｌｉｆｏｒｍ ｂａｃｔｅｒｉａ）、クレブシエラ菌（Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ）、プロテウス属（Ｐｒｏｔｅｕｓ）、リステリア菌（Ｌｉｓｔｅｒｉａ）またはサルモネラ菌（Ｓａｌｍｏｎｅｌｌａ）の菌株のような細菌を除去するのに適している。 製剤および方法は、抗生物質耐性細菌の菌株、好ましくはブドウ球菌およびシュードモナス菌、特に好ましくは黄色ブドウ球菌および緑膿菌を除去するのに適している。 製剤および方法は、特にメチシリン耐性黄色ブドウ球菌（ＭＲＳＡ）の除去に極めて適している。 本発明の好ましい実施形態において、製剤および方法は、皮膚、好ましくは鼻喉エリアや外傷の中のような手が届きにくい場所のＭＲＳＡのコロニー形成を取り除くのに用いられる。
【００６７】
以上に記載された本発明の実施形態は、次の実施例においてより詳細に記載される。しかしながら、本発明は、そのような実施例に限定されない。
【００６８】
バクテリオファージ（ここでは、黄色ブドウ球菌に対して有効）および界面活性物質（ここでは、１つ）からなる製剤の生産に関する実施例。
【００６９】
１．バクテリオファージの分離（ｉｓｏｌａｔｉｏｎ）および複製（ｒｅｐｌｉｃａｔｉｏｎ）。
収集株（ｓｔｒａｉｎ ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ）の中から、必要な標準バクテリオファージ（ｒｅｆｅｒｅｎｃｅ ｂａｃｔｅｒｉｏｐｈａｇｅｓ）および標準菌株（ｒｅｆｅｒｅｎｃｅ ｂａｃｔｅｒｉａｌ ｓｔｒａｉｎｓ）が調達される。
【００７０】
病院廃水からの液体試料を塩化カルシウムおよび塩化マグネシウムと組み合わせ、ろ過した後、細菌ろ過（ｓｔｅｒｉｌｅ−ｆｉｌｔｅｒｅｄ）することで、新たなバクテリオファージを回収してよい。液体試料のＰＦＵ試験が実施され、バクテリオファージが、黄色ブドウ球菌に対して特異的な溶菌活性を有するか否かが検査される。このために、いずれの場合にも、栄養素を含む液体培地（ｌｉｑｕｉｄ ｎｕｔｒｉｅｎｔ ｍｅｄｉｕｍ）で希釈され、対数増殖期まで培養されたメチシリン耐性黄色ブドウ球菌（ｌｏｇ−ｐｈａｓｅ ｃｕｌｔｕｒｅ ｏｆ ｍｅｔｈｉｃｉｌｌｉｎ−ｒｅｓｉｓｔａｎｔ Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ ａｕｒｅｕｓ）に、細菌ろ過された試料が添加される。
【００７１】
黄色ブドウ球菌に特異的なファージを複製（ｒｅｐｌｉｃａｔｉｏｎ）するために、振盪されているエルレンマイヤーフラスコの中のバクテリオファージに、対数増殖期にある特定の標準菌株の新鮮な細菌培養物（ｆｒｅｓｈ ｂａｃｔｅｒｉａｌ ｃｕｌｔｕｒｅ）が添加される。次に、耐性が形成されることを防止する目的で、浄化された懸濁液（ｃｌａｒｉｆｉｅｄ ｓｕｓｐｅｎｓｉｏｎ）が遠心分離され、上澄みが細菌ろ過される。ＰＦＵ試験における濃度が１０１０ファージ／ｍｌになるまで、複製段階が繰り返される。
【００７２】
全ての関連のあるバクテリオファージ（バクテリオファージ・プール）が、混合物中に、ＰＦＵ試験において１０１０／ｍｌの濃度で検出できるようになるまで、全ての黄色ブドウ球菌株およびそれらの特異的なファージについて、この手順が繰り返される。
【００７３】
２．作用の特異性（ａｃｔｉｏｎ ｓｐｅｃｉｆｉｃｉｔｙ）の決定。
種特異性を決定する目的で、得られたファージ懸濁液（ｐｈａｇｅ ｓｕｓｐｅｎｓｉｏｎｓ）が、Ｅ． ｃｏｌｉ ＡＴＣＣ １１２２９およびＰ． ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ ＡＴＣＣ １５４４２の細菌株に対するＰＦＵ試験に用いられる。この点に関して、試験に用いられたファージ懸濁液の対照菌株（ｃｏｎｔｒｏｌ ｓｔｒａｉｎｓ）に対する溶菌活性は、検出されなくてよい。
【００７４】
３．製剤（ファージ製剤）の生産。
バクテリオファージ・プールおよび界面活性物質からファージ製剤を生産する目的で、プールされた（ｐｏｏｌｅｄ）ファージ懸濁液からの、限界濃度（ｅｎｄ ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ）１０７バクテリオファージ／ｍｌであり、０．１重量％のウンデシレン酸アミドプロピルベタインを含む溶液が、アルカリ緩衝液を用いて安定化され、培養され、細菌ろ過される。
【００７５】
４．バクテリオファージの製剤中での濃縮。
ファージ製剤は、ＰＦＵ試験において、関連する全ての黄色ブドウ球菌の標準菌株に対する活性を検査される。この点に関して、プールされたファージ懸濁液の関連する全ての標準菌株に対する十分な有効性が確認されうる。
【００７６】
５．副作用試験（ａｄｖｅｒｓｅ ｒｅａｃｔｉｏｎ ｔｅｓｔｓ）。
生産されたバッチ（ｂａｔｃｈ）には、エンテロトキシン（ｅｎｔｅｒｏｔｏｘｉｎｓ）（ａ型−ｇ型、ｈ型およびｉ型）、ａ型およびｂ型のエクスフォリエイティブトキシン（ｅｘｆｏｌｉａｔｉｖｅ ｔｏｘｉｎｓ）、毒素性ショック症候群に関する毒素（ｔｏｘｉｎ）ならびにエンドトキシン（ｅｎｄｏｔｏｘｉｎｓ）に対する試験のほかに、毒性（ｔｏｘｉｃ）および刺激効果（ｉｒｒｉｔａｎｔ ｅｆｆｅｃｔｓ）に対する試験が実施される。
【特許請求の範囲】
【請求項１】
汚染、浸潤、感染および感染性疾患などの細菌によって引き起こされるコロニー形成を治療するためのバクテリオファージ製剤であって、
前記バクテリオファージ製剤は、アルカリ緩衝溶液中で少なくとも１つの界面活性剤と相まって、少なくとも１つの細菌株に対して特異的な有効性を示す、少なくとも１つのバクテリオファージを有する、
バクテリオファージ製剤。
【請求項２】
前記バクテリオファージは、ブドウ球菌種、シュードモナス菌種、連鎖球菌種、腸球菌種、エンテロバクター属の種、クレブシエラ菌種、プロテウス属の種、リステリア菌種およびサルモネラ菌種からなる群から選択された少なくとも１つの細菌に対する溶菌活性を有する、
請求項１に記載のバクテリオファージ製剤。
【請求項３】
前記界面活性剤は、陰イオンまたは陽イオン界面活性剤、アルコール、酵素、アルギン酸塩、消毒剤、殺菌剤、防腐剤およびこれらの組み合わせからなる群から選択される、
請求項１または請求項２に記載のバクテリオファージ製剤。
【請求項４】
前記界面活性剤は、ポリヘキサメチルビグアニド（ポリヘキサニド）である、
請求項３に記載のバクテリオファージ製剤。
【請求項５】
前記バクテリオファージ製剤のｐＨは、少なくとも１つの緩衝塩によって、ｐＨ７．５からｐＨ９．０までのアルカリ範囲に安定化される、
請求項４に記載のバクテリオファージ製剤。
【請求項６】
前記少なくとも１つの界面活性剤は、前記バクテリオファージ製剤の全体に対して、０．０００００１から２０．０重量％の濃度で存在する、
請求項１から請求項５までの何れか一項に記載のバクテリオファージ製剤。
【請求項７】
前記バクテリオファージ製剤は、溶液または懸濁液として存在する、
請求項１に記載のバクテリオファージ製剤。
【請求項８】
前記バクテリオファージ製剤は、ゲルの形態で存在する、
請求項１に記載のバクテリオファージ製剤。
【請求項９】
前記バクテリオファージ製剤は、グリセロール、または、酢酸セルロースの誘導体およびアクリル酸のポリマーからなる群から選択されるポリマーを有する、
請求項８に記載のバクテリオファージ製剤。
【請求項１０】
前記グリセロールは、バクテリオファージ・プールの全体に対して、１．０から１０．０重量％の濃度で存在する、
請求項９に記載のバクテリオファージ製剤。
【請求項１１】
前記ポリマーは、前記バクテリオファージ・プールの全体に対して、０．１から１０．０重量％の濃度で存在する、
請求項１０に記載のバクテリオファージ製剤。
【請求項１２】
前記バクテリオファージ製剤は、織物繊維もしくは合成繊維の中に存在する、または、バルク材として存在する、
請求項１に記載のバクテリオファージ製剤。
【請求項１３】
治療または予防のための抗菌的使用を目的とする医薬品を調合するための、請求項１から請求項１２までの何れか一項に記載のバクテリオファージ製剤の使用法。
【請求項１４】
外傷および外傷エリアに適用される、
請求項１３に記載の使用法。
【請求項１５】
鼻喉エリアに適用される、
請求項１３に記載の使用法。
【請求項１６】
皮膚および粘膜エリアに適用される、
請求項１３に記載の使用法。
【請求項１７】
泌尿生殖器エリアに適用される、
請求項１３に記載の使用法。
【請求項１８】
目エリアに適用される、
請求項１３に記載の使用法。
【請求項１９】
抗菌の用途に用いられる殺菌剤の調合のための、請求項１から請求項１８までの何れか一項に記載のバクテリオファージ製剤の使用法。
【請求項２０】
請求項１から請求項１１までの何れか一項に記載のバクテリオファージ製剤を、周波数レンジが１２０ｋＨｚより小さく、出力が０．０５から１．５Ｗ／ｃｍ２である低周波の超音波と併用する、
殺菌方法。
【請求項２１】
前記バクテリオファージ製剤が、適用前に２２℃から４５℃の間の温度に加熱される、
請求項２０に記載の殺菌方法。
【請求項１】
汚染、浸潤、感染および感染性疾患などの細菌によって引き起こされるコロニー形成を治療するためのバクテリオファージ製剤であって、
前記バクテリオファージ製剤は、アルカリ緩衝溶液中で少なくとも１つの界面活性剤と相まって、少なくとも１つの細菌株に対して特異的な有効性を示す、少なくとも１つのバクテリオファージを有する、
バクテリオファージ製剤。
【請求項２】
前記バクテリオファージは、ブドウ球菌種、シュードモナス菌種、連鎖球菌種、腸球菌種、エンテロバクター属の種、クレブシエラ菌種、プロテウス属の種、リステリア菌種およびサルモネラ菌種からなる群から選択された少なくとも１つの細菌に対する溶菌活性を有する、
請求項１に記載のバクテリオファージ製剤。
【請求項３】
前記界面活性剤は、陰イオンまたは陽イオン界面活性剤、アルコール、酵素、アルギン酸塩、消毒剤、殺菌剤、防腐剤およびこれらの組み合わせからなる群から選択される、
請求項１または請求項２に記載のバクテリオファージ製剤。
【請求項４】
前記界面活性剤は、ポリヘキサメチルビグアニド（ポリヘキサニド）である、
請求項３に記載のバクテリオファージ製剤。
【請求項５】
前記バクテリオファージ製剤のｐＨは、少なくとも１つの緩衝塩によって、ｐＨ７．５からｐＨ９．０までのアルカリ範囲に安定化される、
請求項４に記載のバクテリオファージ製剤。
【請求項６】
前記少なくとも１つの界面活性剤は、前記バクテリオファージ製剤の全体に対して、０．０００００１から２０．０重量％の濃度で存在する、
請求項１から請求項５までの何れか一項に記載のバクテリオファージ製剤。
【請求項７】
前記バクテリオファージ製剤は、溶液または懸濁液として存在する、
請求項１に記載のバクテリオファージ製剤。
【請求項８】
前記バクテリオファージ製剤は、ゲルの形態で存在する、
請求項１に記載のバクテリオファージ製剤。
【請求項９】
前記バクテリオファージ製剤は、グリセロール、または、酢酸セルロースの誘導体およびアクリル酸のポリマーからなる群から選択されるポリマーを有する、
請求項８に記載のバクテリオファージ製剤。
【請求項１０】
前記グリセロールは、バクテリオファージ・プールの全体に対して、１．０から１０．０重量％の濃度で存在する、
請求項９に記載のバクテリオファージ製剤。
【請求項１１】
前記ポリマーは、前記バクテリオファージ・プールの全体に対して、０．１から１０．０重量％の濃度で存在する、
請求項１０に記載のバクテリオファージ製剤。
【請求項１２】
前記バクテリオファージ製剤は、織物繊維もしくは合成繊維の中に存在する、または、バルク材として存在する、
請求項１に記載のバクテリオファージ製剤。
【請求項１３】
治療または予防のための抗菌的使用を目的とする医薬品を調合するための、請求項１から請求項１２までの何れか一項に記載のバクテリオファージ製剤の使用法。
【請求項１４】
外傷および外傷エリアに適用される、
請求項１３に記載の使用法。
【請求項１５】
鼻喉エリアに適用される、
請求項１３に記載の使用法。
【請求項１６】
皮膚および粘膜エリアに適用される、
請求項１３に記載の使用法。
【請求項１７】
泌尿生殖器エリアに適用される、
請求項１３に記載の使用法。
【請求項１８】
目エリアに適用される、
請求項１３に記載の使用法。
【請求項１９】
抗菌の用途に用いられる殺菌剤の調合のための、請求項１から請求項１８までの何れか一項に記載のバクテリオファージ製剤の使用法。
【請求項２０】
請求項１から請求項１１までの何れか一項に記載のバクテリオファージ製剤を、周波数レンジが１２０ｋＨｚより小さく、出力が０．０５から１．５Ｗ／ｃｍ２である低周波の超音波と併用する、
殺菌方法。
【請求項２１】
前記バクテリオファージ製剤が、適用前に２２℃から４５℃の間の温度に加熱される、
請求項２０に記載の殺菌方法。
【公表番号】特表２０１１−５０９９６４（Ｐ２０１１−５０９９６４Ａ）
【公表日】平成２３年３月３１日（２０１１．３．３１）
【国際特許分類】
【出願番号】特願２０１０−５４２５８３（Ｐ２０１０−５４２５８３）
【出願日】平成２１年１月１６日（２００９．１．１６）
【国際出願番号】ＰＣＴ／ＥＰ２００９／０００２４９
【国際公開番号】ＷＯ２００９／０９００８２
【国際公開日】平成２１年７月２３日（２００９．７．２３）
【出願人】（５１０１９８４８０）
【Ｆターム（参考）】
【公表日】平成２３年３月３１日（２０１１．３．３１）
【国際特許分類】
【出願日】平成２１年１月１６日（２００９．１．１６）
【国際出願番号】ＰＣＴ／ＥＰ２００９／０００２４９
【国際公開番号】ＷＯ２００９／０９００８２
【国際公開日】平成２１年７月２３日（２００９．７．２３）
【出願人】（５１０１９８４８０）
【Ｆターム（参考）】
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