ミトコンドリア機能向上剤
【課題】医薬品、食品等として有用なミトコンドリア機能向上剤、エネルギー消費促進剤又は脂質燃焼促進剤を提供すること。
【解決手段】脂肪球皮膜成分を有効成分とするミトコンドリア機能向上剤、エネルギー消費促進剤又は脂質燃焼促進剤。
【解決手段】脂肪球皮膜成分を有効成分とするミトコンドリア機能向上剤、エネルギー消費促進剤又は脂質燃焼促進剤。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明はミトコンドリア機能向上剤、エネルギー消費促進剤及び脂質燃焼促進剤に関する。
【背景技術】
【０００２】
我々の生命活動は代謝とよばれる様々な物理・化学的過程の連鎖により産生されるアデノシン三リン酸（ＡＴＰ）により支えられているが、ミトコンドリアはエネルギー代謝の中心的役割を担っており、脂肪酸のβ酸化や電子伝達系による酸化的リン酸化によりＡＴＰを供給している。
【０００３】
生体でのエネルギー消費を反映している酸素消費は骨格筋、肝臓、あるいは心臓で多いことが特徴であるが、このことはミトコンドリアが心筋や肝臓、骨格筋に多く分布することと一致しており、エネルギー代謝におけるミトコンドリアの役割の大きさが伺い知れる。生体での酸素消費の９０％以上はミトコンドリアで行われると言われている。
【０００４】
近年、ミトコンドリアの機能異常が、生活習慣病や老化関連疾患等と密接に関係していることが明らかにされつつある。老化によるエネルギー代謝の低下にはミトコンドリアＤＮＡの変異や損傷といったミトコンドリア機能の低下が関係していることが知られている（非特許文献１）。
【０００５】
ミトコンドリア機能の低下は、エネルギー代謝の低下を介して、エネルギー摂取とエネルギー消費のアンバランスを引き起こすことから、生活習慣病の原因となり得る（非特許文献２）。従って、ミトコンドリア機能を維持・向上させ、エネルギー代謝を高めることは、生活習慣病の予防・改善・発症リスクの低下につながり、クオリティオブライフ（ＱＯＬ）の向上に寄与すると考えられる。
【０００６】
一方、運動は筋肉のミトコンドリア量を増加させる方法の一つとして知られている（非特許文献３）。従って、運動は筋肉でのミトコンドリアの増加を介し、生体でのエネルギー消費の増加につながると考えられる。しかしながら、運動の重要性が広く認識されている現代においても、定期的に運動を行うことは現実的にはなかなか難しく、より効果的にエネルギー代謝を促進し、エネルギー消費を増加させる方法が望まれている。
【０００７】
懸かる観点から、エネルギー代謝やミトコンドリア機能を高める成分の探索が行われている。
例えば、エネルギー代謝を促進させる成分として、交感神経活性化作用を有するカフェインやカプサイシンなどが報告されている（非特許文献４、５）。しかしながら、カフェインやカプサイシンは、安全性や刺激性の点等から、その実用性が限定され満足できるものではない。その他のエネルギー代謝促進作用を有する例としては、カプシノイド含有組成物（特許文献１）やフラバン類又はフラバノン類（特許文献２）が挙げられる。
また、近年では、辛味が少なく、低刺激性のカプサイシン類縁体であるカプシエイトのエネルギー代謝促進作用が報告されている（非特許文献６）。
更に、茶カテキンには老化に伴うエネルギー代謝低下、ミトコンドリア機能低下を抑制する作用が見出されている（特許文献３）。また、ミトコンドリア機能活性化作用を有する例としては、ベンゾイミダゾール誘導体又はその塩（特許文献４）、1，2-エタンジオール又はその塩（特許文献５）が挙げられる。
しかしながら、エネルギー代謝やミトコンドリア機能を高める成分は、これら以外には殆ど知られていない。
【０００８】
脂肪球皮膜成分は、乳腺より分泌される乳脂肪球を被覆している膜であって、脂肪を乳汁中に分散させる機能を有するのみならず、新生動物の食物として多くの生理的機能を有している。例えば、血中アディポネクチン増加及び／又は減少抑制効果（特許文献６）、学習能向上効果（特許文献７）、シアロムチンの分泌促進効果等（特許文献８）の生理機能を有することが知られている。
しかしながら、脂肪球皮膜成分が、エネルギー代謝やミトコンドリア機能に対して与える影響については、これまで全く知られていない。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００９】
【特許文献１】特開２００４−１４９４９４号公報
【特許文献２】特開２００７−３１４４４６号公報
【特許文献３】特開２００８−６３３１８号公報
【特許文献４】特開２００４−６７６２９号公報
【特許文献５】特開２００２−３２２０５８号公報
【特許文献６】特開２００７−３２０９０１号公報
【特許文献７】特開２００７−２４６４０４公報
【特許文献８】特開２００７−１１２７９３公報
【非特許文献】
【００１０】
【非特許文献１】岩波講座 現代医学の基礎 1999 12(2):55-58.
【非特許文献２】Ritz P. Diabetes Metab. 2005 2:5S67-5S73.
【非特許文献３】Holloszy JO.J.Physiol.Pharmacol.2008 59:5-18.
【非特許文献４】Dulloo AG.Am J Clin Nutr. 1989 49(1):44-50.
【非特許文献５】Kawada T. Proc Soc Exp Biol Med. 1986 183(2):250-6.
【非特許文献６】Ohnuki K. Biosci Biotechnol Biochem. 2001 65(12):2735-40.
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【００１１】
本発明は、食経験が豊富なものを由来とし、安全性が高く、医薬品、医薬部外品、食品及び飼料として有用なミトコンドリア機能向上剤、エネルギー消費促進剤、脂質燃焼促進剤を提供することに関する。
【課題を解決するための手段】
【００１２】
本発明者らは、ミトコンドリア機能向上、エネルギー消費促進、脂質燃焼促進に関して有効な成分の探索を行った結果、脂肪球皮膜成分に、ミトコンドリア機能向上効果、エネルギー消費促進効果、脂質燃焼促進効果があることを見出した。
【００１３】
すなはち、本発明は、脂肪球皮膜成分を有効成分とするミトコンドリア機能向上剤、エネルギー消費促進剤、脂質燃焼促進剤に係るものである。
【発明の効果】
【００１４】
本発明のミトコンドリア機能向上剤、エネルギー消費促進剤、脂質燃焼促進剤は、安全性が高く、優れたミトコンドリア機能向上作用、エネルギー消費促進作用、脂質燃焼促進作用を有する。従って、ミトコンドリア機能やエネルギー代謝低下の予防・改善のための、飲食品、医薬品、医薬部外品又は飼料に有効成分として配合するための素材として有用である。
【発明を実施するための最良の形態】
【００１５】
本発明における脂肪球皮膜成分は、乳中の脂肪球を皮膜する膜及びそれを構成する膜成分混合物と定義され、バターミルクやバターセーラム等の乳複合脂質高含有画分に多く含まれることが知られている。乳脂肪球皮膜は、一般的に、乳脂肪球皮膜の約４０〜４５％はタンパク質から、また約５０〜５５％は脂質から構成されており、当該タンパク質としては、ミルクムチンと呼ばれる糖蛋白質（Mather IH、Biochim Biophys Acta.(1978) 514:25-36.）等を含むことが知られ、また、当該脂質としては、トリグリセライドやリン脂質（例えば、スフィンゴリン脂質、グリセロリン脂質等）が多く含まれ、これ以外にスフィンゴ糖脂質（例えば、グルコシルセラミド、ガングリオシド等）が含まれることが知られている（Keenan TW、Applied Science Publishers.(1983) pp89-pp130.）。
【００１６】
本発明における脂肪球皮膜成分に含まれるリン脂質としては、スフィンゴミエリン等のスフィンゴリン脂質の他、ホスファチジルコリンやホスファチジルエタノールアミン等のグリセロリン脂質が挙げられる。この中で、乳由来の特徴的なリン脂質であるスフィンゴミエリンが脂肪球皮膜成分に含まれることが好ましい。
【００１７】
本発明における脂肪球皮膜成分中の脂質の含有量は、特に限定されないが、乾燥物換算で、２０〜１００質量％、より３５〜９０質量％、更に５０〜９０質量％であるのが好ましい。
本発明における脂肪球皮膜成分中のリン脂質の含有量は、特に限定されないが、乾燥物換算で、３〜１００質量％、より１０〜１００質量％、更に１５〜８５質量％、より更に２０〜７０質量％であるのが好ましい。
脂肪球皮膜成分中の各リン脂質の含有量は、特に限定されないが、例えば、スフィンゴミエリンの含有量は、脂肪球皮膜成分中、乾燥物換算で、１〜５０質量％、より２〜３０質量％、更に３〜２５質量％、より更に４〜２０質量％であるのが好ましい。
【００１８】
本発明の脂肪球皮膜成分としては、乳原料等から遠心分離法や有機溶剤抽出法等の各種脂肪球皮膜成分の調製法により得たものを用いてもよい。さらに、透析、硫安分画、ゲルろ過、等電点沈殿、イオン交換クロマトグラフィー、溶媒分画等の手法により精製することにより純度を高めたものを使用してもよい。
【００１９】
本発明の脂肪球皮膜成分の乳原料としては、牛乳やヤギ乳等が挙げられるが、乳の中でも牛乳由来の脂肪球皮膜成分は、食経験が豊富であり、高純度かつ安価なものも上市されており、特に好ましい。
また、乳原料には、生乳、脱脂乳や加工乳等の乳の他、乳製品も含まれるが、乳製品としては、バターミルク、バターオイル、バターセーラム、ホエータンパク質濃縮物（ＷＰＣ）等が挙げられる。
【００２０】
当該脂肪球皮膜成分の調製は、例えば、乳やホエータンパク質濃縮物（ＷＰＣ）等の乳製品をエーテルやアセトンで抽出する方法（特開平３−４７１９２号公報）、バターミルクを酸性域に調整、等電点沈殿を行うことにより生じたタンパク質を除去し、上清を精密濾過膜処理して得られる濃縮液を乾燥する方法（特許第３１０３２１８号公報）により行うことができる。
また、バターセーラム中よりタンパク質を凝集除去後に濾過濃縮し乾燥する方法（特開２００７−８９５３５）等も使用することができる。本製法によると、例えば、乳由来の複合脂質を乾燥物中２０重量％以上含有する脂肪球皮膜成分を調製することができる。なお、脂肪球皮膜成分の形態は、特に限定されず、液状、半固体状や個体状、粉状等の何れでもよく、これらを単独で又は２種以上組み合わせて用いてもよい。
【００２１】
また、脂肪球皮膜成分として、市販品を用いることもできる。斯かる市販品としては、メグレジャパン（株）「ＢＳＣＰ」、雪印乳業（株）「ミルクセラミドＭＣ−５」、（株）ニュージーランドミルクプロダクツ「Ｐｈｏｓｐｈｏｌｉｐｉｄ Ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｅ」等が挙げられる。
また、脂肪球皮膜成分は牛乳等を遠心分離して得られるクリームからバター粒を製造する際に得られるバターミルク中に多く含まれているので、バターミルクをそのまま使用してもよい。同様に、脂肪球皮膜成分はバターオイルを製造する際に生じるバターセーラム中に多く含まれているので、バターセーラムをそのまま使用してもよい。
【００２２】
後記実施例に示すように、脂肪球皮膜成分は、ミトコンドリア機能向上作用、エネルギー消費促進作用及び脂質燃焼促進作用を有する。従って、脂肪球皮膜成分は、ミトコンドリア機能向上剤、エネルギー消費促進剤、脂質燃焼促進剤（以下、「ミトコンドリア機能向上剤等」とする。）として使用することができ、さらに当該ミトコンドリア機能向上剤を製造するために使用することができる。当該ミトコンドリア機能向上剤等には、当該脂肪球皮膜成分を単独で、又はこれ以外に、必要に応じて適宜選択した担体等の、配合すべき後述の対象物において許容されるものを使用してもよい。なお、当該製剤は配合すべき対象物に応じて常法により製造することができる。
【００２３】
本発明のミトコンドリア機能向上剤等は、ヒト及び動物に投与することができる他、各種飲食品、医薬品、ペットフード等の有効成分として配合して使用することができる。食品としては、ミトコンドリア機能の向上、あるいはエネルギー消費促進及び生活習慣病の予防・改善・発症リスクの低下等の生理機能をコンセプトとし、必要に応じてその旨を表示した飲食品、機能性飲食品、病者用飲食品、特定保健用食品等に応用できる。
【００２４】
本発明のミトコンドリア機能向上剤等を医薬品、医薬部外品の有効成分として用いる場合の投与形態としては、例えば錠剤、カプセル剤、顆粒剤、散剤、シロップ剤等による経口投与又は注射剤、坐剤、吸入薬、経皮吸収剤、外用剤等による非経口投与が挙げられる。また、このような種々の剤型の製剤を調製するには、本発明のミトコンドリア機能向上剤等を単独で、又は他の薬学的に許容される賦形剤、結合剤、増量剤、崩壊剤、界面活性剤、滑沢剤、分散剤、緩衝剤、保存剤、嬌味剤、香料、被膜剤、担体、希釈剤等を適宜組み合わせて用いることができる。また、これらの投与形態のうち、好ましい形態は経口投与であり、経口用液体製剤を調製する場合は、嬌味剤、緩衝剤、安定化剤等を加えて常法により製造することができる。
【００２５】
本発明のミトコンドリア機能向上剤等を食品の有効成分として用いる場合、当該食品の形態としては、牛乳、加工乳、乳飲料、ヨーグルト、清涼飲料水、茶系飲料、コーヒー飲料、果汁飲料、炭酸飲料、ジュース、ゼリー、ウエハース、ビスケット、パン、麺、ソーセージ等の飲食品や栄養食等の各種食品の他、さらには、上述した経口投与製剤と同様の形態（錠剤、カプセル剤、シロップ等）の栄養補給用組成物が挙げられる。
【００２６】
種々の形態の食品を調製するには、本発明のミトコンドリア機能向上剤等を単独で、又は他の食品材料や、溶剤、軟化剤、油、乳化剤、防腐剤、香科、安定剤、着色剤、酸化防止剤、保湿剤、増粘剤等を適宜組み合わせて用いることが可能である。
【００２７】
また、本発明のミトコンドリア機能向上剤等を飼料の有効成分として用いる場合には、全ての家畜の飼料に広範に用いることができ、例えば、牛、豚、鶏、羊、馬、山羊等に用いる家畜用飼料、ウサギ、ラット、マウス等に用いる小動物用飼料、マグロ、ウナギ、タイ、ハマチ、エビ等に用いる魚介類用飼料、犬、猫、小鳥、リス等に用いるペットフード等が挙げられる。
【００２８】
飼料には本発明のミトコンドリア機能向上剤等の他に、肉類、蛋白質、穀物類、ぬか類、粕類、糖類、野菜、ビタミン類、ミネラル類等一般に用いられる飼料原料、又は溶剤、軟化剤、油、乳化剤、防腐剤、香科、安定剤、着色剤、酸化防止剤、保湿剤、増粘剤等を適宜配合し、常法により当該飼料を製造することができる。
【００２９】
本発明のエネルギー消費促進剤等には、脂肪球皮膜成分の他に、必要に応じて適宜選択したその他の薬効成分を併用してもよい。
【００３０】
本発明のエネルギー消費促進剤等を含む飲料、例えば乳飲料、清涼飲料水、茶系飲料等に対する脂肪球皮膜成分の配合量は、脂肪球皮膜成分（乾燥物換算）は、０．００１〜５．０質量％、さらに０．０１〜３．０質量％、特に０．１〜２．０質量％とするのが好ましい。
【００３１】
本発明のエネルギー消費促進剤等を含む飲料以外の食品や飼料、また医薬品、例えば錠剤、顆粒剤、カプセル剤等の経口用固形製剤、内服液剤、シロップ剤等の経口用液体製剤の場合には、脂肪球皮膜成分（乾燥物換算）は、０．０２〜８０質量％、さらに０．２〜７５質量％、特に２．０〜５０質量％とするのが好ましい。尚、脂肪球皮膜成分は、溶解状態であっても、分散状態であっても良く、その存在状態は問わない。
【００３２】
本発明のミトコンドリア機能向上剤等の摂取量は、剤形や用途によって異なるが、上記脂肪球皮膜成分（乾燥物換算）として、成人に対して１日あたり、１０〜１００００ｍｇ／６０ｋｇ体重とするのが好ましく、特に１００〜５０００ｍｇ／６０ｋｇ体重、更に５００〜５０００ｍｇ／６０ｋｇ体重とするのが好ましい。
【００３３】
以下、本発明の代表的な試験例と実施例を示すが、本発明はこれに限定されるものではない。
【実施例】
【００３４】
試験例１ 脂肪球皮膜成分のエネルギー消費及び脂質燃焼促進作用
脂肪球皮膜成分のエネルギー消費及び脂質燃焼促進作用に対する評価を下記の通り行った。脂肪球皮膜成分としては、メグレジャパン社製 ＢＳＣＰを使用した。
ＢＳＣＰには、乾燥物換算で、蛋白質 ４９質量％（以下、「％」とする）及び脂質 ３９％が含まれ、スフィンゴリン脂質としてスフィンゴミエリン ３．７％が含まれ、スフィンゴ糖脂質としてグルコシルセラミド ２．４％，およびガングリオシド ０．４％が含まれていた。
【００３５】
脂肪球皮膜成分中の蛋白質及び脂質の分析方法としては、ケルダール法（神立誠著、最新食品分析法、同文書院）及びレーゼゴットリーブ法（日本食品工業学会編、食品分析法、光琳）で行なった。
また、脂肪球皮膜成分中のリン脂質の分析は、LC-MS法にて行なった。すなわち、脂肪球皮膜成分よりクロロホルム/メタノール（＝2:1）を用いて脂質画分を抽出し、窒素気流下で乾固した後、ヘキサン/イソプロパノール（＝95:5）に溶解した。この試料を、下記LC-MS分析に供し、リン脂質の定量を行った。
具体的な分析手段としては、以下のものを用いた。
カラム：Inertsil SIL 100A-3 （GLサイエンス社、1.5mm×150mm）
カラム温度：40℃
流速：0.1 mL/min
検出器：アジレント、1100 LC/MSD
移動相：A液（ヘキサン：イソプロパノール：ギ酸＝95:5:0.1）およびB液（ヘキサン：イソプロパノール：50mMギ酸アンモニウム＝25:65:10）のグラジエント分離
【００３６】
１週間の予備飼育後、９週齢のＢＡＬＢ／ｃマウス（雄：オリエンタルバイオサービス）を体重が等しくなるように２群に分けた（各群８匹）。その後、対照食については、コントロール食（１０％脂質、２０％カゼイン、５５．５％ポテトスターチ、８．１％セルロース、０．２％メチオニン、２．２％ビタミン（商品名：ビタミン混合ＡＩＮ−７６、オリエンタルバイオサービス）、４％ミネラル（商品名：ミネラル混合ＡＩＮ−７６、オリエンタルバイオサービス））を、また試験食群については脂肪球皮膜成分を含む試験食（１０％脂質、２０％カゼイン、５４．５％ポテトスターチ、８．１％セルロース、０．２％メチオニン、２．２％ビタミン、４％ミネラル、１％脂肪球皮膜成分）を、それぞれ８週間与え、９週目に呼気分析に供した。
【００３７】
マウスを呼気分析用チャンバーに移し、４８時間環境に馴化させた後、Ａｒｃｏ−２０００ｓｙｓｔｅｍ（アルコシステム）を用いて各マウスの酸素消費量及び呼吸商を２４時間測定した。ここでいう酸素消費量とは、エネルギー消費量（１ｍｉｎ当たりのマウス体重１ｋｇにおける酸素消費量ｍＬ（ｍＬ／ｋｇ／ｍｉｎ））を指し、呼吸商は二酸化炭素排出量と酸素消費量の比を指す。これら酸素消費量と呼吸商より、Ｐｅｒｏｎｎｅｔの式（Peronnet F, and Massicotte D (1991) Can J Sport Sci 16:23-29.）を用いて、脂質燃焼量を算出した。表１に２４時間の平均エネルギー消費量（ｍＬ／ｋｇ／ｍｉｎ）、平均脂質燃焼量（ｍｇ／ｋｇ／ｍｉｎ）を示す。
【００３８】
【表１】
【００３９】
表１から、脂肪球皮膜成分を含有する試験食を摂取したマウス（試験食群）では、対照食群と比較して、酸素消費量及び脂質燃焼量が有意に多いことがわかる。従って、本発明の脂肪球皮膜成分はエネルギー消費促進剤及び脂質燃焼促進剤として又はそれらの素材として有用である。
【００４０】
試験例２ 脂肪球皮膜成分のミトコンドリア機能向上効果
脂肪球皮膜成分のエネルギー消費、脂質燃焼促進、ミトコンドリア機能向上作用に対する評価を下記の通り行った。脂肪球皮膜成分としては、ニュージーランドミルクプロダクツ社製Ｐｈｏｓｐｈｏｌｉｐｉｄ Ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｅ ７００を使用した。
Ｐｈｏｓｐｈｏｌｉｐｉｄ Ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｅ ７００には、乾燥物換算で、脂質 ８５％が含まれ、スフィンゴミエリン １６．５％が含まれていた。
１週間の予備飼育後、９週齢のＢＡＬＢ／ｃマウス（雄：オリエンタルバイオサービス）を体重と遊泳持久力（下記の方法により、マウス用流水プール（京大松元式運動量測定流水槽）を用いて限界遊泳時間を測定）が等しくなるように２群に分けた（各群８匹）。群分け後、対照群としては、コントロール食（１０％脂質、２０％カゼイン、５５．５％ポテトスターチ、８．１％セルロース、０．２％メチオニン、２．２％ビタミン（商品名：ビタミン混合ＡＩＮ−７６、オリエンタルバイオサービス）、４％ミネラル（商品名：ミネラル混合ＡＩＮ−７６、オリエンタルバイオサービス））を、また試験食群としては、脂肪球皮膜成分を含む試験食（１０％脂質、２０％カゼイン、５４．５％ポテトスターチ、８．１％セルロース、０．２％メチオニン、２．２％ビタミン、４％ミネラル、１％脂肪球皮膜成分）を、それぞれ１３週間給餌した。尚、この間マウス（対照食群、試験食群）を運動に慣らすため、週２回の遊泳トレーニング（６Ｌ／ｍｉｎ, ３０ｍｉｎ）を施した。限界遊泳時間測定：７Ｌ／ｍｉｎの流量でマウスが泳げなくなった時点とした。
【００４１】
８週間飼育後に呼気分析に供した。マウスを呼気分析用チャンバーに移し、４８時間環境に馴化させた後、Ａｒｃｏ−２０００ｓｙｓｔｅｍ（アルコシステム）を用いて呼気を２４時間測定した。各マウスの酸素消費量（エネルギー消費量）と呼吸商から、Ｐｅｒｏｎｎｅｔの式（Peronnet F, and Massicotte D (1991) Can J Sport Sci 16:23-29.）を用いて、脂質燃焼量を算出した。表２に２４時間の平均エネルギー消費量、平均脂質燃焼量を示す。
【００４２】
１３週間飼育後に各群のマウスの腓腹筋を採取し、ＲＮｅａｓｙ Ｆｉｂｒｏｕｓ Ｔｉｓｓｕｅ Ｍｉｎｉ Ｋｉｔ（Ｑｉａｇｅｎ）を用いて、ＲＮＡサンプルを得た。各ＲＮＡサンプルを定量し、1反応あたりのＲＮＡ量を１２５ｎｇとして反応液中（１ｘＰＣＲ ｂｕｆｆｅｒ ＩＩ（アプライドバイオシステム社）、５ｍＭ ＭｇＣｌ２、１ｍＭ ｄＮＴＰ ｍｉｘ、２．５μＭ Ｏｌｉｇｏ ｄ〔Ｔ〕18（Ｎｅｗ Ｅｎｇｌａｎｄ Ｂｉｏｌａｂｓ社）、１Ｕ／ｍｌ ＲＮａｓｅ ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ（タカラバイオ社））で逆転写反応を行い、ｃＤＮＡを得た。反応条件は４２℃、１０分間、５２℃、３０分間、９９℃、５分間とした。
【００４３】
得られたｃＤＮＡを鋳型として、ＡＢＩ ＰＲＩＳＭ ７７００ Ｓｅｑｕｅｎｃｅ Ｄｅｔｅｃｔｏｒ（アプライドバイオシステムズ社）により定量的ＰＣＲを行った。３６Ｂ４ｍＲＮＡの発現量を基準として補正し、相対的ｍＲＮＡ発現量として表した。プライマーとしてＰＧＣ−１β（ＧｅｎＢａｎｋ: ＮＭ＿１３３２４９、Ｆｏｒｗａｒｄ：ＡＣＧＧＴＴＴＴＡＴＣＡＣＣＴＴＣＣＧＧＴ（配列番号１）、Ｒｅｖｅｒｓｅ：ＡＴＡＧＣＴＣＡＧＧＴＧＧＡＡＧＧＡＧＧＧ（配列番号２）、ＣＰＴ１ｂ（ＧｅｎＢａｎｋ: ＮＭ＿００９９４８、Ｆｏｒｗａｒｄ：ＡＣＴＧＴＴＧＧＡＣＡＴＣＧＣＣＧＡＡＣ（配列番号３）、Ｒｅｖｅｒｓｅ：ＣＣＴＣＴＴＣＴＴＣＣＡＣＣＡＧＧＴＧＧ（配列番号４））、３６Ｂ４（ＧｅｎＢａｎｋ: ＮＭ＿００７４７５、Ｆｏｒｗａｒｄ：ＧＡＣＡＴＣＡＣＡＧＡＧＣＡＧＧＣＣＣＴ（配列番号５）、Ｒｅｖｅｒｓｅ：ＴＣＴＣＣＡＣＡＧＡＣＡＡＴＧＣＣＡＧＧ（配列番号６））を用いた。結果を表３に示した。
【００４４】
【表２】
【００４５】
表２から、脂肪球皮膜成分を含有する試験食を摂取したマウスでは、対照食群と比較して、酸素消費量及び脂質燃焼量が有意に多いことがわかる。従って、本発明の脂肪球皮膜成分はエネルギー消費促進剤及び脂質燃焼促進剤として又はそれらの素材として有用である。
【００４６】
【表３】
【００４７】
表３から、脂肪球皮膜成分を含有する試験食を摂取したマウスでは、対照食群と比較して、ミトコンドリア新生や脂肪燃焼に関与するＰＧＣ−１βやＣＰＴ１ｂ遺伝子発現が腓腹筋において有意に高いことがわかる。従って、本発明の脂肪球皮膜成分はミトコンドリア機能向上剤として又はその素材として有用である。
【００４８】
製剤例
処方例１ ミトコンドリア機能向上、エネルギー消費促進用ゼリー食品
カラギーナンとローカストビーンガムの混合ゲル化剤０．６５％、オレンジの５０％の濃縮果汁５．０％、クエン酸０．０５％、ビタミンＣ０．０５％、および脂肪球皮膜成分（ニュージーランドミルクプロダクツ社製 Ｐｈｏｓｐｈｏｌｉｐｉｄ Ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｅ ７００）を１．０％混合し、これに水を加えて１００％に調整し、６５℃で溶解した。更に少量のオレンジフレーバーを添加して８５℃で５分間保持して殺菌処理後、１００ｍＬの容器に分注した。８時間静置して徐冷しながら５℃に冷却して、ゲル化させ、口に含んだ時に口溶け性が良好で、果実風味を有し食感良好な脂肪球皮膜成分を含有するゼリー食品を得た。
【００４９】
処方例２ ミトコンドリア機能向上、エネルギー消費促進用錠剤
アスコルビン酸１８０ｍｇ、クエン酸５０ｍｇ、アスパルテーム１２ｍｇ、ステアリン酸マグネシウム２４ｍｇ、結晶セルロース１２０ｍｇ、乳糖２７４ｍｇ、および脂肪球皮膜成分（メグレ社製 ＢＳＣＰ）８００ｍｇからなる処方（１日量２０００ｍｇ）で、日本薬局方（製剤総則「錠剤」）に準じて錠剤を製造し、脂肪球皮膜成分を含有する錠剤を得た。
【００５０】
処方例３ ミトコンドリア機能向上、エネルギー消費促進用ヨーグルト
２０％脱脂乳を１２０℃で、３秒間殺菌した後、ストレプトコッカス・サーモフィルス及びラクトバチルス・カゼイの種菌を培養してヨーグルトベース３００ｇを得た。さらに、砂糖５０ｇ、ペクチン３ｇ、脂肪球皮膜成分（雪印乳業社製 ミルクセラミドＭＣ−５）５０００ｍｇを水に溶解させ、水を加え全量を４５０ｇとした。この溶液を１２０℃で、３秒間殺菌してシロップを得た。上記のヨーグルトベースとシロップを混合し、香料を１ｇ添加した後、均質化して、脂肪球皮膜成分を含有するミトコンドリア機能向上、エネルギー消費促進用ヨーグルトを得た。
【００５１】
処方例４ ミトコンドリア機能向上、エネルギー消費促進用マヨネーズ
卵黄１６ｇに食塩２．８ｇ、蔗糖０．９ｇ、香辛料（マスタード粉末）０．４ｇ、調味料（グルタミン酸ナトリウム）０．５ｇ、増粘剤０．５ｇ、水２３．０ｍｌ、食酢（酸度１０％）８ｇ、脂肪球皮膜成分（雪印乳業社製 ミルクセラミドＭＣ−５）３０００ｍｇを加え、これにサラダ油５０ｇを加えてよく攪拌して脂肪球皮膜成分を含有するミトコンドリア機能向上、エネルギー消費促進用マヨネーズを得た。
【００５２】
処方例５ ミトコンドリア機能向上、エネルギー消費促進用内服液
タウリン１０００ｍｇ、ショ糖１０００ｍｇ、カラメル５０ｍｇ、安息香酸ナトリウム３０ｍｇ、ビタミンＢ１硝酸塩５ｍｇ、ビタミンＢ２ ２０ｍｇ、ビタミンＢ６ ２０ｍｇ、ビタミンＣ ２０００ｍｇ、ビタミンＥ １００ｍｇ、ビタミンＤ３ ２０００ＩＵ、ニコチン酸アミド２０ｍｇ、脂肪球皮膜成分（雪印乳業社製 ミルクセラミドＭＣ−５）１０００ｍｇ、ロイシン３００ｍｇ、イソロイシン１５０ｍｇ、バリン１５０ｍｇを適量の精製水に加えて溶解し、リン酸水溶液でｐＨ３に調節した後、更に精製水を加えて全量を５０ｍＬとした。これを８０℃で３０分滅菌して、脂肪球皮膜成分及びアミノ酸類を含有するミトコンドリア機能向上、エネルギー消費促進用飲料を得た。
【００５３】
処方例６ ミトコンドリア機能向上、エネルギー消費促進用乳系飲料
脱脂粉乳１．８ｇ、クリーミングパウダー２．５ｇ、デキストリン６．５ｇ、ショ糖３ｇ、ミネラル類１．２ｇ、ビタミン類０．３ｇ、脂肪球皮膜成分（ニュージーランドミルクプロダクツ社製 Ｐｈｏｓｐｈｏｌｉｐｉｄ Ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｅ ５００）１．０ｇに精製水を加え、各成分を均一に混合し、脂肪球皮膜成分を含有するミトコンドリア機能向上、エネルギー消費促進用乳系飲料（１００ｍＬ）を得た。
【技術分野】
【０００１】
本発明はミトコンドリア機能向上剤、エネルギー消費促進剤及び脂質燃焼促進剤に関する。
【背景技術】
【０００２】
我々の生命活動は代謝とよばれる様々な物理・化学的過程の連鎖により産生されるアデノシン三リン酸（ＡＴＰ）により支えられているが、ミトコンドリアはエネルギー代謝の中心的役割を担っており、脂肪酸のβ酸化や電子伝達系による酸化的リン酸化によりＡＴＰを供給している。
【０００３】
生体でのエネルギー消費を反映している酸素消費は骨格筋、肝臓、あるいは心臓で多いことが特徴であるが、このことはミトコンドリアが心筋や肝臓、骨格筋に多く分布することと一致しており、エネルギー代謝におけるミトコンドリアの役割の大きさが伺い知れる。生体での酸素消費の９０％以上はミトコンドリアで行われると言われている。
【０００４】
近年、ミトコンドリアの機能異常が、生活習慣病や老化関連疾患等と密接に関係していることが明らかにされつつある。老化によるエネルギー代謝の低下にはミトコンドリアＤＮＡの変異や損傷といったミトコンドリア機能の低下が関係していることが知られている（非特許文献１）。
【０００５】
ミトコンドリア機能の低下は、エネルギー代謝の低下を介して、エネルギー摂取とエネルギー消費のアンバランスを引き起こすことから、生活習慣病の原因となり得る（非特許文献２）。従って、ミトコンドリア機能を維持・向上させ、エネルギー代謝を高めることは、生活習慣病の予防・改善・発症リスクの低下につながり、クオリティオブライフ（ＱＯＬ）の向上に寄与すると考えられる。
【０００６】
一方、運動は筋肉のミトコンドリア量を増加させる方法の一つとして知られている（非特許文献３）。従って、運動は筋肉でのミトコンドリアの増加を介し、生体でのエネルギー消費の増加につながると考えられる。しかしながら、運動の重要性が広く認識されている現代においても、定期的に運動を行うことは現実的にはなかなか難しく、より効果的にエネルギー代謝を促進し、エネルギー消費を増加させる方法が望まれている。
【０００７】
懸かる観点から、エネルギー代謝やミトコンドリア機能を高める成分の探索が行われている。
例えば、エネルギー代謝を促進させる成分として、交感神経活性化作用を有するカフェインやカプサイシンなどが報告されている（非特許文献４、５）。しかしながら、カフェインやカプサイシンは、安全性や刺激性の点等から、その実用性が限定され満足できるものではない。その他のエネルギー代謝促進作用を有する例としては、カプシノイド含有組成物（特許文献１）やフラバン類又はフラバノン類（特許文献２）が挙げられる。
また、近年では、辛味が少なく、低刺激性のカプサイシン類縁体であるカプシエイトのエネルギー代謝促進作用が報告されている（非特許文献６）。
更に、茶カテキンには老化に伴うエネルギー代謝低下、ミトコンドリア機能低下を抑制する作用が見出されている（特許文献３）。また、ミトコンドリア機能活性化作用を有する例としては、ベンゾイミダゾール誘導体又はその塩（特許文献４）、1，2-エタンジオール又はその塩（特許文献５）が挙げられる。
しかしながら、エネルギー代謝やミトコンドリア機能を高める成分は、これら以外には殆ど知られていない。
【０００８】
脂肪球皮膜成分は、乳腺より分泌される乳脂肪球を被覆している膜であって、脂肪を乳汁中に分散させる機能を有するのみならず、新生動物の食物として多くの生理的機能を有している。例えば、血中アディポネクチン増加及び／又は減少抑制効果（特許文献６）、学習能向上効果（特許文献７）、シアロムチンの分泌促進効果等（特許文献８）の生理機能を有することが知られている。
しかしながら、脂肪球皮膜成分が、エネルギー代謝やミトコンドリア機能に対して与える影響については、これまで全く知られていない。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００９】
【特許文献１】特開２００４−１４９４９４号公報
【特許文献２】特開２００７−３１４４４６号公報
【特許文献３】特開２００８−６３３１８号公報
【特許文献４】特開２００４−６７６２９号公報
【特許文献５】特開２００２−３２２０５８号公報
【特許文献６】特開２００７−３２０９０１号公報
【特許文献７】特開２００７−２４６４０４公報
【特許文献８】特開２００７−１１２７９３公報
【非特許文献】
【００１０】
【非特許文献１】岩波講座 現代医学の基礎 1999 12(2):55-58.
【非特許文献２】Ritz P. Diabetes Metab. 2005 2:5S67-5S73.
【非特許文献３】Holloszy JO.J.Physiol.Pharmacol.2008 59:5-18.
【非特許文献４】Dulloo AG.Am J Clin Nutr. 1989 49(1):44-50.
【非特許文献５】Kawada T. Proc Soc Exp Biol Med. 1986 183(2):250-6.
【非特許文献６】Ohnuki K. Biosci Biotechnol Biochem. 2001 65(12):2735-40.
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【００１１】
本発明は、食経験が豊富なものを由来とし、安全性が高く、医薬品、医薬部外品、食品及び飼料として有用なミトコンドリア機能向上剤、エネルギー消費促進剤、脂質燃焼促進剤を提供することに関する。
【課題を解決するための手段】
【００１２】
本発明者らは、ミトコンドリア機能向上、エネルギー消費促進、脂質燃焼促進に関して有効な成分の探索を行った結果、脂肪球皮膜成分に、ミトコンドリア機能向上効果、エネルギー消費促進効果、脂質燃焼促進効果があることを見出した。
【００１３】
すなはち、本発明は、脂肪球皮膜成分を有効成分とするミトコンドリア機能向上剤、エネルギー消費促進剤、脂質燃焼促進剤に係るものである。
【発明の効果】
【００１４】
本発明のミトコンドリア機能向上剤、エネルギー消費促進剤、脂質燃焼促進剤は、安全性が高く、優れたミトコンドリア機能向上作用、エネルギー消費促進作用、脂質燃焼促進作用を有する。従って、ミトコンドリア機能やエネルギー代謝低下の予防・改善のための、飲食品、医薬品、医薬部外品又は飼料に有効成分として配合するための素材として有用である。
【発明を実施するための最良の形態】
【００１５】
本発明における脂肪球皮膜成分は、乳中の脂肪球を皮膜する膜及びそれを構成する膜成分混合物と定義され、バターミルクやバターセーラム等の乳複合脂質高含有画分に多く含まれることが知られている。乳脂肪球皮膜は、一般的に、乳脂肪球皮膜の約４０〜４５％はタンパク質から、また約５０〜５５％は脂質から構成されており、当該タンパク質としては、ミルクムチンと呼ばれる糖蛋白質（Mather IH、Biochim Biophys Acta.(1978) 514:25-36.）等を含むことが知られ、また、当該脂質としては、トリグリセライドやリン脂質（例えば、スフィンゴリン脂質、グリセロリン脂質等）が多く含まれ、これ以外にスフィンゴ糖脂質（例えば、グルコシルセラミド、ガングリオシド等）が含まれることが知られている（Keenan TW、Applied Science Publishers.(1983) pp89-pp130.）。
【００１６】
本発明における脂肪球皮膜成分に含まれるリン脂質としては、スフィンゴミエリン等のスフィンゴリン脂質の他、ホスファチジルコリンやホスファチジルエタノールアミン等のグリセロリン脂質が挙げられる。この中で、乳由来の特徴的なリン脂質であるスフィンゴミエリンが脂肪球皮膜成分に含まれることが好ましい。
【００１７】
本発明における脂肪球皮膜成分中の脂質の含有量は、特に限定されないが、乾燥物換算で、２０〜１００質量％、より３５〜９０質量％、更に５０〜９０質量％であるのが好ましい。
本発明における脂肪球皮膜成分中のリン脂質の含有量は、特に限定されないが、乾燥物換算で、３〜１００質量％、より１０〜１００質量％、更に１５〜８５質量％、より更に２０〜７０質量％であるのが好ましい。
脂肪球皮膜成分中の各リン脂質の含有量は、特に限定されないが、例えば、スフィンゴミエリンの含有量は、脂肪球皮膜成分中、乾燥物換算で、１〜５０質量％、より２〜３０質量％、更に３〜２５質量％、より更に４〜２０質量％であるのが好ましい。
【００１８】
本発明の脂肪球皮膜成分としては、乳原料等から遠心分離法や有機溶剤抽出法等の各種脂肪球皮膜成分の調製法により得たものを用いてもよい。さらに、透析、硫安分画、ゲルろ過、等電点沈殿、イオン交換クロマトグラフィー、溶媒分画等の手法により精製することにより純度を高めたものを使用してもよい。
【００１９】
本発明の脂肪球皮膜成分の乳原料としては、牛乳やヤギ乳等が挙げられるが、乳の中でも牛乳由来の脂肪球皮膜成分は、食経験が豊富であり、高純度かつ安価なものも上市されており、特に好ましい。
また、乳原料には、生乳、脱脂乳や加工乳等の乳の他、乳製品も含まれるが、乳製品としては、バターミルク、バターオイル、バターセーラム、ホエータンパク質濃縮物（ＷＰＣ）等が挙げられる。
【００２０】
当該脂肪球皮膜成分の調製は、例えば、乳やホエータンパク質濃縮物（ＷＰＣ）等の乳製品をエーテルやアセトンで抽出する方法（特開平３−４７１９２号公報）、バターミルクを酸性域に調整、等電点沈殿を行うことにより生じたタンパク質を除去し、上清を精密濾過膜処理して得られる濃縮液を乾燥する方法（特許第３１０３２１８号公報）により行うことができる。
また、バターセーラム中よりタンパク質を凝集除去後に濾過濃縮し乾燥する方法（特開２００７−８９５３５）等も使用することができる。本製法によると、例えば、乳由来の複合脂質を乾燥物中２０重量％以上含有する脂肪球皮膜成分を調製することができる。なお、脂肪球皮膜成分の形態は、特に限定されず、液状、半固体状や個体状、粉状等の何れでもよく、これらを単独で又は２種以上組み合わせて用いてもよい。
【００２１】
また、脂肪球皮膜成分として、市販品を用いることもできる。斯かる市販品としては、メグレジャパン（株）「ＢＳＣＰ」、雪印乳業（株）「ミルクセラミドＭＣ−５」、（株）ニュージーランドミルクプロダクツ「Ｐｈｏｓｐｈｏｌｉｐｉｄ Ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｅ」等が挙げられる。
また、脂肪球皮膜成分は牛乳等を遠心分離して得られるクリームからバター粒を製造する際に得られるバターミルク中に多く含まれているので、バターミルクをそのまま使用してもよい。同様に、脂肪球皮膜成分はバターオイルを製造する際に生じるバターセーラム中に多く含まれているので、バターセーラムをそのまま使用してもよい。
【００２２】
後記実施例に示すように、脂肪球皮膜成分は、ミトコンドリア機能向上作用、エネルギー消費促進作用及び脂質燃焼促進作用を有する。従って、脂肪球皮膜成分は、ミトコンドリア機能向上剤、エネルギー消費促進剤、脂質燃焼促進剤（以下、「ミトコンドリア機能向上剤等」とする。）として使用することができ、さらに当該ミトコンドリア機能向上剤を製造するために使用することができる。当該ミトコンドリア機能向上剤等には、当該脂肪球皮膜成分を単独で、又はこれ以外に、必要に応じて適宜選択した担体等の、配合すべき後述の対象物において許容されるものを使用してもよい。なお、当該製剤は配合すべき対象物に応じて常法により製造することができる。
【００２３】
本発明のミトコンドリア機能向上剤等は、ヒト及び動物に投与することができる他、各種飲食品、医薬品、ペットフード等の有効成分として配合して使用することができる。食品としては、ミトコンドリア機能の向上、あるいはエネルギー消費促進及び生活習慣病の予防・改善・発症リスクの低下等の生理機能をコンセプトとし、必要に応じてその旨を表示した飲食品、機能性飲食品、病者用飲食品、特定保健用食品等に応用できる。
【００２４】
本発明のミトコンドリア機能向上剤等を医薬品、医薬部外品の有効成分として用いる場合の投与形態としては、例えば錠剤、カプセル剤、顆粒剤、散剤、シロップ剤等による経口投与又は注射剤、坐剤、吸入薬、経皮吸収剤、外用剤等による非経口投与が挙げられる。また、このような種々の剤型の製剤を調製するには、本発明のミトコンドリア機能向上剤等を単独で、又は他の薬学的に許容される賦形剤、結合剤、増量剤、崩壊剤、界面活性剤、滑沢剤、分散剤、緩衝剤、保存剤、嬌味剤、香料、被膜剤、担体、希釈剤等を適宜組み合わせて用いることができる。また、これらの投与形態のうち、好ましい形態は経口投与であり、経口用液体製剤を調製する場合は、嬌味剤、緩衝剤、安定化剤等を加えて常法により製造することができる。
【００２５】
本発明のミトコンドリア機能向上剤等を食品の有効成分として用いる場合、当該食品の形態としては、牛乳、加工乳、乳飲料、ヨーグルト、清涼飲料水、茶系飲料、コーヒー飲料、果汁飲料、炭酸飲料、ジュース、ゼリー、ウエハース、ビスケット、パン、麺、ソーセージ等の飲食品や栄養食等の各種食品の他、さらには、上述した経口投与製剤と同様の形態（錠剤、カプセル剤、シロップ等）の栄養補給用組成物が挙げられる。
【００２６】
種々の形態の食品を調製するには、本発明のミトコンドリア機能向上剤等を単独で、又は他の食品材料や、溶剤、軟化剤、油、乳化剤、防腐剤、香科、安定剤、着色剤、酸化防止剤、保湿剤、増粘剤等を適宜組み合わせて用いることが可能である。
【００２７】
また、本発明のミトコンドリア機能向上剤等を飼料の有効成分として用いる場合には、全ての家畜の飼料に広範に用いることができ、例えば、牛、豚、鶏、羊、馬、山羊等に用いる家畜用飼料、ウサギ、ラット、マウス等に用いる小動物用飼料、マグロ、ウナギ、タイ、ハマチ、エビ等に用いる魚介類用飼料、犬、猫、小鳥、リス等に用いるペットフード等が挙げられる。
【００２８】
飼料には本発明のミトコンドリア機能向上剤等の他に、肉類、蛋白質、穀物類、ぬか類、粕類、糖類、野菜、ビタミン類、ミネラル類等一般に用いられる飼料原料、又は溶剤、軟化剤、油、乳化剤、防腐剤、香科、安定剤、着色剤、酸化防止剤、保湿剤、増粘剤等を適宜配合し、常法により当該飼料を製造することができる。
【００２９】
本発明のエネルギー消費促進剤等には、脂肪球皮膜成分の他に、必要に応じて適宜選択したその他の薬効成分を併用してもよい。
【００３０】
本発明のエネルギー消費促進剤等を含む飲料、例えば乳飲料、清涼飲料水、茶系飲料等に対する脂肪球皮膜成分の配合量は、脂肪球皮膜成分（乾燥物換算）は、０．００１〜５．０質量％、さらに０．０１〜３．０質量％、特に０．１〜２．０質量％とするのが好ましい。
【００３１】
本発明のエネルギー消費促進剤等を含む飲料以外の食品や飼料、また医薬品、例えば錠剤、顆粒剤、カプセル剤等の経口用固形製剤、内服液剤、シロップ剤等の経口用液体製剤の場合には、脂肪球皮膜成分（乾燥物換算）は、０．０２〜８０質量％、さらに０．２〜７５質量％、特に２．０〜５０質量％とするのが好ましい。尚、脂肪球皮膜成分は、溶解状態であっても、分散状態であっても良く、その存在状態は問わない。
【００３２】
本発明のミトコンドリア機能向上剤等の摂取量は、剤形や用途によって異なるが、上記脂肪球皮膜成分（乾燥物換算）として、成人に対して１日あたり、１０〜１００００ｍｇ／６０ｋｇ体重とするのが好ましく、特に１００〜５０００ｍｇ／６０ｋｇ体重、更に５００〜５０００ｍｇ／６０ｋｇ体重とするのが好ましい。
【００３３】
以下、本発明の代表的な試験例と実施例を示すが、本発明はこれに限定されるものではない。
【実施例】
【００３４】
試験例１ 脂肪球皮膜成分のエネルギー消費及び脂質燃焼促進作用
脂肪球皮膜成分のエネルギー消費及び脂質燃焼促進作用に対する評価を下記の通り行った。脂肪球皮膜成分としては、メグレジャパン社製 ＢＳＣＰを使用した。
ＢＳＣＰには、乾燥物換算で、蛋白質 ４９質量％（以下、「％」とする）及び脂質 ３９％が含まれ、スフィンゴリン脂質としてスフィンゴミエリン ３．７％が含まれ、スフィンゴ糖脂質としてグルコシルセラミド ２．４％，およびガングリオシド ０．４％が含まれていた。
【００３５】
脂肪球皮膜成分中の蛋白質及び脂質の分析方法としては、ケルダール法（神立誠著、最新食品分析法、同文書院）及びレーゼゴットリーブ法（日本食品工業学会編、食品分析法、光琳）で行なった。
また、脂肪球皮膜成分中のリン脂質の分析は、LC-MS法にて行なった。すなわち、脂肪球皮膜成分よりクロロホルム/メタノール（＝2:1）を用いて脂質画分を抽出し、窒素気流下で乾固した後、ヘキサン/イソプロパノール（＝95:5）に溶解した。この試料を、下記LC-MS分析に供し、リン脂質の定量を行った。
具体的な分析手段としては、以下のものを用いた。
カラム：Inertsil SIL 100A-3 （GLサイエンス社、1.5mm×150mm）
カラム温度：40℃
流速：0.1 mL/min
検出器：アジレント、1100 LC/MSD
移動相：A液（ヘキサン：イソプロパノール：ギ酸＝95:5:0.1）およびB液（ヘキサン：イソプロパノール：50mMギ酸アンモニウム＝25:65:10）のグラジエント分離
【００３６】
１週間の予備飼育後、９週齢のＢＡＬＢ／ｃマウス（雄：オリエンタルバイオサービス）を体重が等しくなるように２群に分けた（各群８匹）。その後、対照食については、コントロール食（１０％脂質、２０％カゼイン、５５．５％ポテトスターチ、８．１％セルロース、０．２％メチオニン、２．２％ビタミン（商品名：ビタミン混合ＡＩＮ−７６、オリエンタルバイオサービス）、４％ミネラル（商品名：ミネラル混合ＡＩＮ−７６、オリエンタルバイオサービス））を、また試験食群については脂肪球皮膜成分を含む試験食（１０％脂質、２０％カゼイン、５４．５％ポテトスターチ、８．１％セルロース、０．２％メチオニン、２．２％ビタミン、４％ミネラル、１％脂肪球皮膜成分）を、それぞれ８週間与え、９週目に呼気分析に供した。
【００３７】
マウスを呼気分析用チャンバーに移し、４８時間環境に馴化させた後、Ａｒｃｏ−２０００ｓｙｓｔｅｍ（アルコシステム）を用いて各マウスの酸素消費量及び呼吸商を２４時間測定した。ここでいう酸素消費量とは、エネルギー消費量（１ｍｉｎ当たりのマウス体重１ｋｇにおける酸素消費量ｍＬ（ｍＬ／ｋｇ／ｍｉｎ））を指し、呼吸商は二酸化炭素排出量と酸素消費量の比を指す。これら酸素消費量と呼吸商より、Ｐｅｒｏｎｎｅｔの式（Peronnet F, and Massicotte D (1991) Can J Sport Sci 16:23-29.）を用いて、脂質燃焼量を算出した。表１に２４時間の平均エネルギー消費量（ｍＬ／ｋｇ／ｍｉｎ）、平均脂質燃焼量（ｍｇ／ｋｇ／ｍｉｎ）を示す。
【００３８】
【表１】
【００３９】
表１から、脂肪球皮膜成分を含有する試験食を摂取したマウス（試験食群）では、対照食群と比較して、酸素消費量及び脂質燃焼量が有意に多いことがわかる。従って、本発明の脂肪球皮膜成分はエネルギー消費促進剤及び脂質燃焼促進剤として又はそれらの素材として有用である。
【００４０】
試験例２ 脂肪球皮膜成分のミトコンドリア機能向上効果
脂肪球皮膜成分のエネルギー消費、脂質燃焼促進、ミトコンドリア機能向上作用に対する評価を下記の通り行った。脂肪球皮膜成分としては、ニュージーランドミルクプロダクツ社製Ｐｈｏｓｐｈｏｌｉｐｉｄ Ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｅ ７００を使用した。
Ｐｈｏｓｐｈｏｌｉｐｉｄ Ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｅ ７００には、乾燥物換算で、脂質 ８５％が含まれ、スフィンゴミエリン １６．５％が含まれていた。
１週間の予備飼育後、９週齢のＢＡＬＢ／ｃマウス（雄：オリエンタルバイオサービス）を体重と遊泳持久力（下記の方法により、マウス用流水プール（京大松元式運動量測定流水槽）を用いて限界遊泳時間を測定）が等しくなるように２群に分けた（各群８匹）。群分け後、対照群としては、コントロール食（１０％脂質、２０％カゼイン、５５．５％ポテトスターチ、８．１％セルロース、０．２％メチオニン、２．２％ビタミン（商品名：ビタミン混合ＡＩＮ−７６、オリエンタルバイオサービス）、４％ミネラル（商品名：ミネラル混合ＡＩＮ−７６、オリエンタルバイオサービス））を、また試験食群としては、脂肪球皮膜成分を含む試験食（１０％脂質、２０％カゼイン、５４．５％ポテトスターチ、８．１％セルロース、０．２％メチオニン、２．２％ビタミン、４％ミネラル、１％脂肪球皮膜成分）を、それぞれ１３週間給餌した。尚、この間マウス（対照食群、試験食群）を運動に慣らすため、週２回の遊泳トレーニング（６Ｌ／ｍｉｎ, ３０ｍｉｎ）を施した。限界遊泳時間測定：７Ｌ／ｍｉｎの流量でマウスが泳げなくなった時点とした。
【００４１】
８週間飼育後に呼気分析に供した。マウスを呼気分析用チャンバーに移し、４８時間環境に馴化させた後、Ａｒｃｏ−２０００ｓｙｓｔｅｍ（アルコシステム）を用いて呼気を２４時間測定した。各マウスの酸素消費量（エネルギー消費量）と呼吸商から、Ｐｅｒｏｎｎｅｔの式（Peronnet F, and Massicotte D (1991) Can J Sport Sci 16:23-29.）を用いて、脂質燃焼量を算出した。表２に２４時間の平均エネルギー消費量、平均脂質燃焼量を示す。
【００４２】
１３週間飼育後に各群のマウスの腓腹筋を採取し、ＲＮｅａｓｙ Ｆｉｂｒｏｕｓ Ｔｉｓｓｕｅ Ｍｉｎｉ Ｋｉｔ（Ｑｉａｇｅｎ）を用いて、ＲＮＡサンプルを得た。各ＲＮＡサンプルを定量し、1反応あたりのＲＮＡ量を１２５ｎｇとして反応液中（１ｘＰＣＲ ｂｕｆｆｅｒ ＩＩ（アプライドバイオシステム社）、５ｍＭ ＭｇＣｌ２、１ｍＭ ｄＮＴＰ ｍｉｘ、２．５μＭ Ｏｌｉｇｏ ｄ〔Ｔ〕18（Ｎｅｗ Ｅｎｇｌａｎｄ Ｂｉｏｌａｂｓ社）、１Ｕ／ｍｌ ＲＮａｓｅ ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ（タカラバイオ社））で逆転写反応を行い、ｃＤＮＡを得た。反応条件は４２℃、１０分間、５２℃、３０分間、９９℃、５分間とした。
【００４３】
得られたｃＤＮＡを鋳型として、ＡＢＩ ＰＲＩＳＭ ７７００ Ｓｅｑｕｅｎｃｅ Ｄｅｔｅｃｔｏｒ（アプライドバイオシステムズ社）により定量的ＰＣＲを行った。３６Ｂ４ｍＲＮＡの発現量を基準として補正し、相対的ｍＲＮＡ発現量として表した。プライマーとしてＰＧＣ−１β（ＧｅｎＢａｎｋ: ＮＭ＿１３３２４９、Ｆｏｒｗａｒｄ：ＡＣＧＧＴＴＴＴＡＴＣＡＣＣＴＴＣＣＧＧＴ（配列番号１）、Ｒｅｖｅｒｓｅ：ＡＴＡＧＣＴＣＡＧＧＴＧＧＡＡＧＧＡＧＧＧ（配列番号２）、ＣＰＴ１ｂ（ＧｅｎＢａｎｋ: ＮＭ＿００９９４８、Ｆｏｒｗａｒｄ：ＡＣＴＧＴＴＧＧＡＣＡＴＣＧＣＣＧＡＡＣ（配列番号３）、Ｒｅｖｅｒｓｅ：ＣＣＴＣＴＴＣＴＴＣＣＡＣＣＡＧＧＴＧＧ（配列番号４））、３６Ｂ４（ＧｅｎＢａｎｋ: ＮＭ＿００７４７５、Ｆｏｒｗａｒｄ：ＧＡＣＡＴＣＡＣＡＧＡＧＣＡＧＧＣＣＣＴ（配列番号５）、Ｒｅｖｅｒｓｅ：ＴＣＴＣＣＡＣＡＧＡＣＡＡＴＧＣＣＡＧＧ（配列番号６））を用いた。結果を表３に示した。
【００４４】
【表２】
【００４５】
表２から、脂肪球皮膜成分を含有する試験食を摂取したマウスでは、対照食群と比較して、酸素消費量及び脂質燃焼量が有意に多いことがわかる。従って、本発明の脂肪球皮膜成分はエネルギー消費促進剤及び脂質燃焼促進剤として又はそれらの素材として有用である。
【００４６】
【表３】
【００４７】
表３から、脂肪球皮膜成分を含有する試験食を摂取したマウスでは、対照食群と比較して、ミトコンドリア新生や脂肪燃焼に関与するＰＧＣ−１βやＣＰＴ１ｂ遺伝子発現が腓腹筋において有意に高いことがわかる。従って、本発明の脂肪球皮膜成分はミトコンドリア機能向上剤として又はその素材として有用である。
【００４８】
製剤例
処方例１ ミトコンドリア機能向上、エネルギー消費促進用ゼリー食品
カラギーナンとローカストビーンガムの混合ゲル化剤０．６５％、オレンジの５０％の濃縮果汁５．０％、クエン酸０．０５％、ビタミンＣ０．０５％、および脂肪球皮膜成分（ニュージーランドミルクプロダクツ社製 Ｐｈｏｓｐｈｏｌｉｐｉｄ Ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｅ ７００）を１．０％混合し、これに水を加えて１００％に調整し、６５℃で溶解した。更に少量のオレンジフレーバーを添加して８５℃で５分間保持して殺菌処理後、１００ｍＬの容器に分注した。８時間静置して徐冷しながら５℃に冷却して、ゲル化させ、口に含んだ時に口溶け性が良好で、果実風味を有し食感良好な脂肪球皮膜成分を含有するゼリー食品を得た。
【００４９】
処方例２ ミトコンドリア機能向上、エネルギー消費促進用錠剤
アスコルビン酸１８０ｍｇ、クエン酸５０ｍｇ、アスパルテーム１２ｍｇ、ステアリン酸マグネシウム２４ｍｇ、結晶セルロース１２０ｍｇ、乳糖２７４ｍｇ、および脂肪球皮膜成分（メグレ社製 ＢＳＣＰ）８００ｍｇからなる処方（１日量２０００ｍｇ）で、日本薬局方（製剤総則「錠剤」）に準じて錠剤を製造し、脂肪球皮膜成分を含有する錠剤を得た。
【００５０】
処方例３ ミトコンドリア機能向上、エネルギー消費促進用ヨーグルト
２０％脱脂乳を１２０℃で、３秒間殺菌した後、ストレプトコッカス・サーモフィルス及びラクトバチルス・カゼイの種菌を培養してヨーグルトベース３００ｇを得た。さらに、砂糖５０ｇ、ペクチン３ｇ、脂肪球皮膜成分（雪印乳業社製 ミルクセラミドＭＣ−５）５０００ｍｇを水に溶解させ、水を加え全量を４５０ｇとした。この溶液を１２０℃で、３秒間殺菌してシロップを得た。上記のヨーグルトベースとシロップを混合し、香料を１ｇ添加した後、均質化して、脂肪球皮膜成分を含有するミトコンドリア機能向上、エネルギー消費促進用ヨーグルトを得た。
【００５１】
処方例４ ミトコンドリア機能向上、エネルギー消費促進用マヨネーズ
卵黄１６ｇに食塩２．８ｇ、蔗糖０．９ｇ、香辛料（マスタード粉末）０．４ｇ、調味料（グルタミン酸ナトリウム）０．５ｇ、増粘剤０．５ｇ、水２３．０ｍｌ、食酢（酸度１０％）８ｇ、脂肪球皮膜成分（雪印乳業社製 ミルクセラミドＭＣ−５）３０００ｍｇを加え、これにサラダ油５０ｇを加えてよく攪拌して脂肪球皮膜成分を含有するミトコンドリア機能向上、エネルギー消費促進用マヨネーズを得た。
【００５２】
処方例５ ミトコンドリア機能向上、エネルギー消費促進用内服液
タウリン１０００ｍｇ、ショ糖１０００ｍｇ、カラメル５０ｍｇ、安息香酸ナトリウム３０ｍｇ、ビタミンＢ１硝酸塩５ｍｇ、ビタミンＢ２ ２０ｍｇ、ビタミンＢ６ ２０ｍｇ、ビタミンＣ ２０００ｍｇ、ビタミンＥ １００ｍｇ、ビタミンＤ３ ２０００ＩＵ、ニコチン酸アミド２０ｍｇ、脂肪球皮膜成分（雪印乳業社製 ミルクセラミドＭＣ−５）１０００ｍｇ、ロイシン３００ｍｇ、イソロイシン１５０ｍｇ、バリン１５０ｍｇを適量の精製水に加えて溶解し、リン酸水溶液でｐＨ３に調節した後、更に精製水を加えて全量を５０ｍＬとした。これを８０℃で３０分滅菌して、脂肪球皮膜成分及びアミノ酸類を含有するミトコンドリア機能向上、エネルギー消費促進用飲料を得た。
【００５３】
処方例６ ミトコンドリア機能向上、エネルギー消費促進用乳系飲料
脱脂粉乳１．８ｇ、クリーミングパウダー２．５ｇ、デキストリン６．５ｇ、ショ糖３ｇ、ミネラル類１．２ｇ、ビタミン類０．３ｇ、脂肪球皮膜成分（ニュージーランドミルクプロダクツ社製 Ｐｈｏｓｐｈｏｌｉｐｉｄ Ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｅ ５００）１．０ｇに精製水を加え、各成分を均一に混合し、脂肪球皮膜成分を含有するミトコンドリア機能向上、エネルギー消費促進用乳系飲料（１００ｍＬ）を得た。
【特許請求の範囲】
【請求項１】
脂肪球皮膜成分を有効成分とするミトコンドリア機能向上剤。
【請求項２】
脂肪球皮膜成分を有効成分とするエネルギー消費促進剤。
【請求項３】
脂肪球皮膜成分を有効成分とする脂質燃焼促進剤。
【請求項１】
脂肪球皮膜成分を有効成分とするミトコンドリア機能向上剤。
【請求項２】
脂肪球皮膜成分を有効成分とするエネルギー消費促進剤。
【請求項３】
脂肪球皮膜成分を有効成分とする脂質燃焼促進剤。
【公開番号】特開２０１１−１５７３２９（Ｐ２０１１−１５７３２９Ａ）
【公開日】平成２３年８月１８日（２０１１．８．１８）
【国際特許分類】
【出願番号】特願２０１０−２２２２２（Ｐ２０１０−２２２２２）
【出願日】平成２２年２月３日（２０１０．２．３）
【出願人】（００００００９１８）花王株式会社 (8,290)
【Ｆターム（参考）】
【公開日】平成２３年８月１８日（２０１１．８．１８）
【国際特許分類】
【出願日】平成２２年２月３日（２０１０．２．３）
【出願人】（００００００９１８）花王株式会社 (8,290)
【Ｆターム（参考）】
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