ラミナリンまたはオリゴラミナリンを主成分とする敗血症および敗血症性ショック治療用薬物
本発明は、敗血症および敗血症性ショックの治療用薬物の製造における、ラミナリン、好ましくは可溶形のラミナリン、またはオリゴラミナリンの使用に関する。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、敗血症および敗血症性ショックの治療に適切なラミナリンまたはオリゴラミナリンを主成分とする薬物に関する。
【０００２】
敗血症またはセプシスは、感染による身体の免疫系および凝固系の過剰反応を特徴とする。この反応は、全身性、すなわち全身の感染、および血液凝固を特徴とし、次いで重症セプシスと称する急速な臓器不全を起こし、しばしば死に至る場合がある現象である。
【０００３】
したがって重症セプシスは、例えば、肺、腎臓、心臓血管系および／または他の臓器などの１つまたは複数の臓器不全を伴うセプシスとして定義される。
【０００４】
敗血症性ショックは、一般的で重大な形態の重症セプシスである。敗血症性ショックは、心臓血管系の機能が停止し始めた時、および動脈圧が危険なまでに低いレベルに下がった時に起こる。
【０００５】
セプシスの症状は、年齢、以前の健康状態、および感染に対する患者の反応によって、人により様々であり得る。疾患の進行は予測できず、一部の患者の状態は急速に悪化し、重度のセプシス段階に移り、次いでこれらの患者は肺、腎臓、心臓血管系および／または他の臓器の不全症に罹る。
【０００６】
一般にセプシスは、身体のいずれの部分にも起こり得る、細菌性、ウイルス性、または真菌性感染の結果である。
【０００７】
肺炎、外傷、外科手術、熱傷、または癌などの重病に罹っている人々は、セプシスに罹患しやすい恐れがあり、癌または肺炎の合併症後に死亡する人々は、実際にセプシスが原因で死亡することが多い。薬物で免疫系が衰弱している高齢の人々や患者は特に脆弱である。
【０００８】
死亡率は、症例の３０〜７０％に達することがある。
【０００９】
グラム陽性またはグラム陰性の細菌、菌類、ウイルス、および寄生虫によって起きるセプシスまたは敗血症性ショックの症例数は、
− 病院環境におけるカテーテルおよび他の侵襲性器具使用の増加
− 化学療法の増加、および臓器移植における免疫抑制剤使用の増加
− 重症の炎症性疾患の増加
におそらく関連する憂慮すべき増加を表している。
【００１０】
セプシスおよび敗血症性ショックは、
− グルコースが豊富な生理的血清から構成される液体
− 血圧を回復するための血管収縮性薬剤、および
− 抗生物質
の投与により治療される。
【００１１】
これらの治療には、患者の酸素投与も含まれる。
【００１２】
言及したばかりの従来のこうした治療は、炎症の有害作用を抑制すること、および抗菌防御能を刺激することを目的とし、特に、
− 抗ＬＰＳ抗体
− 抗ＴＮＦ−α抗体
− 新規の抗凝固剤、すなわち活性なプロテインＣおよびドロテコジン（ｄｒｏｔｅｃｏｇｉｎ）
の投与を含む、代替手法により現在補完されている。
【００１３】
本発明の目的は、特に、敗血症および敗血症性ショックに対処する付加的手段を、医学界に提供することである。
【００１４】
実際、敗血症または敗血症性ショックの発現に先行する臨床的現象が、細胞応答の非常に広範な活性化を引き起こし、その結果、サイトカイン類および特にサイトカインまたはケモカインのＴＮＦ−α（腫瘍壊死因子α）、プロスタグランジン、脂質メディエーター、ならびに活性化酸素体など、幾つもの臓器を炎症状態にしておくと思われるあらゆる種類の炎症性メディエーターが、血清および肝臓に放出され、その中で最も罹患しやすい臓器は腎臓、肝臓、腸、および肺であることが見出された。
【００１５】
したがって本発明が基づく論拠は、上記で引用した炎症性メディエーター、特に患者血清中のＴＮＦ−αの含有量を減少させること、および特に免疫を強化し、病原体を除去する際にその反応が知られているクッパー細胞の個数を増加させることを可能にする手段を見出すためであった。
【００１６】
驚くべきことであり、意外にも、ラミナリン、特に可溶形のラミナリンを示す公知のβ−１，３−グルカン、およびオリゴラミナリンの有効量を特に経口経路で患者に投与することによって、該物質が、ＴＮＦ−α濃度に対して減少の方向に作用し、クッパー細胞数に対して増加の方向に作用することが可能になることを見出したことは、上訴会社の功績である。
【００１７】
したがって本発明の一目的は、敗血症および敗血症性ショックの治療を意図した薬物の製剤に、ラミナリン、好ましくは可溶形のラミナリンまたはオリゴラミナリンを使用することである。
【００１８】
有利な一実施形態によれば、本発明の一目的は、敗血症またはセプシスまたは敗血症性ショックの治療を意図した経口投与用薬物の製剤にラミナリンまたはオリゴラミナリンを使用することであり、該薬物は、身体に毎日貢献するのに十分な量、したがってラミナリンまたはオリゴラミナリンを体重ｋｇ当り２〜２１ｍｇ、好ましくは６〜１５ｍｇの量で患者に投与される。
【００１９】
上訴会社が本発明に到達するのを可能にした研究を説明する前に、「ラミナリン」という用語が、褐藻から抽出され、分子量が約２５００〜約６０００であるβ−１，３−グルカン型多糖類の混合物を示すことを念頭に置かれたい。
【００２０】
一方、オリゴラミナリンは、重合度が２〜１０の間、すなわち分子量が３５０〜２０００の間であることを特徴とする、ラミナリンを加水分解して得られるβ−グルカン型オリゴ糖類の混合物である。
【００２１】
ラミナリンは、β−１，３アセタール結合を介して結合した、１５〜３５グルコピラノース単位の線状主鎖で構成され、この主鎖は枝分れの比率が低い。
【００２２】
平均重合度は約２５である。
【００２３】
ラミナリンは、可溶形および不溶形で存在する。
【００２４】
褐藻からそれを抽出し、必要に応じ可溶形および不溶形のラミナリンを分離するために、特に、２００３年６月５日に公開した本出願会社の国際特許出願ＷＯ０３／０４５４１４号を参照することができる。
【００２５】
以下に記載の本研究に関して使用され、本発明に到達することを可能にした特定のラミナリンは、分子量が４５００、平均重合度が２５であって、基本的には重合度が２０〜３０の範囲である多糖類から構成される。
【００２６】
ラミナリンは、無臭で無風味のオフホワイト粉末の形で供給される。
【００２７】
上記で考察した実験研究により、ラミナリンは、特に経口で投与すると、エンドトキシンショックの身体的反動に対して保護作用を発揮することを示すことができた。
【００２８】
これらの結果により、マクロファージおよびＮＫ（ナチュラルキラー）細胞などの免疫担当細胞に対して、ラミナリンが免疫賦活剤効果を発揮すると考えるのも当然であろう。
【００２９】
当該研究に関して、該実験で使用された生物体に起こったエンドトキシンショックは、リポ多糖類またはＬＰＳの投与により生じ、その結果は公知のように細菌の攻撃と類似している。
【００３０】
上記研究用に選択された動物は、Ｗｉｓｔａｒ Ｈａｎ雄性ラット（Ｈａｒｌｅｍ、Ｎｅｔｈｅｒｌａｎｄｓ）だった。
【００３１】
実験は、各々ラット８匹の２群で行った。
【００３２】
２群のうち一方のラット、即ち「対照群」に、ＡＯ４商品名（ＵＡＲ、Ｆｒａｎｃｅ）の入った標準飼料を「無制限に」供給した。他方の群のラットに、商品名「Ｄｅｃｔｉｎａｎ」で市販の上記ラミナリンを補充した以外は同じ飼料を供給し、第一段階では４日間（−４〜−１）、Ｄｅｃｔｉｎａｎを５重量％、次いで第二次段階の２１日間（０〜２１日）は１０重量％で該飼料を強化した。この第２群のラットを「Ｄｅｃｔｉｎａｎ群」と表す。
【００３３】
２１日目に、体重ｋｇ当り１０ｍｇ相当量のＬＰＳ腹腔内注射により、２群のラットに対しエンドトキシンショックを引き起こした。
【００３４】
２２および２３日目はラットに飼料および水を与えず、２４日目に堵殺した。
【００３５】
下記パラメータを調査した
・水および飼料の摂取量
・体重の変化
・脂質および糖質のバランス
・直腸温度
・白血球数
・炎症性メディエーター（血清ＴＮＦ−αおよびＰＧＥ2またはプロスタグランジンＥ2）
・肝臓の常在マクロファージ、すなわちクッパー細胞の組織検査マーカー（ＥＤ２および／またはペルオキシダーゼ活性）
・ＬＰＳ処置の毒性マーカー（血清ＡＬＴ、ＡＳＴ、およびＬＤＨの活性、肝臓、脾臓、胸腺および肺の組織検査）
・盲腸結腸の発酵（糞便および盲腸の増殖重量）。
【００３６】
各種の回収および測定が行われる日を、下記表Ｉで確認する。
【００３７】
【表１】
【００３８】
さらに特に、下記測定を行った。
ａ）ＬＰＳ注射前
・体重
・湿った糞便、および凍結乾燥後の糞便の重量（２４時間かけて回収）
・食餌および飲料水の重量
・尾静脈から血液の採取：トリグリセリドおよびグルコースの定量
ｂ）ＬＰＳ注射後（０、２、４、６、８、および２４時）
・直腸温度
・尾静脈血液の採取：トリグリセリド、グルコース、ＰＧＥ2、ＴＮＦ−α、遊離脂肪酸、ＡＬＴ、ＡＳＴ、およびＬＤＨ（乳酸脱水素酵素）活性の定量
ｃ）堵殺時
・門脈からの血液：遊離脂肪酸の定量
・大静脈からの血液：血液構成（血球計数、ヘマトクリットおよびヘモグロビン）の測定、ならびに血清における遊離脂肪酸、トリグリセリド、ＰＧＥ2、ＴＮＦ−αおよびＡＬＴ、ＡＳＴおよびＬＤＨの活性の定量
・肝臓：重量、組織検査（ヘマトキシリン−エオシン、ペルオキシダーゼ活性およびＥＤ２抗体を介するクッパー細胞の検出）用試料の凍結
・脾臓：重量、および組織検査（ヘマトキシリン−エオシン）用としてホルムアルデヒド中に試料を保存
・盲腸：盲腸全体および空の盲腸の重量
・胸腺および肺：組織検査（ヘマトキシリン−エオシン）用としてホルムアルデヒド中に保存した試料。
【００３９】
記録結果に統計処理を行った。
【００４０】
これに関連して、以下に言及する値は、平均値±ＳＤＭ（平均値の標準偏差）を表す。ＬＰＳの投与前、および堵殺時に得られた結果を、（Ｍｏｒｅ Ｅｘｃｅｌｌ ｈｔｍｌ ＋ｉｎｔｒｏ ｊａｖａ ＋ｃｄ、著者（複数）Ｇｏｔｔｌｅｂｅｒ、０１−２０００に記載の）Ｅｘｃｅｌｌプログラムを使用した２群の間のスチューデントｔ検定（Ａｐｐａｒｅｉｌｓ ｅｔ Ｍｅｔｈｏｄｅｓ ｅｎ Ｂｉｏｃｈｉｍｉｅ［生化学における装置及び方法］ｂｙ Ｐｉｅｒｒｅ Ｋａｍｏｕｎ、３版、ｍｅｄｉｃｉｎｅ ｓｃｉｅｎｃｅｓ Ｆｌａｍｍａｒｉｏｎ、１９８７に記載）で分析した。ＬＰＳ注射後の各種パラメータ動態検査は、二元配置分散分析法、（Ｔｒａｉｔｅｍｅｎｔ ｄｅ ｄｏｎｎｅｅｓ ａｖｅｃ ＳＰＳＳ ｐｏｕｒ Ｗｉｎｄｏｗｓ [ＷｉｎｄｏｗｓのためのＳＰＳＳを用いたデータ処理］（８．０、９．０版）、著者（複数）：Ｆｅｒｎａｎｄｏ ＯｕｅｌｌｅｔおよびＧｅｒａｌｄ Ｂａｉｌｌａｒｇｅｏｎ、出版日：０１−２０００、に記載の）ＳＰＳＳプログラムを介するＬａｗｒｅｎｃｅ出版のＲｕｄｏｌｐｈ Ｎ．Ｃａｒｄｉｎａｌによる「Ｆｏｒ ｔｈｅ Ｂｅｈａｖｉｏｒａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ Ｒｅｓｅａｒｃｈｅｒ」に記載の分散分析により処理した。
【００４１】
統計処理の前に、ＴＮＦ−αおよびＰＧＥ2パラメータ用として個々の値の対数変換を行った。差異がｐ＜０．０５（ｐは許容差５％の確率を意味する）である場合、統計的に有意と考えられる。
【００４２】
ＬＰＳ投与前に得られた結果は、以下に示す通りである。
【００４３】
ラットの到着１週間後、ラット平均体重は１３６±１ｇであり、無作為の方法で対照群およびＤｅｃｔｉｎａｎ（登録商標）群の２群に各々８匹を分配した。治療の第一日目からＬＰＳ注射日までの体重の増加、ならびに水および飼料の総消費量を表Ｉに示す。該食餌はこれら３種のパラメータに影響を及ぼさず、ラミナリンに毒性が無いことの証明である。
【００４４】
記録データを下記の表ＩＩにまとめた。
【００４５】
【表２】
【００４６】
処置の間の糖血症およびトリグリセリド血症における変化をモニターするために、毎週血液試料を採集した。それぞれ図１および２からの結果として、Ｄｅｃｔｉｎａｎ（登録商標）で強化した食餌により、糖血症およびトリグリセリド血症は処置２５日後で有意に（４日で５％、および２１日で１０％）低減され、処置の間の糖血症およびトリグリセリド血症における変化を例示している。
【００４７】
２４時間の糞便を週１度回収して計量した。
【００４８】
図３に示す表からの結果として、Ｄｅｃｔｉｎａｎ（登録商標）で強化した食餌により、糞便重量が処置の第一週目から１０％増加した。
【００４９】
糞便中の水分損失も大きく、Ｄｅｃｔｉｎａｎ（登録商標）で強化した飼料投与の第３週目で１０％、糞便の水分率は２４．７±１．４％であって、一方対照群では１７．８±１．５％（*ｐ＜０．０５、スチューデントｔ検定）であった。
【００５０】
ＬＰＳは、投与２時間後に一過性の高体温および高糖血症を誘発する。Ｄｅｃｔｉｎａｎ（登録商標）で強化した食餌により、これら２つの現象を有意に増大する。さらに、Ｄｅｃｔｉｎａｎ群のラットは堵殺後、対照群のラットより高い体温を維持する。
【００５１】
飼料にＤｅｃｔｉｎａｎ（登録商標）を混合した２５日間の先行処置によって、ＬＰＳにより発生した急性炎症に起因する代謝的効果が阻止されるか、または少なくとも和らげる。すなわち、図４（高体温）、５（高トリグリセリド血症）、および６（高糖血症）のグラフに見られる曲線による結果として、Ｄｅｃｔｉｎａｎ（登録商標）は、ＬＰＳ注射を形成する最初の数時間の低体温、高トリグリセリド血症、および高糖血症を低減する。
【００５２】
つまり、Ｄｅｃｔｉｎａｎ（登録商標）で強化した飼料の投与により、肝臓の免疫細胞の変調と連動する現象である、ＬＰＳ注射による擬態の急性炎症に関連した毒性作用から肝臓が保護される。
【００５３】
さらに、この飼料の投与は肝臓障害の特異的マーカーの増加を相殺するが、このマーカーはアラニンアミノトランスフェラーゼ（ＡＬＴ）の血清活性から構成されており、該投与により、肝臓を含む臓器の一部の有害な組織変化、即ちアスパラギン酸アミノトランスフェラーゼ（ＡＳＴ）および乳酸脱水素酵素（ＬＤＨ）の活性を反映し得る他の血清パラメータも修正される。
【００５４】
記録した結果を、図７（ＡＳＴにおける変化）、８（ＬＤＨにおける変化）および９（ＡＬＴにおける変化）に示す曲線により表示する。
【００５５】
血清中の下記濃度（ｐｇ／ｍｌ中）も測定した
− ＬＰＳ投与の２時間後、４時間後、６時間後、８時間後、および２４時間後のサイトカインＴＮＦ−α
− ＬＰＳ投与の２時間後および２４時間後のプロスタグランジンＰＧＥ2。
【００５６】
各結果を図１０（ＴＮＦ−α）および１１（ＰＧＥ2）のグラフにそれぞれ示す。
【００５７】
炎症性刺激が無いため、０時間ではＴＮＦ−αの検出は不可能になることがある。さらに、飼料中にＤｅｃｔｉｎａｎが無いため、エンドトキシンショックに曝されたラット血清中のＴＮＦ−αおよびＰＧＥ2の濃度が減少する。
【００５８】
この処置の食欲抑制効果に関連する解釈に対する問題を避けるため、ＬＰＳ投与後はラットに飼料および水を与えなかった。
【００５９】
堵殺後、各種計量を行い、その結果を表ＩＩＩにまとめた。
【００６０】
【表３】
【００６１】
表ＩＩＩにまとめた結果の考査により、下記知見を引き出すことができる。
【００６２】
体重の減少は、Ｄｅｃｔｉｎａｎ（登録商標）を含む飼料の投与により有意に変更することはない（体重に関して、２５±２ｇ 対 ２２±１ｇ）。飼料および水を２４時間与えなかった後、動物の体重には２群の間で差がない。肝臓の重量は、有意に近いｐ値を有するＤｅｃｔｉｎａｎ（登録商標）群で僅かに増加する。盲腸組織および盲腸内容物の重量の平均値によって証明されているように、Ｄｅｃｔｉｎａｎ（登録商標）で強化された食餌によって、盲腸の有意な増殖（Ｄｅｃｔｉｎａｎ（登録商標）群３．２±０．３２ｇ 対 対照２．１５±０．２４ｇ *ｐ＜０．０５ スチューデントｔ検定）がもたらされた。
【００６３】
さらに赤血球および白血球を計数し、異なる血液パラメータも測定したが、その操作は大静脈の血液試料に対して行った。
【００６４】
結果を表ＩＶにまとめる。
【００６５】
【表４】
【００６６】
表ＩＶにまとめた結果を考察すると、白血球の中で単球の比率だけが有意に異なり、対照群のラットと比較して、Ｄｅｃｔｉｎａｎ（登録商標）で強化した食餌を飼料としたラットのほうが低いことが分かる。
【００６７】
免疫組織化学法による膜抗原ＥＤ２の検出によって、肝臓でのクッパー細胞の特異的検出が可能となる。これらの細胞は、特に門脈域内に位置しており、ＬＰＳ投与後２４時間でさらに丸くなり膨潤する。各肝臓切片の観察を精緻化するため、定量的手法を行った。ＥＤ２陽性細胞を数えるため、１０×１０四方の（門脈空隙に属する血管を少なくとも３つ含む）３箇所、肝臓切片毎に選択した。Ｄｅｃｔｉｎａｎ（登録商標）で強化した食餌での前処理により、肝臓マクロファージの数が増加し（２５９±１９ ＥＤ２＋細胞／領域 対 ２１７±１４ ＥＤ２＋細胞／視野；ｎ＝６、ｐ＝０．１、スチューデントｔ検定）、肝臓のこれら常在マクロファージは、肝臓の循環するリポ多糖類を浄化する。Ｄｅｃｔｉｎａｎ（登録商標）群に属する（白四角で表される）ラット８の異常に低い値が平均値内に含まれない場合、差異は有意である。
【００６８】
上記処理の結果を図１２に例示し、各肝臓切片のＥＤ２を検出する手段によりクッパー細胞の定量化を示す。
【００６９】
酵素ペルオキシダーゼは、（クッパー細胞などの）マクロファージ、好中球、および好酸球内に存在することが知られている。免疫細胞（好中球）が補充されると、ＬＰＳ投与により肝臓中の陽性細胞数が増加する。Ｄｅｃｔｉｎａｎ（登録商標）を補充した食餌は、陽性細胞数を減少させるように思われる。
【００７０】
エオシンおよびヘマトキシリンで染色した後の組織学的解析により、組織構造、および障害細胞または壊死の病巣も明らかになる。肝臓では、ＬＰＳ注射に関連する有害な変化、主に壊死病巣は、Ｄｅｃｔｉｎａｎ（登録商標）群および対照群の両群で実質的には見られない。有害な生化学的変化（主にＡＬＴにおける増加）は一般的に早く、肝臓組織内での有害な変化に必ずしも反映されるわけではないことが判る。肺が通常炎症状態に関連する浮腫を示す一方、胸腺および脾臓は壊死領域を明らかに示す。
【００７１】
上記にまとめた結果は、血清中のＡＳＴ、ＬＤＨ、およびＡＬＴ活性の増加に対し、Ｄｅｃｔｉｎａｎ（登録商標）の保護作用を示している。ＬＰＳの毒性は、保護作用により低くなり、炎症誘発性サイトカインであるＴＮＦ−α分泌の減少と相互に関係していることが認められる。炎症性刺激２４時間後のＰＧＥ2濃度の減少も認められる。
【００７２】
低体温により、高用量のＬＰＳ投与後、早期に症状が発現する。実際、ＴＮＦ−αは高体温の維持に関与する「極低温」信号として見なされ、この現象は、この場合Ｄｅｃｔｉｎａｎ（登録商標）群よりも高いＴＮＦ−α濃度を有する対照群のラットのほうが、より明らかである。
【００７３】
ＬＰＳ投与により引き起こされたエンドトキシンショックによって、一つには肝臓での激しいグリコーゲン分解による一過性の高糖血症が生じ、次いで、末端組織および特に免疫細胞によるグルコースの使用で、糖血症の段階的減少が生じる。Ｄｅｃｔｉｎａｎ（登録商標）群のラットにおいて一過性の高糖血症がさほど顕著でない場合、潜在的な代謝標的として肝内グリコーゲン分解が誘起されることもあり得る。
【００７４】
高用量のＬＰＳ投与は、両動物群が受ける高トリグリセリド血症を誘発する。血清トリグリセリド濃度は、Ｄｅｃｔｉｎａｎ（登録商標）で強化された食餌後に体系的に低くなるが、ＬＰＳ注射によるトリグリセリドの変動は同じである。炎症性刺激は別として、血液中のトリグリセリド濃度の低下は、高度に有利な結果をなす。
【００７５】
ＥＤ２抗体の組織学的研究によって、Ｄｅｃｔｉｎａｎ（登録商標）で強化された食餌のもとでのクッパー細胞数の増加が実証されており、それは骨髄から生じる原細胞の補充、または存在するクッパー細胞の肝内の増殖のいずれかに関与する可能性がある。クッパー細胞の活性および炎症状態中に補充された免疫細胞に起因する内因性ペルオキシダーゼの組織学的研究では、Ｄｅｃｔｉｎａｎ（登録商標）で強化された食餌後はそれがあまり顕著ではないように思われる。さらに、ＬＰＳ投与後、循環単球数は対照群よりもＤｅｃｔｉｎａｎ（登録商標）群のほうが少ないと観察されることが興味深い。
【００７６】
結論として、Ｄｅｃｔｉｎａｎ（登録商標）で強化された飼料の投与によって、肝臓由来の酵素および肝臓内の免疫細胞数の補充に関する望ましい結果を伴い、ＬＰＳに関連する炎症を減少するのを可能にし、この現象が肝臓ミクロファージ数の増加と関連して起こると観察されることが興味深い。
【００７７】
本発明に従ったラミナリンまたはオリゴラミナリンの使用により得られる薬物は、錠剤、硬ゼラチンカプセル、またはサッシェの形で、あるいは例えば液体、特に、経口で摂取する溶液の形でも供給することができる。
【００７８】
実施例１：錠剤
Ｄｅｃｔｉｎａｎ（登録商標）を主成分とするコーティングされていない錠剤４５０ｍｇ
その配合は以下の通りである
− Ｄｅｃｔｉｎａｎ（登録商標） ２２５ｍｇ、即ち、５０％
− マルトデキストリン １７６ｍｇ、即ち、３９．１％
− リン酸三カルシウム ４０ｍｇ、即ち、 ８．９％
− ステアリン酸マグネシウム ９ｍｇ、即ち、 ２％。
【００７９】
各成分をふるいにかけ、混合し、次いでインゴットの形に圧縮する。続いて後者を、最終錠剤に錠剤化する段階に適する大きさの顆粒に変形する微粉砕機に導入する。
【００８０】
錠剤は、非コーティング、フィルムコートまたは糖衣の形で販売することができる。該錠剤は、ビン、あるいは１５または２０単位のブリスターパックに包装することができる。
【００８１】
投与量は、１日２〜４錠、食中に２回摂取し、１５日続く治療コースで摂取する。
【００８２】
実施例２：硬ゼラチンカプセル
Ｄｅｃｔｉｎａｎ（登録商標）を主成分とする植物または海産物由来の硬ゼラチンカプセル３６３ｍｇ
２８８ｍｇの散剤におけるその配合は以下の通りである
− Ｄｅｃｔｉｎａｎ（登録商標） ２２５ｍｇ、即ち、７８．１％
− 微結晶セルロース ６０ｍｇ、即ち、２０．８％
− シリカ ２ｍｇ、即ち、 ０．７％
− ステアリン酸マグネシウム １ｍｇ、即ち、 ０．４％。
【００８３】
この硬ゼラチンカプセルは、ビン、あるいは１５または２０単位のブリスターパックに包装することができる。
【００８４】
投与量は、硬ゼラチンカプセルを１日２〜４個、食中に２回摂取し、１５日続く治療コースで摂取する。
【００８５】
実施例３：サッシェ
Ｄｅｃｔｉｎａｎ（登録商標）を主成分とする投与量サッシェ１ｇ
その配合は以下の通りである
− Ｄｅｃｔｉｎａｎ（登録商標） ２２５ｍｇ、即ち、２２．５％
− マルトデキストリン ２７５ｍｇ、即ち、２７．５％
− 果糖 ２９５ｇ、 即ち、２９．５％
− レモン搾り汁粉末 ２００ｍｇ、即ち、２０％
− シリカ ５ｍｇ、即ち、 ０．５％。
【００８６】
Ｄｅｃｔｉｎａｎ（登録商標）２２．５ｇを含む水溶液１リットルを、マルトデキストリン２７．５ｇと混合する。次いで他の成分を混和する。次いで、こうして得た溶液を微粒化し、その粉末を顆粒化する。次いで、その粉末を６０℃で終夜乾燥し、３％未満の乾燥物質を得る。次いで、粉末１ｇを含み、大きさ６０×３０ｍｍのアルミニウムサッシェに包装する。
【００８７】
投与量は、サッシェを１日２〜４個、食中に２回摂取し、１５日続く治療コースで摂取する。
【００８８】
実施例４：経口で摂取する溶液
− 水 即ち、９２．８５％
− Ｄｅｃｔｉｎａｎ（登録商標） 即ち、 ２．２５％
− 果糖 即ち、 ４％
− レモン香料 即ち、 ０．２％
− クエン酸 即ち、 ０．５％
− ソルビン酸カリウム 即ち、 ０．１％
− 安息香酸ナトリウム 即ち、 ０．１％。
【００８９】
経口で摂取するこの溶液は、単回投与量を１０ｍｌまたは１００ｍｌビンに詰めることができる。
【００９０】
投与量は、１日に１０ｍｌを２〜４回分、または食さじ２〜４杯、食中に２回摂取し、１５日続く治療コースで摂取する。
【図面の簡単な説明】
【００９１】
【図１】処置の間の糖血糖における変化を示すグラフである。
【図２】処置の間のトリグリセリド血症における変化を示すグラフである。
【図３】処置の間の糞便重量の変化を示すグラフである。
【図４】直腸体温の変化を示すグラフである。
【図５】高トリグリセリド血症の変化を示すグラフである。
【図６】高糖血症の変化を示すグラフである。
【図７】ＡＳＴにおける変化を示すグラフである。
【図８】ＬＤＨにおける変化を示すグラフである。
【図９】ＡＬＴにおける変化を示すグラフである。
【図１０】血清中のＴＮＦ−αの変化を示すグラフである。
【図１１】血清中のＰＧＥ2の変化を示すグラフである。
【図１２】肝臓切片のＥＤ２陽性細胞の数を示すグラフである。
【技術分野】
【０００１】
本発明は、敗血症および敗血症性ショックの治療に適切なラミナリンまたはオリゴラミナリンを主成分とする薬物に関する。
【０００２】
敗血症またはセプシスは、感染による身体の免疫系および凝固系の過剰反応を特徴とする。この反応は、全身性、すなわち全身の感染、および血液凝固を特徴とし、次いで重症セプシスと称する急速な臓器不全を起こし、しばしば死に至る場合がある現象である。
【０００３】
したがって重症セプシスは、例えば、肺、腎臓、心臓血管系および／または他の臓器などの１つまたは複数の臓器不全を伴うセプシスとして定義される。
【０００４】
敗血症性ショックは、一般的で重大な形態の重症セプシスである。敗血症性ショックは、心臓血管系の機能が停止し始めた時、および動脈圧が危険なまでに低いレベルに下がった時に起こる。
【０００５】
セプシスの症状は、年齢、以前の健康状態、および感染に対する患者の反応によって、人により様々であり得る。疾患の進行は予測できず、一部の患者の状態は急速に悪化し、重度のセプシス段階に移り、次いでこれらの患者は肺、腎臓、心臓血管系および／または他の臓器の不全症に罹る。
【０００６】
一般にセプシスは、身体のいずれの部分にも起こり得る、細菌性、ウイルス性、または真菌性感染の結果である。
【０００７】
肺炎、外傷、外科手術、熱傷、または癌などの重病に罹っている人々は、セプシスに罹患しやすい恐れがあり、癌または肺炎の合併症後に死亡する人々は、実際にセプシスが原因で死亡することが多い。薬物で免疫系が衰弱している高齢の人々や患者は特に脆弱である。
【０００８】
死亡率は、症例の３０〜７０％に達することがある。
【０００９】
グラム陽性またはグラム陰性の細菌、菌類、ウイルス、および寄生虫によって起きるセプシスまたは敗血症性ショックの症例数は、
− 病院環境におけるカテーテルおよび他の侵襲性器具使用の増加
− 化学療法の増加、および臓器移植における免疫抑制剤使用の増加
− 重症の炎症性疾患の増加
におそらく関連する憂慮すべき増加を表している。
【００１０】
セプシスおよび敗血症性ショックは、
− グルコースが豊富な生理的血清から構成される液体
− 血圧を回復するための血管収縮性薬剤、および
− 抗生物質
の投与により治療される。
【００１１】
これらの治療には、患者の酸素投与も含まれる。
【００１２】
言及したばかりの従来のこうした治療は、炎症の有害作用を抑制すること、および抗菌防御能を刺激することを目的とし、特に、
− 抗ＬＰＳ抗体
− 抗ＴＮＦ−α抗体
− 新規の抗凝固剤、すなわち活性なプロテインＣおよびドロテコジン（ｄｒｏｔｅｃｏｇｉｎ）
の投与を含む、代替手法により現在補完されている。
【００１３】
本発明の目的は、特に、敗血症および敗血症性ショックに対処する付加的手段を、医学界に提供することである。
【００１４】
実際、敗血症または敗血症性ショックの発現に先行する臨床的現象が、細胞応答の非常に広範な活性化を引き起こし、その結果、サイトカイン類および特にサイトカインまたはケモカインのＴＮＦ−α（腫瘍壊死因子α）、プロスタグランジン、脂質メディエーター、ならびに活性化酸素体など、幾つもの臓器を炎症状態にしておくと思われるあらゆる種類の炎症性メディエーターが、血清および肝臓に放出され、その中で最も罹患しやすい臓器は腎臓、肝臓、腸、および肺であることが見出された。
【００１５】
したがって本発明が基づく論拠は、上記で引用した炎症性メディエーター、特に患者血清中のＴＮＦ−αの含有量を減少させること、および特に免疫を強化し、病原体を除去する際にその反応が知られているクッパー細胞の個数を増加させることを可能にする手段を見出すためであった。
【００１６】
驚くべきことであり、意外にも、ラミナリン、特に可溶形のラミナリンを示す公知のβ−１，３−グルカン、およびオリゴラミナリンの有効量を特に経口経路で患者に投与することによって、該物質が、ＴＮＦ−α濃度に対して減少の方向に作用し、クッパー細胞数に対して増加の方向に作用することが可能になることを見出したことは、上訴会社の功績である。
【００１７】
したがって本発明の一目的は、敗血症および敗血症性ショックの治療を意図した薬物の製剤に、ラミナリン、好ましくは可溶形のラミナリンまたはオリゴラミナリンを使用することである。
【００１８】
有利な一実施形態によれば、本発明の一目的は、敗血症またはセプシスまたは敗血症性ショックの治療を意図した経口投与用薬物の製剤にラミナリンまたはオリゴラミナリンを使用することであり、該薬物は、身体に毎日貢献するのに十分な量、したがってラミナリンまたはオリゴラミナリンを体重ｋｇ当り２〜２１ｍｇ、好ましくは６〜１５ｍｇの量で患者に投与される。
【００１９】
上訴会社が本発明に到達するのを可能にした研究を説明する前に、「ラミナリン」という用語が、褐藻から抽出され、分子量が約２５００〜約６０００であるβ−１，３−グルカン型多糖類の混合物を示すことを念頭に置かれたい。
【００２０】
一方、オリゴラミナリンは、重合度が２〜１０の間、すなわち分子量が３５０〜２０００の間であることを特徴とする、ラミナリンを加水分解して得られるβ−グルカン型オリゴ糖類の混合物である。
【００２１】
ラミナリンは、β−１，３アセタール結合を介して結合した、１５〜３５グルコピラノース単位の線状主鎖で構成され、この主鎖は枝分れの比率が低い。
【００２２】
平均重合度は約２５である。
【００２３】
ラミナリンは、可溶形および不溶形で存在する。
【００２４】
褐藻からそれを抽出し、必要に応じ可溶形および不溶形のラミナリンを分離するために、特に、２００３年６月５日に公開した本出願会社の国際特許出願ＷＯ０３／０４５４１４号を参照することができる。
【００２５】
以下に記載の本研究に関して使用され、本発明に到達することを可能にした特定のラミナリンは、分子量が４５００、平均重合度が２５であって、基本的には重合度が２０〜３０の範囲である多糖類から構成される。
【００２６】
ラミナリンは、無臭で無風味のオフホワイト粉末の形で供給される。
【００２７】
上記で考察した実験研究により、ラミナリンは、特に経口で投与すると、エンドトキシンショックの身体的反動に対して保護作用を発揮することを示すことができた。
【００２８】
これらの結果により、マクロファージおよびＮＫ（ナチュラルキラー）細胞などの免疫担当細胞に対して、ラミナリンが免疫賦活剤効果を発揮すると考えるのも当然であろう。
【００２９】
当該研究に関して、該実験で使用された生物体に起こったエンドトキシンショックは、リポ多糖類またはＬＰＳの投与により生じ、その結果は公知のように細菌の攻撃と類似している。
【００３０】
上記研究用に選択された動物は、Ｗｉｓｔａｒ Ｈａｎ雄性ラット（Ｈａｒｌｅｍ、Ｎｅｔｈｅｒｌａｎｄｓ）だった。
【００３１】
実験は、各々ラット８匹の２群で行った。
【００３２】
２群のうち一方のラット、即ち「対照群」に、ＡＯ４商品名（ＵＡＲ、Ｆｒａｎｃｅ）の入った標準飼料を「無制限に」供給した。他方の群のラットに、商品名「Ｄｅｃｔｉｎａｎ」で市販の上記ラミナリンを補充した以外は同じ飼料を供給し、第一段階では４日間（−４〜−１）、Ｄｅｃｔｉｎａｎを５重量％、次いで第二次段階の２１日間（０〜２１日）は１０重量％で該飼料を強化した。この第２群のラットを「Ｄｅｃｔｉｎａｎ群」と表す。
【００３３】
２１日目に、体重ｋｇ当り１０ｍｇ相当量のＬＰＳ腹腔内注射により、２群のラットに対しエンドトキシンショックを引き起こした。
【００３４】
２２および２３日目はラットに飼料および水を与えず、２４日目に堵殺した。
【００３５】
下記パラメータを調査した
・水および飼料の摂取量
・体重の変化
・脂質および糖質のバランス
・直腸温度
・白血球数
・炎症性メディエーター（血清ＴＮＦ−αおよびＰＧＥ2またはプロスタグランジンＥ2）
・肝臓の常在マクロファージ、すなわちクッパー細胞の組織検査マーカー（ＥＤ２および／またはペルオキシダーゼ活性）
・ＬＰＳ処置の毒性マーカー（血清ＡＬＴ、ＡＳＴ、およびＬＤＨの活性、肝臓、脾臓、胸腺および肺の組織検査）
・盲腸結腸の発酵（糞便および盲腸の増殖重量）。
【００３６】
各種の回収および測定が行われる日を、下記表Ｉで確認する。
【００３７】
【表１】
【００３８】
さらに特に、下記測定を行った。
ａ）ＬＰＳ注射前
・体重
・湿った糞便、および凍結乾燥後の糞便の重量（２４時間かけて回収）
・食餌および飲料水の重量
・尾静脈から血液の採取：トリグリセリドおよびグルコースの定量
ｂ）ＬＰＳ注射後（０、２、４、６、８、および２４時）
・直腸温度
・尾静脈血液の採取：トリグリセリド、グルコース、ＰＧＥ2、ＴＮＦ−α、遊離脂肪酸、ＡＬＴ、ＡＳＴ、およびＬＤＨ（乳酸脱水素酵素）活性の定量
ｃ）堵殺時
・門脈からの血液：遊離脂肪酸の定量
・大静脈からの血液：血液構成（血球計数、ヘマトクリットおよびヘモグロビン）の測定、ならびに血清における遊離脂肪酸、トリグリセリド、ＰＧＥ2、ＴＮＦ−αおよびＡＬＴ、ＡＳＴおよびＬＤＨの活性の定量
・肝臓：重量、組織検査（ヘマトキシリン−エオシン、ペルオキシダーゼ活性およびＥＤ２抗体を介するクッパー細胞の検出）用試料の凍結
・脾臓：重量、および組織検査（ヘマトキシリン−エオシン）用としてホルムアルデヒド中に試料を保存
・盲腸：盲腸全体および空の盲腸の重量
・胸腺および肺：組織検査（ヘマトキシリン−エオシン）用としてホルムアルデヒド中に保存した試料。
【００３９】
記録結果に統計処理を行った。
【００４０】
これに関連して、以下に言及する値は、平均値±ＳＤＭ（平均値の標準偏差）を表す。ＬＰＳの投与前、および堵殺時に得られた結果を、（Ｍｏｒｅ Ｅｘｃｅｌｌ ｈｔｍｌ ＋ｉｎｔｒｏ ｊａｖａ ＋ｃｄ、著者（複数）Ｇｏｔｔｌｅｂｅｒ、０１−２０００に記載の）Ｅｘｃｅｌｌプログラムを使用した２群の間のスチューデントｔ検定（Ａｐｐａｒｅｉｌｓ ｅｔ Ｍｅｔｈｏｄｅｓ ｅｎ Ｂｉｏｃｈｉｍｉｅ［生化学における装置及び方法］ｂｙ Ｐｉｅｒｒｅ Ｋａｍｏｕｎ、３版、ｍｅｄｉｃｉｎｅ ｓｃｉｅｎｃｅｓ Ｆｌａｍｍａｒｉｏｎ、１９８７に記載）で分析した。ＬＰＳ注射後の各種パラメータ動態検査は、二元配置分散分析法、（Ｔｒａｉｔｅｍｅｎｔ ｄｅ ｄｏｎｎｅｅｓ ａｖｅｃ ＳＰＳＳ ｐｏｕｒ Ｗｉｎｄｏｗｓ [ＷｉｎｄｏｗｓのためのＳＰＳＳを用いたデータ処理］（８．０、９．０版）、著者（複数）：Ｆｅｒｎａｎｄｏ ＯｕｅｌｌｅｔおよびＧｅｒａｌｄ Ｂａｉｌｌａｒｇｅｏｎ、出版日：０１−２０００、に記載の）ＳＰＳＳプログラムを介するＬａｗｒｅｎｃｅ出版のＲｕｄｏｌｐｈ Ｎ．Ｃａｒｄｉｎａｌによる「Ｆｏｒ ｔｈｅ Ｂｅｈａｖｉｏｒａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ Ｒｅｓｅａｒｃｈｅｒ」に記載の分散分析により処理した。
【００４１】
統計処理の前に、ＴＮＦ−αおよびＰＧＥ2パラメータ用として個々の値の対数変換を行った。差異がｐ＜０．０５（ｐは許容差５％の確率を意味する）である場合、統計的に有意と考えられる。
【００４２】
ＬＰＳ投与前に得られた結果は、以下に示す通りである。
【００４３】
ラットの到着１週間後、ラット平均体重は１３６±１ｇであり、無作為の方法で対照群およびＤｅｃｔｉｎａｎ（登録商標）群の２群に各々８匹を分配した。治療の第一日目からＬＰＳ注射日までの体重の増加、ならびに水および飼料の総消費量を表Ｉに示す。該食餌はこれら３種のパラメータに影響を及ぼさず、ラミナリンに毒性が無いことの証明である。
【００４４】
記録データを下記の表ＩＩにまとめた。
【００４５】
【表２】
【００４６】
処置の間の糖血症およびトリグリセリド血症における変化をモニターするために、毎週血液試料を採集した。それぞれ図１および２からの結果として、Ｄｅｃｔｉｎａｎ（登録商標）で強化した食餌により、糖血症およびトリグリセリド血症は処置２５日後で有意に（４日で５％、および２１日で１０％）低減され、処置の間の糖血症およびトリグリセリド血症における変化を例示している。
【００４７】
２４時間の糞便を週１度回収して計量した。
【００４８】
図３に示す表からの結果として、Ｄｅｃｔｉｎａｎ（登録商標）で強化した食餌により、糞便重量が処置の第一週目から１０％増加した。
【００４９】
糞便中の水分損失も大きく、Ｄｅｃｔｉｎａｎ（登録商標）で強化した飼料投与の第３週目で１０％、糞便の水分率は２４．７±１．４％であって、一方対照群では１７．８±１．５％（*ｐ＜０．０５、スチューデントｔ検定）であった。
【００５０】
ＬＰＳは、投与２時間後に一過性の高体温および高糖血症を誘発する。Ｄｅｃｔｉｎａｎ（登録商標）で強化した食餌により、これら２つの現象を有意に増大する。さらに、Ｄｅｃｔｉｎａｎ群のラットは堵殺後、対照群のラットより高い体温を維持する。
【００５１】
飼料にＤｅｃｔｉｎａｎ（登録商標）を混合した２５日間の先行処置によって、ＬＰＳにより発生した急性炎症に起因する代謝的効果が阻止されるか、または少なくとも和らげる。すなわち、図４（高体温）、５（高トリグリセリド血症）、および６（高糖血症）のグラフに見られる曲線による結果として、Ｄｅｃｔｉｎａｎ（登録商標）は、ＬＰＳ注射を形成する最初の数時間の低体温、高トリグリセリド血症、および高糖血症を低減する。
【００５２】
つまり、Ｄｅｃｔｉｎａｎ（登録商標）で強化した飼料の投与により、肝臓の免疫細胞の変調と連動する現象である、ＬＰＳ注射による擬態の急性炎症に関連した毒性作用から肝臓が保護される。
【００５３】
さらに、この飼料の投与は肝臓障害の特異的マーカーの増加を相殺するが、このマーカーはアラニンアミノトランスフェラーゼ（ＡＬＴ）の血清活性から構成されており、該投与により、肝臓を含む臓器の一部の有害な組織変化、即ちアスパラギン酸アミノトランスフェラーゼ（ＡＳＴ）および乳酸脱水素酵素（ＬＤＨ）の活性を反映し得る他の血清パラメータも修正される。
【００５４】
記録した結果を、図７（ＡＳＴにおける変化）、８（ＬＤＨにおける変化）および９（ＡＬＴにおける変化）に示す曲線により表示する。
【００５５】
血清中の下記濃度（ｐｇ／ｍｌ中）も測定した
− ＬＰＳ投与の２時間後、４時間後、６時間後、８時間後、および２４時間後のサイトカインＴＮＦ−α
− ＬＰＳ投与の２時間後および２４時間後のプロスタグランジンＰＧＥ2。
【００５６】
各結果を図１０（ＴＮＦ−α）および１１（ＰＧＥ2）のグラフにそれぞれ示す。
【００５７】
炎症性刺激が無いため、０時間ではＴＮＦ−αの検出は不可能になることがある。さらに、飼料中にＤｅｃｔｉｎａｎが無いため、エンドトキシンショックに曝されたラット血清中のＴＮＦ−αおよびＰＧＥ2の濃度が減少する。
【００５８】
この処置の食欲抑制効果に関連する解釈に対する問題を避けるため、ＬＰＳ投与後はラットに飼料および水を与えなかった。
【００５９】
堵殺後、各種計量を行い、その結果を表ＩＩＩにまとめた。
【００６０】
【表３】
【００６１】
表ＩＩＩにまとめた結果の考査により、下記知見を引き出すことができる。
【００６２】
体重の減少は、Ｄｅｃｔｉｎａｎ（登録商標）を含む飼料の投与により有意に変更することはない（体重に関して、２５±２ｇ 対 ２２±１ｇ）。飼料および水を２４時間与えなかった後、動物の体重には２群の間で差がない。肝臓の重量は、有意に近いｐ値を有するＤｅｃｔｉｎａｎ（登録商標）群で僅かに増加する。盲腸組織および盲腸内容物の重量の平均値によって証明されているように、Ｄｅｃｔｉｎａｎ（登録商標）で強化された食餌によって、盲腸の有意な増殖（Ｄｅｃｔｉｎａｎ（登録商標）群３．２±０．３２ｇ 対 対照２．１５±０．２４ｇ *ｐ＜０．０５ スチューデントｔ検定）がもたらされた。
【００６３】
さらに赤血球および白血球を計数し、異なる血液パラメータも測定したが、その操作は大静脈の血液試料に対して行った。
【００６４】
結果を表ＩＶにまとめる。
【００６５】
【表４】
【００６６】
表ＩＶにまとめた結果を考察すると、白血球の中で単球の比率だけが有意に異なり、対照群のラットと比較して、Ｄｅｃｔｉｎａｎ（登録商標）で強化した食餌を飼料としたラットのほうが低いことが分かる。
【００６７】
免疫組織化学法による膜抗原ＥＤ２の検出によって、肝臓でのクッパー細胞の特異的検出が可能となる。これらの細胞は、特に門脈域内に位置しており、ＬＰＳ投与後２４時間でさらに丸くなり膨潤する。各肝臓切片の観察を精緻化するため、定量的手法を行った。ＥＤ２陽性細胞を数えるため、１０×１０四方の（門脈空隙に属する血管を少なくとも３つ含む）３箇所、肝臓切片毎に選択した。Ｄｅｃｔｉｎａｎ（登録商標）で強化した食餌での前処理により、肝臓マクロファージの数が増加し（２５９±１９ ＥＤ２＋細胞／領域 対 ２１７±１４ ＥＤ２＋細胞／視野；ｎ＝６、ｐ＝０．１、スチューデントｔ検定）、肝臓のこれら常在マクロファージは、肝臓の循環するリポ多糖類を浄化する。Ｄｅｃｔｉｎａｎ（登録商標）群に属する（白四角で表される）ラット８の異常に低い値が平均値内に含まれない場合、差異は有意である。
【００６８】
上記処理の結果を図１２に例示し、各肝臓切片のＥＤ２を検出する手段によりクッパー細胞の定量化を示す。
【００６９】
酵素ペルオキシダーゼは、（クッパー細胞などの）マクロファージ、好中球、および好酸球内に存在することが知られている。免疫細胞（好中球）が補充されると、ＬＰＳ投与により肝臓中の陽性細胞数が増加する。Ｄｅｃｔｉｎａｎ（登録商標）を補充した食餌は、陽性細胞数を減少させるように思われる。
【００７０】
エオシンおよびヘマトキシリンで染色した後の組織学的解析により、組織構造、および障害細胞または壊死の病巣も明らかになる。肝臓では、ＬＰＳ注射に関連する有害な変化、主に壊死病巣は、Ｄｅｃｔｉｎａｎ（登録商標）群および対照群の両群で実質的には見られない。有害な生化学的変化（主にＡＬＴにおける増加）は一般的に早く、肝臓組織内での有害な変化に必ずしも反映されるわけではないことが判る。肺が通常炎症状態に関連する浮腫を示す一方、胸腺および脾臓は壊死領域を明らかに示す。
【００７１】
上記にまとめた結果は、血清中のＡＳＴ、ＬＤＨ、およびＡＬＴ活性の増加に対し、Ｄｅｃｔｉｎａｎ（登録商標）の保護作用を示している。ＬＰＳの毒性は、保護作用により低くなり、炎症誘発性サイトカインであるＴＮＦ−α分泌の減少と相互に関係していることが認められる。炎症性刺激２４時間後のＰＧＥ2濃度の減少も認められる。
【００７２】
低体温により、高用量のＬＰＳ投与後、早期に症状が発現する。実際、ＴＮＦ−αは高体温の維持に関与する「極低温」信号として見なされ、この現象は、この場合Ｄｅｃｔｉｎａｎ（登録商標）群よりも高いＴＮＦ−α濃度を有する対照群のラットのほうが、より明らかである。
【００７３】
ＬＰＳ投与により引き起こされたエンドトキシンショックによって、一つには肝臓での激しいグリコーゲン分解による一過性の高糖血症が生じ、次いで、末端組織および特に免疫細胞によるグルコースの使用で、糖血症の段階的減少が生じる。Ｄｅｃｔｉｎａｎ（登録商標）群のラットにおいて一過性の高糖血症がさほど顕著でない場合、潜在的な代謝標的として肝内グリコーゲン分解が誘起されることもあり得る。
【００７４】
高用量のＬＰＳ投与は、両動物群が受ける高トリグリセリド血症を誘発する。血清トリグリセリド濃度は、Ｄｅｃｔｉｎａｎ（登録商標）で強化された食餌後に体系的に低くなるが、ＬＰＳ注射によるトリグリセリドの変動は同じである。炎症性刺激は別として、血液中のトリグリセリド濃度の低下は、高度に有利な結果をなす。
【００７５】
ＥＤ２抗体の組織学的研究によって、Ｄｅｃｔｉｎａｎ（登録商標）で強化された食餌のもとでのクッパー細胞数の増加が実証されており、それは骨髄から生じる原細胞の補充、または存在するクッパー細胞の肝内の増殖のいずれかに関与する可能性がある。クッパー細胞の活性および炎症状態中に補充された免疫細胞に起因する内因性ペルオキシダーゼの組織学的研究では、Ｄｅｃｔｉｎａｎ（登録商標）で強化された食餌後はそれがあまり顕著ではないように思われる。さらに、ＬＰＳ投与後、循環単球数は対照群よりもＤｅｃｔｉｎａｎ（登録商標）群のほうが少ないと観察されることが興味深い。
【００７６】
結論として、Ｄｅｃｔｉｎａｎ（登録商標）で強化された飼料の投与によって、肝臓由来の酵素および肝臓内の免疫細胞数の補充に関する望ましい結果を伴い、ＬＰＳに関連する炎症を減少するのを可能にし、この現象が肝臓ミクロファージ数の増加と関連して起こると観察されることが興味深い。
【００７７】
本発明に従ったラミナリンまたはオリゴラミナリンの使用により得られる薬物は、錠剤、硬ゼラチンカプセル、またはサッシェの形で、あるいは例えば液体、特に、経口で摂取する溶液の形でも供給することができる。
【００７８】
実施例１：錠剤
Ｄｅｃｔｉｎａｎ（登録商標）を主成分とするコーティングされていない錠剤４５０ｍｇ
その配合は以下の通りである
− Ｄｅｃｔｉｎａｎ（登録商標） ２２５ｍｇ、即ち、５０％
− マルトデキストリン １７６ｍｇ、即ち、３９．１％
− リン酸三カルシウム ４０ｍｇ、即ち、 ８．９％
− ステアリン酸マグネシウム ９ｍｇ、即ち、 ２％。
【００７９】
各成分をふるいにかけ、混合し、次いでインゴットの形に圧縮する。続いて後者を、最終錠剤に錠剤化する段階に適する大きさの顆粒に変形する微粉砕機に導入する。
【００８０】
錠剤は、非コーティング、フィルムコートまたは糖衣の形で販売することができる。該錠剤は、ビン、あるいは１５または２０単位のブリスターパックに包装することができる。
【００８１】
投与量は、１日２〜４錠、食中に２回摂取し、１５日続く治療コースで摂取する。
【００８２】
実施例２：硬ゼラチンカプセル
Ｄｅｃｔｉｎａｎ（登録商標）を主成分とする植物または海産物由来の硬ゼラチンカプセル３６３ｍｇ
２８８ｍｇの散剤におけるその配合は以下の通りである
− Ｄｅｃｔｉｎａｎ（登録商標） ２２５ｍｇ、即ち、７８．１％
− 微結晶セルロース ６０ｍｇ、即ち、２０．８％
− シリカ ２ｍｇ、即ち、 ０．７％
− ステアリン酸マグネシウム １ｍｇ、即ち、 ０．４％。
【００８３】
この硬ゼラチンカプセルは、ビン、あるいは１５または２０単位のブリスターパックに包装することができる。
【００８４】
投与量は、硬ゼラチンカプセルを１日２〜４個、食中に２回摂取し、１５日続く治療コースで摂取する。
【００８５】
実施例３：サッシェ
Ｄｅｃｔｉｎａｎ（登録商標）を主成分とする投与量サッシェ１ｇ
その配合は以下の通りである
− Ｄｅｃｔｉｎａｎ（登録商標） ２２５ｍｇ、即ち、２２．５％
− マルトデキストリン ２７５ｍｇ、即ち、２７．５％
− 果糖 ２９５ｇ、 即ち、２９．５％
− レモン搾り汁粉末 ２００ｍｇ、即ち、２０％
− シリカ ５ｍｇ、即ち、 ０．５％。
【００８６】
Ｄｅｃｔｉｎａｎ（登録商標）２２．５ｇを含む水溶液１リットルを、マルトデキストリン２７．５ｇと混合する。次いで他の成分を混和する。次いで、こうして得た溶液を微粒化し、その粉末を顆粒化する。次いで、その粉末を６０℃で終夜乾燥し、３％未満の乾燥物質を得る。次いで、粉末１ｇを含み、大きさ６０×３０ｍｍのアルミニウムサッシェに包装する。
【００８７】
投与量は、サッシェを１日２〜４個、食中に２回摂取し、１５日続く治療コースで摂取する。
【００８８】
実施例４：経口で摂取する溶液
− 水 即ち、９２．８５％
− Ｄｅｃｔｉｎａｎ（登録商標） 即ち、 ２．２５％
− 果糖 即ち、 ４％
− レモン香料 即ち、 ０．２％
− クエン酸 即ち、 ０．５％
− ソルビン酸カリウム 即ち、 ０．１％
− 安息香酸ナトリウム 即ち、 ０．１％。
【００８９】
経口で摂取するこの溶液は、単回投与量を１０ｍｌまたは１００ｍｌビンに詰めることができる。
【００９０】
投与量は、１日に１０ｍｌを２〜４回分、または食さじ２〜４杯、食中に２回摂取し、１５日続く治療コースで摂取する。
【図面の簡単な説明】
【００９１】
【図１】処置の間の糖血糖における変化を示すグラフである。
【図２】処置の間のトリグリセリド血症における変化を示すグラフである。
【図３】処置の間の糞便重量の変化を示すグラフである。
【図４】直腸体温の変化を示すグラフである。
【図５】高トリグリセリド血症の変化を示すグラフである。
【図６】高糖血症の変化を示すグラフである。
【図７】ＡＳＴにおける変化を示すグラフである。
【図８】ＬＤＨにおける変化を示すグラフである。
【図９】ＡＬＴにおける変化を示すグラフである。
【図１０】血清中のＴＮＦ−αの変化を示すグラフである。
【図１１】血清中のＰＧＥ2の変化を示すグラフである。
【図１２】肝臓切片のＥＤ２陽性細胞の数を示すグラフである。
【特許請求の範囲】
【請求項１】
敗血症および敗血症性ショックの治療を目的とする薬物製剤における、ラミナリン、好ましくは可溶形のラミナリン、またはオリゴラミナリンの使用。
【請求項２】
敗血症および敗血症性ショックの治療を目的とする経口投与用の薬物の製剤におけるラミナリンまたはオリゴラミナリンの使用であって、身体に毎日貢献するのに十分な量、ラミナリンまたはオリゴラミナリンを体重ｋｇあたり２〜２１ｍｇ、好ましくは６〜１５ｍｇの量で前記薬物を患者に投与する使用。
【請求項１】
敗血症および敗血症性ショックの治療を目的とする薬物製剤における、ラミナリン、好ましくは可溶形のラミナリン、またはオリゴラミナリンの使用。
【請求項２】
敗血症および敗血症性ショックの治療を目的とする経口投与用の薬物の製剤におけるラミナリンまたはオリゴラミナリンの使用であって、身体に毎日貢献するのに十分な量、ラミナリンまたはオリゴラミナリンを体重ｋｇあたり２〜２１ｍｇ、好ましくは６〜１５ｍｇの量で前記薬物を患者に投与する使用。
【図１】
【図２】
【図３】
【図４】
【図５】
【図６】
【図７】
【図８】
【図９】
【図１０】
【図１１】
【図１２】
【図２】
【図３】
【図４】
【図５】
【図６】
【図７】
【図８】
【図９】
【図１０】
【図１１】
【図１２】
【公表番号】特表２００８−５４５６４６（Ｐ２００８−５４５６４６Ａ）
【公表日】平成２０年１２月１８日（２００８．１２．１８）
【国際特許分類】
【出願番号】特願２００８−５１１７５２（Ｐ２００８−５１１７５２）
【出願日】平成１８年５月１８日（２００６．５．１８）
【国際出願番号】ＰＣＴ／ＦＲ２００６／００１１２９
【国際公開番号】ＷＯ２００６／１２３０５９
【国際公開日】平成１８年１１月２３日（２００６．１１．２３）
【公序良俗違反の表示】
（特許庁注：以下のものは登録商標）
１．ＪＡＶＡ
２．ＷＩＮＤＯＷＳ
【出願人】（５０７３８２７４０）
【氏名又は名称原語表記】ＬＡＢＯＲＡＴＯＩＲＥＳ ＧＯＥＭＡＲ
【Ｆターム（参考）】
【公表日】平成２０年１２月１８日（２００８．１２．１８）
【国際特許分類】
【出願日】平成１８年５月１８日（２００６．５．１８）
【国際出願番号】ＰＣＴ／ＦＲ２００６／００１１２９
【国際公開番号】ＷＯ２００６／１２３０５９
【国際公開日】平成１８年１１月２３日（２００６．１１．２３）
【公序良俗違反の表示】
（特許庁注：以下のものは登録商標）
１．ＪＡＶＡ
２．ＷＩＮＤＯＷＳ
【出願人】（５０７３８２７４０）
【氏名又は名称原語表記】ＬＡＢＯＲＡＴＯＩＲＥＳ ＧＯＥＭＡＲ
【Ｆターム（参考）】
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